CN101512007A - 用于治疗自身抗体阳性疾病患者的方法和组合物 - Google Patents

用于治疗自身抗体阳性疾病患者的方法和组合物 Download PDF

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CN101512007A CNA2006800471107A CN200680047110A CN101512007A CN 101512007 A CN101512007 A CN 101512007A CN A2006800471107 A CNA2006800471107 A CN A2006800471107A CN 200680047110 A CN200680047110 A CN 200680047110A CN 101512007 A CN101512007 A CN 101512007A
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Abstract

本发明涉及用于治疗自身抗体阳性疾病患者的方法和组合物。在一个具体的实施方式中，本发明涉及治疗其ANA滴度为1∶80或更高和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/ml的患者的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂例如Neutrokine－α拮抗剂。另外还提供减少施用给患者的糖皮质激素的频率和/或量的方法。在优选的实施方式中，患者患有系统性红斑狼疮。本发明也提供确定狼疮患者是否应答于药物治疗的方法。

Description

用于治疗自身抗体阳性疾病患者的方法和组合物
背景技术
Neutrokine-α蛋白(SEQ ID NO：2)是TNF配体家族的一个成员，其与APRIL(28.7％、SEQ ID NO：4)、TNFα(16.2％)、和淋巴毒素-α(LTα)(14.1％)享有氨基酸序列相同性(Moore，et al.，(1999)Science 285：260-263)。Neutrokine-α在科技和专利文献中有着多个名称，包括B淋巴细胞刺激物(BLyS)、B细胞活化因子(BAFF)、TNF和ApoL相关性白细胞表达配体-1(TALL-1)(Moore，et al.，(1999)Science 285：260-263；Schneider et al.，(1999)J.Exp.Med.189：1747-1756；和Khare et al.，(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.97：3370-3375)。Neutrokine-α的正式名称是肿瘤坏死因子(配体)超家族成员13B(TNFSF13b)。全长Neutrokine-α基因编码285个氨基酸的多肽，其第47位到73位氨基酸之间为跨膜区，跨膜区前面为II型膜结合蛋白特征性的非疏水性序列。和TNF家族的其他成员一样，Neutrokine-α以三聚体蛋白的形式发挥作用。当Neutrokine-α在细胞表面表达之后，在第134位氨基酸处裂解细胞外区，以便释放出有生物学活性的三聚体。
已知Neutrokine-α与来自肿瘤坏死因子受体超家族的三种不同受体结合。它们是跨膜活化物和CAML互作用体(TACI，GenBank编号AAC51790，SEQ ID NO：6)、B细胞活化因子受体、B细胞成熟抗原(BCMA，GenBank编号NP_001183、SEQ ID NO：8)和(BAFF-R、GenBank编号NP_443177 SEQ ID NO：10)。(Gross，et al.，(2000)Nature 404：995-999；Thompson et al.，(2001)Science 293：2108-2111；和Yan et al.，(2000)NatureImmunol.1：252-256)。受体的表达主要限定于B淋巴细胞(Moore，et al.，(1999)Science 285：260-263)。相信Neutrokine-α的大部分作用都是由BAFF-R介导的，因为在Neutrokine-α表达缺陷或BAFF-R表达缺陷小鼠的B细胞组分中的主要缺陷在TACI或BCMA缺陷小鼠中并不明显(Schieman，etal.，(2001)Science 292：2111-2114；Gross et al.，(2001)Immunity 15：289-302；和Yan et al.，(2000)Nature Immunol.1：252-256)。
当在体外和体内检测Neutrokine-α蛋白时，Neutrokine-α显示出能促进B细胞的增殖、分化和生存。另外，Neutrokine-α也显示出一些对T细胞的作用(MacKay et al.，(1999)J.Exp.Med.190：1697-1710；Huard et al.，(2001)J.Immunol.167：6225-6231；Huard et al.，(2004)Int.Immunol.16：467-475；Ng et al.，(2004)J.Immunol.173：807-817)。被遗传工程化成过度表达Neutrokine-α的小鼠具有增加数目的外周B细胞和增高的免疫球蛋白浓度。另外，Neutrokine-α转基因小鼠表现出自身免疫表型，其与人系统性红斑狼疮中看到的类似，包括发生自身抗体和肾小球肾炎相关症状(Moore，etal.，(1999)Science 285：260-263；MacKay，et al.，(1999)J.Exp.Med.192：129-135)。后来的研究显示在自身免疫病例如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎和干燥综合征患者的血清和/或滑膜液中的Neutrokine-α水平也是被上调的(Cheema et al.，(2001)Arthritis Rheum.44：1313-1319；Groom et al.，(2002)J.Clin.Invest.109：59-68；Mariette et al.，(2003)Ann.Rheum.Dis 62：168-171)。因此，在科学界普遍的看法是Neutrokine-α拮抗剂在治疗自身免疫病方面具有治疗作用。
系统性红斑狼疮(SLE或“狼疮”)是一种自身免疫病，其症状是极其异质性的。目前SLE的诊断标准包括11条标准：(1)颊部“蝶形”红斑；(2)盘状红斑；(3)光过敏；(4)口腔溃疡；(5)关节炎；(6)浆膜炎；(7)肾脏病；(8)神经系统异常；(9)血液系统异常；(10)免疫学异常；和(11)存在抗核抗体。在Tan et al.，(1982)Arthritis Rheum.25：1271-1277；和Hochberg et al.，Arthritis Rheum.(1997)40：1725中对这些标准有着更详细的解释。符合这11条标准中4条标准的患者就可以被诊断为SLE。因此，临床诊断为SLE的个体可以具有无重叠的症状。此外，多个狼疮症状与其他疾病的症状相重叠。例如，类风湿关节炎、多发性肌炎-皮肌炎、系统性硬化(或硬皮病)、干燥综合征和各种形式的血管炎都与狼疮共有一些症状，包括一个或多个以下特征：出现自身抗体包括抗核抗体和抗dsDNA抗体、关节痛和关节肿胀、皮疹和器官受累。因此，在临床实践中常常难以准确地诊断出狼疮患者和其他类似疾病的患者。造成狼疮诊断困难的其他因素包括疾病没有快速进展，患者在一定时间内逐步地蓄积症状。另外，SLE是一种在患者体内有着可变活性的疾病。疾病有时是静止的，而患者在其他时候表现出症状数目和严重度的增加，即处于“活动”发作。最后，没有一个实验室检查能确诊狼疮。因此，本领域需要能够确定具有特殊症状的狼疮患者亚群以及确定这些患者亚群和最可能使得这些亚群患者获益的治疗之间的相关性。
本申请鉴定出了特殊的自身免疫病患者亚群，其最可能从免疫调节剂治疗中获益。
发明内容
在2期临床试验中，发现用中和Neutrokine-α蛋白的抗体治疗狼疮患者(第0、14、28天静脉内输注，之后每4周静脉内输注1次，直到第52周)，显著地缓解了ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者亚群中与狼疮相关的症状(见实施例1)。令人惊讶的是，与整个入选临床试验的患者人群不同的是，只在患者亚组中获得了测定疾病活性的临床终点的统计学显著的改善(例如SELENA SLEDA评分下降，在下面由更为详细的解释)。因此，本发明涉及鉴定出最可能应答于免疫调节剂例如Neutrokine-α的拮抗剂的治疗的患者亚组。
因此，在一个实施方式中，本发明提供治疗ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂。下面将更为详细地描述免疫调节剂。在一个具体的实施方式中，免疫调节剂是Neutrokine-α的拮抗剂，包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白或其片段或变体、结合Neutrokine-α受体的抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合肽或多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体(例如Neutrokine-α和/或APRIL的显性负调控物(dominant negative)形式)。Neutrokine-α的其他拮抗剂包括Neutrokine-α的小分子拮抗剂、Neutrokine-α肽模拟物、靶向于Neutrokine-α的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)、靶向于APRIL的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)、靶向于Neutrokine-α的受体和/或APRIL的受体的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)。Neutrokine-α受体包括例如跨膜活化物和CAML互作用体(TACI，GenBank编号AAC51790，SEQ ID NO：6)、B细胞活化因子受体、B细胞成熟抗原(BCMA，GenBank编号NP_001183、SEQ ID NO：8)和(BAFF-R、GenBank编号NP_443177 SEQ ID NO：10)。
在另一个实施方式中，本发明提供治疗ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的自身免疫病患者的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂。其中可以鉴定出ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者的自身免疫病实例包括，但不限于系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎、干燥综合征、硬皮病、多发性肌炎-皮肌炎、Felty综合征、混合结缔组织病、雷诺综合征、幼年型慢性关节炎、肾小球肾炎、特发性血小板减少性紫癜和IgA肾病。
在一个具体的实施方式中，本发明提供治疗ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的干燥综合征患者的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，本发明提供治疗ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的干燥综合征患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的拮抗剂。
在一个具体的实施方式中，本发明提供治疗ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的类风湿关节炎患者的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，本发明提供治疗ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的类风湿关节炎患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的拮抗剂。
在一个具体的实施方式中，本发明提供治疗ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的系统性红斑狼疮(SLE)患者的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，本发明提供治疗ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的系统性红斑狼疮(SLE)患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的拮抗剂。在一个具体的实施方式中，依据美国风湿病学会(ACR)标准狼疮患者已经被临床诊断为SLE(见例如Tan et al.，Arthritis Rheum.25：1271-7，(1982)；和Hochberg etal.，Arthritis Rheum.40：1725，(1997)，在此通过引用其全部内容将其并入本申请)。
本发明也提供了治疗患者的方法，包括在施用免疫调节剂之前确定患者血浆或血清中的ANA滴度为1:80或更高和/或抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL。本发明也提供了治疗患者的方法，包括在施用Neutrokine-α的拮抗剂之前确定患者血浆或血清中的ANA滴度为1:80或更高和/或抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL。
在其他实施方式中，本发明提供治疗狼疮患者的方法，包括在施用免疫调节剂之前确定患者具有一个或多个以下特征：依据美国风湿病学会(ACR)标准临床诊断为SLE(见例如Tan et al.，Arthritis Rheum.25：1271-7，(1982)；和Hochberg et al.，Arthritis Rheum.40：1725，(1997))；SELENASLEDAI评分≥6；血浆或血清C4补体水平下降；血浆或血清C3补体水平下降；ANA滴度为1:80或更高；血浆或血清抗ds-DNA抗体大于或等于30IU/mL；正在接受≥7.5mg/天的泼尼松或其他用于治疗狼疮相关症状的糖皮质激素；正在接受或者先前接受过用于治疗狼疮相关症状的免疫抑制剂。在一个具体的实施方式中，临床医生根据对患者病例记录的评价进行确定。在另一个具体的实施方式中，临床医师根据实验室检查结果进行确定。在一个具体的实施方式中，临床医师根据从患者的最后一次狼疮的药物治疗(包括免疫调节剂的药物治疗)以及在开始包括施用治疗有效量的在此所述的免疫调节剂(包括Neutrokine-α的拮抗剂)药物治疗之前获得的实验室检查结果进行确定。
在另一个实施方式中，本发明提供减少施用给ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者的糖皮质激素的频率和/或量的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂。
在一个具体的实施方式中，本发明提供减少施用给ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的干燥综合征患者的糖皮质激素的频率和/或量的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂。在另一个具体的实施方式中，本发明提供减少施用给ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的干燥综合征患者的糖皮质激素的频率和/或量的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的拮抗剂。
在一个具体的实施方式中，本发明提供减少施用给ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的类风湿关节炎患者的糖皮质激素的频率和/或量的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂。在另一个具体的实施方式中，本发明提供减少施用给ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的类风湿关节炎患者的糖皮质激素的频率和/或量的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的拮抗剂。
在一个具体的实施方式中，本发明提供减少施用给ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的系统性红斑狼疮(SLE)患者的糖皮质激素的频率和/或量的方法，包括施用治疗有效量的免疫调节剂。在另一个具体的实施方式中，本发明提供减少施用给ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的系统性红斑狼疮(SLE)患者的糖皮质激素的频率和/或量的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的拮抗剂。在一个具体的实施方式中，依据美国风湿病学会(ACR)标准狼疮患者已经被临床诊断为SLE(见例如Tan et al.，Arthritis Rheum.25：1271-7，(1982)；和Hochberg et al.，Arthritis Rheum.40：1725，(1997)，在此通过引用其全部内容将其并入本申请)。
在进一步的实施方式中，本发明提供减少施用给ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中的抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者的糖皮质激素的量的方法，所述糖皮质激素的量被降低至少25％到≤7.5mg/天。在一个具体的实施方式中，糖皮质激素选自由泼尼松、泼尼松龙、氢化可的松、甲基泼尼松龙和地塞米松组成的组。在进一步的具体的实施方式中，糖皮质激素是泼尼松。在另一个实施方式中，提供减少施用给自身免疫病患者的糖皮质激素的频率和/或量的方法，包括施用治疗有效量的抗Neutrokine-α抗体。
在另一个2期临床试验(实施例3)中，类风湿关节炎患者接受了中和Neutrokine-α蛋白的抗体的治疗，施用方式为第0、14、28天静脉输注1次，然后每4周一次直到第24周，所述治疗最可能缓解在开始中和Neutrokine-α的抗体治疗之前其DAS28评分大于5.1的患者、先前没有接受过抗TNF治疗、和/或血浆和/或血清类风湿因子阳性的患者中的类风湿关节炎相关症状。表现出最可能应答于中和Neutrokine-α蛋白的抗体治疗的其他亚组或类风湿关节炎患者包括男性患者、血浆和/或血清有抗CCP(环状瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide))抗体的患者。在接受中和Neutrokine-α蛋白的抗体同时接受甲氨喋呤的患者、先前甲氨喋呤治疗失败的患者、和/或先前甲氨喋呤治疗以及至少一种其他DMARD治疗失败的患者。
在另一个实施方式中，本发明提供一种确定狼疮患者是否应答于药物治疗的方法，包括在施用药物治疗之前确定患者的SELENA SLEDAI、BILAG和PGA评分；施用药物治疗；以及在施用药物治疗之后确定患者的SELENA SLEDAI、BILAG和PGA评分。在这个方法中，只要出现以下情况患者就被认为是对药物治疗有应答：在施用药物治疗之后确定的患者的SELENA SLEDAI评分比在施用药物治疗之前的SELENA SLEDAI评分低4分或更多分；与在施用药物治疗之前确定的BILAG评分相比较，在施用药物治疗之后确定的患者的BILAG指数评分不包含新的BILAG A器官区评分或2个新的BILAG B器官区评分；和在施用药物治疗之后确定的PGA评分比在施用药物治疗之前确定的PGA评分高出不到0.3分。
因此，在一个实施方式中，本发明提供治疗类风湿关节炎患者的方法，包括在施用免疫调节剂之前确定类风湿关节炎患者具有一个或多个以下特征：患者先前没有接受过抗TNF治疗例如英夫利昔单抗(Infliximab)(也称作RemicadeTM Centocor，Inc.)、阿达木单抗(adalimumab)(Abbott实验室的
Figure A200680047110D00141
)、或依那西普(etanercept)(
Figure A200680047110D00142
患者的血浆和/或血清中有类风湿因子；患者具有可测定的血浆和/或血清抗CCP(环状瓜氨酸肽)抗体；患者有增高水平的血浆和/或血清CRP(C反应蛋白)水平；患者先前经一种或多种缓解疾病的抗风湿性药物治疗失败；患者有高的修饰疾病活动评分(DAS28)；患者有肿胀和压痛的关节；患者有晨僵；患者的红细胞沉积率(ESR)加快和/或患者为男性。
在另一个实施方式中，本发明提供一种水性药物制剂，包括治疗有效量的抗体、量从约5mM到约50mM的缓冲剂、量从约150mM到约500mM的NaCl、量从约0.003％到约0.05％的表面活性剂，以及pH值从约5.5到约6.5。在一个具体的实施方式中，上述制剂中的抗体是具有IgG1/λ同种型的抗体。在进一步的实施方式中，上述制剂中的抗体是具有有IgG1/λ同种型的人抗体，上述制剂中的缓冲剂是10mM组氨酸或柠檬酸钠，上述制剂中的表面活性剂是量为0.01％w/v的聚山梨酯80(polysorbate80)，上述制剂中的NaCl浓度为约150mM，以及制剂的pH值为6.0。在其他具体的实施方式中，上述制剂能够在约2-8℃的温度保持稳定至少1年。在另一个实施方式中，上述制剂中的抗体的量为100mg/ml。
在一个具体的实施方式中，本发明提供水性药物制剂，包括100mg/mlIgG1/λ抗体、0.74mg/ml L-组氨酸、1.1mg/ml L-组氨酸一盐酸盐(L-histidinemonohydrochloride)、8.8mg/ml NaCl和0.1mg/ml聚山梨酯80，其中制剂的pH值为6.0。
附图说明
下面的附图只是用于举例说明本发明的实施方式，并不表示限制了权利要求书所覆盖的本发明的范围。
图1显示了基线ANA抗体为1:80或更高、和/或抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者在第52周时SELENA SLEDAI下降的百分比的平均值。用t检验确定p值。
定义
在一个方面，本发明广泛涉及通过施用治疗有效量的免疫调节剂来治疗自身抗体阳性疾病患者的方法。自身抗体阳性疾病患者是其一种或多种生物学体液样品例如血浆或血清或滑膜液中具有可检测的自身抗体滴度的患者。
“免疫调节剂”在此指的是一大类能够刺激或抑制免疫系统的药物化合物。本申请的工作实施例描述了拮抗性的抗Neutrokine-α抗体在治疗狼疮患者亚组中的成功应用。因此，术语“免疫调节剂”特异地意欲覆盖能够作为Neutrokine-α的拮抗剂的药物化合物或分子。Neutrokine-α的拮抗剂包括但不限于包括抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白或其片段或变体、结合Neutrokine-α受体的抗体或其抗原结合片段和Neutrokine-α结合肽或多肽的组合物。Neutrokine-α受体包括例如跨膜活化物和CAML互作用体(TACI，GenBank编号AAC51790)、BAFF-R(GenBank编码NP_443177)、和B细胞成熟抗原(BCMA，GenBank编号NP_001183)。特别有用的Neutrokine-α受体形式包括可溶性形式的细胞外区。Neutrokine-α受体或其片段或变体和Neutrokine-α结合多肽可以被用作融合蛋白例如Fc或人血清白蛋白(HAS)融合蛋白。Neutrokine-α的其他拮抗剂包括Neutrokine-α的小分子拮抗剂、Neutrokine-α肽模拟物、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体(例如Neutrokine-α和/或APRIL的显性负调控物形式)。这种Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体可以拮抗Neutrokine-α功能，例如通过干扰Neutrokine-α和/或APRIL同或异多聚体化。或者，Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体可以阻止包括所述多肽的多肽结合Neutrokine-α受体例如TACI、BCMA和BAFF-R和/或经所述Neutrokine-α受体的信号传导。Neutrokine-α的其他拮抗剂包括Neutrokine-α的小分子拮抗剂、Neutrokine-α肽模拟物、靶向于Neutrokine-α的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)、靶向于APRIL的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)、靶向于Neutrokine-α受体和/或APRIL受体的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)。下面将更详细地描述Neutrokine-α的拮抗剂。
相信Neutrokine-α抗体通过减少B细胞数目和/或B细胞活性例如免疫球蛋白分泌来发挥作用。因此，术语“免疫调节剂”也特异地意欲覆盖B细胞调节剂，具体地是直接或间接地抑制或降低B细胞活性(例如B细胞增殖、分化、生存或免疫球蛋白分泌)和/或B细胞数目的药物分子和化合物。在一个具体的实施方式中，可以结合本发明的方法使用的B细胞调节剂是减少所有B细胞、活化B细胞、纯真B细胞(
Figure A200680047110D0016172526QIETU
 B cell)、记忆B细胞、浆性B细胞(plasma B cell)、和浆细胞样B细胞(plasmacytoid B cell)、CD19+B细胞和/或CD20+B细胞的活性或数目的药物。
免疫系统是细胞和细胞因子相互作用的复杂的网络系统。例如，抗原呈递细胞(APC，例如巨噬细胞和树突状细胞)和T细胞(特别是CD4+T辅助(Th)细胞)在激活B细胞增殖并分泌抗体(包括在某些疾病状态下的自身抗体)方面起到了作用。因此，通过减少或抑制APC或Th细胞数目或活性来抑制B细胞活性也是可能的。同样，已知由不同类型的免疫应答例如Th1和Th2应答。可以用于本发明的免疫调节剂可以促进一种类型的免疫应答超过另一种，因此对治疗自身抗体阳性患者有着正面作用。因此，术语“免疫调节剂”最广义地特异地意欲覆盖刺激或抑制免疫系统的一种或多种细胞、细胞表面分子(例如细胞表面信号传导分子)和/或细胞因子的活性或数量的药物分子或组合物，包括作为先天性和/或适应性免疫系统一部分的细胞、细胞表面分子(例如细胞表面信号传导分子)和细胞因子。免疫系统的细胞包括，但不限于B细胞、T细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、和天然杀伤(NK)细胞。可以被免疫调节剂刺激或抑制的免疫系统的细胞表面上的细胞表面分子包括但不限于CD抗原例如CD20。免疫系统中重要的细胞因子包括但不限于TNF配体超家族成员，后者包括但不限于Neutrokine-α、APRIL和CD40L。
具体实施方式
在系统性红斑狼疮患者的II期临床试验中，申请人发现用中和Neutrokine-α蛋白的抗体(施用方式为第0、14、28天静脉内输注，然后每4周静脉内输注1次，直到第52周)治疗狼疮患者，显著地消除了ANA滴度为1∶80或更高和/或其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者中与狼疮相关的症状(见实施例1)。
因此，本发明的一个具体实施方式提供了用Neutrokine-α的抗体拮抗剂治疗其血浆或血清ANA滴度≥1:80和/或抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的系统性红斑狼疮患者的方法。但是，本领域人员容易明白抗体分子只是各种能够作为Neutrokine-α的拮抗剂的分子中的其中一种。因此，本发明的另一个具体实施方式提供了用Neutrokine-α的拮抗剂治疗其血浆或血清ANA滴度≥1:80和/或抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的系统性红斑狼疮患者的方法。
Neutrokine-α的拮抗剂包括但不限于包括抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白或其片段或变体、结合Neutrokine-α受体的抗体或其抗原结合片段和Neutrokine-α结合肽或多肽的组合物。Neutrokine-α受体包括例如跨膜活化物和CAML互作用体(TACI，GenBank编号AAC51790)、BAFF-R(GenBank编号NP_443177)和B细胞成熟抗原(BCMA，GenBank编号NP_001183)。特别有用的Neutrokine-α受体形式包括能够结合Neutrokine-α的可溶性形式的细胞外区。Neutrokine-α受体或其片段或变体和Neutrokine-α结合多肽可以被用作融合蛋白例如Fc或人血清白蛋白(HAS)融合蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α的拮抗剂是TACI-Fc蛋白。TACI-Fc蛋白的一个实例是SEQ ID NO：6的第1到154位氨基酸与IgG1免疫球蛋白分子的Fc区相融合。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α的拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。BAFF-R-Fc蛋白的一个实例是SEQ ID NO：10的第1到70位氨基酸与IgG1免疫球蛋白分子的Fc区相融合。任选地，用天冬酰胺取代BAFF-R中的第20位氨基酸(缬氨酸)以及用脯氨酸取代BAFF-R中的第27位氨基酸(亮氨酸)。SEQ IDNO：26显示了具有这两个氨基酸变化的BAFF-R的第1到70位氨基酸。
Neutrokine-α的其他拮抗剂包括Neutrokine-α的小分子拮抗剂、Neutrokine-α肽模拟物、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体(例如Neutrokine-α和/或APRIL的显性负调控物形式)。此类Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体可以拮抗Neutrokine-α功能，例如通过干扰Neutrokine-α和/或APRIL同或异多聚体化。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α的拮抗剂是发挥显性负调控物功能的Neutrokine-α蛋白片段或其变体。或者，Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体可以阻止包括所述多肽的多肽结合Neutrokine-α受体例如TACI、BCMA和BAFF-R和/或经所述Neutrokine-α受体的信号传导。Neutrokine-α的其他拮抗剂包括Neutrokine-α的小分子拮抗剂、Neutrokine-α肽模拟物、靶向于Neutrokine-α的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)、靶向于APRIL的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)、靶向于Neutrokine-α受体和/或APRIL受体的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)。下面将更详细地描述Neutrokine-α的拮抗剂。
同样，本领域人员明白其他免疫调节剂(具体地包括能够调节B细胞活性或数目的分子)可以用于本发明。在具体的实施方式中，可以联合本发明的方法一起使用的B细胞调节剂是能够直接或间接抑制或减少B细胞活性(例如B细胞增殖、分化、生存或免疫球蛋白分泌)和/或B细胞数目的药物。在另一个实施方式中，可以联合本发明的方法一起使用的B细胞调节剂是能够减少所有B细胞、活化B细胞、纯真B细胞、记忆B细胞、浆性B细胞和浆细胞样B细胞、CD19+B细胞和/或CD20+B细胞的活性或数目的药物。可以用于本发明的免疫调节分子和B细胞调节分子对于本领域人员是已知的，并在下面有更为详细的描述。
在另一个实施方式中，本发明提供治疗归为具有“活动性”系统性红斑狼疮(SLE或“狼疮”)病变的系统性红斑狼疮患者亚组中的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的抗体拮抗剂。在具体的实施方式中，本发明提供治疗先前被诊断为狼疮并有着活动性狼疮的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的抗体拮抗剂。本发明提供治疗归为具有“活动性”系统性红斑狼疮(SLE或“狼疮”)病变的系统性红斑狼疮患者亚组中的患者的方法，包括在施用治疗有效量的Neutrokine-α的抗体拮抗剂之前确定患者具有“活动性狼疮”。在具体的实施方式中，本发明提供治疗先前被诊断为狼疮并有着活动性狼疮的患者的方法，包括在施用治疗有效量的Neutrokine-α的抗体拮抗剂之前确定患者先前被诊断为狼疮并具有“活动性狼疮”。
在另一个实施方式中，本发明提供治疗归为具有“活动性”系统性红斑狼疮(SLE或“狼疮”)病变的系统性红斑狼疮患者亚组中的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的抗体拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂。在具体的实施方式中，本发明提供治疗先前被诊断为狼疮并有着活动性狼疮的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α的抗体拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂。本发明提供治疗归为具有“活动性”系统性红斑狼疮(SLE或“狼疮”)病变的系统性红斑狼疮患者亚组中的患者的方法，包括在施用治疗有效量的Neutrokine-α的抗体拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂之前确定患者具有“活动性狼疮”。在具体的实施方式中，本发明提供治疗先前被诊断为狼疮并有着活动性狼疮的患者的方法，包括在施用治疗有效量的Neutrokine-α的抗体拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂之前确定患者先前被诊断为狼疮并具有“活动性狼疮”。
在具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为依据美国风湿病学会(ACR)标准被临床诊断为SLE的患者(见例如Tan et al.，Arthritis Rheum.25：1271-7，(1982)；和Hochberg et al.，Arthritis Rheum.40：1725，(1997)，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。
在具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为SELENA SLEDAI评分≥4的患者。SELENA SLEDAI表示如雌激素在红斑狼疮中的安全性的全国评价试验中修订的系统性红斑狼疮疾病活动指数。临床医生利用本领域已知的技术和方法学可以常规地确定SELENA SLEDAI评分，见例如Bombardier，et al.，Arthritis Rheum.Jun；35(6)：630-40，1992；和Strand，et al.，JRheumatol.Feb；26(2)：490-7，1999，在此通过引用将其全部内容并入本申请。简单地，通过考虑跨9个器官系统中的24项SLE疾病活动项目确定SELENA SLEDAI评分。一些器官系统的病变评分比其他器官系统的病变加权得更多。具体地，如果出现中枢神经系统和血管的SLE疾病活动表现则记为8分；如果出现肾脏和肌肉骨骼的SLE疾病活动表现则记为4分；如果出现浆膜腔、皮肤和免疫学的SLE疾病活动表现则记为2分；以及如果出现全身和血液学的SLE疾病活动表现则记为1分。理论上SELENASLEDAI评分的最高值是105，但是实际上只有少数患者的评分超过45分。
在标准的SELENA SLEDAI评分系统中，如果患者有新出现的大于0.5g/24小时的蛋白尿或者蛋白尿最近增加到了大于0.5g/24小时，则记为4分。换句话说，如果在一次24小时尿液样品中获得的蛋白尿数值比患者最近一次24小时尿液样品中测定到的数值高0.5g，那么SELENA SLEDAI评分表中的蛋白尿一项记为4分。这常常被描述了蛋白尿增加或新出现“0.5g/24小时”。因此，在标准的SELENA SLEDAI评分系统中，在基线因为蛋白尿被记为4分的患者在随访中将有改善的SELENA SLEDAI，条件是目前24小时尿液样品中的尿蛋白数值比最近一次24小时尿液样品中测定到的蛋白尿数值不超过0.5g。换句话说，患者将从其总分中扣除4分，即便是有着稳定的蛋白尿或者蛋白尿增加≤0.5g/24小时。实施例2描述了对SELENA SLEDAI蛋白尿评分规则的修订。在实施例2中，修订了蛋白尿评分，使得持续被记为4分，除非24小时尿液样品中测定到的蛋白尿比患者最近一次24小时尿液样品中测定到的蛋白尿数值减少超过了0.5g。此外，如果有新出现的蛋白尿或者蛋白尿增加>0.5g/24小时，则记为4分。如果在此提到SELENA SLEDAI评分表，表示可以依据标准的SELENASLEDAI评分表完成蛋白尿的评分。优选地，根据实施例2所述的蛋白尿评分系统确定患者的SELENA SLEDAI评分中的蛋白尿的评分。
在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为SELENASLEDAI评分≥5的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为SELENA SLEDAI评分≥6的患者。在进一步具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为SELENA SLEDAI评分≥7的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为SELENA SLEDAI评分≥8的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为SELENA SLEDAI评分≥9的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为SELENASLEDAI评分≥10的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为SELENA SLEDAI评分≥11的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为SELENA SLEDAI评分≥12的患者。
在其他的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中有着抗dsDNA抗体的患者。临床医师利用本领域已知的技术和方法可以常规地测定出抗dsDNA抗体滴度、浓度或水平。一种用于测定抗dsDNA抗体滴度、浓度或水平的示例检测法是基于抗dsDNA抗体与固定化的dsDNA的特异结合的酶联免疫吸附检测法(ELISA)，见例如Halbert，et al.，J LabClin Med.97：97-111，(1981)。用于测定dsDNA抗体滴度、浓度或水平的另一种示例检测法是基于抗dsDNA抗体与绿蝇短膜虫dsDNA的特异结合的间接免疫荧光检测法，见例如Whiteside，et al.，Am J Clin Pathol.72：829-35，(1979)。用于测定dsDNA抗体滴度、浓度或水平的另一种示例检测法是基于抗dsDNA抗体与同位素标记的dsDNA的特异结合以及随后抗dsDNA抗体-同位素标记的dsDNA复合物的沉淀的Farr检测法，见例如Davis，etal.，Am J Clin Pathol.，67：374-8，(1977)。在具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30个国际单位/mL的患者，其中国际单位(IU)是依据于世界卫生组织抗dsDNA抗体的参考制剂，见例如Feltkamp，et al.，Ann.Rheum.Dis.，47：740-746，(1988)。在此通过引用将本段中所引用的所有参考文献的全部内容都并入本申请。
在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于40IU/mL的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于50IU/mL的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于60IU/mL的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于75IU/mL的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于100IU/mL的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于125IU/mL的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于150IU/mL的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于200IU/mL的患者。在其他具体的实施方式中，活动性狼疮患者被定义为其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于300IU/mL的患者。
在其他的实施方式中，活动性狼疮患者被定义成其血浆或血清中具有抗核抗体(ANA+)的患者。临床医生利用本领域已知的技术和方法可以常规地测定出抗核抗体滴度。用于测定抗核抗体滴度的一个示例检测法是基于抗核抗体与HEp-2人上皮细胞的特异结合的间接免疫荧光检测法，见例如Osborn，et al.，Arthritis Rheum.，27：1286-9，(1984)。在另一个实例检测法中，利用基于ANA与固定化的ANA抗原例如dsDNA、Ro/SS-A、La/SS-B、Sm、RNP的特异结合的ELISA可以测定出抗核抗体浓度或水平，见例如Fenger，et al.，Clin Chem.，50：2141-7，(2004)。在Kavanaugh et al.，Archivesof Pathology & Laboratory Medicine(2000)124：71-81和Greidinger，EL andHoffman，RW，Laboratory Medicine(2003)34：113-117中进一步描述了ANA检测。在此通过引用将本段中所引用的所有参考文献的全部内容都并入本申请。
在优选的实施方式中，活动性狼疮患者被定义成ANA滴度为1:80或更高的患者(即当患者的血浆或血清的稀释系数为80或更高时，可以得到阳性的ANA检查结果)。例如滴度1:160、1:320和1:640都大于滴度1:80。在其他优选的实施方式中，活动性狼疮的患者被定义成ANA滴度为1:160或更高的患者。在其他优选的实施方式中，活动性狼疮患者被定义成ANA滴度为1:320或更高的患者。在其他优选的实施方式中，活动性狼疮患者被定义成ANA滴度为1:640或更高的患者。在一个具体的实施方式中，利用基于HEp-2细胞的间接免疫荧光法测定出ANA滴度。在另一个具体的实施方式中，利用抗dsDNA ELISA检测法测定出ANA滴度。
在其他的实施方式中，活动性狼疮患者被定义成具有可检测到的自身抗体的患者，所述自身抗体包括但不限于抗Ro/SS-A抗体、抗La/SS-B抗体、抗RNP抗体、抗心磷脂(抗磷脂)抗体、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体。临床医师利用本领域已知的技术和方法学可以常规地测定出自身抗体的滴度、浓度或水平。
在其他实施方式中，活动性狼疮患者被定义成具有降低的血浆或血清C3和/或C4补体水平的患者。本领域人员明白C3和/或C4的正常水平可以有所不同，取决于用于测定C3和/或C4的检测法。因此，血浆或血清C3补体的正常水平可以从约90mg/dL到约180mg/dL。在其他具体的实施方式中，血浆或血清C3补体的正常水平的范围也可以从约88mg/dL到约206mg/dL或者从约88mg/dL到约252mg/dL。血浆或血清C4补体的正常水平可以从约16mg/dL到约47mg/dL。在其他具体的实施方式中，血浆或血清C4补体的正常水平的范围也可以从约12mg/dL到约72mg/dL或者从约13mg/dL到约75mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C3补体水平被定义成小于90mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C3补体水平被定义成小于88mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C3补体水平被定义成小于85mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C3补体水平被定义成小于80mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C3补体水平被定义成小于75mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C4补体水平被定义成小于16mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C4补体水平被定义成小于15mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C4补体水平被定义成小于14mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C4补体水平被定义成小于13mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C4补体水平被定义成小于12mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C4补体水平被定义成小于11mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C4补体水平被定义成小于10mg/dL。在具体的实施方式中，降低的血浆或血清C4补体水平被定义成小于9mg/dL。临床医师利用本领域已知的技术和方法学例如利用放射免疫弥散检测法可以常规地测定出补体水平。
在其他实施方式中，活动性狼疮患者被定义为具有以下任一个或多个特征的患者：依据美国风湿病学学会(ACR)标准临床诊断为SLE(见例如Tan et al.，Arthritis Rheum.25：1271-7，(1982)；和Hochberg et al.，ArthritisRheum.40：1725，(1997))；SELENA SLEDAI评分≥6；降低的血浆或血清C4补体水平；降低的血浆或血清C3补体水平；ANA滴度为1:80或更高；血浆或血清抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL；正在接受≥7.5mg/天的泼尼松或其他用于治疗狼疮相关症状的糖皮质激素；和/或正在接受或者先前接受过用于治疗狼疮相关症状的免疫抑制治疗。
在其他实施方式中，活动性狼疮患者被定义为具有以下任一个或多个特征的患者：依据美国风湿病学学会(ACR)标准临床诊断为SLE；SELENA SLEDAI评分≥8；降低的血浆或血清C4补体水平；降低的血浆或血清C3补体水平；ANA滴度为1:80或更高；血浆或血清抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL；正在接受最高到40mg/天的泼尼松或其他用于治疗狼疮相关症状的糖皮质激素；和/或正在接受或者先前接受过用于治疗狼疮相关症状的免疫抑制治疗。
多个疾病活动度指数对于本领域临床医师都是熟知的，并且可以用于测定类风湿疾病活动度例如SLE疾病活动度的程度(见例如Strand，et al.，JRheumatol.，26：490-7，(1999))。在一个实施方式中，SELENA SLEDAI被用作疾病活动度指数(DAI)(见例如Bombardier，et al.，Arthritis Rheum.35：630-40，(1992))。在另一个实施方式中，SLE Flare指数被用作DAI(见例如Petri，et al.，Lupus，8：685-91，(1999))。在进一步的实施方式中，系统性红斑狼疮国际合作单位/美国风湿病学学会损伤指数(SLICC/ACR)被用作DAI(见例如Gladman，et al.，Arthritis Rheum.，39：363-9，(1996))。在另一个实施方式中，医师总体评价(PGA)被用作DAI，PGA是一种直观模拟标度尺，范围从0到3，其中0是没有疾病活动，1是轻微疾病活动，2是中等疾病活动，而3是严重疾病活动。在仍另一个实施方式中，医学转归调查简易表格(Medical Outcomes Survey Short Form 36，SF-36)被用作DAI。SF-36是通用的健康相关的生活质量(HRQOL)工具，在观察性群组研究和随机对照试验中都已经显示出其反映出了SLE对HRQOL所有方面的影响(Cook，et al.，J.Rheumatol.，27：1892-1895，(2000)；Thumboo，et al.，JRheumatol.，26：97-102，(1999)；Thumboo，et al.，J Rheumatol.，27：1414-1420，(2000)；Ware JE，et al.，Med Care，30：473-483，(1992)；Smolen JS，et al.，JRheumatol.，26：504-507，(1999)；Gladman，et al.，Lupus，5：190-195，(1996)；Alonso J，et al.，Qual Life Res.，13：283-298，2004；和Gladman et al，JRheumatol.，27：377-9，(1995)，在此通过引用将它们的全部内容并入本申请)。
在进一步的实施方式中，EQ-5D(也称作EuroQol工具)被用作DAI。EQ-5D是一种通用的健康相关的生活质量测量工具。这是一种简单的、自用调查问卷，它不仅包含描述性的健康状态分类系统，还能够生成反映出与给定健康状态相关的偏向值的复合评分或指数。EQ-5D描述性系统由5个部分组成：活动度、自我照顾、日常活动、疼痛/不适、和焦虑/抑郁。每个部分都有3个水平，分别反映“无健康问题”、“中等健康问题”、和“重度健康问题”(见例如Health Policy.1990 Dec；16(3)：199-208，在此通过引用将其内容并入本申请)。
在进一步的实施方式中，慢性病治疗的功能评价(FACIT)测量系统中的慢性病治疗的功能评价-乏力(FACIT-F)次级评分表被用作DAI。FACIT-F次级评分表是27个项目的常见问题的组合，分成4个主要的QOL部分：身体状态、社会/家庭状态、情绪状态、和功能状态。该测量工具收集了患者关于能量水平、倦怠、和开始或完成活动的能力方面的反馈(见，例如Yellen，S.B.，et al.，Journal of Pain and Symptom Management，13：63-74，(1997)；Cella，D.，et al.，94(2)：528-538，(2002)；和Cella，D.，et al.，Journal of Pain & Symptom Management，24(6)：547-561，(2002)，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。
在进一步的实施方式中，疾病活动度评分(DAS28)被用作DAI。DAS28是风湿病学家使用的用于评价风湿性疾病活动度的标准工具。该测量工具依据以下评价计算出指数评分：压痛(TEN)关节的数目、肿胀(SW)关节的数目、红细胞沉降率(ESR)、和患者对疾病活动度的评价(VAS；mm)(见例如Van der Heijde D.M.F.M.，et al.，J.Rheumatol，20：579-8，(1993)；Prevoo M.L.L.，et al.，Arthritis Rheum，38：44-8，(1995)，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。
在进一步的实施方式中，不列颠群岛狼疮评价组(BILAG)被用作DAI(见例如，Isenberg，et al.，Rheumatology，44：902-6，(2005)；Gordon，et al.，Rheumatology，42(11)：1372-9，(2003)；Isenberg，et al.，Lupus，9(9)：651-4，(2000)；Hay et al.，Q J Med.，86：447-58，(1993)；和ADS-Limathon Ltd在2004年4月4日发布的BLIPSTM第3.0版软件程序用户指南，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。BILAG指数包括已知受狼疮影响的8个身体器官/系统，以及每个评分都取决于与先前的评价相比较，临床表现是否是新的、恶化的、相同的或者改善的。对于所有8个身体器官/系统，SLE疾病表现的严重度分别为A、B、C、D或E评分，其中A是最为严重的(见例如，Hay，同上)。BILAG指数提供了评价疾病严重度和治疗有效性的复合评分。该复合评分组合了狼疮中受影响的所有8个身体器官/系统。利用本领域已知的BILAG或其他测量方法，治疗可以靶向于具有特殊器官/系统亚组的疾病表现的狼疮患者。
因此，在一个具体的实施方式中，如果患者已经获得了其SELENASLEDAI评分的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果与同一患者的基线SELENA SLEDAI评分，即在患者开始免疫调节剂治疗之前测定到的SELENA SLEDAI评分相比较，患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分中至少4分的下降，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。一个具体的实施方式中，如果与同一患者的基线SELENA SLEDAI评分，即在患者开始免疫调节剂治疗之前测定到的SELENA SLEDAI评分相比较，患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分中至少4分的下降，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在另一个具体的实施方式中，如果患者没有表现出如医师整体评价(PGA)所测定出的疾病活动度的恶化，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果PGA评分已经降低、仍然稳定或者增高不超过0.3分，则患者没有表现出疾病活动度的恶化。在一个具体的实施方式中，如果与同一患者的基线PGA评分，即在患者开始免疫调节剂治疗之前测定到的PGA评分相比较，所述患者的PGA评分已经降低、仍然稳定或者增高不超过0.3分，则患者没有表现出疾病活动度的恶化。
在另一个具体的实施方式中，如果患者没有表现出如不列颠群岛狼疮评价组(BILAG)疾病活动指数所测定出的疾病活动度的恶化，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果患者没有获得新的BILAG A器官区评分或者没有获得2个新的BILAG B器官区评分，则患者没有表现出疾病活动度的恶化。在一个具体的实施方式中，如果与同一患者的基线BILAG评价，即在患者开始免疫调节剂治疗之前测定到的BILAG评价相比较，患者没有获得新的BILAG A器官区评分或者没有获得2个新的BILAG B器官区评分，则患者没有表现出疾病活动度的恶化。
在另一个具体的实施方式中，如果分别与他们的基线SELENASLEDAI评分、PGA评分和不列颠群岛狼疮评价组(BILAG)评价相比较，患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分的下降、没有表现出其PGA评分的显著恶化、以及没有表现出如BILAG疾病活动指数所测定出的疾病活动度的恶化，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果分别与其基线SELENA SLEDAI评分、PGA评分和BILAG评价相比较，患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分中至少4分的下降、其PGA评分的增加不超过0.3分以及没有获得新的BILAG A器官区评分或者没有获得2个新的BILAG B器官区评分，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经减少，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个实施方式中，如果与患者的基线泼尼松剂量，即在患者开始免疫调节剂治疗之前正在服用的泼尼松剂量相比较，患者的泼尼松剂量已经减少，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经降低至少25％，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经降低至少25％到小于或等于7.5mg/天，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经比基线泼尼松剂量降低至少25％到小于或等于7.5mg/天，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经降低至少50％，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经降低至少50％到小于或等于7.5mg/天，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经比基线泼尼松剂量降低至少50％到小于或等于7.5mg/天，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
可以用其他测量方法测定狼疮患者应答于治疗的质量。在一个具体的实施方式中，如果患者具有改善的SF-36健康调查评分(Health SurveyScore)，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与患者的基线SF-36健康调查评分相比较，患者具有改善的SF-36健康调查评分，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在一个具体的实施方式中，如果患者具有改善的EQ-5D评分，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与患者的基线EQ-5D评分相比较，患者具有改善的EQ-5D评分，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在一个具体的实施方式中，如果患者表现出经患者的FACIT-F评分所显示出的乏力的减轻，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与患者的基线FACIT-F评分相比较，患者表现出经患者的FACIT-F评分所显示出的乏力的减轻，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在一个具体的实施方式中，如果患者具有改善的DAS28评分，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与患者的基线DAS28评分相比较，患者具有改善的DAS28评分，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在另一个具体的实施方式中，如果患者有发作频率和/或持续时间的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与用免疫调节剂治疗之前的发作频率和/或持续时间相比较，患者有发作频率和/或持续时间的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者有发作严重度的减轻，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与用免疫调节剂治疗之前的发作严重度相比较，患者有发作严重度的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。SLE发作指数评价狼疮症状恶化(发作)的频率和严重度。发作被分成了“轻度或中度”或“重度”。轻度或中度发作包括以下一条或多条：SELENASLEDAI评分改变3分或更多；新的/恶化的盘状的、光过敏的、深的、皮下血管炎的或大疱性的狼疮；鼻咽部溃疡；胸膜炎；心包炎；关节炎；发热(SLE)；强地松剂量增加，但不超过0.5mg/kg/天；因为疾病活动增加了NSAID或硫酸羟氯喹(Plaquenil)剂量；以及PGA评分增加到超过1.0，但不超过2.5。重度发作包括以下一条或多条：SELENA SLEDAI评分改变超过12分；新的/恶化的CNS-SLE；血管炎；肾炎；肌炎；Plt<60,000；贫血(<7％或Hb下降>3％)；泼尼松剂量加倍；泼尼松剂量增加到超过0.5mg/kg/天；处方环磷酰胺；处方硫唑嘌呤；处方甲氨喋呤；住院(SLE)和PGA评分增加到超过2.5分。在另一个具体的实施方式中，如果患者有经SLE发作指数测定到的发作频率和/或严重度的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与用免疫调节剂治疗之前的发作频率和/或严重度相比较，患者有经SLE发作指数测定到的发作频率和/或严重度的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者有改进版的SLE发作指数测定到的发作频率和/或严重度的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与用免疫调节剂治疗之前的发作频率和/或严重度相比较，患者有改进版的SLE发作指数测定到的发作频率和/或严重度的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。改进版的SLE发作指数不包括由SELENA SLEDAI评分变化单独触发的严重发作。
