CN101724612A - 人类附睾表达精子结合蛋白hel-128及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术和医学领域。本发明公开了一种新的人附睾特异表达精子结合蛋白HEL-128及其制备和应用。公开了本发明编码HEL-128蛋白的氨基酸序列，提供携带编码本发明蛋白的DNA序列的重组表达载体。该蛋白定位于成熟精子的赤道后区，在附睾、心、肝、脾、肺、肾、胃、睾丸等多种组织均有表达，在附睾检测到一条23KD左右条带。另外，该蛋白还表现出具有很好的抗菌活性，切可能具有独特的抗菌机制。HEL-128蛋白可作为免疫性避孕药的研发，以及男性不育症的临床诊断与治疗的靶蛋白。基于HEL-128蛋白开发的相应基因或蛋白检测方法，将广泛用于生殖医学研究领域。

Description

人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128及其编码基因与应用

技术领域：

本发明涉及生物技术和医学领域。本发明提供一种新的人附睾特异表达精子结合蛋白HEL-128，属于RNases A家族的新成员。公开了编码HEL-128蛋白的氨基酸序列和编码本蛋白的DNA序列。本发明还公开了该蛋白的制备和检测方法，以及生物学功能。该蛋白对精子成熟、正常受精及早期胚胎发育发挥重要作用。HEL-128蛋白可作为免疫性避孕药的研发，以及男性不育症的临床诊断与治疗的靶蛋白。该蛋白的研发，对男性生殖医学研究意义重大。

发明背景：

近50年来，精子数量和质量都有下降趋势，45岁以下的男性原发性不育者占5％-10％；另外，预计2020年全球将有10亿人口进入生育高峰期，人口膨胀压力随之加大，但对于男性而言，可供选择的避孕方式还不能令人完全满意，因此研究人类附睾基因功能，将为解决精子成熟异常所引起的男性不孕症的诊断和治疗提供分子水平的信息，同时也为开发一些阻断精子成熟的男性避孕药物提供新的思路。在过去的几十年里，人们虽然对动物附睾的研究已经取得了一定的进展，但由于物种的不同人附睾基因表达与动物有较大的差异，同时也受人组织标本来源困难和科学界对男性生殖研究兴趣的限制，人类附睾功能基因的研究一直滞后于其他学科。

发明内容

本发明对HEL-128进行了系统的生物学研究，获得了高纯度具有活性的HEL-128重组蛋白(rHEL-128)和相应的单抗，采用RT-PCR和免疫荧光实验证实了该蛋白在人体重要组织和在不同年龄人的附睾组织表达谱，确定了该蛋白与精子结合的部位同时也发现了该蛋白与不同年龄人的精子结合的特征。在功能研究方面主要进行了RNase A活性试验、抗体封闭后的精子运动和穿卵实验、抗菌活性试验。通过我们的研究获得了HEL-128较为系统的生物学信息和科学的实验依据，其结果将有助于人们进一步对附睾HEL-128在正常男性生理的功能的认识，研究异常所引起疾病的诊断和治疗。

本发明的第一个目的是提供一种新的人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128。

一种人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128，它具有序列表中序列2的氨基酸序列或将序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与序列2的氨基酸残基序列相同活性的由序列2衍生的蛋白质或多肽。

本发明的第二个目的是提供编码人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128的基因。它是下列核苷酸序列之一：

序列表中序列1的DNA序列，GenBank注册号为：EU414264；

编码序列表中SEQ ID No.2蛋白质序列的多核苷酸；

与序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。

序列表中的SEQID No.1，全长c DNA序列为618bp，定位于人14q11.2号染色体上，编码205个氨基酸，编码蛋白为HEL-128，含有信号肽，其开放阅读框为615bp，是一个完整的读码框。N末端26个氨基酸为信号肽序列，裂解位点位于26，27氨基酸之间并产生含179个氨基酸的成熟肽，为20kD的分泌蛋白。具有RNaseA超家族的特性，但缺乏RNases具有催化活性所必需的位点及标签基序CKXXNTF这两个特征。

