CN101428143B - 携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗及制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗及制备方法和应用，首先构建含有结核分支杆菌Ag85B、ESAT6-Ag85B基因的真核表达质粒；其次是利用电转化的方法将所构建的真核表达质粒转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌中，减毒鼠伤寒沙门氏菌可以稳定表达结核分枝杆菌蛋白。联合使用Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)和BCG的抵抗结核杆菌感染免疫保护作用最强，大于单独BCG的免疫保护作用；它们产生的黏膜和血清SIgA水平强于BCG和DNA疫苗。并且Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)免疫保护能力大于DNA疫苗或Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-Ag85B)。方法简便，成本低，使用方便，具有能抵抗伤寒沙门菌感染，又能抵抗结核杆菌感染的免疫保护。稳定表达结核分枝杆菌蛋白，免疫后可诱导粘膜和系统免疫应答，具有显著的经济效益。

Description

携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗及制备方法和应用
技术领域
本发明属于分子微生物学和感染免疫领域，涉及携带结核分枝杆菌基因ESAT6和Ag85B的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗，涉及该疫苗的制备方法，这种重组的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗可以用以抵抗结核分枝杆菌的感染，也具有能抵抗伤寒沙门菌感染的免疫中的应用。
背景技术
结核病(Tuberculosis，TB)是一种由结核杆菌感染引起的严重危害人类健康的传染病。据世界卫生组织(WHO)统计资料显示，全球有近1/3的人感染结核杆菌，每年有300万人死于结核病，每年新发病人数达800～1000万。卡介苗(BCG)是目前唯一的结核预防性疫苗，但其对成人结核病的预防效果不稳定，保护效果从0％～80％不等，而且会干扰对结核病的诊断。因此寻找一种安全、有效、廉价且操作简便的预防结核病的新型疫苗成为当务之急。
在结核分支杆菌中，抗原85(antigen 85，Ag85)复合体为优势的分泌蛋白及保护性抗原，包括Ag85A、Ag85B和Ag85C三种蛋白成分。Ag85B含量最大，是一种能诱导明显Th1型免疫反应的免疫原性蛋白，早期分泌性的6-kD的蛋白(earlysecreted antigenic target 6-kDa antigen，ESAT6)是结核感染机体早期分泌的一种同样可以诱导明显Th1型免疫应答的优势抗原，可以诱导T细胞发生明显细胞免疫应答。
而卡介苗(BCG)是目前唯一预防结核分枝杆菌感染的疫苗，但其缺失ESAT6基因，而ESAT6是一种保护性抗原。因而有必要构建具有ESAT6等保护性疫苗以弥补BCG疫苗的不足。
而减毒鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium SL7207是细胞内侵袭性细菌，可以通过肠道及上呼吸道途径感染，侵入粘膜相关淋巴组织(MALT)，被MALT内的专职抗原递呈细胞(APC)吞噬，并在其中增殖。减毒鼠伤寒沙门氏菌与机体相互作用可产生特异性的免疫应答，诱导IgG及肠sIgA的生成，并产生特异性细胞免疫，由于其能靶向感染APC，因而是一种很好的疫苗备选载体，从粘膜免疫方面进一步提高机体对呼吸道病原微生物如结核等感染的防御能力。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)，疫苗可以稳定表达结核分支杆菌的优势抗原。该减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗制备方便，经口服途径免疫后，可以明显增强小鼠的细胞免疫、体液免疫以及粘膜免疫应答，全面提高机体的抗结核分支杆菌的免疫力，它们产生的黏膜和血清SIgA水平强于BCG和DNA疫苗。并且Salmonellatyphimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)免疫保护能力大于DNA疫苗或Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-Ag85B)；联合使用Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)和BCG的免疫保护作用最强，大于单独BCG的免疫保护作用。
本发明的另个一目的是在于提供了一种制备携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗的方法，该方法较简便易行，且所制备的疫苗可以稳定的表达结核分支杆菌蛋白。
本发明的再一个目的是在于提供了一种携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗在制备治疗或预防结核分枝杆菌的感染药物中的应用。
为了实现上述目的，本发明选用减毒鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimuriumSL7207菌株做为载体，与其他伤寒沙门氏菌株相比，安全性较高。
本发明的目的基因是结核分支杆菌基因Ag85B以及ESAT6，二者在结核感染的过程中发挥重要的作用，可以明显诱导Th1型免疫应答，是制备结核分支杆菌疫苗的首选抗原。
本发明利用同源重组的方法将结核分支杆菌基因插入到真核表达载体质粒中，然后将构建成功的真核表达质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌中使其稳定表达结核分支杆菌抗原，刺激机体产生有效的免疫应答。
本发明采用以下技术方案：
发明的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)，已在中国典型培养物保藏中心保存，CCTCC：M208241及CCTCC：M 208242。其制备步骤如下：
