CN101410501A - ω3 - Google Patents

Abstract

由包含至少一种非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或其盐的粗制组合物制备水溶性不饱和脂肪酸盐的方法，所述方法包括：在水存在下向所述粗制组合物中添加至少一种氨基醇化合物以形成所述酸或盐的水溶性氨基醇盐；分离水相；和可选地从所述水相中离析所述盐。

Description

ω3

技术领域

本发明涉及由包含不饱和脂肪酸的粗制组合物，尤其是天然来源的脂肪酸，例如植物或动物油例如海产的油来制备水溶性不饱和脂肪酸盐，例如水溶性ω-3脂肪酸盐和/或水溶性ω-6脂肪酸盐的方法。本发明还涉及可以通过本发明方法制备的某些新型水溶性盐和其混合物。具体来说，本发明涉及一种方法，其中形成ω-3脂肪酸的水溶性单氨基醇或多氨基醇盐，且其中将这些化合物用于健康促进增补剂或药物制剂。

背景技术

ω-3和ω-6脂肪酸对人体健康而言是必需的脂肪酸，但又是不能通过人体自身制造的脂肪酸。因此，ω-3脂肪酸必须从食物来源获得，并且可以在鱼和某些植物油中找到。在饮食中维持ω-3和ω-6(另一种必需的脂肪酸)的合适平衡是重要的，因为这两种物质一同发挥作用来促进健康。例如，ω-3和ω-6脂肪酸在大脑功能以及正常生长和发育方面发挥至关重要的作用。

有三种主要类型的在食品中摄取并为机体使用的不饱和脂肪酸：ω-6脂肪酸α-亚麻酸(ALA)，ω-3脂肪酸二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。一旦食用，机体将ALA转化成EPA和DHA，即两类更容易被身体使用的ω-3脂肪酸。深入研究表明ω-3脂肪酸减少炎症并且帮助预防某些慢性疾病例如心脏病和关节炎。这些必需脂肪酸在大脑中高度浓缩并且好象对认知和行为功能尤其重要。事实上，在母亲怀孕期间没有从母亲那里得到足够ω-3脂肪酸的婴儿有形成视觉和神经问题的风险。

如此前所提及的那样，维持饮食中ω-3和ω-6脂肪酸之间的平衡是非常重要的。例如，ω-3脂肪酸帮助减少炎症，而大多数ω-6脂肪酸倾向于促进炎症。这些必需脂肪酸的不适当的平衡导致疾病产生，而适当的平衡帮助维持甚至改善健康。健康的饮食构成应该是ω-6脂肪酸比ω-3脂肪酸多大致一至四倍。

随着方便食品的发展和例如新鲜的鱼、水果和蔬菜的健康食品消耗的普遍减少，典型的美国人的饮食往往包含比ω-3脂肪酸多11至30倍的ω-6脂肪酸，并且许多研究人员认为这种不平衡是美国炎症性病症上升率方面的重要因素。

然而，相反，地中海民族的饮食由ω-3和ω-6脂肪酸间更健康的平衡构成并且许多研究已经表明遵循这种饮食的人很少会产生心脏病。地中海民族的饮食不包括很多肉(其ω-6脂肪酸含量高)并且强调富含ω-3脂肪酸的食品，包括整谷粒、新鲜水果和蔬菜、鱼、橄榄油、大蒜以及适度的酒消耗。

因此，自从七十年代他们发现，ω-3与ω-6酸的比例在许多个体的饮食中不平衡，ω-3脂肪酸或它们的衍生物已经被制成可为消费者获得的膳食增补剂以试图恢复所需的ω-3与ω-6的平衡。因此目前有数十万人日常摄取ω-3脂肪酸或其衍生物来预防各种疾病，例如关节炎、心肌梗塞和中风。

ω-3脂肪酸通常以它们天然存在的甘油三酯形式提供给消费者。ω-3脂肪酸甘油三酯或游离脂肪酸本身通常源自天然的油例如海产的油。因为难以从海产的油高纯度地离析ω-3酸，所以ω-3增补剂通常具有使人不愉快的鱼腥余味，消费者不喜欢这种味道。对于许多人，例如老年人和儿童，咽下目前用来容纳ω-3材料的胶质胶囊也是一个主要问题。因此如果ω-3化合物可以以足够的纯度离析以致可以除去鱼的余味，则将是有益的。如果任何组合物中的ω-3化合物的浓度可以相对于天然来源被富集，也将是有益的。

一般而言，ω-3脂肪酸和长链不饱和脂肪酸遇到的具体问题是它们是水不溶性的并且它们典型的盐，例如它们的钠盐也是水不溶性的。这种不溶性严重地限制了它们的生物利用率并阻碍了它们的纯化。因此，从包含ω-3物质(例如以其甘油三酯形式或游离酸形式)的粗制混合物获得水溶性ω-3化合物将非常有益。

此外，由于我们海洋和淡水中的污染，许多海产的油现在包含高水平的有毒化合物例如二恶英、重金属、多卤化阻燃剂和PCB’s(多氯化联苯)。如果可能以消除这些有毒物质的方式从粗制海产的油中离析ω-3脂肪酸，则将是有益的。

同样重要的是，所使用的任何分离方法廉价并且可以工业规模应用。ω-3增补剂的市场是巨大的，但是产品的利润小并且产物零售便宜。因此不能使用昂贵的色谱技术来从粗制海产的油中离析ω-3酸，因为此类纯化的成本将使得ω-3过贵而难以销售。分子蒸馏目前用来纯化EPA和DHA的乙基酯，如药物的加工中那样，但是这不可用于纯化粗制海产的油。

发明内容

发明人已经惊奇地发现富含可溶于纯水的不饱和脂肪酸盐，尤其是ω-3盐的组合物的新制造方法。在一些实施方案中，该方法能除去导致鱼味和有害气味并对ω-3的健康益处没有帮助的较短链的脂肪酸和低分子量胺，同时还允许消除有毒物质例如二恶英、重金属、阻燃剂和PCB’s，从而留下高度富含ω-3脂肪酸盐，尤其是多氨基醇盐的组合物。该方法甚至可以消除胆固醇的存在。此外，水溶性不饱和脂肪酸盐或其混合物可以以固体形式，例如粉末形式离析，使得它们对在药物或营养剂形式中的配方是理想的。

本发明人已经发现将含天然存在的粗制脂肪酸衍生物的油例如海产的油转化成含水溶性ω-3盐的组合物的方法，该组合物可以直接用于制造用于治疗和预防疾病的药剂。该方法进行起来廉价且简单，并且不需要昂贵的纯化程序。

在其最主要的实施方案中，本发明的方法能形成不饱和脂肪酸的水溶性盐，并因此能够通过将水溶性盐萃取到水相中来纯化含所需酸的粗制混合物，从而留下非水溶性杂质。本发明还揭示了新型水溶性盐的形成，例如基于多氨基醇化合物的那些盐和水溶性不饱和脂肪酸盐的混合物的形成。

ω-3脂肪酸的盐不是新的。例如，WO96/33155描述了某些特定纯化ω-3脂肪酸的葡甲胺(N-甲基葡糖胺)盐，并提出了其各种治疗应用。然而，本发明提供取得呈粗制形式的，即存在杂质的不饱和脂肪酸，并制备其纯化水溶性盐的第一方法，并提供水溶性不饱和脂肪酸盐的混合物的第一公开内容。在这方面，最令人意外的是盐混合物可以根据本发明离析为结晶或半结晶物质。当存在化合物的混合物时，结晶物质的回收是很难得的，因为多于一种化合物的存在导致熔点降低和油状物质的形成。

因此，从一个方面考虑，本发明提供由包含非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或其盐的粗制组合物制备水溶性不饱和脂肪酸盐，例如水溶性不饱和脂肪酸盐的混合物的方法，所述方法包括：

在水存在下向所述粗制组合物中添加至少一种氨基醇化合物，以形成所述酸或盐的水溶性氨基醇盐；

分离水相；和

可选地从所述水相中离析所述盐。

从另一个方面考虑，本发明提供由不饱和脂肪酸或其盐的非水溶性或微水溶性混合物制备水溶性不饱和脂肪酸盐的混合物的方法，所述方法包括：

在水存在下向所述非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或其盐的混合物中添加至少一种氨基醇化合物，以形成所述酸或盐的水溶性氨基醇盐；