本发明的第三方面，提供了采用基因工程技术制备具有人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128活性多肽的方法，它包括含有上述多核苷酸序列的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞。

本发明的第四方面，提供了与上述人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128特异性结合的抗体，以及由此开发的用于附睾功能异常所致的不育症的辅助诊断。

本发明的第五方面，提供了检测样本中是否存在人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128的方法，它包括：将待测样品与分泌蛋白的特异性抗体在一定条件下共同作用，观察是否形成抗原抗体复合物，有抗原抗体复合物形成就提示样品中存在分泌蛋白。

本发明的第六方面，提供了本发明蛋白和其编码序列的用途。例如本发明蛋白可作为一种抗菌药物或作为诊断不育症的分子靶点，或作为有效药物成分用于治疗不育症，或作为开发新型避孕药物的靶分子。根据人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128的编码序列或其片段，可设计引物或探针用于PCR或核酸杂交，或者用于制备基因芯片。

本发明的第七方面，提供了一种药物组合物，所述组合物包含本发明所述的蛋白、核苷酸序列、构建物或细胞，以及药学上可接受的载体。

本发明的蛋白能够在附睾内特异性表达，而且所述蛋白表现抗菌活性，定位于精子赤道后区，因此可能与生殖有关。因为它是一种天然的抗菌肽，可以预见可能具有较少的副作用，本发明的其他优点可从以下的详细描述获知。

附图说明

图.1 HEL-128蛋白在人精子上的免疫荧光定位

红色荧光显示精子核；绿色荧光显示HEL-128蛋白在精子上的定位；

A组：HEL-128蛋白定位，C3.显示HEL-128蛋白结合在精子赤道后区。

B组：阳性对照，A3显示HEL-75蛋白结合于整个精子(文章已发表)

C组：阴性对照。

比例尺：5mm。

图2 HEL-128基因组织表达图谱

1附睾头  2附睾体  3附睾尾  4睾丸  5心  6肝  7脾  8肾  9胃  10阴性对照

图3.HEL-128蛋白在附睾液表达的western blot结果

M：Marker；1：阳性对照，HEL-75蛋白；2：阴性对照，小鼠血清；3：HEL-128蛋白

本发明的蛋白包括了所述蛋白多肽的具有相同或相似性生物活性或功能的变异形式，这些变异形式包括(但并不限于)：相对于天然蛋白的氨基酸序列有若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳的1-10个)氨基酸的缺失、插入和取代。另外，所述缺失或插入(增加)也可发生在C末端和/或N末端(通常有20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内的氨基酸缺失或增加)，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变氨基酸的功能，提供功能相似氨基酸的保守性置换表是本领域所熟知的。下列5组各自含有能相互保守置换的氨基酸；脂族：甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)；芳族：苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；含硫：甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)；碱性：精氨酸(R)、赖氨酸(K)、组氨酸(H)；酸性：天冬氨酸(D)、谷氨酰胺(Q)。另外，该术语还包括了蛋白的片段或衍生物，条件是该片段或衍生物保留了所希望的蛋白生物活性。

本发明的核苷酸序列通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，用本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA文库作为模板，扩增而得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

本发明中，使用本领域技术人员已知的常规方法将包含编码本发明的蛋白的核苷酸序列插入到载体中，这些方法包括但不限于体外重组DNA技术，体内重组技术等。

上述载体可用于转化或转染适当的原核和真核细胞，以使其能够表达所编码的本发明的蛋白，宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞，或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如昆虫细胞等。可采用的转化、转染方法包括但并不限于：磷酸钙共沉淀法、显微注射、电穿孔、脂质体介导等。

本发明的蛋白在细胞内表达，如果需要，可利用其物理的、化学的和其他特性通过各种方法分离和纯化表达产物，这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但不限于：常规的复性处理、用常规的蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、声波破菌、超离心、分子筛层析、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析和其它各种层析技术及这些方法的结合。

本发明还包括对蛋白或其片段具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，还包括具有免疫活性的抗体片段或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗体部分的抗体。

本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生，本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备。

