CN101457251A

CN101457251A - 一种增敏肿瘤细胞药剂的筛选方法及其应用

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Publication number: CN101457251A
Application number: CNA2007101645210A
Authority: CN
Inventors: 唐修文
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2007-12-10
Filing date: 2007-12-10
Publication date: 2009-06-17

Abstract

一种增敏肿瘤细胞药剂的筛选方法及其应用。主要为解决在肿瘤化疗过程中，有效克服多药耐药性，以提高抗癌药的治疗效果。本发明利用以Nrf2为分子靶标的细胞筛药平台，以tBHQ为Nrf2诱导剂，通过荧光素酶活力检测，筛选出能有抑制该诱导作用的抑制剂，这种抑制剂即为增敏肿瘤细胞的药剂。经过筛选获得的该药剂为一种小分子化合物ZDAK02(coralyne sulfoacetate硫代乙酸酯甲氧檗因)。它与抗癌药瘤可宁Chlorambucil或抗癌药奥沙利铂联合使用，即可增强抗癌药对癌细胞的毒性，还可有助减轻甚至逆转肿瘤对抗癌药的多药耐药性。

Description

一种增敏肿瘤细胞药剂的筛选方法及其应用

技术领域

本发明涉及能减轻甚至逆转肿瘤对抗肿瘤药耐药性的药物及其筛选技术。

背景技术

目前临床上抗癌药种类用的最多的是烷化剂和氧化-还原循环物，这两类药物包括环磷酰胺(CTX)、异环磷酰胺、美法兰、瘤可宁、噻替派、马利兰、亚硝脲类药物、顺铂等十多种抗癌药。烷化剂类抗肿瘤药物具有高度的化学活性、能直接作用于对肿瘤细胞生长具有重要意义的蛋白质、酶、核酸的关键部分，与这些组织中的氨基、巯基、羧基及磷酸基等起烷化反应，使细胞的蛋白质、酶及核酸发生变性、结构或生理功能发生变异，从而阻止肿瘤细胞增殖使其死亡。因本类药物直接与生物大分子发生烷化反应，故又称生物烷化剂。烷化剂类抗肿瘤药物按化学结构还可分为氮芥类、乙烯亚胺类、磺酸酯类、卤代多元醇类及亚硝基脲类等。瘤可宁(Chlorambucil)为烷化剂类抗肿瘤药，是一种氮芥衍生物，对多种肿瘤有抑制作用。铂类金属抗癌药与烷化剂作用类似，均能与DNA分子内鸟嘌呤碱基上N7或鸟嘌呤N3的分子形成交叉联节。这些作用导致细胞因功能失调而死亡，其中的顺铂(Cisplatin)属细胞周期非特异性药物，具有细胞毒性，可抑制癌细胞的DNA复制过程，并损伤其细胞膜结构，有较强的广谱抗癌作用。

因肿瘤而死亡的患者中90％与肿瘤细胞的耐药性有关，特别是多药耐药性(multidrugresistance，MDR)，这是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时，对结构和作用机制不同的其他抗肿瘤药物也都产生交叉耐药性。导致产生多药耐药性的因素中，与细胞膜有关的主要因素有P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药性相关蛋白(MRP)和肺多药耐药性相关蛋白(LRP)等，与细胞质有关的主要因素有凋亡抑制蛋白(I-APs)、拓扑异构酶II、蛋白激酶C和谷胱苷肽氧化还原系统等。但最重要、最常见的为P-gp，也称典型MDR，其为一种广泛存在于多种肿瘤细胞胞膜上的蛋白，负责将细胞内的药物泵出细胞外，从而引起肿瘤细胞的多药耐药性，降低肿瘤化疗的疗效。另一方面可能是因为一些耐药蛋白的表达增加或活力升高导致细胞自身的生存能力增强所致，从而肿瘤细胞产生了耐药性。理论上，克服多药耐药性主要有两种途径，一种是开发对MDR、细胞不具有耐药性的新抗癌药物，另一种途径是寻找MDR的逆转剂与抗癌药物合用，恢复MDR细胞对抗癌药物的敏感性。在肿瘤化疗领域中，克服多药耐药性的研究一直方兴未艾，也是肿瘤化疗领域急需解决的难题。

