CN101709295B - 固体羔羊皱胃酶的制备方法 - Google Patents
固体羔羊皱胃酶的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101709295B CN101709295B CN2009102191746A CN200910219174A CN101709295B CN 101709295 B CN101709295 B CN 101709295B CN 2009102191746 A CN2009102191746 A CN 2009102191746A CN 200910219174 A CN200910219174 A CN 200910219174A CN 101709295 B CN101709295 B CN 101709295B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lamb
- ferment rennet
- lamb ferment
- rennet
- freezing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
一种固体羔羊皱胃酶的制备方法，由处理羔羊皱胃、剥离羔羊皱胃粘膜、提取羔羊皱胃酶、浓缩液态羔羊皱胃酶、冷冻羔羊皱胃酶、真空冷冻干燥羔羊皱胃酶步骤组成。本发明采用真空冷冻干燥技术，并通过添加酶活性保护剂成功的解决了羔羊皱胃酶在冷冻和干燥过程中酶活性损失的问题，采用本发明制备的固体羔羊皱胃酶可在常温下保持较高的活性，便于储存和运输，可在干酪生产中应用。
Description
技术领域
本发明属于酶技术领域，具体涉及到从动物组织得到的蛋白酶。
背景技术
皱胃酶是从反刍动物幼畜第四胃(皱胃)中提取的一种凝乳酶，是制造干酪过程中起凝乳作用的关键性酶，其作用是水解乳中κ-酪蛋白的Phe105-Met106肽键，形成para-κ-酪蛋白和水溶性糖巨肽，使酪蛋白胶粒失去稳定性，在Ca2+参与下使乳凝固，形成凝乳。羔羊皱胃中含有大量的皱胃酶，具有很高的凝乳活性。近年来，我国羔羊肉消费量不断增加，羔羊屠宰数量大幅度提高，其下脚料——羔羊皱胃，绝大部分被作为垃圾废弃，不仅造成资源浪费，而且也对环境造成污染。若采用现代技术提取羔羊皱胃中的皱胃酶并将其制成产品，不仅可以缓解干酪生产中皱胃酶的供应紧张状况，而且还可以提高山羊业深加工产品的附加值，变废为宝，同时解决环境污染问题。
传统方法提取的羔羊皱胃酶为液态，其稳定性较差，易失活，不易储存和运输。将液态皱胃酶干燥处理后制成粉末状的固体皱胃酶是解决这些缺陷的有效方法，然而羔羊皱胃酶是一类具有活性的蛋白质，高温处理容易导致热变性而失活，因此在羔羊皱胃酶干燥过程中如何最大程度保存酶的活性是制备固体羔羊皱胃酶的关键。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述液态羔羊皱胃酶的缺点，提供一种稳定性高、易于储存和运输的固体羔羊皱胃酶的制备方法。
解决上述技术问题所采用的技术方案是它由下述步骤组成：
1、处理羔羊皱胃
取2～3周龄羔羊的皱胃，用小刀划开，水流冲洗1～2分钟，除去皱胃中的内容物，再剥除皱胃外部的脂肪及结缔组织，-20℃冷冻，备用。
2、剥离羔羊皱胃粘膜
将冷冻的羔羊皱胃在0～5℃解冻12小时，用小刀刮取粘膜，得到羔羊皱胃粘膜。
3、提取羔羊皱胃酶
用蒸馏水和NaCl按常规方法配制成质量分数为8％的NaCl水溶液，将羔羊皱胃粘膜加入质量分数为8％的NaCl水溶液中，羔羊皱胃粘膜与质量分数为8％的NaCl水溶液的质量比为1∶10，25℃搅拌浸提72小时，每1小时搅拌一次，每次搅拌5～10分钟，得到浸提液，将浸提液在3000转/分钟离心15分钟，取上清液，用物质的量浓度为0.1mol/L的HCl调整pH至4.60，室温激活12小时，再用物质的量浓度为0.1mol/L的NaOH调节pH至6.0，制备成液态羔羊皱胃酶。
4、浓缩液态羔羊皱胃酶
将步骤3制备的液态羔羊皱胃酶装入膜分离设备容器内，10～20℃浓缩至浓缩度为10％～60％，得到浓缩的羔羊皱胃酶。
上述的膜分离设备容器的型号为JXYGX-320，膜通透量为3000μ，压力为0.1MPa，由厦门金星源生产膜科技有限公司生产。上述羔羊皱胃酶的浓缩度按下式计算：
