CN101627051A - 多肽作为抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及经分离的多肽作为抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂的用途。本发明多肽的一个例子是来自Bacillus licheniformis ATCC 14580的所谓的L12蛋白质。本发明还涉及生产与L12相关的蛋白质的Bacillus菌株的益生菌用途。

Description

多肽作为抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂的用途

本发明涉及下文定义的多肽在食物或动物饲料中作为抑球虫剂(coccidiostat)和/或抑组织滴虫剂(histomonastat)的用途。本发明多肽的一个例子是来自Bacillus licheniformis ATCC 14580的所谓的L12蛋白质，其具有本文SEQ ID NO：2的氨基酸+1到+85的氨基酸序列(在下文中称作SEQID NO：2的氨基酸1-85)。

球虫(Coccidia)是给予一种单细胞原生动物的属名，所述单细胞原生动物是感染脊椎动物和无脊椎动物的肠寄生虫。所述生物引起球虫病，并通常沉积在小肠如结肠中。农场动物被球虫感染不仅可严重降低生长，而且会危及生命。球虫感染的症状包括上皮细胞损失、肠粘膜剥脱和腹泻(通常伴随着失血)。对一些农场动物(如家禽)而言，球虫感染可能是致命的，否则严重损伤动物的健康。

家禽尤其易受球虫病伤害是因为若干个原因：(1)6到8天的寄生周期在第2周和第4周之间的关键阶段击中它们，该阶段时通常表现出最大的生长。因为寄生虫实际上破坏整个肠上皮，所以营养物的吸收被显著降低，这导致可观的生长抑制。直到5或6周屠宰时，已没有足够的时间恢复。(2)存在7种能够感染家禽的Eimeria物种，多于任何其它的动物范畴，并且它们中至少4种在商业操作中经常见到。因此，当一种感染循环已被终止时，另一种可能处于早期阶段，从而使球虫病成为慢性的。(3)在家禽中观察到致病性最强的物种KJS/5.2.2007(Eimeria tenella，E.necatrix)，其诱导严重的出血，并且在某些情况下可引起多达50％的死亡率。这样的急性球虫病病例可轻易毁掉家禽农场主。(4)深厚垃圾(deeplitter)上家禽的密集饲养(一栋房中100,000或更多只鸡)便于家禽通过食粪便接近粪便中的球虫传染期，并因此支持该疾病在整个家禽群体间快速传播。如果卫生条件不严格，则该疾病也会传递至相同农场的其它家禽舍内，并在该场所停留数年。

为了抗击球虫病，通常对动物饲料补充抑球虫剂。已被EEC批准用于家禽(鸡、火鸡、肉鸡和蛋鸡)的抑球虫剂包括磺酰亚胺(sulphonimides)、安普罗铵、地考喹酯和离子载体。然而，这些抑球虫剂中的一些是非天然的无机化合物，并因此必须被合成制造。这表示它们相对昂贵。因此需要天然存在的抑球虫剂。

组织滴虫病也是由原生动物引起的。在该特异的情况下，原生动物感染火鸡、鸡以及偶然地其它鹌鹑目鸟(galliform bird)的盲肠，然后感染肝。在火鸡中，大部分感染是知名的；在其它鸟中，死亡率较低。原生动物寄生虫Histomonas meleagridis最经常在盲肠线虫Heterakis gallinarum的胚胎卵中传播，有时通过与被感染的鸟接触而直接传播。爆发通过直接接触在群体中快速蔓延。较大百分比的鸡带有该蠕虫，并且组织滴虫位于两种性别的成年蠕虫中。这些蚯蚓物种可带有含H meleagridis的H gallinarum幼虫，其对鸡和火鸡均有感染性。H meleagridis在Heterakis卵中存活更长时间，所述Heterakis卵是有抵抗力的，并可在土壤中存活数年。线虫进入后数天，组织滴虫由盲肠中的Heterakis幼虫释放，并在盲肠组织中快速复制。寄生虫迁移进粘膜下层和粘膜肌层并引起广泛和严重的坏死。组织滴虫通过血管系统或通过腹膜腔达到肝，肝表面上迅速出现圆形的坏死斑。组织滴虫与其它肠道生物如细菌和球虫相互作用，并且依赖于它们得到完全毒性。

传统上组织滴虫被认为能感染火鸡，但是对鸡几乎没有损伤。然而，在鸡中的爆发能够引起高发病率、中度死亡率和广泛的报废(culling)。在鸡中肝损伤倾向于较不严重，但是在年轻的蛋鸡(layer pullet)或肉鸡(breeder pullet)中发病率会特别高。

为了抗击组织滴虫病，通常对动物饲料补充抑组织滴虫剂。家禽(鸡，火鸡)使用的抑组织滴虫剂可包括例如4-硝基苯胂酸，这是一种非天然的化合物因此必须合成制造。另外已知UK当局在2003年撤销了剩余的最后一种用于火鸡的被授权的抑组织滴虫剂Nifursol。因此，还存在对新的和另外的例如天然存在的抑组织滴虫剂的需要。

除了使用天然化合物的常见优点之外，这些可能比合成化合物更便宜。

本发明基于下述发现：下文定义的多肽具有针对球虫病和组织滴虫病的活性，并因此可被用作抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂。尽管所述多肽已被建议作为动物饲料的添加剂(WO-A-2006/099871)，但是迄今为止尚未明确这些化合物能够有效对抗球虫或组织滴虫病。事实上，在WO-A-2006/099871中是将多肽添加进动物饲料中，从而通过改善饲料转化比(FCR)和/或调控肠微生物区系来促进动物饲料利用。并且未提到任何针对球虫和组织滴虫病的活性。

因此，本发明涉及下述多肽作为抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂的用途，所述多肽选自：

(a)包含下述氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的氨基酸1-85具有至少33％的同一性程度；

(b)由在低严格度条件下与

(i)SEQ ID NO：1的核苷酸124-378，

(ii)至少100个核苷酸的(i)的亚序列，或

(iii)(i)或(ii)的互补链；

杂交的核酸序列编码的多肽；

(c)具有SEQ ID NO：2的氨基酸1-85的氨基酸序列的多肽变体，其包含一个或多个氨基酸的取代、缺失、延伸和/或插入；

(d)(a)或(b)的等位变体；和

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的片段。

通过使用在上文中被定义为例如抑球虫剂的多肽，可使用针对球虫病被治疗的人或动物来说更可能被接受的天然存在的化合物。另外，工业和消费者团体通常赞成使用天然存在的化合物而不是合成化合物。多肽是有机的，并因此可比合成的无机化合物更便宜地提供。