研究发现，Nrf2/ECH(NF-E2-related factor2或Chicken erythroid-derivedCNC-homology factor)是一种66-kDa蛋白，含有一高度保守的碱性亮氨酸拉链(bZIP)结构，属于CNC(cap-‘n’-collar)转录因子家族成员，最初被Moi等人分离得到。常态下，胞浆中的Nrf2被胞浆蛋白伴侣分子Keapl(Kelch-like ECH-associated proteinl)的DGR区结合从而处于抑制状态，Keapl同时可促进Nrf2的泛素蛋白酶体途径降解过程。活性氧及亲核剂等氧化应激源作用下，Nrf2脱离Keapl，转移入核，通过bZIP与小分子Maf蛋白异二聚化之后二聚体与抗氧化元件ARE上GCTGAGTCA位点结合，启动受ARE调节的基因的转录表达。基因分析显示，ARE是一个特异的DNA-启动子结合部位，位于谷胱甘肽S转移酶(GSTs)、NAD(P)H：醌氧化还原酶1(NQO1)、UDP-葡萄糖醛酸转移酶(UGT)、微粒体环氧化物水解酶、谷氨酰半胱氨酸连接酶GCL(含GCLC和GSLM两个亚基)、谷胱甘肽合成酶、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物岐化酶(SOD)、血红素氧化酶(HO-1)、醛脱氢酶、醛酮还原酶、AKR1C1(醇醛酮还原酶家族1，成员C1)等II相解毒酶和抗氧化酶基因的5’侧翼区域，其能被多种抗氧化性和(或)亲电性物质激活，从而激活II相解毒酶和抗氧化酶基因的表达，进而增加细胞对氧化应激的抗性。Nrf2的激活受多个水平的调控，主要涉及Nrf2与Keapl的相互作用。Nrf2从Keapl解离是Nrf2激活的重要环节，主要通过两种途径，其一是亲核物质或活性氧(reactive oxygen species，ROS)直接攻击作用；其二是磷酸化的间接作用。目前认为促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、蛋白激酶C(PKC)和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)等几条蛋白激酶途径参与了Nrf2-ARE通路激活和其依赖基因表达的调控。Nrf2、Keapl和ARE是Nrf2-ARE信号系统的轴心元件。激活Nrf2-ARE信号通路能上调很多II相解毒酶和抗氧化酶基因的转录活性，从而表达一些抗致癌物、氧化剂和其他有毒化学物质的基因产物，起细胞保护作用。Nrf2是调控细胞对抗有害环境因素的关键转录因子，Nrf2缺失或激活障碍，会引起细胞对应激源的敏感性增高，可加重氧化应激源的细胞毒性，导致细胞功能障碍、凋亡甚至死亡，其与化学促癌的发生、炎症修复进程延长、细胞凋亡等病变密切相关。

近几年来，对一些抗癌药的耐药性研究表明Nrf2调控的一系列基因与多药耐药性的典型蛋白MDR有很大的关系，这是肿瘤细胞对抗肿瘤药产生耐药性的一条重要途径。某些抗肿瘤药能在肿瘤细胞中激活Nrf2转录而导致第II相解毒酶和抗氧化酶基因表达量的增加，提高肿瘤细胞对氧化应激的抵抗能力，增强肿瘤细胞对抗癌药的抗性，引起很多种肿瘤对这些抗癌药物产生耐药性。从而，以Nrf2为研究肿瘤耐药性的分子靶标，筛选Nrf2的拮抗剂，可能起到致敏肿瘤细胞的作用，降低肿瘤耐药性。

发明内容

本发明的目的是要解决肿瘤化疗领域急需解决的难题，提供一种增敏肿瘤细胞药剂的方法，获取与抗癌药物合用的能有效克服多药耐药性的药剂。

为实现上述目的，本发明在Nrf2与肿瘤耐药性关系的基础上，建立了灵敏、稳定、以Nrf2为分子靶标的细胞筛药平台。采用以叔丁基对苯二酚(tBHQ)为Nrf2诱导剂，取Nrf2抑制剂视黄酸Retinoid acid(RA)或X为阳性对照，通过荧光素酶活力检测，筛选有效抑制tBHQ和莱菔硫烷Sulforaphane诱导的荧光素酶活力的Nrf2抑制剂，作为降低肿瘤耐药性的药剂。据此试验可知某些生物碱小分子化合物可能使肿瘤细胞对化疗药物-烷化剂和氧化还原循环物更敏感。抗氧化性诱导剂tBHQ能强诱导II相解毒酶，而不会诱导其它药物代谢酶，为单功能诱导剂。