酶浓缩度(％)＝[(原酶液体积-浓缩后酶液体积)/原酶液体积]×100
5、冷冻羔羊皱胃酶
向步骤4得到的浓缩羔羊皱胃酶中添加酶活性保护剂，酶活性保护剂为甘油或乳糖或脱脂奶粉，甘油的添加量为浓缩羔羊皱胃酶质量的0.05％～0.15％，乳糖的添加量为浓缩羔羊皱胃酶质量的4.0％～12.0％，脱脂奶粉的添加量为浓缩羔羊皱胃酶质量的5％～20％，搅拌均匀，-18～-40℃冷冻12小时。
6、真空冷冻干燥羔羊皱胃酶
将冷冻的羔羊皱胃酶放入真空冷冻干燥机中，在真空度为0.22×10-3Pa、-20～-30℃冷冻干燥至羔羊皱胃酶中水分含量小于5％，制备成固体羔羊皱胃酶。
在本发明的浓缩液态羔羊皱胃酶步骤4中，将步骤3制备的液态羔羊皱胃酶放入膜分离设备容器内，10～20℃优选浓缩至液态羔羊皱胃酶体积的20％～60％，得到浓缩的羔羊皱胃酶。在本发明的冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩后的羔羊皱胃酶中优选添加羔羊皱胃酶质量0.08％～0.12％的甘油或6.0％～10.0％的乳糖或10％～20％的脱脂奶粉，搅拌均匀，优选-30～-40℃冷冻12小时。
在本发明的浓缩液态羔羊皱胃酶步骤4中，将步骤3制备的液态羔羊皱胃酶放入膜分离设备容器内，10～20℃最佳浓缩至液态羔羊皱胃酶体积的50％，得到浓缩的羔羊皱胃酶。在本发明的冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩后的羔羊皱胃酶中最佳添加羔羊皱胃酶质量0.10％的甘油或8.0％的乳糖或15％的脱脂奶粉，搅拌均匀，最佳选择-40℃冷冻12小时。
本发明采用真空冷冻干燥技术方案，并通过添加酶活性保护剂解决了羔羊皱胃酶在冷冻和干燥过程中酶活性损失的问题，采用本发明制备的固体羔羊皱胃酶可在常温保持较高的活性，便于储存和运输，可在干酪生产中应用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1
1、处理羔羊皱胃
取2～3周龄羔羊的皱胃，用小刀划开，水流冲洗1～2分钟，除去皱胃中的内容物，再剥除皱胃外部的脂肪及结缔组织，-20℃冷冻，备用。
2、剥离羔羊皱胃粘膜
将冷冻的皱胃在0～5℃解冻12小时，用小刀刮取粘膜，得到羔羊皱胃粘膜。
3、提取羔羊皱胃酶
用蒸馏水和NaCl按常规方法配制成质量分数为8％的NaCl水溶液，将羔羊皱胃粘膜加入质量分数为8％的NaCl水溶液中，羔羊皱胃粘膜与质量分数为8％的NaCl水溶液的质量比为1∶10，25℃搅拌浸提72小时，每1小时搅拌一次，每次搅拌5～10分钟，得到浸提液，将浸提液在3000转/分钟离心15分钟，取上清液，用物质的量浓度为0.1mol/L的HCl调整pH至4.60，室温激活12小时，再用物质的量浓度为0.1mol/L的NaOH调节pH至6.0，制备成液态羔羊皱胃酶。
4、浓缩液态羔羊皱胃酶
将步骤3制备成的液态羔羊皱胃酶放入型号为JXYGX-3、膜通透量为3000μ、压力为0.1MPa的膜分离设备容器内，10～20℃浓缩至浓缩度为50％，得到浓缩的羔羊皱胃酶。
5、冷冻羔羊皱胃酶
向步骤4浓缩的羔羊皱胃酶中添加脱脂奶粉，脱脂奶粉的添加量是浓缩的羔羊皱胃酶质量的15％，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。
6、真空冷冻干燥羔羊皱胃酶
将冷冻的羔羊皱胃酶放入真空冷冻干燥机中，在真空度为0.22×10-3Pa、-20～-30℃冷冻干燥至羔羊皱胃酶中水分含量小于5％，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例2
本实施例冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩的羔羊皱胃酶中添加脱脂奶粉，脱脂奶粉的添加量是浓缩的羔羊皱胃酶质量的5％，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例3
