CN101779634B - 一种含春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的杀菌组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的杀菌组合物，该组合物中含有春雷霉素和二氯异氰尿酸钠作为活性组分制成的杀菌剂中，春雷霉素与二氯异氰尿酸钠的重量比为1∶25～79；春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的累积重量占制剂总重量比的36～80％。本发明产品具有增效作用明显、速效性好、持效期长、高效低残留等优点，可以延缓水稻稻瘟病和纹枯病的抗性。

Description

一种含春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的杀菌组合物

技术领域

本发明涉及一种杀菌剂农药，具体是一种含春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的杀菌组合物。

背景技术

水稻是我国主要粮食作物之一，种植面积约占全国耕地面积的1/4，年产量约占全国粮食总产的1/2。然而，水稻病害的危害一直严重影响着水稻生产。在现行防治条件下，全国平均每年因各种稻病造成稻谷减产达200亿kg，如果不进行防治，减产可达300亿kg。稻瘟病和纹枯病是水稻病害中流行情况复杂，潜在威胁大的两大病害，两病都是由真菌感染所致，危害地域广泛，在大风吹动下可在同一时间席卷整个田野，摧毁水稻，甚至可能导致颗粒无收；因此水稻稻瘟病和纹枯病的防治就成了摆在广大水稻种植户面前的一大难题。我国防治稻瘟病主要以三环唑、稻瘟灵、异稻瘟净为主，纹枯病主要以井冈霉素、春雷霉素等为主的老品种，由于多年使用抗性增加，防治效果下降。

二氯异氰尿酸钠是一种广谱、新型的内吸性杀菌剂，具有强大的穿透杀伤力。化学性质稳定，喷施在作物表面能慢慢的释放次氯酸，通过使菌体蛋白质变性，改变膜通透性，干扰酶系统生理生化及影响DNA合成等过程，使病原菌迅速死亡。二氯异氰尿酸钠与其它常用的杀菌剂无交互抗性，且比常规杀菌剂持效期长，并具有高度的选择性，对作物、人畜及有益生物安全，对环境基本无污染。

春雷霉素属农用抗菌素类低毒杀菌剂，具有较强的内吸渗透性，同时具有预防和治疗作用，其治疗作用更为显著。作用机理是干扰病原菌的氨基酸代谢的酯酶系统，破坏蛋白质的生物合成，抑制菌丝的生长和造成细胞颗粒化，使病原菌失去繁殖和侵染能力，从而达到杀死病原菌防治病害的目的。对细菌、酵母以及植物真菌均有活性，尤其是对水稻稻瘟病菌及纹枯病菌的孢子萌发、茵丝生长和孢于形成均有抑制氨基酸合成为蛋白质的作用。春雷霉素施用于水稻等作物后，经内吸传导到植物体内，显著地抑制稻瘟病蛋白质的合成乃至菌丝生长，使肽键拉长，抑制肽转移酶的活性。

实际的农药田间试验表明，重复且专一施用一种活性化合物来防治有害真菌在很多情况下导致菌株的快速选择性，为降低抗性菌株选择性的危险性，通常使用的方法是筛选出不同活性的化合物的混合物来防治有害真菌。而如何将具有不同作用机理的活性化合物进行组合，使其能延缓抗性，降低施用量，减少防治成本，一直是人们不断研究的课题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种对于防治水稻稻瘟病和纹枯病具有协同增效作用的杀菌组合物。

本发明以如下技术方案解决上述技术问题：本发明杀菌组合物是由以下组分组成：春雷霉素和二氯异氰尿酸钠以及农药的常规助剂，其中春雷霉素和二氯异氰尿酸钠作为活性组分，春雷霉素与二氯异氰尿酸钠的重量比为1∶25～79，优选为1∶39。

春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的累积重量占制剂总重量比的36～80％。

所述杀菌组合物的加工剂型为可溶性粒剂，配制时添加以下占制剂总重量比的助剂：润湿剂1～3％、分散剂1～3％、吸附剂1～3％、粘结剂1～3％、余量为载体。

试验结果表明，本发明将春雷霉素和二氯异氰尿酸钠合理复配，融合两成分的特点，具有协同增效作用，可以延缓水稻稻瘟病和纹枯病的抗性。

具体实施方式

本发明产品中的有效成分是春雷霉素和二氯异氰尿酸钠，它们的化学名称、结构式和基本物化参数如下：

a)有效成分I：二氯异氰尿酸钠

ISO通用名称：二氯异氰尿酸钠

化学名称：二氯异氰尿酸钠

结构式：

分子式：NaCl2(CNO)3

相对分子质量(按2001年国际相对原子质量计)：219.95

生物活性：杀菌

密度：0.74g/mL。

b)有效成分II：春雷霉素

ISO通用名称：Kasugamycin

化学名称：[5-氨基-2-甲基-6-(2，3，4，5，6-羰基环己基氧代)吡喃-3-基氨基-a-亚氨醋酸]