因此，如果患者已经显示了其SELENA SLEDAI评分的降低，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α的拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果与同一患者的基线SELENA SLEDAI评分、在患者开始Neutrokine-α拮抗剂治疗之前测定到的SELENA SLEDAI评分相比较，患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分的降低，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分中至少4分的下降，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。一个具体的实施方式中，如果与同一患者的基线SELENA SLEDAI评分、在患者开始Neutrokine-α拮抗剂治疗之前测定到的SELENA SLEDAI评分相比较，患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分中至少4分的下降，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体(peptibody)。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在另一个具体的实施方式中，如果患者没有表现出经医师整体评价(PGA)所确定的疾病活动度的恶化，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果PGA评分已经降低、仍然稳定或者增高不超过0.3分，则患者没有表现出疾病活动度的恶化。在一个具体的实施方式中，如果与同一患者的基线PGA评分、在患者开始Neutrokine-α拮抗剂治疗之前测定到的PGA评分相比较，所述患者的PGA评分已经降低、仍然稳定或者增高不超过0.3分，则患者没有表现出疾病活动度的恶化。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在另一个具体的实施方式中，如果患者没有表现出如不列颠群岛狼疮评价组(BILAG)疾病活动指数所测定出的疾病活动度的恶化，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果患者没有获得新的BILAG A器官区评分或者没有获得2个新的BILAG B器官区评分，则患者没有表现出疾病活动度的恶化。在一个具体的实施方式中，如果与同一患者的基线BILAG评价、在患者开始Neutrokine-α拮抗剂治疗之前测定到的BILAG评价相比较，患者没有获得新的BILAG A器官区评分或者没有获得2个新的BILAG B器官区评分，则患者没有表现出疾病活动度的恶化。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在另一个具体的实施方式中，如果分别与他们的基线SELENASLEDAI评分、PGA评分和BILAG评价相比较，患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分的下降、没有表现出其PGA评分的显著恶化、以及没有表现出如不列颠群岛狼疮评价组(BILAG)疾病活动指数所测定出的疾病活动度的恶化，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果分别与其基线SELENA SLEDAI评分、PGA评分和BILAG评价相比较，患者已经获得了其SELENA SLEDAI评分中至少4分的下降、其PGA评分的增加不超过0.3分以及没有获得新的BILAG A器官区评分或者没有获得2个新的BILAG B器官区评分，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经减少，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在另一个实施方式中，如果与患者的基线泼尼松剂量，即在患者开始Neutrokine-α拮抗剂治疗之前正在服用的泼尼松剂量相比较，患者的泼尼松剂量已经减少，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经降低至少25％，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经降低至少25％到小于或等于7.5mg/天，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经比基线泼尼松剂量降低至少25％到小于或等于7.5mg/天，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经降低至少50％，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经降低至少50％到小于或等于7.5mg/天，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者的泼尼松剂量已经比基线泼尼松剂量降低至少50％到小于或等于7.5mg/天，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
可以用其他测量方法测定狼疮患者应答于治疗的质量。在一个具体的实施方式中，如果患者具有改善的SF-36健康调查评分，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与患者的基线SF-36健康调查评分相比较，患者具有改善的SF-36健康调查评分，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在一个具体的实施方式中，如果患者具有改善的EQ-5D评分，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与患者的基线EQ-5D评分相比较，患者具有改善的EQ-5D评分，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在一个具体的实施方式中，如果患者表现出经患者的FACIT-F评分所显示出的乏力的减轻，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与患者的基线FACIT-F评分相比较，患者表现出经患者的FACIT-F评分所显示出的乏力的减轻，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在一个具体的实施方式中，如果患者具有改善的DAS28评分，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与患者的基线DAS28评分相比较，患者具有改善的DAS28评分，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在另一个具体的实施方式中，如果患者有发作频率和/或持续时间的降低，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与用Neutrokine-α拮抗剂治疗之前的发作频率和/或持续时间相比较，患者有发作频率和/或持续时间的降低，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者有发作严重度的减轻，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与用Neutrokine-α拮抗剂治疗之前的发作严重度相比较，患者有发作严重度的降低，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。SLE发作指数评价狼疮症状恶化(发作)的频率和严重度。发作被分成了”轻度或中度”或“重度”。轻度或中度发作包括以下一条或多条：SELENA SLEDAI评分改变3分或更多；新的/恶化的盘状的、光过敏的、深的、皮下血管炎的或大疱性的狼疮；鼻咽部溃疡；胸膜炎；心包炎；关节炎；发热(SLE)；强地松剂量增加，但不超过0.5mg/kg/天；因为疾病活动增加了NSAID或硫酸羟氯喹剂量；以及PGA评分增加到超过1.0，但不超过2.5。重度发作包括以下一条或多条：SELENA SLEDAI评分改变超过12分；新的/恶化的CNS-SLE；血管炎；肾炎；肌炎；Plt<60,000；贫血(<7％或Hb下降>3％)；泼尼松剂量加倍；泼尼松剂量增加到超过0.5mg/kg/天；处方环磷酰胺；处方硫唑嘌呤；处方甲氨喋呤；住院(SLE)和PGA评分增加到超过2.5分。在另一个具体的实施方式中，如果患者有经SLE发作指数测定到的发作频率和/或严重度的降低，则正在接受或已经接受过本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与用免疫调节剂治疗之前的发作频率和/或严重度相比较，患者有经SLE发作指数测定到的发作频率和/或严重度的降低，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果患者有改进版的SLE发作指数测定到的发作频率和/或严重度的降低，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在另一个具体的实施方式中，如果与用Neutrokine-α拮抗剂治疗之前的发作频率和/或严重度相比较，患者有改进版的SLE发作指数测定到的发作频率和/或严重度的降低，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。改进版的SLE发作指数不包括由SELENA SLEDAI评分变化单独触发的严重发作。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
可以单个地或联合地使用上述的疾病活动度指数(例如SELENASLEDAI、PGA、BILAG、SLE发作指数、SF-36健康调查评分、EQ-5D、FACIT-F、DAS28)评价狼疮患者的状态。也可以在开始Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)的治疗之后通过比较一种或多种患者先前的疾病活动度指数评分测量值来评价如这些疾病活动度指数所测定到的患者健康状态的改善。另外，在一个具体的实施方式中，如果患者保持着与先前的测量值相比疾病活动度评分有改善，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，可以在开始Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂之前或者在开始Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂之后的第1、2、3、4、5、6、7、8、10、11或12周时评价一种或多种疾病活动度指数评分。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在一个具体的实施方式中，用Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗具有一个或多个器官/系统的疾病表现的狼疮患者。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在具体的实施方式中，用Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂治疗具有一个或多个内在器官系统的疾病表现以及有或没有粘膜皮肤和/或肌肉骨骼系统受累的狼疮患者。在具体的实施方式中，用Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂治疗具有一个或多个内在器官系统的疾病表现且没有粘膜皮肤和/或肌肉骨骼系统受累的狼疮患者。在狼疮中，累及粘膜皮肤和/或肌肉骨骼系统的疾病表现包括但不限于：盘状红斑、颊部红斑、或其他皮肤斑疹、粘膜溃疡、脂膜炎、皮肤血管炎、皮肤血栓形成、指趾梗死、指趾血栓形成、秃发、甲周红斑、冻疮、甲下线状出血、肌炎、多关节炎、关节炎、腱炎、关节痛和肌痛。在狼疮中，可以受到狼疮影响的内在器官系统包括但不限于神经系统、循环系统、呼吸系统、泌尿/排泄系统、消化系统和眼睛。神经系统的狼疮疾病表现包括但不限于无菌性脑膜炎、脑血管炎、脱髓鞘综合征、脊髓病、急性精神错乱状态、精神病、急性炎性脱髓鞘性多神经根病、单神经病、颅神经病、神经丛病、多发性神经病、癫痫病、癫痫持续状态、非血管炎造成的脑血管病、认知障碍、运动失调、自主神经病、小脑共济失调、头痛、偏头痛、情绪障碍和焦虑障碍。循环系统的狼疮疾病表现包括但不限于心肌炎、心衰、心律失常、新的瓣膜功能不全、浆膜炎、心包填塞、胸腔积液伴呼吸困难、肺出血、肺血管炎、间质性肺泡炎、间质性肺炎、皱缩肺综合征、主动脉炎和冠状动脉血管炎。消化系统的狼疮疾病表现包括但不限于腹膜炎、腹部浆膜炎、腹水、狼疮肠炎、狼疮结肠炎、吸收不良、失蛋白性肠病、肝炎、假性肠梗阻、急性胆囊炎和急性胰腺炎。与眼睛相关的狼疮疾病表现包括但不限于眼眶炎症、角膜炎、前葡萄膜炎、后葡萄膜炎、视网膜血管炎、巩膜外层炎、巩膜炎、视网膜/脉络膜血管闭塞病、cutoid体、视神经炎和前部缺血性视神经病。
通过在开始治疗之后的一个或多个间期内评价生物学标记物并比较患者的生物学标记物评价和患者的同一生物学标记物的基线和/或先前的测量值可以监测患者对Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的应答。可以被评价的生物学标记物包括但不限于免疫球蛋白水平(例如总血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgA、和/或IgE水平)、自身抗体水平(例如抗dsDNA抗体、抗CCP抗体、抗Ro/SS-A抗体、抗La/SS-B抗体、抗RNP抗体、抗心磷脂(抗磷脂)抗体和抗Sm抗体水平以及ANA滴度)、B细胞数目(例如总的B细胞数目、活化B细胞数目、纯真B细胞数目、记忆B细胞数目、浆样B细胞数目、浆细胞样B细胞数目、总的CD19+B细胞和/或CD20+B细胞数目)、C4补体水平、C3补体水平。在一个具体的实施方式中，在开始Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗之前和/或在开始Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗之后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周、月和年时评价生物学测量值。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在一个具体的实施方式中，如果与患者的免疫球蛋白的基线测量值相比较，患者具有降低的免疫球蛋白水平(例如总血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgA、和/或IgE水平)，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在一个具体的实施方式中，如果与一次或多次患者先前的免疫球蛋白测量值相比较，患者具有降低的免疫球蛋白水平(例如总血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgA、和/或IgE水平)，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果与一次或多次患者先前的免疫球蛋白测量值相比较，患者保持住降低的免疫球蛋白水平(例如总血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgA、和/或IgE水平)，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果患者具有正常的免疫球蛋白水平(例如总血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgA、和/或IgE水平)，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在一个具体的实施方式中，如果与患者的自身抗体的基线测量值相比较，患者具有降低的自身抗体(例如抗dsDNA抗体、抗CCP抗体、抗Ro/SS-A抗体、抗La/SS-B抗体、抗RNP抗体、抗心磷脂(抗磷脂)抗体和抗Sm抗体水平以及ANA滴度)水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在一个具体的实施方式中，如果与患者的一次或多次先前的自身抗体测量值相比较，患者具有降低的自身抗体(例如抗dsDNA抗体、抗CCP抗体、抗Ro/SS-A抗体、抗La/SS-B抗体、抗RNP抗体、抗心磷脂(抗磷脂)抗体和抗Sm抗体水平以及ANA滴度)水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果与患者的一次或多次先前的自身抗体测量值相比较，患者保持了降低的自身抗体(例如抗dsDNA抗体、抗CCP抗体、抗Ro/SS-A抗体、抗La/SS-B抗体、抗RNP抗体、抗心磷脂(抗磷脂)抗体和抗Sm抗体水平以及ANA滴度)水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果患者获得了正常的自身抗体(例如抗dsDNA抗体、抗CCP抗体、抗Ro/SS-A抗体、抗La/SS-B抗体、抗RNP抗体、抗心磷脂(抗磷脂)抗体和抗Sm抗体水平以及ANA滴度)水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，测定了IgG同种型的自身抗体。
在一个具体的实施方式中，如果与患者的B细胞数目的基线测量值相比较，患者具有降低的B细胞数目(总的B细胞数目、活化B细胞数目、纯真B细胞数目、记忆B细胞数目、浆样B细胞数目、浆细胞样B细胞数目、总的CD19+B细胞和/或CD20+B细胞数目)，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在一个具体的实施方式中，如果与一次或多次患者的先前的B细胞数目测量值相比较，患者具有降低的B细胞数目(总的B细胞数目、活化B细胞数目、纯真B细胞数目、记忆B细胞数目、浆样B细胞数目、浆细胞样B细胞数目、总的CD19+B细胞和/或CD20+B细胞数目)，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果与一次或多次患者的先前的B细胞数目测量值相比较，患者保持了降低的B细胞数目(总的B细胞数目、活化B细胞数目、纯真B细胞数目、记忆B细胞数目、浆样B细胞数目、浆细胞样B细胞数目、总的CD19+B细胞和/或CD20+B细胞数目)，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果患者获得了正常的B细胞数目(总的B细胞数目、活化B细胞数目、纯真B细胞数目、记忆B细胞数目、浆样B细胞数目、浆细胞样B细胞数目、总的CD19+B细胞和/或CD20+B细胞数目)，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在一个具体的实施方式中，如果与患者的C4基线测量值相比较，患者具有增高的血清补体因子C4水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在一个具体的实施方式中，如果与一次或多次患者的先前的C4测量值相比较，患者具有增高的C4水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果与一次或多次患者的先前的C4测量值相比较，患者保持了增高的C4水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果患者获得了正常的C4水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在一个具体的实施方式中，如果与患者的C3基线测量值相比较，患者具有增高的血清补体因子C3水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的狼疮患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在一个具体的实施方式中，如果与一次或多次患者的先前的C3测量值相比较，患者具有增高的C3水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果与一次或多次患者的先前的C3测量值相比较，患者保持了增高的C3水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。在一个具体的实施方式中，如果患者获得了正常的C3水平，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂治疗的狼疮患者被认为是应答于或已经应答于所述治疗。
在具体的实施方式中，本发明提供治疗先前已经接受过一种或多种免疫抑制剂治疗的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂，包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA。在具体的实施方式中，本发明提供治疗先前已经被诊断为系统性红斑狼疮(狼疮)以及先前接受过一种或多种免疫抑制剂治疗的患者的方法，包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在具体的实施方式中，患者先前接受过的免疫抑制剂是硫唑嘌呤(例如依木兰TM)、环磷酰胺(例如
Figure A200680047110D00461
CTX)、神经钙蛋白抑制剂例如FK506、他克莫司或环孢菌素(例如
Figure A200680047110D00462
)和/或
Figure A200680047110D00463
(霉酚酸酯，其活性代谢物是霉酚酸)。
目前狼疮和其他自身免疫病的最为通用的治疗方法都利用非特异性阻断各种炎症通路的药物。在这种治疗方法中最为危险的药物可能就是糖皮质激素。虽然糖皮质激素例如泼尼松是控制疾病表现的基本药物，但是它们也对患者的健康有着多种不良作用例如整体的免疫抑制造成感染、骨质疏松造成骨折、以及动脉粥样硬化造成了早期发生心脏事件和中风。在临床试验中，申请人发现用中和Neutrokine-α蛋白的抗体的治疗(第0、14和28天静脉内输注，然后每4周一次，直到第52周)能有效地减少缓解狼疮患者的疾病表现所需的糖皮质激素泼尼松的剂量。特别是，抗Neutrokine-α抗体的治疗与治疗期最后3个月内的泼尼松量的减少有关。在基线ANA滴度为1:80或更高、和/或抗dsDNA大于或等于30IU/mL的患者中，有更高比例的接受抗Neutrokine-α抗体的患者减少了他们的泼尼松剂量，相反，更多数目的接受安慰剂治疗的患者已经增加泼尼松剂量到大于7.5mg/天。
因此，在一个实施方式中，本发明提供减少施用给患者的糖皮质激素治疗的频率和/或糖皮质激素的量的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂，包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA。在具体的实施方式中，糖皮质激素是泼尼松、泼尼松龙、氢化可的松、甲基泼尼松龙或地塞米松。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在一个具体的实施方式中，其中减少了糖皮质激素治疗的患者是患有炎症的患者。在另一个具体的实施方式中，其中减少了糖皮质激素治疗的患者是患有自身免疫病的患者，包括但不限于类风湿关节炎、狼疮、干燥综合征或其他自身免疫病例如在此所述的一种自身免疫病。
因此，在一个具体的实施方式中，本发明提供减少施用给系统性红斑狼疮(狼疮)患者的糖皮质激素治疗的频率和/或糖皮质激素的量的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂，包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA。在另一个具体的实施方式中，本发明提供减少施用给系统性红斑狼疮(狼疮)患者的泼尼松治疗的频率和/或泼尼松的量的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂，包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA。“治疗有效量”在此指的是减少通常的缓解疾病表现所需的糖皮质激素的处方量的量。这些表现以及用于确定能有效地减轻这些表现的严重度的抗体/组合物的量的方法学都是临床医师熟知的。在优选的实施方式中，施用给患者的本发明的抗体的剂量是0.1mg到100mg/kg患者体重。更优选地，施用给患者的剂量是在0.1mg到20mg/kg患者体重之间。在最优选的实施方式中，施用给患者的剂量是1、4、10、或20mg/kg。
在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量从先前更高的剂量被减少到了≤80mg/天。在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量从先前更高的剂量被减少到了≤40mg/天。在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量从先前更高的剂量被减少到了小于20mg/天。在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量从先前更高的剂量被减少到了≤10mg/天。在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量从先前更高的剂量被减少到了≤8mg/天。在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量从先前更高的剂量被减少到了≤6mg/天。在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量从先前更高的剂量被减少到了≤4mg/天。在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量从先前更高的剂量被减少到了≤2mg/天。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量从先前更高的剂量被减少到了≤7.5mg/天。在一个具体的实施方式中，与患者在开始包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂之前所服用的泼尼松剂量相比较，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量最终降低至少25％。在一个具体的实施方式中，与患者在开始包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂之前所服用的泼尼松剂量相比较，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量最终降低至少50％。在一个具体的实施方式中，与患者在开始包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂之前所服用的泼尼松剂量相比较，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量最终降低至少25％到≤7.5mg/天。在一个具体的实施方式中，与患者在开始包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂之前所服用的泼尼松剂量相比较，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂的治疗方案时，施用给患者的糖皮质激素(例如泼尼松)的量最终降低至少50％到≤7.5mg/天。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在一个具体的实施方式中，当同一患者同时接受了包括施用Neutrokine-α拮抗剂或其他免疫调节剂的治疗方案时，患者暂时地或永久地停止了糖皮质激素(例如泼尼松)治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在具体的实施方式中，用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗临床诊断为类风湿关节炎(RA)的患者。在具体的实施方式中，所治疗的类风湿关节炎患者没有B细胞肿瘤。此外，类风湿关节炎患者还任选地接受了一种或多种适用于治疗RA的药物例如水杨酸盐、非甾体类抗炎药例如吲哚美辛、苯丁唑酮、苯乙酸衍生物(例如布洛芬和非诺洛芬)、萘乙酸(甲氧萘丙酸)、pyrrolealkanoic acid(Tometin)、吲哚乙酸(奇诺力)、卤代邻氨基苯甲酸(甲氯灭酸钠)、吡洛昔康、苯酰吡酸钠和二氟尼酸、抗疟药例如氯喹、金盐、青霉胺、或免疫抑制剂例如甲氨喋呤或糖皮质激素，所述剂量为这些药物的常用剂量或减量。但是，优选地类风湿关节炎患者只接受了Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的和/或在此所属的其他免疫调节剂的治疗。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。按照下面所述的给药方案给RA患者施用这些免疫调节剂，本领域人员都可以容易地确定所述给药方案。用Paulus指数(Paulus et al.Arthritis Rheum.33：477-484(1990))确定初始应答，即晨僵、痛性和炎性关节数目、红细胞沉降率(ESR)的提高、以及经患者和医师所评价的5分疾病严重度评分表至少提高2分。施用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂将缓解如上所述治疗的RA患者的一种或多种RA症状。
在2期临床试验(实施例3)中，类风湿关节炎患者接受了中和Neutrokine-α蛋白的抗体的治疗，第0、14、28天静脉内输注，然后，每4周1次直到第24周，治疗更倾向于缓解在开始中和Neutrokine-α蛋白的抗体治疗之前其DAS28评分大于5.1的患者、先前没有接受过抗TNF治疗的患者、和/或血浆和/或血清中类风湿因子阳性的患者中与类风湿关节炎相关的症状。表现出更倾向于应答于中和Neutrokine-α蛋白的抗体的治疗的附加亚组包括男性患者、血浆和/或血清抗CCP(环瓜氨酸肽)抗体阳性的患者、同时接受中和Neutrokine-α蛋白的抗体和甲氨喋呤的患者、先前甲氨喋呤治疗失败的患者、和/或先前甲氨喋呤治疗以及至少一种其他DMARD治疗失败的患者。
因此，本发明提供一种用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂治疗类风湿关节炎患者的方法，其中所述类风湿关节炎患者具有以下任何一种或多种特征：患者先前没有接受过抗TNF治疗例如英夫利昔单抗(也称作RemicadeTM Centocor，Inc.)、阿达木单抗(Abbott实验室的)或依那西普
Figure A200680047110D00512
患者的血浆和/或血清类风湿因子阳性；患者的血浆和/或血清中具有可检测到的抗CCP(环瓜氨酸肽)抗体；患者有提高了的血浆和/或血清CRP(C反应蛋白)水平；患者先前有一种或多种疾病修饰抗类风湿药物失败史；患者有高的改进的疾病活动度评分(DAS28)；患者有肿胀和压痛的关节；患者有晨僵；患者有高的红细胞沉降率(ESR)和/或男性患者。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在具体的实施方式中，类风湿关节炎患者的血浆和/或血清的类风湿因子等于或大于12IU/ml。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少1.5mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少5mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少6mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少9mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少10mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少20mg/L。在具体的实施方式中，类风湿关节炎患者的血浆和/或血清的抗CCP抗体等于或大于10单位。在具体的实施方式中，类风湿关节炎患者的血浆和/或血清的抗CCP抗体等于或大于20单位。在具体的实施方式中，患者先前经一种或多种DMARD包括但不限于甲氨喋呤、氨喹脲、柳氮磺吡啶、和来氟米特的治疗失败。在具体的实施方式中，患者先前经甲氨喋呤治疗失败。在具体的实施方式中，患者的DAS评分大于5.1。在具体的实施方式中，患者有至少6个肿胀的关节和至少8个压痛的关节。在具体的实施方式中，患者的ESR大于28mm/小时。在具体的实施方式中，患者的晨僵时间至少为45分钟。在具体的实施方式中，患者的晨僵时间至少为1个小时。在具体的实施方式中，患者的晨僵时间至少为1个半小时。在具体的实施方式中，患者的晨僵时间至少为2个小时。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
因此，本发明提供用Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗类风湿关节炎患者的方法。其中所述类风湿关节炎患者具有以下任何一种或多种特征：患者先前没有接受过抗TNF治疗例如英夫利昔单抗(也称作RemicadeTMCentocor，Inc.)、阿达木单抗(Abbott实验室的)或依那西普
Figure A200680047110D00532
患者的血浆和/或血清类风湿因子阳性；患者的血浆和/或血清中具有可检测到的抗CCP(环瓜氨酸肽)抗体；患者有提高了的血浆和/或血清CRP(C反应蛋白)水平；患者先前有一种或多种疾病修饰抗类风湿药物失败史；患者有高的改进的疾病活动度评分(DAS28)；患者有肿胀和压痛的关节；患者有晨僵；患者有高的红细胞沉降率(ESR)和/或男性患者。在具体的实施方式中，类风湿关节炎患者的血浆和/或血清的类风湿因子等于或大于12IU/ml。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少1.5mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少5mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少6mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少9mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少10mg/L。在具体的实施方式中，提高了的CRP水平被定义为至少20mg/L。在具体的实施方式中，类风湿关节炎患者的血浆和/或血清的抗CCP抗体等于或大于10单位。在具体的实施方式中，类风湿关节炎患者的血浆和/或血清的抗CCP抗体等于或大于20单位。在具体的实施方式中，患者先前经一种或多种DMARD包括但不限于甲氨喋呤、氨喹脲、柳氮磺吡啶、和来氟米特的治疗失败。在具体的实施方式中，患者先前经甲氨喋呤治疗失败。在具体的实施方式中，患者的DAS评分大于5.1。在具体的实施方式中，患者有至少6个肿胀的关节和至少8个压痛的关节。在具体的实施方式中，患者的ESR大于28mm/小时。在具体的实施方式中，患者的晨僵时间至少为45分钟。在具体的实施方式中，患者的晨僵时间至少为1个小时。在具体的实施方式中，患者的晨僵时间至少为1个半小时。在具体的实施方式中，患者的晨僵时间至少为2个小时。
在另一个具体的实施方式中，如果类风湿关节炎患者已经获得了ACR20应答，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的类风湿关节炎患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。ACR20是美国风湿病学学会(ACR)开发出的评价患者对类风湿关节炎治疗的应答的指数。ACR20应答被定义为除了5个其他症状或疾病表现评价(即患者疼痛评价、患者总体评价、医师总体评价、患者自我评价的残疾、急性期反应物(ESR或CRP))中的3个评价都至少提高了20％外，还要压痛关节数目和肿胀关节数目至少减少20％。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在另一个具体的实施方式中，如果类风湿关节炎患者已经获得了ACR50应答，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的类风湿关节炎患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。ACR50是美国风湿病学学会(ACR)开发出的评价患者对类风湿关节炎治疗的应答的指数。ACR50应答被定义为除了5个其他症状或疾病表现评价(即患者疼痛评价、患者总体评价、医师总体评价、患者自我评价的残疾、急性期反应物(ESR或CRP))中的3个评价都至少提高了50％外，还要压痛关节数目和肿胀关节数目至少减少50％。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
在另一个具体的实施方式中，如果类风湿关节炎患者已经获得了ACR70应答，则正在接受或已经接受过Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂(包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或变体、抗Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体、靶向于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-α和/或APRIL的受体的反义或siRNA)治疗的类风湿关节炎患者被认为是应答于或者已经应答于所述治疗。ACR70是美国风湿病学学会(ACR)开发出的评价患者对类风湿关节炎治疗的应答的指数。ACR70应答被定义为除了5个其他症状或疾病表现评价(即患者疼痛评价、患者总体评价、医师总体评价、患者自我评价的残疾、急性期反应物(ESR或CRP))中的3个评价都至少提高了70％外，还要压痛关节数目和肿胀关节数目至少减少70％。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。
免疫调节剂
本发明提供用免疫调节剂治疗ANA滴度为1:80或更高和/或其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者的方法。上面讨论了在此所用的“免疫调节剂”的含义。在一个具体的实施方式中，免疫调节剂是Neutrokine-α拮抗剂。“拮抗剂”表示能够抑制或拮抗Neutrokine-α的体外和/或体内的功能性作用和/或生物学作用(例如刺激B细胞的分化、增殖、和/或生存；刺激B细胞生成Ig；和结合Neutrokine-α受体)的药物。可以在存在或不存在拮抗剂和Neutrokine-α多肽的直接物理的接触时发生这种抑制作用(例如拮抗剂可以调节Neutrokine-α活性的上游效应物，以便降低所述活性)。在此描述了用于测定Neutrokine-α拮抗剂抑制B细胞活性的检测法。Neutrokine-α拮抗剂包括但不限于抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α受体蛋白或其片段或变体、结合Neutrokine-α受体的抗体或其抗原结合片段、Neutrokine-α结合肽或多肽、Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体(例如Neutrokine-α和/或APRIL的显性负调控物形式)。其他的Neutrokine-α拮抗剂包括Neutrokine-α的小分子拮抗剂、Neutrokine-α肽模拟物、靶向于Neutrokine-α的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)和靶向于APRIL的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)、靶向于Neutrokine-α的受体和/或APRIL的受体的反义RNA和短干扰RNA(siRNA)。下面将更详细地描述每种拮抗剂。
Neutrokine-α拮抗剂
A.Neutrokine-α和APRIL多肽
在一个具体的实施方式中，用于本发明方法的Neutrokine-α拮抗剂是Neutrokine-α或APRIL多肽片段或变体。下面将更详细地描述Neutrokine-α多肽、APRIL多肽和其片段或变体。Neutrokine-α蛋白(SEQ ID NO：2)是TNF配体家族的成员，其与APRIL(SEQ ID NO：4；GenBank编号AF046888；PCT国际出版物WO97/33902；Hahne，M.，et al.，J Exp Med.(1998)188(6)：1185-90)、TNFα和淋巴毒素α(LTα)(Moore，et al.，1999)享有氨基酸序列相同性。全长Neutrokine-α基因编码285个氨基酸多肽，其具有第1和46位残基之间的细胞内区、第47和73位残基之间的跨膜区，所述跨膜区前面是II型膜结合蛋白特征性的非疏水性序列，以及第74和285位残基之间的细胞外区。与TNF家族的其他成员一样，Neutrokine-α以三聚体蛋白的形式发挥作用。在细胞表面上表达Neutrokine-α之后，在134位氨基酸上裂解出细胞外区，以便释放出生物学活性的三聚体。结构表征发现虽然TNF家族配体表现出序列多样性，但是它们都显示出高度的结构同源性。与其他的TNF配体家族的成员一样，Neutrokine-α蛋白是2层的β-三明治结构，其形成了TNF样的凝胶卷(jellyroll)形式。Neutrokine-α蛋白在总体结构和尺度上都与其他TNF配体家族相似。但是，Neutrokine-α的受体结合区是比在其他细胞因子上观察到的结合区更深的沟(Oren，et al.，(2002)Nature Structural Biology 9：288-292)。在例如国际出版物WO98/18921、WO00/50597、WO02/1820、和WO03/033658中更详细地描述了Neutrokine-α多肽，在此通过引用将其全部内容都并入本申请。
如上所述，Neutrokine-α多肽的作用为刺激B细胞增殖、分化、存活、和Ig分泌。因此，没有人会预期可在本发明方法中使用天然形式的Neutrokine-α。但是，天然形式的Neutrokine-α可以作为靶向剂，其可以将其他能够抑制B细胞活性的药物(例如细胞毒基序或蛋白)携带带接近于B细胞的位置(见例如，WO00/033658的实施例12和13，其中同位素标记的Neutrokine-α被用于靶向并杀死表达Neutrokine-α受体的细胞，所述细胞主要是B细胞来源的)。或者，结合一种或多种Neutrokine-α受体但不诱导信号传导的Neutrokine-α的片段或变体可以用作Neutrokine-α拮抗剂。影响Neutrokine-α形成或保持稳定的同三聚体或异三聚体的能力的Neutrokine-α片段或变体也可以用作本发明方法中的Neutrokine-α拮抗剂。因此，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽包括SEQ ID NO：2的Neutrokine-α蛋白的多肽片段或变体。多肽片段或变体可以是“独立式的(free standing)”或者可包含于更大的多肽内，其中所述片段形成了所述更大多肽的一部分或一个区域，最优选地是作为单一的连续区域。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽包括多肽片段，所述多肽片段包含推定的Neutrokine-α细胞外区(SEQ ID NO：2的第73到285位氨基酸残基)和Neutrokine-α的可溶性片段(SEQ ID NO：2的第134到285位氨基酸残基)或者是由它们组成。在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的多肽片段或变体包括与上面所述的天然的Neutrokine-α的多肽片段至少有着80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的多肽片段或变体或者是由其组成。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽变体包括肽模拟物。模拟物是模拟了蛋白二级结构的元件的含肽分子。见例如Johnson et al.，＂Peptide Turn Mimetics＂in BIOTECHNOLOGY ANDPHARMACY，Pezzuto et al.，Eds.，Chapman and Hall，New York(1993)，在此通过引用将其内容并入本申请。使用肽模拟物背后的潜在原理是蛋白的肽骨架存在主要是为了按促进分子相互作用的方式来定位氨基酸侧链，例如抗体和抗原的那些侧链。预计肽模拟物可以容许类似于天然分子的分子相互作用。这些原理可以用于遗传工程化具有在此所述的靶向肽的天然性能但是具有改变的、甚至改良的特征的第二代分子。
APRIL(SEQ ID NO：4)是TNF配体家族的成员，其与Neutrokine-α(SEQ ID NO：2；GenBank编号NM_006573；Moore，et al.，(1999)Science285：260-263；Schneider et al.，(1999)J.Exp.Med.189：1747-1756；和Khareet al.，(2000)Proc.Natl.Acad Sci.97：3370-3375)、TNFα、和淋巴毒素-α(LTα)(Moore，et al.，1999)享有氨基酸序列的相同性。全长APRIL基因编码250个氨基酸的多肽，其具有第1和28位残基之间的细胞内区、第29和49位残基之间的跨膜区、以及第50和250位残基之间的细胞外区。与TNF家族的其他成员一样，APRIL以三聚体蛋白的形式发挥作用。在细胞表面上表达APRIL之后，在105位氨基酸上裂解出细胞外区，以便释放出生物学活性的三聚体。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽包括SEQ ID NO：4的APRIL蛋白的多肽片段或变体。多肽片段或变体可以是“独立式的”或者可包含于更大的多肽内，其中所述片段形成了所述更大多肽的一部分或一个区域，最优选地是作为单一的连续区域。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽包括多肽片段，所述多肽片段包含推定的APRIL细胞外区(SEQ ID NO：4的第50到250位氨基酸残基)和APRIL的可溶性片段(SEQ ID NO：4的第105到250位氨基酸残基)或者是由其组成。在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的多肽片段或变体包括与上面所述的天然的APRIL的多肽片段至少有着80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的多肽片段或变体或者是由其组成。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽变体包括肽模拟物。模拟物是模拟了蛋白二级结构的元件的含肽分子。见例如Johnson et al.，＂Peptide Turn Mimetics＂in BIOTECHNOLOGY ANDPHARMACY，Pezzuto et al.，Eds.，Chapman and Hall，New York(1993)，在此通过引用将其内容并入本申请。使用肽模拟物背后的潜在原理是蛋白的肽骨架存在主要是为了按促进分子相互作用的方式来定位氨基酸侧链，例如抗体和抗原的那些侧链。预计肽模拟物可以容许类似于天然分子的分子相互作用。这些原理可以用于遗传工程化具有在此所述的靶向肽的天然性能但是具有改变的、甚至是改良的特征的第二代分子。
可以用于本发明方法中的Neutrokine-α和APRIL多肽可以被表达或合成为修饰形式例如融合蛋白(包含经肽键连接于(不同蛋白的)异源蛋白序列的多肽)，以及不仅可以包含分泌信号，还可以包含额外的异源的功能区。通过用本领域已知的方法在合适的阅读框内彼此连接Neutrokine-α或APRIL多核苷酸和编码所需氨基酸序列的核酸序列，并用本领域已知的方法表达融合蛋白产物可以生成这种融合蛋白。或者，可以用蛋白合成技术例如通过使用肽合成仪可以生成这种融合蛋白。因此，例如，可以向多肽的N末端加入额外的氨基酸区域(特别是带电荷的氨基酸)，以提高其在宿主细胞内、纯化期间、或随后的操作和储存期间的稳定性和持久性。也可以向多肽加入肽基序，以促进纯化。可以在多肽制备结束之前去除这些区域。向多肽加入肽基序以引起分泌或排出、提高稳定性和促进纯化都是本领域熟悉的和常规的技术。
可以用于本发明方法中的优选的Neutrokine-α或APRIL融合蛋白包括能够用于稳定和纯化蛋白的来自免疫球蛋白的异源区域。例如，EP-A-O464 533(对应于加拿大2045869)和WO00/024782阐述了包括免疫球蛋白分子的恒定区的不同部分和另一种人类蛋白或其部分的融合蛋白。例如在Yu，et al.，(2000)Nat Immunol 1：252-256中已经能够描述了Neutrokine-α免疫球蛋白融合蛋白，在此通过引用将其全部内容并入本申请。例如在PCT出版物WO01/087977中已经描述了APRIL免疫球蛋白融合蛋白，在此通过引用将其全部内容并入本申请。在很多情况中，融合蛋白中的Fc部分非常适用于治疗和诊断，并因此造成了改善的药物动力学性能(EP-A 0232262)。另一方面，对于某些应用而言，需要在以在此所述的有利的方式表达、检测并纯化出融合蛋白之后能够缺失Fc部分。当Fc部分被证实其对用于治疗和诊断是妨碍时就是这种情况，例如当融合蛋白被用作免疫接种的抗原时。在药物研发中，例如人类蛋白如hIL-5已经与Fc部分融合，以便用高通量筛选检测法鉴定出hIL-5的拮抗剂。见D.Bennett et al.，J.Molecular Recognition 8：52-58(1995)和K.Johanson et al.，J.Biol.Chem.270：9459-9471(1995)。
本领域人员知道并如上面讨论的那样，Neutrokine-α和APRIL多肽可以与其他多肽序列融合。例如，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽可以与免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定区或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一组合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)融合，形成嵌合多肽。
这些融合蛋白可以促进纯化、可以延长储存时间以及可以增加体内半衰期。由人CD4多肽的头两个结构域和哺乳动物免疫球蛋白的重链或轻链恒定区的不同区域组成的嵌合蛋白已经显示出这一点。见例如EP394,827、Traunecker et al.，Nature，331：84-86(1988)。对于与FcRn结合伴侣例如IgG或Fc片段缀合的抗原(例如胰岛素)已经证实可以增强抗原跨越上皮屏障转运到免疫系统的能力(见例如PCT出版物WO 96/22024和WO99/04813)。也已经发现由于IgG部分的二硫键所造成的具有二硫键连接的二聚体结构的IgG融合蛋白能比单聚体多肽或其片段单独本身更有效地结合并中和其他分子。见例如Fountoulakis et al.，J.Biochem.，270：3958-3964(1995)。
人血清白蛋白(HAS或HA)的成熟形式是585个氨基酸的蛋白(SEQID NO：11)，其是引起血清渗透压的主要部分，也作用能够为内源性和外源性配体的载体。现在，通过人类血液提取生成用于临床应用的HA。EP330 451和EP 361 991已经阐述了在微生物中生成重组HA(rHA)。
白蛋白作为载体分子的作用以及其惰性性能都是在体内用作多肽的载体和转运子所需的性能。在WO 93/15199、WO 93/15200、和EP 413 622中已经提出了白蛋白作为白蛋白融合蛋白的组件用作各种蛋白的载体的用途。也已经提出了HA作为与多肽的融合物的N末端片段的用途(EP 399666)。通过遗传学操作可以实现白蛋白与治疗性蛋白的融合，例如将编码HA或其片段的DAN加入到编码治疗性蛋白的DNA中。然后用排列在合适质粒上的融合的核苷酸序列转化或转染合适的宿主，以表达融合蛋白。可以在体外从原核或真核细胞中或者在体内从转基因生物体中实现所述表达。
可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一个Neutrokine-α多肽的片段或变体以及至少一个人血清白蛋白的片段或变体，其彼此连接在一起，优选地通过遗传融合(即通过翻译核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，编码Neutrokine-α的全部或一部分的多核苷酸与编码白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架连接)，或者化学缀合彼此连接在一起。一旦作为白蛋白融合蛋白的一部分，Neutrokine-α多肽和白蛋白蛋白可以被称作白蛋白融合蛋白的“部分”、“区域”或“基序”(例如“Neutrokine-α部分”或“白蛋白部分”)。
在一个实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine-α多肽和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine-α多肽的片段和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine-α多肽的变体和血清白蛋白或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的血清白蛋白蛋白组分是血清白蛋白的成熟部分。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine-α多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或者是由它们组成。在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine-α多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的Neutrokine-α部分是全长Neutrokine-α多肽。在一个进一步优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的Neutrokine-α蛋白部分是Neutrokine-α多肽的成熟的、可溶性的区域。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine-α多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，本发明提供包括或由Neutrokine-α多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)组成的白蛋白融合蛋白。在一个优选的实施方式中，Neutrokine-α多肽与成熟形式的人血清白蛋白(即如欧洲专利0 322 094的图1和2所示的人血清白蛋白的第1到585位氨基酸)融合，在此通过引用将其全部内容并入本申请。在另一个优选的实施方式中，本发明的抗体(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到x位残基组成的多肽片段融合，其中x是从1到585的整数，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一个优选的实施方式中，Neutrokine-α多肽(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到z位氨基酸组成的多肽片段融合，其中z是从369到419的整数，如美国专利5,766,883所述，在此通过引用将其全部内容并入本申请。Neutrokine-α多肽(包括其片段或变体)可以与异源蛋白(例如免疫球蛋白Fc多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。
在优选的实施方式中，在可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一组或两组下面的参照SEQ ID NO：11的点突变组：Leu-407突变为Ala、Leu-408突变为Val、Val-409突变为Ala、和Arg-410突变为Ala；或Arg-410突变为A、Lys-413突变为Gln、和Lys-414突变为Gln(见例如国际申请WO95/23857，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。在甚至更为优选的实施方式中，含有一组或两组上面所述的点突变组的可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白已经提高了对酵母Yap3p蛋白裂解性降解的稳定性/耐受性，容许增加在酵母宿主细胞中表达的重组白蛋白融合蛋白的产量。
优选地，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括作为N末端部分的HA和作为C末端部分的Neutrokine-α多肽。或者，也可以使用包括作为其C末端部分的HA和作为其N末端部分的Neutrokine-α多肽的白蛋白融合蛋白。
在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白具有与白蛋白的N末端和C末端融合的Neutrokine-α多肽。在一个具体的实施方式中，在N末端和C末端融合的Neutrokine-α多肽是相同的。在另一个实施方式中，在N末端和C末端融合的Neutrokine-α多肽是不同的Neutrokine-α多肽。在另一个实施方式中，Neutrokine-α多肽被融合于白蛋白的N或C末端，异源多肽被融合于剩余末端。
另外，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之间的连接物肽，以提供所述部分之间的更大的物理分隔。连接物肽可以由氨基酸组成，使得其是柔性的或更具刚性。
一般而言，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一个HA衍生区和一个Neutrokine-α区。但是，每个蛋白中的多个区域都可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。同样，一种以上的蛋白可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在这种构型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。双官能的白蛋白融合蛋白的结构可以表示为X-HA-Y或Y-HA-X。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α蛋白或其片段或变体可以与细胞毒素(例如细胞生长抑制剂或杀细胞剂)缀合。细胞毒素或细胞毒药物可以包括任何对细胞有害的药物。实例包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、吐根素、丝裂霉素、足叶乙甙、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、dihydroxy anthracin dione、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛尔、和嘌呤霉素以及其类似物或同系物。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α或其片段或变体可以与毒素缀合。“毒素”表示一种或多种可以结合并激活内源性细胞毒效应物系统的化合物、放射性同位素、全毒素、修饰毒素、毒素的催化亚基、或在给定的引起细胞死亡的条件下不会正常地表达于细胞表面内或表面上的任何分子或酶。可以使用的毒素包括但不限于本领域已知的放射性同位素、化合物例如结合内在的或诱导的内源性细胞毒效应物系统的抗体(或其含补体固定化的部分)、胸苷激酶、核酸内切酶、RNA酶、α毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假单胞菌外毒素A、白喉毒素、皂草素(saporin)、木鳖子甙(momordin)、白树毒素(gelonin)、美洲商路抗病毒蛋白、α-帚曲霉素(α-Sarcin)、和霍乱毒素。“毒素”也包括细胞生长抑制剂或杀细胞剂、治疗药物或放射性金属离子例如α粒子发射离子，例如213Bi、或其他放射性同位素如103Pd、133Xe、131I、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、35S、90Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、90钇(90Yttrium)、117锡(117Tin)、186铼(186Rhenium)、166钬(166Holmium)、和188铼。
在另一个实例中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽可以与免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定区或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一组合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)融合，形成嵌合多肽。
这些融合蛋白可以促进纯化、可以延长储存时间以及可以增加体内半衰期。由人CD4多肽的头两个结构域和哺乳动物免疫球蛋白的重链或轻链恒定区的不同区域组成的嵌合蛋白已经显示出这一点。见例如EP394,827、Traunecker et al.，Nature，331：84-86(1988)。对于与FcRn结合伴侣例如IgG或Fc片段缀合的抗原(例如胰岛素)已经证实可以增强抗原跨越上皮屏障转运到免疫系统的能力(见例如PCT出版物WO 96/22024和WO99/04813)。也已经发现由于IgG部分的二硫键所造成的具有二硫键连接的二聚体结构的IgG融合蛋白能比单聚体多肽或其片段单独本身更有效地结合并中和其他分子。见例如Fountoulakis et al.，J.Biochem.，270：3958-3964(1995)。
可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一个APRIL多肽的片段或变体以及至少一个人血清白蛋白的片段或变体，其彼此连接在一起，优选地通过遗传融合(即通过翻译核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，编码APRIL的全部或一部分的多核苷酸与编码白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架连接)，或者化学缀合彼此连接在一起。一旦作为白蛋白融合蛋白的一部分，APRIL多肽和白蛋白蛋白可以被称作白蛋白融合蛋白的“部分”、“区域”或“基序”(例如“APRIL部分”或“白蛋白部分”)。
在一个实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽的片段和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽的变体和血清白蛋白或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的血清白蛋白蛋白组分是血清白蛋白的成熟部分。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或者是由它们组成。在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的APRIL部分是全长APRIL多肽。在一个进一步优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的APRIL蛋白部分是APRIL多肽的成熟的、可溶性的区域。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽的片段或变体和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或者是由它们组成。在进一步的实施方式中，本发明提供包括APRIL多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分或者是由它们组成的白蛋白融合蛋白。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽的片段或变体和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，本发明提供包括或由APRIL多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)组成的白蛋白融合蛋白。在一个优选的实施方式中，APRIL多肽与成熟形式的人血清白蛋白(即如欧洲专利0 322 094的图1和2所示的人血清白蛋白的第1到585位氨基酸)融合，在此通过引用将其全部内容并入本申请。在另一个优选的实施方式中，本发明的抗体(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到x位残基组成的多肽片段融合，其中x是从1到585的整数，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一个优选的实施方式中，APRIL多肽(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到z位氨基酸组成的多肽片段融合，其中z是从369到419的整数，如美国专利5,766,883所述，在此通过引用将其全部内容并入本申请。APRIL多肽(包括其片段或变体)可以与异源蛋白(例如免疫球蛋白Fc多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。
在优选的实施方式中，在可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一组或两组下面的参照SEQ ID NO：11的点突变组：Leu-407突变为Ala、Leu-408突变为Val、Val-409突变为Ala、和Arg-410突变为Ala；或Arg-410突变为A、Lys-413突变为Gln、和Lys-414突变为Gln(见例如国际申请WO95/23857，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。在甚至更为优选的实施方式中，含有一组或两组上面所述的点突变组的可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白已经提高了对酵母Yap3p蛋白裂解性降解的稳定性/耐受性，容许增加在酵母宿主细胞中表达的重组白蛋白融合蛋白的产量。
