CN101583621A - 治疗、诊断或检测癌症的amigo-2抑制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供治疗癌症的方法，治疗癌症的组合物及诊断和/或检测癌症的方法和组合物，等等。具体地说，本发明提供治疗、诊断和检测AMIGO－2过度表达相关癌症的组合物和方法。

Description

治疗、诊断或检测癌症的AMIGO-2抑制剂

发明领域

本发明总体上涉及肿瘤学领域。更具体地说，本发明涉及治疗癌症的方法，治疗癌症的组合和诊断和/或检测癌症的方法和组合物。

发明背景

癌症是美国的第二死因。虽然利用“癌症”描述许多不同类型的癌症，即乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌，但各类型癌症的区别既在于表型水平也在于遗传学水平。当一种或多种基因的表达因突变而失调并且细胞生长不再受控制上，则发生癌症特征性的不受调节生长。

通常将基因分成两类，癌基因和肿瘤抑制基因。癌基因是只有在特定条件下其功能为促进细胞生长的基因。当癌基因产生突变，随后失控，其促进所有条件下的生长。然而，现已发现癌症要真正成功，该癌症还必须在肿瘤抑制基因中获得突变。肿瘤抑制基因的正常功能是终止细胞生长。肿瘤抑制(基因)的例子包括p53、p16、p21和APC，所有这些在正常起作用时可终止细胞不受控地分化和生长。当肿瘤抑制(基因)突变或丧失，则对细胞生长的制动作用也丧失，从而细胞可不受限制地生长。

AMIGO-2(也称为Alivin 1和DEGA)是AMIGO(两性霉素(amphoterin)-诱导基因和ORF)家族的一员(Kuja-Panula等，JCB 160：963，2003)。AMIGO家族参与细胞运动性，家族成员具有同嗜性和异嗜性相互作用。AMIGO-2还抑制凋亡，促进神经元存活(Ono等，J Neurosci 23 5887，2003)。AMIGO-2在胃癌中上调(Rabenau等，Oncogene 23 5056，2004)，稳定抑制AMIGO-2可抑制肿瘤细胞染色体稳定性、迁移和生长。

然而，目前为止，AMIGO-2在癌症和其它疾病及病症中的作用尚未完全阐明。因此，需要坚定能调节AMIGO-2的组合物和方法。本发明涉及这些以及其它重要的需要。

发明概述

在一些方面，本发明提供包含AMIGO-2调节剂和一种或多种药学上可接受的载体的组合物。

在一方面，本发明的特征在于包含AMIGO-2抑制剂和一种或多种药学上可接受的载体的组合物，其中所述AMIGO-2抑制剂是分离的双链RNA(dsRNA)；含有选自SEQ ID NO：7-16所构成组的序列中至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；结合选自下组的AMIGO2-结构域中表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、IgV-组结构域和Ig结构域；小分子；模拟物；可溶性受体；或引诱物。

在另一方面，本发明的特征在于特异性结合AMIGO-2多肽表位的纯化抗体，其中所述表位位于信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、IgV-组结构域或Ig结构域中。

在还有另一方面，本发明的特征在于产生特异性结合AMIGO-2多肽表位的抗体的分离细胞，其中所述表位位于信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、IgV-组结构域或Ig结构域中。

在另一方面，本发明的特征在于产生特异性结合AMIGO-2多肽表位的抗体的杂交瘤，其中所述表位位于信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、IgV-组结构域或Ig结构域中。

在还有另一方面，本发明的特征在于产生特异性结合AMIGO-2多肽表位的抗体的非人转基因动物，其中所述表位位于信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、IgV-组结构域或Ig结构域中。

在另一方面，本发明的特征在于SEQ ID NO：2所示多肽的携带表位的分离片段，其中所述片段包含选自SEQ ID NO：3-6和25-62所构成组的一种或多种表位。

在还有另一方面，本发明的特征在于编码SEQ ID NO：2所示多肽的携带表位的分离片段的多核苷酸，其中所述片段包含选自SEQ ID NO：3-6和25-62所构成组的一种或多种表位。

在还有另一方面，本发明的特征在于用SEQ ID NO：2所示多肽的携带表位的片段免疫对象而获得的纯化AMIGO-2抗体，其中所述片段包含选自SEQID NO：3-6和25-62所构成组的一种或多种表位。

在另一方面，本发明的特征在于包含第一核苷酸链和第二核苷酸链的分离dsRNA分子，所述第一核苷酸链包含SEQ ID NO：17-24所示某序列的至少19个连续核苷酸，所述第二核苷酸链包含与所述第一链基本上互补的序列，其中所述dsRNA分子长度短于3769个核苷酸。

在还有另一方面，本发明的特征在于包含第一核苷酸链和第二核苷酸链的分离dsRNA分子，所述第一核苷酸链包含SEQ ID NO：17-24所示某序列的至少19个连续核苷酸，所述第二核苷酸链包含与所述第一链完全互补的序列，其中所述dsRNA分子长度短于3769个核苷酸。

在另一方面，本发明的特征在于包含SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离核酸。

在另一方面，本发明的特征在于治疗有此需要的患者的癌症或癌症症状的方法，包括将治疗有效量的AMIGO-2抑制剂给予患者，其中所述抑制剂是分离的双链RNA(dsRNA)；含有选自SEQ ID NO：7-16所构成组的序列中至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；结合选自下组的AMIGO2-结构域中表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；小分子；模拟物；可溶性受体；或引诱物。

在还有另一方面，本发明的特征在于调节患者的AMIGO-2活性的方法，该方法包括将有效调节AMIGO-2活性用量的AMIGO-2抑制剂给予患者。

在还有另一方面，本发明的特征在于鉴定对AMIGO-2治疗敏感的患者的方法，包括(a)检测样品中是否存在AMIGO-2表达的证据，其中样品中存在AMIGO-2表达的证据表明患者是AMOGI-2治疗的候选者，而样品中不存在AMIGO-2表达的证据表明患者不是AMOGI-2治疗的候选者，(b)如果患者是AMOGI-2治疗的候选者，则将治疗有效量的包含AMIGO-2抑制剂的组合物给予患者，和(c)如果患者不是AMOGI-2治疗的候选者，则将传统癌症治疗剂给予患者。

在另一方面，本发明的特征在于抑制癌细胞生长的方法，包括使癌细胞与有效抑制细胞生长相比于对照至少20％的用量的AMIGO-2抑制剂接触。

在另一方面，本发明的特征在于抑制有此需要的患者中癌细胞表型的方法，该方法包括将治疗有效量的AMIGO-2抑制剂给予该患者。

在另一方面，本发明的特征在于抑制癌细胞生长的方法，该方法包括将调节AMIGO-2的一种或多种下游标记物的化合物给予具有癌症的患者，所述癌症包含一种或多种表达AMIGO-2的细胞。AMIGO-2的一种或多种下游标记物可以是c-MYC、c-Jun、FosL1和胞外信号调节激酶(ERK)。在一些实施方式中，调节一种或多种下游标记物可以是抑制一种或多种下游标记物的表达，例如抑制蛋白质或mRNA表达。在一些实施方式中，调节还可包括抑制AMIGO-2的一种或多种下游标记物的活性。在一些实施方式中，调节ERK包括调节ERK的磷酸化。在一些实施方式中，调节ERK包括调节ERK激酶针对一种或多种ERK底物的活性。

在还有另一方面，本发明的特征在于检测患者的肿瘤的方法，包括将包含与显像剂相连的AMIGO-2抑制剂的组合物给予该患者并检测该显像剂在患者中的定位。

在另一方面，本发明的特征在于抑制患者中两种或多种细胞相互作用的方法，包括将治疗有效量的AMIGO-2抑制剂给予该患者。

在另一方面，本发明的特征在于在细胞中表达AMIGO-2抗体的方法，其中所述AMIGO-2抗体特异性结合包含选自SEQ ID NO：3-6和25-62所构成组的序列的表位。该方法包括在细胞中表达编码AMIGO-2抗体的核酸。

在另一方面，本发明的特征在于鉴定癌症抑制剂的方法，其中所述癌症的特征在于AMIGO-2相比于对照过度表达。该方法包括使表达AMIGO-2的细胞与候选化合物接触并测定AMIGO-2活性是否得到调节，其中所述AMIGO-2活性得到调节是癌症抑制剂的标志。

在另一方面，本发明的特征在于鉴定癌症抑制剂的方法，其中所述癌症的特征在于AMIGO-2相比于对照过度表达。该方法包括使表达AMIGO-2的细胞与候选化合物和AMIGO-2配体接触并测定AMIGO-2下游标记物的活性是否得到调节，其中所述下游标记物得到调节是癌症抑制剂的标志。

在另一方面，本发明的特征在于测定患者对AMIGO-2抑制剂敏感性的方法，包括检测患者的癌症样品中AMIGO-2差别表达的证据，其中AMIGO-2差别表达的证据是患者对AMIGO-2抑制剂敏感性的标志。

在另一方面，本发明的特征在于从样品中纯化AMIGO-2蛋白的方法，包括(a)提供包含抗-AMIGO-2抗体的亲和基质，所述抗体结合于固体支持物上，(b)使样品与亲和基质接触以形成亲和基质-AMIGO-2蛋白复合体，(c)将该亲和基质AMIGO-2蛋白复合体与其余样品分离，和(d)从该亲和基质上释放AMIGO-2蛋白。

在另一方面，本发明的特征在于将细胞毒剂或诊断剂递送至一种或多种表达AMIGO-2的细胞的方法。该方法包括：(a)提供与抗-AMIGO-2抗体或其片段偶联的细胞毒剂或诊断剂，和(b)使细胞与该抗体-试剂或片段-试剂偶联物接触。

在另一方面，本发明的特征在于测定候选AMIGO-2抑制剂效力的方法，包括使表达AMIGO-2的细胞与候选AMIGO-2抑制剂接触并测定下游AMIGO-2标记物的水平或活性是否降低，其中所述下游标记物的水平或活性降低表明候选AMIGO-2抑制剂是有效的抗癌症药物。

在还有另一方面，本发明的特征在于测定候选AMIGO-2抑制剂效力的方法，包括使表达AMIGO-2的细胞与候选AMIGO-2抑制剂接触并测定PARP1切割是否增加，其中PARP1增加表明候选AMIGO-2抑制剂是有效的抗癌症药物。

在还有另一方面，本发明的特征在于测定某种癌症是否为AMIGO-2相关癌症的方法，包括比较癌症和对照细胞中的AMIGO-2表达，其中与对照相比，癌细胞中AMIGO-2表达上调表明该癌症是AMIGO-2相关癌症。

在还有另一方面，本发明的特征在于测定某种癌症是否为AMIGO-2相关癌症的方法，包括使癌症样品和对照样品与AMIGO-2抑制剂接触，并比较癌症样品和对照样品中AMIGO-2下游标记物的水平或活性，其中与对照样品相比，癌症样品中AMIGO-2下游标记物的水平或活性降低表明该癌症是AMIGO-2相关癌症。

在另一方面，本发明的特征在于测定某种癌症是否为AMIGO-2相关癌症的方法，包括使癌症样品和对照样品与AMIGO-2抑制剂接触，并比较癌症样品和对照样品中的PARP1切割情况，其中与对照样品相比，癌症样品中PARP1切割增加表明该癌症是AMIGO-2相关癌症。

在还有另一方面，本发明的特征在于治疗癌症患者的方法，包括测定某种癌症是否为AMIGO-2相关癌症，如果该患者具有AMIGO-2相关癌症则将包含AMIGO-2抑制剂的组合物给予该患者，如果该患者不具有AMIGO-2相关癌症则将传统癌症治疗剂给予该患者。

在另一方面，本发明的特征在于治疗癌症患者的方法，包括比较患者癌症样品中的AMIGO-2表达与对照样品中的AMIGO-2表达，并(1)如果与对照样品相比，该癌症样品中AMIGO-2表达上调则用包含AMIGO-2抑制剂的组合物治疗该患者，和(2)如果与对照样品相比，该癌症样品中AMIGO-2表达未变或下调则进行二级试验。

在另一方面，本发明的特征在于诊断患者中癌症的方法，包括检验候选癌细胞中的AMIGO-2定位，其中当定位于细胞膜的AMIGO-2与定位于不包括细胞膜的癌细胞其它区域的AMIGO-2之比至少为2∶1时，该患者诊断为具有AMIGO-2相关癌症。

在另一方面，本发明的特征在于检测包含表达AMIGO-2的细胞的样品中AMIGO-2活性调节情况的方法。该方法包括(a)使样品与AMIGO-2抑制剂接触足以调节AMIGO-2活性的时间，(b)用抗-AMIGO-2抗体免疫沉淀AMIGO-2，和(c)利用磷酸-丝氨酸/苏氨酸抗体比较样品与对照中AMIGO-2丝氨酸/苏氨酸磷酸化情况。与对照相比，样品中AMIGO-2的丝氨酸/苏氨酸磷酸化情况改变表明AMIGO-2活性得到调节。

在另一方面，本发明的特征在于检测包含表达AMIGO-2的细胞的样品中AMIGO-2活性调节情况的方法。该方法包括(a)使样品中的AMIGO-2过度表达足以调节AMIGO-2活性的时间，(b)用抗-AMIGO-2抗体免疫沉淀AMIGO-2，和(c)利用磷酸-丝氨酸/苏氨酸抗体比较样品与对照中AMIGO-2丝氨酸/苏氨酸磷酸化情况。与对照相比，样品中AMIGO-2的丝氨酸/苏氨酸磷酸化情况改变表明AMIGO-2活性得到调节。

在还有另一方面，本发明的特征在于检测包含表达AMIGO-2的细胞的样品中AMIGO-2活性调节情况的方法。该方法包括(a)使样品与AMIGO-2抑制剂接触足以调节AMIGO-2活性的时间，(b)用抗-磷酸-丝氨酸/苏氨酸抗体免疫沉淀AMIGO-2，和(c)利用抗AMIGO-2抗体比较样品与对照中磷酸化AMIGO-2的水平。与对照相比，样品中磷酸化AMIGO-2的水平改变表明AMIGO-2活性得到调节。

在另一方面，本发明的特征在于检测包含表达AMIGO-2的细胞的样品中AMIGO-2活性调节情况的方法。该方法包括(a)使样品中的AMIGO-2过度表达足以调节AMIGO-2活性的时间，(b)用抗-磷酸-丝氨酸/苏氨酸抗体免疫沉淀AMIGO-2，和(c)利用抗AMIGO-2抗体比较样品与对照中磷酸化AMIGO-2的水平。与对照相比，样品中磷酸化AMIGO-2的水平改变表明AMIGO-2活性得到调节。

在另一方面，本发明的特征在于鉴定AMIGO-2调节剂的方法，包括比较有和没有候选化合物存在下，包含表达AMIGO-2的一种或多种细胞的样品中AMIGO-2的磷酸化，其中与没有候选化合物存在下样品中AMIGO-2的磷酸化相比，有候选化合物存在下样品中AMIGO-2的磷酸化得到调节表明该候选化合物是AMIGO-2调节剂。

发明详述中将说明本发明的这些和其它方面。

附图简述

图1A和1B描述了用Affymetrix Gene(人基因组U133+2.0阵列(Human Genome U133 Plus 2.0 Array)，艾飞麦特利克斯公司(Affymetrix，Inc.))寡核苷酸阵列(图1A)和内部合成的cDNA微阵列(图1B)产生的基因表达数据。

图2图示了正常组织和结肠、乳腺和前列腺组织样品中相对AMIGO-2mRNA水平。

图3图示了从癌性和正常组织分离的AMIGO-2mRNA的寡核苷酸阵列数据(人基因组U133+2.0阵列，艾飞麦特利克斯公司)。正常和癌性组织类型沿x轴表示。纵轴上的各斑点表示一位患者的组织样品，各斑点在纵轴上的高度(线性)表示探针组的相对表达水平。实心圆圈表示表达水平处于线性检测范围内的样品。空心圆圈表示样品中基因表达的上限，此处基因低于探针组的检测界限。空心正方形表示样品中基因表达的下限，此处探针组饱和。

图4描述了图3所示的图示，但y-轴为log2值。正常和癌性组织类型沿水平轴表示。癌组织的名称前有“c”，正常组织的名称前为“n”。“ns”表示未指定的组织亚型。

图5描述了显示从6种不同细胞系分离的AMIGO-2蛋白的蛋白质印迹分析。相对半-定量RT-PCR Ct水平表示于毗邻4种细胞系的名称的括号中。

图6图示了给予siRNA后SW620细胞中的AMIGO-2mRNA水平。y-轴是相对比例，数值是任意的。UT＝未转染的；Eg5＝靶向Eg5(无关基因)的siRNA；阴性对照＝与任何已知基因不同源的siRNA序列；C315-1.2到C315-4.3是一组AMIGO-2siRNA。

图7A图示了给予siRNA后Colo320细胞中的AMIGO-2mRNA水平。y-轴是相对比例，数值是任意的。Eg5＝靶向Eg5(无关基因)的siRNA；阴性对照＝与任何已知基因不同源的siRNA序列；C315-1.2和C315-4.3是AMIGO-2特异性siRNA。

图7B图示了给予siRNA后HCT116细胞中的AMIGO-2mRNA水平。y-轴是相对比例，数值是任意的。Eg5＝靶向Eg5(无关基因)的siRNA；阴性对照＝与任何已知基因不同源的siRNA序列；C315-1.2和C315-4.3是AMIGO-2特异性siRNA。

图8A图示了AMIGO-2特异性siRNA对SW620细胞死亡的作用。“Pos.对照”是靶向Eg5的Eg5siRNA。“阴性对照”是与任何已知基因不同源的siRNA序列。y-轴检测与死细胞数目成比例的发光水平。

图8B图示了AMIGO-2特异性siRNA对MRC9细胞死亡的作用。“Pos.对照”是靶向Eg5的Eg5siRNA。“阴性对照”是与任何已知基因不同源的siRNA序列。y-轴检测与死细胞数目成比例的发光水平。

图9描述了显示AMIGO-2特异性siRNA对AGS细胞中AMIGO-2、PARP、M30和微管蛋白表达和加工的作用的一组蛋白质印迹。“Pos.对照”表示用Eg5siRNA转染的细胞的裂解液。“阴性对照”表示用与任何已知基因不同源的siRNA序列转染的细胞的裂解液。

图10A描述了显示AMIGO-2特异性siRNA对SW620细胞中AMIGO-2、ERK、c-Myc和微管蛋白表达和加工的作用的一组蛋白质印迹。pERK是磷酸化的ERK蛋白。“阴性对照”如图9所示。

图10A图示了AMIGO-2特异性siRNA对SW620细胞中c-MYC mRNA水平的作用。“Pos.对照”是靶向Eg5的Eg5siRNA。“阴性对照”是与任何已知基因不同源的siRNA序列。y-轴检测通过qPCR测定的mRNA的相对表达水平。

图11描述了显示AMIGO-2特异性siRNA对AGS细胞中AMIGO-2、ERK、c-Myc、细胞周期蛋白D1和微管蛋白表达和加工的作用的一组蛋白质印迹。pERK是磷酸化的ERK蛋白。标有“抗-有丝分裂基因”的泳道表示用Eg5siRNA转染的细胞的裂解液。“阴性对照”表示用与任何已知基因不同源的siRNA序列转染的细胞的裂解液。

图12A-12C描述了调节AMIGO-2对cJun表达的作用。图12A是显示cJun在用AMIGO-2siRNA转染的细胞中下调的一组蛋白质印迹。“UT”表示未转染的对照样品；“DharmNeg”是与任何已知基因不同源的阴性对照siRNA序列；C315-1.3si是AMIGO-2特异性siRNA。图12B是显示cJun表达在用AMIGO-2转染的细胞中上调的一组蛋白质印迹。图12C是显示使AGS细胞与激动剂抗-AMIGO-2抗体MAB2080接触后cJun上调的蛋白质印迹。“ISO”表示同种型对照。

图13描述了显示AMIGO-2敲除对AGS和SW620细胞中细胞周期蛋白B1和cFos表达的作用的一组蛋白质印迹。“UT”表示未转染的对照样品；“DharmNeg”是与任何已知基因不同源的阴性对照siRNA序列；C315-1.3si和C315-4.3si是AMIGO-2特异性siRNA。

图14A-C描述了调节AMIGO-2对cMyc表达的作用。图14A和14B是显示使SW620(图14A)和AGS(图14B)细胞与AMIGO-2siRNA C315-1.3si和C315-4.3si接触后c-Myc下调的一组蛋白质印迹。“UT”是未转染的细胞培养液。“Neg”表示用与任何已知基因不同源的siRNA序列转染的样品。“Eg5”表示用靶向Eg5的siRNA转染的样品。图14C表示使SW620细胞和AGS细胞与抗-AMIGO-2抗体MAB2080接触后cMyc在细胞中上调的蛋白质印迹。

图15A-15B描述了利用AMIGO-2调节剂一致下调(图15A)和上调(图15B)的基因。

图16描述了显示AMIGO-2-特异性抗体MAB2080(A)对SW620细胞的全细胞裂解液中cJUN、cFosL1和微管蛋白表达的作用的一组蛋白质印迹(上两幅图)。下图中一系列蛋白质印迹描述了与细胞中总ERK相比，MAB2080(A)对ERK磷酸化(pERK)的作用。“I”或“同种型对照”表示用非特异性小鼠IgG处理SW620细胞。

详述

本申请的发明人发现AMIGO-2在包括肺癌和结肠癌在内的几种癌症中过度表达，而在正常组织中表达有限。令人意外地，抑制AMIGO-2抑制了癌细胞存活。此外，现已发现抑制AMIGO-2能调节包括，例如细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白B1、c-Myc、cJcun、FosL1、VEGF、尿激酶或ERK在内的下游标记物水平。因此，本发明提供治疗、诊断和使癌症成像的方法和组合物，特别是治疗诊断和使AMIGO-2相关癌症成像，以及治疗AMIGO-2表达异常相关的其它疾病和病症。本申请提供了本发明的这些和其它方面。

定义

本文件采用了各种定义。大多数词语具有本领域技术人员所赋予那些词语的意义。在下文或本文件它处专门定义的词语总体上具有本发明范围内提供的意义，与本领域技术人员通常理解的一样。

除非另有表述，实施本发明可采用本领域技术范围内的常规化学、生物化学、分子生物学、免疫学和药学方法。参考文献中充分解释了这些技术。参见，例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)，第18版(伊斯顿，宾夕法尼州，马克出版公司(Mack Publishing Company)，1990)，MethodsIn Enzymology(酶学方法)(S.Colowick和N.Kaplan编，学术出版社公司(Academic Press，Inc))和Handbook of Experimental Immunology(实验免疫学手册)，第I-IV卷(D.M.Weir和C.C.Blackwell编，1986，布莱克威尔科学出版公司(Blackwell Scientific Publications))和Sambrook等，MolecularCloning：A Laboratory Manual(分子克隆：实验室手册)(第2版，1989)。

除非文中另有表述，本文所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数形式。因此，例如“一个抗体”包括两个或多个这种抗体的混合物。

本文所用的术语“约”指某数值的+/-30％、+/-20％、+/-10％或+/-5％。

本文所用的术语“AMIGO-2”(也称为Alivin1(ALI1)和DEGA)指具有Ig样结构域2的黏着分子。AMIGO-2的核苷酸序列见SEQ ID NO：1(GenBank登录号NM_181847)，AMIGO-2的氨基酸序列见SEQ ID NO：2(GenBank登录号NM_181847)。该术语“AMIGO-2”还包括核酸和氨基酸同源物。在一些实施方式中，这种AMIGO-2核酸和氨基酸保留了投入AMIGO-2核酸或氨基酸的一种或多种活性。

术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用，指任何长度的氨基酸聚合形式，其可包含编码和非编码的氨基酸，化学或生物化学修饰或衍生的氨基酸和具有修饰的肽主链的多肽。该术语包括融合蛋白，包括但不限于：具有异源氨基酸序列的融合蛋白；具有异源和同源前导序列的融合蛋白，含或不含N-末端甲硫氨酸残基；免疫学标记的蛋白质；等等。

术语“个体”、“对象”、“宿主”和“患者”可互换使用，指需要诊断、治疗或诊治的任何对象，尤其是人。其它对象可包括牛、狗、猫、豚鼠、家兔、大鼠、小鼠、马等。在一些实施方式中，所述对象是人。

本文所用的“癌症”指原发癌或转移癌。术语“癌细胞”指转化的细胞。可以从癌症患者分离这些细胞，或者这些细胞可以是体外转化成癌性的细胞。癌细胞可以衍生自许多类型的样品，包括任何组织或细胞培养系。在一些实施方式中，癌细胞是过度增生性，肿瘤细胞或赘生物。在一些实施方式中，从肺组织、膀胱组织、肾组织、结肠组织、乳腺组织、子宫组织、卵巢组织或胰腺组织分离癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞取自公众可得的已有细胞系。在一些实施方式中，从先前存在的患者样品或含癌细胞的文库分离癌细胞。在一些实施方式中，分离癌细胞，然后植入不同的宿主，例如异种移植。在一些实施方式中，移植癌细胞，用于SCID小鼠模型。在一些实施方式中，癌症是肺癌或结肠癌。在一些实施方式中，癌症是除胃癌以外的癌症。

本文所用的术语“转化的”指其后代可稳定遗传的细胞特性的任何改变。在一些实施方式中，“转化的”指正常细胞向癌性细胞改变，例如能导致肿瘤的改变。在一些实施方式中，转化细胞是无限增殖的。许多因素可导致转化，包括某受体在缺乏受体磷酸化下的过度表达，病毒感染、癌基因和/或肿瘤抑制基因的突变，和/或改变细胞的生长和/或无限增殖特性的任何其它技术。

“癌性表型”通常指作为癌细胞特征的各种生物学现象，这些现象可因癌症类型而有所不同。通常由，例如细胞生长或增殖(例如，不受控的生长或增殖)，细胞周期的调节，细胞运动性，细胞-细胞相互作用或转移等等中的异常现象来鉴定癌性表型。

本文所用的术语“转移”指某癌症从其起源，例如从原发癌症扩展到远端部位。转移部位包括但不限于：骨、淋巴结、肺、肝和脑。

本文所用的术语“血管发生”指患者体内产生血管。

本文所用的术语“临床终末点”指表明癌症的可检测现象。临床终末点包括但不限于：首次转移的时间、后继转移的时间、转移的大小和/或数量、肿瘤的大小和/或数量、肿瘤的定位、肿瘤的侵袭性、生活质量、疼痛等等。本领域技术人员能确定并检测临床终末点。本领域技术人员已知检测临床终末点的方法。

本文所用的术语“样品”指患者的生物学材料。本发明检验的样品不限于任何特定类型。样品包括但不限于：单细胞、多细胞、组织、肿瘤、生物学液体、生物学分子或任何前述的上清液或提取物。例子包括取出用于生物活检的组织，切除期间取出的组织，血液，尿液，淋巴组织，脑脊液，粘液和粪便样品。所用的样品根据试验形式、检测方法和待检验的肿瘤、组织、细胞或提取物的性质而有所不同。本领域熟知制备样品的方法，不难采用这些方法获得与所用方法相容的样品。

本文所用的术语“生物学分子”包括但不限于：多肽、核酸和糖。

本文所用的术语“调节”指细胞内、外或其表面上的基因、蛋白质或任何分子的质量或数量的改变。所述改变可以是分子表达或水平的增加或降低。术语“调节”还包括改变生物学功能/活性的质量或数量，所述生物学功能/活性包括但不限于：细胞信号传导活性、细胞周期调节、激酶活性、丝氨酸/苏氨酸激酶活性、细胞-细胞相互作用活性、影响多倍性的活性、染色体稳定性、致瘤性、细胞运动性、转移性、癌细胞存活、癌细胞生长、增殖、通过细胞周期进展、不依赖于贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、细胞-细胞相互作用，包括在AMIGO-2与AMIGO-1(GenBank登录号NM_020703，氨基酸序列见SEQ ID NO：63)或AMIGO-3(GenBank登录号NM_198722，氨基酸序列见SEQ ID NO：64)中一种或两种之间的相互作用、细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平、血管发生、神经元长出(neuronal outgrowth)或细胞死亡。

本文所用的术语“调节剂”指能调节一种或多种癌症相关的生理学或生物化学事件的组合物。在一些实施方式中，所述调节剂抑制一种或多种癌症相关的生物学活性。在一些实施方式中，所述调节剂是小分子、抗体、模拟物、引诱物或寡核苷酸。在一些实施方式中，所述调节剂通过阻断配体结合或通过竞争配体结合位点而起作用。在一些实施方式中，所述调节剂不依赖于配体结合而起作用。在一些实施方式中，所述调节剂不竞争配体结合位点。在一些实施方式中，所述调节剂阻断涉及癌症的基因产物表达。在一些实施方式中，所述调节剂阻断涉及癌症的两种或更多种生物分子的物理相互作用。在一些实施方式中，本发明调节剂抑制选自下组的一种或多种AMIGO-2活性：细胞信号传导活性、细胞周期调节、激酶活性、丝氨酸/苏氨酸激酶活性、细胞-细胞相互作用活性、影响多倍性的活性、染色体稳定性、致瘤性、细胞运动性、转移性、癌细胞存活、癌细胞生长、增殖、通过细胞周期进展、不依赖于贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、细胞-细胞相互作用(包括在AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用)、细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平、血管发生、神经元长出。在一些实施方式中，所述AMIGO-2调节剂抑制AMIGO-2表达。在一些实施方式中，所述调节剂抑制分裂细胞发展成细胞周期的G2/M期。

“基因产物”是基因表达或产生的生物聚合产物。基因产物可以是，例如未剪接的RNA、mRNA、剪接变体mRNA、多肽、翻译后修饰的多肽、剪接变体多肽等。该术语还包括利用RNA基因产物(即，RNA的cDNA)作为模板产生的生物聚合产物。基因产物可用酶方法、重组方法、化学方法或在该基因的天然细胞内产生。在一些实施方式中，如果基因产物是蛋白性的，其显示生物学活性。在一些实施方式中，如果基因产物是核酸，可将其翻译成显示生物学活性的蛋白性基因产物。

