CN101384264A - 含有聚(adp-核糖)聚合酶抑制剂的治疗组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明通常涉及式1表示的8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮作为增强细胞中毒类药或放射治疗的效力的化学增敏剂的应用。如右式1,本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮或或其药学上可接受的盐和至少一种另外的治疗剂的药物组合,含有这样组合的试剂盒,使用这样的组合治疗遭受如癌症的疾病的患者的方法。
Description
本申请要求2004年9月22日提交的美国临时申请号60/612,458和2005年5月19日提交的美国临时申请号60/683,006的利益,其内容在此以全文并入作为参考。
发明领域
发明背景
是聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的小分子抑制剂。式1化合物及其盐类,可以按照美国专利号6,495,541、PCT申请号PCT/IB2004/000915、国际申请号WO 2004/087713,美国临时申请号60/612,457、60/612,459和60/679,296中所述的来制备,其公开的内容在此以全文并入作为参考。
迄今为止,在PARP家族中,已经有18种酶通过DNA序列同源性得到鉴定,调查了7种酶的生物化学和酶的性质:通过DNA链断裂刺激PARP-1和PARP-2;PARP-3与PARP-1和中心体的相互作用;PARP-4还称为穹窿PARP(VPARP)是最大的PARP并与细胞质的穹窿有关;t ankyrasel和2(PARP-5a和5b)是和端粒蛋白有关的;PARP-7(TiPARP)的功能目前还不清楚但是其可能与T-细胞功能有关而且它可以多聚ADP-核糖化组蛋白(Ame JC,Splenlehauer C and deMurcia G.The PARP Superfamily.Bioessays 26 882-893(2004))。药理学研究表明,式1化合物是PARP-1(Ki=1.4nM)和PARP-2(Ki=0.17nM)的抑制剂。基于PARP酶中氨基酸序列上结构的相似性,式1的化合物也可能高亲和力地结合家族中的其他成员。
DNA中单链或双链断裂的酶介导修复是潜在的抗放射治疗或细胞中毒类药的机制,该机制取决于DNA损伤。因此,抑制DNA修复酶是增强这些试剂的策略。PARP-1是PARP家族中最具有特征的成员,是这样的核酶,当其被DNA损伤激活时,其调节ADP-核糖碎片从NAD+转化成大量的受体蛋白。根据遭受的DNA损伤的程度,PARP-1激活,随后的聚(ADP-核糖)化调解损伤的DNA的修复或引起细胞死亡。当DNA损伤是适度的,PARP-1在DNA的修复过程中具有重要的作用。相反地,如果发生大量的DNA损伤,PARP-1过度的激活耗尽ATP池(pools)(尽力再补充NAD+),由于坏死其最终导致细胞死亡(Tentori L,PortarenaI,Graziani G.Potential applications of poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitors.Pharmacol Res 2002,45,73-85)。PARP的激活还可以导致释放AIF(凋亡诱导因子)触发不依赖半胱天冬酶的细胞凋亡的途径。(Hong SJ,Dawson TM and Dawson VL.Nuclearand mitochondrial conversations in cell death:PARP-1 and AIF.Trends in Pharmacological Sciences 25 259-264(2004))。
作为PARP-1双重作用的结果,这种酶的抑制剂,如式1表示的8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮,可能具有化学敏感剂的作用(通过防止DNA修复,例如,抗癌治疗后),或者作为多种疾病和毒性症状的治疗,所述的疾病和毒性症状是与氧化的或一氧化氮诱导的应激和随后的PARP活动过度有关。这样的病症包括神经障碍和神经变性障碍(例如,帕金森病、阿耳茨海默病)(Love S,Barber R,Wilcock GK.Increasedpoly(ADP-ribosyl)ation of nuclear proteins in Alzheimer'sdisease.Brain 1999;122:247-53;Mandir AS,Przedborski S,Jackson-Lewis V,等人的Poly(ADP-ribose)polymerase activationmediates 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6- tetrahydropyridine(MPTP)-induced parkinsonism.Proc Natl Acad Sci USA1999;96:5774-9);心血管病症(例如,心肌梗死、缺血再灌注损伤)(Pieper AA,Walles T,Wei G,等人的Myocardial postischemicinjury is reduced by poly(ADP-ribose)polymerase-1 genedisruption.J Mol Med 2000;6:271-82;SzabóG, S,StumpfN,等人的Poly(ADP-ribose)polymerase inhibition reducesreperfus ioninjury after heart transplantation.Circ Res2002;90:100-6;U.S.Patent 6,423,705);炎性疾病(SzabóC,DawsonV.Role of poly(ADP-ribose)synthetase in inflammation andischaemia-reperfusion.TIPS 1998;19:287-98);糖尿病性血管功能障碍(Soriano FG,Virág L,Szabó C.Diabetic endothelialdysfunction:role of reactive oxygen and nitrogen speciesproduction and poly(ADP-ribose)polymerase activation.J MolMed 2001;79:437-48);关节炎(SzabóC,Virág L,Cuzzocrea S,等人Protection against peroxynitrite-induced fibroblast injuryand arthritis development by inhibition of poly(ADP-ribose)synthase.Proc Natl Acad Sci USA 1998,第95卷,第3867-72页);和顺铂引起的中毒性肾损害(Racz等人的“BGP-15-a novelpoly(ADP-ribose)polymerase inhibitor- protectsa gainstnephrotoxicity of cisplantin without compromising itsantitumor activity.”Biochem Pharmacol 2002;63:1099-111)。此外,还显示了,BRCA2缺乏的肿瘤细胞仅仅是对PARP抑制剂尖锐敏感的(Bryant等人“Specific killing of BRCA2 deficien ttumorswith inhibitors of poly(ADP-ribose)polymerase,”Nature,2005年434卷,第913-917页;Farmer等人“Targeting the DNA repairdefect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategy,”Nature,2005,第434卷,第917-921页)。PARP抑制剂还与增强诱导β细胞中Reg基因和HGF基因的表达有关,因此,促进胰岛的胰腺β-细胞的增殖并抑制细胞的凋亡(美国专利申请公布2004/0091453;PCT公开WO02/00665)。而且,PARP抑制剂还用于化妆制品,特别是日晒后洗剂(PCT公开号WO 01/82877)。目前,市场上没有销售PARP抑制剂。
癌症仍然是一种高的未满足医学需要的疾病。细胞中毒化疗仍然是对大多数癌症特别是晚期疾病的全身治疗的主要支柱。然而,对患有进行性或转移性的疾病的患者而言,很少的细胞毒素的化学治疗剂或治疗法能有效提高整体的存活率。而且,与细胞毒素剂有关的窄的治疗窗产生联接最适度以下效力的显著的毒性。因此,耐受良好剂量的增强细胞中毒类药的效力的化学增敏剂将实现癌症患者的危急需要
放疗是一种在大多数肿瘤类型中使用的有效形式的癌症治疗,用于局限性疾病控制。超过50%的所有癌症患者在他们的生病期间将接受放疗(Foroudi F等人.An evidence-bas edestimate of appropriateradiotherapy utilization rate for breast cancer.Int J RadiatOncol Biol Phys.2002,53:1240-53;ForoudiF等人.Anevidence-bas edestimate of the appropriate radiotherapyutilization rate for colorectal cancer.Int J Radiat Oncol BiolPhys.2003,56:1295-307;Foroudi F.等人.Evidence-basedestimate of appropriate radiotherapy utilization rate forprostate cancer.Int J Radiat Oncol Biol Phys.2003,55:51-63;Barbera L.等人.Estimating the benefit and cost of radiotherapyfor lung cancer.Int J Technol Assess Health Care.2004,20:545-51)。然而,甚至在癌症的一线治疗中,给予放射治疗用于治愈目的(例如,头颈癌、软组织肉瘤和宫颈癌),不是所有的患者应答良好。因此,这里需要增强全体患者应答的策略。常常,放射治疗前或放射治疗后给予标准的化学治疗。一种选择性的方法是使用放射治疗与专门设计来增强放射治疗的功效的新的抗癌因子联合。这样的因子影响决定肿瘤放射应答的五个关键的因素(“Cell survival as adeterminant of tumor response.”Basic clinical radiobiology第3版.Steel GG(Ed.).Arnold Press UK,第52-63页,2002年)。这些是修复放射治疗引起的DNA-损害的能力;放射治疗后通过细胞循环的细胞再分配(以致于在第一次放射剂量时处于抵抗阶段的肿瘤细胞通过下一次的放射组分(radiation fraction)可以发展成更敏感的阶段);再生,借此存活细胞持续分化从而提高放射组分之间的肿瘤积存量;在最初的一轮放射治疗存活的细胞的再充氧是作为更弱的充氧和最后特定组织的内在放射敏感性。关于这些因素,增强的修复和再生导致抗放射性,反之再分配、再充氧和内在的放射敏感性可以使肿瘤对放射治疗更敏感。清楚地,与放射治疗联合的降低DNA-修复能力的药剂的使用潜在地增强了放疗的效果。在对辐射诱发的DNA-损害的应答中发现了PARP-1激活和后来的聚-(ADP-核糖基化)(Satoh MS &Lindahl T.“Role of poly(ADP-ribose)formation in DNA repair.”Nature.1992,356:356-358)。而且,发生丧失PARP-1表达和活性的细胞系和基因敲除的小鼠显示了敏锐的辐射敏感性支持PARP-1,为用于放射增强的吸引人的目标(Wang等人.“Mice lacking ADPRT andpoly(ADP-ribosyl)ation develop normally but are susceptible toskin disease.”Genes Dev.1995,9:509-20;de Murcia等人.“Requirement of poly(ADP-ribose)polymerase in recovery fromDNA dama ge in mice and in cells.”Proc Natl Acad Sci U S A.1997,94:7303-7;Masutani等人.“Function of poly(ADP-ribose)polymerase in response to DNA damage:gene-disruption study inmice.”Mol Cell Biochem.1999,193:149-52)。除了对DNA-修复的直接作用之外,详细的PARP-1抑制剂的种类是作用于血管的,而且同样地增强放射部分之间肿瘤再给氧的可能性,所述放射部分可以有助于提高放射应答(Calabrese等人.“Anticancer chemo-andradio-sensitisation in vivo and in vivo by a potent novelpoly(ADP-ribose)polymerase-1(PARP-1)inhibitor,AG14361.”J.Natl.Cancer Inst.2004,96:56-67)。
发明概述
在一个实施方案中,本发明提供了给予哺乳动物的剂型,该剂型包含式1的化合物:
药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,以给药哺乳动物后有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时的量。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种给药于哺乳动物的剂型,此剂型包含式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,为给药哺乳动物后有效提供至少10ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时的量。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种给药于哺乳动物的剂型,此剂型包含式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,为给药哺乳动物后有效提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时的量,其中该剂型是注射用冻干粉。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种给药于哺乳动物的剂型,此剂型包含式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,为给药哺乳动物后在外周血淋巴细胞中有效地抑制至少50%的聚(ADP-核糖)聚合酶至少24小时的量。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种给药于哺乳动物的剂型,此剂型包含式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,为给药哺乳动物后在外周血淋巴细胞中有效地抑制至少50%的聚(ADP-核糖)聚合酶的酶至少24小时的量,其中该剂型注射用冻干粉。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种给药于哺乳动物的剂型,此剂型包含式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,用量是1-48mg/m2,表示为式1化合物相当量的游离碱。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种给药于哺乳动物的剂型,此剂型包含式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,用量是1-48mg/m2,表示为式1化合物相当量的游离碱,其中该剂型是注射用冻干粉。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种给药于哺乳动物的剂型,此剂型包含式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,用量是2-96mg,表示为式1化合物相当量的游离碱。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种给药于哺乳动物的剂型,此剂型包含式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,用量是2-96mg,表示为式1化合物相当量的游离碱,其中该剂型是注射用冻干粉。
