CN101637119A - 隐性性状的连续回交技术 - Google Patents
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Abstract
隐性性状的连续回交技术，其特征是，将不含目标隐性基因的待改良材料作为轮回亲本，将含有目标隐性基因的材料作为供体亲本；以轮回亲本为母本与供体亲本杂交，收获杂种一代F1与轮回亲本种子；种植杂种一代F1与轮回亲本种子直至种植回交n代杂种二代BCnF2群体，直到定型成轮回亲本的目标隐性基因等基因系。本发明还公开了应用上述的隐性性状的连续回交技术的紫叶标记等基因系的创建方法以及以紫叶标记等基因系作中间材料再转育新的紫叶标记核不育系。本发明方法将自交过程与下一次回交过程合并在同一季处理，时间效率提高近50％，可以快速改良现有优良亲本的个别由显性基因控制的不适性状，也可将有用的隐性性状快速导入到现有高水平遗传背景中。
Description
技术领域
本发明涉及一种杂交水稻组合选育方法，特别是一种隐性性状的连续回交技术。
背景技术
现有技术中植物隐性基因的回交技术，一般采用隔代回交的方法实现，因此回交进程较慢，时间效率较显性基因回交速度慢近50％，在种子高度市场化的情况下已很不利。
近来在中国因两系法杂种稻制种中不育系本身存在育性风险，掀起了标记性状不育系的研究热潮，出现了像白化标记、黄化标记、淡绿叶标记、有色稃壳标记、苯达松敏感基因标记、披叶标记、紫叶标记等等，各种标记方法的遗传规律也基本清晰，但其中从标记醒目、不育系生长势、全程可鉴定等选择标准比较，水稻紫叶标记更为理想。现在国内已有紫叶标记两系不育系选育成功的报道，但由于紫叶标记系选育技术路线存在不足，选育出的不育系携带大量不利基因，因此国内至今未有一个利用携有紫叶标记不育系选育的组合通过审定。另据扬州大学农学院潘学彪与中国水稻所曹立勇等研究，紫叶标记对育成不育系的配合力、育性、开花习性无显著影响，说明紫叶标记水稻不育系在理论与实践上都是可行的。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种提高杂交水稻纯度、降低两系杂交稻种子纯度风险的隐性性状的连续回交技术。
本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种隐性性状的连续回交技术，其特点是，其步骤如下：
(1)将不含目标隐性基因的待改良材料作为轮回亲本，其基因型为AA，将含有目标隐性基因aa的材料作为供体亲本；以轮回亲本为母本与供体亲本杂交，或配制反交组合，收获杂种一代F1与轮回亲本种子；
(2)种植杂种一代F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本与杂种一代F1杂交，产生回交一代BC1F1种子，收获回交一代BC1F1与轮回亲本种子；
(3)种植回交一代BC1F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本，与回交一代BC1F1成对杂交，在回交一代BC1F1群体中选择与轮回亲本较相似的单株回交，要求选择单株应不少于10株，当目标基因为2个或更多时，选择株数应成倍增加；每株与尽可能多地配制杂交种子，以回交一代BC1F1中株为单位，成对收获回交二代BC2F1与回交一代BC1F1自交种子BC1F2，成对编号与种植，同时收获轮回亲本种子；
(4)成对种植回交二代BC2F1与回交一代BC1F1自交种子BC1F2，同时种植轮回亲本，作杂交亲本和对照用；在可鉴别隐性性状的时期，淘汰回交一代BC1F1自交后代中不分离出隐性性状单株的对应回交二代杂种一代，当选回交二代杂种一代作父本与轮回亲本再杂交，回交二代杂种一代群体中选择单株数量同步骤(3)；
