CN101842009A - 肺癌的治疗 - Google Patents

肺癌的治疗 Download PDF

Info

Publication number
CN101842009A
CN101842009A CN200880112940A CN200880112940A CN101842009A CN 101842009 A CN101842009 A CN 101842009A CN 200880112940 A CN200880112940 A CN 200880112940A CN 200880112940 A CN200880112940 A CN 200880112940A CN 101842009 A CN101842009 A CN 101842009A
Authority
CN
China
Prior art keywords
scv
group
day
cell
dosage
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN200880112940A
Other languages
English (en)
Inventor
辛西亚·W·塔特希尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sciclone Pharmaceuticals LLC
Original Assignee
Sciclone Pharmaceuticals LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sciclone Pharmaceuticals LLC filed Critical Sciclone Pharmaceuticals LLC
Publication of CN101842009A publication Critical patent/CN101842009A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

在受试者中施用免疫调节化合物以治疗、预防、抑制或减轻肺癌。

Description

肺癌的治疗
发明背景
本发明要求在2007年8月23日提交的美国临时申请流水号第60/957,530号的优先权，其公开的内容在此全部通过述及并入。
技术领域
本发明涉及肺癌的治疗领域。
背景技术
肺癌为肺组织的恶性转化和扩张，并且其每年导致130万的死亡。其在男性中是癌症相关死亡的最常见原因，在女性中是第二常见原因。
目前的研究表明对肺癌具有最大影响的因素为长期曝露于吸入性致癌物，特别是烟草烟雾。在其它方面肺癌的出现(低于十分之一)似乎是因为各遗传因素的组合。氡气和空气污染也可以促成肺癌的形成。
治疗和预后取决于癌症的组织学类型、阶段(扩散的程度)和患者的体力状态。目前的治疗包括外科手术、化疗和放疗。总体而言，5年生存率约为14％。
通过在显微镜下通过组织病理学观察恶性细胞的大小和形态，将肺癌分为两个主要类型：非小细胞(80％)和小细胞(约20％)肺癌。尽管这种分类基于简单的组织学标准，但是其对于所述疾病的临床管理和预后具有非常重要的意义。
非小细胞癌症(NSCLC)被归类在一起是因为它们的预后和管理大致相同。其具有三种主要的亚型：鳞状细胞肺癌、腺癌和大细胞肺癌。
鳞状细胞肺癌，占肺癌的29％，也始于大支气管，但是生长较慢。在诊断中这些肿瘤的大小是不同的。
腺癌是最常见的NSCLC亚型，占肺癌的32％。其是始于肺的气体交换表面附近的形式。腺癌的大多数病例与吸烟有关。然而，在从来没有吸烟的人(“非吸烟者”)中，腺癌是肺癌的最常见形式。腺癌的亚型，细支气管肺泡癌，在女性非吸烟者中更为常见，并且对治疗可能具有不同的应答。
大细胞癌为快速增长的形式，占肺癌的9％，其在接近肺的表面生长。
小细胞肺癌(SCLC，又称“燕麦细胞癌”)为肺癌的少见的形式。其倾向始于大呼吸管，并迅速生长变得十分巨大。涉及的最常见的致癌基因为L-myc。所述“燕麦”细胞含有致密神经分泌颗粒，其导致这种内分泌/副肿瘤综合征联合症。其最初对化疗更为敏感，但是最后导致差的预后，并在表现时经常是转移的。这种肺癌类型与吸烟强烈相关。
其它肺癌类型包括类癌、腺样囊性癌(圆柱瘤)和粘液表皮样癌。
转移癌
肺为来自身体其它部分的肿瘤的转移的常见部位。肾上腺、肝、脑和骨为原发性肺癌本身最常见的转移部位。
本领域内需要用于治疗、预防、抑制或减少肺癌的治疗方法。
发明内容
根据本发明，在受试者中用于治疗、抑制、减少或至少部分预防肺癌，其转移或来自肺外部的癌的肺中转移，或者用于治疗、抑制、减少或至少部分预防肺癌细胞、其转移、或来自肺外部的癌细胞的肺中癌细胞转移的生长的方法，包括给受试者施用治疗有效量的式A的免疫调节化合物：
其中，n为1或2，R为氢、酰基、烷基或肽片段，以及X为芳族或杂环氨基酸或者其衍生物，如此在受试者中治疗、抑制、减少或至少部分预防所述肺癌、其转移或来自肺外部的癌的肺中转移，或者如此治疗、抑制、减少或至少部分预防所述肺癌细胞、其转移、或来自肺外部的癌细胞的肺中癌细胞转移的生长。
附图说明
图1以图表描述在一个实施方案的一个研究中不同剂量下的肿瘤生长。
图2以图表描述在一个实施方案的一个研究中不同的剂量下的肿瘤重量。
发明详述
根据一个实施方案，本发明涉及通过向哺乳动物受试者(优选人类患者)施用免疫调节化合物用于治疗、至少部分预防、抑制或减少肺癌的治疗方法。
在某些实施方案中，所述疾病为肺癌、其转移、或来自肺外部的癌的肺中转移。可以使用本发明在受试者中治疗、至少部分预防、抑制或减少肺癌细胞、其转移、或来自肺外部的癌细胞的肺中癌细胞转移的生长。在一些实施方案中，在用本发明的化合物治疗之前、期间或之后通过外科手术去除原发性肺癌肿瘤、或其主要部分。
根据本发明的免疫调节化合物包含通式A的免疫调节剂：
Figure GPA00001113404200031
在通式A中，n为1或2，R为氢、酰基、烷基或肽片段，以及X为芳族或杂环氨基酸或其衍生物。优选地，X为L-色氨酸或D-色氨酸，最优选为L-色氨酸。
对于“X”合适的芳族或杂环氨基酸的衍生物为：酰胺、单或二-(C1-C6)烷基取代的酰胺、芳基酰胺和(C1-C6)烷基或芳基酯。对于“R”合适的酰基或烷基部分为：分支或不分支的1至约6个碳的烷基、2至约10个碳原子的酰基、以及封闭基团如苄氧甲酰基(carbobenzyloxy)和叔丁氧羰基。优选地，示于式A中的CH基团的碳当n为2时具有与X的立体构型不同的立体构型。
优选的实施方案使用的化合物例如γ-D-谷氨酰-L-色氨酸、γ-L-谷氨酰-L-色氨酸、γ-L-谷氨酰-Nin-甲酰-L-色氨酸、N-甲基-γ-L-谷氨酰-L-色氨酸、N-乙酰-γ-L-谷氨酰-L-色氨酸、γ-L-谷氨酰-D-色氨酸、β-L-天冬氨酰-L-色氨酸、和β-D-天冬氨酰-L-色氨酸。特别优选的实施方案使用γ-D-谷氨酰-L-色氨酸，有时称作SCV-07。美国专利第5,916,878号(通过述及并入本文)公开了这些化合物、制备这些化合物的方法、这些化合物药学上可接受的盐及其药物制剂。
SCV-07，即γ-D-谷氨酰-L-色氨酸为具有γ-谷氨酰基或β-天冬氨酰基部分的免疫调节药类的成员，其是由俄国科学家发现并且在美国由SciClonePharmaceuticals公司检测了在多种适应症中的有效性。SCV-07在体内和体外具有多种免疫调节活性。SCV-07增加Con-A诱导的胸腺细胞和淋巴细胞增殖、增加Con-A诱导的白介素-2(IL-2)生成和脾淋巴细胞的IL-2受体表达，并刺激骨髓细胞上的Thy-1.2的表达。在体内，SCV-07对5-FU-免疫-抑制的动物和在用绵羊红细胞免疫的模型中具有强烈的免疫刺激作用。
可以以任何有效的剂量施用式A化合物，例如，以范围在约0.001-1000mg，优选约0.1-100mg，并且最优选约10mg的剂量。可以每周一次或多次施用剂量，例如，以天计，每天施用剂量一次或多次剂量。可以通过任何合适的方法施用，包括口服、经鼻、经皮、舌下、注射、定期输注(periodic infusion)、连续输注等。可以通过肌肉注射施用剂量，尽管可以使用其它形式的注射或输注，也可以采用例如口服或鼻吸入或口服摄入等其它形式。可以使用气溶胶、溶液、悬浮剂、分散剂、片剂、胶囊、糖浆剂等。
也可以使用mg/kg(毫克每千克)来度量剂量，并且剂量在约0.00001-1000mg/kg的范围内，更优选在约0.01-100mg/kg的范围内，还更优选约0.1-50mg/kg，并且还更优选约1-20mg/kg。
包括具有取代、缺失、延长、替换或以其它方式修饰的部分的生物学活性类似物，其具有与SCV-07基本上类似的生物活性，例如，与SCV-07具有充分同源性的SCV-07衍生肽，使得其与SCV-07具有基本上相同的活性以基本上相同的方式起作用。
根据一个实施方案，可以将式A化合物施用给受试者以在治疗或预防期间在受试者循环系统中基本上连续保持有效量的式A化合物。尽管根据本发明预见了长得多的治疗期，但是本发明的实施方案包括在至少约6个、10个、12个小时或更长的治疗期期间在患者循环系统中基本上连续保持有效量的式A化合物。在其它实施方案中，治疗期为持续至少约1天，并且甚至持续多天，例如，一周或更久。然而，如上所限定，认为其中在受试者的循环系统中基本上连续保持有效量的式A化合物的治疗可以被持续时间相似或不同的非治疗期分开。
根据一个实施方案，在治疗期期间将式A的化合物连续地输注入受试者中，例如，通过静脉输注，从而在受试者循环系统中基本上连续保持有效量的式A化合物。可以通过任何合适的方法进行输注，例如通过微型泵。或者，可以保持式A化合物的注射方案从而在受试者循环系统中基本上连续保持有效量的式A化合物。合适的注射方案可以包括每1、2、4、6等小时注射，从而在治疗期间在受试者的循环系统中基本上连续保持有效量的免疫调节化合物肽。
虽然认为在连续输注式A化合物期间的施用会持续实际上更长的时间，但是根据一个实施方案，式A化合物的连续输注持续至少约1小时的治疗期。更优选地，进行更长时间的连续输注，例如持续至少约6、8、10、12小时或更长的时期。在其它实施方案中，连续输注持续至少约1天，并且甚至持续多天，例如一周或更久。
在一些实施方案中，式A化合物以约0.001-1000μg/ml，更优选约0.1-100μg/ml范围内的浓度存在于药学上可接受的液体载体中，例如注射用水、生理盐水或类似物。
可以通过常规的剂量滴定实验测定式A化合物的有效量。
式A化合物也可以与其它药剂一起施用。例如，对于癌症治疗，这些药剂包括化疗药物和/或放射。
可以通过任何合适的方法并以任何合适的剂量以及在本领域内施用的给药方案施用放射。例如，放射可以以约1Gy/分钟的剂量率进行，并且放射可以例如如下进行，每天两剂，例如，约4Gy/剂，隔天施用，用一天不施用放射隔开。
在治疗方案中可以与式A化合物一起施用的化疗剂包括任何合适的化疗剂，例如，但不限于顺铂、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、DTIC和/或其它。可以以任何合适的剂量和/或给药方案施用这些化疗剂，包括在本文的实施例中所提出的那些。
实施例1
缩写
CTX  环磷酰胺
F    雌性
g    克
IR   抑制率
IP   腹膜内
Kg   千克
L    长度
M    雄性
mL    毫升
SC    皮下
SD    标准偏差
W     宽度
概要
在本研究中，测试SCV-07在C57/BL6小鼠中对鼠肺肿瘤生长的抑制性作用。为总共70只小鼠中皮下植入鼠路易斯肺癌(Lewis lung cancer；LLC)细胞，接着单独用SCV-07或环磷酰胺(CTX)或者其组合连续处理14天。通过皮下注射每天施用SCV-07，而隔天通过腹膜内注射施用CTX。总共使用了7组：第1组：运载体；第2组：CTX 20mg/kg；第3组：CTX 40mg/kg；第4组：SCV-075mg/kg；第5组：SCV-0710mg/kg；第6组：SCV-075mg/kg加上CTX 20mg/kg；第7组：SCV-0710mg/kg加CTX 20mg/kg。每三天测量肿瘤体积和体重，并在研究结束时即第16天(尸体剖检日)测量肿瘤重量。
在整个研究期间，在各组中均没有发现动物死亡。此外，体重的统计结果显示仅SCV-07组与运载体对照组之间没有显著差异，表明SCV-07对动物的生长没有影响。相比之下，从第6天起，CTX处理组显示了体重的显著下降，特别是在施用高剂量CTX的组中。
对于肿瘤生长，在第3天，与第1组相比(运载体对照)，除第4组外的所有组显示了统计学上显著的对肿瘤体积的抑制。在第6天，仅第2组和第3组显示了抑制。在第9天，第2组、第3组和第7组显示了抑制。在第12天，除第4组外的所有组显示了抑制。在第15天，所有组的平均肿瘤大小在统计学上显著小于第1组。在第16天，所有处理组的平均肿瘤重量低于运载体对照组。第2组、第3组、第4组、第5组、第6组和第7组的肿瘤重量抑制率分别为45.54％(p＜0.01)、90.25％(p＜0.01)、18.08％(p＝0.07)、30.60％(p＜0.01)、48.57％(p＜0.01)和62.63％(p＜0.01)。
总而言之，在本研究中使用的肿瘤模型是有效的，因为运载体组显示了显著的肿瘤生长，而阳性对照药物CTX有效地减少了肿瘤的生长。14天每天施用SCV-07(10mg/kg)显著抑制了肿瘤生长。与运载体对照组相比，受处理动物中的肿瘤重量显著降低。此外，次优剂量(suboptimal dose)的CTX(20mg/kg)与高剂量的SCV-07(10mg/kg)的组合处理显示了提高的抗肿瘤效力。
介绍
本研究用鼠肺癌模型测试SCV-07的抗肿瘤效果以探索其在肺癌中作为抗肿瘤药的潜力。将CTX用作阳性对照(positive control)。也测试SCV-07和CTX的组合效果以测定是否存在累加效果或协同效果。
材料和方法
测试和对照品
将PBS用作阴性对照品(运载体)，而CTX作为阳性对照。CTX购自Sigma-Aldrich，并分为10mg/小瓶。加入PBS以达到在研究设计表中指明的适当剂量水平。将该制剂在冰上保存、避光并立即使用。将测试品(SCV-07)溶解在PBS中以达到在研究设计表中指明的适当剂量水平；在冰上保存、避光并在一周内使用。
测试系统和动物管理
鼠肺癌细胞(LLC)
鼠路易斯肺癌细胞获得自中国医学科学院细胞培养中心(Cell CultureCenter of Chinese Academy of Medical Sciences；CAMS；中华人民共和国，北京)。在用于实验前，将所述癌细胞在C57BL/6小鼠中进行适应。细胞适应(adaptation)的详情请参见4.3.1部分。
测试系统
35只雄性和35只雌性健康的首次用于实验(naive)的C57BL/6小鼠是从中华人民共和国北京CAMS的实验动物科学研究院(Institute of LaboratoryAnimal Science)收到的。这些动物为6周龄，并且在研究开始时重量为18至22克。
动物管理
动物被分组关在具有经高压灭菌的木屑作为铺垫材料的经高压灭菌的鞋盒笼(shoe box cage)里。动物房的温度保持在22～25℃，并且相对湿度保持在40～60％。除被研究相关的事件打断外，保持12小时光照/12小时黑暗循环。用无菌水和北京KeAoXieLi啮齿动物饲料(合格)自由(ad libitum)进行喂养。在肿瘤接种前使所有动物适应环境3天。
实验规程
肿瘤细胞适应
按照无菌组织培养规程，将一小瓶鼠肺癌细胞解冻并在20～25℃以1000rpm离心5分钟。将细胞沉淀(cell pellet)悬浮在0.5ml的生理盐水(NS)中，并皮下注射入各小鼠的右腋(约1×106细胞/小鼠)。当肿瘤直径达到约1cm时，用CO2窒息处死(euthanize)动物并切除肿瘤。将肿瘤细胞悬浮在前面所述的生理盐水中，并再重复一次细胞适应循环。
肿瘤细胞接种
将在体积为0.1mL的生理盐水中的1×106LLC细胞皮下注射到小鼠的右腋区域中。接种日定义为第0天。
研究设计和处理方案
在第1天，基于动物的体重将它们随机分为7个不同的组，使得各组间的平均体重在统计学上没有显著差异。在第1天开始给药。以0.1mL/20g体重的剂量体积(dose volume)通过皮下(sc)施用连续14天每天一次施用SCV-07，并且以相同的剂量体积每隔一天通过腹膜内注射施用CTX。所述运载体也是每天一次连续14天通过皮下施用相同剂量体积的PBS。所有组的处理方案概括于表1中。
表1：处理方案和研究设计
Figure GPA00001113404200081
抗肿瘤效果的评价
在整个研究的过程中，每3天测量所有动物的肿瘤大小和体重，由测径器测量肿瘤大小，并用实验室天平测量体重。每天监测并记录动物的死亡率和发病率。在第16天，通过CO2窒息处死动物，并切除、分离和称量肿瘤。
使用如下公式计算肿瘤体积：
肿瘤体积＝长度×宽度×宽度/2
根据如下公式计算肿瘤体积抑制率(IR)
IR(TV)＝(TV运载体-TV药物处理)/TV运载体×100％
其中，TV为测量日的肿瘤体积，“运载体”表示接受PBS的组，以及“药物处理”表示接受SCV-07和/或CTX的组。
也通过肿瘤重量评估单独使用SCV-07或与CTX一起组合使用的抗肿瘤效果。在处死后记录各小鼠的肿瘤重量，并根据下面的公式计算肿瘤重量的抑制率：
