CN101548653A - 通过耳石研究刀鲚年龄和洄游生活史的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种通过耳石研究刀鲚年龄和洄游生活史的方法,属于鱼类生态学领域。本发明选取耳石作为研究材料,对其横截面进行磨片,观察耳石的微结构特征来研究刀鲚的年龄、生长和生活史。与传统方法相比,本发明为鱼类年轮研究提供了一种新的方法,填补了耳石上亮带和暗带不清楚鱼类年龄研究的空白;耳石磨片时效率比较高,每个耳石只需五分钟即可磨制完,而且结果比其它硬骨组织分析更可靠;指甲油包埋和封片的同时对耳石具有透明的作用,相对于使用二甲苯透明更安全,透明效果更好。本发明适用于所有耳石背腹形态弯曲的硬骨鱼类有关年龄和洄游生活史的研究。
Description
技术领域
本发明属于鱼类生态学领域,尤其涉及一种通过耳石研究刀鲚年龄和洄游生活史的方法。
背景技术
研究对象刀鲚(Coilia ectenes Jordan et Seale)属鯡形目(Clupeiformes),鳀科(Engraulidae),是长江中下游及其附属水体重要的经济鱼类。平时栖息在长江口及临近浅海底层,到了繁殖季节,性成熟个体集群溯河而上。5月份开始在崇明繁殖,随着时间的推移向上推移,洄游到安庆的繁殖群体在8月份开始产卵。历史上长江洄游性刀鲚资源极其丰富,最高年产量达3945吨,每年2月开始形成渔汛,3月中旬渔汛达到高峰,汛期约20天,洄游可达长江中游洞庭湖水域。上世纪七十年代以来,刀鲚资源量锐减,近年渔汛形成推迟到4月上中旬,汛期一般仅3-5天,甚至不再有明显的渔汛。洄游距离也显著缩短,一般在鄱阳湖湖口以下。刀鲚的资源量锐减使刀鲚的售价越来越高,最近几年每500克刀鲚价格最高达可达4000元人民币。因此对刀鲚这一类濒危鱼类进行年龄和洄游生活史研究是非常必要的,这对刀鲚的的资源管理和保护具有重要的意义。
目前,进行鱼类年龄鉴定的常用材料有鳞片、耳石、鳍条、鳃盖骨、脊椎骨和匙骨等,其中最常用的是鳞片和耳石。鳞片是覆盖在鱼类体表的组织,容易脱落而形成次生鳞,且易受营养条件的影响。当鱼体长到一定大小时,鳞片可能会停止生长,从而给年龄的鉴别带来了误差;另外,对高龄鱼进行年龄鉴定时常常出现低估的情况。耳石是位于鱼类内耳(膜迷路)里的一种石灰质硬组织,主要由碳酸钙组成,起平衡和听觉作用;鱼类耳石一般有3对,分别是位于球囊里的矢耳石、椭圆囊里的微耳石和听壶里的星耳石。硬骨鱼类中最先钙化的结构通常是耳石,不仅表现出年沉积率,而且在遭遇饥饿等不良环境条件时仍能继续生长,即使受到环境压力时亦不易被吸收,并且一旦形成便保持不变,因而成为生活史事件的永久记录形式,所以,耳石被认为是鉴定鱼类年龄最精确的材料。
耳石信息分析的应用涵盖了鱼类生态学研究的诸多方面,如鱼类的孵化和早期发育生长、产卵场和产卵期判定、仔鱼的运输过程年龄鉴定与种群鉴定个体迁移等。近年来,随着相关科学和技术的发展,它已经成为一种揭示鱼类生活史、生活史重建以及海洋环境改变的关键技术,也是国际上渔业科学和海洋环境科学的研究热点。
耳石的选择取决于样品处理后微结构的规则性及清晰度。一般来说,最大的耳石也最容易摘取和处理。骨鳔鱼类以外的其他硬骨鱼类,通常是矢耳石最大,而且其微结构清晰度最好,生长轮宽度最大,多数研究者采用矢耳石作为鉴定年龄的材料,鱼类年龄的鉴定是通常在显微镜下观察耳石磨片上淡白色的宽层和暗黑色的狭层交替出现,而且是每年形成这样一个宽层和狭层,宽层是在温度上升,饵料生物丰富,生长快速的春、夏季节形成的,而狭层是在温度下降,饵料生物丰度降低,生长缓慢的的秋、冬季节形成的,通常将狭层视为年轮(图1),我们把这种方法称为亮带/暗带法。