(5)重复步骤(4)，直到回交n代杂种一代BCnF1已与轮回亲本十分相似时停止回交工作，从当选回交n代杂种一代BCnF1群体中选择单株自交收获，形成回交n代杂种二代BCnF2群体；
(6)种植回交n代杂种二代BCnF2群体，同时种植轮回亲本作对照，选择已携带目标隐性性状，且与轮回亲本十分相似的单株，单收建系，再与轮回亲本比较，直到定型成轮回亲本的目标隐性基因等基因系。
隐性性状一般回交方法是通过对回交或杂交杂种一代(F1)进行加代，从杂种二代(F2)中选择隐性性状单株与轮回亲本杂交，如此反复进行，至达到育种目标为止，该法达到饱合回交要很长时间，如回交5次，需要14季时间，若每年种植两季，则需7年。实际上，若能选择目标基因的杂合基因型也能进行回交，而不必选到目标基因的隐性纯合型才开始回交，这样可以省略一季自交占用的季节。杂合基因型如何选择成了本研究的关键。在不能知晓杂合体的情况下可以多做成对杂交，待下季用F2中是否出现隐性目标单株判断基因型杂合与否。这种做法需要根据杂合基因型出现频率，用泊松分布计算99％保证率下最小群体要求。一对隐性基因为10株，两对隐性基因为19株。为防止小概率失败事件发生而中断回交过程，需用F2中的隐性目标株作父本与轮回亲本杂交，以作备用支路，防止回交过程的意外中断。本发明方法可以将自交过程与下一次回交过程合并在同一季处理，可以大幅度减少育种时间，时间效率提高近50％，在不用启用备用支路的条件下与显性基因回交效率一样。如果因小概率事件发生意外中断，可以启用备用支路，可以持续回交，但时间上增加一季。备用支路实际上是一种保障性技术方案，非意外情况下可以不启用。本方法在种子市场化程度很高的情况下，可以用最快的速度改良现有优良亲本的个别由显性基因控制的不适性状。也可以快速将一十分有用的隐性性状快速导入到现有高水平遗传背景中。
本发明植物隐性基因连续回交技术路线可参见图1。
成对回交BCnF1与上季回交种的自交种BCn-1 F2(初次杂交记为BC0)种子成对排列，BCn-1 F2群体中不出现隐性性状植株，淘汰对应成对回交BCn F1，当选回交行继续成对回交，同时用BCn-1 F2中隐性性状植株回交，当下季成对回交中丢失目标隐性基因时用其F1继续回交。用BCn-1 F2中隐性性状植株回交可称为备用支路。当采用同步测交鉴定成对回交法时，成对回交BCn F1、上季测交种TBCn-1 F1与上季回交种的自交种BCn-1F2(初次杂交记为BC0)种子成组排列，TBCn-1 F1群体中不出现隐性性状植株，淘汰对应成对回交BCnF1，从未汰BCn F1中选株继续成对回交。当回交后代已与轮回亲本高度相似时，可以停止回交过程，开始对回交F1加代，从回交F2代始选择隐性目标单株。
本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以上所述的隐性性状的连续回交技术中，在步骤(4)中，从BC1F2中选择隐性性状单株与轮回亲本杂交，同时成对收获BC2F1与轮回亲本种子，作为备用支路。
本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。本发明还公开了一种应用上述隐性性状的连续回交技术的紫叶标记等基因系的创建方法，其特点是，其步骤如下：
(1)将不含紫叶性状的待改良材料作为轮回亲本，紫叶材料作为供体亲本；
以轮回亲本为母本与供体亲本杂交，或者配制反交组合；收获杂种一代F1与轮回亲本种子；
(2)种植杂种一代F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本与杂种一代杂交，产生回交一代种子；收获回交一代BC1F1与轮回亲本种子；