通过本方法实验中的荧光素酶活性检测技术，我们筛选得到生物碱类小分子化合物ZDAK02(硫代乙酸酯甲氧檗因coralyne sulfoacetate)可以成为Nrf2抑制剂，能有效抑制瘤瘤可宁Chlorambucil等抗肿瘤药对Nrf2-ARE信号通路的激活作用。

硫代乙酸酯甲氧檗因ZDAK02结构式为：

本发明的有益效果

本发明所筛选的药剂ZDAK02(硫代乙酸酯甲氧檗因coralyne sulfoacetate)能增强烷化剂抗癌药瘤可宁Chlorambucil对肿瘤细胞的毒性并能减轻甚至逆转肿瘤对该抗癌药的耐药性。以人乳腺癌MCF-7细胞株和人结肠腺癌Caco2细胞株为实验细胞，用报告基因技术检测不同加药组细胞中荧光素酶活力，ZDAK02能有效抑制该诱导作用；ZDAK02能使瘤可宁Chlorambucil对细胞的毒性增加。实践证明本发明对抗肿瘤具有显著效果。

附图说明

图1为tBHQ浓度0、1、5、10、20μM所诱导的萤光素酶活性；

图2为Sul浓度0、1、5、10μM所诱导的萤光素酶活性；

图3为ZDAK02(硫代乙酸酯甲氧檗因coralyne sulfoacetate)(cs)浓度0、10、20、25、40、50μM对20μM tBHQ的所诱导的萤光素酶活性的抑制百分比曲线；

图4为抑制剂50μM CS增加XW细胞对瘤可宁Chlorambucil的敏感性；

图5为抑制剂50μM CS增加Caco2细胞对瘤可宁Chlorambucil的敏感性。

具体实施方式

本发明筛选增敏肿瘤细胞药物的方法，其具体实施过程如下，参照附图可以对结果进行统计分析：

1、材料

1.1 试剂

DMEM(GIBCO)：每包Dulbecco’s Modified Eagle Medium(10.3g)溶于高纯水中，再缓慢加3.7g NaHCO₃体积调至1L，过滤分装并4℃保存。

MEM(GIBCO)：每包Minimum Essential Medium(10.3g)溶于高纯水中，再缓慢加2.2gNaHCO₃体积调至1L，过滤分装并4℃保存。

胎牛血清(FBS，GIBCO)

抗生素Antibiotic-Antimycotic(GIBCO，100^*)

G418(GIBCO，100^*)：称取G418粉1.6g，溶于20ml1^*PBS中，抽滤除菌，分装后-20℃保存。

胰酶：Nacl(百达)8g+Kcl(天龙)0.2g+Na₂HPO₄(湖试)3.2g+KH₂PO₄(湖试)0.2g+胰酶(trypgin，生工)2.5g+EDTA(生工)0.2g溶于双蒸水1000ml中，抽滤除菌，分装后-20℃保存，注意在加入胰酶粉后不能加热和剧烈搅拌。

10^*磷酸盐缓冲液(PBS)：Nacl(百达)80g+Kcl(天龙)2.0g+Na₂HPO₄(湖试)14.4g+KH₂PO₄(湖试)2.4g，加水调至1L，调PH值至7.2-7.4。使用时，要稀释成1^*PBS且经过高温灭菌。

台盼兰溶液：称台盼兰粉(沃凯)0.2g溶于50ml的生理盐水中，放入50℃水浴中加热，经过过滤后常温保存。

1.2 药品

tBHQ、Sulforaphane

ZDAK02(coralyne sulfoacetate)，顺铂Cisplatin(APS)、苯丁酸氮芥Chlorambucil

L-Buthionine-[S，R]-sulfox-imine(bso，SIGMA)：抑制还原型谷胱甘肽(GSH)合成的限速酶谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)，使GSH合成减少。使用bso1h后检测到细胞内的氧活性物质(ROS)增多，3h达高峰，此时GSH水平降至正常的30％，GSH在24h后完全耗竭，48h后线粒体失去功能。

MTT：250mg MTT粉溶于50ml 1^*PBS中，抽滤除菌后，分装后4℃避光保存。

萤光素酶发光底物试剂盒Luciferase Assay System(Promega)