分离水相；和

可选地从所述水相中离析所述盐。

从另一个方面考虑，本发明提供由非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或其盐制备水溶性不饱和脂肪酸盐的方法，所述方法包括：

在水存在下向所述非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或其盐中添加至少一种多氨基醇化合物，以形成所述酸或盐的水溶性多氨基醇盐；

分离水相；和

可选地从所述水相中离析所述盐。

具体实施方式

本发明的第一方法允许由包含非水溶性不饱和脂肪酸或盐的粗制组合物形成水溶性不饱和脂肪酸盐或盐的混合物，并从而允许通过将脂肪酸与非水溶性杂质分离来将它纯化。所谓的纯化是指将目标材料，即水不溶性的不饱和脂肪酸氨基醇盐与存在于该粗制组合物中的至少一种杂质，优选多种杂质，尤其是多种水溶性杂质例如胆固醇和下面提及的毒物分离。因此，所述粗制组合物包含非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或盐以及至少一种杂质。

本发明的方法还能够通过使呈纯化形式的水不溶性不饱和脂肪酸混合物或盐混合物反应来形成水溶性氨基醇脂肪酸盐的混合物，并且允许通过使呈纯化形式的不溶性不饱和脂肪酸或盐反应形成多氨基醇脂肪酸盐。在任何这些方法中，该非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸化合物在氨基醇化合物添加之前优选为其COOH形式。

随后的论述假定该非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸呈COOH形式，但是同样涉及盐形式，如果盐存在于起始材料中的话。存在于所述粗制组合物或用于该方法中的任何非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸，优选ω-3脂肪酸一般优选来自天然来源例如植物性油或动物油。包含不饱和脂肪酸(通常作为脂肪酸的酯存在)的油是本领域中熟知的。适合的植物性油包括菜籽油、玉米油、豆油、向日葵油、植物油和橄榄油。然而，优选地，不饱和脂肪酸的天然来源是动物油例如动物脂油(tallow oil)。

然而，高度优选地，不饱和脂肪酸的来源是海产的油，例如鱼油或磷虾油。用于本发明的粗制海产的油可以源自任何海生来源，例如鱼，尤其是海水鱼，例如，金枪鱼、沙丁鱼、鲑鱼、鲭鱼、鲱鱼、鳟鱼、大比目鱼、鳕鱼、黑线鳕、鲶鱼、鳎鱼等。优选使用多油的鱼。然而，理想地，所述粗制海产的油源自海洋哺乳动物例如海豹、海象或海狮，优选海豹或源自磷虾。已经发现海豹油尤其富含ω-3脂肪酸化合物，例如大约20-25wt％，并且因此形成用来形成本发明的粗制组合物的理想的起始材料。海豹油可以从各种商业源获得。

所述不饱和脂肪酸包含一个或多个双键。优选地，它是多不饱和的。实施本发明所用的粗制组合物可以包含一种这样的非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或这样的不饱和脂肪酸的混合物。优选地，它包含不饱和脂肪酸的混合物，因此该方法的产物是脂肪酸盐的混合物。应理解该粗制组合物也可能包含饱和脂肪酸，因为它们也存在于天然存在的不饱和脂肪酸源物质中。

优选地，所述非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸是ω-3脂肪酸，其中与羧酸官能团相距最远的双键位于从碳链的末端(ω)数第三键处。脂肪酸还可以是ω-6脂肪酸，其中与羧酸官能团相距最远的双键位于从碳链的末端(ω)数第六键处。用于本发明的粗制组合物，例如粗制海产的油很可能包含多种ω-3和ω-6脂肪酸。本发明因此涵盖其中制备水溶性ω-3不饱和脂肪酸盐的混合物的方法。

粗制的油中ω-3脂肪酸或其衍生物的总浓度根据所述的天然源而改变，但是例如，在海洋鱼中，ω-3化合物的量大致是25wt％。

如上所述，在天然存在的源物质中脂肪酸通常作为游离酸的衍生物存在。所谓的不饱和脂肪酸的衍生物，例如ω-3或ω-6脂肪酸的衍生物是指其盐、酰胺或酯或其中COOH基团以其会在处理(例如水解)后恢复到COOH基团的方式被官能化的任何其它化合物。然而，通常粗制的油中的脂肪酸化合物呈酯，尤其是甘油三酯的形式，即，所述脂肪酸衍生物是甘油三酯。

能形成所述粗制组合物一部分的不饱和脂肪酸可以是通式(I)所表示的化合物：

CH₃(CH₂)_n-(CH＝CH-CH₂)_m-(CH₂)_S-COOH    (I)

其中n、m和s是例如1～10的整数。下标n优选是1。下标m优选是2～8。下标s优选是1～6。理想地，碳链是线性的，但是具有例如甲基或乙基的烷基侧链骨架也在本发明的范围之内。(对于该通式，DHA，为n＝1、m＝6且s＝1，对于EPA，为n＝1、m＝5且s＝1。在ALA中，为n＝4、m＝2且s＝6)。

可以转化成本发明的氨基醇盐的用于治疗或预防疾病的ω-3脂肪酸优选是碳骨架中包含至少18个碳原子的那些脂肪酸。较低级链脂肪酸(骨架中含17个碳原子或更少的那些)似乎显示更少的有用的治疗效果，但是可以用于如鱼或动物饲料的应用中。因此，优选的不饱和脂肪酸是具有以下通式(I′)的那些不饱和脂肪酸：

CH₃CH₂CH＝CH-R-COOH    (I′)

其中R是C₁₃₊烯基(例如C_13-25)，该烯基可选地可包含或不包含1个或更多个双键，优选非共轭双键。理想地，R基团是线性的，但是具有例如甲基或乙基的烷基侧链的骨架也在本发明的范围之内。链中碳原子的总数优选是16～22。此外，R的碳原子数优选是13、15、17、19等，即链中碳原子的数目优选是偶数。虽然应当理解，通过本发明方法制备的富含ω-3的组合物将很可能包含各种不同的ω-3类化合物，但是通式(I)的高度优选的化合物是C₁₈、C₂₀和C₂₂化合物，ALA、DHA和EPA是尤其优选的，(即其中R包含13、15或17个碳原子)。

在一个高度优选的实施方案中，所述脂肪酸包含DHA和EPA混合物，即在所要求保护的方法结束时形成的盐包括DHA和EPA盐的混合物。这些盐的比例(EPA/DHA)可以是30∶70～70∶30，优选40∶60～60∶40。

粗制组合物还可以包含ω-6脂肪酸。适合于制备本发明所需水溶性盐的优选的ω-6脂肪酸是具有以下通式(II)的那些ω-6脂肪酸：

CH₃CH₂CH₂CH₂CH₂CH＝CH-R”-COOH    (II)

其中R”是包含或不包含1个或更多个双键的C₅₊烯基(例如C_10-22)。理想地，R”基团是线性的，但是携带烷基侧链例如甲基或乙基的骨架也在本发明的范围之内。

R”中的碳原子数目优选是10、12、14、16等，即链中的碳原子数目优选是偶数。在一个优选的实施方案中，ω-6脂肪酸是亚油酸或共轭亚油酸。

同时应当理解，通过本发明方法制备的组合物很可能将包含各种不同的ω3和ω6类化合物，通式(II)的高度优选的化合物是C₁₈、C₂₀和C₂₂化合物。

在本发明方法结束时ω-3与ω-6的重量比可以约等于1∶1～1∶3。

优选地，通过本发明方法形成的盐将在该分子的脂肪酸部分具有至少10个碳原子，例如至少12个碳原子，例如至少14个碳原子，即脂肪酸必须包含至少10个碳原子。

理想地，通式(I)、(I′)或(II)的化合物将是多不饱和的，例如包含2～10个双键，尤其是4～7个双键。优选地，双键彼此不共轭且不与羰基官能团共轭。

优选地，至少一个，例如2或3个，优选全部双键处于顺式构型。

粗制油包含具有不同碳链长度和不同不饱和程度的各种脂肪酸或其衍生物(例如其酯，尤其是甘油三酯)。当然，不是所有这些脂肪酸都会是ω-3不饱和脂肪酸，一些会是ω-6不饱和脂肪酸，一些可以是饱和油。因此显而易见，在本发明方法进行期间制造的水溶性组合物不是必需由ω-3盐构成。然而，优选存在水溶性ω-3盐。优选地，相对于所述粗制油，最终组合物中ω-3化合物的浓度显著更高。因此重要的是最终组合物中ω-3的量通过形成水溶性盐且同时通过水溶液萃取而得到富集。通过除去不希望的杂质而富集，留下较高浓度的ω-3材料。

