CN101906142B - 咔啉羧酸-四肽偶联物及其合成方法和在医学中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了咔啉羧酸四肽偶联物及其合成方法和作为抗血栓剂的应用。本发明将具有抗血栓活性的3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的3位羧基与AA-Tyr-Ser-Val四肽的氨端偶联，脱去保护，即得；其中，AA选自丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸、色氨酸、组氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸或精氨酸残基。在大鼠血栓形成模型上的评价实验表明，本发明化合物具有优秀的抗血栓活性，可作为抗血栓剂应用。此外，本发明能改善3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸在极性溶剂和非极性溶剂中溶解度低所导致的低生物利用度缺陷。

Description

咔啉羧酸-四肽偶联物及其合成方法和在医学中的应用

技术领域

本发明咔啉羧酸与肽的偶联物，尤其涉及3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸与四肽的偶联物，本发明还涉及该偶联物的合成方法以及它们作为抗血栓剂的应用，属于生物医药领域。

背景技术

血栓病在我国很常见，在临床治疗的各个领域都有发生，各脏器的动脉血栓形成都是最危险的疾病之一，具有致命的危险。寻找抗血栓药物是新药研究的热点之一。发明人注意到，3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸是中药薤白中的一种成分，具有抗血小板聚集活性(姚新生等，中国药物化学杂志，1995，5，134)。针对3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸在极性溶剂和非极性溶剂中溶解度都不好带来的生物利用度低的问题，本发明人对此进行了改进。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种具有抗血栓活性的咔啉羧酸-四肽偶联物；

本发明的目的之二是提供一种合成上述咔啉羧酸-四肽偶联物的方法；

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

具有抗血栓活性的咔啉羧酸-四肽偶联物，其结构式为式I所示：

式I

其中，所述的AA选自丙氨酸残基、甘氨酸残基、脯氨酸残基、谷氨酰胺残基、亮氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、色氨酸残基、组氨酸残基、天冬酰胺残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、丝氨酸残基、苏氨酸残基、甲硫氨酸残基、赖氨酸残基或精氨酸残基；

本发明的另一个目的是提供一种合成上述咔啉羧酸-四肽偶联物的方法；

一种合成上述咔啉羧酸-四肽偶联物的方法，包括以下步骤：

(1)制备AA-Tyr-Ser-Val四肽；其中，所述的AA选自丙氨酸残基、甘氨酸残基、脯氨酸残基、谷氨酰胺残基、亮氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、色氨酸残基、组氨酸残基、天冬酰胺残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、丝氨酸残基、苏氨酸残基、甲硫氨酸残基、赖氨酸残基或精氨酸残基；

(2)将保护的3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的3位羧基与保护的AA-Tyr-Ser-Val四肽的氨端偶联，再脱去保护，即得。

在大鼠血栓形成模型上的评价表明，本发明偶联物具有优秀的抗血栓活性，可作为抗血栓剂应用。本发明能改善3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸在极性溶剂和非极性溶剂中溶解度低导致的低生物利用度缺陷。

附图说明

图1本发明咔啉羧酸四肽偶联物的合成路线图；i)：DCC/HOBt；ii)：4NHCl-EA；iii)：30％的甲醛和浓硫酸；iv)：(Boc)₂O；v)：Pd/C，H₂和4N HCl-EA；其中AA为19种氨基酸残基(丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸、色氨酸、组氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、精氨酸残基)。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的制备(4a)

1)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的制备

将400ml水置于500ml的圆底烧瓶中，缓慢加入0.2ml浓硫酸摇匀。再加入5.0g(24.5mmol)L-色氨酸，超声振荡至L-色氨酸完全溶解，往上述混合液中加入10ml浓度为35％的甲醛，搅拌反应，TLC板显示L-色氨酸原料点消失，往反应液中缓慢递加氨水至PH＝6.0，静置0.5小时，减压抽滤得白色固体，干燥称重5.01g，产率：95.0％，m.p：228-230℃，ESI-MS(m/z)：217[M+H]⁺

2)N-叔丁酰-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的制备

冰浴条件下，将1.0g(4.63mmol)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸悬浮于15mlDMF中，再加入1.2g(Boc)₂O到上述溶液中，然后用三乙胺调PH＝8～9，搅拌反应，随着反应的进行，混悬溶液逐渐变为澄清，反应液呈黄色，TLC板显示(氯仿∶甲醇＝10∶1，Rf＝0.21)原料点消失，停止反应，回收溶剂，乙酸乙酯将吹干后的残留物溶解，5％的KHSO₄洗涤3次，饱和NaCl洗涤3次，无水NaSO₄干燥，过滤，减压旋干溶剂，得黄色固体，氯仿洗涤后得目标化合物958mg，无色固体，产率：68.5％，m.p：241～243℃。ESI-MS(m/z)：318[M+H]⁺