裂解液Passive lysis(5^*Buffer，Promega)、

Dimethyl sulfoxide minimum 99.5％ GC(DMSO，GIBCO)

1.3 实验器材

96孔板购自Greiner Bio-one

Millex Syringe Driven Filter Unit 0.22μM(MILLIPORE)

Steriltop Vacuum Driven Disposable Filtration System(MILLIPORE)

电子天平FA2004N(上海精密科学仪器有限公司)

培养箱Thermo Series II Water Jacketed CO2 Incubator

全波长酶标仪Thermo MULTISKAN SPECT RUM

荧光化学发光仪Thermo FLUOROSKAN ASCENT FL

EPPENDORF MIX MATE

1.4 细胞

本实验室建立了一非常灵敏、稳定、以Nrf2为分子靶标的、人类乳腺癌MCF-7萤光素酶报告蛋白细胞株ARExw(xw)。这一细胞株具有一ARE-报告蛋白基因质粒，此报告蛋白基因定位在8个连锁排列的ARE序列下游。将需要筛选的化合物加到细胞中，就能检测所筛选的化合物是否能降低诱导或降低报告蛋白基因的表达。这一细胞筛药平台确保了所获取的药物先导物的可溶性及细胞膜穿透性。

结肠癌Caco2株来源于人体结肠癌细胞，同源性好，在培养条件下可自发进行上皮样分化并可形成紧密连接，其形态学、标志酶的表达等特征与人类肠道粘膜相似。

上述两种细胞株均购自上海细胞所。

2、方法

2.1 细胞复苏

ARExw细胞培养基为DMEM+10％ FBS+抗生素(1：100)+G418(1：100)，Caco2细胞培养基为MEM+10％ FBS+抗生素(1：100)，两种细胞培养条件为5％CO2，(37±0.5)℃，湿润。

(1)从液氮中取出细胞株，立刻化冻。

(2)把冰冻管内的细胞悬液转移至离心管内，加入5ml培养基。

(3)以1000转/秒，离心5min后，去掉上清液，再加入5ml的培养基并多次吹打细胞沉淀，使之完全分散。

(4)取小号的培养瓶，在其表面注明复苏细胞名称、培养基类型、代数、时间。最后离心管内细胞悬液转移至培养瓶内，把培养瓶的瓶盖旋松放入培养箱内。

2.2 细胞扩增

(1)在显微镜下观察细胞，若细胞覆盖率超过70％，则准备扩增细胞。

(2)吸去废液，再用1^*PBS(与原培养瓶内的培养基相同的量)洗一遍，往培养瓶内加入胰酶(小号瓶1-2ml，中号瓶5ml)，再把培养瓶放入培养箱内加热3-5min，消化至细胞从铺展开的多边形稍缩为圆形。

(3)取出培养瓶，往里面加入含10％NCF的培养液停止消化(小号瓶2-3ml，中号瓶5ml)，并吹打数次，再把细胞悬液体转移至离心管内。

(4)以1000转/秒，离心5min后，去掉上清液，再加入培养基并多次吹打细胞沉淀，使之完全分散。

(5)按细胞量取相应个数的中瓶加入培养基，再加入离心管内的细胞液，中瓶保持总体积为15ml/瓶。

(6)在培养瓶表面注明复苏细胞名称、培养基类型、代数、时间。最后把培养瓶的瓶盖旋松放入培养箱内。

2.3种细胞

(1)吸去废液，再用1^*PBS洗一遍，往培养瓶内加入胰酶消化。

(2)加入含10％FBS的培养液停止消化，并吹打数次，再把细胞悬液体转移至离心管内。

(3)以1000转/秒，离心5min后，去掉上清液，再加入培养基并多次吹打细胞沉淀，使之完全分散。

(4)吸50ul的细胞悬液到0.5ml的小离心管内，再加入100ul的1^*PBS和50ul的台盼蓝，用枪混匀。再吸10ul到数细胞的玻片内，进行数细胞。

(5)根据细胞数，算好体积，则即以每孔200ul细胞悬液种到96孔板中，注意96孔板最外面的一圈孔不加，因此只有60孔。最后把种好的96孔板放入培养箱内。

2.4 细胞加药

(1)现有药品的浓度：tBHQ 5mM和100mM、Sul(sulforaphan)5mM、ZDAK02(coralynesulfoacetate)5mM、Chlorambucil 50mM和bso 10mM