结构式：

分子式：C14H25N3O9

相对分子质量(按2001年国际相对原子质量计)：433.8

生物活性：杀菌；

熔点：202℃-204℃(分解)；

蒸汽压(25℃)：＜13mPa；

溶解性能：以盐酸盐形式存在，易溶于水，微溶于甲醇，不溶于乙醇、丙醇、酯类(乙酸)、乙酸、三氯甲烷、苯及石油醚等有机溶剂。

稳定性：在常温下稳定，在酸性和中性条件下稳定，在碱性条件下易分解。

本发明产品是由符合标准的春雷霉素和二氯异氰尿酸钠原药与助剂溶解在适宜的溶剂中制成可溶性粒剂。

本发明有效成分的分析方法是：

春雷霉素：生物测定法萤光杯法(NIHJ B-245)；

二氯异氰尿酸钠：化学法(碘量法Q/10RJH002-92)。

本发明产品主要应用于水稻，防治对象是稻瘟病和纹枯病，有效成分施用量是37～50克/亩，使用时采用喷施方法。

以下是三个实施例A、B、C的原料配比表：

所述润湿剂可以是：聚乙二醇、拉开粉、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、壬(辛)基酚聚氧乙烯醚、木质素磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、二辛基丁二酸酯磺酸钠、椰子油N-甲基牛磺酸钠、十六烷基甜菜碱、二壬基磷酸钠、茶皂素、月桂醇醚硫酸钠以及它们的复配物。

所述分散剂可以是：亚甲基双甲基苯磺酸钠、单烷基萘磺酸钠、双烷基萘磺酸钠、萘磺酸甲醛缩合物钠盐、烷基或芳烷基磺酸甲醛缩合物钠盐、萘酚磺酸甲醛缩合物钠盐、石油磺酸钠、烷基苯磺酸钙盐、N-甲基-脂肪酰基-牛磺酸盐、有机磷酸酯类、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物、木质素磺酸盐、壬(辛)基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、烷基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚以及它们的复配物。

所述粘结剂可以是：F-F胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠以及这些品种的复配物。

所述吸附剂可以是：10X分子筛等化工类使用的吸附剂以及这些品种的复配物。

所述载体可以是高岭土、云母粉、轻质碳酸钙、陶土、滑石粉以及这些品种的复配物。

本发明产品的制备工艺是：将春雷霉素原药和二氯异氰尿酸钠原药及其它助剂按配比进行搅拌混合均匀，经检验、灌装、包装后即得成品。

本发明由南宁德丰富化工有限责任公司将本发明产品与春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的单剂进行农药室内联合毒力测定对比以及本发明产品的配方筛选试验，有关数据及结果如下：

一、对水稻稻瘟病的试验

1试验依据：NY/T1156.2-2006；供试靶标：水稻稻瘟病原菌。

本试验从田间采集稻瘟病样品并分离纯化得到水稻稻瘟病菌种，采用菌丝生长速率抑制法，进行春雷霉素与二氯异氰尿酸钠不同比例二元混配的联合毒力测定，评价其增效作用，并综合分析其毒力、增效作用及生产成本，确定这两种药剂混配的最佳配比。

2试验条件

2.1供试靶标

水稻稻瘟病(Pyricularia oryzae)，从广西南宁市武鸣县水稻田采集稻瘟病样品，室内分离纯化鉴定培养，得到水稻稻瘟病菌种。

2.2培养条件

菌种保存在25℃光照培养箱中。接种后置于光照培养箱中培养，温度27±1℃，相对湿度85％左右条件下培养。

2.3仪器设备

2.3.1光照培养箱(广东医疗器械厂)；

2.3.2电子天平(感量0.1mg)；

2.3.3打孔器；

2.3.4培养皿；

2.3.5接种器；

2.3.6移液管

2.3.7卡尺等。

3试验设计

3.1试材准备

PDA培养基(1000mL)的制备：马铃薯200g，葡萄糖17g，琼脂17g。

供试的稻瘟病菌株，先在PDA培养基上，置于光照培养箱中培养，温度27±1℃，相对湿度85％左右条件下培养备用。

3.2试剂

3.2.1试验药剂

混剂1号(春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝0.50∶39.50，下同)、混剂2号(0.75∶39.25)、混剂3号(1.00∶39.00)、混剂4号(1.25∶38.75)、混剂5号(1.50∶38.50)。