在另一个实施方案中,本发明提供一种治疗哺乳动物的癌症的方法,该方法包括给予哺乳动物:
(a)为给药于哺乳动物后有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时的量的式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物;和
(b)治疗有效量的至少一种抗癌剂。
在另一个实施方案中,本发明提供一种治疗哺乳动物的癌症的方法,该方法包括给予哺乳动物:
(a)以给药于哺乳动物后有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时的量的式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物;和
(b)治疗有效量的至少一种抗癌剂,
其中在给药式1化合物后1小时给予抗癌剂。
在另一个实施方案中,本发明提供一种治疗哺乳动物的癌症的方法,该方法包括给予哺乳动物:
(a)以给药于哺乳动物后有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时的量的式1化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物;和
(b)治疗有效量的至少一种抗癌剂,
其中癌症是选自肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤黑色素瘤或眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的新生物、原发性中枢神经的淋巴瘤、脊椎肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤及其组合。
在另一个实施方案中,本发明提供了治疗哺乳动物的癌症的试剂盒,该试剂盒包括:
(a)第一个单位剂型中的一定量的式1的化合物、药学上可接受的盐或溶剂合物、或其混合物,和药学上可接受的载体或稀释剂;
(b)至少第二个单位剂型中的一定量的至少一种抗癌剂和药学上可接受的载体或稀释剂;和
(c)包含第一个和至少第二个剂型的容器;
其中式1化合物的量是给药哺乳动物后有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时。
在另一个实施方案中,本发明提供了治疗哺乳动物的癌症的方法,该方法包括给药哺乳动物:
(a)以给药于哺乳动物后有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时的量的式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物;和
(b)伊立替康、5-氟尿嘧啶和亚叶酸的组合。
在另一个实施方案中,本发明提供了治疗哺乳动物的癌症的方法,该方法包括给药哺乳动物:
(a)以给药于哺乳动物后有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时的量的式1的化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物;和
(b)有效地破坏癌症的放射剂量。
术语的定义和缩写
术语“化合物I”涉及8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐。术语“式1化合物”涉及8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮游离碱。
如本文所用的"异常细胞生长",除非另外指出,涉及不依赖正常的调节机制的细胞生长(例如,丧失接触抑制)。
如本文所用的术语"治疗",除非另外指出,指的是逆转、缓解、抑制该术语施用的障碍或病症或这样的障碍或病症的一种或多种综合征的进展或预防该术语施用的障碍或病症或这样的障碍或病症的一种或多种综合征。如本文所用的术语"疗法",除非另外指出,指的是用作以上直接定义的“治疗”的治疗的行为。
如本文所用的术语"放射敏化剂",指的是使肿瘤细胞对放射治疗更敏感的药物。
如本文所用的术语"放射治疗",包括外线束放射治疗(XBRT)或远程放射治疗、近程放射治疗或密封源放射治疗和未密封源放射治疗。这三组主要放射治疗之间的差异,是关于放射源的位置;外部的是在在身体外面,而密封源和未密封源的放射治疗具有在体内传递的放射性物质。外线束放射治疗是放射治疗最常见的形式,其中患者躺在检查台上,外源的X-射线的瞄准身体的特定部位。放射线与组织相互作用,被吸收,损害细胞的DNA。近程放射治疗是用放置于尽可能接近治疗位点的密封源传送放射治疗。当放射源可以放置于体腔如食道或支气管内或当肿瘤如头和颈和皮肤进得去放置放射源的针或导管,其可适用于治疗肿瘤。近程放射治疗潜在地应用于大多数的肿瘤位点,其可以用作初期治疗或与外线束放射治疗联合。未密封源的放射治疗指的是使用注射进体内的溶解形式的放射性物质。所有这些物质具有一个最常见的特征,即是非放射性母体物质的生物学作用。质子治疗是外线束放射治疗的特殊情况,其中粒子是质子。
如本文所用的术语"放射免疫疗法",指的是这样的放射治疗,其中细胞毒素的放射性核素联接抗体,以便直接传送毒素进入肿瘤的靶点。胜于抗体靶向毒素(免疫毒素)的定向放射的治疗具有的益处是,靠近肿瘤的丧失适当的抗原决定子的细胞可以是被交叉放疗破坏的。放射免疫疗法有时称为靶向放射治疗,但是后者的术语还可以涉及连接无免疫性分子的放射性核素(放射治疗)。
如本文所用的术语"药学上可接受的盐",除非另外指出,包括化合物中可存在的酸性或碱性基团的盐。本质上是碱性的化合物能够与多种无机和有机酸形成广泛的多种盐。可用于制备这样碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是形成无毒的酸加成盐的那些酸,即,含有药理学上可接受的阴离子的盐,如醋酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、重硫酸盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、依地酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、二盐酸化物、依地酸盐、edislyate、丙酸酯月桂硫酸盐、乙磺酸盐,乙基琥珀酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、醣酵对氨基苯胂酸盐、hexylresorcinate、海葱次苷、氢溴化物、盐酸盐、碘化物、异苏氨酸、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、扑酸盐(双羟萘酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、次醋酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、triethiodode和戊酸盐的盐类。特别优选的盐包括磷酸盐和葡糖酸盐的盐。
本发明还包括同位素标记的化合物,其与式1中列举的那些化合物相同,除一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然界中常见的原子量或质量数的原子取代。可结合本发明的化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素,分别如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。包含前述提及的同位素和/或其他原子的其他同位素的本发明的化合物及该化合物药学上可接受的盐是在本发明的范围之内。本发明某些同位素标记的化合物,例如其中结合放射性同位素如3H、14C、11C或18F那些,可用于药物和/或底物组织分布测定。氚标记即3H和碳-14标记即14C的同位素是特别优选的,由于其易于制备和测定,而11C或18F用于正电子成象术。进一步,具有更重同位素的置换如氘即2H,可以提供某些治疗益处,由于更大的代谢稳定性,例如增加的体内半衰期或减少的剂量需要,因此,在某些情况下可以是优选的。本发明中同位素标记的式1化合物通常以上述制备未标记化合物的方法制备,以易得的同位素标记试剂取代非同位素标记试剂。
ADP 二磷酸腺苷
AE 不利事件
ALT 丙氨酸氨基转移酶
ANC 嗜中性细胞绝对计数
AST 天门冬氨酸氨基转移酶
AUC 血浆浓度-时间曲线下面积
AUC(0-24) 0-24小时的血浆浓度时间曲线下面积
AUC(0-tlast) 0-最后的记录的观察点的血浆浓度时间曲线下面积
BLD 检测下限
BSA 体表面积
BUN 血液尿素氮
C0 开始浓度
CL 清除率
Cmax 最大血浆浓度
CRC 结肠直肠癌
CTCAEv3 不利事件版本3的常规术语标准
CV 心血管的
DLT 剂量限制毒性
DNA 脱氧核糖核苷酸
EC50 产生50%的最大效应的浓度
ECG 心电图
FcR Fc受体
5-FU 5-氟尿嘧啶
GI 胃肠的
GIST 胃肠道间质瘤
GLP 药品安全性试验规范
HCT 血细胞比容
hERG 人快速延迟性整流性钾通道基因
hERG-IKr 人快速延迟性整流性钾通道基因通道阻断
HGB 血红蛋白
GI50 50%细胞生长抑制浓度
IC50 50%酶活性抑制浓度
IGF 胰岛素样生长因子
IGF-1R 1型,胰岛素样生长受体
IL 白细胞介素
IP 腹膜内注射
IV 静脉注射
LLN 正常的下限
LLOQ 定量的下限
LV 亚叶酸
MMNG N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍
MTD 最大耐受剂量
NAD 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
NOAEL 未观察到不利事件的浓度
PARP 聚(ADP-核糖)聚合酶
PBMCs 外周血单核细胞
PD 药效学
PID PARP-抑制剂量
PK 药物代谢动力学
PO 服
RBC 红血细胞
RECIST 实体瘤响应评价标准
QC 质量控制
SAE 严重的不利事件
SWFI/SWI 注射用无菌水
t1/2 表观的末端半衰期
Tmax 出现Cmax的时间
ULN 正常的上限
Vdss 稳态分布的量
WFI 注射用水
附图简述
图1表示关于与用作抑制SW620异种移植的8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐联合的替莫唑胺的有效性的数据。
图2表示关于与用作抑制SW620异种移植的8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮的葡萄糖醛酸盐联合替莫唑胺的有效性的数据。
图3表示当30-分钟IV输注给予磷酸盐和给予口服替莫唑胺100mg/m2时,第7天(单独8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐)和第1天和第4天(8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐+替莫唑胺)平均的8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮血浆浓度-时间分布。
图4表示给药8-氟-2-{4-[(甲氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮之后外周血淋巴细胞中中值PARP活性。
发明详述
式1化合物的及其盐,可以按照美国专利号6,495,541、PCT申请号PCT/IB2004/000915、美国临时专利申请号60/612,457和美国临时专利申请号60/612,459描述的制备,其在此以全文并入作为参考。某些起始原料可以根据本领域技术人员熟悉方法制备,而且根据本领域技术人员熟悉的方法可以进行某些合成修饰。
式1化合物能够与无机和有机酸形成广泛的多种不同的盐类。虽然这样的盐必须是药学上可接受的用于给药哺乳动物,在实践中,常常期望最初从反应混合物中分离出式1化合物作为药学上不可接受的盐,然后通过用碱性试剂处理使后者简单地转变成游离碱化合物,随后把后者的游离碱转变成药学上可接受的酸加成盐。本发明碱性化合物的酸加成盐是容易制得的,通过用含基本上等量的选择的无机酸或有机酸在水性溶剂介质或适合的有机溶剂如甲醇或乙醇中处理碱性化合物。谨慎地蒸发溶剂,容易获得期望的固体盐。通过把适合的无机酸或有机酸加入到溶液中,还可以是从游离碱的有机溶剂中沉淀出期望的酸式盐。制备优选的盐,磷酸盐的特定的实例可以在PCT申请号PCT/IB2004/000915、美国临时专利申请号60/612,457和美国临时专利申请号60/612,459找到,其公开的内容在此以全文并入作为参考。
通过能使化合物传送至作用位点的任何方法,可以完成式1化合物的给药。这些方法包括口服途径、十二指肠内途径、胃肠外注射(包括静脉、皮下、肌内、血管内或输注)、局部和直肠给药。
例如,该化合物可以是以适于口服给药如片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、持续释放制剂、溶液、混悬液,适于胃肠外注射如无菌溶液、混悬液或乳液,适于局部给药如软膏剂或霜剂或适于直肠给药如栓剂的形式提供。
该化合物可以是适于精确剂量的单个给药的单位剂型。优选地,剂型含有常规的药用载体或赋形剂和作为活性成分的式1化合物。此外,剂型可以包含其他的医用或药用的试剂、载体、佐剂等。
示例性的胃肠外给药的形式包括无菌水溶液的溶液或混悬液,例如水性的丙二醇或葡萄糖溶液。如果需要,这样的剂型可以适当地缓冲。
适合的药用载体包括无活性的稀释剂或填充剂,水和多种有机溶剂。如果期望,药物组合物可以含有另外的成分如调味剂、粘合剂、辅料和类似物。因此就口服给药而言,含有多种辅料的片剂,如柠檬酸可以和多种崩解剂如淀粉、海藻酸和某些复合的硅酸盐以及粘合剂如蔗糖、明胶和阿拉伯胶一起使用。此外,润滑剂如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠和滑石常常用于压片目的。同样类型的固体组分也可以用在软和硬填充的明胶胶囊中。因此,优选的物质包括乳糖或乳糖(milksugar)以及高分子量的聚乙二醇。当水性的混悬剂或酏剂期望用于口服给药时,其中的活性成分可以配伍多种甜味剂或芳香剂、着色物质或颜料,而且如果期望,乳化剂或助悬剂连同稀释剂如水、乙醇、丙二醇、甘油或其组合。
在本发明剂型的一个优选的实施方案中,该剂型是口服剂型,更优选地是片剂或胶囊剂。
在本发明方法的一个优选的实施方案中,式1化合物是胃肠外给药,例如使用冻干粉。临床用注射的冻干粉的制备是在美国临时专利申请号60/612,459中描述的,其公开的内容在此以全文并入作为参考。
例如,式1化合物的磷酸盐可以配制并提供为注射用的冻干粉。12mg/瓶(作为游离碱),10mL/20mm,I型,琥珀色玻璃管形瓶。式1化合物的磷酸盐的组合物的药品可以是由式1化合物的磷酸盐、甘露醇、注射用水和氮气组成。所得的药品可以是米色至黄色的饼状物。每个药物产品瓶可以用6mL的注射用无菌水重建获得2.02mg/mL(四舍五入至2mg/mL),为式1化合物的游离碱。
在本发明优选的实施方案中,式1化合物的血浆浓度维持在5.9ng/mL或以上。根据抑制细胞NAD+消耗和多聚-ADP-核糖聚合物形成且调节蛋白结合的靶效应(IC89)来测定该值。特别地,如实施例4中所示,式1化合物在5nM(替莫唑胺PF50=1.3)时,大大地减少了A549细胞中MNNG-诱导的细胞NAD+消耗并抑制89%的多聚-ADP-核糖形成。校正人蛋白结合(27.4%平均未结合的式1化合物浓度介于0.05-25nM)的5nM靶效应,获得5.9ng/mL的血浆浓度:
II.本发明的药物组合物及其应用
在本发明的一个实施方案中,式1化合物是用于增强细胞中毒类药的效力,所述细胞中毒类药的机制依赖于DNA损伤。这些药物包括但不限于替莫唑胺(SCHERING)、伊立替康(PFIZER)、托泊替康(GLAXOSMITHKLINE)、顺铂(BRISTOL MEYERS SQUIBB;AM PHARM PARTNERS;BEDFORD;GENSIA SICOR PHARMS;PHARMACHEMIE),和盐酸阿霉素(AMPHARM PARTNERS;BEDFORD;GENS IA;S ICOR PHARMS;PHARMACHEMIE;ADRIA;ALZA)。