在一些具体的实施方案中，多肽具有下述氨基酸序列、基本由下述氨基酸序列组成或由下述氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的氨基酸1-85具有至少33％的同一性程度，例如SEQ ID NO：2的氨基酸1-85的多肽。其它特定的例子是SEQ ID NO：8、9和10任一的氨基酸1-85的多肽(在本文实施例1的PCR-测试的基础上被鉴定为L12-样)。

本发明的多肽可以是细菌或真菌多肽。在第二个具体的实施方案中，多肽是革兰氏阳性细菌多肽如Bacillus多肽或其变体，例如为Bacilluslicheniformis多肽，例如衍生自Bacillus licheniformis ATCC 14580，其为Bacillus licheniformis的模式株并可根据要求得自美国典型培养物保藏中心ATCC。优选的Bacillus licheniformis菌株在本文实施例1的测试中是阳性的，例如以下Bacillus licheniformis菌株：ATCC 14580(＝NCIB 9375)、NCIMB 6346(＝DSM 8785)、NCTC 1024、NCTC 1025、NCTC 2120、NCTC 7589、NCTC 9932、ATCC 21424、NCIMB 10689和ATCC 53757。

本发明的第二方面涉及上文定义的多肽在抑球虫剂或抑组织滴虫剂组合物的制备中的用途。

本发明的又一方面涉及动物饲料组合物(如适用于单胃或非反刍动物)，其包含如上文定义的多肽，所述多肽作为抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂存在。根据本发明的多肽优选地以具有抑球虫剂活性或有效对抗球虫的量存在。

术语动物包括所有动物。除家禽外其它动物的例子是反刍动物，包括例如绵羊、山羊和牛(cattle)，例如牛(cow)如肉牛和奶牛。在一个具体的实施方案中，动物是非反刍动物。非反刍动物包括宠物动物例如猫或犬，和单胃动物例如除家禽以外的猪(pig)或猪(swine)(包括但不限于小猪、正在生长的猪和大母猪(sow))；鱼(包括但不限于鲑鱼、鳟鱼、罗非鱼、鲶鱼和鲤鱼)；和甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。

本发明的又一方面涉及预混物或添加剂组合物，如要被添加进一种或多种可食用的饲料物质或成分中，例如用于制备或补充现存的饲料，形成饲料组合物。

根据本发明，多肽可作为经分离的纯多肽或在多肽的混合物中使用。

如本文所定义的，“经分离的”或“纯”多肽是基本不含其它多肽的多肽，例如至少80％纯，优选地至少85％、86％、87％、88％、89％或至少90％纯，更优选地至少91％、92％、93％、94％、95％或至少96％纯，如通过SDS-PAGE所测定的(例如通过考马斯-染色并随后通过本领域已知的方法扫描)。也可通过HPLC，优选地通过RP-HPLC测定纯度(例如使用Waters μ-Bondapak C18柱，流动相A：0.1％TFA，流动相B：乙腈+0.1％TFA，在280nm下检测)。SDS-PAGE纯度以及HPLC纯度是指相对于总蛋白质量的本发明的多肽量。在可选的实施方案中，多肽可以是至少20％、40％、60％或至少70％纯的。

可通过本领域已知的任何方法如Kjeldahl方法(A.O.A.C.，1984，OfficialMethods of Analysis 14th ed.，Association of Official Analytical Chemists，Washington DC)来测定总蛋白质的量，并且可通过本领域也已知的SDS-PAGE和随后的扫描测定本发明的多肽量。

由本发明的核酸序列编码的多肽也包括融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一多肽与多肽或其片段的N-端或C-端融合。融合多肽通过将编码另一多肽的核酸序列(或其部分)与本发明的核酸序列(或其部分)融合产生。生产融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列，使得它们按照读码框融合，并且融合多肽的表达处于相同启动子和终止子的控制下。

在一个特定的实施方案中，多肽是低变应原性变体，其被设计为暴露于动物(包括人)时引起降低的免疫应答。术语免疫应答应当被理解为暴露于多肽的动物免疫系统的任何反应。一种免疫应答是变应性应答，其导致暴露的动物中提高的IgE水平。可使用本领域已知的技术制备低变应原性变体。例如可将多肽与多聚体部件缀合，所述多聚体部件掩蔽涉及免疫应答的多肽部分或表位。与多聚体的缀合可涉及多聚体与多肽的体外化学偶联，例如WO 96/17929、WO98/30682、WO98/35026和/或WO99/00489中所述。缀合可另外或可选地涉及多聚体与多肽的体内偶联。这类缀合可通过编码多肽的核苷酸序列的基因工程完成。提供低变应原性变体的另一种方式是编码多肽的核苷酸序列的基因工程，从而引起多肽自身寡聚体化，结果是多肽单体可遮蔽其它多肽单体的表位，从而降低寡聚体的抗原性。这类产物及其制备描述于例如WO 96/16177中。免疫应答中涉及的表位可通过多种方法鉴定，如WO 00/26230和WO 01/83559中所述的噬菌体展示方法，或EP 561907中所述的随机方法。一旦鉴定了表位，可通过已知的基因操作技术如位点定向诱变(见例如WO 00/26230、WO 00/26354和/或WO 00/22103)改变其氨基酸序列，以产生多肽改变的免疫学特性，或可在足够接近表位处进行多聚体的缀合，使得多聚体遮蔽表位。

在又一方面中，本发明涉及Bacillus菌株在动物饲料中的用途，所述菌株的DNA被收获和用作PCR反应中的模板时，导致产生约0.4kb大小的PCR片段，所述PCR反应使用SEQ ID NOs：6和7作为引物。该测试用于鉴定具有L12-样基因的菌株，见本文的实施例1。这些Bacillus菌株也可用于制备在动物饲料中用作抑球虫剂的组合物。

在第一个具体的实施方案中，Bacillus菌株是益生菌微生物。术语“益生菌”通常表示喂养给动物(包括鸟)的非致病性细菌，作为防止致病微生物(例如protazoa)建群的一种途径。益生菌也可以被定义为活的，或可存活的微生物，其有益地影响健康和有正常机能的人和动物的肠内平衡。