3.2.2对照药剂

春雷霉素(kasugamycin)原药，含量65％，华北制药集团制剂有限公司，市购。

二氯异氰尿酸钠原药，含量91％，山西康派伟业生物科技有限公司，市购。

3.2.3其他试剂

丙酮(分析纯)；

0.1％吐温-80蒸馏水溶液。

3.3剂量设置

3.3.1剂量设置

根据预备试验结果，设置等比浓度如下：

春雷霉素设置处理浓度为192、96、48、24、12mg/L；

二氯异氰尿酸钠设置处理浓度为288、144、72、36、18mg/L；

混剂1号设置处理浓度为192、96、48、24、12mg/L；

混剂2号设置处理浓度为192、96、48、24、12mg/L；

混剂3号设置处理浓度为192、96、48、24、12mg/L；

混剂4号设置处理浓度为192、96、48、24、12mg/L；

混剂5号设置处理浓度为192、96、48、24、12mg/L。

4试验步骤

4.1药剂配制

在预备试验的基础上，准确称取91％二氯异氰尿酸钠原药1.0990g，用丙酮溶解，装入100ml的容量瓶中，用丙酮定容，得10g·L-1母液；准确称取65％春雷霉素原药1.5385g，用丙酮溶解，装入100ml的容量瓶中，用丙酮定容，得10g·L-1母液；然后分别称取春雷霉素母液、二氯异氰尿酸钠原药按下列比例混配：

混剂1号春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝0.50∶39.50；

混剂2号春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝0.75∶39.25；

混剂3号春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝1.00∶39.00；

混剂4号春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝1.25∶38.75；

混剂5号春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝1.50∶38.50；

最后再将两种单剂和上述5种不同配比的混剂母液，分别用0.1％吐温-80蒸馏水溶液按照等比梯度稀释成5个浓度的药液，剂量设置参见3.3.1。

4.2药剂处理

在无菌条件下，将预先融化的灭菌培养基定量加入无菌锥形瓶中，从低浓度到高浓度依次定量吸取相同体积(1ml)药液，分别加入上述锥形瓶中，充分摇匀，然后等量倒入4个直径为9cm的培养皿中，制成相应浓度的含药平板。

试验设不添加春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的丙酮溶液的PDA平板处理为空白对照。

4.3菌饼的移植与培养

用灭过菌的孔径为5mm的打孔器在培养好的菌落上选均匀部分打取菌饼，用消毒镊子夹取菌饼放于药液处理过的PDA平板上，菌丝面朝下，在27℃恒温培养箱中培养7d，与空白对照相比较，每处理4次重复。

5数据调查与统计分析

5.1调查方法

视空白对照培养皿中菌的生长情况，在培养箱中培养7d左右，用“十”字交叉法测定2次，以其平均值代表各处理菌落的增长直径。

5.2计算方法

根据调查数据，按照公式(1)计算防效，单位为百分率(％)，计算结果保留小数点后两位。

$P=\frac{D_0-D_1}{D_0}\×100...\left(1\right)$

式中：P——防治效果

D0——空白对照菌落直径

D1——药剂处理菌落直径

5.3统计分析

利用DPS(数据处理软件)及Excel，建立各药剂的毒力回归方程，计算LC50值、LC90和95％置信限。

5.4混配剂共毒系数计算及增效作用评价

采用孙云沛法(1960)评价混剂增效作用。根据下列公式计算混剂实测毒力指数。

$\mathrm{ATI}=\frac{S}{M}\×100...\left(3\right)$

式中：ATI——混剂实测毒力指数；

S——标准药剂的EC50，单位为毫克每升(mg/L)；

M——混剂的EC50，单位为毫克每升(mg/L)。

根据下列公式计算混剂理论毒力指数

TTI＝TI_A×P_A+TI_B×P_B……………………………………(4)

式中：TTI——混剂理论毒力指数；

TIA——A药剂毒力指数；

PA——A药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率(％)；

TIB——B药剂毒力指数；

PB——B药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率(％)。

根据下列公式计算混剂的共毒系数

$\mathrm{CTC}=\frac{\mathrm{ATI}}{\mathrm{TTI}}\×100...\left(5\right)$

式中：CTC——共毒系数；

ATI——混剂实测毒力指数；

TTI——混剂理论毒力指数。

复配剂的共毒系数(CTC)≥120表现为增效作用；CTC≤80表现为拮抗作用；80＜CTC＜120表现为相加作用。

6试验结果与分析

6.1单剂对水稻稻瘟病的毒力测定结果

单剂处理菌落的发病情况和毒力测定结果见附表1，经统计分析，单剂的毒力回归方程及检验结果见附表2。从附表2看出，二氯异氰尿酸钠对水稻稻瘟病的EC50为58.82mg/L，EC90为638.34mg/L；春雷霉素对水稻稻瘟病的EC50为49.29mg/L，EC90为369.59mg/L。