优选地，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括作为N末端部分的HA和作为C末端部分的APRIL多肽。或者，也可以使用包括作为其C末端部分的HA和作为其N末端部分的APRIL多肽的白蛋白融合蛋白。
在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白具有与白蛋白的N末端和C末端融合的APRIL多肽。在一个具体的实施方式中，在N末端和C末端融合的APRIL多肽是相同的。在另一个实施方式中，在N末端和C末端融合的APRIL多肽是不同的APRIL多肽。在另一个实施方式中，APRIL多肽被融合于白蛋白的N或C末端，异源多肽被融合于剩余末端。
另外，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之间的连接物肽，以提供所述部分之间的更大的物理分隔。连接物肽可以由氨基酸组成，使得其是柔性的或更具刚性。
一般而言，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一个HA衍生区和一个APRIL区。但是，每个蛋白中的多个区域都可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。同样，一种以上的蛋白可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在这种构型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。双官能的白蛋白融合蛋白的结构可以表示为X-HA-Y或Y-HA-X。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL蛋白或其片段或变体可以与细胞毒素(例如细胞生长抑制剂或杀细胞剂)缀合。细胞毒素或细胞毒药物可以包括任何对细胞有害的药物。实例包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、吐根素、丝裂霉素、足叶乙甙、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、dihydroxyanthracin dione、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛尔、和嘌呤霉素以及其类似物或同系物。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL或其片段或变体可以与毒素缀合。
“毒素”表示一种或多种可以结合并激活内源性细胞毒效应物系统的化合物、放射性同位素、全毒素、修饰毒素、毒素的催化亚基、或在给定的引起细胞死亡的条件下不会正常地表达于细胞表面内或表面上的任何分子或酶。可以使用的毒素包括但不限于本领域已知的放射性同位素、化合物例如结合内在的或诱导的内源性细胞毒效应物系统的抗体(或其含补体固定化的部分)、胸苷激酶、核酸内切酶、RNA酶、α毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假单胞菌外毒素A、白喉毒素、皂草素、木鳖子甙、白树毒素、美洲商路抗病毒蛋白、α-帚曲霉素、和霍乱毒素。“毒素”也包括细胞生长抑制剂或杀细胞剂、治疗药物或放射性金属离子例如α粒子发射离子，例如213Bi、或其他放射性同位素如103Pd、133Xe、131I、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、35S、90Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、90钇、117锡、186铼、166钬、和188铼。
可以采用遗传工程化来改变Neutrokine-α和APRIL多肽的特征，以生成可以用于本发明方法中的多肽。可以用本领域人员已知的重组DNA技术生成新的突变蛋白或“突变型蛋白”包括单个或多个氨基酸取代、缺失、添加或融合蛋白。这些修饰多肽可以表现出例如增强活性、降低活性或增加稳定性。另外，至少在特定的纯化和储存条件下，它们可以比相应的天然多肽按更高的产量被纯化，并表现出更好的稳定性。例如，对于多种包括分泌蛋白的细胞外区或成熟形式的蛋白而言，本领域已知可以从N末端或C末端缺失一个或多个氨基酸，且基本上不丢失生物学功能。例如，Ron et al.，J.Biol.Chem.，268：2984-2988(1993)报道了经修饰的KGF蛋白具有肝素结合活性，即使缺失了3、8、或27个氨基末端的氨基酸残基。
可以被用于本发明方法中的Neutrokine-α和APRIL多肽可以是单体或多聚体(即二聚体、三聚体、四聚体、和更高聚体)，在具体的实施方式中，可以被用于本发明方法中的Neutrokine-α和APRIL多肽可以是同聚体或异聚体。Neutrokine-α同聚体指的是只含有Neutrokine-α多肽(包括Neutrokine-α片段、变体、和在此所述的融合蛋白)的多聚体。这些同聚体可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的Neutrokine-α多肽。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽是Neutrokine-α同二聚体(例如含有两个具有相同的或不同的氨基酸序列的Neutrokine-α多肽)或者是Neutrokine-α同三聚体(例如含有三个具有相同的或不同的氨基酸序列的Neutrokine-α多肽)。在一个优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽是Neutrokine-α的同三聚体。在另外的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽至少是同二聚体、同三聚体或同四聚体。APRIL同聚体指的是只含有APRIL多肽(包括APRIL片段、变体、和在此所述的融合蛋白)的多聚体。这些同聚体可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的APRIL多肽。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽是APRIL同二聚体(例如含有两个具有相同的或不同的氨基酸序列的APRIL多肽)或者是APRIL同三聚体(例如含有三个具有相同的或不同的氨基酸序列的APRIL多肽)。在一个优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽是APRIL的同三聚体。在另外的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽至少是同二聚体、同三聚体或同四聚体。
异聚体的Neutrokine-α指的是除了Neutrokine-α多肽外还含有异源性多肽(即不同蛋白的多肽)的多聚体。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽是异二聚体、异三聚体、或异四聚体。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽是多聚体，其中至少是异二聚体、异三聚体、或异四聚体。异聚体的APRIL指的是除了APRIL多肽外还含有异源性多肽(即不同蛋白的多肽)的多聚体。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽是异二聚体、异三聚体、或异四聚体。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽是多聚体，其中至少是异二聚体、异三聚体、或异四聚体。在另外的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽是包括Neutrokine-α多肽和APRIL多肽或其片段或变体的异三聚体。在另外的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽是包括一个Neutrokine-α多肽(包括片段或变体)和两个APRIL多肽(包括片段或变体)的异三聚体。在另外的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽是包括两个Neutrokine-α多肽(包括片段或变体)和一个APRIL多肽(包括片段或变体)的异三聚体。
在另外的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽是同聚体的、特别是同三聚体的Neutrokine-α多肽，其中多聚体的单个蛋白组分包括Neutrokine-α的成熟形式(例如SEQ ID NO：2的第134到285位氨基酸)或其片段或变体或者是由它们组成。在其他具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α多肽是异聚体的、特别是异三聚体的Neutrokine-α多肽例如含有两个Neutrokine-α多肽和一个APRIL多肽的异三聚体或含有一个Neutrokine-α多肽和两个APRIL多肽的异三聚体，其中Neutrokine-α异聚体的单个蛋白组分包括Neutrokine-α的成熟的细胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO：2的第134到285位氨基酸)或其片段或变体、或APRIL的成熟的细胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO：4的第105到250位氨基酸)或其片段或变体或者是由其组成。
在另外的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽是同聚体的、特别是同三聚体的APRIL多肽，其中多聚体的单个蛋白组分包括APRIL的成熟形式(例如SEQ ID NO：4的第105到250位氨基酸)或其片段或变体或者是由其组成。在其他具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL多肽是异聚体的、特别是异三聚体的APRIL多肽例如含有两个APRIL多肽和一个Neutrokine-α多肽的异三聚体或含有一个APRIL多肽和两个Neutrokine-α多肽的异三聚体，其中APRIL异聚体的单个蛋白组分包括APRIL的成熟的细胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO：4的第105到250位氨基酸)或其片段或变体、或Neutrokine-α的成熟的细胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO：2的第134到285位氨基酸)或其片段或变体或者是由其组成。
可以用于本发明方法中的多聚体可以是疏水连接、亲水连接、离子连接和/或共价连接相连的结果，和/或可以是间接相连的，例如通过脂质体形成。因此，在一个实施方式中，当多肽在溶液中彼此接触时，就形成了同多聚体例如同二聚体或同三聚体。在另一个实施方式中，当多肽在溶液中彼此接触时，就形成了异二聚体例如异三聚体或异四聚体。在其他实施方式中，通过与Neutrokine-α多肽的共价连接或者Neutrokine-α之间的共价连接形成多聚体。在其他实施方式中，通过与APRIL多肽的共价连接或者APRIL之间的共价连接形成多聚体。这些共价连接可能涉及到多肽序列(例如Neutrokine-α的SEQ ID NO：2或APRIL的SEQ ID NO：4)所含的一个或多个氨基酸残基。在一种情况中，共价连接是位于多肽序列内的半胱氨酸残基之间的交联，所述半胱氨酸残基在天然(即天然存在)多肽中也相互作用。在另一种情况中，共价连接是化学或重组处理后的结果。或者，这种共价连接可以涉及一个或多个在Neutrokine-α或APRIL融合蛋白的异源性多肽序列中所含的氨基酸残基(见美国专利5,478,925)。在一个具体的实例中，共价连接是Neutrokine-α-Fc融合蛋白(如在此所述)所含的异源性序列之间的共价连接。在一个具体的实例中，共价连接是APRIL-Fc融合蛋白(如在此所述)所含的异源性序列之间的共价连接。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的融合蛋白的共价连接是来自另一个能够形成共价连接的多聚体的TNF家族配体/受体成员例如护骨蛋白(oseteoprotegerin)(见例如国际出版物WO 98/49305，在此通过引用将其全部内容并入本申请)的异源性多肽序列之间的共价连接。在另一个实施方式中，两个或多个Neutrokine-α多肽和/或APRIL多肽经合成的连接物(例如肽、碳水化合物或可溶性的多聚体连接物)连接在一起。实例包括在美国专利5,073,627中所述的那些肽连接物(在此通过引用将其并入本申请)。利用传统的重组DNA技术可以生成包括多个经肽连接物分离的Neutrokine-α多肽和/或APRIL多肽的蛋白。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α拮抗剂是Neutrokine-α和/或APRIL的显性负调控物形式。具体地，在例如国际专利出版物WO06/034106、WO05/113598、WO04/089982、WO04/081043和WO03/057856以及美国专利出版物US20060014248、US20050221443、US20050130892、US20050048626、US2005003480和US20030166559中已经描述了Neutrokine-α和/或APRIL的变体，包括显性负调控物形式。在此通过引用将其所有内容并入本申请。这种Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体例如可以通过干扰Neutrokine-α和/或APRIL形成同或异多聚体化来拮抗Neutrokine-α功能。或者，Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体可以阻止包括所述Neutrokine-α和/或APRIL多肽变体的多肽与Neutrokine-α受体例如TACI、BCMA和BAFF-R的结合和/或信号传导。
在另一个实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是Gao et a.l，(2006)Biotechnol.Lett.28：1649-54所述的Neutrokine-α蛋白突变体，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α拮抗剂是ΔBAFF(SEQ ID NO：12)。
B.抗Neutrokine-α抗体
在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体或其抗原结合片段。例如在PCT出版物WO01/087977、WO03/016468、WO01/60397、WO02/02641和WO03/55979；美国出版物2005/0070694和2005/0255532；和Cao et al.，(2005)Immunol Lett 101：87-94；Ch’en et al.，(2005)Cell Immunol 236：78-85；Liu et al.，(2005)Acta Biochim Biophys Sin(Shanghai)37：415-420；Schneider et al.，(1999)J Exp Med 189：1747-1756；Sun et al.，(2006)Hybridoma 25：80-85；Sun et al.，(2006)Hybridoma 25：238-242中已经描述了抗Neutrokine-α抗体及其片段；下面将做更为详细的描述。在此通过引用将其全部内容并入本申请。
术语“抗体”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。术语抗体不仅包括整个抗体分子，还包括抗体片段和抗体以及抗体片段的变体(包括衍生物)。在本申请中术语“抗体”所述的分子的实例包括但不限于：单链Fv(scFv)、Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2、二硫键连接的Fv(sdFv)、Fv、和包括或由VL或VH结构域组成的片段。术语“单链Fv”或“scFv”在此指的是包括与抗体的VH结构域相连的抗体的VL结构域的多肽。免疫特异性结合特殊抗原(例如Neutrokine-α)的抗体可以具有与其他抗原的交叉反应性。优选地，免疫特异性结合特殊抗原的抗体与其他抗原没有交叉反应。例如通过免疫检测法或其他本领域人员已知的技术可以鉴定出与特殊抗原的免疫特异性结合，例如2006年7月31日提交的美国专利申请60/834,152所述的免疫检测法，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可以用于本发明方法中的抗体包括但不限于单克隆的、多特异性的、人类或嵌合的抗体、单链抗体、Fab片段、F(ab′)片段、抗独特型(抗Id)抗体、以及上述所有抗体的表位结合片段。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何类型的(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何组(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚组的免疫球蛋白。
可以用于本发明方法中的抗体也可以包括多聚体形式的抗体。例如，可以用于本发明方法中的抗体可以是抗体二聚体、三聚体、或单体免疫球蛋白分子的高级多聚体形式。整个免疫球蛋白分子或者F(ab’)2片段的二聚体是四价的，而Fab片段或scFv分子的二聚体是二价的。抗体多聚体内的单个单体可以是相同的或不同的，即它们可以是异聚体的或同聚体的抗体多聚体。例如，多聚体内的单个抗体可以具有相同的或不同的结合特异性。通过抗体的天然聚集或者通过本领域已知的化学或重组连接技术可以完成抗体的多聚体化。例如，一部分纯化的抗体制剂(例如纯化的IgG1分子)可以自发地形成含有抗体同二聚体和其他更高级的抗体多聚体的蛋白聚集物。或者，可以通过本领域已知的化学连接技术形成抗体同二聚体。例如，异双官能的交联剂包括但不限于SMCC(琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯)[succinimidyl 4-(maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate]和SATA[N-succinimidyl S-acethylthio-acetate](例如购自PierceBio technology，Inc.(Rockford，IL))，可以用所述交联剂形成抗体多聚体。Ghetie et al.，Proceedings of the National Academy of Sciences USA(1997)94：7509-7514给出了用于形成抗体同二聚体的示例方案，在此通过引用将其全部内容并入本申请。通过胃蛋白酶的消化可以将抗体同二聚体转化成Fab’2同二聚体。形成抗体同二聚体的另一个方法是通过使用在Zhao andKohler，The Journal of Immunology(2002)25：396-404中所述的autophilic的T15肽，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
或者，可以通过重组DNA技术使得抗体多聚体化。IgM和IgA通过与J链多肽的相互作用天然地形成抗体多聚体。非IgA或非IgM分子例如IgG分子可以被遗传工程化成含有IgA或IgM的J链相互作用区，据此赋予非IgA或非IgM分子形成高级多聚体的能力(见例如Chintalacharuvu etal.，(2001)Clinical Immunology 101：21-31.和Frigerio et al.，(2000)PlantPhysiology 123：1483-94.，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。也可以要通过本领域已知的重组技术形成scFv二聚体，Goel et al.，(2000)CancerResearch 60：6964-6971给出了构建scFv二聚体的实例，在此通过引用将其全部内容并入本申请。利用本领域已知的任何合适的方法包括但不限于分子排阻色谱法可以纯化出抗体多聚体。
除非在本说明书中有其他不同的说明，抗体的特异性结合或免疫特异性结合都表示抗体结合靶抗原，但不会显著地结合(即交叉反应)除靶抗原以外的蛋白例如同一蛋白家族中的其他蛋白(例如其他TNF家族配体)。结合靶抗原和不会与其他蛋白交叉反应的抗体不必是在所有条件下都不会结合所述其他蛋白的抗体，而是相比较于其结合所述其他蛋白的能力而言，靶抗原特异性抗体优选地结合靶抗原，使得其适用于至少一种类型的检测法或治疗，即得到了低背景水平或者对治疗不会造成不合理的副作用。抗体所结合的蛋白部分称作表位，这是公知的。表位可以是线性的(即由蛋白序列中的次序的氨基酸残基组成)或者构象的(即由蛋白一级结构中不连续的一个或多个氨基酸残基组成，但是通过蛋白的二级、三级或四级结构组合在一起)。假定靶抗原特异性抗体结合靶抗原的表位，那么特异性结合靶抗原的抗体可以或不可以结合靶抗原的片段和/或靶抗原的变体(例如与靶抗原至少90％相同的蛋白)，这取决于靶抗原片段或变体中是否存在给定靶抗原特异性抗体所结合的表位。同样，靶抗原特异性抗体可以结合靶抗原(包括其片段)的物种直系同源物(species orthologues)，这也取决于在直系同源物中是否存在抗体所识别的表位。另外，靶抗原特异性抗体可以结合修饰形式的靶抗原例如靶抗原融合蛋白。在这种情况中，当抗体结合靶抗原融合蛋白时，抗体必须与融合蛋白的靶抗原基序结合接触，以便使得结合是特异性的。
例如通过免疫检测法或其他本领域人员已知的技术可以鉴定出与任何特殊靶抗原特异性结合的抗体，例如通过2006年7月31日提交的美国专利申请60/834,152所述的免疫检测法，在此通过引用将其全部内容并入本申请。可以用于本发明方法中的抗体可以“特异于”Neutrokine-α，但是这并非是必要条件。可根据其交叉反应性来描述或说明可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体。不会结合Neutrokine-α的任何其他类似物、同源物、或同系物的抗体可以用于本发明的方法。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体与APRIL交叉反应。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体与人类蛋白质的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相应表位交叉反应。
在一个具体的实施方式中，结合Neutrokine-α多肽、多肽片段、或SEQ ID NO：2的变体、和/或Neutrokine-α表位(通过用于检测特异的抗体-抗原结合的本领域熟知的免疫检测法确定的表位)的抗体可以用于本发明方法中。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体可以结合与其他多肽序列融合的Neutrokine-α多肽。例如，Neutrokine-α多肽可以与免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定区或其部分(CH1、CH2、CH3或其任何组合及其部分)、或白蛋白(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请))融合，形成嵌合多肽。这些融合蛋白可以促进纯化以及增加体内半衰期。由人CD4多肽的头两个结构域和哺乳动物免疫球蛋白的重链或轻链恒定区的不同区域组成的嵌合蛋白已经显示出这一点。见例如EP 394,827、Traunecker et al.，Nature，331：84-86(1988)。对于与FcRn结合伴侣例如IgG或Fc片段缀合的抗原(例如胰岛素)已经证实可以增强抗原跨越上皮屏障转运到免疫系统的能力(见例如PCT出版物WO96/22024和WO 99/04813)。也已经发现由于IgG部分的二硫键所造成的具有二硫键连接的二聚体结构的IgG融合蛋白能比单聚体多肽或其片段单独本身更有效地结合并中和其他分子。见例如Fountoulakis et al.，J.Biochem.，270：3958-3964(1995)。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合突变的Neutrokine-α多肽，通过对编码Neutrokine-α多肽的多核苷酸的随机突变、通过错配PCR、随机核苷酸插入或重组之前的其他方法生成所述突变的Neutrokine-α多肽。在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合与一种或多种异源分子的一个或多个组分、基序、节段、部分、区域、片段等重组的Neutrokine-α的一个或多个组分、基序、节段、部分、区域、片段等。在优选的实施方式中，异源分子是例如TNF-α、淋巴毒素-α(LT-α，也叫做TNF-β)、LT-β(见于复杂异三聚体LT-α2-β)、OPGL、FasL、CD27L、CD30L、CD40L、4-1BBL、DcR3、OX40L、TNF-γ(国际出版物WO 96/14328)、AIM-I(国际出版物WO 97/33899)、AIM-II(国际出版物WO 97/34911)、APRIL(J.Exp.Med.188(6)：1185-1190)、endokine-α(国际出版物WO 98/07880)、OPG、OX40、和神经生长因子(NGF)、和可溶形式的Fas、CD30、CD27、CD40和4IBB、TR2(国际出版物WO96/34095)、DR3(国际出版物WO 97/33904)、DR4(国际出版物WO98/32856)、TR5(国际出版物WO 98/30693)、TR6(国际出版物WO98/30694)、TR7(国际出版物WO 98/41629)、TRANK、TR9(国际出版物WO 98/56892)、TR10(国际出版物WO 98/54202)、312C2(国际出版物WO98/06842)、TR12、CAD、和v-FLIP。在进一步的实施方式中，异源分子是TNF家族的任一成员。
在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合同聚体的、特别是同三聚体的Neutrokine-α多肽。在其他具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合异聚体的、特别是异三聚体的Neutrokine-α多肽例如含有两个Neutrokine-α多肽和一个APRIL多肽的异三聚体或者含有一个Neutrokine-α多肽和两个APRIL多肽的异三聚体。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合同聚体的、特别是同三聚体的Neutrokine-α多肽，其中多聚体的单个蛋白组分是由成熟形式的Neutrokine-α(例如SEQ ID NO：2的第134到285位氨基酸残基)组成的。在其他具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合异聚体的、特别是异三聚体的Neutrokine-α多肽例如含有两个Neutrokine-α多肽和一个APRIL多肽的异三聚体或者含有一个Neutrokine-α多肽和两个APRIL多肽的异三聚体，其中Neutrokine-α异聚体的蛋白组分是由Neutrokine-α的成熟的细胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO：2的第134到285位氨基酸)或APRIL的成熟的细胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO：4的第105到250位氨基酸)组成的。
在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合Neutrokine-α单体蛋白的构象表位。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合Neutrokine-α多聚体的、特别是三聚体的蛋白的构象表位。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合由Neutrokine-α和异源多肽的并置所产生的构象表位，当Neutrokine-α形成异三聚体(例如和APRIL多肽)或者在Neutrokine-α和异源多肽之间的融合蛋白内可以出现所述构象表位。
可以用于本发明方法中的抗体包括但不限于多克隆的、单克隆的、多特异性的、人的、人源化的或嵌合的抗体、单链抗体、Fab片段、F(ab)’片段、Fab表达文库生成的片段、抗独特型(抗Id)抗体(包括抗Neutrokine-α抗体的抗id抗体)、和上面所有抗体的表位结合片段。在优选的实施方式中，免疫球蛋白是IgG1或IgG4同种型。免疫球蛋白可以具有重链和轻链。IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY的排列可以与κ或λ形式的轻链相匹配。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体是结合Neutrokine-α的抗体片段，包括但不限于Fab、Fab’、和F(ab’)2、Fd、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)和包括VL或VH区的片段。包括单链抗体的结合Neutrokine-α的抗体片段可以包括单独的可变区或者与下面的全部或一部分组合的可变区：铰链区、CH1、CH2和CH3区。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合片段包括可变区和铰链区、CH1、CH2和CH3区的任一组合。可以用于本发明方法中的抗体可以来自任何动物来源的抗体，包括鸟类和哺乳动物类。优选地，抗体是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驴、ship rabbit、山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡来源的。“人”抗体在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体以及包括从人免疫球蛋白文库或从转基因了一个或多个人免疫球蛋白且不表达内源性免疫球蛋白的转基因动物中分离到的抗体，如在Kucherlapati等的美国专利5,939,598所述的那样，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可以用于本发明方法中的抗体可以是单特异的、双特异的、三特异的或更高的多特异性的。多特异性抗体可以特异于Neutrokine-α多肽的不同表位或者可以特异于Neutrokine-α多肽以及异源表位例如异源多肽或固体支持材料。见例如PCT出版物WO 93/17715、WO 92/08802、WO91/00360、WO 92/05793、Tutt，et al.，J.Immunol.147：60-69(1991)；美国专利4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920、5,601,819、Kostelnyet al.，J.Immunol.148：1547-1553(1992)。
可以抗体与Neutrokine-α多肽的结合亲和力来描述或说明可用于本发明方法中的抗体。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合Neutrokine-α多肽或其片段或变体，其解离常数或KD小于或等于5x10-9M、10-9M、5 x 10-10M、10-10M、5 x 10-11M、10-11M、5 x 10-12M、或10- 12M。在具体的实施方式中，可用于本发明方法中的抗体结合Neutrokine-α多肽的解离常数或KD是在每个单个给出值之间的任一范围内。
部分或完全地阻断与Neutrokine-α多肽的受体/配体相互作用的Neutrokine-α抗体可以用于本发明方法。也包括不会阻止配体结合但会阻止受体活化的Neutrokine-α特异性抗体。用在此所述的或本领域已知的技术可以确定受体活化(即信号传导)。例如，通过用本领域已知的技术检测转录因子NF-AT、AP-1、MAPK8/JNK和/或NF-κB(包括非经典的NF-κB信号传导途径)的活化和/或通过免疫沉淀以及随后的western印迹分析检测受体或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或丝氨酸/苏氨酸)可以确定受体活化。
利用本领域已知的方法可以制备出上述的Neutrokine-α抗体。见例如PCT出版物WO 96/40281；美国专利5,811,097；Deng et al.，Blood92(6)：1981-1988(1998)；Chen et al.，Cancer Res.58(16)：3668-3678(1998)；Harrop et al.，J.Immunol.161(4)：1786-1794(1998)；Zhu et al.，Cancer Res.58(15)：3209-3214(1998)；Yoon et al.，J.Immunol.160(7)：3170-3179(1998)；Prat et al.，J.Cell.Sci.111(Pt2)：237-247(1998)；Pitard et al.，J.Immunol.Methods 205(2)：177-190(1997)；Liautard et al.，Cytokine 9(4)：233-241(1997)；Carlson et al.，J.Biol.Chem.272(17)：11295-11301(1997)；Tarymanet al.，Neuron 14(4)：755-762(1995)；Muller et al.，Structure 6(9)：1153-1167(1998)；Bartunek et al.，Cytokine 8(1)：14-20(1996)(在此通过引用将其全部内容并入本申请)。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α抗体(包括包含或由抗体片段或其变体组成的分子)特异地结合Neutrokine-α或Neutrokine-α的片段或变体。具体地，抗体例如具有在表1中所指出的SEQ ID NO：13-18中的任一氨基酸序列的单链Fv(scFv)都可以用于本发明方法。
表1：免疫特异性结合Neutrokine-α的scFv。
Figure A200680047110D00771
在本发明的一个实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合Neutrokine-α并包括具有表1所指出的任一VH区和/或表1所指出的任一VL区的氨基酸序列的多肽。在优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括来自表1所指出的同一scFv的VH区和VL区的氨基酸序列。在另一个的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括来自表1所指出的不同的scFv的VH区和VL区的氨基酸序列。在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体特异性结合Neutrokine-α并包括具有表1所指出的任一个、两个、三个或更多个VH CDR和/或表1所指出的任一个、两个、三个或更多个VL CDR的氨基酸序列的多肽。在优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括来自表1所指出的同一scFv的VH CDR和VL CDR的氨基酸序列。在另一个的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括来自表1所指出的不同的scFv的VH CDR和VLCDR的氨基酸序列。包括或由免疫特异性结合Neutrokine-α的表1指出的scFv的抗体片段或变体组成的分子也可以用于本发明方法。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：13的VH和VL区。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：13的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3区。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：14的VH和VL区。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：13的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3区。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：13的VH和VL区。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：14的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3区。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：15的VH和VL区。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：15的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3区。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：16的VH和VL区。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：16的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3区。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：17的VH和VL区。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：17的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3区。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：18的VH和VL区。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括如表1所述的SEQ ID NO：18的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3区。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体包括15C10的VH和VL区，15C10是例如美国专利申请20050186637中所述的一种中和性抗Neutrokine-α抗体。15C10的VH区的氨基酸序列为SEQ ID NO：19。15C10的VL区的氨基酸序列为SEQ ID NO：20。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体是15C10变体的抗原结合片段。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体是人源化的15C10。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括15C10的VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3区。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体包括4A5-3.1.1-B4的VH和VL区，4A5-3.1.1-B4是国际专利出版物WO03/0164468中所述的抗Neutrokine-α抗体，在此通过引用将其全部内容并入本申请。在WO03/0164468中，Neutrokine-α被称作hTNFSF13b。4A5-3.1.1-B4的VH区的氨基酸序列为SEQ ID NO：21。4A5-3.1.1-B4的VL区的氨基酸序列为SEQ ID NO：22。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗Neutrokine-α抗体是4A5-3.1.1-B4变体的抗原结合片段。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体包括4A5-3.1.1-B4的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3区。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明的Neutrokine-α抗体特异地结合细胞所表达的天然的Neutrokine-α多肽。
C.Neutrokine-α结合多肽
在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是Neutrokine-α结合肽或多肽。例如在国际专利出版物WO05/005462、WO05/000351、WO02/092620、WO02/16412、WO02/02641和WO02/16411以及美国专利出版物US2006135430、US2006084608、US2003194743、US20030195156和US2003091565中已经描述了Neutrokine-α结合肽或多肽，在此通过引用将其全部内容并入本申请。例如在Sun et al.，(2006)Biochem.Biophys.Res.Commun.346：1158-1162中已经描述了Neutrokine-α结合肽或多肽，在此通过引用将其全部内容并入本申请。可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽包括从经与丝状噬菌体包被蛋白的融合所展示出的随机肽序列中鉴定出的短的多肽。对于噬菌体展示肽文库技术的讨论见例如Scott et al.(1990)Science 249：386；Devlin et al.(1990)，Science 249：404；1993年6月29日提交的美国专利5,223,409；1998年3月31日提交的美国专利5,733,731；1996年3月12日提交的美国专利5,498,530；1995年7月11日提交的美国专利5,432,018；1994年8月16日提交的美国专利5,338,665；1999年7月13日提交的美国专利5,922,545；1996年12月19日出版的WO 96/40987；和1998年4月16日出版的WO 98/15833，在此通过引用将其并入本申请。通过连续多轮的针对固定化的Neutrokine-α靶向肽的亲和纯化以及随后的再繁殖可以分离出表达肽的噬菌体。给具有与Neutrokine-α的最高结合力的候选噬菌体测序，以便确定每个结合肽的身份。然后将所有鉴定出的Neutrokine-α结合肽都连接到“载体”上，以生成用于本发明方法中的进一步的Neutrokine-α结合肽。术语“载体”指的是能够阻止Neutrokine-α结合肽的降解和/或延长半衰期、降低毒性、减少免疫原性、或增加生物学活性的分子。示例载体包括Fc区及其变体(“肽抗体”是优选的)；线性聚合物(例如聚乙二醇(PEG)，包括5kD、20kD、和30kDPEG、聚赖氨酸、葡聚糖等)；支链聚合物(见例如1981年9月15日提交的Denkenwalter等的美国专利4,289,872；1993年7月20日提交的Tam的5,229,490；1993年10月28日出版的Frechet等的WO 93/21259)；脂质；胆固醇基团(例如类固醇)；碳水化合物或寡糖(例如葡聚糖)；任何与补救受体结合的天然的或合成的蛋白、多肽或肽；白蛋白，包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见1999年3月2日提交的美国专利5,876,969；欧洲专利0 413 622；和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)；亮氨酸拉链区；和其他这样的蛋白和蛋白片段。可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽要求存在至少一个经其中一个氨基酸残基的N末端、C末端或侧链与肽相连的载体。也可以使用多个载体，例如每个末端为Fc或一个末端为Fc，另一个末端或侧链为PEG基团。对于Neutrokine-α结合肽而言，Fc区是优选的载体。Fc区可以与肽的N或C末端融合或者融合于肽的两个N和C末端。与N末端的融合是优选的。
如上所述，Fc变体是可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽的合适载体。天然的Fc可以被广泛地修饰，以便形成Fc变体，条件是保持了与补救受体的结合能力；见例如WO 97/34631和WO 96/32478。在这些Fc变体中，可以去除天然Fc中提供了可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽所不需要的结构性能或功能活性的一个或多个位点。例如通过取代或缺失残基、向位点中插入残基、或截断含所述位点的部分都可以去除这些位点。所插入的或取代的残基也可以是改变了的氨基酸例如肽模拟物或D-氨基酸。基于多种原因都需要Fc变体，下面描述了一些原因。示例Fc变体包括分子和序列，其中：
1.去除了涉及二硫键形成的位点。这种去除可以避免与用于生成本发明分子的宿主细胞上所具有的其他含半胱氨酸蛋白的反应。为此，可以截断N末端的含半胱氨酸片段或者可以缺失半胱氨酸残基或者用其他氨基酸(例如丙氨酸、丝氨酸)取代半胱氨酸。甚至当去除了半胱氨酸残基时，单链Fc区仍能形成非共价结合在一起的二聚体的Fc区。
2.修饰天然Fc，使得其与所选的宿主细胞更为兼容。例如，可以去除邻近经典的天然Fc的N末端的PA序列，所述序列可以被大肠杆菌中的消化酶例如脯氨酸亚胺基肽酶所识别。也可以添加N末端的甲硫氨酸残基，特别是当在细菌细胞例如大肠杆菌中重组表达所述分子时。
3.去除天然Fc的N末端的一部分，以避免当在所选的宿主细胞内表达时的N末端的异质性。为此，可以缺失N末端的头20个氨基酸中的任何残基。
4.去除一个或多个糖基化位点。通常被糖基化的残基(例如天冬酰胺)可以赋予细胞裂解效应。可以缺失或用非糖基化的残基(例如丙氨酸)取代这些残基。
5.去除涉及与补体相互作用的位点例如Clq结合位点。例如，可以缺失或取代人IgG1的EKK序列。补体募集对于可以用于本发明方法中的分子可能是不利的，因此用这种Fc变体可以避免这一点。
6.去除影响与Fc受体而不是补救受体的结合的位点。天然Fc可以具有与某些白细胞相互作用的位点，这些对于可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽融合分子是不需要的，因此可以将其去除。
7.去除ADCC位点。ADCC位点在本领域是已知的，见例如Molec.Immunol.29(5)：633-9(1992)阐述了IgG1的ADCC位点。这些对于可以用于本发明方法中的融合分子是不需要的，因此可以将其去除。
8.当天然Fc衍生于非人抗体时，天然Fc可以被人源化。通常为了人源化天然Fc，可以用正常见于人天然Fc中的残基取代所选的非人的天然Fc中的残基。用于抗体人源化的技术是本领域公知的。
可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽的另一种载体是能够结合补救抗体的蛋白、多肽、肽、抗体、抗体片段、或小分子(例如肽模拟化合物)。例如，可以使用在美国专利5,739,277中所述的肽作为载体。也可以用噬菌体展示或用于结合补救受体的RNA-肽筛选来选出肽。这些补救受体结合化合物也包含在“载体”的含义内，并且可以用于可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽中。应当根据延长半衰期(例如通过避免蛋白酶所识别的序列)和降低免疫原性(例如通过优先非免疫原性序列，如在抗体人源化中所见的那样)来选择这些载体。
如上所述，聚合物载体也可以用于可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽。目前可得到各种用于连接可作为载体的化学部分的方法，见例如专利合作条约(＂PCT＂)国际出版物WO 96/11953，在此通过引用将其全部内容并入本申请。该PCT申请阐述了水溶性聚合物与蛋白N末端的选择性相连。
在一个优选的实施方式中，优选的聚合物载体是聚乙二醇(PEG)。PEG基团可以是任何便利的分子量，可以是线性的或支链的。PEG的平均分子量范围优选的是从约2千道尔顿(“kD”)到约100kD，更优选的从约5kD到约10kD，最优选的是从约5kD到约10kD。对于可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽，PEG基团一般都通过PEG基序上的反应基团的酰化作用或还原烷基化作用连接到发明化合物的反应基团(例如醛基、氨基、或酯基)上。
用于合成肽的PEG化的有用的策略包括通过在溶液中形成缀合物连接来组合肽和PEG基序，每个组分都具有彼此相互反应的特殊功能性。用传统的固相合成法可以容易地制备出肽。用合适的功能基团在特殊的位点上“预活化”肽。在与PEG基序反应之前，纯化并完全表征出前体。通常在液相中发生肽与PEG的连接，用反向分析HPLC可以容易地监视这个过程。用制备级的HPLC可以容易地纯化出PEG化的肽，用分析级HPLC、氨基酸分析和激光吸减质谱法表征出所述PEG化的肽。
多糖聚合物是另一类型的可以用于可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽中的水溶性聚合物。葡聚糖是由主要经α1-6连键连接在一起的单个葡萄糖亚基组成的多糖聚合物。葡聚糖本身可以由多种分子量范围，容易得到的分子量范围是从约1kD到约70kD。葡聚糖是合适的水溶性聚合物，其本身或者联合另一种载体(例如Fc)可以作为可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽的载体。见例如WO 96/11953和WO96/05309。已经报道了葡聚糖与治疗性或诊断性免疫球蛋白缀合的用途；见例如European Patent出版物0 315 456，在此通过引用将其全部内容并入本申请。当葡聚糖作为本发明的载体时，约1kD到约20kD的葡聚糖是优选的。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽任选地包括“连接物”。当存在连接物时，其化学结构并不重要，因为它主要作为一个间隔物。连接物优选地是由经肽键连接在一起的氨基酸组成的。因此，在优选的实施方式中，连接物是由经肽键连接在一起的1到30个氨基酸组成的，其中所述氨基酸选自20个天然存在的氨基酸。这些氨基酸中的一些氨基酸可以被糖基化，本领域人员非常了解这一点。在更优选的实施方式中，1到20个氨基酸是选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸。甚至更优选地，连接物是由大部分空间上未受阻碍的氨基酸例如甘氨酸和丙氨酸组成的。因此，优选的连接物是聚甘氨酸(特别是(Gly)4、(Gly)5)、聚(Gly-Ala)、和聚丙氨酸。优选的连接物是包括超过5个氨基酸的氨基酸连接物，合适的连接物可以具有最多500个选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸中的氨基酸。约20到50个氨基酸的连接物是最优选的。
非肽的连接物也可以用于可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽。例如，可以使用烷基连接物例如--NH--(CH2)n--C(O)--，其中n为2到20。可以用任何非空间阻碍基团例如更低的烷基(例如C1--C6)、更低的烃基、卤素(例如Cl、Br)、CN、NH2、苯基等取代这些烷基连接物。
在优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽包括氨基酸序列SEQ ID NO：23、氨基酸序列SEQ ID NO：24或氨基酸序列SEQ ID NO：25。在特别优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽是氨基酸序列SEQ ID NO：23(AMG 623；AGP3肽抗体)。
Neutrokine-α受体
在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是Neutrokine-α受体蛋白或其片段或变体。Neutrokine-α受体包括例如跨膜活化剂和CAML相互作用剂(TACI，GenBank编号AAC51790，SEQ ID NO：6)、B细胞活化因子受体(BAFF-R，GenBank编号NP_443177，SEQ ID NO：10)、B细胞成熟抗原(BCMA，GenBank编号NP_001183，SEQ ID NO：8)。例如在PCT出版物WO03/014294、WO02/066516、WO02/024909、WO03/014294、WO03/024991、WO02/094852和WO04/011611以及美国专利出版物US20030148445、US20030099990、US2005070689、US2005043516和US2003012783已经描述了Neutrokine-α受体蛋白、其片段和变体、以及抗体。下面将对此有更为详细的描述。在此通过引用将其全部内容并入本申请。
D.Neutrokine-α受体，TACI
TACI多肽，例如下面所述的那些多肽，可作为Neutrokine-α和/或APRIL拮抗剂，也可以用于本发明方法。TACI也称作TR17，是一种293个氨基酸残基的蛋白(SEQ ID NO：6)，其推测分子量约为31.8kDa。编码TACI的cDNA核苷酸序列是SEQ ID NO：5。推定的从约1到约165位氨基酸组成了细胞外区(SEQ ID NO：6)、从约166到约186位氨基酸组成了跨膜区(SEQ ID NO：6)；以及从约187到约293位氨基酸组成了细胞内区(SEQID NO：6)。
因此，在一个实施方式中，可以用于本发明方法中的TACI蛋白是包括或是由氨基酸序列SEQ ID NO：6组成的分离的多肽，或者是包括或是由一部分SEQ ID NO：6组成的多肽例如TACI细胞外区(包括SEQ ID NO：6的第1到165位氨基酸)和/或TACI富半胱氨酸区(包括SEQ ID NO：6的第33到104位氨基酸)；以及与上面所述的多肽至少80％相同的、更优选的至少90％或95％相同的、仍更优选的至少96％、97％、98％、99％或100％相同的多肽。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的TACI蛋白是包括SEQ ID NO：6的第1到154位氨基酸的分离的多肽以及与上面所述的多肽至少80％相同的、更优选的至少90％或95％相同的、仍更优选的至少96％、97％、98％、99％或100％相同的多肽。
具有与TACI多肽的参照氨基酸序列至少例如95％“相同的”氨基酸序列的多肽表示多肽的氨基酸序列与参照序列相同，除了所述多肽序列可以包括每100个TACI受体的参照氨基酸序列的氨基酸中最多5个氨基酸改变。换句话说，为了得到具有与参照氨基酸序列至少95％相同的多肽，可以缺失或用另一种氨基酸取代参照序列中最多5％的氨基酸残基，或者最多达参照序列的总氨基酸残基数目5％的氨基酸残基可以被插入到参照序列内。参照序列的这些改变可以发生于参照氨基酸序列的氨基末端或羧基末端位置，或者发生在这些末端位置之间的任一位置，可以散在发生于参照序列中的单个残基上或者发生于参照序列内的一个或多个连续残基上。
TACI的多肽片段包括包含或由SEQ ID NO：6所含的氨基酸序列组成的多肽。多肽片段可以是“独立式的”或者包含在更大的多肽内，所述片段形成了更大多肽的一部分或区域，最优选的是作为单一的连续区域。在另外的实施方式中，多肽片段包括一个或多个TACI区或者是由其组成。优选的多肽片段包括选自组中的成员：(a)包括或由TACI细胞外区(推定其构成SEQ ID NO：6的第1到约165位氨基酸残基)组成的多肽；(b)包括或由TACI富半胱氨酸区(推定其构成SEQ ID NO：6的第33到第104位氨基酸残基)组成的多肽；(c)包括或由TACI跨膜区(推定其构成SEQ ID NO：6的第166到第186位氨基酸残基)组成的多肽；(d)包括或由TACI细胞内区(推定其构成SEQ ID NO：6的第187到第293位氨基酸残基)组成的多肽；或(e)(a)-(d)中的多肽的任一组合。
相信TACI的细胞外的富半胱氨酸基序对于TACI及其配体(Neutrokine-α和APRIL)之间的相互作用是重要的。因此，在优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的TACI多肽片段包括SEQ ID NO：6的第33到66位和/或第70到104位氨基酸残基或者是由它们组成。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的TACI多肽片段包括一个或两个细胞外的富半胱氨酸基序(SEQ ID NO：6的第33到66位和第70到104位氨基酸残基)或者是由其组成。包括与一个或两个这些富半胱氨酸基序的多肽序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列或者是由所述多肽序列组成的蛋白也是优选的。
可以用于本发明方法中的TACI蛋白的其他片段是经TACI的结构或功能属性所表征的片段。这些片段包括包含完整(全长)TACI(SEQ IDNO：6)的α螺旋或α螺旋形成区(“α区”)、β折叠和β折叠形成区(“β区”)、转角结构和转角结构形成区(“转角结构区”)、卷曲和卷曲形成区(“卷曲区”)、亲水区、疏水区、α两亲区、β两亲区、表面形成区和高抗原性指数区(即含有四个或更多个具有抗原指数大于或等于1.5的连续氨基酸，利用Jameson-Wolf程序的默认参数所鉴定到的)的氨基酸残基，如在美国专利6,969,519中所讨论的那样。如利用这些计算机程序的默认参数所推定的，某些优选的区域包括但不限于Garnier-Robson推定的α区、β区、转角结构区、和卷曲区；Chou-Fasman推定的α区、β区和转角结构区；Kyte-Doolittle推定的亲水区；Hopp-Woods推定的疏水区；Eisenbergα和β两亲区；Emini表面形成区；以及Jameson-Wolf高抗原性指数区。
可以表达修饰形式的可以用于本发明方法中的TACI多肽例如融合蛋白(包括经肽键与异源蛋白序列(不同蛋白的序列)连接的多肽)，不仅可以包括分泌信号，还可以包括额外的异源功能区。或者可以通过合成技术例如通过使用肽合成仪制备出这种融合蛋白。因此，可以向多肽的N末端加入额外的氨基酸区，特别是带电荷的氨基酸，以提高在宿主细胞中、纯化期间或随后的处理和储存期间的的稳定性和持久性。也可以将肽基序加入到多肽中，以便促进纯化。可以在最终制备出多肽之前去除这些区域。向多肽中添加肽基序以便引起分泌或排出、提高稳定性和促进纯化等都是本领域熟知的和常规的技术。
优选的可以用于本发明方法中的TACI融合蛋白包括来自免疫球蛋白的异源区，其被用于增溶蛋白。例如EP-A-O 464 533(对应于加拿大2045869)和WO00/024782、PCT出版物WO01/60397、WO01/81417、WO01/087977、和WO02/94852；美国出版物US2003103986和US2006034852以及Gross，et al.，(2000)Nature 404：995-999和Yu，et al.，(2000)Nat Immunol 1：252-256都阐述了包括免疫球蛋白分子的恒定区的各个部分以及另一种人蛋白或其部分的融合蛋白，在此通过引用将其内容并入本申请。在很多情况中，融合蛋白中的Fc部分非常适用于治疗和诊断，并因此造成了改善的药物动力学性能(EP-A 0232 262)。另一方面，对于某些应用而言，需要在以在此所述的有利的方式表达、检测并纯化出融合蛋白之后能够缺失Fc部分。当Fc部分被证实其对用于治疗和诊断是妨碍时就是这种情况，例如当融合蛋白被用作免疫接种的抗原时。在药物研发中，例如人类蛋白如hIL-5已经与Fc部分融合，以便用高通量筛选检测法鉴定出hIL-5的拮抗剂。见D.Bennett et al.，J.Molecular Recognition8：52-58(1995)和K.Johanson et al.，J.Biol.Chem.270：9459-9471(1995)。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的TACI-Fc融合蛋白是Atacicept(TACI-Ig)。
本领域人员知道并如上面讨论的那样，TACI多肽可以与其他多肽序列融合。例如，可以用于本发明方法中的TACI多肽可以与免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定区或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一组合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)融合，形成嵌合多肽。
这些融合蛋白可以促进纯化、可以延长储存时间以及可以增加体内半衰期。由人CD4多肽的头两个结构域和哺乳动物免疫球蛋白的重链或轻链恒定区的不同区域组成的嵌合蛋白已经显示出这一点。见例如EP394,827、Traunecker et al.，Nature，331：84-86(1988)。对于与FcRn结合伴侣例如IgG或Fc片段缀合的抗原(例如胰岛素)已经证实可以增强抗原跨越上皮屏障转运到免疫系统的能力(见例如PCT出版物WO 96/22024和WO99/04813)。也已经发现由于IgG部分的二硫键所造成的具有二硫键连接的二聚体结构的IgG融合蛋白能比单聚体多肽或其片段单独本身更有效地结合并中和其他分子。见例如Fountoulakis et al.，J.Biochem.，270：3958-3964(1995)。
可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一个TACI多肽的片段或变体以及至少一个人血清白蛋白的片段或变体，其彼此连接在一起，优选地通过遗传融合(即通过翻译核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，编码TACI的全部或一部分的多核苷酸与编码白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架连接)，或者化学缀合彼此连接在一起。一旦作为白蛋白融合蛋白的一部分，TACI多肽和白蛋白蛋白可以被称作白蛋白融合蛋白的“部分”、“区域”或“基序”(例如“TACI部分”或“白蛋白部分”)。
在一个实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽的片段和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽的变体和血清白蛋白或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的血清白蛋白蛋白组分是血清白蛋白的成熟部分。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或者是由它们组成。在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的TACI部分是全长TACI多肽。在一个进一步优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的TACI蛋白部分是TACI多肽的成熟的、可溶性的区域。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽的片段或变体和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，本发明提供包括或由TACI多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分组成的白蛋白融合蛋白。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽的片段或变体和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，本发明提供包括或由TACI多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)组成的白蛋白融合蛋白。在一个优选的实施方式中，TACI多肽(包括其片段或变体)与成熟形式的人血清白蛋白(即如欧洲专利0 322 094的图1和2所示的人血清白蛋白的第1到585位氨基酸)融合，在此通过引用将其全部内容并入本申请。在另一个优选的实施方式中，本发明的抗体(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到x位残基组成的多肽片段融合，其中x是从1到585的整数，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一个优选的实施方式中，TACI多肽(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到z位氨基酸组成的多肽片段融合，其中z是从369到419的整数，如美国专利5,766,883所述，在此通过引用将其全部内容并入本申请。TACI多肽(包括其片段或变体)可以与异源蛋白(例如免疫球蛋白Fc多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。