粗制组合物可以包含极性溶剂，例如非水性溶剂例如乙醇或DMSO，或更优选包含非极性溶剂例如己烷或甲苯。然而，优选地，水是形成盐期间存在的唯一极性溶剂。

本发明的方法可以通过使存在于粗制组合物中的不饱和脂肪酸或盐形成水溶性盐氨基醇盐来进行。氨基醇盐可以包含单个氨基(单氨基化合物)或多个氨基(多氨基化合物)。氨基醇化合物还包含羟基官能团(即醇)，优选多个羟基。氨基醇化合物因此可以包含一个或多个氨基和一个或多个羟基。高度优选的氨基醇化合物包含多个羟基与一个氨基或多个羟基与多个氨基。本文所使用的术语多氨基醇表示包含多个氨基和至少一个(优选多个)羟基的化合物。

适合的氨基醇化合物可以具有1-20个氨基，例如一个氨基或5-15个氨基。适合的氨基醇化合物可以具有1-100个羟基，例如3-50个羟基，例如5-15个羟基。氨基可以是伯、仲或叔氨基，然而仲氨基或尤其是伯氨基是优选的。

因此允许形成本发明水溶性盐的所需的氨基醇化合物优选是以下通式的羟基化胺：

((HO(R′)_0/1)_n)R₁NHR₂)_m    (III)

其中n是3-6的整数，R′是甲基，R₁是C_1-20烯基，R₂是H或C_1-6烷基侧链，优选甲基，m是1～20的整数。

在n＝3，存在R′并且是甲基，R₁是甲基，R₂＝H的情况下，该羟胺是三-(羟甲基)-甲胺(Tris)。在n＝5，R′不存在，R₁是直链六碳链，R₂是Me，m＝1的情况下，该羟胺是葡甲胺。

使用多氨基醇化合物形成脂肪酸的多氨基醇盐。多氨基化合物是包含两个或更多个可用于与脂肪酸的羧基形成铵盐的氨基的那些化合物。理想地，采用的多氨基化合物将是多氨基糖。此类多氨基糖优选将包含多个糖单元以及多个羟基以有助于所形成的盐的溶解性。

适合的多氨基糖可以衍生自几丁质，尤其是壳聚糖。适合的多氨基糖可以具有以下通式：

(C₆H₁₄NO₅)_P    (IV)

其中p是2或更大的整数，例如5-15。

尤其优选的多氨基糖是可以从FMC或Novamatrix获得的那些。壳聚糖通常以乙酸盐形式提供，即胺基被保护。可以使用已知的离子交换法除去乙酸盐以释放壳聚糖的游离多氨基形式。

当使用单氨基醇化合物时，它可以是葡甲胺、Tris或葡糖胺。反应介质的控制(例如通过改变其温度、pH值或离子强度)可以提高盐的溶解性。

还可以使用多氨基醇盐和单氨基醇盐的混合物，例如两种多氨基盐、两种单氨基盐或多氨基和单氨基盐的混合物。

氨基醇化合物与存在于粗制组合物中的不饱和脂肪酸或盐形成盐并且变得可溶于水。所形成的水溶性不饱和脂肪酸盐优选具有至少10g/L水的溶解度。优选地，形成的盐的溶解度是至少15g/L水。发明人已经惊奇地发现通过本发明方法制备的脂肪酸盐的溶解性事实上非常高。本发明的盐的溶解度可以高达40g/L，更优选100g/L，尤其是250g/L。发明人甚至已经发现溶解度大于500g/L的材料。

此外，已经确定，本发明的水溶性脂肪酸盐的混合物也可以具有类似的溶解度水平。

粗制组合物中的不饱和脂肪酸或盐是微水溶性或非水溶性的。非水溶性材料优选具有小于0.1g/L水的溶解度。微水溶性材料优选具有小于1g/L水，尤其是小于0.5g/L的溶解度。

因此，此前的非水溶性不饱和脂肪酸/盐或仅微水溶性脂肪酸/盐在氨基醇盐形成后变得可溶于水。

实际的盐形成反应本身仅要求脂肪酸或盐，优选酸在水存在下与氨基醇化合物接触。可以理解，虽然同时引入氨基醇化合物和水(作为水溶液)是最方便的，但是技术人员可以将它们分开添加。如果水已经存在于粗制组合物中，则可以只需要添加氨基醇化合物。

如果采用单氨基醇化合物，则所使用的量可以是化学计量的或可以过量使用。因为多氨基醇化合物包含多个氨基，所以当然存在与多氨基多键接的可能性。因此，虽然还可以使用过量的多氨基醇化合物，但是预期多氨基醇化合物与脂肪酸的比例将是大约1∶1-1∶30，例如1∶2-1∶10，尤其是1∶3-1∶6。

如果需要的话，盐形成步骤可以加热或加压，但是这是不必要的，因为盐容易地形成。盐形成步骤还可以包括搅拌、超声震荡或更强烈的混合法例如离心。然而，优选最初调节反应的pH值以确保脂肪酸呈它们的酸形式(而不是盐形式COO^-)以确保与氨基醇化合物的盐可以更容易地形成。

一旦水溶性脂肪酸盐已经形成并萃取到水相中，就可以将它与有机相离析。然后水相中的水溶性脂肪酸盐可以被处置，然而取决于技术人员。它们可以如下面进一步论述的那样离析或可以在水相酸化并分离形成的油后再次获得游离酸形式。然而，所得的游离脂肪酸比起始材料中的更纯。因此，然后可以按任何方式处置经纯化的脂肪酸盐例如以形成酯(例如甘油酯)或另一种盐(例如葡甲胺盐)、磷脂、酰胺、氨基甲酸酯或它们可以与聚合物连接。

不饱和脂肪酸的某些水溶性盐是新的并且它们形成本发明的又一个方面。

从另一个方面考虑，本发明提供不饱和脂肪酸(优选ω-3或ω-6脂肪酸)的水溶性三-(羟甲基)-甲胺盐或多氨基醇盐。

从另一个方面考虑，本发明提供不饱和脂肪酸(优选ω-3或ω-6脂肪酸)的水溶性氨基醇盐的混合物。

从另一个方面考虑，本发明提供组合物，例如药物组合物，其包含不饱和脂肪酸(优选ω-3或ω-6脂肪酸)的水溶性三-(羟甲基)-甲胺盐或多氨基醇盐或上述盐的混合物。

从另一个方面考虑，本发明提供用于医药或用作营养增补剂的不饱和脂肪酸(优选ω-3或ω-6脂肪酸)的水溶性三-(羟甲基)-甲胺盐或多氨基醇盐，或上述盐的混合物。

从另一个方面考虑，本发明提供不饱和脂肪酸(优选ω-3或ω-6脂肪酸)的水溶性三-(羟甲基)-甲胺盐或多氨基醇盐，或上述盐的混合物在制造用于医药或用作营养增补剂的药剂中的用途。

因此，除某些新的个体盐之外，本发明还提供不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐的混合物。所谓的混合物在此是指存在至少两种不同的化合物并且应当理解存在两种可能的变量，即盐组分的性质和不饱和脂肪酸的性质。在此限定的混合物因此涵盖例如，DHA的葡甲胺盐和EPA的葡甲胺盐的混合物。该混合物还涵盖相同酸的不同盐，例如DHA的葡甲胺盐和DHA的壳聚糖盐的混合物。混合物还涵盖不同酸的不同盐，例如DHA的葡甲胺盐和EPA的壳聚糖盐。

优选地，所述混合物包含不同的不饱和脂肪酸但是相同的成盐材料。

本发明涵盖无论如何制备的不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐的混合物。

包含呈酸形式(COOH)或盐形式的脂肪酸的粗制组合物优选源自含天然不饱和脂肪酸衍生物的油(在此称作粗制油)的水解。如上所述和如下面更详细描述，不饱和脂肪酸通常以甘油三酯形式存在于自然环境中，所以为了将它们释放成游离酸形式要求将甘油酯的酯键水解。应当理解，水解的油包含杂质并因此可以形成包含本发明需要的所述酸的粗制组合物。