3)Boc-Ser(Bzl)-Val-OBzl的制备

将1.0g(3.39mmol)Boc-Ser(Bzl)用15ml无水THF溶解，冰浴下，再加入0.458g(3.39mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)，以及10ml无水THF溶解的0.698g(3.39mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)，搅拌反应30分钟，得相应的活泼酯溶液，待用。

15ml无水THF将1.071g(2.82mmol)Tos·Val-OBzl溶解，N-甲基吗啉调PH＝8～9，然后与上述待用的活泼酯溶液反应，TLC板显示(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.22)原料点消失，滤去二环己基脲(DCU)，减压浓缩至干，残留物用40ml乙酸乙酯溶解，依次用5％NaHCO₃、饱和NaCl、5％KHSO₄和饱和NaCl各洗涤三次至中性，无水NaSO₄干燥，过滤，减压旋干溶剂，得标题化合物1.314g，淡黄色固体，产率96.1％，m.p：69.5～70.2℃。ESI-MS(m/z)：495[M+H]⁺

4)Ser(Bzl)-Val-OBzl的制备

将1.314g(2.71mmol)Boc-Ser(Bzl)-Val-OBzl和6.0ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)冰浴下混合搅拌反应，TLC板显示(氯仿∶甲醇＝5∶1，Rf＝0.26)原料点消失，加入无水乙醚，减压抽干溶液，重复三次。残留物用无水乙醚浸泡磨洗，倾去无水乙醚，重复三次，得标题化合物1.024g，无色固体，产率98.2％。ESI-MS(m/z)：385[M+H]⁺

5)Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的制备

20ml无水THF将1.024g(3.19mmol)Boc-Tyr溶解，冰浴下，加入0.431g(3.19mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)，以及10ml无水THF溶解的0.657g(3.19mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)，搅拌反应30分钟，得相应的活泼酯溶液，待用。

15ml无水THF将1.024g Ser(BZl)-Val-OBzl溶解，N-甲基吗啉调PH＝8～9，然后与上述待用的活泼酯溶液反应，TLC板显示(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.24)原料点消失，滤去二环己基脲(DCU)，减压浓缩至干，残留物用40ml乙酸乙酯溶解，依次用5％NaHCO₃、饱和NaCl、5％KHSO₄和饱和NaCl各洗涤三次至中性，无水NaSO₄干燥，过滤，减压旋干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化得标题化合物1.289g，无色固体，产率74.8％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.28)m.p：79.8～80.5℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=7.857$ (C＝0.7，甲醇)。ESI-MS(m/z)：649[M+H]⁺.

6)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.289g(1.99mmol)Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和7.0ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.079g，无色固体，产率98.99％。ESI-MS(m/z)：[M+H]⁺548.8

7)Boc-Val-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的制备(1a)

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.287g(2.35mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.613g(2.82mmol)Boc-Val，制得标题化合物1.341g无色固体，产率76.39％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.25)m.p：85.8～87.1℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-23.778$ (C＝0.6，甲醇)。ESI-MS(m/z)：748[M+H]⁺.

8)Val-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的制备(2a)

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.328g(1.78mmol)Boc-Val-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和5.3ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.146g，黄色油状物，产率99.65％。ESI-MS(m/z)：648[M+H]⁺.

9)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3a)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以从1.142g(1.77mmol)Val-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.675g(2.12mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉羧酸，制得标题化合物1.225g，无色固体，产率73.27％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.20)m.p：113.8～115.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=0.818$ (C＝1.1，甲醇)。ESI-MS(m/z)：970[M+Na]⁺.

10)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val(4a)的制备

先将0.458g Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl溶于30ml无水MeOH，往得到的溶液中加入0.137gPd/C。室温下往该悬浮溶液中通入H₂5天，TLC板显示(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.20)原料点消失，滤去Pd/C，减压浓缩至干，残留物用无水乙醚浸泡磨洗，倾去无水乙醚，重复三次，得淡黄色固体，将此淡黄色固体和3.0ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)冰浴下混合搅拌反应，TLC板显示(氯仿∶甲醇＝5∶1，Rf＝0.20)原料点消失，加入无水乙醚，减压抽干溶液，重复三次。残留物用无水乙醚浸泡磨洗，倾去无水乙醚，重复三次，得标题化合物0.302g，黄色固体，产率93.79％。TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.22)m.p：187.2～188.6℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-34.300$ (C＝1.0，甲醇)。HPLC纯度：98.31％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：666[M-H]^-.