在优选的实施方式中，在可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一组或两组下面的参照SEQ ID NO：11的点突变组：Leu-407突变为Ala、Leu-408突变为Val、Val-409突变为Ala、和Arg-410突变为Ala；或Arg-410突变为A、Lys-413突变为Gln、和Lys-414突变为Gln(见例如国际申请WO95/23857，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。在甚至更为优选的实施方式中，含有一组或两组上面所述的点突变组的可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白已经提高了对酵母Yap3p蛋白裂解性降解的稳定性/耐受性，容许增加在酵母宿主细胞中表达的重组白蛋白融合蛋白的产量。
优选地，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括作为N末端部分的HA和作为C末端部分的TACI多肽。或者，也可以使用包括作为其C末端部分的HA和作为其N末端部分的TACI多肽的白蛋白融合蛋白。
在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白具有与白蛋白的N末端和C末端融合的TACI多肽。在一个具体的实施方式中，在N末端和C末端融合的TACI多肽是相同的。在另一个实施方式中，在N末端和C末端融合的TACI多肽是不同的TACI多肽。在另一个实施方式中，TACI多肽被融合于白蛋白的N或C末端，异源多肽被融合于剩余末端。
另外，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之间的连接物肽，以提供所述部分之间的更大的物理分隔。连接物肽可以由氨基酸组成，使得其是柔性的或更具刚性。
一般而言，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一个HA衍生区和一个TACI区。但是，每个蛋白中的多个区域都可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。同样，一种以上的蛋白可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在这种构型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。双官能的白蛋白融合蛋白的结构可以表示为X-HA-Y或Y-HA-X。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的TACI蛋白或其片段或变体可以与细胞毒素(例如细胞生长抑制剂或杀细胞剂)缀合。细胞毒素或细胞毒药物可以包括任何对细胞有害的药物。实例包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、吐根素、丝裂霉素、足叶乙甙、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、dihydroxyanthracin dione、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛尔、和嘌呤霉素以及其类似物或同系物。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的TACI蛋白或其片段或变体可以与毒素缀合。
“毒素”表示一种或多种可以结合并激活内源性细胞毒效应物系统的化合物、放射性同位素、全毒素、修饰毒素、毒素的催化亚基、或在给定的引起细胞死亡的条件下不会正常地表达于细胞表面内或表面上的任何分子或酶。可以使用的毒素包括但不限于本领域已知的放射性同位素、化合物例如结合内在的或诱导的内源性细胞毒效应物系统的抗体(或其含补体固定化的部分)、胸苷激酶、核酸内切酶、RNA酶、α毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假单胞菌外毒素A、白喉毒素、皂草素、木鳖子甙、白树毒素、美洲商路抗病毒蛋白、α-帚曲霉素、和霍乱毒素。“毒素”也包括细胞生长抑制剂或杀细胞剂、治疗药物或放射性金属离子例如α粒子发射离子，例如213Bi、或其他放射性同位素如103Pd、133Xe、131I、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、35S、90Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、90钇、117锡、186铼、166钬、和188铼。
可以采用遗传工程化来改进或改变可以用于本发明方法中的TACI多肽的特征，以生成可以用于本发明方法中的多肽。可以用本领域人员已知的重组DNA技术生成新的突变蛋白或“突变型蛋白”包括单个或多个氨基酸取代、缺失、添加或融合蛋白。这些修饰多肽可以表现出例如增强活性、或增加稳定性。另外，至少在特定的纯化和储存条件下，它们可以比相应的天然多肽按更高的产量被纯化，并表现出更好的稳定性。
可以被用于本发明方法中的TACI多肽可以是单体或多聚体(即二聚体、三聚体、四聚体、和更高聚体)。在具体的实施方式中，本发明的多肽是单体、二聚体、三聚体或四聚体。在另外的实施方式中，本发明的多聚体至少是二聚体、三聚体或四聚体。相信某些TNF家族蛋白成员是以三聚体的形式存在的(Beutler and Huffel，Science 264：667，1994；Banner et al.，Cell73：431，1993)。因此，三聚体的TACI可以提供增强生物学活性的优势。
在具体的实施方式中，多聚体可以是同聚体或异聚体。术语“同聚体”在此指的是只含有TACI多肽(包括TACI片段、变体、和在此所述的融合蛋白)的多聚体。这些同聚体可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的TACI多肽。在具体的实施方式中，同聚体是只含有具有相同的多肽序列的TACI蛋白的多聚体。在另一个具体的实施方式中，同聚体是含有具有不同多肽序列的TACI蛋白的多聚体。
术语“异聚体”在此指的是除了TACI多肽外还含有异源性多肽(即只含有非对应于TACI基因所编码的多肽序列的多肽序列的蛋白)的多聚体。可以用于本发明方法中的多聚体可以是疏水连接、亲水连接、离子连接和/或共价连接相连的结果，和/或可以是间接相连的，例如通过脂质体形成。因此，在一个实施方式中，当蛋白在溶液中彼此接触时，就形成了同多聚体例如同二聚体、同三聚体、异四聚体或异四聚体。在其他实施方式中，通过与TACI蛋白的共价连接或者TACI蛋白之间的共价连接形成多聚体。这些共价连接可能涉及到蛋白的多肽序列(所含的一个或多个氨基酸残基。在一种情况中，共价连接是位于蛋白的多肽序列内的半胱氨酸残基之间的交联，所述半胱氨酸残基在天然(即天然存在)多肽中也相互作用。在另一种情况中，共价连接是化学或重组处理后的结果。
或者，这种共价连接可以涉及一个或多个在TACI融合蛋白的异源性多肽序列中所含的氨基酸残基。在一个实例中，共价连接是融合蛋白所含的异源性序列之间的共价连接(见美国专利申请5,478,925，在此通过引用将其内容并入本申请)。在一个具体的实例中，共价连接是TACI-Fc融合蛋白(如在此所述)所含的异源性序列之间的共价连接。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的融合蛋白的共价连接是来自另一个能够形成共价连接的多聚体的TNF家族配体/受体成员例如护骨蛋白(见例如国际出版物WO 98/49305，在此通过引用将其全部内容并入本申请)的异源性多肽序列之间的共价连接。在另一个实施方式中，两个或多个TACI多肽经合成的连接物(例如肽、碳水化合物或可溶性的多聚体连接物)连接在一起。实例包括在美国专利5,073,627中所述的那些肽连接物(在此通过引用将其并入本申请)。利用传统的重组DNA技术可以生成包括多个经肽连接物分离的TACI多肽的蛋白。
在一个具体的实施方式中，结合TACI多肽、多肽片段、或SEQ IDNO：6的变体、和/或TACI多肽表位(通过用于检测特异的抗体-抗原结合的本领域熟知的免疫检测法确定的表位)的抗体可以用于本发明方法中。例如在PCT出版物WO04/011611、WO01/087977、WO01/60397、和WO02/66516；美国专利出版物US2005043516和US2003012783；和Ch’en，et al.，(2005)Cell Immunol 236：78-85和Liu，et al.，(2003)Xi Bao Yu Fen ZiMian Yi Xue Za Zhi 19：168-169中已经能够描述了抗TACI抗体及其片段。在此通过引用将其全部内容并入本申请。抗体包括但不限于单克隆的、多特异性的、人的、人源化的或嵌合的抗体、单链抗体、Fab片段、F(ab′)片段、Fab表达文库生成的片段、抗独特型(抗Id)抗体(包括例如抗TACI抗体的抗Id抗体)、以及上述所有抗体的表位结合片段。术语“抗体”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何类型的(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何组(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚组的免疫球蛋白。在具体的实施方式中，免疫球蛋白分子是IgG1。在其他具体的实施方式中，免疫球蛋白分子是IgG4。
可以用于本发明方法中的结合TACI的抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、和F(ab’)2、Fd、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)和包括VL或VH区的片段。包括单链抗体的结合TACI的抗体片段可以包括单独的可变区或者与下面的全部或一部分组合的可变区：铰链区、CH1、CH2和CH3区。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的TACI结合片段包括可变区和铰链区、CH1、CH2和CH3区的任一组合。可以用于本发明方法中的抗体可以来自任何动物来源的抗体，包括鸟类和哺乳动物类。优选地，抗体是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驴、shiprabbit、山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡来源的。“人”抗体在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体以及包括从人免疫球蛋白文库或从转基因了一个或多个人免疫球蛋白且不表达内源性免疫球蛋白的转基因动物中分离到的抗体，如在Kucherlapati等的美国专利5,939,598所述的那样，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可以用于本发明方法中的抗TACI抗体可以是单特异的、双特异的、三特异的或更高的多特异性的。多特异性抗体可以特异于TACI多肽的不同表位或者可以特异于TACI多肽以及异源表位例如异源多肽或固体支持材料。见例如PCT出版物WO 93/17715、WO 92/08802、WO91/00360、WO 92/05793、Tutt，et al.，J.Immunol.147：60-69(1991)；美国专利4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920、5,601,819、Kostelny et al.，J.Immunol.148：1547-1553(1992)；在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可根据其交叉反应性来描述或说明可以用于本发明方法中的TACI抗体。不会结合TACI多肽的任何其他类似物、同源物、或同系物的抗体可以用于本发明的方法。在具体的实施方式中，TACI抗体与人TACI蛋白的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相应表位交叉反应。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗TACI抗体不仅结合TACI，也结合BCMA和BAFF-R。
也可根据其与TACI多肽的结合亲和力来描述或说明可以用于本发明方法中的抗体。优选的结合亲和力包括解离常数或KD小于或等于5 x 10- 9M、10-9M、5 x 10-10M、10-10M、5 x 10-11M、10-11M、5 x 10-12M、或10-12M。
可以用于本发明方法中的TACI抗体可以是TACI多肽的激动剂或拮抗剂。例如包括部分或完全地阻断与TACI多肽的受体/配体相互作用的TACI抗体。也包括不会阻止配体结合但会阻止受体活化的受体特异性抗体。用在此所述的或本领域已知的技术可以确定受体活化(即信号传导)。例如，通过用本领域已知的技术检测转录因子NF-AT、AP-1、和/或NF-κB的活化和/或通过免疫沉淀以及随后的western印迹分析检测受体或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或丝氨酸/苏氨酸)可以确定受体活化。
在一个具体的实施方式中，阻止配体结合和受体活化的受体特异性TACI抗体和识别受体-配体复合物以及优选地不会特异地识别未结合的受体或未结合的配体的TACI抗体都可以用于本发明方法。利用本领域已知的技术可以制备出上述TACI抗体。见例如PCT出版物WO96/40281；美国专利5,811,097；Deng et al.，Blood 92(6)：1981-1988(1998)；Chen et al.，Cancer Res.58(16)：3668-3678(1998)；Harrop et al.，J.Immunol.161(4)：1786-1794(1998)；Zhu et al.，Cancer Res.58(15)：3209-3214(1998)；Yoon et al.，J.Immunol.160(7)：3170-3179(1998)；Prat et al.，J.Cell.Sci.111(Pt2)：237-247(1998)；Pitard et al.，J.Immunol.Methods 205(2)：177-190(1997)；Liautard etal.，Cytokine 9(4)：233-241(1997)；Carlson et al.，J.Biol.Chem.272(17)：11295-11301(1997)；Taryman et al.，Neuron 14(4)：755-762(1995)；Muller et al.，Structure 6(9)：1153-1167(1998)；Bartunek et al.，Cytokine8(1)：14-20(1996)(在此通过引用将其全部内容并入本申请)。
E.Neutrokine-α受体，BCMA
BCMA多肽，例如下面所述的那些BCMA多肽，可以作为Neutrokine-α和/或APRIL的拮抗剂，并且也可以用于本发明方法。BCMA也称作TR18，是184个氨基酸残基的蛋白(SEQ ID NO：8)，推断分子量约为20.1kDa。编码BCMA的cDNA核苷酸序列为SEQ ID NO：7。推定的从约1到约45位氨基酸构成了细胞外区(SEQ ID NO：8)；从约55到约80位氨基酸构成了跨膜区(SEQ ID NO：8)；以及从约81到约184位氨基酸构成了细胞内区(SEQ ID NO：8)。
因此，在一个实施方式中，可以用于本发明方法中的BCMA蛋白是包括或是由氨基酸序列SEQ ID NO：8组成的分离的多肽，或者是包括或是由一部分SEQ ID NO：8组成的多肽例如BCMA细胞外区(包括SEQ ID NO：8的第1到54位氨基酸)和/或BCMA富半胱氨酸区(包括SEQ ID NO：8的第8到41位氨基酸)；以及与上面所述的多肽至少80％相同的、更优选的至少90％或95％相同的、仍更优选的至少96％、97％、98％、99％或100％相同的多肽。
具有与BCMA多肽的参照氨基酸序列至少例如95％“相同的”氨基酸序列的多肽表示多肽的氨基酸序列与参照序列相同，除了所述多肽序列可以包括每100个BCMA受体的参照氨基酸序列的氨基酸中最多5个氨基酸改变。换句话说，为了得到具有与参照氨基酸序列至少95％相同的多肽，可以缺失或用另一种氨基酸取代参照序列中最多5％的氨基酸残基，或者最多达参照序列的总氨基酸残基数目5％的氨基酸残基可以被插入到参照序列内。参照序列的这些改变可以发生于参照氨基酸序列的氨基末端或羧基末端位置，或者发生在这些末端位置之间的任一位置，可以散在发生于参照序列中的单个残基上或者发生于参照序列内的一个或多个连续残基上。
BCMA的多肽片段包括包含或由SEQ ID NO：8所含的氨基酸序列组成的多肽。多肽片段可以是“独立式的”或者包含在更大的多肽内，所述片段形成了更大多肽的一部分或区域，最优选的是作为单一的连续区域。在另外的实施方式中，多肽片段包括一个或多个BCMA区或者是由其组成。优选的多肽片段包括选自组中的成员：(a)包括或由BCMA细胞外区(推定其构成SEQ ID NO：8的第1到约54位氨基酸残基)组成的多肽；(b)包括或由BCMA富半胱氨酸区(推定其构成SEQ ID NO：8的第8到第41位氨基酸残基)组成的多肽；(c)包括或由BCMA跨膜区(推定其构成SEQ ID NO：8的第55到第80位氨基酸残基)组成的多肽；(d)包括或由BCMA细胞内区(推定其构成SEQ ID NO：8的第81到第184位氨基酸残基)组成的多肽；或(e)(a)-(d)中的多肽的任一组合。
相信BCMA的细胞外的富半胱氨酸基序对于BCMA及其配体(Neutrokine-α和APRIL)之间的相互作用是重要的。因此，在优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的BCMA多肽片段包括SEQ ID NO：8的第8到41位氨基酸残基或者是由其组成。包括与所述富半胱氨酸基序的多肽序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列或由所述多肽序列组成的蛋白也是优选的。
可以用于本发明方法中的BCMA蛋白的其他片段是经BCMA的结构或功能属性所表征的片段。这些片段包括包含完整(全长)BCMA(SEQ IDNO：8)的α螺旋或α螺旋形成区(“α区”)、β折叠和β折叠形成区(“β区”)、转角结构和转角结构形成区(“转角结构区”)、卷曲和卷曲形成区(“卷曲区”)、亲水区、疏水区、α两亲区、β两亲区、表面形成区和高抗原性指数区(即含有四个或更多个具有抗原指数大于或等于1.5的连续氨基酸，利用Jameson-Wolf程序的默认参数所鉴定到的)的氨基酸残基，如在美国专利6,969,519中所讨论的那样。如利用这些计算机程序的默认参数所推定的，某些优选的区域包括但不限于Garnier-Robson推定的α区、β区、转角结构区、和卷曲区；Chou-Fasman推定的α区、β区和转角结构区；Kyte-Doolittle推定的亲水区；Hopp-Woods推定的疏水区；Eisenbergα和β两亲区；Emini表面形成区；以及Jameson-Wolf高抗原性指数区。
可以表达修饰形式的可以用于本发明方法中的BCMA多肽例如融合蛋白(包括经肽键与异源蛋白序列(不同蛋白的序列)连接的多肽)，不仅可以包括分泌信号，还可以包括额外的异源功能区。或者可以通过合成技术例如通过使用肽合成仪制备出这种融合蛋白。因此，可以向多肽的N末端加入额外的氨基酸区，特别是带电荷的氨基酸，以提高在宿主细胞中、纯化期间或随后的处理和储存期间的的稳定性和持久性。也可以将肽基序加入到多肽中，以便促进纯化。可以在最终制备出多肽之前去除这些区域。向多肽中添加肽基序以便引起分泌或排出、提高稳定性和促进纯化等都是本领域熟知的和常规的技术。
优选的可以用于本发明方法中的BCMA融合蛋白包括来自免疫球蛋白的异源区，其被用于增溶蛋白。例如EP-A-O 464 533(对应于加拿大2045869)和WO00/024782阐述了包括免疫球蛋白分子的恒定区的各个部分以及另一种人蛋白或其部分的融合蛋白。例如PCT出版物WO01/087977、WO01/60397、和WO01/24811以及Gross，et al.，(2000)Nature 404：995-999；Thompson，et al.，(2000)J Exp Med 192：129-135；和Yu，et al.，(2000)Nat Immunol 1：252-256都已经描述了BCMA免疫球蛋白融合蛋白，在此通过引用将其内容并入本申请。在很多情况中，融合蛋白中的Fc部分非常适用于治疗和诊断，并因此造成了改善的药物动力学性能(EP-A 0232 262)。另一方面，对于某些应用而言，需要在以在此所述的有利的方式表达、检测并纯化出融合蛋白之后能够缺失Fc部分。当Fc部分被证实其对用于治疗和诊断是妨碍时就是这种情况，例如当融合蛋白被用作免疫接种的抗原时。在药物研发中，例如人类蛋白如hIL-5已经与Fc部分融合，以便用高通量筛选检测法鉴定出hIL-5的拮抗剂。见D.Bennett et al.，J.MolecularRecognition 8：52-58(1995)和K.Johanson et al.，J.Biol.Chem.270：9459-9471(1995)。
本领域人员知道并如上面讨论的那样，BCMA多肽可以与其他多肽序列融合。例如，可以用于本发明方法中的BCMA多肽可以与免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定区或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一组合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)融合，形成嵌合多肽。
这些融合蛋白可以促进纯化、可以延长储存时间以及可以增加体内半衰期。由人CD4多肽的头两个结构域和哺乳动物免疫球蛋白的重链或轻链恒定区的不同区域组成的嵌合蛋白已经显示出这一点。见例如EP394,827、Traunecker et al.，Nature，331：84-86(1988)。对于与FcRn结合伴侣例如IgG或Fc片段缀合的抗原(例如胰岛素)已经证实可以增强抗原跨越上皮屏障转运到免疫系统的能力(见例如PCT出版物WO 96/22024和WO99/04813)。也已经发现由于IgG部分的二硫键所造成的具有二硫键连接的二聚体结构的IgG融合蛋白能比单聚体多肽或其片段单独本身更有效地结合并中和其他分子。见例如Fountoulakis et al.，J.Biochem.，270：3958-3964(1995)。
可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一个BCMA多肽的片段或变体以及至少一个人血清白蛋白的片段或变体，其彼此连接在一起，优选地通过遗传融合(即通过翻译核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，编码BCMA的全部或一部分的多核苷酸与编码白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架连接)，或者化学缀合彼此连接在一起。一旦作为白蛋白融合蛋白的一部分，BCMA多肽和白蛋白蛋白可以被称作白蛋白融合蛋白的“部分”、“区域”或“基序”(例如“BCMA部分”或“白蛋白部分”)。
在一个实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽的片段和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽的变体和血清白蛋白或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的血清白蛋白蛋白组分是血清白蛋白的成熟部分。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或者是由它们组成。在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的BCMA部分是全长BCMA多肽。在一个进一步优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的BCMA蛋白部分是BCMA多肽的成熟的、可溶性的区域。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽的片段或变体和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，本发明提供包括或由BCMA多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分组成的白蛋白融合蛋白。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽的片段或变体和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，本发明提供包括或由BCMA多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)组成的白蛋白融合蛋白。在一个优选的实施方式中，BCMA多肽(包括其片段或变体)与成熟形式的人血清白蛋白(即如欧洲专利0 322 094的图1和2所示的人血清白蛋白的第1到585位氨基酸)融合，在此通过引用将其全部内容并入本申请。在另一个优选的实施方式中，本发明的抗体(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到x位残基组成的多肽片段融合，其中x是从1到585的整数，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一个优选的实施方式中，BCMA多肽(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到z位氨基酸组成的多肽片段融合，其中z是从369到419的整数，如美国专利5,766,883所述，在此通过引用将其全部内容并入本申请。BCMA多肽(包括其片段或变体)可以与异源蛋白(例如免疫球蛋白Fc多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。
在优选的实施方式中，在可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一组或两组下面的参照SEQ ID NO：11的点突变组：Leu-407突变为Ala、Leu-408突变为Val、Val-409突变为Ala、和Arg-410突变为Ala；或Arg-410突变为A、Lys-413突变为Gln、和Lys-414突变为Gln(见例如国际申请WO95/23857，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。在甚至更为优选的实施方式中，含有一组或两组上面所述的点突变组的可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白已经提高了对酵母Yap3p蛋白裂解性降解的稳定性/耐受性，容许增加在酵母宿主细胞中表达的重组白蛋白融合蛋白的产量。
优选地，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括作为N末端部分的HA和作为C末端部分的BCMA多肽。或者，也可以使用包括作为其C末端部分的HA和作为其N末端部分的BCMA多肽的白蛋白融合蛋白。
在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白具有与白蛋白的N末端和C末端融合的BCMA多肽。在一个具体的实施方式中，在N末端和C末端融合的BCMA多肽是相同的。在另一个实施方式中，在N末端和C末端融合的BCMA多肽是不同的BCMA多肽。在另一个实施方式中，BCMA多肽被融合于白蛋白的N或C末端，异源多肽被融合于剩余末端。
另外，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之间的连接物肽，以提供所述部分之间的更大的物理分隔。连接物肽可以由氨基酸组成，使得其是柔性的或更具刚性。
一般而言，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一个HA衍生区和一个BCMA区。但是，每个蛋白中的多个区域都可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。同样，一种以上的蛋白可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在这种构型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。双官能的白蛋白融合蛋白的结构可以表示为X-HA-Y或Y-HA-X。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的BCMA蛋白或其片段或变体可以与细胞毒素(例如细胞生长抑制剂或杀细胞剂)缀合。细胞毒素或细胞毒药物可以包括任何对细胞有害的药物。实例包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、吐根素、丝裂霉素、足叶乙甙、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、dihydroxyanthracin dione、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛尔、和嘌呤霉素以及其类似物或同系物。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的BCMA蛋白或其片段或变体可以与毒素缀合。
“毒素”表示一种或多种可以结合并激活内源性细胞毒效应物系统的化合物、放射性同位素、全毒素、修饰毒素、毒素的催化亚基、或在给定的引起细胞死亡的条件下不会正常地表达于细胞表面内或表面上的任何分子或酶。可以使用的毒素包括但不限于本领域已知的放射性同位素、化合物例如结合内在的或诱导的内源性细胞毒效应物系统的抗体(或其含补体固定化的部分)、胸苷激酶、核酸内切酶、RNA酶、α毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假单胞菌外毒素A、白喉毒素、皂草素、木鳖子甙、白树毒素、美洲商路抗病毒蛋白、α-帚曲霉素、和霍乱毒素。“毒素”也包括细胞生长抑制剂或杀细胞剂、治疗药物或放射性金属离子例如α粒子发射离子，例如213Bi、或其他放射性同位素如103Pd、133Xe、131I、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、35S、90Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、90钇、117锡、186铼、166钬、和188铼。
可以采用遗传工程化来改进或改变可以用于本发明方法中的BCMA多肽的特征，以生成可以用于本发明方法中的多肽。可以用本领域人员已知的重组DNA技术生成新的突变蛋白或“突变型蛋白”包括单个或多个氨基酸取代、缺失、添加或融合蛋白。这些修饰多肽可以表现出例如增强活性、或增加稳定性。另外，至少在特定的纯化和储存条件下，它们可以比相应的天然多肽按更高的产量被纯化，并表现出更好的稳定性。仍在本发明的另一个实施方式中，BCMA多肽突变体可以是“显性负调控物”。为此，可以用缺陷型BCMA多肽例如缺少整个或部分TNF保守区的突变体消除BCMA的活性。无功能的BCMA多肽能组装形成能够结合但不能诱导信号传导的受体(例如多聚体)。
可以被用于本发明方法中的BCMA多肽可以是单体或多聚体(即二聚体、三聚体、四聚体、和更高聚体)。在具体的实施方式中，本发明的多肽是单体、二聚体、三聚体或四聚体。在另外的实施方式中，本发明的多聚体至少是二聚体、三聚体或四聚体。相信某些TNF家族蛋白成员是以三聚体的形式存在的(Beutler and Huffel，Science 264：667，1994；Banner et al.，Cell73：431，1993)。因此，三聚体的BCMA可以提供增强生物学活性的优势。
在具体的实施方式中，多聚体可以是同聚体或异聚体。术语“同聚体”在此指的是只含有BCMA多肽(包括BCMA片段、变体、和在此所述的融合蛋白)的多聚体。这些同聚体可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的BCMA多肽。在具体的实施方式中，同聚体是只含有具有相同的多肽序列的BCMA蛋白的多聚体。在另一个具体的实施方式中，同聚体是含有具有不同多肽序列的BCMA蛋白的多聚体。
术语“异聚体”在此指的是除了BCMA多肽外还含有异源性多肽(即只含有非对应于BCMA基因所编码的多肽序列的多肽序列的蛋白)的多聚体。可以用于本发明方法中的多聚体可以是疏水连接、亲水连接、离子连接和/或共价连接相连的结果，和/或可以是间接相连的，例如通过脂质体形成。因此，在一个实施方式中，当蛋白在溶液中彼此接触时，就形成了同多聚体例如同二聚体、同三聚体、异四聚体或异四聚体。在其他实施方式中，通过与BCMA蛋白的共价连接或者BCMA蛋白之间的共价连接形成多聚体。这些共价连接可能涉及到蛋白的多肽序列(所含的一个或多个氨基酸残基。在一种情况中，共价连接是位于蛋白的多肽序列内的半胱氨酸残基之间的交联，所述半胱氨酸残基在天然(即天然存在)多肽中也相互作用。在另一种情况中，共价连接是化学或重组处理后的结果。
或者，这种共价连接可以涉及一个或多个在BCMA融合蛋白的异源性多肽序列中所含的氨基酸残基。在一个实例中，共价连接是融合蛋白所含的异源性序列之间的共价连接(见美国专利申请5,478,925，在此通过引用将其内容并入本申请)。在一个具体的实例中，共价连接是BCMA-Fc融合蛋白(如在此所述)所含的异源性序列之间的共价连接。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的融合蛋白的共价连接是来自另一个能够形成共价连接的多聚体的TNF家族配体/受体成员例如护骨蛋白(见例如国际出版物WO 98/49305，在此通过引用将其全部内容并入本申请)的异源性多肽序列之间的共价连接。在另一个实施方式中，两个或多个BCMA多肽经合成的连接物(例如肽、碳水化合物或可溶性的多聚体连接物)连接在一起。实例包括在美国专利5,073,627中所述的那些肽连接物(在此通过引用将其并入本申请)。利用传统的重组DNA技术可以生成包括多个经肽连接物分离的BCMA多肽的蛋白。
在一个具体的实施方式中，结合BCMA多肽、多肽片段、或SEQ IDNO：8的变体、和/或BCMA多肽表位(通过用于检测特异的抗体-抗原结合的本领域熟知的免疫检测法确定的表位)的抗体可以用于本发明方法中。例如在PCT出版物WO01/087977、WO01/60397、和WO02/66516以及Ch’en，et al.，(2005)Cell Immunol 236：78-85中已经描述了抗BCMA抗体及其片段。在此通过引用将其全部内容并入本申请。抗体包括但不限于单克隆的、多特异性的、人的、人源化的或嵌合的抗体、单链抗体、Fab片段、F(ab′)片段、Fab表达文库生成的片段、抗独特型(抗Id)抗体(包括例如抗BCMA抗体的抗Id抗体)、以及上述所有抗体的表位结合片段。术语“抗体”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何类型的(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何组(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚组的免疫球蛋白。在具体的实施方式中，免疫球蛋白分子是IgG1。在其他具体的实施方式中，免疫球蛋白分子是IgG4。
可以用于本发明方法中的结合BCMA的抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、和F(ab’)2、Fd、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)和包括VL或VH区的片段。包括单链抗体的结合BCMA的抗体片段可以包括单独的可变区或者与下面的全部或一部分组合的可变区：铰链区、CH1、CH2和CH3区。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的BCMA结合片段包括可变区和铰链区、CH1、CH2和CH3区的任一组合。可以用于本发明方法中的抗体可以来自任何动物来源的抗体，包括鸟类和哺乳动物类。优选地，抗体是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驴、shiprabbit、山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡来源的。“人”抗体在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体以及包括从人免疫球蛋白文库或从转基因了一个或多个人免疫球蛋白且不表达内源性免疫球蛋白的转基因动物中分离到的抗体，如在Kucherlapati等的美国专利5,939,598所述的那样，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可以用于本发明方法中的抗BCMA抗体可以是单特异的、双特异的、三特异的或更高的多特异性的。多特异性抗体可以特异于BCMA多肽的不同表位或者可以特异于BCMA多肽以及异源表位例如异源多肽或固体支持材料。见例如PCT出版物WO 93/17715、WO 92/08802、WO91/00360、WO 92/05793、Tutt，et al.，J.Immunol.147：60-69(1991)；美国专利4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920、5,601,819、Kostelny et al.，J.Immunol.148：1547-1553(1992)；在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可根据其交叉反应性来描述或说明可以用于本发明方法中的BCMA抗体。不会结合BCMA多肽的任何其他类似物、同源物、或同系物的抗体可以用于本发明的方法。在具体的实施方式中，BCMA抗体与人BCMA蛋白的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相应表位交叉反应。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗BCMA抗体不仅结合BCMA，也结合TACI和BAFF-R。
也可根据其与BCMA多肽的结合亲和力来描述或说明可以用于本发明方法中的抗体。优选的结合亲和力包括解离常数或KD小于或等于5 x 10- 9M、10-9M、5 x 10-10M、10-10M、5 x 10-11M、10-11M、5 x 10-12M、或10-12M。
可以用于本发明方法中的BCMA抗体可以是BCMA多肽的激动剂或拮抗剂。例如包括部分或完全地阻断与BCMA多肽的受体/配体相互作用的BCMA抗体。也包括不会阻止配体结合但会阻止受体活化的受体特异性抗体。用在此所述的或本领域已知的技术可以确定受体活化(即信号传导)。例如，通过用本领域已知的技术检测转录因子NF-AT、AP-1、和/或NF-κB的活化和/或通过免疫沉淀以及随后的western印迹分析检测受体或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或丝氨酸/苏氨酸)可以确定受体活化。
在一个具体的实施方式中，阻止配体结合和受体活化的受体特异性BCMA抗体和识别受体-配体复合物以及优选地不会特异地识别未结合的受体或未结合的配体的BCMA抗体都可以用于本发明方法。利用本领域已知的技术可以制备出上述BCMA抗体。见例如PCT出版物WO 96/40281；美国专利5,811,097；Deng et al.，Blood 92(6)：1981-1988(1998)；Chen et al.，Cancer Res.58(16)：3668-3678(1998)；Harrop et al.，J.Immunol.161(4)：1786-1794(1998)；Zhu et al.，Cancer Res.58(15)：3209-3214(1998)；Yoon et al.，J.Immunol.160(7)：3170-3179(1998)；Prat et al.，J.Cell.Sci.111(Pt2)：237-247(1998)；Pitard et al.，J.Immunol.Methods 205(2)：177-190(1997)；Liautard etal.，Cytokine 9(4)：233-241(1997)；Carlson et al.，J.Biol.Chem.272(17)：11295-11301(1997)；Taryman et al.，Neuron 14(4)：755-762(1995)；Muller et al.，Structure 6(9)：1153-1167(1998)；Bartunek et al.，Cytokine8(1)：14-20(1996)(在此通过引用将其全部内容并入本申请)。
F.Neutrokine-α受体，BAFF-R
BAFF-R多肽，例如下面所述的那些BAFF-R多肽，可以作为Neutrokine-α和/或APRIL的拮抗剂，并且也可以用于本发明方法。BAFF-R也称作TR21，是184个氨基酸残基的蛋白(SEQ ID NO：10)，推断分子量约为18.9kDa。编码BAFF-R的cDNA核苷酸序列为SEQ ID NO：9。推定的从约1到约81位氨基酸构成了细胞外区(SEQ ID NO：10)；从约82到约101位氨基酸构成了跨膜区(SEQ ID NO：10)；以及从约102到约184位氨基酸构成了细胞内区(SEQ ID NO：10)。
因此，在一个实施方式中，可以用于本发明方法中的BAFF-R蛋白是包括氨基酸序列SEQ ID NO：10或是由其组成的分离的多肽，或者是包括一部分SEQ ID NO：10或是由其组成的多肽，例如BAFF-R细胞外区(包括SEQ ID NO：10的第1到81位氨基酸)和/或BAFF-R富半胱氨酸区(包括SEQ ID NO：10的第19到35位氨基酸)；以及与上面所述的多肽至少80％相同的、更优选的至少90％或95％相同的、仍更优选的至少96％、97％、98％、99％或100％相同的多肽。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的BAFF-R蛋白是包括SEQ ID NO：10的第1到70位氨基酸和或氨基酸序列SEQ ID NO：26的分离的多肽。SEQ ID NO：26显示了BAFF-R的第1到70位氨基酸，其中BAFF-R中的第20位氨基酸(缬氨酸)被天冬酰胺所取代以及BAFF-R中的第27位氨基酸(亮氨酸)被脯氨酸所取代。在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的BAFF-R蛋白是包括SEQ ID NO：26的第2到70位氨基酸的分离的多肽。与上面所述的多肽至少80％相同的、更优选的至少90％或95％相同的、仍更优选的至少96％、97％、98％、99％或100％相同的多肽也可用于本发明方法。
具有与BAFF-R多肽的参照氨基酸序列至少例如95％“相同的”氨基酸序列的多肽表示多肽的氨基酸序列与参照序列相同，除了所述多肽序列可以包括每100个BAFF-R受体的参照氨基酸序列的氨基酸中最多5个氨基酸改变。换句话说，为了得到具有与参照氨基酸序列至少95％相同的多肽，可以缺失或用另一种氨基酸取代参照序列中最多5％的氨基酸残基，或者最多达参照序列的总氨基酸残基数目5％的氨基酸残基可以被插入到参照序列内。参照序列的这些改变可以发生于参照氨基酸序列的氨基末端或羧基末端位置，或者发生在这些末端位置之间的任一位置，可以散在发生于参照序列中的单个残基上或者发生于参照序列内的一个或多个连续残基上。
BAFF-R的多肽片段包括包含SEQ ID NO：10所含的氨基酸序列或由其组成的多肽。多肽片段可以是“独立式的”或者包含在更大的多肽内，所述片段形成了更大多肽的一部分或区域，最优选的是作为单一的连续区域。在另外的实施方式中，多肽片段包括一个或多个BAFF-R区或者是由其组成。优选的多肽片段包括选自组中的成员：(a)包括或由BAFF-R细胞外区(推定其构成SEQ ID NO：10的第1到约81位氨基酸残基)组成的多肽；(b)包括或由BAFF-R富半胱氨酸区(推定其构成SEQ ID NO：10的第19到第35位氨基酸残基)组成的多肽；(c)包括或由BAFF-R跨膜区(推定其构成SEQ ID NO：10的第82到第101位氨基酸残基)组成的多肽；(d)包括或由BAFF-R细胞内区(推定其构成SEQ ID NO：10的第102到第184位氨基酸残基)组成的多肽；或(e)(a)-(d)中的多肽的任一组合。
相信BAFF-R的细胞外的富半胱氨酸基序对于BAFF-R及其配体(Neutrokine-α和APRIL)之间的相互作用是重要的。因此，在优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的BAFF-R多肽片段包括SEQ ID NO：10的第19到35位氨基酸残基或者是由其组成。包括与所述富半胱氨酸基序的多肽序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列或由所述多肽序列组成的蛋白也是优选的。
可以用于本发明方法中的BAFF-R蛋白的其他片段是经BAFF-R的结构或功能属性所表征的片段。这些片段包括包含完整(全长)BAFF-R(SEQID NO：10)的α螺旋或α螺旋形成区(“α区”)、β折叠和β折叠形成区(“β区”)、转角结构和转角结构形成区(“转角结构区”)、卷曲和卷曲形成区(“卷曲区”)、亲水区、疏水区、α两亲区、β两亲区、表面形成区和高抗原性指数区(即含有四个或更多个具有抗原指数大于或等于1.5的连续氨基酸，利用Jameson-Wolf程序的默认参数所鉴定到的)的氨基酸残基，如在美国专利6,969,519中所讨论的那样。如利用这些计算机程序的默认参数所推定的，某些优选的区域包括但不限于Garnier-Robson推定的α区、β区、转角结构区、和卷曲区；Chou-Fasman推定的α区、β区和转角结构区；Kyte-Doolittle推定的亲水区；Hopp-Woods推定的疏水区；Eisenbergα和β两亲区；Emini表面形成区；以及Jameson-Wolf高抗原性指数区。
可以表达修饰形式的可以用于本发明方法中的BAFF-R多肽例如融合蛋白(包括经肽键与异源蛋白序列(不同蛋白的序列)连接的多肽)，不仅可以包括分泌信号，还可以包括额外的异源功能区。或者可以通过合成技术例如通过使用肽合成仪制备出这种融合蛋白。因此，可以向多肽的N末端加入额外的氨基酸区，特别是带电荷的氨基酸，以提高在宿主细胞中、纯化期间或随后的处理和储存期间的的稳定性和持久性。也可以将肽基序加入到多肽中，以便促进纯化。可以在最终制备出多肽之前去除这些区域。向多肽中添加肽基序以便引起分泌或排出、提高稳定性和促进纯化等都是本领域熟知的和常规的技术。
优选的可以用于本发明方法中的BAFF-R融合蛋白包括来自免疫球蛋白的异源区，其被用于增溶蛋白。例如EP-A-O 464 533(对应于加拿大2045869)和WO00/024782阐述了包括免疫球蛋白分子的恒定区的各个部分以及另一种人蛋白或其部分的融合蛋白。例如Pelletier，et al.，(2003)J BiolChem 278：33127-33133和Carter，et al.，(2005)Arthritis Rheum 52：3943-3954已经描述了BAFF-R免疫球蛋白融合蛋白，在此通过引用将其内容并入本申请。在很多情况中，融合蛋白中的Fc部分非常适用于治疗和诊断，并因此造成了改善的药物动力学性能(EP-A 0232 262)。另一方面，对于某些应用而言，需要在以在此所述的有利的方式表达、检测并纯化出融合蛋白之后能够缺失Fc部分。当Fc部分被证实其对用于治疗和诊断是妨碍时就是这种情况，例如当融合蛋白被用作免疫接种的抗原时。在药物研发中，例如人类蛋白如hIL-5已经与Fc部分融合，以便用高通量筛选检测法鉴定出hIL-5的拮抗剂。见D.Bennett et al.，J.Molecular Recognition 8：52-58(1995)和K.Johanson et al.，J.Biol.Chem.270：9459-9471(1995)。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的BAFF-R-Fc融合蛋白是BR3-Fc。
本领域人员知道并如上面讨论的那样，BAFF-R多肽可以与其他多肽序列融合。例如，可以用于本发明方法中的BAFF-R多肽可以与免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定区或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一组合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0413622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)融合，形成嵌合多肽。
这些融合蛋白可以促进纯化、可以延长储存时间以及可以增加体内半衰期。由人CD4多肽的头两个结构域和哺乳动物免疫球蛋白的重链或轻链恒定区的不同区域组成的嵌合蛋白已经显示出这一点。见例如EP394,827、Traunecker et al.，Nature，331：84-86(1988)。对于与FcRn结合伴侣例如IgG或Fc片段缀合的抗原(例如胰岛素)已经证实可以增强抗原跨越上皮屏障转运到免疫系统的能力(见例如PCT出版物WO 96/22024和WO99/04813)。也已经发现由于IgG部分的二硫键所造成的具有二硫键连接的二聚体结构的IgG融合蛋白能比单聚体多肽或其片段单独本身更有效地结合并中和其他分子。见例如Fountoulakis et al.，J.Biochem.，270：3958-3964(1995)。
BAFF-R-Fc蛋白的一个实例是与IgG1免疫球蛋白分子的Fc区相融合的SEQ ID NO：10的第1到70位氨基酸。任选地，BAFF-R中的第20位氨基酸(缬氨酸)被天冬酰胺所取代以及BAFF-R中的第27位氨基酸(亮氨酸)被脯氨酸所取代。SEQ ID NO：26显示了具有这两个氨基酸变化的BAFF-R的第1到70位氨基酸。
可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一个BAFF-R多肽的片段或变体以及至少一个人血清白蛋白的片段或变体，其彼此连接在一起，优选地通过遗传融合(即通过翻译核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，编码BAFF-R的全部或一部分的多核苷酸与编码白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架连接)，或者化学缀合彼此连接在一起。一旦作为白蛋白融合蛋白的一部分，BAFF-R多肽和白蛋白蛋白可以被称作白蛋白融合蛋白的“部分”、“区域”或“基序”(例如“BAFF-R部分”或“白蛋白部分”)。
在一个实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽的片段和血清白蛋白或者是由它们组成。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽的变体和血清白蛋白或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的血清白蛋白蛋白组分是血清白蛋白的成熟部分。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或者是由它们组成。在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的BAFF-R部分是全长BAFF-R多肽。在进一步优选的实施方式中，白蛋白融合蛋白的BAFF-R蛋白部分是BAFF-R多肽的成熟的、可溶性的区域。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽的片段或变体和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，本发明提供包括BAFF-R多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分或由它们组成的白蛋白融合蛋白。
在进一步的实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽的片段或变体和血清白蛋白的具有生物学活性的和/或有治疗活性的片段或变体或者是由它们组成。在优选的实施方式中，本发明提供包括BAFF-R多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)或由它们组成的白蛋白融合蛋白。在一个优选的实施方式中，BAFF-R多肽(包括其片段或变体)与成熟形式的人血清白蛋白(即如欧洲专利0 322 094的图1和2所示的人血清白蛋白的第1到585位氨基酸)融合，在此通过引用将其全部内容并入本申请。在另一个优选的实施方式中，本发明的抗体(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到x位残基组成的多肽片段融合，其中x是从1到585的整数，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一个优选的实施方式中，BAFF-R多肽(包括其片段或变体)与包括或由人血清白蛋白的第1到z位氨基酸组成的多肽片段融合，其中z是从369到419的整数，如美国专利5,766,883所述，在此通过引用将其全部内容并入本申请。BAFF-R多肽(包括其片段或变体)可以与异源蛋白(例如免疫球蛋白Fc多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。
在优选的实施方式中，在可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一组或两组下面的参照SEQ ID NO：11的点突变组：Leu-407突变为Ala、Leu-408突变为Val、Val-409突变为Ala、和Arg-410突变为Ala；或Arg-410突变为A、Lys-413突变为Gln、和Lys-414突变为Gln(见例如国际申请WO95/23857，在此通过引用将其全部内容并入本申请)。在甚至更为优选的实施方式中，含有一组或两组上面所述的点突变组的可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白已经提高了对酵母Yap3p蛋白裂解性降解的稳定性/耐受性，容许增加在酵母宿主细胞中表达的重组白蛋白融合蛋白的产量。
优选地，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白包括作为N末端部分的HA和作为C末端部分的BAFF-R多肽。或者，也可以使用包括作为其C末端部分的HA和作为其N末端部分的BAFF-R多肽的白蛋白融合蛋白。
在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白具有与白蛋白的N末端和C末端融合的BAFF-R多肽。在一个具体的实施方式中，在N末端和C末端融合的BAFF-R多肽是相同的。在另一个实施方式中，在N末端和C末端融合的BAFF-R多肽是不同的BAFF-R多肽。在另一个实施方式中，BAFF-R多肽被融合于白蛋白的N或C末端，异源多肽被融合于剩余末端。
另外，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之间的连接物肽，以提供所述部分之间的更大的物理分隔。连接物肽可以由氨基酸组成，使得其是柔性的或更具刚性。
一般而言，可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一个HA衍生区和一个BAFF-R区。但是，每个蛋白中的多个区域都可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。同样，一种以上的蛋白可以被用于制备可以用于本发明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在这种构型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。双官能的白蛋白融合蛋白的结构可以表示为X-HA-Y或Y-HA-X。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的BAFF-R蛋白或其片段或变体可以与细胞毒素(例如细胞生长抑制剂或杀细胞剂)缀合。细胞毒素或细胞毒药物可以包括任何对细胞有害的药物。实例包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、吐根素、丝裂霉素、足叶乙甙、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、dihydroxy anthracin dione、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛尔、和嘌呤霉素以及其类似物或同系物。
在另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的BAFF-R蛋白或其片段或变体可以与毒素缀合。
“毒素”表示一种或多种可以结合并激活内源性细胞毒效应物系统的化合物、放射性同位素、全毒素、修饰毒素、毒素的催化亚基、或在给定的引起细胞死亡的条件下不会正常地表达于细胞表面内或表面上的任何分子或酶。可以使用的毒素包括但不限于本领域已知的放射性同位素、化合物例如结合内在的或诱导的内源性细胞毒效应物系统的抗体(或其含补体固定化的部分)、胸苷激酶、核酸内切酶、RNA酶、α毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假单胞菌外毒素A、白喉毒素、皂草素、木鳖子甙、白树毒素、美洲商路抗病毒蛋白、α-帚曲霉素、和霍乱毒素。“毒素”也包括细胞生长抑制剂或杀细胞剂、治疗药物或放射性金属离子例如α粒子发射离子，例如213Bi、或其他放射性同位素如103Pd、133Xe、131I、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、35S、90Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、90钇、117锡、186铼、166钬、和188铼。
可以采用遗传工程化来改进或改变可以用于本发明方法中的BAFF-R多肽的特征，以生成可以用于本发明方法中的多肽。可以用本领域人员已知的重组DNA技术生成新的突变蛋白或“突变型蛋白”包括单个或多个氨基酸取代、缺失、添加或融合蛋白。这些修饰多肽可以表现出例如增强活性、或增加稳定性。另外，至少在特定的纯化和储存条件下，它们可以比相应的天然多肽按更高的产量被纯化，并表现出更好的稳定性。仍在本发明的另一个实施方式中，BAFF-R多肽突变体可以是“显性负调控物”。为此，可以用缺陷型BAFF-R多肽例如缺少整个或部分TNF保守区的突变体消除BAFF-R的活性。无功能的BAFF-R多肽能组装形成能够结合但不能诱导信号传导的受体(例如多聚体)。
可以被用于本发明方法中的BAFF-R多肽可以是单体或多聚体(即二聚体、三聚体、四聚体、和更高聚体)。在具体的实施方式中，本发明的多肽是单体、二聚体、三聚体或四聚体。在另外的实施方式中，本发明的多聚体至少是二聚体、三聚体或四聚体。相信某些TNF家族蛋白成员是以三聚体的形式存在的(Beutler and Huffel，Science 264：667，1994；Banner et al.，Cell 73：431，1993)。因此，三聚体的BCMA可以提供增强生物学活性的优势。
在具体的实施方式中，多聚体可以是同聚体或异聚体。术语“同聚体”在此指的是只含有BAFF-R多肽(包括BAFF-R片段、变体、和在此所述的融合蛋白)的多聚体。这些同聚体可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的BAFF-R多肽。在具体的实施方式中，同聚体是只含有具有相同的多肽序列的BAFF-R蛋白的多聚体。在另一个具体的实施方式中，同聚体是含有具有不同多肽序列的BAFF-R蛋白的多聚体。
术语“异聚体”在此指的是除了BAFF-R多肽外还含有异源性多肽(即只含有非对应于BAFF-R基因所编码的多肽序列的多肽序列的蛋白)的多聚体。可以用于本发明方法中的多聚体可以是疏水连接、亲水连接、离子连接和/或共价连接相连的结果，和/或可以是间接相连的，例如通过脂质体形成。因此，在一个实施方式中，当蛋白在溶液中彼此接触时，就形成了同多聚体例如同二聚体、同三聚体、异四聚体或异四聚体。在其他实施方式中，通过与BAFF-R蛋白的共价连接或者BAFF-R蛋白之间的共价连接形成多聚体。这些共价连接可能涉及到蛋白的多肽序列(所含的一个或多个氨基酸残基。在一种情况中，共价连接是位于蛋白的多肽序列内的半胱氨酸残基之间的交联，所述半胱氨酸残基在天然(即天然存在)多肽中也相互作用。在另一种情况中，共价连接是化学或重组处理后的结果。
或者，这种共价连接可以涉及一个或多个在BAFF-R融合蛋白的异源性多肽序列中所含的氨基酸残基。在一个实例中，共价连接是融合蛋白所含的异源性序列之间的共价连接(见美国专利申请5,478,925，在此通过引用将其内容并入本申请)。在一个具体的实例中，共价连接是BAFF-R-Fc融合蛋白(如在此所述)所含的异源性序列之间的共价连接。在另一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的融合蛋白的共价连接是来自另一个能够形成共价连接的多聚体的TNF家族配体/受体成员例如护骨蛋白(见例如国际出版物WO 98/49305，在此通过引用将其全部内容并入本申请)的异源性多肽序列之间的共价连接。在另一个实施方式中，两个或多个BAFF-R多肽经合成的连接物(例如肽、碳水化合物或可溶性的多聚体连接物)连接在一起。实例包括在美国专利5,073,627中所述的那些肽连接物(在此通过引用将其并入本申请)。利用传统的重组DNA技术可以生成包括多个经肽连接物分离的BAFF-R多肽的蛋白。
在一个具体的实施方式中，结合BAFF-R多肽、多肽片段、或SEQ IDNO：10的变体、和/或BAFF-R多肽表位(通过用于检测特异的抗体-抗原结合的本领域熟知的免疫检测法确定的表位)的抗体可以用于本发明方法中。例如在Lee，et al.，(2006)Synthetic anti-BR3 antibodies that mimic BAFF binding and target both human and murine B cells Blood(Blood First EditionPaper，prepublished online July 13，2006)Vol.0，No.2006，pp.200603011；Ch’en，et al.，(2005)Cell Immunol 236：78-85；Nakamura，et al.，(2005)Virchows Arch 447：53-60；和Carter，et al.，(2005)Arthritis Rheum 52：3943-3954中已经描述了抗BAFF-R抗体及其片段。在此通过引用将其全部内容并入本申请。抗体包括但不限于单克隆的、多特异性的、人的、人源化的或嵌合的抗体、单链抗体、Fab片段、F(ab′)片段、Fab表达文库生成的片段、抗独特型(抗Id)抗体(包括例如抗BAFF-R抗体的抗Id抗体)、以及上述所有抗体的表位结合片段。术语“抗体”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何类型的(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何组(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚组的免疫球蛋白。在具体的实施方式中，免疫球蛋白分子是IgG1。在其他具体的实施方式中，免疫球蛋白分子是IgG4。