在第二个具体的实施方案中，Bacillus菌株以孢子形式被使用。孢子可以是外生孢子或优选地为内生孢子。内生孢子是在生物(通常为细菌)内产生的任何孢子。内生孢子可在环境胁迫周期间存活，并因此能够存活着通过上部胃肠道的苛刻(酸性)环境，同时仅在达到肠道时显示其作用，在所述肠中会形成正常的营养细胞。

在又一个具体的实施方案中，Bacillus菌株是Bacillus licheniformis的菌株，其优选地选自以下Bacillus licheniformis菌株：ATCC 14580(＝NCIB9375)、NCIMB 6346(＝DSM 8785)、NCTC 1024、NCTC 1025、NCTC2120、NCTC 7589、NCTC 9932、ATCC 21424、NCIMB 10689和ATCC53757。一个优选的亚组包括Bacillus licheniformis ATCC 14580(＝NCIB9375)和Bacillus licheniformis NCIMB 6346(＝DSM 8785)。

实施例1的测试是PCR反应，在该实施例中用分离自Bacilluslicheniformis多种菌株的DNA进行。在该测试的一个具体的实施方案中，作为PCR反应模板使用的DNA是可通过本领域已知的方法分离的染色体DNA。获得正确大小的PCR片段时，实施例1测试的结果是阳性的。在实施例1中，正确的大小被指定为0.4kb。在一个具体的实施方案中，正确的大小在0.35kb和0.44kb之间(＝350bp-440bp)。在可选的实施方案中，正确的大小是330-430bp、340-420bp、350-410bp、360-400bp、370-390bp或385-395bp。SEQ ID NO.1的编码序列(CDS)的大小约为380bp(即378bp)。

WO-A-2006/099871中描述了编码上文定义的多肽的经分离的核酸序列、核酸构建体、载体和下述宿主细胞以及上文中举例的益生菌菌株，所述宿主细胞包含用于表达和生产上文定义的经分离的多肽的核酸序列。该公开的内容，尤其是根据本发明的多肽和菌株的变体及其生产通过参考并入本文。

多肽组合物可根据本领域已知的方法制备，并且可以是液体或干燥组合物的形式。例如，多肽组合物可以是颗粒或微型颗粒的形式。组合物中要包含的多肽可根据本领域已知的方法被稳定化。

本发明组合物的具体例子如下：

-包含(a)本发明的多肽；和(b)至少一种脂溶性维生素，(c)至少一种水溶性维生素，(d)至少一种微量矿物质，和/或(e)至少一种大量矿物质的动物饲料添加剂；

-动物饲料组合物，其具有50到800g/kg粗蛋白质含量并包含本发明的多肽；

-包含(a)题为“细菌菌株；益生菌Bacillus菌株”章节中定义的Bacillus菌株；和(b)至少一种脂溶性维生素，(c)至少一种水溶性维生素，(d)至少一种微量矿物质，和/或(e)至少一种大量矿物质；和

-动物饲料组合物，其具有50到800g/kg的粗蛋白质含量并包含题为“细菌菌株；益生菌Bacillus菌株”章节中定义的Bacillus菌株。

所谓的预混物是本发明的动物饲料添加剂的例子。预混物优选地表示一种或多种微量成分与稀释剂和/或运载体的均一混合物。预混物被用于促进微量成分在更大混合物中的均一分布。

术语饲料或饲料组合物表示适合或旨在被动物摄入的任何化合物、制剂、混合物或组合物。

在根据本发明的用途中，多肽和/或Bacillus菌株可在膳食之前、之后或同时喂养给动物。后者是优选的。

在一个具体的实施方案中，多肽在被添加进饲料的形式中或包含在饲料添加剂中时，是充分确定的。术语“充分确定的”表示多肽制剂至少50％纯。在另一个具体的实施方案中，充分确定的多肽制剂至少为60、70、80、85、88、90、92、94或至少95％纯。

充分确定的多肽制剂是有利的。例如，向饲料中以正确剂量添加(dosecorrectly)下述多肽容易得多，所述多肽基本不含干扰性或污染性的其它多肽。术语“以正确剂量添加”尤其表示获得一致和恒定结果的目的，和根据期望的效果优化剂量的能力。

然而，对在动物饲料中使用而言，多肽不需要这么纯；其可例如包含其它多肽如动物饲料酶，在这种情况下其也可以被称作多肽制剂。

多肽制剂可被(a)直接添加至饲料(或在蛋白质的处理过程中直接使用)，或(b)其可被用于一种或多种随后被添加进饲料的中间体组合物的生产中(或被用于处理过程中)，所述中间体组合物如饲料添加剂或预混物。上述纯净程度表示原始多肽制剂的纯度，无论是根据上文(a)还是(b)。使用。

具有这种数量级纯度的多肽制剂尤其可使用重组生产方法获得，但是通过传统发酵方法生产多肽时，它们不是如此容易获得并且也经受了高级得多的批次批次之间的变化。

多肽可以以任何形式被添加至饲料，其为相对纯的多肽，或是与旨在添加进动物饲料的其它成分的混合物，即为动物饲料添加剂的形式，如所谓的动物饲料预混物。

除本发明的多肽和/或Bacillus菌株外，本发明的动物饲料添加剂含有至少一种脂溶性维生素，和/或至少一种水溶性维生素，和/或至少一种微量矿物质，和/或至少一种大量矿物质。

另外，任选的饲料添加剂成分为着色剂，例如类胡萝卜素如β-胡萝卜素、虾青素和叶黄素；芳香化合物；稳定剂；抗微生物肽；其它抑球虫剂；产活性氧的物类；和/或至少一种选自以下的酶：植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26)；木聚糖酶(EC 3.2.1.8)；半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89)；α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)；蛋白酶(EC 3.4.，磷脂酶A1(EC 3.1.1.32)；磷脂酶A2(EC 3.1.1.4)；溶血磷脂酶(EC 3.1.1.5)；磷脂酶C(EC 3.1.4.3)；磷脂酶D(EC 3.1.4.4)；淀粉酶例如α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)；和/或β-葡聚糖酶(EC3.2.1.4或EC 3.2.1.6)。

抗微生物肽(AMP)的例子为CAP18、Leucocin A、Tritrpticin、Protegrin-1、Thanatin、Defensin、Lactoferrin、Lactoferricin和Ovispirin如Novispirin(Robert Lehrer，2000)、Plectasins和抑制素(Statins)，包括WO03/044049和WO 03/048148中公开的化合物和多肽，以及以上的保留抗微生物活性的变体或片段。