通常以药物组合物的形式,给药治疗有效量的本发明的药物来治疗PARP的调变或调节介导的疾病。"有效量"意欲指的是当给药于需要此治疗的哺乳动物包括人时,足以有效地治疗由一种或多种PARP酶介导的疾病的药物的量。因此,本发明化合物的治疗有效量是足以调整、调节或抑制一种或多种PARP酶的活性以便减轻或缓解由该活性介导的疾病症状的量。给定化合物的有效量将根据以下因素变化,如疾病情况及其严重度、需要治疗的哺乳动物的特性和条件(例如,体重),但是尽管如此可以由本领域技术人员常规地确定。"治疗"意欲指的是至少缓和哺乳动物包括人的疾病情况,所述疾病情况是至少部分上被一种或多种PARP酶的活性影响,并包括:预防哺乳动物中疾病情况的发生,特别是当发现哺乳动物倾向于患有了疾病情况但是还未诊断出患有该疾病情况;调节和/或抑制病症;和/或减轻疾病情况。示例性的病症包括癌症。
作为PARP活性调节剂的式1化合物的活性可以通过本领域技术人员可用的任何方法测量,包括体内和/或体外测定。测量活性的适合测定法的实例包括美国专利号6,495,541及本发明说明书中描述的那些。
本发明涉及治疗PARP活性介导的病症的治疗方法,所述病症是例如癌症和涉及氧化的或一氧化氮引起的应激和后来的PARP活动过度的多种疾病和中毒状态。这样的病症包括,但不限于神经和神经变性的病症(例如,帕金森病、阿耳茨海默病)、心血管病症(例如,心肌梗死、缺血再灌注损伤)、糖尿病的血管功能障碍、顺铂引起的中毒性肾损害。本发明的治疗方法包括给予有此需要的哺乳动物治疗有效量药物组合物,所述药物组合物包括任何多晶型、或以上讨论的药物组合物。
本发明还涉及治疗哺乳动物包括人的异常细胞生长的方法,包括给予该哺乳动物有效治疗异常细胞生长的以上定义量的式1化合物,或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在此方法的一个实施方案中,异常细胞生长是癌症,包括但不限于间皮瘤、hepatobilliary(肝和billiary duct)、原发性或继发性的CNS肿瘤、原发性或继发性的脑瘤、肺癌(NSCLC and SCLC)、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼黑色素瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、胃肠(胃的、结肠直肠的和十二指肠的)癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、睾丸癌、慢性或急性白血病、慢性髓细胞样白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统的新生物(CNS)、原发性中枢神经的淋巴瘤、非霍奇金淋巴癌、脊椎肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、肾上腺皮质癌、胆囊癌、多发性骨髓瘤、胆管癌、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、视网膜母细胞瘤,或前述癌症的一种或多种的组合。
在该方法的另一个实施方案中,该异常细胞生长是良性的增殖疾病,包括但不限于银屑病、良性前列腺肥大或restinosis。
本发明还涉及治疗哺乳动物异常细胞生长的方法,包括给药该哺乳动物一定量的式1化合物,或其药学上可接受的盐或溶剂合物,其与选自有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢物、嵌入抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶类、拓扑异构酶抑制剂、生物反应修饰剂、抗体、细胞毒素、抗激素类和抗雄激素类的抗肿瘤剂组合有效地治疗异常细胞生长。
本发明还涉及治疗哺乳动物包括人异常细胞生长的药物组合物,包含如上定义量的有效地治疗异常细胞生长的式1化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物,以及药学上可接受的载体。在该组合物的一个实施方案中,该异常细胞生长是癌症,包括但不限于间皮瘤、hepatobilliary(肝和billiary duct)、原发性或继发性的CNS肿瘤、原发性或继发性的脑瘤、肺癌(NSCLC and SCLC)、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼的黑色素瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、胃肠(胃的、结肠直肠的和十二指肠的)癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、睾丸癌、慢性或急性白血病、慢性髓细胞样白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统的新生物(CNS)、原发性中枢神经的淋巴瘤、非霍奇金淋巴癌、脊椎肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、肾上腺皮质癌、胆囊癌、多发性骨髓瘤、胆管癌、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、视网膜母细胞瘤、或一种或多种前述癌症的组合。在该药物组合物的另一个实施方案中,该异常细胞生长是良性的增殖疾病,包括但不限于银屑病、良性前列腺肥大或restinosis。
本发明还涉及治疗哺乳动物包括人的异常细胞生长的药物组合物,其包含如上定义量的式1化合物,或其药学上可接受的盐或溶剂合物,其与药学上可接受的载体和选自有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢物、嵌入抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶类、拓扑异构酶抑制剂、生物反应修饰剂、抗体、细胞毒素、抗激素类和抗雄激素类的抗肿瘤剂组合有效地治疗异常细胞生长。
本发明还涉及治疗哺乳动物中过度增生疾病的方法,包括给予该哺乳动物治疗有效量的式1化合物或其药学上可接受的盐或水合物,与选自抗增殖剂、激酶抑制剂、血管生成抑制剂、生长因子抑制剂、cox-I抑制剂、cox-II抑制剂、有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢物、嵌入抗生素、生长因子抑制剂、放射、细胞周期抑制剂、酶类、拓扑异构酶抑制剂、生物反应修饰剂、抗体类、细胞毒素类、抗激素类、他汀类和抗雄激素类的抗肿瘤剂的联合。
本发明还涉及治疗PARP活性介导的病症的组合治疗方法,包括向有此需要的哺乳动物给予治疗有效量的药物组合物,其含有以上讨论的任何多晶型或药物组合物和治疗有效量一种或多种选自抗肿瘤剂、血管生成抑制、信号传导抑制剂和抗增殖剂的物质。这样的物质包括PCT公布号WO 00/38715、WO 00/38716、WO 00/38717、WO 00/38718、WO 00/38719、WO 00/38730、WO 00/38665,WO 00/37107和WO 00/38786中公开的那些,其公开的内容在此以全文并入作为参考。
抗肿瘤剂的实例包括替莫唑胺(SCHERING)、伊立替康(PFIZER)、托泊替康(GLAXO SMITHKLINE)、顺铂(BRISTOL MEYERSSQUIBB;AM PHARM PARTNERS;BEDFORD;GENSIA SICOR PHARMS;PHARMACHEMIE)和盐酸阿霉素(AM PHARM PARTNERS;BEDFORD;GENSIA;SICOR PHARMS;PHARMACHEMIE;ADRIA;ALZA)。
联合治疗方法包括使用任何希望的剂量用法给药式1化合物和抗肿瘤剂。例如,用药法可以取决于以下的联合药剂:
(a)给药25-200mg/m2替莫唑胺之前,优选是100-200mg/m2替莫唑胺之前1小时,式1化合物、药学上可接受的盐或溶剂合物、或其混合物可以表示为式1化合物的等量的游离碱的1-48mg/m2的量给药,每28天,每日给药连续5天;
(b)式1化合物、药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,可以是以1-48mg/m2的量给药,表示为式1化合物的等量的游离碱,伊立替康给药前1小时和24小时后。
伊立替康的剂量范围:
每6周,每周62-125mg/m2连续4周
每3周175-350mg/m2
每2周90-180mg/m2
(c)托泊替康给药前1小时,式1化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物可以表示为式1化合物的等量的游离碱的1-48mg/m2的量给药,每21天,每日给药连续5天。
托泊替康的剂量范围:
每21天,每日0.75-1.5mg/m2连续5天
(d)顺铂给药前1小时,式1化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,可以表示为式1化合物的等量的游离碱的1-48mg/m2的量给药,每3-4周一次或者每3-4周,每日给药连续3-5天。
顺铂的剂量范围:
每3-4周,10-100mg/m2
每3-4周,每日10-40mg/m2连续3-5天
(e)式1化合物,药学上可接受的盐或溶剂合物,或其混合物,可以表示为式1化合物的等量的游离碱的1-48mg/m2的量给药,在多柔比星给药前1小时和24小时后。
多柔比星的剂量范围:
每21-28天的20-75mg/m2
本发明的联合治疗方法可包括以表示为式1化合物的等量的游离碱的1-48mg/m2的量给药式1化合物、药学上可接受的盐或溶剂合物、或其混合物,以及抗肿瘤剂,例如给药法如表1所示:
表1
药名 | 用法 | 参考 |
伊立替康 | 第1、8、15、22天,90分钟给药125mg/m2,每6周重复 | Saltz et al.NEngl J Med.2000;343:905-914. |
伊立替康 | 第1天,90分钟IV 300或350mg/m2,每3周重复 | Cunningham et al.Lancet.1998;352:1413-1418. |
IFLSaltzreg imen | 第1、8、15、22天,90分钟内IV伊立替康125mg/m2,第1、8、15、22天,IV推注LV20mg/m2,第1、8、15、22天,IV推注5-FU500mg/m2,每6周重复 | Saltz et al.N Engl JMed.2000;343:905-914. |
伊立替康+5-FU/LVDouillardregimen | 2小时内给药伊立替康180mg/m2,第1天先于5-FU,2小时内IV给药LV200mg/m2,第1和2天IV推注5-FU400mg/m2,然后22小时内持续输注600mg/m2,第1和2天每2周重复 | Douillard et al.Lancet.2000;355:1041-1047. |
FOLFIRI | 第1天,90分钟内给药伊立替康180mg/m2,第1和2天,给药伊立替康时2小时内给药LV200mg/m2,推注5-FU400mg/m2,然后46小时内持续输注2.4-3g/m2,每2周重复 | André et al.Eur JCancer.1999;35:1343-1347.Tournigand et al.J ClinOncol.2004;23:229-237. |
Caplri | 一日两次PO卡培他滨1,000mg/m2,第1-14天伊立替康100mg/m2,第1和8天每22天重复 | Grothey et al.Proc Am SocClin Oncol.2003;22:255.Abstract 1022. |
药名 | 用法 | 参考 |
XELIRI | 伊立替康250mg/m2IV,第1天一日两次PO卡培他滨1,000mg/m2,第1天晚-第15天早晨每3周重复 | Patt et al.Proc Am Soc ClinOncol.2004;23;271.Abstract3602. |
IROX | 第1天,90分钟IV立替康200mg/m2,第1天,2小时内IV奥沙利铂85mg/m2,每3周重复 | Goldberg et al.J Clin Oncol.2004;22:23-30. |
IFL+贝伐单抗 | 第1、8、15、22天,90分钟内IV伊立替康125mg/m2,第1、8、15、22天,LV20mg/m2IV,第1、8、15、22天,5-FU500mg/m2IV,每6周重复化疗之后,90分钟内贝伐单抗5mg/kg IV *,第1天每2周重复 | Hurwitz et al.N Engl J Med.2004;350:2335-2342. |
CRC=结肠直肠癌;5-FU=5-氟尿嘧啶;LV=亚叶酸。
*如果第一次输注时耐受良好,以后的输注可以在60分钟内给予,然后30分钟。
可以修改表1列出的给药方案。例如,伊立替康给予50-350mg/m2的剂量,5-FU可以370mg/m2-3.0g的剂量给予。LV可以20-500mg/m2给予。
例如在治疗未能用如表2给出的治疗法治疗的患者中,可以使用本发明的联合治疗方法,其包括以表示为式1化合物的等量的游离碱的1-48mg/m2的量给药式1化合物、药学上可接受的盐或溶剂合物、或其混合物,以及一种抗肿瘤剂。
表2
药名 | 用法 | 参考 |
FOLFOX4 | 第1天2小时内IV奥沙利铂85mg/m2,第1和2天,2小时内IV LV 200mg/m2,第1和2天,IV推注5-FU 400mg/m2,22小时内IV 600mg/m2,每2周重复 | de Gramont等人J ClinOncol.2000;18:2938-2947.Rothenberg等人J ClinOncol.2003;21:2059-2069. |
FOLFOX6 | 第1天2小时内IV奥沙利铂100mg/m2,第1天2小时内IV LV 200mg/m2,IV推注5-FU 400mg/m2,然后46小时内连续输注2.4-3g/m2,每2周重复 | Maindrault-Goebel等人Eur J Cancer.1999;35:1338-1342.Tournigand等人J ClinOncol.2004;23:229-237. |
mFOLFOX6 | 第1天2小时内IV奥沙利铂85mg/m2,第1天2小时内IV LV 175mg/m2,IV推注5-FU 400mg/m2,然后46小时内连续输注2.4-3g/m2,每2周重复 | Cheeseman等人Br JCancer.2002;87:393-399. |
FOLFOX7 | 第1天2小时内IV奥沙利铂130mg/m2,2小时内IV LV 400mg/m2,46小时内IV 5-FU 2,400mg/m2,连续输注每2周重复,6个周期 | André等人Proc AmSoc Clin Oncol.2003;22:253.Abstract1016. |
FLOX | 第1、15、29天2小时内IV奥沙利铂85mg/m2,第1、8、15、22、29、36天2小时内IV LV 500mg/m2,第1、8、15、22、29、36天LV开始后1小时IV推注5-FU 500 mg/m2,每8周重复,3个周期 | Smith等人Proc Am SocClin Oncol.2003;22:294.Abstract 1181. |
FUFOX | 第1、8、15、22天2小时内IV奥沙利铂60mg/m2,第1、8、15、22天2小时内IV LV 500mg/m2,第1、8、15、22天24小时内IV 5-FU 2.6g/m2,连续输注,每36天重复 | Moehler等人ZGastroenterol.2002;40:957-964. |
药名 | 用法 | 参考 |
bFOL | 24小时内IV奥沙利铂85mg/m2,每2周第1、8、15天10-20分钟内小时内IV LV 20mg/m2,第1、8、15天IV推注5-FU 500mg/m2,每28天重复 | Hochester等人J ClinOncol.2003;21:2703-2707. |
FOLFOX4+贝伐单抗 | 第1天2小时内IV奥沙利铂85mg/m2,第1和2天2小时内IV LV 200mg/m2,第1和2天IV推注5-FU 400mg/m2,然后2小时内IV 600mg/m2,第1天90分钟内IV贝伐单抗10mg/kg*每2周重复 | Benson等人Proc AmSoc Clin Oncol.2003;22:243.Abstract975. |
FOLFOX4+西妥昔单抗 | 第1天2小时内IV奥沙利铂85mg/m2,第1和2天2小时内IV LV 200mg/m2,第1和2天IV推注5-FU 400mg/m2,然后22小时内IV600mg/m2,每2周重复第1周2小时内IV西妥昔单抗400mg/m2,接着每周60分钟内IV 250mg/m2 | Tabernero等人ProcAm Soc Clin Oncol.2004;23:248.Abstract3512. |