实施例2  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Tyr-Tyr-Ser-Val(4b)的制备

1)Boc-Tyr-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1b)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.238g(2.26mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.762g(2.71mmol)Boc-Tyr，制得标题化合物1.166g，无色固体，产率63.63％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.26)m.p：86.9～88.5℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-16.19$ (C＝0.7，甲醇)。ESI-MS(m/z)：812[M+H]⁺.

2)Tyr-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2b)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.098g(1.35mmol)Boc-Tyr-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和5.5ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物0.960g，黄色油状物，产率99.79％。ESI-MS(m/z)：712[M+H]⁺

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Tyr-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的制备(3b)

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以0.960g(1.35mmol)Tyr-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.516g(1.62mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.022g，无色固体，产率74.82％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.23)m.p：111.3～112.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=28.222$ (C＝0.6，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1010[M-H]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Tyr-Tyr-Ser-Val(4b)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.468g(0.46mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Tyr-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.140g Pd/C，制得标题化合物0.329g，绿色固体，产率97.34％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.24)m.p：164.5～165.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-30.099$ (C＝1.35，甲醇)。HPLC纯度：98.44％(甲醇∶水＝71∶29)。ESI-MS(m/z)：729[M-H]^-.

实施例3  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ala-Tyr-Ser-Val(4c)的制备

1)Boc-Ala-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1c)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.260g(2.30mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.522g(2.76mmol)Boc-Ala，制得标题化合物1.169g，无色固体，产率70.69％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.27)m.p：78.9～80.9℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-23.091$ (C＝1.1，甲醇)。ESI-MS(m/z)：720[M+H]⁺.

2)Ala-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2c)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以0.929g(1.29mmol)Boc-Ala-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和3.7ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物0.7988g，黄色油状物，产率99.75％。ESI-MS(m/z)：620[M+H]⁺

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ala-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3c)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以0.798g(1.29mmol)Ala-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.493g(1.55mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物0.812g，无色固体，产率68.52％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.20)m.p：112.5～113.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-18.406$ (C＝1.15，甲醇)。ESI-MS(m/z)：919[M]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ala-Tyr-Ser-Val(4c)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.488g(0.53mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ala-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.146g Pd/C，制得标题化合物0.323g，黄色固体，产率95.28％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.25)m.p：170.2～171.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-59.579$ (C＝0.95，甲醇)。HPLC纯度：94.76％(甲醇∶水＝68∶32)。ESI-MS(m/z)：637[M-H]^-.

实施例4  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asn-Tyr-Ser-Val(4d)的制备

1)Boc-Asn-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1d)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.210g(2.21mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.616g(2.65mmol)Boc-Asn，制得标题化合物1.257g，无色固体，产率74.68％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.22)m.p：167.2～168.7℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-29.567$ (C＝1.0，甲醇)ESI-MS(m/z)：762[M+H]⁺.

2)Asn-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2d)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.222g(1.60mmol)Boc-Asn-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和6.4ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.058g，黄色油状物，产率99.62％。ESI-MS(m/z)：663[M+H]⁺

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asn-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3d)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.058g(1.60mmol)Asn-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.611g(1.92mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.068g，无色固体，产率69.22％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.21)m.p：114.8～116.5℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=10.952$ (C＝1.05，甲醇)。ESI-MS(m/z)：985[M+Na]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asn-Tyr-Ser-Val(4d)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.469g(0.49mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asn-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.141g Pd/C，制得标题化合物0.322g，绿色固体，产率96.99％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.25)m.p：177.2～178.9℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-67.053$ (C＝0.95，甲醇)。HPLC纯度：97.82％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：680[M-H]^-.

实施例5  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-His-Tyr-Ser-Val(4e)的制备

1)Boc-His(Boc)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1e)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.468g(2.68mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和1.142g(3.22mmol)Boc-His(Boc)，制得标题化合物0.871g，淡黄色固体，产率37.99％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.24)m.p：86.1～87.9℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-9.37$ (C＝0.9，甲醇)。ESI-MS(m/z)：886[M+H]⁺.

2)His-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2e)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.521g(1.72mmol)Boc-His(Boc)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和10.0ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.175g，黄色油状物，产率99.83％。ESI-MS(m/z)：686[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-His-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3e)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.175g(1.72mmol)His-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.656g(2.06mmol)Boc-13S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.028g，淡黄色固体，产率60.83％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.20)m.p：139.6～141.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=16.905$ (C＝0.7，甲醇)。ESI-MS(m/z)：985[M]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-His-Tyr-Ser-Val(4e)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.472g(0.48mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-His-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.142g Pd/C，制得标题化合物0.324g，黄色固体，产率95.86％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.28)m.p：193.2～194.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-21.159$ (C＝1.15，甲醇)。HPLC纯度：95.16％(甲醇∶水＝65∶35)。ESI-MS(m/z)：704[M-H]^-.