抗真菌多肽(AFP)的例子是Aspergillus giganteus和Aspergillus niger肽，及其保留抗真菌活性的变体和片段，如WO 94/01459和WO02/090384中所公开的。

也可使用的其它抑球虫剂的例子为离子载体，如拉沙洛西、莫能菌素(monensin)、盐霉素(salinomycin)、马杜霉素(maduramycin)、semduramycin和化学试剂如amproliurn、硝卡巴嗪(nicarbazin)地克珠利(diclazuril)。

如WO-A-2003/009700中所公开的，已发现多不饱和脂肪酸同样具有抑球虫剂的活性。因此，在本发明的一个具体的优选的实施方案中，其它饲料添加剂成分为多不饱和脂肪酸(PUFA)。

(动物饲料)组合物可包含每kg饲料从0.001、0.01g或1g到多达0.01或100g的PUFA，优选地从0.0001到100g/kg。用量可低至每kg饲料从0.0001到多达0.1g PUFA，例如每kg饲料从0.0025(或0.05或0.08)到0.001(或0.01g)PUFA。典型地，组合物会包含每kg饲料从0.002到0.01g PUFA，优选地每kg饲料从0.0004g到0.08g PUFA。

上述用量是指PUFA的重量，因此如果以油(例如具有30到40％的PUFA)的形式添加PUFA，则可相应地计算存在(或添加)的油量，例如通过将PUFA量乘以100/x来计算，其中X表示油中PUFA的百分比。因此，例如具有30(或35)％到40(或45或50)％PUFA含量时，可添加的油量可成比例地变化，如每kg饲料从0.00033或0.00025g到至多330或250g油。

PUFA可以是单一的PUFA或两种或更多不同的PUFA。每种PUFA可以是n-3或n-6家族的。优选地，气味C18、C20或C22PUFA。其可具有至少18个碳原子和3个双键。PUFA可以以游离脂肪酸形式、盐形式、作为脂肪酸酯(例如甲酯或乙酯)、作为磷脂和/或甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯的形式提供。

合适的(n-3和n-6)PUFA包括：

-二十二碳六烯酸(DHA，22：6Q3)，适当地来自藻类或真菌，如(沟鞭藻类)Crypthecodinium或(真菌)Thraustochytrium；

-y-亚麻酸(GLA，18：Ω6)；

-a-亚麻酸(ALA，18：Ω3)；

-共轭的亚麻酸(十八碳二烯酸，CLA)；

-二高-y-亚麻酸(DGLA，20：Ω6)；

-花生四烯酸(ARA，20：Ω6)；和

-二十碳五烯酸(EPA，20：5Ω3)。

优选的PUFA包括花生四烯酸(ARA)、二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)和/或y-亚麻酸(GLA)。尤其优选ARA。

PUFA可来自天然(例如植物或海产)来源，或可来自单细胞或微生物来源。PUFA尤其可由细菌、藻类、真菌或酵母生产。优选真菌，优选地为Mucorales目，例如Mortierella、Phycomyces、Blakeslea、Aspergillus、Thraustochytrium、Pythium或Entomophthora。优选的ARA来源是来自Mortierella alpina、Blakeslea trispora、Aspergillus terreus或Pythium insidiosum。藻类可以是沟鞭藻类和/或包括Porphyridium、Nitszchia或Crypthecodinium(例如Crypthecodinium cohnii)。酵母包括Pichia或Saccharomyces的属，如Pichia ciferii。细菌可以是Propionibacterium的属。

PUFA可作为(例如可食用的)油存在于或被添加进组合物中。油可以(在室温下)是液体的。油可以是微生物(例如单细胞)油、海产(例如金枪鱼)油或植物油。包含ARA的合适油可在商品名VEVODAR下得自DSM N.V.，Alexander Fleminglaan 1或Wateringseweg 1，P.O.Box1，2600MA Delft，荷兰。另一种可商业获得的(ARA)油是来自MartekCorporation，6480Dobbin Road，Columbia，MD 21045，美国的ARASCO。其它PUFA是可获得的，例如作为DHA油获得DHA(在商标PAX下来自Martek Corporation or DHA from Pronova，挪威的DHASCO)。

大量文件描述了粗PUFA油的生产。WO-A-92/13086(Martek)中公开了含ARA的微生物油，WO-A-91/14427(Martek)中公开了含EPA的微生物油，WO-A-91/11918(Martek)中公开了含DHA的微生物油。从微生物来源提取PUFA油的多种方法可见于WO-A-97/36996和WO-A-97/37032(均属于Gist-brocades)。含ARA、DHA和EPA的油也描述于WO-A-92/12711(Martek)中。

优选地，大部分PUFA是甘油三酯的形式。因此，优选地，至少50％，如至少60％，或任选地至少70％的PUFA是甘油三酯形式。然而，甘油三酯的量可更高，如为油的至少85％，优选地至少90％，任选地至少95％或98％。

优选地，添加剂或预混物包含的PUFA(或其它组分，如酶)是饲料的10到1,000倍，如25或50到750倍，优选地为75或100到250或500倍。这是因为制造动物饲料时，预混物可被“稀释”10到1,000倍(从而预混物组成最终饲料的10％到0.1％)。因此，可使用任何这些数字乘以下一章节中公开的PUFA量的(最大和/或最小)值，从而获得预混物中PUFA的浓度。然而，浓度的宽阔范围可以是1到100g/kg。预混物可以是颗粒或团粒的形式。

产活性氧物类的例子是化学品如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐；和酶如氧化酶、加氧酶或合成酶。

通常脂溶和水溶的维生素以及微量矿物质形成旨在被添加进饲料中的所谓的预混物部分，而大量矿物质通常被独立地添加进饲料中。这些组合物种类任一富含本发明的多肽或Bacillus菌株时，是本发明的动物饲料添加剂。

以下是这些组分的非排他性列表：

-脂溶性维生素的例子是维生素A、维生素D3、维生素E和维生素K，例如维生素K3。

-水溶性维生素的例子是维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸，例如D-泛酸钙。

-微量矿物质的例子为镁、锌、铁、铜、碘、硒和钴。

-大量矿物质的例子是钙、磷和钠。

这些组分的营养需要量(nutritional requirement)(以家禽和小猪/猪为例)列于WO 01/58275的表A中。营养需要量表示这些组分应当以指定的浓度在膳食中提供。