一、构建含有结核分支杆菌H37Rv菌株Ag85B以及ESAT6-Ag85B(相关文献在《J Immunol.》第154卷上发表)融合基因真核表达质粒pVAX-1-Ag85B以及pVAX-1-ESAT6-Ag85B。antigen 85B(Ag85B)以及早期分泌抗原(early secretedantigenic target6-kDa antigen，ESAT6)以结核分支杆菌H37Rv菌株基因组为模板通过PCR方法获得。Ag85B上下游引物分别是5′-TGAATTCAAATGTTCTCCCGGCCG-3’和5′-AAAGCTTTCAGCCGGCGCCTAA-3’，(酶切位点分别是BamHI、EcoRI)，然后将获得的Ag85B与pVAX-1分别作BamHI、EcoRI双酶切后连接得到pVAX-1-Ag85B真核表达质粒；ESAT6上下游引物分别为5′-GCAAGCTTATGACAGAGCAGCAGTGGAA-3’和5′-TTCCTAGGTGCGAACATCCCAGTGACGT-3′.(酶切位点分别为HindIII andBamHI)，然后将PCR获得的ESAT6以及构建成功的pVAX-1-Ag85B分别做HindIII andBamHI双酶切，连接获得pVAX-1-ESAT6-Ag85B真核表达质粒。
二、利用电转化的方法(相关文献在1999年《FOLIA MICROBIOLOGICA》第44卷发表)将克隆构建的真核表达质粒pVAX-1-Ag85B以及pVAX-1-ESAT6-Ag85B转化到Salmonella typhimurium LB5000菌株(相关文献在1992年《VACCINE》第10卷发表)中进行修饰后提取质粒再转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium SL7207(相关文献已发表在《infection and immunity》第61卷)中，并将其传代20代后鉴定其稳定性，免疫印迹(Western Blot)检测构建的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗中GST-Ag85B以及GST-ESAT6-Ag85B融合蛋白的表达；最后保存鉴定正确后的菌种Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)。
一种携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)的应用过程是：
将申请人制备的疫苗Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)在含有卡那霉素及链霉素的无菌LB培养基中37度培养过夜，收集细菌后以无菌PBS调整其浓度，按每只小鼠1×108CFU的量以灌胃途径免疫BalB/C小鼠，每两周免疫一次，共免疫三次。免疫后小鼠一部分用于特异性抗体、黏膜免疫和细胞免疫等免疫指标的检测，另一批小鼠免疫三次后在ABSL-III级实验室进行结核分枝杆菌H37Rv攻毒(尾静脉及滴鼻)实验，观察感染后小鼠的生存率、脾脏肺脏的病理变化及结核分枝杆菌菌落计数、肺脏结核分枝杆菌的抗酸染色等进一步评估携带结核分枝杆菌Ag85B以及ESAT6-Ag85B的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗对结核分枝杆菌感染的免疫保护作用。所构建的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗可以作为制备治疗或预防结核分枝杆菌的感染药物中的应用，以及作为制备治疗或预防结核分枝杆菌感染的疫苗药物中的应用。
发明的优点和效果：
本发明构建了一种可以稳定表达结核分支杆菌基因的减毒伤寒沙门氏菌载体疫苗Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)，这种减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗能激发有效的体液免疫、细胞免疫的同时，会显著的诱导机体产生粘膜性免疫应答，可以很好的用来预防结核分支杆菌的感染。这种疫苗具有很多优点：①可以稳定表达结核分枝杆菌蛋白；②免疫后可有效的诱导粘膜和系统免疫应答；③制备方法及使用途径简便，成本低，具有显著的经济效益。动物实验表明：以这种减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗免疫小鼠，小鼠能产生抗结核分支杆菌感染的特异性免疫应答，因此本发明可以作为抗结核分支杆菌的候选疫苗。本发明为进一步拓展减毒伤寒沙门氏菌作为口服疫苗载体的应用打下了基础，并为结核疫苗的研制提供了一条新的思路。
附图说明
图1.含有结核分支杆菌基因Ag85B以及ESAT6-Ag85B融合基因的真核表达质粒构建示意图。
1为DNA marker，2为重组质粒pVAX-1-Ag85B酶切鉴定，3为重组质粒pVAX-1-ESAT6-Ag85B的酶切鉴定。
将真核表达质粒酶切鉴定，pVAX-1大小为3.0kb，Ag85片段大小为860bp，ESAT6-Ag85B融合基因片段大小为1140bp，鉴定正确。
图2.减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗的稳定性检测及Western Blot检测真核蛋白Ag85B、ESAT6-Ag85B的表达示意图
将疫苗菌株传代20代后提取质粒，做酶切鉴定，图2A：1为DNA marker，2为疫苗Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-Ag85B)的质粒表达鉴定，3为疫苗Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)的质粒表达鉴定。图2B：为免疫后小鼠肌肉、脾脏、肺脏及肠道中蛋白Ag85B、ESAT6-Ag85B的真核表达。
将减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗传代20代后提取质粒鉴定，质粒没有丢失，构建的真核表达质粒在Salmonella typhimurium SL7207中稳定表达；疫苗免疫小鼠后在多个脏器中稳定表达真核蛋白Ag85B、ESAT6-Ag85B。
图3.质粒DNA疫苗以及减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗免疫小鼠血清特异性抗体的ELISA检测的示意图.
