CN101372425A

CN101372425A - 一种微生物肥料及其制备方法

Info

Publication number: CN101372425A
Application number: CNA2008101670880A
Authority: CN
Inventors: 袁杰力; 汪松林; 曲嫣红; 兰斌
Original assignee: Dalian Sinian Microecology Research Institute; HEILONGJIANG ZHIYUAN BIOENGINEERING CO Ltd
Current assignee: Dalian Sinian Microecology Research Institute; HEILONGJIANG ZHIYUAN BIOENGINEERING CO Ltd
Priority date: 2008-10-10
Filing date: 2008-10-10
Publication date: 2009-02-25

Abstract

本发明涉及一种微生物肥料及其制备方法，采用蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌混合发酵、胶冻样芽孢杆菌、成团泛菌和圆褐固氮菌分别发酵，将四种发酵培养物按一定比例混合、分装后制成微生物菌剂。通过浸种、灌根或喷施的方法使用。本发明的产品可以促进植物根际生长、繁殖，改良土壤、消除板结、透水透气、促使根系发达；解钾、解磷、固氮提高肥效，减少化肥用量；抑制土壤中有害菌繁殖，预防土传病、重茬等各种病害的发生；实现增收、改善农产品品质的作用。

Description

一种微生物肥料及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种微生物肥料及其制备方法。

背景技术

现代人类食物的来源依赖于作为第一产业的农业生产。而由于世界人口爆炸性的增长，仅靠土壤基础肥力提供养分根本不可能生产出足够的粮食来满足人类的需要。因此，在农业生产中我们必须施用大量的肥料。除自然界所能提供的有限的有机肥料外，目前更主要的是依靠化学肥料。我国目前单位面积的化肥使用量是美国和世界平均水平的三倍多，全年总用量超过1.2亿吨，氮素化肥的损失率高达45％，这意味着年损失1000亿元以上和大量的能源被破坏而且造成环境的严重污染。为了解决或减缓使用化肥所带来的污染问题，世界上许多国家一方面采取限制化肥的用量，一方面投入大量人力物力研究一种无污染的生物肥料以取代化肥。生物肥料必将取代化肥这也是科学家们一致公认的发展取势。微生物肥料可利用微生物的生命活力及其代谢产物的作用，改善作物养分供应，向农作物提供营养元素、生长物质，调控其生长，达到提高产量和改善品质、减少化肥使用，提高土壤的肥力减少和降低病(虫)害的发生，改善环境质量的目的。一般讲的微生物肥料，其实是一种菌剂，是一类微生物群体。这类微生物菌剂能够提供一种或多种对作物生长有益的微生物群落。由于农业上应用的微生物菌剂常常和草炭、泥炭、有机肥料等有机质含量较高的基质混合在一起，所以习惯上把微生物菌剂称为微生物肥料，人们俗称为“菌肥”。

微生物肥料的作用机理根本不同于化学肥料。能够提供一种微生物群落的叫“单一微生物肥料”或“专一微生物菌剂(肥料)”；能够提供两种以上多种微生物群落的叫“复合微生物菌剂(肥料)”。根据微生物的作用划分，可以将微生物菌剂划分为“固氮细菌(菌剂)”、“解磷细菌(菌剂)”、“解钾细菌(菌剂)”、“腐解细菌(菌剂)”等。这些微生物菌剂都可以选择性地为农业生产服务。微生物肥料的作用主要是提供对作物生长有益的“微生物群落”，而不是“营养元素”。这些有益的微生物施到土壤中后，通过细菌的固定、分解、分泌作用，影响到土壤中的营养养分的变化。土壤中营养养分变化了，生长在土壤中的作物的生长情况当然也要变化。所以，微生物的作用是“作用”于土壤中、“反应”在作物上。如果土壤养分太低，微生物肥料(菌剂)也无回天之力，还得加施有机肥或化肥。