IR(TW)＝(肿瘤重量运载体-肿瘤重量药物处理)/肿瘤重量运载体×100％
使用Excel计算平均值和标准偏差。
统计学分析
使用斯氏t检验(student’s ttest)在肿瘤体积、肿瘤重量和体重方面进行组内比较。P值小于0.05被认为是统计学上显著的。
结果与讨论
死亡率
在本研究中没有观察到动物死亡。
肿瘤大小
肿瘤大小的原始测量数据列在附录1-10中。计算的肿瘤抑制率和各处理组与运载体组的统计比较列在表2-6中。肿瘤生长曲线示于图1中。基于肿瘤体积数据，除第4组外所有组在第3天显示了对肿瘤生长的显著抑制。第2组和第3组在第6天显示了抑制。在第9天，第2组、第3组和第7组的平均肿瘤大小在统计学上显著小于第1组(运载体)。在第12天，除第4组外，所有处理组的平均肿瘤大小在统计学上显著小于第1组。在第15天，所有组的平均肿瘤大小在统计学上显著小于第1组。在组合处理组中，高剂量的SCV-07与CTX显示了累加效果。
肿瘤重量
肿瘤重量的原始数据示于附录11中，而各处理组与运载体对照组之间的统计比较结果列表于表7中。如表7中所示，所有处理组在第16天测量的平均肿瘤重量低于运载体对照组。第2组、第3组、第4组、第5组、第6组和第7组的肿瘤抑制率分别为45.54％(p＜0.01)、90.25％(p＜0.01)、18.08％(p＝0.07)、30.60％(p＜0.01)、48.57％(p＜0.01)和62.63％(p＜0.01)。在第2组(CTX20mg/kg)与第6组(CTX 20mg/kg+SCV-075mg/kg)之间在肿瘤抑制上没有统计学上的显著差异。相比之下，第7组(CTX 20mg/kg+SCV-0710mg/kg)中的抑制率在统计学上显著大于第2组(CTX 20mg/kg)，表明当组合使用CTX和SCV-07时的累加效果。
图2示例了在研究结束时(第16天)所有组的肿瘤重量。
体重
体重测量的原始数据列于附录12-17中。各处理组与运载体组的统计比较结果列于表8-13中。
如所述表中所示，在第3天各处理组与运载体对照组之间无显著差异。在第6天，第3组(CTX 40mg/kg)显示体重抑制率为10.82％(P＜0.05)。其它组体重没有显著差异。在第9天，第2组(CTX 20mg/kg)、第3组(CTX 40mg/kg)和第6组(CTX 20mg/kg+SCV-075mg/kg)的抑制率分别为12.35％(p＜0.01)、16.12％(p＜0.01)和7.22％(p＜0.01)。随着在第6组中加入SCV-07，体重增加的抑制率降低。其它组的体重没有显著差异，表明SCV-07对动物的体重增加没有影响。在第12天，第2组(CTX 20mg/kg)、第3组(CTX 40mg/kg)和第6组(CTX 20mg/kg+SCV-075mg/kg)的抑制率分别为14.83％(p＜0.01)、21.97％(p＜0.01)和10.28％(p＜0.01)。在第15天，第3组(CTX 40mg/kg)中的抑制率为25％(p＜0.01)。其它组的体重没有显著差异。该结果表明CTX抑制体重增加可能是由于其毒性，而SCV-07可以部分保持抑制，可能是由于其减轻CTX毒性。
结论和讨论
总之，在本研究中使用的肿瘤模型是有效的，因为肿瘤生长可以被阳性对照药物CTX抑制。以10mg/kg每天施用测试品(test article)SCV-07持续14天针对肿瘤生长也是有效的。从第12天起，与用运载体处理的对照组相比，所有SCV-07处理组的动物中的肿瘤大小显著减小。在接受单独的10mg/kgSCV-07的组中和在接受组合疗法的组中，在第16天测量的肿瘤重量也显著减少，而在接受单独的5mg/kg SCV-07的组中却不是这样。此外，与使用单独的10mg/kg SCV-07或20mg/kg CTX时得到的30.6％和45.54％抑制相比，组合使用10mg/kg SCV-07和20mg/kg CTX共同产生了62.63％对肿瘤生长的抑制。这些结果提示组合使用SCV-07和CTX对肿瘤生长抑制产生累加效果。
CTX处理组中平均动物体重显著下降，表明其毒性作用。然而，随着在组合疗法组中SCV-07的加入，显示CTX的毒性作用至少部分地被SCV-07削弱。这种现象在第9天显现，当单独的CTX 20mg/kg对体重增加产生统计学上显著的抑制时，但是在组合处理组(CTX 20mg/kg+SCV-0710mg/kg)中所述抑制被消除。我们没有测试与对体重产生更显著影响的更高剂量的CTX(即，40mg/kg)组合的SCV-07的保护效果。SCV-07的保护效果，如果在未来的研究中被证实，在考虑SCV-07和CTX的组合疗法时会非常有用。总之，次优剂量的CTX(20mg/kg)与高剂量的SCV-07(10mg/kg)的组合显示了增加的抗肿瘤效力和较小的毒性。
表
表2：在第3天肿瘤大小的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(TV)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   0.0172±0.0078
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0022±0.0043   87.21   0.0000
  3   阳性对照2   CTX40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0014±0.0043   91.85   0.0000
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   0.0173±0.0137   -0.29   0.9921
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   0.0072±0.0068   58.43   0.0066
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0094±0.0100   45.34   0.0677
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(TV)％   P值
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0070±0.0058   59.30   0.0038
表3：在第6天肿瘤大小的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(TV)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   0.1091±0.0857
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0217±0.0248   80.15   0.0062
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0067±0.0196   93.86   0.0017
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   0.0908±0.0224   16.78   0.5216
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   0.0871±0.0366   20.17   0.4648
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔   10   0.0824±0.0560   24.44   0.4209
  一天
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0601±0.0406   44.89   0.1199
表4：在第9天肿瘤大小的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(TV)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   0.5252±0.2953
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0582±0.0100   88.92   0.0001
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(TV)％   P值
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0085±0.0195   98.39   0.0000
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   0.5286±0.1945   -0.66   0.9757
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   0.4001±0.2034   23.82   0.2845
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.3324±0.1944   36.71   0.1018
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0998±0.0602   81.01   0.0003
表5：在第12天肿瘤大小的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(TV)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   1.6607±0.6599
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.4864±0.1807   70.71   0.0000
  3   阳性对照2   CTX40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.0149±0.0333   99.11   0.0000
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   1.1649±0.2079   29.85   0.0360
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   0.7196±0.2452   56.67   0.0005
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.7505±0.3700   54.81   0.0013
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(TV)％   P值
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.3573±0.2481   78.49   0.0000
表6：在第15天肿瘤大小的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(TV)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   3.5911±1.5089
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   1.4398±0.4698   59.91   0.0004
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.1222±0.2207   96.60   0.0000
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   2.0853±0.5227   41.93   0.0080
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   1.7460±0.4757   51.38   0.0017
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   1.7240±0.6097   51.99   0.0019
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   1.1728±0.5247   67.34   0.0001
表7：在第16天肿瘤重量的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(TW)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   4.062±1.0113
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   1.806±0.5407   55.54   0.0000
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   0.396±0.5509   90.25   0.0000
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   3.329±0.6713   18.05   0.0722
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   2.819±0.7946   30.60   0.0068
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   2.089±0.7854   48.57   0.0001
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   1.518±0.6677   62.63   0.0000
表8：在第0天体重的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(BW)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   20.75±1.2869
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   20.86±1.2267   -0.53   0.8471
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   20.74±1.0490   0.05   0.9850
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   20.62±1.3935   0.63   0.8309
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，   10   20.84±1.2267   -0.43   0.8746
  皮下，每天
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   20.62±1.3139   0.63   0.8256
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   20.75±1.2704   0.00   1.0000
表9：在第3天体重的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(BW)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   20.56±1.5742
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   20.36±1.3954   0.97   0.7671
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   19.80±1.0414   3.70   0.2191
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   20.14±1.3468   2.04   0.5295
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   20.08±1.2444   2.33   0.4592
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(BW)％   P值