本实施例冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩的羔羊皱胃酶中添加脱脂奶粉，脱脂奶粉的添加量是浓缩的羔羊皱胃酶质量的20％，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例4
本实施例冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩的羔羊皱胃酶中添加甘油，甘油的添加量是浓缩的羔羊皱胃酶质量的0.10％，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例5
本实施例冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩的羔羊皱胃酶中添加甘油，甘油的添加量是浓缩的羔羊皱胃酶质量的0.05％，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例6
本实施例冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩的羔羊皱胃酶中添加甘油，甘油的添加量是浓缩的羔羊皱胃酶质量的0.12％，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例7
本实施例冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩的羔羊皱胃酶中添加乳糖，乳糖的添加量是浓缩的羔羊皱胃酶质量的8.0％，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例8
本实施例冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩的羔羊皱胃酶中添加乳糖，乳糖的添加量是浓缩的羔羊皱胃酶质量的4.0％，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例9
本实施例冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，向步骤4浓缩的羔羊皱胃酶中添加乳糖，乳糖的添加量是浓缩的羔羊皱胃酶质量的12.0％，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例10
在实施例1～9冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，-18℃冷冻12小时，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例11
在实施例1～9冷冻羔羊皱胃酶步骤5中，-30℃冷冻12小时，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同。其他步骤与实施例1相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例12
在实施例1～11浓缩液态羔羊皱胃酶步骤4中，将步骤3制备成的液态羔羊皱胃酶放入JXYGX-3型膜分离设备容器内，10～20℃浓缩至浓缩度为10％，得到浓缩的羔羊皱胃酶。其他步骤与相应的实施例相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
实施例13
在实施例1～11浓缩液态羔羊皱胃酶步骤4中，将步骤3制备成的液态羔羊皱胃酶放入JXYGX-3型膜分离设备容器内，10～20℃浓缩至浓缩度为60％，得到浓缩的羔羊皱胃酶。其他步骤与相应的实施例相同，制备成固体羔羊皱胃酶。
为了确定本发明的最佳工艺条件，发明人进行了浓缩度对羔羊皱胃酶活性的影响、不同酶活性保护剂添加量对羔羊皱胃酶活性的影响、不同酶活性保护剂对羔羊皱胃酶活性的影响、真空冷冻干燥对羔羊皱胃酶活性的影响研究试验。各种试验情况如下：
测定方法：
(1)测定羔羊皱胃酶浓缩度
在羔羊皱胃酶浓缩过程中，按下式计算酶浓缩度：
酶浓缩度(％)＝[(原酶液体积-浓缩后酶液体积)/原酶液体积]×100
(2)测定羔羊皱胃酶活性