本文所用的“调节AMIGO-2活性”指，例如某物质与AMIGO-2多核苷酸序列或多肽相互作用，抑制AMIGO-2转录和/或翻译(例如通过反义或siRNA与AMIGO-2基因或AMIGO-2基因表达产物相互作用，通过调节促进AMIGO-2表达的转录因子)等而导致AMIGO-2活性增加或降低。例如，调节AMIGO-2活性指生物学活性增加或生物学活性降低。调节AMIGO-2活性也指增加或降低一种或多种AMIGO-2表型。可通过(包括但不限于)评估AMIGO-2多肽水平，或通过评估AMIGO-2转录水平来评估AMIGO-2活性。还可通过检测AMIGO-2下游标记物水平、检测染色体稳定性、检测激酶活性、检测致瘤性、检测转移、检测AMIGO-2信号传导、检测AMIGO-2介导的细胞黏着、检测AMIGO-2介导的癌细胞凋亡、检测ERK磷酸化、检测癌细胞生长、检测肿瘤形成、检测细胞周期蛋白产生、检测细胞增殖、检测癌细胞生长、检测不依赖与贴壁的生长、检测细胞周期调节、检测神经元指导(neuronal guidance)、检测癌细胞运动性、检测AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、检测细胞-细胞相互作用(包括在AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用)、检测细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平、检测血管发生和检测细胞死亡等来比较AMIGO-2活性。

在一些实施方式中，尤其感兴趣的是抑制AMIGO-2活性。本文所用的术语“抑制”指活性或数量的减少、降低、失活或下调。例如，就本发明而言，AMIGO-2调节剂可抑制一种或多种致瘤性；癌细胞运动性；细胞黏附；转移性；癌细胞存活；激酶活性；增殖；不依赖于贴壁的生长；癌细胞运动性；AMIGO-2蛋白定位于细胞膜；在AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用；神经元指导；细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平；磷酸化ERK的水平和血管发生。与对照相比，这些活性的抑制可以是至少25％、至少50％、至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或100％。本领域技术人员能检测AMIGO-2调节情况；示范性试验的非限制性例子见下文。

因此，本文所用的术语“抑制AMIGO-2”指一种或多种AMIGO-2-介导的生物学活性的减少、降低、失活或下调。“AMIGO-2生物学活性”的抑制指，例如以下活性的减少、降低、失活或下调：致瘤性；癌细胞运动性；细胞黏附；转移性；癌细胞存活；激酶活性；增殖；不依赖于贴壁的生长；癌细胞运动性；AMIGO-2蛋白定位于细胞膜；在AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用；神经元指导；细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平；磷酸化ERK的水平；或血管发生。与对照相比，这些活性的抑制可以是至少25％、至少50％、至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或100％。

在一些实施方式中，尤其感兴趣的是调节AMIGO-2活性从而能活化或导致AMIGO活性增加。AMIGO-2调节剂可抑制一种或多种多倍性和细胞死亡(活性)。与对照相比，AMIGO-2活性的活化、上调或增加可以是至少125％、至少150％、至少200％、至少250％、至少300％、至少500％。例如，与对照相比，增加细胞死亡率200％的AMIGO-2调节剂将细胞死亡率提高两倍。

本文所用的术语“在癌细胞中有差别地表达”和“在癌细胞中有差别地表达的多核苷酸”可互换使用，指与细胞类型相同的非癌性细胞相比，代表或对应于在癌性细胞中有差别地表达的基因的多核苷酸，例如，发现mRNA水平差异有至少约25％、至少约50％-约75％、至少约90％、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍或至少约50倍或更高(例如，较高或较低)。该比较可以在组织中进行，例如如果采用在组织的细胞类型之间有一定区分程度的原位杂交或另一试验方法。还可以在从组织来源取出的细胞之间，或在原位细胞与从组织来源取出的第二细胞之间进行比较。在一些实施方式中，与正常细胞相比，所述基因在癌基因中上调。

如果AMIGO-2相关癌症的至少一种症状缓解、终止、减缓或阻止则该癌症受到“抑制”。如本文所用，如果AMIGO-2相关癌症的复发或转移降低、减缓、延迟或阻止则也“抑制”了该癌症。

本文所用的短语“抑制AMIGO-2介导的细胞黏着”指有AMIGO-2调节剂存在下，细胞-细胞黏着的降低、减少或消除，其中至少一种细胞有差别地表达AMIGO-2。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在时AMIGO-2介导的细胞黏着相比，AMIGO-2调节剂可将AMIGO-2介导的细胞黏着降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。可通过检测，例如通过标记感兴趣的细胞，将它们与黏着于基板的一群未标记细胞温育，并作清洗以分开黏着和未黏着的细胞群来比较AMIGO-2介导的细胞黏着。以此方式可通过检测保留于基板上的标记量来确定细胞黏着。试验系统的例子包括但不限于：用荧光标记物，例如钙荧光素AM、CFMDA(5-氯甲基荧光素二乙酸酯)、5(6)-CFDA-SE[5-(和-6)-羧基荧光素二乙酸酯，琥珀酰亚胺酯]作标记并用荧光平板读数计或通过流式细胞术检测荧光。

本文所用的短语“抑制癌细胞生长”指有AMIGO-2调节剂存在下降低、减少或消除癌细胞生长，其中所述细胞表达AMIGO-2。在一些实施方式中，与其它正常细胞相比和/或与其它癌细胞相比，这些细胞有差别地表达AMIGO-2。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下的癌细胞生长相比，AMIGO-2调节剂可将细胞生长降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。可采用，例如MTT试验(例如，英杰公司(Invitrogen)的

MTT细胞增殖检验试剂盒)；BrdU掺入(例如，英杰公司的绝对-S SBIP试验)；检测胞内ATP水平(例如，利用帕金埃尔默公司(PerkinElmer)的ATPLite^TM-M，1,000检验试剂盒或生景公司(BioVision)的ATP细胞活力检验试剂盒)；DiOc18试验，一种膜透过性染料(英杰公司)；葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性试验(例如，英杰公司的Vibrant细胞毒性试验)；或检测细胞LDH活性来比较癌细胞生长。

本文所用的短语“抑制肿瘤形成”指有AMIGO-2调节剂存在下降低、减少或消除肿瘤形成，其中所述肿瘤包含有差别地表达AMIGO-2的细胞。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下的肿瘤形成相比，AMIGO-2调节剂可将肿瘤形成降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。可采用，例如细胞试验(例如软琼脂中的菌落形成)；通常依赖于将感兴趣细胞注射入动物的肿瘤形成体内模型(例如，无胸腺小鼠或大鼠，受辐射的小鼠或大鼠，接种入免疫特惠区，如脑、颊囊或眼，接种同系动物)和在限定时间后监测(肿瘤)块大小来比较肿瘤形成。

本文所用的短语“抑制细胞周期蛋白D1”指降低、减少或消除AMIGO-2介导的细胞周期蛋白产生。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下的AMIGO-2介导细胞周期蛋白产生相比，抑制性物质可将AMIGO-2介导的细胞周期蛋白产生降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。可通过以下方式比较细胞周期蛋白产生：通过RT-PCR或northern印迹检测，例如细胞周期蛋白mRNA水平；通过免疫印迹、免疫沉淀或ELISA检测细胞周期蛋白的多肽水平；或采用功能试验，包括利用例如靶向CDK、p21WAF1、p27 KIP-1的抗体进行免疫共沉淀试验以检测与细胞周期蛋白调节剂，如细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)形成复合体的细胞周期蛋白水平；和通过放射性标记与免疫沉淀分析或FRET复发，例如分子装置公司(Molecular Devices)的CDK2/细胞周期蛋白A检验试剂盒来检测CDK导致的细胞周期蛋白的磷酸化情况。

本文所用的短语“抑制细胞周期蛋白B1”指降低、减少或消除AMIGO-2介导的细胞周期蛋白产生。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下的AMIGO-2介导细胞周期蛋白产生相比，抑制性物质可将AMIGO-2介导的细胞周期蛋白产生降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。可按照所述细胞周期蛋白D1所述的方法比较细胞周期蛋白产生。

本文所用的短语“抑制FosL1”指降低、减少或消除AMIGO-2介导的FosL1产生。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下的AMIGO-2介导FosL1产生相比，抑制性物质可将AMIGO-2介导的FosL1产生降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。可通过RT-PCR或northern印迹检测，例如FosL1 mRNA水平；或通过免疫印迹、免疫沉淀、ELISA或免疫组织化学方法检测FosL1多肽水平来比较FosL1产生。检测FosL1表达(例如，mRNA或蛋白质表达)的合适方法的例子见本实施例，例如Matsuo等(2000)Nature Genet 24：184-187和Sahin等(2005)Pancreas 30(2)：158-167中也有描述。

本文所用的“抑制c-Myc”指降低、减少或消除AMIGO-2介导的c-Myc产生。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下的AMIGO-2介导c-Myc产生相比，抑制性物质可将AMIGO-2介导的c-Myc产生降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。可通过RT-PCR或northern印迹检测，例如c-Myc mRNA水平；或通过免疫印迹、免疫沉淀、ELISA或免疫组织化学方法检测c-Myc多肽水平来比较c-Myc产生。或者，可“功能性地”检测c-Myc，例如通过c-Myc转录因子促进靶基因转录的能力。所述靶基因可以是内源性基因或者可以是外源性转基因(即，报道基因)。可采用本文所述的任何方法检测靶基因mRNA或蛋白质的表达。在一些例子中，所述报道基因可以是具有可检测活性的酶(例如，萤光素酶、氯霉素乙酰基转移酶、碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶)或可检测的蛋白质(例如，绿色荧光蛋白或红色荧光蛋白)。检测c-Myc表达(例如，mRNA或蛋白质表达)的合适方法的例子是本领域已知的，详见本实施例。监测报道基因表达，特别是上述酶或可检测的报道基因的方法是本领域熟知的，描述于，例如Cziepluch等(1993)Oncogene 8(10)：2833-8。

本文所用的“抑制c-Jun”指降低、减少或消除AMIGO-2介导的c-Jun产生。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下的AMIGO-2介导c-Jun产生相比，抑制性物质可将AMIGO-2介导的c-Jun产生降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。可通过RT-PCR或northern印迹检测，例如c-Myc mRNA水平；或通过免疫印迹、免疫沉淀、ELISA或免疫组织化学方法检测c-Jun多肽水平来比较c-Jun产生。或者，可“功能性地”检测c-Jun，例如通过c-Jun转录因子促进靶基因转录的能力。所述靶基因可以是内源性基因或者可以是外源性转基因(即，报道基因)。可采用本文所述的任何方法检测靶基因mRNA或蛋白质的表达。检测c-Jun表达(例如，mRNA或蛋白质表达)的合适方法的例子是本领域已知的，详见本实施例，例如Kharbanda等(1991)Biochemistry 30：7947-7952和Kayahara等(2005)Mol Cell Biol 25(9)：3784-3792中也有描述。监测报道基因表达，特别是上述酶或可检测的报道基因的方法是本领域熟知的，上文有所描述。

本文所用的短语“抑制ERK磷酸化”指降低、减少或消除AMIGO-2介导的ERK磷酸化。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下的AMIGO-2介导ERK磷酸化相比，抑制性物质可将AMIGO-2介导的ERK磷酸化降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。可采用本领域技术人员已知的磷酸化试验评估ERK磷酸化的比较。

尽管不局限于任何特定的理论或作用机制，因为ERK的磷酸化通常导致其活化，但在一些实施方式中，该短语“抑制ERK磷酸化”也可指减少、降低或消除AMIGO-2介导的磷酸化ERK所致的一种或多种ERK底物磷酸化。ERK底物包括但不限于：IEX-1、ELK1、桩蛋白、Bcl-2、SOS或SP1。监测ERK对其底物的激酶活性的方法是本领域已知的，描述于，例如Mechant等(1999)BBRC 254：454-461；Chemiack等(1994)J Biol Chem 269：4717-4720；Cano等(1995)J Cell Sci 108：3599-3609；Garcia等(2004)EMBO J 21：5151-5163和Tamura等(2004)FEBS Lett 569：249-255。

本文所用的短语“抑制癌细胞存活”指降低或减少表达AMIGO-2的癌细胞的存活率。在一些实施方式中，术语“抑制癌细胞存活率”指影响表达AMIGO-2的癌细胞的凋亡。在一些实施方式中，与其它正常细胞和/或癌细胞相比，这些癌细胞有差别地表达AMIGO-2。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下或正常细胞中的癌细胞存活率相比，抑制性物质可将表达AMIGO-2的癌细胞存活率降低至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多达100％。

本文所用的短语“抑制AMIGO-2信号传导”指降低、减少或消除AMIGO-2对包含AMIGO-2的细胞信号传导级联的下游成员的作用。包含AMIGO-2的细胞信号传导级联包括介导细胞生长和存活的途径。在一些实施方式中，介导细胞生长和存活的这些途径是活化的生长因子途径，例如EGFR途径或β-联蛋白途径的下游。在一些实施方式中，所述途径是导致β-联蛋白稳定的突变β-联蛋白途径，等等。在一些实施方式中，抑制AMIGO-2信号传导上调一种或多种下游标记物。在一些实施方式中，抑制AMIGO-2信号传导下调一种或多种下游标记物。

可通过检测细胞信号传导途径的下游成员的多肽或多核苷酸水平来测定AMIGO-2信号传导的抑制情况。本领域技术人员能检测AMIGO-2多肽和/或多核苷酸水平。本领域技术人员还能检测AMIGO-2下游标记物的水平。

本文所用的短语“抑制细胞-细胞相互作用”指降低或消除表达AMIGO-2的两个或多个细胞之间的相互作用。在一些实施方式中，细胞之间的相互作用导致细胞信号传导。可通过本领域已知的许多方法检测细胞-细胞相互作用，包括但不限于观察共同培养、预先标记的细胞之间的膜交换，例如用不同的荧光膜染料，包括西格玛公司(Sigma)的PKH26和PKH67作标记。

本文所用的短语“抑制增殖”指降低或消除AMIGO-2介导的增殖，其可通过本领域技术人员已知的许多方法检测。细胞增殖试验包括但不限于：MTT试验(例如，英杰公司的

MTT细胞增殖检验试剂盒)；BrdU掺入试验(例如，英杰公司的绝对-S SBIP试验)；检测胞内ATP水平(试验的商品化形式包括帕金埃尔默公司的ATPLite^TM-M，1,000检验试剂盒或生景公司的ATP细胞活力检验试剂盒)；DiOc18试验，一种膜透过性染料(英杰公司)；葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性试验(例如，英杰公司的Vibrant细胞毒性试验)；检测细胞LDH活性；3H-胸苷掺入和细胞滴度Glo试验(普罗美加公司(Promega))。

本文所用的短语“抑制血管发生”指降低或消除AMIGO-2介导的血管发生。可通过本领域技术人员已知的方法检测血管发生，包括但不限于：细胞增殖试验、细胞迁移试验、细胞分化试验、器官培养(离体)试验、鸡绒毛膜尿囊膜(CAM)试验、角膜血管发生试验、基质胶活塞试验(Matrigel plug assay)和在SCID小鼠、裸鼠或C57BL小鼠中进行的肿瘤体积试验。

细胞迁移试验包括但不限于：盲-孔趋化室(blind-well chemotaxischamber)，例如改进的博伊登室(modified Boyden Charmber)和吞噬动力学轨迹试验(Phagokinetic track assay)。细胞分化试验包括但不限于：在胶原、纤维蛋白凝块或基质胶中形成管道，然后进行电子显微术。器官培养(离体)试验包括但不限于：大鼠主动脉环试验(rat aortic ring assay)和鸡主动脉弓试验(chick aortic arch assay)。

本文所用的短语“抑制通过细胞周期进展”指减缓或停止细胞分裂。可通过溴脱氧尿苷(BRDU)掺入来检验细胞周期进展。这些试验通过将BRDU掺入新合成的DNA来鉴定经历DNA合成的细胞群。然后可利用抗-BRDU抗体(Hoshino等，1986，J Cancer 38，369；Campana等，1988，J Immunol Meth107，79)或通过其它方式检测新合成的DNA。还可通过磷酸-组蛋白H3染色检验细胞增殖，从而通过组蛋白H3的磷酸化鉴定经历有丝分裂的细胞群。利用对组蛋白H3的丝氨酸10残基的磷酸化形式具有特异性的抗体检测组蛋白H3在丝氨酸10处的磷酸化(Chadlee，D N 1995，J Biol Chem 270：20098-105)。还可利用[³H]-胸苷掺入检测细胞增殖(Chen，J，1996，Oncogene13：1395-403；Jeoung，J，1995，J Biol Chem 270：18367-73)。该试验能定量表征S-期DNA合成。在该试验中，合成DNA的细胞将[³H]-胸苷掺入新合成的DNA。然后可通过标准技术检测掺入情况，例如用闪烁计数仪(例如，贝克曼L S 3800液相闪烁计数仪)计数放射性同位素。另一增殖试验利用购自生物源国际公司(Biosource International)的染料阿尔玛蓝(Alamar Blue)，该染料在红细胞中还原时发出荧光，从而能间接检测细胞数目(Voytik-Harbm S L等，1998，In Vitro Cell Dev Biol Anim 34：239-46)。还有另一种增殖试验，即MTS试验依据工业化学品的体外细胞毒性评估，其利用可溶性四唑鎓盐，MTS。MTS试验可以商品化购得，包括普罗美加细胞滴度

水性非放射性细胞增殖试验(目录号G5421)。还可通过软琼脂中的菌落形成来检验细胞增殖(Sambrook等，Molecular Cloning(分子克隆)，冷泉港，(1989))。还可通过检测ATP水平作为代谢活性细胞的指示剂来检验细胞增殖。这些试验司商品化购得，包括普罗美加公司的细胞滴度-Glo^TM。还可通过流式细胞术检验细胞周期增殖(Gray J W等(1986)Int J RadiatBiol Relat Stud Phys Chem Med 49：237-55)。可用碘化丙啶染色细胞，用流式细胞计评估从而检测在细胞周期不同阶段的细胞累积。

本文所用的“AMIGO-2下游标记物”是与在正常或健康组织中的表达水平相比，显示在癌组织或癌细胞中表达水平改变的基因或活性，或者是有AMIGO-2调节剂存在时改变的特性。在一些实施方式中，当用本发明AMIGO-2调节剂干扰AMIGO-2时，所述下游标记物显示表达水平改变。AMIGO-2下游标记物包括但不限于：细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白B1、c-Myc、VEGF、尿激酶、cJcun、FosL1或ERK。在一些实施方式中，切割PARP1是AMIGO-2活性的下游标记。

本文所用的短语“增加癌细胞凋亡”指在有AMIGO-2调节剂存在下增加表达AMIGO-2的癌细胞凋亡。就此而言，与没有AMIGO-2调节剂存在下的癌细胞凋亡相比，AMIGO-2调节剂能将癌细胞凋亡增加至少25％、至少50％、至少75％、至少85％、至少90％、至少95％，最多100％。在一些实施方式中，与其它正常细胞相比和/或与其它癌细胞相比，癌细胞有差别地表达AMIGO-2。可通过检测，例如DNA断裂、胱冬酶活性、线粒体膜电势丧失、活性氧中间体(ROS)产量增加、胞内酸化、染色质凝聚、细胞表面的磷脂酰丝氨酸(PS)水平和细胞膜渗透性增加来比较癌细胞凋亡。

例如，可采用TUNEL试验(末端脱氧核苷酸转移酶dUTP切口末端标记)检测DNA断裂。该试验的商品化形式可广泛获得，例如英杰公司的APO-BrdU^TM TUNEL检验试剂盒、BD生物科学法玛金公司(BD BiosciencesPharmmgen)的APO-DIRECT^TM试剂盒和ApoAlert^TM DNA断裂检验试剂盒(克隆技术公司(Clontech)，Takara生物公司(Takara Bio Company))。

可通过特定胱冬酶的特异性发荧光、生色和发光底物监测胱冬酶活性。至少胱冬酶1、2、3、6、7、8和9有商品化的检验试剂盒可用(参见，例如英杰公司、凯米康公司(Chemicon)、卡尔生物化学公司(CalBiochem)、生物源公司公司、生景公司)。

可用能有差别地累积在健康活性线粒体上的荧光染料检测线粒体膜电势的丧失。一种非限制性例子是英杰公司的米图特拉克红系统(MitoTracker Redsystem)。

可用荧光染料检测活性氧中间体(ROS)的产量，包括，例如英杰公司的H2DCFDA。

可用荧光或生色染料检测胞内酸化情况。

可用荧光染料检测染色质凝聚，包括，例如Hoechst 33342。

可检测细胞表面的磷脂酰丝氨酸(PS)水平。例如，膜联蛋白V对PS具有高亲和力。许多可商品化购得的试验适于监测标记膜联蛋白V与细胞表面的结合。

可利用能进入凋亡细胞但不进入坏死细胞的染料，例如英杰公司的荧光染料YO-PRO-I检测细胞膜渗透性。

本文所用的术语“上调”指增加、活化或刺激某活性或数量。

本文所用的术语“N-末端”指某蛋白质的前10个氨基酸。

本文所用的术语“C-末端”指某蛋白质的后10个氨基酸。

本文所用的术语“结构域”指生物分子中对该生物分子的已知或猜测的功能作出贡献的结构部分。结构域可与其区域或部分共生，除该区域的全部或部分外，还可掺入生物分子中不同于特定区域的一部分。

本文所用的术语“胞外域”指分子中在细胞以外或外部的部分。就本发明而言，N-末端胞外域指存在于分子N-末端并恰好在第一跨膜区之前的胞外域。对于(TM)区之间，例如TM 2和3之间的胞外域，胞外域指在AMIGO-2的第二和第三跨膜区之间并在细胞膜外的AMIGO-2部分。

本文所用的术语“配体结合域”指保留AMIGO-2的相应天然序列的至少一种定性结合活性的受体中任何部分或区域。

术语“区域”指生物分子的一级结构中物理上连续的部分。就蛋白质而言，区域定义为该蛋白质的氨基酸序列的连续部分。在一些实施方式中，“区域”与生物分子的功能相关。

本文所用的术语“片段”指生物分子的一级结构中物理上连续的部分。就蛋白质而言，部分定义为该蛋白质的氨基酸序列的连续部分，其指至少3-5个氨基酸、至少8-10个氨基酸、至少11-15个氨基酸、至少17-24个氨基酸、至少25-30个氨基酸和至少30-45个氨基酸。就寡核苷酸而言，部分定义为该寡核苷酸的核酸序列的连续部分，其指至少9-15个核苷酸、至少18-30个核苷酸、至少33-45个核苷酸、至少48-72个核苷酸、至少75-90个核苷酸和至少90-130个核苷酸。在一些实施方式中，生物分子的片段具有生物学活性。就本发明而言，AMIGO-2多肽片段不包含SEQ ID NO：2所示完整的AMIGO-2多肽序列。在一些实施方式中，AMIGO-2片段保留了AMIGO-2的一种或多种活性。

本文所用的短语“AMIGO-2相关细胞/肿瘤/样品”等指与非癌性和/或非转移细胞、样品、肿瘤或其它病状相比，特征在于有差别地表达AMIGO-2的细胞、样品、肿瘤或其它病状。在一些实施方式中，与非转移性细胞、样品、肿瘤或其它病状相比，AMIGO-2-相关细胞、样品、肿瘤或其它病状的特征在于AMIGO-2表达增加。

本文所用的术语“抗体”指对于靶蛋白或其片段具有特异性的单克隆抗体和多克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、双功能/双特异性抗体、人源化抗体、人抗体和互补决定区(CDR)-嫁接抗体，还包括抗体片段，包括Fab、Fab’、F(ab)₂、scFv、Fv、骆驼体(camelbody)或微抗体(microantibody)。术语“抗体”还包括体内治疗性抗体基因转移。

本文所用的术语“单克隆抗体”指来自于基本同源的抗体群的抗体，即，组成该群的各抗体是一样的，除了少量存在天然突变外。单克隆抗体是高度特异的，直接针对单一抗原位点。另外，与包含针对不同决定子(表位)的不同抗体的多克隆抗体制品相反，各单克隆抗体只针对抗原上的单一决定子。除了其特异性外，单克隆抗体的优点还在于可以人工合成，从而不会被其它抗体污染。修饰语“单克隆”表示抗体的特征是来自于基本同源的抗体群，不应理解为需要通过任何特定的方法制备抗体。例如，本发明所用的单克隆抗体可通过Kohler等Nature，256：495(1975)首先描述的方法或通过重组DNA方法(参见美国专利号4,816,567)制备。例如，还可采用Clackson等，Nature，352：624-628(1991)和Marks等，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)描述的技术从噬菌体抗体库中分离“单克隆抗体”。

本文的单克隆抗体专门包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于另一抗体类型或亚类的抗体的相应序列一致或同源，而链的其余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类型或亚类的抗体的相应序列一致或同源，以及这种抗体的片段，只要它们形式所需的生物学活性(美国专利号4,816,567；和Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：6851-6855(1984))。本文的感兴趣嵌合抗体包括含有衍生自非人灵长类(如，古猴(Old World Monkey)、猿等)的可变区抗原结合序列和人恒定区序列的“灵长类化”的抗体。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分，在一些实施方式中包含其抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双抗体(diabody)；线性抗体(Zapata等，Protein Eng.8(10)：1057-1062[1995])；单链抗体分子；和抗体片段形成的多特异性抗体。

“完整”的抗体是包含抗原结合可变区以及轻链恒定区(C_L)和重链恒定区C_H1、C_H2和C_H3的抗体。恒定区可以是天然序列恒定区(如人天然序列恒定区)或其氨基酸序列变体。在一些实施方式中，完整抗体具有一种或多种效应功能。

抗体“效应功能”是指抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)所具有的那些生物学活性。抗体效应功能的例子包括C1q结合；补体依赖的细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(如，B细胞受体；BCR)的下调等。

“抗体依赖的细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”指某种形式的细胞毒性，其中分泌的Ig结合到某种细胞毒性细胞(如，天然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)表面的Fc受体(FcR)上，使这些细胞毒性效应细胞与携带抗原的靶细胞特异性结合，随后用细胞毒素杀伤靶细胞。抗体“武装”细胞毒性细胞，这是发挥这种杀伤作用所必须的。介导ADCC的初级细胞，NK细胞只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol.9：457-92(1991)第464页的表3中总结了造血细胞的FcR表达。为了评估感兴趣分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC试验，如美国专利号5,500,362或5,821,337所描述的。可用于这种试验的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。另外，可以体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，如Clynes等，(USA)95：652-656(1998)所描述的。

“人效应细胞”是表达一种或多种FcR并且执行效应功能的白细胞。在一些实施方式中，这些细胞至少表达FcγRIII，并执行ADCC效应功能。能介导ADCC的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和中性粒细胞。可从其天然资源，例如从本文所述的血液或PBMC中分离效应细胞。

术语“Fc受体”或“FcR”用于描述可结合抗体Fc区的受体。在一些实施方式中，FcR是天然序列人FcR。另外，在一些实施方式中，FcR是能结合IgG抗体的受体(γ受体)，包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，其中包括这些受体的等位基因变体和其它剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，氨基酸序列相似，区别主要在其胞浆区。活化受体FcγRIIA在其胞浆区含有免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞浆区含有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)。(参见综述M，见Daron，Annu.Rev.Immunol.15：203-234(1997))。FcR的综述见Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)；Capel等，Immunomethods 4：25-34(1994)；以及de Haas等，J.Lab.Clin.Med.126：330-41(1995)。其它FcR，包括未来可能鉴定的那些，都属于本文术语“FcR”。该术语还包括新生儿受体，FcRn，它负责母体IgG向胎儿转运(Guyer等，J.Immunol.117：587(1976)和Kim等，J.Immunol.24：249(1994))。

“补体依赖的细胞毒性”或“CDC”指有补体存在下分子溶解靶标的能力。通过补体系统的第一组分(C1q)与能与同源抗原形成复合物的分子(如抗体)结合启动补体活化途径。为评估补体活化，可进行CDC试验，如Gazzano-Santoro等，J.Immunol.Methods 202：163(1996)所述。

本文所用的术语“表位”指多肽的抗原决定子。在一些实施方式中，表位可包含该表位独特空间构象的3个或更多个氨基酸。在一些实施方式中，表位可以是线性或构象表位。表位通常包含至少4个、至少6个、至少8个、至少10个和至少12个这种氨基酸。更常见是包含至少8-10个这种氨基酸。本领域已知测定氨基酸空间构象的方法，包括，例如x-射线晶体学和2-维核磁共振。

短语“互补决定区”指一起决定天然免疫球蛋白结合位点中天然Fv区的结合亲和力和特异性的氨基酸序列。参见，例如Chothia等，J Mol Biol 196：901-917(1987)，Kabat等，美国健康与人类服务部(U S Dept of Health andHuman Services)NIH出版号91-3242(1991)。短语“恒定区”指抗体分子中赋予效应功能的那部分。在本发明中，人恒定区取代了小鼠恒定区。目标人源化抗体的恒定区衍生自人免疫球蛋白。重链恒定区可选自5种同种型：α、δ、ε、γ和μ。使抗体人源化的一种方法包括比对非人重链和轻链序列与人重链和轻链序列，依据该比对结果选择并用人框架区替换非人框架区，分子建模来预测人源化序列的构象以及与亲代抗体的构象作比较。在该方法后对CDR区中干扰CDR结构的残基进行反复回突变，直至人源化序列模型的预测构象近似亲代非人抗体的非人CDR的构象。还可衍生这些人源化抗体以促进摄取和清除，例如通过Ashwell受体。参见，例如通过引用纳入本文的美国专利号5,530,101和5,585,089。