剂量单位是以每m2的BSA的mg表示。例如,Mosteller公式、DuBois和DuBois公式、Haycock公式、Gehan和George公式、Boyd公式是用于测量BSA(Mosteller RD:Simplified Calculation of BodySurface Area.N Engl J Med 1987 Oct 22;317(17):1098;DuBois D;DuBois EF:A formula to estimate the approximate surface areaif height and weight be known.Arch Int Med 1916 17:863-71;Haycock G.B.,Schwartz G.J.,Wisotsky D.H.Geometricmethod formeasur ing body surface area:A height weight formula validatedin infants,children and adults.The Journal of Pediatrics1978 93:1:62-66;Gehan EA,George SL,Estimation of human bodysurfacearea from height and weight.Cancer Chemother Rep 197054:225-35;Boyd E,The growth of the surface area of the humanbody.Minneapolis:university of Mi nnesota Press,1935;Lam TK,Leung DT:More on simplified calculation of body-surface area.N Engl J Med 1988 Apr 28;318(17):1130)。
抗肿瘤剂另外的实例包括抗增殖剂、激酶抑制剂、血管生成抑制剂、生长因子抑制剂、cox-I抑制剂、cox-II抑制剂、有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢物、嵌入抗生素、生长因子抑制剂、放射、细胞周期抑制剂、酶类、拓扑异构酶抑制剂、生物反应修饰剂、抗体类、细胞毒素类、抗激素类、他汀类和抗雄激素类。
在本发明的一个实施方案中,与本文所述的式1化合物和药物组合物一起使用的抗肿瘤剂是血管生成抑制、激酶抑制剂、全激酶抑制剂或生长因子抑制剂。
优选的全激酶抑制剂包括SU-11248,描述于美国专利号6,573,293(Pfizer,Inc,NY,USA)中。
血管生成抑制,包括但不限于以下的药物,如EGF抑制剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂、VEGFR抑制剂、TIE2抑制剂、IGF1R抑制剂、COX-II(环氧合酶II)抑制剂、MMP-2(基质金属蛋白酶2)抑制剂和MMP-9(基质金属蛋白酶9)抑制剂。
例如,优选的VEGF抑制剂包括Avastin(贝伐单抗),Genentech,Inc.of South San Francisco,California的抗-VEGF单克隆抗体。
另外的VEGF抑制剂包括CP-547,632(Pfizer Inc.,NY,USA)、AG13736(Pfizer Inc.)、ZD-6474(AstraZeneca)、AEE788(Novartis)、AZD-2171)、VEGF Trap(Regeneron,/Aventis)、Vatalanib(也称为PTK-787、ZK-222584:Novartis & Schering AG)、Macugen(pegaptaniboctasodium、NX-1838、EYE-001、Pfizer Inc./Gilead/Eyetech)、IM862(Cytran Inc.of Kirkland,Washington,USA);以及angiozyme,一种来自Ribozyme(Boulder,Colorado)和Chiron(Emeryville,California)及其组合的合成的核酶。用于本发明实际的VEGF抑制剂在美国专利号6,534,524和6,235,764中公开了,两者以所有目的的全文并入。特别优选的VEGF抑制剂包括CP-547,632、AG13736、Vatalanib、Macugen及其组合。
另外的VEGF抑制剂记载于,例如WO 99/24440(1999年5月20日公布)、PCT国际申请PCT/IB99/00797(1999年5月3日提交)、WO95/21613(1995年8月7日公布)、WO 99/61422(1999年12月2日公布)、美国专利6,534,524(公开了AG13736)、美国专利5,834,504(1998年11月10日出版)、WO 98/50356(1998年11月12日公布)、美国专利5,883,113(1999年3月16日出版)、美国专利5,886,020(1999年3月23日出版)、美国专利5,792,783(1998年8月11日出版)、美国专利号US 6,653,308(2003年11月25日出版)、WO 99/10349(1999年3月4日公布)、WO 97/32856(1997年9月12日公布)、WO97/22596(1997年6月26日公布)、WO 98/54093(1998年12月3日公布)、WO 98/02438(1998年1月22日公布)、WO 99/16755(1999年4月8日公布)和WO 98/02437(1998年1月22日公布),所有这些在此以全文并入作为参考。
可与本发明的化合物一起使用其他的抗增殖剂包括酶法呢基蛋白质转移酶的抑制剂和受体酪氨酸激酶PDGFr的抑制剂,包括在以下美国专利申请中公开和要求的化合物:09/221946(1998年12月28日提交)、09/454058(1999年12月2日提交)、09/501163(2000年2月9日提交)、09/539930(2000年3月31日提交)、09/202796(1997年5月22日提交)、09/384339(1999年8月26日提交)和09/383755(1999年8月26日提交),以及在以下美国临时专利申请中公开和要求的化合物:60/168207(1999年11月30日提交)、60/170119(1999年12月10日提交)、60/177718(2000年1月21日提交)、60/168217(1999年11月30日提交)和60/200834(2000年5月1日提交)。每个上述的专利申请和临时专利申请是以全文并入作为参考。
PDGRr抑制剂包括但不限于2001年7月7日公布的国际专利申请号WO01/40217和2004年3月11日公布的国际专利申请号WO2004/020431中公开的那些,其内容根据所有目的以全文并入。
优选的PDGFr抑制剂包括辉瑞的CP-673,451和CP-868,596及其药学上可接受的盐。
优选的GARF抑制剂包括辉瑞的AG-2037(pelitrexol)及其药学上可接受的盐。本发明实践中所用的GARF抑制剂是公开在美国专利号5,608,082中,其根据所有目的以全文并入。
可以与本文描述的式1化合物和药物组合物一起使用的有用的COX-II抑制剂的实例包括CELEBREXTM(塞来考昔)、帕瑞考昔、地拉考昔、ABT-963、MK-663(艾托考昔)、COX-189(罗非昔布)、BMS 347070、RS 57067、NS-398、Bextra(伐地考昔)、paracoxib、Vioxx(罗非考昔)、SD-8381、4-甲基-2-(3,4-二甲苯基)-1-(4-氨磺酰基-苯基)-1H-吡咯、2-(4-乙氧基苯基)-4-甲基-1-(4-氨磺酰基苯基)-1H-吡咯、T-614、JTE-522、S-2474、SVT-2016、CT-3、SC-58125和Arcoxia(艾托考昔)。另外地,COX-II抑制剂公开在美国专利申请号10/801,446和10/801,429,其内容根据所有目的以全文并入。
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如美国专利号5,466,823中公开的塞来考昔,其内容根据所有目的以全文并入作为参考。塞来考昔的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如美国专利号5,633,272中公开的伐地考昔,其内容根据所有目的以全文并入作为参考。伐地考昔的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如美国专利号5,932,598中公开的帕瑞考昔,其内容根据所有目的以全文并入作为参考。帕瑞考昔的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如美国专利号5,521,207中公开的地拉考昔,其内容根据所有目的以全文并入作为参考。地拉考昔的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如美国专利号6,034,256中公开的SD-8381,其内容根据所有目的以全文并入作为参考。SD-8381的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如国际公布号WO2002/24719中公开的ABT-963,其内容根据所有目的以全文并入作为参考。ABT-963的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如下所示的罗非考昔:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如国际公布号WO1998/03484中公开的MK-663(艾托考昔),其内容根据所有目的以全文并入作为参考。艾托考昔的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如国际公布号WO1999/11605中公开的COX-189(Lumiracoxib),其内容根据所有目的以全文并入作为参考。Lumiracoxib的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是如美国专利号6,180,651中公开的BMS-347070,其内容根据所有目的以全文并入作为参考。
BMS-347070的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是NS-398(CAS123653-11-2)。NS-398(CAS 123653-11-2)的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是RS57067(CAS17932-91-3)。RS-57067(CAS 17932-91-3)的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是4-甲基-2-(3,4-二甲苯基)-1-(4-氨磺酰基-苯基)-1H-吡咯。4-甲基-2-(3,4-二甲苯基)-1-(4-氨磺酰基-苯基)-1H-吡咯的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是2-(4-乙氧基苯基)-4-甲基-1-(4-氨磺酰基苯基)-1H-吡咯。2-(4-乙氧基苯基)-4-甲基-1-(4-氨磺酰基苯基)-1H-吡咯的结构是如下所示:
在一个优选的实施方案中,抗肿瘤剂是美洛昔康。美洛昔康的结构是如下所示:
作为抗肿瘤剂与本文描述的式1化合物和药物组合物一起使用的其他有用的抑制剂包括阿斯匹林及抑制产生前列腺素的酶(环氧合酶I和II)致使前列腺素水平更低的非甾体类抗炎药(NSAIDs),包括但不限于以下双水杨酯(Amigesic)、二氟尼柳(Dolobid)、布洛芬(Motrin)、酮洛芬(Orudis)、萘丁美酮(Relafen)、吡罗昔康(Feldene)、萘普生(Aleve、Naprosyn)、双氯芬酸(Voltaren)、吲哚美辛(Indocin)、舒林酸(Clinoril)、托美丁(Tolectin)、依托度酸(Lodine)、酮咯酸(Toradol)、奥沙普秦(Daypro)及其组合。
优选的COX-I抑制剂包括布洛芬(Motrin)、磺胺二甲噁唑、萘普生(Aleve)、吲哚美辛(Indocin)、萘丁美酮(Relafen)及其组合。
与本文记载的式1化合物和药物组合物一起使用的靶向剂包括EGFr抑制剂如Iressa(gefitinib,AstraZeneca)、Tarceva(erlotinib或OSI-774、OSI Pharmaceuticals Inc.)、Erbitux(cetuximab,Imclone Pharmaceuticals,Inc.)、EMD-7200(Merck AG)、ABX-EGF(Amgen Inc.和Abgenix Inc.)、HR3(CubanGovernment)、IgA抗体类(University of Erlangen-Nuremberg)、TP-38(IVAX)、EGFR融合蛋白、EGF-疫苗、抗-EGFr免疫脂质体(HermesBiosciences Inc.)及其组合。
优选的EGFr抑制剂包括Iressa、Erbitux、Tarceva及其组合。
本发明还涉及选自pan erb受体抑制剂或ErbB2受体抑制剂的抗肿瘤剂,如CP-724,714(Pfizer,Inc.)、CI-1033(canertinib,Pfizer、Inc.)、赫赛汀(trastuzumab,Genentech Inc.)、Omitarg(2C4,pertuzumab,Genentech Inc.)、TAK-165(Takeda)、GW-572016(lonafarnib,GlaxoSmithKline)、GW-282974(GlaxoSmithKline)、EKB-569(Wyeth)、PKI-166(Novartis)、dHER2(HER2 Vaccine,Corixa和GlaxoSmithKline)、APC8024(HER2 Vaccine,Dendreon)、抗-HER2/neu双特异性抗体(Decof Cancer Center)、B7.her2.IgG3(Agensys)、AS HER2(Research Institute for Rad Biology &Medicine)、三功能性的双特异性抗体(University of Munich)和mABAR-209(Aronex Pharmaceuticals Inc)和mAB 2B-1(Chiron)及其组合。优选的erb选择性抗肿瘤剂包括赫赛汀、TAK-165、CP-724,714、ABX-EGF、HER3及其组合。
优选的pan erbb受体抑制剂包括GW572016、CI-1033、EKB-569和Omitarg及其组合。
另外的erbB2抑制剂包括WO 98/02434(1998年1月22日公布)、WO 99/35146(1999年7月15日公布)、WO 99/35132(1999年7月15日公布)、WO 98/02437(1998年1月22日公布)、WO 97/13760(1997年4月17日公布)、WO 95/19970(1995年7月27日公布)、美国专利5,587,458(1996年12月24日出版)和美国专利5,877,305(1999年3月2日出版)中描述的那些,其各自在此以全文并入作为参考。本发明中有用的ErbB2受体抑制剂还描述在美国专利号6,465,449和6,284,764,及国际申请号WO 2001/98277中,其各自在此以全文并入作为参考。
此外,其他的抗肿瘤剂可以是选自以下的药物,BAY-43-9006(Onyx Pharmaceuticals Inc.)、Genasense(augmerosen,Genta)、Panitumumab(Abgenix/Amgen)、Zevalin(Schering)、Bexxar(Corixa/GlaxoSmithKline)、阿巴瑞克、Alimta、EPO 906(Novartis)、discodermolide(XAA-296)、ABT-510(Abbott)、新伐司他(Aeterna)、enzastaurin(Eli Lilly)、Combrestatin A4P(Oxigene)、ZD-6126(AstraZeneca)、flavopiridol(Aventis)、CYC-202(Cyclacel)、AVE-8062(Aventis)、DMXAA(Roche/Antisoma)、Thymitaq(Eximias)、Temodar(替莫唑胺、Schering Plough)和Revilimd(Celegene)及其组合。
其他的抗肿瘤剂可以选自以下的药物,CyPat(醋酸环丙氯地孕酮)、Histerelin(醋酸组氨瑞林)、Plenaixis(阿巴瑞克己酸羟孕酮)、阿曲生坦(ABT-627)、沙铂(JM-216)、thalomid(沙利度胺)、癌疫苗、Temilifene(DPPE)、ABI-007(紫杉醇)、Evista(雷洛昔芬)、阿他美坦(Biomed-777)、Xyotax(polyglutamate紫杉醇)、Targetin(bexarotine)及其组合。此外,其他的抗肿瘤剂可以选自以下的药物,Trizaone(替拉扎明)、Aposyn(依昔舒林)、Nevastat(AE-941)、Ceplene(二盐酸组胺)、Orathecin(卢比替康)、维鲁利秦、Gastrimmune(G17DT)、DX-8951f(甲磺酸依沙替康)、Onconase(豹蛙酶)、BEC2(米妥莫单抗)、Xcytrin(莫特沙芬钆)及其组合。