(2)bso预处理是96孔板每孔200ul中加入1ul的100mM bso，则终浓度为50μM bso，然后放入培养箱内过夜，不要超过24h。

(3)设计加药分组，一般以三个孔为一组，有一个空白对照、DMSO1％对照、加诱导药组、抑制剂组、诱导药和抑制剂混合组。

(4)把药与含抗生素的无血清的培养液混匀，并取出96孔板去其废液，用1*PBS洗一遍，进行加药。最后放入培养箱内过夜。

2.5 萤光素酶测定

(1)取发光底物和裂解液化冻。

(2)取加药24h的96孔板，去掉废液，用1^*PBS洗一遍，然后每孔加入20ul的裂解液，放到MIX MATE上1000rpm，25min。

(3)25min后避光往每孔加100ul的发光底物，1000rpm，60s。最后去荧光化学发光仪读数。

2.6 细胞增殖抑制实验(MTT法)

(1)种细胞，放入培养箱内过夜。

(2)设计加药分组，一般以三个孔为一组，则96孔板的60个孔可以分为上下各十组。一般设计有一个空白，一个DMSO，抑制剂组，上层不同浓度抗癌药组，对比下层相应不同浓度抗癌药加抑制剂组。

(3)把药品与含抗生素的无血清的培养液混匀，并取出96孔板，去废液，用1*PBS洗一遍后加药，放入培养箱内24h。

(4)取出加药24h的96孔板，每孔加入20ul的MTT，再放入培养箱内。

(5)4h后取出96孔板，小心去掉废液，注意不能用力。

(6)避光每孔加入200ulDMSO，放到MIX MATE(混匀器)上1000rpm，15min。最后到全波长酶标仪以490nm波长光源读数。

2.7 结果统计分析

实验为了提高准确度，把每加药组做三个孔，并重复三次。数据以均数±标准差(x±s)表示。两组资料之间的比较采用t检验。采用GraphPad Prism 4统计软件分析。以P<0.05或P<0.01为差别有统计学意义。

结果：

1.tBHQ和Sul(sulforaphane)的浓度曲线

通过测量不同浓度tBHQ和Sulforphane所诱导的ARExw细胞萤光素酶活性，可以得到在一定浓度范围内tBHQ和Sul所诱导的萤光素酶活性呈浓度依赖性增强。其中浓度0表示本底1％DMSO诱导的萤光素酶活性，这是因为药品都是溶于DMSO的，DMSO相比空白，也具有诱导作用，且DMSO终浓度超过1％会对细胞产生毒性作用。

表1 为不同浓度tBHQ所诱导的萤光素酶活性(x±s，n＝5)

表1

如图1所示，XW细胞以5.0*10⁴个/ml密度种板过夜，用不同浓度的tBHQ处理XW细胞24h后测量，且每个浓度重复5次。(x±s，n＝5)

选择Sulforphane浓度为0、1、5μM处理ARExw细胞24h后测量，但在10μM时由于大量XW细胞已经被杀死，所以读数很小。

表2为不同浓度Sul所诱导的萤光素酶活性(x±s，n＝5)

表2

如图2所示，XW细胞以5.0*10⁴个/ml密度种板过夜，用不同浓度的Sul处理XW细胞24h后测量，且每个浓度重复5次。。(x±s，n＝5)。

2.如图1、图2所示，本发明筛选出的药剂即小分子抑制剂ZDAK02(coralynesulfoacetate)(cs)对20μM tBHQ和5μM Sul所诱导的萤光素酶活性的抑制百分比曲线

2.1 小分子抑制剂ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)只对20μM tBHQ所诱导的萤光素酶活性有抑制作用，且抑制作用随终浓度的升高而增强。

表3为不同浓度ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)对20μM tBHQ的所诱导的萤光素酶活性的抑制(％，x±s，n＝2)

表3

如图3所示XW细胞以5.0*10⁴个/ml密度种板过夜，用不同浓度的cs和20μM tBHQ一起处理ARExw细胞24h后测量，且每个浓度重复3次。数据处理方式为：计算出对照组1％DMSO读数的平均值，其他加药组的平均值除以1％DMSO的平均值得到倍数。以公式(20μM tBHQ组倍数-不同浓度cs和20μM tBHQ混合组倍数)/20μM tBHQ组倍数*100％可以算出抑制百分比，取3次的百分比求出平均值和标准差。(％，x±s，n＝3)。