可利用各种抗体/免疫球蛋白框架或支架，只要得到的多肽包含至少一个靶蛋白特异性结合区。这些框架或支架包括人免疫球蛋白的5种主要同种型或它们的片段(例如本文它处公开的)，包括其它动物的免疫球蛋白，优选具有人源化部分。在这点上，尤其感兴趣的是单一重链抗体，例如在骆驼中鉴定的那些。本领域技术人员不断发现和开发新型框架、支架和片段。

利用可将本发明CDR嫁接于其上的非免疫球蛋白支架，可产生基于抗体的非免疫球蛋白。可利用已知或其它非免疫球蛋白框架和支架，只要它们包含靶标的特异性结合区。本文将这些化合物称为“包含靶标特异性结合区的多肽”。已知的非免疫球蛋白框架或支架包括但不限于：Adnectins(纤连蛋白)(化合物疗剂公司(Compound Therapeutics，Inc)，沃尔瑟姆，马萨诸塞州)、锚蛋白(分子伴侣公司(Molecular Partners AG)，苏黎世，瑞士)、结构域抗体(domain antibody)(多门提斯有限公司(Domantis，Ltd)，剑桥，马萨诸塞州和阿比耐克斯公司(Ablynx nv)(茨维纳德(Zwijnaarde)，比利时))、脂笼蛋白(安提卡林(Anticalin))(拜恩斯蛋白实验室公司(Piens ProteolabAG)，弗莱兴(Freising)，德国)、小模块免疫药物(small modularimmuno-pharmaceuticals)(特鲁宾医药公司(Trubion Pharmaceuticals Inc)，西雅图，华盛顿州)、麦克西体(maxybody)(阿维迪亚公司(Avidia，Inc)(芒廷维尤(Mountain View)，加利福尼亚州))、A蛋白(亲和体公司(Affibody AG)，瑞典)和亲和蛋白(affilin)(γ-晶体蛋白或泛素)(希尔蛋白质股份有限公司(Scil Proteins GmbH)，哈雷(Halle)，德国)。

(iii)麦克西体/高亲合性聚合体(Avimer)-阿维迪亚公司

高亲合性聚合体衍生自含有天然A-结构域的蛋白，例如LRP-1。这些结构域在其本质上用于蛋白质-蛋白质相互作用，在人类中，250种以上的蛋白质在结构上基于A-结构域。高亲合性聚合体由通过氨基酸接头相连的许多不同“A-结构域”单体(2-10)构成。可采用，例如美国专利公布20040175756、20050053973、20050048512和20060008844所述的方法产生能结合靶抗原的高亲合性聚合体。

术语“拮抗剂”以广义使用，包括部分或完全阻断、抑制或中和本文所述肿瘤细胞抗原的生物学活性的任何分子。同样，术语“激动剂”也以广义使用，包括可模拟本文所述肿瘤细胞抗原的生物学活性的任何分子。合适的激动剂或拮抗剂分子尤其包括激动剂或拮抗剂抗体或抗体片段、肿瘤细胞抗原的片段或氨基酸序列变体、肽、反义寡核苷酸、小有机分子等。鉴定肿瘤细胞抗原的激动剂或拮抗剂的方法包括使表达感兴趣抗原的肿瘤细胞与候选激动剂或拮抗剂分子接触，检测与肿瘤细胞抗原正常相关的一种或多种生物学活性的可检测变化。拮抗剂还可以是通过合理设计或通过噬菌体展示产生的肽(参见，例如1998年8月13日公布的W098/35036)。在一个实施方式中，备选分子是根据抗体的CDR设计的“CDR模拟物”或抗体类似物。虽然这种肽本身是拮抗性的，但该肽任选与细胞毒剂融合以增加或增强该肽的拮抗特性。

本文所用的术语“寡核苷酸”指一系列相连的核苷酸残基。寡核苷酸包括但不限于：反义和siRNA寡核苷酸。寡核苷酸包含DNA序列的一部分，其具有至少约10个核苷酸和最多约500个核苷酸。在一些实施方式中，寡核苷酸包含约10个核苷酸-约50个核苷酸，约15个核苷酸-约30个核苷酸，约20个核苷酸-约25个核苷酸。寡核苷酸可以是化学合成的，其还可用作探针。在一些实施方式中，寡核苷酸是单链的。在一些实施方式中，寡核苷酸包含的至少一部分是双链。在一些实施方式中，寡核苷酸是反义寡核苷酸(ASO)。在一些实施方式中，寡核苷酸是RNA干扰寡核苷酸(RNAi寡核苷酸)。

本文所用的术语“反义寡核苷酸”指具有AMIGO-2多核苷酸序列的互补核苷酸序列的未修饰或修饰核酸，所述AMIGO-2多核苷酸序列包含与AMIGO-2的转录或翻译相关的多核苷酸序列(例如，AMIGO-2多核苷酸的启动子)，其中所述反义寡核苷酸能与AMIGO-2多核苷酸序列杂交。尤其感兴趣的是能在体外或体内抑制AMIGO-2多肽的编码多核苷酸转录和/或翻译的反义寡核苷酸。

本文所用的术语“siRNA寡核苷酸”、“RNAi寡核苷酸”、“短干扰RNA”或“siRNA”可互换使用，指通过转录后基因剪接而起作用的寡核苷酸，也称为RNA干扰(RNAi)。这些术语指能实施RNA干扰“RNAi”的双链核酸分子(参见Kreutzer等，WO 00/44895；Zernicka Goetz等，WO01/36646；Fire，WO 99/32619；Mello和Fire，WO 01/29058)。siRNA分子通常是RNA分子，但也包括化学修饰的核苷酸和非核苷酸。通过将siRNA瞬时转移入细胞进行siRNA基因靶向实验(通过经典方法，例如脂质体-介导的转染、电穿孔或微量注射进行)。siRNA分子是21-到23-核苷酸RNA，含有特征性的2-到3-核苷酸3’突出端类似于正常启动RNAi的长双链RNA(dsRNA)的RNA酶III加工产物。

本文所用的术语“引诱受体”指包含能结合AMIGO-2配体的多肽、模拟物或其它大分子的至少一部分的受体。本文所用的术语“治疗有效量”表示药物的用量，当将治疗有效量的药物给予个体时，可产生医学作用，即观察到该个体中一种或多种临床终末点、癌细胞的生长和/或存活或癌细胞的转移发生降低或逆转。与将不含活性成分的组合物给予类似情况的个体时观察到的作用相比，治疗有效量一般通过它们具有的疗效确定。对于某对象的精确有效量取决于该对象的体形和健康状况、病症的性质和程度以及选择给予的治疗剂和治疗剂组合。然而，常规实验可确定给定状况的有效量，临床医师也可作出判断。

本文所用的术语“组合”或“联用”指联合给予本发明的AMIGO-2调节剂和其它治疗方案。

本文所用的术语“敏感的”指AMIGO-2治疗是可接受的治疗方法的患者，即，可能起阳性反应的患者。在一些实施方式中，与对AMIGO-2治疗不敏感的那些患者相比，对AMIGO-2治疗敏感的癌症患者表达高水平的AMIGO-2。在一些实施方式中，不是AMIGO-2治疗的优良候选对象的癌症患者包括肿瘤样品的癌细胞中缺乏AMIGO-2或其水平较低的癌症患者。在一些实施方式中，相比于AMIGO-2定位于癌细胞的其它区域，较高比例的AMIGO-2定位于细胞膜的患者表明相比于非细胞膜定位的AMIGO-2，这些患者对AMIGO-2治疗的敏感性高于细胞膜定位的AMIGO-2比例较低的那些患者。在一些实施方式中，定位于细胞膜的AMIGO-2与定位于不包括细胞膜的癌细胞其它区域的AMIGO-2之比至少为2∶1表明该患者具有AMIGO-2相关癌症，并对AMIGO-2治疗敏感。在一些实施方式中，定位于细胞膜的AMIGO-2与定位于不包括细胞膜的癌细胞其它区域的AMIGO-2之比至少为3∶1表明该患者具有AMIGO-2相关癌症，并对AMIGO-2治疗敏感。

本文所用的术语“检测”表示建立、发现或确认某活性(例如基因表达)或生物分子(例如多肽)的证据。

“天然序列”多肽是具有与衍生自自然界的多肽相同的氨基酸序列的多肽。这些天然序列多肽可以从自然界分离或可通过重组或合成方法产生。因此，天然序列多肽可具有天然人多肽、鼠科多肽或任何其它哺乳动物多肽的氨基酸序列。

术语“氨基酸序列变体”指所具有的氨基酸序列在一定程度上不同于天然序列多肽的多肽。氨基酸序列变体通常与天然配体的至少一个受体结合区或与天然受体的至少一个配体结合区或其多个配体结合区有至少约70％、至少约80％同源性或至少约90％同源性。氨基酸序列变体在天然氨基酸序列的氨基酸序列内的某些位置具有取代、缺失和/或插入。

本文所用的短语“同源核苷酸序列”或“同源氨基酸序列”或它们的改变形式指特征在于在核苷酸水平或氨基酸水平上具有至少一定百分比的同源性的序列，该短语可与“序列相同性”互换使用。同源核苷酸序列包括编码蛋白质同种型的那些序列。这些同种型可因，例如RNA的另路剪接而在同一生物的不同组织中表达。或者，可由不同基因编码同种型。同源核苷酸序列包括编码除人以外的物种(包括但不限于哺乳动物)的蛋白质的核苷酸序列。同源核苷酸序列还包括但不限于本文所示核苷酸序列的天然等位基因改变和突变。同源氨基酸序列包括含有不超过50(例如，不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、35、40或50)个保守性氨基酸取代的那些氨基酸序列，这些多肽保留天然多肽的至少25％(例如，至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少50％、至少55％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％或100％或更高)结合能力和/或活性。保守性取代通常包括下组内的取代：甘氨酸和丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸和苏氨酸；赖氨酸、组氨酸和精氨酸；以及苯丙氨酸和酪氨酸。

同源氨基酸序列可包括缺乏1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸区段(由两个或更多个氨基酸构成)或不连续的单一氨基酸的氨基酸序列缺失变体。

在一些实施方式中，同源氨基酸序列可含有一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、20个以上)氨基酸插入。

在一些实施方式中，同源氨基酸序列可含有保守性取代、插入和/或缺失。

例如，可通过采用Smith和Waterman算法(Adv Appl Math，1981，2，482-489)的Gap程序(威斯康星序列分析包(Wisconsin Sequence AnalysisPackage)，用于UNIX的8版，遗传学计算机组(Genetics Computer Group)，大学研究园区(University Research Park)，麦迪逊，威斯康星州)，利用默认设置测定同源性或相同性百分比。在一些实施方式中，探针和靶标之间的同源性在约50％-约60％之间。在一些实施方式中，核酸具有与SEQ ID NO：1或其一部分约70％、约80％、约85％、约90％、约92％、约94％、约95％、约97％、约98％、约99％和约100％同源的核苷酸。在一些实施方式中，同源物具有与SEQ ID NO：1相同的活性。在一些实施方式中，同源物与SEQ IDNO：1共有相同的表达分布。

同源性还可以是多肽水平上的。在一些实施方式中，多肽与SEQ IDNO：2或其一部分约60％、约70％、约80％、约85％、约90％、约92％、约94％、约95％、约97％、约98％、约99％和约100％同源。在一些实施方式中，同源物具有与SEQ ID NO：2相同的活性。在一些实施方式中，同源物与SEQ ID NO：2共有相同的表达分布。

本文所用的术语“探针”指长度不同的核酸序列。在一些实施方式中，探针包含至少约10个，最多约6,000个核苷酸。在一些实施方式中，探针包含至少12、至少14、至少16、至少18、至少20、至少25、至少50或至少75个连续核苷酸。探针可用于检测相同、相似或互补的核酸序列。较长的探针通常小天然或重组来源获得，其对靶序列高度特异且与靶标的杂交远慢于寡聚物。探针可以是单链或双链的，其设计成在PCR、基于膜的杂交、原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)或ELISA-样技术中具有特异性。

本文所用的术语“混合”指将一种或多种化合物、细胞、分子等组合在同一区域中的过程。这可在，例如试管、培养皿或能混合一种或多种化合物、细胞或分子的任何容器中进行。

本文所用的术语“分离的”指多核苷酸、多肽、抗体或宿主细胞所处环境不同于该多核苷酸、多肽或抗体天然所处的环境。本领域技术人员熟知分离细胞的方法。分离的多核苷酸、多肽或抗体通常基本上是纯的。

本文所用的术语“基本上纯的”指从其天然环境中取出的化合物(例如，多核苷酸或多肽或抗体)，其至少60％、至少75％和至少90％不含天然与其相连的其它组分。

本文所用的术语“结合”表示两个或多个生物分子或化合物之间的物理或化学相互作用。结合包括离子、非离子、氢键、范德华力、疏水相互作用等。结合可以是直接的，或者通过或因另一生物分子或化合物的作用而间接结合。直接结合指不通过或不因另一分子或化合物的作用，而是没有其它实质性化学中间体即可发生的相互作用。

本文所用的术语“接触”表示直接或间接地将一个分子带至第二分子的物理邻近范围内。所述分子可以是许多缓冲剂、氧、溶液等。“接触”包括，例如将多核苷酸置于含有核酸分子的烧杯、微量滴定板、细胞培养烧瓶或微阵列等中。接触还包括，例如将抗体置于含有多肽的烧杯、微量滴定板、细胞培养烧瓶或微阵列等中。接触可在体内、离体或体外发生。

本文所用的短语“严格杂交条件”或“严格条件”指探针、引物或寡核苷酸与其靶序列杂交但尽可能少地与其它序列杂交的条件。严格条件依赖于序列，并且在不同环境中有区别。较长的序列在较高温度下特异性杂交其合适的互补序列。通常选择的严格条件比确定离子强度和pH下特定序列的解链温度(T_m)约低5℃。T_m是50％与靶序列互补的探针与该靶序列杂交平衡时的温度(确定的离子强度、pH和核酸浓度下)。由于靶序列通常过量存在，在T_m下，平衡时有50％的探针与它们的互补序列杂交。严格条件通常是盐浓度低于约1.0M钠离子，通常是约0.01-1.0M钠离子(或其它盐)，pH7.0-8.3，对于短探针、引物或寡核苷酸(例如10-50个核苷酸)，温度至少约30℃，对于较长的探针、引物或寡核苷酸，温度至少约60℃。还可加入去稳定剂，例如甲酰胺以获得严格条件。

本文所用的术语“中等严格条件”指探针、引物或寡核苷酸与其靶序列杂交但也与少量其它序列杂交的条件。中等严格条件依赖于序列，并且在不同环境中有区别。本领域技术人员熟知中等条件，其描述于Maniatis等(Molecular Cloning：A Laboratory Manual(分子克隆：实验室手册)，冷泉港实验室，第2版(1989年12月))，等等。

本文所述的核酸组合物可用于，例如，制备多肽，用作检测生物学样品(例如，人细胞提取物)中的mRNA或从这种样品产生的cDNA的探针，产生额外拷贝的多核苷酸序列，产生核酶或寡核苷酸(单链和双链)，用作单链DNA探针或形成三链的寡核苷酸(triple-strand forming oligonucleotide)。本文所述的探针可用于，例如测定样品中是否存在本文提供的多核苷酸。这些多肽可用于产生癌症相关多肽的特异性抗体，进而可用于本文详细讨论的诊断方法、预后方法等。多肽还可用作治疗干预的靶标，如本文详细讨论的。本发明抗体还可用于，例如纯化、检测和靶向本发明多肽，包括在体外和体内诊断和治疗方法中。例如，这些抗体可用于免疫测定来定性和定量检测生物学样品中本发明多肽的水平。参见，例如Harlow等，Antibodies：A Laboratory Manual(抗体：实验室手册)，(冷泉港实验室出版社，第2版，1988)。下文详细描述了这些和其它应用。

本文所用的术语“显像剂”指与本发明抗体、小分子或探针相连的组合物，其可用本领域技术人员已知的技术检测。本文所用的术语“基因表达的证据”指基因表达的任何可检测的标记。

术语“药学上可接受的载体”指给予治疗剂，例如抗体或多肽、基因和其它治疗剂的载体。该术语指本身不诱导对接受组合物的个体有害的抗体产生并且可以给予而不产生过度毒性的任何药物载体。合适的载体可以是大的、代谢缓慢的大分子，例如蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、多聚氨基酸、氨基酸共聚物、脂质聚集物和灭活的病毒颗粒。本领域技术人员熟知这些载体。治疗组合物中药学上可接受的载体可包括液体，例如水、盐水、甘油和乙醇。这些载体中也可存在辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。

本发明方法和组合物可治疗的癌症的具体例子包括但不限于AMIGO-2相关癌症。与非癌性细胞相比，本文所用的“AMIGO-2相关癌症”指特征在于有差别地表达AMIGO-2的细胞的癌症。本发明还适用于AMIGO-2在以下方面起作用的任何肿瘤细胞类型：染色体稳定性、激酶活性、致瘤性、转移性、信号传导、细胞黏着、凋亡、底物磷酸化、细胞生长、肿瘤形成、细胞周期蛋白产生、细胞增殖、细胞周期调节、癌细胞生长、癌细胞存活、依赖于贴壁的生长和血管发生、细胞迁移、细胞-细胞相互作用等。

在一些实施方式中，所述癌症是肺癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌或胰腺癌，或癌症转移。在一些实施方式中，所述癌症是肺癌或结肠癌。在一些实施方式中，所述癌症是除胃癌以外的癌症。在一些实施方式中，与对照相比，这些癌症显示AMIGO-2表达有至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约100％、至少约150％、至少约200％或至少约300％不同。

本发明提供用于治疗、抑制和控制AMIGO-2过度表达相关疾病和病症以及治疗、抑制和控制这些疾病和病症的症状的方法和组合物。本发明的一些实施方式涉及方法和组合物，包括治疗、抑制或控制癌症的组合物，包括但不限于：癌症转移、癌细胞存活、癌细胞增殖、癌细胞生长、细胞周期调节、血管发生和癌细胞侵袭性。

本发明还提供包括将其它活性成分与本发明AMIGO-2调节剂组合的方法。在一些实施方式中，这些方法还包括将一种或多种常规癌症疗剂给予患者。在一些实施方式中，本发明方法还包括用化疗、放疗或外科手术中的一种或多种治疗患者。

本发明还提供治疗、抑制和控制对目前的或标准癌症治疗，例如外科手术、化疗、放疗、激素疗法和生物疗法部分或完全难治的癌症或其它过度增生性细胞病症或疾病的方法和组合物。

本发明还提供利用本发明AMIGO-2调节剂，特别是AMIGO-2抗体诊断癌症和/或预测癌症进展的诊断和/或显像方法。在一些实施方式中，本发明方法提供显像和定位肿瘤和/或转移的方法和诊断及预后方法。在一些实施方式中，本发明方法提供评估AMIGO-2-相关治疗的适当性和/或效力的方法。

AMIGO-2调节剂

本发明提供AMIGO-2调节剂来治疗、诊断、检测或显像癌症。AMIGO-2调节剂还可用于制备治疗癌症的药物。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是AMIGO-2抑制剂。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是核苷酸、小分子、模拟物、引诱物或抗体。在一些实施方式中AMIGO-2调节剂是分离双链RNA(dsRNA)；含有选自SEQ ID NO：7-16所构成组的序列中至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；结合选自下组的AMIGO-2结构域中表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；小分子；模拟物；可溶性受体；或引诱物。在一些实施方式中，结合AMIGO-2结构域中表位的抗体不与除AMIGO-2以外的多肽特异性结合。例如，在一些实施方式中，抗体片段不与AMIGO-1或AMIGO-3特异性结合。

在一些实施方式中，与对照相比，AMIGO-2调节剂可将AMIGO-2活性抑制至少25％、50％、75％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或100％。在一些实施方式中，与对照相比，AMIGO-2调节剂将LIV-1表达抑制至少25％、50％、75％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或100％。

抗体

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体、单链抗体或Fab片段。可以，例如酶放射性同位素或荧光团标记抗体或Fab片段。在一些实施方式中，抗体或Fab片段不与除AMIGO-2以外的多肽特异性结合。例如，在一些实施方式中，抗体或Fab片段不与AMIGO-1或AMIGO-3特异性结合。在一些实施方式中，抗体或Fab片段对AMIGO-2以外的多肽的结合亲和力小于约1×10⁵Ka。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是以至少1×10⁸Ka的结合亲和力结合AMIGO-2多肽的单克隆抗体。

本发明还提供竞争性抑制某抗体与本发明表位结合的抗体，所述竞争性抑制通过本领域已知的采用，例如免疫试验来测定竞争性结合的任何方法测定。在一些实施方式中，该抗体将与表位的结合竞争性抑制至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％或至少50％。

在一些实施方式中，抗体是人源化抗体。可通过各种方法获得人源化抗体，所述方法包括，例如(1)将非人互补决定区(CDR)嫁接到人框架区和恒定区上(本领域称为“人源化”的方法)，或者(2)移植完整的非人可变区，但通过替代表面残基用人-样表面“掩盖”它们(本领域称为“镶面(veneering)”的方法)。在本发明中，人源化抗体包括“人源化”和“镶面”的抗体。类似地，可将人免疫球蛋白基因座引入内源性免疫球蛋白基因被部分或完全灭活的转基因动物，例如小鼠来制造人抗体。激发后，观察到人抗体产生，在所有方面，包括基因重排、装配和抗体谱均类似于在人中所见。该方法描述于，例如美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016和以下科学出版物中：Marks等，Bio/Technology 10，779-783(1992)；Lonberg等，Nature 368856-859(1994)；Morrison，Nature 368，812-13(1994)；Fishwild等，Nature Biotechnology 14，845-51(1996)；Neuberger，Nature Biotechnology 14，826(1996)；Lonberg和Huszar，Intern.Rev.Immunol.1365-93(1995)；Jones等，Nature321：522-525(1986)；Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci，U.S.A.，81：6851-6855(1984)；Morrison和Oi，Adv.Immunol.，44：65-92(1988)；Verhoeyer等，Science 239：1534-1536(1988)；Padlan，Molec.Immun.28：489-498(1991)；Padlan，Molec.Immunol.31(3)：169-217(1994)；和Kettleborough，C.A.等，Protein Eng.4(7)：773-83(1991)，各篇文献通过引用纳入本文。

本发明抗体可通过不同机制起作用。在一些实施方式中，抗体触发依赖抗体的细胞毒性(ADCC)，一种对抗体所靶向的细胞的裂解攻击。在一些实施方式中，抗体具有多种治疗功能，包括例如，抗原结合，诱导凋亡和依赖补体的细胞毒性(CDC)。在一些实施方式中，抗体与毒素或放射性核素偶联。

在一些实施方式中，本发明抗体可用作AMIGO-2拮抗剂。例如，在一些实施方式中，本发明提供部分或完全干扰受体/配体与本发明多肽相互作用的抗体。在一些实施方式中，本发明抗体结合本文公开的表位或其一部分。在一些实施方式中，与没有抗体存在下的活性相比，提供的抗体能将配体活性或受体活性调节至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％或至少50％。

在一些实施方式中，本发明提供中和抗体。中和抗体结合感染性物质，例如病毒或细菌，如癌症相关病毒或细菌(如JC多瘤病毒、EB病毒或幽门螺杆菌(Helicobacter pylori))。在一些实施方式中，中和抗体能有效用作受体拮抗剂，即，抑制配体介导受体活化的所有或部分生物学活性。在一些实施方式中，可将抗体指定为生物学活性(包括本文公开的本发明肽特定生物学活性)的激动剂、拮抗剂或反向激动剂。

在一些实施方式中，抗体抑制选自下组的一种或多种AMIGO-2活性：染色体稳定性、激酶活性、致瘤性、转移性、信号传导、细胞黏着、细胞凋亡、底物磷酸化、癌细胞生长、肿瘤形成、细胞周期蛋白产生、细胞增殖、通过细胞周期的进展(例如，进展至细胞周期的G2/M期)、依赖贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用和血管发生，等等。

在一些实施方式中，AMIGO-2抗体抑制生长和存活途径，例如活化EGFR和突变β连环蛋白介导的那些途径。在一些实施方式中，AMIGO-2抗体抑制(例如，抑制mRNA或蛋白质表达)细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白B1、c-Myc、c-Jun、FosL1、胞外信号调节激酶(ERK)、血管内皮生长因子(VEGF)、尿激酶和聚ADP核糖聚合酶1(PARP1)中的一种或多种。调节VEGF和尿激酶还表明Amigo-2在血管发生中的作用。在一些实施方式中，AMIGO-2抗体调节癌细胞运动性并影响癌症转移。

在一些实施方式中，AMIGO-2抗体调节立即早期基因和包含立即早期基因的途径。例如，AMIGO-2抗体调节cFosL1、E2F1、ELK1、JNK、MEKK、SAPK1p38、细胞周期D、c-Jun、c-fos、c-myc、JE、KC、junB和BTG2中的一种或多种以及相关途径。

本发明抗体可单独使用或可与其它组合物联用。这些抗体还可与异源多肽在N-或C-末端重组融合或化学偶联于(包括共价和非共价偶联)多肽或其它组合物。例如，本发明抗体可重组融合或偶联于可用作检测试验标记的分子和效应分子，例如异源多肽、药物、放射性核素或毒素。参见，例如PCT公布WO 92/08495；WO 91/14438；WO 89/12624；美国专利号5,314,995和EP 396,387。

除嵌合和人源化抗体外，完全人抗体可衍生自具有人免疫球蛋白基因的转基因小鼠(参见，例如美国专利号6,075,181；6,091,001和6,114,598，所有均通过引用纳入本文)，或衍生自人免疫球蛋白基因的噬菌体展示文库(参见，例如McCafferty等，Nature，348：552-554(1990)；Clackson等，Nature，352：624-628(1991)；和Marks等，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991))。在一些实施方式中，可通过scFv-噬菌体展示文库产生和鉴定抗体。可从商业来源，例如魔弗希斯公司(Morphosys)获得抗体噬菌体展示技术。

可采用Kohler等((1975)Nature 256495-496)的方法获取改进方法制备单克隆抗体。通常用含有抗原的溶液免疫小鼠。可通过在盐水，一些实施方式中在佐剂，例如完全弗氏佐剂中混合或乳化含抗原的溶液，然后胃肠外注射该混合物或乳液来进行免疫。可用本领域已知的任何免疫方法获得本发明的单克隆抗体。免疫动物后，取出脾脏(任选取出几个大的淋巴结)，解离成单细胞。可将细胞悬液施加于包被了感兴趣抗原的平板或孔上来筛选脾细胞。表达抗原特异性的膜结合免疫球蛋白的B细胞与平板结合而不会洗去。然后诱导得到的B细胞或所有解离的脾细胞与骨髓瘤细胞融合以形成杂交瘤，在选择性培养基中培养。通过连续或有限稀释接种得到的细胞，检验特异性结合感兴趣抗原(不结合无关抗原)的抗体产生。然后体外(例如，在组织培养瓶或中空纤维反应器中)或体内(作为小鼠的腹水)培养选择的分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤。

作为用杂交瘤表达的备选方法，可以用诸如CHO或骨髓瘤细胞系等细胞系产生抗体，如各自通过引用纳入本文的美国专利号5,545,403；5,545,405和5,998,144所述。简言之，用分别能表达轻链和重链的载体转染细胞系。通过在不同的载体上转染两种蛋白质，可产生嵌合抗体。Immunol.147：8；Banchereau等，(1991)Clin.Immunol.Spectrum 3：8；和Banchereau等，(1991)Science 251：70；均通过引用纳入本文。

还可采用本领域已知的技术产生人抗体，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom和Winter，J Mol Biol，227：381(1991)；Marks等，J Mol Biol，222：581(1991))。还可采用Cole等和Boerner等的技术制备人单克隆抗体(Cole等，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy(单克隆抗体和癌症治疗)，ARL公司(Alan R.Liss)，第77页(1985)和Boerner等，J.Immunol.，147(1)：8695(1991))。可通过各种方法获得人源化抗体，所述方法包括，例如(1)将非人互补决定区(CDR)嫁接到人框架区和恒定区上(本领域称为“人源化”的方法)，或者(2)移植完整的非人可变区，但通过替代表面残基用人-样表面“掩盖”它们(本领域称为“镶面”的方法)。在本发明中，人源化抗体包括“人源化”和“镶面”的抗体。类似地，可将人免疫球蛋白基因座引入内源性免疫球蛋白基因被部分或完全灭活的转基因动物，例如小鼠来制造人抗体。激发后，观察到人抗体产生，在所有方面，包括基因重排、装配和抗体谱均类似于在人中所见。该方法描述于，例如美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016和以下科学出版物中：Marks等，Bio/Technology 10，779-783(1992)；Lonberg等，Nature 368856-859(1994)；Morrison，Nature 368，812-13(1994)；Fishwild等，Nature Biotechnology 14，845-51(1996)；Neuberger，Nature Biotechnology14，826(1996)；Lonberg和Huszar，Intern.Rev.Immunol.13 65-93(1995)；Jones等，Nature 321：522-525(1986)；Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci，U.S.A.，81：6851-6855(1984)；Morrison和Oi，Adv.Immunol.，44：65-92(1988)；Verhoeyer等，Science 239：1534-1536(1988)；Padlan，Molec.Immun.28：489-498(1991)；Padlan，Molec.Immunol.31(3)：169-217(1994)；和Kettleborough，C.A.等，Protein Eng.4(7)：773-83(1991)，各篇文献通过引用纳入本文。可利用商业来源，例如魔弗希斯公司(Martinsned/Planegg，德国)，在筛选试验中鉴定完全人源化的抗体。