阴性对照：以真核表达载体pVAX-1以及减毒伤寒沙门氏菌株Salmonellatyphimurium SL7207免疫的小鼠；空白对照：以PBS免疫的小鼠。
血清中抗体随着免疫次数的增加而明显升高且减毒伤寒载体疫苗组明显高于空载体对照组，减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗免疫三次后的小鼠血清中抗体亚型IgG2a也明显高于空载体对照组。
图4.质粒DNA疫苗以及减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗免疫小鼠的特异性黏膜免疫水平，即胃肠及血清SIgA的ELISA检测的示意图.
减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗组小鼠的肠道及血清SIgA水平最高，进一步提高机体的抗结核分支感染能力。
图5.ELISPOT法检测免疫后小鼠特异性T细胞分泌的细胞因子的表达示意图。
伤寒沙门氏菌载体疫苗组分泌IFN-γ的细胞数量明显高于对照组，而IL4不明显，呈现出以Th1型免疫反应为主的免疫应答。
图6.流式细胞术检测细胞免疫水平CD8+T细胞颗粒酶释放结果示意图。
颗粒酶释放实验显示减毒伤寒沙门氏菌载体疫苗组的CD8+T淋巴细胞针对结核分支杆菌的特异性免疫应答增强。
图7.经疫苗免疫后小鼠感染结核分枝杆菌后生存率观察结果示意图。
减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗可以明显延长感染结核分枝杆菌的小鼠的生存时间，提高其生存率。
图8.经疫苗免疫后小鼠感染结核分枝杆菌后小鼠肺脏结核分枝杆菌的抗酸染色结果示意图。
图9.经疫苗免疫后小鼠感染结核分枝杆菌后小鼠肺脏HE染色结果示意图。
经减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗免疫组的小鼠肺脏病理变化明显轻于对照组，肺组织结构清晰，肺泡融合少。
具体实施方式
实施例1：
减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)的制备，其步骤是：
A、构建含有结核分支杆菌H37Rv菌株Ag85B以及ESAT6-Ag85B(相关文献在《J Immunol.》第154卷上发表)融合基因真核表达质粒pVAX-1-Ag85B以及pVAX-1-ESAT6-Ag85B。抗原85B(Ag85B)以及分泌性6-kDa蛋白(ESAT6)以结核分支杆菌H37Rv菌株基因组为模板通过PCR方法获得。Ag85B上下游引物分别是5′-TGAATTCAAATGTTCTCCCGGCCG-3’和5′-AAAGCTTTCAGCCGGCGCCTAA-3’，(酶切位点分别是BamHI、EcoRI)，然后将获得的Ag85B与pVAX-1分别作BamHI、EcoRI双酶切后连接得到pVAX-1-Ag85B真核表达质粒；ESAT6上下游引物分别为5′-GCAAGCTTATGACAGAGCAGCAGTGGAA-3’和5′-TTCCTAGGTGCGAACATCCCAGTGACGT-3′.(酶切位点分别为HindIII andBamHI)，然后将PCR获得的ESAT6以及构建成功的pVAX-1-Ag85B分别做HindIII andBamHI双酶切，连接获得pVAX-1-ESAT6-Ag85B真核表达质粒。
B、利用电转化的方法(相关文献在1999年《FOLIA MICROBIOLOGICA》第44卷发表)将克隆构建的真核表达质粒pVAX-1-Ag85B以及pVAX-1-ESAT6-Agg5B转化到Salmonella typhimurium LB5000菌株(相关文献在1992年《VACCINE》第10卷发表)中进行修饰后提取质粒再转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium SL7207(相关文献已发表在《infection and immunity》第61卷)中，鉴定后保存菌种Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)。将保存的菌种传代(传代方法：取10微升保存的菌液，加入到含有5微升卡那霉素和5微升链霉素的5毫升LB培养基中，37度摇床中培养)20代后提取质粒鉴定疫苗的稳定性并免疫小鼠后检测真核蛋白Ag85B以及ESAT6-Ag85B的表达情况。
重组疫苗效果的鉴定：
申请人将该减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)按每只小鼠1×108CFU的量以灌胃途径免疫BalB/C小鼠，每两周免疫一次，共免疫三次。每次免疫后两周取各组小鼠的尾静脉血检测血清中针对结核分支杆菌Ag85B蛋白的特异性抗体IgG；第三次免疫后两周取小鼠尾静脉血检测结核分支杆菌Ag85B蛋白的特异性抗体IgG1、IgG2a以及小鼠胃、肠、血清中的分泌性IgA表达；同时，还将另一批小鼠免疫三次后进行结核分枝杆菌H37Rv攻毒(尾静脉及滴鼻)实验，观察感染后小鼠的生存率、脾脏肺脏的病理变化及结核分枝杆菌菌落计数、肺脏结核分枝杆菌的抗酸染色等进一步评估携带结核分枝杆菌Ag85B以及ESAT6-Ag85B的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗对结核分枝杆菌感染的免疫保护作用。
实验发现，经构建的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗免疫后的小鼠抗原85B特异性的抗体IgG、IgG1、IgG2a以及分泌性IgA表达水平明显提高，提高了小鼠的体液免疫和粘膜免疫功能；同时，构建的伤寒沙门氏载体疫苗还可以显著促进IFN-γ、颗粒酶等的分泌和释放，极大的提高了小鼠的细胞免疫功能；同时，小鼠感染实验也发现，经构建的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗免疫的小鼠，生存率明显提高，肺脏病理变化明显减轻，脾肺结核分枝杆菌计数明显减少。从多方面证实，所构建的减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗可以作为制备治疗或预防结核分枝杆菌的感染药物中的应用，以及作为制备治疗或预防结核杆菌感染的疫苗药物中的应用。