这种方法广泛的应用于各种具有明显的亮带和暗带的鱼类年龄研究中。现在有学者报道有的鱼类耳石上的亮带容易丢失或出现次生亮带,用来鉴定年龄容易导致误差。刀鲚的鳞片上存在很多的再生鳞,而且鳞片上的年轮不清晰,在刀鲚洄游的时候,鳞片上的钙质还容易被重吸收。到目前为止,研究刀鲚的年龄和生长主要依赖于鳞片分析,存在很多的不确定性。我们的研究发现刀鲚耳石不同磨片方向上均没有明显的亮暗带。鱼类洄游生活史一般采用标志放流法进行研究,由于刀鲚个体较小,出水即死亡,很难进行标志回捕操作。目前还没有刀鲚洄游生活史的研究报道。
发明内容
本发明的目的是针对刀鲚年龄和生活史研究中存在的问题,提供一种通过耳石研究刀鲚年龄和洄游生活史的方法。
本发明的目的是这样实现的:
选取耳石作为研究材料,对其横截面进行磨片,观察耳石的微结构特征来研究刀鲚的年龄、生长和生活史。
具体地说,本发明包括下列步骤:
①取出耳石,经清水清洗干净后,再用75%的酒精清洗,晾干;
②取左侧矢耳石作为鉴定年龄的材料,用硬度较大的热熔胶将其沿横截面方向固定在载玻片上;
③等热熔胶冷却后在600#~1500#的水磨砂纸上打磨,并用抛光纸(flappingfilm)抛光,磨至中心后,用酒精灯将热熔胶熔化后取出耳石;
④将耳石被抛光的横截面朝下,用指甲油固定在载玻片上,自然干燥至指甲油完全变硬;
⑤按照步骤③的说明打磨另一面直至观察到耳石核心和清晰的微结构为止,最后用指甲油封片;
⑥将磨制好的耳石在解剖镜下拍照,用axiovision3.1.0.18软件沿耳石腹部的生长轴弯曲的方向测量每个直/弯生长结构的长度和边缘宽度;
⑦按以下公式计算耳石的边缘增长率:
MIR=(R-Rn)/(Rn-Rn-1)
R表示耳石横截面上腹部沿生长轴弯曲方向的半径,
Rn表示耳石的核心沿生长轴弯曲方向到倒数第一个直/弯生长结构的距离,
Rn-1表示耳石的核心沿生长轴弯曲方向到倒数第二个直/弯生长结构的距离;
⑧比较不同洄游距离繁殖群体耳石横截面上第一个年轮的宽度来分析刀鲚的洄游生活史。
与传统方法相比,本发明具有以下优点和积极效果:
①为鱼类年轮研究提供了一种新的方法,填补了耳石上亮带和暗带不清楚鱼类年龄研究的空白;
②耳石磨片时效率比较高,每个耳石只需五分钟即可磨制完,而且结果比其它硬骨组织分析更可靠;
③指甲油包埋和封片的同时对耳石具有透明的作用,相对于使用二甲苯透明更安全,透明效果更好;
④可以得到比其它硬骨组织更多的信息,耳石上的微结构特征除了可用于生长和生活史的分析以外,还可用于微化学分析;
⑤适用于所有耳石背腹形态弯曲的硬骨鱼类有关年龄和洄游生活史的研究。
附图说明
图1是一般鱼类耳石年轮结构示意图;
图2是崇明和安庆江段刀鲚繁殖群体耳石横截面年轮结构比较图。
其中:
1-年轮;
2-宽层(亮带);
3-狭层(暗带);
4-耳石核心;
5-边缘生长结构。
6-直生长结构;
7-弯曲的生长结构;
8-直/弯生长结构
A-来自安庆江段的繁殖群体;
B-来自崇明江段的繁殖群体。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的各步骤详细说明:
1、步骤①
打开刀鲚的脑颅,从球囊中取出耳石,经清水清洗干净后,再用75%的酒精清洗,晾干;酒精清洗是为了去掉粘在耳石上的油脂,确保磨片后观察的效果。
2、步骤②
取左侧矢耳石作为鉴定年龄的材料,先用解剖剪将耳石前端的基叶和翼叶剪除,剪出一个完全垂直于耳石长轴的平面;选择硬度较大的热熔胶,制成长宽高各为1cm左右的立方体,放置在载玻片上,用酒精灯加热至熔解,将剪过的耳石平面朝下,用热熔胶固定于载玻片上,并且确保耳石的长轴完全垂直于载玻片上,这样能保证所有的样本具有可比性。