动物饲料组合物或膳食具有相对高的蛋白质含量。价钱和猪膳食的特征可如WO 01/58275的表B中第2-3列所示。鱼膳食特征可如该表B的第4列中所示。另外，这些鱼膳食通常具有200-310g/kg的粗脂肪含量。

WO 01/58275对应于US 09/779334，其通过引用并入本文。

根据本发明的动物饲料组合物具有50-800g/kg的粗蛋白质含量，并另外包含至少一种多肽和/或至少一种如本文所述和/或要求保护的Bacillus菌株。

在一个具体的实施方案中，本发明的动物饲料组合物含有至少一种植物蛋白或蛋白质来源。其也可含有动物蛋白，如肉和骨粉，和/或鱼粉，典型地以0-25％的量含有。本文使用术语植物蛋白是指包含至少一种下述蛋白质的任何复合物、组合物、制剂或混合物，所述蛋白质衍生自植物或来源于植物，包括经修饰的蛋白质和蛋白质衍生物。在具体的实施方案中，植物蛋白的蛋白质含量至少为10％、20％、30％、40％、50％或60％(w/w)。

植物蛋白可衍生自植物蛋白质来源，如豆类和谷物，例如来自Fabaceae(Leguminosae)、Cruciferaceae、Chenopodiaceae和Poaceae科的植物，如大豆粉、羽扇豆粉和油菜籽粉。在一个具体的实施方案中，植物蛋白质来源是来自一种或多种Fabaceae科植物例如大豆、羽扇豆、豌豆或黄豆的材料。在另一具体的实施方案中，植物蛋白质来源是来自一种或多种Chenopodiaceae科植物例如甜菜(beet)、甜菜(sugar beet)、菠菜或藜谷(quinoa)的材料。

动物膳食可例如被制成醪液饲料(mash feed)(未制成团粒)或团粒饲料。通常，混合研磨过的饲料原料，并根据正在讨论的物种的技术指标添加足量的必需维生素和矿物质。多肽和/或Bacillus菌株可作为固体或液体配制物被添加。例如，固体多肽配制物典型地在混合步骤之前或期间添加；液体多肽制剂典型地在制粒步骤之后添加。多肽也可被掺入饲料添加剂或预混物中。

膳食中的最终多肽浓度在每kg膳食0.01-200mg蛋白质的范围内，例如在每kg动物膳食0.1-20mg蛋白质的范围内。

多肽和/或Bacillus菌株当然应当以有效量使用，即以足够促进饲料转化的量使用。

目前预期以一种或多种以下用量(剂量范围)施用多肽：0.01-200；0.01-100；0.5-100；1-50；5-100；10-100；0.05-50；1-10或0.10-10，这些范围的单位均为每kg饲料mg多肽蛋白质(ppm)。在一个具体的实施方案中，剂量范围为1-9、1-8、2-7、2-6或2-5ppm。尤其优选的剂量范围的例子是0.5-15.0、1.0-12.5、1.5-10.0和2.5-7.5ppm。

目前预期以一种或多种以下用量(剂量范围)施用Bacillus菌株：10E2-14、10E4-12、10E6-10、10E7-9，优选地10E8CFU/g的饲料(名称E表示指数，即例如10E2-14表示10²-10¹⁴)。

为了测定每kg饲料的mg多肽蛋白质，从饲料组合物中纯化多肽，并计算以每kg饲料mg多肽蛋白质为单位的剂量，例如如WO-A-2006/099871的实施例10中所述。相同的原则适用于测定饲料添加剂中的mg多肽蛋白质。

本文描述和要求保护的本发明在范围上不受本文公开的特定实施方案的限制，因为这些实施方案旨在阐述本发明的若干方面。任何等同的实施方案旨在属于本发明的范围内。事实上，除本文显示和描述的这些外，本领域技术人员从前文的描述中会明白发明的多种变更。这些变更也旨在落入附带的权利要求书的范围内。在冲突的情况下，以包含定义的本公开为准。

实施例1：如通过PCR所鉴定的，具有L12-样基因的Bacillus菌株

通过PCR，在大量其它Bacillus licheniformis菌株中鉴定了与编码L12蛋白质(SEQ ID NO：1)的基因相似的基因。从十一种不同的Bacilluslicheniformis菌株中分离出了用作PCR反应模板的DNA，所述菌株在TY琼脂平板上于37℃下过夜生长。将含有来自各个菌株的细胞的一个培养管悬浮于0.1ml H₂O中并煮沸10分钟，离心，并且在如下文所述的PCR反应中使用来自每管的5微升上清液作为DNA模板。

在来自Amersham Biosciences的″Pure TaqTM Ready-To_GoTM PCRBeads″中进行PCR反应：5微升DNA模板+2×1微升引物Pep481(SEQID NO：6)和Pep482(SEQ ID NO：7)+18微升H₂O。

PCR程序：1)95℃3分钟；2)95℃10秒；3)65℃30秒，每循环-1℃；4)72℃1分钟；5)回到2)9次；6)95℃10秒；7)55℃30秒；8)72℃1分钟；9)回到6)19次；10)72℃5分钟；11)4℃保持，这表示步骤10)以后温度被降低至4℃。

引物：

Pep481AATTACGCGTGTTGGTGCGATAGTAGTAACG-3’(SEQ ID NO：6)

Pep482TTAAGAATTCGAATGAAAGAGGAGGAATG-3’(SEQ ID NO：7)

将得到的来自五个不同阳性菌株(阳性表示给出大小正确的DNA条带)的0.4kb PCR片段纯化，并用在DNA测序实验中，所述实验再次使用Pep481(SEQ ID NO：6)和Pep482(SEQ ID NO：7)引物作为测序引物。

五个阳性菌株中的三个给出了相同的DNA序列：Bacilluslicheniformis ATCC 14580、Bacillus licheniformis NCIMB 6346(＝DSM 8785)和Bacillus licheniformis菌株712，得到SEQ ID NO：2的氨基酸序列。在Bacillus licheniformis菌株470中，DNA改变导致两个氨基酸改变(SEQ IDNO：9)，但是成熟的肽中没有改变。在Bacillus licheniformis菌株009中，DNA改变导致十五个氨基酸改变(SEQ ID NO：8)，其中八个在成熟的肽中。另外，从SEQ ID NOs：2、8和9衍生了共有序列(SEQ ID NO：10)。