可利用经工程改造而含有人免疫球蛋白基因座的转基因动物产生人抗体。例如，WO 98/24893公开了具有人IgG基因座的转基因动物，其中所述动物因内源性重链和轻链基因座灭活而不产生内源性功能免疫球蛋白。WO 91/10741还公开了能对免疫原产生免疫应答的转基因非灵长类哺乳动物宿主，其中抗体具有灵长类恒定区和/或可变区，其中编码内源性免疫球蛋白的基因座被取代或灭活。WO 96/30498公开了利用Cre/Lox系统修饰哺乳动物的免疫球蛋白基因座，例如替代所有或部分恒定区或可变区以形成修饰的抗体分子。WO 94/02602公开了具有灭活的内源性Ig基因座和功能性人Ig基因座的非人哺乳动物宿主。美国专利号5,939,598公开了制备转基因小鼠的方法，该小鼠缺乏内源性重链，表达含一个或多个异基因恒定区的外源性免疫球蛋白基因座。还可采用通过引用纳入本文的美国专利号5,766,886所述的人工程改造技术产生本发明抗体。

利用上述转基因动物可产生免疫应答，从而能在先额抗原性分子，可从动物中取出产生抗体的细胞并用于产生分泌人单克隆抗体的杂交瘤。本领域已知免疫方案、佐剂等，可用于免疫，例如WO 96/33735所述的转基因小鼠。可检验单克隆抗体抑制或中和相应蛋白质的生物学活性或生理学作用的能力。

可通过Fang等(2005)，Nat Biotechnol 23，584-590所述的体内治疗性抗体基因转移将本发明抗体给予对象。例如，可产生重组载体以递送多顺反子表达盒，所述重组载体在Mab重链和轻链编码序列之间含有介导多肽的酶不依赖性共翻译自身切割的肽。表达产生化学计量量的两种Mab链。在一些实施方式中，介导酶不依赖性共翻译自身切割的肽是口蹄疫衍生的2A肽。

抗体片段适用于本发明方法，只要它们保留全长抗体的所需亲和力。因此，抗-AMIGO-2抗体的片段保留结合AMIGO-2的能力。这些片段的特征在于类似于相应的全长抗-AMIGO-2抗体的特性。即这些片段特异性结合表达于人细胞表面的人AMIGO-2抗原。

在一些实施方式中，这些抗体特异性结合AMIGO-2胞外域中的一种或多种表位。在一些实施方式中，这些抗体调节一种或多种AMIGO-2相关生物学活性。在一些实施方式中，这些抗体抑制激酶活性、致瘤性、转移性、AMIGO-2信号传导、AMIGO-2介导细胞黏着、癌细胞凋亡、ERK磷酸化、细胞生长、肿瘤形成、细胞周期蛋白产生、细胞增殖、通过细胞周期进展、不依赖贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种相互作用和血管发生，等等中的一种或多种。

在一些实施方式中，这些抗体是特异性结合选自下组的AMIGO-2结构域中一种或多种AMIGO-2表位的单克隆抗体或Fab片段：信号肽结构域、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、IgV-组结构域和Ig结构域。信号肽结构域大致是SEQ ID NO：2的氨基酸1-33；LRR-N-末端(LRR-NT)结构域大致是SEQ ID NO：2的氨基酸41-60；LRR1结构域大致是SEQ ID NO：2的氨基酸69-92；LRR2结构域大致是氨基酸94-116；LRR3结构域大致是氨基酸118-140；LRR4结构域大致是氨基酸142-164；LRR5结构域大致是167-191；LRR6结构域大致是氨基酸193-216；LRR-C-末端(LRR-CT)结构域大致是氨基酸222-282；Ig V-组结构域大致是293-388；AMIGO-2的Ig结构域在V-组结构域，大致是氨基酸303-365。在一些实施方式中，这些抗体是特异性结合AMIGO-2的信号肽中一个或多个表位的单克隆抗体。在一个实施方式中，所述抗体不与非AMIGO-2表位的表位特异性结合。例如，在一个实施方式中，所述抗体不与AMIGO-2表位或AMIGO-3表位特异性结合。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的LRRNT结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的LRR1结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。在一些实施方式中，所述LRR1表位选自SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：57。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的LRR2结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。在一些实施方式中，所述LRR2表位选自SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：39或SEQ ID NO：61。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的LRR3结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。在一些实施方式中，所述LRR3表位选自SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQID NO：56或SEQ ID NO：58。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的LRR4结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。在一些实施方式中，所述LRR4表位选自SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：35或SEQ ID NO：45。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的LRR5结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。在一些实施方式中，所述LRR5表位选自SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：36或SEQID NO：53。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的LRR6结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。在一些实施方式中，所述LRR6表位选自SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：41、SEQID NO：46、SEQ ID NO：47或SEQ ID NO：62。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的LRRCT结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。在一些实施方式中，所述LRRCT表位选自SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ IDNO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：62。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的Ig V-组结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的Ig结构域的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合AMIGO-2的胞外域(ECD)的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合基本上由SEQ ID NO：3所构成序列的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。

本发明的合适抗体可识别线性或构象表位，或它们的组合。在一些实施方式中，本发明抗体结合选自SEQ ID NO：3-6或SEQ ID NO：25-62的AMIGO-2中抗原性区域的表位。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是特异性结合基本上由SEQ ID NO：3所构成序列的一种或多种表位的单克隆抗体或Fab片段。在一些实施方式中，抗体对具有SEQ ID NO：3所示序列的表位有特异性。

应该知道这些肽不一定精确地表示一种表位的图谱，而是还可包含不具有免疫原性的AMIGO-2序列。

本领域技术人员熟知预测本发明抗体可结合的潜在表位的方法，包括但不限于：Kyte-Doolittle分析(Kyte，J.和Dolittle，R.F.，J.Mol.Biol.(1982)157：105-132)、Hopp和Woods分析(Hopp，T.P.和Woods，K.R.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1981)78：3824-3828；Hopp，T.J.和Woods，K.R.，Mol.Immunol.(1983)20：483-489；Hopp，T.J.，J.Immunol.Methods(1986)88：1-18.)、Jameson-Wolf分析(Jameson，B.A.和Wolf，H.，Comput.Appl.Biosci.(1988)4：181-186.)和Emini分析(Emini，E.A.，Schlief，W.A.，Colonno，R.J.和Wimmer，E.，Virology(1985)140：13-20)。在一些实施方式中，通过测定理论胞外域鉴定潜在的表位。可采用诸如TMpred(参见K.Hofmann和W.Stoffel(1993)TMbase-A database of membrane spanningproteins segments(TM基础-一种跨膜蛋白质区段的数据库)Biol.Chem.Hoppe-Seyler 374，166)或TMHMM(A.Krogh，B.Larsson，G.von Heijne和E.L.L.Sonnhammer.，Predicting transmembrane protein topology with ahidden Markov model：Application to complete genomes(用隐马尔科夫模型预测跨膜蛋白质拓扑学：完整基因组的应用).Journal of Molecular Biology，305(3)：567-580，2001年1月)的分析算法作出这种预测。可采用其它算法，例如SignalP 3.0(Bednsten等，(2004)J Mol Biol.2004年7月16日；340(4)：783-95)预测信号肽的存在并预测那些肽在何处从全长蛋白质上切下。蛋白质的胞外部分可用作抗体相互作用的靶标。

如果：1)抗体显示阈值水平的结合活性，和/或2)它们不与已知的相关多肽分子明显交叉反应，则将这些抗体定义为“特异性结合”。本领域技术人员不难测定抗体的结合亲和力，例如可通过Scatchard分析(Scatchard，Ann.NY Acad.Sci.51：660-672，1949)。在一些实施方式中，对于靶癌症相关多肽，本发明抗体结合它们的靶表位或模拟引诱物比结合AMIGO家族的其它已知成员(例如，AMIGO-1和AMIGO-3)高至少1.5-倍、2-倍、5-倍、10-倍、100-倍、10³-倍、10⁴-倍、10⁵-倍、10⁶-倍或更高。

在一些实施方式中，这些抗体的结合亲和力为10^-4M或不到、10^-7M或不到、10^-9M或不到或亚纳摩尔(subnanomolar)的亲和力(0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1nM或更低)。在一些实施方式中，这些抗体对AMIGO-2的结合亲和力是至少1×10⁶Ka。在一些实施方式中，这些抗体对AMIGO-2的结合亲和力是至少5×10⁶Ka、至少1×10⁷Ka、至少2×10⁷Ka、至少1×10⁸Ka或更高。还可借鉴本发明多肽的结合亲和力描述或说明本发明抗体。在一些实施方式中，结合亲和力包括低于5×10^-2M、10^-2M、5×10^-3M、10^-3M、5×10^-4M、10^-4M、5×10^-5M、10^-5M、5×10^-6M、10^-6M、5×10^-7M、10^-7M、5×10^-8M、10^-8M、5×10^-9M、10^-9M、5×10^-10M、10^-10M、5×10^-11M、10^-11M、5×10^-12M、10^-12M、5×10^-13M、10^-13M、5×10^-14M、10^-14M、5×10^-15M、or 10^-15M过更低的K_d。

在一些实施方式中，采用标准蛋白质印迹分析(Ausubel等，CurrentProtocols in Molecular Biology(最新分子生物学方法)，1994)，本发明抗体不结合已知的相关多肽分子，例如如果它们结合AMIGO-2多肽则不结合已知的相关多肽。已知的相关多肽的例子包括但不限于AMIGO家族的其它成员(例如，AMIGO-1和AMIGO-3)。

在一些实施方式中，本发明抗体结合AMIGO-2的直向同源物、同源物、侧向同源物或变体，或它们的组合和亚组合(subcombination)。在一些实施方式中，本发明抗体结合AMIGO-2的直向同源物。在一些实施方式中，本发明抗体结合AMIGO-2同源物。AMIGO-2的同源物指已知的AMIGO-2-相关蛋白质，包括AMIGO-1和AMIGO-3。在一些实施方式中，本发明抗体结合AMIGO-2的侧向同源物。在一些实施方式中，本发明抗体结合AMIGO-2的变体。在一些实施方式中，本发明抗体不结合AMIGO-2的直向同源物、同源物、侧向同源物或变体，或它们的组合和亚组合。

在一些实施方式中，可用已知的相关多肽筛选抗体以分离特异性结合AMIGO-2多肽的抗体群。例如，在合适的缓冲条件下，使人AMIGO-2多肽的特异性抗体流过包含粘附在不可溶基质上的AMIGO蛋白质(除AMIGO-2外)的柱子。这种筛选能分离与紧密相关的多肽不具交叉反应性的多克隆和单克隆抗体(Antibodies：A Laboratory Manual(抗体：实验室手册)，Harlow和Lane(编)，冷泉港实验室出版社，1988；Current Protocols inImmunology(最新免疫学方法)，Cooligan等(编)，国家卫生研究院，约翰威利父子公司(John Wiley and Sons，Inc.)，1995)。本领域熟知如何筛选和分离特定抗体(参见，Fundamental Immunology(基础免疫学)，Paul(编)，雷文出版社(Raven Press)，1993；Getzoff等，Adv.in Immunol.43：1-98，1988；Monoclonal Antibodies：Principles and Practice(单克隆抗体：原理和实践)，Goding，J.W.(编)，学术出版社有限公司(Academic Press Ltd.)，1996；Benjamin等，Ann.Rev.Immunol.2：67-101，1984)。这些试验的代表性例子包括：并行免疫电泳(concurrent immunoelectrophoresis)、放射免疫测定(RIA)、放射免疫沉淀、酶联免疫吸附测定(ELISA)、斑点印迹或蛋白质印迹、抑制或竞争试验和夹心试验。

在一些实施方式中，本发明抗体不与选自SEQ ID NO：63(AMIGO-1)或SEQ ID NO：64(AMIGO-3)的序列内的表位特异性结合。在一些实施方式中，这些抗体或Fab片段不与AMIGO-1或AMIGO-3交叉反应。

本发明还提供靶蛋白特异性的SMIP或结合区免疫球蛋白融合蛋白。这些构建物是包含与实施抗体效应功能所需的免疫球蛋白结构域融合的抗原结合结构域的单链多肽。参见，例如WO03/041600；美国专利公布20030133939和美国专利公布20030118592。

在一些实施方式中，本发明抗体是中和抗体。在一些实施方式中，这些抗体是寻靶抗体。在一些实施方式中，这些抗体在结合靶标后被内在化。在一些实施方式中，这些抗体在结合靶标后未被内在化，而是维持在表面。

在一些实施方式中，这些中和抗体不具有任何效应功能。或者，中和抗体可具有效应功能。

可以筛选本发明抗体在结合所研究的肿瘤细胞抗原后被快速内在化的能力，或在结合后维持在表面的能力。在一些实施方式中，例如，在一些类型的免疫偶联物构建中，如果内在化是释放毒素部分所需，则抗体能被内在化可能是理想的。或者，如果将抗体用于促进ADCC或CDC，则该抗体最好维持在细胞表面。可采用筛选方法区分这些性能类型。例如，在冰上(含0.1％叠氮化钠以阻断内在化)或37℃(不含叠氮化钠)，将细胞与浓度约1μg/mL的人IgG(对照抗体)或本发明抗体之一温育3小时的情形下，可利用携带肿瘤细胞抗原的细胞。然后用冷的染色缓冲液(PBS+1％BSA+0.1％叠氮化钠)洗涤细胞，在冰上用山羊抗-人IgG-FITC染色30分钟。用FACS Calibur记录几何平均荧光强度(MFI)。如果在冰上有叠氮化钠存在下与本发明抗体温育的细胞与37℃没有叠氮化钠存在下的细胞之间未观察到MFI有差异，则怀疑该抗体维持与细胞表面结合，而不是被内在化。然而，如果当细胞在37℃没有叠氮化钠存在下温育时发现表面可染色抗体减少，则怀疑该抗体能内在化。

抗体偶联物

在一些实施方式中，本发明抗体是偶联的。在一些实施方式中，偶联的抗体可用于癌症治疗、癌症诊断或癌细胞显像。

对于诊断应用，通常用可检测部分标记抗体。通常可将许多可用的标记物分成以下类别：

(a)放射性核素，例如下文所述那些。例如，可采用Current Protocols inImmunology(最新免疫学方法)，第1和2卷，Coligen等编，WI公司(Wiley-Interscience)，纽约，纽约州，出版(1991)中所述的技术以放射性同位素标记抗体，可采用闪烁计数法检测放射性。

(b)可利用荧光标记物，例如稀土螯合剂(铕螯合剂)或荧光及其衍生物，罗丹明及其衍生物、丹酰、丽丝胺(Lissamine)、藻红蛋白和德克萨斯红(Texas Red)。例如，可采用“最新免疫学方法”(同上)中所述的技术将荧光标记物偶联于抗体。可利用荧光计定量测定荧光。

(c)可利用各种酶-底物标记物，美国专利号4,275,149总结了其中一些。酶通常催化生色底物的化学改变，从而可用各种技术检测。例如，酶可催化底物的颜色改变，从而可透过分光光度法检测。或者，酶可改变底物的荧光或化学发光。上文描述了定量测定荧光变化的技术。可通过化学反应电激发化学发光底物，然后可检测(例如利用化学冷光测量计(chemiluminometer))发出的光或者将能量递送至荧光接受体。酶标记物的例子包括萤光素酶(例如，萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶；美国专利号4,737,456)、荧光素、2，3-二氢酞嗪二酮类(dihydrophthalazinediones)、苹果酸脱氢酶、过氧化物酶，例如辣根过氧化物酶(HRPO)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(例如，尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)、乳酸过氧化物酶、微过氧化物酶，等等。O′Sullivan等，Methodsfor the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in EnzymeImmunoassay(制备用于酶免疫测定的酶-抗体偶联物的方法)，刊于Methodsin Enzym(酶学方法).(J.Langone和H.Van Vunakis编)，学术出版社，纽约，73：147-166(1981)中描述了将酶与抗体偶联的技术。

这些抗体还可用于体内诊断试验。在一些实施方式中，可用放射性核素标记这些抗体，从而可采用免疫闪烁照相术(immunoscintiography)定位肿瘤。为方便起见，可利用试剂盒，即预定量试剂与实施诊断试验的使用说明书的包装组合来提供本发明抗体。如果用酶标记抗体，该试剂盒可装有底物和酶所需的辅因子(例如，提供可检测生色团或荧光团的底物前体)。此外，可装有其它添加剂，例如稳定剂、缓冲剂(例如，封闭缓冲剂或裂解缓冲剂)等。可大幅度地改变各种试剂的相对量，从而提供的试剂溶液浓度能实质性优化试验灵敏度。特别是，诸试剂可作为干粉提供，通常是冻干的并包含赋形剂，从而在溶解后能提供浓度合适的试剂溶液。

在一些实施方式中，抗体与一种或多种美登素(maytansine)分子偶联(例如，每个抗体分子约1-约10个美登素分子)。可以将美登素，例如转化为May-SS-Me，其可还原为May-SH3并与修饰的抗体反应(Chari等，CancerResearch 52：127-131(1992))以产生美登素-抗体免疫偶联物。在一些实施方式中，所述偶联物可以是高度强效的美登素衍生物DM1(N2’-脱乙酰基-N2’-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素)(参见，例如2002年12月12日公布的WO02/098883)，其IC50约为10-11M(综述可参见Payne(2003)Cancer Cell3：207-212)，或DM4(N2′-脱乙酰基-N2′(4-甲基-4-巯基-1-氧代戊基)-美登素)(参见，例如2004年12月2日公布的WO2004/103272)。

在一些实施方式中，所述抗体偶联物包含与一个或多个刺孢霉素(calicheamicin)分子偶联的抗肿瘤细胞抗原抗体。亚-皮摩尔浓度的抗体刺孢霉素家族能导致双链DNA断裂。可用的刺孢霉素结构类似物包括但不限于：γ1I、α2I、α3I、N-乙酰基-γ1I、PSAG和θI1(Hinman等，Cancer Research53：3336-3342(1993)和Lode等，Cancer Research 58：2925-2928(1998))。还可参见美国专利号5,714,586；5,712,374；5,264,586和5,773,001，这些专利通过引用专门纳入本文。

在一些实施方式中，所述抗体偶联于前药，所述前药能通过许多癌症中过度产生的酶而释放其活性形式。例如，可用阿霉素的前药形式制备抗体偶联物，其中纤溶酶将活性组分从该偶联物中释放。纤溶酶已知在许多癌性组织中过度产生(参见Decy等，(2004)FASEB Journal 18(3)：565-567)。

在一些实施方式中，这些抗体偶联于酶促活性毒素及其片段。在一些实施方式中，所述毒素包括但不限于：白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、假单胞菌内毒素、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒素A链、α-抑酶、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白(Phytolaca americana protein)(PAPI、PAPII和PAP-S)、核糖核酸酶(RNA酶)、脱氧核糖核酸酶(DNA酶)、商陆抗病毒蛋白、苦瓜素抑制剂(momordica charantia inhibitor)、泻果素、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制剂(sapaonaria officinalis inhibitor)、白树毒素、米托洁林、局限曲菌素、酚霉素、新霉素和单端孢菌毒素(tricothecene)。参见，例如1993年10月28日公布的WO 93/21232。在一些实施方式中，毒素固有的免疫原性低，其作用机制(例如，细胞毒性机制与细胞抑制机制)能降低癌细胞对该毒素耐受的机会。

在一些实施方式中，可在本发明抗体与免疫调节剂之间形成偶联物。例如，在一些实施方式中，可用免疫刺激性寡核苷酸。这些分子能激发抗原特异性抗体应答的高效免疫原(参见Datta等，(2003)Ann N.Y.Acad.Sci1002：105-111)。其它免疫刺激性化合物包括干细胞生长因子，如“S1因子”，淋巴毒素，如肿瘤坏死因子(TNF)，造血因子，如白介素，集落刺激因子(CSF)，如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，干扰素(IFN)，如干扰素α或γ，红细胞生成素和血小板生成素。

一些实施方式提供放射性偶联的抗体。在一些实施方式中，可利用³²P、³³P、⁴⁷Sc、⁵⁹Fe、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁷⁵Se、⁷⁷As、⁸⁹Sr、⁹⁰Y、⁹⁹Mo、¹⁰⁵Rh、¹⁰⁹Pd、¹²⁵I、¹³¹I、¹⁴²Pr、¹⁴³Pr、¹⁴⁹Pm、¹⁵³Sm、¹⁶¹Th、¹⁶⁶Ho、¹⁶⁹Er、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、¹⁸⁹Re、¹⁹⁴Ir、¹⁹⁸Au、¹⁹⁹Au、²¹¹Pb、²¹²Pb、²¹³Bi、⁵⁸Co、⁶⁷Ga、^80mBr、^99mTc、^103mRh、¹⁰⁹Pt、¹⁶¹Ho、^189mOs、¹⁹²Ir、¹⁵²Dy、²¹¹At、²¹²Bi、²²³Ra、²¹⁹Rn、²¹⁵Po、²¹¹Bi、²²⁵Ac、²²¹Fr、²¹⁷At、²¹³Bi、²⁵⁵Fm及其组合和亚组合来制备这些抗体。在一些实施方式中，硼、钆或铀原子与这些抗体偶联。在一些实施方式中，硼原子是¹⁰B，钆原子是¹⁵⁷Gd，铀原子是²³⁵U。

在一些实施方式中，放射性核素偶联物包含能量在20到10,000keV之间的放放射性核素。放射性核素可以是能量低于1000keV的Auger发射体、能量在20到5000keV之间的P发射体或者能量在2000到10,000keV之间的α或“a”发射体。

在一些实施方式中，提供的诊断性放射偶联物所含的放射性核素是γ-、β-或正电子发射同位素。在一些实施方式中，放射性核素的能量在20到10,000keV之间。在一些实施方式中，放射性核素选自：¹⁸F、⁵¹Mn、^52mMn、⁵²Fe、⁵⁵Co、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁸Ga、⁷²As、⁷⁵Br、⁷⁶Br、^82mRb、⁸³Sr、⁸⁹Zr、^94mTc、⁵¹Cr、⁵⁷Co、⁵⁸Co、⁵⁹Fe、⁶⁷Ga、⁷⁵Se、⁹⁷Ru、^99mTc、^114mIn、¹²³I、¹²⁵I、¹³Li和¹⁹⁷Hg。

在一些实施方式中，本发明抗体偶联于作为光活化剂或造影剂。光活化化合物包括如发色团或染料等化合物。造影剂可以是，例如，顺磁性离子，其中所述离子包括选自下组的金属：铬(III)、镁(II)、铁(III)、铁(II)、钴(II)、镍(II)、铜(II)、钕(III)、钐(III)、镱(III)、钆(III)、钒(II)、铽(III)、镝(III)、钬(III)和铒(III)。造影剂还可以是用于X射线技术或计算机断层扫描术的不透射线的化合物，如碘、铱、钡、镓和铊化合物。不透射线的化合物可选自：钡、泛影酸、乙碘油、枸橼酸镓、碘卡明酸、碘卡酸、碘达酸、胆影酸、碘撒酸、碘磺拉胺(iogulamide)、碘海索、碘帕醇、碘番酸、碘普西酸、碘西法酸、碘丝酸、碘砜葡胺、碘琥酸(iosemetic acid)、碘酞硫、碘得酸(iotetric acid)、碘拉酸、碘托酸、碘克沙酸、羟泛影酸、碘泊酸盐、葡甲胺、甲泛葡胺、甲泛影钠、丙碘酮和氯化亚铊。在一些实施方式中，诊断性免疫偶联物可含有超声增强剂，如与本发明抗体偶联的充气脂质体。诊断性免疫偶联物可用于各种方法，包括但不限于肿瘤或癌诊断和检测的手术中、内窥镜或血管内方法。

在一些实施方式中，抗体偶联物可利用各种双功能蛋白偶联剂来制备，例如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二巯基)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺苄甲基)环己烷-1-羰化物、亚氨基硫烷(iminothiolane)(IT)、亚氨酸酯的双功能衍生物(如己二亚氨盐酸二甲酯(dimethyl adipimidate HCL))、活性酯类(如辛二酸二琥珀酰亚胺)、醛(如戊二醛)、双-叠氮化合物(如双(对-叠氮基苯甲酰)己二胺(bis(p-azidobenzoyl)hexanediamine))、二重氮盐(bis-diazonium)衍生物(如双-(对-二重氮苯甲酰)-乙二胺(bis-(p-diazoniumbenzoyl)-ethylenediamine))、二异氰酸酯(如亚苄基2，6-二异氰酸酯)以及双活性氟化合物1，5-二氟-2，4-二硝基苯)。例如，蓖麻毒蛋白免疫毒素可按照Vitetta等，Science 238：1098(1987)描述的方法制备。碳-14标记的1-异硫氰酸根合苄基-3-甲基二亚乙基三胺戊酸(isothiocyanatobenzyl-3-methyldiethylenetriaminepentaacetic acid)(MX-DTPA)是将放射性核苷酸偶联于抗体的示范性螯合剂。参见WO94/11026。接头可以是促使细胞毒性药物在细胞中释放的“可切割接头”。例如，可用酸不稳定的接头、肽酶敏感性接头、二甲基接头或含二硫键的接头(Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992))。试剂还可以通过碳水化合物部分连接于本发明抗体。

在一些实施方式中，可通过，例如重组技术或肽合成制备包含本发明抗体和细胞毒性剂的融合蛋白。在一些实施方式中，将包含偶联于细胞毒性剂的抗肿瘤抗原抗体的这种免疫偶联物给予患者。在一些实施方式中，免疫偶联物和/或其所结合的肿瘤细胞抗原蛋白被细胞内在化，从而增加了免疫偶联物杀伤与之结合的癌细胞的疗效。在一些实施方式中，细胞毒性剂靶向或干扰癌细胞的核酸。这种细胞毒性剂的例子包括美登醇(maytansinoid)、刺孢霉素、核糖核酸酶和DNA核酸内切酶。

在一些实施方式中，这些抗体可以偶联于“受体”(如链霉亲和素)，从而可用于肿瘤预靶向(tumor pretargeting)，其中先将抗体-受体偶联物给予患者，然后利用清除剂从循环中去除未结合的偶联物，再给予偶联于细胞毒性剂(如放射核苷酸)的配体(例如，亲和素)。

在一些实施方式中，这些抗体可偶联于在靶细胞溶酶体内释放的细胞毒性分子。例如，药物单甲基奥瑞斯他汀E(monomethyl auristatin E)(MMAE)可经缬氨酸-瓜氨酸连接键偶联，该连接键在抗体偶联物内在化后可被蛋白水解性溶酶体酶，组织蛋白酶B切割(参见，例如2003年4月13日公布的WO03/026577)。在一些实施方式中，可以利用含有腙官能团作为可切割部分的酸不稳定接头将MMAE连接于抗体(参见，例如2002年11月11日公布的WO02/088172)。

抗体依赖的酶介导前药治疗(ADEPT)

在一些实施方式中，本发明抗体还可以通过将抗体偶联于前药活化酶而用于ADEPT，所述酶可将前药(例如，肽酰基化疗剂，参见WO81/01145)转化成活性抗癌药物。参见，例如WO88/07378和美国专利号4975278。

在一些实施方式中，ADEPT可用的免疫偶联物中的酶组分包括能以将前药转化成具有更高活性的细胞毒性形式的方式作用于前药的任何酶。

可用于ADEPT中的酶包括但不限于：用于将含磷酸(基团)的前药转化成游离药物的碱性磷酸酶；用于将含硫酸(基团)的前药转化成游离药物的芳基硫酸酯酶；用于将非毒性的5-氟半胱氨酸转化成抗癌药物5-氟尿嘧啶的半胱氨酸脱氨酶；用于将含肽的前药转化成游离药物的蛋白酶，如沙雷氏菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶和组织蛋白酶(如组织蛋白酶B和L)；用于转化含D氨基酸取代基的前药的D-丙氨酰羧肽酶；用于将糖基化前药转化成游离药物的碳水化合物链切割酶如β-半乳糖苷酶和神经酰胺酶；用于将β-内酰胺衍生的药物转化成游离药物的β-内酰胺酶；和用于将在氨基氮处分别用苯氧乙酰基或苯乙酰基衍生的药物转化成游离药物的青霉素酰胺酶，如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。在一些实施方式中，本领域中也称为“抗体酶”的具有酶活性的抗体可用于将本发明前药转化成游离的活性药物(参见，例如Massey，Nature 328：457-458(1987))。抗体-抗体酶偶联物可按照本文所述方法制备，从而能将抗体酶转移给肿瘤细胞群。

在一些实施方式中，ADEPT酶可通过本领域熟知的技术，例如利用上述异双功能交联剂共价结合于抗体。在一些实施方式中，可采用本领域熟知的重组DNA技术构建融合蛋白，其中融合蛋白至少包含连接于本发明酶的至少功能活性部分的本发明抗体的抗原结合区(参见，例如Neuberger等，Nature，312：604-608(1984)。

在一些实施方式中，可通过检测与未处理对照培养物相比，经处理靶细胞培养物的活力来鉴定以细胞抑制方式而非细胞毒性方式起作用的抗体。可采用本领域已知的方法检测活力，如CellTiter-

细胞活力试验或CellTiter-发光细胞活力试验(普罗美加公司(Promega)，编号分别为G8080和G5750)。在一些实施方式中，与对照培养物相比，如果通过上述方式检测到处理导致细胞数下降而没有细胞死亡的证据，则抗体可认为是细胞抑制性的。

在一些实施方式中，可采用本领域已知的试验来进行体外筛选试验以鉴定可促进ADCC的抗体。一种示范性试验是体外ADCC试验。为制备51-Cr标记的靶细胞，在组织培养板上培养肿瘤细胞系，用PBS配制的10mM无菌EDTA收获细胞。用细胞培养基洗涤解离的细胞两次。37℃用200μCi的Cr-51(新英格兰核制品公司(New England Nuclear)/杜邦公司(DuPont))标记细胞(5×10⁶)1小时，期间偶尔搅拌。用细胞培养基洗涤标记的细胞三次，然后重悬至浓度为1×10⁵细胞/mL。不调理或调理细胞，然后在PBMC试验中将细胞与100ng/ml和125ng/ml的测试抗体共孵育，在NK试验中将细胞与20ng/mL和1ng/mL的测试抗体共孵育。利用肝素从正常健康供者采集血液，用等体积的磷酸缓冲盐水(PBS)稀释来制备外周血单核的细胞。然后按照生产商的使用说明书，将血液叠加到淋巴细胞分离液(LYMPHOCYTE SEPARATION