早在100多年前人们就已经发现在健康植物组织的内部也有微生物存在，这类微生物永久性地或周期性地生活在植物体内，被称为植物内生菌(endophyte)。它们生活于健康植物的各种组织和器官内部的细胞间隙或细胞内，不形成特殊的结构，与寄(宿)主植物在长期的共同进化过程中形成和谐的联合关系。它们作为植物微生态系统的天然组分，可以通过固氮作用，产生生理活性物质，抗逆境，抗动物摄食，拮抗病原菌等作用而促进宿主对环境的适应。它们还可产生具有多种生物活性的次生代谢产物，在农业和医药业中具有重要的应用潜力。近年来在甘蔗、玉米、水稻等作物和一些牧草中发现了多种具固氮功能的内生细菌，引起了学术界的高度关注现已成为生物固氮研究的活跃领域。

内生固氮菌生物有机菌剂的核心技术是采用了内生固氮菌。内生固氮菌是在植物体内有益的内生菌，并通过茎叶的光合作用获取能量来进行生物固氮，其固氮能力是根际固氮菌的几倍。另外研究证明，植物内生固氮菌与土壤固氮菌对植物的作用不同，内生固氮菌所固定的氮可直接为寄主植物的利用，而土壤固氮菌固定的氨首先是满足自身生命活动的需求，只有当菌体死亡后，其尸体对增加土壤的含氮量才有效果。

虽然目前市场上已出现了一些复合微生物菌剂，但其或者功能单一，或者其施用方法受到限制，使用后的作物增产效果还不能达到令人满意，所以目前仍需要开发适于多种施用途径、具有综合功能和良好增产效果的复合微生物菌剂或肥料。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有改善土壤品质、避免土传病害、减少化肥用量、提高农产品品质和产量综合功能的微生物肥料及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种微生物肥料，其特征在于:所述肥料包含蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、胶冻样芽孢杆菌、成团泛菌和圆褐固氮菌的发酵培养物的混合物，所述各菌的发酵培养物的重量配比为:

蜡样芽胞杆菌培养物 10～30％

巨大芽胞杆菌培养物 10～30％

枯草芽胞杆菌培养物 10～30％

胶冻样芽孢杆菌培养物 10～30％

成团泛菌培养物 20～40％

圆褐固氮菌培养物 20～40％。

优选所述各菌的发酵培养物的重量配比为:

蜡样芽胞杆菌培养物 10～25％

巨大芽胞杆菌培养物 10～25％

枯草芽胞杆菌培养物 10～25％

胶冻样芽孢杆菌培养物 10～25％

成团泛菌培养物 20～30％

圆褐固氮菌培养物 20～30％。

最优选所述各菌的发酵培养物的重量配比为:

蜡样芽胞杆菌培养物 15％

巨大芽胞杆菌培养物 15％

枯草芽胞杆菌培养物 15％

胶冻样芽孢杆菌培养物 15％

成团泛菌培养物 20％

圆褐固氮菌培养物 20％。

所述蜡样芽胞杆菌培养物可是单一蜡样芽胞杆菌株培养物，或是多种蜡样芽胞杆菌株培养物混合物，优选是蜡样芽胞杆菌CMCC63305(B.cereus)、蜡样芽胞杆菌BS8641(B.cereus)、蜡样芽胞杆菌AS2015(B.cereus)菌株培养物混合物。

更优选所述蜡样芽胞杆菌培养物是蜡样芽胞杆菌CMCC63305(B.cereus)、蜡样芽胞杆菌BS8641(B.cereus)、蜡样芽胞杆菌AS2015(B.cereus)菌株培养物重量比为1:1:1的混合物。

上述巨大芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、胶冻样芽孢杆菌、成团泛菌、和圆褐固氮菌可分别采用任何市售菌株，优选分别采用巨大芽胞杆菌ATCC10011(B.megaterium)、枯草芽胞杆菌K-M(Bacillus subtilis)、胶冻样芽孢杆菌硅酸盐亚种ATCC10013(B.mucilaginosus)、成团泛菌WLL(Pantoeaagglomerans)和圆褐固氮菌ATCC10003(Azotobocter chroococcum)。这些菌株均为市售菌株。