可以用于本发明方法中的结合BAFF-R的抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、和F(ab’)2、Fd、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)和包括VL或VH区的片段。包括单链抗体的结合BAFF-R的抗体片段可以包括单独的可变区或者与下面的全部或一部分组合的可变区：铰链区、CH1、CH2和CH3区。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的BAFF-R结合片段包括可变区和铰链区、CH1、CH2和CH3区的任一组合。可以用于本发明方法中的抗体可以来自任何动物来源的抗体，包括鸟类和哺乳动物类。优选地，抗体是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驴、ship rabbit、山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡来源的。“人”抗体在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体以及包括从人免疫球蛋白文库或从转基因了一个或多个人免疫球蛋白且不表达内源性免疫球蛋白的转基因动物中分离到的抗体，如在Kucherlapati等的美国专利5,939,598所述的那样，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可以用于本发明方法中的抗BAFF-R抗体可以是单特异的、双特异的、三特异的或更高的多特异性的。多特异性抗体可以特异于BAFF-R多肽的不同表位或者可以特异于BAFF-R多肽以及异源表位例如异源多肽或固体支持材料。见例如PCT出版物WO 93/17715、WO 92/08802、WO91/00360、WO 92/05793、Tutt，et al.，J.Immunol.147：60-69(1991)；美国专利4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920、5,601,819、Kostelnyet al.，J.Immunol.148：1547-1553(1992)；在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可根据其交叉反应性来描述或说明可以用于本发明方法中的BAFF-R抗体。不会结合BAFF-R多肽的任何其他类似物、同源物、或同系物的抗体可以用于本发明的方法。在具体的实施方式中，BAFF-R抗体与人BAFF-R蛋白的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相应表位交叉反应。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗BAFF-R抗体不仅结合BAFF-R，也结合TACI和BCMA。
也可根据其与BAFF-R多肽的结合亲和力来描述或说明可以用于本发明方法中的BAFF-R抗体。优选的结合亲和力包括解离常数或KD小于或等于5 x 10-9M、10-9M、5 x 10-10M、10-10M、5 x 10-11M、10-11M、5 x 10- 12M、或10-12M。
可以用于本发明方法中的BAFF-R抗体可以是BAFF-R多肽的激动剂或拮抗剂。例如包括部分或完全地阻断与BAFF-R多肽的受体/配体相互作用的BAFF-R抗体。也包括不会阻止配体结合但会阻止受体活化的受体特异性抗体。用在此所述的或本领域已知的技术可以确定受体活化(即信号传导)。例如，通过用本领域已知的技术检测转录因子NF-AT、AP-1、和/或NF-κB的活化和/或通过免疫沉淀以及随后的western印迹分析检测受体或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或丝氨酸/苏氨酸)可以确定受体活化。
在一个具体的实施方式中，阻止配体结合和受体活化的受体特异性BAFF-R抗体和识别受体-配体复合物以及优选地不会特异地识别未结合的受体或未结合的配体的BAFF-R抗体都可以用于本发明方法。利用本领域已知的技术可以制备出上述BAFF-R抗体。见例如PCT出版物WO96/40281；美国专利5,811,097；Deng et al.，Blood92(6)：1981-1988(1998)；Chen et al.，Cancer Res.58(16)：3668-3678(1998)；Harrop et al.，J.Immunol.161(4)：1786-1794(1998)；Zhu et al.，Cancer Res.58(15)：3209-3214(1998)；Yoon et al.，J.Immunol.160(7)：3170-3179(1998)；Prat et al.，J.Cell.Sci.111(Pt2)：237-247(1998)；Pitard et al.，J.Immunol.Methods 205(2)：177-190(1997)；Liautard et al.，Cytokine 9(4)：233-241(1997)；Carlson et al.，J.Biol.Chem.272(17)：11295-11301(1997)；Taryman et al.，Neuron 14(4)：755-762(1995)；Muller et al.，Structure 6(9)：1153-1167(1998)；Bartunek et al.，Cytokine 8(1)：14-20(1996)(在此通过引用将其全部内容并入本申请)。
G.抗APRIL抗体
在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗APRIL抗体或其抗原结合片段。例如在PCT出版物WO01/087977、WO99/12965、WO01/60397、和WO02/094192；美国专利6,506,882；2002年10月11日提交的美国专利出版物2003/0166864；和Ch’en，et al.，(2005)Cell Immunol236：78-85中已经描述了抗APRIL抗体及其片段。在此通过引用将其全部内容并入本申请。
在一个具体的实施方式中，与APRIL多肽、多肽片段、或SEQ IDNO：4的变体、和/或APRIL表位(如本领域已知的用于检测特异的抗体-抗原结合的免疫检测法所确定的)结合的抗体可以用于本发明方法。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体可以结合与其他多肽序列融合的APRIL多肽。例如，APRIL多肽可以与免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定区或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一组合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见例如1999年3月2日提交的美国专利5,876,969、欧洲专利0 413 622、和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)融合，形成嵌合多肽。这些融合蛋白可以促进纯化、可以延长储存时间以及可以增加体内半衰期。由人CD4多肽的头两个结构域和哺乳动物免疫球蛋白的重链或轻链恒定区的不同区域组成的嵌合蛋白已经显示出这一点。见例如EP 394,827、Traunecker et al.，Nature，331：84-86(1988)。对于与FcRn结合伴侣例如IgG或Fc片段缀合的抗原(例如胰岛素)已经证实可以增强抗原跨越上皮屏障转运到免疫系统的能力(见例如PCT出版物WO96/22024和WO 99/04813)。也已经发现由于IgG部分的二硫键所造成的具有二硫键连接的二聚体结构的IgG融合蛋白能比单聚体多肽或其片段单独本身更有效地结合并中和其他分子。见例如Fountoulakis et al.，J.Biochem.，270：3958-3964(1995)。
在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合同聚体的、特别是同三聚体的APRIL多肽。在其他具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合异聚体的、特别是异三聚体的APRIL多肽例如含有两个APRIL多肽和一个Neutrokine-α多肽的异三聚体或者含有一个APRIL多肽和两个Neutrokine-α多肽的异三聚体。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合同聚体的、特别是同三聚体的APRIL多肽，其中多聚体的单个蛋白组分是由成熟形式的APRIL(例如SEQ IDNO：4的第105到250位氨基酸残基)组成的。在其他具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合异聚体的、特别是异三聚体的APRIL多肽例如含有两个APRIL多肽和一个Neutrokine-α多肽的异三聚体或者含有一个APRIL多肽和两个Neutrokine-α多肽的异三聚体，其中APRIL异聚体的蛋白组分是由APRIL的成熟的细胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO：4的第105到250位氨基酸)或Neutrokine-α的成熟的细胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO：2的第134到285位氨基酸)组成的。
在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合APRIL单体蛋白的构象表位。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合APRIL多聚体的、特别是三聚体的蛋白的构象表位。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合由APRIL和异源多肽的并置所产生的构象表位，当APRIL形成异三聚体(例如和Neutrokine-α多肽)或者在APRIL和异源多肽之间的融合蛋白内可以出现所述构象表位。
可以用于本发明方法中的抗体包括但不限于多克隆的、单克隆的、多特异性的、人的、人源化的或嵌合的抗体、单链抗体、Fab片段、F(ab)’片段、Fab表达文库生成的片段、抗独特型(抗Id)抗体(包括抗APRIL抗体的抗id抗体)、和上面所有抗体的表位结合片段。术语“抗体”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何类型的(IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何组的(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚组的免疫球蛋白分子。在优选的实施方式中，免疫球蛋白是IgG1或IgG4同种型。免疫球蛋白可以具有重链和轻链。IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY的排列可以与κ或λ形式的轻链相匹配。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体是结合APRIL的抗体片段，包括但不限于Fab、Fab’、和F(ab’)2、Fd、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)和包括VL或VH区的片段。包括单链抗体的结合APRIL的抗体片段可以包括单独的可变区或者与下面的全部或一部分组合的可变区：铰链区、CH1、CH2和CH3区。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合片段包括可变区和铰链区、CH1、CH2和CH3区的任一组合。可以用于本发明方法中的抗体可以来自任何动物来源的抗体，包括鸟类和哺乳动物类。优选地，抗体是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驴、ship rabbit、山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡来源的。“人”抗体在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体以及包括从人免疫球蛋白文库或从转基因了一个或多个人免疫球蛋白且不表达内源性免疫球蛋白的转基因动物中分离到的抗体，如在Kucherlapati等的美国专利5,939,598所述的那样，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可以用于本发明方法中的抗体可以是单特异的、双特异的、三特异的或更高的多特异性的。多特异性抗体可以特异于APRIL多肽的不同表位或者可以特异于APRIL多肽以及异源表位例如异源多肽或固体支持材料。见例如PCT出版物WO 93/17715、WO 92/08802、WO91/00360、WO92/05793、Tutt，et al.，J.Immunol.147：60-69(1991)；美国专利4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920、5,601,819、Kostelny et al.，J.Immunol.148：1547-1553(1992)。
可根据其交叉反应性来描述或说明可以用于本发明方法中的抗APRIL抗体。不会结合APRIL多肽的任何其他类似物、同源物、或同系物的抗体可以用于本发明的方法。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体与Neutrokine-α交叉反应。在具体的实施方式中，抗体与人类蛋白质的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相应表位交叉反应。
也可根据其与APRIL多肽的结合亲和力来描述或说明可以用于本发明方法中的抗体。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合APRIL多肽或其片段或变体，其解离常数或KD小于或等于5 x 10-9M、10- 9M、5 x 10-10M、10-10M、5 x 10-11M、10-11M、5 x 10-12M、或10-12M。在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗体结合APRIL多肽的解离常数或KD是在每个单个给出值之间的任一范围内。
例如，包括部分或完全地阻断与APRIL多肽的受体/配体相互作用的APRIL抗体。也包括不会阻止配体结合但会阻止受体活化的APRIL特异性抗体。用在此所述的或本领域已知的技术可以确定受体活化(即信号传导)。例如，通过用本领域已知的技术检测转录因子NF-AT、AP-1、和/或NF-κB的活化和/或通过免疫沉淀以及随后的western印迹分析检测受体或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或丝氨酸/苏氨酸)可以确定受体活化。
在一个具体的实施方式中，阻止配体结合和受体活化的受体特异性APRIL抗体和识别受体-配体复合物以及优选地不会特异地识别未结合的受体或未结合的配体的APRIL抗体都可以用于本发明方法。在一个具体的实施方式中，结合配体并阻止配体和受体结合的中和抗体以及结合配体据此阻止受体活化但不会阻止配体结合受体的抗体都可以用于本发明方法。利用本领域已知的技术可以制备出上述APRIL抗体。例如PCT出版物WO96/40281；美国专利5,811,097；Deng et al.，Blood 92(6)：1981-1988(1998)；Chen et al.，Cancer Res.58(16)：3668-3678(1998)；Harrop et al.，J.Immunol.161(4)：1786-1794(1998)；Zhu et al.，Cancer Res.58(15)：3209-3214(1998)；Yoon et al.，J.Immunol.160(7)：3170-3179(1998)；Prat et al.，J.Cell.Sci.111(Pt2)：237-247(1998)；Pitard et al.，J.Immunol.Methods 205(2)：177-190(1997)；Liautard et al.，Cytokine 9(4)：233-241(1997)；Carlson et al.，J.Biol.Chem.272(17)：11295-11301(1997)；Taryman et al.，Neuron 14(4)：755-762(1995)；Muller et al.，Structure 6(9)：1153-1167(1998)；Bartunek et al.，Cytokine 8(1)：14-20(1996)(在此通过引用将其全部内容并入本申请)。
H.APRIL结合多肽
在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是APRIL结合肽或多肽。例如在国际专利出版物WO01/87977、WO01/87979和美国专利出版物US2002081296及US2002086018中已经描述了APRIL结合肽或多肽，在此通过引用将其全部内容并入本申请。可以用于本发明方法中的APRIL结合肽包括从经与丝状噬菌体包被蛋白的融合所展示出的随机肽序列中鉴定出的短的多肽。对于噬菌体展示肽文库技术的讨论见例如Scott et al.(1990)Science 249：386；Devlin et al.(1990)，Science 249：404；1993年6月29日提交的美国专利5,223,409；1998年3月31日提交的美国专利5,733,731；1996年3月12日提交的美国专利5,498,530；1995年7月11日提交的美国专利5,432,018；1994年8月16日提交的美国专利5,338,665；1999年7月13日提交的美国专利5,922,545；1996年12月19日出版的WO96/40987；和1998年4月16日出版的WO98/15833，在此通过引用将其并入本申请。通过连续多轮的针对固定化的APRIL靶向肽的亲和纯化以及随后的再繁殖可以分离出表达肽的噬菌体。给具有与APRIL的最高结合力的候选噬菌体测序，以便确定每个结合肽的身份。然后将所有鉴定出的APRIL结合肽都连接到“载体”上，以生成用于本发明方法中的进一步的APRIL结合肽。术语“载体”指的是能够阻止APRIL结合肽的降解和/或延长半衰期、降低毒性、减少免疫原性、或增加生物学活性的分子。示例载体包括Fc区及其变体(“肽抗体”是优选的)；线性聚合物(例如聚乙二醇(PEG)，包括5kD、20kD、和30kD PEG、聚赖氨酸、葡聚糖等)；支链聚合物(见例如1981年9月15日提交的Denkenwalter等的美国专利4,289,872；1993年7月20日提交的Tam的5,229,490；1993年10月28日出版的Frechet等的WO 93/21259)；脂质；胆固醇基团(例如类固醇)；碳水化合物或寡糖(例如葡聚糖)；任何与补救受体结合的天然的或合成的蛋白、多肽或肽；白蛋白，包括但不限于重组人白蛋白或其片段或变体(见1999年3月2日提交的美国专利5,876,969；欧洲专利0 413 622；和1998年6月16日提交的美国专利5,766,883，在此通过引用将其全部内容并入本申请)；亮氨酸拉链区；和其他这样的蛋白和蛋白片段。可以用于本发明方法中的APRIL结合肽要求存在至少一个经其中一个氨基酸残基的N末端、C末端或侧链与肽相连的载体。也可以使用多个载体，例如每个末端为Fc或一个末端为Fc，另一个末端或侧链为PEG基团。对于APRIL结合肽而言，Fc区是优选的载体。Fc区可以与肽的N或C末端融合或者融合于肽的两个N和C末端。与N末端的融合是优选的。
如上所述，Fc变体是可以用于本发明方法中的APRIL结合肽的合适载体。天然的Fc可以被广泛地修饰，以便形成Fc变体，条件是保持了与补救受体的结合能力；见例如WO 97/34631和WO 96/32478。在这些Fc变体中，可以去除天然Fc中提供可以用于本发明方法中的APRIL结合肽所不需要的结构性能或功能活性的一个或多个位点。例如通过取代或缺失残基、向位点中插入残基、或截断含所述位点的部分都可以去除这些位点。所插入的或取代的残基也可以是改变了的氨基酸例如肽模拟物或D-氨基酸。基于多种原因都需要Fc变体，下面描述了一些原因。示例Fc变体包括分子和序列，其中：
1.去除了涉及二硫键形成的位点。这种去除可以避免与用于生成本发明分子的宿主细胞上所具有的其他含半胱氨酸蛋白的反应。为此，可以截断N末端的含半胱氨酸片段或者可以缺失半胱氨酸残基或者用其他氨基酸(例如丙氨酸、丝氨酸)取代半胱氨酸。甚至当去除了半胱氨酸残基时，单链Fc区仍能形成非共价结合在一起的二聚体的Fc区。
2.修饰天然Fc，使得其与所选的宿主细胞更为兼容。例如，可以去除邻近经典的天然Fc的N末端的PA序列，所述序列可以被大肠杆菌中的消化酶例如脯氨酸亚胺基肽酶所识别。也可以添加N末端的甲硫氨酸残基，特别是当在细菌细胞例如大肠杆菌中重组表达所述分子时。
3.去除天然Fc的N末端的一部分，以避免当在所选的宿主细胞内表达时的N末端的异质性。为此，可以缺失N末端的头20个氨基酸中的任何残基。
4.去除一个或多个糖基化位点。通常被糖基化的残基(例如天冬酰胺)可以赋予细胞裂解效应。可以缺失或用非糖基化的残基(例如丙氨酸)取代这些残基。
5.去除涉及与补体相互作用的位点例如C1q结合位点。例如，可以缺失或取代人IgG1的EKK序列。补体募集对于可以用于本发明方法中的分子可能是不利的，因此用这种Fc变体可以避免这一点。
6.去除影响与Fc受体而不是补救受体的结合的位点。天然Fc可以具有与某些白细胞相互作用的位点，这些对于可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽融合分子是不需要的，因此可以将其去除。
7.去除ADCC位点。ADCC位点在本领域是已知的，见例如Molec.Immunol.29(5)：633-9(1992)阐述了IgG1的ADCC位点。这些对于可以用于本发明方法中的融合分子是不需要的，因此可以将其去除。
8.当天然Fc衍生于非人抗体时，天然Fc可以被人源化。通常为了人源化天然Fc，可以用正常见于人天然Fc中的残基取代所选的非人的天然Fc中的残基。用于抗体人源化的技术是本领域公知的。
可以用于本发明方法中的APRIL结合肽的另一种载体是能够结合补救抗体的蛋白、多肽、肽、抗体、抗体片段、或小分子(例如肽模拟化合物)。例如，可以使用在美国专利5,739,277中所述的肽作为载体。也可以用噬菌体展示或用于结合补救受体的RNA-肽筛选来选出肽。这些补救受体结合化合物也包含在“载体”的含义内，并且可以用于可以用于本发明方法中的Neutrokine-α结合肽中。应当根据延长半衰期(例如通过避免蛋白酶所识别的序列)和降低免疫原性(例如通过优先非免疫原性序列，如在抗体人源化中所见的那样)来选择这些载体。
如上所述，聚合物载体也可以用于可以用于本发明方法中的APRIL结合肽。目前可得到各种用于连接可作为载体的化学部分的方法，见例如专利合作条约(＂PCT＂)国际出版物WO 96/11953，在此通过引用将其全部内容并入本申请。该PCT申请阐述了水溶性聚合物与蛋白N末端的选择性相连。
在一个优选的实施方式中，优选的聚合物载体是聚乙二醇(PEG)。PEG基团可以是任何便利的分子量，可以是线性的或支链的。PEG的平均分子量范围优选的是从约2千道尔顿(“kD”)到约100kD，更优选的从约5kD到约10kD，最优选的是从约5kD到约10kD。对于可以用于本发明方法中的APRIL结合肽，PEG基团一般都通过PEG基序上的反应基团的酰化作用或还原烷基化作用连接到发明化合物的反应基团(例如醛基、氨基、或酯基)上。
用于合成肽的PEG化的有用的策略包括通过在溶液中形成缀合物连接来组合肽和PEG基序，每个组分都具有彼此相互反应的特殊功能性。用传统的固相合成法可以容易地制备出肽。用合适的功能基团在特殊的位点上“预活化”肽。在与PEG基序反应之前，纯化并完全表征出前体。通常在液相中发生肽与PEG的连接，用反向分析HPLC可以容易地监视这个过程。用制备级的HPLC可以容易地纯化出PEG化的肽，用分析级HPLC、氨基酸分析和激光吸减质谱法表征出所述PEG化的肽。
多糖聚合物是另一类型的可以用于可以用于本发明方法中的APRIL结合肽中的水溶性聚合物。葡聚糖是由主要经α1-6连键连接在一起的单个葡萄糖亚基组成的多糖聚合物。葡聚糖本身可以由多种分子量范围，容易得到的分子量范围是从约1kD到约70kD。葡聚糖是合适的水溶性聚合物，其本身或者联合另一种载体(例如Fc)可以作为可以用于本发明方法中的APRIL结合肽的载体。见例如WO 96/11953和WO 96/05309。已经报道了葡聚糖与治疗性或诊断性免疫球蛋白缀合的用途；见例如European Patent出版物0 315 456，在此通过引用将其全部内容并入本申请。当葡聚糖作为本发明的载体时，约1kD到约20kD的葡聚糖是优选的。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的APRIL结合肽任选地包括“连接物”。当存在连接物时，其化学结构并不重要，因为它主要作为一个间隔物。连接物优选地是由经肽键连接在一起的氨基酸组成的。因此，在优选的实施方式中，连接物是由经肽键连接在一起的1到30个氨基酸组成的，其中所述氨基酸选自20个天然存在的氨基酸。这些氨基酸中的一些氨基酸可以被糖基化，本领域人员非常了解这一点。在更优选的实施方式中，1到20个氨基酸是选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸。甚至更优选地，连接物是由大部分空间上未受阻碍的氨基酸例如甘氨酸和丙氨酸组成的。因此，优选的连接物是聚甘氨酸(特别是(Gly)4、(Gly)5)、聚(Gly-Ala)、和聚丙氨酸。优选的连接物是包括超过5个氨基酸的氨基酸连接物，合适的连接物可以具有最多500个选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸中的氨基酸。约20到50个氨基酸的连接物是最优选的。
非肽的连接物也可以用于可以用于本发明方法中的APRIL结合肽。例如，可以使用烷基连接物例如--NH--(CH2)n--C(O)--，其中n为2到20。可以用任何非空间阻碍基团例如更低的烷基(例如C1--C6)、更低的烃基、卤素(例如Cl、Br)、CN、NH2、苯基等取代这些烷基连接物。
I.反义RNA和siRNA
在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是靶向于Neutrokine-α、APRIL或Neutrokine-α的受体(例如TACI、BCMA和BAFF-R)的反义RNA、催化RNA(核酶)或短干扰RNA(siRNA)。在一个具体的实施方式中，针对于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的反义RNA可以用于本发明方法。可以用反义技术通过反义DNA或RNA或通过三螺旋形成来控制基因表达。例如，在Okano，J.Neurochem.56：560(1991)；＂Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression，CRC Press，Boca Raton，FL(1988)中讨论了反义技术。例如，在Lee et al.，Nucleic AcidsResearch 6：3073(1979)；Cooney et al.，Science 241：456(1988)；和Dervanet al.，Science 251：1360(1991)中讨论了三螺旋形成。所述方法是依据于多核苷酸和互补的DNA或RNA的结合。例如，编码本发明多肽的细胞外区的多核苷酸的5’编码部分可以被用于设计出长度约10到40碱基对的反义RNA寡核苷酸。DNA寡核苷酸可以被设计成与涉及转录的基因区域互补，据此阻止Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的转录和生成。反义RNA寡核苷酸在体内与mRNA杂交，并阻断mRNA分子翻译成Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R多肽。上面所述的寡核苷酸也可以被转运到细胞，使得可以在体内表达反义RNA或DNA，以便抑制Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的生成。
在一个实施方式中，通过从外源序列的转录生成了可以用于本发明方法中的Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R反义核酸。例如，载体或其一部分被转录，生成了可以用于本发明方法中的反义核酸(RNA)。这种载体可以含有编码Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R反义核酸的序列。这种载体可以仍然是游离的基因的或者可以是染色体内整合的，条件是它们能被转录生成所需的反义RNA。用本领域标准的DNA技术方法可以构建出这些载体。载体可以是质粒的、病毒的或者本领域其他已知的用于在脊椎动物细胞中复制并表达的载体。编码Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的序列的变大可以是本领域已知的在脊椎动物细胞优选的是人类细胞中发挥作用的启动子。这些启动子可以是诱导型的或组成型的。这些启动子包括但不限于SV40早期启动子区(Bernoist and Chambon，Nature 29：304-310(1981))、Rous肉瘤病毒的3’长末端重复所含的启动子(Yamamoto et al.，Cell 22：787-797(1980))、疱疹胸腺嘧啶启动子(Wagner et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.78：1441-1445(1981))、金属硫蛋白基因的调节序列(Brinster，et al.，Nature 296：39-42(1982))等。
可以用于本发明方法中的反义核酸包括与至少一部分Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R基因的RNA转录体互补的序列。但是，绝对互补性虽然是优选的，但不是必需的。“与至少一部分RNA互补的”序列在此指的是具有足够的互补性使之能够与RNA杂交形成稳定的双链体的序列；对于双链Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R反义核酸而言，因此可以检测双链DNA的单链或者可以检测三链体的形成。杂交能力取决于互补程度以及反义核酸的长度。一般而言，杂交核酸越大，则其含有与Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R错配的碱基越多，并且仍可形成稳定的双链体(或者是三链体)。本领域人员用标准方法可以确定可接受的错配程度，以便确定杂交复合物的解链温度。
与信使RNA的5’末端例如5’直到并包括AUG起始密码子的非翻译序列互补的寡核苷酸应当对抑制翻译有着最为有效的作用。但是，与mRNA的3’非翻译序列互补的序列已经显示出也能有效地抑制mRNA的翻译。一般见于Wagner，R.，1994，Nature 372：333-335。因此，与Neutrokine-α(SEQID NO：1)、APRIL(SEQ ID NO：3)、TACI(SEQ ID NO：5)、BCMA(SEQ IDNO：7)或BAFF-R(SEQ ID NO：9)的5’或3’非翻译的、无编码区互补的寡核苷酸可以用于反义方法，以便抑制内源性Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R mRNA的翻译。与mRNA的5’非翻译区互补的寡核苷酸应当包括AUG起始密码子的互补物。与mRNA编码区互补的反义寡核苷酸是翻译的较为无效的抑制剂，但是也可以用于本发明的方法。无论是否被设计成与Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-RmRNA的5’、3’或编码区杂交，反义核酸应当至少为6个核苷酸长度，优选地是长度从6到约50个核苷酸的寡核苷酸。在特殊的方面，寡核苷酸是至少10个核苷酸、至少17个核苷酸、至少25个核苷酸或者至少50个核苷酸。
可以用于本发明方法中的多核苷酸可以是单链的或双链的DNA或RNA或其嵌合混合物或衍生物或修饰形式。可以在碱基部分、糖部分或磷酸骨架上修饰寡核苷酸，以便例如提高分子杂交的稳定性等。寡核苷酸可以包括其他额外的基团例如肽(例如用于在体内靶向于宿主细胞受体)或促进转运经过细胞膜的制剂(见例如Letsinger et al.，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86：6553-6556；Lemaitre et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.84：648-652(1987)；1988年12月15日出版的PCT出版物WO88/09810)、或转运经过血脑屏障的制剂(见例如1988年4月25日出版的PCT出版物WO89/10134)、杂交靶向裂解剂(见例如Krol et al.，BioTechniques 6：958-976(1988))或嵌入剂(见例如Zon，Pharm.Res.5：539-549(1988))。为此，寡核苷酸可以与另一种分子例如肽、杂交靶向交联剂、转运剂、杂交靶向裂解剂等缀合。
可以用于本发明方法中的反义寡核苷酸可以包括至少一个经修饰的碱基部分，其选自包括但不限于5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧羟甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨甲基-2-硫脲苷、5-羧甲基氨甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-羟乙酸(v)、wybutoxosine、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、(acp3)w、和2，6-二氨基嘌呤的组。
可以用于本发明方法中的反义寡核苷酸也可以包括至少一个选自包括但不限于阿拉伯糖、2-氟阿拉伯糖、木酮糖、和己糖的组中的修饰糖基。
在仍另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的反义寡核苷酸包括至少一个选自包括但不限于磷硫酰、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、氨基磷酸酯、二氨基磷酸酯、甲基膦酸酯(methylphosphonate)、烷基磷酸三酯和formacetal或其类似物的组中的修饰磷酸骨架。
在仍另一个实施方式中，可以用于本发明方法中的反义寡核苷酸是α异头寡核苷酸。α异头寡核苷酸与互补RNA形成了特殊的双链杂合体，其中与常见的β单元不同的是，所述链彼此相互平行(Gautier et al.，Nucl.Acids Res.15：6625-6641(1987))。寡核苷酸是2-0-甲基核糖核苷(Inoue et al.，Nucl.Acids Res.15：6131-6148(1987))或嵌合的RNA-DNA类似物(Inoue etal.，FEBS Lett.215：327-330(1997))。
用本领域已知的标准方法例如使用自动化的DNA合成仪(例如可以购自Biosearch，Applied Biosystems等)可以合成可以用于本发明方法中的多核苷酸。例如，用Stein等的方法(Nucl.Acids Res.16：3209(1988))可以合成硫代磷酸酯寡核苷酸，利用可控多孔玻璃聚合物支持(Sarin et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：7448-7451(1988))可以制备出甲基膦酸酯寡核苷酸等。
虽然可以使用与Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R编码区序列互补的反义核苷酸，与转录的非翻译区互补的那些反义核苷酸对于本发明方法中是最优选的。
在一个具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的Neutrokine-α拮抗剂也包括针对Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的催化性RNA或核酶(见例如1990年10月4日出版的PCT国际出版物WO90/11364；Sarver et al，Science 247：1222-1225(1990))。虽然可以用在特殊识别序列的位点上裂解mRNA的核酶破坏Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R mRNA，锤头状核酶在本发明方法中是优选的。锤头状核酶在与靶mRNA形成互补碱基对的侧向区所指示的部位裂解mRNA。唯一的要求是靶mRNA具有以下的两个碱基的序列：5′-UG-3′。锤头状核酶的构建和生成是本领域公知的，并在Haseloff and Gerlach，Nature 334：585-591(1988)中更好的阐述。在Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的核苷酸序列中有着多个潜在的锤头状核酶的裂解位点。优选地，核酶被遗传工程化成使得裂解识别位点位于接近于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R mRNA的5’末端的位置，即增加了效率并使得无功能的mRNA转录体的细胞内蓄积最小化。
和反义方法一样，可以用于本发明方法中的核酶可以是由修饰寡核苷酸组成的(例如用于提高稳定性、靶向性等)，其应当在体内被转运到表达Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的细胞内。用与上述的引入反义编码DNA的方式相同的方式可以将编码核酶的DNA引入到细胞内。优选的转运方法涉及使用在强的组成型启动子例如polIII或polII启动子控制下的编码核酶的DNA构建提，使得转染细胞生成足够量的核酶，以便破坏内源性Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R信使并抑制翻译。因为核酶与反义分子不同的是其是催化性的，因此起效只需要更低的细胞内浓度。
在一个具体的实施方式中，针对Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的短干扰RNA可以用于本发明方法中。可以用siRNA技术通过诱导细胞RNA诱导的沉默复合物(RISC)来控制基因表达。例如在Hamilton AJ and Baulcombe DC.Science.1999 Oct 29；286(5441)：950-2；Elbashir SM，et al.Nature.2001 May 24；411(6836)：494-8和Hanon，Gregory J.and Rossi，John J.Nature 431，371-378(2004)讨论了siRNA技术。方法依据于向细胞内引入短的双链RNA(一般是20到25个核苷酸)。双链RNA是未伸展的，每条链都是分离的。然后单链RNA将被整合到RISC内。然后RISC指导进行序列特异性的mRNA降解，造成了翻译抑制。例如，可以用编码Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R多肽的多核苷酸的编码部分设计出长度约为20到25个核苷酸的siRNA寡核苷酸。用近20到25个核苷酸片段、近9个核苷酸的分隔物以及所选的寡核苷酸片段的反向互补物涉及出DNA寡核苷酸。预计从此构建体中生成的RNA转录体将自我折叠形成发夹环。发夹环RNA向细胞内的转运造成了RNA酶的加工处理，生成了短的双链siRNA。该siRNA的一条链向RISC效应物复合体内的整合造成了siRNA所靶向的mRNA的降解，抑制了Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的生成。
在一个实施方式中，通过外源性序列的转录在细胞内生成了可以用于本发明方法中的Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R siRNA核酸。例如，转录出载体或其一部分，生成了可以用于本发明方法中的siRNA。这种载体含有编码Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R siRNA核酸的序列。通过本领域标准的重组DNA技术方法可以构建出这些载体。载体可以是可以在脊椎动物细胞内复制并表达的质粒载体、病毒载体或本领域已知的其他载体。通常利用RNA聚合酶III启动子(例如U6或H1)实现编码Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R siRNA的转录，所述启动子常常指导小核RNA(snRNA)的转录。
B细胞调节剂
除了表达Neutrokine-α和APRIL的受体外，B淋巴细胞还表达多种细胞表面分子，所述分子的作用为告知B细胞细胞外微环境的情况，以及作为正向或负向地调节B细胞功能和生存的跨膜信号。在这些受体中，CD19、CD20和CD22已经被鉴定为治疗干预的有希望的靶点。
CD20是膜内在蛋白，其在作为钙离子通道的复合体中发挥作用。CD20钙离子通道的抑制剂破坏了Ca2+内平衡和细胞周期进程。在一个具体的实施方式中，抗CD20抗体可以用于本发明方法中。在一个优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗CD20
Figure A200680047110D01281
(利妥昔单抗)。在另一个优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗CD20抗体是TRU-015。在另一个优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗CD20抗体是ocrelizumab(PRO70769)。在另一个优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗CD20抗体是IMMU-106。在另一个优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗CD20抗体是HuMax-CD20。
CD22是见于多种细胞包括B淋巴细胞中的唾液酸结合蛋白的siglec家族的成员。CD22和多种顺式和反式糖配体的相互作用造成了对B细胞发育、增殖和活化的多个方面的调节。在一个具体的实施方式中，抗CD22抗体可以用于本发明方法中。在一个优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的抗CD22抗体是epratuzumab。
其他免疫调节剂
在一个具体的实施方式中，可以用一种或多种以下药物来实践本发明的方法：骁悉(麦考酚酸莫酯；MMF、
Figure A200680047110D01282
(abatacept；CTLA4-Ig)、RiquentTM(阿贝莫司钠；LJP 394)、PrestaraTM(praserone)、Edratide(TV-4710)、(tocilizumab；atlizumab)、VX-702、TRX 1、IPP-201101、ABR-215757、鞘氨醇-1-磷酸酯-1(sphingosine-1-phosphate-1，S1P1)激动剂、HuMax-InflamTM(MDX 018)、MEDI-545(MDX-1103/1333)、
Figure A200680047110D01284
脱氧精胍菌素(Deoxyspergualin)、ENBRELTM(Etanercept)、抗TNF抗体、抗干扰素α抗体。
患者人群
在此所述的数据来自临床试验，其中狼疮患者接受了中和Neutrokine-α蛋白的抗体的治疗，这显著地缓解了具有ANA滴度为1:80或更高、和/或抗dsDNA大于或等于30IU/mL的患者中与狼疮相关的症状(实施例1)。令人惊讶的是，与临床试验所入选的整个患者人群不同，只有在一亚组患者中得到了测定疾病活动度的临床终点(例如SELENA SLEDAI评分的降低，下面有更详细的解释)的显著改善。因此，本发明涉及鉴定出最可能应答于免疫调节剂例如Neutrokine-α拮抗剂治疗的患者亚组。
另外，系统性红斑狼疮(SLE)在此是一种极为异质性的疾病，其难以被准确地诊断，因为患者可能有多种症状以及多种与狼疮相关的症状也可见于大量其他的自身免疫性疾病的事实。因此，本发明的一个实施方式提供了治疗ANA滴度为1:80或更高、和/或其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂，无论疾病的诊断如何。本发明的另一个实施方式提供了治疗ANA滴度为1:80或更高、和/或其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的或在此所述的其他免疫调节剂，无论疾病的诊断如何；还包括在施用免疫调节剂之前确定ANA滴度为1:80或更高、和/或其血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者。
在进一步的实施方式中，ANA滴度为1:80或更高、和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者患有非SLE的自身免疫病。在进一步的实施方式中，ANA滴度为1:80或更高、和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者患有类风湿关节炎。在进一步的实施方式中，ANA滴度为1:80或更高、和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者患有干燥综合征。在进一步的实施方式中，ANA滴度为1:80或更高、和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者患有硬皮病。在进一步的实施方式中，ANA滴度为1:80或更高、和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者患有多发性肌炎-皮肌炎。在进一步的实施方式中，ANA滴度为1:80或更高、和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者患有Felty综合征。在进一步的实施方式中，ANA滴度为1:80或更高、和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者患有混合结缔组织病。在进一步的实施方式中，ANA滴度为1:80或更高、和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者患有雷诺综合征。在进一步的实施方式中，ANA滴度为1:80或更高、和/或血浆或血清中抗dsDNA抗体大于或等于30IU/mL的患者患有幼年型慢性关节炎。
此外，值得注意的是，在两个用中和Neutrokine-α蛋白的抗体治疗患有系统性红斑狼疮和类风湿关节炎患者的2期临床试验(见，实施例1和3)中，发现具有基线自身抗体阳性疾病的患者更可能应答于治疗。基线ANA滴度为1:80或更高、和/或抗dsDNA大于或等于30IU/mL的SLE患者比其ANA滴度小于1:80以及其抗dsDNA抗体水平小于30IU/mL的SLE患者显示出更强的应答。同样，在类风湿关节炎中，观察到基线类风湿因子(RF)或抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体阳性的患者比基线类风湿因子(RF)或抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体阴性的患者显示出更强的应答。
因此，在本发明的另一个方面，提供了治疗基线类风湿因子(RF)或抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体阳性的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的和/或在此所述的其他免疫调节剂，无论疾病诊断如何。本发明的另一个实施方式提供了治疗基线类风湿因子(RF)或抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体阳性的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的和/或在此所述的其他免疫调节剂，无论疾病诊断如何；以及在施用免疫调节剂之前确定基线类风湿因子(RF)或抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体阳性的患者。在具体实施方式中，如果患者的血浆和/或血清中类风湿因子≥12IU/ml，则认为患者的类风湿因子阳性。在具体实施方式中，如果患者的血浆和/或血清中抗CCP抗体≥10单位，则认为患者的抗CCP抗体阳性。
在本发明的进一步的方面，提供了治疗基线自身抗体阳性的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的和/或在此所述的其他免疫调节剂，而无论疾病诊断如何。本发明的另一个实施方式提供了治疗基线自身抗体阳性的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂或本领域已知的和/或在此所述的其他免疫调节剂，而无论疾病诊断如何；以及在施用免疫调节剂之前确定基线自身抗体阳性的患者。
制备免疫调节剂
制备和/或分离可以用于本发明的免疫调节剂的方法对于相关领域的熟练人员是已知的。下面，简要地复习了可获得的用于制备性质上为蛋白源性的免疫调节剂(例如抗Neutrokine-α抗体、Neutrokine-α结合肽和多肽、Neutrokine-α受体蛋白以及上面提及的多肽的片段和变体)的方法。
在一个实施方式中，将编码免疫调节蛋白的多核苷酸插入到载体(例如克隆载体或表达载体)内。载体例如可以是噬菌体、质粒、病毒或逆转录病毒载体。逆转录病毒载体可以是能复制的或复制缺陷的。在后一情况中，一般只有在互补的宿主细胞内才会发生病毒繁殖。编码免疫调节蛋白的多核苷酸可以与含用于在宿主内繁殖的选择标记物的载体相连接。通过本领域已知的技术可以实现载体构建体向宿主细胞内的引入，所述技术包括但不限于磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、感染或其他方法。在多种标准的实验手册例如Daviset al.，Basic Methods In Molecular Biology(1986)中都描述了这些方法。
重组表达载体一般都包括复制起点和容许转化宿主细胞的选择标记物例如大肠杆菌的氨苄青霉素耐药基因和酿酒酵母TRP1基因、指导下游结构序列转录的源自高表达基因的启动子。这些启动子可以源自编码糖酵解酶例如3-磷酸甘油酯激酶(PGK)、α-因子、酸性磷酸酶、或热休克蛋白等的操纵子。装配合适状态的异源结构序列和翻译起始及终止序列、以及优选的能够指导翻译蛋白分泌到原生质周围间隙或细胞外介质中的前导序列。任选地，异源序列可以编码融合蛋白，包括N末端的传递所需表征例如稳定或简化所表达的重组产物的纯化的鉴定肽。
在一个实施方式中，编码免疫调节蛋白的多核苷酸与合适的异源调节元件(例如启动子或增强子)如噬菌体λPL启动子、大肠杆菌lac、trp、phoA、tac启动子、SV40早期和晚期启动子和逆转录病毒LTR的启动子可操纵地相连。其他合适的启动子对于本领域人员是已知的。
如上所述，表达载体优选地包括至少一个选择标记物。这些标记物包括真核细胞培养的二氢叶酸还原酶、G418或新霉素耐药基因以及大肠杆菌和其他细菌培养的卡那霉素或氨苄青霉素耐药基因。合适宿主的代表性实例包括但不限于细菌细胞例如大肠杆菌、链霉菌和鼠伤寒沙门氏菌细胞；真菌细胞例如酵母菌细胞(例如酿酒酵母或毕赤酵母(ATCC编号201178))；昆虫细胞例如Drosophila S2和Spodoptera Sf9细胞；动物细胞例如CHO、COS 293和Bowes黑色素瘤细胞；和植物细胞。上述宿主细胞的合适的培养基和培养条件在本领域是已知的。
宿主细胞可以是更高等的真核细胞例如哺乳动物细胞(例如人源细胞)或耕地等的真核细胞例如酵母细胞、或者宿主细胞可以使原核细胞例如细菌细胞。可以选出宿主菌株，其按所需的特殊方式调控所插入的基因序列的表达，或修饰并处理基因产物。在存在特定的诱导剂时，可以提高特定启动子的表达；因此可以控制遗传工程化过的多肽的表达。此外，不同的宿主细胞具有翻译和翻译后加工和修饰(例如磷酸化、裂解)蛋白的特征性的和特殊的机制。可以选择合适的细胞系，以保证所需的对所表达的外来蛋白的修饰和加工处理。对用于在宿主细胞中的表达的合适的载体和启动子的选择是公知的方法，对于表达载体构建、向宿主内引入载体以及宿主内的表达的必要技术都是本领域的常规技术。
通过插入与功能性启动子处于可操纵阅读相的编码所需蛋白的结构性DNA序列连同合适的翻译起始和终止信号构建出用于细菌的表达载体。载体将包括一个或多个表型选择标记物和复制起点，以保证维持载体，以及如果需要则提供载体在宿主内的扩增。用于转化的合适的原核细胞宿主包括大肠杆菌、枯草杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和假单胞菌属、链霉菌属和葡萄球菌属内的不同菌种，尽管也可以选择其他的宿主细胞。作为代表性的但不受限的实例，用于细菌的表达载体可以包括源自商品化可获得的质粒中的选择标记物和细菌的复制起点，所述质粒包括公知的克隆载体pBR322(ATCC 37017)的遗传元件。这些商品化的载体包括例如pKK223-3(Pharmacia Fine Chemicals，Uppsala，Sweden)和GEM1(Promega Biotec，Madison，WI，USA)。这些pBR322“骨架”部分与合适的载体以及所表达的结构序列相组合。在优选用于细菌的载体中，包括pHE4-5(ATCC编码No.209311及其变体)、pQE70、pQE60和pQE-9，购自QIAGEN，Inc.，supra；pBS载体、Phagescript载体、Bluescript载体、pNH8A、pNH16a、pNH18A、pNH46A，购自Stratagene；和ptrc99a、pKK223-3、pKK233-3、pDR540、pRIT5，购自Pharmacia；pYES2、pYD1、pTEF1/Zeo、pYES2/GS、pPICZ、pGAPZ、pGAPZalpha、pPIC9、pPIC3.5、pHIL-D2、pHIL-S1、pPIC3.5K、pPIC9K、和PAO815(所有都购自Invitrogen，Carlsbad，CA)。优选的真核载体是pWLNEO、pSV2CAT、pOG44、pXT1和pSG，购自Stratagene；和pSVK3、pBPV、pMSG和pSVL(购自Pharmacia)。其他合适的载体对于本领域人员是显而易见的。
在转化了合适的宿主株以及宿主株生长到合适的细胞密度之后，用合适的方式(例如温度变化或化学诱导)诱导选择性启动子，再培养细胞一段时间。通常通过离心收集细胞，用物理或化学方法破坏细胞，保留所生成的粗提取物进行进一步的纯化。
可以用任一便利的方法包括冻融循环、超声、机械破坏、或应用细胞裂解剂破坏表达蛋白所采用的微生物细胞。这些方法对于本领域人员是公知的。
在一个实施方式中，用酵母菌毕赤酵母在真核系统中表达Neutrokine-α蛋白。毕赤酵母是一种嗜甲基酵母，其可以将甲醇代谢为其唯一的碳源。在甲醇代谢途径中的主要步骤是利用氧气将甲醇氧化成甲醛。这个反应是受酶醇氧化酶所催化的。为了将甲醇代谢为其唯一的碳源，毕赤酵母必须生成高水平的纯氧化酶，部分原因是因为醇氧化酶对氧气的相对低的亲和力。因此，在依赖甲醇作为主要碳源的生长培养基中，两个醇氧化酶基因(AOX1)其中之一的启动子区是高度活化的。在存在甲醇时，从AOX1基因生成的醇氧化酶占到了毕赤酵母中总可溶性蛋白的近30％。见，Ellis，S.B.，et al.，Mol.Cell.Biol.5：1111-21(1985)；Koutz，P.J，et al.，Yeast 5：167-77(1989)；Tschopp，J.F.，et al.，Nucl.Acids Res.15：3859-76(1987)。因此，在生长在甲醇中的毕赤酵母中，受所有或部分AOX1调节序列的转录调节下的异源编码序列是异常高水平表达的。
在一个实例中，在基本上如＂Pichia Protocols：Methods in MolecularBiology，＂D.R.Higgins and J.Cregg，eds.The Humana Press，Totowa，NJ，1998所述的毕赤酵母系统中，用质粒载体pPIC9K表达编码在此定义的免疫调节蛋白或其部分的DNA。通过与位于多个克隆位点上游的毕赤酵母碱性磷酸酶(PHO)分泌信号肽(即前导序列)相连的强AOX1启动子的作用，该表达载体容许表达并分泌免疫调节蛋白。
本领域人员容易明白，可以用多种其他的酵母载体取代pPIC9K，例如pYES2、pYD1、pTEF1/Zeo、pYES2/GS、pPICZ、pGAPZ、pGAPZα、pPIC9、pPIC3.5、pHIL-D2、pHIL-S1、pPIC3.5K、和PAO815；只要所提出的表达构建体提供了用于转录、翻译、分泌(如果需要)等的合适定位的信号，包括所需的框内AUG。
在一个实施方式中，通过将本发明的异源多核苷酸克隆到表达载体例如pGAPZ或pGAPZα中并容许在没有甲醇的条件下生长酵母培养物可以获得异源编码序列的高水平表达。
通过将增强子序列加入到载体内就增加了高等真核细胞转录编码免疫调节蛋白的DNA。增强子是DNA的顺式作用元件，一般是从约10到300bp，其作用于启动子以增加其转录。实例包括复制起点后侧100bp到270bp处的SV40增强子、巨细胞病毒早期启动子增强子、复制起点后侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子。
也可以用各种哺乳动物细胞培养系统表达重组蛋白。哺乳动物表达系统的实例包括Gluzman(Cell 23：175(1981))所述的猴肾成纤维细胞的COS-7细胞系，和其他能够表达兼容载体的细胞系例如C127、3T3、CHO、HeLa和BHK细胞系。哺乳动物表达载体包括复制起点、合适的启动子和增强子、也包括任何必需的核糖体结合位点、多腺苷酸化位点、剪切供体和受体位点、转录终止序列、和5’侧的非转录序列。可以用源自SV40剪切体的DNA序列和多腺苷酸化位点提供所需的非转录的遗传元件。
在一个具体的实施方式中，使用被设计成表达免疫调节蛋白的一部分例如Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA和BAFF-R)的细胞外区的构建体。本领域一些熟练人员能够使用分别为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8或分别为SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10的多核苷酸或多肽设计出多核苷酸引物，以生成这种表达构建体。
宿主细胞被用于表达编码免疫调节蛋白的多核苷酸。这些宿主细胞包括脊椎动物来源的，特别是哺乳动物来源的原代的、次级的和永生的宿主细胞。在一些情况中，宿主细胞已经被遗传工程化成缺失或取代了内源性遗传材料(例如Neutrokine-α编码序列)和/或包括遗传材料(例如异源性多核苷酸序列)。在一些情况中，宿主细胞被修饰成启动和/或改变编码免疫调节蛋白的内源性多核苷酸的表达。例如，可以用本领域已知的技术通过同源重组可操纵地连接异源控制区(例如启动子和/或增强子)和内源性多核苷酸序列(见例如1997年6月24日提交的美国专利5,641,670；1996年9月26日出版的国际出版物WO 96/29411；1994年8月4日出版的国际出版物WO 94/12650；Koller et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：8932-8935(1989)；and Zijlstra et al.，Nature 342：435-438(1989)；在此通过引用将其全部内容并入本申请)。
可以用传统的方式使用在此所述的细胞来生成免疫调节蛋白。或者，也可以利用源自本发明的DNA构建体的RNA，采用无细胞翻译系统来生成免疫调节蛋白。
可以表达或合成修饰形式的所需的阅读框AUG，例如融合蛋白(包括经肽键与(不同蛋白的)异源蛋白序列相连的多肽)，不仅可以包含分泌信号，还可以包含额外的异源功能区。用本领域已知的方法通过将编码免疫调节蛋白的多核苷酸和编码所需的氨基酸序列的所需核酸序列彼此连接在合适的阅读框内，并用本领域已知的方法表达融合蛋白产物可以制备出这种融合蛋白。或者，通过蛋白合成技术例如通过使用肽合成仪可以制备出这种融合蛋白。因此，例如，可以向多肽的N末端加入额外的氨基酸区，特别是带电荷的氨基酸，以提高在宿主细胞内、纯化期间、或随后的操作和储存期间的稳定性和持久性。也可以将肽基序加入到多肽内，以促进纯化。可以在最终制备出多肽之前去除这些区域。向多肽内添加肽基序以引发分泌或排泄、提高稳定性和促进纯化等都是本领域常用的和常规的技术。
在一个实施方式中，编码免疫调节蛋白的多核苷酸可以与信号序列融合，所述信号序列将指导免疫调节蛋白定位于原核或真核细胞的特殊的隔室内和/或指导免疫调节蛋白从原核或真核细胞内分泌出来。例如，在大肠杆菌中，希望指导蛋白被分泌到原生质周间隙内。可以与本发明的多肽融合以便指导多肽表达到细菌的原生质周间隙内的信号序列或蛋白(或其片段)的实例包括但不限于pelB信号序列、麦芽糖结合蛋白(MBP)信号序列、MBP、ompA信号序列、原生质周的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基的信号序列和碱性磷酸酶的信号序列。可以商品化获得一些用于构建指导蛋白定位的融合蛋白的载体，例如New England Biolabs的pMAL载体系列(特别是pMAL-p系列)。在一个具体的实施方式中，编码免疫调节蛋白的多核苷酸可以与pelB果胶酶信号序列融合，以增加这些多肽在革兰阴性细菌中的表达和纯化的效率。见，美国专利5,576,195和5,846,818，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
可以与免疫调节蛋白融合以便指导所述蛋白在哺乳动物细胞中的分泌的信号肽的实例包括但不限于MPIF-1信号序列(GenBank编号AAB51134的第1到21位氨基酸)、斯钙素(stanniocalcin)信号序列(MLQNSAVLLLLVISASA，SEQ ID NO：27)、和共有信号序列(MPTWAWWLFLVLLLALWAPARG，SEQ ID NO：28)。可以结合颗粒症病毒表达系统一起使用的合适的信号序列是gp67信号序列(GenBank编号AAA72759的第1到19位氨基酸)。
优选的融合蛋白包括来自免疫球蛋白的异源区，其用于稳定并纯化蛋白。例如，EP-A-O 464 533(对应于加拿大2045869)阐述了包括免疫球蛋白分子恒定区的不同部分以及另一种人类蛋白或其部分的融合蛋白。在很多情况中，融合蛋白中的Fc部分非常适用于治疗和诊断，并因此造成了改善的药物动力学性能(EP-A 0232 262)。另一方面，对于某些应用而言，需要在以在此所述的有利的方式表达、检测并纯化出融合蛋白之后能够缺失Fc部分。当Fc部分被证实其对用于治疗和诊断是妨碍时就是这种情况，例如当融合蛋白被用作免疫接种的抗原时。在药物研发中，例如人类蛋白如hIL-5已经与Fc部分融合，以便用高通量筛选检测法鉴定出hIL-5的拮抗剂。见D.Bennett et al.，J.Molecular Recognition 8：52-58(1995)和K.Johanson et al.，J.Biol.Chem.270：9459-9471(1995)。
可以用于本发明方法中的免疫调节蛋白包括天然纯化产物、化学合成方法的产物、和经重组技术从原核或真和宿主中生成的产物，所述宿主包括例如细菌、酵母菌、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞。根据在重组生产方法中所采用的宿主细胞的不同，免疫调节蛋白可以被糖基化或者可以未被糖基化。另外，免疫调节蛋白也可以包含初始的修饰甲硫氨酸残基，在一些情况中这是宿主介导的加工处理的结果。
利用本领域已知的技术可以化学合成可以用于本发明方法中的免疫调节蛋白(例如见Creighton，1983，Proteins：Structures and Molecular Principles，W.H.Freeman & Co.，N.Y.，and Hunkapiller，M.，et al.，1984，Nature 310：105-111)。例如，利用肽合成仪可以合成对应于免疫调节蛋白的一个片段的肽。此外，如果需要，还可以向编码免疫调节蛋白的多核苷酸序列中作为取代或添加的氨基酸来引入非常用的氨基酸或化学氨基酸类似物。非常用的氨基酸包括但不限于常用氨基酸的D-异构体、2，4-二氨基丁酸、a-氨基异丁酸、4-氨基丁酸、Abu、2-氨基丁酸、g-Abu、e-Ahx、6-氨基己酸、Aib、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、丙氨酸环己酯、b-丙氨酸、氟氨基酸、设计者氨基酸例如b-甲基氨基酸、Ca-甲基氨基酸、Na-甲基氨基酸、和一般的氨基酸类似物。此外，氨基酸可以是D(右旋)或L(左旋)体。
在翻译期间或之后可以不同地修饰可以用于本发明方法中的免疫调节蛋白，例如糖基化、乙酰化、磷酸化、氨酰化、已知保护性/封闭性基团的衍生化、蛋白裂解性降解、与抗体分子或其他细胞配体的连接等。用已知的技术可以实现所有的多种化学修饰，所述技术包括但不限于溴化氰、胰蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜酶、V8蛋白酶、NaBH4的特殊的化学降解、甲酰化作用、氧化作用、还原作用、存在衣霉素时的代谢性合成。