(LSM：Organon Teknika))上并离心。从LSM-血浆界面收集单核的细胞，PBS洗涤三次。将效应细胞悬浮在细胞培养基中，终浓度为1×10⁷细胞/mL。经LSM纯化后，按照厂家的使用说明书，利用NK细胞分离试剂盒和磁柱(米尔特尼耶生物技术公司(Miltenyi Biotech))通过负筛选从PBMC中分离天然杀伤细胞(NK)。收集分离的NK细胞，洗涤并重悬到细胞培养基内，浓度为2×10⁶细胞/mL。通过流式细胞术分析确定NK细胞的身份。沿微量滴定板的各行用细胞培养基两倍连续稀释效应细胞(PBMC或NK)以制备不同效应细胞∶靶细胞之比(终体积为100μL)。效应细胞的浓度范围为：PBMC是1.0×10⁷/mL到2.0×10⁴/mL，NK是2.0×10⁶/mL到3.9×10³/mL。效应细胞滴定后，向滴定板的各孔中加入100μL浓度为1×10⁵细胞/ml的Cr51-标记的靶细胞(调理或未调理)。从而对于PBMC，初始效应细胞∶靶细胞之比为100∶1，对于NK，初始效应细胞∶靶细胞之比为20∶1。所有试验一式两份进行，各滴定板都包含自发裂解(无效应细胞)和完全裂解(靶细胞加100μL 1％十二烷基硫酸钠，1N氢氧化钠)对照。37℃温育滴定板18小时，然后利用上清液收获系统(斯卡特隆仪器公司(Skatron Instrument，Inc.))收获细胞培养上清液，用Minaxi自动γ5000系列γ计数仪(帕卡德公司(Packard))计数1分钟。然后利用以下公式将结果表示为细胞毒性百分比：％细胞毒性＝(样品cpm-自发裂解)/(完全裂解-自发裂解)×100。

为鉴定能促进CDC的抗体，技术人员可以实施本领域已知的试验。一种示范性试验是体外CDC试验。在体外，在没有或有不同浓度的测试抗体存在下，通过共同温育表达肿瘤细胞抗原的细胞与人(或其它来源的)的含补体血清来检测CDC活性。然后利用ALAMAR

定量测定活细胞来检测细胞毒性(Gazzano-Santoro等，J.Immunol.Methods 202163-171(1997))。所进行的对照试验不用抗体，和使用抗体但用的是热灭活血清和/或使用不表达所研究肿瘤细胞抗原的细胞。另外，可用肿瘤抗原或衍生自肿瘤抗原的肽包被红细胞，然后通过观察红细胞裂解检验CDC(参见，例如Karjalainen和Mantyjarvi，Acta Pathol Microbiol Scand[C].1981/10；89(5)：315-9)。

为选择能诱导细胞死亡的抗体，可以评估与对照相比，膜完整性的丧失，如PI、台盼蓝或7AAD摄取试验所示。一种示范性试验是用表达肿瘤抗原的细胞进行的PI摄取试验。按照该试验，用添加10％热灭活FBS(Hyclone)和2mM L-谷氨酰胺的Dulbecco改进的Eagle培养基(D-DMEM)∶Ham F-12(50∶50)培养表达肿瘤细胞抗原的细胞。(因此，该试验可在没有补体和免疫效应细胞存在下进行)。以3×10⁶/皿的接种密度将肿瘤细胞接种到100×20mm培养皿中，使细胞贴壁培养过夜。然后除去培养基，或者更换单独的新鲜培养基，或者更换含10μg/mL合适单克隆抗体的培养基。每次处理后，用PBS洗涤细胞单层，然后通过胰蛋白酶消化分离细胞。4℃以1200rpm离心细胞5分钟，细胞团重悬到3mL冰冷却的Ca²⁺结合缓冲液(10mM Hepes，pH7.4，140mM NaCl，2.5mM CaCl₂)中，然后分装入35mm带过滤盖子的12×75管内(每管1mL，每个处理组3管)，从而去除细胞团块。然后在管内加入PI(10μg/mL)。用FACSCAN^TM流式细胞仪和FACSCONVERT^TM CellQuest软件(BD公司(Becton Dickinson))分析样品。通过PI摄取测定到能诱导统计学显著水平的细胞死亡的的抗体可选为细胞死亡诱导抗体。

还可利用¹⁸F-膜联蛋白为PET造影剂在体内筛选这些抗体的凋亡活性。在该方法中，用¹⁸F放射性标记膜联蛋白V，在所研究的抗体给予测试动物后给予。凋亡过程中最早发生的事件之一是磷脂酰丝氨酸从细胞膜的内侧外翻到细胞外表面，在此处磷脂酰丝氨酸可接近膜联蛋白。然后对动物进行PET造影(参见Yagle等，J Nucl Med.2005年4月；46(4)：658-66)。还可以处死动物，取出各器官或肿瘤并按标准方法分析凋亡标记。

虽然在一些实施方式中，癌症的特征在于基因表达产物的过度表达，但本申请还提供一种治疗不视作过度表达肿瘤抗原的癌症的方法。为测定癌症中的肿瘤抗原表达，可进行各种诊断/预后试验。在一些实施方式中，可通过IHC分析基因表达产物过度表达。对肿瘤生物活检的石蜡包埋组织切片进行IHC试验，参照以下肿瘤抗原蛋白染色强度标准：

0分：未见染色或者在不到10％的肿瘤细胞中观察到膜染色。

1+分：在10％以上的肿瘤细胞中检测到微弱的/几乎不可觉察的膜染色。染色只发生在细胞膜的一部分上。

2+分：在10％以上的肿瘤细胞中观察到弱到中度的完整膜染色。

3+分：在10％以上的肿瘤细胞中观察到中度到强的完整膜染色。

在一些实施方式中，肿瘤抗原过度表达评估中为0或1+分的那些肿瘤可表征为没有过度表达肿瘤抗原，而那些2+或3+的肿瘤则表征为过度表达肿瘤抗原。

在一些实施方式中，与正常细胞相比，癌细胞中AMIGO-2未显著上调，而且癌细胞和正常细胞对AMIGO-2表达的依赖性不同。在一些实施方式中，调节AMIGO-2可影响肿瘤-基质相互作用。在一些实施方式中，抑制AMIGO-2可调节肿瘤-基质相互作用。

或者，可用甲醛固定、石蜡包埋的肿瘤组织进行FISH分析，如INFORM^TM(由亚利桑那州维塔纳公司(Ventana)销售)或PATHVISION^TM(瓦西斯公司(Vysis)，伊利诺伊州)以测定肿瘤中肿瘤抗原过度表达的程度(如果存在)。

此外，例如可将抗体共价偶联于聚合物来进行化学修饰以增加它们的循环半衰期。各抗体分子可连接于一个或多个(即，1、2、3、4、5或更多个)聚合物分子。在一些实施方式中，聚合物分子通过接头分子连接于抗体。聚合物通常可以是合成或天然聚合物，例如任选取代的直链或支链聚亚烷基、聚链烯或聚氧化烯聚合物或支链或无支链的多糖，例如同-或杂多糖。在一些实施方式中，聚合物是聚氧乙烯多元醇和聚乙二醇(PEG)。PEG在室温下可溶于水，其通式为R(O-CH₂-CH₂)_nO-R，其中R可以是氢或保护基团，例如烷基或烷醇基团。在一些实施方式中，所述保护基团具有1-8个碳。在一些实施方式中，所述保护基团是甲基。符号n是1-1,000或2-500之间的正整数。在一些实施方式中，PEG的平均分子量在1000-40,000之间、2000-20,000之间或3,000-12,000之间。在一些实施方式中，PEG具有至少一个羟基。在一些实施方式中，所述羟基是末端羟基。在一些实施方式中，该羟基经活化与抑制剂上的游离氨基反应。然而，应该知道可改变反应基团的类型和数量以获得共价偶联的PEG/本发明抗体。美国专利号4,766,106；4,179,337；4,495,285和4,609,546公开了聚合物以及将它们连接于肽的方法，各专利通过引用纳入本文。

安全性研究

可检验本发明抗体的安全性和毒理学特征。这类研究的指南可见通过引用纳入本文的USDA CBER部门，“Points to Consider in the Manufactureand Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use”(案卷号94D-0259，1997年2月28日)。一般而言，应在临床前研究中用大量人组织样品和/或分离的人细胞类型筛选候选抗体以评估非靶组织结合和交叉反应。从这些人组织研究中获得满意结果后，再筛选各种动物来源的一组组织样品或分离细胞以鉴定适用于一般毒理学研究的物种。如果未鉴定出有交叉反应性的动物种类，其它模型类型也可视为合适的。这些其它模型包括诸如异种移植模型等研究，其中人肿瘤细胞植入啮齿类宿主，或者使用能识别毒理学研究所选用的动物物种内相应的肿瘤细胞抗原的代用单克隆抗体。应当知道，这些类型的其它模型的数据是一级近似，转化成高级物种时应谨慎。

对于候选裸抗体，可进行测定简单耐受性的研究。在这些研究中，可通过观察任何剂量依赖性药效学效应来测定候选分子的治疗指数。应使用较宽的剂量范围(例如，0.1mg/kg到100mg/kg)。在估计治疗指数时应考虑肿瘤细胞抗原数之间的差异、候选抗体对交叉反应性动物靶位的亲和力以及抗体结合后细胞应答的差异。还应当用合适的动物模型进行药效学和药动学研究以帮助确定在人中测试候选抗体时的初始剂量。

对于候选免疫偶联物，必须在体内进行偶联物的稳定性研究。任选对免疫偶联物的各组分进行药效学和药动学研究以确定候选免疫偶联物的任何分解产物的后果。如上所述，也应用合适的动物模型进行药效学和药动学研究以帮助确定初始剂量。如果药物与用裸抗体预处理联用，那么安全性研究的设计还必须考虑其它因素。必须单用裸抗体进行安全性研究，在设计免疫偶联物的安全性研究时必须要记得，在这类治疗方案中免疫偶联物的最终给药剂量要适当降低。

对于放射性免疫偶联物，应进行动物组织分布研究以测定生物分布数据。另外，应采取早和晚时间点计算所给予的放射性总剂量的代谢降解。利用血清或血浆可测试放射性免疫偶联物的体外稳定性，应开发方法以检测游离放射性核素、放射性免疫偶联物和标记的非抗体化合物的百分比。

寡核苷酸

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是寡核苷酸。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是包含选自SEQ ID NO：7-24的某序列的寡核苷酸。

在一些实施方式中，寡核苷酸是反义或RNAi寡核苷酸。在一些实施方式中，所述寡核苷酸与AMIGO-2基因或基因表达产物的区域、结构域、部分或区段互补。在一些实施方式中，所述寡核苷酸包含约5-约100个核苷酸、约10-约50个核苷酸、约12-约35和约18-约25个核苷酸。在一些实施方式中，所述寡核苷酸与AMIGO-2基因或基因表达产物的区域、结构域、部分或区段有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。在一些实施方式中，在AMIGO-2基因或基因表达产物的至少15、20、25、30、35、40、50或100个连续核苷酸上有实质性的序列同源性。在一些实施方式中，在全长AMIGO-2基因或基因表达产物上有实质性的序列同源性。在一些实施方式中，在AMIGO-2基因或基因表达产物的至少15、20、25、30、35、40、50或100个连续核苷酸上有完全的序列相同性。在一些实施方式中，在全长AMIGO-2基因或其基因表达产物上有完全的序列相同性。在一些实施方式中，所述寡核苷酸在中等或严格杂交条件下结合具有SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的核酸分子。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是双链RNA(dsRNA)分子，其通过RNAi(RNA干扰)起作用。在一些实施方式中，所述dsRNA的一条链与AMIGO-2基因的区域、部分、结构域或区段有至少50％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。在一些实施方式中，在AMIGO-2基因的至少15、20、25、30、35、40、50、100、200、300、400、500或1000个连续核苷酸上有实质性的序列同源性。在一些实施方式中，在全长AMIGO-2基因上有实质性的序列同源性。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是双链RNA(dsRNA)分子(其通过RNAi(RNA干扰)起作用)，其中该dsRNA的一条或两条链与AMIGO-2基因的区域、部分、结构域或区段部分互补(例如，至少50％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)。在一些实施方式中，所述dsRNA的一条或两条链与AMIGO-2基因的区域、部分、结构域或区段完全互补。序列“互补性”指特定含氮碱基之间因它们成氢键的特性而具有的化学亲和力(即，具有碱基序列的两条核酸链能形成反平行的双链体的特性，其中腺嘌呤和尿嘧啶(或在DNA或修饰的RNA的情形下是胸腺嘧啶)彼此相对，而鸟嘌呤和胞嘧啶彼此相对)。因此，核苷酸序列形成反平行双链体时，完全互补的序列应是碱基序列具有完全的一对一对应性(即，腺嘌呤对尿嘧啶，鸟嘌呤对胞嘧啶)的两条序列。

在一些实施方式中，本发明寡核苷酸用于聚合酶链式反应(PCR)。该序列可依据(从中设计)基因组序列或cDNA序列，还可用于扩增、证实或检测特定细胞或组织中相同、相似或互补的DNA或RNA是否存在。

小分子

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是小分子。本文所用的术语“小分子”指有机或无机非聚合化合物，其分子量小于约10kd。小分子的例子包括肽、寡核苷酸、有机化合物、无机化合物等。在一些实施方式中，所述小分子的分子量小于约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2或约1kd。

模拟物

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是模拟物。本文所用的术语“模拟物”指能模拟某肽活性的化合物。模拟物是非肽，但可包含通过非肽键相连的氨基酸。1997年6月10日授权的美国专利号5,637,677及其专利申请(均通过引用纳入本文)记载了制备模拟物的详细指导。简言之，不是肽的分子复制了与AMIGO-2的三维结构特异性相互作用的肽的三维结构。在一些实施方式中，AMIGO-2模拟物是AMIGO-2的模拟物或AMIGO-2配体的模拟物。

引诱物受体

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是包含AMIGO-2受体的至少一部分的引诱物受体。在一些实施方式中，所述引诱物受体与天然AMIGO-2受体竞争AMIGO-2配体。在一些实施方式中，标记所述引诱物受体以促进定量测定、定性测定和/或目测观察。在其它实施方式中，所述引诱物受体还包含有助于分离引诱物受体和/或引诱物受体-AMIGO-2复合体的部分。在一些实施方式中，所述引诱物受体结合AMIGO-2受体配体后可增强要影响的信号(与天然AMIGO-2受体相比)。在一些实施方式中，所述引诱物受体是通过捕捉AMIGO-2配体并防止其与信号传导AMIGO-2受体相互作用而起作用的非信号传导分子。在一些实施方式中，所述引诱物受体包含与抗体或抗体片段融合的AMIGO-2受体的至少一部分。

治疗/预防癌症的方法

本发明提供治疗和/或预防对象中癌症或癌症症状的方法，包括将治疗有效量的一种或多种本发明AMIGO-2调节剂给予该对象。在一些实施方式中，所述癌症是AMIGO-2过度表达相关的癌症。在一些实施方式中，所述癌症是肺癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌或胰腺癌。在一些实施方式中，所述癌症是肺癌或结肠癌。在一些实施方式中，所述对象已诊断患有癌症或倾向于患癌症。在一些实施方式中，所述对象是已诊断患有癌症或倾向于患除胃癌以外的癌症。

本领域技术人员熟知癌症的症状，包括但不限于：乳腺肿块、乳头变化、乳腺囊肿、乳腺疼痛、死亡、体重减轻、虚弱、过度疲劳、进食困难、食欲不振、久咳、气喘恶化、咳血、尿中带血、血便、恶心、呕吐、肝转移、肺转移、骨转移、腹痛下堕、胃气胀、腹膜腔中有液体、阴道出血、便秘、腹胀、结肠穿孔、急性腹膜炎(感染、发热、疼痛)、疼痛、吐血、大量出汗、发热、高血压、贫血、腹泻、黄疸、头晕、寒颤、肌肉痉挛、结肠转移、肺转移、膀胱转移、肝转移、骨转移、肾转移和胰腺转移、吞咽困难，等等。

可按照医学药剂师熟知的方法，凭经验决定调节性化合物的治疗有效量，其取决于患者的年龄、病症的严重程度和所需的最终药物制剂，等等。可通过，例如吸入或栓剂或诸如灌洗阴道、直肠、尿道、含服和舌下组织等给予至粘膜组织，口服、局部、鼻内、腹膜内、胃肠外、静脉内、淋巴管内、肿瘤内、肌肉内、间质地、动脉内、皮下、眼内、滑膜内、经上皮地和经皮地给予本发明调节剂。在一些实施方式中，通过灌洗、口服或动脉内给予这些抑制剂。其它合适的引入方法还包括可充电的或可生物可降解的装置以及慢释放或缓释多聚装置。如上所述，本发明的治疗组合物还可作为组合治疗的一部分与其它已知的抗癌药或其它已知的抗-骨疾病治疗方案一起给予。

本发明还提供调节患者中AMIGO-2-相关生物学活性的方法。这些方法包括有效调节一种或多种AMIGO-2生物学活性用量的AMIGO-2调节剂给予患者。检测AMIGO-2生物学活性的合适试验见上文和下文。

本发明还提供抑制有此需要的患者中癌细胞生长的方法，包括将治疗有效量的一种或多种AMIGO-2调节剂给予该患者。本领域技术人员已知检测AMIGO-2相关细胞生长的合适试验，见于上文和下文中。

本发明还提供抑制癌细胞生长(例如，在需要这种方法的患者中)的方法，该方法将能调节AMIGO-2的一种或多种下游标记的化合物给予具有包含一种或多种表达AMIGO-2的细胞的癌症的患者。所述一种或多种AMIGO-2下游标记可选自：c-MYC、c-Jun、FosL1或胞外信号调节激酶(ERK)。调节ERK可以是调节ERK的磷酸化或ERK对其一种或多种底物的磷酸化(参见上文)。该方法任选包括鉴定具有癌症的患者的步骤，所述癌症包含一种或多种表达AMIGO-2(例如，AMIGO-2mRNA或AMIGO-2蛋白)的细胞。

本发明还包括提供抑制有此需要的患者的癌症的方法。这些方法包括测定该患者是否是本文所述AMIGO-2治疗的候选者，如果该患者是AMIGO-2治疗的候选者，则将治疗有效量的一种或多种AMIGO-2调节剂给予该患者。如果该患者不是AMIGO-2治疗的候选者，则用常规癌症疗法治疗该患者。

本发明还提供抑制患者的癌症的方法，该患者被诊断到或怀疑患有癌症。该方法包括将治疗有效量的一种或多种AMIGO-2调节剂给予该患者。

本发明还提供抑制患者中两种或更多种细胞相互作用的方法，包括将治疗有效量的AMIGO-2调节剂给予所述患者。本领域技术人员已知检测AMIGO-2相关细胞相互作用的合适试验，见于上文和下文中。

本发明还提供调节患者中癌症的一种或多种症状的方法，包括将治疗有效量的一种或多种AMIGO-2调节剂给予所述患者。

本发明还提供抑制有此需要的患者中细胞生长的方法，包括将治疗有效量的AMIGO-2调节剂给予所述患者。本领域技术人员已知检测细胞生长的合适试验，见于上文和下文中。

本发明还提供抑制有此需要的患者中癌细胞迁移的方法，包括将治疗有效量的AMIGO-2调节剂给予该患者。本领域技术人员已知检测AMIGO-2相关细胞迁移的合适试验，见于上文和下文中。

本发明还提供抑制有此需要的患者中癌细胞黏着的方法，包括将治疗有效量的AMIGO-2调节剂给予该患者。本领域技术人员已知检测AMIGO-2相关细胞黏着的合适试验，见于上文和下文中。

本发明还提供抑制有此需要的患者中血管发生的方法，包括将治疗有效量的AMIGO-2调节剂给予该患者。本领域技术人员已知检测血管发生的合适试验，见于上文和下文中。

本发明还提供预防性治疗患者的方法，所述患者有患癌症、癌症转移的倾向，或已具有转移因此易复发。这些方法尤其可用于高危险个体，例如具有癌症或转移性肿瘤家族史，或显示癌症转移遗传倾向性的个体。在一些实施方式中，这些肿瘤是AMIGO-2相关肿瘤。此外，这些方法可用于防止已通过外科手术切除了AMIGO-2相关肿瘤，或用常规癌症疗法治疗过的患者发生AMIGO-2相关肿瘤的复发。

本发明还提供抑制癌症进展和/或导致癌症消退的复发，包括将治疗有效量的AMIGO-2调节剂给予该患者。

在一些实施方式中，联用本发明AMIGO-2调节剂与化疗和/或放疗治疗需要抗癌症治疗的患者。例如，给予AMIGO-2调节剂后，还可用治疗有效量的抗癌症辐射治疗患者。在一些实施方式中，联用化疗与AMIGO-2调节剂。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂与化疗和放疗联合给予。

治疗方法包括将单剂量或多剂量的一种或多种AMIGO-2调节剂给予患者。在一些实施方式中，将AMIGO-2调节剂作为可注射的药物组合物给予，所述药物组合物无菌、无热原并包含AMIGO-2调节剂与药学上可接受的载体或稀释剂。

在一些实施方式中，联用本发明治疗方案与常规癌症治疗方案，包括但不限于外科手术、放疗、激素消融(hormone ablation)和/或化疗。可以在常规癌症治疗前、其同时或之后给予本发明AMIGO-2调节剂。在一些实施方式中，将两种或更多种不同的AMIGO-2调节剂给予患者。

在一些实施方式中，给予患者的AMIGO-2调节剂用量足以抑制染色体不稳定性、激酶活性、致瘤性、转移性、AMIGO-2细胞信号传导、细胞黏着、癌细胞存活、ERK磷酸化、癌细胞生长、肿瘤形成、细胞周期蛋白产生、细胞增殖、通过细胞周期进展、不依赖于贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用、细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平和血管发生，等等中的一种或多种。在一些实施方式中，给予患者的AMIGO-2调节剂用量足以通过凋亡而增加癌细胞死亡。

治疗神经系统相关疾病和病症的方法

本发明还提供治疗有此需要的患者中神经系统疾病和病症的方法，包括将治疗有效量的AMIGO-2调节剂给予该患者。在一些实施方式中，本发明提供治疗阿尔茨海默病、帕金森病、癫痫、多发性硬化症、亨廷顿病、脊髓损伤、中风、面神经损伤、糖尿病相关神经损伤和视网膜变性中一种或多种的方法。

干扰下游基因表达的方法

在一些实施方式中，本发明提供干扰一种或多种基因的方法。在一些实施方式中，该方法包括使过度表达AMIGO-2的细胞与AMIGO-2调节剂接触的方法。在一些实施方式中，给予患者治疗有效量的AMIGO-2调节剂后，体内一种或多种基因的表达受到干扰。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂抑制选自下组的一种或多种基因表达：BNIP3L、FAM46C、LOC339988、SATB1、C11orf21、FAM3B、UCP2、FNDC3A、DRE1、PPIC、ASS、KIAA1718、ALDH6A1、LR8、ADAMTSL2、LIPC、FZD10、COL4A2、TPP1、SERPINF1、ADCY9、AZGP1、USH1C、RAB40B、SMOC2、RRAGD、NUDT21、C14orf1、TPP1、RPS6KB1、KIAA0657、QPRT、RFK、KCNH2、PAQR8、SEPT6、LOC285758、EFNA1、LGALS8、ATP10D、ERBB3、CHST13、FLJ25476、MCF2L、FLJ10159、RAB13、ZNF261、USH1C、OSTM1、BMPR2、IPO9、ZNF226、HRASLS3、ERBB3、PROS1、ALDH6A1、PPT2、TFF3、C21orf86、LRRC8B、BAZ2B、HIP1、RNASE4、FAM46C、STARD10、KLF13、BACE1、FCGRT、QPCT、KCTD14、FRAS1、FAM63B、SPON2、IQWD1、BMPR2、TXNIP、ZBTB4、DDAH2、ZNF420、LGALS8、NEU1、FUCA1、GRN、C20orf194、SEPT6、ASPSCR1、KLHDC5、GRN、STARD10、MGC12981、C14orf1、EPB41、ALDH2、ARHGEF10L、FNDC3A、CYP2R1、PAQR8、RNF38、KIAA1327、ALS2CR3、EPS8L3、BACE1、SEPT6、IL27RA、DTX3L、CBPIN、ZNF627、C1orf85、AZGP1、GRN、SUOX、PSMB8、ARHGAP1、DACH1、COL4A2、PLEKHB1、SEC14L1、C2orf7、TPD52L1、PGM2、C14orf4、ZNF286、CAMK2D、PSME1、ZNF268、TRAF5、SEPT6、MGC45474、WIPI-2、CAMK2D、ZBED1、SEC24A、GGTL3、TRIM4、PPM1H、JMJD1A、DOK4、RPS6KB1、PSAP、EXOC7、C6orf80、RERE、ZNF641、MXRA7、RAC1、NDST1、JAG2、ZNF329、SEPT6、KLHDC5、STXBP1和UBE2L3以及它们的组合和亚组合。

组合治疗

在一些实施方式中，本发明提供包含两种或更多种AMIGO-2调节剂的组合物以提供更加改善的抵御癌症效力。在一些实施方式中，所述AMIGO-2调节剂是单克隆抗体。可将包含两种或更多种AMIGO-2抗体的组合物给予患有或易患癌症的人或哺乳动物。还可联合给予一种或多种抗体与另一种治疗剂，例如细胞毒性剂或癌症化疗剂。共同给予两种或更多种治疗剂不要求同时或以同一途径给予这些药剂，只要这些药剂施加其疗效的时期重叠即可。考虑了同时或依次给药，例如在不同日子或星期给药。

在一些实施方式中，考虑了给予不同抗体的组合或“混合物”。这种抗体混合物具有一定优点，因为它们所含的抗体利用不同的效应机制或直接组合了细胞毒性抗体与依赖免疫效应功能的抗体。这种组合抗体可显示协同疗效。

细胞毒性剂指抑制或防止细胞功能和/或导致细胞破坏的物质。该术语应包括放射性同位素(例如，¹³¹I、¹²⁵I、⁹⁰Y和¹⁸⁶Re)、化疗剂和毒素，例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或合成毒素，或它们的片段。非细胞毒性剂指不抑制或防止细胞功能和/或不导致细胞破坏的物质。非细胞毒性剂可包括可活化成细胞毒性的药剂。非细胞毒性剂可包括珠、脂质体、基质或颗粒(参见，例如通过引用纳入本文的美国专利公布2003/0028071和2003/0032995)。这种药剂可以缀合、偶联、连接或结合于本发明抗体。

在一些实施方式中，将常规癌症药物与本发明组合物共同给予。常规癌症药物包括：

a)癌症化疗剂；

b)其它药剂；

c)前药。

癌症化疗剂包括但不限于：烷化剂，例如碳铂和顺铂；氮芥烷化剂；亚硝基脲烷化剂，如卡莫司汀(BCNU)；抗代谢物，如甲氨蝶呤；亚叶酸；嘌呤类似抗代谢物，巯基嘌呤；密度类似抗代谢物，如氟尿嘧啶(5-FU)和吉西他滨

激素抗肿瘤剂，如戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林和他莫昔芬；天然抗肿瘤剂，如阿地白介素、白介素-2、多西他赛、依托泊苷(VP-16)、干扰素α、紫杉醇

和维甲酸(ATRA)；抗生素天然抗肿瘤剂，如博来霉素、放线菌素D、柔红霉素、阿霉素、柔红霉素和丝裂霉素，包括丝裂霉素C；和长春花生物碱天然抗肿瘤剂，例如长春碱、长春新碱、长春地辛；羟基脲；醋葡醛内酯、阿霉素、异环磷酰胺、依诺他滨、环硫雄醇、阿柔比星、安西他滨、尼莫司汀、盐酸丙卡巴肼、卡波醌、卡铂、卡莫氟、色霉素A3、抗肿瘤多糖、抗肿瘤血小板因子、环磷酰胺

裂殖菌多糖、阿糖胞苷(阿糖胞苷)、达卡巴嗪、硫嘌呤苷、塞替派、替加氟、多拉司他汀、多拉司他汀类似物，如奥瑞斯他汀、CPT-11(依立替康)、米托蒽醌、长春瑞滨、替尼泊苷、氨基蝶呤、去甲柔红霉素、埃斯培拉霉素(esperamicin)(参见，例如美国专利号4,675,187)、新制癌菌素、OK-432、博来霉素、氟铁龙、溴尿苷、白消安、二磷酸己烯雌酚四钠、培洛霉素、抑氨肽酶素b干扰素-β、美雄烷、二溴甘露醇、美法仑、层粘连蛋白肽、香菇多糖、采绒革盖菌提取物、替加氟/尿嘧啶、雌莫司汀(雌激素/氮芥)。

可用作癌症患者疗剂的其它药剂包括：EPO、G-CSF、更昔洛韦；抗生素、醋酸亮丙瑞林；哌替啶；齐多夫定(AZT)；白介素1-18，包括突变体和类似物；干扰素或细胞因子，例如干扰素α、β和γ激素，例如促黄体激素释放激素(LHRH)和类似物及促性腺激素释放激素(GnRH)；生长因子，例如转化生长因子-β(TGF-β)、成纤维细胞生长因子(FGF)、神经生长因子(NGF)、生长激素释放因子(GHRF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子同源因子(FGFHF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素生长因子(IGF)；肿瘤坏死因子-α和β(TNF-α和β)；侵袭抑制因子-2(IIF-2)；骨形态发生蛋白1-7(BMP1-7)；生长激素抑制素；胸腺素-α-1；γ-球蛋白；超氧化物歧化酶(SOD)；补体因子；血管生成抑制因子；抗原性物质；和前药。