进一步的抗肿瘤剂可以选自以下的药物,CeaVac(CEA)、三甲曲沙(葡萄糖醛酸三甲曲)及其组合。
另外的抗肿瘤剂可以选自以下的药物,OvaRex(oregovomab)、Osidem(IDM-1)及其组合。
另外的抗肿瘤剂可以选自以下的药物,Advexin(IN G201)、Tirazone(替拉扎明)及其组合。
另外的抗肿瘤剂可以选自以下的药物,RSR13(efaproxiral)、Cotara(131I chTNT l/b)、NBI-3001(IL-4)及其组合。
另外的抗肿瘤剂可以选自以下的药物,Canvaxin、GMK疫苗、PEGInteron A、Taxoprexin(DHA/paciltaxel)及其组合。
其他优选的抗肿瘤剂包括Pfizer’s MEK1/2抑制剂PD325901、Array Biopharm’s MEK抑制剂ARRY-142886、Bristol Myers’CDK2抑制剂BMS-387,032、Pfizer’s CDK抑制剂PD0332991和AstraZeneca’s AXD-5438及其组合。
另外地,还可以利用mTOR抑制剂如CCI-779(Wyeth)和雷怕霉素衍生物RAD001(Novartis)和AP-23573(Ariad)、HDAC抑制剂SAHA(Merck Inc./Aton Pharmaceuticals)及其组合。
另外的抗肿瘤剂包括aurora 2抑制剂VX-680(Vertex)、Chk1/2抑制剂XL844(Exilixis)。
以下细胞毒素剂,例如一个或多个选自表柔比星(Ellence)、多西紫杉醇(Taxotere)、紫杉醇、右雷佐生(右丙亚胺)、利妥昔单抗(Rituxan)、甲磺酸伊马替尼(Gleevec)及其组合,可以与本文描述的式1化合物和药物组合物一起使用。
本发明还关注本发明的化合物和激素治疗的一起使用,包括但不限于,依西美坦(Aromasin,Pfizer Inc.)、亮丙瑞林(Lupron或Leuplin,TAP/Abbott/Takeda)、阿那曲唑(Arimidex,Astrazeneca)、gosrelin(Zoladex,AstraZeneca)、度骨化醇、法倔唑、福美坦、柠檬酸他莫昔芬(tamoxifen、Nolvadex、AstraZeneca)、康士得(AstraZeneca)、阿巴瑞克(Praecis)、Trelstar及其组合。
本发明还涉及激素治疗剂如抗雌激素类,包括但不限于氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、来曲唑(Femara、Novartis),抗雄激素类如比卡鲁胺、氟他胺、米非司酮、尼鲁米特、康士得(4'-氰基-3-(4-氟苯基磺酰)-2-羟基-2-甲基-3'-(三氟甲基)propionanilide、比卡鲁胺)及其组合。
进一步,本发明提供本发明的化合物单独或连同一种或多种支持性医护品,例如选自非格司亭(Neupogen)、昂丹司琼(Zofran)、法安明、重组人类红细胞生成素α(Procrit)、Aloxi、Emend或其组合的产品。
特别优选的细胞毒素剂包括盐酸伊立替康的山梨醇注射剂(Camptosar)、Erbitux、Iressa、Gleevec、泰索帝及其组合。
以下的拓扑异构酶I抑制剂可用作抗肿瘤剂,喜树碱、伊立替康HCl(Camptosar)、edotecarin、orathecin(Supergen)、依沙替康(Daiichi)、BN-80915(Roche)及其组合。
优选的拓扑异构酶II抑制剂包括表柔比星(Ellence)。
本发明的化合物可以和抗肿瘤剂、烷化剂、抗代谢物、抗生素、植物衍生的抗肿瘤剂、喜树碱衍生物、酪氨酸激酶抑制剂、抗体类、干扰素类和/或生物反应修饰剂一起使用。
烷化剂,包括但不限于氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺、AMD-473、六甲蜜胺、AP-5280、apaziquone、brostallicin、苯达莫司汀、卡莫司汀、雌莫司汀、福莫司汀、葡磷酰胺、异环磷酰胺、KW-2170、马磷酰胺和二溴卫矛醇;铂协调的烷化化合物,包括但不限于顺铂、伯尔定(carboplatin)、依他铂、洛铂、奈达铂、乐沙定(奥沙利铂、Sanofi)或satrplatin及其组合。特别优选的烷化剂包括乐沙定(奥沙利铂)。
抗代谢物,包括但不限于甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤肌苷、巯嘌呤、5-氟尿嘧啶(5-FU)单独或联合亚叶酸、替加氟、UFT、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷ocfosfate、依诺他滨、S-1、Alimta(培美曲塞二钠、LY231514、MTA)、健择(吉西他滨、Eli Lilly)、氟达拉滨、5-氮杂胞苷、卡培他滨、克拉屈滨、氯苯吩嗪、地西他滨、依洛尼塞、ethynylcytidine、阿糖胞苷、羟基脲、TS-1、美法仑、奈拉滨、诺拉曲塞、ocfosfate、培美曲塞二钠、喷司他丁、pelitrexol、雷替曲塞、triapine、三甲曲沙、阿糖腺苷、长春新碱、长春瑞滨;或者例如,欧洲专利申请号239362中公开优选的抗代谢物之一,如N-(5-[N-(3,4-二氢-2-甲基-4-氧喹唑啉-6-基甲基)-N-甲氨基]-2-噻吩甲酰)-L-谷氨酸及其组合。
抗体包括嵌入抗生素,但不限于:阿柔比星、放线菌素D、氨柔比星、阿米替林、阿霉素、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、依沙芦星、表柔比星、加柔比星、伊达比星、丝裂霉素C、奈莫柔比星、新制癌菌素、培洛霉素、吡柔比星、rebeccamycin、stimalamer、链佐星、戊柔比星、净司他丁及其组合。
植物衍生的抗肿瘤物质包括,例如,选自有丝分裂抑制剂例如长春碱、多西紫杉醇(泰索帝)、紫杉醇及其组合的那些。
细胞毒素的拓扑异构酶抑制剂包括选自的aclarubicn、氨萘非特、belotecan、喜树碱、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、diflomotecan、伊立替康HCl(Camptosar)、edotecarin、表柔比星(Ellence)、依托泊苷、依沙替康、gimatecan、勒托替康、米托蒽醌、吡柔比星、pixantrone、卢比替康、索布佐生、SN-38、tafluposide、托泊替康及其组合一种或多种药物。
优选的细胞毒素的拓扑异构酶抑制剂包括选自的喜树碱、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、伊立替康HCl(Camptosar)、edotecarin、表柔比星(Ellence)、依托泊苷、SN-38、托泊替康及其组合的一种或多种药物。
免疫剂类干扰素类和多种其他的免疫增强剂。干扰素类包括干扰素α、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素β、干扰素γ-1a、干扰素γ-1b(Actimmune)或干扰素γ-n1及其组合。其他的药包括非格司亭、蘑菇多糖、裂裥多糖、TheraCys、乌苯美司、WF-10、阿地白介素、阿仑单抗、BAM-002、达卡巴嗪、达珠单抗、地尼白介素、吉姆单抗奥佐米星、ibritumomab、咪喹莫特、来格司亭、香菇多糖、黑色素瘤疫苗(Corixa)、莫拉司亭、OncoVAX-CL、沙格司亭、他索纳明、替克洛占、胸腺法新、托西莫单抗、维鲁利秦、Z-100、依帕珠单抗、米妥莫单抗、oregovomab、pemtumomab(Y-muHMFG1)、Provenge(Dendreon)及其组合。
生物反应修饰剂是修饰活的有机体防御机制或生物应答如存活、生长,或者分化组织细胞使其具有抗肿瘤活性的药物。这样的药物包括云芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、溶链菌、乌苯美司及其组合。
其他的抗肿瘤剂包括阿利维A酸、聚肌胞、阿曲生坦、贝沙罗汀、bortezomib、波生坦、骨化三醇、依昔舒林、非那雄胺、福莫司汀、伊班膦酸、米替福新、米托蒽醌、I-门冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基脲、培门冬酶、喷司他丁、tazarotne、Telcyta(TLK-286,TelikInc.)、Velcade(bortemazib、Millenium)、维A酸及其组合。
其他的抗生血管的化合物包括阿昔曲丁、芬维A胺、沙利度胺、唑来膦酸、血管他丁、aplidine、cilengtide、考布他汀A-4、内皮他丁、卤夫酮、rebimastat、removab、Revlimid、角鲨胺、ukrain、Vitaxin及其组合。
铂协调的化合物,包括但不限于顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂及其组合。
喜树碱衍生物包括但不限于喜树碱、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、伊立替康、SN-38、edotecarin、托泊替康及其组合。
其他抗肿瘤剂包括米托蒽醌、I-门冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基脲、喷司他丁、维A酸及其组合。
还可以利用能够增强抗肿瘤免疫应答的抗肿瘤剂如CTLA4(细胞毒素淋巴细胞抗原4)抗体类,和能够阻止CTLA4其他的药物如MDX-010(Medarex)和CTLA4化合物,公开于美国专利号6,682,736;还有抗增值剂如其他法呢基蛋白转移酶抑制剂,例如法呢基蛋白转移酶抑制剂。此外,可以用于本发明的特别的CTLA4抗体包括美国临时申请60/113,647(1998年12月23日提交)、美国专利号6、682,736中描述的那些,两者在此以全文并入作为参考。
可用于本发明的特别的IGF1R抗体包括国际专利申请号WO2002/053596中描述的那些,其在此以全文并入作为参考。
可用于本发明的特别的CD40抗体类包括国际专利申请号WO2003/040170中描述的那些,其在此以全文并入作为参考。
基因治疗剂也可以用作抗肿瘤剂,如TNFerade(GeneVec),其在对放射治疗的应答中表达TNFα。
本发明的一个实施方案中,他汀类药物可以与式1化合物和药物组合物一起使用。他汀类(HMG-CoA还原酶抑制剂)可选自阿托伐他汀(Lipitor,Pfizer Inc.)、普伐他汀(Pravachol,Bristol-MyersSquibb)、洛伐他汀(Mevacor,Merck Inc.)、辛伐他汀(Zocor,MerckInc.)、氟伐他汀(Lescol,Novartis)、西立伐他汀(Baycol,Bayer)、罗苏伐他汀(Crestor,AstraZeneca)、洛伐他汀和烟酸(Advicor,KosPharmaceuticals)及其衍生物和组合。
在一个优选的实施方案中,他汀药物选自Atovorstatin和洛伐他汀,及其衍生物和组合。
其他用作抗肿瘤剂的药包括Caduet。
所述方法包括使用任何期望的剂量用法给药式1化合物。在一个特定的实施方案中,尽管或多或少次数的给药是在本发明的保护范围内,该化合物是每日给药一次。式1化合物可以按照与其联合给药的细胞毒素相同的时间表给药。在细胞毒素剂的半衰期长(即,>10小时)的情况下,考虑在细胞毒素剂给药后的当天也单独给药式1化合物。式1化合物可以给予哺乳动物包括人,优选通过30分钟内的静脉注射。
在本发明的另一个实施方案中,式1化合物是用作增强放射治疗的效力的辐射敏化剂。根据本发明,式1化合物可以与任何种类的放射治疗联合使用,所述放射治疗包括外线束放射治疗(XBRT)或远程放射治疗、近程放射治疗或密封源的放射治疗、未密封源的放射治疗和放射免疫疗法。根据本发明,为了使临床上的肿瘤应答到最大值,通常每日给予2-4Gy的部分至50-60Gy的总剂量的放射。本领域的普通技术人员应当理解,根据疾病位点以及给予放射是否是用于治愈的目的或作为姑息治疗,精确的实验设计将是不同的。例如,关于不同种类的放射治疗的进一步的信息可以在“Absorbed Dose Determination inExternal Beam Radiotherapy”International Atomic Energy Agency,Vienna,2000,Technical Reports Series No.398;“Principlesand Practice of Brachytherapy:Using Afterloading Systems,”Joslin等人.(Eds.),Arnold Publishers,第1版,2001;“ProtonTherapy and Radiosurgery,”Smit等人.(Eds.),Springer-VerlagTelos,第1版,2000;Greig等人.“Treatment with unsealedradioisotopes,”Br.Med.Bull.,1973,29(1):63-68;“Radioimmunotherapy of Cancer,”Abrams等人.(Eds.),MarcelDekker,第1版,2000中找到。美国专利号6,649,645教导了放射和环氧合酶-2抑制剂用于治疗瘤形成病症的联合疗法。
在本发明的另一个实施方案中,式1化合物用在与放射治疗和至少一种抗肿瘤剂的组合中。
在本发明的另一个实施方案中,式1化合物用在与放射治疗和至少一种辐射增强剂如生长因子受体拮抗剂的组合中。
本发明的方法和组合物提供了一种或多种益处。本发明的式1化合物与化疗或放疗的联合可以低剂量给药,即是,以低于临床情况下常规使用的各个组分单独给药的剂量。降低给予哺乳动物的本发明的化疗或放疗的剂量的益处包括降低同较高给药量有关的不良作用的发生率。通过降低不良作用的发生率,预计改善经历癌症治疗的患者的生活质量。降低不良作用发生率的进一步的益处包括患者顺应性的改进,治疗不良作用所需的住院数的减少。
选择性地,本发明的方法和组合物还可以使较高剂量时的疗效达到最大。
实施例
以下提供的实施例和制剂进一步说明和例证了本发明的组合、剂型和方法。应当理解的是本发明的保护范围在任何情况下不限于以下实施例的范围。
材料
除非另外指出,所有化学试剂是从Sigma(Poole,Dorset,UK)购得。Dulbecco’s磷酸盐缓冲盐水(PBS)是从Gibco(Paisley,UK)获得,蔗糖、氢氧化钠和氯化钾是由BDH(Lutterworth,UK)提供,而毛地黄皂苷是由Boehringer Mannheim(Roche Diagnostics,Lewes,UK)提供。BCA蛋白含量测定试剂盒(Pierce,Perbio Science,Rockford,IL,USA)是用于蛋白质浓度测定。奶粉是从Marvel Premier Brands UKLtd(Spalding,UK)购得,而ECL蛋白质印迹检测试剂盒是从Amersham(Little Chalfont,UK)购得。淋巴细胞分离剂是从Axis-Shield(Oslo,Norway)购得,而EDTA血采集导管是从BDVacutainer(Plymouth,UK)购得。10H小鼠单克隆原发抗体是由教授Alexander Bürkle充足供应,而山羊抗小鼠二级抗体(HRP-结合的)是从DAKO(Ely,UK)购得。用于刺激PARP活性的寡核苷酸最初是由DrJLunec(Northern Institute for Cancer Research,Newcastle)合成,以后的供应是从Invitrogen(Glasgow,UK)获得。纯化的聚(ADP核糖)(PAR)聚合物是从BIOMOL Research Lab(Plymouth,PA,USA)购得。
SW620和L1210(质量控制)细胞的组织培养
细胞维持在添加10%(v/v)的胎牛血清(Invitrogen)和1U/ml的青霉素-链霉素溶液(Sigma)的RPMI 1640培养基(Sigma)中,所述培养基是在保持在37℃的增湿的含5% CO2的空气的气氛的Hereus培养箱(Fischer Scientific,Manchester,UK)中。使用的L1210细胞是从ATCC(American Type Culture Collection,Manassas,VA)获得,在收获时生长成约6 x 105/ml密度的悬浮液,以确保指数生长。用作质量控制样品的1 x 106细胞的等分部分再悬浮于1ml的添加10%(v/v)DMSO和10%(v/v)胎牛血清的培养基中并在-80℃下冷冻。
肿瘤异种移植样本的制备