6.2混剂对水稻稻瘟病的毒力测定结果

分别测定了5个不同配比的春雷霉素与二氯异氰尿酸钠对水稻稻瘟病的毒力。混剂的毒力基本上高于春雷霉素与二氯异氰尿酸钠。毒力高低次序依次为：混剂3号＞混剂4号＞混剂2号＞混剂5号＞混剂1号，毒力最高的混剂3号(即春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝1∶39)对水稻稻瘟病的EC50为37.99mg/L，EC90为293.51mg/L，毒力最低的混剂1号(即春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝0.5∶39.5)对水稻稻瘟病的EC50为48.14mg/L，EC90为336.01mg/L。(见附表2)

6.3混剂对水稻稻瘟病的共毒系数

从共毒系数(CTC)计算结果(见附表3)看出，各混剂的共毒系数分别为：121.89、133.17、154.09、136.80、125.94，均大于120，表明这些混剂增效作用明显，其中混剂3号(春雷霉素·二氯异氰尿酸钠＝1∶39)，其共毒系数为154.09，增效最为明显，综合成本、防效、增效情况等多方面的因素考虑，该配比比较合理。

7试验结论

7.1本次试验所测定的春雷霉素和二氯异氰尿酸钠5个配比混剂对水稻稻瘟病的共毒系数(CTC)都大于120，表现出明显的增效作用，说明利用春雷霉素和二氯异氰尿酸钠混配是合理可行的，可以显著提高药效。

附表1春雷霉素、二氯异氰尿酸钠及其混剂对水稻稻瘟病的毒力测定结果

附表2供试药剂对水稻稻瘟病的毒力回归方程及检验结果

药剂	毒力回归方程	相关系数	EC50及CL95(mg/L)	EC90及CL95(mg/L)	SE(B)
						二氯异氰尿酸钠原药	Y＝1.3850X+2.5586	0.9993	58.82(44.75-72.88)	638.34(316.96-959.73)	0.1737
春雷霉素原药	Y＝1.6073X+2.2943	0.9980	49.29(39.25-59.33)	369.59(207.18-532.00)	0.1797
						混剂1号	Y＝1.6567X+2.2265	0.9946	48.14(38.58-57.71)	336.01(195.62-476.40)	0.1814
混剂2号	Y＝1.4661X+2.6026	0.9999	43.99(34.23-53.79)	411.82(213.78-609.86)	0.1756
						混剂3号	Y＝1.5729X+2.5228	0.9983	37.99(29.79-46.18)	293.51(172.39-414.63)	0.1797
混剂4号	Y＝1.5333X+2.5103	0.9989	42.74(33.57-51.92)	354.97(196.47-513.48)	0.1777
						混剂5号	Y＝1.7409X+2.1116	0.9926	46.37(37.52-55.21)	289.86(178.39-401.33)	0.1843

附表3供试药剂对水稻稻瘟病的共毒系数

药剂	EC50(mg/L)	实测毒力指数	理论毒力指数	共毒系数
					二氯异氰尿酸钠原药	58.82	83.80
春雷霉素原药	49.29	100.00
					混剂1号	48.14	102.39	84.00	121.89
混剂2号	44.01	112.00	84.10	133.17
					混剂3号	37.99	129.74	84.20	154.09
混剂4号	42.74	115.33	84.30	136.80
					混剂5号	46.37	106.30	84.41	125.94

二、对水稻纹枯病的试验

1.供试靶标：水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)，从广西南宁市武鸣县水稻田采集纹枯病样品，室内分离纯化鉴定培养，得到水稻纹枯病菌种。试验的其它条件与对水稻稻瘟病的试验相同。

2.试验结果及分析

2.1单剂对水稻纹枯病的毒力测定结果

单剂处理的发病情况和毒力测定结果见附表4，经统计分析，单剂的毒力回归方程及检验结果见附表5。从附表5看出，二氯异氰尿酸钠对水稻纹枯病的EC50为87.92mg/L，EC90为554.64mg/L；春雷霉素对水稻纹枯病的EC50为79.81mg/L，EC90为2808.04mg/L。

