CN101595856A - 一种淡水轮虫通用培养液及其制法 - Google Patents

一种淡水轮虫通用培养液及其制法 Download PDF

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殷旭旺
赵文
刘钢
魏杰
王丽
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Abstract

本发明涉及生物培养液。一种淡水轮虫通用培养液，pH7.0－7.5的磷酸缓冲液中加入下述各原料：硝酸钾、七水合硫酸镁、六水合硝酸钙、磷酸氢二钾、维生素B12、维生素H。本发明以不同的配比加入到蒸馏水中配制成轮虫培养液，适合培养常见的淡水轮虫种类，该培养液稳定性高，制备简单，无毒无害，且适用的范围较广；为实验生态学研究的模式生物轮虫的室内培养提供了条件，同时也提高了室内淡水轮虫的培养质量，降低了轮虫培养的风险。

Description

一种淡水轮虫通用培养液及其制法
技术领域
本发明涉及生物培养液，特别是通用的室内淡水轮虫培养液。
背景技术
某些种类的淡水轮虫，如萼花臂尾轮虫(Brachionus calyciflorus)，是国际公认的模式生物，可为室内的种群生态学、分子生物学和生态毒理学研究提供基本的实验材料。由于轮虫是活体受试生物，因而需要在实验室内进行长期的培养，以便得到足够数量的鲜活个体进行实验。淡水轮虫室内培养的关键技术就是轮虫的培养液。目前，大多数的实验室都是用曝气的自来水或过滤的野外池塘水来培养轮虫。但是，以上两种轮虫培养液都存在如下几方面的问题：(一)由于天然淡水缺乏缓冲体系，因而培养液的pH极其不稳定，经常出现大范围的波动；(二)天然淡水中的离子组成和比例常常失衡，某些离子种类偏多，如Ca2+，使得培养液的硬度、碱度或氯度偏高；(三)环境污染常导致天然淡水中含有浓度较高的毒性物质(生物毒素、重金属和有机物等)，而这些有毒物质难以通过曝气、过滤以及高温灭菌的方法予以清除；(四)由于环境条件背景值的差异，某一地区的天然淡水其应用具有局限性，无法适用于其他地区采集到的淡水轮虫，不具有通用性。
发明内容
本发明的目的是为了解决以上淡水轮虫培养液中存在的问题，提供一种淡水轮虫通用培养液，适合培养常见的淡水轮虫种类，该培养液稳定性高，无毒无害，且适用的范围较广，提高淡水轮虫的培养质量，降低轮虫培养的风险。
本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种淡水轮虫通用培养液，pH7.0-7.5的磷酸缓冲液中加入下述各原料：硝酸钾[KNO3]、七水合硫酸镁[MgSO4·7H2O]、六水合硝酸钙[Ca(NO3)2·6H2O]、磷酸氢二钾[K2HPO4]、维生素B12、维生素H。
所述pH 7.0-7.5的磷酸缓冲液中按下述重量加入各原料：硝酸钾6-10g/l、七水合硫酸镁3.7-6.2g/l、六水合硝酸钙8.6-11.6g/l、磷酸氢二钾2.4-4.0g/l、维生素B120.5μg/l、维生素H0.5μg/l。
所述培养液优选按下述配方配制而成：
pH 7.3的磷酸缓冲液
KNO3            8.0g/l
MgSO4·7H2O     4.96g/l
K2HPO4          3.2g/l
Ca(NO3)2·6H2O  11.52g/l
维生素H         0.5μg/l
维生素B12       0.5μg/l。
所述培养液优选按下述配方配制而成：
pH 7.3的磷酸缓冲液
KNO3         10.0g/l
MgSO4·7H2O  6.2g/l
K2HPO4       4.0g/l
Ca(NO3)2·6H2O 14.4g/l
维生素H        0.5μg/l
维生素B12      0.5μg/l
所述培养液优选按下述配方配制而成：
pH 7.3的磷酸缓冲液
KNO3              6.0g/l
MgSO4·7H2O       3.72g/l
K2HPO4            2.4g/l
Ca(NO3)2·6H2O    8.64g/l
维生素H           0.5μg/l
维生素B12         0.5μg/l。
所述培养液的制法：分别取NaH2PO4溶液和Na2HPO4溶液溶于蒸馏水中，配制成符合pH值的磷酸缓冲液；然后向磷酸缓冲液中依次加入KNO3溶液、MgSO4·7H2O溶液、K2HPO4溶液、Ca(NO3)2·6H2O溶液，并最终用蒸馏水定容，最后向定容溶液中分别加入维生素H和维生素B12，即配制成淡水轮虫通用培养液。