注意：在该实验中，编码SEQ ID NO：2的七个C-端氨基酸的核苷酸包括在Pep481引物(SEQ ID NO：6)中，因此SEQ ID NOs：8-9的七个C-端氨基酸残基可能不正确。然而，稍后确认了SEQ ID NOs：8-9的正确性。

从命名为BioPlus^TM2B(由Chr.Hansen A/S，10-12Boege AHe，DK-2970Hoersholm，丹麦提供)的饲料益生菌制品分离的Bacilluslicheniformis菌株包括在经测试但为阴性的十一个菌株中。

另外，如上所述测试Bacillus licheniformis的44个其它菌株。在27个这些菌株中发现阳性的PCR-应答。被发现为L12-阳性的其它公众可获得的Bacillus licheniformis菌株的例子具有以下的保藏号：NCTC 1024、NCTC 1025、NCTC 2120、NCTC 7589、NCTC 9932、ATCC 21424、NCIMB 10689、ATCC 53757。NCTC是典型培养物国家保藏中心(theNational Collection of Type Cultures)。ATCC是美国典型培养物保藏中心(the American Type Culture Collection)。NCIMB是工业、海产和食物细菌国家保藏中心(the National Collection of Industrial，Marine and FoodBacteria)。

实施例2：动物饲料和添加剂

动物饲料添加剂

通过向以下的预混物(每kg预混物)添加25g被包裹的T-颗粒制备动物饲料添加剂，所述T-颗粒以20g/kg的量包含经纯化的L12(如EP569468B1的实施例3所述制备，然而具有约7％的氢化棕榈油和约13％的CaCO₃)：

1100000IE	维生素A
		300000IE	维生素D3
4000IE	维生素E
		250mg	维生素B1
800mg	维生素B2
		1200mg	D-泛酸钙
500mg	维生素B6
		2.5mg	维生素B12
5000mg	烟酸

10000mg	维生素C
		300mg	维生素K3
15mg	生物素
		150mg	叶酸
50004mg	胆碱氯化物
		6000mg	Fe
3000mg	Cu
		5400mg	Zn
8000mg	Mn
		124mg	I
60mg	Co
		29.7mg	Se
9000mg	拉沙洛西钠(Lasalocid Sodium)(Avatec)
		17.3％	Ca
0.8％	Mg
		11.7％	Na

动物饲料

通过将成分混合制备具有以下组成(％，w/w)的肉鸡培养者(broilergrower)膳食。小麦、黑麦和SBM 48可得自Moulin Moderne Hirsinque，Hirsingue，法国。混合后，将饲料在期望的温度例如约70℃下制成小球(3×25mm)。

小麦	46.00
		黑麦	15.00
大豆粉(SMB 48)	30.73
		大豆油	4.90
DL-甲硫氨酸	0.04
		DCP(磷酸二钙)	1.65
石灰石	0.43
		盐	0.15

TiO2	0.10
		动物饲料添加剂(上文)	1.00

得到的动物饲料每千克包含5.0mg经纯化的L12蛋白质(5ppm)。

以相同的方式制备另外的动物饲料和饲料添加剂组合物，但是用1013菌落形成单位(CFU)的Bacillus licheniformis ATCC 14580(优选地为内生孢子形式)代替每kg预混物25g经包裹的L12CT颗粒，这得到每克饲料组合物含约108CFU的动物饲料。

序列表

<110>帝斯曼知识产权资产管理有限公司

<120>多肽

<130>25856

<160>10

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>381

<212>DNA

<213>Bacillus licheniformis ATCC 14580

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(378)

<220>

<221>mat_peptide

<222>(124)..(378)

<400>1

atg aaa aat cat ttg tat gag aaa aaa aag agg aaa cct ttg act cgg     48

Met Lys Asn His Leu Tyr Glu Lys Lys Lys Arg Lys Pro Leu Thr Arg

    -40                 -35                 -30

aca att aaa gcg acg ctc gcc gtg ttg aca atg tcc atc gct ttg gtg     96

Thr Ile Lys Ala Thr Leu Ala Val Leu Thr Met Ser Ile Ala Leu Val

-25                 -20                 -15                 -10

gga ggc gct acg gtg cct tca ttt gca tgg gtg aat ccg ggt tat cac    141

Gly Gly Ala Thr Val Pro Ser Phe Ala Trp Val Asn Pro Gly Tyr His

                -5              -1  1               5

tac cag tac cca tcg gaa ggt ggt aca tgg agg tat gga ttc gta aac    192

Tyr Gln Tyr Pro Ser Glu Gly Gly Thr Trp Arg Tyr Gly Phe Val Asn

        10                  15                  20

gcc ggg ctc cgt tca gag tac aac cac ccg aca aag gtc cac ggc tcg    240

Ala Gly Leu Arg Ser Glu Tyr Asn His Pro Thr Lys Val His Gly Ser

    25                  30                  35

aca gtg caa aag ctc atc gat gga aaa gtg gat aaa acg aat aga agt    288

Thr Val Gln Lys Leu Ile Asp Gly Lys Val Asp Lys Thr Asn Arg Ser

40                  45                  50                  55

att gat acg gct gcg ggc cgc tac tct aat gcc tat gtc gga gcc ata    336

Ile Asp Thr Ala Ala Gly Arg Tyr Ser Asn Ala Tyr Val Gly Ala Ile

                60                  65                  70

aac tca cct ggt ctt aag ggt cgt tac tac tat cgc acc aac taa        381

Asn Ser Pro Gly Leu Lys Gly Arg Tyr Tyr Tyr Arg Thr Asn

          75                  80                  85

<210>2

<211>126

<212>PRT

<213>Bacillus licheniformis ATCC 14580

<400>2

Met Lys Asn His Leu Tyr Glu Lys Lys Lys Arg Lys Pro Leu Thr Arg

    -40                 -35                 -30

Thr Ile Lys Ala Thr Leu Ala Val Leu Thr Met Ser Ile Ala Leu Val

-25                 -20                 -15                 -10

Gly Gly Ala Thr Val Pro Ser Phe Ala Trp Val Asn Pro Gly Tyr His

                -5              -1  1               5

Tyr Gln Tyr Pro Ser Glu Gly Gly Thr Trp Arg Tyr Gly Phe Val Asn

        10                  15                  20

Ala Gly Leu Arg Ser Glu Tyr Asn His Pro Thr Lys Val His Gly Ser

    25                  30                  35

Thr Val Gln Lys Leu Ile Asp Gly Lys Val Asp Lys Thr Asn Arg Ser

40                  45                  50                  55

Ile Asp Thr Ala Ala Gly Arg Tyr Ser Asn Ala Tyr Val Gly Ala Ile

                60                  65                  70

Asn Ser Pro Gly Leu Lys Gly Arg Tyr Tyr Tyr Arg Thr Asn

            75                  80                  85

<210>3

<211>1581

<212>DNA

<213>Bacillus licheniformis

<220>

<221>CDS

<222>(601)..(978)