按干酪生产中凝乳活性表示。将羔羊皱胃酶用质量分数为1％的NaCl水溶液配制成质量分数为1％的羔羊皱胃酶溶液。取10mL质量分数为10％的脱脂乳液，35℃保温10分钟，加入0.5mL质量分数为1％的羔羊皱胃酶溶液，迅速混合均匀，准确记录从加入羔羊皱胃酶溶液到脱脂乳液凝固的时间(秒)，把40分钟凝固1mL质量分数为10％的脱脂乳液的酶量定义为一个索氏单位(Soxhelt unit，SU)，按下式计算羔羊皱胃酶活性：
羔羊皱胃酶活性(SU)＝(2400/T)×(10/0.5)×D
式中T为凝乳时间(秒)，D为稀释倍数。
(3)测定羔羊皱胃酶活性回收率
将羔羊皱胃酶用质量分数为1％的NaCl水溶液配制成质量分数为1％的羔羊皱胃酶溶液。用物质的量浓度为0.1mol/L的NaOH调节pH至4.60，按测定方法(2)中测定羔羊皱胃酶活性的方法测定不同处理中酶的活性，按下式计算酶活性回收率：
酶活性回收率(％)＝(处理后酶活性/处理前酶活性)×100
(4)固体羔羊皱胃酶外观性状评定
颜色：在自然光下用肉眼观察固体羔羊皱胃酶的颜色。
结块性：在相对湿度为70％时放置12小时，观察固体羔羊皱胃酶是否有结块现象。
(5)测定固体羔羊皱胃酶活性保存率
将固体羔羊皱胃酶25℃保存6个月，测定其活性，按照下式计算固体羔羊皱胃酶活性保存率：
固体羔羊皱胃酶活性保存率(％)＝(保存后酶活性/保存前酶活性)×100
(6)测定固体羔羊皱胃酶的微生物指标
细菌总数：按GB4789.2食品卫生微生物学检验中菌落总数测定方法进行检验。
大肠菌群：按GB4789.3食品卫生微生物学检验中大肠菌群测定方法进行检验。
致病菌(沙门氏菌)：按GB4789.4-10食品微生物学检验中致病菌的测定方法进行检验。
(7)测定重金属含量
按GB5009.12食品中铅的含量测定方法进行检验。
1、浓缩度对羔羊皱胃酶活性的影响
浓缩的目的是为了脱去羔羊皱胃酶液中大量水分，为真空冷冻干燥创造条件，同时浓缩度也对羔羊皱胃酶活性有一定的影响。取5L本发明步骤3制备的液态羔羊皱胃酶装入膜分离设备容器内，10～20℃浓缩至浓缩度分别为0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％时，测定羔羊皱胃酶活性，测试结果见表1。
表1浓缩度对羔羊皱胃酶活性的影响
注：表中数据为3次测定结果的平均值。
由表1可见，随着羔羊皱胃酶的浓缩，酶活性有轻微降低的趋势，但单位体积羔羊皱胃酶的浓度逐渐增大，单位体积羔羊皱胃酶的活性明显提高，说明通过浓缩过程可有效提高羔羊皱胃酶的浓度。当羔羊皱胃酶的浓缩度大于50％时，单位体积羔羊皱胃酶活性不再上升。羔羊皱胃酶的浓缩度为20％～60％时，单位体积羔羊皱胃酶的活性较高，其中浓缩度为50％时最佳。因此，本发明选择羔羊皱胃酶浓缩度为20％～60％，最佳为50％。
2、不同酶活性保护剂添加量对羔羊皱胃酶活性的影响
冷冻是酶冷冻干燥过程的前期工作，冷冻过程对酶活性也有一定的影响。通常采用添加酶活性保护剂的方法来防止酶在冷冻过程中活性损失。本发明选用甘油或乳糖或脱脂乳粉作为酶活性保护剂，分别在-18℃、-25℃、-30℃、-35℃、-40℃将羔羊皱胃酶冷冻12小时，测定冷冻后羔羊皱胃酶的活性，测定结果见表2～表4。
(1)甘油添加量对羔羊皱胃酶冷冻过程中活性的影响
取6份10g浓缩程度为50％的羔羊皱胃酶装入到6支试管内，再分别加入甘油0g、0.005g、0.008g、0.01g、0.012g、0.015g，使其分别为羔羊皱胃酶质量的0％、0.05％、0.08％、0.10％、0.12％、0.15％，分别在-18℃、-25℃、-30℃、-35℃、-40℃冷冻12小时，测试冷冻后羔羊皱胃酶活性。测试结果见表2。
表2甘油添加量对羔羊皱胃酶冷冻过程中活性的影响(SU)
注：表中数据为3次测定结果的平均值。
由表2可见，在羔羊皱胃酶中不添加甘油的对照组(0％)冷冻后酶活性较低，冷冻过程中酶活性损失较大。在相同的冷冻温度下，甘油添加量由0.05％上升至0.10％时，冷冻后羔羊皱胃酶活性显著升高；甘油添加量大于0.10％，羔羊皱胃酶活性有逐渐下降的趋势；甘油添加量为0.10％，冷冻后酶活性最高，且与不添加甘油的对照组(0％)比较酶活性显著提高，说明在羔羊皱胃酶中添加甘油可有效地保护酶在冷冻过程中活性的损失。从冷冻温度来看，随着冷冻温度的降低，冷冻后羔羊皱胃酶活性显著升高。甘油添加量为羔羊皱胃酶质量的0.05％～0.15％，-18℃～-40℃冷冻12小时，羔羊皱胃酶的活性较高，其中甘油添加量为羔羊皱胃酶质量的0.10％、-40℃冷冻12小时羔羊皱胃酶的活性最高。本发明选择甘油添加量为羔羊皱胃酶质量的0.08％～0.12％、最佳添加量为0.10％，-30～-40℃冷冻12小时、最佳-40℃冷冻12小时。