本发明淡水轮虫培养液适合培养常见的淡水轮虫种类，该培养液配方合理，溶液稳定性高，无毒无害，且适用的范围较广，提高淡水轮虫的培养质量，降低轮虫培养的风险，可为种群生态学、分子生物学和生态毒理学的模式生物--轮虫提供基本的室内培养环境。本发明培养液制法简单。经试验本发明所配置的轮虫培养液，实验轮虫种群的存活率和种群增长率均有显著提高，存活率最高可提高45％，种群增长率最高可提高0.9。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施例。
实施例1
按下述方法配制淡水轮虫通用培养液：首先分别取2.3ml 0.2mol/LNaH2PO4溶液和7.7ml 0.2mol/L Na2HPO4溶液溶于500ml的蒸馏水中，配制成pH值7.3的磷酸缓冲液；然后向该磷酸缓冲液中依次加入如下溶液各8.0ml：10.0g/l的KNO3溶液——6.2g/l的MgSO4·7H2O溶液——4.0g/l的K2HPO4溶液——14.4g/l的Ca(NO3)2·6H2O溶液，并最终用蒸馏水定容到1000ml，向该1000ml溶液中分别加入0.5μg的维生素H和维生素B12，即配制成淡水轮虫通用培养液。
试验结果如下：
1.使用本发明配置的轮虫培养液10天后，萼花臂尾轮虫的存活率和种群增长率如表1。
表1
  轮虫的存活率(％)   轮虫的种群增长率(个/天)
  曝气的自来水(对照组)   51   0.41
  过滤的池塘水(对照组)   69   0.63
  本发明轮虫培养液   96   1.31
2.使用本发明配置的轮虫培养液15天后，十指臂尾轮虫的存活率和种群增长率如表2。
表2
  轮虫的存活率(％)   轮虫的种群增长率(个/天)
  曝气的自来水(对照组)   61   0.21
  过滤的池塘水(对照组)   54   0.11
  本发明轮虫培养液   89   0.81
3.使用本发明配置的轮虫培养液8天后，角突臂尾轮虫的存活率和种群增长率如表3。
表3
  轮虫的存活率(％)   轮虫的种群增长率(个/天)
  曝气的自来水(对照组)   15   0.03
  过滤的池塘水(对照组)   30   0.09
  本发明轮虫培养液   57   0.41
通过以上应用实例可以看出，使用本发明所配置的轮虫培养液，实验轮虫种群的存活率和种群增长率均有显著提高，存活率最高可提高45％，种群增长率最高可提高0.9。
实施例2
按照实施例1所述方法制备淡水轮虫通用培养液，在NaH2PO4和Na2HPO4配制的pH 7.3的磷酸缓冲液中加入下述原料，终产品中各原料量如下：
KNO3            10.0g/l
MgSO4·7H2O     6.2g/l
K2HPO4          4.0g/l
Ca(NO3)2·6H2O  14.4g/l
维生素H         0.5μg/l
维生素B12     0.5μg/l。
实施例3
按照实施例1所述方法制备淡水轮虫通用培养液，在NaH2PO4和Na2HPO4配制的pH 7.3的磷酸缓冲液中加入下述原料，终产品中各原料量如下：
KNO3            6.0g/l
MgSO4·7H2O     3.72g/l
K2HPO4          2.4g/l
Ca(NO3)2·6H2O  8.64g/l
维生素H         0.5μg/l
维生素B12       0.5μg/l。
实施例4
按照实施例1所述的方法制备淡水轮虫通用培养液，在NaH2PO4和Na2HPO4配制的pH 7.0的磷酸缓冲液中加入实施例1所述用量的原料。
实施例5
按照实施例1所述的方法制备淡水轮虫通用培养液，在NaH2PO4和Na2HPO4配制的pH 7.0的磷酸缓冲液中加入实施例2所述用量的原料。
实施例6
按照实施例1所述的方法制备淡水轮虫通用培养液，在NaH2PO4和Na2HPO4配制的pH 7.0的磷酸缓冲液中加入实施例3所述用量的原料。
实施例7
按照实施例1所述的方法制备淡水轮虫通用培养液，在NaH2PO4和Na2HPO4配制的pH 7.5的磷酸缓冲液中加入实施例1所述用量的原料。
实施例8
按照实施例1所述的方法制备淡水轮虫通用培养液，在NaH2PO4和Na2HPO4配制的pH 7.5的磷酸缓冲液中加入实施例2所述用量的原料。
实施例9
按照实施例1所述的方法制备淡水轮虫通用培养液，在NaH2PO4和Na2HPO4配制的pH 7.5的磷酸缓冲液中加入实施例3所述用量的原料。