本发明还提供了上述微生物肥料的制备方法，其包括如下步骤:

a制备蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液:将蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌菌株种子液按3:2:2比例接入已经灭菌后的重量比为5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、余量为水的培养基中经32℃-36℃在PH7.2至8.5的条件下有氧发酵16-28小时后，制得蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液；

b制备成团泛菌发酵液:将成团泛菌种子液接入已经灭菌后的重量比为大豆粉1％-3％；玉米粉1％-2％；酵母膏0.1-0.5％；白糖1-3％味精0.1-0.3％；磷酸二氢钾0.1-0.3％碳酸钙1-3％；氯化钠0.3-0.6％、余量为水的培养基中，在30-35℃、pH为7.2-8.5下通气培养36-48小时，获得成团泛菌发酵液；

c制备圆褐固氮菌发酵液:将圆褐固氮菌种子液接入已经灭菌后的重量比为:KH2PO40.02-0.05％；K2HPO40.05-0.1％；MgSO4.7H2O0.01-0.05％；CaSO4.2H2O0.01-0.03％；酵母膏0.5-1％；蔗糖1-5％、余量为水的培养基中，在30-35℃、pH为7.2-7.5下通气培养24-48小时获得圆褐固氮菌发酵液；

d制备胶冻样芽孢杆菌发酵液:将胶冻样芽孢杆菌种子液接入已经灭菌后的含有重量比蔗糖0.05％-1％，MgSO47H2O 0.01％-0.5％，FeCl3 0.005％-0.5％，CaCO30.05％-0.5％，NaCl 0.01％-0.1％余量为水且pH为7.0-8.5的培养基中，在30-35℃、pH为7.2-8.5下通气培养36-48小时，获得成团泛菌发酵液；

e将上述的培养物发酵液，按照蜡样芽胞杆菌10～30％；巨大芽胞杆菌10～30％；枯草芽胞杆菌10～30％；胶冻样芽孢杆菌20～40％；成团泛菌20～40％；圆褐固氮菌20～40％比例混合，分装制成微生物肥料。

作为上述微生物肥料的制备方法的一种具体的实施方案，在蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液的制备步骤中，是将蜡样芽胞杆菌CMCC63305、蜡样芽胞杆菌BS8641、蜡样芽胞杆菌AS2015、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌菌株种子液按1:1:1:2:2比例接入已经灭菌后的含有重量比5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、余量为水的培养基中在PH7.2至8.5的条件下经32℃-36℃有氧发酵16-28小时后，制得蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液。

作为上述微生物肥料的制备方法的另一种具体的实施方案，在蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液的制备步骤中，是将蜡样芽胞杆菌CMCC63305、蜡样芽胞杆菌BS8641、蜡样芽胞杆菌AS2015、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌菌株种子液分别独立地接入已经灭菌后的含有重量比5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、余量为水的培养基中在PH7.2至8.5的条件下经32℃-36℃有氧发酵16-28小时后，分别独立地制得蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液。

本发明微生物肥料优选是各菌种发酵培养物直接混合的液体菌剂，其可通过浸种、灌根或喷施的方法使用；本发明微生物肥料也可通过将所述液体菌剂与公知的载体混合，然后经干燥制成固体微生物肥料，便于储存和运输。所述载体例如是糠麸、农作物秸秆或适于用作肥料的其它载体。

本发明发明微生物肥料也可采用上述菌种使用固体发酵的方法来制备，这类制备方法是本领域的公知常识。

本发明的有益效果是:

1、采用蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、成团泛菌和圆褐固氮菌进行复合，通过浸种、灌根或喷施的方法使用，可促进植物根际生长、繁殖，改良土壤、消除板结、透水透气、促使根系发达；解钾、解磷、固氮提高肥效减少化肥用量；抑制土壤中有害菌繁殖，预防土传病、重茬等各种病害的发生；实现增收、改善农产品品质的作用。