实施例6  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Pro-Tyr-Ser-Val(4f)的制备

1)Boc-Pro-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1f)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.160g(2.12mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.547g(2.54mmol)Boc-Pro，制得标题化合物1.040g，无色固体，产率65.91％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.31)m.p：69.9～71.6℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-64.57$ (C＝0.7，甲醇)。ESI-MS(m/z)：745[M+H]⁺.

2)Pro-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的制备(2f)

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.120g(1.50mmol)Boc-Pro-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和5.6ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物0.949g，黄色固体，产率95.87％。ESI-MS(m/z)：646[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Pro-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3f)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以0.949g(1.47mmol)Pro-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.516g(1.62mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物0.677g，无色固体，产率48.67％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.24)m.p：104.9～105.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-18.926$ (C＝0.9，甲醇)。ESI-MS(m/z)：945[M]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Pro-Tyr-Ser-Val(4f)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.482g(0.51mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-3-酰基-Pro-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.153g Pd/C，制得标题化合物0.326g，绿色固体，产率96.17％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.27)m.p：165.2～166.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-29.901$ (C＝1.35，甲醇)。HPLC纯度：95.76％(甲醇∶水＝66∶34)。ESI-MS(m/z)：704[M+K]^-.

实施例7  1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Gly-Tyr-Ser-Val(4g)的制备

1)Boc-Gly-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1g)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.249g(2.28mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.479g(2.74mmol)Boc-Gly，制得标题化合物1.101g，无色固体，产率68.52％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.26)m.p：78.5～79.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-3.31$ (C＝1.4，甲醇)。ESI-MS(m/z)：706[M+H]⁺.

2)Gly-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2g)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.132g(1.61mmol)Boc-Gly-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和5.7ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物0.968g，黄色油状物，产率99.69％。ESI-MS(m/z)：605[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Gly-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3g)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以0.968g(1.60mmol)Gly-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.612g(1.92mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.026g，无色固体，产率70.81％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.24)m.p：113.9～114.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=28.07$ (C＝0.95，甲醇)。ESI-MS(m/z)：928[M+Na]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Gly-Tyr-Ser-Val(4g)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.482g(0.51mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Gly-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.153g Pd/C，制得标题化合物0.326g，绿色固体，产率96.17％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.27)m.p：165.2～166.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-29.901$ (C＝1.35，甲醇)。HPLC纯度：95.85％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：623[M-H]^-.

实施例8  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Gln-Tyr-Ser-Val(4h)的制备

1)Boc-Gln-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1h)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.473g(2.69mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.795g(3.23mmol)Boc-Gln，制得标题化合物0.953g，无色固体，产率45.68％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.26)m.p：131.2～132.9℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=23.333$ (C＝1.05，甲醇)。ESI-MS(m/z)：776[M+H]⁺.

2)Gln-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2h)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.348g(1.74mmol)Boc-Gln-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和5.4ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.169g，黄色油状物，产率99.57％。ESI-MS(m/z)：676[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Gln-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3h的制备)

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.169g(1.73mmol)Gln-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.661g(2.08mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.115g，无色固体，产率66.02％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.22)m.p：114.9～115.6℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-84.205$ (C＝0.65，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1000[M+Na]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Gln-Tyr-Ser-Val(4h)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.426g(0.44mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Gln-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.128g Pd/C，制得标题化合物0.295g，绿色固体，产率97.04％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.27)m.p：164.5～165.6℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-19.000$ (C＝1.3，甲醇)。HPLC纯度：97.84％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：695[M-H]^-.

实施例9  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ser-Tyr-Ser-Val(4i)的制备

1)Boc-Ser(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1i)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.199g(2.19mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.777g(2.63mmol)Boc-Ser(BzL)，制得标题化合物1.024g，无色固体，产率56.71％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.30)m.p：84.3～85.6℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-17.641$ (C＝0.65，甲醇)。ESI-MS(m/z)：826[M+H]⁺.

2)Ser(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2i)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以0.864g(1.05mmol)Boc-Ser(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和4.3ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物0.751g，黄色油状物，产率98.95％。ESI-MS(m/z)：725[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ser(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3i)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以0.751g(1.04mmol)Ser(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.396g(1.24mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物0.729g，无色固体，产率68.77％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.24)m.p：97.5～98.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=18.912$ (C＝0.95，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1025[M]⁺..

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ser-Tyr-Ser-Val(4i)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.467g(0.46mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ser-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.140g Pd/C，制得标题化合物0.283g，绿色固体，产率94.98％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.28)m.p：162.5～163.9℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-35.125C=0.8,$ 甲醇)。HPLC纯度：95.46％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：654[M-H]^-.