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/g，腹膜内，每隔一天   10   19.98±1.4328   2.82   0.4002
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   20.17±1.6446   1.90   0.5946
表10：在第6天体重的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(BW)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   20.51±1.5581
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   18.89±2.0041   7.90   0.0587
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   18.29±1.5344   10.82   0.0049
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   20.33±1.6674   0.88   0.8059
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   20.44±1.4909   0.34   0.9194
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   19.59±1.1921   4.49   0.1554
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   19.58±2.3766   4.53   0.3144
表11：在第9天体重的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(BW)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   22.45±1.0835
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   19.68±2.1856   12.35   0.0024
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   18.83±1.9922   16.12   0.0001
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   21.96±1.5551   2.18   0.4243
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   21.42±1.7453   4.59   0.1303
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   20.83±1.1016   7.22   0.0038
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   21.14±2.1966   5.84   0.1080
表12：在第12天体重的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(BW)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   23.26±2.1665
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   19.81±2.1231   14.83   0.0021
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   18.15±1.3168   21.97   0.0000
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   22.21±1.8071   4.51   0.2545
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   21.97±1.6371   5.55   0.1504
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(BW)％   P值
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   20.87±1.2623   10.28   0.0075
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   20.98±2.4512   9.80   0.0408
表13：在第15天体重的统计结果
  组号   组名   处理   存活动物数   平均重量(x±SD)   IR(BW)％   P值
  1   运载体对照   PBS   10   24.01±1.9076
  2   阳性对照1   CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   22.75±2.3590   5.25   0.2056
  3   阳性对照2   CTX 40mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   17.98±1.9240   25.11   0.0000
  4   测试品1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天   10   23.05±2.1423   4.00   0.3039
  5   测试品2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天   10   23.19±1.5538   3.42   0.3058
  6   组合1   SCV-07，5mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   22.52±1.4695   6.21   0.0661
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg，皮下，每天+CTX 20mg/kg，腹膜内，每隔一天   10   22.43±2.3641   6.58   0.1174
Figure GPA00001113404200171
Figure GPA00001113404200181
Figure GPA00001113404200191
Figure GPA00001113404200201
Figure GPA00001113404200241
Figure GPA00001113404200251
实施例2
评估SCV-07与放射组合在减少肿瘤生长中的功效
概要
在本研究中，使用小鼠中的H146肺癌模型测试在进行放射或不进行放射处理的情况下SCV-07对肿瘤生长的影响。用盐水或SCV-07在进行或不进行放疗的条件下每天一次处理带有肿瘤的小鼠20天。基于存活率和重量变化的观察结果，在本研究中没有证据显示SCV-07毒性，并且其不会改变H146肿瘤对放射的应答。当单独提供时，SCV-07以剂量依赖的方式有效减少肿瘤生长，以1mg/kg每日两次持续20天接受SCV-07的动物显示9.1％的肿瘤生长抑制，以及以10mg/kg每日两次持续20天接受SCV-07的动物显示35.9％的肿瘤生长抑制。当与单剂的放疗组合时，以10mg/kg每日两次持续20天用SCV-07处理导致78.3％肿瘤生长抑制，或相对于单独用放射处理的动物40.5％的TGI。基于这些观察结果，当单独使用或者与放疗组合使用时，SCV-07似乎都对减少肺癌模型中的肿瘤生长有效。
目标
使用小鼠中的NCI H146小细胞肺癌模型，评估SCV-07在作为单一疗法和与放疗组合两种情况下在抑制肿瘤生长方面的功效。
研究设计
将96只雌性裸小鼠(nu/nu)随机指定为8个处理组。每只鼠在其左下胁用Matrigel接种0.1ml体积的1×105的NCI-H146(H146)肺癌细胞。在肿瘤体积达到75-125mm3时开始处理。按照表2.1中所详述的用运载体、放射、SCV-07或放射和SCV-07处理各组。将药物处理的开始指定为第1天。第1组和第4组中的小鼠通过皮下(sc)注射接受运载体20天。第2-4和6-8组中的小鼠在第1至20天每天1次通过sc注射运载体中的SCV-07，并且第6-8组中的小鼠接受放射(在第0和2天4Gy/剂，2剂)。使用氯胺酮(120mg/kg)和甲苯噻嗪(6mg/kg)麻醉这些组的小鼠，并将它们置于铅屏中使得有肿瘤的胁区域暴露在放射中来进行放射。采用Philips 160kV源以约40cm的焦距给予放射，且剂量率约为1.0Gy/min。在整个研究期间隔日(on alternating days)测量肿瘤。第1-8组中的小鼠在第21天被处死，并将剩余肿瘤切除、测量、称重、拍照，并固定在福尔马林中用于后续分析。
表2.1SCI-05：研究设计
  组   动物数   肿瘤细胞接种物   RT第0和2天   药物处理和给药   途径   频率   安排
  1   12   1×105   无   运载体   sc   bid   第1-20天
  2   12   1×105   无   SCV-07100μg/kg   sc   bid   第1-20天
  3   12   1×105   无   SCV-071.0mg/kg   sc   bid   第1-20天
  4   12   1×105   无   SCV-0710.0mg/kg   sc   bid   第1-20天
  5   12   1×105   4Gy焦点上   运载体   sc   bid   第1-20天
  组   动物数   肿瘤细胞接种物   RT第0和2天   药物处理和给药   途径   频率   安排
  6   12   1×105   4Gy焦点上   SCV-07100μg/kg   sc   bid   第1-20天
  7   12   1×105   4Gy焦点上   SCV-071.0mg/kg   sc   bid   第1-20天
  8   12   1×105   4Gy焦点上   SCV-0710.0mg/kg   sc   bid   第1-20天
重量和存活率
为了评定可能的毒性，每天称量这些动物并记录它们的存活率。在研究的过程中，对任何显示损失＞20％的起始体重的动物进行处死。对任何肿瘤生长超过4000mm3的动物也进行处死。
材料和方法
组织培养
H146人肺癌细胞获得自ATCC。将这些细胞在补充有10％胎牛血清(FCS)、1％的青霉素和链霉素、和2mM L-谷氨酰胺的DMEM中培养。通过除去培养基，用无菌的无钙镁磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)清洗两次，并加入1至2ml 0.25％的胰岛素/0.03％EDTA溶液来进行传代培养。将烧瓶在37℃下温育直至细胞分离(detach)。然后以1∶3的比率传代培养细胞。
研究进行的场所(Location of Study Performance)
本研究是在Watertown MA的Biomodels AAALAC鉴定为合格的设备上进行的。本研究的使用动物许可获得自Biomodels IACUC。
动物
使用nu基因纯合的(nu+/nu+)(Charles River Labs)、5至6周龄、平均处理前体重为24克的雌性裸小鼠。使用耳部打孔对动物进行单独编号，每只笼舍容纳6只动物的组，并且在研究开始前使其适应环境。在至少2天的适应期中，每天观察动物以淘汰呈现差的状况的动物。
饲养条件(housing)
本研究在温度为70°F+/-5°F以及相对湿度为50％+/-20％的、提供过滤空气的动物房内进行的。将动物房设定保持每小时有至少12至15次换气。该房间设有自动定时器用于12小时开、12小时关的光照/黑暗循环，没有微光。
使用灭菌的
Figure GPA00001113404200281
铺垫。这些铺垫每周至少换一次。
使用市售洗涤剂洗涤笼舍、台面、瓶子等，并使其风干。在使用前，包裹这些物品并进行高压灭菌。使用市售的消毒剂消毒表面和引入到罩内的材料。每天清扫地板，并用市售洗涤剂拖地每周至少两次。用稀释的漂白剂溶液用海绵每月至少一次擦拭壁和笼架。用具有识别研究、剂量、动物号和处理组的必要适当信息的笼卡或标签标记所有笼舍。在研究期间记录温度和相对湿度，并且保持记录。
饮食
用经无菌Labdiet
Figure GPA00001113404200282
(预灭菌)的啮齿动物饲料喂养动物并为动物自由提供无菌水。
动物随机化和分配
在开始处理前，将小鼠随机且前瞻性地分成8组。各动物通过对应于单独编号的耳部穿孔进行识别。笼卡用于识别各笼并标记有研究编号(SCI-05)、处理组编号和动物编号。
结果评定
使用斯氏t检验、曼-惠特尼U检验和卡方分析用0.05的临界值测定各处理组之间的统计差异。
实验规程
使用测微计每两天一次测量肿瘤，并按照4/3πr3计算肿瘤体积，其中r等于长度与宽度之和除以4。使用如下公式计算肿瘤生长指数：100-(Vc*100/Vt)，其中Vc为对照组中的肿瘤的平均体积，且Vt为测试组中的肿瘤的平均体积。
结论和讨论
存活率
在本研究的过程中没有出现处理直接导致的动物死亡。
动物重量
在平均每日重量变化方面，在用运载体处理的组与接受SCV-07单一处理的动物(p＝0.7)之间或者在仅接受放射与接受结合有放射的SCV-07的动物之间(p＝0.68)没有显著差异。接受单独的运载体的小鼠到第21天仅仅增加了它们起始重量的13.2％。用100μg/kg、1.0mg/kg或10mg/kg SCV-07处理的小鼠到第21天增加了它们起始重量的10.2％-12.3％。用运载体处理并暴露于放射的小鼠到第21天增加了它们起始重量的3.2％。用100μg/kg、1.0mg/kg或10mg/kg SCV-07处理并暴露于放射的小鼠到第21天增加了它们起始重量的2.8％-3.6％。
通过计算各动物百分比重量变化的曲线下平均面积(AUC)并使用单向ANOVA检验(One-Way ANOVA test)比较各组来评估这些差异的显著性。
肿瘤体积
由隔日测量的长度和宽度大小来计算肿瘤体积，其通过计算平均半径(r)并使用计算体积的公式4πr3/3来进行，所述平均半径为长度和宽度之和除以4。
用100μg/ml处理的动物的肿瘤以高于运载体对照动物的速率生长。在没有受到照射的动物中，用10mg/kg的SCV-07处理的小鼠显示了最好的肿瘤生长抑制的改善。在研究期结束时，用运载体处理的动物的平均肿瘤体积为4436.6mm3，用100μg/kg SCV-07处理的动物为4923mm3，用1mg/kg SCV-07处理的动物为4033.4mm3，而用10mg/kg SCV-07处理的动物为2842.4mm3。
在受到照射的动物之中，用10mg/kg SCV-07处理的小鼠显示了最好的肿瘤生长抑制的改善。在研究期结束时的平均肿瘤体积，用运载体处理的动物为1618.5mm3，用100μg/kg SCV-07处理的动物为1322.3mm3，用1mg/kgSCV-07处理的动物为1923.9mm3，而用10mg/kg SCV-07处理的动物为962.8mm3。
通过计算各动物肿瘤体积的曲线下平均面积(AUC)并使用单向ANOVA检验比较各组来进一步分析数据。这些分析没有显示任何处理组与盐水对照组之间的显著差异(未受照射的动物为p＝0.13；而受到照射的动物为p＝0.14)。然而，使用曼-惠特尼秩和分析(Mann-Whitney Rank Sum analysis)对用运载体处理与10mg/kg SCV-07的直接比较是差异显著的(p＝0.026)。
使用公式：100-(Vc*100/Vt)计算肿瘤的生长抑制(TGI)，其中Vc为对照组中的肿瘤平均体积，而Vt为测试组中的肿瘤的平均体积。表2.2显示单独或者与放射组合用100μg/kg、1mg/kg、10mg/kg SCV-07处理的动物的肿瘤生长抑制。当与未受照射的对照相比时，用单独的1mg/kg SCV-07处理的动物具有9.1％的肿瘤生长抑制，而用单独的10mg/kg SCV-07处理的动物具有35.9％的肿瘤生长抑制。与未受照射的对照相比，用单独的放射处理的动物具有63.5％的TGI，而用SCV-07加上放射处理的动物的TGI值为70.2％(100μg/kg)、50.3％(1mg/kg)和78.3％(10mg/kg)。当与接受放射加上运载体的组比较时，用放射加上SCV-07处理的组在100μg/kg的TGI为18.3％，而在10mg/kg的TGI为40.5％。
表2.2
  组   RT日0和2   药物处理和给药   平均肿瘤体积(mm3)   TGI(％)
  1   -   运载体   4436.5   -