额外的翻译后修饰包括例如N-连接或O-连接的糖链、N末端或C-末端的加工处理、化学部分与氨基酸骨架的附着、N连接或O连接的糖链的化学修饰、以及原核宿主细胞表达所造成的N末端甲硫氨酸残基的添加或缺失。也可以用可检测标记例如酶的、荧光的、放射性同位素的或亲和的标记修饰多肽，以便容许检测并分离蛋白。
合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合物的实例包括抗生物素蛋白链菌素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合适的荧光物质的实例包括生物素、伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、dichlorotriazinylamine荧光素、氯化丹酰或藻红蛋白；发光物质的实例包括鲁米诺；生物发光物质的实例包括萤光素酶、萤光素、和水母素；合适的放射性物质的实例包括放射性金属离子例如α粒子辐射剂例如213Bi、或其他放射性同位素例如碘(131I、125I、123I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(115mIn、113mIn、112In、111In)、和锝(99Tc、99mTc)、铊(201Ti)、鎵(68Ga、67Ga)、钯(103Pd)、钼(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、和117锡。
在具体的实施方式中，可以用铕标记可以用于本发明方法中的免疫调节蛋白。例如，依据产品说明书，可以利用DELFIA Eu标记试剂盒(目录号# 1244-302，Perkin Elmer Life Sciences，Boston，MA)用铕标记免疫调节蛋白(例如Neutrokine-α拮抗剂)。
在具体的实施方式中，免疫调节蛋白(例如)与大环螯合剂相附着，所述大环螯合剂用于将放射性金属离子，包括但不限于111In、177Lu、90Y、166Ho、和153Sm，缀合于多肽。在一个优选的实施方式中，与附着于免疫调节剂的大环螯合剂相连的放射性金属离子是111In。在另一个优选的实施方式中，与附着于免疫调节剂的大环螯合剂相连的放射性金属离子是90Y。在具体的实施方式中，大环螯合剂是1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N＂，N″′-四乙酸(1，4，7，10-tetraazacyclododecane-N，N′，N＂，N″′-tetraaceticacid，DOTA)。在其他具体的实施方式中，DOTA经连接物分子与免疫调节蛋白相附着。用于缀合DOTA和多肽的连接物分子是本领域常见的，见例如DeNardo et al.，Clin Cancer Res.4(10)：2483-90，1998；Peterson et al.，Bioconjug.Chem.10(4)：553-7，1999；和Zimmerman et al，Nucl.Med.Biol.26(8)：943-50，1999，在此通过引用将其全部内容并入本申请。另外，美国专利5,652,361和5,756,065阐述了可以与抗体相缀合的螯合剂以及制备并使用所述螯合剂的方法，在此通过引用将其内容并入本申请。尽管美国专利5,652,361和5,756,065集中于螯合剂和抗体的缀合作用，本领域人员容易采用在此所述的方法来缀合螯合剂和其他多肽。
在一个实施方式中，可以用生物素标记可以用于本发明方法中的免疫调节蛋白。
可以提供附加优点例如增加多肽的可溶性、稳定性以及体内或体外循环时间或者降低免疫原性(见美国专利4,179,337)的免疫调节蛋白的化学修饰衍生物也可以用于本发明方法中。用于衍生化的化学部分可以选自水溶性聚合物例如聚乙二醇、乙烯乙二醇/丙烯乙二醇共聚体、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇等。可以在分子内的随机位置或者在分子内的预定位置修饰多肽，所述多肽可以包括1、2、3或更多个相连的化学部分。
聚合物可以是任一分子量，可以是分支的或不分支的。对于聚乙二醇而言，为了操作和生产的便利性，优选的分子量是约1kDa和约100kDa之间(术语“约”表示在聚乙二醇制剂中，一些分子可能要比给定的分子量更重，一些分子可能更轻)。可以使用其他的尺寸，取决于所需的治疗谱(例如所需的持续释放的持续时间、作用、任何对生物学活性方面的作用、操作的便利性、抗原性的程度和缺乏以及聚乙二醇对治疗蛋白或类似物的其他已知的作用)。例如，聚乙二醇的平均分子量可以约为200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、50,000、55,000、60,000、65,000、70,000、75,000、80,000、85,000、90,000、95,000、或100,000kDa。
如上所述，聚乙二醇可以具有分支结构。例如在美国专利5,643,575；Morpurgo et al.，Appl.Biochem.Biotechnol.56：59-72(1996)；Vorobjev et al.，Nucleosides Nucleotides 18：2745-2750(1999)；和Caliceti et al.，Bioconjug.Chem.10：638-646(1999)中已经描述了分支的聚乙二醇，在此通过引用将其全部内容并入本申请。
应当根据其对蛋白的功能区或抗原区的作用来连接聚乙二醇分子(或其他化学部分)和蛋白。本领域人员可以得到多种连接方法，例如EP 0 401384，在此通过引用将其并入本申请(结合PEG和G-CSF)，也见于Malik etal.，Exp.Hematol.20：1028-1035(1992)(报道了利用三氟乙基磺酰氯(tresylchloride)将GM-CSF聚乙二醇化)。例如，通过反应基团例如游离的氨基或羧基，聚乙二醇可以与氨基酸残基共价结合。反应基团是那些活性聚乙二醇分子可以结合的基团。具有游离氨基的氨基酸残基可以包括例如赖氨酸和N末端的氨基酸残基；那些具有游离羧基的氨基酸残基可以包括天冬氨酸残基、谷氨酸残基以及C末端的氨基酸残基。巯基也可以用作连接聚乙二醇分子的反应基团。治疗性目的所优选的是氨基连接，例如N末端或赖氨酸的氨基连接。
如上所提示的那样，聚乙二醇可以通过与任何氨基酸残基的连接与蛋白相连接。例如，聚乙二醇可以通过与赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸残基的共价键与蛋白相连接。可以采用一个或多个反应化学物连接聚乙二醇和蛋白的特殊的氨基酸残基(例如赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸)或者蛋白的一种以上类型的氨基酸残基(例如赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸及其组合)。
可以特殊地要求在N末端化学修饰蛋白。利用聚乙二醇作为举例说明，可以从多种聚乙二醇分子中选出聚乙二醇(根据分子量、分支等)、可以选择反应混合物中的聚乙二醇分子与蛋白(或肽)分子的比例、所进行的聚乙二醇化反应的类型、以及获得所选的N末端聚乙二醇化蛋白的方法。获得N末端聚乙二醇制剂的方法(即如果需要将该基序与其他单聚乙二醇化的基序分离开)可以是从聚乙二醇化蛋白分子群中纯化出N末端聚乙二醇化的物质。通过利用了在具体蛋白质中可用于衍生化的不同类型的伯氨基(赖氨酸对N末端氨基酸)的不同的反应性的还原性烷基化可以实现在N末端修饰中被化学修饰的选择性蛋白。在合适的反应条件下，实现了含羰基聚合物在N末端对蛋白的基本上选择性的衍生化。
如上所述，用多种方法都可以实现对本发明蛋白的聚乙二醇化。例如，聚乙二醇可以直接地或者通过插入连接物与蛋白相连接。在Delgadoet al.，Crit.Rev.Thera.Drug Carrier Sys.9：249-304(1992)；Francis et al.，Intern.J.of Hematol.68：1-18(1998)；美国专利4,002,531；美国专利5,349,052；WO 95/06058；和WO 98/32466中描述了用于连接聚乙二醇和蛋白的无连接物系统，在此通过引用将其内容并入本申请。
用于无插入连接物直接连接聚乙二醇和蛋白的氨基酸残基的一个系统采用了三氟乙基磺酰化的MPEG，这是通过用三氟乙基磺酰氯(tresylchloride)(ClSO2CH2CF3)修饰单甲氧基聚乙二醇(MPEG)生成的产物。在用三氟乙基磺酰化的MPEG与蛋白反应之后，聚乙二醇与蛋白的氨基直接相连。因此，发明包括通过本发明的蛋白与具有2，2，2-三氟乙基磺酰基的聚乙二醇分子的反应生成的蛋白-聚乙二醇缀合物。
也可以利用不同的插入连接物连接聚乙二醇和蛋白。例如，美国专利5,612,460(在此通过引用将其内容并入本申请)阐述了用于连接聚乙二醇和蛋白的氨基甲酸酯连接物。通过蛋白和化合物例如MPEG-琥珀酰亚胺基丁二酸酯(MPEG-succinimidylsuccinate)、经1，1′-羰二咪唑活化的MPEG、MPEG-2，4，5-三氯苯基碳酸酯(MPEG-2，4，5-trichloropenylcarbonate)、MPEG-对硝基酚碳酸酯(MPEG-p-nitrophenolcarbonate)和各种MPEG-琥珀酸衍生物的反应也可以生成其中经连接物连接聚乙二醇和蛋白的蛋白-聚乙二醇缀合物。在WO 98/32466中描述了多种额外的用于连接聚乙二醇和蛋白的聚乙二醇衍生物和反应化学物，在此通过引用将其全部内容并入本申请。利用在此给出的反应化学物生成的聚乙二醇化的蛋白产物包含在本发明的范围之内。
与本发明的每种蛋白相连的聚乙二醇基序的数目(即取代程度)也可以有所不同。例如，本发明的聚乙二醇蛋白可以连接平均1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、17、20、或更多个聚乙二醇分子。同样，平均取代程度是在例如每个蛋白分子1-3、2-4、3-5、4-6、5-7、6-8、7-9、8-10、9-11、10-12、11-13、12-14、13-15、14-16、15-17、16-18、17-19、或18-20个聚乙二醇基序的范围之内。在Delgado et al.，Crit.Rev.Thera.DrugCarrier Sys.9：249-304(1992)中讨论了用于确定取代程度的方法。
用已知的方法可以回收并纯化可以用于本发明方法中的免疫调节蛋白，所述方法包括但不限于硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阳离子或阴离子交换色谱法、磷酸纤维素色谱法、疏水性相互作用色谱法、亲和色谱法、羟磷灰石色谱法和凝集素色谱法。最优选地采用高效液相色谱法(“HPLC”)进行纯化。
制剂和施用
本发明提供通过给对象施用治疗有效量的包括免疫调节剂例如Neutrokine-α拮抗剂的药物组合物的治疗、抑制和预防的方法。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是TACI-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是BAFF-R-Fc蛋白。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α肽抗体。在一个具体的实施方式中，Neutrokine-α拮抗剂是发挥显性负调控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或变体。在一个优选的实施方式中，免疫调节剂是基本上纯化的(即基本上没有限制其作用或生成不必要的副作用的物质)。对象优选地是动物，包括但不限于动物例如牛、猪、马、鸡、猫、狗等，优选地是哺乳动物，最优选地是人。
结合个体患者的临床状况(特别是单独的免疫调节剂治疗的副作用)、含免疫调节剂的组合物的转运位点、施用方法、施用计划、和其他医学从业人员已知的因素，按照与好的医疗实践相符的方式来制剂和定量免疫调节剂。因此，根据这些考虑确定出在此提出的免疫调节剂的“治疗有效量”。
各种转运系统都是已知的，并且可以用于施用包括免疫调节剂的药物组合物，例如脂质体胶囊化、微粒、微胶囊、能够表达化合物的重组细胞、受体介导的细胞内吞作用(见例如Wu and Wu，J.Biol.Chem.262：4429-4432(1987))、将核酸构建为逆转录病毒或其他载体的一部分等。给药方法包括但不限于皮内、肌肉内、腹腔内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、和口服途径。可以通过任何便利的途径例如通过输注或弹丸式注射、通过上皮或粘膜层(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)的吸收施用包括免疫调节剂的药物组合物，可以与其他生物学活性药物一起施用包括免疫调节剂的药物组合物。施用可以是全身的或局部的。另外，通过合适的途径包括脑室内和鞘内注射将包括免疫调节剂的药物组合物引入到中枢神经系统内可能是需要的；通过例如与储存囊如Ommaya囊相连的脑室内导管可能有助于脑室内注射。例如通过使用吸入器或雾化器和雾化剂的制剂也可以采用肺部施用。
在一个具体的实施方式中，本发明涉及治疗药物(例如本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂)的药物制剂。具体地，本发明涉及本质上为蛋白源性的治疗药物(例如蛋白和抗体)的药物制剂。本发明的药物制剂含有可药用赋形剂。一般而言，本发明的药物制剂被配制成使得治疗药物保留了其物理的、化学的和生物学的活性。可以在合适的温度下储存本发明的药物制剂。例如，可以在2-8℃、-40℃、或-80℃下储存本发明的药物制剂。在一个具体的实施方式中，稳定制剂是其中在2年内观察到治疗药物不到约1％发生凝集、2年内观察到治疗药物不到约1％发生氧化、和/或在2年内观察到不到约4％治疗药物发生脱酰胺作用的制剂。例如通过结合所需的剂量容积和施用方式来确定出本发明的药物制剂中的治疗药物的量。在本发明的一个实施方式中，本发明的药物制剂中的治疗药物的浓度是约1-160mg/ml、约0-155mg/ml、约20-150mg/ml、约30-145mg/ml、约40-140mg/ml、约50-135mg/ml、约60-130mg/ml、约70-125mg/ml、约80-120mg/ml、约90-115mg/ml、约95-110mg/ml、约为100-105mg/ml、或约100mg/ml。上述浓度范围中间的浓度范围例如约11-154mg/ml预计也是本发明的一部分。例如，预计包括利用上面所述的任一数值作为上限和/或下限的组合的数值范围。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2、或1)mg/ml的范围。
本发明的水性药物制剂包括pH缓冲液。在本发明的一个实施方式中，本发明的药物制剂所用的缓冲液的pH值范围是从约5到约7。在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂所用的缓冲液的pH值范围是从约5.5到约6.5。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂所用的缓冲液的pH值范围是从约5.8到约6.2。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂所用的缓冲液的pH值范围是约6.0。在上面所述的pH值范围中间的pH值范围预计也是本发明的一部分。例如，预计包括利用上面所述的任一数值作为上限和/或下限的组合的数值范围。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小0.5、0.4、0.3、0.2、或0.1pH值单位的范围。将pH值控制在优选范围内的缓冲剂实例包括乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡萄糖酸盐、组氨酸盐、柠檬酸盐、Tris盐、磷酸盐、甘氨酰甘氨酸和其他有机酸缓冲剂。额外的示例缓冲剂是那些可药用的以及可以从合适的酸、碱及其盐中生成的缓冲剂，例如下面所定义的那些缓冲剂。
可药用的酸包括在其所被配制的浓度和方式方面为无毒的无机酸和有机酸。例如，合适的无机酸包括盐酸、高氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磺酸、亚磺酸、对氨基苯磺酸、磷酸、碳酸等。合适的有机酸包括直链和直链烷基酸、芳香基酸、环酸、环脂肪酸、芳香族脂肪酸、异环酸、饱和酸、不饱和酸、单、双或三羧酸，包括例如甲酸、乙酸、2-羟乙酸、三氟乙酸、苯乙酸、三甲基乙酸、叔丁乙酸、邻氨基苯甲酸、丙酸、2-羟基丙酸、2-氧丙酸、丙二酸、环戊烷丙酸、环戊烷丙酸、3-苯丙酸、丁酸、丁二酸、苯甲酸、3-(4-羟苯基)苯甲酸、2-乙酸-苯甲酸、抗坏血酸、肉桂酸、月桂硫酸、硬脂酸、粘康酸、扁桃酸、琥珀酸、双羟萘酸、反丁烯二酸、苹果酸、马来酸、羟基马来酸、丙二酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、羟乙酸、葡萄糖酸、葡糖酸、丙酮酸、乙醛酸、草酸、mesylate、琥珀酸、水杨酸、邻苯二甲酸、palmoic、palmeic、硫氰酸、甲烷磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、萘-2-磺酸(napthalene-2-sulphonic)、对甲苯硫磺酸(p-toluenesulphonic)、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]-八-2-烯-1-羧酸(4-methylbicyclo[2.2.2]-oct-2-ene-1-carboxylic)、葡庚糖酸、4，4′-亚甲基双-3-(羟基-2-烯-1-羧酸)(4，4′-methylenebis-3-(hydroxy-2-ene-1-carboxylicacid))、羟萘甲酸(hydroxynapthoic)等。
可药用的碱包括在其所被配制的浓度和方式方面为无毒的无机碱和有机碱。例如，合适的碱包括那些来自无机碱形成金属例如锂、钠、钾、镁、钙、铵、铁、锌、铜、锰、铝、N-甲基葡胺、吗啉、哌啶的碱以及有机的无毒的碱，包括伯铵、仲铵和叔铵、取代铵、环铵和碱性离子交换树脂、[例如N(R′)4 +(其中R独立地是H或C1-4烷基例如铵，Tris)]，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙氨基乙醇、氨基丁三醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、氨茶碱、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。特别优选的有机的无毒碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己铵、胆碱和咖啡因。
可以用于本发明中的额外的可药用的酸和碱包括那些衍生自氨基酸的酸和碱，包括组氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸和天冬酰胺。
可药用的缓冲液包括那些源自上面所述的酸和碱的酸性和碱性的加成盐的缓冲液。在本发明的一个实施方式中，本发明的药物制剂的缓冲液是琥珀酸盐、组氨酸盐、柠檬酸盐和/或磷酸盐。在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂的缓冲剂是组氨酸盐。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂的缓冲剂是柠檬酸盐。
在本发明的另一个实施方式中，本发明的药物制剂中的缓冲剂浓度为约5-50mM、约5-20mM、约5-15mM、或约10mM。上述浓度范围中间的浓度范围例如约6-48mM预计也是本发明的一部分。例如，预计包括利用上面所述的任一数值作为上限和/或下限的组合的数值范围。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2、或1)mM的范围。
也可以向本发明的药物制剂中加入表面活性剂。示例的表面活性剂包括非离子型表面活性剂例如聚山梨酯(例如聚山梨酯20或80)或聚羟亚烃(例如聚羟亚烃188)。其他可药用的表面活性剂是本发明公知的，也在本发明的范围之内。在一个具体的实施方式中，所加入的表面活性剂的量足以减少治疗药物的凝集(例如在摇晃或运输之后发生的凝集)、使得本发明的药物制剂中的颗粒形成最小化、和/或减少治疗药物的非特异性吸收。在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂包括表面活性剂，所述表面活性剂是聚山梨酯。
在一个实施方式中，本发明的药物制剂含有表面活性剂聚山梨酯20。在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有至少0.007％和约0.07％之间的聚山梨酯20。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有至少0.01％和约0.05％之间的聚山梨酯20。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有至少0.01％和约0.03％之间的聚山梨酯20。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有约0.01％聚山梨酯20。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小一些(0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％或0.005％)的范围，条件是聚山梨酯20的百分比不低于0.007％。
在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有表面活性剂聚山梨酯80。在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有至少0.0015％和约0.07％之间的聚山梨酯80。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有至少0.003％和约0.05％之间的聚山梨酯80。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有至少0.005％和约0.03％之间的聚山梨酯80。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有至少0.01％和约0.03％之间的聚山梨酯80。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有约0.01％聚山梨酯80。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小一些(0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％或0.005％)的范围，条件是聚山梨酯80的百分比不低于0.0015％。
也可以向本发明的药物制剂中加入张力调节剂。有用的张力调节剂包括盐和氨基酸。可药用的以及适用于本发明的药物制剂的盐包括氯化钠、琥珀酸钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁、和氯化钙。优选的用于本发明的药物制剂的盐是NaCl和MgCl2。NaCl可以通过保护药物避免脱酰胺作用和凝集来提高治疗药物的稳定性。在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有NaCl。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有约150和约500mM之间的NaCl。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有约150mMNaCl。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小一些(1、2、3、4、5、10、25或50mM)的范围。在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂是等张的。等张表示本发明的药物制剂具有与人体血液基本上相同的渗透压。等张制剂一般具有从约250到约350mOsm的渗透压，优选地是从约290到约310mOsm。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2或1)mOsm的范围。例如利用蒸汽压型或冰冻型渗透压仪都可以测定出等张性。
在一个实施方式中，本发明的药物制剂含有上面所定义的药物(即治疗药物、缓冲剂、表面活性剂和张力调节剂)，以及基本上没有一种或多种防腐剂例如苯甲醇、苯酚、m-甲酚、三氯丁醇、和苯乙胺氯。在另一个实施方式中，本发明的药物制剂可以包括防腐剂，特别是其中所述制剂是多剂量制剂时。本发明的药物制剂可以包括一种或多种其他的可药用载体、赋形剂或稳定剂，例如那些在Remington′s Pharmaceutical Sciences 16thedition，Osol，A.Ed.(1980)中所述的载体、赋形剂或稳定剂，条件是它们不会显著地负向影响制剂所需的特性。所用的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度时对于受体都是无毒的，并包括：额外的缓冲剂、共溶剂、抗氧化剂包括抗坏血酸和甲硫氨酸、螯合剂例如EDTA、金属复合物(例如Zn蛋白复合物)、可生物降解的聚合物例如聚酯、防腐剂、抗冻剂、抗裂解剂、填充剂等。合适的抗冻剂实例包括多元醇、聚乙二醇(PEG)、牛血清白蛋白(BSA)、谷氨酸、其他氨基酸等。其他合适的抗冻剂包括糖和糖醇例如蔗糖、甘露糖、海藻糖、葡萄糖、山梨醇、和甘露醇等。合适的抗裂解剂可以包括糖例如蔗糖、海藻糖、乳糖、和麦芽糖等。合适的填充剂包括甘露醇、甘氨酸和山梨糖醇等。
在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂不包括抗冻剂。在进一步的实施方式中，本发明的药物制剂不包括蔗糖。
本发明的药物制剂也可以包括常用于稳定蛋白制剂的EDTA。EDTA作为螯合剂可以抑制金属催化的巯基氧化，据此减少二硫键连接的聚集物的形成。EDTA的优选浓度是从约0.01％到约0.2％。
对于所治疗的特殊适应症，本发明的药物制剂也可以按需与一种或多种其他的治疗药物组合，优选地是那些具有互补活性且不负向影响本发明的药物制剂中的治疗药物的治疗药物。本发明涉及额外的其他的治疗药物被配制成与免疫调节剂的混合物的组合。另外，本发明也涉及其中额外的治疗药物被独立制剂但被打算用于与免疫调节剂的同步或重叠施用的组合。在组合中，这些额外的治疗药物具有能有效地实现所计划目的的量。在此进一步描述了可以被与本发明的制剂组合的额外的治疗药物。
在一个优选的实施方式中，本发明提供包括或由10mM组氨酸缓冲液、150mM NaCl和0.01％聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)组成的药物制剂。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂包括量从约1mg/ml到约160mg/ml的抗体，优选的是从约80mg/ml到约120mg/ml的抗体、10mM组氨酸缓冲液、150mM NaCl和0.01％聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。在另一个优选的实施方式中，用于静脉施用的本发明的药物制剂包括量从约1mg/ml到约160mg/ml的抗体，优选的是从约80mg/ml到约120mg/ml的抗体、10mM组氨酸缓冲液、150mM NaCl和0.01％聚山梨酯80(pH6.0±0.5)或者是由其组成。在另一个优选的实施方式中，用于皮下施用的本发明的药物制剂包括量从约1mg/ml到约160mg/ml的抗体，优选的是从约80mg/ml到约120mg/ml的抗体、10mM组氨酸缓冲液、150mMNaCl和0.01％聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2或1)mg/ml的范围。
在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂包括100mg/ml抗体、10mM组氨酸缓冲液、150mM NaCl和0.01％聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。在另一个优选的实施方式中，用于静脉施用的本发明的药物制剂包括100mg/ml抗体、10mM组氨酸缓冲液、150mM NaCl和0.01％聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。在另一个优选的实施方式中，用于皮下施用的本发明的药物制剂包括100mg/ml抗体、10mM组氨酸缓冲液、150mM NaCl和0.01％聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。
在一个优选的实施方式中，本发明提供包括或由0.74mg/ml L-组氨酸、1.1mg/ml L-组氨酸一盐酸盐、8.8mg/ml NaCl和0.1mg/ml聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)组成的药物制剂。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂包括量从约1mg/ml到约160mg/ml的抗体，优选的是从约80mg/ml到约120mg/ml的抗体、0.74mg/ml L-组氨酸、1.1mg/ml L-组氨酸一盐酸盐、8.8mg/ml NaCl和0.1mg/ml聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。在另一个优选的实施方式中，用于静脉施用的本发明的药物制剂包括量从约1mg/ml到约160mg/ml的抗体，优选的是从约80mg/ml到约120mg/ml的抗体、0.74mg/ml L-组氨酸、1.1mg/ml L-组氨酸一盐酸盐、8.8mg/ml NaCl和0.1mg/ml聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。在另一个优选的实施方式中，用于皮下施用的本发明的药物制剂包括量从约1mg/ml到约160mg/ml的抗体，优选的是从约80mg/ml到约120mg/ml的抗体、0.74mg/ml L-组氨酸、1.1mg/ml L-组氨酸一盐酸盐、8.8mg/ml NaCl和0.1mg/ml聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2或1)mg/ml的范围。
在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂包括100mg/ml抗体、0.74mg/ml L-组氨酸、1.1mg/ml L-组氨酸一盐酸盐、8.8mg/ml NaCl和0.1mg/ml聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。在另一个优选的实施方式中，用于静脉施用的本发明的药物制剂包括100mg/ml抗体、0.74mg/ml L-组氨酸、1.1mg/ml L-组氨酸一盐酸盐、8.8mg/ml NaCl和0.1mg/ml聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。在另一个优选的实施方式中，用于皮下施用的本发明的药物制剂包括100mg/ml抗体、0.74mg/ml L-组氨酸、1.1mg/ml L-组氨酸一盐酸盐、8.8mg/ml NaCl和0.1mg/ml聚山梨酯80(pH 6.0±0.5)或者是由其组成。
在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体是单克隆抗体。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体是IgG抗体。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体是IgG1抗体。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体是IgG1/λ抗体。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体是人或人源化的抗体。
在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂在2-8℃下稳定至少6个月。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂在2-8℃下稳定至少9个月。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂在2-8℃下稳定至少1年。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂在2-8℃下稳定至少1.5年。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂在2-8℃下稳定至少2年。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂在2-8℃下稳定至少3年。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂在2-8℃下稳定至少4年。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂在2-8℃下稳定至少5年。
在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体可以在重复的冻融周期时表现出显著的稳定性，以及在这些处理之后，在融化后仍保持稳定。一般而言，被冷冻的制剂被快速冷冻，例如冷冻于液氮内。可以在一定的温度范围内进行融化，例如是从约0℃到约25℃，这是缓慢融化；或者是从约26℃到40℃，这是快速融化。“约”在此包括具体所述的范围以及比该范围的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2或1)摄氏度的范围。快速融化的实例是在37℃的水箱内融化本发明的药物制剂。在一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体可以保持稳定至少1个冻融周期。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体可以保持稳定至少2个冻融周期。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体可以保持稳定至少3个冻融周期。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体可以保持稳定至少4个冻融周期。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体可以保持稳定至少5个冻融周期。在另一个优选的实施方式中，本发明的药物制剂中的抗体可以保持稳定至少10个冻融周期。
为了保持稳定性，可能需要确定冻融本发明的药物制剂的最佳方案，或者为了给将进行特殊的冻融周期的抗体提供最大的稳定性，可能需要鉴定本发明的药物制剂。因此，在本发明的一个实施方式中，评价了这个参数。例如，可以在不同组合的各种冻融条件例如快速冷冻、缓慢冷冻、快速融化、缓慢融化下检测本发明的药物制剂的稳定性，以确定生成最少的降解产物(即具有最大稳定性)的方案。
浓缩研究已经显示出在包括10mM组氨酸缓冲液、150mM NaCl、和0.01％聚山梨酯80(pH 6.0)的本发明的药物制剂中的IgG/λ抗体可以被浓缩到至少160mg/ml，且对纯度(经SEC-HPLC测定)和聚集(没有观察到颗粒)没有不利的影响(数据没有显示)。另外，观察到浓缩增加了粘度。由于粘度的增加，因此增加了施用困难的可能性。研究已经显示在小于10秒钟内，经30G 1/2英寸针头可以容易地注射粘度小于7.75cP的样品。如表X所示，甚至在IgG1/λ抗体的浓度为160mg/ml时，药物制剂的粘度仍低于7.75cP，因此仍能容易地经注射器注射。
表X：作为IgG1/λ抗体浓度的函数的粘度
 
浓度(mg/ml) 粘度(cP)
0.0 0.93
18.9 0.97
35.5 1.13
65.7 1.48
79.2 1.80
89.4 1.96
104.0 2.38
113.2 2.68
122.2 3.15
128.0 3.43
136.5 3.89
144.1 4.58
161.7 6.74
可以用于体内施用的制剂最优选地是无菌的。通过在制剂制备之前或之后经无菌滤膜的过滤可以容易地完成这一点。
在一个优选的实施方式中，本发明的抗体被配制于10mM柠檬酸钠、1.9％甘氨酸、0.5％蔗糖、0.01％聚山梨酯80(pH 6.5±0.3)内。在另一个优选的实施方式中，用于静脉施用的本发明的抗体被配制于10mM柠檬酸钠、1.9％甘氨酸、0.5％蔗糖、0.01％聚山梨酯80(pH 6.5±0.3)内。
在一个优选的实施方式中，本发明的抗体被配制于10mM柠檬酸钠、8％蔗糖、0.04％(w/v)聚山梨酯80(pH 6.5±0.3)内。在另一个优选的实施方式中，用于静脉施用的本发明的抗体被配制于10mM柠檬酸钠、8％蔗糖、0.04％(w/v)聚山梨酯80(pH 6.5±0.3)内。在另一个优选的实施方式中，用于皮下施用的本发明的抗体被配制于10mM柠檬酸钠、8％蔗糖、0.04％(w/v)聚山梨酯80(pH 6.5±0.3)内。
一般而言，通过Neutrokine-α拮抗剂或其他本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂和液体载体或精细分离的固体载体或两者均匀地和紧密地接触来制备制剂。然后，如果需要，产物被成形为所需的剂型。优选地，载体是肠外载体；更优选地是与受体的血液等张的溶液。这些载体的实例包括水、盐水、林格液、和葡萄糖溶液。非水性载体例如不挥发油和油酸乙酯以及脂质体在此也是有用的载体。
载体适当地含有较少量的添加剂，例如增强等张性和化学稳定性的物质。这些物质在其所采用的剂量和浓度时对于受体都是无毒的，并包括缓冲剂例如磷酸、柠檬酸、琥珀酸、乙酸和其他的有机酸或它们的盐；抗氧化剂例如抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)的多肽，例如聚精氨酸或三肽；蛋白例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物例如聚乙烯吡咯酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、或精氨酸；单糖、双糖、和其他的碳水化合物包括纤维素或其衍生物、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、或糊精；抗衡离子例如钠；防腐剂例如甲酚、苯酚、三氯丁醇、苯甲醇和对羟基苯甲酸酯；和/或非离子型表面活性剂例如聚山梨酯、聚羟亚烃或PEG。
在这些载体中，包括免疫调节多肽的组合物通常被配制成浓度约为0.001mg/ml到100mg/ml，或0.1mg/ml到100mg/ml，优选地约为1-10mg/ml或1-10mg/ml，pH值约为3到10、或3到8，更优选地为5-8，最优选地为6-7。要明白施用某些上面提及的赋形剂、载体或稳定剂将造成多肽盐的形成。
可以用于治疗性施用的组合物最优选地是无菌的。通过在制剂制备之前或之后经无菌滤膜(例如，0.2微米膜)的过滤可以容易地完成这一点。治疗性组合物常常被放置于具有无菌入口的容器内，例如具有可被皮下注射针头穿透的塞子的静脉内溶液袋或瓶子。
包括可以用于本发明方法中的免疫调节剂的药物组合物常常作为水溶液或作为用于重建的低压冻干制剂储存于单位剂量或多剂量容器内，例如密封安瓿或瓶子。作为低压冻干制剂的实例，用5ml无菌过滤的1％(w/v)水性Neutrokine-α多肽溶液填充10ml瓶子，将所形成的混合物低压冻干。通过用抑菌的注射用水重建低压冻干的Neutrokine-α多肽制备出输注溶液。
或者，包括可以用于本发明方法中的免疫调节剂的药物组合物可以以低压冻干的形式储存于单剂量容器内。利用无菌的注射用载体重建输注溶液。
在具体的实施方式中，可以用于本发明的免疫调节剂是放射性标记的多肽例如放射性标记形式的Neutrokine-α或抗CD20抗体。这些包括放射性标记分子的药物组合物也可以包括辐射保护剂和血浆增溶剂例如抗坏血酸钠、右旋糖酐-40、和甘油。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括碘化形式的Neutrokine-α多肽或其片段或变体，其被配制于10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mM HEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40(Genetran-40)中。
在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括至少1mg/mL碘化形式的SEQ ID NO：2的第134-285位氨基酸残基、10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mM HEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括至少2mg/mL碘化形式的SEQ ID NO：2的第134-285位氨基酸残基、10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mM HEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括至少3mg/mL碘化形式的SEQ ID NO：2的第134-285位氨基酸残基、10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mM HEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括至少4mg/mL碘化形式的SEQ ID NO：2的第134-285位氨基酸残基、10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mMHEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括约4.6mg/mL碘化形式的SEQID NO：2的第134-285位氨基酸残基、10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mM HEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40。
在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括约0.1mg/mL和20mg/mL之间的碘化形式的SEQ ID NO：2的第134-285位氨基酸残基、10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mM HEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括约1mg/mL和10mg/mL之间的碘化形式的SEQID NO：2的第134-285位氨基酸残基、10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mM HEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括约2mg/mL和8mg/mL之间的碘化形式的SEQ ID NO：2的第134-285位氨基酸残基、10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mM HEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40。在具体的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括约3mg/mL和6mg/mL之间的碘化形式的SEQ ID NO：2的第134-285位氨基酸残基、10.0mM柠檬酸钠、140mM氯化钠、8.7mM HEPES、4％(w/v)抗坏血酸钠、3.3％(w/v)右旋糖酐-40。
在优选的实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括抗Neutrokine-α抗体。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括特异性结合Neutrokine-α的抗体。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括拮抗性的抗Neutrokine-α抗体。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括特异性结合Neutrokine-α以及中和Neutrokine-α的生物学活性的抗体。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括结合从细胞培养物中纯化出的重组Neutrokine-α蛋白的抗体，其中所述重组Neutrokine-α蛋白是由至少编码SEQ ID NO：2的第134到285位氨基酸的多核苷酸编码的。在其他实施方式中，可以用于本发明方法中的组合物包括特异性结合Neutrokine-α的抗体，其中所述抗体结合从细胞培养物中纯化出的重组Neutrokine-α蛋白，其中所述重组Neutrokine-α蛋白是由至少编码SEQ IDNO：2的第134到285位氨基酸的多核苷酸编码的。
可以口服、直肠、肠外、皮下、脑池内、阴道内、腹腔内、局部(例如经粉末、软骨、滴剂或经皮贴剂)、口颊部(bucally)、或口腔或鼻腔喷雾(例如经吸入吸入剂或粉末)施用含有免疫调节剂的药物组合物。
术语“肠外”在此指的是施用模式，其包括静脉内、肌肉内、腹腔内、胸骨内、皮下和关节内注射和输注。
在一个优选的实施方式中，皮下施用含有免疫调节剂的组合物。
在一个优选的实施方式中，静脉内施用含有免疫调节剂的组合物。
也可以用持续释放系统施用含有免疫调节剂的组合物。持续是否组合物的合适实例包括合适的聚合物材料(例如，成形物品形式例如膜或微胶囊的半渗透的聚合物基质)、合适的疏水性材料(例如可用油的乳剂)或离子交换树脂、和略溶性衍生物(例如略溶性盐)。
持续释放基质包括多乳酸化合物(美国专利3,773,919、EP 58,481)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸盐的共聚物(Sidman，U.et al.，Biopolymers22：547-556(1983))、聚(2-羟乙基异丁烯酸)(R.Langer et al.，J.Biomed.Mater.Res.15：167-277(1981)；和R.Langer，Chem.Tech.12：98-105(1982))乙烯乙酸乙烯酯(R.Langer et al.，同上)或聚-D-(-)-3-羟丁酸(EP 133,988)。
在一个具体的实施方式中，含有免疫调节剂的组合物被配制于可生物降解的、聚合物的药物转运系统，例如美国专利4,938,763、5,278,201、5,278,202、5,324,519、5,340,849、和5,487,897以及国际出版物WO01/35929、WO00/24374、和WO00/06117所述的那些转运系统，在此通过引用将其全部内容并入本申请。在具体的实施方式中，利用
Figure A200680047110D01541
 Biodegradable System of Atrix Laboratories，Inc.(Fort Collins，Colorado)制剂含有免疫调节剂的组合物。在其他具体的实施方式中，利用购自Alkermes，Inc.(Cambridge，MA)的
Figure A200680047110D01542
持续释放系统制剂含有免疫调节剂的组合物。
可以用于药物制剂中的可生物降解的聚合物的实例包括但不限于聚乳酸化合物、聚乙醇酸交酯、聚己酸内酯、聚酐、聚酰胺、聚氨基甲酸酯、聚酯酰胺、聚正酯、聚二氧六环酮、缩醛树脂、聚乙酰、聚碳酸盐、聚正碳酸盐、polyphosphazenes、聚羟基丁酸戊酯、聚羟基戊酸、聚烷撑草酸、聚烷撑琥珀酸、聚苹果酸、聚氨基酸、聚甲基乙烯醚、聚苹果酸酐、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚羟基纤维素、甲壳素、壳聚糖和上述物质的共聚物、三聚物或组合物或混合物。优选的聚合物是那些具有较低的结晶度以及更高疏水性的聚合物。这些聚合物和共聚物比高结晶度的聚合物例如聚乙醇酸交酯和甲壳素在生物兼容性溶剂中具有更高的溶解度，所述聚合物也具有高水平的氢键。优选的具有所需的溶解度参数的物质是聚乳酸化合物、聚己酸内酯、和这些聚合物和乙交酯的共聚物，其中有着更多的非结晶区域，以便增强溶解度。在特别优选的实施方式中，可以用于配制含有免疫调节剂的组合物的可生物降解的聚合物是聚(丙交酯-共-乙交酯)。可以修饰聚合物性能例如分子量、疏水性、和丙交酯/乙交酯比例，以获得所需的药物释放谱(见例如Ravivarapu et al.，Journal of Pharmaceutical Sciences89：732-741(2000)；在此通过引用将其内容并入本申请)。
也优选的是用于可生物降解的聚合物的溶剂是无毒的、水可混溶的和生物兼容的溶剂。这种溶剂的实例包括但不限于N-甲基-2-吡咯酮、2-吡咯酮、C2到C6链烯醇、C1到C15醇、二醇、三醇和四醇例如乙醇、甘油、丙二醇、丁醇；C3到C15烷基酮例如丙酮、二乙酮和甲乙酮；C3到C15酯例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乳酸乙酯；烷基酮例如甲乙酮；C1到C15酰胺例如二甲基酰胺、二甲乙酰胺和己内酰胺；C3到C20醚例如四氢呋喃、或甘油醇缩丙酮(solketal)；Tween、三醋精、碳酸丙烯、癸甲基亚砜、二甲基亚砜、油酸、1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮(1-dodecylazacycloheptan-2-one)。其他优选的溶剂是苄基醇、苯甲酸苄酯、双丙二醇、甘油、三丁酸甘油酯、油酸乙酯、甘油、糖原质(glycofural)、十四烷酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、油酸、聚乙二醇、碳酸丙烯、和枸橼酸三乙酯。根据溶解能力以及它们的兼容性，最优选的溶剂是N-甲基-2-吡咯酮、2-吡咯酮、二甲基亚砜、三醋精和碳酸丙烯。
另外，含有免疫调节剂和可生物降解的聚合物的制剂也可以含有释放速率调节剂和/或成孔剂。释放速率调节剂的实例包括但不限于脂肪酸、甘油三酯、其他类似的疏水化合物、有机溶剂、成形化合物和亲水性化合物。合适的释放速率调节剂包括例如单-、双和三羧酸的酯例如2-醋酸乙氧乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二丁酯、己二酸二甲酯、丁二酸二甲酯、草酸二甲酯、柠檬酸二甲酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸乙酰三丁酯、柠檬酸乙酰三乙酯、甘油三乙酸酯、二(正丁基)癸二酸盐(di(n-butyl)sebecate)等；多羟基醇例如丙二醇、聚乙二醇、甘油、山梨糖醇等；脂肪酸；甘油的三酯例如甘油三酯、环氧化大豆油、和其他的环氧化植物油；醇例如胆固醇；醇例如C6-C12链烯醇、2-乙氧基乙醇等。可以单独地或联合其他的这些物质使用释放速率调节剂。释放速率调节剂的合适组合包括但不限于甘油/丙烯乙二醇、山梨糖醇/甘油、乙撑氧化物/丙撑氧化物、丁烯乙二醇/己二酸等。优选的释放速率调节剂包括但不限于二甲基柠檬酸、三乙基柠檬酸、庚酸乙酯、甘油和己二醇。可以用于聚合物组合物中的合适的成孔剂包括但不限于糖例如蔗糖和葡萄糖、盐例如氯化钠和碳酸钠、聚合物例如羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、聚乙二醇、和聚乙烯吡咯酮。可以提供给定孔径的固体结晶例如盐或糖是优选的。
在具体的实施方式中，利用BEMATM BioErodible MucoadhesiveSystem、MCATM MucoCutaneous Absorption System、SMPTM SolventMicroParticle System、或BCPTM BioCompatible Polymer System of AtrixLaboratories，Inc.(Fort Collins，Colorado)可以配制出含免疫调节剂的组合物。
持续释放的组合物也包括脂质体包埋的组合物(通常见于Langer，Science 249：1527-1533(1990)；Treat et al.，in Liposomes in the Therapy ofInfectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein and Fidler(eds.)，Liss，NewYork，pp.317-327 and 353-365(1989))。用已知的方法例如DE 3,218,121；Epstein et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)82：3688-3692(1985)；Hwang et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)77：4030-4034(1980)；EP 52,322；EP 36,676；EP 88,046；EP 143,949；EP 142,641；日本专利申请83-118008；美国专利4,485,045和4,544,545；以及EP 102,324可以制备出脂质体。脂质体一般都是小的(约200-800埃米)单层类型的脂质体，其中脂肪含量超过约30摩尔百分比胆固醇，调整所选比例，以便进行最佳的免疫调节治疗。
在另一个实施方式中，持续释放的组合物包括本领域已知的结晶制剂。
在仍一个其他的实施方式中，用泵转运包括免疫调节剂的组合物(见Langer，同上；Sefton，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201(1987)；Buchwald et al.，Surgery 88：507(1980)；Saudek et al.，N.Engl.J.Med.321：574(1989))。
在Langer的综述中讨论了其他的控制释放系统(Science 249：1527-1533(1990))。
对于肠外施用而言，在一个实施方式中，一般通过混合所需纯度的、单位剂量的可注射形式(溶液、悬浮液或乳剂)的免疫调节剂和可药用载体即在所采用的剂量和浓度时对受体无毒的并且与制剂的其他组分相兼容的载体来配制免疫调节剂。例如，当活性组分是免疫调节蛋白时，制剂优选地不包括氧化剂和已知对多肽有害的其他化合物。
在一个具体的实施方式中，可能需要将药物化合物或组合物局部施用到所需治疗的区域；通过例如但非限制方式的手术期间的局部输注、局部应用例如在手术后联合伤口敷料的应用、通过注射、通过导管方式、通过栓剂方式、或通过植入物方式(所述植入物可以是多孔的、非多孔的或凝胶的物质，包括膜例如唾液酸盐膜或滤膜)可以实现这一点。优选地，当施用蛋白包括本发明的抗体时，必须仔细地使用蛋白所不会吸附的材料。
在另一个实施方式中，可以用载体特别是脂质体转运免疫调节剂(见Langer，Science 249：1527-1533(1990)；Treat et al.，in Liposomes in theTherapy of Infectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein and Fidler(eds.)，Liss，New York，pp.353-365(1989)；Lopez-Berestein，出处同上，pp.317-327)。
仍在另一个实施方式中，可以用控制释放系统转运免疫调节剂。在一个实施方式中，可以施用泵(见Langer，同上；Sefton，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201(1987)；Buchwald et al.，Surgery 88：507(1980)；Saudeket al.，N.Engl.J.Med.321：574(1989))。在另一个实施方式中，可以使用聚合物材料(见Medical Applications of Controlled Release，Langer and Wise(eds.)，CRC Press，Boca Raton，Florida(1974)；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design and Performance，Smolen and Ball(eds.)，Wiley，NewYork(1984)；Ranger and Peppas，J.，Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23：61(1983)；也见于Levy et al.，Science 228：190(1985)；During et al.，Ann.Neurol.25：351(1989)；Howard et al.，J.Neurosurg.71：105(1989))。仍在另一个实施方式中，可以将控制释放系统放置于治疗靶点即脑部的近端，因此只需要全身剂量的一部分(见例如Goodson，in Medical Applications ofControlled Release，同上，vol.2，pp.115-138(1984))。
在Langer的综述中讨论了其他的控制释放系统(Science 249：1527-1533(1990))。
在一个具体的实施方式中，其中本发明的化合物是编码蛋白的核酸，可以体内施用核酸，以促进其所编码蛋白的表达，通过构建其作为合适的核酸表达载体的一部分以及通过使用逆转录病毒载体(见美国专利4,980,286)或者通过直接注射、或通过使用微粒轰击(例如基因枪，Biolisitic，Dupont)、或者通过脂质涂层或细胞表面受体或转染剂、或者通过使用与已知能进入核内的同源异型盒样肽(见例如Joliot et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：1864-1868(1991))相连的核酸等都可以使用所述化合物，使得其成为细胞内部分。或者，通过同源重组可以细胞内引入核酸，并将其整合于宿主细胞DNA内进行表达。
本发明也提供了药物组合物。这些组合物包括治疗有效量的化合物和可药用载体。在一个具体的实施方式中，术语“可药用”表示经联邦或州政府的监督机构认证了的或美国药典或其他普遍公认的动物应用且特别是人类应用的药典中所列出的。术语“载体”指的是与治疗药物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。这些药物载体可以是无菌液体例如水和油，包括那些石油、动物、蔬菜或合成来源的油例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药物组合物时，水是优选的载体。盐溶液和水性葡萄糖和甘油溶液也可以被采用为液体载体，特别是可注射溶液。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、水稻、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，组合物也可以含有少量的湿化剂或乳化剂、或pH缓冲剂。这些组合物可以采用溶液、悬浮液、乳剂、片剂、丸剂、胶囊、粉末、持续释放制剂等的形式。和传统的结合剂和载体例如甘油三酯一起，组合物可以被配制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体例如药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素碳酸镁等。在E.W.Martin的“Remington′s Pharmaceutical Sciences”中描述了合适的药物载体的实例。这些组合物含有治疗有效量的化合物，优选地是纯化形式的化合物以及合适量的载体，以便提供适合于施用给患者的形式。制剂应当符合施用模式。
在一个优选的实施方式中，根据常规方法将组合物配制成适用于静脉施用给人体的药物组合物。用于静脉施用的组合物通常是无菌等张水性缓冲液的溶液。如果需要，组合物也可以包括增溶剂和局麻药例如利多卡因，以便减轻注射部位的疼痛。一般而言，可以分开地或混合一起提供单位剂量形式的组分，例如以标注有活性剂的量的熔封容器例如安瓿或Sachette内的干燥低压冻干粉末或无水浓缩物的形式提供。如果通过输注施用组合物，可以用含有无菌的药用级水或盐水的输注瓶来调配组合物。如果通过注射施用组合物，可以提供一安瓿的无菌注射用水或盐水，使得可以在施用之前混合组分。
免疫调节剂可以被配制成中性的或盐的形式。可药用的盐包括那些用阴离子例如那些源自盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的阴离子所形成的盐，以及那些用阳离子例如那些源自钠、钾、铵、钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的阳离子所形成的盐。
用标准的临床技术可以确定在在此所述的方法中能有效的免疫调节剂的量。另外，可以任选地采用体外检测法，有助于鉴定出最佳剂量范围。制剂中所采用的精确剂量也取决于施用途径和疾病或病变的严重度，应当根据医学从业人员的判断和每个患者的情况来决定所述剂量。从源自体外或动物模型测试系统的剂量-效应曲线中可以推算出有效剂量。
对于抗体而言，施用给患者的剂量通常是0.1mg/kg到100mg/kg患者体重。优选地，施用给患者的剂量是在0.1mg/kg到20mg/kg患者体重之间，更优选地是在0.1mg/kg到10mg/kg患者体重之间。在优选的实施方式中，给患者静脉内施用1、4、10、或20mgkg的剂量。一般而言，人类抗体比来自其他物种的抗体在人体内具有更长的半衰期，因为人体对外来多肽的免疫应答。因此，更低剂量的人类抗体和更少频率的施用常常是可能的。此外，通过经修饰例如脂质化来增强抗体的摄取和组织渗透(例如进入到脑内)可以减少本发明的抗体的施用剂量和频率。
作为一般的建议，每剂量中肠外施用的多肽的总体药用有效量是在约1mg/kg/天到10mg/kg/天患者体重的范围之内，尽管如上所述，但是这应当取决于治疗判断。更优选地，这个剂量至少是0.01mg/kg/天，对于人而言，最优选的是在约0.01和1mg/kg/天之间。
在另一个实施方式中，施用给人的多肽的剂量是在0.0001和0.045mg/kg/天之间，优选地剂量是在0.0045和0.045mg/kg/天之间，更优选地，人类的剂量是在约45微克/kg/天，小鼠的剂量约为3mg/kg/天。
如果持续给药，通常以约1微克/kg/小时到约50微克/kg/小时的剂量速度施用多肽，或者通过每天1到4次注射或者通过连续皮下输注例如使用迷你泵施用多肽。也可以采用静脉内用袋装溶液。
所需治疗的长度以便观察治疗后应答发生的变化和间隔有所不同，这取决于所需的效应。
可以以连续输注、每天多次注射(例如每天3次或更多次，或每天两次)、每天单次、或间断注射(例如每天两次、一天一次、隔天一次、每周两次、每周一次、每月一次、每月两次和每季度一次)的形式施用包括免疫调节剂的组合物。如果持续给药，通常以约0.001微克/kg/小时到约10微克/kg/小时到约50微克/kg/小时的剂量速度施用多肽，或者通过每天1到4次注射或者通过连续皮下输注例如使用迷你泵施用多肽。
通过本领域人员公知的方法可以确定所施用的包括免疫调节剂的组合物的有效剂量，其中所涉及到的参数是生物学半衰期、生物可利用度和毒性。这些确定方法是在本领域的熟练人员的能力范围之内，特别是结合在此所提供的详细阐述。
生物体对免疫调节剂的生物暴露在确定治疗和/或药物有效剂量方案方面也发挥着重要作用。剂量的变异例如相当长的一段时间内反复施用相当低剂量的免疫调节剂可以具有作用，所述作用与在相当短的一段时间内反复施用相当高剂量的免疫调节剂所获得的作用在治疗学上和/或药学上是可区分的。
利用Freireich，E.J.，等(Cancer Chemotherapy Reports 50(4)：219-44(1966))所提供的等效体表面积剂量转换系数，本领域人员能够便利地将从在给定的应用免疫调节剂的试验系统中获得的数据转换成在另一个试验系统中每个剂量所施用的免疫调节剂的药物有效量的准确估计值。利用Freireich等提供的转换系数，通过在小鼠中施用免疫调节剂所获得的试验数据例如可以被转换成Neutrokine-α在大鼠、猴、狗和人中的药物有效量的准确估计值。下面的转换表(表III)是Freireich等所提供的数据的概述。表III给出了用于将从一个物种中的用mg/kg表示的剂量转换成在表中所列出的另一个物种中的用mg/kg所表示的等效体表面积剂量。
表III：等效体表面积剂量转换系数。
--到--
         小鼠    大鼠    猴       狗      人
--从--   (20g)  (150g) (3.5kg)   (8kg)  (60kg)
小鼠       1      1/2    1/4      1/6    1/12
大鼠       2      1      1/2      1/4    1/7
猴         4      2      1        3/5    1/3