实施例10  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Thr-Tyr-Ser-Val(4j)的制备

1)Boc-Thr(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1j)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.177g(2.15mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.798g(2.58mmol)Boc-Thr(Bzl)，制得标题化合物0.991g，无色固体，产率54.94％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.23)m.p：76.5～78.9℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-9.546$ (C＝1.1，甲醇)。ESI-MS(m/z)：840[M+H]⁺.

2)Thr(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2j)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.520g(1.81mmol)Boc-Thr(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和7.6ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.330g，黄色油状物，产率99.33％。ESI-MS(m/z)：740[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Thr(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3j)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.330g(1.80mmol)Thr(Bzl)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.688g(2.16mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.118g，无色固体，产率59.95％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.25)m.p：98.5～100.1℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=18.778$ (C＝1.2，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1062[M+Na]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Thr-Tyr-Ser-Val(4j)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.436g(0.42mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Thr-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.131g Pd/C，制得标题化合物0.274g，绿色固体，产率95.71％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.29)m.p：162.5～163.9℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-23.97$ (C＝1.1，甲醇)。HPLC纯度：96.56％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：692[M+Na+H]⁺.

实施例11  1，2，3，4-四氢-β-Klss-3-酰基-Lys-Tyr-Ser-Val(4k)的制备

1)Boc-Lys(Z)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1k)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.078g(1.66mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.898g(2.36mmol)Boc-Lys(Z)，制得标题化合物1.001g，无色固体，产率55.89％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.28)m.p：61.9～63.5℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-17.259$ (C＝0.9，甲醇)。ESI-MS(m/z)：911[M+H]⁺.

2)Lys(Z)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2k)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.288g(1.42mmol)Boc-Lys(Z)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和6.4ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.140g，黄色油状物，产率99.48％。ESI-MS(m/z)：810[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Lys(Z)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3k)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.140g(1.41mmol)Lys(Z)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.538g(1.69mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物0.788g，无色固体，产率53.75％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.26)m.p：95.2～96.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=18.242$ (C＝1.1，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1109[M-H]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Lys-Tyr-Ser-Val(4k)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.456g(0.41mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Lys-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.137g Pd/C，制得标题化合物0.278g，黄色固体，产率97.29％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.27)m.p：186.3～187.4℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-38.148$ (C＝0.9，甲醇)。HPLC纯度：98.99％(甲醇∶水＝72∶28)。ESI-MS(m/z)：694[M-H-H]^-.

实施例12  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Trp-Tyr-Ser-Val(4l)的制备

1)Boc-Trp-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1l)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.144g(2.09mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.763g(2.51mmol)Boc-Trp，制得标题化合物1.088g，淡黄色固体，产率62.47％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.28)m.p：90.5～91.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-15.68$ (C＝1.2，甲醇)。ESI-MS(m/z)：835[M+H]⁺.

2)Trp-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的制备(2l)

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl·HCl的方法，以1.498g(1.80mmol)Boc-Trp-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和7.4ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.312g，黄色油状物，产率99.54％。ESI-MS(m/z)：735[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Trp-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3l)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.310g(1.78mmol)Trp-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.682g(2.14mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物0.905g，淡黄色固体，产率49.02％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.26)m.p：113.2～114.6℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=8.633$ (C＝1.0，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1057[M+H]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Trp-Tyr-Ser-Val(4l)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.462(0.45mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Trp-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.139g Pd/C，制得标题化合物0.319g，紫色固体，产率94.71％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.26)m.p：172.5～173.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-12.467$ (C＝0.75，甲醇)。HPLC纯度：95.52％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：755[M+H]^-.

实施例13  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Phe-Tyr-Ser-Val(4m)的制备

1)Boc-Phe-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1m)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.079g(1.97mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.627g(2.36mmol)Boc-Phe，制得标题化合物1.077g，产率68.78％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.27)m.p：171.5～172.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-18.833$ (C＝0.80，甲醇)。ESI-MS(m/z)：796[M+H]⁺.

2)Phe-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2m)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.493g(1.88mmol)Boc-Phe-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和7.5ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.296g，黄色油状物，产率99.31％。ESI-MS(m/z)：696[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Phe-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3m的制备)

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.296g(1.87mmol)Phe-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.713g(2.24mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.218g，淡黄色固体，产率65.62％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.26)m.p：110.6～112.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=22.083$ (C＝0.8，甲醇)。ESI-MS(m/z)：995[M]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Phe-Tyr-Ser-Val(4m)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.440g(0.44mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Phe-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.132g Pd/C，制得标题化合物0.294g，黄色固体，产率93.01％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.24)m.p：166.2～167.8℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-12.882$ (C＝1.55，甲醇)。HPLC纯度：95.61％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：713[M-H]^-.