包含天然存在的不饱和脂肪酸的材料的水解可以如下所述进行并且可以包括用水洗涤水解材料。该方法形成本发明的另一个方面。

因此，从另一个方面考虑，本发明提供包含水溶性不饱和脂肪酸盐的组合物的制备方法，包括：

(I)将包含至少一种不饱和脂肪酸衍生物的粗制油，例如天然的海洋来源的油(海产的油)水解，并形成包含至少一种脂肪酸的油相；

(II)可选地用水性洗剂洗涤所得的油相；

(III)在水存在下将至少一种氨基醇化合物添加到步骤(I)的产物或，如果进行步骤(II)的话，添加到步骤(II)的产物中以与所述至少一种不饱和脂肪酸形成水溶性盐，从而将所述盐萃取到水相中；和

(IV)离析并可选地干燥该水相。

因此，在上述方法的第一阶段中，将天然油(优选海洋来源的油)水解以将其中的脂肪酸衍生物(通常甘油三酯化合物)转化成羧基形式COO^-。虽然这种水解反应可以在酸中进行，但是此类条件倾向于使存在于该脂肪酸中的双键异构化并因此不是优选的。作为替代，优选在碱性条件中进行水解。这样的一种反应是化学中熟知的皂化反应。

因此，在可用于本发明的典型皂化反应中，氢氧化物例如KOH、LiOH或NaOH与存在于粗制油中的甘油三酯反应而获得不饱和脂肪酸盐(通常Na、Li或K盐)和甘油。皂化可以在本领域中熟知的条件下，例如在高温下进行。众所周知，还可以采用高压和蒸汽。

优选的皂化条件包括与碱水溶液一起使用极性溶剂例如醇。在这样的溶剂混合物存在下皂化之后，所形成的游离脂肪酸盐可以分配到水相中，因为它们在醇例如乙醇中显示溶解性。这允许使用非极性溶剂洗涤，例如采用己烷将未皂化的材料冲洗掉。然后可以将水相酸化以形成不再可溶于反应介质的游离酸。

在水解反应期间释放的较长链脂肪酸因此形成油相并因此与甘油和水性反应介质分离。较短链脂肪酸，例如C₁₀或更短的那些在水相中是水溶性的，例如，钾或钠盐并因此与非水溶性较长链组分分离。

因为皂化反应可以包括大量水性材料和相应少量的油相材料，所以此时可以使油相更容易处理，例如通过使它具有更大体积，通过添加无毒有机溶剂(通常称为″绿色化学溶剂″)以将皂化反应的油相溶解。已经发现这一步骤的加入改进了纯化过程。适合的无毒的溶剂是能够溶解油(即基本上非极性的溶剂)但不危险的那些溶剂。此类溶剂包括烷烃例如戊烷、己烷，醚，乙酸酯，酮，二甲苯和甲苯。己烷和甲苯是最优选的。

因此，在一个高度优选的实施方案中，上述方法的步骤(I)包括：

(I)在水和极性有机溶剂如醇存在下将包含至少一种不饱和脂肪酸衍生物的粗制油水解；

用非极性溶剂例如烷烃洗涤该水解的粗制油并保留水相；

将该水相酸化以形成油相；和

优选将非极性溶剂添加到所述油相中。

如果需要的话，然后可以通过常规技术将油相和水相分离。

如果在分离出水相之后，如下面详细描述那样用水溶液洗涤油相，则是优选的。然而，这不是必需的。如随后段落中更详细论述的那样，洗涤步骤帮助从水解的粗制油中除去某些水溶性组分，从而使存在的不饱和脂肪酸的量富集。然而，因为在水溶液中进行水解反应，所有在水解期间或之后油相与水相的分离本身确实有效地充当洗涤步骤，因为水溶性组分保留在水相中。然而，为了使水溶性组分的除去最大化，可以采用另一个专门的洗涤步骤。

可以使用纯水进行另一个洗涤步骤或可以使用碱性水溶液，例如稀NaOH进行另一个洗涤步骤。在这一洗涤阶段期间(或在水解期间，当油相形成时)，较短链脂肪酸化合物被除去(例如10个碳原子或更少的那些)，因为它们作为钾或钠盐往往是相当水溶性的，而较长链脂肪酸(例如含18个碳原子或更多的那些)不是那样。

然而，显而易见的是，溶解性依赖于链长、离子强度、pH值、温度等，并且虽然呈COO^-形式的非常短链脂肪酸将容易地溶解在水或稀NaOH溶液中并因此在水性洗剂中除去，但是中链脂肪酸(例如C₁₄-C₁₆)可能是仅部分可溶的。

水性洗涤还从水解的粗制油中除去重金属杂质，因为它们往往是水溶性的。因为重金属污染物与疾病例如癌症有关，所以除去这些化合物是重要的。也可以适合的络合剂例如EDTA或DTPA除去重金属。

用水洗涤通常采用过滤进行，其中分液漏斗或连续萃取用来离析所需的未溶解的油相残留物。必要时，可以重复地进行洗涤步骤。

在洗涤阶段之后留下的残留物主要包含较长链分子(例如C₁₈或以上)，通常呈盐形式(例如呈钠盐形式)。因为除去了相当大量较短链脂肪酸，并且大部分高度合乎需要的ω-3脂肪酸具有至少18个碳原子，所以在这一阶段之后产生的残留物根据定义富含合乎需要的不饱和脂肪酸化合物例如ω-3化合物。

是较长链ω-3分子提供有利的治疗效果，并理想地需要存在于最终ω-3富集的组合物中。然而，在洗涤之后的油质残留物不呈适合于给药的形式，因为这些较长链脂肪酸化合物不是水溶性的。包含呈酸形式或不溶性盐形式的ω-3化合物的药剂因此具有有限的益处，因为该药剂中的大量ω-3不会溶于体液并且不会被吸收。如果它们不被吸收，则它们不能提供治疗的益处。

在皂化和洗涤之后形成的残留物还可以包含PCB、阻燃剂和二恶英，因为它们不是水溶性的。

发明人已经发现，通过将较长链脂肪酸形成氨基醇盐(尤其是多氨基醇盐)，所得的盐是水溶性的，并且因此可以容易地配制到有用的药剂中或配制为营养剂或药物。此外，可以把水溶性盐萃取在水相中，从而与存在于粗制油中的非水溶性杂质离析。

这种技术还使脂肪酸材料与可能存在于粗制组合物中的胆固醇分离或与任何其它亲油性材料例如邻苯二甲酸酯分离。已知高胆固醇水平与各种疾病有关，所以从脂肪酸中除去胆固醇也有重要价值。如同上述的各种其它毒物一样，胆固醇是水不溶性的，这意味着可以在盐形成步骤期间使它与脂肪酸分离。

因为至此(即刚好在盐形成之前)形成的油相可以包含呈盐形式的脂肪酸，如果在进行另一个盐形成步骤之前，使较长链脂肪酸盐返回到它们的酸形式，则是优选的。这可以容易地在稀酸中实现。呈酸形式的脂肪酸事实上是更疏水性的，所以此时同样将容易形成油相，从而允许在盐形成过程期间形成的任何水溶性盐简单地在水相中除去。

因此，可以使用酸性水相将在油相中的任何不饱和脂肪酸盐的羧酸基转变成COOH形式。允许脂肪酸与氨基醇化合物形成氨基盐是优选的。如果需要的话，这一步骤后面可以是用无毒溶剂的有机物洗涤。在这一阶段形成的组合物是用于本发明方法的优选的粗制组合物。

盐形成反应本身在上面已经进行了描述并且仅要求脂肪酸或盐在水存在下与氨基醇化合物接触。优选地，将氨基醇化合物添加在水溶液中，但是应当理解在此要求的是在水相存在下氨基醇化合物与脂肪酸一起存在，在该水相中，可以萃取形成的水溶性盐。

随着氨基醇盐形成，它们被萃取到反应介质的水相中，而非水溶性杂质留在油相中。然后可以通过标准相分离技术离析水相以提供不含非水溶性杂质的组合物。特别地，通常的毒物例如PCB、阻燃剂和二恶英是非水溶性的，所以不会被萃取到水相中。胆固醇也被除去。这形成本发明的另一个且重要的特征，其中不饱和脂肪酸盐用于消耗。