(3)种植回交一代BC1F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本，与回交一代成对杂交，在回交一代群体中选择与轮回亲本较相似的单株回交；要求选择单株应不少于19株，每株与尽可能多地配制杂交种子，以回交一代中株为单位，成对收获回交二代BC2F1与回交一代自交种子BC1F2，成对编号与种植，同时收获轮回亲本种子；
(4)成对种植回交二代BC2F1与回交一代自交种子BC1F2，同时种植轮回亲本，作杂交亲本和对照用；淘汰回交一代自交后代中不分离紫叶单株的对应回交二代杂种一代，当选回交二代杂种一代作父本与轮回亲本再杂交，回交二代杂种一代群体中选择单株数量同步骤(3)；
(5)重复步骤(4)工作，直到回交n代杂种一代BCnF1已与轮回亲本十分相似时停止回交工作，从当选回交n代杂种一代BCnF1群体中选择紫稃尖紫叶枕单株自交收获，形成回交n代杂种二代BCnF2群体；
(6)种植回交n代杂种二代BCnF2群体，同时种植轮回亲本作对照，选择紫叶且与轮回亲本十分相似的单株，单收建系，再与轮回亲本比较，直到定型成轮回亲本的目标隐性基因等基因系，即紫叶标记等基因系。
紫叶性状由4对互补基因控制，可以总结为CAPI体系，基因型为CCAAPlPli-Pli-Pl为纯合紫叶(C为色素原基因，A为色素原活化基因，Pl为紫叶表达基因，I-Pl紫叶表达抑制基因，开头字母小写的为各自相应的隐性等位基因)，基因型为CCAAPlpli-Pl i-Pl时，紫叶片，后代出现1/4的青叶株，基因型为CCAAPlPlI-Pl i-Pl时，为青叶片，后代出现1/4的紫叶株，当I-Pl存在时无论Pl为显隐性，均表达为青叶，但Pl为显性时其它部位均有色。因此，可以用其它部位显色与否判断Pl的存在，后代出现紫叶与否判断i-Pl存在。应用隐性性状的连续回交技术，从杂种二代(F2)中出现紫叶株的对应杂种一代(F1)中选择其它部位显色的正常可育单株与轮回亲本杂交，如此连续回交5次以后，基本可以创建轮回亲本的紫叶等基因系。本发明方法可以快速消除紫叶标记基因与不利基因的连锁，从而改变以杂交选育或不饱合回交转育紫叶标记难以获得成功杂交稻组合的现状。
水稻紫叶表达及其抑制基因连续回交技术路线可参照图2。
成对回交BCn F1与上季回交种的自交种BCn-1 F2(初次杂交记为BC0)种子成对排列，BCn-1 F2群体中不出现紫叶株，淘汰对应成对回交BCn F1，当选回交行继续成对回交，同时用BCn-1 F2中紫叶株回交，当下季成对回交中丢失紫叶表达基因与紫叶表达抑制基因的等位基因时，启用其F1继续回交。在回交基本饱和时，可以对BCn-1 F2选种，从中选择可育株或不育株均可，之后用常规方法选择。对育性、开花习性、异交率进行观察，并测定配合力，决选优异、紫叶标记两系不育系。
本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以上所述的应用上述隐性性状的连续回交技术的紫叶标记等基因系的创建方法，在步骤(4)中，从BC1F2中选择隐性性状单株与轮回亲本杂交，同时成对收获BC2F1与轮回亲本种子，作为备用支路。
本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。本发明还公开了一种以上述技术方案所述的紫叶标记等基因系作中间材料再转育新的紫叶标记核不育系，其特点是，其步骤如下：
(1)选择目前生产上最广泛应用的新两系不育系，或自育综合性状优良核不育系，与已育成的如以上技术方案所述的骨干亲本紫叶等基因系杂交，收获杂种一代种子；
(2)种植杂种一代种子，混合收获形成杂种二代群体种子；