<400>3

gaattttccg gaagctgaaa cacccgtgat atatataacc ataaattaaa cagcataggc     60

ggattgtgcg agttcctcca cattcggagt atttctgaat gatagagcca cacggtccac    120

gttctcactg gctaaccgga tcaaatgatc ttcaggagtc agcataatac atccagttca    180

ggtagataag atttgaattt ggtgacttgc ttttgttctt cttctttcat tttctgacta    240

atccaaactg gaaaaagcag gtcttttaac agattaggag gtttctgaca tgcaccattc    300

ggtcactaac cgaatgcagt aaaggacact gtggtgcttg ccagccatta gggtattgag    360

gaggtgatca aaatgctagg tgacagtatt tcgtcgaagt ggacaagtcg tgaccaaatg    420

acctcggatc gagggttggt catggaggaa aaaattgatg tctggtgaca aagaggagtc    480

atgatcatgg caccgccaac gagggaaaaa actcttcccg catcgacacg gtatgtgggc    540

ggtgacaaac taacttatag agtaaattta ttagtcgaat gaaagaggag gaatgaaata    600

atg aaa aat cat ttg tat gag aaa aaa aag agg aaa cct ttg act cgg      648

Met Lys Asn His Leu Tyr Glu Lys Lys Lys Arg Lys Pro Leu Thr Arg

1               5                   10                  15

aca att aaa gcg acg ctc gcc gtg ttg aca atg tcc atc gct ttg gtg      696

Thr Ile Lys Ala Thr Leu Ala Val Leu Thr Met Ser Ile Ala Leu Val

            20                  25                  30

gga ggc gct acg gtg cct tca ttt gca tgg gtg aat ccg ggt tat cac      744

Gly Gly Ala Thr Val Pro Ser Phe Ala Trp Val Asn Pro Gly Tyr His

        35                  40                  45

tac cag tac cca tcg gaa ggt ggt aca tgg agg tat gga ttc gta aac      792

Tyr Gln Tyr Pro Ser Glu Gly Gly Thr Trp Arg Tyr Gly Phe Val Asn

    50                  55                  60

gcc ggg ctc cgt tca gag tac aac cac ccg aca aag gtc cac ggc tcg      840

Ala Gly Leu Arg Ser Glu Tyr Asn His Pro Thr Lys Val His Gly Ser

65                  70                  75                  80

aca gtg caa aag ctc atc gat gga aaa gtg gat aaa acg aat aga agt      888

Thr Val Gln Lys Leu Ile Asp Gly Lys Val Asp Lys Thr Asn Arg Ser

                85                  90                  95

att gat acg gct gcg ggc cgc tac tct aat gcc tat gtc gga gcc ata      936

Ile Asp Thr Ala Ala Gly Arg Tyr Ser Asn Ala Tyr Val Gly Ala Ile

            100                 105                 110

aac tca cct ggt ctt aag ggt cgt tac tac tat cgc acc aac              978

Asn Ser Pro Gly Leu Lys Gly Arg Tyr Tyr Tyr Arg Thr Asn

        115                  120                  125

taatcaaagg gaaaacggtt gctgtcaacg gggctagcat ggcaagaccc agaaaagttc    1038

tgggagatcc cgctttgcat aagcgtatta tagtggatga cgcgggcttt gttgtttaca    1098

cttcttgcac ctgctgacgg caatcatccc tatctatgaa atcgagattt cagcaggccg    1158

ttattttcga gagagttaaa tctatattca ttgtttttat tttggtaagg acataccgga    1218

ttttaggttt ggattaccgg tcgagttagc ttgtcttttc gcccactacc gtgtcgatgc    1278

gggagcaatt taccagaagc acttaccgat tgatagtttt ttattccggt gattgcaaag    1338

tttcataaac tctgagaatt caataggggt aataccccgc tttgaggggc gcggcatttt    1398

atgcgccccg agtatttatt cttaaaattt ttaaattaat gtatctatat aaaaaggaga    1458

tgctttcggt gtactgccaa agcatctcca caaaagatag tgcatatctg caggaaaaaa    1518

cataaaatgc aactaacatt tttttggaaa gcaataggtt tatttaattt tgtagtttta    1578

tct                                                                  1581

<210>4

<211>126

<212>PRT

<213>Bacillus licheniformis

<400>4

Met Lys Asn His Leu Tyr Glu Lys Lys Lys Arg Lys Pro Leu Thr Arg

1               5                   10                  15

Thr Ile Lys Ala Thr Leu Ala Val Leu Thr Met Ser Ile Ala Leu Val

            20                  25                  30

Gly Gly Ala Thr Val Pro Ser Phe Ala Trp Val Asn Pro Gly Tyr His

        35                  40                  45

Tyr Gln Tyr Pro Ser Glu Gly Gly Thr Trp Arg Tyr Gly Phe Val Asn

    50                  55                  60

Ala Gly Leu Arg Ser Glu Tyr Asn His Pro Thr Lys Val His Gly Ser

65                  70                  75                  80

Thr Val Gln Lys Leu Ile Asp Gly Lys Val Asp Lys Thr Asn Arg Ser

                85                  90                  95

Ile Asp Thr Ala Ala Gly Arg Tyr Ser Asn Ala Tyr Val Gly Ala Ile

            100                 105                 110

Asn Ser Pro Gly Leu Lys Gly Arg Tyr Tyr Tyr Arg Thr Asn

        115                 120                 125

<210>5

<211>15

<212>PRT

<213>Bacillus licheniformis ATCC 14580

<220>

<221>MISC_FEATURE

<223>N-末端

<400>5

Trp Val Asn Pro Gly Tyr His Tyr Gln Tyr Pro Ser Glu Gly Gly

1               5                   10                  15

<210>6

<211>31

<212>DNA

<213>人工

<220>

<221>

<222>引物Pep 481

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>6

aattacgcgt gttggtgcga tagtagtaac g                              31

<210>7

<211>29

<212>DNA

<213>人工

<220>

<221>

<222>引物Pep 482

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>7

ttaagaattc gaatgaaaga ggaggaatg                                29

<210>8

<211>125

<212>PRT

<213>Bacillus licheniformis菌株009

<220>

<221>mat_peptide

<223>(41)...(125)