肿瘤离体,在液氮中快速冷冻,在-80℃下储存,直至匀浆化用于分析。样品在冰上解冻,记录下湿重。组织在3体积(即,1mg加上3μl等渗缓冲液-7mM Hepes、26mM KCl、0.1mM葡聚糖、0.4mM EGTA、0.5mM MgCl2、45mM蔗糖,pH 7.8)使用Pro 2000设备(Pro ScientificInc,Monroe,CT,USA)来匀浆化,获得总稀释度为四分之一的匀浆。贯穿此过程,保持匀浆就绪,在10秒钟内突发完成匀浆化以防止样品的过度的受热。测定之前,用等渗缓冲液进一步稀释样品,其中[32P]NAD结合测定需要获得四十分之一的最终稀释度,或者免疫印迹测定需要获得千分之一的最终稀释度。
PBL和肿瘤样品的制备
全部的血液收集在EDTA vacutainer中,根据生产说明书通过淋巴制备获得人PBLs。从手术室采集的肿瘤活组织检查放入无菌容器并立即放置冰上。在30分钟内,肿瘤样品在液氮中快速冷冻并在-80℃下储藏,直至经过匀浆化用于分析。样品在冰上解冻,记录下湿重。重量超过100mg的组织在3体积(即,1mg加上3μl等渗缓冲液-7mM Hepes、26mM KCl、0.1mM葡聚糖、0.4mM EGTA、0.5mM MgCl2、45mM蔗糖,pH 7.8)使用Pro 2000设备(Pro Scientific Inc,Monroe,CT,USA)来匀浆化,获得总稀释度为四分之一的匀浆。当获得较少的样品时,稀释成99或999体积时匀浆化,分别获得百分之一和千分之一的总稀释度。贯穿此过程,保持匀浆就绪,在10秒钟内突发完成匀浆化以防止样品的过度的受热。除非样品在匀浆化的当天进行测定,样品再冷冻至-80℃并在此温度下储藏直到分析。测定之前,样品用用等渗缓冲液进一步稀释,这里需要得到千分之一的最终稀释度。
使用[
32
P]NAD掺合的PARP测定
如在Calabrese CR,Almassy R,Barton S,Batey MA,CalvertAH,Canan-Koch S,Durkacz BW,Hos tomsky Z,Kumpf RA,Kyle S,Li J,Maegley K,Newell DR,North M,Notarianni E,StratfordIJ,Skalitzky D,Thomas HD,Wang L-Z,Webber SE,Williams KJ和Curtin NJ.Preclinical evaluation of a novelpoly(ADP-ribose)polymerase-1(PARP-1)inhibitor,AG14361,withs ignificant anticancer chemo- and radio-sensitizationactivity.JNCI 96 56-67(2004)以及Bowman KJ,Newell DR,Calvert AH和Curtin NJ.Differential effects of thepoly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitor NU1025 ontopoisomerase I and II inhibitor cytotoxicity.Br.J Cancer 84106-112(2001).based on previously published methods(Halldorsson H.,GrayD.A.,和Shall S.(1978).poly(ADP-ribose)polymerase activity in nucleotide permeablecells.FEBS Letters 85:349-352,Grube,K.,Küpper,J.H.& Bürkle,A.Direct stimulation of poly(ADP-ribose)polymerasein permeabilised cells by double-stranded DNA oligomers.Anal.Biochemistry.1991;193:236-239)中描述的。
PARP抑制是在用外加的12-mer平端的DNA双链寡核苷酸(2.5μg/ml)刺激的毛地黄皂苷(0.15mg/ml)-渗透的细胞(8 x 105-1 x 106/反应)中,通过测量75μM NAD++[32P]NAD+(Amersham)的抑制来测定,在25℃孵育的6分钟内掺入细胞大分子再用如先前所述的冰冷的10%TCA、10% NaPPi(w/v)沉淀。简言之,细胞以1.5 x 107/ml悬浮于低渗的缓冲剂(9mM HEPES pH 7.8,4.5%(v/v)葡聚糖,4.5mM MgCl2和5mM DTT)中30分钟就绪,然而加入9体积的等渗缓冲液(40mMHEPES pH 7.8、130mM KCl、4%(v/v)葡聚糖、2mM EGTA、2.3mMMgCl2、225mM蔗糖和2.5mM DTT)。把300μl的细胞加入至100μl的300μM的含[32P]-NAD+(Amersham,UK)的NAD+中开始反应,加入2ml冰冷的10%(w/v)TCA+10%(w/v)焦磷酸钠终止。30分钟之后,沉淀的32P-标记的ADP-核糖聚合物用过Whatman GC/C滤器(WhatmanInternational Ltd,Kent,UK)过滤,用1%(v/v)TCA/1%(v/v)焦磷酸钠洗5次,干燥并计数。PARP抑制的IC50值是通过计算机-拟合的曲线计算(GraphPad Software,Inc.,San Diego,CA)。
以相似的方法测定肿瘤的匀浆;然而,匀浆化使足够的DNA损伤经历最高刺激的PARP活性,因此不需要寡核苷酸。结果是以皮摩尔PAR former/mg肿瘤的方式表达。
PARP测定使用单克隆抗体
如在Plummer ER,Middleton MR,Jones C,Olsen A,Hickson I,McHugh P,Margison G,McGown G,Thorncroft M,Watson AJ,BoddyAV,Calvert AH,Harris AL,Newell DR,Curtin NJ.Temozolomidepharmacodynamics in patients with metastatic melanoma:DNAdamage and activity of repair enzymes ATase and PARP-1.ClinicalCancer Research.11 3402-3409(2005)based on modification ofpreviously published methods(Pfieffer R,Brabeck C,Burkle A:Quantitative nonisotopic immuno-dot-blot method for theassessment of cellular poly(ADP-ribosyl)ation capacity.Analytical Biochemistry 1999;275:118-122)中描述的。
培养的细胞或快速解冻的淋巴细胞制品在冰冷的PBS中洗两次。细胞的片状沉淀再悬浮于0.15mg/ml的毛地黄皂苷中至约1-2 x 106个细胞/ml的密度5分钟来渗透细胞,接着加入9体积的冰冷的缓冲液(7mM HEPES、26mM KCl、0.1mM葡聚糖、0.4mM EGTA、0.5mMMgCl2、45mM蔗糖,pH 7.8),样品放置就绪。计数渗透的(即,锥虫蓝染色的)细胞密度,如果需要用上述的缓冲液稀释细胞悬浮液获得使每个反应管中加入20,000个渗透的细胞的细胞密度。在含量测定中,最大刺激的PARP活性是通过在26℃的摆动的水浴下暴露于存在NAD+底物[25]的平端的寡核苷酸中测量的。5ul的7mM NAD+和5μl的200μg/ml的pallindromic寡核苷酸(CGGAATTCCG)与渗透的细胞混合,加入反应缓冲液(100mM Tris HCl、120mM MgCl2,pH 7.8)至100μl的最终体积。加入过量的PARP抑制剂(400μl的12.5μM的化合物I)6分钟后停止反应,使用24-孔的多支管把细胞沾在硝酸纤维素膜(Hybond N,Amersham)上。纯化的PAR标准曲线加载于各个膜(0-25pmol单体当量)使定量化。在4℃下用原发抗体(1/500的PBS-MT(PBS+0.05% Tween 20+5%奶粉)整夜的培养,接着用PBS-T(PBS+0.05% Tween 20)洗2次,然后在室温下在二级抗体(1/1000的PBS-MT)中培养1小时。培养的膜在1小时的时间内用PBS频繁地洗,再暴露于生产商提供的ECL反应溶液1分钟。在5分钟暴露内检出的化学发光是使用Fuji LAS3000 UV Illuminator(Raytek,Sheffield,UK)测量并使用成像软件(Fuji LAS成像版本1.1,Raytek)数字化。获得的图象是使用Aida图象分析家(版本3.28.001)分析,结果以LAU/mm2表达。测量曝光污点上的三个背景区域,从所有结果中扣除背景信号的平均值。PAR聚合物标准曲线是使用结合非线性的回归模型的无关紧要的一个位点和偏离标准曲线产生的未知读数来分析。相对于装载的细胞数然后表示结果。5000L的1210细胞的三份QC样品采用各个分析,从一个患者得到的所有样品以相同污点进行分析。
肿瘤匀浆是以类似的方式分析;然而,把足够的DNA损伤引入至最大的刺激PARP活性和寡核苷酸的匀浆化过程因此是不需要的。匀浆的蛋白质浓度是使用BCA蛋白分析和Titertek Multiscan MCC/340平板读数器测量的。结果可以pmol PAR former/mg蛋白质或mg肿瘤的方式表达。
在外周血单核细胞(PBMCs)中的的PARP活性分析是以Boulton等人(“Potentiation of temozolomide-induced cytotoxicity:acomparative study of the biological effects of聚(ADP-核糖)polymerase inhibi tors.”1995.British J.Cancer 72,849-856)的方法为基础的。所有过程是在0-4℃下进行。
PBMC’s的制备
1、采集5ml的血液在Lithium Heparin管中并轻轻地混合。
2、在30ml的用完即扔掉的通用管中用PBS稀释肝素化的血液1:1(终体积10ml)。
3、小心地分层30ml的用完扔掉的通用管中的8-10ml预冷冻的淋巴细胞分离剂上的稀释的血液。务必不要使血液与分离的液体混合。
4、在4℃下的800xG的转位式旋转器(Mistral centrifuge)中离心分离样品15分钟,制动率为0。
5、离心分离之后,在界面上应当看到白细胞带。这个细胞带应当用玻璃的巴斯德吸管收集并放入30ml的用完扔掉的通用管中。
6、用20ml的冰冷PBS稀释淋巴细胞悬浮液,再在4℃、500xG下离心分离细胞10分钟。
7、除去上清夜。
8、在20ml的冰冷PBS中再悬浮片状沉淀,在333xG/4℃下离心分离5分钟。
9、除去上清夜并再把细胞悬浮于添加10% DMSO的500μl的预冷冻的培养基(RPMI+10%胎牛血清)中。
10、转入贴上标签的螺旋盖的埃彭道夫管并冷冻。
11、在-70℃下储藏。
PBMC’s的PARP测定
1、在进行上述实验的当天新鲜制得32P 600μM的NAD溶液。寡核苷酸原液从储藏中取出并解冻。
2、浴加热至26℃,在70振荡/分下开始搅动。
3、反应试验管如下调制。
试剂 | TO | +oligo | -oligo | 终浓度 |
寡核苷酸 | 5μl | 5μl | 2.5μg/ml | |
32P 600μM NAD原液 | 50μl | 50μl | 50μl | 75μM |
水 | 45μl | 45μl | 50μl | |
流出总量 | 100μl | 100μl | 100μl | |
细胞悬浮液 | 300μl | 300μl | 300μl | |
反应总量 | 400μl | 400μl | 400μl |
4、各个PBMC样品和QC标准品分成三份进行分析,用TO、+oligo和-oligo样品x 3。(每个样品共9只管)。
5、计算各个悬浮液中的细胞密度。各个细胞悬浮液的10μl的样品用锥虫蓝稀释至1:1,用血球细胞计数器计数每ml的渗透的细胞。
6、反应试管和渗透的细胞悬浮液在水浴中加热至26℃持续7分钟。
7、渗透的细胞悬浮液短暂地涡旋,将其300μl(约1 x 106细胞)加入各个反应管中开始反应。
8、加入2ml的冰冷的10% TCA+10% NaPPi并涡旋正好在加入细胞后6分钟停止反应。
9、过滤之前,试管于冰上孵育至少1小时(在测定的这个阶段,沉淀必须存在至少1小时,如果温度维持在≤4℃反应管可以留存整夜)。
10、加入渗透的细胞之前,2ml冰冷的10% TCA+10% NaPPi加入T0管,用于校正放射标记对滤器的非特异性结合。
肿瘤/组织样品的制备
1、称重冷冻的肿瘤样品。
2、加上DTT的3体积(即,每1mg组织加入3μl溶液)的等渗缓冲液加入到肿瘤样品中。其储藏于冰上,直到和匀浆化的时候。
3、样品于冰上在II号箱里10秒钟快速匀浆化,直至看不到可发觉的组织的肉眼可见部分。
4、足量的匀浆用等渗缓冲液+DTT稀释成十分之一,提供原始样品的1/40的总稀释度。3ml的最后量是足以分成三份样品,接着进行蛋白含量测定。
5、稀释的匀浆储藏于冰上,如下1小时内进行分析。
肿瘤/组织样品的PARP测定
1、在进行上述实验的当天新鲜制得32P 600μM的NAD溶液。寡核苷酸原液从储藏中取出并解冻。
2、水浴加热至26℃,在70振荡/分下开始搅动。
3、反应试管按照表A进行配制用于QC样品,并按照表B配制用于匀浆。
表A
试剂 | T0 | +oligo | -oligo | 终浓度 |
寡核苷酸 | 5μl | 5μl | 2.5μg/ml | |
600μM[32P]NAD+原液 | 50μl | 50μl | 50μl | 75μM |
水 | 45μl | 45μl | 50μl | |
流出总量 | 100μl | 100μl | 100μl | |
细胞悬浮液 | 300μl | 300μl | 300μl | |
反应总量 | 400μl | 400μl | 400μl |
表B
试剂 | T0 | Reaction | 终浓度 |
600μM[32P]NAD+原液 | 50μl | 50μl | 75μM |
水 | 50μl | 50μl | |
流出总量 | 100μl | 100μl | |
匀浆 | 300μl | 300μl | |
反应总量 | 400μl | 400μl |
4、各个QC样品分成三份进行测定,为T0、+oligo和-oligo样品x 3份(每个样品总计9管,如果忽略低细胞计数-oligo样品)。匀浆还分成3份测定,为T0和反应样品x3。(每个样品总计6管)。
5、添加匀浆或细胞之前,向T0管加入2ml冰冷的10% TCA+10%NaPPi,用以校正放射标记与滤器的非特异性结合。
6、反应试管的匀浆和QC细胞在水浴中加热至26℃持续7分钟。
7、各个制剂短暂地涡旋,将其300μl加入各个反应管中开始反应。
8、加入2ml的冰冷的10% TCA+10% NaPPi并涡旋正好在加入匀浆后6分钟停止反应。
9、过滤前,试管至少于冰上孵育1小时。
10、10μl的QC悬浮液的样品用锥虫蓝稀释成1:1,用血球细胞计数器计数每ml的渗透的细胞的数目。
11、剩余的匀浆在4℃下500 xG离心分离5分钟,移去200μl的上清夜,放置于贴上标签的螺旋盖的微型管,用于蛋白质测量。如果不是立即分析,上清夜样品可以在-20℃下储藏至少1个月。
实施例1.聚-ADP-核糖聚合酶的抑制
结合抑制的靶向酶的式1化合物的晶体分析揭示了,药物结合PARP-1的活性部位,形成3氢键。按照美国专利6,495,541中所述的,测定PARP酶抑制式1化合物的活性。通过纯化的全长人PARP-1使用32P-NAD+掺入聚合物测定的Ki是1.4nM(表3)。式1化合物也是有效的PARP-2抑制剂(Ki=0.17nM),而且基于不同PARP族酶类(tankyrase、V-PARP)中氨基酸序列的强的结构相似性,式1化合物的磷酸盐(化合物I)也将同样地以高亲和力结合这些酶。
表3.式1化合物和PARP相互作用的动力学常数
*SD=标准差。
实施例2.细胞生长的抑制
如美国专利6,495,541所述的在A549、LoVo和SW620细胞系中测定式1化合物在5天连续暴露后,其内在的生长抑制活性(表4)。GI50值(抑制生长50%所需的浓度)的范围是7-12μM。相似地,测定了增加替莫唑胺和托泊替康的生长抑制潜能的0.4μM的式1化合物(即,<5%的IC50)的能力(表2)。IC50浓度时的增强因子;PF50,计算为:仅是GI50单独的替莫唑胺或托泊替康/GI50替莫唑胺或托泊替康+0.4μM的式1化合物。当加入0.4μM的式1化合物后,LoVo细胞中替莫唑胺的GI50有8-倍减少,而A549细胞中替莫唑胺的GI50有3.5-倍减少。当加入0.4μM的式1化合物后,LoVo细胞中托泊替康的GI50有1.6-倍减少,而A549和SW620细胞中托泊替康的IC50有2.6-倍的减少。
表4.式1化合物抑制细胞生长且0.4μM式1化合物增强替莫唑胺和托泊替康。