(3)种植杂种二代，群体不少于2000株，选择综合性状优良的紫叶株或青叶株，只选择可育株，建成杂种三代家系；
(4)种植杂种三代，每家系不少于60株；紫叶后代可能全部单株为紫叶，也可能出现少量青叶株；青叶株后代中可能全部为青叶单株，也可能出现少量紫叶单株。因此，紫叶性状的选择可以放到杂种三代选择，而不应在杂种二代高压选择，防止丢失大量有利基因型。可育后代多数会分离出不育株，从分离出不育株的家系中继续选择紫叶可育株。选种单株单收，产生杂种四代种子；选种群体附近应种植生产上应用较广的两系不育系与三系保持系作对照，不育系要分期播种，以作家系中不育株的开花习性与育性稳定性对照，明显低于对照不育系的要淘汰；生长势、产量、抗性、米质以保持系作对照，低于对照也淘汰；
(5)种植杂种四代，从综合性状好，且出现不育株的家系中选择不育株与骨干恢复系测验配合力，其它选种标准与对照设定同步骤(4)，从分离出不育株的家系中选择紫叶可育株形成杂种五代；
(6)种植杂种五代与测交种，将测交种杂种优势不足的家系提前淘汰，从当选系中选择紫叶不育株，再生收种、进入普通育种程序。
当选择一个综合性状好的轮回亲本转育成了优秀的紫叶标记等基因系后，以紫叶标记等基因系为骨干亲本，与其它两系不育系杂交，可以快速选育新的紫叶标记不育系。
本发明方法可以将自交过程与下一次回交过程合并在同一季处理，可以大幅度减少育种时间，时间效率提高近50％，在不用启用备用支路的条件下与显性基因回交效率一样。如果因小概率事件发生意外中断，可以启用备用支路，可以持续回交，但时间上增加一季。备用支路实际上是一种保障性技术方案，非意外情况下可以不启用。本方法在种子市场化程度很高的情况下，可以用最快的速度改良现有优良亲本的个别由显性基因控制的不适性状。也可以快速将一十分有用的隐性性状快速导入到现有高水平遗传背景中。
附图说明
图1为植物隐性基因连续回交技术路线图；图中：BCmFn表示回交m次杂种第n代，a表示隐性基因，A表示a的等位基因，AA表示显性纯合，Aa表示杂合，aa表示隐性纯合；
图2为水稻紫叶表达及其抑制基因连续回交技术路线图；图中：BCmFn表示回交m次杂种第n代。
具体实施方式
以下参照附图，进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。
实施例1。参照图1。一种隐性性状的连续回交技术，其步骤如下：
(1)将不含目标隐性基因的待改良材料作为轮回亲本，其基因型为AA，将含有目标隐性基因aa的材料作为供体亲本；以轮回亲本为母本与供体亲本杂交，或配制反交组合，收获杂种一代F1与轮回亲本种子；
(2)种植杂种一代F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本与杂种一代F1杂交，产生回交一代BC1F1种子，收获回交一代BC1F1与轮回亲本种子；
(3)种植回交一代BC1F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本，与回交一代BC1F1成对杂交，在回交一代BC1F1群体中选择与轮回亲本较相似的单株回交，要求选择单株应不少于10株，当目标基因为2个或更多时，选择株数应成倍增加；每株与尽可能多地配制杂交种子，以回交一代BC1F1中株为单位，成对收获回交二代BC2F1与回交一代BC1F1自交种子BC1F2，成对编号与种植，同时收获轮回亲本种子；
(4)成对种植回交二代BC2F1与回交一代BC1F1自交种子BC1F2，同时种植轮回亲本，作杂交亲本和对照用；在可鉴别隐性性状的时期，淘汰回交一代BC1F1自交后代中不分离出隐性性状单株的对应回交二代杂种一代，当选回交二代杂种一代作父本与轮回亲本再杂交，回交二代杂种一代群体中选择单株数量同步骤(3)；
