CN101406435B - 萝卜几丁质结合蛋白在制备口腔卫生产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及萝卜几丁质结合蛋白在制备例如：牙膏、牙线、漱口水、口腔喷剂或吸入剂以及口香糖等口腔卫生产品中的应用，所述口腔卫生产品用于消除和/或减少口腔中的菌斑和/或细菌，从而减少牙病(龋齿、牙周病等)和口臭的发病率。

Description

萝卜几丁质结合蛋白在制备口腔卫生产品中的应用 

技术领域

本发明涉及口腔卫生用品领域，具体地，涉及萝卜几丁质结合蛋白在制备用于消除和/或减少口腔菌斑或细菌方面的卫生产品中的应用。 

背景技术

口腔菌斑是指粘附在牙齿表面或口腔其他软组织上的微生物群，它是由大量细菌、细胞间物质、少量白细胞、脱落上皮细胞和食物残屑等组成，而且它是口腔常见牙齿疾病龋病和牙周病的主要诱因。 

龋齿是由多种因素复合作用所致，目前公认的龋病病因学说是四联因素学说，主要包括细菌、口腔环境、宿主和时间，其基本点为：致龋性食物(特别是蔗糖和精制碳水化合物)在糖，紧紧贴附于牙面由涎液蛋白形成的获得性膜上，在这种由牙齿表面解剖结构和生化、生物物理特点形成的不仅得以牢固的附着于牙面，而且可以在适宜温度下，有足够的时间在菌斑深层产酸，侵蚀牙齿，使之脱矿，并进而破坏有机质，产生龋洞。 

牙周病是牙齿组织，包括牙龈、牙骨质、牙周韧带和牙槽骨因炎症所致的一种疾病。牙周病的病因大多由于局部的菌斑、牙垢、牙石、食物嵌塞、不良修复体等所致。 

另外，口臭又称口气，是常见疾病，除了患一些系统性疾病或感染时可以 引起口臭外，大部分情况下是由存在于牙菌斑、唾液及舌面等处的细菌分解食物残渣和唾液中的蛋白质，代谢氨基酸产生挥发性硫化物(volatile sulfur compounds，VSC)，形成难闻的口腔异味。细菌生化学实验揭示，口腔中的革兰阴性厌氧菌主要参与了这一过程。因此，通过采取措施来减少口腔内细菌特别是厌氧菌的数量，能有效地减轻口臭症状。 

日常使用刷牙、牙线或漱口水等清洁口腔，可减少口腔中的菌斑和细菌，并在一定程度上预防口臭，但效果不太理想，仍需提供一种有效防止菌斑形成的安全方法。 

中国发明专利号为02115151.2，专利名称为萝卜几丁质结合蛋白及制备方法详细揭露了从萝卜中提取萝卜几丁质结合蛋白M₁、M₂、M₃、M₄的方法，揭露了这四种蛋白的物理化学特性，其中几丁质结合蛋白M₁、M₂是双功能酶，兼有溶菌酶和几丁质酶的活性，M₃、M₄只有几丁质酶的活性。也就是说萝卜几丁质结合蛋白对革兰氏阴性细菌(G^-)和革兰氏阴性细菌(G⁺)都有杀菌作用，同时对真菌细胞壁也有水解作用。但是，对萝卜几丁质结合蛋白的具体应用没有论述。 

发明内容

本发明的目的是提供萝卜来源的几丁质结合蛋白在制备可消除或减少菌斑和口腔有害细菌的口腔卫生产品中的应用方法。菌斑和或口腔中细菌的完全或部分减少的结果是口腔疾病、禹齿、牙周炎发病率的下降，以及口臭发病率的下降。 

萝卜是人们常吃的绿色食品，萝卜来源的几丁质结合蛋白是天然植物酶，对人无任何毒害作用，环保健康。 

发明专利专利号为02115151.2，专利名称为萝卜几丁质结合蛋白及制备方 法详细揭露了从萝卜中提取萝卜几丁质结合蛋白的方法，为萝卜几丁质结合蛋白的广泛应用和开发提供了技术条件。 

萝卜几丁质结合蛋白包含蛋白质M₁、M₂、M₃、M₄，几丁质结合蛋白是四者的总称。其中M₁、M₂是双功能酶，兼有溶菌酶和几丁质酶的活性，M₃、M₄只有几丁质酶的活性。M₁、M₂的溶菌酶活力为6.0～7.0万U/mg蛋白质，M₁、M₂的几丁质酶活力分别为24～47U/ml，M₃、M₄的几丁质酶活力分别为47～62U/ml。 