在一些实施方式中，可联合给予一种或多种AMIGO-2调节剂与一种或多种用于癌症的常规免疫治疗剂。免疫治疗剂可包括目标为刺激免疫系统(例如，刺激天然杀伤细胞、巨噬细胞和嗜中性白细胞的产生或活性)的药剂，例如干扰素α、粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-12或白介素-2。免疫治疗剂还可包括一种或多种用于治疗癌症的疫苗药剂。例如，可组合给予(例如，同时，大致同时或作为患者的整体治疗方案的一部分)一种或多种AMIGO-2调节剂与用于给定癌症或癌症抗原(例如，MAGE抗原)的肽、多肽或病毒载体疫苗。还可组合给予一种或多种AMIGO-2调节剂与一种或多种靶向特定癌症或癌症抗原的单克隆抗体治疗剂(例如药剂)。例如，利妥昔单抗(IDEC-C2B8)-一种靶向存在于某些B细胞恶性肿瘤中CD20抗原的嵌合抗体-结合免疫效应细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞或天然杀伤细胞)上的Fc受体并促进这些免疫效应细胞破坏肿瘤细胞(也称为抗体依赖性细胞介导的毒性，见上文)。结合特异性肿瘤细胞或肿瘤细胞抗原的抗体还可用于触发补体依赖性细胞毒性反应，如本文所述。

在一些实施方式中，可组合给予一种或多种AMIGO-2调节剂与一种或多种用于癌症的细胞周期靶向剂。细胞周期靶向剂可包括靶向细胞周期的特定蛋白质介体(例如，细胞周期蛋白依赖性激酶)的那些药剂，例如罗卡维亭(roscovitine)或黄酮吡醇。细胞周期靶向剂(例如，化合物)还可包括导致分裂细胞(例如，癌细胞)停滞在细胞周期特定时期的药剂，例如但不限于紫杉醇、斯他菌素(staurosporin)、UCN-01、罗卡维亭或长春碱。

在一些实施方式中，可以同时给予一种或多种AMIGO-2调节剂和一种或多种其它药剂。在其它实施方式中，首先给予一种或多种AMIGO-2调节剂，再给予一种或多种其它药剂。在一些实施方式中，首先一种或多种其它药剂，再给予一种或多种AMIGO-2调节剂。一种或多种AMIGO-2调节剂可替代或补充以前或目前给予的治疗剂。例如，用一种或多种AMIGO-2调节剂治疗后，可停止或减少给予一种或多种其它药剂，例如以较低水平给予。在其它实施方式中，可维持给予以前的疗剂。在一些实施方式中，可维持以前的疗剂直至一种或多种AMIGO-2调节剂水平达到足以提供疗效的水平(例如，在测定给定患者的最佳剂量时)。可组合给予两种疗剂。

在一些实施方式中，可将一种或多种AMIGO-2调节剂给予对象(例如，人患者)以弥补同时给予的一种或多种药剂的水平或剂量。例如，当第一疗剂(例如，一种或多种其它药剂，如紫杉醇)有毒性或患者的耐受不佳时，给予一种或多种AMIGO-2调节剂时可降低剂量。所述给予一种或多种AMIGO-2调节剂可提供与第一疗剂等效或更高的疗效，而没有毒性或耐受不佳的副作用。

前药指药学活性物质的前体或衍生物形式，与母体药物相比，前药对肿瘤细胞的毒性较低或无毒性并能被酶促活化或转化成活性或更具活性的母体形式。参见，例如Wilman，“Prodrugs in Cancer Chemotherapy”(癌症化疗的前药)，Biochemical Society Transactions(生物化学协会学报)，14，第375-382页，第615届贝尔法斯特大会(Meeting Belfast)(1986)和Stella等，“Prodrugs：A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery”(前药：靶向药物递送的化学方法)，Directed Drug Delivery(定向药物递送)，Borchardt等(编)，第247-267页，休玛娜出版社(Humana Press)(1985)。前药包括但不限于：能转化成更具活性的游离药物的含磷酸(根)的前药、含硫代磷酸(根)的前药、含硫酸(根)的前药、含肽的前药、D-氨基酸-修饰的前药、糖基化的前药、含b-内酰胺的前药、含任选取代的苯氧基乙酰胺的前药或含任选取代的苯基乙酰胺的前药、5-氟胞嘧啶和前体5-氟尿嘧啶前药。可以衍生为本文所用前药形式的细胞毒性药物的例子包括但不限于上述那些化疗剂。

临床方面

在一些实施方式中，本发明方法和组合物尤其可用于肺癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌或胰腺癌和癌症转移。在一些实施方式中，所述癌症是肺癌或结肠癌。

药物组合物

本发明还提供包含一种或多种AMIGO-2调节剂和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方式中，将药物组合物制备成可注射剂，例如液体溶液或悬液；还可制备成适用于先溶解或悬浮在液体载体中再注射的固体形式。药学上可接受的载体包括脂质体。药物组合物中还可存在药学上可接受的盐，例如矿物酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等；和有机酸盐，如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐等。药学上可接受的赋形剂的详细讨论见Remington：The Science and Practice of Pharmacy(雷明顿：药学科学和实践)(1995)Alfonso Gennaro，Lippincott，Williams和Wilkins。

检测AMIGO-2的方法

本发明还提供检测AMIGO-2的方法。在一些实施方式中，患者或患者样品中存在AMIGO-2。在一些实施方式中，该方法包括将含一种或多种AMIGO-2调节剂的组合物给予患者并检测显像剂在患者体内的定位。在一些实施方式中，患者样品包含癌细胞。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂与显像剂相连或作可检测标记。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是偶联于显像剂的AMIGO-2抗体，将其给予患者以检测一种或多种肿瘤或测定患者对AMIGO-2治疗的敏感性。标记的抗体结合细胞上高密度的受体，从而累积在肿瘤细胞上。利用标准显像技术，可检测肿瘤的部位。

本发明还提供显像/检测表达或过度表达AMIGO-2的细胞或肿瘤的方法，包括使包含AMIGO-2调节剂的组合物与样品接触并检测样品中是否存在AMIGO-2调节剂。在一些实施方式中，所述样品是患者样品。在一些实施方式中，患者样品包含癌细胞。在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂与显像剂相连或作可检测标记。

本发明还提供定量测定患者、细胞或样品中AMIGO-2的存在量的方法。这些方法包括将抗体、探针或小分子的一种或多种给予患者或样品并检测样品中AMIGO-2的存在量。在一些实施方式中，抗体、探针或小分子连接于显像剂或作可检测标记。这种信息表明，例如肿瘤是否与AMIGO-2相关以及由此的是否应使用或避免具体治疗方法。在一些实施方式中，采用本领域技术人员熟知的标准技术获得据信包含肿瘤细胞的样品，使之与标记的抗体、探针、寡核苷酸和小分子接触。除去任何未结合的、标记的抗体、探针、寡核苷酸或小分子后，可测定与细胞结合的标记抗体、肽、寡核苷酸或模拟物的数量或因未结合而除去的抗体、肽、寡核苷酸或模拟物的数量。该信息与AMIGO-2的存在量直接相关。

可采用本领域普通技术人员熟知的方法进行显像。例如，可通过放射性闪烁照相术、核磁共振成像(MRI)或计算机断层扫描(CT扫描)进行显像。显像剂最常用的放射性标记包括放射性碘和铟。CT扫描显像可利用重金属，例如铁螯合剂。MRI扫描可利用钆或锰的螯合剂。此外，利用氧、氮、铁、碳或镓的正电子发射体可能进行正电子发射断层摄影术(PET)。

在一些实施方式中，AMIGO-2调节剂是AMIGO-2抗体。在一些实施方式中，所述调节剂连接于显像剂或作可检测标记。在一些实施方式中，所述显像剂是¹⁸F、⁴³K、⁵²Fe、⁵⁷Co、⁶⁷Cu、⁶⁷Ga、⁷⁷Br、⁸⁷MSr、⁸⁶Y、⁹⁰Y、⁹⁹MTc、¹¹¹In、¹²³I、¹²⁵I、¹²⁷Cs、¹²⁹Cs、¹³¹I、¹³²I、¹⁹⁷Hg、²⁰³Pb或²⁰⁶Bi。

本领域技术人员熟知检测方法。例如，检测多核苷酸的方法包括但不限于：PCR、Northern印迹、Southern印迹、RNA保护和DNA杂交(包括原位杂交)。检测多肽的方法包括但不限于：蛋白质印迹、ELISA、酶活性试验、狭线印迹、肽质量指纹法(peptide mass fingerprinting)、电泳、免疫化学和免疫组织化学。检测方法的其它例子包括但不限于：放射免疫测定(RIA)、化学发光免疫测定、荧光免疫测定、时间分辨荧光免疫测定(TR-FIA)、双色荧光显微术或免疫色谱试验(ICA)，所有这些是本领域技术人员熟知的。在本发明的一些实施方式中，采用PCR方法检测多核苷酸表达，采用ELISA技术检测多肽产生。

将细胞毒性剂或诊断剂递送给细胞的方法

本发明还提供将细胞毒性剂或诊断剂递送给一个或多个表达AMIGO-2的细胞的方法。在一些实施方式中，这些方法包括使偶联于细胞毒性剂或诊断剂的本发明AMIGO-2调节剂与细胞接触。

测定癌症患者预后的方法

本发明还提供测定AMIGO-2相关癌症患者的预后的方法。在一些实施方式中，这些方法包括测定定位于细胞膜的AMIGO-2水平与定位于癌细胞其它区域的AMIGO-2水平之比。在一些实施方式中，患者中定位于细胞膜的AMIGO-2水平高于定位于不包括细胞膜的癌细胞其它区域的AMIGO-2水平表明该患者具有AMIGO-2-相关癌症并对AMIGO-2治疗敏感。在一些实施方式中，定位于细胞膜的AMIGO-2与定位于不包括细胞膜的癌细胞其它区域的AMIGO-2之比至少为2∶1表明该患者具有AMIGO-2-相关癌症并对AMIGO-2治疗敏感。在一些实施方式中，定位于细胞膜的AMIGO-2与定位于不包括细胞膜的癌细胞其它区域的AMIGO-2之比至少为3∶1表明该患者具有AMIGO-2-相关癌症并对AMIGO-2治疗敏感。

测定对AMIGO-2治疗敏感性的方法

本发明还提供测定患者对AMIGO-2治疗的敏感性的方法。这些方法包括检测患者或患者样品中是否存在AMIGO-2差别表达的证据。在一些实施方式中，患者或样品中存在AMIGO-2差别表达的证据表明患者对AMIGO-2治疗敏感。在一些实施方式中，患者或样品中不存在AMIGO-2差别表达的证据表明患者不是AMIGO-2治疗的候选者。在一些实施方式中，与正常细胞相比，癌细胞中AMIGO-2未显著上调，但癌细胞与正常细胞对AMIGO-2表达的依赖性不同。在一些实施方式中，调节AMIGO-2影响肿瘤-基质相互作用。在一些实施方式中，调节AMIGO-2抑制肿瘤和基质组织之间的相互作用。

在一些实施方式中，治疗方法包括首先鉴定对AMIGO-2治疗敏感的患者，包括将包含连接于显像剂的AMIGO-2调节剂的组合物高于对AMIGO-2治疗敏感的患者，并检测患者中是否存在基因后基因产物的证据。在一些实施方式中，这些治疗方法还包括如果患者是AMIGO-2治疗的候选者，则将一种或多种AMIGO-2调节剂给予该患者，如果患者不是AMIGO-2治疗的候选者，则用常规癌症治疗方法治疗该患者。

在一些治疗方法中，在患者被鉴定为具有癌症或易患癌症时，将一种或多种AMIGO-2调节剂单独或与其它抗癌症药物组合给予该患者。

评估癌症进展的方法

本发明还提供评估患者中癌症进展的方法，包括比较生物学样品中AMIGO-2表达产物在第一时间点的水平与同一表达产物在第二时间点的水平。与第一时间点相比，表达产物在第二时间点的水平变化表明癌症的进展。

筛选方法

本发明还提供筛选抗癌症药剂的方法。这些方法包括使表达AMIGO-2的细胞与候选化合物接触并测定AMIGO-2-相关生物学活性是否得到调节。在一些实施方式中，以下一种或多种情况的抑制表明是抗癌症药剂：染色体不稳定性、激酶活性、致瘤性、癌细胞生长、癌细胞存活、肿瘤形成、癌细胞增殖、转移性、细胞迁移、底物磷酸化、细胞周期蛋白产生、血管发生、细胞增殖、细胞周期调节、信号传导、细胞-细胞黏着、细胞-细胞膜相互作用、细胞-胞外基质相互作用、不依赖于贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用和AMIGO-2表达。在一些实施方式中，在治疗和/或诊断方法中将通过本发明方法鉴定的抗癌症药剂给予有此需要的患者。

在一些实施方式中，本发明提供通过，例如筛选假定调节剂调节下游标记物的活性或水平的能力来筛选抗癌症药剂，特别是抗转移癌症药剂的方法。在一些实施方式中，能降低细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白B1、c-Myc、c-Jun、胞外信号调节激酶(ERK)、血管内皮生长因子(VEGF)、尿激酶和聚ADP核糖聚合酶1(PARP1)水平的候选药剂鉴定为抗癌症药剂。

在一些实施方式中，本发明提供鉴定AMIGO-2调节剂的方法。在一些实施方式中，该方法包括比较有和没有候选化合物存在下包含一种或多种表达AMIGO-2的细胞的样品中AMIGO-2的磷酸化。在一些实施方式中，与没有候选化合物存在下样品中AMIGO-2的磷酸化相比，有候选化合物存在下样品中AMIGO-2的磷酸化得到调节表明该候选化合物是AMIGO-2调节剂。

在一些实施方式中，利用免疫沉淀抗体从样品中分离AMIGO-2。在一些实施方式中，免疫沉淀抗体是本发明的抗-AMIGO-2抗体。在一些实施方式中，AMIGO-2磷酸化是丝氨酸/苏氨酸磷酸化。在一些实施方式中，利用磷酸丝氨酸/苏氨酸抗体检测和/或定量测定AMIGO-2磷酸化。在一些实施方式中，免疫沉淀抗体是磷酸丝氨酸/苏氨酸抗体。

检测AMIGO-2调节的方法

在一些实施方式中，本发明提供检测细胞中AMIGO-2活性调节的方法。在一些实施方式中，这些方法包括使包含表达AMIGO-2的细胞的样品与AMIGO-2抑制剂接触足够时间以调节AMIGO-2活性；用本发明的AMIGO-2抗体免疫沉淀AMIGO-2；和利用磷酸-丝氨酸/苏氨酸抗体比较样品与对照中的AMIGO-2丝氨酸/苏氨酸磷酸化。在一些实施方式中，与对照相比，样品的细胞中AMIGO-2的丝氨酸/苏氨酸磷酸化改变表明AMIGO-2活性得到调节。在一些实施方式中，AMIGO-2磷酸化是丝氨酸/苏氨酸磷酸化。在一些实施方式中，利用磷酸丝氨酸/苏氨酸抗体检测和/或定量测定AMIGO-2磷酸化。在一些实施方式中，免疫沉淀抗体是磷酸丝氨酸/苏氨酸抗体。

在一些实施方式中，本发明提供检测包含过度表达AMIGO-2的细胞的样品中AMIGO-2活性调节的方法。在一些实施方式中，这些方法包括使细胞过度表达AMIGO-2足够的时间以调节AMIGO-2活性，用本发明的AMIGO-2抗体免疫沉淀AMIGO-2，和利用磷酸-丝氨酸/苏氨酸抗体比较样品与对照中的AMIGO-2丝氨酸/苏氨酸磷酸化。在一些实施方式中，与对照相比，样品中AMIGO-2的丝氨酸/苏氨酸磷酸化改变表明AMIGO-2活性得到调节。

在一些实施方式中，这些方法包括使样品与AMIGO-2抑制剂接触足够的时间以调节AMIGO-2活性，用抗-磷酸-丝氨酸/苏氨酸抗体免疫沉淀AMIGO-2，和利用本发明抗体比较样品与对照中的磷酸化AMIGO-2水平。在一些实施方式中，与对照相比，样品中磷酸化AMIGO-2水平的改变表明AMIGO-2活性得到调节。

在一些实施方式中，该方法包括在样品中过度表达AMIGO-2足够的时间以调节AMIGO-2活性，用抗-磷酸-丝氨酸/苏氨酸抗体免疫沉淀AMIGO-2，和利用本发明的AMIGO-2抗体比较样品与对照中磷酸化AMIGO-2的水平。在一些实施方式中，与对照相比，样品中磷酸化AMIGO-2的水平改变表明AMIGO-2活性得到调节。

纯化AMIGO-2的方法

在一些实施方式中，本发明提供从含有AMIGO-2的样品中纯化AMIGO-2蛋白的方法。这些方法包括提供包含与固体支持物结合的本发明AMIGO-2抗体的亲和基质，使样品与该亲和基质接触以形成亲和基质-AMIGO-2蛋白复合体，将亲和基质-AMIGO-2蛋白复合体与剩余样品分开，和从该亲和基质中释放AMIGO-2蛋白。

试剂盒

在一些实施方式中，本发明提供显像和/或检测与AMIGO-2差别表达相关的基因或基因产物的试剂盒。本发明的试剂盒装有实施本发明方法的可检测抗体、小分子、寡核苷酸、引诱物、模拟物或探针以及使用说明书。试剂盒任选还装有以下一种或多种：对照(阳性对照和/或阴性对照)、对照的容器、正和/或负结果的代表性例子的照片或图片。

本文所述的专利、专利申请、登录号和出版物各自通过引用全文纳入本文。

除了本文所述那些，本领域技术人员借鉴上文可明白本发明的各种改进形式。这些改进形式也属于所附实施方式的范围。以下实施例进一步说明的本发明，其目的是说明而不是要限制本发明的范围。

实施例

实施例1：一些癌组织中AMIGO-2表达上调

从激光捕捉显微切割的(LCM)结肠癌、乳腺癌和前列腺癌组织分离mRNA，将该mRNA与各自的正常组织库(图1A；RSM＝参比标准混合物)或各组织样品中癌细胞附近的正常细胞(图1B)作比较。利用

Gene

(艾飞麦特利克斯公司，圣克拉拉，加利福尼亚州)(图1A)或利用从癌性组织制得的cDNA文库内部制备的阵列(图1B)，通过寡核苷酸阵列分析经验样品。对于图1A和1B中的各表，显示了患者数量，然后是癌症和正常样品之间的相对表达。(“％GE2X”和“＞＝2X”表示上调2-倍；“％LE.5X”和“＜＝2x”表示下调2-倍)。两组芯片证明结肠癌中AMIGO-2上调。用内部芯片进行的实验表明AMIGO-2在乳腺癌和前列腺癌中也上调。用艾飞麦特利克斯实验未观察到在这些组织中上调。

还采用反转录偶联的聚合酶链式反应(RT-PCR)检测正常和癌组织样品中的相对AMIGO-2mRNA水平(图2)。通过半定量RT-PCR(Gene

应用生物系统公司(Applied Biosystems)，福斯特城，加利福尼亚州)比较一组正常组织与结肠、乳腺和前列腺LCM(激光捕捉切割)切割样品组(每组8位患者)。测试的两组引物得到相似的结果(名为“ABTP 508/509”的引物组的数据见图2)。在测试的正常组织中，乳腺和肺显示相对表达最高。与正常结肠相比，结肠癌显示上调5-倍以上，与正常乳腺相比，上调数倍。

利用人基因组U133+2.0阵列(艾飞麦特利克斯公司)对癌性和正常组织中AMIGO-2mRNA表达的寡核苷酸阵列分析的图示见图3和4。正常和癌性组织类型沿水平轴显示。在图4中，用“c”标记癌性组织(例如，“c_乳腺_导管(c_breast_duct)”代表乳腺癌组织样品)，用“n”标记正常组织。组织类型还标记有相关的组织类型和亚型，如果已知的话。例如，“c_乳腺_导管”是定位于乳腺导管的乳腺癌的癌组织。如果在手术切除时不清楚亚型或者亚型未知，那么标记“ns”代表“非特异性的”。图3和4的垂直轴上各点代表一位患者的一个组织样品，各点在垂直轴上的高度(线性)表示探针组的相对表达水平。图3表示线性分析，而图4的数据以log₂比例表示。实心圈代表表达水平在线性检测范围内的样品。空心圈代表样品中基因表达的上限，即基因低于探针组的检测限以下之处。空心方块代表样品中基因表达的下限，即探针组饱和之处。进行分析前，通过在大量不同样品组中分析其组成型探针的特性来校正各探针组。这种校正检测了各探针的相对灵敏度和探针之间的探针组反应是线性的强度范围。该范围以下的强度称为“未检出”，而该范围以上的强度称为“饱和的”。由于样品间的杂交和标记效率存在差异，因此各阵列在校正后还要进行标准化。就基因表达而言，这导致该范围的上下限随样品而有所不同。

实施例2：免疫组织化学方法揭示AMIGO-2在结肠癌和肺癌中表达

使组织切片脱石蜡，用亚利桑那州图森市维塔纳医学系统公司(VentanaMedical Systems，Inc.，Tucson，AZ)的维塔纳发现仪器(Ventana Discoveryinstrument)进行抗原回收。进行标准细胞条件化，然后将细胞与第一抗体温育60分钟。利用10μg/ml的加利福尼亚州艾莫利维尔市希龙公司(Chiron，Emeryville，CA)的家兔抗-人AMIGO-2抗体和加利福尼亚州艾莫利维尔市希龙公司的家兔IgG预采血对照(Prebleed control)。依次利用维塔纳医学系统公司的维塔纳通用第二试剂和维塔纳医学系统公司的维塔纳DAB Map试剂盒检测。利用维塔纳医学系统公司的维塔纳苏木精和靛青试剂复染，切片在分等级酒精中脱水，在二甲苯中清洁，用合成的固定介质盖上盖玻片。

染色表明肿瘤细胞和肿瘤基质中表达AMIGO-2。观察到围绕肿瘤的基质组织中表达的AMIGO-2与肿瘤自身中的表达相当或更高，从而表明AMIGO-2对于支持肿瘤生长所需的血管形成可能至关重要。

实施例3：不同细胞系中AMIGO-2蛋白水平不同

从不同细胞系的细胞团制备蛋白质裂解液，用市售可得的AMIGO-2抗体(明尼苏达州明尼阿波利斯RD系统公司(R&D Systems，Inc.)的MAB2080，)免疫沉淀该裂解液，该抗体特异性识别AMIGO-2，而不识别AMIGO-1或AMIGO-3蛋白。细胞系包括人胃癌细胞系(AGS)、两种结肠癌细胞系(SW620和HT29)、两种结肠直肠细胞系(Colo320和HCT116)和胚胎细胞系(293-CMVII)(图5)。通过丙烯酰胺凝胶电泳分开免疫沉淀捕捉的蛋白质，然后利用内部制备的抗-AMIGO-2抗体进行蛋白质印迹分析(图5)。在结肠和胃细胞系中观察到两个条带(约63kD和约90kD)。分子量较高的产物可能是糖基化、磷酸化或多聚形式的AMIGO-2。测定相对半定量RT-PCR Ct水平，将其标注在图5中4种细胞系名称旁的括号内。Ct值表明经一定轮次PCR后的检测阈值。Ct值较高表明要检测cDNA需要较多轮PCR，因此表明mRNA水平较低。测试的所有细胞系对AMIGO-2mRNA呈阳性，但检测蛋白质的能力随mRNA数量减少而降低。图5表明结肠癌细胞系中表达的AMIGO-2水平显著。

实施例4：功能试验

测试了一组siRNA在SW620细胞(表达AMIGO-2的结肠癌细胞系)中敲减AMIGO-2mRNA的能力(图6)。图6中测试的siRNA序列见表3。图6所示AMIGO-2siRNA均将AMIGO-2mRNA水平降低一定程度，但siRNAC315-1.3和C315-4.3看来降低mRNA水平最有效。

虽然蛋白质印迹分析在Colo320和HCT116细胞中未能检测到AMIGO-2蛋白水平(见图5)，但AMIGO-2特异性siRNA C315-1.3和C315-4.3降低了这些细胞系中的AMIGO-2mRNA水平，这与Colo320和HCT116细胞中的阳性mRNA表达一致。

通过几种方法测试AMIGO-2敲减的功能后果。利用市售可得的试剂盒(Toxi

康布莱科斯公司(Cambrex Corporation)，东卢瑟福，新泽西州)评估在结肠癌细胞系SW620中进行AMIGO-2敲减后的细胞死亡程度。虽然在未感染和阴性对照样品中观察到极少的细胞死亡，但敲减阳性对照基因和AMIGO-2(通过两种不同的siRNA试剂)显示明显的毒性(图8A)。也检测了AMIGO-2敲减在MRC9细胞中的功能后果。虽然在用阴性对照siRNA处理的细胞中检测到的细胞死亡量较低，但在用CHIR314-1.5SI siRNA处理的MRC9细胞中观察到显著且可重现的细胞死亡量(图8B)。

还通过检测siRNA CHIR315-1.3SI和CHIR315-4.3SI在胃癌细胞系AGS中对PARP切割和M30表达的作用而测试了AMIGO-2敲减的功能后果。PARP切割和M30产生表明作为凋亡介体的胱冬酶活化。用siRNA温育细胞48小时，然后通过蛋白质印迹分析细胞裂解液的AMIGO-2、PRAP、M30和微管蛋白的表达。阳性对照和siRNA处理样品中PARP切割和M30表达均增加，从而表明这些细胞系中凋亡增加(图9)。与预计的一样，与各siRNA接触后，AMIGO-2蛋白水平降低(图9，上图)。还检测了结肠癌细胞系SW620中siRNA CHIR315-1.3SI和CHIR315-4.3SI对PARP切割和M30表达的作用。将SW620细胞与AMIGO-2特异性siRNA(或对照RNA)温育72小时，通过上述蛋白质印迹分析细胞裂解液。检测用CHIR315-1.3SI处理的SW620细胞中的PARP切割，表明siRNA处理导致这些这些细胞中发生凋亡。

还采用其它试验检验AMIGO-2敲减在各种细胞系中的功能后果，所述细胞系包括AGS、SW620、HT29、A549和Colo320癌细胞系；184B5和HMEC非致瘤性乳腺上皮细胞系；和MRC9正常人肺成纤维细胞系。利用两种不同的AMIGO-2siRNA，即C315-1.3si和C315-4.3si进行实验。也在所有实验中证实了AMIGO-2敲减。这些实验的结果如下所示。

采用亚-G1DNA试验(Sub-G1DNA assay)，用流式细胞术检测细胞死亡。用AMIGO-2siRNA转染后，检测到在AGS、SW620、A549和Colo320癌细胞系中细胞死亡增加，在HT29中有一定程度(增加)，但在184E5或HMEC细胞中未增加。MRC9细胞没有数据报道。

还采用凋亡试验，通过检测PARP切割和/或M30产生检测细胞死亡。用AMIGO-2siRNA C315-1si和C315-4si转染后，检测到在AGS和SW620癌细胞系中细胞死亡增加，但在A549细胞中未增加。HT29、Colo320、184B5、HMEC或MRC9细胞系没有数据报道。

按照生产商的使用说明书，还采用Toxi

试验(康布莱科斯公司，东卢瑟福，新泽西州)检测细胞死亡。

将细胞接种在96-孔碟中，其密度在1天后可达到约80-95％汇合。用OptiMEM^TM将寡核苷酸稀释至2μM。然后将寡核苷酸-OptiMEM^TM加入递送载体，选择以优化用于该试验中的特定细胞类型。然后用含血浆的细胞培养基进一步稀释寡聚/递送载体混合物。siRNA寡核苷酸终浓度是50nM。

如上所述制备寡核苷酸。37℃转染细胞约4小时至过夜，用新鲜培养基替换转染混合物。胰蛋白酶处理转染的细胞，在48或72小时计数维持与平板结合的总细胞。

用AMIGO-2siRNA转染后，检测到在SW620和A549癌细胞系中细胞死亡增加，但在MRC9细胞中未增加。AGS、HT29、Colo320、184B5或HMEC细胞系没有数据报道。

采用细胞滴度发光(ATP检测；普罗美加公司)试验检测依赖贴壁的细胞生长。24小时时，将细胞以3000-5000个细胞/孔接种在96-孔板上。按照生产商的使用说明书，在各时间点(转染后24小时、48小时、72小时、96小时、120小时)裂解细胞并采用细胞滴度发光试验检验。细胞滴度发光试验的结果提供与相对细胞数成比例的荧光。在AGS、SW620、HT29、Colo320、A549和MRC9细胞中观察到依赖贴壁的细胞生长降低，但在184B5或HMEC细胞中未观察到。

采用软琼脂试验检测不依赖贴壁的细胞生长。软琼脂试验的实施首先用多聚-HEMA包被非组织培养处理的平板以防细胞与平板相连。利用胰蛋白酶收集未转染的细胞，用培养基洗涤两次。用血球计数器计数细胞，将细胞重悬在培养基中达10⁴个细胞/ml。将50μl试样置于多聚HEMA包被的96-孔板中并转染。