发明人通过研究进一步发现，该蛋白定位于成熟精子的赤道后区(图1)，在附睾、心、肝、脾、肺、肾、胃、睾丸等多种组织均有表达(图2)，发明人在大肠杆菌中表达了人HEL-128蛋白，用其免疫小鼠，获得了其多抗血清。发明人用Western blot在附睾体部检测到一条23KD左右条带(图3)。另外，该蛋白还表现出具有很好的抗菌活性，切可能具有独特的抗菌机制。

本发明的药物组合可根据各种需要制成各种剂型，通常可将药物组合物制成可注射剂，例如液体溶液或悬浮液；还可制成在注射前适合配入溶液或悬液中、溶液载体的固体形式，脂质体也包括在药学上可接受的载体的定义中，本发明的药物组合物可由医师根据患者种类、年龄、体重和大致疾病状况、给药方式等因素确定对病人有益的剂量进行施用，为了提高用药效果，本发明的蛋白也可以与其他药物共同使用。

下面结合具体实例，进一步阐述本发明，应理解这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，除非另有描述，本发明的实施将采用分子生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术，这些均是本领域技术人员所知的。这些技术在下面文献中有完整的描述：例如Sambrook《分子克隆实验指南》第二版(1989)；《DNA克隆》第I和第II卷(D.N.Glover编辑，1985)；《寡核苷酸合成》(M.J.Gait编辑，1984)；《核酸杂交》(B.D.Hames和S。J。Higgins编辑。1984)；《蛋白质纯化；原理和实践》第2版(Spring-Verlag，N.Y.)，以及《实验免疫学手册》I-IV卷(D.C.Weir和C.C.Blackwell编辑1986)或者，可以按照试剂生产商所提供的说明书进行。

实施例1基因克隆及序列分析

对本实验室构建的人附睾cDNA文库进行大规模测序筛选，获取表达序列标签(EST)，利用Unigene数据库进行电子克隆，获得人HEL-128全长cDNA。使用Expasy Translate tool(http://us.expasy.orghttp://us.expasy.org)，InterProScan(http://www.ebi.ac.uk/Tools/http://www.ebi.ac.uk/Tools/)和Protein杙roteinblast(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)等预测HEL-128肽序列及假定功能。SignalP(http://www.cbs.dtu.dkhttp://www.cbs.dtu.dk)，PSORTII和WoLFPSORT(http://psort.nibb.ac.jp)等软件分析预测该蛋白的信号肽及胞内定位。ProfileScan(http://myhits.isb-sib.ch/cgi-bin/PFSCANhttp://myhits.isb-sib.ch/cgi-bin/PFSCAN)预测N端糖基化和磷酸化位点。

对获得的人HEL-128全长cDNA，根据生物信息学预测HEL-128编码区，设计一对特异引物：F：5’-TTGGTACCGACGACGACGACAAGATGAGAACTCTCATCACCACA-3’，下游R：5’-GCGGCGAATTCGGGCGGTATGACAAAG- 3’上下游引物两端分别引进限制性内切酶位点KpnI和EcoRI。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。以本实验室构建的人附睾cDNA文库为模板，PCR扩增HEL-128基因片段。PCR反应条件：94℃预变性10min，(94℃，40s；55℃，45s；70℃，30s)30个循环，70℃延伸10min，4℃保存。反应结束后，1.0％琼脂糖凝胶电泳检测并分离回收目的片段，插入克隆载体pMD-18T中进行测序鉴定。

实施例2 RT-PCR实验

组织分离后立即液氮冷冻。所有组织总RNA的提取采用Trizol一步法，并按照厂家的说明书进行操作，采用RT-PCR法进行扩增人HEL-128 cDNA片段，采用的上游引物：F：5’-ctg gtg cag ttt caa gag gtg-3’，下游引物R：5’-tcc ccc ggg cta ggg cga tat gacaaa gac-3’，退火及延伸温度95℃ 30s，56℃ 40s and 72℃ 1min，以内源性βactin作为内参同时进行扩增，β-actin引物序列：上游5’-CCATGCCAATCTCATCTT-3’，下游引物：5’-CGTGACATTAAGGAGAAG-3’。结果发现，HEL-128在心、肺、肝、脾、肾、胃、睾丸等多种组织均有表达。但在附睾表达量较高。