实施例14  1，2，3，4-四氢-β-Klss-3-酰基-Met-Tyr-Ser-Val(4n)的制备

1)Boc-Met-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1n)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.122g(2.05mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.613g(2.46mmol)Boc-Met，制得标题化合物1.129g，无色固体，产率70.75％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.23)m.p：72.8～74.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-6.196$ (C＝0.85，甲醇)。ESI-MS(m/z)：780[M+H]⁺.

2)Met-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2n)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.416g(1.82mmol)Boc-Met-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和7.1ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.230g，黄色油状物，产率99.68％。ESI-MS(m/z)：680[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Met-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3n)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.228g(1.84mmol)Met-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.702g(2.20mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.458g，无色固体，产率82.33％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.21)m.p：110.8～111.6℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=8.364$ (C＝1.1，甲醇)。ESI-MS(m/z)：979[M]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Met-Tyr-Ser-Val(4n)的制备

将0.366g(0.37mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Met-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl先加入1ml苯甲醚润湿，冰浴条件下加入6ml三氟醋酸(TFA)溶解化合物，再将3ml三氟甲磺酸(TFMSA)加入，冰浴反应1.5小时。一次性加入无水乙醚100ml，即析出大量絮状固体。静置，倾出上层清液，反复操作三次，过滤，滤饼用sephadex G-10柱脱盐，流动相为5％醋酸水溶液，茚三酮显色监测收集水溶液，冷冻干燥，制得标题化合物0.176g，黄褐色固体，产率67.55％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.26)m.p：156.2～157.5℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-19.556$ (C＝0.75，甲醇)。HPLC纯度：94.56％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：698[M-H]^-.

实施例15  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Leu-Tyr-Ser-Val(4o)的制备

1)Boc-Leu-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1o)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.292g(2.36mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.655g(2.83mmol)Boc-Leu，制得标题化合物1.238g，无色固体，产率68.96％，TLC(氯仿∶甲醇＝45∶1，Rf＝0.29)m.p：76.5～77.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-63.636$ (C＝1.1，甲醇)。ESI-MS(m/z)：762[M+H]⁺.

2)Leu-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2o)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.325g(1.74mmol)Boc-Leu-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和6.6ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.146g，无色油状物，产率99.65％。ESI-MS(m/z)：661[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Leu-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3o)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.146g(1.74mmol)Leu-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.663g(2.08mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.089g，无色固体，产率65.29％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.23)m.p：108.6～109.7℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-6.444$ (C＝0.9，甲醇)。ESI-MS(m/z)：961[M]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Leu-Tyr-Ser-Val(4o)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.428g(0.45mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Leu-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.128g Pd/C，制得标题化合物0.287g，紫色固体，产率94.68％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.23)m.p：177.5～178.9℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-38.697$ (C＝1.1，甲醇)。HPLC纯度：95.95％(甲醇∶水＝72∶28)。ESI-MS(m/z)：679[M-H]^-.

实施例16  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ile-Tyr-Ser-Val(4p)的制备

1)Boc-Ile-Tyr-Ser(Bz)-Val-OBzl(1p)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.287g(2.35mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.652g(2.82mmol)Boc-Ile，制得标题化合物1.179g，无色固体，产率65.91％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.35)m.p：88.9～90.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-6.210$ (C＝1.0，甲醇)。ESI-MS(m/z)：762[M+H]⁺.

2)Ile-Tyr-Ser(Bz)-Val-OBzl(2p)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.532g(2.01mmol)Boc-Ile-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和7.7ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.328g，黄色油状物，产率99.85％。ESI-MS(m/z)：662[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ile-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3p)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.328g(2.01mmol)Ile-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.768g(2.41mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧基，制得标题化合物1.326g，淡绿色固体，产率68.70％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.25)m.p：108.6～109.5℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=9.50$ (C＝0.8，甲醇)。ESI-MS(m/z)：984[M+Na]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ile-Tyr-Ser-Val(4p)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.406g(0.42mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Ile-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.122g Pd/C，制得标题化合物0.273g，绿色固体，产率94.66％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.23)m.p：172.5～173.6℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-29.053$ (C＝1.9，甲醇)。HPLC纯度：95.79％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：681[M-H]^-.

实施例17  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Arg-Tyr-Ser-Val(4q)的制备

1)Boc-Arg(NO₂)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(1q)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.325g(2.42mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.927g(2.90mmol)Boc-Arg(NO₂)，制得标题化合物1.169g，无色固体，产率56.89％，TLC(氯仿∶甲醇＝30∶1，Rf＝0.21)m.p：111.5～112.6℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-25.233$ (C＝1.0，甲醇)。ESI-MS(m/z)：849[M+H]⁺.