转染一天后，胰蛋白酶处理细胞，重悬并计数。将细胞稀释至约500个细胞/100μl/孔，转移至深孔区(deep well block)(最大体积＝1ml/孔，一式三份，按照标准布局)。将细胞接种在两块平板中：用于试验的康宁7007号超低粘附U-平板(Corning#7007Ultra Low Adherent U-plate)和用于接种效率检测的康宁3799号平板。用微波炉加热约1分钟来融化Seaplaque GTG琼脂糖3％。完全融化时，将约10ml倒入预热的50ml聚丙烯试管中(Falcon#35-2070)，在60℃加热块中温育至少10分钟。将约18.6ml完全培养基加入50ml聚丙烯试管，在水浴中以约37℃温育。用Multimek^TM移液器将琼脂糖分散于96孔板中的细胞。将约18.6ml热培养基倒入10ml琼脂糖中，小心翻转以充分混合。约4℃温育平板20-30分钟以使琼脂糖快速固化。琼脂糖固化后，将100μl完全培养基加在细胞上。为检测第0天接种效率，加入约25μl/孔阿尔玛蓝，37℃温育过夜。18-24小时后，用TECAN平板读数计在530ex/590em阅读平板。37℃，温育试验平板7天，然后用阿尔玛蓝(25μl/孔)显色。

在SW620、A549和MRC9细胞中观察到不依赖贴壁的细胞生长降低。AGS、HT29或Colo320细胞没有数据报道。该试验不适于测试MRC9、184B5和HMEC细胞，因为该类型的正常细胞通常不以不依赖于贴壁的方式生长。利用AMIGO-2调节剂能抑制癌细胞系中菌落形成表明AMIGO-2在转移表型的产生和/或维持中至关重要。

在SW620和AGS细胞中测试了通过C315-1.3si和C315-4.3si siRNA敲减AMIGO-2对功能相关下游标记的影响。将这些细胞与siRNA温育48小时，然后通过蛋白质印迹分析细胞裂解液。利用抗-AMIGO-2抗体RBAd70(希龙公司，艾莫利维尔，加利福尼亚州)检测AMIGO-2蛋白。利用微管蛋白作为加样对照。两种siRNA均在SW620和AGS细胞中导致AMIGO-2蛋白水平降低(图10A和11)。在SW620细胞中，C314-1.3si看来比C315-4.3si更有效地降低AMIGO-2蛋白水平(图10A)。还利用C315-1.3si和C315-4.3si siRNA检测了SW620细胞中AMIGO-2敲减对c-myc mRNA水平的作用。将细胞与siRNA温育72小时，然后分离并制备mRNA用于分析。阳性对照siRNA和两种AMIGO-2特异性siRNA均降低cMyc mRNA，表明AMIGO-2影响c-myc在转录水平的表达(图10B)。两种siRNA还降低了两种细胞系中的磷酸化ERK，但在SW620细胞中，C315-1.3si看来比C315-4.3si更能降低磷酸化(分别见图10和11)。两种siRNA还降低了两种细胞系中的C-myc、cFosL1和cJun(见图11、12A、14A和14B)。用两种AMIGO-2-特异性siRNA转染的AGS细胞中细胞周期蛋白D1表达也降低(图11)。用C315-1.3si转染的SW620和AGS细胞中细胞周期蛋白B1和cFosl1水平也降低(图13)。蛋白质印迹(图16)检测到接触抗AMIGO-2抗体MAB2080(用作AMIGO-2激动剂)的SW620细胞显示cMyc(图14C)、cJun(图2C)、FosL1和磷酸-ERK上调。接触MAB2080的AGS细胞还显示cMyc(图14C)和cJun(图12C)上调。此外，用AMIGO-2稳定转染的Rat1细胞显示cJun表达上调(图12B)。AMIGO-2对c-Myc、细胞周期蛋白B1、cFosl1和cJun表达的表观作用提示AMIGO-2参与调节立即早期基因。这些观察结果和AMIGO-2下调对细胞周期蛋白基因表达的作用(见上文)支持了AMIGO-2在细胞周期调节中起作用。

进行艾飞麦特利克斯实验以检测AMIGO-2siRNA对基因表达的作用(图15A和15B)。这些结果证实cFosL1和细胞周期蛋白B1的下调与AMIGO-2下调相关，这与AMIGO-2在细胞生长和存活中的作用一致。

实施例5：AMIGO-2抑制血管生成

AMIGO-2敲减抑制参与血管生成的尿激酶和VEGF表达。现已在正常血管中观察到AMIGO-2表达，从而支持了该基因在血管生成中起作用(参见上文实施例2)。参与神经元指导和运动性的许多基因，例如AMIGO-2也参与血管生成。

实施例6：AMIGO-2抗体

表1：靶向AMIGO-2多肽的抗体

供应商	目录号	特异性	表位	物种
					希龙公司	RbA	人	ECD	Rb
希龙公司	RbB	人	ECD	Rb
					阿巴康公司(Abcam)	ab16762	81％人	TGDASADDRKAGKRVV  (SEQ ID NO：5)	Rb
RD系统公司	MAB2080	人	重组ECD(SEQ ID NO：3)	小鼠
					RD系统公司	MAB2374	人	重组ECD(SEQ ID NO：3)	大鼠
RD系统公司	AF2080	人	重组ECD(SEQ ID NO：3)	山羊
					希龙公司	C3606	人	CIAMNKQRLLNETVDVTI(SEQ ID NO：6)	Rb
希龙公司	C3607	人	CIAMNKQRLLNETVDVTI(SEQ ID NO：6)	Rb

实施例7：AMIGO-2反义寡核苷酸

表2：靶向AMIGO-2的反义RNA

样品名称	天然名称	序列	SEQ IDNO：
				CHIR315-1	NM_181847:P0314	GTCTGTCCGTGTCTGTCACTCTTG	7
CHIR315-2	NM_181847:P0750	ATGACGAAGAATTAGGGTGTTCAGC	8
				CHIR315-3	NM_181847:P0857	TGGAATACAGCATTTTTCACCGTCT	9
CHIR315-4	NM_181847:P0900	GTGATTGTTGTAAAGCAGAAGCACT	10
				CHIR315-5	NM_181847:P1160	AAGGAGTACAGGGAACAGTCACAGA	11
CHIR315-6	NM_181847:P1507	AACGAGGGCTTTCTATAACCAGACT	12
				CHIR315-7	NM_181847:P1571	ACAGTTTCATTTAACAGGCGTTGCT	13
CHIR315-8	NM_181847:P1817	GTTCATCAGCGGAGGCATCACTAG	14
				CHIR315-9	NM_181847:P2526	GGTCTAAAACGGTAATTTTGGCTGA	15
CHIR315-10	NM_181847:P3219	AGGTTCAGAGAGGGTACTTGATTGC	16

实施例8：AMIGO-2siRNA

表3：靶向AMIGO-2mRNA的siRNA(反义链)

样品名称	原始名称	序列	SEQ ID NO：
				CHIR315-1SI	快而精(Qiagen)	UAG AUG UUU CUUAUA ACC GAA	17
CHIR315-2SI	快而精	AAC UGU GGA CGUCAC AAU AAA	18
				CHIR315-1.2SI		UAG CAU CAU CACAGA CCU AUA	19
CHIR315-1.3SI	达玛康-1(Dharmacon-1)D-018701-01	GAA UAA GCA ACGCCU GUU AUU	20
				CHIR315-2.3SI	达玛康-2D-018701-02	GCU CAG UGA UGGAUU UUA AUU	21
CHIR315-3.2SI		AAC UGU GGA CGUCAC AAU AAA	22
				CHIR315-3.3SI	达玛康-3D-018701-03	CCG AUG GAU UUGUAU GUU GUU	23
CHIR315-4.3SI	达玛康-4D-018701-04	GCA CUC GCG UCAGGU ACU UUU	24

实施例9：AMIGO-2表位

表位	AMIGO-2的氨基酸	结构域	SEQ IDNO：
				LTQFPMDLY	177-185	LRR5	25
LLYNNHISY	147-155	LRR4	26
				GLSQLQKLY	163-171	LRR5	27
YLHGNPFVC	224-232	LRR-CT	28
				CLDLSSNKL	121-129	LRR3	29
LIKRLDLSY	69-77	LRR1	30
				ELMFLDVSY	193-201	LRR6	31
LILRHNNIT	98-106	LRR2	32
				LAELMFLDV	191-199	LRR6	33
YSLLVFWYR	237-245	LRR-CT	34
				LKVLEVLLL	140-148	LRR4	35
YLSGNFLTQ	171-179	LRR5	36
				LYSLLVFWY	236-244	LRR-CT	37
LLQDSFMNC	274-282	LRR-CT	38
				FSTTPNLKC	113-121	LRR2-LRR3	39
DLSSNKLKTV	123-132	LRR3	40
				KLAELMFLDV	190-199	LRR6	41
CLLMITVTV	25-33	信号肽	42
				LLCLLMITV	23-31	信号肽	43
IYLHGNPFV	223-231	LRR-CT	44
				KVLEVLLLY	141-149	LRR4	45
RIPSMPMHH	204-212	LRR6	46
				NLVPGKQLR	213-221	LRR6	47
GAVVRPGCR	13-21	信号肽	48
				RHSRQVLLL	267-275	LRR-CT	49
LRGIYLHGN	220-228	LRR-CT	50
				YRRHFSSVM	244-252	LRR-CT	51
RRHFSSVMDF	245-254	LRR-CT	52
				GRFKLAELM	187-195	LRR5	53
NPFVCDCSL	228-236	LRR-CT	54
				LPTLLGAVV	8-16	信号肽	55
TPNLKCLDL	116-124	LRR3	56
				RLIKRLDLSY	68-77	LRR1	57
KNAVFQELK	133-141	LRR3	58
				SLLVFWYRR	238-246	LRR-CT	59
RRHFSSVMD	245-253	LRR-CT	60
				LRHNNITSI	100-108	LRR2	61
VPGKQLRGI	215-223	LRR6-LRRCT	62

实施例10：正常组织中的AMIGO-2表达

制备正常组织切片，用上述家兔抗-AMIGO-2或对照、预采血抗体染色。染色表明AMIGO-2在各种正常人组织中表达，包括肾上腺、乳腺、子宫颈、肺、肾脏、肝脏、卵巢、胰腺、前列腺、骨骼肌、皮肤、脾脏、睾丸、结肠和子宫，特别是在肺、子宫颈、心脏和肝脏的基质细胞亚组(例如，血管和巨噬细胞)中。艾飞麦特利克斯实验(见上文)测定到这些组织中的AMIGO-2蛋白表达水平与相应的mRNA表达水平相关，表明AMIGO-2在正常组织，特别是增殖性组织(例如，睾丸、皮肤、卵巢、脾脏和结肠)中广泛表达。

虽然参考具体实施方式描述了本发明，但本领域技术人员应该知道可作出各种改变并可取代各种等价形式而不脱离本发明的真实构思和范围。此外，可对本发明的目的、构思和范围作出许多改进以适应特定的情形、材料、物质、方法、方法步骤或步骤的组成。所有这样的改进应属于本发明的范围。

序列表

<110>诺华有限公司(Novartis AG)

<120>治疗、诊断或检测癌症的AMIGO-2抑制剂

<130>20366-058WO1

<150>US 60/807,885

<151>2006-07-20

<150>US 60/870,025

<151>2006-12-14

<160>64

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

<211>3709

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>1

ggggtcctgc agcctcccga gtgcggagag gcggggccgc ccgctgccgc ccggctgcct   60

gcgccccctc ccgcggcccc ggctctggga gcggggcgcc ccgcgcgcgg gcacacggcg  120

gccagagcgc cgaggcggta ccttcagcct gcaatgagag gaacccggga gagcccccgg  180

gagccagcga agagcttggc tgctgcgtcc agggctgctg ctgccgccgc ggctgcttga  240

aactcctcaa agttgagagc cggctagagg gtgccgcccg ccgggagccg gagggaaagg  300

aagtcgggag gtgcaagagt gacagacacg gacagacgga cgcgcagacc ttcggaaggc  360

actgcgtagg cagcctcccc ggagcccacg aggctcccca gcaccgttca ctggtgggag  420

gctgagccgg tggaaaagac accgggaaga gactcagagg cgaccataat gtcgttacgt  480

gtacacactc tgcccaccct gcttggagcc gtcgtcagac cgggctgcag ggagctgctg  540

tgtttgctga tgatcacagt gactgtgggc cctggtgcct ctggggtgtg ccccaccgct  600

tgcatctgtg ccactgacat cgtcagctgc accaacaaaa acctgtccaa ggtgcctggg  660

aaccttttca gactgattaa gagactggac ctgagttata acagaattgg gcttctggat  720

tctgagtgga ttccagtatc gtttgcaaag ctgaacaccc taattcttcg tcataacaac  780

atcaccagca tttccacggg cagtttttcc acaactccaa atttgaagtg tcttgactta  840

tcgtccaata agctgaagac ggtgaaaaat gctgtattcc aagagttgaa ggttctggaa  900

gtgcttctgc tttacaacaa tcacatatcc tatctcgatc cttcagcgtt tggagggctc  960

tcccagttgc agaaactcta cttaagtgga aattttctca cacagtttcc gatggatttg 1020

tatgttggaa ggttcaagct ggcagaactg atgtttttag atgtttctta taaccgaatt 1080

ccttccatgc caatgcacca cataaattta gtgccaggaa aacagctgag aggcatctac 1140

cgtaggcact ttagctcagt gatggatttt aagaacgatt acacctgtcg cctgtggtct 1200

gactccaggc actcgcgtca ggtacttctg ctccaggata gctttatgaa ttgctctgac 1260

agcatcatca atggttcctt tcgtgcgctt ggctttattc atgaggctca ggtcggggaa 1320

agactgatgg tccactgtga cagcaagaca ggtaatgcaa atacggattt catctgggtg 1380

ggtccagata acagactgct agagccggat aaagagatgg aaaactttta cgtgtttcac 1440

aatggaagtc tggttataga aagccctcgt tttgaggatg ctggagtgta ttcttgtatc 1500

gcaatgaata agcaacgcct gttaaatgaa actgtggacg tcacaataaa tgtgagcaat 1560

ttcactgtaa gcagatccca tgctcatgag gcatttaaca cagcttttac cactcttgct 1620

gcttgcgtgg ccagtatcgt tttggtactt ttgtacctct atctgactcc atgcccctgc 1680

aagtgtaaaa ccaagagaca gaaaaatatg ctacaccaaa gcaatgccca ttcatcgatt 1740

ctcagtcctg gccccgctag tgatgcctcc gctgatgaac ggaaggcagg tgcaggtaaa 1800

agagtggtgt ttttggaacc cctgaaggat actgcagcag ggcagaacgg gaaagtcagg 1860

ctctttccca gcgaggcagt gatagctgag ggcatcctaa agtccacgag ggggaaatct 1920

gactcagatt cagtcaattc agtgttttct gacacacctt ttgtggcgtc cacttaattt 1980

gtgcctatat ttgtatgatg tcataattta atctgttcat atttaacttt gtgtgtggtc 2040

tgcaaaataa acagcaggac agaaattgtg ttgttttgtt ctttgaaata caaccaaatt 2100

ctcttaaaat gattggtagg aaatgaggta aagtacttca gttcctcaat gtgccagaga 2160

aagatggggt tgttttccaa agtttaagtt ctagatcaca atatcttagc ttttagcact 2220

attggtaatt tcagagtagg cccaaaggtg atatgactcc cattgtccct ttatttagga 2280

tattgaaaga aaaaataaac tttatgtatt agtgtccttt aaaaatagac tttgctaact 2340

tactagtacc agagttattt taaagaaaaa cactagtgtc caatttcatt tttaaaagat 2400

gtagaaagaa gaatcaagca tcaattaatt ataaagccta aagcaaagtt agatttgggg 2460

gttattcagc caaaattacc gttttagacc agaatgaata gactacactg ataaaatgta 2520

ctggataatg ccacatccta tatggtgtta tagaaatagt gcaaggaaag tacatttgtt 2580

tgcctgtctt ttcattttgt acattcttcc cattctgtat tcttgtacaa aagatctcat 2640

tgaaaattta aagtcatcat aatttgttgc cataaatatg taagtgtcaa taccaaaatg 2700

tctgagtaac ttcttaaatc cctgttctag caaactaata ttggttcatg tgcttgtgta 2760

tatgtaaatc ttaaattatg tgaactatta aatagaccct actgtactgt gctttggaca 2820

tttgaattaa tgtaaatata tgtaatctgt gacttgatat tttgttttat ttggctattt 2880

aaaaacataa atctaaaatg tcttatgtta tcagattatg ctattttgta taaagcacca 2940

ctgatagcaa atctctctcc aaaattctta tagtaaagtt gattttttta aagggggagg 3000

ggaaggcttt aatgtgttct agatcaattt ataccttccg tatgacgttt tactctgata 3060

tcattgtgca ctttagccag atccagaaaa cactcaaatt tattttgcaa caagtgagag 3120

cccaggagac ctccttatta tcctgtctct gctttgaggc aatcaagtac cctctctgaa 3180

cctaggttcc ctcatctgta aaacaaaggt ttcagaccag atggtgttta aggtttctcc 3240

ccatactgga atgaatgatt tcttggtggt attagcatca tcacagacct atacttgctt 3300

tctgaaactc taccacatac tgaaggaata caggaatggg attaagatga ctagcatagc 3360

agtgtacagc ttgaagagat gttccacatc atcactccag ctccttctct tttctcaggg 3420

acaaatgagg cccagagaga atacgacctg tgtaaggtca aacagtggca gggaaagaag 3480

gagagctggg gtttagcatt ctccctggtg aagattggag gtccaaagaa atgactcctt 3540

tttaagggat gggcataaaa aagtgatcaa aacattgcaa aggagaatca aagattgatt 3600

gtcctggggc taagaaagaa gataattttt aaagaatggg agtgggcaac agtgaaaaat 3660

attgcagata agtagataag gatagaagat caaccactga ctggtagta             3709

<210>2

<211>522

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>2

Met Ser Leu Arg Val His Thr Leu Pro Thr Leu Leu Gly Ala Val Val

 1               5                  10                  15

Arg Pro Gly Cys Arg Glu Leu Leu Cys Leu Leu Met Ile Thr Val Thr

            20                  25                  30

Val Gly Pro Gly Ala Ser Gly Val Cys Pro Thr Ala Cys Ile Cys Ala

        35                  40                  45

Thr Asp Ile Val Ser Cys Thr Asn Lys Asn Leu Ser Lys Val Pro Gly

    50                  55                  60

Asn Leu Phe Arg Leu Ile Lys Arg Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Arg Ile

65                  70                  75                  80

Gly Leu Leu Asp Ser Glu Trp Ile Pro Val Ser Phe Ala Lys Leu Asn

                85                  90                  95

Thr Leu Ile Leu Arg His Asn Asn Ile Thr Ser Ile Ser Thr Gly Ser

            100                 105                 110

Phe Ser Thr Thr Pro Asn Leu Lys Cys Leu Asp Leu Ser Ser Asn Lys

        115                 120                 125

Leu Lys Thr Val Lys Asn Ala Val Phe Gln Glu Leu Lys Val Leu Glu

    130                 135                 140

Val Leu Leu Leu Tyr Asn Asn His Ile Ser Tyr Leu Asp Pro Ser Ala

145                 150                 155                 160

Phe Gly Gly Leu Ser Gln Leu Gln Lys Leu Tyr Leu Ser Gly Asn Phe

                165                 170                 175

Leu Thr Gln Phe Pro Met Asp Leu Tyr Val Gly Arg Phe Lys Leu Ala

            180                 185                 190

Glu Leu Met Phe Leu Asp Val Ser Tyr Asn Arg Ile Pro Ser Met Pro

        195                 200                 205

Met His His Ile Asn Leu Val Pro Gly Lys Gln Leu Arg Gly Ile Tyr

    210                 215                 220

Leu His Gly Asn Pro Phe Val Cys Asp Cys Ser Leu Tyr Ser Leu Leu

225                 230                 235                 240

Val Phe Trp Tyr Arg Arg His Phe Ser Ser Val Met Asp Phe Lys Asn

                245                 250                 255

Asp Tyr Thr Cys Arg Leu Trp Ser Asp Ser Arg His Ser Arg Gln Val

            260                 265                 270

Leu Leu Leu Gln Asp Ser Phe Met Asn Cys Ser Asp Ser Ile Ile Asn

        275                 280                 285

Gly Ser Phe Arg Ala Leu Gly Phe Ile His Glu Ala Gln Val Gly Glu

    290                 295                 300

Arg Leu Met Val His Cys Asp Ser Lys Thr Gly Asn Ala Asn Thr Asp

305                 310                 315                 320

Phe Ile Trp Val Gly Pro Asp Asn Arg Leu Leu Glu Pro Asp Lys Glu

                325                 330                 335

Met Glu Asn Phe Tyr Val Phe His Asn Gly Ser Leu Val Ile Glu Ser

            340                 345                 350

Pro Arg Phe Glu Asp Ala Gly Val Tyr Ser Cys Ile Ala Met Asn Lys

        355                 360                 365

Gln Arg Leu Leu Asn Glu Thr Val Asp Val Thr Ile Asn Val Ser Asn

    370                 375                 380

Phe Thr Val Ser Arg Ser His Ala His Glu Ala Phe Asn Thr Ala Phe

385                 390                 395                 400

Thr Thr Leu Ala Ala Cys Val Ala Ser Ile Val Leu Val Leu Leu Tyr

                405                 410                 415

Leu Tyr Leu Thr Pro Cys Pro Cys Lys Cys Lys Thr Lys Arg Gln Lys

            420                 425                 430

Asn Met Leu His Gln Ser Asn Ala His Ser Ser Ile Leu Ser Pro Gly

        435                 440                 445

Pro Ala Ser Asp Ala Ser Ala Asp Glu Arg Lys Ala Gly Ala Gly Lys

    450                 455                 460

Arg Val Val Phe Leu Glu Pro Leu Lys Asp Thr Ala Ala Gly Gln Asn

465                 470                 475                 480

Gly Lys Val Arg Leu Phe Pro Ser Glu Ala Val Ile Ala Glu Gly Ile

                485                 490                 495

Leu Lys Ser Thr Arg Gly Lys Ser Asp Ser Asp Ser Val Asn Ser Val

            500                 505                 510

Phe Ser Asp Thr Pro Phe Val Ala Ser Thr

        515                 520

<210>3

<211>252

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>3

Val Cys Pro Thr Ala Cys Ile Cys Ala Thr Asp Ile Val Ser Cys Thr

 1               5                  10                  15

Asn Lys Asn Leu Ser Lys Val Pro Gly Asn Leu Phe Arg Leu Ile Lys

            20                  25                  30

Arg Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Arg Ile Gly Leu Leu Asp Ser Glu Trp

        35                  40                  45

Ile Pro Val Ser Phe Ala Lys Leu Asn Thr Leu Ile Leu Arg His Asn

    50                  55                  60

Asn Ile Thr Ser Ile Ser Thr Gly Ser Phe Ser Thr Thr Pro Asn Leu

65                  70                  75                  80

Lys Cys Leu Asp Leu Ser Ser Asn Lys Leu Lys Thr Val Lys Asn Ala

                85                  90                  95

Val Phe Gln Glu Leu Lys Val Leu Glu Val Leu Leu Leu Tyr Asn Asn

            100                 105                 110

His Ile Ser Tyr Leu Asp Pro Ser Ala Phe Gly Gly Leu Ser Gln Leu

        115                 120                 125

Gln Lys Leu Tyr Leu Ser Gly Asn Phe Leu Thr Gln Phe Pro Met Asp

    130                 135                 140

Leu Tyr Val Gly Arg Phe Lys Leu Ala Glu Leu Met Phe Leu Asp Val

145                 150                 155                 160

Ser Tyr Asn Arg Ile Pro Ser Met Pro Met His His Ile Asn Leu Val

                165                 170                 175

Pro Gly Lys Gln Leu Arg Gly Ile Tyr Leu His Gly Asn Pro Phe Val

            180                 185                 190

Cys Asp Cys Ser Leu Tyr Ser Leu Leu Val Phe Trp Tyr Arg Arg His

        195                 200                 205

Phe Ser Ser Val Met Asp Phe Lys Asn Asp Tyr Thr Cys Arg Leu Trp

    210                 215                 220

Ser Asp Ser Arg His Ser Arg Gln Val Leu Leu Leu Gln Asp Ser Phe

225                 230                 235                 240

Met Asn Cys Ser Asp Ser Ile Ile Asn Gly Ser Phe

                245                 250

<210>4

<211>39

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>4

Met Ser Leu Arg Val His Thr Leu Pro Thr Leu Leu Gly Ala Val Val

 1               5                  10                  15

Arg Pro Gly Cys Arg Glu Leu Leu Cys Leu Leu Met Ile Thr Val Thr

            20                  25                  30

Val Gly Pro Gly Ala Ser Gly

        35

<210>5

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>5

Thr Gly Asp Ala Ser Ala Asp Asp Arg Lys Ala Gly Lys Arg Val Val

 1               5                  10                  15

<210>6

<211>18

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>6

Cys Ile Ala Met Asn Lys Gln Arg Leu Leu Asn Glu Thr Val Asp Val

 1               5                  10                  15

Thr Ile

<210>7

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>7

gtctgtccgt gtctgtcact cttg     24

<210>8

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>8

atgacgaaga attagggtgt tcagc    25

<210>9

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>9

tggaatacag catttttcac cgtct    25

<210>10

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>10

gtgattgttg taaagcagaa gcact    25

<210>11

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>11

aaggagtaca gggaacagtc acaga    25

<210>12

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>12

aacgagggct ttctataacc agact    25

<210>13

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>13

acagtttcat ttaacaggcg ttgct    25

<210>14

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>14

gttcatcagc ggaggcatca ctag     24

<210>15

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>15

ggtctaaaac ggtaattttg gctga    25

<210>16

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>16

aggttcagag agggtacttg attgc    25

<210>17

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>17

uagauguuuc uuauaaccga a        21

<210>18

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>18

aacuguggac gucacaauaa a        21

<210>19

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>19

uagcaucauc acagaccuau a        21

<210>20

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>20

gaauaagcaa cgccuguuau u        21

<210>21

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>21

gcucagugau ggauuuuaau u        21

<210>22

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>22

aacuguggac gucacaauaa a    21

<210>23

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>23

ccgauggauu uguauguugu u    21

<210>24

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>24

gcacucgcgu cagguacuuu u    21

<210>25

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>25

Leu Thr Gln Phe Pro Met Asp Leu Tyr

 1               5

<210>26

<211>7

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>26

Leu Leu Tyr Asn Asn His Tyr

 1               5

<210>27

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>27

Gly Leu Ser Gln Leu Gln Lys Leu Tyr

 1               5

<210>28

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>28

Tyr Leu His Gly Asn Pro Phe Val Cys

 1               5

<210>29

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>29

Cys Leu Asp Leu Ser Ser Asn Lys Leu

 1               5

<210>30

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>30

Leu Ile Lys Arg Leu Asp Leu Ser Tyr

 1               5

<210>31

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>31

Glu Leu Met Phe Leu Asp Val Ser Tyr

 1               5

<210>32

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>32

Leu Ile Leu Arg His Asn Asn Ile Thr

 1               5

<210>33

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>33

Leu Ala Glu Leu Met Phe Leu Asp Val

 1               5

<210>34

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>34

Tyr Ser Leu Leu Val Phe Trp Tyr Arg

 1               5

<210>35

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>35

Leu Lys Val Leu Glu Val Leu Leu Leu

 1               5

<210>36

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>36

Tyr Leu Ser Gly Asn Phe Leu Thr Gln

 1               5

<210>37

<211>7

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>37

Lys Leu Leu Val Phe Trp Tyr

 1               5

<210>38

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>38

Leu Leu Gln Asp Ser Phe Met Asn Cys

 1               5

<210>39

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>39

Phe Ser Thr Thr Pro Asn Leu Lys Cys

 1               5

<210>40

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>40

Asp Leu Ser Ser Asn Lys Leu Lys Thr Val

 1               5                  10

<210>41

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>41

Lys Leu Ala Glu Leu Met Phe Leu Asp Val

 1               5                  10

<210>42

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>42

Cys Leu Leu Met Ile Thr Val Thr Val

 1               5

<210>43

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>43

Leu Leu Cys Leu Leu Met Ile Thr Val

 1               5

<210>44

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>44

Ile Tyr Leu His Gly Asn Pro Phe Val

 1               5

<210>45

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>45

Lys Val Leu Glu Val Leu Leu Leu Tyr

 1               5

<210>46

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>46

Arg Ile Pro Ser Met Pro Met His His

 1               5

<210>47

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>47

Asn Leu Val Pro Gly Lys Gln Leu Arg

 1               5

<210>48

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>48

Gly Ala Val Val Arg Pro Gly Cys Arg

 1               5

<210>49

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>49

Arg His Ser Arg Gln Val Leu Leu Leu

 1               5

<210>50

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>50

Leu Arg Gly Ile Tyr Leu His Gly Asn

 1               5

<210>51

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>51

Tyr Arg Arg His Phe Ser Ser Val Met

 1               5

<210>52

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>52

Arg Arg His Phe Ser Ser Val Met Asp Phe

 1               5                  10

<210>53

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>53

Gly Arg Phe Lys Leu Ala Glu Leu Met

 1               5

<210>54

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>54

Asn Pro Phe Val Cys Asp Cys Ser Leu

 1               5

<210>55

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>55

Leu Pro Thr Leu Leu Gly Ala Val Val

 1               5

<210>56

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>56

Thr Pro Asn Leu Lys Cys Leu Asp Leu

 1               5

<210>57

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>57

Arg Leu Ile Lys Arg Leu Asp Leu Ser Tyr

 1               5                  10

<210>58

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>58

Lys Asn Ala Val Phe Gln Glu Leu Lys

 1               5

<210>59

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>59

Ser Leu Leu Val Phe Trp Tyr Arg Arg

 1               5

<210>60

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>60

Arg Arg His Phe Ser Ser Val Met Asp

 1               5

<210>61

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>61

Leu Arg His Asn Asn Ile Thr Ser Ile

 1               5

<210>62

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>62

Val Pro Gly Lys Gln Leu Arg Gly Ile

 1               5

<210>63

<211>492

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>63

Met His Pro His Arg Asp Pro Arg Gly Leu Trp Leu Leu Leu Pro Ser

 1               5                  10                  15

Leu Ser Leu Leu Leu Phe Glu Val Ala Arg Ala Gly Arg Ala Val Val

            20                  25                  30

Ser Cys Pro Ala Ala Cys Leu Cys Ala Ser Asn Ile Leu Ser Cys Ser

        35                  40                  45

Lys Gln Gln Leu Pro Asn Val Pro His Ser Leu Pro Ser Tyr Thr Ala

    50                  55                  60

Leu Leu Asp Leu Ser His Asn Asn Leu Ser Arg Leu Arg Ala Glu Trp

65                  70                  75                  80

Thr Pro Thr Arg Leu Thr Gln Leu His Ser Leu Leu Leu Ser His Asn

                85                  90                  95

His Leu Asn Phe Ile Ser Ser Glu Ala Phe Ser Pro Val Pro Asn Leu

            100                 105                 110

Arg Tyr Leu Asp Leu Ser Ser Asn Gln Leu Arg Thr Leu Asp Glu Phe

        115                 120                 125

Leu Phe Ser Asp Leu Gln Val Leu Glu Val Leu Leu Leu Tyr Asn Asn

    130                 135                 140

His Ile Met Ala Val Asp Arg Cys Ala Phe Asp Asp Met Ala Gln Leu

145                 150                 155                 160

Gln Lys Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Gln Ile Ser Arg Phe Pro Leu Glu