  2   -   SCV-07100μg/kg   4922.8   **
  3   -   SCV-071.0mg/kg2.0   4033.4   9.1
  4 -   SCV-0710.0mg/kg   2842.4   35.9   TGI(％)
  5   4Gy焦点上   运载体   1618.5   63.5   -
  6   4Gy焦点上   SCV-07100μg/kg   1322.3   70.2   18.3
  7   4Gy焦点上   SCV-071.0mg/kg2.0   1923.9   50.3   **
  组   RT日0和2   药物处理和给药   平均肿瘤体积(mm3)   TGI(％)
  8   4Gy焦点上   SCV-0710.0mg/kg   962.8   78.3   40.5
表2.2.肿瘤生长抑制(TGI)。由最终的肿瘤测量大小使用公式100-(Vc*100/Vt)计算TGI，其中Vc为对照组中的肿瘤平均体积，以及Vt为测试组中的肿瘤平均体积。
**第2和7组中的平均肿瘤体积超过运载体控制动物(分别为9.8％和15.87％)
结论
在本研究中基于存活率和重量变化的观察结果，没有证据显示SCV-07的毒性。
与运载体对照动物相比，用单独的10mg/kg SCV-07处理的动物显示了显著减少的肿瘤生长抑制(TGI＝68％)(P＝0.026)。
尽管统计学上不显著，与接受单独的运载体的动物相比，用单独的100μg/kg的SCV-07或用单独的1mg/kg SCV-07处理的动物显示了肿瘤生长的减少。
尽管统计学上不显著，相对于受到照射的运载体对照动物，用100μg/kg或10mg/kg SCV-07处理的受到照射的动物显示了肿瘤生长的减少。
Figure GPA00001113404200311
Figure GPA00001113404200321
Figure GPA00001113404200331
Figure GPA00001113404200341
附录2.3肿瘤重量(克)
  组   动物#   重量
  1   1   4.83
  组   动物#   重量
  1   2   2.2
  1   3   3.084
  1   4   4.042
  1   5   1.38
  1   6   5.76
  1   7   4.776
  1   8   3.488
  1   9   1.78
  1   10   3.667
  1   11   0.416
  1   12   10.6
  2   13   1.85
  2   14
  2   16   2.95
  2   16   5.84
  2   17   2.56
  2   18   1.56
  2   19   7.102
  2   20   16.56
  2   21   3.878
  2   22   4.74
  2   23   0.866
  组   动物#   重量
  2   24   2.821
  3   25   3.26
  3   26   2.64
  3   27   3.126
  3   28   1.674
  3   29   3.22
  3   30   5.65
  3   31   5.194
  3   32   5.36
  3   33   5.35
  3   34   0.994
  3   35   1.01
  3   36   2.91
  4   37   3.7
  4   38   5.116
  4   39   0.928
  4   40   3.142
  4   41   4.344
  4   42   9.198
  4   43   0.766
  4   44   1.77
  4   45   0.332
  组   动物#   重量
  4   46   1.31
  4   47   1.448
  4   48   1.38
  组   动物#   重量
  5   49   0.74
  5   50   1.36
  5   51   0.47
  5   52   2.43
  5   53   1.04
  5   54   0.41
  5   55   0.66
  5   56   0.7
  5   57   0.02
  5   58   1.19
  5   59   0.57
  5   60   0.35
  6   61   0.76
  6   62   0.17
  6   63   0.98
  6   64   0.83
  6   65   1.76
  6   66   0.83
  组   动物#   重量
  6   67   1.04
  6   68   0.63
  6   69   0.23
  6   70   0.51
  6   71   0.68
  6   72   0.45
  7   73   0.1
  7   74   0.3
  7   75   2.83
  7   76   3.93
  7   77   1.32
  7   78   3.3
  7   79   1.22
  7   80   0.72
  7   81   1.24
  7   82   3.52
  7   83   0.91
  7   84   0.43
  8   85   0.31
  8   86   0.39
  8   87   0.31
  8   88   0.33
  组   动物#   重量
  8   89   1.05
  8   90   0.49
  8   91   0.64
  8   92   0.48
  8   93   0.67
  8   94   0.62
  8   95
  8   96   0.89
实施例3
SCV-07和顺铂组合处理在携带皮下LLC肿瘤的小鼠中的抗肿瘤功效研究
缩写
BW：体重
CO2：二氧化碳
CDDP：顺-二胺二氯铂(顺铂)
g：克
kg：千克
L：长度
LLC：路易斯肺癌
mg：毫克
mL：毫升
PBS：磷酸盐缓冲盐水
PI：百分比抑制
SD：标准偏差
TV：肿瘤体积
TW：肿瘤重量
VBI：Vital Bridge(China)，Inc.
W：宽度
概要
在本研究中，SCV-07与顺铂(CDDP)一起的抑制效果在C57/BL6小鼠中基于自接种的鼠路易斯肺癌(LLC)细胞生长的皮下癌的生长来评估。为总共70只小鼠皮下植入鼠LLC细胞，接着单独或组合用SCV-07或CDDP连续处理14天。通过皮下注射每天施用SCV-07，而在第1、6和12天通过腹膜内注射施用CDDP。总共使用7组：第1组：运载体；第2组：CDDP 2mg/kg；第3组：CDDP 6mg/kg；第4组：SCV-0710mg/kg；第5组：SCV-07，20mg/kg；第6组：SCV-0710mg/kg加上CDDP 2mg/kg；第7组：SCV-0720mg/kg加上CDDP 2mg/kg。每3天记录一次体重，隔天测量一次肿瘤大小，并且在研究结束时即第16天(尸体剖检日)测量肿瘤重量。
在整个研究期间，没有动物死亡。体重的统计学结果显示单独SCV-07处理组(第4和5组)与运载体对照组(第1组)之间没有显著差异，表明SCV-07对动物生长没有影响。相比之下，从第三天开始，接受6mg/kg的CDDP处理的组(第3组)始终一贯地显示在体重方面统计学显著的减少。第2组，即接受2mg/kg CDDP处理的组，仅在第15天显示了统计学上显著的体重降低，而第7组，其接受2mg/kgCDDP和20mg/kg SCV-07的组合，从第三天开始相对于第1组始终一贯地显示了统计学上显著的体重降低。
肿瘤测量数据显示在第6天第2组和第3组的平均肿瘤体积在统计学上显著小于第1组。在第8、10、12、14天，所有组的平均肿瘤体积在统计学上显著小于第1组。在第16天，所有处理组的平均肿瘤重量均小于第1组。以肿瘤重量为基础计算第2组、第3组、第4组、第5组、第6组和第7组的肿瘤抑制分别为58.90％(p＜0.01)、77.35％(p＜0.01)、16.84％(p＜0.05)、37.45％(p＜0.01)、40.81％(p＜0.01)和56.13％(p＜0.01)。
综上，本研究中使用的肿瘤模型是有效的，因为阳性对照药物CDDP有效降低了肿瘤生长。用SCV-07(10mg/kg或20mg/kg)的处理抑制了肿瘤生长，如通过这些组相对于运载体对照组而言更小的肿瘤体积和更低的肿瘤重量所反映的。SCV-07(10或20mg/kg)与CDDP(2mg/kg)组合的处理方案比单独的SCV-07处理导致了更高的对肿瘤生长的抑制，但是与单独的CDDP比较没有增加抗-肿瘤功效(无累加效果)。
介绍
将本研究设计用于评估在鼠路易斯肺癌(LLC)模型中单独或与CDDP组合使用SCV-07的抗肿瘤效果，以探索其用于肺癌处理中的处理潜能。CDDP也用作验证癌症模型的阳性对照药物。
材料和方法
测试和对照品
PBS被用做阴性对照品(运载体)，而CDDP作为阳性对照。CDDP购自PUMC医院。由齐鲁制药有限公司(Qilu Pharmaceuticla Co.，LTD)加工，每瓶药物包含10mg CDDP粉剂。在使用前，向一瓶CDDP中加入PBS以达到如剂量配方表(表3.1)中所指明的适当的剂量水平。将该制剂在冰上保存、避光并立即使用。将测试品(SCV-07)溶解在PBS中以达到如表1所指明的适当的剂量水平；在冰上保存，避光，并在一周内使用。
表3.1：剂量配方
Figure GPA00001113404200381
测试系统和动物管理
鼠肺癌细胞(LLC)
鼠路易斯肺癌细胞获得自中国医学科学院细胞培养中心(CAMS；中华人民共和国，北京)。在用于实验前，将所述癌细胞在C57BL/6小鼠中进行适应。细胞适应的详情请参见4.3.1部分。
测试体系
35只雄性和35只雌性健康的首次用于实验的C57BL/6小鼠是从中华人民共和国北京CAMS的实验动物科学研究院收到的。这些动物为6周龄，并且在研究开始时重量为18至22克。
动物管理
动物被分组关在具有经高压灭菌的木屑作为铺垫材料的经高压灭菌的鞋盒笼里。动物房的温度保持在22～25℃，并且相对湿度保持在40～60％。除被研究相关的事件打断外，保持12小时光照/12小时黑暗循环。用无菌水和北京KeAoXieLi啮齿动物饲料(合格)自由进行喂养。在肿瘤接种前使所有动物适应环境3天。
实验规程
肿瘤细胞适应
从液氮原种(liquid nitrogen stock)中取出一瓶LLC细胞，并放入37℃水浴。轻微来回震荡(gentle swriling)直到瓶里的内容物解冻。使用无菌组织培养技术，立即用TD5A-WS离心机将细胞在20-25℃下以1000rpm离心5分钟。离心之后，将细胞悬浮于0.1-0.5mL生理盐水(NS)中然后皮下注射至10只小鼠内(每只小鼠0.1mL，约1×106个细胞)。1至2周之后，当肿瘤直径约为1厘米时，用过量CO2处死动物并切除肿瘤。用另外20只小鼠重复这些程序直到产生足够数量有充分可移植性的LLC细胞。
肿瘤细胞接种
在肿瘤植入当天，将0.1mL约1.2×106个细胞皮下注射到每只小鼠的右腋区域。将肿瘤植入日定义为第0天。
研究设计和处理方案
在第1天，将动物随机分成不同的重量匹配组，并且根据表3.2的方案开始给药。简而言之，连续14天在不同于肿瘤细胞植入的部位每天一次经皮下注射施用SCV-07，而在第1、6和12天腹膜内施用CDDP。
抗-肿瘤效果的评估
从第1天到第14天，每天两次检验死亡率和发病率，每3天记录一次体重，且每两天用测径器测量一次肿瘤。在研究结束时(第16天)，通过CO2窒息处死动物并切除肿瘤和秤重。
用以下公式计算肿瘤体积：
肿瘤体积＝长度×宽度×宽度/2
根据下面的公式计算肿瘤体积抑制(PI)：
PI(TV)＝(TV运载体-TV药物处理)/TV运载体×100％
其中，TV是测量日的肿瘤体积，“运载体”表示接受PBS的组，且“药物处理”表示接受SCV-07和/或CDDP的组。
也通过肿瘤重量评估了单独或与CDDP组合使用的SCV-07的抗肿瘤效果。处死之后记录每只小鼠的肿瘤重量，并根据下面的公式计算肿瘤重量的百分比抑制：
PI(TW)＝(TW运载体-TW药物处理)/TW运载体×100％
用Excel计算平均值和标准偏差。
表3.2：处理方案和研究设计
Figure GPA00001113404200391
Figure GPA00001113404200401
统计学分析
使用斯氏t检验在肿瘤体积、肿瘤重量和体重方面进行组内比较。P值小于0.05被认为是统计学上显著的。
结果与讨论
死亡率
在整个研究过程中没有动物死亡。
肿瘤大小
肿瘤大小的原始测量数据列表示于附录3.1-3.14中。计算的平均肿瘤体积和每个处理组相对于运载体组的统计检验结果列表示于表3-9。在第二天，任何组的肿瘤均无法测量。第4天，除了第4组外的所有组中平均肿瘤体积在统计学上显著小于第1组(运载体组)。第6天，仅第2组和第3组显示了较小的平均肿瘤体积。第8、10、12和14天，所有组的平均肿瘤体积均在统计学上显著小于第1组。
肿瘤重量
在第16天测量的肿瘤重量的原始数据列表示于附录3.15。根据肿瘤重量计算的百分比抑制(PI)值和在每个处理组与运载体组之间进行的统计学比较结果列表示于表3.10。如表3.10中所示，所有组的平均肿瘤重量均低于运载体组。第2组、第3组、第4组、第5组、第6组和第7组的PI值分别为58.90％(p＜0.01)、77.35％(p＜0.01)、16.84％(p＜0.05)、37.45％(p＜0.01)、40.81％(p＜0.01)和56.13％(p＜0.01)。虽然组合处理组(如第6组和第7组)比相应的仅接受SCV-07处理的组(即，第4组和第5组)的PI值高，但是这些PI值却并不比仅接受CDDP处理的第2组高。任一组合处理组与仅用CDDP处理的组(第2组)的PI值之间在统计学上均没有显著差异，表明当组合使用CDDP和SCV-07时无累加效果。
体重
体重测量的原始数据示于附录3.16-3.21中。对每个处理组相对于运载体组的统计比较结果列表示于表3.11-3.16中。
如表3.11-3.16中所示，第0天在每个处理组和运载体组之间在统计学上无显著差异。第3天，第3组(CDDP 6mg/kg)和第7组(CDDP 2mg/kg+SCV-0720mg/kg)相对于运载体组在体重上分别显示了9.33％(P＜0.01)和8.31％(P＜0.01)的降低。其它组与运载体组相比在体重上没有统计学显著差异。第6天，第3组和第7组的体重比运载体组低10.45％(p＜0.01)和6.58％(p＜0.01)。第9天，第3、6和7组的体重比运载体组分别低14.51％(p＜0.01)、8.70％(p＜0.05)和11.41％(p＜0.01)。第12天，第3组和第7组的体重比运载体组分别低13.62％(p＜0.01)和6.65％(p＜0.05)。第15天，第2、3、6和7组的体重比运载体组分别低12.51％(p＜0.01)、24.38％(P＜0.01)、10.42％(P＜0.05)和14.56％(P＜0.01)。在整个研究过程中，仅接受SCV-07处理的第4组和第5组的体重在统计学上无显著差异，表明单独使用SCV-07时，对动物体重无显著影响。相反，CDDP处理与体重损失有关，并且在接受高剂量(6mg/kg)CDDP的第3组中观察的尤为显著。组合使用SCV-07和CDDP并没有缓解体重损失，但是事实上可能使CDDP-相关的体重损失更显著。在接受CDDP与高剂量SCV-07的第7组中记录了比仅接受CDDP的第2组中更大的体重损失。
结论和讨论
总而言之，本研究中所用的肿瘤模型是有效的，因为阳性对照药物CDDP抑制了肿瘤生长。以10mg/kg和20mg/kg每天施用测试品SCV-07针对肿瘤生长是有效的。从第8天起，与运载体对照组相比，所有SCV-07处理组动物中的平均肿瘤体积显著减小。在单独接受10mg/kg或20mg/kg SCV-07的组中和接受组合疗法的组中在第16天测量的肿瘤重量也显著减少。组合使用10mg/kg或20mg/kg SCV-07与2mg/kg CDDP产生了40.81％和56.13％的肿瘤生长抑制，相比之下单独使用10mg/kg或20mg/kg SCV-07获得了16.84％和37.45％抑制，而单独使用2mg/kg或6mg/kg CDDP时获得了58.90％和77.35％抑制。这些结果提示组合使用SCV-07和CDDP对于肿瘤生长的抑制没有产生累加效果。
CDDP处理组中的平均体重显著降低，表明其毒性作用。单独使用时，在所有SCV-07-处理组中SCV-07未引起任何统计学上显著的体重损失，表明SCV-07对动物体重没有影响。然而，当将SCV-07与CDDP组合使用时，其可能加重与CDDP-相关的体重损失，因为在第7组中记录了较大的重量损失，该组在整个研究过程中接受与高剂量SCV-07组合的CDDP。
表
表3.3：第2天平均肿瘤体积(cm3)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   0   -   -
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   0 -   -