狗         6      4      5/3      1      1/2
人         12     7      3        2      1
因此，例如利用表III所提供的转换系数，小鼠中的剂量50mg/kg可以转换成猴中的近似剂量12.5mg/kg，因为(50mg/kg) x (1/4)＝12.5mg/kg。作为额外的实例，小鼠中的剂量0.02、0.08、0.8、2、和8mg/kg分别等效于人中的有效剂量1.667微克/kg、6.67微克/kg、66.7微克/kg、166.7微克/kg、和0.667mg/kg。
在某些实施方式中，涉及施用放射性标记形式的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体。所应用的放射性剂量基本上都是不同的。可以施用剂量约为0.1到约100mCi/70kg体重的放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物。在另一个实施方式中，可以施用剂量约为0.1到约50mCi/70kg体重的放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物。在另一个实施方式中，可以施用剂量约为0.1、0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90或100mCi/70kg体重的放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物。
可以施用剂量约为0.1到约10mCi/kg体重的放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物。在另一个实施方式中，可以施用剂量约为0.25到约5mCi/kg体重的放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物。在具体的实施方式中，可以施用剂量约为0.35、0.70、1.35、1.70、2.0、2.5或3.0mCi/kg体重的放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物。
可以施用剂量约为1到约50mCi/m2的放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物。在另一个实施方式中，可以施用剂量约为10到约30mCi/m2的放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物。在具体的实施方式中，可以施用剂量约为10、15、20、25、或30mCi/m2的放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物。
放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物中的总Neutrokine-α蛋白、Neutrokine-αSV蛋白、抗Neutrokine-α抗体和/或抗Neutrokine-αSV抗体的浓度也可以有所不同，例如从约1微克/kg到约1mg/kg。在具体的实施方式中，放射性标记的Neutrokine-α或抗Neutrokine-α抗体组合物中的Neutrokine-α蛋白、Neutrokine-αSV蛋白、抗Neutrokine-α抗体和/或抗Neutrokine-αSV抗体的总浓度可以约为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100微克/kg。
例如，已知淋巴瘤是放射敏感的肿瘤。对于免疫诊断性显像而言，可以施用复合物的示踪标记，通常用约1到60mCi放射性同位素标记1-20mgNeutrokine-α蛋白。剂量有时候取决于用于显像的同位素；范围中的上限量优选地是40到60mCi，可以使用99mTc；范围中的下限量优选地是1-20mCi，可以使用111In。对于显像目的而言，可以给予对象约1到约30mgNeutrokine-α复合物。对于放射性免疫治疗目的而言，可以给对象施用足量的Neutrokine-α复合物，使得所接受到的全身剂量最高到1100cGy，但优选地小于或等于500cGy。施用给对象的Neutrokine-α蛋白包括Neutrokine-α蛋白、Neutrokine-α缀合物和Neutrokine-α复合物的总量范围可以从1.0微克/kg到1.0mg/kg患者体重。在另一个实施方式中，施用给对象的Neutrokine-α蛋白的总量范围可以从20微克/kg到100微克/kg患者体重。
估计约825mCi的131I可以给整个人体提供近似500cGy的放射性强度的量。所施用的放射性强度的量部分取决于所选的放射性同位素。对于90Y治疗，认为从约1到约200mCi量的放射性强度是合适的，其中优选的量是1到150mCi，以及1到100mCi(例如60mCi)是最优选的。从所施用的放射性强度中估计出组织剂量的优选方法是用示踪剂量进行显像或其他的药物动力学方案，以便获得对预定的放射量测定值的估计。在确定所施用给个体的放射性药物的合适剂量中，必须要考虑到相对于这种器官的最大耐受量的单个器官所接受到的辐射的量。这些信息对于本领域人员是已知的，例如见Emami et al.，International Journal of Radiation Oncology，Biology，Physics 21：109-22(1991)；和Meredith，Cancer Biotherapy &Radiopharmaceuticals 17：83-99(2002)，在此通过引用将两者的全部内容并入本申请。
“高剂量”方案，例如全身施用200到600cGy(或更高)的量，可能需要骨髓取代方案的支持，因为骨髓是由于毒性而限制了辐射剂量的组织。
在具体的实施方式中，患者接受了组合物(例如特异性结合Neutrokine-α的抗体或本领域已知的和/或在此所述的其他免疫调节剂)的多次施用。一组多次施用被称作一个周期。单个周期可以包括例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多次施用。对于任何一次施用而言，其剂量可以是固定的或者是不同的，以便容许实现最初的药物负荷和/或补偿了在体重、体表面积、疾病活动度、疾病应答性、药物耐受性、恢复时间、PK参数、和/或药理学应答方面的患者特异性差异。
在给定周期内的任何两次施用之间的时间可以是固定的或者是不同的，以便适应在疾病活动度、疾病应答性、药物耐受性、恢复时间、PK参数和/或药理学应答方面的患者特异性差异。在具体的实施方式中，患者被给予了初治的负荷剂量，所述剂量是随后施用中所给予的量的两倍。在其他的实施方式中，任何两次施用之间的时间可以是1、2、3、4、5、6、或7天(1周)或更长。在具体的实施方式中，任何两次施用之间的时间可以是1、2、3、4、5、6、7、或8周(或更长)。患者可以接受多个周期的治疗。如果需要超过1个以上的周期，任何两个治疗周期之间的时间可以是固定的或不同的，以便适应在疾病活动度、疾病应答性、药物耐受性、恢复时间、PK参数和/或药理学应答方面的患者特异性差异。在具体的实施方式中，任何两个周期之间的时间可以是1、2、3、4、5或6周或更长。在具体的实施方式中，任何两个周期之间的时间可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月或更长。在具体的实施方式中，任何两个周期之间的时间可以是1、2、3、4、5年或更长。在具体的实施方式中，患者接受了最初的弹丸式施用，随后接受了1个或多个周期的治疗。
在一个实施方式中，最初的弹丸式施用包括给患者静脉内施用剂量为大于或等于2mg/kg的Neutrokine-α的抗体拮抗剂。在一个实施方式中，最初的弹丸式施用包括给患者静脉内施用剂量为大于或等于5mg/kg的Neutrokine-α的抗体拮抗剂。在优选的实施方式中，最初的弹丸式施用是给患者静脉内施用剂量为大于或等于10mg/kg的Neutrokine-α的抗体拮抗剂。在其他的实施方式中，最初的弹丸式施用是给患者静脉内施用剂量为大于或等于15mg/kg的Neutrokine-α的抗体拮抗剂。在一个实施方式中，最初的弹丸式施用包括给患者静脉内施用剂量为大于或等于20mg/kg的Neutrokine-α的抗体拮抗剂。
在其他的实施方式中，最初的弹丸式施用包括抗CD20抗体。
在其他的实施方式中，最初的弹丸式施用包括B细胞耗竭剂。
本发明也提供了包括一个或多个填满药物组合物的一种或多种组分的容器的药物包或试剂盒。任选地，与这些容器相伴随的可以是政府监督部门所规定的关于药品或生物产品的生产、使用或销售方面的通知，该通知反映了用于人体施用的药品或生物产品的生产、使用或销售的监督部门的认证。
可以单独地或联合其他的治疗药物一起施用免疫调节剂，所述其他的治疗药物包括但不限于一种或多种其他的免疫调节剂、化疗药物、抗生素、抗病毒药、甾体类或非甾体类抗炎药、传统的免疫治疗剂和细胞因子。可以伴随地例如作为混合物、分离地但同时地或同步地、或次序地施用所述组合。这包括其中组合药物被作为治疗混合物一起施用的情况，也包括其中组合药物被分离地但同时地施用例如经分离的静脉通路进入到同一个体体内的过程。“组合”施用还包括分离地先施用其中一种化合物或药物，随后施用第二种化合物或药物。
在随后的段落中，阐述了可以联合其他的化合物施用免疫调节剂。在某些情况中，其他的化合物本身也是一种免疫调节剂。那些段落中的阐述被计划用于传达一种观点，即特异地涉及结合本发明的方法可以联合施用两种或更多种不同的免疫调节剂。例如，特异地涉及结合本发明的方法可以联合抗CD20抗体联合使用抗Neutrokine-α抗体。
可以联合免疫调节剂施用的传统的非特异性免疫抑制剂包括但不限于类固醇、环孢菌素、环孢菌素类似物、环磷酰胺、环磷酰胺IV、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、硫唑嘌呤、FK506、15-脱氧精胍菌素、和其他通过抑制效应T细胞的功能而发挥作用的免疫抑制剂。可以联合免疫调节剂施用的其他免疫抑制剂包括但不限于泼尼松龙、甲氨喋呤、沙利度胺、甲氧沙林、雷帕霉素、来氟米特、咪唑立宾(BREDININTM)、布喹那、脱氧精胍菌素、和Azaspirane(SKF 105685)。
在具体的实施方式中，可以联合免疫抑制剂施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的免疫抑制制剂包括但不限于ORTHOCLONE 
Figure A200680047110D01641
3(莫罗单抗-CD3)、SANDIMMUNETM、NEORALTM、SANGDYATM(环孢菌素)、(FK506、他克莫司)、
Figure A200680047110D01643
(霉酚酸酯，其活性代谢物是霉酚酸)、IMURANTM(硫唑嘌呤)、糖皮质激素、肾上腺皮质类固醇例如DELTASONETM(泼尼松)和HYDELTRASOLTM(泼尼松龙)、FOLEXTM和MEXATETM(氨甲蝶呤)、OXSORALEN-ULTRATM(甲氧沙林)和RAPAMUNETM(西罗莫司)。在一个具体的实施方式中，可以用免疫抑制剂阻止对器官或骨髓抑制的排异。
在另一个实施方式中，联合类固醇激素治疗施用免疫调节剂。可以联合免疫调节剂施用的类固醇包括但不限于口服糖皮质激素、泼尼松、和甲基泼尼松龙(例如IV甲基泼尼松龙)。在一个具体的实施方式中，联合泼尼松施用免疫调节剂。在一个进一步的具体的实施方式中，联合泼尼松和免疫抑制剂施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂和泼尼松一起施用的免疫抑制剂是那些在此所述的免疫抑制剂，包括但不限于硫唑嘌呤、环磷酰胺和环磷酰胺IV。在另一个具体的实施方式中，联合甲基泼尼松龙施用免疫调节剂。在一个进一步具体的实施方式中，联合甲基泼尼松龙和免疫抑制剂施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂和甲基泼尼松龙一起施用的免疫抑制剂是那些在此所述的免疫抑制剂，包括但不限于硫唑嘌呤、环磷酰胺和环磷酰胺IV。
在一个优选的实施方式中，联合抗疟药施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的抗疟药包括但不限于羟氯喹(例如PLAQUENILTM)、氯喹、和/或奎那克林。
在一个优选的实施方式中，联合NSAID施用免疫调节剂。
在一个非排他的实施方式中，联合1、2、3、4、5、10、或更多种以下药物施用免疫调节剂：NRD-101(Hoechst Marion Roussel)、双氯酚酸(Dimethaid)、本嗯丙酸钾(Monsanto)、美卡舍明(Chiron)、T-614(Toyama)、培美曲塞二钠(Eli Lilly)、阿曲留通(Abbott)、伐地考昔(Monsanto)、伊尔替酸(Byk Gulden)、Campath、AGM-1470(Takeda)、CDP-571(Celltech Chiroscience)、CM-101(CarboMed)、ML-3000(Merckle)、CB-2431(KS Biomedix)、CBF-BS2(KS Biomedix)、IL-1Ra基因治疗(Valentis)、JTE-522(Japan Tobacco)、紫杉醇(Angiotech)、DW-166HC(Dong Wha)、darbufelone mesylate(Warner-Lambert)、可溶性TNF受体1(synergen；Amgen)、IPR-6001(Institute for PharmaceuticalResearch)、托卡特(Hoffman-La Roche)、EF-5(Scotia Pharmaceuticals)、BIIL-284(Boehringer Ingelheim)、BIIF-1149(Boehringer Ingelheim)、LeukoVax(Inflammatics)、MK-663(Merck)、ST-1482(Sigma-Tau)、和butixocort propionate(WarnerLambert)。
在一个实施方式中，联合一种或多种以下药物施用免疫调节剂：英夫利昔单抗(也称作RemicadeTM Centocor，Inc.)、托卡特(Roche，RO-32-3555)、来氟米特(也称作AravaTM，来自Hoechst Marion Roussel)、KineretTM(IL-1受体拮抗剂，也称作阿那白滞素。来自Amgen，Inc.)、SCIO-469(p38激酶抑制剂，来自Scios，Inc)、(来自Abbott实验室的阿达木单抗)、和/或ASLERATM(普拉雄酮，脱氢表雄酮，GL701，来自Genelabs Technologies Inc)。
在另一个实施方式汇总，可以联合1、2、3、4、5、或更多种以下药物施用免疫调节剂：氨甲蝶呤、柳氮磺吡啶、硫代硫酸金钠、金诺芬、环孢菌素、青霉胺、硫唑嘌呤、抗疟药(如在此所述)、环磷酰胺、瘤可然、金制剂、ENBRELTM(依那西普)、抗TNF抗体、LJP394(La JollaPharmaceutical Company，San Diego，California)、和泼尼松龙。
在另一个实施方式中，联合抗疟药、氨甲蝶呤、抗TNF抗体、ENBRELTM、和/或柳氮磺吡啶施用免疫调节剂。在一个实施方式中，联合甲氨喋呤施用免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，联合抗TNF抗体施用免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，联合甲氨喋呤和抗TNF抗体施用免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，联合柳氮磺吡啶施用免疫调节剂。在另一个特数的实施方式中，联合甲氨喋呤、抗TNF抗体、和柳氮磺吡啶施用免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，联合ENBRELTM施用免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，联合ENBRELTM和甲氨喋呤施用免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，联合ENBRELTM、甲氨喋呤和柳氮磺吡啶施用免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，联合ENBRELTM、和柳氮磺吡啶施用免疫调节剂。在其他的实施方式中，一种或多种抗疟药与其中一种上述的组合一起组合施用。在一个具体的实施方式中，联合抗疟药(例如羟氯喹)、ENBRELTM、甲氨喋呤和柳氮磺吡啶施用免疫调节剂。在另一个具体的实施方式中，联合抗疟药(例如羟氯喹)、ENBRELTM、柳氮磺吡啶、抗TNF抗体、和甲氨喋呤施用免疫调节剂。
在一个另外的实施方式中，单独地或联合一种或多种静脉用免疫球蛋白制品施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂施用的静脉用免疫球蛋白制品包括但不限于GAMMARTM、IVEEGAMTM、SANDOGLOBULINTM、GAMMAGARDS/DTM、和GAMIMUNETM。在一个具体的实施方式中，在移植治疗(例如骨髓移植)中，联合静脉用免疫球蛋白制品施用免疫调节剂。
在一个另外的实施方式中，单独地或联合抗炎药施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂施用的抗炎药包括但不限于糖皮质激素和非甾体类抗炎药、氨基芳香羧酸衍生物、芳香乙酸衍生物、芳香丁酸衍生物、芳香羧酸衍生物、芳香丙酸衍生物、吡唑、吡唑酮、水杨酸衍生物、Thiazinecarboxamides、e-乙酰氨基己酸、S-腺苷甲硫氨酸、3-氨基-4-羟丁酸、阿米西群、苄达酸、苄达明、布可龙、联苯吡胺、地他唑、依莫法宗、愈创蓝油烃、萘普酮、尼美舒利、奥古蛋白、奥沙西罗、瑞尼托林、哌异噁唑、哌酰苯肟、普罗喹宗、胺丙噁二唑、和替尼达普。
在具体的实施方式中，单独地或联合抗CD4抗体施用免疫调节剂。在一个实施方式中，免疫调节剂和抗CD4抗体的共施用被用于治疗类风湿关节炎。在一个实施方式中，免疫调节剂和抗CD4抗体的共施用被用于治疗系统性红斑狼疮。
在具体的实施方式中，单独地或联合抗IL-15抗体施用免疫调节剂。在一个实施方式中，免疫调节剂和抗IL-15抗体的共施用被用于治疗类风湿关节炎。在一个实施方式中，免疫调节剂和抗IL-15抗体的共施用被用于治疗系统性红斑狼疮。
在具体的实施方式中，单独地或联合CTLA4-Ig和LEA29Y施用免疫调节剂。在一个实施方式中，免疫调节剂和CTLA4-Ig和LEA29Y的共施用被用于治疗类风湿关节炎。在一个实施方式中，免疫调节剂和CTLA4-Ig和LEA29Y的共施用被用于治疗系统性红斑狼疮。
在具体的实施方式中，单独地或联合抗IL-6受体抗体施用免疫调节剂。在一个实施方式中，免疫调节剂和抗IL-6受体抗体的共施用被用于治疗类风湿关节炎。在一个实施方式中，免疫调节剂和抗IL-6受体抗体的共施用被用于治疗系统性红斑狼疮。
在具体的实施方式中，单独地或联合抗C5(补体组分)抗体施用免疫调节剂。在一个实施方式中，免疫调节剂和抗C5抗体的共施用被用于治疗类风湿关节炎。在一个实施方式中，免疫调节剂和抗C5抗体的共施用被用于治疗系统性红斑狼疮。
在具体的实施方式中，单独地或联合补体级联抑制剂施用免疫调节剂。补体级联抑制剂包括但不限于抗裂解素抗体(Gliatech)、TP-10，重组可溶性I型补体受体(AVANT Immunotheragenetics Inc.)；Pexelizmab，补体C5抑制剂(Alexion Pharmaceuticals Inc.)；和5G1.1，组织补体部分C5裂解成其促炎症组分的单克隆抗体。在一个实施方式中，免疫调节剂和补体级联抑制剂的共施用被用于治疗炎症、类风湿关节炎和/或系统性红斑狼疮。
在另一个实施方式中，联合化疗药物施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的化疗药物包括但不限于抗生素衍生物(例如阿霉素、博莱霉素、柔红霉素、和更生霉素)；抗雌激素药(例如他莫昔芬)；抗代谢药(例如氟尿嘧啶、5-FU、甲氨喋呤、脱氧氟尿甙、干扰素α-2b、谷氨酸、光辉霉素、巯基嘌呤、和6-硫代鸟嘌呤)；细胞毒药物(例如卡氮芥、BCNU、环己亚硝脲、CCNU、阿糖胞苷、环磷酰胺、雌氮芥、羟基脲、甲基苄肼、丝裂霉素、白消安、顺铂和硫酸长春新碱)；激素(例如甲羟孕酮、雌二醇氮芥磷酸钠、乙炔雌二醇、雌二醇、醋酸甲地孕酮、甲睾酮、二磷酸己烯雌酚、氯烯雌醚和睾内酯)；氮芥衍生物(例如马法兰、瘤可然、双氯乙基甲胺(氮芥)和塞替派)；类固醇和组合物(例如倍他米松磷酸钠)；和其他药物(例如达卡巴嗪、天冬酰胺酶、硫酸长春新碱、硫酸长春花碱和足叶乙甙)。
在一个具体的实施方式中，联合CHOP(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松)或联合一种或多种CHOP中的组分施用免疫调节剂。在一个实施方式中，联合抗CD20抗体例如人单克隆抗CD20抗体施用免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，联合抗CD20抗体和CHOP，或抗CD20抗体和一种或多种CHOP组分的任一组合(特别是环磷酰胺和/或泼尼松)施用免疫调节剂。在一个具体的实施方式中，联合利妥昔单抗施用免疫调节剂。在一个进一步的实施方式中，与利妥昔单抗和CHOP，或利妥昔单抗和一种或多种CHOP组分的任一组合(特别是环磷酰胺和/或泼尼松)一起施用免疫调节剂。在一个具体的实施方式中，联合托西莫单抗(来自Coulter Pharmaceuticals，San Francisco，CA的抗CD20抗体)施用免疫调节剂。在一个进一步的实施方式中，与托西莫单抗和CHOP，或托西莫单抗和一种或多种CHOP组分的任一组合(特别是环磷酰胺和/或泼尼松)一起施用免疫调节剂。托西莫单抗可以任选地与131I相连接。抗CD20抗体可以任选地与放射性同位素、毒素或细胞毒前体药物相连接。
在另一个具体的实施方式中，联合ZevalinTM施用免疫调节剂。在一个进一步的实施方式中，与ZevalinTM和CHOP，或ZevalinTM和一种或多种CHOP组分的任一组合(特别是环磷酰胺和/或泼尼松)一起施用免疫调节剂。ZevalinTM可以与一种或多种放射性同位素相连接。特别优选的同位素是90Y和111In。
在另外的实施方式中，联合利妥昔单抗(RituxanTM)和/或IbritumomabTiuxetan(ZevalinTM，例如(In-111)Ibritumomab Tiuxetan或(Y-90)Ibritumomab Tiuxetan)施用免疫调节剂。在一个具体的实施方式中，联合施用利妥昔单抗和/或Ibritumomab Tiuxetan和免疫调节剂来治疗非霍奇金淋巴瘤。
在具体的实施方式中，施用免疫调节剂作为在疾病发作例如狼疮发作后补充抗CD20施用的长期治疗。
在另外的实施方式中，联合甲磺酸伊马替尼(格列
Figure A200680047110D0169180338QIETU
：4-[(4-Methyl-1-piperazinyl)methyl]-N-[4-methyl-3-[[4-(3-pyridinyl)-2-pyrimidinyl]amino]-phenyl]benzamide methanesulfonate)施用免疫调节剂。
在另外的实施方式中，联合硼替佐米(万珂TM[(1R)-3-methyl-1-[[(2S)-1-oxo-3-phenyl-2-[(pyrazinylcarbonyl)amino]propyl]amino]butyl]boronic acid)施用免疫调节剂。
在另外的实施方式中，联合阿伦珠单抗
Figure A200680047110D01691
施用免疫调节剂。
在另外的实施方式中，联合磷酸氟达拉滨
Figure A200680047110D01692
9H-Purin-6-amine，2-fluoro-9-(5-O-phosphono-β-D-arabinofuranosyl)(2-fluoro-ara-AMP))施用免疫调节剂。
可以联合一种或多种用于治疗多发性骨髓瘤的治疗药物施用免疫调节剂，所述药物包括但不限于烷化剂、蒽环类、卡氮芥(DTI-015、BCNU、BiCNU、Gliadel 
Figure A200680047110D01693
环磷酰胺(
Figure A200680047110D01694
CTX)、地塞米松
Figure A200680047110D01695
阿霉素
Figure A200680047110D01696
马法兰(L-PAM、
Figure A200680047110D01697
苯丙酸氮芥)、泼尼松、沙利度胺和长春新碱(
Figure A200680047110D01698
yCR、
可以联合免疫调节剂施用的用于治疗多发性骨髓瘤的治疗药物的优选组合包括但不限于环磷酰胺+泼尼松、马法兰+泼尼松(MP)、长春新碱+阿
Figure A200680047110D016910
+地塞米松(VAD)、长春新碱+卡氮芥+马法兰+环磷酰胺+泼尼松(MFMCP，M2方案)、和长春新碱+马法兰+环磷酰胺+泼尼松和长春新碱+卡氮芥+阿霉素+泼尼松的交替方案(VMCP/VBAP)。
可以联合免疫调节剂施用的一种或多种用于治疗非霍奇金淋巴瘤的治疗药物包括但不限于2-氯脱氧腺苷、阿米斯丁
Figure A200680047110D016911
WR-272)、贝沙罗汀(Targretin 
Figure A200680047110D016913
Targretin LGD1069)、博莱霉素白消安卡铂(
Figure A200680047110D016917
CBDCA)、卡氮芥(DTI-015、BCNU、BiCNU、Gliadel
Figure A200680047110D016918
瘤可然
Figure A200680047110D016919
顺铂(
Figure A200680047110D016920
CDDP)、克拉屈滨(2-CdA、
Figure A200680047110D01701
环磷酰胺CTX)、阿糖胞苷ara-C、胞嘧啶阿糖核苷、
Figure A200680047110D01704
达卡巴嗪(DTIC)、柔红霉素(Daunomycin、
Figure A200680047110D01705
Figure A200680047110D01706
Figure A200680047110D01707
Denileukin diftitox
Figure A200680047110D01708
地塞米松
Figure A200680047110D01709
甲磺酸多拉司琼
Figure A200680047110D017010
阿霉素
Figure A200680047110D017011
促红细胞生成素
Figure A200680047110D017012
磷酸足叶乙甙
Figure A200680047110D017013
依托泊甙(VP-16、
Figure A200680047110D017014
氟达拉滨
Figure A200680047110D017015
FAMP)、Granisetron氢化可的松、去甲基柔红霉素
Figure A200680047110D017017
DMDR、IDA)、异环磷酰胺
Figure A200680047110D017018
干扰素α干扰素α2a
Figure A200680047110D017020
氮芥(Nitrogen Mustard、HN2、马法兰(L-PAM、
Figure A200680047110D017022
苯丙酸氮芥)、(MTX、
Figure A200680047110D017024
甲基泼尼松龙
Figure A200680047110D017025
米托蒽醌
Figure A200680047110D017026
DHAD)、Ondansetron
Figure A200680047110D017027
喷司他丁
Figure A200680047110D017028
2-脱氧柯福霉素)、过磷酸胺(4-氢过氧化环磷酰胺，4-HC)、泼尼松、甲基苄肼
Figure A200680047110D017029
利妥昔单
Figure A200680047110D017030
抗CD20单抗)、塞替派(三亚以及硫化磷酰胺、
Figure A200680047110D017031
拓扑替康
Figure A200680047110D017032
SK&F-104864、NSC-609699、
Figure A200680047110D017033
长春花碱
Figure A200680047110D017034
VLB)、长春新碱
Figure A200680047110D017035
Onco
Figure A200680047110D017036
VCR、和长春地辛
Figure A200680047110D017038
可以联合免疫调节剂施用的用于治疗非霍奇金淋巴瘤的治疗药物的优选组合包括但不限于：
Figure A200680047110D017039
+博莱霉素+长春花碱+达卡巴嗪(ABVD)、抗独特型抗体治疗(BsAb)+干扰素阿尔法、抗独特型抗体治疗(BsAb)+瘤可然、抗独特型抗体治疗(BsAb)+白介素-2、BCNU(卡氮芥)+足叶乙甙+Ara-C(阿糖胞苷)+马法兰(BEAM)、博莱霉素+足叶乙甙+阿霉素+环磷酰胺+长春新碱+甲基苄肼+泼尼松(BEACOPP)、薯司他丁+长春新碱、环磷酰胺+BCNU(卡氮芥)+VP-16(足叶乙甙)(CBV)、环磷酰胺+长春新碱+泼尼松(CVP)、环磷酰胺+
Figure A200680047110D017040
(羟基柔红霉素)+长春新碱(Oncovorin)+泼尼松(CHOP)、环磷酰胺+
Figure A200680047110D017041
(米托蒽醌)+长春新碱(Oncovorin)+泼尼松(CNOP)、环磷酰胺+阿霉素+鬼臼噻吩甙+泼尼松、环磷酰胺+阿霉(羟基柔红霉素)+长春新碱(Oncovorin)+泼尼松+利妥昔单抗(CHOP+利妥昔单抗)、环磷酰胺+阿霉素+鬼臼噻吩甙+泼尼松+干扰素阿尔法、阿糖胞苷+博莱霉素+长春新碱+米托蒽醌(CytaBOM)、地塞米松+阿糖胞苷+顺铂(DHAP)、地塞米松+异环磷酰胺+顺铂+足叶乙甙(DICE)、阿霉素+长春花碱+氮芥+长春新碱+博莱霉素+足叶乙甙+泼尼松(Stanford V)、足叶乙甙+长春花碱+阿霉素(EVA)、足叶乙甙+甲基泼尼松+阿糖胞苷+顺铂(ESHAP)、足叶乙甙+泼尼松+异环磷酰胺+顺铂(EPIC)、氟达拉滨+米托蒽醌+地塞米松(FMD)、氟达拉滨+地塞米松+阿糖胞苷(ara-C)+顺铂
Figure A200680047110D01711
(FluDAP)、异环磷酰胺+顺铂+足叶乙甙(ICE)、氮芥+
Figure A200680047110D01712
(长春新碱)+甲基苄肼+泼尼松(MOPP)、美司那+异环磷酰胺+去甲基柔红霉素+足叶乙甙(MIZE)、甲氨喋呤+四氢叶酸解救+博莱霉素+阿霉素+环磷酰胺+Oncovorin+地塞米松(m-BACOD)、泼尼松+甲氨喋呤+阿霉素+环磷酰胺+足叶乙甙(ProMACE)、塞替派+白消安+环磷酰胺、塞替派+白消安+马法兰、拓扑替康+紫杉醇、和长春新碱(Oncovin
Figure A200680047110D0171180705QIETU
)+阿霉素
Figure A200680047110D0171180705QIETU
+地塞米松(VAD)。
可以联合免疫抑制剂施用的用于治疗非霍奇金淋巴瘤的治疗药物的更多的实例包括但不限于A007(4-4’-二羟基二苯甲酮-2，4-二硝基苯腙)、AG-2034(AG-2024、AG-2032、GARFT[甘氨酰胺核糖核苷转甲酰酶]抑制剂)、阿地白介素(IL-2、
Figure A200680047110D01713
阿伦珠单抗
Figure A200680047110D01714
阿利维甲酸
Figure A200680047110D01715
LGN-1057)、六甲蜜胺
Figure A200680047110D01716
六甲密胺、
Figure A200680047110D01717
氨基喜树碱(9-AC、9-氨基喜树碱、NSC 603071)、抗CD19/CD3单抗(抗CD19/CD3 scFv、抗NHL单抗)、抗独特型抗体治疗(BsAb)、阿糖鸟嘌呤(Ara-G、GW506U78)、三氧化二砷
Figure A200680047110D01718
ATO)、B43-染料木黄酮(抗CD19抗体/染料木黄酮缀合物)、B7抗体缀合物、Betathine(Beta-LT)、BlyS拮抗剂、薯司他丁-1
Figure A200680047110D01719
BMY-45618、NSC-339555)、CHML(Cytotropic Heterogeneous MolecularLipids)、氯法拉滨(氯-氟-araA)、达珠单抗
Figure A200680047110D017110
缩酚酸肽(FR901228、FK228)、多拉司他汀-10(DOLA-10、NSC-376128)、表柔比星
Figure A200680047110D017111
EPI、4’表-阿霉素)、Epratuzumab人源化抗CD22，HAT)、Fly3/flk2配体G3139
Figure A200680047110D017114
反义Bcl-2)、HulDl0(抗HLA-DR单抗、SMART1D10)、HumaLYM(抗CD20单抗)、Ibritumomabtiuxetan干扰素γ(γ-干扰素、Gamma 
Figure A200680047110D017117
γ-IF)、依立替康
Figure A200680047110D017118
CPT-11、CaptoCPT-1)、ISIS-2053、ISIS-3521(反义PKC-α)、Lmb-2免疫毒素(抗CD25重组免疫毒素、抗Tac(Fv)-PE38)、
Figure A200680047110D01721
(cytofectin+IL-2基因、IL-2基因治疗)、Lym-1(131I LYM-1)、淋巴瘤疫苗(Genitope)、萘拉滨(化合物506、U78)、Neugene化合物
Figure A200680047110D01722
反义myc)、NovoMAb-G2 scFv(NovoMAb-G2 IgM)、O6-benzylguanine(BG、
Figure A200680047110D01724
草酸铂
Figure A200680047110D01725
紫杉醇
Figure A200680047110D01726
紫杉醇-DHA培得星(BCX-34、PNP抑制剂)、Rebeccamycin和Rebeccamycin类似物、SCH-66336、索布佐生(MST-16、SU5416
Figure A200680047110D01729
VEGF抑制剂)、TER-286、沙利度胺、TNP-470(AGM-1470)、托西莫单抗
Figure A200680047110D017210
Valspodar(PSC833)、Vaxid(B细胞淋巴瘤DNA疫苗)、长春瑞滨
Figure A200680047110D017211
WF10(巨噬细胞调节剂)和XR-9576(XR-9351、P-糖蛋白/MDR抑制剂)。
可以联合免疫调节剂施用的一种或多种用于治疗急性淋巴细胞白血病的治疗药物包括但不限于安吖啶、卡铂
Figure A200680047110D017212
CBDCA)、卡氮芥(DTI-015、BCNU、BiCNU、Gliadel 
Figure A200680047110D017213
Cholecaliferol、环磷酰胺
Figure A200680047110D017214
CTX)、阿糖胞苷
Figure A200680047110D017215
ara-C、阿糖胞苷、
Figure A200680047110D017216
柔红霉素(Daunomycin、
Figure A200680047110D017218
Figure A200680047110D017219
地塞米松
Figure A200680047110D017220
阿霉素
Figure A200680047110D017221
Figure A200680047110D017222
足叶乙甙(VP-16、
Figure A200680047110D017223
Figure A200680047110D017224
Figure A200680047110D017225
G-CSF、
Figure A200680047110D017226
氟达拉滨
Figure A200680047110D0172180956QIETU
FAMP)、去甲基柔红霉素
Figure A200680047110D017228
DMDR、IDA)、异环磷酰胺
Figure A200680047110D017229
甲磺酸伊马替尼(STI-571、
Figure A200680047110D017230
Abl酪氨酸激酶抑制剂)、干扰素γ(Gamma-干扰素、Gamma 
Figure A200680047110D017231
Gamma-IF)、L-天冬酰胺酶
Figure A200680047110D017233
天冬酰胺酶
Figure A200680047110D017234
Figure A200680047110D017235
巯基嘌呤(6-巯基嘌呤、6-MP)、(MTX、米托蒽醌
Figure A200680047110D017238
DHAD)、
Figure A200680047110D017239
Figure A200680047110D017240
泼尼松、维甲酸、鬼臼噻吩甙(VM-26、
Figure A200680047110D017241
硫鸟嘌呤(6-硫鸟嘌呤、6-TG)、拓扑替康SK&F-104864、NSC-609699、维甲酸
Figure A200680047110D017244
Figure A200680047110D017245
ATRA、
Figure A200680047110D017246
和长春新碱Onco yCR、
Figure A200680047110D017249
可以联合免疫调节剂施用的用于治疗急性淋巴细胞白血病的治疗药物的更多的实例包括但不限于氨基喜树碱(9-AC、9-氨基喜树碱、NSC603071)、氨基蝶呤、Annamycin(AR-522、annamycin LF、
Figure A200680047110D01731
阿糖鸟嘌呤(Ara-G、GW506U78、
Figure A200680047110D01732
三氧化二砷
Figure A200680047110D01733
ATO、
Figure A200680047110D01734
B43-染料木黄酮(抗CD19抗体/染料木黄酮缀合物)、B43-PAP(抗CD19Ab/美洲商陆抗病毒蛋白缀合物)、Cordycepin、CS-682、地西他滨(5-杂氮-2’-脱氧胞苷)、多拉司他汀-10(DOLA-10、NSC-376128)、G3139
Figure A200680047110D01735
Figure A200680047110D0173181113QIETU
反义Bcl-2)、伊罗夫文(MGI-114、Ivofulvan、酰基富烯类似物)、MS-209、丁酸苯酯、奎宁、TNP-470(AGM-1470、夫马洁林)、Trimetrexate
Figure A200680047110D01737
Troxacitabine(BCH-204、BCH-4556、
Figure A200680047110D01738
UCN-01(7-羟基星孢素)、WHI-P131和WT1疫苗。
可以联合免疫调节剂施用的用于治疗急性淋巴细胞白血病的治疗药物的优选组合包括但不限于卡铂+米托蒽醌、卡氮芥+环磷酰胺+足叶乙甙、阿糖胞苷+柔红霉素、阿糖胞苷+阿霉素、阿糖胞苷+去甲基柔红霉素、阿糖胞苷+干扰素γ、阿糖胞苷+L-天冬酰胺酶、阿糖胞苷+米托蒽醌、阿糖胞苷+氟达拉滨和米托蒽醌、足叶乙甙+阿糖胞苷、足叶乙甙+异环磷酰胺、足叶乙甙+米托蒽醌、异环磷酰胺+足叶乙甙+米托蒽醌、异环磷酰胺+鬼臼噻吩甙、甲氨喋呤+巯基嘌呤、甲氨喋呤+巯基嘌呤+长春新碱+泼尼松、丁酸苯酯+阿糖胞苷、丁酸苯酯+足叶乙甙、丁酸苯酯+拓扑替康、丁酸苯酯+维甲酸、奎宁+阿霉素、奎宁+米托蒽醌+阿糖胞苷、硫鸟嘌呤+阿糖胞苷+安吖啶、硫鸟嘌呤+足叶乙甙+去甲基柔红霉素、硫鸟嘌呤+维甲酸+Cholecaliferol、长春新碱+泼尼松、长春新碱+泼尼松和L-天冬酰胺酶、长春新碱+地塞米松/泼尼松+天冬酰胺酶+柔红霉素/阿霉素、长春新碱+地塞米松/泼尼松+天冬酰胺酶+柔红霉素/阿霉素+非格司亭、长春新碱+地塞米松/泼尼松+天冬酰胺酶+柔红霉素/阿霉素+环磷酰胺+甲氨喋呤、和长春新碱+地塞米松/泼尼松+天冬酰胺酶+柔红霉素/阿霉素+环磷酰胺+甲氨喋呤+非格司亭。
可以联合免疫调节剂施用的一种或多种用于治疗慢性淋巴细胞白血病的治疗药物包括但不限于瘤可然克拉屈滨(2-CdA、环磷酰胺
Figure A200680047110D017312
CTX)、阿糖胞苷(Cytosar-
Figure A200680047110D017313
ara-C、胞嘧啶阿糖核苷、
Figure A200680047110D017314
Cytarabine ocfosfate、ara-CMP)、阿霉素(
Figure A200680047110D017315
Figure A200680047110D017316
Figure A200680047110D017317
)、氟达拉滨FAMP)、喷司他丁
Figure A200680047110D01741
2-脱氧助间型霉素)、泼尼松和长春新碱
Figure A200680047110D01742
Onco 
Figure A200680047110D01743
VCR、
Figure A200680047110D01744
可以联合免疫调节剂施用的用于治疗慢性淋巴细胞白血病的治疗药物的更多的实例包括但不限于阿伦珠单抗氨基喜树碱(9-AC、9-氨基喜树碱、NSC 603071)、氨基蝶呤、Annamycin(AR-522、annamycinLF、
Figure A200680047110D01746
阿糖鸟嘌呤(Ara-G、GW506U78、
Figure A200680047110D01747
化合物506U78)、三氧化二砷
Figure A200680047110D01748
ATO、
Figure A200680047110D01749
薯司他丁-1BMY-45618、NSC-339555)、CS-682、多拉司他汀-10(DOLA-10、NSC-376128)、非格司亭
Figure A200680047110D017411
G-CSF、Leukine)、Flavopiridol(NSC-649890、HMR-1275)、G3139
Figure A200680047110D017412
Figure A200680047110D017413
反义Bcl-2)、伊罗夫文(MGI-114、Ivofulvan、酰基富烯类似物)、MS-209、丁酸苯酯、
Figure A200680047110D017414
Figure A200680047110D017415
抗CD20单抗)、沙利度胺、Theophylline、TNP-470(AGM-1470、夫马洁林)、UCN-01(7-羟基星孢素)和WHI-P131。
可以联合免疫调节剂施用的用于治疗慢性淋巴细胞白血病的治疗药物的优选组合包括但不限于氟达拉滨+泼尼松、和环磷酰胺+阿霉素+长春新碱+泼尼松(CHOP)。
在另外的实施方式中，联合细胞因子施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的细胞因子包括但不限于GM-CSF、G-CSF、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL10、IL12、IL13、IL15、抗CD40、CD40L、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α、和TNF-β。在另一个实施方式中，免疫调节剂可以与任何一种白介素一起施用，包括但不限于IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19，IL-20、IL-21、和IL-22。在优选的实施方式中，联合IL4和IL10施用免疫调节剂。发明者已经观察到IL4和IL10都能增强Neutrokine-α介导的B细胞增殖。
在体外，发明者已经观察到IFNγ和IL-10增加了单核细胞和巨噬细胞的细胞表面表达的Neutrokine-α(通过培养原代单核细胞和20ng/mL M-CSF12-15天获得巨噬细胞)，其中IL-4处理减少了单核细胞和巨噬细胞的细胞表面表达的Neutrokine-α。与IL-10一起施用IL-4造成了对IL-10诱导的细胞表面表达Neutrokine-α的完全抑制。与IFNγ一起施用IL-4造成了细胞表面表达Neutrokine-α的增加。与未处理的巨噬细胞相比较，用IFN-γ和IL-10处理巨噬细胞造成了释放到培养基内的可溶性(活性)Neutrokine-α的量增加了3倍。
在另外的实施方式中，和趋化因子一起施用免疫调节剂。在另一个具体实施方式中，与趋化因子β-8、趋化因子β-1，、和/或巨噬细胞炎症蛋白-4一起施用免疫调节剂。在一个优选的实施方式中，与趋化因子β-8一起施用免疫调节剂。
在一个另外的实施方式中，联合IL-4拮抗剂施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的IL-4拮抗剂包括但不限于：可溶性IL-4受体多肽、多聚体形式的可溶性IL-4受体多肽、结合IL-4受体且不传导经IL-4引发的生物学信号的抗IL-4受体抗体、阻断IL-4和一种或多种IL-4受体结合的抗IL-4抗体、和结合IL-4受体且不传导经IL-4引发的生物学信号的IL-4的突变蛋白。优选地，本发明所采用的抗体是单克隆抗体(包括抗体片段，例如在此所述的那些片段)。
在一个另外的实施方式中，联合造血生长因子施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的造血生长因子包括但不限于LEUKINETM(SARGRAMOSTIMTM)和NEUPOGENTM(非格司亭TM)。
在一个另外的实施方式中，联合成纤维生长因子施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的成纤维生长因子包括但不限于FGF-1、FGF-2、FGF-3、FGF-4、FGF-5、FGF-6、FGF-7、FGF-8、FGF-9、FGF-10、FGF-11、FGF-12、FGF-13、FGF-14、和FGF-15。
在一个另外的实施方式中，联合抗高血压药施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的抗高血压药包括但不限于钙离子拮抗剂例如硝苯地平(ADALATTM、PROCARDIATM)、周围血管扩张剂例如肼屈嗪(APRESOLINETM)、贝塔肾上腺素能阻断剂例如普萘洛尔(INDERALTM)、α/β肾上腺素能阻断剂例如labetolol(NORMODYNETM、TRANDATETM)、抑制血管紧张素II生成的药物例如卡托普利(CAPOTENTM)、直接抑制血管紧张素II活性的药物例如氯沙坦(COZAARTM)、和噻嗪类利尿剂例如氢氯噻嗪(HYDRODIURILTM、ESIDREXTM)。
可以单独地或联合其他佐剂施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂施用的佐剂包括但不限于明矾、明矾加脱氧胆酸(ImmunoAg)、MTP-PE(Biocine Corp.)、QS21(Genentech，Inc.)、BCG、和MPL。在另一个具体的实施方式中，联合QS-21施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂施用的更多的佐剂包括但不限于单磷酸类脂免疫调节剂、AdjuVax 100a、QS-21、QS-18、CRL1005、铝盐、MF-59、和Virosomal佐剂技术。可以与免疫调节剂施用的疫苗包括但不限于针对性保护MMR(麻疹、腮腺炎、风疹)、脊髓灰质炎、水痘、破伤风/白喉、甲型肝炎、乙型肝炎、流感嗜血杆菌B、百日咳、肺炎、流感、Lyme病、轮状病毒、霍乱、黄热病、日本脑炎、脊髓灰质炎、狂犬病、伤寒、和百日咳、和或PNEUMOVAX-23TM的疫苗。在另一个具体的实施方式中，联合PNEUMOVAX-23TM使用免疫调节剂。
在一个实施方式中，联合TNF家族的另一个成员施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂施用的TNF、TNF相关分子或TNF样分子包括但不限于可溶形式的TNF-α、淋巴毒素-α(LT-α，也称作TNF-β)、LT-β(见于复合异三聚体LT-α2-β)、OPGL、FasL、CD27L、CD30L、CD40L、4-1BBL、DcR3、OX40L、TNF-γ(国际出版物WO 96/14328)、TRAIL/AIM-I(国际出版物WO97/33899)、LIGHT/AIM-II(国际出版物WO 97/34911)、APRIL(J.Exp.Med.188(6)：1185-1190)、endokine-α(国际出版物WO 98/07880)、FASTR/TR6(国际出版物WO 98/30694)、护骨蛋白(OPG)、和Neutrokine-α(国际出版物WO 98/18921)、OX40、和神经生长因子(NGF)、和可溶形式的Fas、CD30、CD27、CD40和4-IBB、TR2(国际出版物WO96/34095)、DR3(国际出版物WO 97/33904)、TRAIL-R1/DR4(国际出版物WO98/32856)、TRAIL-R3、TR5(国际出版物WO 98/30693)、TR6(国际出版物WO 98/30694)、TRAIL-R2/TR7(国际出版物WO 98/41629)、TRANK、TR9(国际出版物WO 98/56892)、TRAIL-R4/TR10(国际出版物WO 98/54202)、312C2(国际出版物WO 98/06842)、和TR12。
在另一个实施方式中，联合一种或多种Neutrokine-α受体(例如TACI、BCMA和BAFF-R)施用免疫调节剂。在优选的实施方式中，Neutrokine-α受体是可溶性的。在其他优选的实施方式中，Neutrokine-α受体与免疫球蛋白分子的Fc区例如IgG分子的Fc区相融合。例如，TACI的第1-154位氨基酸残基(GenBank编号AAC51790)、BCMA的第1-48位氨基酸(GenBank编号NP_001183)或BAFF-R的第1到81位氨基酸(GenBank编号NP_443177)可以与IgG分子的Fc区融合，并与另一种本领域已知的和/或在此所述的免疫调节剂联合使用。在另一个实施方式中，可以联合免疫调节剂施用的BAFF-R-Fc蛋白是与IgG1免疫球蛋白分子的Fc区融合的SEQ ID NO：10的第1到70位氨基酸。任选地，BAFF-R中的第20位氨基酸(缬氨酸)被天冬酰胺取代，BAFF-R中的第27位氨基酸(亮氨酸)被脯氨酸取代。
在一个优选的实施方式中，联合抗CD40L抗体和/或抗CD40抗体施用免疫调节剂。
在一个另外的实施方式中，单独地或联合抗血管生成剂施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂施用的抗血管生成剂包括但不限于血管生成抑制因子(Entremed、Rockville、MD)、肌钙蛋白-1(Boston Life Sciences，Boston，MA)、抗侵袭因子、维甲酸及其衍生物、紫杉醇(Taxol)、舒拉明、金属蛋白酶1组织抑制物、金属蛋白酶-2组织抑制物、VEGI、纤溶酶原活化因子抑制剂-1、纤溶酶原活化因子抑制剂-2、和各种形式的更轻的“d组”过渡金属。
更轻的“d族”过渡金属包括例如钒、钼、钨、钛、铌、和钽种类。这些过渡金属种类可以形成过渡金属复合物。合适的上面提及的过渡金属种类的复合物包括氧络过渡金属复合物。
钒复合物的代表性实例包括氧络钒复合物例如钒酸和氧钒复合物。合适的钒酸复合物包括偏钒酸和正钒酸复合物例如偏钒酸铵、偏钒酸钠和正钒酸钠。合适的氧钒复合物包括例如氧钒乙酰丙酮酯和硫酸氧钒包括硫酸氧钒水合物例如硫酸氧钒单水和三水合物。
钨和钼复合物的代表性实例也包括氧络复合物。合适的氧络钨复合物包括钨酸和氧化钨复合物。合适的钨酸复合物包括钨酸铵、钨酸钙、钨酸钠二水合物、和钨酸。合适的氧化钨包括氧化钨(IV)和氧化钨(VI)。合适的氧络钼复合物包括钼酸、氧化钼、和氧钼基复合物。合适的钼酸复合物包括钼酸铵及其水合物、钼酸钠及其水合物、和钼酸钾及其水合物。合适的氧化钼包括氧化酶(VI)、氧化钼(VI)和钼酸。合适的氧钼基复合物包括例如氧钼基乙酰丙酮。其他合适的钨和钼复合物包括源自例如甘油、酒石酸和糖的氢氧衍生物。
在本发明中，也可以利用多种其他的抗血管生成因子。代表性的实例包括但不限于血小板因子4、硫酸鱼精蛋白、硫酸甲壳素衍生物(由母螃蟹壳制成)(Murata et al.，Cancer Res.51：22-26，1991)、硫酸多糖肽聚糖复合物(SP-PG)(类固醇例如雌激素和枸橼酸他莫昔芬的存在可以增强这种化合物的功能)、十字孢碱、基质代谢的调节剂包括例如脯氨酸类似物、顺式羟脯氨酸、d，L-3，4-脱氢脯氨酸、硫代脯氨酸、α，α-联吡啶、氨基丙腈延胡索酸、4-丙基-5-(4-吡啶基)-2(3H)-噁唑酮、甲氨喋呤、米托蒽醌、肝素、干扰素、血清β2微球蛋白、chIMP(Pavloff et al.，J.Bio.Chem.267：17321-17326，1992)、糜蛋白酶抑制素(Tomkinson et al.，Biochem J.286：475-480，1992)、环糊精十四硫酸酯、Eponemycin、喜树碱、夫马洁林(Ingber et al.，Nature 348：555-557，1990)、硫代苹果酸金钠(“GST”；Matsubara and Ziff，J.Clin.Invest.79：1440-1446，1987)、血清抗胶原酶、α2-抗血纤维蛋白酶(Holmes et al.，J.Biol.Chem.262(4)：1659-1664，1987)、比生群(NationalCancer Institute)、氯苯扎利二钠(N-(2)-carboxyphenyl-4-chloroanthronilicacid disodium或“CCA”(Takeuchi et al.，Agents Actions 36：312-316，1992))、和金属蛋白酶抑制剂例如BB94。
在本发明中也可以利用的其他的抗血管生成因子包括沙利度胺(Celgene，Warren，NJ)、Angiostatic steroid、AGM-1470(H.Brem and J.Folkman J Pediatr.Surg.28：445-51(1993))、整联蛋白αvβ3拮抗剂(C.Storgard et al.，J Clin.Invest.103：47-54(1999))、Carboxynaminolmidazole、Carboxyamidotriazole(CAI)(National Cancer Institute，Bethesda，MD)、Conbretastatin A-4(CA4P)(OXiGENE，Boston，MA)、角鲨胺(MagaininPharmaceuticals，Plymouth Meeting，PA)、TNP-470(Tap Pharmaceuticals，Deerfield，IL)、ZD-0101(AstraZeneca，London，UK)、APRA(CT2584)、氟草胺、Byrostatin-1(SC339555)、CGP-41251(PKC412)、CM101、右雷佐生(ICRF187)、DMXAA、内皮抑素、Flavopridiol、染料木黄酮(Genestein)、GTE、ImmTher、Iressa(ZD1839)、奥曲肽(Somatostatin)、Panretin、Penacillamine、Photopoint、PI-88、普啉司他(AG-3340)Purlytin、Suradista(FCE26644)、他莫昔芬(Nolvadex)、他扎罗汀、四硫钼酸盐、希罗达(Capecitabine)、和5-氟尿嘧啶。
可以联合免疫调节剂施用的抗血管生成剂可以通过多种机制发挥作用，所述机制包括但不限于抑制细胞外基质的蛋白裂解、阻断内皮细胞-细胞外基质粘附分子的功能、拮抗血管生成诱导剂例如生长因子的功能、和抑制增殖性内皮细胞所表达的整联蛋白受体。干扰细胞外基质蛋白裂解并可以联合免疫调节剂施用的抗血管生成剂的实例包括但不限于AG-3340(Agouron，La Jolla，CA)、BAY-12-9566(Bayer，West Haven，CT)、BMS-275291(Bristol Myers Squibb，Princeton，NJ)、CGS-27032A(Novartis，EastHanover，NJ)、马立马司他(British Biotech，Oxford，UK)、和Metastat(Aeterna，St-Foy，Quebec)。通过阻断内皮细胞-细胞外基质粘附分子的功能而发挥作用以及可以联合免疫调节剂施用的抗血管生成抑制剂的实例包括但不限于EMD-121974(Merck KcgaA Darmstadt，Germany)和Vitaxin(Ixsys，La Jolla，CA/Medimmune，Gaithersburg，MD)。通过直接拮抗或抑制血管生成诱导物而发挥作用以及可以联合免疫调节剂施用的抗血管生成剂的实例包括但不限于Angiozyme(Ribozyme，Boulder，CO)、抗VEGF抗体(Genentech，S.San Francisco，CA)、PTK-787/ZK-225846(Novartis，Basel，Switzerland)、SU-101(Sugen，S.San Francisco，CA)、SU-5416(Sugen/Pharmacia Upjohn，Bridgewater，NJ)、和SU-6668(Sugen)。其他抗血管生成剂的作用是间接抑制血管生成。可以联合免疫调节剂施用的血管生成的间接抑制剂的实例包括但不限于IM-862(Cytran，Kirkland，WA)、干扰素-α、IL-12(Roche，Nutley，NJ)、和Pentosan polysulfate(Georgetown University，Washington，DC)。
在具体的实施方式中，免疫调节剂和抗血管生成剂的联合应用被用于治疗、预防、和/或改善自身免疫病例如在此所述的自身免疫病。
在一个具体的实施方式中，免疫调节剂和抗血管生成剂的联合应用被用于治疗、预防、和/或改善关节炎。在一个更具体的实施方式中，免疫调节剂和抗血管生成剂的联合应用被用于治疗、预防、和/或改善类风湿关节炎。
在另一个实施方式中，联合抗凝剂施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的抗凝剂包括但不限于肝素、华法林和阿司匹林。在一个具体的实施方式中，联合肝素和/或华法林施用免疫调节剂。在另一个具体的实施方式中，联合华法林施用免疫调节剂。在另一个具体的实施方式中，联合华法林和阿司匹林施用免疫调节剂。在另一个具体的实施方式中，联合肝素施用免疫调节剂。在另一个具体的实施方式中，联合肝素和阿司匹林施用免疫调节剂。
在另一个实施方式中，联合抑制抗心磷脂抗体生成的药物施用免疫调节剂。在具体的实施方式中，联合阻断和/或降低抗心磷脂抗体结合磷脂结合性血浆蛋白β2-糖蛋白I(b2GPI)的能力的药物施用免疫调节剂。
在某些实施方式中，联合抗逆转录病毒剂、核苷逆转录酶抑制剂、非核苷逆转录酶抑制剂、和/或蛋白酶抑制剂施用免疫调节剂。可以联合免疫调节剂施用的核苷逆转录酶抑制剂包括但不限于RETROVIRTM(齐多夫定/AZT)、VIDEXTM(双脱氧腺苷/ddI)、HIVIDTM(扎西他滨/ddC)、ZERITTM(司他夫定/d4T)、EPIVIRTM(拉米夫定/3TC)、和COMBIVIRTM(齐多夫定/拉米夫定)。可以联合免疫调节剂施用的非核苷逆转录酶抑制剂包括但不限于VIRAMUNETM(奈韦拉平)、RESCRIPTORTM(地拉夫定)、和SUSTIVATM(依法韦仑)。可以联合免疫调节剂施用的蛋白酶抑制剂包括但不限于CRIXIVANTM(印地那韦)、NORVIRTM(利托那韦)、INVIRASETM(沙奎那韦)、和VIRACEPTTM(那非那韦)。
在某些实施方式中，联合抗逆转录病毒剂、核苷/核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)、和/或蛋白酶抑制剂(PI)施用免疫调节剂。可以联合免疫调节剂施用的NRTIs包括但不限于RETROVIRTM(齐多夫定/AZT)、VIDEXTM(双脱氧腺苷/ddI)、HIVIDTM(扎西他滨/ddC)、ZERITTM(司他夫定/d4T)、EPIVIRTM(拉米夫定/3TC)、和COMBIVIRTM(齐多夫定/拉米夫定)。可以联合免疫调节剂施用的NNRTIs包括但不限于VIRAMUNETM(奈韦拉平)、RESCRIPTORTM(地拉夫定)、和SUSTIVATM(依法韦仑)。可以联合免疫调节剂施用的PIs包括但不限于CRIXIVANTM(印地那韦)、NORVIRTM(利托那韦)、INVIRASETM(沙奎那韦)、和VIRACEPTTM(那非那韦)。
其他的NRTI包括LODENOSINETM(F-ddA；酸稳定的腺苷NRTI；Triangle/Abbott)、COVIRACILTM(恩曲他滨/FTC；结构上类似于拉米夫定(3TC)，但是体外活性是拉米夫定的3到10倍；Triangle/Abbott)、dOTC(BCH-10652；也在结构上类似于拉米夫定，但是仍保留了抗大部分拉米夫定耐药性分离株的活性；Biochem Pharma)、阿德福韦(FDA拒绝批准其用于抗HIV治疗；Gilead Sciences)、
Figure A200680047110D0180181723QIETU
(阿德福韦二匹福酯；阿德福韦的活性前体药物；其活性形式为PMEA-pp)、TENOFOVIRTM(bis-POCPMPA，PMPA前体药物；Gilead)、DAPD/DXG(DAPD的活性代谢物；Triangle/Abbott)、D-D4FC(类似于3TC，具有抗AZT/3TC耐药病毒的活性)、GW420867X(Glaxo Wellcome)、ZIAGENTM(阿巴卡韦/159U89；GlaxoWellcome Inc.)、CS-87(3’叠氮基-2’，3’-双脱氧尿苷；WO 99/66936)、和β-L-FD4C及β-L-FddC的携带S-酰基-2-硫乙基(S-acyl-2-thioethyl，SATE)的前体药物形式(WO 98/17281)。
其他的NNRTI包括COACTINONTM(乙米韦林/MKC-442、HEPT型的强NNRTI；Triangle/Abbott)、CAPRAVIRINETM(AG-1549/S-1153，下一代的具有抗含K103N突变的病毒活性的NNRTI；Agouron)、PNU-142721(具有比其前身地拉夫定高20到50倍的活性，并能抗K104N突变体；Pharmacia & Upjohn)、DPC-961和DPC-963(被设计成抗具有K103N突变的病毒的依法韦仑的第二代衍生物；DuPont)、GW-420867X(具有比HBY097高25倍的活性，并能抗K103N突变体；Glaxo Wellcome)、CALANOLIDE A(来自橡胶树的天然存在的物质；能抗含Y181C和K103N突变的病毒)；和Propolis(WO 99/49830)。
其他的蛋白酶抑制剂包括LOPINAVIRTM(ABT378/r；AbbottLaboratories)、BMS-232632(一种氮杂肽；Bristol-Myres Squibb)、TIPRANAVIRTM(PNU-140690，非肽的二氢吡咯酮；Pharmacia &Upjohn)、PD-178390(非肽的二氢吡咯酮；Parke-Davis)、BMS 232632(一种氮杂肽；Bristol-Myers Squibb)、L-756，423(印地那韦类似物；Merck)、DMP-450(环状尿素复合物；Avid & DuPont)、AG-1776(具有体外抗蛋白酶抑制剂耐药病毒活性的肽模拟物；Agouron)、VX-175/GW-433908(安泼那韦的磷酸前体药物；Vertex & Glaxo Welcome)、CGP61755(Ciba)、和AGENERASETM(安泼那韦；Glaxo Wellcome Inc.)。
其他的抗逆转录病毒剂包括融合抑制剂/gp41结合剂。融合抑制剂/gp41结合剂包括T-20(来自HIV gp41跨膜蛋白外功能区的第643到678位氨基酸的肽，其与静止状态的gp41结合，并阻止其转化成融合状态；Trimeris)和T-1249(第二代融合抑制剂；Trimeris)。
其他的抗逆转录病毒剂包括融合抑制剂/趋化因子受体拮抗剂。融合抑制剂/趋化因子受体拮抗剂包括CXCR4拮抗剂例如AMD3100(bicyclam)、SDF-1及其类似物、和ALX40-4C(阳离子肽)、T22(18个氨基酸的肽；Trimeris)、和T22类似物T134和T140；CCR5拮抗剂例如RANTES(9-68)、AOP-RANTES、NNY-RANTES、和TAK-779；和CCR5/CXCR4拮抗剂例如NSC 651016(偏端霉素类似物)。也包括CCR2B、CCR3、和CCR6拮抗剂。趋化因子受体激动剂例如RANTES、SDF-1、MIP-1α、MIP-1β等也抑制融合。
其他的抗逆转录病毒剂包括整合酶抑制剂。整合酶抑制剂包括二咖啡酰奎宁酸(DFQA)、L-菊苣酸(一种二咖啡酰酒石酸(DCTA))、喹唑啉(QLC)和相关的蒽醌、ZINTEVIRTM(AR177，寡核苷酸，可能作用于细胞表面而不是真正的整合酶抑制剂；Arondex)、萘酚例如在WO 98/50347中所述的那些萘酚。
其他的抗逆转录病毒剂包括羟基脲样化合物例如BCX-34(嘌呤核苷磷酸化酶，Biocryst)、核苷酸还原酶抑制剂例如DIDOXTM(Molecules forHealth)、次黄嘌呤单磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂例如VX-497(Vertex)、和霉酚酸例如CellCept(霉酚酸酯；Roche)。