M₁、M₂是二者都不是糖蛋白，不含半胱氨酸(Cys)，相应地，没有链内和链间二硫键，为单体蛋白。M₁、M₂的生物催化活性中心由谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、组氨酸(His)和色氨酸(Trp)残基组成。以溶壁微球菌为底物时，M₁的K_m值为0.287mg/ml、V_max为666.7U/min，M₂的K_m值为0.1533mg/ml、V_max为3333.33U/min。  M₁反应的温度为45～60℃，反应的pH为5～7；、M₂反应的温度为35～55℃，反应的pH为6～8。以N-乙酰葡萄糖胺为底物时，M₁反应的pH为3.6～5.6，M₂反应的pH为2.4～4.4。 

也就是说萝卜几丁质结合蛋白不仅可水解真菌、酵母和昆虫等细胞壁成份中的几丁质，而且可水解革兰氏阴性细菌(G^-)和革兰氏阳性细菌(G⁺)的细胞壁，从而达到杀菌的目的。 

为了进一步说明本发明的意义之所在，本文将进一步分析引起牙病和口臭的细菌的属性。 

经鉴定，与牙周病有关的病原体包括牙龈卟啉单胞菌(porphyromonasgingivalis)、中间普雷沃氏菌(Prevotellaintermedia)、放线共生放线杆菌(Actinobacillus actinomycelemcomitans)、核粒梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum)、啮蚀艾肯氏菌(Eikenella corrodens)、福赛斯拟杆菌(Bacteroidesfrosythus)、二氧化碳嗜纤维菌属(Capnocytophoge spp.)等。这些病原体都是革兰氏阴性细菌(G^-)。 

变异链球菌(Streptococcus sanguis)是引起龋齿的发生的主要病原体。 

体外实验也表明显示：口腔中的一些革兰阴性厌氧菌能够分解蛋白质产生硫化氢(hydrogen sulfide，H₂S)和甲硫醇(methyl mercaptan，CH₃SH)这两种挥发性硫化物。Persson等[Persson S，Edlund MB，Claesson R，et al.The formation of hydrogen sulfide and methyl mercaptan by oral bacteria.Oral Microbiol Immunol，1990，5(4)：195-201.]的研究发现，消化链球菌属、优杆菌属、新月形单胞菌属、拟杆菌属和梭杆菌属中的部分细菌能利用L-半胱氨酸产生硫化氢，而梭杆菌属、拟杆菌属、卟啉菌属和优杆菌属中的一些细菌可以通过代谢L-甲硫氨酸产生甲硫醇。硫化氢和甲硫醇这两种气体构成了口腔内挥发性硫化物的90％以上，同时也是口臭的主要成分。 

简而言之，引起牙病和口臭的主要病因是口腔中的革兰氏阴性细菌。从上述论述中，可知萝卜几丁质结合蛋白，尤其是其中的蛋白质M₁、M₂具有较强的杀灭革兰氏阴性细菌的能力，这就是本发明的基本原理。

本发明的方案是：萝卜几丁质结合蛋白在制备用于改善口腔卫生的口腔卫生产品中的应用，其中的口腔卫生产品中所含萝卜几丁质结合蛋白按重量百分比计为1～50％。。 

本发明还提供了一种用于口腔卫生的产品，该产品含有萝卜几丁质蛋白。优选地，萝卜几丁质蛋白占此产品总重量的1～50％。 

本发明用于口腔卫生的产品，可以采用多种形式的制剂，例如：牙膏、牙线、漱口水，口腔喷雾剂或吸入剂、口香糖等，这些制剂的配方中包括有效成份、添加剂及用于此制剂形式的适宜的载体。 

本发明的有益效果为：(1)萝卜几丁质蛋白为纯天然植物蛋白，对人体无任何毒副作用；(2)提供给口腔良好的清洁，消除或减少口腔病原体微生物，改善口腔环境卫生；(3)消除或减少产生口臭的病原体，减少口臭的发病率。

具体实施方式

本发明用于口腔卫生的产品以牙膏的形式提供时，除含有萝卜几丁质结合蛋白，还含有为产品提供特殊性能的其他化合物、适宜的载体和添加剂，例如氟源、摩擦剂、表面活性剂、湿润剂、粘合剂、香料、甜味剂等。 