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   0   - -
  4   测试品1   SCV-0710mg/kg   10   0   -   -
  5   测试品2   SCV-0720mg/kg   10   0   -   -
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0 -   -
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0 -   -
表3.4：第4天平均肿瘤体积(cm3)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   0.007±0.0024
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   0.000±0.0006   93.90   0.0000
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   0.000±0.0002   98.66   0.0000
  4   测试品1   SCV-0710mg/kg   10   0.006±0.0040   16.97   0.3989
  5   测试品2   SCV-0720mg/kg   10   0.004±0.0016   42.01   0.0032
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.004±0.0039   51.10   0.0168
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.003±0.0013   54.15   0.0002
表3.5：第6天平均肿瘤体积(cm3)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   0.071±0.0222
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   0.015±0.0072   78.57   0.0000
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   0.004±0.0039   93.76   0.0000
  4   测试品1   SCV-07 10mg/kg   10   0.096±0.0348   -35.62   0.0689
  5   测试品2   SCV-07 20mg/kg   10   0.069±0.0229   3.31   0.8185
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.069±0.0229   3.31   0.8185
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.055±0.0241   22.63   0.1384
表3.6：第8天平均肿瘤体积(cm3)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   0.449±0.0880
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   0.089±0.0458   80.19   0.0000
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   0.035±0.0291   92.13   0.0000
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  4   测试品1   SCV-07 10mg/kg   10   0.329±0.1108   26.73   0.0153
  5   测试品2   SCV-07 20mg/kg   10   0.270±0.0929   39.73   0.0003
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.185±0.0504   58.70   0.0000
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.161±0.0449   64.12   0.0000
表3.7：第10天平均肿瘤体积(cm3)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   1.102±0.2442
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   0.221±0.0873   79.98   0.0000
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   0.092±0.0658   91.67   0.0000
  4   测试品1   SCV-07 10mg/kg   10   0.695±0.2090   36.92   0.0008
  5   测试品2   SCV-07 20mg/kg   10   0.621±0.1795   43.70   0.0001
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.402±0.1256   63.55   0.0000
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.393±0.0892   64.37   0.0000
表3.8：第12天平均肿瘤体积(cm3)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   1.565±0.3264
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   0.481±0.0951   69.28   0.0000
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   0.185±0.1165   88.16   0.0000
  4   测试品1   SCV-07 10mg/kg   10   1.081±0.3261   30.92   0.0038
  5   测试品2   SCV-07 20mg/kg   10   0.902±0.3294   42.41   0.0003
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.649±0.1757   58.55   0.0000
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.648±0.2096   58.58   0.0000
表3.9：第14天平均肿瘤体积(cm3)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤体积(平均值±SD)   PI(TV)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   2.388±0.5225
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   0.802±0.0858   66.44   0.0000
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   0.374±0.2229   84.35   0.0000
  4   测试品1   SCV-07 10mg/kg   10   1.467±0.3658   38.58   0.0002
  5   测试品2   SCV-07 20mg/kg   10   1.259±0.2956   47.30   0.0000
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   1.027±0.2889   57.01   0.0000
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   0.907±0.2647   62.03   0.0000
表3.10：第16天平均肿瘤重量(g)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤重量(平均值±SD)   PI(TW)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   4.08±0.6159
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   1.68±0.4358   58.90   0.0000
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   0.92±0.4679   77.35   0.0000
  4   测试品1   SCV-0710mg/kg   10   3.39±0.5793   16.84   0.0193
  5   测试品2   SCV-0720mg/kg   10   2.55±0.4791   37.45   0.0000
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   2.42±0.4954   40.81   0.0000
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   1.79±0.5690   56.13   0.0000
表3.11：第0天平均体重(g)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤重量(平均值±SD)   PI(BW)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   17.40±0.8069
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   17.52±0.9402   -0.69   0.7629
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   17.57±0.8970   -0.98   0.6612
  4   测试品1   SCV-0710mg/kg   10   17.39±0.7156   0.06   0.9769
  5   测试品2   SCV-0720mg/kg   10   17.15±0.5442   1.44   0.4272
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   17.10±0.9250   1.72   0.4496
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   16.97±0.6019   2.47   0.1935
表3.12：第3天平均体重(g)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤重量(平均值±SD)   PI(BW)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   17.57±0.8486
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   16.56±1.4592   5.75   0.0747
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   15.93±1.5762   9.33   0.0096
  4   测试品1   SCV-07 10mg/kg   10   17.67±0.7469   -0.57   0.7829
  5   测试品2   SCV-07 20mg/kg   10   17.52±0.3676   0.28   0.8662
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   16.65±1.3277   5.24   0.0814
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   16.11±0.9061   8.31   0.0016
表3.13：第6天平均体重(g)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤重量(平均值±SD)   PI(BW)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   18.09±0.7795
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   17.52±1.2639   3.15   0.2405
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   16.20±1.1402   10.45   0.0004
  4   测试品1   SCV-07 10mg/kg   10   18.12±0.6250   -0.17   0.9254
  5   测试品2   SCV-07 20mg/kg   10   17.88±0.4492   1.16   0.4700
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   17.51±1.2512   3.21   0.2294
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2m/kg   10   16.90±1.0088   6.58   0.0085
表3.14：第9天平均体重(g)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤重量(平均值±SD)   PI(BW)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   18.40±0.8511
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   17.74±1.0926   3.59   0.1492
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   15.73±0.7558   14.51   0.0000
  4   测试品1   SCV-0710mg/kg   10   18.59±0.6173   -1.03   0.5748
  5   测试品2   SCV-0720mg/kg   10   18.24±0.5522   0.87   0.6240
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   16.80±1.5463   8.70   0.0103
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   16.30±0.7394   11.41   0.0000
表3.15：第12天平均体重(g)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤重量(平均值±SD)   PI(BW)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   19.24±1.4789
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   18.23±1.8233   5.25   0.1905
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   16.62±1.6164   13.62   0.0014
  4   测试品1   SCV-07 10mg/kg   10   18.89±1.0429   1.82   0.5484
  5   测试品2   SCV-07 20mg/kg   10   19.12±0.8522   0.62   0.8266
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   18.29±1.9116   4.94   0.2298