因此，从另一个方面考虑，本发明提供组合物，其包含不饱和脂肪酸(尤其是ω-3脂肪酸)的水溶性氨基醇盐，不含二恶英、阻燃剂、胆固醇和/或PCB。

粗制海产的油中PCB和二恶英的含量可以是数百毫微克/克，并且甚至经加工的商业海产的油具有0.16-30毫微克/千克的二恶英或PCB含量(例如参见Saldeen，P.等人的Obstetrical and Gynecological Survey 59(2004)722-730)。在本发明方法进行之后，优选其含量检测不到。

上述整个方法形成本发明的又一个方面。因此，从另一个方面考虑，本发明提供包含不饱和脂肪酸盐的组合物的制备方法，包括：

(I)将包含至少一种不饱和脂肪酸衍生物的粗制油，例如海产的油水解并形成包含脂肪酸的油相；

(II)可选地将所形成的油相溶解在无毒溶剂例如己烷或甲苯中；

(III)可选地用水性洗剂洗涤该油相，例如重复地洗涤；

(IV)可选地，添加酸性水相以确保存在的任何脂肪酸化合物呈COOH形式，并将水相分离出来；

(V)在水存在下将至少一种氨基醇化合物添加到前一步骤的油相中以与所述至少一种不饱和脂肪酸或盐形成水溶性氨基醇盐，从而将所述盐萃取到水相中；和

(VI)离析并可选地干燥该水相。

在一个优选的实施方案中，不饱和脂肪酸是ω-3脂肪酸。在另一个优选的实施方案中，至少一种脂肪酸包含ω-3和ω-6脂肪酸的混合物。

在另一个可选的步骤中，可以将饱和脂肪酸与目标不饱和脂肪酸材料分离。如本说明书中举例说明的那样，可以使用脲络合从不饱和脂肪酸，尤其是具有顺式构型键的那些酸中除去饱和脂肪酸。在溶剂如乙醇中，脲往往在直链脂肪酸链周围形成线性隧道并与它们络合，从而使得它们不溶于乙醇，而不饱和脂肪酸保留在溶液中。然后可以通过过滤除去固体材料，即饱和脂肪酸/脲络合物。

本发明的方法因此可以包括其中将油相溶于例如乙醇的醇类溶剂，并添加脲的步骤。然后如果必要的话可以将该溶液冷却并且分离形成的结晶产物。这是不希望的饱和脂肪酸组分。然后可以从剩余的残留物和还要用于另一个工艺步骤的油相中除去乙醇，或许在将该油相再溶于无毒有机溶剂中以给予它大体积之后。

该脲络合步骤可以适宜地刚好在盐形成之前，例如在中和步骤(IV)之后进行。

还应了解的是，通过脲络合除去的饱和脂肪酸本身可以具有有用的最终应用，例如可用于动物饲料、化妆品等。形成脲络合物的饱和脂肪酸可以使用已知的方法容易地回收，例如通过脲的水萃取回收以留下可能有价值的产物。同时，脲络合是用这种方式离析饱和脂肪酸的已知反应，与上述皂化方法结合形成本发明的又一个方面。

(I)将包含至少一种不饱和脂肪酸衍生物和至少一种饱和脂肪酸的粗制油，例如海产的油水解并形成包含该脂肪酸的油相；

(II)可选地将所形成的油相溶解在无毒溶剂例如己烷或甲苯中；

(III)可选地用水性洗剂洗涤该油相，例如重复地洗涤；

(IV)可选地，添加酸性水相以确保存在的任何脂肪酸化合物呈COOH形式，并将水相分离出来；

(V)使该油相与脲在醇类溶剂中接触并分离形成的结晶产物；

(VI)回收在该结晶产物中的饱和脂肪酸。

上述的不饱和脂肪酸离析方法是新的，因此允许盐和组合物形成，例如鉴于它们的杂质分布，该盐和组合物也是新的。从另一个方面考虑，本发明提供通过上文描述的方法制备的水溶性不饱和脂肪酸盐。

从另一个方面考虑，本发明提供包含通过上文描述的方法制备的水溶性盐的组合物，例如药物组合物。

从另一个方面考虑，本发明提供通过上文描述的方法制备的用于医药或用作营养增补剂的水溶性盐。

发明人已经发现，通过将脂肪酸形成氨基醇和/或多氨基醇盐(尤其是多氨基醇盐)，所得的盐是水溶性的，并且因此可以容易地配制到有用的药剂中或配制为营养剂或药物。此外，可以将它们萃取在水相中，从而与存在于海产的油中的非水溶性的毒物离析。

因为ω-3脂肪酸的氨基醇盐是水溶性的，所以它们是更加生物可利用的，这是指包含此种化合物的药剂可以含有比当前市售的那些更少的活性剂，当前市售的那些中的ω-3化合物呈较低的生物可利用的形式。从文献，例如Beckerman等人的Arzneimittelforschung 40(1990)700-704获知，游离脂肪酸(即它们在胃中的酸性条件下将呈现的形式)的生物可利用性导致比呈甘油三酯形式的原始海产的油最大高50％的血浆水平。与目前工艺水平的海产的油相比，这是本发明中的所得粉末的又一个优点。因此，采用本发明ω-3的剂量可以显著地更低，原因在于更高的生物可利用性。

不饱和脂肪酸材料遇到的另一个问题是其中的双键氧化的可能性。如果自由地暴露于空气中或在较高的温度下储存或配制它们，可能存在使人不愉快的味道和气味，因为氧化可能在空气中发生，这是由于它们的分子中的大量碳-碳双键。结果可能是感观特征方面的恶化和环氧基和短链醛或羧酸的可能形成。

为了避免这种氧化过程，如果将不饱和水溶性脂肪酸盐与环糊精，例如α-、β-和γ-环糊精或羟丙基-β-环糊精，尤其是β-环糊精混合，则是优选的。

因此，可以将脂肪酸的氨基醇盐的最终水溶液与环糊精，例如α-、β-和γ-环糊精或羟丙基-β-环糊精混合，以形成多相混合物。可以在0-100℃的温度下将它搅拌1-24小时以形成该盐和环糊精间的络合物。然后可以通过下述技术，例如溶剂的真空蒸发，冻干或喷雾干燥将它离析。所获得的产物是水溶性的，浅黄色或白色的，松脆的并且几乎不具有鱼腥味道或气味。

所添加的环糊精的量可以改变，但是脂肪酸盐与环糊精的适合的比例以重量计是2∶1-1∶2。

因此，从另一个方面考虑，本发明提供包含不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐和至少一种环糊精的组合物。该组合物可以是这些材料的络合物。

可以另外地或备选地将一种或多种生理可容许的抗氧化剂添加到包含该所需氨基醇盐的水相中以防止它们降解。可以在水相的离析之前或，更优选，离析之后添加它们。适合用于本发明的抗氧化剂同时包括水溶性和油溶性化合物和它们的组合，然而，水溶性抗氧化剂例如抗坏血酸(尤其是L-抗坏血酸)和柠檬酸通常是优选的。可以采用的油溶性抗氧化剂包括α-生育酚(维生素E)。抗氧化剂的所需量可以由本领域技术人员容易地确定，但是相对于脂肪酸盐，可以是约为0.5-10wt％。

包含至少一种抗氧化剂的组合物形成本发明的另一个方面。因此，从另一个方面考虑，本发明提供包含不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐(优选多氨基醇盐)和至少一种生理可容许的抗氧化剂的组合物。更优选，本发明提供这样的组合物，它们还基本上不含二恶英、阻燃剂或PCB。

氨基醇盐，尤其是多氨基醇盐的另一个优点是认为它们防止ω-3或ω-6材料中的顺式双键异构化。因为材料可以作为粉末离析，所以顺反异构化比在液体油中遇到的问题少。曝露在光下可能引起油中的双键异构化，但是在粉末中这样的可能性低得多。

因此，本发明最显著的好处是脂肪酸盐可以以粉末形式离析，最优选以结晶形式离析，这使得与油相比，它们的处理和配制更简单。粉末例如可以容易地制成片剂，该片剂优于必须装有油并且通常用于目前的市场的胶囊。

为了获得呈粉末形式的盐，仅需要蒸发水相，然而如果采用冻干或喷雾干燥，则是优选的。当存在盐的混合物时，盐的粉末形式的形成尤其是重要的，因为通常，盐混合物不能作为粉末被分离。