                165                 170                 175

Leu Val Lys Glu Gly Ala Lys Leu Pro Lys Leu Thr Leu Leu Asp Leu

            180                 185                 190

Ser Ser Asn Lys Leu Lys Asn Leu Pro Leu Pro Asp Leu Gln Lys Leu

        195                 200                 205

Pro Ala Trp Ile Lys Asn Gly Leu Tyr Leu His Asn Asn Pro Leu Asn

    210                 215                 220

Cys Asp Cys Glu Leu Tyr Gln Leu Phe Ser His Trp Gln Tyr Arg Gln

225                 230                 235                 240

Leu Ser Ser Val Met Asp Phe Gln Glu Asp Leu Tyr Cys Met Asn Ser

                245                 250                 255

Lys Lys Leu His Asn Val Phe Asn Leu Ser Phe Leu Asn Cys Gly Glu

            260                 265                 270

Tyr Lys Glu Arg Ala Trp Glu Ala His Leu Gly Asp Thr Leu Ile Ile

        275                 280                 285

Lys Cys Asp Thr Lys Gln Gln Gly Met Thr Lys Val Trp Val Thr Pro

    290                 295                 300

Ser Asn Glu Arg Val Leu Asp Glu Val Thr Asn Gly Thr Val Ser Val

305                 310                 315                 320

Ser Lys Asp Gly Ser Leu Leu Phe Gln Gln Val Gln Val Glu Asp Gly

                325                 330                 335

Gly Val Tyr Thr Cys Tyr Ala Met Gly Glu Thr Phe Asn Glu Thr Leu

            340                 345                 350

Ser Val Glu Leu Lys Val His Asn Phe Thr Leu His Gly His His Asp

        355                 360                 365

Thr Leu Asn Thr Ala Tyr Thr Thr Leu Val Gly Cys Ile Leu Ser Val

    370                 375                 380

Val Leu Val Leu Ile Tyr Leu Tyr Leu Thr Pro Cys Arg Cys Trp Cys

385                 390                 395                 400

Arg Gly Val Glu Lys Pro Ser Ser His Gln Gly Asp Ser Leu Ser Ser

                405                 410                 415

Ser Met Leu Ser Thr Thr ProA sn His Asp Pro Met Ala Gly Gly Asp

            420                 425                 430

Lys Asp Asp Gly Phe Asp Arg Arg Val Ala Phe Leu Glu Pro Ala Gly

        435                 440                 445

Pro Gly Gly Gln Ser Gly Lys Leu Lys Pro Gly Asn Thr Leu Pro Val

    450                 455                 460

Pro Glu Ala Thr Gly Lys Gly Gln Arg Arg Met Ser Asp Pro Glu Ser

465                 470                 475                 480

Val Ser Ser Val Phe Ser Asp Thr Pro Ile Val Val

                485                 490

<210>64

<211>504

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>64

Met Thr Trp Leu Val Leu Leu Gly Thr Leu Leu Cys Met Leu Arg Val

 1              5                   10                  15

Gly Leu Gly Thr Pro Asp Ser Glu Gly Phe Pro Pro Arg Ala Leu His

            20                  25                  30

Asn Cys Pro Tyr Lys Cys Ile Cys Ala Ala Asp Leu Leu Ser Cys Thr

        35                  40                  45

Gly Leu Gly Leu Gln Asp Val Pro Ala Glu Leu Pro Ala Ala Thr Ala

    50                  55                  60

Asp Leu Asp Leu Ser His Asn Ala Leu Gln Arg Leu Arg Pro Gly Trp

65                  70                  75                  80

Leu Ala Pro Leu Phe Gln Leu Arg Ala Leu His Leu Asp His Asn Glu

                85                  90                  95

Leu Asp Ala Leu Gly Arg Gly Val Phe Val Asn Ala Ser Gly Leu Arg

            100                 105                 110

Leu Leu Asp Leu Ser Ser Asn Thr Leu Arg Ala Leu Gly Arg His Asp

        115                 120                 125

Leu Asp Gly Leu Gly Ala Leu Glu Lys Leu Leu Leu Phe Asn Asn Arg

    130                 135                 140

Leu Val His Leu Asp Glu His Ala Phe His Gly Leu Arg Ala Leu Ser

145                 150                 155                 160

His Leu Tyr Leu Gly Cys Asn Glu Leu Ala Ser Phe Ser Phe Asp His

                165                 170                 175

Leu His Gly Leu Ser Ala Thr His Leu Leu Thr Leu Asp Leu Ser Ser

            180                 185                 190

Asn Arg Leu Gly His Ile Ser Val Pro Glu Leu Ala Ala Leu Pro Ala

        195                 200                205

Phe Leu Lys Asn Gly Leu Tyr Leu His Asn Asn Pro Leu Pro Cys Asp

    210                 215                 220

Cys Arg Leu Tyr His Leu Leu Gln Arg Trp His Gln Arg Gly Leu Ser

225                 230                 235                 240

Ala Val Arg Asp Phe Ala Arg Glu Tyr Val Cys Leu Ala Phe Lys Val

                245                 250                 255

Pro Ala Ser Arg Val Arg Phe Phe Gln His Ser Arg Val Phe Glu Asn

            260                 265                 270

Cys Ser Ser Ala Pro Ala Leu Gly Leu Glu Arg Pro Glu Glu His Leu

        275                 280                 285

Tyr Ala Leu Val Gly Arg Ser Leu Arg Leu Tyr Cys Asn Thr Ser Val

    290                 295                 300

Pro Ala Met Arg Ile Ala Trp Val Ser Pro Gln Gln Glu Leu Leu Arg

305                 310                 315                 320

Ala Pro Gly Ser Arg Asp Gly Ser Ile Ala Val Leu Ala Asp Gly Ser

                325                 330                 335

Leu Ala Ile Gly Asn Val Gln Glu Gln His Ala Gly Leu Phe Val Cys

            340                 345                 350

Leu Ala Thr Gly Pro Arg Leu His His Asn Gln Thr His Glu Tyr Asn

        355                 360                 365

Val Ser Val His Phe Pro Arg Pro Glu Pro Glu Ala Phe Asn Thr Gly

    370                 375                 380

Phe Thr Thr Leu Leu Gly Cys Ala Val Gly Leu Val Leu Val Leu Leu

385                 390                 395                 400

Tyr Leu Phe Ala Pro Pro Cys Arg Cys Cys Arg Arg Ala Cys Arg Cys

                405                 410                 415

Arg Arg Trp Pro Gln Thr Pro Ser Pro Leu Gln Glu Leu Ser Ala Gln

            420                 425                 430

Ser Ser Val Leu Ser Thr Thr Pro Pro Asp Ala Pro Ser Arg Lys Ala

        435                 440                 445

Ser Val His Lys His Val Val Phe Leu Glu Pro Gly Arg Arg Gly Leu

    450                 455                 460

Asn Gly Arg Val Gln Leu Ala Val Ala Glu Glu Phe Asp Leu Tyr Asn

465                 470                 475                 480

Pro Gly Gly Leu Gln Leu Lys Ala Gly Ser Glu Ser Ala Ser Ser Ile

                485                 490                 495

Gly Ser Glu Gly Pro Met Thr Thr

            500

Claims (121)

1.一种治疗有此需要的患者的癌症或癌症症状的方法，包括将治疗有效量的AMIGO-2抑制剂给予该患者，所述AMIGO-2抑制剂选自下组：

(a)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(b)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(c)分离的双链RNA(dsRNA)；

(d)小分子；

(e)模拟物；

(f)可溶性受体；和

(g)引诱物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，与对照相比，所述AMIGO-2抑制剂将AMIGO-2表达抑制至少20％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，与对照相比，所述AMIGO-2抑制剂导致至少20％癌细胞死亡。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述AMIGO-2抑制剂是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体、单链抗体或Fab片段。

5.如权利要求87所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段结合AMIGO-2的ECD中一个或多个表位。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合基本上由SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3构成的序列中的一个或多个表位。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRRNT结构域中一个或多个表位。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR1结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：30和SEQ ID NO：57构成的组。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR2结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：32、SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：61构成的组。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR3结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：29、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：58构成的组。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR4结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：26、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：45构成的组。

12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR5结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：53构成的组。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR6结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47和SEQ ID NO：62构成的组。

14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRRCT结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：28、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ IDNO：54、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60和SEQ ID NO：62构成的组。

15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的Ig V-组结构域中一个或多个表位。

16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的Ig结构域中一个或多个表位。

17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的ECD中一个或多个表位。

18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合选自由SEQ ID NO：3-6和25-62构成的组的一个或多个表位。

19.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述患者具有或易患肺癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌或胰腺癌。

20.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述癌症是肺癌或结肠癌。

21.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述抗体或Fab片段抑制选自以下的AMIGO-2活性：染色体稳定性、致瘤性、细胞增殖、细胞周期调节、癌细胞运动性、细胞黏着、肿瘤形成、转移性、AMIGO-2信号传导、癌细胞存活、细胞周期蛋白产生、激酶活性、底物磷酸化、不依赖于贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用、细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平、肿瘤和基质组织之间的相互作用和血管发生。

22.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述抗体作了标记。

23.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述标记是酶、放射性同位素、毒素或荧光团。

24.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述抗体对除AMIGO-2以外的多肽的结合亲和力小于约1x10⁵K_a。

25.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述AMIGO-2抑制剂是包含第一核苷酸链和第二核苷酸链的dsRNA分子，所述第一核苷酸链包含SEQID NO：17-24所示某序列的至少19个连续核苷酸，所述第二核苷酸链包含与所述第一链基本上互补的序列，其中所述dsRNA分子长度短于3769个核苷酸。

26.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述AMIGO-2抑制剂是包含SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离核酸。

27.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括用化疗、放疗或外科手术中的一种或多种治疗患者。

28.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述癌症症状选自下组：久咳、气喘恶化、体重减轻、过度疲劳、疼痛、咳血、尿中带血、食欲不振、大量出汗、发热、高血压、贫血、腹泻、便秘、血便、黄疸、头晕、虚弱、寒颤、肌肉痉挛、深静脉血栓、腹胀、胃气胀、月经不调、结肠转移、肺转移、膀胱转移、肾转移、乳腺转移、子宫转移、卵巢转移和胰腺转移。

29.一种调节患者AMIGO-2活性的方法，该方法包括将足以调节AMIGO-2活性用量的AMIGO-2抑制剂给予该患者，所述AMIGO-2抑制剂选自下组：

(a)特异性结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(b)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(c)分离的双链RNA(dsRNA)；

(d)小分子；

(e)模拟物；

(f)可溶性受体；和

(g)引诱物。

30.如权利要求29所述的方法，其特征在于，所述AMIGO-2活性选自下组：染色体稳定性、致瘤性、细胞增殖、细胞周期调节、癌细胞运动性、细胞黏着、肿瘤形成、转移性、AMIGO-2信号传导、AMIGO-2下游标记的调节、癌细胞存活、细胞周期蛋白产生、激酶活性、底物磷酸化、不依赖于贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用、细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平、肿瘤和基质组织之间的相互作用和血管发生。

31.如权利要求29所述的方法，其特征在于，所述AMIGO-2抑制剂是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体、单链抗体或Fab片段。

32.一种鉴定对AMIGO-2治疗敏感的患者的方法，包括：

(a)检测所述样品中是否存在AMIGO-2表达的证据，其中所述样品中存在AMIGO-2表达的证据表明患者是AMOGI-2治疗的候选者，而所述样品中不存在AMIGO-2表达的证据表明患者不是AMOGI-2治疗的候选者；

(b)如果患者是AMOGI-2治疗的候选者，则将治疗有效量选自下组的抑制剂给予该患者：

(1)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(2)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(3)分离的双链RNA(dsRNA)；

(4)小分子；

(5)模拟物；

(6)可溶性受体；和

(7)引诱物；和

(c)如果该患者不是AMOGI-2治疗的候选者，则将传统癌症治疗剂给予该患者。

33.如权利要求32所述的方法，其特征在于，与对照相比，AMIGO-2表达至少增加20％。

34.如权利要求32所述的方法，其特征在于，通过检测AMIGO-2RNA水平来检测AMIGO-2表达的证据。

35.如权利要求32所述的方法，其特征在于，通过检测AMIGO-2多肽水平来检测AMIGO-2表达的证据。

36.如权利要求32所述的方法，其特征在于，所述患者具有或易患肺癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌或胰腺癌中的一种或多种。

37.一种抑制癌细胞生长的方法，包括使癌细胞与相比对照以至少20％抑制细胞生长用量的AMIGO-2抑制剂接触，所述AMIGO-2抑制剂选自下组：

(a)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(b)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(c)分离的双链RNA(dsRNA)；

(d)小分子；

(e)模拟物；

(f)可溶性受体；和

(g)引诱物。

38.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述癌细胞在癌症患者体内或衍生自癌症患者。

39.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述AMIGO-2抑制剂是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体、单链抗体或Fab片段。

40.一种抑制有此需要的患者中癌细胞表型的方法，所述方法包括将治疗有效量的AMIGO-2抑制剂给予所述患者，所述AMIGO-2抑制剂选自下组：

(a)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(b)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(c)分离的双链RNA(dsRNA)；

(d)小分子；

(e)模拟物；

(f)可溶性受体；和

(g)引诱物。

41.如权利要求40所述的方法，其特征在于，所述癌细胞表型是胶原中的细胞运动性、致瘤性、以不依赖于贴壁的方式生长的能力、细胞存活能力或细胞黏着能力中的一种或多种。

42.如权利要求40所述的方法，其特征在于，所述癌细胞选自肺癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌或胰腺癌细胞。

43.一种抑制癌细胞生长的方法，该方法包括将调节一种或多种AMIGO-2下游标记的化合物给予具有包含一种或多种表达AMIGO-2的细胞的癌症的患者。

44.如权利要求43所述的方法，其特征在于，所述一种或多种AMIGO-2的下游标记选自：c-MYC、c-Jun、FosL1和胞外信号调节激酶(ERK)。

45.如权利要求44所述的方法，其特征在于，所述ERK是磷酸化ERK。

46.一种检测患者的肿瘤的方法，包括将包含连接于显像剂的AMIGO-2抑制剂的组合物给予患者并检测该显像剂在患者中的定位，其中所述抑制剂选自：

(a)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(b)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(c)分离的双链RNA(dsRNA)；

(d)小分子；

(e)模拟物；

(f)可溶性受体；和

(g)引诱物。

47.如权利要求46所述的方法。其特征在于，所述组合物包含偶联于显像剂的AMIGO-2抗体。

48.如权利要求47所述的方法，其特征在于所述显像剂是¹⁸F、⁴³K、⁵²Fe、⁵⁷Co、⁶⁷Cu、⁶⁷Ga、⁷⁷Br、⁸⁷MSr、⁸⁶Y、⁹⁰Y、⁹⁹MTc、¹¹¹In、¹²³I、¹²⁵I、¹²⁷Cs、¹²⁹Cs、¹³¹I、¹³²I、¹⁹⁷Hg、²⁰³Pb或²⁰⁶Bi。

49.一种鉴定癌症抑制剂的方法，其中所述癌症的特征在于AMIGO-2相比于对照过度表达，所述方法包括使表达AMIGO-2的细胞与候选化合物接触并测定AMIGO-2活性是否得到调节，其中所述AMIGO-2活性得到调节是癌症抑制剂的标志。

50.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述候选化合物调节癌细胞中而不是非癌细胞中的AMIGO-2活性。

51.一种鉴定癌症抑制剂的方法，其中所述癌症的特征在于AMIGO-2相比于对照过度表达，所述方法包括使表达AMIGO-2的细胞与候选化合物和AMIGO-2配体接触并测定AMIGO-2下游标记物的活性是否得到调节，其中所述下游标记物得到调节是癌症抑制剂的标志。

52.如权利要求51所述的方法，其特征在于，所述下游标记物选自：细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白B1、c-Myc、c-Jun、FosL1、胞外信号调节激酶(ERK)、血管内皮生长因子(VEGF)、尿激酶和聚ADP核糖聚合酶1(PARP1)。

53.如权利要求51所述的方法，其特征在于，所述下游标记物的活性是ERK磷酸化降低或ERK表达降低。

54.如权利要求51所述的方法，其特征在于，所述下游标记物的活性是PARP1切割增加。

55.如权利要求51所述的方法，其特征在于，所述候选化合物和AMIGO-2配体诱导调节癌细胞而不是非癌细胞中AMIGO-2的下游标记物。

56.一种将细胞毒性剂或诊断剂递送至一种或多种表达AMIGO-2的细胞的方法，所述方法包括：

(a)提供与纯化抗体偶联的细胞毒剂或诊断剂，所述抗体特异性结合AMIGO-2多肽的表位，其中所述表位位于选自下组的结构域中：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；和

(b)使该细胞与该抗体-试剂或片段-试剂偶联物接触。

57.一种治疗癌症患者的方法，包括将患者癌症样品的AMIGO-2表达与对照样品的AMIGO-2表达进行比较，和

(1)如果与对照样品相比，该癌症样品的AMIGO-2表达上调则用包含选自下组的抑制剂的组合物治疗该患者：

(a)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(b)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(c)分离的双链RNA(dsRNA)；

(d)小分子；

(e)模拟物；

(f)可溶性受体；和

(g)引诱物；和

(2)如果与对照样品相比，该癌症样品中AMIGO-2表达未变或下调则进行二级试验。

58.如权利要求57所述的方法，其特征在于，所述二级试验包括比较有和没有抑制剂存在下，癌症样品中AMIGO-2下游标记物的水平或活性，其中：

(1)如果与没有AMIGO-2抑制剂存在下癌症样品中的AMIGO-2下游标记物的水平或活性相比，有AMIGO-2抑制剂存在下癌症样品中的AMIGO-2下游标记物的水平或活性降低，则用包含选自下组的抑制剂的组合物治疗该患者：

(a)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(b)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(c)分离的双链RNA(dsRNA)；

(d)小分子；

(e)模拟物；

(f)可溶性受体；和

(g)引诱物；或

(2)如果与没有AMIGO-2抑制剂存在下癌症样品中的AMIGO-2下游标记物的水平或活性相比，有AMIGO-2抑制剂存在下癌症样品中的AMIGO-2下游标记物的水平或活性不变或降低，则用常规癌症治疗剂治疗该患者。

59.如权利要求57所述的方法，其特征在于，所述AMIGO-2下游标记物选自：细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白B1、c-Myc、c-Jun、FosL1、VEGF、尿激酶和ERK。

60.如权利要求57所述的方法，其特征在于，所述下游标记物的活性是ERK磷酸化或ERK表达。

61.如权利要求57所述的方法，其特征在于，所述下游AMIGO-2标记物的活性降低。

62.如权利要求57所述的方法，其特征在于，所述二级试验包括比较有和没有抑制剂存在下，癌症样品中的PARP1切割，其中：

(a)如果与没有AMIGO-2抑制剂存在下癌症样品中的PARP1切割相比，有AMIGO-2抑制剂存在下癌症样品中的PARP1切割增加，则用包含选自下组的抑制剂的组合物治疗该患者：

(1)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(2)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(3)分离的双链RNA(dsRNA)；

(4)小分子；

(5)模拟物；

(6)可溶性受体；和

(7)引诱物；或

(b)如果与没有AMIGO-2抑制剂存在下癌症样品中的PARP1切割相比，有AMIGO-2抑制剂存在下癌症样品中的PARP1切割增加或不变，则用常规癌症治疗剂治疗该患者。

63.一种诊断患者中癌症的方法，包括检验候选癌细胞中的AMIGO-2定位，其中当定位于细胞膜的AMIGO-2与定位于不包括细胞膜的癌细胞其它区域的AMIGO-2之比至少为2∶1时，该患者诊断为具有AMIGO-2相关癌症。

64.如权利要求63所述的方法，其特征在于，定位于细胞膜的AMIGO-2与定位于不包括细胞膜的癌细胞其它区域的AMIGO-2之比至少为3∶1。

65.如权利要求63所述的方法，其特征在于，还包括当患者诊断为具有AMIGO-2相关癌症时，将含有选自下组的抑制剂的组合物给予该患者：

(a)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(b)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(c)分离的双链RNA(dsRNA)；

(d)小分子；

(e)模拟物；

(f)可溶性受体；和

(g)引诱物。

66.一种鉴定AMIGO-2调节剂的方法，包括比较有和没有候选化合物存在下，包含表达AMIGO-2的一种或多种细胞的样品中AMIGO-2的磷酸化，其中与没有候选化合物存在下样品中AMIGO-2的磷酸化相比，有候选化合物存在下样品中AMIGO-2的磷酸化得到调节表明该候选化合物是AMIGO-2调节剂。

67.如权利要求66所述的方法，其特征在于，利用免疫沉淀抗体从样品中分离AMIGO-2。

68.如权利要求67所述的方法，其特征在于，所述免疫沉淀抗体是特异性结合AMIGO-2多肽表位的抗体，其中所述表位位于选自下组的结构域中：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域。

69.如权利要求66所述的方法，其特征在于，所述AMIGO-2磷酸化是丝氨酸/苏氨酸磷酸化。

70.如权利要求66所述的方法，其特征在于，利用磷酸丝氨酸/苏氨酸抗体测定所述AMIGO-2磷酸化。

71.如权利要求67所述的方法，其特征在于，所述免疫沉淀抗体是磷酸丝氨酸/苏氨酸抗体。

72.一种包含AMIGO-2抑制剂的一种或多种药学上可接受的载体的组合物，其中所述AMIGO-2抑制剂选自下组：

(a)结合选自下组的AMIGO-2结构域中的表位的抗体：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域；

(b)包含选自SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离寡核苷酸；

(c)分离的双链RNA(dsRNA)；

(d)小分子；

(e)模拟物；

(f)可溶性受体；和

(g)引诱物。

73.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述组合物抑制至少一种选自以下的AMIGO-2活性：染色体稳定性、致瘤性、细胞增殖、细胞周期调节、癌细胞运动性、细胞黏着、肿瘤形成、转移性、AMIGO-2信号传导、癌细胞存活、细胞周期蛋白产生、激酶活性、底物磷酸化、不依赖于贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用、细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平、肿瘤和基质组织之间的相互作用和血管发生。

74.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述组合物在癌细胞而不在非癌细胞中诱导至少一种细胞表型。

75.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述组合物抑制癌细胞存活，抑制AMIGO-2的细胞质磷酸化，抑制血管发生或细胞增殖、丝氨酸/苏氨酸激酶活性，抑制Erk磷酸化，抑制cJun、cMyc或FosL1表达，或抑制分裂细胞进展至细胞周期的G2/M期。

76.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述组合物是无菌可注射剂。

77.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述AMIGO-2抑制剂抑制AMIGO-2翻译或诱导AMIGO-2mRNA降解。

78.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述AMIGO-2抑制剂是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体、单链抗体或Fab片段。

79.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRRNT结构域中一个或多个表位。

80.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR1结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：30和SEQ ID NO：57构成的组。

81.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR2结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：32、SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：61构成的组。

82.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR3结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：29、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：58构成的组。

83.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR4结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：26、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：45构成的组。

84.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR5结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：53构成的组。

85.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRR6结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ IDNO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47和SEQ ID NO：62构成的组。

86.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的LRRCT结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQID NO：28、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ IDNO：54、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60和SEQ ID NO：62构成的组。

87.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的Ig V-组结构域中一个或多个表位。

88.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的Ig结构域中一个或多个表位。

89.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合AMIGO-2的胞外域(ECD)中一个或多个表位。

90.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合基本上由选自SEQ ID NO：3-6和25-62的序列构成的序列中的一个或多个表位。

91.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段特异性结合基本上由SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3构成的序列中的一个或多个表位。

92.如权利要求78所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段结合AMIGO-2的亲和力至少为1x10⁸K_a。

93.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述AMIGO-2活性选自：染色体稳定性、致瘤性、细胞增殖、细胞周期调节、癌细胞运动性、细胞黏着、肿瘤形成、转移性、AMIGO-2信号传导、癌细胞存活、细胞周期蛋白产生、激酶活性、底物磷酸化、不依赖于贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用、细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平、肿瘤和基质组织之间的相互作用和血管发生。

94.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述抗体或Fab片段抑制癌细胞存活、AMIGO-2的细胞质磷酸化或ERK磷酸化。

95.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述组合物抑制cJun、cMyc或FosL1表达。

96.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述组合物抑制分裂细胞进展至细胞周期的G2/M期。

97.如权利要求72所述的组合物，其特征在于，所述AMIGO-2抑制剂是包含第一核苷酸链和第二核苷酸链的dsRNA分子，所述第一核苷酸链包含SEQID NO：17-24所示某序列的至少19个连续核苷酸，所述第二核苷酸链包含与所述第一链基本上互补的序列，其中所述dsRNA分子长度短于3769个核苷酸。

98.如权利要求97所述的组合物，其特征在于，与对照相比，所述dsRNA将AMIGO-2翻译抑制至少20％。

99.一种特异性结合AMIGO-2多肽的表位的纯化抗体，其特征在于，所述表位位于选自下组的结构域中：信号肽、LRRNT结构域、LRR1结构域、LRR2结构域、LRR3结构域、LRR4结构域、LRR5结构域、LRR6结构域、LRRCT结构域、Ig V-组结构域和Ig结构域。

100.如权利要求99所述的纯化抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合AMIGO-2的LRR1结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：57构成的组。

101.如权利要求99所述的纯化抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合AMIGO-2的LRR2结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：61构成的组。

102.如权利要求99所述的纯化抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合AMIGO-2的LRR3结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：58构成的组。

103.如权利要求99所述的纯化抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合AMIGO-2的LRR4结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：45构成的组。

104.如权利要求99所述的纯化抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合AMIGO-2的LRR5结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：53构成的组。

105.如权利要求99所述的纯化抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合AMIGO-2的LRR6结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47和SEQ IDNO：62构成的组。

106.如权利要求99所述的组合物，其特征在于，所述抗体特异性结合AMIGO-2的LRRCT结构域中一个或多个表位，所述表位选自SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60和SEQ ID NO：62构成的组。

107.如权利要求99所述的纯化抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合选自SEQ ID NO：25-62的一个或多个表位。

108.如权利要求119所述的纯化抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合基本上由SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3构成的序列中的一个或多个表位。

109.如权利要求99所述的纯化抗体，其特征在于，所述抗体抑制选自下组的AMIGO-2活性：染色体稳定性、致瘤性、细胞增殖、细胞周期调节、癌细胞运动性、细胞黏着、肿瘤形成、转移性、AMIGO-2信号传导、癌细胞存活、细胞周期蛋白产生、激酶活性、底物磷酸化、不依赖于贴壁的生长、AMIGO-2蛋白定位于细胞膜、AMIGO-2与AMIGO-1或AMIGO-3中一种或两种之间的相互作用、细胞质磷酸化AMIGO-2蛋白的水平、肿瘤和基质组织之间的相互作用和血管发生。

110.一种特异性结合AMIGO-2多肽的一个或多个表位的纯化抗体，其中所述表位包含选自SEQ ID NO：3-6和25-62构成的组的序列。

111.一种产生权利要求99所述抗体的分离细胞。

112.一种产生权利要求99所述抗体的杂交瘤。

113.一种产生权利要求99所述抗体的非人转基因动物。

114.一种SEQ ID NO：2所示多肽的携带表位的分离片段，所述片段包含选自SEQ ID NO：3-6和25-62构成的组的一个或多个表位。

115.如权利要求114所述携带表位的片段，其特征在于，所述片段包含SEQ ID NO：2的约6-20个毗连氨基酸。

116.如权利要求114所述携带表位的片段，其特征在于，所述片段包含SEQ ID NO：2的至少21个毗连氨基酸和SEQ ID NO：2的少于522个毗连氨基酸。

117.一种编码如权利要求114所述携带表位的分离片段的多核苷酸。

118.一种纯化的AMIGO-2抗体，其通过用权利要求114所述携带表位的片段免疫对象获得。

119.一种分离的dsRNA分子，其包含第一核苷酸链和第二核苷酸链，所述第一核苷酸链包含SEQ ID NO：17-24所示某序列的至少19个连续核苷酸，所述第二核苷酸链包含与所述第一链基本上互补的序列，其中所述dsRNA分子长度短于3769个核苷酸。

120.如权利要求119所述的分离的dsRNA分子，其特征在于，所述第二核苷酸链包含与所述第一核苷酸链完全互补的序列，其中所述dsRNA分子长度短于3769个核苷酸。

121.一种包含SEQ ID NO：7-16所示某序列的至少10个连续核苷酸的分离核酸。

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