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   17.96±1.1862   6.65   0.0468
表3.16：第15天平均体重(g)
  组号   组名   处理   存活动物数   肿瘤重量(平均值±SD)   PI(BW)   P值
  1   运载体对照   PBS   10   20.06±1.2057
  2   阳性对照1   CDDP 2mg/kg   10   17.55±1.6216   12.51   0.0010
  3   阳性对照2   CDDP 6mg/kg   10   15.17±1.9810   24.38   0.0000
  4   测试品1   SCV-07 10mg/kg   10   19.01±1.1939   5.23   0.0661
  5   测试品2   SCV-07 20mg/kg   10   19.31±0.8724   3.74   0.1284
  6   组合1   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   17.97±1.9647   10.42   0.0102
  7   组合2   SCV-07，10mg/kg+CDDP 2mg/kg   10   17.14±1.1394   14.56   0.0000
Figure GPA00001113404200481
Figure GPA00001113404200491
Figure GPA00001113404200501
Figure GPA00001113404200521
Figure GPA00001113404200551
Figure GPA00001113404200571
实施例4
在体外SCV-07对B16、LLC和RenCa细胞系增殖的影响
缩写
5-Fu   5-氟尿嘧啶
CV     变异系数
DMEM   Dulbecco氏改良Eagle氏培养基
DMF    N，N-二甲基甲酰胺
DTIC   5-(3，3-二甲基-1-三氮烯)咪唑-4-甲酰胺
FBS    胎牛血清
LLC    路易斯肺癌
MTT    甲基噻唑基联苯四唑溴化物
       (Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide)
NA     不适用
OD     吸光度
PBS    磷酸缓冲盐水
RPMI   Roswell Park Memorial Institute
SD     标准偏差
SDS    十二烷基硫酸钠
SOP    标准操作规程
VBI    Vital Bridge(China)，Inc.
Vs     比较
概要
进行本研究以评估在体外SCV-07对B16、LLC和RenCa细胞的细胞毒性作用。
在12种不同浓度(包括空白对照)的SCV-07或阳性对照药物(即DTIC、5-Fu和顺铂)存在下在96孔板中培养B16、LLC或RenCa细胞。SCV-07的浓度根据血浆浓度近似于之前体内研究的有效剂量的来选择。5-Fu和顺铂的浓度按照文献报道的各自的IC50值来选择。SCV-07和阳性对照药物的温育时间从24到72小时变化。药物对细胞增殖的抑制效果由MTT法来测定。
5-Fu和顺铂的处理在相应的细胞系中导致了显著的细胞毒性效果。5-Fu抑制B 16细胞增殖的IC50值在三次测定中分别估计为0.26、0.38和0.26μg/mL。在RenCa细胞中，5-Fu的IC50值在三次测定中分别估计为0.03、0.04和0.04μg/mL。顺铂抑制LLC细胞增殖的IC50值在三次测定中分别估计为3.26、3.07和3.10μg/mL。所有测试浓度的SCV-07(0.05-100μg/mL)在培养的B16、LLC和RenCa细胞中均不抑制细胞增殖。SCV-07的IC50值由于缺少对其浓度-抑制曲线的拟合而没有获得。
总而言之，本研究证明了SCV-07在培养的B16、LLC和RenCa肿瘤细胞中无体外细胞毒性效果。
介绍
本研究的目的是评估在体外SCV-07对B16、LLC和RenCa细胞的细胞毒性效果。
SCV-07是免疫调节剂。其在之前的体内研究中已经被证实抑制皮下植入小鼠的肿瘤细胞(B16、LLC或RenCa)的生长(1-3)。在本研究中，评估了SCV-07在体外对这些肿瘤细胞系的细胞毒效性果。
在SCV-07或阳性对照药物(DTIC、5-Fu或顺铂)存在下在96孔板中培养B16、LLC和RenCa细胞。在不同细胞系中药物的温育时间从24至72小时变化。使用MTT测定法评定对细胞增殖的抑制。
材料和方法
材料
SCV-07
SCV-07(Lot#RR002101)由赞助者提供。通过将4.2mg SCV-07溶解在8.4mL无菌Dulbecco氏PBS(Invitrogen，Cat#14190-144)中制备了浓度为0.5mg/mL的SCV-07原液(stock solution)。然后将原液无菌过滤，在2至8℃下保存，并用锡纸遮光。使用之前，用培养基将原液进一步稀释成不同的浓度。
DTIC
DTIC购自Sigma(Cat.#D2390，Lot#026K1363)。通过将8.8mg DTIC溶解在500μL的0.1N HCI中再加入380μL Milli-Q水制备了10mg/mL的原液。制成后，将原液无菌过滤，在2至8℃下保存，并用锡纸遮光。使用之前，用培养基将原液进一步稀释成不同的浓度。
5-FU
5-Fu购自Sigma(Cat.#F6627，Lot#125K1499)。通过将4.8mg 5-Fu溶解在9.6mL无菌Dulbecco氏PBS(Invitrogen，Cat.#14190-144)中制备了0.5mg/mL的原液。制成后，将原液无菌过滤，在2至8℃下保存，并用锡纸遮光。使用之前，用培养基将原液进一步稀释成不同的浓度。
顺铂
顺铂购自齐鲁制药有限公司。通过将10mg顺铂溶解在10mL无菌Dulbecco氏PBS(Invitrogen，Cat.#14190-144)中制备了1mg/mL的原液。制成后，将原液无菌滤过并在2至8℃下保存。使用之前，用培养基将原液进一步稀释成不同浓度。
其它材料
MTT购自Sigma(Cat.#M2128)。FBS、青霉素-链霉素、DMEM和RPMI-1640培养基购自Invitrogen。
Figure GPA00001113404200601
孔平底板(BD，Cat.#353072)购自Fisher Scientific。
测试体系
B16细胞的培养
B16黑素瘤细胞系从中国科学院上海细胞库获得。将细胞在补充有10％FBS、100单位/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基中培养。
LCC细胞的培养
LCC细胞系从中国科学院上海细胞库获得。将细胞在补充有10％FBS、100单位/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM中培养。
RenCa细胞的培养
RenCa细胞系从中国军事科学院获得。将细胞在补充有10％FBS、100单位/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基中培养。
MTT测定法
根据VBI SOP 65.026实施MTT测定法。简言之，用上述相应的培养基制备了B16、LLC或RenCa细胞的悬液。向
Figure GPA00001113404200602
孔平底板的每个孔中接种100μL细胞悬液。接种密度是每孔10000个细胞(B16和LLC细胞系)或每孔7000个细胞(RenCa细胞系)。通过向平板加入25μL药物进行药物处理，然后将平板在37℃、5％CO2条件下温育一段预先确定的时间(药物处理详情参见表4.1)。药物处理为12种不同浓度包括空白对照，每个浓度测试一式四份。SCV-07的浓度根据血浆浓度近似于之前体内研究的有效剂量来选择。5-Fu和顺铂的浓度按照文献中报道的它们各自用于相应细胞系的IC50值来选择。药物处理以后，以终浓度1mg/mL向每个孔中加入MTT，并继续细胞温育4小时。在MTT温育结束时，向平板中加入由SDS和DMF组成的提取缓冲液以通过活细胞溶解从MTT中转化的甲
Figure GPA00001113404200611
(formazan)。然后用Tecan InfiniteM200平板阅读器在570nm测量每个孔的OD。
表4.1药物处理设计
Figure GPA00001113404200612
数据分析
平均值和SD的计算
将原始OD数据输入Microsoft Excel进行平均值和SD的计算。
IC50的计算
抑制细胞增殖的IC50是用Prism 5.01(GraphPad Software，Inc.)计算的。将导致杀死细胞的药物浓度排除在IC50的测定之外。用下面的公式估计IC50：
其中，X表示药物的浓度，且Y表示相应的OD。最低值表示OD理论上的最低值(对应于细胞生长的最大抑制)，而最高值表示OD理论上的最高值。IC50表示产生50％应答的药物浓度。在输入所有X和Y值后，最低值、最高值和IC50的值通过拟合到内置抑制模式(即，Log[抑制剂]vs相应模型)由程序自动测定。
结果
SCV-07对B16细胞的影响
测量了SCV-07和阳性对照药物对B16细胞增殖的效果。计算的IC50值列于表4.2中。原始数据和计算的平均值和SD列表示于附录4.1-4.4中。SCV-07的浓度-抑制曲线基本是平坦的，表示SCV-07对B16细胞无细胞毒性作用(即，抑制细胞增殖)。DTIC最初被用作阳性对照。然而，仅在高浓度(即，250和500μg/mL)注意到了细胞毒性效果，并且由于曲线不能收敛而无法确定IC50值。这可能是由于DTIC缺乏肝细胞依赖性的活化。观察从0.2至20μg/mL浓度范围内的5-Fu对细胞生长的抑制。50和100μg/mL导致杀死细胞。因此这两个浓度排除在IC50分析之外。5-Fu在三次测定中测定的IC50值为0.26、0.38和0.26μg/mL。相反，由于缺乏拟合的浓度-抑制曲线而未获得SCV-07的IC50值。
表4.2B16细胞的生长抑制的IC50
Figure GPA00001113404200621
“-”表示因没有拟合而没有得到的IC50值。NT：未测试。
SCV-07对LLC细胞的影响
测量了SCV-07和顺铂(阳性对照药物)对LLC细胞增殖的影响。计算的IC50值列于表4.3中。原始数据和计算的平均值和SD列表示于附录4.5-4.7中。SCV-07的浓度-抑制曲线是基本上平坦的，表明在LCC细胞中无细胞毒性。相反，对于浓度为1.0μg/mL及以上的顺铂观察到了细胞毒性效果。顺铂在三次测定中的IC50值为3.26、3.07和3.10μg/mL，而由于缺乏拟合的浓度-抑制曲线而无法确定SCV-07I的IC50值。
表4.3LLC细胞的生长抑制的IC50
Figure GPA00001113404200622
“-”表示因缺乏拟合而没有得到的IC50值。
SCV-07对RenCa细胞的影响
测量了SCV-07和5-Fu(阳性对照药物)对RenCa细胞增殖的影响。计算的IC50列于表4.4中。原始数据和计算的平均值和SD列表示于附录4.8-4.10中。SCV-07的浓度-抑制曲线是基本上平坦的，表示在RenCa细胞中无细胞毒性。相反，对于浓度为0.05-10μg/mL范围的5-Fu观察到了细胞毒性效果。20、50和100μg/mL导致杀死细胞。因此这三个浓度排除在IC50分析之外。5-Fu在三次测定中的IC50值为0.03、0.04和0.04μg/mL。相比之下，由于缺乏拟合的浓度-抑制曲线而没有获得SCV-07的IC50值。
表4.4RenCa细胞的生长抑制的IC50
Figure GPA00001113404200631
“-”表示因缺乏拟合而没有得到的IC50值。
结论和讨论
在相应的细胞系中5-Fu和顺铂的处理导致了对细胞增殖的显著抑制，验证了这种测定法用于测定测试化合物的潜在细胞毒性的有效性。5-Fu在三次测定中抑制B16细胞增殖的IC50值估计为0.26、0.38和0.26μg/mL。在RenCa细胞中，5-Fu在三次测定中估计的IC50值为0.03、0.04和0.04μg/mL。顺铂在三次测定中估计的抑制LLC细胞增殖的IC50值为3.26、3.07和3.10μg/mL。在较高浓度(即，250和500μg/mL)下记录了DTIC的细胞毒性。在较低的DTIC浓度缺乏可察的细胞毒性与肝细胞将DTIC代谢转化为毒性更大的代谢物的需要相一致，这些代谢物没有包括在本研究中。
与阳性对照药物的显著细胞毒性形成鲜明的对比，在培养的B16、LLC或RenCa细胞中SCV-07未导致对细胞增殖的抑制。由于缺乏对其浓度-抑制曲线的拟合而没有获得SCV-07的IC50值。
SCV-07不存在细胞毒性效果与典型的通过激活免疫系统发挥其效果的免疫调节剂的作用机理相符。然而，应该注意的是由SCV-07衍生的代谢物的细胞毒性效果还有待测定。与DTIC一样，肝细胞-介导的SCV-07的代谢活化可能是细胞毒效果的必要前提。利用SCV-07代谢物或由肝细胞和肿瘤细胞组成的细胞培养物体系的研究可有助于进一步确定在SCV-07用于肿瘤治疗的作用机理中细胞毒性的作用。
总而言之，本研究证实了在本实验条件下SCV-07对培养的B16、LLC和RenCa肿瘤细胞没有体外细胞毒性作用。
附录4.1：MTT测定11280701的原始数据和计算的平均值和SD
                              药物处理(SCV-07对DTIC)
细胞系  B16(10000细胞/孔)  药物处理时间  24小时
Figure GPA00001113404200641
附录4.2：MTT测定法12050701的原始数据和计算的平均值和SD
                                药物处理(SCV-07对5-FU)
细胞系  B16(10000细胞/孔)  药物处理时间  24小时
Figure GPA00001113404200643
Figure GPA00001113404200651
附录4.3：MTT测定法12050702的原始数据和计算的平均值和SD
                            药物处理(SCV-07对5-FU)
细胞系  B16(10000细胞/孔)  药物处理时间  24小时
Figure GPA00001113404200652
Figure GPA00001113404200653
附录4.4：MTT测定法12050703的原始数据和计算的平均值和SD
                            药物处理(SCV-07对5-FU)
细胞系  B16(10000细胞/孔)  药物处理时间  24小时
Figure GPA00001113404200661
Figure GPA00001113404200662
附录4.5：MTT测定法12060704的原始数据和计算的平均值和SD
                           药物处理(SCV-07对顺铂)
细胞系  LLC(10000细胞/孔)  药物处理时间  48小时
Figure GPA00001113404200671
附录4.6：MTT测定法12060705的原始数据和计算的平均值和SD
                                药物处理(SCV-07对顺铂)
细胞系  LLC(10000细胞/孔)  药物处理时间  48小时
Figure GPA00001113404200672
Figure GPA00001113404200681
附录4.7：MTT测定法12060706的原始数据和计算的平均值和SD
                            药物处理(SCV-07对顺铂)
细胞系  LLC(10000细胞/孔)  药物处理时间  48小时
Figure GPA00001113404200682
Figure GPA00001113404200683
附录4.8：MTT测定法12070704的原始数据和计算的平均值和SD
                            药物处理(SCV-07对5-Fu)
细胞系  RenCa(7000细胞/孔)  药物处理时间   72小时
Figure GPA00001113404200692
附录4.9：MTT测定法12070705的原始数据和计算的平均值和SD
                            药物处理(SCV-07对5-Fu)
细胞系RenCa(7000细胞/孔)    药物处理时间   72小时
Figure GPA00001113404200693
Figure GPA00001113404200702
附录4.10：MTT测定法12070706的原始数据和计算的平均值和SD
                            药物处理(SCV-07对5-Fu)
细胞系  RenCa(7000细胞/孔)  药物处理时间    72小时
Figure GPA00001113404200703
Figure GPA00001113404200711