2)Arg(NO₂)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(2q)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.163g(1.37mmol)Boc-Arg(NO₂)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和5.8ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.023g，无色油状物，产率99.71％。ESI-MS(m/z)：750[M+H]⁺

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Arg(NO₂)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl(3q)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.011g(1.35mmol)Arg(NO₂)-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.516g(1.62mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物1.072g，无色固体，产率75.65％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.25)m.p：119.8～121.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-37.97$ (C＝1.1，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1049[M]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Arg-Tyr-Ser-Val(4q)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.425g(0.40mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Arg-Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl和0.128g Pd/C，制得标题化合物0.283g，绿色固体，产率96.60％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.23)m.p：159.6～160.5℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-15.079$ (C＝1.05，甲醇)。HPLC纯度：97.17％(甲醇∶水＝65∶35)。ESI-MS(m/z)：723[M-H]^-.

实施例18 3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Glu-(Tyr-Ser-Val)₂(4r)的制备

1)Boc-Glu-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂(1r)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.566g(2.86mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.321g(1.30mmol)Boc-Glu，制得标题化合物0.851g，无色固体，产率50.18％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.26)m.p：102.8～103.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-14.528$ (C＝1.2，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1330[M+Na]⁺.

2)Glu-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂(2r)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.01g(0.77mmol)Boc-Glu-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂和5.70ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物0.93g，黄色油状物，产率99.68％。ESI-MS(m/z)：1207[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Glu-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂(3r)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以0.930g(0.77mmol)Glu-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂和0.295g(0.93mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物0.596g，无色固体，产率51.29％，TLC(氯仿∶甲醇＝15∶1，Rf＝0.23)m.p：99.3～100.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=3.206$ (C＝1.05，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1530[M+Na]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Glu-(Tyr-Ser-Val)₂(4r)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.520g(0.35mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Glu-[Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl]₂和0.156g Pd/C，制得标题化合物0.345g，褐色固体，产率95.53％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.23)m.p：167.6～168.5℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-22.758$ (C＝1.5，甲醇)。HPLC纯度：97.84％(甲醇∶水＝70∶30)。ESI-MS(m/z)：1045[M-H]^-.

实施例19  3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asp-(Tyr-Ser-Val)₂(4s)的制备

1)Boc-Asp-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂(1s)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.583g(2.89mmol)Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl和0.306g(1.31mmol)Boc-Asp，制得标题化合物0.827g，无色固体，产率48.75％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.25)m.p：152.5～153.3℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-10.222$ (C＝0.75，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1315[M+Na]⁺.

2)Asp-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂(2s)的制备

用制备Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.142g(0.88mmol)Boc-Asp-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂和5.7ml氯化氢-乙酸乙酯(4N)，制得标题化合物1.045g，黄色油状物，产率99.15％。ESI-MS(m/z)：1294[M+H]⁺.

3)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asp-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂(3s)的制备

用制备Boc-Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl的方法，以1.045g(0.88mmol)Asp-[Tyr-Ser(Bzl)-Val-OBzl]₂和0.335g(1.05mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，制得标题化合物0.618g，无色固体，产率47.25％，TLC(氯仿∶甲醇＝20∶1，Rf＝0.24)m.p：117.5～118.2℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=6.190$ (C＝1.4，甲醇)。ESI-MS(m/z)：1516[M+Na]⁺.

4)3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asp-(Tyr-Ser-Val)₂(4s)的制备

用制备3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Val-Tyr-Ser-Val的方法，以0.556g(0.60mmol)Boc-3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asp-[Tyr-Ser(OBzl)-Val-OBzl]₂和0.167g Pd/C，制得标题化合物0.375g，绿色固体，产率97.61％，TLC(正丁醇∶水∶冰醋酸＝4∶1∶0.5，Rf＝0.23)m.p：158.6～159.5℃， ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=-25.628$ (C＝0.75，甲醇)。HPLC纯度：95.21％(甲醇∶水＝73∶27)。ESI-MS(m/z)：1033[M]^-.

试验例1本发明化合物口服给药的抗血栓试验

1)口服给药

药品：生理盐水(3ml/kg)、阿斯匹林(剂量为30mg/kg)的生理盐水溶液、本发明的化合物(剂量为10nmol/kg)的生理盐水溶液。

2)大鼠手术与器械

Wistar大鼠(雄性，190～220g)按1200mg-kg^-1剂量腹腔注射乌拉坦溶液进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，将远心端的手术线于皮毛用止血钳夹紧，准备在远心端插管。

3)插管

插管为硅烷化过的聚乙烯胶管，分三段，中段为聚乙烯胶管，长60.0mm，内径3.5mm；两端为相同的聚乙烯管，管长100.0mm，内径1.0mm，外径2.0mm该管的一端拉成尖管(用于插入大鼠颈动脉或静脉)，外径为1.0mm。将编好号的干净青霉素小瓶中分别装入6cm长的黑色手术线，称重；然后取出丝线，按照编号放入准备好的插管的中段较粗的插管中。