Claims (4)

1.一种携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗，其特征在于：Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-Ag85B)，CCTCC保藏号为CCTCC：M 208241。
2.一种携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗，其特征在于：Salmonella typhimurium SL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)，CCTCC保藏号为CCTCC：M 208242。
3.一种用于实现权利要求1或2所述的携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗的制备方法，它包括下列步骤：
A、构建含有结核分支杆菌Ag85B以及ESAT6-Ag85B融合基因真核表达质粒pVAX-1-Ag85B以及pVAX-1-ESAT6-Ag85B，Ag85B和ESAT6基因分别以结核分支杆菌H37Rv菌株基因组为模板通过PCR方法获得，Ag85B上下游引物分别是5′-TGAATTCAAATGTTCTCCCGGCCG-3’和5′-AAAGCTTTCAGCCGGCGCCTAA-3’，然后将获得的Ag85B与pVAX-1分别作BamHI、EcoRI双酶切后连接得到pVAX-1-Ag85B真核表达质粒；ESAT6上下游引物分别为5′-GCAAGCTTATGACAGAGCAGCAGTGGAA-3’和5′-TTCCTAGGTGCGAACATCCCAGTGACGT-3′，然后将PCR获得的ESAT6以及构建成功的pVAX-1-Ag85B分别做HindIII and BamHI双酶切，连接获得pVAX-1-ESAT6-Ag85B真核表达质粒；
B、利用电转化的方法将克隆构建的真核表达质粒pVAX-1-Ag85B以及pVAX-1-ESAT6-Ag85B转化到LB5000菌株中进行修饰后提取质粒再转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中，鉴定后保存菌种Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-Ag85B)以及Salmonella typhimuriumSL7207(pVAX-1-ESAT6-Ag85B)，将保存的菌种传代20代后提取质粒鉴定疫苗的稳定性。
4.根据权利要求1或2所述的一种携带结核基因的减毒细菌载体结核疫苗在制备治疗或预防结核分枝杆菌的感染药物中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0918154D0 (en) * 2009-10-16 2009-12-02 Isis Innovation Mycobacterial vaccines
CN102604979A (zh) * 2011-06-02 2012-07-25 杭州贤至生物科技有限公司 一种核苷酸序列、基于序列编码的融合蛋白、制备的结核分枝杆菌疫苗及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1923278A (zh) * 2006-09-14 2007-03-07 复旦大学 Ag85B,ESAT－6的嵌合疫苗
CN101049508A (zh) * 2007-05-11 2007-10-10 武汉大学 携带结核分支杆菌Ag85B的减毒伤寒杆菌载体疫苗

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1923278A (zh) * 2006-09-14 2007-03-07 复旦大学 Ag85B,ESAT－6的嵌合疫苗
CN101049508A (zh) * 2007-05-11 2007-10-10 武汉大学 携带结核分支杆菌Ag85B的减毒伤寒杆菌载体疫苗

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anja Weinreich Olsen, et al.Protection of Mice with a Tuberculosis Subunit Vaccine Based on a Fusion Protein of Antigen 85B and ESAT-6.《INFECTION AND IMMUNITY》.2001,第69卷(第5期),第2773-2778页. *
刘焰等.结核杆菌Ag85B 与ESAT26 双顺反子真核表达质粒的构建及体外表达.《免疫学杂志》.2005,第21卷(第1期),第33-36页. *

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