因此，从另一个方面考虑，本发明提供不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐(优选不同脂肪酸的相同盐)的粉末，优选结晶混合物的制备方法，包括：将不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐的混合物的水溶液喷雾干燥或冻干。

喷雾干燥技术在″Spray Drying Handbook″，K.Masters，第五版，LongmanScientific Technical UK，1991中进行了公开，该文献的公开内容(至少对于其喷雾干燥法的教导)在此引入供参考。喷雾干燥用来产生脂肪酸基产物的粉末的用途的实例可以参见现有技术，例如参见US5106639。可以将本发明中所述的盐的水溶液加热到20-50℃的温度并在喷雾干燥器中使用50-180℃的鼓风空气干燥。

可以通过常规方法进行冻干。然而，当进行这一程序时，加入一种或多种具有防冷冻效果的试剂可能是有利的。可以使用任何生理可容许的防冻剂并且此类试剂的实例是本领域中熟知的。它们包括，例如，多元醇例如甘油；氨基酸例如甘氨酸；碳水化合物，例如糖类例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖、葡萄糖、乳糖或多糖例如右旋糖苷。生理容许性良好的糖，例如蔗糖是尤其优选的。防冻剂的所需量可以容易地由本领域技术人员确定，但是相对于脂肪酸盐，可以是约为0.5-10wt％。

在一种或多种防冷冻剂存在下形成的冻干产物形成本发明的另一个方面。从另一个方面考虑，本发明因此提供包含不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐(例如多氨基醇盐)和至少一种生理可容许的防冷冻剂的组合物(优选冻干组合物)。更优选，本发明提供此类组合物，其还包括至少一种生理可容许的抗氧化剂、环糊精和/或其还基本上不含二恶英、阻燃剂或PCB。

在本发明的另一个实施方案中，干燥步骤可以通过冻干或喷雾干燥进行。

在一个高度优选的实施方案中，因此，本发明的方法至少包括以下步骤：

(A)将包含至少一种不饱和脂肪酸(优选ω-3脂肪酸衍生物)的粗制油，例如海产的油水解；

(B)添加酸性水相以将所述至少一种ω-3脂肪酸转化成其COOH形式，并将水相分离出来；

(C)添加包含至少一种氨基醇化合物的水相以与所述至少一种不饱和脂肪酸，优选ω-3脂肪酸形成水溶性盐，从而将所述水溶性盐萃取到水相中。

通过本发明方法制备的不饱和脂肪酸的盐，尤其是ω-3和ω-6盐可以直接地用于健康增补剂。可以使用为药物化学工作者熟知的常规技术将它们常规地配制到药剂中。因此，可以采用熟知的受体(recipient)或常规添加剂例如抗氧化剂、防腐剂、色素、调味剂等配制该化合物。

本发明的化合物可以配制成任何适宜的剂型例如片剂、糖衣片剂、丸剂、粉末、胶囊、乳液、乳膏、球剂(pessiaries)、栓剂等。给药模式可以是任何已知的模式，例如口服、经鼻给药、透粘膜给药、非肠道给药、局部给药、皮下给药等。口服是优选的。因为本发明的方法以高产率提供高纯度ω-3化合物，所以有可能以″一天一次″组合物提供ω-3增补剂。此种组合物应该包含100～300mg ω-3物质。

在一个优选的实施方案中，采用磷脂和/或单糖配制富集的ω-3的组合物以增加水溶性和片剂质量。

使用本发明方法制备的ω-3盐可以用于治疗和/或预防其中ω-3已经暗示有帮助的任何身体状况。这些状况包括自身免疫病症、炎症、中风、高血压、皮肤病症、癌症、大脑和视网膜功能、神经系统紊乱、婴儿生长发育并且尤其是心脏健康。ω-3可以降低三酰基甘油水平，可以降低低密度脂蛋白胆固醇水平，降低心律不齐的发生率，降低动脉粥样硬化/血栓。因此，本发明的ω-3在制造用于治疗或预防任何这些状况的药剂中的用途形成本发明的另一个方面。

本发明已经在不饱和脂肪酸化合物方面进行了描述，因为已知它们提供有用的治疗利益。然而可以认识到，本文描述的技术也可以用来以完全相同的原理离析饱和脂肪酸化合物。这些材料用于动物饲料，所以获得呈水溶性形式和粉末形式的这些材料的能力也是非常宝贵的。

因此，从另一个方面考虑，本发明提供由包含至少一种非水溶性或微水溶性饱和脂肪酸或其盐的粗制组合物制备水溶性饱和脂肪酸盐的方法，所述方法包括：

在水存在下向所述粗制组合物中添加至少一种氨基醇化合物以形成所述酸或盐的水溶性氨基醇盐；

分离水相；和

可选地从所述水相中离析所述盐。

从另一个方面考虑，本发明提供包含水溶性饱和脂肪酸盐的组合物的制备方法，包括：

(I)将包含至少一种饱和脂肪酸衍生物的粗制油，例如粗制海产的油水解并形成包含该脂肪酸的油相；

(II)可选地用水性洗剂洗涤所得的油相；

(III)在水存在下将至少一种氨基醇化合物添加到步骤(I)的产物或，如果进行步骤(II)的话，添加到步骤(II)的产物中以与所述至少一种饱和脂肪酸形成水溶性盐，从而将所述盐萃取到水相中；和

(IV)离析并可选地干燥该水相。

从另一个方面考虑，本发明提供饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐，所述饱和脂肪酸优选含至少10个碳原子，尤其是至少12个碳原子。

从另一个方面考虑，本发明提供包含饱和脂肪酸的氨基醇盐的组合物，例如药物组合物。

从另一个方面考虑，本发明提供用于医药或用作营养增补剂的饱和脂肪酸的氨基醇盐。

上面描述的优选的盐和方法特征同样适用于分离饱和脂肪酸，但是脲络合步骤显然是不合乎需要的。可以用这种方式形成的优选的饱和脂肪酸盐包括C₁₀或更长，例如C₁₂或更长，优选C₁₄或更长，尤其是C₁₆或更长的碳骨架那些脂肪酸盐。碳骨架优选是线性的。

现将参照以下非限制性实施例描述本发明。

实施例1

含壳聚糖的DHA盐(5∶1)的制备

让壳聚糖乙酸盐(100mg；17μmol)在去离子水(4mL)中的溶液通过

A-26(OH)树脂(1g)的柱。用去离子水(10mL)冲洗该树脂。将(全顺式)-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(28mg；85μmol)在96％乙醇(0.5mL)中的溶液添加到合并的洗出液中，获得混浊溶液。在冻干之后，获得53mg乳白色固体，其当被加热到350℃时焦化而不熔融。将产物储存在冰箱中。

实施例2

含壳聚糖的DHA盐(20∶1)的制备

使用壳聚糖乙酸盐(100mg；17μmol)和(全顺式)-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(112mg；340μmol)重复前述程序。冻干获得131mg固体。

实施例3

片剂制备

通过将DHA盐(25mg)、微晶纤维素(Avicel)(140mg)和乳糖一水合物(135mg)的混合物直接压制制备含DHA盐(实施例1)的片剂。片剂重300mg。片剂直径7mm。

实施例4

DHA(顺式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸)的纯化

采用N-甲基葡糖胺(0.5g；2.6mmol)在水(5mL)中的溶液萃取(全顺式)-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(DHA)(100mg；0.30mmol)和2，4，5-三氯联苯(1.0mg；3.9mmol)在甲苯(10mL)中的溶液。将该黄色乳液离心大约12min。甲苯相的GLC分析表明仅存在三氯联苯。用1M HCl(5mL)酸化水相并用甲苯(1×0.5mL)萃取。萃取物的GLC分析表明它包含0.25％PCB，98.5％DHA和1.3％其它杂质。在重复盐形成过程并再离析游离脂肪酸之后，PCB化合物的含量变得过低而不能检测到。

实施例5

通过用葡甲胺萃取从海豹鲸脂油纯化游离脂肪酸

将KOH(5.75g)添加到海豹鲸脂油(seal blubber oil，SBO)(25g)和十溴代联苯醚(1.25g)在H₂O(11ml)和MeOH(66ml)中的混合物中。在氩气氛下将该混合物加热回流过夜，冷却到室温并用H₂O(50ml)稀释该皂化的混合物。将未皂化的物质萃取到正己烷(2×100ml)中并丢弃。用2M HCl将水层酸化到pH值2并将游离脂肪酸(FFA)萃取到正己烷(2×50ml)中。在无水Na₂SO₄上干燥有机层并在40℃下在真空中除去溶剂而留下为黄色油的FFA。