2.2混剂对水稻纹枯病的毒力测定结果

分别测定了5个不同配比的春雷霉素与二氯异氰尿酸钠对水稻纹枯病的毒力。混剂的毒力基本上高于春雷霉素与二氯异氰尿酸钠。毒力高低次序依次为：混剂3号＞混剂4号＞混剂2号＞混剂5号＞混剂1号，毒力最高的混剂3号(即春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝1∶39)对水稻纹枯病的EC50为55.49mg/L，EC90为568.90mg/L，毒力最低的混剂1号(即春雷霉素∶二氯异氰尿酸钠＝0.5∶39.5)对水稻纹枯病的EC50为72.14mg/L，EC90为420.71mg/L。(见附表5)

2.3混剂对水稻纹枯病的共毒系数

从共毒系数(CTC)计算结果(见附表6)看出，各混剂的共毒系数分别为：121.72、133.12、158.04、142.48、123.43，均大于120，表明这些混剂增效作用明显，利用春雷霉素和二氯异氰尿酸钠混配是合理可行的，可以显著提高药效。其中混剂3号(春雷霉素·二氯异氰尿酸钠＝1∶39)，其共毒系数为158.04，增效最为明显，综合成本、防效、增效情况等多方面的因素考虑，该配比比较合理。

附表4春雷霉素、二氯异氰尿酸钠及其混剂对水稻纹枯病的毒力测定结果

附表5供试药剂对水稻纹枯病的毒力回归方程及检验结果

药剂	毒力回归方程	相关系数	EC50及CL95(mg/L)	EC90及CL95(mg/L)	SE(B)
						二氯异氰尿酸钠原药	Y＝2.1365X+0.9515	0.9957	87.92(56.51-119.33)	554.64(183.05-926.24)	0.4127
春雷霉素原药	Y＝1.4236X+3.0302	0.9941	79.81(34.33-125.28)	2808.04(339.48-5276.60)	0.3535
						混剂1号	Y＝1.5426X+2.4565	0.9936	72.14(46.76-97.52)	420.71(144.81-696.60)	0.4220
混剂2号	Y＝1.2955X+3.0465	0.9970	65.92(38.21-93.63)	568.90(169.34-1584.00)	0.3710

混剂3号	Y＝1.7745X+1.9776	0.9951	55.49(33.69-77.29)	603.27(146.48-991.33)	0.3765
						混剂4号	Y＝1.6927X+2.0616	0.9974	61.51(37.10-86.92)	778.24(161.91-1394.56)	0.3711
混剂5号	Y＝1.5622X+2.2253	0.9950	70.96(38.80-103.13)	1355.58(186.80-2524.35)	0.3634

附表6供试药剂对水稻纹枯病的共毒系数

药剂	EC50(mg/L)	实测毒力指数	理论毒力指数	共毒系数
					二氯异氰尿酸钠原药	87.92	90.78
春雷霉素原药	79.81	100.00
					混剂1号	72.14	110.63	90.89	121.72
混剂2号	65.92	121.07	90.95	133.12
					混剂3号	55.49	143.83	91.01	158.04
混剂4号	61.51	129.75	91.06	142.48
					混剂5号	70.96	112.47	91.12	123.43

以下是将本发明产品应用于广西横县陶圩镇荔枝村对水稻纹枯病及稻瘟病进行大田试验，其结果见附表7和附表8。

附表7本发明产品(总有效成份40％)与其它药剂对水稻纹枯病药后6天药效试验结果

附表8本发明产品(其中春雷霉素与二氯异氰尿酸钠的重量比为1∶39，它们总量为40％)与其它药剂对水稻稻瘟病药后6天药效试验结果

可见，本发明产品对不同水稻品种均有很好的安全性，不会造成药害事故。

以下是将本发明产品进行室内安全性测定，其结果见附表9、附表10及附表11。

附表9本发明产品对粳稻3-5叶期的生长抑制率数据表

接下表

附表10本发明产品对籼稻3-5叶期的生长抑制率数据表

接下表

附表11本发明产品对糯稻3-5叶期的生长抑制率数据表

接下表

Claims (2)

1.一种含春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的杀菌组合物，其特征在于含有春雷霉素和二氯异氰尿酸钠作为活性组分制成的杀菌剂中，春雷霉素与二氯异氰尿酸钠的重量比为1∶25～79；春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的累积重量占制剂总重量的36～80％。

2.根据权利要求1所述含春雷霉素和二氯异氰尿酸钠的杀菌组合物，其特征在于：春雷霉素与二氯异氰尿酸钠的重量比为1∶39。