其他的抗逆转录病毒剂包括病毒整合酶的抑制剂、病毒基因组核转位的抑制剂例如亚芳基双(甲基酮)化合物、HIV进入的抑制剂例如AOP-RANTES、NNY-RANTES、RANTES-IgG融合蛋白、RANTES和氨基葡聚糖(GAG)的可溶性复合物、和AMD-3100；核衣壳锌指抑制剂例如二噻烷化合物；HIV Tat和Rev的靶点；以及药物增强剂例如ABT-378。
其他的抗逆转录病毒治疗和辅助治疗包括细胞因子和淋巴因子例如MIP-1α、MIP-1β、SDF-1α、IL-2、PROLEUKINTM(阿地白介素/L2-7001；Chiron)、IL-4、IL-8、IL-10、IL-12、和IL-13；干扰素例如IFN-α2a；TNF、NFκB、GM-CSF、M-CSF、和IL-10的拮抗剂；调控免疫激活的药物例如环孢菌素和泼尼松；疫苗例如RemuneTM(HIV免疫原)、APL 400-003(Apollon)、重组gp120和片段、二价(B/E)重组包膜糖蛋白、rgp120CM235、MN rgp120、SF-2 rgp120、gp120/可溶性CD4复合物、Delta JR-FL蛋白、源自非连续的gp120 C3/C4区的分支合成肽、融合-互补免疫原、和Gag、Pol、Nef、及Tat疫苗；基因治疗例如遗传抑制子元件(GSE；WO 98/54366)、和细胞内趋化因子(intrakine)(靶向于ER阻断新合成的CCR5的表面表达的遗传学修饰的CC趋化因子(Yang et al.，PNAS94：11567-72(1997)；Chen et al.，Nat.Med.3：1110-16(1997)))；抗体例如抗CXCR4抗体12G5、抗CCR5抗体2D7、5C7、PA8、PA9、PA10、PA11、PA12、和PA14、抗CD4抗体Q4120和RPA-T4、抗CCR3抗体7B11、抗gp120抗体17b、48d、447-52D、257-D、268-D和50.1、抗Tat抗体、抗TNF-α抗体、和单克隆抗体33A、芳香烃(AH)受体激动剂和拮抗剂例如TCDD、3，3’，4，4’，5-五氯联苯、3，3’，4，4’-四氯乙烷、和α-萘黄酮(WO 98/30213)、和抗氧化剂例如γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸乙酯(γ-GCE；WO99/56764)。
在其他实施方式中，可以联合抗机会性感染药物施用免疫调节剂。可以联合免疫调节剂的抗机会性感染药物包括但不限于TRIMETHOPRIM-SULFAMETHOXAZOLETM、DAPSONETM、PENTAMIDINETM、ATOVAQUONETM、ISONIAZIDTM、RIFAMPINTM、PYRAZINAMIDETM、ETHAMBUTOLTM、RIFABUTINTM、CLARITHROMYCINTM、AZITHROMYCINTM、GANCICLOVIRTM、FOSCARNETTM、CIDOFOVIRTM、FLUCONAZOLETM，ITRACONAZOLETM、KETOCONAZOLETM、ACYCLOVIRTM、FAMCICOLVIRTM、PYRIMETHAMINETM、LEUCOVORINTM、NEUPOGENTM(非格司亭/G-CSF)、和LEUKINETM(sargramostim/GM-CSF)。在一个具体的实施方式中，用免疫调节剂和TRIMETHOPRIM-SULFAMETHOXAZOLETM、DAPSONETM、PENTAMIDINETM、和/或ATOVAQUONETM的任一组合预防性治疗、预防、和/或诊断机会性卡氏肺孢子菌肺炎感染。在另一个具体的实施方式中，用免疫调节剂和ISONIAZIDTM、RIFAMPINTM、PYRAZINAMIDETM、和/或ETHAMBUTOLTM的任一组合预防性治疗、预防、和/或诊断机会性鸟型分枝杆菌复合物感染。在另一个具体的实施方式中，用免疫调节剂和RIFABUTINTM、CLARITHROMYCINTM、和/或AZITHROMYCINTM的任一组合预防性治疗、预防、和/或诊断机会性结核分枝杆菌感染。在另一个具体的实施方式中，用免疫调节剂和GANCICLOVIRTM、FOSCARNETTM、和/或CIDOFOVIRTM的任一组合预防性治疗、预防、和/或诊断机会性巨细胞病毒感染。在另一个具体的实施方式中，用免疫调节剂和FLUCONAZOLETM、ITRACONAZOLETM、和/或KETOCONAZOLETM的任一组合预防性治疗、预防、和/或诊断机会性真菌感染。在另一个具体的实施方式中，用免疫调节剂和ACYCLOVIRTM和/或FAMCICOLVIRTM的任一组合预防性治疗、预防、和/或诊断机会性I型和/II型单纯疱疹病毒感染。在另一个具体的实施方式中，用免疫调节剂和PYRIMETHAMINETM和/或LEUCOVORINTM的任一组合预防性治疗、预防、和/或诊断机会性鼠弓形体感染。在另一个具体的实施方式中，用免疫调节剂和LEUCOVORINTM和/或NEUPOGENTM的任一组合预防性治疗、预防、和/或诊断机会性细菌感染。
在一个进一步的实施方式中，联合抗病毒剂施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的抗病毒剂包括但不限于阿昔洛韦、利巴韦林、金刚烷胺和金刚乙胺(remantidine)。
在一个进一步的实施方式中，联合抗生素施用免疫调节剂。可以与免疫调节剂一起施用的抗生素包括但不限于阿莫西林、氨基糖甙、β-内酰胺类(糖肽)、β-内酰胺酶、克林霉素、氯霉素、头孢菌素、环丙沙星、环丙沙星、红霉素、氟喹诺酮、大环内酯、甲硝唑、青霉素、喹诺酮、利福平、链霉素、磺胺、四环素、甲氧苄胺嘧啶、甲氧苄胺嘧啶-硫酸甲氧苄啶、和万古霉素。
另外，可以单独地或联合其他的治疗方案施用免疫调节剂，所述治疗方案包括但不限于放射治疗。可以次序地和/或同步地施用这些组合治疗。
试剂盒
本发明也提供了包括一个或多个填充了一种或多种药物组合物的组分的容器的药物袋或试剂盒。任选地，与这些容器相伴随的可以是政府监督部门所规定的关于药品或生物产品的生产、使用或销售方面的通知，该通知反映了用于人体施用的药品或生物产品的生产、使用或销售的监督部门的认证。另外，可以采用与其他治疗化合物组合的本发明的多肽。在一个具体的实施方式中，试剂盒含有政府监督部门所规定的关于药品或生物产品的生产、使用或销售方面的通知，该通知反映了用于人体施用的药品或生物产品的生产、使用或销售的监督部门认证了其在ANA滴度大于或等于1:80和/或血浆或血清抗dsDNA抗体大于或等于30IU的患者中的应用。
实施例
虽然已经广泛地描述了本发明，本领域人员参照下面的实施例将更容易理解本发明，所述实施例在此只是举例说明的目的，并不作为对本发明的限定。
实施例1：应用中和Neutrokine-α蛋白的抗体(Belimumab(贝利单抗))治疗系统性红斑狼疮(SLE)的临床试验结果的总结
一个前瞻性、随机、双盲、安慰剂对照试验是关于SLE标准治疗基础上加入Belimumab(中和Neutrokine-α的抗体)治疗SLE的研究。总共入选了449例符合ACR标准(Tan et al.，Arthritis Rheum.25：1271-7，(1982)；和Hochberg et al.，Arthritis Rheum.40：1725，(1997))、具有可测定的自身抗体的病史以及筛选时SELENA SLEDAI评分≥4的SLE对象。
在第0、14、28天，然后每28天静脉内施用研究药物(1、4、10mg/kg Belimumab)或安慰剂，共52周。给完成52周治疗的对象进行是否继续24周延长期研究的选择。Belimumab被配制于10mM柠檬酸钠、1.9％甘油、0.5％蔗糖、0.01％(w/v)聚山梨酯80(pH6.5±0.3)。接受安慰剂的对象也接受没有Belimumab的制剂(10mM柠檬酸钠、1.9％甘油、0.5％蔗糖、0.01％(w/v)聚山梨酯80(pH6.5±0.3))。每隔1到2个月用SELENASLEDAI(SS)、SLE Flare Index、医师整体评价(PGA)评价疗效。也规律地评价BILAG和SF-36疾病活动度评分。预定的主要疗效终点是24周时SS评分的下降百分比以及52周内如SLE发作指数所定义的至发作时间。生物学标记物包括ANA、抗dsDNA抗体(Ab)、C3/C4、Ig同种型、和周围B细胞FACS。每隔1到2个月用4色FACS(CD19、CD20、CD27、CD69、CD38、CD138和CD45)分析B细胞。在同一次随访中获得血清自身抗体水平包括抗dsDNA Ab、Ig同种型、总蛋白和白蛋白水平。用似然比卡方分析、Wilcoxon检验或t-检验分析生物学标记物的变化。
在本研究中，对象的平均年龄为42岁；这些对象中的平均SLE患病时间为8.8年。这些对象中的基线疾病活动性水平是相当高的，接近67％的对象的SS评分为8分或更高(平均SS评分为9.6)。93％本研究入选的对象都是女性。70％的对象是白种人；24％的对象是非裔美国人；3％的对象是亚洲裔；以及18％的对象是西班牙裔(重叠分类)。98％的对象具有历史记录的ANA阳性，以及71.5％的对象在入选时为ANA+(筛选时/第0天ANA滴度≥1：80和/或抗dsDNA Ab≥30IU/ml)。50％对象在入选时的抗dsDNA滴度≥30IU/ml。基线时最常见的用于SLE治疗的药物包括以下药物：类固醇(接近70％对象)、氨基喹啉(例如抗疟药)(70％)、COX-2抑制剂(28％)、COX-1抑制剂(26％)、硫唑嘌呤(20％)、甲氨喋呤(16％)、和霉酚酸酯(16％)。在基线时，分别有34％和42％的试验组和安慰剂组对象接受了有临床意义剂量的全身糖皮质激素(定义为>7.5mg/天的泼尼松或等效剂量的其他糖皮质激素)。试验组间的基线表征或完成率方面都没有显著差异(81％完成试验)。
虽然主要疗效终点没有达到统计学显著差异，但是在ANA+对象中，第52周时SS评分被显著地降低了29％(p＝0.0435，见图1)。利用24周基线，减少了Belimumab对象在第24到52周期间的SLE发作(log rank p＝0.036)。虽然没有观察到BILAG组合数字评分(通过按照以下方法将器官系统分级转化成数字评分计算出BILAG组合)，但是在ANA+对象中，对8个单个器官区评分的分析发现第52周时经Belimumab治疗的对象的两个器官区评分有着更少的增加(骨骼肌肉，p<0.008；神经，p<0.038)以及三个器官区的评分有向更少增加的趋势(心血管和呼吸，p＝0.06；全身，p＝0.15；肾脏，p<0.15)。至第16周(p＝0.016)到第52周(p<0.002；总活性与安慰剂相比)时都改善了PGA评分。因此是有改善的，尽管安慰剂组的泼尼松剂量与Belimumab治疗组相比是增加的(增加到大于7.5mg/天，15％对7％)。在ANA+对象中，早在第8周时就观察到了泼尼松增加(从低剂量≤7.5mg/天到高剂量>7.5mg/天)的频率的显著下降(在第8-12周时以及第32到40周时p<0.05)。没有剂量应答性的疗效，说明所有的剂量都有着相等的活性。在安全性方面包括不良事件(AE)、AE严重性、感染或实验室毒性，在所有Belimumab和安慰剂组的比较中都没有观察到临床显著的差异。Belimumab组对象出现胸膜炎的更少(3.3％对8％，p<0.05)，而出现荨麻疹更多(4％对0％，p<0.05)。输注反应少见，只报道了1例严重事件。在1例对象(1mg/kg)中观察到了对Belimumab的免疫原性。
如表IX所示，在第52周时对ANA+对象的分析发现，相对于安慰剂而言，Belimumab治疗造成了疾病的显著稳定，如BILAG指数(第3行)和PGA(第4行)所测定的那样。此外，也用组合应答终点(第1行)分析了试验治疗组中的应答率，所述终点组合了经SS评分测定到的整体疾病活动度的测量值和经PGA疾病活动度指数测定到的患者总体状态的测定值以及经BILAG评分表测定到的特殊器官系统病变的测量值。如果患者的SELENA SLEDAI评分减少≥4分，其PGA评分没有恶化(定义为PGA评分增加<0.3分)以及任一特定器官系统没有恶化(定义为没有新的BILAG A器官区评分或没有2个新的BILAG B器官区评分)，那么在组合终点中患者就被认为是应答于所述治疗。利用上面所述的组合终点，对ANA+对象的分析发现对Belimumab的显著应答(p＝0.0058)。
另外，在ANA+对象中，在治疗早期就观察到了PGA和SF-36体能组分评分(SF-36 PCS)的显著改善。与ANA+安慰剂治疗的对象相比较，经Belimumab治疗的ANA+对象最早在第4周时就显示出了基线PGA变化平均百分比的显著改善(p<0.05)。与ANA+安慰剂治疗的对象相比较，经Belimumab治疗的ANA+对象在第8周、16周、48周和52周时也显示出了基线PGA变化平均百分比数值的显著改善(第8、16周和48周时p<0.05；第52周时p<0.01)。与ANA+对象安慰剂治疗组相比较，平均SF-36 PCS也显示出经Belimumab治疗的ANA+对象在第12周、24周、48周和52周时的生活质量的显著改善(每个时间点都p<0.05)。
在整个研究期间观察到了Belimumab治疗对象中的B细胞数目的显著减少(用中位基线数目改变百分比表示)，包括CD19+B细胞(在第8到52周期间所取的每个测量值都是p<0.01)、活化B细胞(CD20+/CD69+；在第8到52周期间所取的每个测量值都是p<0.01)、纯真B细胞(CD20+/CD27-，在第8到52周期间所取的每个测量值都是p<0.01)、和浆细胞样B细胞(CD20+/CD138+；在第16到52周期间所取的每个测量值都是p<0.01)。在第24周时对B细胞数目的测量证实，与安慰剂治疗的对象相比较，Belimumab(所有治疗的汇总)显著地降低了第24周时的B细胞。在第24周时，观察到细胞数目的显著下降(用中位基线数目改变百分比表示)，包括CD19+B细胞、活化B细胞(CD20+/CD69+)、纯真B细胞(CD20+/CD27-)、和浆细胞样B细胞(CD20+/CD138+)。Belimumab(组合了所有治疗)显著地降低了第52周时的B细胞(中位值)。在第52周时，组合所有治疗组的中位CD20+B细胞的改变百分比是54％*，早在第8周时就观察到了显著下降(p<0.0001)。在第52周时，组合所有治疗组的中位浆细胞样B细胞(CD20+/CD138+)的改变百分比是62％*。在第52周时，组合所有治疗组的中位活化B细胞(CD20+/CD69+B细胞)变化百分比是70％*(*均为p<0.02)。在第52周时，显著地减少了CD19+B细胞和纯真B细胞(CD20+/CD27-)，同时保留了记忆细胞群。相反地，在Belimumab治疗对象中，第52周时的浆细胞比基线(2.7％)增加了72.5％，而安慰剂/标准治疗组中只有30.6％(p＝0.02)。另外，Belimumab诱导的B细胞数目的减少一直持续到了第76周。在第76周时，组合所有治疗组的中位CD20+B细胞的改变百分比是61％。在第76周时，组合所有治疗组的中位浆细胞样B细胞(CD20+/CD138+)的改变百分比是60％。在第76周时，组合所有治疗组的中位活化B细胞(CD20+/CD69+B细胞)变化百分比是84％。在Belimumab治疗对象和安慰剂治疗对象的比较中，早在第4周就观察到了Belimumab显著地降低了入选时抗dsDNA滴度≥30IU/ml的对象体内的抗dsDNA滴度(用中位基线改变百分比表示)(在第4到12周期间得到的每个测定值为p<0.01；在第16到24周期间得到的每个测定值为p<0.03；在第32到52周期间得到的每个测定值为p<0.01)。在第52周时Belimumab降低了抗dsDNA Ab 30％(p<0.002，基线阳性)，而安慰剂组为9％。该作用得到了保持，因为第76周的测量值显示出抗dsDNA Ab降低了28％。与安慰剂治疗的对照相比较，在Belimumab治疗对象中，早在第8周时就证实了Belimumab诱导的血清IgG、IgA、IgE、和IgM水平的显著降低(用中位基线改变百分比表示)(p<0.0001)。在第52周时，降低了血清IgG、IgA、IgE、和IgM水平(分别是10％、14％、34％和29％)。所述降低持续到了第76周(分别是12％、15％、35％和34％)。此外，对于那些基线时Ig同种型水平增高的对象，41％接受Belimumab治疗的对象(52/128，p＝0.0014)恢复到了正常的Ig同种型水平，而只有16％(7/45)对照对象恢复到了正常水平。在Belimumab治疗组中的基线低C4补体水平的患者中，对于在第4到52周期间得到的所有测量值都观察到了C4补体水平的显著增加(用中位基线改变百分比表示)。在第52周时，Belimumab治疗组中的C4增加了33％(p＝0.0126，低基线C4水平)。Belimumab作用再一次得到了保持，Belimumab治疗组第76周时的C4提高到了46％。在第52周时，与安慰剂组相比较(3.5％，2/58)，14.5％(24/165)接受Belimumab的抗dsDNA+对象转变成了阴性(p＝0.012)。在第76周时，又有3个接受Belimumab的抗dsDNA+对象转变成了阴性。
Belimumab是被很好耐受的，并显示出了显著的生物学活性。Belimumab提高了PGA评分、降低了B细胞数目、增加了C4、减少了抗dsDNA，和降低/正常化了Ig同种型水平。Belimumab延迟了6个月后的发作发生。在入选时ANA阳性的对象中，显著地提高了第52周时的SS评分。最后，组合应答终点显示出了ANA+对象对Belimumab治疗的显著应答(见表IX)。
表IX：ANA+对象在第52周时的应答率
Figure A200680047110D01891
aP值来自组合的总活性与安慰剂组之间的配对比较的似然比检验。
实施例2：SELENA SLEDAI蛋白尿评分
肾功能不全常常与系统性红斑狼疮相关。本领域人员知道多种可以用于评价肾功能的标准措施，例如进展至终末期肾病时间、血清肌酐持续倍增时间、肌酐清除率、碘酞酸清除率、单次尿液样品中的蛋白浓度和24小时尿液样品中的蛋白浓度。
从“24小时尿液样品”中计算出的蛋白尿变化是SELENA SLEDAI所评分的项目之一。可以用本领域任一已知的方法进行蛋白尿测量。在一个具体的实施方式中，收集单次尿液样品，并测定出蛋白量和/或肌酐清除率，见例如Lemann，et al.，Clin Chem.，33：297-9，1987和Schwab，et al.，ArchIntern Med.，May；147(5)：943-4，1987。在一个具体的实施方式中，收集24小时的尿液，并测定出蛋白量和/或肌酐清除率。在一个具体的实施方式中，收集单次尿液样品，测定出蛋白量与肌酐清除率量的比值，用该比值估计出24小时尿液样品中的蛋白量，见例如Ruggenenti，et al.，BMJ.316(7130)：504-9，1998。因此，在这个实施例中，“24小时尿液样品”可以表示基于24小时尿液样品的尿液中的蛋白克数或对24小时尿液样品中的蛋白克数的估计值。对24小时尿液样品中的蛋白克数的估计可以依据例如单次尿液样品中的蛋白量与单次尿液样品中的肌酐清除率量的比值。
在标准的SELENA SLEDAI评分系统中，表现出新出现的蛋白尿或者近期蛋白尿的增加(造成了最近24小时尿液样品中的蛋白尿数值比在紧邻的前一24小时尿液样品中测定到的蛋白尿数值高出至少0.5g)的患者被记为所发表的SELENA SLEDAI评分表中的蛋白尿4分，见例如Bombardier，et al.，Arthritis Rheum.Jun；35(6)：630-40，1992。因此，在标准的SELENASLEDAI评分系统下，只要24小时尿液样品中的蛋白尿不持续增加>0.5g，那么基线被记为蛋白尿4分的对象在随后的随访中就会出现SELENA SLEDAI的改善(即甚至在面临着稳定的蛋白尿或蛋白尿增加≤0.5g/24时，患者的总分都可以减去4分)。
下面描述了对SELENA SLEDAI蛋白尿评分规则的修饰。和标准的SELENA SLEDAI评分系统一样，表现出新出现的蛋白尿或者近期蛋白尿的增加(造成了最近24小时尿液样品中的蛋白尿数值比在紧邻的前一24小时尿液样品中测定到的蛋白尿数值高出至少0.5g)的患者被记为蛋白尿4分。此外如果患者的蛋白尿数值没有改善(即，当前24小时尿液样品中的蛋白尿没有比紧邻的前一24小时尿液样品中测定到的蛋白尿数值减少至少0.5g)，则患者继续被记为蛋白尿4分。但是如果患者的蛋白尿数值得到了改善(即当前24小时尿液样品中的蛋白尿比紧邻的前一24小时尿液样品中测定到的蛋白尿数值降低至少0.5g)，则患者被记为蛋白尿0分。
在一个具体的实施方式中，紧邻的前一蛋白尿测量值是在当前测量前≤26周内的24小时尿液样品中得到的测量值。
实施例3：应用中和Neutrokine-α蛋白的抗体(Belimumab)类风湿关节炎(SLE)的临床试验结果的总结
在患有RA的对象中进行了一项2期、多中心、随机、双盲、安慰剂对照研究。对象被随机分为4个治疗组(安慰剂组、1mg/kg、4mg/kg和10mg/kg)。在第0、14、28天，然后每28天施用1、4、10mg/kgBelimumab或安慰剂，共24周。之后是任选的24周延伸期。Belimumab被配制于10mM柠檬酸钠、1.9％甘油、0.5％蔗糖、0.01％(w/v)聚山梨酯80(pH6.5±0.3)。接受安慰剂的对象也接受没有Belimumab的制剂(10mM柠檬酸钠、1.9％甘油、0.5％蔗糖、0.01％(w/v)聚山梨酯80(pH6.5±0.3))。总共283例对象参加了该研究。在24周的研究治疗期内给214例对象施用了1、4、或10mg/kg的Belimumab。99例对象接受了安慰剂。
在1mg/kg治疗组(p＝0.0097)以及组合所有积极治疗组(p＝0.0213)中都获得了统计学更优的ACR20应答。ACR20是美国风湿病学会开放的用于评价患者对类风湿关节炎治疗的应答的指数。ACR20应答被定义成除了5个其他的症状或疾病表现评价(即患者疼痛评价、患者整体评价、体能整体评价、患者自我评价的残疾、急性期反应物(ESR或CRP))中的3个评价改善了至少20％外，压痛关节数目和肿胀关节数目至少减少了20％。此外，在利用Bonferroni closed方法进行的多个比较的调整之后，1mg/kg治疗组的结果仍是统计学显著的(p<0.0166)。和SLE对象一样，Belimumab与基线自身抗体阳性疾病(类风湿因子(RF)或抗环瓜氨酸肽(CCP))的对象以及基线C反应蛋白(CRP)阳性的对象中的ACR20应答的提高相关。观察到了生物学活性，包括统计学显著的CD20+B细胞、纯真B细胞、活化B细胞和RF的降低；记忆细胞在治疗第一个月内的增多以及在持续治疗期间的缓慢减少。所有剂量的Belimumab都能被很好的耐受。在本研究中，疗效、安全性或生物学标记物作用的剂量-效应关系并不明显。研究延伸期的持续治疗能被很好的耐受。在第48周时，ACR20应答增加了近40％。随着治疗的持续，增加并保持了对生物学标记物的作用，同时记忆细胞数目继续降低到基线水平。本研究中的血清浓度是在根据1期数据所预期到的范围之内，相伴的药物(例如甲氨喋呤、来氟米特或羟氯喹)对Belimumab的暴露都没有显著影响。
实施例4：Neutrokine-α通过两条独立的信号传导途径延长了B细胞寿命
Neutrokine-α也称作BLyS(B淋巴细胞刺激物)、BAFF、TALL-1、THANK、TNFSF13B和zTNF4是静止周围B淋巴细胞存活的关键因子(Rolink，A.G.，and Melchers，F.(2002).Curr Opin Immunol 14,266-275)。通过经靶向基因缺失或引入可溶性诱饵受体生成的Neutrokine-α缺陷小鼠有着边缘带和滤泡B细胞(主要的成熟外周B细胞群)的严重缺陷的发现已经很好地证实了Neutrokine-α在纯真B细胞内环境稳定方面的重要性(Gross，J.A.，et al.(2001).Immunity 15，289-302；Schiemann，B.，et al.(2001).Science293，2111-2114)。相反地，转基因造成的Neutrokine-α的异位表达明显延长了滤泡和边缘带外周B细胞的寿命，且不影响T细胞、B1细胞、早期(T1)过渡外周B细胞、或骨髓中的发育B细胞(Mackay，F.，et al(2003).Annu Rev Immunol 21，231-264)。对于多种B细胞肿瘤的维持，Neutrokine-α也是所必需的，失调的Neutrokine-α刺激拯救了自身反应性B细胞，使得其避免被缺失，据此促进了自身抗体的生成(Kalled，S.L.(2005).Immunol Rev 204，43-54)。因此，Neutrokine-α在正常B细胞和致病B细胞的细胞内环境稳定方面都起到了关键作用。本实施例详细地描述了所进行的试验的结果，以便了解Neutrokine-α促进B细胞存活的机理。
试验方案
小鼠：从纽约Paul Rothman Columbia大学的Pim-1+/-2+/-品系中生成了Pim-1+/+2+/+、Pim-1-/-2+/+、Pim-1+/+2-/-和Pim-1-/-2-/-小鼠。C57BL/6(B6)；来自Bar Harbor ME的Jackson实验室或者来自National Cancer InstituteProduction Program，NCI-Fredrick，Fredrick MD。根据研究所动物饲养和使用委员会指南将动物喂养并保养于宾夕法尼亚大学、哈佛医学院或麻省医学院。
B细胞纯化：用抗thy1.2和对脾细胞的补体处理以及随后通过用逐步percoll梯度纯化剩余B细胞和在60％-70％界面收集细胞来获得脾脏B细胞。在一些试验中，通过阳性选择和用生物素化的抗CD23抗体(BDBiosciences-Pharmingen，San Diego CA)和抗生物素蛋白链菌素涂层的微珠(Miltenyi Biotec，Auburn CA)磁分离脾细胞悬浮液来获得CD23+B细胞。CD23+B细胞是不被Percoll尺寸选择的，因为体内的环境活化造成了CD23的丢失。通过抗体和Percoll制备的B细胞是>90％ B220+，而CD23+B细胞是>95％纯度。
细胞培养：将纯化的B细胞或CD23+B细胞培养在加有2-巯基乙醇、MEM-非必需氨基酸、谷氨酰胺、青霉素和链霉素的RPMI-1640培养基(完全培养基，CM)中。对于B细胞存活和其他的检测而言，使用50-100ng/ml在Human Genome Sciences，Rockville MD中制备出的重组人Neutrokine-α。FLAG标签的人Neutrokine-α来自Dartmouth Medical School的Randolph Noelle博士。小鼠Neutrokine-α购自Alexis Biochemicals，SanDiego CA；干扰素α(IFN-α)购自PBL Biomedical，Piscataway，NJ。向培养物中加入终浓度为50nM的来自溶解于甲醇的母液的雷帕霉素。在使用雷帕霉素的试验中，用甲醇作为对照载体处理对照B细胞。对于动力学检测而言，制备B细胞并在4℃冷却过夜。然后按每个样品5-6 x 106个B细胞将其加入到已经5微克/ml单克隆的抗FLAG M2抗体(Sigma)涂层的，经1％BSA PBS洗涤、封闭的，随后在洗涤和添加细胞前1个小时加入每孔2ug FLAG标签的人Neutrokine-α的24孔板内。未刺激的对照B细胞是那些加入到孔内的仅经抗FLAG抗体处理过的B细胞。通过与被加入到动力学检测缓冲液(Hank平衡盐溶液加上2％BSA)中的抗小鼠IgM(5微克/ml)、抗CD40(0.5微克/ml)或100ng/ml重组人Neutrokine-α的孵育也活化了B细胞。
抗体和Western印迹法：小鼠抗Pim2(1D12)、Piml(19F7)、山羊抗肌动蛋白(1-19)、抗小鼠Ig、抗兔Ig和与HRP结合的抗山羊Ig抗体都来自Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz CA。兔抗磷酸丝氨酸473Akt、磷酸苏氨酸389p70 S6激酶、磷酸苏氨酸24/32 FKHR/FKRHL1、phosphoGSK3、GSK、p70S6K、FKHR和Akt都购自Cell Signaling，Beverly MA。兔抗小鼠Mcl-1购自Rockland，Wilmington MA。通过在冰冷的PBS中洗涤B细胞并将其裂解在加有蛋白酶抑制剂(minitab，Roche，Indianapolis IN)和磷酸酶抑制剂鸡尾酒I和II(Sigma)的RIPA(150mM NaCl、1％ NP-40、0.5％脱氧胆酸钠、0.1％ SDS、50mM Tris，pH8.0)中制备出全细胞裂解液。将10-50ug蛋白溶解于4-12％ NuPage bis-tris聚丙烯酰胺凝胶(Invitrogen，Carlsbad CA)上，并将其转移到硝基纤维素。用3％BSA(Sigma，无IgG)、0.2％ Tween-20 PBS封闭印迹，并在与相同缓冲液中的第一抗体4℃下孵育过夜。用PBS-0.2％ Tween-20洗涤印迹，并与缀合有HRP的第二抗体孵育，用ECLplus(Amersham Bioscience，Piscataway NJ)显影。通过在加有1％ SDS和100uM巯基乙醇的PBS中65℃下孵育20分钟将印迹剥离进行再探针化。然后如上洗涤和封闭印迹。
存活检测：在37℃ CM下将5 x 106/ml B细胞培养在24板培养皿内。向B细胞中加入50-100ng/ml Neutrokine-α、50nM雷帕霉素、200U人IFN或这些试剂的组合。在用试验添加物培养之前1个小时，用50nM雷帕霉素或载体预处理B细胞，在培养48个小时之后加入新鲜的雷帕霉素。每天通过用苔盼兰排除法计数存活细胞来监测存活率，每个测定都重复三次。
结果
对Neutrokine-α如何促进B细胞存活的机制的研究发现Neutrokine-α激活了B细胞中的Akt/mTOR途径。用100ng/ml重组人或小鼠Neutrokine-α或抗Ig(阳性对照)在37℃、传代培养基中刺激纯化B细胞0、5、20、60、或120分钟。从冰冷样品中制备出裂解液，并用Western印迹法分析。如通过Akt的丝氨酸473和苏氨酸308的磷酸化的增加所测定的那样，重组Neutrokine-α对原代B细胞的这种刺激造成了Akt途径的活化。其中用板结合的FLAG标签的Neutrokine-α、可溶性Neutrokine-α(100ng/ml)或0.5微克/ml抗CD40(阳性对照)刺激纯化B细胞的附加试验显示出Akt本身已经被活化，如Akt底物GSKβ和上游转轮因子FOXO1和FOXO3a的磷酸化所示。mTOR是Akt主要的下游效应物。通过mTOR底物(p70S6激酶和翻译抑制物4E-BP1)的磷酸化也显示出在Neutrokine-α刺激之后活化了原代B细胞中的mTOR。Western印迹法研究了磷酸化模式。
雷帕霉素是mTOR的强抑制剂以及B细胞增殖和分化的强抑制素。在有或没有100ng/ml Neutrokine-α、载体或50nM雷帕霉素的情况下培养来自正常供体的小静止B细胞，所述雷帕霉素被用于培养前预处理B细胞，在开始培养后被直接加入到培养内，并每隔2天再添加一次。在第4天确定活细胞数目。总B或CD23+B细胞与Neutrokine-α及雷帕霉素的共培养没有阻止Neutrokine-α介导的存活促进作用，如在培养后第4天所出现的活细胞数目所测定的那样。这个结果表明在Neutrokine-α处理过的B细胞中可能活化了另一条存活途径。
Pims是一个三种丝氨酸/苏氨酸的激酶家族，其提供了耐雷帕霉素的凋亡保护作用，所述凋亡保护作用是多种激活剂在造血细胞中所诱导出的(Fox，C.J.，et al.，(2003).Genes Dev 17，1841-1854和Fox，C.J.，et al.，(2005).J Exp Med 201，259-266)。Western印迹显示在用100ng/ml Neutrokine-α处理2天之后，原代B细胞上调了Pim1和Pim2表达。
为了研究Pim1和2是否涉及Neutrokine-α介导的B细胞存活，将来自野生型、或Pim1-/+2-/+杂合体、Pim 1-/-2-/-双重缺陷或Pim 2缺陷(Pim1+/-2-/-)供体中的CD23+B细胞与载体、100ng/ml rhuNeutrokine-α以及有或没有50nM雷帕霉素在CM中培养4天。每天都用苔盼兰排除法确定生活力。有趣的是，当暴露于Neutrokine-α时，来自Pim1和Pim2双重缺陷小鼠的B细胞(Pim-1-/-2-/-B细胞)的确显示出了存活增强。如果mTOR和Pim1和2在不同的信号传导途径中运作，每个途径都介导了Neutrokine-α对细胞存活的促进作用，这就可以解释上述结果。为了检验是否涉及两个分离的途径理论，检查了雷帕霉素对Neutrokine-α介导的Pim-1-/-2-/-B细胞存活的作用。雷帕霉素的加入消除了Neutrokine-α增强Pim-1-/-2-/-B细胞中的B细胞存活的能力。进一步的研究显示Pim-1+/-2-/-B细胞(只有Pim2功能缺陷)和Pim-1-/-2-/-B细胞一样对雷帕霉素敏感，说明Pim1对于Neutrokine-α对B细胞存活的作用并非是必需的。总而言之，这些数据显示有两条独立的途径来介导Neutrokine-α介导的生存，每条途径都单独地足以介导Neutrokine-α的这种活性。
进一步的试验表明B细胞存活的有效增强(抗凋亡保护诱导)需要Mcl-1、Bcl-2家族成员的表达，所述成员在促进外周B和T细胞内环境稳定方面起到了作用(数据没有显示)。
因此，可以用包括akt/mTOR途径的抑制剂(例如雷帕霉素)和Pim2途径的抑制剂的组合物来模拟Neutrokine-α拮抗剂所诱导的作用。因此，包括Akt/mTOR途径的抑制剂(例如雷帕霉素)和Pim2途径的抑制剂的组合物可以被用作抑制B细胞存活或治疗一种或多种在此所述的疾病或病变的Neutrokine-α拮抗剂。例如，可以用包括akt/mTOR途径的抑制剂(例如雷帕霉素)和Pim2途径的抑制剂的组合物缩短B细胞寿命。另外，可以用包括akt/mTOR途径的抑制剂(例如雷帕霉素)和Pim2途径的抑制剂的组合物治疗自身免疫病。在具体的实施方式中，可以用包括akt/mTOR途径的抑制剂(例如雷帕霉素)和Pim2途径的抑制剂的组合物治疗B细胞介导的自身免疫病。在其他具体的实施方式中，可以用包括akt/mTOR途径的抑制剂(例如雷帕霉素)和Pim2途径的抑制剂的组合物治疗其中自身抗体流行的自身免疫病。在具体的实施方式中，可以用包括akt/mTOR途径的抑制剂(例如雷帕霉素)和Pim2途径的抑制剂的组合物治疗类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、干燥综合征、1型糖尿病、特发性血小板减少性紫癜、格林-巴利综合征、Hashimoto甲状腺炎或Grave病。
另外，可以用包括Mcl-1抑制剂的组合物模拟Neutrokine-α拮抗剂诱导的作用。因此，包括Mcl-1抑制剂的组合物可以被用作抑制B细胞存活或治疗一种或多种在此所述的疾病或病变的Neutrokine-α拮抗剂。例如，可以用包括Mcl-1抑制剂的组合物缩短B细胞寿命。另外，可以用包括Mcl-1抑制剂的组合物治疗自身免疫病。可以用包括Mcl-1抑制剂的组合物治疗B细胞介导的自身免疫病。在其他具体的实施方式中，可以用包括Mcl-1抑制剂的组合物治疗其中自身抗体流行的自身免疫病。在具体的实施方式中，可以用包括Mcl-1抑制剂的组合物治疗类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、干燥综合征、1型糖尿病、特发性血小板减少性紫癜、格林-巴利综合征、Hashimoto甲状腺炎或Grave病。
实施例5：抗体制剂的表征
用通过差示扫描测热法对制剂于10mM组氨酸和10mM柠檬酸缓冲液中的1mg/ml IgG/λ抗体的分析来评价每个制剂中的抗体的热稳定性。用于本研究中的特殊抗体是特异于Neutrokine-α并能够中和Neutrokine-α活性的IgG1/λ抗体。分析发现pH范围为6.0-7.5内的两种缓冲液的解链温度最高，更高的解链温度一般表示更高的热稳定性。在这个pH范围之内，柠檬酸缓冲液的解链温度比组氨酸缓冲液高2℃，说明柠檬酸缓冲液可能生成了更稳定的抗体制剂。但是，组氨酸缓冲液中的抗体比柠檬酸缓冲液中的抗体有着更高的热可逆性。这表明抗体在组氨酸中有着更高的生物物理稳定性，尽管其有着更低的解链温度。对抗体制剂的稳定性研究证实了这一点，研究发现当在2-8℃下储存18个月时，10mM组氨酸比10mM柠檬酸造成了更少的聚集。在稳定性研究期间，用重复pH测定来评价两种缓冲液的缓冲能力。除了能给抗体提供更高的生物物理稳定性外，pH6.0-6.5的组氨酸表现出比pH范围为6.5-7.0的柠檬酸提供了更大的缓冲能力。在18个月稳定性研究中，组氨酸在所测试的所有温度(2-8℃、25℃、和40℃)下始终保持稳定的pH值。相反地，柠檬酸制剂在更高的温度下有着更广的变异(数据没有显示)。
实施例6：抗体制剂的长期稳定性研究
为了测定抗体制剂的储存期限，进行了对制剂于10mM组氨酸、150mM NaCl、0.01％(w/v)聚山梨酯80(pH 6.0)中的100mg/ml抗体的长期稳定性研究。用于本研究中的特殊抗体是特异于Neutrokine-α并能够中和Neutrokine-α活性的IgG1/λ抗体。将5ml玻璃瓶内的2ml抗体制剂在-80℃、2-8℃、25℃和40℃直立存放24个月。用储存在-80℃的样品作为对照，用储存在2-8℃的样品测定储存期限，以及用储存在加速条件(25℃和40℃)下的样品监测所发生的任何可能的降解途径。在24个月内，用多个检测法定期地分析样品，包括肉眼观察、pH值、浓度、SDS-PAGE、SEC-HPLC、离子交换HPLC(IE-HPLC)、生物检测法、毛细血管等电聚焦(cIEF)、肽谱法、RP-HPLC和
Figure A200680047110D0197182740QIETU
。
经SEC-HPLC、IE-HPLC和RP-HPLC对在2-8℃和-80℃储存24个月的样品的分析发现所有的三个方法得到的结果事实上是相当的，只看到了很小的差别。2-8℃样品的SEC-HPLC纯度的降低率为每个月近似0.03％，早期洗脱的IE-HPLC峰(最可能是由于脱酰胺作用)的增加率为每个月0.14％(数据没有显示)。在储存24个月后，2-8℃样品在抗体的聚集(<1％)、脱酰胺(～4％)和氧化(1％)方面值显示出很少的改变。但是对储存在加速条件下的样品的所有检测都观察到了显著的降解。在加速条件下经SEC-HPLC观察到的降解包括聚集和片段化。IE-HPLC检测显示出加速调价下的储存造成了早期洗脱峰的增加。肽谱法观察到了25℃时的脱酰胺和片段化；观察到了40℃时的脱酰胺、氧化、片段化以及天冬氨酸向异天冬氨酸的重排。因此，100mg/ml药物制剂中的IgG1/λ抗体至少可以在2-8℃稳定储存24个月。
实施例7：测定对Neutrokine-α-Neutrokine-α受体相互作用的抑制作用的体外检测法
下面描述了能够用于测定化合物是否用作为Neutrokine-α拮抗剂的检测法。具体地，本检测法测定是化合物抑制可溶性Neutrokine-α与其IM9细胞上的同源受体结合的能力。
生物素化Neutrokine-α的制备
利用slide-a-lyzer盒(Pierce)，用50mM碳酸氢钠(碳酸氢钠)在4℃下透析100微克人或小鼠Neutrokine-α过夜。次日，将NHS-生物素(Pierce)溶解于DMSO，浓度为13.3mg/ml。然后将其加入到Neutrokine-α内，生物素与Neutrokine-α的摩尔比为20：1，混合并在冰上孵育2个小时。然后，利用slide-a-lyzer框，用无菌PBS(Sigma)在4℃下透析生物素化的Neutrokine-α过夜。利用受体结合抑制检测法(见下)验证生物素化的Neutrokine-α的生物学活性。
IM9细胞的培养
IM9细胞是表达Neutrokine-α受体的人B淋巴细胞系。将IM9细胞维护于加有4mM L-谷氨酰胺、10％FCS、10U青霉素、100g/ml链霉素的RPMI-1640内(所有制剂都来自Sigma)。从冷冻的母液中融化得到这些细胞，并在培养5天后当其密度达到4-8 x 105/ml时，将其用于检测。
受体结合抑制检测法
用每孔100微升1:10稀释的聚L赖氨酸(Sigma)PBS溶液在室温下涂层平底96孔板(Costar)1个小时。然后用水洗涤板两次，容许其风干，并在4℃下放置过夜。然后向每个孔内加入100微升IM9细胞(106/ml RPMI-1640培养基)。然后将板在3200rpm下离心5分钟，以便沉淀细胞。仔细地抽吸出培养基，向每个孔内加入200微升MPBS(含3％Marvel封闭液的PBS)。然后容许板在室温下被封闭1个小时。
在一个分离的96孔板内，向每个孔内加入10微升生物素化的Neutrokine-α(162.5ng/ml)MPBS溶液，终浓度为25ng/ml。向每个孔内加入55微升各种测试化合物。每个孔内的终体积为65微升。优选地，测试化合物也稀释于MPBS。然后将板在室温下孵育30分钟。
用PBS洗涤IM9涂层的板两次，轻轻敲打板，并立刻加入50微升噬菌体/生物素化Neutrokine-α混合物，并在室温下孵育1个小时。将板在PBST中洗涤三次，在PBS中洗涤三次，轻轻敲打板，向每个孔内加入50微升按1:1000稀释于产商的检测缓冲液中的抗生物素链菌素-Delfia(Wallac)。然后将板在室温下孵育1个小时，用Delfia洗涤溶液(Wallac)洗涤6次。在轻轻敲打板板之后，加入每孔100微升Delfia增强溶液(Wallac)。轻轻地敲打板，以便有助于微粒形成，在室温下孵育10分钟，用Wallac 1420工作站读出6520nm处的荧光。
本检测所包含的合适对照是只包括生物素化Neutrokine-α以证实本检测中的生物素化Neutrokine-α与其受体的最大结合的样品以及不包含生物素化Neutrokine-α以证实本检测中的背景信号的样品。其他有用的对照是非Neutrokine-α特异的、或“无关的”化合物(与测试化合物结构相似的但相信其不会与Neutrokine-α或其中一种Neutrokine-α受体相互作用的化合物。如果测试化合物是IgG1同种型的抗Neutrokine-α抗体，合适的“无关对照”是另一种吧非特异于Neutrokine-α或其中一种受体的IgG1抗体。
实施例8：用于体外筛选Neutrokine-α拮抗分子的人B细胞增殖检测法
通过混合等体积的Neutrokine-α、应答细胞、和假定拮抗剂(每种都被制备成3X母液)在96孔板内进行用于评价假定Neutrokine-α拮抗剂的作用的生物检测，每个检测重复3次。
用MACS(抗CD3剥夺)从人扁桃体中纯化出B淋巴细胞，洗涤，并将其重悬于完全培养基(CM)(RPMI1640和含100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、4mM谷氨酰胺、5 x 10-5M β-巯基乙醇的10％FBS)，细胞浓度为每毫升3 x 106个细胞。向细胞内加入3X浓度(3X＝母液的1:33,333稀释液)的金黄色葡萄球菌CowanI(SAC，CalBiochem)。
同时，用CM制备出8个系列的潜在拮抗剂的稀释液(3倍)，使得稀释的拮抗剂是本检测中测试终浓度的3X。例如，被常规测试的抗体的起始终浓度为10微克/mL，稀释到约1.5ng/mL。
用CM制备人r Neutrokine-α，使得其在CM中的浓度为3X(3X＝300ng/mL、30ng/mL、和3ng/mL)。用一些浓度的Neutrokine-α常规测试潜在的拮抗剂，以避免由于不可预计的低亲和力或者拮抗剂浓度造成的假阴性结果。
然后向含有50微升细胞混合物的孔内加入50微升稀释的拮抗剂和50微升稀释的Neutrokine-α。
然后将细胞在非常潮湿的孵箱内孵育72个小时(37℃、5％CO2)。在72个小时之后，向细胞内加入0.5μCi/孔3H-胸腺嘧啶(6.7Ci/mmol)，并再孵育24个小时。用Tomtec细胞收集器收集板，用TopCount Scintillation计数器(Packard)计数出过滤器中的细胞数。
本检测所包含的合适对照是其中不含拮抗剂以证实本检测中的最大程度的3H-胸腺嘧啶掺和的样品以及不含Neutrokine-α以证实本检测中的背景信号的样品。其他有用的对照是非Neutrokine-α特异的、或“无关的”化合物(与测试化合物结构相似的但相信其不会与Neutrokine-α或其中一种Neutrokine-α受体相互作用的化合物。如果测试化合物是IgG1同种型的抗Neutrokine-α抗体，合适的“无关对照”是另一种非特异于Neutrokine-α或其中一种受体的IgG1抗体。
本领域人员知道可以对本检测进行修饰，例如在步骤的次序或施用的试剂方面都可以修饰。作为一个特殊的实施例，可以用抗IgM取代SAC预处理B细胞。本领域人员也知道可以用其他检测法测试化合物作为Neutrokine-α拮抗剂的能力。
实施例9：用于体外筛选Neutrokine-α拮抗剂分子的小鼠B细胞增殖检测
为了确定潜在的Neutrokine-α拮抗剂是否能够抑制Neutrokine-α介导的B细胞增殖，进行了小鼠脾细胞增殖检测。简单地说，通过用25g针头和10ml完全培养基(RPMI1640和含100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、4mM谷氨酰胺、5 x 10-5M β-巯基乙醇的10％FBS)冲洗脾脏分离出小鼠脾细胞。细胞流经100微米尼龙滤膜，以便去除细胞团。然后在室温下400xg ficoll离心细胞悬浮液25分钟(1个15ml圆锥管/脾脏；3ml ficol、10ml细胞悬浮液/脾脏；Ficol 1083来自Sigma)。将所回收到的细胞在完全培养基中洗涤3次，并计数。然后将所回收到的细胞在含3X SAC(3X＝1:33,333母液稀释；母液是10％来自Calbiochem的金黄色葡萄球菌(CowanI菌株)的悬浮液)的完全培养基中被稀释到浓度为3 x 106/ml。
对于每个抗体而言，将50微升浓度为30μg/ml、3.0μg/ml、和0.3μg/ml的抗体稀释液分配到96孔板的单个孔内，重复3次。用不含抗体(和人同种型对照(商品化购买)，如果需要)的培养基作为阴性对照。
用完全培养基将Neutrokine-α蛋白稀释到浓度为300ng/ml、90ng/ml和30ng/ml。然后将50微升每种Neutrokine-α稀释液加入到板的抗体稀释液系列中。然后将含有抗体和Neutrokine-α稀释液的板在37℃、5％ CO2下孵育30分钟，之后向每个孔内加入50微升含SAC的脾细胞悬浮液。然后孵育板72个小时(37℃、5％ CO2)。
在72个小时之后，向每个孔内加入50μl含0.5μCi/孔3H-胸腺嘧啶(6.7Ci/mmol，Amersham)的完全培养基，并将细胞再孵育24个小时(37℃、5％ CO2)。用Tomtec细胞收集器收集板，用TopCount Scintillation计数器(Packard)计数出过滤器中的细胞数。
本领域人员知道可以对本检测进行修饰，例如在步骤的次序或施用的试剂方面都可以修饰。作为具体的实例，可以用抗IgM取代SAC预处理B细胞。本领域人员也知道可以用其他检测法测试化合物作为Neutrokine-α拮抗剂的能力。
显而易见的是可以用不同于在先前的描述和实施例中特殊描述的方式实践本发明。根据上面的教义对本发明的多种修饰和变异都是可能的，并因此是在附录的权利要求书的范围之内。
通过引用将在此所引用的所有出版物(包括专利、专利申请、杂志文章、实验室手册、书籍或其他文档)的所有内容都并入本申请。
此外，通过引用将在此所提交的计算机和纸件形式的序列表的全部内容并入本申请。另外，在此通过引用将下面的每个美国临时和非临时专利申请和国际专利申请的全部内容(包括说明书、序列表和附图)都并入本申请：2005年10月13日提交的美国临时申请60/725,625、2005年11月14日提交的60/735,967、2006年2月27日提交的60/776,664、2006年3月13日提交的60/781,387、2006年3月31日提交的60/787,557、2006年5月4日提交的60/797,360、2006年6月20日提交的60/814,870、2006年6月22日提交的60/815,558、2006年6月23日提交的60/815,827、2006年7月31日提交的60/834,150、2005年10月13日提交的60/725,626、2005年11月14日提交的60/735,988、2006年2月27日提交的60/776,665、2006年5月4日提交的60/797,351、2006年6月20日提交的60/814,869、2006年6月22日提交的60/815,559、2006年7月31提交的60/834,152、2005年10月13日提交的60/725,627、2005年11月14日提交的60/735,964、2006年2月27日提交的60/776,658、2005年10月13日提交的60/725,629、2005年11月14日提交的60/735,963、2006年2月27日提交的60/776,660、2005年10月13日提交的60/725,628、2005年11月14日提交的60/735,987、2006年2月27日提交的60/776,659、2004年2月11日提交的60/543,261、2004年6月18日提交的60/580,387、2004年10月12日提交的60/617,191、2002年4月1日提交的60/368,548、2001年12月7日提交的60/336,726、2001年11月16日提交的60/331,478、2001年10月31日提交的60/330,835、2001年10月18日提交的60/329,747、和2001年10月17日提交的60/329,508、2000年8月15日提交的60/225,628、2000年8月23日提交的60/227,008、2000年9月22日提交的60/234,338、2000年10月17日提交的60/240,806、2000年11月30日提交的60/250,020、2001年3月6日提交的60/276,248、2001年5月25日提交的60/293,499、2001年6月7日提交的60/296,122、2001年7月13日提交的60/304,809、1999年3月2日提交的60/122,388、1999年3月12日提交的60/124,097、2000年3月26日提交的60/126,599、1999年4月2日提交的60/127,598、1999年4月16日提交的60/130,412、1999年4月23日提交的60/130,696、1999年4月27日提交的60/131,278、1999年4月29日提交的60/131,673、1999年5月28日提交的60/136,784、1999年7月6日提交的60/142,659、1999年7月27日提交的60/145,824、1999年11月24日提交的60/167,239、1999年12月3日提交的60/168,624、1999年12月16日提交的60/171,108、1999年12月23日提交的60/176,015、以及1997年1月14日提交的60/036,100；美国非临时申请：2005年2月10日提交的11/054,539、2003年12月19日提交的10/739,042、2003年12月16日提交的10/735,865、2002年10月16日提交的10/270,487、2001年8月14日提交的09/929,493、2000年6月8日提交的09/588,947、2000年6月8日提交的09/589,285、2000年6月8日提交的09/589,286、2000年6月8日提交的09/589,287、2000年6月8日提交的09/589,288、2000年2月22日提交的09/507,968、1999年2月23日提交的09/255,794以及1998年1月12日提交的09/005,874；国际专利申请：2001年8月15日提交的PCT/US01/25549、2000年2月22日提交的PCT/US00/04336、以及1996年10月25日提交的PCT/US96/17957。
序列表
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<223>OTHER INFORMATION：consensus signal sequence
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<222>(1)..(22)
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Claims (69)

1.治疗ANA滴度≥1:80或其血浆或血清中抗dsDNA抗体≥30IU/mL的患者的方法，包括施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂。
2.权利要求1的方法，其中所述患者的ANA滴度≥1:80且血浆或血清中抗dsDNA抗体≥30IU/mL。
3.权利要求1的方法，其中Neutrokine-a拮抗剂与抗CD20抗体组合施用。
4.权利要求1的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者的ANA滴度≥1:80或血浆或血清中抗dsDNA抗体≥30IU/mL。
5.权利要求4的方法，其中依据患者的病历记录进行所述确定。
6.权利要求4的方法，其中依据实验室检测进行所述确定。
7.权利要求1的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。
8.权利要求1的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括TACI(SEQID NO：6)的Neutrokine-α结合区的蛋白。
9.权利要求1的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括BCMA(SEQID NO：8)的Neutrokine-α结合区的蛋白。
10.权利要求1的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括BAFF-R(SEQ ID NO：10)的Neutrokine-α结合区或所述BAFF-R Neutrokine-a结合区的变体的蛋白，所述变体具有SEQ ID NO：26的第2到70位氨基酸残基的氨基酸序列。
11.权利要求1的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是Neutrokine-α结合肽、肽抗体、Neutrokine-α蛋白变体或抗Neutrokine-α受体抗体。
12.权利要求11的方法，其中Neutrokine-α蛋白变体作为显性负调控物起作用。
13.权利要求1的方法，其中所述患者患有自身免疫病。
14.权利要求13的方法，其中自身免疫病是系统性红斑狼疮(SLE)。
15.权利要求14的方法，其中Neutrokine-a拮抗剂与抗CD20抗体组合施用。
16.权利要求13的方法，其中自身免疫病是类风湿关节炎、干燥综合征、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、Felty综合征、混合结缔组织病、雷诺综合征或幼年型慢性关节炎。
17.权利要求7的方法，其中抗体包括选自由以下各项组成的组中的一组VH和VL区的氨基酸序列：
(a)SEQ ID NO：13的VH区和VL区；
(b)SEQ ID NO：14的VH区和VL区；
(c)SEQ ID NO：15的VH区和VL区；
(d)SEQ ID NO：16的VH区和VL区；
(e)SEQ ID NO：17的VH区和VL区；
(f)SEQ ID NO：18的VH区和VL区；
(g)SEQ ID NO：19的VH区和SEQ ID NO：20的VL区；和
(h)SEQ ID NO：21的VH区和SEQ ID NO：22的VL区；
18.治疗系统性红斑狼疮患者的方法，包括：
(a)确定患者的ANA滴度≥1:80或血浆或血清中抗dsDNA抗体≥30IU/mL；和
(b)在进行所述确定之后，给所述患者施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂。
19.权利要求18的方法，其中所述患者的ANA滴度≥1:80且血浆或血清中抗dsDNA抗体≥30IU/mL。
20.权利要求18的方法，其中Neutrokine-a拮抗剂与抗CD20抗体组合施用。
21.权利要求18的方法，还包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者具有选自由以下各项组成的组中的至少一个特征：
(a)SELENA SLEDAI评分≥6；
(b)降低的血浆或血清C3补体因子水平；
(c)降低的血浆或血清C4补体因子水平；
(d)患者正在接受≥7.5mg/天的泼尼松；和
(e)患者正在接受或者先前接受过用于治疗狼疮相关症状的免疫抑制治疗。
22.权利要求21的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者的SELENA SLEDAI评分≥6。
23.权利要求21的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者的血浆或血清C3补体因子低于90mg/dL。
24.权利要求21的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者的血浆或血清C4补体因子低于16mg/dL。
25.权利要求21的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者正接受≥7.5mg/天的泼尼松。
26.权利要求21的方法，包括进行在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者正接受或者先前已经接受过用于治疗狼疮相关症状的免疫抑制治疗。
27.权利要求18的方法，其中依据患者的病历记录进行所述确定。
28.权利要求18的方法，其中依据实验室检测进行所述确定。
29.权利要求18的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。
30.权利要求18的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括TACI(SEQID NO：6)的Neutrokine-α结合区的蛋白。
31.权利要求18的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括BCMA(SEQ ID NO：8)的Neutrokine-α结合区的蛋白。
32.权利要求18的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括BAFF-R(SEQ ID NO：10)的Neutrokine-α结合区或所述BAFF-R Neutrokine-a结合区的变体的蛋白，所述变体具有SEQ ID NO：26的第2到70位氨基酸残基的氨基酸序列。
33.权利要求18的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是Neutrokine-α结合肽、肽抗体、Neutrokine-α蛋白变体或抗Neutrokine-α受体抗体。
34.权利要求33的方法，其中Neutrokine-α蛋白变体作为显性负调控物起作用。
35.减少施用给系统性红斑狼疮患者的糖皮质激素的频率或量的方法，包括给所述患者施用治疗有效量的Neutrokine-α拮抗剂。
36.权利要求35的方法，还包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者具有选自由以下各项组成的组中的至少一个特征：
(a)ANA滴度≥1:80；
(b)血浆或血清抗dsDNA抗体≥30IU/mL；
(c)SELENA SLEDAI评分≥6；
(d)降低的血浆或血清C3补体因子水平；
(e)降低的血浆或血清C4补体因子水平；
(f)患者正在接受≥7.5mg/天的泼尼松；和
(g)患者正在接受或者先前接受过用于治疗狼疮相关症状的免疫抑制治疗。
37.权利要求36的方法，包括确定患者的ANA滴度≥1:80。
38.权利要求36的方法，包括确定患者的血浆或血清抗dsDNA抗体≥30IU/mL。
39.权利要求36的方法，包括确定患者的ANA滴度≥1:80且其血浆或血清抗dsDNA抗体≥30IU/mL。
40.权利要求36的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者的SELENA SLEDAI评分≥6。
41.权利要求36的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者的血浆或血清C3补体因子低于90mg/dL。
42.权利要求36的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者的血浆或血清C4补体因子低于16mg/dL。
43.权利要求36的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者正接受≥7.5mg/天的泼尼松。
44.权利要求36的方法，包括在施用Neutrokine-α拮抗剂之前确定患者正接受或者先前已经接受过用于治疗狼疮相关症状的免疫抑制治疗。
45.权利要求36的方法，其中依据患者的病历记录进行所述确定。
46.权利要求36的方法，其中依据实验室检测进行所述确定。
47.权利要求35的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。
48.权利要求35的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括TACI(SEQID NO：6)的Neutrokine-α结合区的蛋白。
49.权利要求35的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括BCMA(SEQ ID NO：8)的Neutrokine-α结合区的蛋白。
50.权利要求35的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括BAFF-R(SEQ ID NO：10)的Neutrokine-α结合区或所述BAFF-R Neutrokine-α结合区的变体的蛋白，所述变体具有SEQ ID NO：26的第2到70位氨基酸残基的氨基酸序列。
51.权利要求35的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是Neutrokine-α结合肽、肽抗体、Neutrokine-α蛋白变体或抗Neutrokine-α受体抗体。
52.权利要求51的方法，其中Neutrokine-α蛋白变体作为显性负调控物起作用。
53.权利要求35的方法，其中糖皮质激素选自由泼尼松、泼尼松龙、氢化可的松、甲基泼尼松龙和地塞米松组成的组。
54.权利要求35的方法，其中糖皮质激素是泼尼松。
55.权利要求54的方法，其中施用给患者的泼尼松的量被降低至少25％到≤7.5mg/天。
56.确定狼疮患者是否应答于药物治疗的方法，包括：
(a)在施用药物治疗之前确定患者的SELENA SLEDAI、BILAG和PGA评分；
(b)施用药物治疗；和
(c)在施用药物治疗后确定患者的SELENA SLEDAI、BILAG和PGA评分；
其中如果在步骤(c)中确定的SELENA SLEDAI评分比在步骤(a)中确定的SELENA SLEDAI评分少4分或更多分；与在步骤(a)中确定的BILAG评分相比较，在步骤(c)中确定的BILAG指数评分不包括新的BILAG A器官区评分或2个新的BILAG B器官区评分；和在步骤(c)中确定的PGA评分比在步骤(a)中确定的PGA评分高<0.3，则认为患者应答于药物治疗。
57.权利要求56的方法，其中药物治疗是包括Neutrokine-α拮抗剂的药物组合物。
58.权利要求56的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是抗Neutrokine-α抗体。
59.权利要求56的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括TACI(SEQID NO：6)的Neutrokine-α结合区的蛋白。
60.权利要求56的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括BCMA(SEQ ID NO：8)的Neutrokine-α结合区的蛋白。
61.权利要求56的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是包括BAFF-R(SEQ ID NO：10)的Neutrokine-α结合区或所述BAFF-R Neutrokine-α结合区的变体的蛋白，所述变体具有SEQ ID NO：26的第2到70位氨基酸残基的氨基酸序列。
62.权利要求56的方法，其中Neutrokine-α拮抗剂是Neutrokine-α结合肽、肽抗体、Neutrokine-α蛋白变体或抗Neutrokine-α受体抗体。
63.权利要求62的方法，其中Neutrokine-α蛋白变体作为显性负调控物起作用。
64.一种水性药物制剂，其包括治疗有效量的抗体、量从约5mM到约50mM的缓冲剂、量从约150mM到约500mM的NaCl、量从约0.003％到约0.05％的表面活性剂，以及pH值为约5.5到约6.5。
65.权利要求64的制剂，其中抗体是人IgGl/λ抗体、缓冲剂是10mM组氨酸、表面活性剂是量为0.01％w/v的聚山梨酯80、NaCl为150mM，其中制剂的pH值为6.0。
66.权利要求65的制剂，其在约2-8℃的温度保持稳定至少1年。
67.权利要求65的制剂，其在约2-8℃的温度保持稳定至少2年。
68.权利要求65的制剂，其中抗体的量为100mg/ml。
69.权利要求64的水性药物制剂，包括100mg/ml IgGl/λ抗体、0.74mg/ml L-组氨酸、1.1mg/ml L-组氨酸一盐酸盐、8.8mg/ml NaCl、以及0.1mg/ml聚山梨酯80，其中制剂的pH值为6.0。
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