将脲(20g)添加到FFA(10g)溶于96％EtOH水溶液(100ml)的样品中。搅拌该混合物并加热直到透明。将该溶液保持在冰箱中一整夜。从液体过滤脲络合物。用等体积水稀释该滤液并用2M HCl酸化到pH值2。将正己烷(100ml)添加到该水性混合物中并搅拌1/2h。分离有机层并用10％葡甲胺水溶液(2×50ml)萃取。分离有机层并丢弃。用正己烷(2×50ml)洗涤该葡甲胺水溶液，然后用2M HCl酸化到pH值2。将该FFA萃取到正己烷(2×50ml)中，在无水Na₂SO₄上干燥并在真空中蒸发溶剂。FFA的GC分析表明它不含任何十溴代联苯醚。

实施例6

含有壳聚糖和添加的水溶性抗氧化剂的EPA盐的制备

在氩气氛下在室温下将壳聚糖粉末(低分子量)(2g)添加到顺式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸(EPA)(0.5g)在DMSO(5ml)和H₂O(10ml)中的搅拌溶液中。添加L-抗坏血酸(100mg)和柠檬酸(100mg)并搅拌该混合物2h，然后冷冻干燥一整夜而留下为黄色固体的产物。

实施例7

含有壳聚糖和添加的水溶性抗氧化剂的游离脂肪酸(FFA)盐的制备

在氩气氛下在室温下将壳聚糖粉末(低分子量)(2g)添加到FFA(通过从海豹鲸脂油中通过葡甲胺萃取FFA获得)(0.5g)在DMSO(5ml)和H₂O(10ml)中的搅拌溶液中。添加L-抗坏血酸(100mg)和柠檬酸(100mg)并搅拌该混合物2h，然后冷冻干燥一整夜而留下为黄色固体的产物。

实施例8

含有添加的水溶性抗氧化剂和α-生育酚的EPA壳聚糖盐的制备

在氩气氛下在室温下将壳聚糖粉末(低分子量)(2g)添加到EPA(0.5g)在DMSO(5ml)和H₂O(10ml)中的搅拌溶液中。添加L-抗坏血酸(100mg)、柠檬酸(100mg)和α-生育酚(100mg)并搅拌该混合物2h，然后冷冻干燥一整夜而留下为黄色固体的产物。

实施例9

带有添加的水溶性抗氧化剂和α-生育酚的热稳定化的EPA葡甲胺盐

采用10％葡甲胺水溶液(30ml)萃取在正己烷(10ml)中的EPA(1.0g)溶液。将该葡甲胺水溶液转移至锥形瓶中并添加L-抗坏血酸、柠檬酸和α-生育酚(各自50mg)并剧烈地搅拌。将该水性混合物分成3×10ml样品并转移至500ml圆底烧瓶。以如下步骤处理该样品：在冻干之前，a)不添加防冻剂；b)添加3.3g蔗糖；和c)添加6.6g蔗糖。将所得的混合物冷冻干燥一整夜而留下为结晶固体的产物。

实施例10

带有添加的水溶性抗氧化剂和α-生育酚的热稳定化的游离脂肪酸(FFA)葡甲胺盐

遵循实施例5概括的程序，将天然海豹油(得自GC Rieber Oils AS)水解以产生FFA。采用10％葡甲胺水溶液(30ml)萃取FFA(1.0g)在正己烷(10ml)中的样品。将该葡甲胺水溶液添加到L-抗坏血酸、柠檬酸和α-生育酚(各自50mg)中并剧烈地搅拌。将该水性混合物分成3×10ml的样品并转移至500ml圆底烧瓶。如下处理该样品：在冻干之前a)添加3.3g蔗糖；b)添加6.6g蔗糖；和c)添加9.9g蔗糖。将所得的混合物冷冻干燥一整夜而留下为结晶固体的产物。

实施例11

采用葡甲胺、三(羟甲基)氨基甲烷和NaOH萃取不同的脂肪酸

用1M NaOH水溶液(3×50ml)洗涤癸酸(1.0g)、月桂酸(1.0g)、肉豆蔻酸(1.0g)、棕榈酸(1.0g)、硬脂酸(1.0g)和花生酸(1.0g)在正己烷(200ml)中的混合物。采用2M HCl将该NaOH水溶液酸化到pH值2，并将FFA萃取到正己烷(2×100ml)中。正己烷萃取物的GLC分析表明NaOH可以用于萃取癸酸(C₁₀H₂₀O₂)，但不可用于萃取具有更长链长度的FFA。

重复该实验，但是分别用10％葡甲胺水溶液和10％三(羟甲基)氨基甲烷溶液洗涤有机层。用葡甲胺和(三(羟甲基)氨基甲烷)萃取显示所有的FFA从有机层萃取到水溶液中。

实施例12

热稳定化的FFA葡甲胺盐

将N-甲基葡糖胺(0.57g)添加到FFA(由实施例5获得)(0.5g)在H₂O(30ml)中的搅拌乳液中。将所得的葡甲胺水溶液转移至500ml圆底烧瓶中并冷冻干燥一整夜而留下为半结晶固体的产物。

实施例13

添加β-环糊精的热稳定化FFA葡甲胺盐

将N-甲基葡糖胺(3.0g)和β-环糊精(1.0g)添加到FFA(由实施例5获得)(0.5g)在H₂O(30ml)中的搅拌乳液中。将所得的葡甲胺水溶液转移至500ml圆底烧瓶中并冷冻干燥一整夜而留下为白色粉末的产物。

实施例14

添加β-环糊精和L-抗坏血酸的热稳定化FFA葡甲胺盐

将N-甲基葡糖胺(0.57g)和β-环糊精(0.5g)添加到FFA(由实施例5获得)(0.5g)在H₂O(30ml)中的搅拌乳液中。向所得的葡甲胺水溶液中添加L-抗坏血酸(50mg)，转移至500ml圆底烧瓶并冷冻干燥一整夜而留下为黄色粉末的产物。

实施例15

添加β-环糊精的热稳定化FFA tris盐

将三(羟甲基)氨基甲烷(0.35g)和β-环糊精(0.5g)添加到FFA(从实施例5获得)(0.5g)在H₂O(30ml)中的搅拌乳液中。将所得的tris水溶液转移至500ml圆底烧瓶中并冷冻干燥一整夜而留下为白色粉末的产物。

实施例16

在无水条件下制备的热稳定化FFA葡甲胺盐

在60℃下使FFA(从实施例5获得)(0.5g)和N-甲基葡糖胺(0.37g)在MeOH(40ml)中的混合物回流2h，冷却到室温并在真空中蒸发而留下为半结晶固体的FFA葡甲胺盐。

实施例17

FFA葡甲胺盐和添加β-环糊精的FFA tris盐的溶解度

FFA葡甲胺盐(得自实施例12)和FFA tris盐(得自实施例15)的溶解度通过将该盐添加到含H2O(1.0ml)的小瓶中来测定。FFA葡甲胺盐的溶解度测定为大致650mg/ml。FFA tris盐的溶解度测定为大致50mg/ml。

实施例18

FFA酯及其它衍生物的制备

按如下步骤再离析实施例5的FFA混合物：将包含该氨基醇盐的水溶液酸化，萃取到适合的有机绿色溶剂中，例如己烷或甲苯中，并蒸发溶剂。将离析的FFA混合物溶于干乙醇中。添加催化量的盐酸并在环境温度下搅拌该溶液24小时。在这期间蒸馏出一部分溶剂，并添加新溶剂达到原始体积。蒸发溶液，并通过分子蒸馏离析脂肪酸酯的混合物。

Claims (41)

1、一种制备水溶性不饱和脂肪酸盐的方法，所述盐由包含至少一种非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或其盐的粗制组合物制备，所述方法包括：