实施例3.HEL-128多抗血清制备及Western blot实验

用重组HEL-128蛋白免疫BALB/C小鼠制备多抗。简单地说，每只老鼠于第1天注射50μg重组蛋白与等量的完全福氏佐剂(CFA)。然后在第15，30和45天注射25μg重组蛋白和等量的不完全福氏佐剂(IFA)加强免疫。第60天从眼球取血，分离血清后用ELASA和western blot分析抗体的效价和特异性。ELISA分析表明抗体效价达到1∶10000。

实施例4.组织免疫荧光实验

取-70℃保存附睾组织、睾丸及其他组织OCT组织块包埋，恒冷箱切片8mm，贴片于1％明胶包被的载玻片上，切片自然干燥后，浸入4％多聚甲醛中20min，再于含0.5％Triton X-100PBS中通透30min。PBS洗3次，每次5min；滴加3％BSA，室温封闭1h后，PBS洗3次，每次5min；滴加(1∶400稀释)鼠抗HEL-128多抗血清，4℃冰箱过夜，PBS洗3次，每次5min；滴加FITC羊抗鼠IgG(1∶200稀释)，室温避光孵育1h，PBS洗3次，每次5min，蒸馏水洗3次，每次5min；PI复染，37℃，10min，蒸馏水洗2次，每次10min。缓冲甘油封片，置激光共聚焦显微镜下观察并照相。阴性对照用3％BSA取代一抗进行孵育即可。

实施例5.人精子免疫荧光实验

取正常男性精液，液化后，每1ml精液中加入1ml PBS，37℃、45°角倾斜放置至少1h，使活力好的精子上浮。吸取上层液体于另一离心管中，1500r/min离心15min。去上清，再向沉淀中加入3-5mlPBS，1000r/min离心10min，重复两次。洗涤后，加入PBS，调整精子密度约为1.0×10⁷个/ml。将处理好的精液涂片室温自然干燥，甲醇固定10min，干燥后即用。免疫荧光步骤同上。结果表明，人HEL-128定位于精子赤道后区，可能与精卵融合有关。

实施例6.抗菌实验

按照文献的方法，我们分析了在大肠杆菌中诱导重组蛋白的表达是否抑制宿主菌的生长。简单的说，含重组载体或者空载体的细菌过夜培养后，用LB培养基按照1∶40接种，此时取样测OD600，以后每隔1h取样一次。当达到生长指数期时，将细菌平均分成2份。其中一份加入IPTG至终浓度为0.1mM，另一份不加作为对照，以后每隔1h测OD600，每次平行重复测量三次。作为阴性对照组，空白宿主菌BL21用于检测IPTG的毒性。结果表明HEL-128具有抗菌活性。

实施例7.核糖核酸酶活性实验

重组人HEL-128蛋白经过亲和层析纯化后得到浓度为800ug/ml，用标准酵母tRNA底物实验检测其核糖核酸酶活性，检测方法如下：取40mM，pH7.4磷酸盐缓冲液在25℃溶解酵母tRNA，终浓度1.42nmol。用0.5ml 20mm硝酸镧终止反应，12000rpm离心去掉不溶性tRNA，可溶性tRNA通过紫外分光测定其吸光度值(OD260)。核糖核酸酶催化活性定义为每pmol核糖核酸酶每秒钟消化的RNA的pmol数。阴性对照催化活性小于RNase 7的3％。图示三次试验的平均值和标准差。结果发现，HEL-128虽然属于Rnase家族成员，但不具有核糖核酸酶的活性。

实施例8抗体封闭精子运动、穿卵实验

1、人精子准备准备2个15ml离心管，每管加入2ml已于37℃、5％CO₂饱和湿度条件下平衡12h的SpermRinse-30，将液化好的精液加入试管底部，然后于37℃、5％CO₂饱和湿度条件下孵育1h使精子上游并获能。收集精子悬液，离心，弃上清。然后用SpermRinse-30洗涤2次，弃上清，再加入5.0mlG-Fert，悬浮15min，以除去SpermRinse-30中的庆大霉素，重复洗涤2次。弃上清，用G-Fert调整精子浓度为1.0？0⁷个/ml。