<400>8

Met Lys Asn Leu Leu Asn Lys Lys Lys Arg Lys Pro Leu Thr Arg Thr

-40                 -35                 -30                 -25

Ile Lys Ala Thr Phe Ala Val Leu Thr Val Ser Ile Gly Leu Val Gly

                -20                 -15                 -10

Gly Ala Thr Val Pro Ala Phe Ala Trp Val Asn Pro Asp Tyr His Tyr

            -5               -1  1               5

Gln Tyr Pro Ser Glu Gly Gly Thr Trp Arg Tyr Gly Phe Val Asn Leu

     10                  15                  20

Gly Leu Arg Ser Glu Tyr Asn His Pro Lys Lys Val His Gly Ser Thr

 25                  30                  35                  40

Val Gln Lys Leu Ile Asp Gly Lys Val Glu Lys Thr Asn Arg Ser Leu

                 45                  50                  55

Asp Thr Ala Pro Gly Arg Tyr Ser Asn Ala Tyr Val Gly Val Val Asn

             60                  65                  70

Ser Pro Gly Leu Lys Gly Arg Tyr Tyr Tyr Arg Thr Asn

         75                  80                  85

<210>9

<211>126

<212>PRT

<213>Bacillus licheniformis菌株470

<220>

<221>mat_peptide

<223>(42)...(126)

<400>9

Met Lys Asn Thr Leu Tyr Glu Lys Lys Lys Arg Lys Pro Leu Thr Arg

    -40                 -35                 -30

The Ile Lys Ala Thr Leu Ala Val Leu Thr Met Ser Ile Ala Leu Val

-25                 -20                 -15                 -10

Gly Gly Ala Thr Val Pro Ala Phe Ala Trp Val Asn Pro Gly Tyr His

                -5              -1  1               5

Tyr Gln Tyr Pro Ser Glu Gly Gly Thr Trp Arg Tyr Gly Phe Val Asn

         10                  15                  20

Ala Gly Leu Arg Ser Glu Tyr Asn His Pro Thr Lys Val His Gly Ser

    25                  30                  35

Thr Val Gln Lys Leu Ile Asp Gly Lys Val Asp Lys Thr Asn Arg Ser

40                  45                  50                  55

Ile Asp Thr Ala Ala Gly Arg Tyr Ser Asn Ala Tyr Val Gly Ala Ile

                60                  65                  70

Asn Ser Pro Gly Leu Lys Gly Arg Tyr Tyr Tyr Arg Thr Asn

            75                  80                  85

<210>10

<211>126

<212>PRT

<213>人工

<220>

<221>mat_peptide

<222>42)...(126)

<223>共有序列

<400>10

Met Lys Asn Thr Leu Tyr Glu Lys Lys Lys Arg Lys Pro Leu Thr Arg

    -40                 -35                 -30

The Ile Lys Ala Thr Leu Ala Val Leu Thr Met Ser Ile Ala Leu Val

-25                 -20                 -15                 -10

Gly Gly Ala Thr Val Pro Ala Phe Ala Trp Val Asn Pro Gly Tyr His

                -5              -1  1               5

Tyr Gln Tyr Pro Ser Glu Gly Gly Thr Trp Arg Tyr Gly Phe Val Asn

            10                  15                  20

Ala Gly Leu Arg Ser Glu Tyr Asn His Pro Thr Lys Val His Gly Ser

        25                  30                  35

Thr Val Gln Lys Leu Ile Asp Gly Lys Val Asp Lys Thr Asn Arg Ser

40                  45                  50                  55

Ile Asp Thr Ala Ala Gly Arg Tyr Ser Asn Ala Tyr Val Gly Ala Ile

                60                  65                  70

Asn Ser Pro Gly Leu Lys Gly Arg Tyr Tyr Tyr Arg Thr Asn

            75                  80                  85

Claims (8)

1.经分离的多肽作为抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂制剂或用于制备它们的用途，所述多肽选自：

(a)包含下述氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的氨基酸1-85具有至少33％的同一性程度；

(b)由在严格条件下与：

(i)SEQ ID NO：1的核苷酸124-378，

(ii)至少100个核苷酸的(i)的亚序列，或

(iii)(i)或(ii)的互补链

杂交的核酸序列编码的多肽；

(c)具有SEQ ID NO：2的氨基酸1-85的氨基酸序列的多肽变体，其包含一个或多个氨基酸的取代、缺失、延伸和/或插入；

(d)(a)或(b)的等位变体；和

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的片段

组成的组。

2.下述Bacillus菌株在动物饲料中作为抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂的用途，所述菌株的DNA被收集并在使用SEQ ID NOs：6和7作为引物的PCR反应中用作DNA模板时导致产生尺寸约0.4kb的PCR片段。

3.根据权利要求1或2的抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂在动物饲料中的用途。

4.根据权利要求1到3中任一项的用途，其中经分离的多肽与至少一种多不饱和脂肪酸(PUFA)组合，所述多不饱和脂肪酸具有抑球虫剂活性和/或能有效对抗球虫。

5.根据权利要求1的多肽或根据权利要求2的菌株在制造下述动物饲料或饲料添加剂中的用途，所述动物饲料或饲料添加剂用于治疗或预防球虫病和/或组织滴虫病。

6.包含根据权利要求1的多肽或根据权利要求2的Bacillus菌株的动物饲料组合物、或添加剂或其预混组合物作为抑球虫剂和/或抑组织滴虫剂的用途。

7.根据权利要求6的组合物，其还包含至少一种多不饱和脂肪酸(PUFA)。

8.用于动物饲料组合物的添加剂或预混组合物，其包含根据权利要求1的多肽或根据权利要求2的Bacillus菌株作为抑球虫剂。