Claims (6)

1、一种淡水轮虫通用培养液，其特征是：在pH7.0-7.5的磷酸缓冲液中加入下述各原料：硝酸钾、七水合硫酸镁、六水合硝酸钙、磷酸氢二钾、维生素B12、维生素H。
2、根据权利要求1所述的一种淡水轮虫通用培养液，其特征是：在pH7.0-7.5的磷酸缓冲液中按下述重量加入各原料：硝酸钾6-10g/l、七水合硫酸镁3.7-6.2g/l、六水合硝酸钙8.6-11.6g/l、磷酸氢二钾2.4-4.0g/l、维生素B120.5μg/l、维生素H0.5μg/l。
3、根据权利要求1所述的一种淡水轮虫通用培养液，其特征是：pH 7.3的磷酸缓冲液中含有下述重量的原料：
KNO3            8.0g/l
MgSO4·7H2O     4.96g/l
K2HPO4          3.2g/l
Ca(NO3)2·6H2O  11.52g/l
维生素H         0.5μg/l
维生素B12       0.5μg/l。
4、根据权利要求1所述的一种淡水轮虫通用培养液，其特征是：pH 7.3的磷酸缓冲液中含有下述重量的原料：
pH 7.3的磷酸缓冲液
KNO3         10.0g/l
MgSO4·7H2O  6.2g/l
K2HPO4       4.0g/l
Ca(NO3)2·6H2O  14.4g/l
维生素H         0.5μg/l
维生素B12       0.5μg/l。
5、根据权利要求1所述的一种淡水轮虫通用培养液，其特征是：pH 7.3的磷酸缓冲液中含有下述重量的原料：
pH 7.3的磷酸缓冲液
KNO3            6.0g/l
MgSO4·7H2O     3.72g/l
K2HPO4          2.4g/l
Ca(NO3)2·6H2O  8.64g/l
维生素H         0.5μg/l
维生素B12       0.5μg/l。
6、权利要求1-5任一所述的一种淡水轮虫通用培养液的制法，其特征是：分别取NaH2PO4溶液和Na2HPO4溶液溶于蒸馏水中，配制成符合pH值的磷酸缓冲液；然后向磷酸缓冲液中依次加入KNO3溶液、MgSO4·7H2O溶液、K2HPO4溶液、Ca(NO3)2·6H2O溶液，并最终用蒸馏水定容，最后向定容溶液中分别加入维生素H和维生素B12，即配制成淡水轮虫通用培养液。
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