打开大鼠右侧动脉夹，用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU·kg^-1)，然后将插管的动脉端插入大鼠右侧颈总动脉，将计算量的肝素缓缓注入大鼠体内。夹闭大鼠右侧颈动脉夹，将插管的静脉端插入分离好的大鼠左侧颈静脉，打开动脉夹，使血液开始循环。并同时开始计时。此过程中插管中央的粗管中的丝线上会因为血液循环而产生血栓。

4)血栓称重

计时开始15分钟后，剪断动静脉插管，停止循环，用眼科镊小心取出丝线，在滤纸上轻轻蘸掉血滴，放入事先称重好的青霉素小瓶中，精确称重并记录。计算出血栓的湿重。每个药品重复10次给药。统计各组的血栓湿重(X±SD)，并做t检验。

5)结果

经口服给药，本发明化合物都具有很好的抗血栓活性。结果见表1。

表1化合物口服给药的体内抗血栓活性

n＝10；NS＝生理盐水；a：与生理盐水相比，P＜0.01；b：与母核1，2，3，4-四氢-β-咔啉羧酸相比，P＜0.05；c：与阳性药阿司匹林相比，P＜0.05；

试验例2本发明化合物1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-酰基-Asn-Tyr-Ser-Val(4d)口服给药的量效关系

1)给药溶液

药品：将4d按10nmol·kg^-1，1nmol·kg^-1和0.1nmol·kg^-1剂量配置生理盐水溶液，供口服给药。

2)大鼠手术与器械

Wistar大鼠(雄性，190～220g)按10nmol·kg^-1，1nmol·kg^-1和0.1nmol·kg^-1剂量口服，30min后按1200mg-kg^-1剂量腹腔注射乌拉坦溶液进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，将远心端的手术线于皮毛用止血钳夹紧，准备在远心端插管。

3)插管

插管为硅烷化过的聚乙烯胶管，分三段，中段为聚乙烯胶管，长60.0mm，内径3.5mm；两端为相同的聚乙烯管，管长100.0mm，内径1.0mm，外径2.0mm该管的一端拉成尖管(用于插入大鼠颈动脉或静脉)，外径为1.0mm。将编好号的干净青霉素小瓶中分别装入6cm长的黑色手术线，称重；然后取出丝线，按照编号放入准备好的插管的中段较粗的插管中。

打开大鼠右侧动脉夹，用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU·kg^-1)，然后将插管的动脉端插入大鼠右侧颈总动脉，将计算量的肝素缓缓注入大鼠体内。

2)血栓称重

计时开始15分钟后，剪断动静脉插管，停止循环，用眼科镊小心取出丝线，在滤纸上轻轻蘸掉血滴，放入事先称重好的青霉素小瓶中，精确称重并记录。计算出血栓的湿重。每个药品重复11次给药。统计各组的血栓湿重(X±SD)，并做t检验。

3)结果

经口服给药，在10nmol·kg^-1，1nmol·kg^-1和0.1nmol·kg^-1剂量下，4d剂量依赖地发挥抗血栓作用。结果列入表2

表2口服4d的量效关系

n＝10；NS＝生理盐水；a：与生理盐水相比，P＜0.05

10.0nmol与1.0nmol相比，P＜0.01

Claims (4)

1.具有抗血栓活性的咔啉羧酸-四肽偶联物，其结构式为式I所示：

式I

其中，所述的AA选自丙氨酸残基、甘氨酸残基、脯氨酸残基、谷氨酰胺残基、亮氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、色氨酸残基、组氨酸残基、天冬酰胺残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、丝氨酸残基、苏氨酸残基、甲硫氨酸残基、赖氨酸残基或精氨酸残基。

2.一种合成权利要求1所述咔啉羧酸-四肽偶联物的方法，包括以下步骤：

(1)制备AA-Tyr-Ser-Val四肽；

(2)将保护的3S-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的3位羧基与保护的AA-Tyr-Ser-Val四肽的氨端偶联，再脱去保护，即得；

其中，所述的AA选自丙氨酸残基、甘氨酸残基、脯氨酸残基、谷氨酰胺残基、亮氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、色氨酸残基、组氨酸残基、天冬酰胺残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、丝氨酸残基、苏氨酸残基、甲硫氨酸残基、赖氨酸残基或精氨酸残基。

3.一种抗血栓的药物组合物，其特征在于，由治疗或预防上有效量的权利要求1所述的咔啉羧酸-四肽偶联物和药学上可接受的载体或辅料所组成。

4.权利要求1所述的咔啉羧酸-四肽偶联物在制备抗血栓药物中的用途。

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