实施例3.通过化合物I化学增敏标准化疗剂
根据美国专利6,495,541所述的操作进行的人肿瘤细胞系的体外研究,已经表明不足微摩尔浓度的式1化合物增强了细胞对于抑制人H460非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的替莫唑胺和I型拓扑异构酶抑制剂、托泊替康和SN-38(伊立替康的活性代谢物)的敏感性(表5)。
表5.葡萄糖醛酸盐的式1化合物对于人H460NSCLC细胞中的标准化疗剂的体外效力的影响
aPF50=在人H460 NSCLC细胞中,GI50(单药剂)/GI50(药+0.4μM的式1化合物)。
b在这些实验中,式1化合物葡萄糖醛酸盐代替化合物I(式1化合物的磷酸盐)。
实施例4.通过式1化合物抑制细胞的NAD耗尽和聚-ADP-核糖聚
合物的形成
按照Abou-Ela等人(Anal Biochem.(1988),174:239-250)所述的采用如下的较少的改变来确定聚(ADP_核糖)聚合物和NAD+。A549细胞(ATCC,Rockville,MD.)播种在35mm的培养皿中并使其生长至汇合(confluence)。移去培养基,用含20-50μCi ml-1[3H]腺嘌呤的新鲜培养基替代。细胞在37℃下标记16h。实验操作之前,培养基用新鲜的培养基取代45分钟。实验操作之后,移去培养基,细胞用pH7.2的冰冷的磷酸盐缓冲盐水漂洗,通过加入1ml的20%的冰冷的三氯乙酸收获。通过刮除从培养皿中除去酸不溶性物质。培养皿用1ml 20%的三氯乙酸洗一次,样品接受离心分离。上清夜用于NAD+测定。片状沉淀溶解于0.2ml冰冷的98%的甲酸中,然后用冰冷的去离子水稀释至10ml。加入两百微升的10mg/ml牛血清白蛋白,促进沉淀。加入2.55ml的100%三氟乙酸调节三氟乙酸的浓度至20%。离心分离收集酸不溶性的部分。
NAD+的测定.三氟乙酸上清液用pH 8.6的250mM的甲酸铵稀释至10ml,再用浓缩的氢氧化铵调至pH 8.6。样品上到0.5ml的DHB-琼脂糖柱中,所述柱已经用10ml的pH 8.6的250mM甲酸铵预洗过的。柱子用pH 8.6的10ml的250mM甲酸铵洗,用pH 4.5的4ml的250mM甲酸铵洗脱2ml的H2O.NAD+。
ADP-核糖聚合物的测定。酸不溶的片状沉淀溶解于1ml氯化胍、250mM乙酸铵、10mM EDTA,pH 6.0和1ml的1M KOH、100mM EDTA中。样品在37℃下孵育2h。样品用pH 9.0的1M氯化胍、250mM乙酸铵、10mM EDTA(缓冲液A)稀释至10ml,调至pH 9.0,上到已经用5ml H2O和10ml缓冲液A预洗过的0.5ml的DHBB(Bio Rad)柱中。上柱后,柱子用25ml的缓冲液A洗,接着用pH 9.0的10ml的1M碳酸氢铵、1mM EDTA洗。聚(ADP-核糖)是用0.5ml的H2O洗脱。样品冻干至干燥,然后悬浮在pH 7.5的2ml的50mM MOPS、5mMMcGiII中。悬浮液加入1单位的Snake venom phophodiesterase 1(Worthington Biochemicals)和1单位的BAP在37℃下煮解3小时。
HPLC分析:通过5μm Beckman C18 ODS-反相柱的HPLC进行分析,在1ml/min的流速下使用7mM甲酸铵、7%甲醇流动相。各个样品与10nmo l的腺苷和去氧腺苷之一共同注射。收集1毫升的柱的流分,并在5ml闪烁液体中计数。
通过式1化合物的替莫唑胺的体外增强是与抑制烷化基-诱导的细胞NAD消耗和阻断多聚-ADP-核糖聚合物形成相联系的,有效范围是5-400nM。DNA损伤之后,细胞NAD快速结合成多聚-ADP-核糖聚合物。5nM(PF50=1.3)的式1化合物大大的减少MNNG-引起的细胞NAD耗竭并抑制89%的细胞多聚-ADP-核糖形成(表6)。在低至50nM的浓度时,式1化合物增加A549中替莫唑胺的潜能至少2-倍,相当于抑制93%的MNNG-引起的NAD耗竭和抑制95%的多聚-ADP-核糖聚合物的形成。式1化合物还抑制PARP催化活性,根据MNNG、过氧化氢或γ辐照激活PARP后,P388小鼠白血病细胞和小鼠外周血淋巴细胞中细胞NAD耗竭的抑制来测量(数据没有显示)。
表6.式1化合物抑制体外A549细胞内的PARP活性
aDMSO对照。
bMNNG只是对照。
实施例5.式1化合物-替莫唑胺的体内抗肿瘤效力的研究
按照Calabrese等人(JNCI(2004),96:56-67)所述的进行体内实验。
对于这些研究,化合物I(磷酸盐)剂量和葡萄糖醛酸盐剂量的计算是以游离碱为基础。
在这些研究中,化合物I证明无单药剂抗肿瘤效应。在联合研究中,化合物I增强了γ辐照、伊立替康和替莫唑胺的剂量效力(dosepotency)。在单剂量实验中,式1化合物增强了超过SW620人结肠癌异种移植的小鼠中的10-倍无毒剂量的200mg/kg替莫唑胺的抗肿瘤效应(表7)。
表7.式1化合物联合单剂量的替莫唑胺抑制人SW620结肠癌异种移植的体内活性
a替莫唑胺给药是通过口服管饲法传送。
b式1化合物给药是通过腹膜内注射传送。
c所有组的n=5。
d%增强=100 x(替莫唑胺+式1化合物的延时-只有替莫唑胺的延时)/只有替莫唑胺的延时。延时计算为治疗组的RTV(相对肿瘤体积)4时间-对照组RTV4的时间,在此RTV4是等于开始治疗时肿瘤体积4倍的肿瘤体积。
e单药剂替莫唑胺(曼-怀二氏检验)的显著差异
f由于毒性的死亡2个。
在抑制SW620异种移植的重复剂量实验(每剂,QD x 5)中,与68mg/kg替莫唑胺联合的0.05、0.15和0.5mg/kg的式1化合物(为葡萄糖醛酸盐)增强所有3个联合组(68mg/kg替莫唑胺+0.05、0.15或0.5mg/kg的式1化合物葡萄糖醛酸盐)中替莫唑胺的活性。在与0.15或0.5mg/kg的式1化合物葡萄糖醛酸盐的联合组中,观察到100%的完全缓解率。对于式1化合物葡萄糖醛酸盐的剂量组合(68mg/kg替莫唑胺+0.05或0.15mg/kg的式1化合物葡萄糖醛酸盐),没有观察到体重减轻。用高剂量联合组(68mg/kg替莫唑胺+0.5mg/kg的式1化合物葡萄糖醛酸盐),观察到一个中毒死亡数。在抑制LoVo异种移植的相似的实验中,式1化合物葡萄糖醛酸盐(0.5mg/kg)增强替莫唑胺(68mg/kg)的67%的抗肿瘤活性(表8,图1)。在LoVo实验的任何剂量组中没有观察到体重减轻。没有联合研究观察到拮抗作用。
表8.与葡萄糖醛酸盐的式1化合物联合的替莫唑胺抑制SW620和LoVo异种移植的效力
a替莫唑胺给药是通过口服管饲法传送。
b式1化合物给药是通过腹膜内注射传送。
c式1化合物(游离碱同等物)给药为葡萄糖醛酸盐。
d所有组的n=5。
e%增强=100 x(替莫唑胺+式1化合物的延时-只有替莫唑胺的延时)/只有替莫唑胺的延时。延时计算为治疗组的RTV(相对肿瘤体积)4时间-对照组RTV4的时间,在此RTV4是等于开始治疗时肿瘤体积4倍的肿瘤体积。
f药剂替莫唑胺(曼-怀二氏检验)的显著差异
g由于毒性的1个死亡数。
实施例7.式1化合物-伊立替康的体内抗肿瘤效力研究
按照Calabrese等人(J.Natl.Cancer Inst.(2004),96:56-67)所述的进行体内实验。
作为单药剂拓扑异构酶I抑制剂,伊立替康(25mg/kg,QW x 3IP)未显著地抑制SW620肿瘤生长。25mg/kg伊立替康和以葡萄糖醛酸盐给药的式1化合物的组合,产生相当大的抗肿瘤效应并增强所有联合组(25mg/kg伊立替康+0.05、0.15或0.5mg/kg的式1化合物)中伊立替康的活性(表9)。在伊立替康单药剂组或含伊立替康和PARP抑制剂的组合的组中,未观察到显著的毒性。由于增加式1化合物的给药量,增强了肿瘤生长抑制(增强%)。在抑制LoVo异种移植的相似实验中,式1化合物(0.5mg/kg)增强了伊立替康(25mg/kg)86%的抗肿瘤效应(表9)。没有联合研究观察到拮抗作用。
表9.与葡萄糖醛酸盐的式1化合物联合的伊立替康抑制SW620和LoVo异种移植的效力
a伊立替康给药是通过腹膜内注射传送。
b式1化合物葡萄糖醛酸盐给药是通过腹膜内注射传送。
c所有组的n=5。
d%增强=100x(伊立替康+式1化合物的延时-只有伊立替康的延时)/只有伊立替康的延时。延时计算为治疗组的RTV(相对肿瘤体积)4时间-对照组RTV4的时间,在此RTV4是等于开始治疗时肿瘤体积4倍的肿瘤体积。
e式1化合物(游离碱当量)给药为葡萄糖醛酸盐。
f单药剂伊立替康(曼-怀二氏检验)的显著差异。
实施例8.式1化合物-替莫唑胺的药效学
具有SW620人结肠癌异种移植的小鼠只用10mg/kg的式1化合物(QD x 5)治疗,产生无肿瘤生长延迟,而且无毒性。表10(a)表示腹膜内给药磷酸盐(化合物I)之后,式1化合物的血浆和肿瘤浓度。在抑制SW620异种移植的重复剂量组合实验中(对于每个药为QD x5),0.1mg/kg的式1化合物增强68mg/kg的替莫唑胺的抗肿瘤效应的28%,超过仅用68或136mg/kg的替莫唑胺的抗肿瘤效应(表10(b))。增加式1化合物的剂量至1mg/kg,增强了替莫唑胺(68mg/kg)抗肿瘤效应100%。10mg/kg的式1化合物和68mg/kg的替莫唑胺的组合是有毒的。
在平行研究中,通过HPLC/MS测定法来测量式1化合物的血浆和肿瘤浓度。此外,使用掺入P32-NAD的聚-ADP-核糖聚合物的治疗动物的SW620肿瘤的匀浆,评估肿瘤PARP催化能力的抑制程度。在式1化合物的有效剂量(1.0mg/kg)时,在注射后6小时时几乎检测不到式1化合物血浆浓度,而在注射后6和24小时检测到式1化合物肿瘤浓度为40-60ng/mL。在6小时抑制了50%的PARP催化能力,在24小时抑制了25%。
在式1化合物的毒性剂量(10mg/kg)时,式1化合物的血浆浓度在6小时处是30ng/mL,但是24小时处几乎检测不出。给药10mg/kg式1化合物之后,式1化合物的肿瘤浓度大于>200ng/mL,在直至24小时的所有时间都能检测到,而且在6小时处抑制了90%的PARP催化能力,在24小时处抑制了75%。
表10(a).腹膜内给药磷酸盐(化合物I)之后,式1化合物的血浆和肿瘤浓度
a式1化合物给药是通过腹膜内注射传递。
b式1化合物(游离碱当量)给药为磷酸盐。
cBLQ:定量的下限
表10(b).与替莫唑胺联合的葡萄糖醛酸盐的式1化合物抑制SW620人结肠癌异种移植的效力和药效学
a式1化合物给药是通过腹膜内注射传递。
b式1化合物(游离碱当量)给药为葡萄糖醛酸盐。
c替莫唑胺给药是通过口服管饲法传递。
di.p.传送的式1化合物联合p.o.传送的68mg/kg的替莫唑胺,给药。
eSD=标准差.
f增强计算为((延迟(组合)/延迟(只有替莫唑胺))x 100-100)
g与单药剂替莫唑胺(曼-怀二氏检验)的显著差异
hN/A,不可适用,由于毒性5/5死亡率。
实施例9.动物中药物代谢动力学的研究
IV给药式1化合物的盐之后,在CD-1小鼠、Wistar大鼠、Beagle狗和短尾猴中评估式1化合物(游离碱药物物质)的药物代谢动力学,并总结在表11中。IV给药给所有物种导致调节至快速的清除率(34-136mL/min/kg)和大量的分布(7-15L/kg),表明此化合物在体内是良好分布地。末端半衰期是相对短地而难以调节(2-5小时)。化合物I(磷酸盐)和替莫唑胺的联合研究是在小鼠和大鼠中进行,用于调查这种细胞毒素剂对于式1化合物的药物代谢动力学的潜在的影响。对于小鼠的联合研究而言,第一组的8只小鼠接受单个6.5mg/kg的IV剂量的化合物I(等同于5mg/kg的式1化合物),而第二组的8只小鼠接受单个6.5mg/kg的IV剂量的化合物I和单个200mg/kg的口服剂量的替莫唑胺。每个剂量治疗组分成4只小鼠的2个同龄组。采集同龄组血液的原因是因为小鼠物种的血量限制。每隔一药物代谢动力学采样时间从每个同龄组采集血液。对于大鼠的联合研究而言,一组的2只大鼠接受单个6.5mg/kg的IV剂量的化合物I(5mg/kg),而第二组的2只大鼠接受6.5mg/kg的IV剂量的化合物I和50mg/kg的口服剂量的替莫唑胺。由在小鼠和大鼠中的化合物I和替莫唑胺的联合研究得到的结果表明这种细胞毒素剂对于式1化合物的药物代谢动力学分布仅有较少的影响(表12和表13)。类似地,化合物I显示出对替莫唑胺的药物代谢动力学分布仅有较少的影响(数据为给出)。此外,在雄性CD-1小鼠和雄性Wistar大鼠中进行化合物I和伊立替康的联合研究。就小鼠的联合研究而言,一组的15只小鼠接受单个6.5mg/kg的IV剂量的化合物I(等同于5mg/kg的式1化合物),而第二组接受6.5mg/kg的IV剂量的化合物I和45mg/kg的IV剂量的伊立替康。每个剂量组的三只小鼠在每个采集时间点安乐死。对于大鼠的联合研究而言,一组接受6.5mg/kg的IV剂量的化合物I,而第二组接受6.5mg/kg的IV剂量的化合物I和45mg/kg的剂量伊立替康。在每个时间点从每只大鼠采集血液。由此研究得到的结果揭示了在给药剂量时,化合物I和伊立替康之间不存在导致改变药物代谢动力学的药物-药物相互作用(表14和表15)。
表11.在小鼠、大鼠、狗和猴中单个IV给药式1化合物的平均药物代谢动力学参数
组平均n=15只小鼠,所有其他n=2或3(±SD)
a小鼠和大鼠的数据来自含有替莫唑胺的联合研究
b式1化合物(游离碱当量)给药为化合物I(磷酸盐)
c式1化合物(游离碱当量)给药为葡萄糖醛酸盐
表12.在仅给药化合物I(磷酸盐)或联合替莫唑胺给药的小鼠中,组平均的式1化合物的药物代谢动力学参数
a化合物I(式1化合物的磷酸盐);盐校正的剂量。
表13.在仅给药化合物I(磷酸盐)或联合给药替莫唑胺的大鼠中,组平均的式1化合物药物代谢动力学参数。
a化合物I(式1化合物的磷酸盐);盐校正的剂量。
表14.在仅给药化合物I(磷酸盐)或联合给药替伊立替康的小鼠中,组平均式1化合物IV药物代谢动力学参数
a化合物I(式1化合物的磷酸盐);盐校正的剂量。
表15.在仅给药化合物I(磷酸盐)或联合给药替伊立替康的大鼠中,平均(SD)式1化合物IV药物代谢动力学参数
a化合物I(式1化合物的磷酸盐);盐校正的剂量。
实施例10.人类中的效应:与每四周给予的五天口服替莫唑胺联
合的静脉注射PARP抑制剂化合物I的第1阶段试验
这是在第2部分中进行的一个标签公开、多中心、剂量按比例上升的研究。研究的第1部分对于患有进行性肿瘤的病人是开放的。在第7天给予试验剂量的单药剂化合物I之后,给予化合物I和替莫唑胺(100mg/m2/剂量)连续5天的每日IV输注。在连续的同龄组的病人中,化合物I的剂量按比例上升直到PARP禁止的剂量(PID,参见以下D部分)是通过药效学和药物代谢动力学数据确认。PID已经确定是12mg/m2。在先前的同龄组中评价了较高剂量的安全性之后,病人内按比例上升的化合物I是允许的。
第2部分的研究对于患有的转移性黑素瘤的患者是开放的。除了扩大剂量的替莫唑胺之外,连续的同龄组的患者接受PID的化合物I直到确定了联合药物的MTD或替莫唑胺剂量达到200mg/m2的最大值。进入第2部分研究的患者必须同意治疗前和治疗后的肿瘤活体检查来测量PARP的抑制。在先前的同龄组中评价了较高剂量的安全性之后,病人内按比例上升的替莫唑胺是允许的。
关于17名病人的临床结果是同意的并在研究的第1部分治疗了。表16显示了这些病人的人口统计。
表16.第1阶段研究的第1部分的病人人口统计学
这些病人的原发性癌症的诊断,对于进行性疾病的全部是乳房(1)、结肠(2)、肾(1)、肝(1)、胰(2)、前列腺(1)、直肠(1)、黑色素瘤(3)、软组织肉瘤(3)和胃(2)。12个(71%)患者接受了先前的化疗,3个(18%)患者没有接受,而2个(12%)没有信息。
A.人中的药物代谢动力学和产品代谢
在与替莫唑胺联合的IV化合物I的第1阶段的开放性、剂量按比例增大研究中,评价了式1化合物的药物代谢动力学。在第1部分的研究(剂量按比例上升的化合物I)中,在以下时间采集连续的血液样品用于式1化合物的测定:
周期1,第7天(C1D-7、化合物I单剂量)
周期1,第1天(C1D1、化合物I+替莫唑胺单剂量)
周期1,第4天(C1D4、化合物I+替莫唑胺多剂量)
对于开始的中间数据使用额定的采集时间进行PK分析。
B.在一直到第4天的所有周期进行PK分析
通过使用蛋白质沉淀提取,接着反相HPLC串联质谱检测,测定人血浆中的式1化合物。
使用以下的色谱条件:
分析柱: Thermo Hypersil Keystone Betabasic C8,
5μm,100 x 2.1mm ID
流动相A成分: 含0.1%甲酸的水
流动相B成分: 含0.1%甲酸的乙腈
流速: 200μL/min
注射量: 10μL
自动采样器的针头洗 水:乙腈:甲酸(500:500:1,v:v:v)
液:
通常的保留时间*: 式1化合物:1.5分钟
式1的d6-化合物:1.5分钟
*保留时间是近似的,可以分析批次之间和之内变化。
以下是通常的质谱参数而且可以在仪器之间变化来获得等效的响应:
质谱: Sciex API 365
电离: Sciex Turbo Ion Spray
Turbo离子喷射: 正电性离子模式