Claims (23)

1.一种治疗方法，其用于在受试者中治疗、至少部分预防、抑制或减少肺癌、其转移或来自肺外部的癌的肺中转移，或者用于治疗、至少部分预防、抑制或减少肺癌细胞、其转移或来自肺外部的癌细胞的肺中癌细胞转移的生长，该方法包括给受试者施用有效量的式A的免疫调节化合物：
Figure FPA00001113404100011
其中，n为1或2，R为氢、酰基、烷基或肽片段，以及X为芳族或杂环氨基酸或其衍生物，如此在所述受试者中治疗、至少部分预防、抑制、或减少所述肺癌、所述其转移或所述来自肺外部的癌的肺中转移，或者如此治疗、至少部分预防、抑制或减少所述肺癌细胞、所述其转移或所述来自肺外部的癌细胞的肺中癌细胞转移的生长。
2.权利要求1的方法，其中X为L-色氨酸或D-色氨酸。
3.权利要求1的方法，其中所述化合物为SCV-07。
4.权利要求1的方法，其中以约0.001-1000mg范围内的剂量施用所述化合物。
5.权利要求1的方法，其中以约0.01-100mg范围内的剂量施用所述化合物。
6.权利要求1的方法，其中以约0.00001-1000mg/kg受试者体重范围内的剂量施用所述化合物。
7.权利要求1的方法，其中以约0.01-100mg/kg受试者体重范围内的剂量施用所述化合物。
8.权利要求1的方法，其中所述化合物为SCV-07，并且以约0.001-1000mg范围内的剂量施用。
9.权利要求1的方法，其中所述化合物为SCV-07，并且以约0.00001-1000mg/kg受试者体重范围内的剂量施用。
10.权利要求3的方法，其中所述治疗用于原发性肺癌。
11.权利要求10的方法，其中以约0.001-1000mg范围内的剂量施用所述化合物。
12.权利要求10的方法，其中以约0.1-100mg范围内的剂量施用所述化合物。
13.权利要求10的方法，其中以约0.00001-1000mg/kg受试者体重范围内的剂量施用所述化合物。
14.权利要求10的方法，其中以约0.01-100mg/kg受试者体重范围内的剂量施用所述化合物。
15.权利要求3的方法，其中所述治疗用于肺癌转移。
16.权利要求15的方法，其中以约0.001-1000mg范围内的剂量施用所述化合物。
17.权利要求15的方法，其中以约0.1-100mg范围内的剂量施用所述化合物。
18.权利要求15的方法，其中以约0.00001-1000mg/kg受试者体重范围内的剂量施用所述化合物。
19.权利要求15的方法，其中以约0.01-100mg/kg受试者体重范围内的剂量施用所述化合物。
20.权利要求12的方法，其中所述剂量为约10mg。
21.权利要求17的方法，其中所述剂量为约10mg。
22.权利要求1的方法，其中在治疗方案中施用所述式A的化合物，所述治疗方案额外包括施用放射或化疗剂中的至少一种。
23.权利要求22的方法，其中所述化疗剂包括顺铂、5-FU或DTIC中的至少一种。
CN200880112940A 2007-08-23 2008-08-21 肺癌的治疗 Pending CN101842009A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US95753007P 2007-08-23 2007-08-23
US60/957,530 2007-08-23
PCT/US2008/009932 WO2009025830A1 (en) 2007-08-23 2008-08-21 Treatment of lung cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101842009A true CN101842009A (zh) 2010-09-22