(2)乳糖添加量对固体羔羊皱胃酶冷冻过程中活性的影响
取6份10g浓缩程度为50％的羔羊皱胃酶装入到6个烧杯内，再分别加入乳糖0g、0.4g、0.6g、0.8g、1.0g、1.2g，使其分别为羔羊皱胃酶质量的0％、4％、6％、8％、10％、12％，分别在-18℃、-25℃、-30℃、-35℃、-40℃冷冻12小时，测试羔羊皱胃酶活性。
测试结果见表3。
表3乳糖添加量对羔羊皱胃酶冷冻过程中活性的影响(SU)
注：表中数据为3次测定结果的平均值。
由表3可见，在羔羊皱胃酶中添加羔羊皱胃酶质量的4％～12％的乳糖，-18℃～-40℃冷冻12小时，羔羊皱胃酶的活性较高，其中乳糖添加量为8％、-40℃冷冻12小时羔羊皱胃酶的活性最高。本发明选择乳糖的添加量为4％～12％、最佳添加量为8％，-30～-40℃冷冻12小时、最佳-40℃冷冻12小时。
(3)脱脂奶粉添加量对羔羊皱胃酶冷冻过程中活性的影响
取5份10g浓缩程度为50％的羔羊皱胃酶装入到5个烧杯内，再分别加入脱脂奶粉0g、0.5g、1.0g、1.5g、2.0g，使其分别为羔羊皱胃酶质量的0％、5％、10％、15％、20％，分别在-18℃、-25℃、-30℃、-35℃、-40℃冷冻12小时，测试羔羊皱胃酶活性。测试结果见表4。
表4脱脂奶粉添加量对羔羊皱胃酶冷冻过程中活性的影响(SU)
注：表中数据为3次测定结果的平均值。
由表4可见，脱脂奶粉添加量为羔羊皱胃酶质量的5％～20％，-18℃～-40℃冷冻12小时，羔羊皱胃酶的活性较高，其中脱脂奶粉添加量为羔羊皱胃酶质量的15％、-40℃冷冻12小时羔羊皱胃酶的活性最高。本发明选择脱脂奶粉的添加量为羔羊皱胃酶质量的5％～20％、最佳添加量为15％，-30～-40℃冷冻12小时、最佳-40℃冷冻12小时。
3、不同酶活性保护剂对羔羊皱胃酶冷冻过程中酶活性回收率的影响
选择添加量为0.10％的甘油、添加量为8.0％的乳糖、添加量为15％的脱脂奶粉为酶活性保护剂，以不添加酶活性保护剂为对照，在-40℃冷冻12小时，测定冷冻前后羔羊皱胃酶活性，计算酶活性回收率。
试验结果见表5。
表5不同酶活性保护剂对羔羊皱胃酶冷冻过程中酶活性回收率的影响
注：表中数据为3次测定结果的平均值。
由表5可见，酶活性保护剂对羔羊皱胃酶冷冻过程中酶活性有明显保护作用，添加酶活性保护剂后，酶在冷冻过程中的活性回收率显著高于不添加酶活性保护剂的对照组。不同酶活性保护剂对酶的保护效果也有差别，添加甘油和脱脂奶粉对羔羊皱胃酶保护效果较好，-40℃冷冻后酶活性回收率均达95％以上。添加乳糖对羔羊皱胃酶也有明显的保护作用，-40℃冷冻12小时，酶活性回收率为85％以上，而不添加酶活性保护剂的对照组在-40℃冷冻12小时，酶活性回收率仅为65.43％。
4、真空冷冻干燥对羔羊皱胃酶活性的影响
选择添加量为0.10％的甘油、添加量为8.0％的乳糖、添加量为15％的脱脂奶粉为保护剂，以不添加酶活性保护剂为对照，在-40℃冷冻12小时，再真空冷冻干燥24小时，测定冷冻前及干燥前后羔羊皱胃酶活性，并以酶活性回收率为指标，比较各种保护剂在真空冷冻干燥过程中的应用效果。
试验结果见表6。
表6不同酶活性保护剂对羔羊皱胃酶真空冷冻干燥过程中酶活性回收率的影响
注：表中数据为3次测定结果的平均值。
由表6可见，以甘油、乳糖、脱脂奶粉作为酶活性保护剂，通过真空冷冻干燥制备的羔羊皱胃酶活性回收率均明显高于不添加保护剂的对照组，说明酶活性保护剂在真空冷冻干燥羔羊皱胃酶中能起到一定的保护作用。添加甘油或脱脂奶粉对羔羊皱胃酶的保护效果较好，羔羊皱胃酶经-40℃冷冻，再通过真空干燥后酶活性损失较小，活性回收率达到90％以上；添加乳糖对羔羊皱胃酶在真空冷冻干燥过程中也有明显的保护作用，-40℃冷冻，再通过真空干燥后酶活性回收率在73％以上，而不添加酶活性保护剂的对照组-40℃冷冻，再通过真空干燥时酶活性回收率仅为56.25％。因此，在羔羊皱胃酶真空冷冻干燥过程中添加酶活性保护剂可有效防止酶的活性损失。