(5)重复步骤(4)，直到回交n代杂种一代BCnF1已与轮回亲本十分相似时停止回交工作，从当选回交n代杂种一代BCnF1群体中选择单株自交收获，形成回交n代杂种二代BCnF2群体；
(6)种植回交n代杂种二代BCnF2群体，同时种植轮回亲本作对照，选择已携带目标隐性性状，且与轮回亲本十分相似的单株，单收建系，再与轮回亲本比较，直到定型成轮回亲本的目标隐性基因等基因系。
实施例2。在实施例1的步骤(4)中，从BC1F2中选择隐性性状单株与轮回亲本杂交，同时成对收获BC2F1与轮回亲本种子，作为备用支路。
实施例3。一种应用实施例1所述的隐性性状的连续回交技术的紫叶标记等基因系的创建方法，其步骤如下：
(1)将不含紫叶性状的待改良材料作为轮回亲本，紫叶材料作为供体亲本；
以轮回亲本为母本与供体亲本杂交，或者配制反交组合；收获杂种一代F1与轮回亲本种子；
(2)种植杂种一代F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本与杂种一代杂交，产生回交一代种子；收获回交一代BC1F1与轮回亲本种子；
(3)种植回交一代BC1F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本，与回交一代成对杂交，在回交一代群体中选择与轮回亲本较相似的单株回交；要求选择单株应不少于19株，每株与尽可能多地配制杂交种子，以回交一代中株为单位，成对收获回交二代BC2F1与回交一代自交种子BC1F2，成对编号与种植，同时收获轮回亲本种子；
(4)成对种植回交二代BC2F1与回交一代自交种子BC1F2，同时种植轮回亲本，作杂交亲本和对照用；淘汰回交一代自交后代中不分离紫叶单株的对应回交二代杂种一代，当选回交二代杂种一代作父本与轮回亲本再杂交，回交二代杂种一代群体中选择单株数量同步骤(3)；
(5)重复步骤(4)工作，直到回交n代杂种一代BCnF1已与轮回亲本十分相似时停止回交工作，从当选回交n代杂种一代BCnF1群体中选择紫稃尖紫叶枕单株自交收获，形成回交n代杂种二代BCnF2群体；
(6)种植回交n代杂种二代BCnF2群体，同时种植轮回亲本作对照，选择紫叶且与轮回亲本十分相似的单株，单收建系，再与轮回亲本比较，直到定型成轮回亲本的目标隐性基因等基因系，即紫叶标记等基因系。
实施例4。在实施例3的步骤(4)中，从BC1F2中选择隐性性状单株与轮回亲本杂交，同时成对收获BC2F1与轮回亲本种子，作为备用支路。
实施例5。一种以实施例2或3所述的紫叶标记等基因系作中间材料再转育新的紫叶标记核不育系，其步骤如下：
(1)选择目前生产上最广泛应用的新两系不育系，或自育综合性状优良核不育系，与已育成的如实施例2或3所述的骨干亲本紫叶等基因系杂交，收获杂种一代种子；
(2)种植杂种一代种子，混合收获形成杂种二代群体种子；
(3)种植杂种二代，群体不少于2000株，选择综合性状优良的紫叶株或青叶株，只选择可育株，建成杂种三代家系；
(4)种植杂种三代，每家系不少于60株；紫叶后代可能全部单株为紫叶，也可能出现少量青叶株；青叶株后代中可能全部为青叶单株，也可能出现少量紫叶单株。因此，紫叶性状的选择可以放到杂种三代选择，而不应在杂种二代高压选择，防止丢失大量有利基因型。可育后代多数会分离出不育株，从分离出不育株的家系中继续选择紫叶可育株。选种单株单收，产生杂种四代种子；选种群体附近应种植生产上应用较广的两系不育系与三系保持系作对照，不育系要分期播种，以作家系中不育株的开花习性与育性稳定性对照，明显低于对照不育系的要淘汰；生长势、产量、抗性、米质以保持系作对照，低于对照也淘汰；