摩擦剂是牙膏的主体，用量在30％～55％之间，常用的摩擦剂有碳酸钙(CaCO3)、磷酸氢钙(CaHPO4·2H2O)、焦磷酸钙(Ca2P2O7)、水合硅酸(SiO2·nH2O)、氢氧化铝[Al(OH)₃]等。他们随着牙刷一起移动，牙齿上粘附的残余物在不破坏牙釉质和牙本质的情况下，会随着摩擦剂一起除去。 

为了增加去污效果，牙膏中还需加入表面活性剂，目前广泛采用的是十二烷基硫酸钠和月桂醇磺酸钠，既能快速发泡，又能清洗口腔中的污垢，其一般用量为2％。 

湿润剂可防止牙膏在软管中固化变硬，并使膏体具有光泽等效能，用于牙膏中的湿润剂有甘油、丙二醇、山梨醇等多种。 

粘合剂可使牙膏中配料分散均匀，如羧甲基纤维素钠盐及其衍生物、角叉菜、海藻酸钠等多种物质。 

牙膏中添加香料，如薄荷、留兰香等，不仅在使用时有清爽芳香之感，还有杀菌作用，清除口腔中的细菌，防止膏体腐败。 

为使牙膏口感良好，还得加些糖精作甜味剂。这样，刷牙之后，口腔就会感觉凉爽舒适，并带有甜丝丝的芬芳，糖精的配用量一般为0.01％～0.1％。 

为了防治口腔疾病，有的牙膏中还加入了一些特殊成分：①为除去口臭常在牙膏中加入双氧代苯基二胍基己烷和柏醇等杀菌剂，铜叶绿酸对防止口臭亦有一定功效。②防治龋齿可加入氟化合物，既能抑制口腔中残留物发酵，又使牙齿表面的珐琅质强化。从安全性来考虑，牙膏中氟含量规定在1000微克以下。在饮用含氟天然水的人群中，龋齿的发病率相对较低，但饮用含氟量高的水，牙齿表面会形成白浊状(斑状齿)，反而使齿质变脆。 

本发明所提供的含有萝卜双功能酶的牙膏，含有下列组分： 

组分                   占总重量的百分数 

萝卜几丁质蛋白酶       1～50％ 

摩擦剂                 30～55％ 

表面活性剂             0.5～2％

湿润剂    20～50％ 

粘合剂    0.5～2％ 

甜味剂    0.01％～0.1％ 

防腐剂    适量 

水        适量至100 

本发明提供的不同产品，例如牙线、漱口水，口腔喷雾剂或吸入剂、口香糖等，可通过使用本领域已知的常规技术获得。 

以下将以实施例来进一步说明本发明。 

实施例1.含有萝卜几丁质蛋白的牙膏，用常规方法，通过充分混合适宜量的各组分，制备具备表1中所示配方的(1)和(2)的牙膏。 

表1 含有萝卜几丁质蛋白的牙膏 

组分                         重量百分比 

                             配方(1)    配方(2) 

萝卜几丁质蛋白酶             5          40 

摩擦剂                       45         30 

表面活性剂                   2          2 

甘油                         30         20 

粘合剂                       1.5        2 

香味剂                       1.0        1.0 

氟化钠                       0.32       0.32 

着色剂                       0.16       0.16 

糖精钠                       0.13       0.13 

防腐剂                       0.1        0.1

其他特殊材料                  适量          适量 

水                            加水至100     加水至100 

实施例2 

含有萝卜几丁质蛋白的漱口水，用常规方法，通过充分混合适宜量的各组分，制备具备表1中所示配方的(1)和(2)的漱口水。 

表2 含有萝卜几丁质蛋白的牙膏 

组分                        重量百分比 

                            配方(1)    配方(2) 

萝卜几丁质蛋白酶            5          40 

表面活性剂                  2          2 

甘油                        30         20 

香味剂                      1.0        1.0 

着色剂                      0.16       0.16 

糖精钠                      0.13       0.13 

防腐剂                      0.1        0.1 

其他特殊材料                适量       适量 

水                          加水至100  加水至100

Claims (2)

1.萝卜几丁质结合蛋白在制备用于改善口腔卫生的口腔卫生产品中的应用，其中的口腔卫生产品中所含萝卜几丁质结合蛋白按重量百分比计为1～50％。

2.一种口腔卫生产品，其特征在于：含有萝卜几丁质结合蛋白，所含萝卜几丁质结合蛋白按重量百分比计为1～50％。