2、采用单一菌种分批发酵和多菌种混合发酵技术可充分利用各菌种的生长特点减少发酵次数获得最大数量的有益微生物，降低生产成本。

3、利用芽孢杆菌的固氮作用和成团泛菌和圆褐固氮菌植物内生固氮作用，可以从多方面帮助植物有效固氮利用土壤中的氮源，促进植物生长，增产增收。

4、本菌剂主要利用多种具有固氮菌作用芽孢杆菌作为生产菌种，可保障产品的有效活菌数量，延长产品的质保期和货架期。

5、本菌剂中的活菌数达到10～30亿/毫升。

6、本发明生物制剂的原材料是来源广泛、成本低廉，并可进行大规模的生产，产品成本低，效果好，生物安全性高，发酵周期短，菌剂制备工艺简单，具有工业化生产的可能性，宜于普及和推广。

上述多联合固氮菌的微生物菌剂一般在大豆上的用法用量如下:

1、拌种:可将种子放入容器中，然后将多联合固氮菌的微生物菌剂(100ml/亩)对适量清水进行拌种。

2、喷施:可兑水稀释200倍，叶面喷施，每亩用量250ml

上述多联合固氮菌的微生物菌剂实施效果

2005年在德惠市农业技术推广中心进行大豆对比试验，试验结果表明，大豆增产8.97％。

具体实施方式

实施例1

按下述方法制备菌种发酵液:

a制备蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液:蜡样芽胞杆菌CMCC63305、蜡样芽胞杆菌BS8641、蜡样芽胞杆菌AS2015、巨大芽胞杆菌ATCC10011(B.megaterium)、和枯草芽胞杆菌K-M(Bacillus subtilis)种子液按1:1:1:2:2比例接入已经灭菌后的含有重量比5％豆芽汁、0.5％葡萄糖、1.5％蛋白胨、余量为水的培养基中经32℃有氧发酵后16小时后，制得蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液。

b制备成团泛菌发酵液:将成团泛菌WLL(Pantoea agglomerans)种子液接入已经灭菌后的重量比为大豆粉1％；玉米粉2％；酵母膏0.5％；白糖1％、味精0.3％；磷酸二氢钾0.1％、碳酸钙1％；氯化钠0.3％、余量为水的培养基中，在35℃、pH为7.2下通气培养36小时，获得成团泛菌发酵液；

c制备圆褐固氮菌发酵液:将圆褐固氮菌ATCC10003(Azotobocterchroococcum)种子液接入已经灭菌后的重量比为:KH2PO4 0.05％；K2HPO40.05％；MgSO4.7H2O 05％；CaSO4.2H2O 0.03％；酵母膏0.5％；蔗糖1％、余量为水的培养基中，在35℃、pH为7.2下通气培养48小时，获得圆褐固氮菌发酵液；

d制备胶冻样芽孢杆菌发酵液:将胶冻样芽孢杆菌硅酸盐亚种ATCC10013(B.mucilaginosus)种子液接入已经灭菌后的含有重量比蔗糖1％，MgSO47H2O 0.1％，FeCl3 0.1％，CaCO3 0.2％，NaCl 0.08％余量为水且pH为8.0的培养基中，在32℃、pH为8.0下通气培养38小时，获得成团泛菌发酵液。

实施例2

按下述方法制备菌种发酵液:

a制备蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液:将蜡样芽胞杆菌CMCC63305、蜡样芽胞杆菌BS8641、蜡样芽胞杆菌AS2015、巨大芽胞杆菌ATCC10011(B.megaterium)、和枯草芽胞杆菌K-M(Bacillus subtilis)种子液分别独立地接入已经灭菌后的重量比为8％豆芽汁、0.3％葡萄糖、1.05％蛋白胨、余量为水的培养基中经34℃在PH7.8的条件下有氧发酵20小时后，分别独立地制得蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液；

b制备成团泛菌发酵液:将成团泛菌WLL(Pantoea agglomerans)种子液接入已经灭菌后的重量比为大豆粉2％；玉米粉1.5％；酵母膏0.3％；白糖2％、味精0.2％；磷酸二氢钾0.2％、碳酸钙2％；氯化钠0.4％、余量为水的培养基中，在33℃、pH为7.5下通气培养39小时，获得成团泛菌发酵液；