Family

ID=40378469

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200880112940A Pending CN101842009A (zh) 2007-08-23 2008-08-21 肺癌的治疗

Country Status (14)

Country Link
US (1) US20110189305A1 (zh)
EP (1) EP2192835A4 (zh)
JP (1) JP2010536854A (zh)
KR (1) KR20100063078A (zh)
CN (1) CN101842009A (zh)
AU (1) AU2008289522A1 (zh)
BR (1) BRPI0815772A2 (zh)
CA (1) CA2697261A1 (zh)
EA (1) EA201070295A1 (zh)
MX (1) MX2010002046A (zh)
NZ (1) NZ584065A (zh)
UA (1) UA98508C2 (zh)
WO (1) WO2009025830A1 (zh)
ZA (1) ZA201001876B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7906486B2 (en) 2007-02-13 2011-03-15 Sciclone Pharmaceuticals, Inc. Method of treating or preventing tissue deterioration, injury or damage due to disease of mucosa
RU2519738C2 (ru) * 2011-12-12 2014-06-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Способ лечения рака легкого

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5916878A (en) * 1995-11-28 1999-06-29 Edward T. Wei γ-glutamyl and β-aspartyl containing immunomodulator compounds and methods therewith

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5902790A (en) * 1995-10-03 1999-05-11 Cytran, Inc. Pharmaceutical angiostatic dipeptide compositions and method of use thereof
US5744452A (en) * 1995-11-28 1998-04-28 Edward T. Wei γ-L-glutamyl containing immunomodulator compounds and methods therewith
RU2141483C1 (ru) * 1997-07-04 1999-11-20 Небольсин Владимир Евгеньевич Производные пептидов или их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения, применение и фармацевтическая композиция
RU2229892C2 (ru) * 2001-06-08 2004-06-10 Государственное учреждение "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии" Способ лечения туберкулеза легких

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5916878A (en) * 1995-11-28 1999-06-29 Edward T. Wei γ-glutamyl and β-aspartyl containing immunomodulator compounds and methods therewith
CN1284943A (zh) * 1997-12-25 2001-02-21 魏德烽 含有γ－谷氨酰基和β－天冬氨酰基的免疫调制剂化合物及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
D.LYNNE SMITH等: "Natural killer cell cytolytic activity is necessary for in vivo antitumor activity of the dipeptide L-glutamyl-L-tryptophan", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER》 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2009025830A1 (en) 2009-02-26
KR20100063078A (ko) 2010-06-10
EA201070295A1 (ru) 2010-10-29
BRPI0815772A2 (pt) 2014-09-30
ZA201001876B (en) 2010-11-24
EP2192835A4 (en) 2010-11-10
JP2010536854A (ja) 2010-12-02
AU2008289522A1 (en) 2009-02-26
NZ584065A (en) 2012-03-30
UA98508C2 (ru) 2012-05-25
EP2192835A1 (en) 2010-06-09
CA2697261A1 (en) 2009-02-26
US20110189305A1 (en) 2011-08-04
MX2010002046A (es) 2010-05-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6789916B2 (ja) 薬学的組成物及び方法
US10307465B2 (en) Pharmaceutical compositions and methods
US11052068B2 (en) Pharmaceutical compositions and methods
CN101842009A (zh) 肺癌的治疗
US11103559B2 (en) Pharmaceutical compositions and methods
US8163702B2 (en) Treatment of melanoma
US7906486B2 (en) Method of treating or preventing tissue deterioration, injury or damage due to disease of mucosa
US20100267637A1 (en) Treatment of melanoma with alpha thymosin peptides in combination with a kinase inhibitor
EA042139B1 (ru) Фармацевтические композиции и способы лечения рака
TWI434829B (zh) 以密環菌乙素來治療癌症之新穎用途
Revill Velafermin
CA2516097A1 (en) A combined therapy comprising an indolopyrrolocarbazole derivative and another antitumor agent

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20100922