3、步骤③
等热熔胶完全冷却后,开始在水磨砂纸上研磨,开始要使用较粗的砂纸(600#~800#,粗磨可以提高效率),打磨到接近核心以后换成较细的砂纸(1000#~1500#)打磨,磨制过程中要经常在显微镜下反复观测磨制进程,防止离核太远或磨过核心,每次在砂纸上磨完准备在显微镜下观察前均使用抛光纸(flapping film)抛光,磨至中心后,用酒精灯将热熔胶熔化后取出耳石,取出时动作要快,避免热熔胶粘到抛光的横截面上。
4、步骤④
将抛光的横截面朝下,用露琪娅(locia)指甲油固定,并用解剖针将指甲油中的气泡赶掉(选用指甲油时必须选择干燥后硬度大的指甲油,避免在磨片过程中耳石脱落),自然干燥24小时左右至指甲油完全变硬。
5、步骤⑤
按照步骤(3)的说明打磨另一面直至观察到耳石核心和清晰的微结构为止,最后将磨好的耳石磨片用指甲油封片,指甲油不仅可以包埋耳石,同时还具有透明耳石的作用,能使耳石微结构更清晰;磨制好的耳石磨片厚约0.3mm。
6、步骤⑥
将磨制好的耳石在解剖镜下拍照,用axiovision3.1.0.18软件沿耳石腹部的生长轴弯曲的方向测量每个直/弯生长结构和边缘没有完整直/弯生长结构的宽度。
7、步骤⑦
按以下公式计算耳石的边缘增长率:
MIR=(R-Rn)/(Rn-Rn-1)
R表示耳石横截面上腹部沿生长轴弯曲方向的半径,
Rn表示耳石的核心沿生长轴弯曲方向到倒数第一个直/弯生长结构的距离,
Rn-1表示耳石的核心沿生长轴弯曲方向到倒数第二个直/弯生长结构的距离;MIR值接近0时表示新轮刚刚形成,MIR值接近1时表示新轮即将形成。
根据每个月刀鲚MIR值的变化就可判断刀鲚年轮的形成时间。
8、步骤⑧
如图2,比较两个繁殖群体的第一个年轮宽度,洄游到安庆的刀鲚繁殖群体第一年轮半径显著小于长江口和靖江繁殖群体的年轮半径。由于安庆繁殖季节较晚(较长江口晚3个月),因此,在安庆出生的后代到第一年轮形成的生长季节较长江口和靖江出生的后代短,其第一年轮半径应该较小。安庆繁殖群体和安庆出生的后代第一年轮耳石半径大小的一致性,说明安庆繁殖群体可能是在安庆出生的后代,即刀鲚的洄游具有回归性。
Claims (1)
1、一种通过耳石研究刀鲚年龄和洄游生活史的方法,其特征在于包括下列步骤:
①取出耳石,经清水清洗干净后,再用75%的酒精清洗,晾干;
②取左侧矢耳石作为鉴定年龄的材料,用硬度较大的热熔胶将其沿横截面方向固定在载玻片上;
③等热熔胶冷却后在600#~1500#的水磨砂纸上打磨,并用抛光纸(flappingfilm)抛光,磨至中心后,用酒精灯将热熔胶熔化后取出耳石;
④将耳石被抛光的横截面朝下,用指甲油固定在载玻片上,自然干燥至指甲油完全变硬;
⑤按照步骤③的说明打磨另一面直至观察到耳石核心和清晰的微结构为止,最后用指甲油封片;
⑥将磨制好的耳石在解剖镜下拍照,用axiovision3.1.0.18软件沿耳石腹部的生长轴弯曲的方向测量每个直/弯生长结构的长度和边缘宽度;
⑦按以下公式计算耳石的边缘增长率:
MIR=(R-Rn)/(Rn-Rn-1)
R表示耳石横截面上腹部沿生长轴弯曲方向的半径,
Rn表示耳石的核心沿生长轴弯曲方向到倒数第一个直/弯生长结构的距离,
Rn-1表示耳石的核心沿生长轴弯曲方向到倒数第二个直/弯生长结构的距离;
⑧比较不同洄游距离繁殖群体耳石横截面上第一个年轮的宽度来分析刀鲚的洄游生活史。
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