2抗体封闭精子运动实验

取两个1.5ml离心管，分别加入上述处理过的精液，然后向试验管中按1∶5稀释比例加入鼠抗HEL-128多抗血清，向对照管中加入与多抗血清等量的G-Fert，混匀，置于37℃、6％CO₂饱和湿度培养箱内孵育2h。然后将孵育后的试验组与对照组的精液利用计算机辅助精液分析系统检测精子各项运动指标(平均曲线运动速度VCL、平均直线运动速度VSL、平均路径速度VAP)。取3份人精液标本，重复以上实验，统计分析RNases 9蛋白对精子运动的影响。

2、抗体封闭精子穿卵实验

参照Yanagimachi等人的方法，采用上浮法获取精子并用BWW液孵育3～5h。将精子浓度调整到3.53×10⁶/ml，8～12周龄金黄地鼠肌注孕激素，人绒毛膜促性腺激素。处死金黄地鼠，去掉输卵管，用0.1％hyaluronidase和0.1％trypsin冲洗卵丘。加0.1ml人精子，石蜡油覆盖，5％CO₂，37℃孵育18h。延长孵育时间可以使精子获能和顶体反应达到最佳水平，将卵放在玻片上，用4％甲醛在4℃固定24～48h并用盖玻片固定。接着用0.25％间苯二酚蓝染色。在相差显微镜下放大3400倍进行观察。胞浆内肿胀精子头部的百分数计算精子的穿卵率，穿卵指数＝受精的卵细胞数/卵细胞总数。

序列表

<110>李建远

<120>人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128及其编码基因与应用

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>618

<212>DNA

<213>人属人种(Homo sapiens)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(618)