离子喷射电压: 4000V
Turbo加热器温度: 450℃
Mass Transitions(额定 式1化合物:m/z=324.4→m/z 293.2
的):
式1的d6-化合物:m/z=330.3→m/z
299.1
停留时间: 式1化合物:350ms
式1d6-化合物:150ms
Nebuliser气体压力: 6
Curtain Gas Setting: 8
CAD: 2
所有17名患者中的初步的PK参数的总结列在表17中,各个剂量同龄组的式1化合物的平均血浆浓度-时间分布是如图3所示。
表17.单独IV输注30分钟的化合物I(C1D-7)之后,或化合物I加上口服100mg/m2替莫唑胺(C1D1和C1D4)之后,式1化合物的开始的药物代谢动力学参数(平均(CV%))的总结
a当外推时,AUC0-inf和CL可能不是精确地反映,因为对某些患者而言AUC0-inf是>20%的AUC0-24。
b未包含在统计分析中。该数值可能不是正确评估的,因为数据不够。
B.1.第1周期第7天的PK分析(C1D-7)
单独IV输注化合物I30分钟(C1D-7)之后,式1化合物的血浆浓度是以多指数的方式降低,具有约6.2-10.7小时的平均末端半衰期。30-分钟IV输注单独给予2-12mg/m2的化合物I时,在AUC(0-24)和Cmax上是线性剂量比例的。1mg/m2时的AUC0-24是没有包括在剂量比例的评价之内的,因为给药3个小时后所有患者的浓度是低于分析含量测定的极限值(LLOQ=2ng/mL)。平均总的身体清除率是27L/h(C1D-7),其大约是肝血流量的30%。分布的平均稳态量是197L(C1D-7)。
B.2.第1周期第1天的PK分析(C1D1)
单个口服给药100mg/m2的替莫唑胺和单个给药1-12mg/m2的化合物I之后,式1化合物浓度是与单独给予化合物I的浓度相似的。在C1D-7(单独给药I)时式1化合物的AUC(0-24)是与在C1D1(化合物I加上替莫唑胺)所有给药时相类似的。
B.3.第1周期第4天(C1D4)PK分析
在每日给药化合物I加替莫唑胺4天之后,基于对个体血浆浓度-时间分布的真实观察,在血浆中存在式1化合物最小量的蓄积。然而,在第1周期第4天给药和第1周期第1天给药之间,式1化合物AUC(0-24)有增大(范围:50%-75%)的趋势(表17)。
B.4.病人之间或病人内的差异性(Variability)
病人之间的式1化合物的AUC(0-24)的差异性是14%-85%,Cmax是7%-95%。然而,各个同龄组内病人之间的AUC(0-24)和Cmax差异性通常是小于60%(表17)。病人内AUC(0-24)和Cmax的差异性是通过比较在C1D-7单独给药化合物I与在C1D1给药化合物I+替莫唑胺来评价。病人内AUC(0-24)差异性的范围是7%-47%,Cmax差异性的范围是3%-44%。
C.测定PARP抑制剂量:测定方法学
PARP活性和抑制的药效学测定使用单克隆抗体来测量PAR聚合物的量的,PAR聚合物是在透化的外周血淋巴细胞和经过匀浆化的肿瘤样品中设定的条件下形成的。形成的聚合物的量可以是用作PARP活性的相关量,由此减少聚合物形成是与PARP抑制的程度相关的。PARP活性是表达为基线的百分比,而且通过输注后形成的PAR聚合物的量除输注前形成的量计算。在患有转移性黑色素瘤的病人中单药剂替莫唑胺的12个病人的第2阶段研究中,这个测定的可行性是成功试验的。这个研究表明单药剂替莫唑胺不抑制外周血淋巴细胞或肿瘤活组织检查样品中的PARP活性。
D.从第1阶段临床评价的药效学
在IV与替莫唑胺联合的化合物I的标签公开、剂量按比例增大的第1阶段的研究中,该研究的主要目的之一是测定化合物I的PID;PID是定义为剂量,在此剂量时外周血淋巴细胞中PARP活性减少至低于基线的50%,在介于2个化合物I的剂量水平之间的PARP抑制程度上存在一个高线(+/-10%绝对的)。定义是基于在第1天给药化合物I后24小时观察到的PARP活性。
使用以上C段公开的PARP活性的药效学测定,外周血淋巴细胞和肿瘤组织中的PARP抑制是在第1阶段的临床试验中评价。如上指出的,第1阶段第2部分研究中的登记是限于患有biopsiable疾病的转移性黑色素瘤的病人。所有病人需要同意治疗前和治疗后的活组织检查,以便可以评估肿瘤中的PARP活性。
在第1阶段的研究中,在给予化合物I试验剂量的那天(通常是Day-7)、以及第1天和4天从所有病人采集的全部的血液样品。采集的定时是输注化合物I前、输注结束后、输注后的4-6小时,输注后的24小时(下一天输注前)。化合物I是在30分钟内IV输注给药。从血液样品中收集外周血淋巴细胞,可能时,样品分成三分进行分析。
在表18中,总结了在第1天给药化合物I之后的外周血淋巴细胞中PARP活性。显著的PARP抑制(中值PARP活性减少至少50%)在所有的病人中表现出,与在第1天完成化合物I的30-分钟输注无关。取决于病人,在0.5和4-至6-小时的时间点观察到最大的抑制。在同龄组4和5中证明了PARP活性的持久抑制,其中PARP活性大于50%的中值减少是在它们第1天给药化合物I后24小时观察到。
如表19中所示,在第2部分的研究中,在其第一周期的第1、4或5天给药12mg/m2的式I化合物4-6小时之后,在从6位病人取得的肿瘤样品中PARP活性被抑制50%-93%。
表18.在第1天给药化合物I后的0.5、4-6,和24小时的PARP活性
PARP聚(ADP-核糖)聚合酶;BLD检测下限
a仅对于第1个同龄组而言,样品不在第1天采集。数据是来自试验剂量的化合物I(通常是第7天)之后采集样品的数据。
表19.肿瘤中PARP抑制
病人 | 开始的替莫唑胺剂量(mg/m2) | 开始的化合物I剂量(mg/m2) | 活检的天数 | %PARP抑制 |
A | 100 | 4 | 1 | 79% |
B | 135 | 12 | 1 | 91% |
C | 135 | 12 | 4 | 85% |
D | 135 | 12 | 4 | 50% |
E | 170 | 12 | 5 | 93% |
F | 170 | 12 | 1 | 77% |
G | 170 | 12 | 1 | 98% |
H | 200 | 12 | 1 | 90% |
I | 200 | 12 | 1 | 88% |
J | 200 | 18 | 1 | 98% |
K | 200 | 18 | 1 | 94% |
L | 200 | 18 | 1 | 89% |
M | 200 | 18 | 1 | 86%* |
N | 200 | 18 | 1 | 97% |
治疗的活组织检查是指出天治疗后的4-6小时进行,例外*:在第1天治疗后的24小时进行(第2天治疗之前).
实施例11.人中的效应:在患有进行性结肠直肠癌的病人中的与
“FOLFIRI”给药法联合的静脉内注射PARP抑制剂化合物I的阶段1/2
的试验,所述病人在第一线转移性发作(Metastatic Setting)的
“FOLFOX”给药法失败了
引入第1阶段部分的研究确定了在第2阶段部分所用的与伊立替康,5-FU和亚叶酸联合的化合物I的剂量。第2阶段部分是与FOLFIRI联合的化合物I的标签公开的多中心研究,FOLFIRI是用于已接受先前的第一线转移的结肠直肠癌的FOLFOX化疗病人。
试验的第1阶段部分是分成2部分。第1部分是标签公开的剂量按比例增大的研究,评价化合物I与伊立替康组合的安全性和耐受性(参见表20-1部分)。2部分是向1部分已经评价的组合中加入5-FU+亚叶酸(参见表20-2部分)。病人在2-周的周期内给药,来促进转变成第2阶段的FOLFIRI给药方案。病人具有组织学上和细胞学上证实的结肠直肠癌,对病人而言其是难治,或者其在第一线转移性发作中具有失败的FOLFOX,至少18岁,具有良好的行为状态(WHO 0或1),具有常规血试验确定的足够的骨髓、肝和肾功能,提供征得同意,而且满足多种其他的进入标准。病人接受PARP抑制剂量的化合物I(如早前的第1阶段研究和这个试验的第1部分确定的)和FOLFIRI。
在第2阶段,周期数涉及每2-周的周期的FOLFIRI,其以标准方式给予。伊立替康(基于第1阶段的剂量)在第1天90分钟内静脉给药。亚叶酸(LV 200mg/m2)输注与伊立替康同时开始,在第1天进行了2小时。5-FU推注(400mg/m2)和46小时5-FU输注(2400mg/m2)紧跟亚叶酸输注。在如表20所示的一系列病人的同龄组中,化合物I以升高的剂量加入伊立替康。在各个伊立替康给药前1小时以及又24小时之后,化合物I最初以12mg/m2的起始剂量静脉输注30分钟。伊立替康的起始剂量是150mg/m2(约是FOLFIRI给药法中所用的伊立替康全部剂量的80%)。在第1周期采集血液样品用以测定化合物I、伊立替康和SN-38PK分布。
剂量限制毒性(DLT)是用于测定最大耐受剂量(MTD),而且在最初的4周评估。最初,3个病人参与各个剂量水平。如果在任何同龄组的最初的3个病人中的1个观察到DLT,另外的3个病人被登记。MTD是定义为最高剂量水平,在此水平下的最初的4周内≤1/6的病人经历DLT。没有使化合物I的剂量升高到18mg/m2以上。一旦6个病人在MTD下的治疗完成4周后,第2阶段部分开始。MTD定义为低于使超过30%(2-6个病人)的同龄组由于在治疗的开始21天内的药物组合经历了剂量限制毒性的剂量的剂量。由于除了治疗有关的毒性之外任何原因,没有完成评价DLTs的前提时间的病人被替换。MTD推荐为第2阶段试验的起始剂量。
表20-第1阶段剂量
目标应答率是第2阶段研究的首要的终末点。病人评价了FOLFIRI的每3个周期的肿瘤应答。化合物I和FOLFIRI联合的目标应答率(RR)是使用实体瘤反应评价标准(RECIST)测定。Therasse等人,Newguidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors.J Nat lCancer Inst,2000年,第92卷,第205-216页。
实施例12.通过式1的化合物的辐射敏化
在体内对辐射抵抗起作用的因素是休眠细胞修复潜在致死性损伤(PLD)的能力(Weichselbaum,R.R.and Little,J.B.Thedifferential response of human tumors to fractionated radiationmay be due to a post-irradiation repair process.Br.J.Cancer1982;46:532-537)。在PLD测量的体外模型中,延迟集落形成的平板接种后,受辐射的生长受阻的细胞的存活率增加。在体外使用LoVo细胞测量潜在致死性损伤的修复,通过生长汇合至模拟肿瘤里的抗辐射的休眠细胞群所述LoVo细胞在G1阶段已经停止。细胞暴露于8 Gy的γ-辐射(Gammacel 1000 Elite,Nordian International Inc.Canada),立即进行用于集落形成测定的收获和平板接种,或者在用于集落形成测定的收获和平板接种之前,维持如生长停止的融合培养物24-小时修复期。当指明时,放射前30分钟加入0.4μM式1化合物,并存在于修复孵育的整个过程。如表21中所示的,在对照培养基中修复了24小时之后,细胞存活率提高了约7-倍。在修复时期加入式1化合物的孵育抑制了64.9%的PLD修复。
表21.潜在致死性损伤的修复(PLDR)的抑制
治疗 | 0时的存活率 | 24小时的存活率 | %PLDRa | PLDRb,c的抑制 |
单独的8Gy | 0.03±0.01 | 0.22±0.026 | 694±308 | |
8Gy+0.4μM的式1化合物 | 0.02±0.01 | 0.057±0.038 | 211±184 | 64.9±39.4 |
a% PLDR是计算为100x(24小时处的存活率-0时的存活率)/0时的存活率
b%修复的抑制是计算为100-((存在式1化合物下的PLDR/对照的PLDR)x100)
c3个独立试验的均值
作为放射增强剂的式1化合物的体内效力已经使用两个独立的方法进行了评估:离体的克隆原细胞测定和肿瘤生长延迟分析。就第一种方法而言,在5Gy剂量的肿瘤局限性辐射之前,确定的LoVo异种移植是用式1化合物(15或30mg/kg;母体化合物)治疗30分钟。肿瘤离体24小时之后,分解获得单个细胞悬浮液并放在平板上用于集落形成测定。如表22所示的,与只用辐射的治疗的肿瘤细胞相比,用式1化合物和5Gy治疗的肿瘤细胞的存活因素(SF)是提高的。15mg/kg和30mg/kg IR组合的SF等同于使用8Gy或9.5Gy辐射剂量取得的,分别获得1.6和1.9的剂量改变系数(DMF)。
表22.通过式1化合物的离体辐射增强
治疗 | CFEa | SFb | DMFc |
无 | 7.6 | 1 | - |
5Gy | 1.3 | 0.17 | 1 |
15mg/kg F1+5Gy | 0.44 | 0.06 | 1.6 |
30mg/kg F1+5Gy | 0.24 | 0.03 | 1.9 |
a集落形成效率(%平板接种的细胞)
b存活因素:集落形成率(CFE)作为未治疗的对照肿瘤的函数。
c剂量改变系数:将需要获得如式1+辐射的组合相同水平的克隆形成的存活的辐射剂量的倍数增加。
对于肿瘤生长延迟研究而言,约250mm3体积的LoVo异种移植是用10Gy辐射治疗,每天给予2Gy的部分连续5天。在联合组中,在每次2GY的部分30分钟之前,以15或0.15mg/kg的剂量给予式1化合物(再次使用母体化合物)。实验的终点确定是相对肿瘤体积增加至开始治疗时测量的体积(RTV4)的4倍所需的时间。生长延迟是由IR/式1治疗的肿瘤和未治疗肿瘤取得RTV4的需要的时间(天)的差异计算的。如表23所示,两个剂量的式1化合物导致抑制LoVo异种移植的辐射活性的显著的(36%)增强。
表23.式1化合物联合的X-辐射抑制LoVo异种移植的效率
a局部的肿瘤辐射。
b式1化合物剂量是通过腹膜内注射传送。
c全部组的n=5。
d增强计算为%增强=100x(IR+式1化合物的生长延迟-单独IR的生长延迟)/单独IR的生长延迟。
e单独IR的显著差异p=0.015(曼-怀二氏检验)
f单独IR的显著差异p=0.009(曼-怀二氏检验)
所有引用参考文献的公开内容在以其全文并入作为参考。
Claims (16)
4、权利要求1-3任一项的剂型,包含以表示为式1化合物的等量游离碱的1-48mg/m2的量的式1化合物。
5、权利要求1-3任一项的剂型,包含以表示为式1化合物的等量游离碱的2-96mg的式1化合物。
6、权利要求1-5任一项的剂型,其中所述剂型是注射用冻干粉。
7、权利要求1-6任一项的剂型,其中药学上可接受的盐是磷酸盐。
8、一种组合物,其包含式1化合物:
其药学上可接受的盐或溶剂合物,或混合物,为表示为式1化合物的等量游离碱的约2-约96mg的量,和治疗有效量的至少一种选自替莫唑胺、伊立替康、托泊替康、顺铂、卡铂和多柔比星的抗癌剂。
9、权利要求8的组合物,包含式1化合物、伊立替康、5-氟尿嘧啶和亚叶酸。
10、权利要求8或9的组合物在制备治疗哺乳动物的癌症的药剂中的用途。
11、权利要求10的用途,其中癌症是选自肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤黑色素瘤或眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统的新生物(CNS)、原发性中枢神经的淋巴瘤、脊椎肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤及其组合。
12、一种试剂盒:
(a)在第一单位剂型中的一定量的式1化合物:
其药学上可接受的盐或溶剂合物,或混合物,以及一种药学上可接受的载体或稀释剂;
(b)在第二单位剂型中的一定量的至少一种抗癌剂和一种药学上可接受的载体或稀释剂;和
(c)包含第一和至少第二剂型的容器。
13、一种治疗哺乳动物癌症的方法,所述方法包括向哺乳动物给予:
(a)式1化合物:
其药学上可接受的盐或溶剂合物,或混合物,以给药哺乳动物后有效地提供至少5.9ng/mL的式1化合物的持续的血浆浓度值至少24小时的量;和
(b)治疗有效量的至少一种抗癌剂。
14、权利要求13的方法,其中抗癌剂是给药式1化合物之后1小时内给药。
16、权利要求13-15任一项的方法,其中癌症是选自肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤黑色素瘤或眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统的新生物(CNS)、原发性中枢神经的淋巴瘤、脊椎肿瘤、、脑干胶质瘤、垂体腺瘤及其组合。
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CN114096243A (zh) * | 2018-10-22 | 2022-02-25 | 耶鲁大学 | 鉴定PPM1D突变作为NAMPTi敏感性的新型生物标志物 |
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