为了验证本发明的有益效果，发明人采用本发明实施例1制备的固体羔羊皱胃酶进行了测试，各种试验情况如下：
1、固体羔羊皱胃酶检测结果
发明人对本发明实施例1制备的固体羔羊皱胃酶进行了酶活性的测定、微生物指标的测定、重金属的测定、酶活性保存率的测定、感官性状评定测试，测试方法与前面相同。
各种检测结果见表7。
表7固体羔羊皱胃酶检测结果
| 指标 | QB1805.3-1993(固体剂型) | 固体羔羊皱胃酶 |
| 颜色 | 黄褐色粉末 | 淡黄色粉末 |
| 结块性 | 无结块 | 无结块 |
| 酶活性，≥ | 30000U/g | 128000SU/g |
| 酶活性保存率(％)，≥ | 100 | 100 |
| 重金属(以Pb计)(％)，≤ | 0.004 | 未检出 |
| 大肠菌群(个/100g)，≤ | 3000 | 1500 |
| 细菌总数(个/g)，≤ | 50000 | 20000 |
| 致病菌(沙门氏菌) | 不得检出 | 未检出 |
结论
本发明通过对液体羔羊皱胃酶进行浓缩、添加酶活性保护剂，采用真空冷冻干燥制备成固体羔羊皱胃酶，经外观性状评定、酶活性保存率测定、理化指标检测、卫生指标检测及微生物指标检测，结果表明本发明制备的固体羔羊皱胃酶质量均符合QB1805.3-93《工业用蛋白酶制剂》中固体剂型的应用指标，可在乳品工业中应用。
Claims (3)
1.一种固体羔羊皱胃酶的制备方法，其特征在于它由下述步骤组成：
(1)处理羔羊皱胃
取2～3周龄羔羊的皱胃，用小刀划开，水流冲洗1～2分钟，除去皱胃中的内容物，再剥除皱胃外部的脂肪及结缔组织，-20℃冷冻，备用；
(2)剥离羔羊皱胃粘膜
将冷冻的羔羊皱胃在0～5℃解冻12小时，用小刀刮取粘膜，得到羔羊皱胃粘膜；
(3)提取羔羊皱胃酶
用蒸馏水和NaCl按常规方法配制成质量分数为8％的NaCl水溶液，将羔羊皱胃粘膜加入质量分数为8％的NaCl水溶液中，羔羊皱胃粘膜与质量分数为8％的NaCl水溶液的质量比为1∶10，25℃搅拌浸提72小时，每1小时搅拌一次，每次搅拌5～10分钟，得到浸提液，将浸提液在3000转/分钟离心15分钟，取上清液，用物质的量浓度为0.1mol/L的HCl调整pH至4.60，室温激活12小时，再用物质的量浓度为0.1mol/L的NaOH调节pH至6.0，制备成液态羔羊皱胃酶；
(4)浓缩液态羔羊皱胃酶
将步骤(3)制备的液态羔羊皱胃酶装入膜分离设备容器内，10～20℃浓缩至浓缩度为10％～60％，得到浓缩的羔羊皱胃酶；
上述的膜分离设备容器的型号为JXYGX-320，由厦门金星源生产膜科技有限公司生产；所述羔羊皱胃酶的浓缩度按下式计算：
酶浓缩度(％)＝[(原酶液体积-浓缩后酶液体积)/原酶液体积]×100；
(5)冷冻羔羊皱胃酶
向步骤(4)得到的浓缩羔羊皱胃酶中添加酶活性保护剂，酶活性保护剂为甘油或乳糖或脱脂奶粉，甘油的添加量为浓缩羔羊皱胃酶质量的0.05％～0.15％，乳糖的添加量为浓缩羔羊皱胃酶质量的4.0％～12.0％，脱脂奶粉的添加量为浓缩羔羊皱胃酶质量的5％～20％，搅拌均匀，-18～-40℃冷冻12小时；
(6)真空冷冻干燥羔羊皱胃酶
将冷冻的羔羊皱胃酶放入真空冷冻干燥机中，在真空度为0.22×10-3Pa、-20～-30℃冷冻干燥至羔羊皱胃酶中水分含量小于5％，制备成固体羔羊皱胃酶。
2.按照权利要求1所述的固体羔羊皱胃酶的制备方法，其特征在于：在浓缩液态羔羊皱胃酶步骤(4)中，将步骤(3)制备的液态羔羊皱胃酶放入膜分离设备容器内，10～20℃浓缩至浓缩度为20％～60％，得到浓缩的羔羊皱胃酶；在冷冻羔羊皱胃酶步骤(5)中，向步骤(4)浓缩后的羔羊皱胃酶中添加羔羊皱胃酶质量0.08％～0.12％的甘油或6.0％～10.0％的乳糖或10％～20％的脱脂奶粉，搅拌均匀，-30～-40℃冷冻12小时。