在水存在下向所述粗制组合物中加入至少一种氨基醇化合物以形成所述酸或盐的水溶性氨基醇盐；

分离水相；和

可选地，从所述水相中离析所述盐。

2、一种制备水溶性不饱和脂肪酸盐的混合物的方法，所述混合物由不饱和脂肪酸或其盐的非水溶性或微水溶性混合物制备，所述方法包括：

在水存在下向所述非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或其盐的混合物中添加至少一种氨基醇化合物以形成所述酸或盐的水溶性氨基醇盐；

分离水相；和

可选地，从所述水相中离析所述盐。

3、一种制备水溶性不饱和脂肪酸盐的方法，所述盐由非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或其盐制备，所述方法包括：

在水存在下向所述非水溶性或微水溶性不饱和脂肪酸或其盐中加入至少一种多氨基醇化合物以形成所述酸或盐的水溶性多氨基醇盐；

分离水相；和

可选地从所述水相中离析所述盐。

4、根据权利要求1的方法，其中所述粗制组合物来源于粗制海产的油。

5、根据权利要求1的制备水溶性不饱和脂肪酸盐的方法，包括：

(I)将包含至少一种不饱和脂肪酸衍生物的粗制油水解并形成包含所述脂肪酸的油相；

(II)可选地用水性洗剂洗涤所得的油相；

(III)在水存在下将至少一种氨基醇化合物添加到步骤(I)的产物或，如果进行步骤(II)的话，添加到步骤(II)的产物中以与所述至少一种不饱和脂肪酸形成水溶性盐，从而将所述盐萃取到水相中；和

(IV)离析，并可选地干燥该水相。

6、根据权利要求5的制备不饱和脂肪酸盐的方法，包括：

(I)将包含至少一种不饱和脂肪酸衍生物的粗制油水解并形成包含所述脂肪酸的油相；

(II)将所形成的油相溶解在无毒溶剂例如己烷或甲苯中；

(III)可选地用水性洗剂洗涤该油相，例如重复地洗涤；

(IV)可选地，加入酸性水相以确保存在的任何脂肪酸化合物呈COOH形式，并将水相分离出来；

(V)在水存在下将至少一种氨基醇化合物添加到前一步骤的油相中以与所述至少一种不饱和脂肪酸或盐形成水溶性氨基醇盐，从而将所述盐萃取到水相中；和

(VI)离析并可选地干燥该水相。

7、根据权利要求5或6的方法，其中该水解反应在碱性条件下进行。

8、根据权利要求7的方法，其中该水解反应在醇类溶剂存在下进行。

9、根据权利要求5-8中任一项的方法，其中步骤(I)包括：

(I)在水和诸如醇的极性有机溶剂存在下将包含至少一种不饱和脂肪酸衍生物的粗制油水解；

用非极性溶剂例如烷烃洗涤该水解的粗制油并保留水相；

将该水相酸化以形成油相。

10、根据权利要求1的方法，其中多氯化联苯、二恶英、重金属、阻燃剂、邻苯二甲酸酯和胆固醇中的至少一种存在于所述粗制组合物中并在形成盐的过程中被除去。

11、上述权利要求中任一项的方法，其中使用多氨基醇化合物。

12、根据权利要求11的方法，其中所述多氨基醇化合物是壳聚糖。

13、根据权利要求1、2和4-10中任一项的方法，其中使用单氨基醇化合物。

14、根据权利要求13的方法，其中所述单胺化合物是葡甲胺或三(羟甲基)氨基甲烷。

15、根据权利要求1的方法，其中不饱和脂肪酸的混合物存在于所述粗制组合物中。

16、上述权利要求中任一项的方法，其中所述水溶性不饱和脂肪酸盐是ω-3不饱和脂肪酸盐，是ω-3不饱和脂肪酸盐的混合物或是ω-3不饱和脂肪酸盐和ω-6不饱和脂肪酸盐的混合物。

17、根据权利要求1-16中任一项的方法，其中所述不饱和脂肪酸是以下通式(I)的化合物，或是衍生自以下通式(I)的化合物：

CH₃(CH₂)_n-(CH＝CH-CH₂)_m-(CH₂)₅-COOH    (I)

其中n、m和s是整数。

18、上述权利要求中任一项的方法，其中通过干燥将该盐离析，并且在干燥之后形成固体；

19、上述权利要求中任一项的方法，其中通过喷雾干燥或冻干进行干燥。

20、根据权利要求1方法制备含ω-3不饱和脂肪酸盐的组合物的方法，包括：

(A)将包含至少一种ω-3脂肪酸或其衍生物的粗制油，例如海产的油水解；

(B)添加酸性水相以将所述至少一种ω-3脂肪酸转化成其COOH形式，并将水相分离出来；

(C)添加包含至少一种单氨基和/或多氨基醇化合物的水相以与所述至少一种ω-3脂肪酸形成盐，从而将所述盐萃取到水相中。

21、一种通过权利要求1-20的方法制备的不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐或包含这样的盐的混合物的组合物。

22、一种不饱和脂肪酸的水溶性三-(羟甲基)甲胺盐或多氨基醇盐。

23、一种包含不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐的混合物的组合物。

24、一种包含权利要求21或22的水溶性盐的组合物。

25、根据权利要求23或24的组合物，还包含至少一种生理可容许的抗氧化剂。

26、根据权利要求23-25的组合物，还包含至少一种生理可容许的防冷冻剂。

27、根据权利要求23-26中任一项的组合物，还包含至少一种环糊精。

28、根据权利要求21-27中任一项的组合物或盐，呈粉末形式。

29、根据权利要求21-27的组合物或盐是结晶的组合物或盐。

30、根据权利要求23-28中任一项的组合物，其中至少一种脂肪酸盐衍生自以下通式(I′)所表示的酸：

CH₃CH₂CH＝CH-R-COOH    (I′)

其中R是C₁₃₊烯基(例如C_13-25)，该烯基可选地包含1个或更多双键，优选非共轭双键；或

衍生自以下通式(II)所表示的酸：

CH₃CH₂CH₂CH₂CH₂CH＝CH-R”-COOH    (II)

其中R”是C₅₊烯基(例如C_10-22)，该烯基可选地包含1个或更多双键烯基。

31、根据权利要求30的组合物，其中存在衍生自通式(I′)和(II)的化合物的脂肪酸盐。

32、根据权利要求31的组合物，包含DHA、EPA、亚油酸或共轭亚油酸或其混合物的氨基醇盐。

33、根据权利要求23-32中任一项的组合物，其中形成所述盐的氨基醇化合物由以下通式表示：

((HO(R′)_0/1)_n)R₁NHR₂)_m    (III)

其中n是3～6的整数，R′是甲基，R₁是C_1-20烯基，R₂是H或C_1-6烷基侧链，优选甲基，m是1-20的整数；或

由以下通式表示：

(C₆H₁₄NO₅)_P    (IV)

其中p是2或更大的整数。

34、根据权利要求33的组合物，其中所述氨基醇化合物是葡甲胺、三(羟甲基)氨基甲烷或壳聚糖。

35、根据权利要求21-34中任一项的盐或组合物，具有至少250g/L的水溶解度。

36、根据权利要求21-35中任一项的水溶性盐或组合物在制造用于医药或用作营养增补剂的药剂中的用途。

37、一种干燥组合物的制备方法，所述干燥组合物包含不饱和脂肪酸(优选不同脂肪酸的相同盐)的水溶性氨基醇盐的混合物，该方法包括：将不饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐的混合物的水溶液喷雾干燥或冻干。

38、一种由包含至少一种非水溶性或微水溶性饱和脂肪酸或其盐的粗制组合物制备水溶性饱和脂肪酸盐的方法，所述方法包括：

在水存在下向所述粗制组合物中加入至少一种氨基醇化合物以形成所述酸或盐的水溶性氨基醇盐；

分离水相；和

可选地从所述水相中离析所述盐。

39、一种包含水溶性饱和脂肪酸盐的组合物的制备方法，包括：

(I)将包含至少一种饱和脂肪酸衍生物的粗制油水解并形成包含所述脂肪酸的油相；

(II)可选地用水性洗剂洗涤所得的油相；

(III)在水存在下将至少一种氨基醇化合物添加到步骤(I)的产物或，如果进行步骤(II)的话，添加到步骤(II)的产物中，以与所述至少一种饱和脂肪酸形成水溶性盐，从而将所述盐萃取到水相中；和

(IV)离析并可选地干燥该水相。

40、一种饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐。

41、一种包含饱和脂肪酸的水溶性氨基醇盐的混合物的组合物。