3，细胞增殖抑制实验数据

为了进一步验证Nrf2小分子抑制剂能够增敏肿瘤细胞，我们把XW细胞和Caco2细胞暴露于不同浓度的Chlorambucil、相应浓度Chlorambucil+抑制剂、奥沙利铂和相应浓度奥沙利铂+抑制剂中24h后测量细胞活力。

抑制剂CS能够增加XW细胞对Chlorambucil和Caco2细胞对奥沙利铂的敏感性，如图4、图5所示。

如图4所示，XW细胞以7.5*10⁴个/ml密度种板过夜，50μM CS分别和0、10、25、50、75、100、150、200μM Chlorambucil一起处理XW细胞24h后测量，且每个浓度重复3次。数据处理方式为：计算出对照组1％DMSO读数的平均值作为100％，各浓度Chlorambucil组的平均值/1％DMSO的平均值*100％可以算出活力百分比；计算出50μM CS组的平均值作为100％，50μM CS+各浓度Chlorambucil组的平均值/50μM CS组的平均值*100％可以算出活力百分比。本图是3次实验中有代表性的一组数据。

如图5所示，Caco2细胞以5.0*10⁴个/ml密度种板过夜，50μM CS分别和0、25、50、75、100、1251μM奥沙利铂一起处理Caco2细胞24h后测量，且每个浓度重复3次。数据处理方式为：计算出对照组1％DMSO读数的平均值作为100％，各浓度奥沙利铂组的平均值/1％DMSO的平均值^*100％可以算出活力百分比；计算出50μM CS组的平均值作为100％，50μM CS+各浓度奥沙利铂组的平均值/50μM CS组的平均值*100％可以算出活力百分比。本图是3次实验中的一组数据。

综上所述，Chlorambucil是临床上常用的抗癌药，对这类抗癌药的耐药性研究表明它们在肿瘤细胞中激活Nrf2转录而导致II相解毒酶和抗氧化酶基因表达量的增加，增强肿瘤细胞对抗癌药的抗性，引起多种肿瘤对这些抗癌药物产生耐药性。Nrf2现已成为肿瘤化疗增敏解毒药物研发的新靶点蛋白，以Nrf2-ARE通路为分子靶点的抑制剂的研发和使用，一方面将有可能增敏肿瘤细胞，即减少抗癌药物的用量从而减轻毒副作用；另一方面也会逆转耐药性。因此，以Nrf2-ARE为分子靶点的抑制剂的开发利用将有可能改善化疗药物的治疗效果，为癌症的协同治疗提供一条新途径。

本实验室建立了灵敏、稳定、以Nrf2为分子靶标的荧光素酶报告蛋白细胞株ARExw筛药平台。实验表明，通过检测细胞荧光素酶发现tBHQ能强有力地诱导Nrf2-ARE信号通路调控的某些基因的蛋白表达水平。因此，选择tBHQ作为Nrf2诱导剂来筛选Nrf2抑制剂。以tBHQ为Nrf2诱导剂，通过荧光素酶活性检测发现，ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)能有效抑制tBHQ的诱导作用。

ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)能增加烷化剂瘤可宁Chlorambucil抗癌药对肿瘤细胞的毒性，联合使用ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)能改善瘤可宁Chlorambucil抗癌药的治疗效果，ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)具有联合治疗的开发前景。

Claims

1、一种增敏肿瘤细胞药剂的筛选方法，其特征是利用以Nrf2为分子靶标的细胞筛选平台，以叔丁基对苯二酚tBHQ为Nrf2诱导剂，取Nrf2抑制剂视黄酸Retinoid acid(RA)或X为阳性对照，通过荧光素酶活力检测，来筛选出能有效抑制该诱导作用即抑制Nrf2的抑制剂，该抑制剂即为能增敏肿瘤细胞的药剂。

2、由权利要求1所述增敏肿瘤细胞药剂的筛选方法，筛选得到增敏肿瘤细胞的药剂为一种小分子化合物硫代乙酸酯甲氧檗因ZDAKO2，其结构式为：

3、权利要求2所述的增敏肿瘤细胞的药剂ZDAKO2(硫代乙酸酯甲氧檗因coralynesulfoacetate)的应用，将该药剂与烷化剂抗癌瘤可宁Chlorambucil或与抗癌药奥沙利铂联合使用，以治疗癌症。