(5)种植杂种四代，从综合性状好，且出现不育株的家系中选择不育株与骨干恢复系测验配合力，其它选种标准与对照设定同步骤(4)，从分离出不育株的家系中选择紫叶可育株形成杂种五代；
(6)种植杂种五代与测交种，将测交种杂种优势不足的家系提前淘汰，从当选系中选择紫叶不育株，再生收种、进入普通育种程序。
实施例6。参照图2。水稻紫叶标记快速成对回交法。
采用广占63S作轮回亲本，用马来西亚紫稻作紫叶标记供材料。经研究，广占63S与马来西亚紫稻在紫叶性状上差异两对基因，分别是紫叶表达基因Pl与其抑制基因I-Pl。当I-Pl存在时，叶片表达为青色，当Pl存在时，才能表达为紫叶，当Pl存在且I-Pl存在时，植株表现为叶片青色，而叶缘、稃尖紫色。
应用广占63S与马来西亚紫稻杂交，之后再用广占63S为母本回交一次，获得BC1 F1杂交种。再用广占63S为母本，以BC1 F1父本，杂交获得BC2 F1，成对收BC2F1与对应父本自交种BC1 F2，杂交种在前，父本在后，成对排列、成对种植。当BC1 F2中不出现紫叶株时，淘汰对应BC2F1，从当选BC2 F1中选择紫稃尖，正常可育单株作父本，再与广占63S杂交，成对收、排、种BC3 F1、BC2 F2，处理方法同BC1 F2、BC2F1。之后重复前面过程，直到BCn F1中不育株已与广占63S高度相似，从中选择紫稃尖可育株或不育株加代，分离出紫叶不育株，即获得广占63S的紫叶标记等基因系。对多个紫叶标记等基因系进行育性、开花习性与配合力测验，选择出综合性状最佳的两系不育系株系。可以用此不育系与恢复系广泛测交，选育出高产、优质、多抗两系新组合。同时当选株系也可以作新的骨干亲本与其它优良材料杂交，选育二环系。
Claims (5)
1、一种隐性性状的连续回交技术，其特征在于，其步骤如下：
(1)将不含目标隐性基因的待改良材料作为轮回亲本，其基因型为AA，将含有目标隐性基因aa的材料作为供体亲本；以轮回亲本为母本与供体亲本杂交，或配制反交组合，收获杂种一代F1与轮回亲本种子；
(2)种植杂种一代F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本与杂种一代F1杂交，产生回交一代BC1F1种子，收获回交一代BC1F1与轮回亲本种子；
(3)种植回交一代BC1F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本，与回交一代BC1F1成对杂交，在回交一代BC1F1群体中选择与轮回亲本较相似的单株回交，要求选择单株应不少于10株，当目标基因为2个或更多时，选择株数应成倍增加；每株与尽可能多地配制杂交种子，以回交一代BC1F1中株为单位，成对收获回交二代BC2F1与回交一代BC1F1自交种子BC1F2，成对编号与种植，同时收获轮回亲本种子；
(4)成对种植回交二代BC2F1与回交一代BC1F1自交种子BC1F2，同时种植轮回亲本，作杂交亲本和对照用；在可鉴别隐性性状的时期，淘汰回交一代BC1F1自交后代中不分离出隐性性状单株的对应回交二代杂种一代，当选回交二代杂种一代作父本与轮回亲本再杂交，回交二代杂种一代群体中选择单株数量同步骤(3)；
(5)重复步骤(4)，直到回交n代杂种一代BCnF1已与轮回亲本十分相似时停止回交工作，从当选回交n代杂种一代BCnF1群体中选择单株自交收获，形成回交n代杂种二代BCnF2群体；
(6)种植回交n代杂种二代BCnF2群体，同时种植轮回亲本作对照，选择已携带目标隐性性状，且与轮回亲本十分相似的单株，单收建系，再与轮回亲本比较，直到定型成轮回亲本的目标隐性基因等基因系。
2、根据权利要求1所述的隐性性状的连续回交技术，其特征在于，在步骤(4)中，从BC1F2中选择隐性性状单株与轮回亲本杂交，同时成对收获BC2F1与轮回亲本种子，作为备用支路。