<400>1

atg atg aga act ctc atc acc aca cac cca ctg ccc ctg ctt cta ttg 48

Met Met Arg Thr Leu Ile Thr Thr His Pro Leu Pro Leu Leu Leu Leu

1               5                   10                  15

ccg cag cag ctg ctg cag ctg gtg cag ttt caa gag gtg gat aca gat    96

Pro Gln Gln Leu Leu Gln Leu Val Gln Phe Gln Glu Val Asp Thr Asp

            20                  25                  30

ttt gat ttc cca gaa gaa gat aaa aaa gaa gaa ttt gaa gag tgt ttg    144

Phe Asp Phe Pro Glu Glu Asp Lys Lys Glu Glu Phe Glu Glu Cys Leu

        35                  40                  45

gaa aaa ttt ttt agt aca ggg ccc gcc aga cca cct acc aaa gaa aaa    192

Glu Lys Phe Phe Ser Thr Gly Pro Ala Arg Pro Pro Thr Lys Glu Lys

    50                  55                  60

gtc aaa aga cgt gtc ctt att gaa cct gga atg cca cta aat cat ata    240

Val Lys Arg Arg Val Leu Ile Glu Pro Gly Met Pro Leu Asn His Ile

65                  70                  75                  80

gag tac tgt aac cat gaa atc atg gga aaa aat gtt tac tac aaa cac    288

Glu Tyr Cys Asn His Glu Ile Met Gly Lys Asn Val Tyr Tyr Lys His

                85                  90                  95

cgt tgg gtg gca gaa cat tac ttc ctt ctt atg caa tat gac gag ctc    336

Arg Trp Val Ala Glu His Tyr Phe Leu Leu Met Gln Tyr Asp Glu Leu

            100                 105                 110

caa aaa atc tgt tac aac aga ttt gtg cca tgt aag aat gga att agg    384

Gln Lys Ile Cys Tyr Asn Arg Phe Val Pro Cys Lys Asn Gly Ile Arg

        115                 120                 125

aaa tgt aac agg agc aaa ggt ctt gta gaa gga gtg tat tgt aat tta    432

Lys Cys Asn Arg Ser Lys Gly Leu Val Glu Gly Val Tyr Cys Asn Leu

    130                 135                 140

aca gaa gca tct gaa ata cca gcg tgt aaa tac gaa tca ctt tat agg    480

Thr Glu Ala Ser Glu Ile Pro Ala Cys Lys Tyr Glu Ser Leu Tyr Arg

145                 150                 155                 160

aag ggc tac gtc ctt atc act tgt tca tgg caa aat gaa atg caa aaa    528

Lys Gly Tyr Val Leu Ile Thr Cys Ser Trp Gln Asn Glu Met Gln Lys

                165                 170                 175

cgt att cct cat act ata aat gat ctc gtg gag cca cct gaa cac aga    576

Arg Ile Pro His Thr Ile Asn Asp Leu Val Glu Pro Pro Glu His Arg

            180                 185                 190

agt ttc ctc agt gag gat ggt gtc ttt gtc ata ccg ccc tag    618

Ser Phe Leu Ser Glu Asp Gly Val Phe Val Ile Pro Pro

        195                 200                 205

<210>2

<211>205

<212>PRT

<213>人属人种(Homo sapiens)

<400>2

Met Met Arg Thr Leu Ile Thr Thr His Pro Leu Pro Leu Leu Leu Leu

1               5                   10                  15

Pro Gln Gln Leu Leu Gln Leu Val Gln Phe Gln Glu Val Asp Thr Asp

            20                  25                  30

Phe Asp Phe Pro Glu Glu Asp Lys Lys Glu Glu Phe Glu Glu Cys Leu

        35                  40                  45

Glu Lys Phe Phe Ser Thr Gly Pro Ala Arg Pro Pro Thr Lys Glu Lys

    50                  55                  60

Val Lys Arg Arg Val Leu Ile Glu Pro Gly Met Pro Leu Asn His Ile

65                  70                  75                  80

Glu Tyr Cys Asn His Glu Ile Met Gly Lys Asn Val Tyr Tyr Lys His

                85                  90                  95

Arg Trp Val Ala Glu His Tyr Phe Leu Leu Met Gln Tyr Asp Glu Leu

            100                 105                 110

Gln Lys Ile Cys Tyr Asn Arg Phe Val Pro Cys Lys Asn Gly Ile Arg

        115                 120                 125

Lys Cys Asn Arg Ser Lys Gly Leu Val Glu Gly Val Tyr Cys Asn Leu

    130                 135                 140

Thr Glu Ala Ser Glu Ile Pro Ala Cys Lys Tyr Glu Ser Leu Tyr Arg

145                 150                 155                 160

Lys Gly Tyr Val Leu Ile Thr Cys Ser Trp Gln Asn Glu Met Gln Lys

                165                 170                 175

Arg Ile Pro His Thr Ile Asn Asp Leu Val Glu Pro Pro Glu His Arg

            180                 185                 190

Ser Phe Leu Ser Glu Asp Gly Val Phe Val Ile Pro Pro

        195                 200                 205

Claims (10)

1.一种人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128，其特征在于，它具有序列表中序列2的氨基酸序列或将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与序列2的氨基酸残基序列相同活性的序列2衍生的蛋白质和通过化学方法合成的蛋白质。

2.一种人类附睾表达精子结合蛋白HEL-128的编码基因，它是下列核苷酸序列之一：

序列表中序列1的核苷酸序列；

与序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白的DNA序列。

3.含有权利要求2所述基因的真核和原核表达载体。

4.含有权利要求2所述基因的细胞系。

5.针对权利要求1所述蛋白质所制备的各种抗体以及以该抗体为活性成分的试剂。

6.针对权利要求1所述蛋白质提供的药物组合物，所述组合物包含本发明所述的蛋白、核苷酸序列、构建物或细胞，以及药学上可接受的载体。

7.根据权利要求1所述的蛋白在不育症诊断中的应用。

8.根据权利要求1所述的蛋白在不育症治疗中的应用。

9.根据权利要求2所述的基因在开发新的避孕药物中的应用。

10.根据权利要求1所述的蛋白在制备新的抗生素中的应用。

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