3.按照权利要求1所述的固体羔羊皱胃酶的制备方法，其特征在于：在浓缩液态羔羊皱胃酶步骤(4)中，将步骤(3)制备的液态羔羊皱胃酶放入膜分离设备容器内，10～20℃浓缩至浓缩度为50％，得到浓缩的羔羊皱胃酶；在冻羔羊皱胃酶步骤(5)中，向步骤(4)浓缩后的羔羊皱胃酶中添加羔羊皱胃酶质量0.10％的甘油或8.0％的乳糖或15％的脱脂奶粉，搅拌均匀，-40℃冷冻12小时。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009102191746A CN101709295B (zh) | 2009-11-26 | 2009-11-26 | 固体羔羊皱胃酶的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009102191746A CN101709295B (zh) | 2009-11-26 | 2009-11-26 | 固体羔羊皱胃酶的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101709295A CN101709295A (zh) | 2010-05-19 |
| CN101709295B true CN101709295B (zh) | 2012-03-14 |
Family
ID=42402100
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009102191746A Expired - Fee Related CN101709295B (zh) | 2009-11-26 | 2009-11-26 | 固体羔羊皱胃酶的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101709295B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102517270A (zh) * | 2011-12-22 | 2012-06-27 | 呼和浩特职业学院 | 凝乳酶分离提纯工艺 |
| CN106661567B (zh) * | 2014-07-11 | 2021-08-13 | 科.汉森有限公司 | 凝乳天冬氨酸蛋白酶组合物 |
| CN106011115A (zh) * | 2016-06-17 | 2016-10-12 | 中国科学院新疆理化技术研究所 | 一种羔羊第四胃有效成分提取物的制备方法及用途 |
-
2009
- 2009-11-26 CN CN2009102191746A patent/CN101709295B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101709295A (zh) | 2010-05-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100582216C (zh) | 核苷酸生物合成有关化合物作为冷冻保护剂 | |
| Moradi et al. | The relationship between milk somatic cell count and cheese production, quality and safety: A review | |
| Borelli et al. | Yeast populations associated with the artisanal cheese produced in the region of Serra da Canastra, Brazil | |
| EP2223609A1 (en) | Frozen lab culture of individual frozen pellets | |
| EP1441027A1 (en) | Storage stable frozen lactic acid bacteria | |
| Ahtesh et al. | Processing and sensory characteristics of a fermented low‐fat skim milk drink containing bioactive antihypertensive peptides, a functional milk product | |
| CN101709295B (zh) | 固体羔羊皱胃酶的制备方法 | |