3、一种应用权利要求1所述的隐性性状的连续回交技术的紫叶标记等基因系的创建方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)将不含紫叶性状的待改良材料作为轮回亲本，紫叶材料作为供体亲本；以轮回亲本为母本与供体亲本杂交，或者配制反交组合；收获杂种一代F1与轮回亲本种子；
(2)种植杂种一代F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本与杂种一代杂交，产生回交一代种子；收获回交一代BC1F1与轮回亲本种子；
(3)种植回交一代BC1F1与轮回亲本种子，以轮回亲本为母本，与回交一代成对杂交，在回交一代群体中选择与轮回亲本较相似的单株回交；要求选择单株应不少于19株，每株与尽可能多地配制杂交种子，以回交一代中株为单位，成对收获回交二代BC2F1与回交一代自交种子BC1F2，成对编号与种植，同时收获轮回亲本种子；
(4)成对种植回交二代BC2F1与回交一代自交种子BC1F2，同时种植轮回亲本，作杂交亲本和对照用；淘汰回交一代自交后代中不分离紫叶单株的对应回交二代杂种一代，当选回交二代杂种一代作父本与轮回亲本再杂交，回交二代杂种一代群体中选择单株数量同步骤(3)；
(5)重复步骤(4)工作，直到回交n代杂种一代BCnF1已与轮回亲本十分相似时停止回交工作，从当选回交n代杂种一代BCnF1群体中选择紫稃尖紫叶枕单株自交收获，形成回交n代杂种二代BCnF2群体；
(6)种植回交n代杂种二代BCnF2群体，同时种植轮回亲本作对照，选择紫叶且与轮回亲本十分相似的单株，单收建系，再与轮回亲本比较，直到定型成轮回亲本的目标隐性基因等基因系，即紫叶标记等基因系。
4、根据权利要求3所述的创建方法，其特征在于，在步骤(4)中，从BC1F2中选择隐性性状单株与轮回亲本杂交，同时成对收获BC2F1与轮回亲本种子，作为备用支路。
5、一种以紫叶标记等基因系作中间材料再转育新的紫叶标记核不育系，其特征在于，其步骤如下：
(1)选择目前生产上最广泛应用的新两系不育系，或自育综合性状优良核不育系，与已育成的如权利要求3或4所述的骨干亲本紫叶等基因系杂交，收获杂种一代种子；
(2)种植杂种一代种子，混合收获形成杂种二代群体种子；
(3)种植杂种二代，群体不少于2000株，选择综合性状优良的紫叶株或青叶株，只选择可育株，建成杂种三代家系；
(4)种植杂种三代，每家系不少于60株；紫叶后代可能全部单株为紫叶，也可能出现少量青叶株；青叶株后代中可能全部为青叶单株，也可能出现少量紫叶单株。因此，紫叶性状的选择可以放到杂种三代选择，而不应在杂种二代高压选择，防止丢失大量有利基因型。可育后代多数会分离出不育株，从分离出不育株的家系中继续选择紫叶可育株。选种单株单收，产生杂种四代种子；选种群体附近应种植生产上应用较广的两系不育系与三系不育系作对照，不育系要分期播种，以作家系中不育株的开花习性与育性稳定性对照，明显低于对照不育系的要淘汰；生长势、产量、抗性、米质以保持系作对照，低于对照也淘汰；
(5)种植杂种四代，从综合性状好，且出现不育株的家系中选择不育株与骨干恢复系测验配合力，其它选种标准与对照设定同步骤(4)，从分离出不育株的家系中选择紫叶可育株形成杂种五代；
(6)种植杂种五代与测交种，将测交种杂种优势不足的家系提前淘汰，从当选系中选择紫叶不育株，再生收种、进入普通育种程序。
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2009
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