c制备圆褐固氮菌发酵液:将圆褐固氮菌ATCC10003(Azotobocterchroococcum)种子液接入已经灭菌后的重量比为:KH2PO4 0.03％；K2HPO40.08％；MgSO4.7H2O 0.035％；CaSO4.2H2O 0.02％；酵母膏0.8％；蔗糖3％、余量为水的培养基中，在34℃、pH为7.3下通气培养35小时，获得圆褐固氮菌发酵液；

d制备胶冻样芽孢杆菌发酵液:将胶冻样芽孢杆菌硅酸盐亚种ATCC10013(B.mucilaginosus)种子液接入已经灭菌后的含有重量比蔗糖0.8％，MgSO47H2O0.3％，FeCl3 0.1％，CaCO3 0.2％，NaCl 0.05％余量为水且pH为7.5的培养基中，在32℃、pH为7.6下通气培养40小时，获得成团泛菌发酵液；

实施例3

将实施例1制备的蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、胶冻样芽孢杆菌、成团泛菌的发酵液，按如下重量配合比混合:

蜡样芽胞杆菌ATCC63305 5％

蜡样芽胞杆菌BS8641 5％

蜡样芽胞杆菌AS2015 5％

巨大芽胞杆菌ATCC10011 10％

枯草芽胞杆菌K-M 10％

胶冻样芽孢杆菌ATCC10013 20％

成团泛菌WLL 20％

圆褐固氮菌ATCC10003 25％

然后分装制成本发明的微生物肥料。

实施例4

将实施例2制备的蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、胶冻样芽孢杆菌、成团泛菌的发酵液，按如下重量配合比混合:

蜡样芽胞杆菌ATCC63305 6％

蜡样芽胞杆菌BS8641 6％

蜡样芽胞杆菌AS2015 6％

巨大芽胞杆菌ATCC10011 10％

枯草芽胞杆菌K-M 10％

胶冻样芽孢杆菌ATCC10013 20％

成团泛菌WLL 20％

圆褐固氮菌ATCC10003 22％

然后分装制成本发明的微生物肥料。

实施例5

微生物肥料的制法如实施例1。

微生物肥料在水稻上的用法及效果如下:

2、沾根、喷苗床:将菌剂兑水稀释100倍，沾根1小时左右，进行易栽，也可喷施苗床上。

3、喷施：可兑水稀释200倍，叶面喷施，每亩用量250ml

上述微生物肥料的实施效果:

1、本发明微生物肥料能促进水稻发芽、主根生长、根须增加；从苗期到黄熟期能够促进水稻根系干重增加；在始穗期至蜡熟期增加水稻根冠比；在蜡熟期和黄熟期促进穗子干物质积累；

2、大田实验表明:本发明微生物肥料对水稻纹枯病、穗颈瘟、胡麻叶斑病、稻曲病等均有一定防治效果，防治率分别为19.18-27.72％、28.33-44.21％、54.50-74.11％、63.76-72.75％，对螟虫的防治效果为16.75-53％。

3、与对照相比，本发明微生物肥料能提高水稻分蘖能力、增加有效穗、穗长和实粒数、提高结实率、提高产量可达8.8％。

4、本发明微生物肥料具有节肥、增产、提高非特异性免疫能力增强抗逆性，缓解土壤板结增强土地肥力、促进早熟、改善品质等几项功效。

实施例6

本发明微生物肥料的制法实施例1。

本发明微生物肥料在马铃薯上的用法及效果如下:

1、浸种:可将种子放入容器中，然后将本发明微生物肥料(100ml/亩)对适量清水进行拌种。

2、喷施:可兑水稀释200倍，叶面喷施，每亩用量250ml

效果:与对照相比浸种和喷施增产255公斤/亩和193.9公斤/亩，增产22.7％和17.3％。

Claims

1.一种微生物肥料，其特征在于其包括蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、胶冻样芽孢杆菌、成团泛菌和圆褐固氮菌发酵培养物的混合物，所述各种发酵培养物的重量配合比为:

蜡样芽胞杆菌培养物 10～30％

巨大芽胞杆菌培养物 10～30％

枯草芽胞杆菌培养物 10～30％

胶冻样芽孢杆菌培养物 10～30％

成团泛菌培养物 20～40％

圆褐固氮菌培养物 20～40％。

2.如权利要求1所述的微生物肥料，其中所述蜡样芽胞杆菌培养物是单一蜡样芽胞杆菌株培养物，或是多种蜡样芽胞杆菌株培养物混合物。

3.如权利要求2所述的微生物肥料，其中所述蜡样芽胞杆菌培养物是蜡样芽胞杆菌CMCC63305(B.cereus)、蜡样芽胞杆菌BS8641(B.cereus)、蜡样芽胞杆菌AS2015(B.cereus)菌株培养物混合物。

4.如权利要求3所述的微生物肥料，其中所述蜡样芽胞杆菌培养物是蜡样芽胞杆菌CMCC63305(B.cereus)、蜡样芽胞杆菌BS8641(B.cereus)、蜡样芽胞杆菌AS2015(B.cereus)菌株培养物重量比为1:1:1的混合物。

5.如前述任一项权利要求所述的微生物肥料，其中所述巨大芽胞杆菌培养物、枯草芽胞杆菌培养物、胶冻样芽孢杆菌培养物、成团泛菌培养物、圆褐固氮菌培养物分别是巨大芽胞杆菌ATCC10011(B.megaterium)、枯草芽胞杆菌K-M(Bacillus subtilis)、胶冻样芽孢杆菌硅酸盐亚种ATCC10013(B.mucilaginosus)、成团泛菌WLL(Pantoea agglomerans)和圆褐固氮菌ATCC10003(Azotobocter chroococcum)的发酵培养物。

6.如权利要求1至4任一项所述的微生物肥料，其中所述肥料呈液体形态或固体形态。

7.如权利要求5所述的微生物肥料，其中所述肥料呈液体形态。

8.按照权利要求1所述的微生物肥料的制备方法，其特征在于包括如下步骤:

a 制备蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液:将蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌菌株种子液按3:2:2比例接入已经灭菌后的重量比为5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、余量为水的培养基中在PH7.2至8.5的条件下经32℃-36℃有氧发酵16-28小时后，制得蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液；

b 制备成团泛菌发酵液:将成团泛菌种子液接入已经灭菌后的重量比为大豆粉1％-3％；玉米粉1％-2％；酵母膏0.1-0.5％；白糖1-3％味精0.1-0.3％；磷酸二氢钾0.1-0.3％碳酸钙1-3％；氯化钠0.3-0.6％、余量为水的培养基中，在30-35℃、pH为7.2-8.5下通气培养36-48小时，获得成团泛菌发酵液；

c 制备圆褐固氮菌发酵液:将圆褐固氮菌种子液接入已经灭菌后的重量比为:KH2PO4 0.02-0.05％；K2HPO4 0.05-0.1％；MgSO4.7H2O0.01-0.05％；CaSO4.2H2O 0.01-0.03％；酵母膏0.5-1％；蔗糖1-5％、余量为水的培养基中，在30-35℃、pH为7.2-7.5下通气培养24-48小时，获得圆褐固氮菌发酵液；

d制备胶冻样芽孢杆菌发酵液:将胶冻样芽孢杆菌种子液接入已经灭菌后的含有重量比蔗糖0.2％，MgSO47H20.02％，FeC130.01％，CaCO3 0.2％，NaC10.03％余量为水且pH为7.5的培养基中，在30-35℃、pH为7.2-8.5下通气培养36-48小时，获得成团泛菌发酵液；

e将上述的发酵培养物培养物，按照蜡样芽胞杆菌10～30％；巨大芽胞杆菌10～30％；枯草芽胞杆菌10～30％；胶冻样芽孢杆菌10～30％；成团泛菌20～40％；圆褐固氮菌20～40％比例混合，分装制成微生物肥料。

9.按照权利要求7所述的微生物肥料制备方法，其特征在于:步骤a中是将蜡样芽胞杆菌CMCC63305、蜡样芽胞杆菌BS8641、蜡样芽胞杆菌AS2015、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌菌株种子液按1:1:1:2:2比例接入已经灭菌后的含有重量比5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、余量为水的培养基中在PH7.2至8.5的条件下经32℃-36℃有氧发酵16-28小时后，制得蜡样芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌发酵液。