| Oumer et al. | The effects of cultivating lactic starter cultures with bacteriocin-producing lactic acid bacteria | |
| CN113969250A (zh) | 干酪乳杆菌dy13及其产品和应用 | |
| CN101948818B (zh) | N-乙酰高丝氨酸内酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其编码基因和应用 | |
| CN103243081B (zh) | 一种凝乳酶基因及其编码的氨基酸序列与应用 | |
| GAGNAIRE et al. | Free active peptidases are detected in Emmental juice extracted before ripening in the warm room | |
| CN103966131A (zh) | 一种具有高肽酶活力的植物乳杆菌及其应用 | |
| Saiki et al. | Effects of the addition of non-starter lactic acid bacteria on free amino acid production during cheese ripening | |
| PIVETEAU et al. | Inability of dairy propionibacteria to grow in milk from low inocula | |
| Rattray et al. | Purification and characterization of an intracellular esterase from Brevibacterium linens ATCC 9174 | |
| US9289003B2 (en) | Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents | |
| WO2021078764A1 (en) | Bacterial composition for controlling fungal spoilage and uses thereof | |
| FR2542013A1 (fr) | Procede de preparation et de conservation d'un hydrolysat proteinique utile notamment dans le domaine agro-alimentaire | |
| Singh et al. | Study on beta-Galactosidase isolation, purification and optimization of lactose hydrolysis in whey for production of instant energy drink | |
| US20050069862A1 (en) | Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents | |
| Powell | Coagulants and Starter Cultures | |
| AU2004270911A1 (en) | Ferment activator based on lactic acid bacteria, and method of preparing a product using said activator | |
| CN106070679A (zh) | 利用羊肚菌制作的羊肚菌奶酪及其制备方法 | |
| Oliver et al. | Cheese industry development and research in Argentina |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120314 Termination date: 20141126 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |