CN101365674A - 白细胞介素-1和肿瘤坏死因子α调节剂、该调节剂的合成和应用该调节剂的方法 - Google Patents

白细胞介素-1和肿瘤坏死因子α调节剂、该调节剂的合成和应用该调节剂的方法 Download PDF

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CN101365674A CNA2006800345689A CN200680034568A CN101365674A CN 101365674 A CN101365674 A CN 101365674A CN A2006800345689 A CNA2006800345689 A CN A2006800345689A CN 200680034568 A CN200680034568 A CN 200680034568A CN 101365674 A CN101365674 A CN 101365674A
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迈克尔·A·帕拉迪诺
伊曼纽尔·A·塞奥多拉基斯
文卡塔·拉米·雷迪·马歇尔拉
赵达祥
徐永钜
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Abstract

公开了具有通式(II)、(IIA)和(IIB)化学结构的化合物及其前药酯和酸加合盐，这些化合物可用作白细胞介素－1和肿瘤坏死因子a调节剂，并且因此可用于治疗多种疾病，其中R基团如权利要求所定义。

Description

白细胞介素-1和肿瘤坏死因子α调节剂、该调节剂的合成和应用该调节剂的方法
相关申请的引用
本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求下列美国临时申请的优先权：2005年7月21日提交的第60/701,932号、2005年11月7日提交的第60/734,590号、2005年11月7日提交的第60/734,679号、2005年12月12日提交的第60/749,542号以及2006年3月22日提交的第60/785,223号，这些临时申请均整体并入本文作为参考。
发明领域
本发明涉及化合物和药物组合物，包括用于治疗多种疾病和疾病状态的新颖的化合物及其药物组合物。本发明还涉及天然产物和新颖的、结构相关的化合物的合成方法。更具体地，本发明涉及化合物及其药物组合物的新颖类似物以及所述化合物及其药物组合物的新颖的制备方法，所述化合物及其药物组合物用于治疗例如炎症、癌、恶病质、心血管疾病、抗感染、糖尿病、中耳炎、窦炎和移植排斥反应。
发明背景
胰腺癌在美国是造成癌死亡的第五大原因，其五年存活率低于百分之五。核因子κB(NFκB)是被暗示可以抑制凋亡、血管生成和转移的二聚转录因子。
五加酸是由朝鲜药用植物朝鲜五加(Acanthopanax koreanumNakai)(五加科(Araliaceae))中分离的海松二烯二萜。朝鲜五加的根和茎皮在韩国已被用于传统医药作为滋补剂和镇静药以及用于治疗风湿病和糖尿病。朝鲜五加是大韩民国济州岛的特产，其传统用作治疗如神经痛、麻痹以及腰痛的药物。从该树的根皮中已分离出多种有用的成分，包括具有式(I)化学结构的化合物五加酸。此外，从朝鲜五加的根皮中还分离出了式(I)化合物的某些类似物，例如其中COOH基团被甲醇基团、甲基乙酰基醚、甲基基团以及甲基酯取代。参见Kim，Y.H.和Chung，B.S.，J.Nat.Pro.，51，1080-83(1988)(该参考文献中提供了这些类似物的适当的化学名称)。该参考文献和本文引用的所有其它专利和专利公开均整体并入本文作为参考。
Figure A200680034568D00271
已报道式(I)化合物，也称为五加酸，具有某些药理学效果，包括如止痛和抗炎活性。式(I)化合物还显示极低的毒性；当对大鼠口服给药或静脉注射给药时其最小致死剂量(MLD)是1000mg/kg(参见Lee，Y.S.，“Pharmacological Study for(-)-Pimara-9(11)，15-Diene-19-oic Acid，A Component of Acanthopanax koreanum Nakai(朝鲜五加的成分(-)-海松-9(11)，15-二烯-19-酸的药理学研究)，”Doctorate Thesis，Dept.ofPharmacy，Seoul National University，Korea(1990))。式(I)化合物和/或其天然存在的类似物可通过抑制白细胞迁移和前列腺素E2(PGE2)合成来显示这些已知的药理学效果，并且其是白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生的可疑的效应物。此外，国际专利公开WO95/34300(1995年12月21日)中描述五加酸的合成方法以及五加酸在治疗免疫疾病中的用途。
另外，从朝鲜五加的根皮中已分离出式(IA)化合物——贝壳杉酸，和式(IA)化合物相应的甲基酯类似物以及式(IA)化合物的甲醇还原类似物。参见Kim，Y.H.和Chung，B.S.，J.Nat.Pro.，51，1080(1988)(该参考文献中提供了贝壳杉酸、(-)-异贝壳杉-16-烯-19-酸以及贝壳杉酸的已知类似物的适当的化学名称)。
多种生物化学途径中涉及肿瘤坏死因子α(本文简写为“TNF-α”或“TNF”)和/或白细胞介素-1(本文简写为“IL-1”)，因此亟需TNF-α和/或IL-1活性或产生的调节剂和其它被TNF-α或IL-1调节的分子，尤其是新颖的TNF-α和/或IL-1活性调节剂或影响IL-1或/和TNF-α产生的新颖化合物。对于维持人免疫系统和治疗诸如结核性胸膜炎、类风湿性胸膜炎等疾病以及诸如癌、心血管疾病、皮肤发红、病毒感染、糖尿病和移植排斥反应等通常不被认为是免疫紊乱的疾病，这样的化合物和化合物种类是有价值的。
尽管已知很多调节TNF-α和白细胞介素产生的方法，仍然亟需新颖的调节TNF-α和白细胞介素产生的方法、化合物和药物制剂，并且长期以来本领域技术人员一直在寻找新颖的调节TNF-α和白细胞介素产生的方法、化合物和药物制剂。
发明概述
还描述式(I)和(IA)化合物及包括其新颖的类似物在内的结构类似物的合成和半合成制备，包括环状含酰胺化合物的合成和半合成制备。
公开的化合物还包括例如具有通式(II)化学结构的化合物和具有通式(IIA)化学结构的化合物。对于具有通式(II)化学结构的化合物，公开的化合物包括：
Figure A200680034568D00291
及其立体异构体，其中若R3-R5、R7、R8、R11-R13均不是氢，R2或R6或R9不是甲基，或R10不是CH2，则R1能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、伯酰胺、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基以及C5-C12芳基；然而，若R3-R5、R7、R8、R11-R13均为氢，R2、R6和R9均为甲基，且R10是CH2，则R1选自氢、卤素、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C2-C12酯、C2-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C2-C12醇、不同于甲基-乙酰基醚的(C1-C12)(C1-C12)醚、C2-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12芳基等等；
R2和R9均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12酰基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
在尤其优选的实施方案中，R11能够是C1-C6烷基或C1-C6取代烷基，并且所有其它R基团能够是氢；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等，并且优选地，R1和R2不同时为甲基。
对于具有通式(IIA)化学结构的化合物，公开的化合物包括：
及其立体异构体，其中若R3-R5、R7、R8、R11-R13均不是氢，R2或R6不是甲基，R10不是CH2，或者若R10是CH2OH且R11是OH不成立，则能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基等等；但若所有R3-R5、R7、R8、R11-R13均为氢，R2和R6均为甲基，并且R10是CH2或CH2OH，则R1能够例如是氢、卤素、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C2-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C2-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C2-C12烷基、C2-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基等等；
R2能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12酰基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基和C5-C12芳基。在尤其优选的实施方案中，R11能够是C1-C6烷基或C1-C6取代烷基，并且所有其它R基团能够是氢；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15可以是立体有择的，并且能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇和C5-C6芳基，并且优选地，R1和R2不同时为甲基。
另一目的是提供具有通式(IIB)化学结构的化合物，并且提供合成和半合成制备具有通式(IIB)化学结构的化合物的方法。对于所述具有通式(IIB)化学结构的化合物，例如本文指定为TTL1、TTL2、TTL3、TTL4的化合物及其类似物和衍生物，本发明包括：
Figure A200680034568D00311
及其立体异构体，其中R1能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基。在这些条件下，R1优选选自COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12仲酰胺和C1-C12酯，并且最优选选自COOH、环状仲酰胺和C1-C6酯。
R2和R9均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12酰基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等。在尤其优选的实施方案中，R11是C1-C6烷基或C1-C6取代烷基，并且所有其它R基团均为氢；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R14和R15是立体有择的，并且均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等，并且优选地，R1和R2不同时为甲基。
还应该理解，可选择多个R基团，尤其是R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13，以形成环状体系。例如，R13和R12可以均为亚乙基基团，并且可在其各自的末端碳之间包括共价C-C键，在通式(IIB)化合物中产生另外的六元环。作为其它实例，通过对通式(IIB)的多个R基团，尤其是R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13选择适当的化学物类可形成双环。
公开的化合物包括任一公开的化合物的前药酯，例如包括通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物，以及通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的酸加合盐，包括含有环酰胺的化合物，以及包含治疗有效量的包括其前药酯及其酸加合盐在内的所述化合物的药物组合物，所述化合物可选地与药物可接受的载体组合。这样的组合物例如可在免疫和自身免疫紊乱的治疗中用作抗炎止痛剂，用作抗癌剂或抗肿瘤剂并用于治疗心血管疾病、皮肤发红、病毒感染、糖尿病、中耳炎、窦炎和/或移植排斥反应。包含治疗有效量的通式(II)、(IIA)或(IIB)化合物或通式(II)、(IIA)或(IIB)化合物的前药酯和酸加合盐的药物组合物尤其可用作抗癌剂、抗肿瘤剂、抗病毒剂，并且可被用于治疗心血管疾病、皮肤发红、病毒感染、糖尿病、中耳炎、窦炎和/或移植排斥反应。
还公开了上述化合物及其类似物的合成方法，其包括进行Diels-Alder反应的步骤，其使具有两个或多个环的二烯与亲二烯化合物反应，以产生有三个或多个环的结果化合物；并产生期望的合成化合物。Diels-Alder反应，连同二烯和亲二烯体的选择，提供合成多种化合物的灵活性，并允许使用化合物的组合化学库，允许使用包括临床试验在内的生物学测定。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00331
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R14和R15能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；并且
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；并且
其中所述化合物还包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
在某些方面，R16能够例如是氢。在其它方面，R17能够例如是环己烷。在其它方面，R3-R5、R7、R8、R11-R15均能够例如是氢。
另一实施方案包括以下化合物：
Figure A200680034568D00341
及其前药酯和酸加合盐。
其它实施方案涉及治疗疾病状态的方法。所述疾病状态能够例如是炎症、结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、癌、与癌及其治疗相关的疲劳降低、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病、化疗相关的粘膜损伤等等。所述方法能够包括例如将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00351
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基和C5-C12芳基等等；
并且R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12炔基；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
其中所述化合物能够包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
另一方面，所述治疗方法能够包括将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构
Figure A200680034568D00361
及其前药酯和酸加合盐。
其它实施方案涉及治疗动物炎性疾病状态的方法。所述方法能够包括将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00371
其中：
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基和C5-C12芳基；并且R9选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
其中所述化合物能够包括其前药酯和酸加合盐。
一方面，所述炎性疾病状态能够例如是结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病、化疗相关的粘膜损伤等等。
另一方面，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00381
及其前药酯和酸加合盐。
某些实施方案涉及治疗动物中癌的方法。所述方法能够包括将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00391
其中：
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基和C5-C12芳基；并且R9选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基和C5-C12芳基；
并且R9选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
其中所述化合物能够包括上述化合物的前药酯以及酸加合盐。
一方面，所述癌能够例如是多发性骨髓瘤、人前列腺腺癌等等；
另一方面，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00401
包括其前药酯和酸加合盐。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00411
其中：
若R3-R5、R7、R8、R11-R13均不是氢，R6不是甲基，R10不是CH2，或者若R10是CH2OH并且R11是OH，则R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基等等；
若R3-R5、R7、R8、R11-R13均为氢，R6是甲基并且R10是CH2或CH2OH，则R2能够例如是氢、卤素、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C2-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C2-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C2-C12烷基、C2-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基等等；
R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基、C5-C12芳基等等；
其中所述化合物能够包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
一方面，R16能够例如是氢等等。另一方面，R17能够例如是环己烷等等。另一方面，R3-R5、R7、R8、R11-R15均能够例如是氢等等。
另一实施方案中，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00421
及其前药酯和酸加合盐。
某些实施方案涉及治疗疾病状态的方法。所述疾病状态的实例能够是炎症、结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、癌、与癌或其治疗相关的疲劳降低、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤等等。
所述方法能够包括例如将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00431
其中：
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基、C5-C12芳基等等；
其中所述化合物能够包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
一方面，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00441
及其前药酯和酸加合盐。
其它实施方案涉及治疗动物炎性疾病状态的方法。该方法的实例包括将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00451
其中：
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基、C5-C12芳基等等；
其中所述化合物能够包括其前药酯和酸加合盐。
在某些方面，所述炎性疾病状态能够例如是结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病、化疗相关的粘膜损伤等等。
另一方面，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00461
及其前药酯和酸加合盐。
另一实施方案涉及治疗动物中癌的方法。该方法的实例包括将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00471
其中：
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基、C5-C12芳基等等；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯以及酸加合盐。
一方面，所述癌能够是例如多发性骨髓瘤和人前列腺腺癌。
另一方面，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00481
包括其前药酯和酸加合盐。
某些其它实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00491
其中：
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；并且
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基C5-C12芳基等等；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯以及其酸加合盐。
一方面，R16能够例如是氢等等。另一方面，R17能够例如是环己烷等等。另一方面，R3-R5、R7、R8、R11-R15均能够例如是氢等等。
其它实施方案涉及具有下述结构的化合物：
Figure A200680034568D00501
及其前药酯和酸加合盐。
某些实施方案涉及治疗疾病状态的方法。所述疾病状态能够例如是炎症、结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、癌、与癌或其治疗相关的疲劳降低、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病、化疗相关的粘膜损伤等等。
该方法的实例能够包括将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00511
其中：
R2能够是例如氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R16能够是例如氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够是例如C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基和C5-C12芳基；
并且R9选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯，以及其酸加合盐。
一方面，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00521
及其前药酯和酸加合盐。
某些其它实施方案涉及在动物中治疗炎性疾病状态的方法。例如，该方法能够包括将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00531
其中：
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
其中所述化合物包括其前药酯和酸加合盐。
一方面，所述炎性疾病状态能够例如是结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病、化疗相关的粘膜损伤等等。
另一方面，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00541
及其前药酯和酸加合盐。
另一实施方案涉及治疗动物中癌的方法。该方法的实例包括将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00551
其中：
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R16能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R17能够例如是C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯和酸加合盐。
一方面，所述癌能够例如是多发性骨髓瘤、人前列腺腺癌等等。
另一方面，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00561
包括其前药酯和酸加合盐。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00571
R1能够例如是：
Figure A200680034568D00572
Figure A200680034568D00573
和
Figure A200680034568D00574
Z是O或S；
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R14和R15能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；并且
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
其中所述化合物还包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
在某些方面，R16能够例如是氢。在某些方面，R3-R5、R7、R8、R11-R15均能够例如是氢。
任何任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基、或氰基任选取代。
某些实施方案涉及具有下列结构的化合物：
Figure A200680034568D00591
R1能够例如是：
Figure A200680034568D00592
和
Figure A200680034568D00594
其中Z是O或S；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
及其前药酯和酸加合盐。
任何任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基、或氰基任选取代。
某些实施方案涉及具有下列结构的化合物：
及其前药酯和酸加合盐。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00612
其中R1选自：
和
Figure A200680034568D00622
其中Z是O或S；
若R3-R5、R7、R8、R11-R13均不是氢、R6不是甲基、R10不是CH2，或者若R10是CH2OH并且R11是OH，则R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基等等；
若R3-R5、R7、R8、R11-R13均为氢，R6是甲基并且R10是CH2或CH2OH，则R2能够例如是氢、卤素、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C2-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C2-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C2-C12烷基、C2-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基等等；
R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够是独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
其中所述化合物能够包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
一方面，R16能够例如是氢等等。另一方面，R3-R5、R7、R8、R11-R15均能够例如是氢等等。
任何任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
在另一实施方案中，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00641
其中R1选自：
Figure A200680034568D00642
Figure A200680034568D00643
和
Figure A200680034568D00644
其中Z是O或S；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
及其前药酯和酸加合盐。
任何任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
在某些方面，所述化合物能够是例如：
Figure A200680034568D00651
及其前药酯和酸加合盐。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00661
其中R1选自：
Figure A200680034568D00663
和
Figure A200680034568D00664
其中Z是O或S；
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯以及酸加合盐。
任何任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
某些实施方案涉及具有下列结构的化合物：
Figure A200680034568D00681
其中R1能够例如是：
Figure A200680034568D00682
Figure A200680034568D00683
和
其中Z是O或S；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
及其前药酯和酸加合盐。
任何任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
在某些方面，所述化合物能够是例如：
Figure A200680034568D00701
Figure A200680034568D00711
Figure A200680034568D00721
及其前药酯和酸加合盐。
在某些方面，所述化合物能够例如是下列的一个或多个：
Figure A200680034568D00731
及其前药酯和酸加合盐。
在某些方面，所述化合物能够例如是：
Figure A200680034568D00732
及其前药酯和酸加合盐。
其它实施方案涉及治疗疾病状态的方法。所述疾病状态能够例如是炎症、结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、癌、与癌或其治疗相关的疲劳降低、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病、化疗相关的粘膜损伤等等。所述方法能够包括例如将上述的以及本文其它部分所述的化合物与所述动物的活组织接触，所述化合物例如包括通式II-b、IIA-b和IIB-b化合物。
其它实施方案涉及治疗动物中炎性疾病状态的方法。所述方法能够包括将化合物与所述动物的活组织接触。所述化合物能够例如是任何一个或多个通式II-b、IIA-b和IIB-b化合物。
某些实施方案涉及治疗或抑制动物中瘤形成疾病的方法。所述方法能够包括对所述动物给予治疗有效量的任何一种或多种上述的或本文其它部分所述的化合物以及药物可接受盐和前药酯的步骤。例如，所述瘤形成疾病能够是癌，其包括例如下列任一种：乳癌、肉瘤、白血病、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、骨癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌、黑素瘤、血管瘤和脑(包括神经胶质瘤)或中枢神经系统(CNS)癌。所述癌能够是多发性骨髓瘤、结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、其它肺癌、卵巢癌、黑素瘤等等。
在某些方面，所述癌能够是耐药性癌。所述耐药性癌能够显示例如下列至少一种：Bcl-2-过表达、P-糖蛋白外排泵的升高的水平、被MRP1编码的多药耐药性相关的蛋白1的增加的表达、降低的药物摄取、药物靶的改变或药物诱导的DNA损伤的增加的修复、细胞凋亡途径的改变或细胞色素P450酶的活化。所述耐药癌能够例如是多发性骨髓瘤、肉瘤、淋巴瘤(包括非霍奇金淋巴瘤)、白血病或任何其它的耐药性癌。所述癌能够例如是天然耐药性的或耐化疗、耐生物、耐辐射或耐免疫治疗的。所述癌能够耐利妥昔单抗、Gleevac、万珂(velcade)、Gleveec、雷利米得(Revlimid)、阿瓦斯丁(Avastin)、特罗凯(Tarceva)、爱必妥(Erbitux)、硼替佐米(bortezomib)、沙利度胺等等。耐药性细胞系某些其它的具体实例包括MES-SA细胞系、其多药耐药性衍生物MES-SA/Dx5、HL-60和HL-60/MX2。
某些实施方案涉及本文所述的化合物在治疗或抑制瘤形成疾病中的用途，例如抑制肿瘤、癌和其它肿瘤形成组织的生长。本文公开的治疗方法能够用于任何被怀疑带有良性或恶性肿瘤生长、癌或其它肿瘤形成生长的患者(本文所用的“肿瘤(tumor)”或“肿瘤(tumors)”涵盖肿瘤、实体瘤、癌、播散性肿瘤形成细胞和局部肿瘤形成生长)。这些生长的实例包括但不限于乳腺癌；骨肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤和其它肉瘤；白血病；窦瘤；卵巢、输尿管、膀胱、前列腺和其它泌尿生殖癌；结肠、食道和胃癌及其它胃肠癌；肺癌；淋巴瘤；骨髓瘤；胰腺癌；肝癌；肾癌；内分泌癌；皮肤癌；黑素瘤；血管瘤；以及脑或中枢神经系统(CNS；神经胶质瘤)癌。通常，待治疗的肿瘤或生长能够是任何原发性或继发性肿瘤或癌。某些实施方案涉及治疗动物中瘤形成疾病的方法。该方法能够包括例如对有需要的患者给予有效量的化合物。其它实施方案涉及化合物在制备用于治疗瘤形成疾病的药物或药品中的用途。
所述化合物或组合物能够与诸如化疗、辐射疗法及生物疗法的治疗联合给药或使用。某些实施方案涉及通过与化疗、辐射、免疫疗法或生物疗法组合，给予本文所公开的化合物或组合物来治疗疾病的方法。在某些实施方案中，所述化合物能够与化疗剂共同给药或使用。这些化疗剂的实例包括生物碱、烷基化剂、抗生素、抗代谢物、酶、激素、铂化合物、免疫治疗剂(抗体、T细胞、表位)、BRMs等等。实例包括长春新碱、长春碱、长春地辛、紫杉醇(Taxol)、多西紫杉醇、拓扑异构酶抑制剂、表鬼臼毒素(足叶乙甙(VP-16)、替尼泊甙(VM-26))、喜树碱、氮芥(环磷酰胺)、亚硝基脲、卡氮芥、洛莫司汀、氮烯咪胺、羟甲基三聚氰胺、塞替派和丝裂霉素C、放线霉素D(Actinomycin D)、蒽环类抗生素(柔红霉素(Daunorubicin)、柔红霉素(Daunomycin)、柔红霉素(Cerubidine))、多柔比星(阿霉素)、伊达比星(去甲氧基柔红霉素)、蒽二酮(米托蒽醌)、博莱霉素(争光霉素)、普卡霉素(光神霉素)、叶酸拮抗剂(甲氨蝶呤(雌酮、Mexate))、嘌呤抗代谢物(6-巯基嘌呤(6-MP、巯基嘌呤(Purinethol))和6-硫鸟嘌呤(6-TG))。该种类中两种主要的抗癌药物是6-巯基嘌呤和6-硫代鸟嘌呤、氯脱氧腺苷和喷司他丁(Pentostatin)(2’-脱氧肋间型霉素)、嘧啶拮抗剂、氟嘧啶(5-氟尿嘧啶(Adrucil)、5-氟脱氧尿苷(FdUrd)(氟尿苷))、胞嘧啶阿糖胞苷(赛德萨、ara-C)、氟达拉滨、L-天冬酰胺酶、羟基脲、糖皮质激素、抗雌激素、三苯氧酚、非甾体抗雄激素类药物、氟他胺、芳香化酶抑制剂阿那曲唑(瑞宁得)、顺铂、6-巯基嘌呤和硫鸟嘌呤、甲氨蝶呤、环磷酰胺、阿糖胞苷、L-天冬酰胺酶、类固醇：强的松和地塞米松。同样，例如蛋白酶体抑制剂如硼替佐米能够与本发明化合物联合使用。生物制剂的实例能够包括诸如TRAIL抗体的试剂、诸如α-V-β-3(αVβ3)和/或血管生成中涉及的其它细胞因子/生长因子的整合素、VEGF、EGF、FGF和PDGF。在某些方面，该化合物能够与抗体结合或与抗体一起输送。上述联合方法能够被用于治疗多种疾病状态，包括癌和肿瘤形成疾病、炎症和微生物感染。
某些实施方案涉及药物组合物，其包括上述的以及本文其它部分所述的化合物，及其药物可接受盐或前药酯。在某些方面，所述药物组合物还能够包括抗微生物剂。所述组合物能够被用于上述的以及本文中其它部分所述的任何方法。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00761
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯，及其酸加合盐。
某些其它实施方案涉及具有下列化学结构的合成化合物的制备方法：
Figure A200680034568D00771
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯，及其酸加合盐，所述制备方法包括下列步骤：
进行Diels-Alder反应，其使具有两个或多个环的二烯与亲二烯化合物反应，以产生具有三个或多个环的结果化合物；并且
产生所述合成化合物。
其它实施方案涉及具有下列化学结构的化合物的纯化方法：
Figure A200680034568D00772
所述方法包括色谱过程。
其它实施方案涉及在动物中治疗炎性疾病状态或肿瘤生成状态的方法，其包括：
使化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00781
在某些方面，所述炎性疾病能够例如是结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病或化疗相关的粘膜损伤。
在另外的方面，所述瘤形成疾病是癌。
在某些实施方案中、所述癌能够例如是乳癌、肉瘤、白血病、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌、黑素瘤、血管瘤以及脑或中枢神经系统(CNS)癌。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00791
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯，以及其酸加合盐。
其它实施方案涉及具有下列化学结构的合成化合物的制备方法：
Figure A200680034568D00792
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯，以及其酸加合盐，所述方法包括下列步骤：
进行Diels-Alder反应，其使具有两个或多个环的二烯与亲二烯化合物反应，以产生具有三个或多个环的结果化合物；并且
产生所述合成化合物。
其它实施方案涉及具有下列化学结构的化合物的纯化方法：
所述方法包括色谱过程。
某些实施方案涉及治疗动物中炎性疾病状态或瘤形成疾病状态的方法，所述方法包括：
将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568D00802
在某些方面，所述炎性疾病能够例如是结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤。
在某些实施方案中，所述瘤形成疾病是癌。
在某些方面，所述癌能够例如是乳癌、肉瘤、白血病、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌、黑素瘤、血管瘤以及脑活中枢神经系统(CNS)癌。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00811
在制造治疗疾病的药物中的用途，所述疾病选自：结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病和化疗相关的粘膜损伤、乳腺癌、肉瘤、白血病、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌、黑素瘤、血管瘤以及脑或中枢神经系统(CNS)癌。
其它实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00821
在制造治疗疾病的药物中的用途，所述疾病选自：结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病和化疗相关的粘膜损伤、乳腺癌、肉瘤、白血病、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌、黑素瘤、血管瘤以及脑或中枢神经系统(CNS)癌。
其它实施方案涉及包括药物可接受的载体和至少一种下列化合物的药物组合物：
Figure A200680034568D00831
和
Figure A200680034568D00832
附图简要说明
附图中例举了某些优选实施方案。附图仅表明本发明的某些优选实施方案和/或制备和/或使用本发明的某些优选方法。附图无意限制本发明所述和要求保护的范围。
图1描述五加酸和五加酸甲酯的结构、五加酸的立体化学图形以及本发明特定化合物的骨架型图形。
图2描述特定化合物的逆合成分析和关键键的结合。
图3描述所选择的构建某些化合物的AB环的方法，其包括：合成(±)罗汉松酸的Wenkert法；合成(±)罗汉松酸的Welch法；以及合成(±)罗汉松酸的DeGrot法。
图4描述合成五加酸和特定化合物的AB环体系的合成方案(方案1)。
图5描述合成方案(方案2)，其中完成了五加酸和某些化合物的合成。
图6描述如详细说明中所述的二烯42的最小化的三维模型。
图7描述如优选实施方案不对称Diels-Alder反应的详细描述中所述的催化剂49的开发和应用的合成方案(方案3)。
图8描述基于不对称Diels-Alder方法合成式(I)化合物和特定化合物的合成方案(方案4)。
图9描述石竹素及其衍生物和特定化合物的结构活性关系以及结构活性关系研究的焦点。
图10描述用于识别化合物1的结构改变和结构活性关系研究的位点。
图11描述用于结构活性关系研究和生物学研究的化合物1的类似物的优选的、有代表性的实例。
图12描述用于光亲和标记研究的化合物1的某些优选的、有代表性的衍生物。
图13描述化合物1的二聚体和/或结合物的某些优选的、有代表性的实例。
图14描述本文的图17中指定为TTL1和TTL3的特定化合物的全化学合成。
图15描述图17中指定为TTL3的优选的14C-标记的化合物的化学合成。
图16描述式(I)化合物的全化学合成。
图17描述某些化合物的合成概要以及这些化合物的物理性质。如图所述定义了化合物TTL1、TTL2、TTL3和TTL4。
图18描述实施例1的合成概述。
图19描述(-)五加酸和(+)海松酸的结构。
图20描述实施例1的(-)五加酸的逆合成分析。
图21描述如实施例1-6所述优选的通式(IIB)化合物的合成方案(方案5)。每一步骤的试剂、条件和百分比收率如下：(a)0.1当量PTSA(CH2OH)2、苯、80℃、4h、90％；(b)2.2当量Li、液NH3、1.0当量tBuOH、-78℃至-30℃、30分钟、然后异戊二烯(过量)、-78℃至50℃；1.1当量NC-CO2Me、Et2O、-78℃至0℃、2小时、55％；(c)1.1当量NaH、HMPA、25℃、3小时；1.1当量MoMCl、25℃、2小时、95％；(d)7.0当量Li、液NH3、-78℃至-30℃、20分钟；CH3I(过量)、-78℃至-30℃、1小时、61％；(e)1N HCl、THF、25℃、15分钟、95％；(f)1.6当量乙炔锂、Et2O、25℃、1小时、91％；(g)Lindlar催化剂(20％每份重量)、H2、二噁烷/吡啶10/1、25℃、10分钟、95％；(h)4.4当量BF3·Et2O、苯/THF4/1、80℃、5小时、95％；(i)13当量化合物103、光学纯、8小时、25℃、100％；(j)1.4当量NaBH4、THF/MeOH：10/1、30分钟、25℃、94％；(k)1.1当量p-Br-C6H4COCl、1.5当量吡啶、0.1当量DMAP、CH2Cl2、25℃、2小时、对化合物116为95％、对化合物117为97％。
图22描述化合物116和117的ORTEP图的Chem3D表示，为清楚的目的仅显示了所选择的氢原子。
图23描述实施例1的(-)五加酸的三环核心的合成方案(方案6)。每一步骤的试剂、条件和百分比收率如下：(a)3.0当量PhSH、0.05当量AIBN、二甲苯、120℃、18小时、86％；(b)1.1当量POCl3、HMPA、25℃、1小时；1.1当量吡啶、150℃、18小时、81％；(c)3.0当量化合物103、0.2当量SnCl4(1M的CH2Cl2溶液)、CH2Cl2、-20℃至0℃、20小时、84％；(d)1.4当量NaBH4、EtOH、25℃、30分钟；(e)ReneyNi(过量)、THF、65℃、10分钟、91％(两步)；(f)1.3当量Dess-Martin过碘烷(periodinane)、CH2Cl2、25℃、30分钟；(g)2.7当量P3PhCH3Br、2.2当量NaHMDS(1.0M的THF溶液)、THF、25℃、18小时、86％(两步)；(h)3.0LiBr、DMF、160℃、3小时、93％。
图24描述本文指定为TTL的化合物的两个对映异构体，其显示对指定为R6的基团进行立体选择性定位的能力。
图25描述图23中所述的(-)对映异构体的合成方法；用(L)-脯氨酸代替(D)-脯氨酸可合成图23中所述的(+)对映异构体。
图26描述图24所述的合成步骤的后续合成步骤。
图27描述所公开的合成路线在以立体特异性方式对通式IIB化合物及其立体异构体中指定为R9、R10和R11的基团在环上定位中的应用。
图28描述通式IIB化合物及其立体异构体的合成、分离和纯化，示出如何纯化化合物，其中以立体特异性方式对通式IIB化合物及其立体异构体中指定为R9、R10和R11的基团在环上定位。
图29也描述通式IIB化合物及其立体异构体的合成、分离和纯化，示出如何纯化化合物，其中以立体特异性方式对通式IIB化合物及其立体异构体中指定为R9、R10和R11的基团在环上定位。
图30描述TTL3类似物CC-3-02、CC-3-09、TTL-1、LT-1-73、LT-1-78、LT-1-85和LT-1-74的合成策略(策略1)。
图31描述TTL3类似物C-3-02、LT-1-46、CC-3-19、CC-3-17和CC-3-18的合成策略(策略2)。
图32描述TTL3类似物CC-3-02、CC-3-09、CC-3-14、CC-3-13、CC-3-13P、CC-3-15和CC-3-14x的合成策略(策略3)。
图33描述合成TTL3类似物和某些化合物的示意性合成方案(方案1)。
图34描述合成TTL3类似物和某些化合物的示意性合成方案(方案2)。
图35描述合成TTL3类似物和某些化合物的示意性合成方案(方案3)。
图36描述合成TTL3类似物和某些化合物的示意性合成方案(方案4)。
图37描述合成TTL3类似物和某些化合物的示意性合成方案(方案5)。
图38描述由式(IIB-a1)引起的人外周血单核细胞中LPS诱导的IκBα磷酸化水平的下降。
图39描述由式(IIB-A1)引起的RPMI 8226细胞中LPS诱导的IκBα磷酸化水平的下降。
图40显示式(IIB-A1)特异性抑制RPMI 8226细胞中LPS-诱导的IκBα和p38MAP激酶的磷酸化。
图41显示式(IIB-A1)抑制RPMI 8226细胞中Toll样受体配体诱导的IκBα的磷酸化。
图42显示式(IIB-A1)在RPMI 8226细胞中以剂量依赖方式降低LPS诱导的IL-8和IL-10产生。
图43描述使用LPS/IFNγ刺激的RAW264.7细胞中TTL3及其类似物对NOS-2、COX-2和NO的影响。
图44描述TTL3、TTL1、LT-1-45、LT-1-85和式(IIB-A1)对NIK/NF-κB途径的影响。
图45描述TTL3和式(IIB-A1)对NIK活性的影响。化合物1和5代表TTL3和式(IIB-A1)。
图46显示TTL3和式(IIB-A1)抑制TPA诱导的耳水肿。
图47显示TTL3和式(IIB-A1)延缓D-GalN/LPS的致死性。
图48描述式(IIB-A1)的CDCl3溶液的1H NMR谱图。
图49描述式(IIB-A1)的CDCl3溶液的13C NMR谱图。
图50描述式(IIB-A1)的COSY谱图。
图51描述式(IIB-A1)的1H-13C HSQC谱图。
图52描述式(IIB-A1)的1H-13C HMBC谱图。
图53描述式(IIB-A1)的HRMS谱图。
图54描述NPI-1390的1H-NMR(CDCl3溶液)。
图55描述NPI-1390的13C-NMR(CDCl3溶液)。
图56描述NPI-1391的1H-NMR(CDCl3溶液)。
图57描述NPI-1308的1H-NMR(CDCl3溶液)。
图58描述NPI-1308的13C-NMR(CDCl3溶液)。
图59描述NPI-1387的1H-NMR(CDCl3溶液)。
图60描述NPI-1387的13C-NMR(CDCl3溶液)。
图61描述NPI-1388的1H-NMR(CDCl3溶液)。
图62显示作为化合物浓度的函数的P+和正常细胞的存活百分数。
图63显示作为NPI-1387浓度的函数的细胞死亡百分数。
图64显示细胞死亡百分数作为NPI-1387浓度和PS-341浓度的函数。
图65显示作为化合物浓度的函数的多种细胞类型的细胞存活百分数。
图66显示免疫荧光染色，其描述LPS刺激后RAW264.7细胞中NPI-1387对NF-κB p65亚单位核转位的影响。
图67显示作为NPI-1387浓度的函数的存活Bcl-2-过表达MM.1S细胞和耐硼替佐米DHL-4淋巴瘤细胞的百分数。
图68显示作为NPI-1387浓度的函数的存活PMBNC百分数。
图69显示存在或不存在NPI-1387时MM细胞中凋亡信号的水平，以及作为NPI-1387浓度的函数的MM细胞中凋亡信号的水平。
图70显示作为NPI-1387和PS-341浓度的函数的MM.1S细胞死亡百分数的等效线图解分析。
图71显示作为NPI-1387浓度的函数的MM.1S细胞死亡百分数的等效线图解分析。
图72显示LPS刺激的RAW264.7细胞中作为NPI-1387浓度的函数的TNF-α合成的抑制。
图73显示LPS刺激时RAW264.7细胞中不同浓度的NPI-1387对IRAK1的磷酸化和IKKα的激酶活性的影响。
图74显示癌细胞中不同浓度的NPI-1387对NF-κB DNA结合活性的影响。
图75显示NPI-1387对PC-3菌落形成的时间依赖和剂量依赖影响。
优选实施方案的详细说明
某些公开的化合物具有如通式(II)所示的化学结构。
Figure A200680034568D00881
通式(II)化合物的R基团可以下列方式选择。若(1)R3-R5、R7、R8、R11-R13均不是氢，(2)R2、R6或R9不是甲基，或(3)R10不是CH2，则R1选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、伯酰胺、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基。在这些条件下，R1优选选自COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团和C1-C12酯，并且最优选选自C1-C12仲酰胺、COOH和C1-C6酯。
然而，若(1)R3-R5、R7、R8、R11-R13均为氢，(2)R2、R6和R9均为甲基，并且(3)R10是CH2，则R1选自氢、卤素、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C2-C12酯、伯酰胺、C2-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C2-C12醇、不同于甲基乙酰基醚的(C1-C12)(C1-C12)醚、C2-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12芳基。在这些条件下，R1优选选自C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团和C2-C12酯，并且最优选C4-C8酯。
R2和R9均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12酰基、C1-C12醇和C5-C12芳基。优选地，R2和R9均分别选自烷基和烯基基团。最优选地，R2和R9均为甲基基团，尽管在通式(II)化合物的优选实施方案中R2和R9之一可以是甲基并且另一个不是甲基。
R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基和C5-C12芳基。优选地，R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均为氢或C1-C6烷基，并且最优选地，R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均为氢。虽然如此，在通式(II)化合物的优选实施方案中R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13中任一个或几个可以是氢，而另外的可以不是氢。
R6选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12炔基。优选地，R6选自氢、卤素、C1-C6烷基。更优选地，R6是C1-C6烷基，并且最优选地，R6是甲基。
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇和C5-C12芳基。连接R10与通式(II)化合物其余部分的键优选为C-C双键，但可以是C-C单键、C-H单键或杂原子单键。优选地，R10是CH2或CH2R’，其中R’是C1-C6烷基或C1-C6取代烷基。最优选地，R10是CH2。
R14和R10分别选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇和C5-C6芳基，最优选氢和C1-C6烷基、C1-C6取代烷基，并且优选地，R1和R2不同时为甲基。
还应该理解，可选择不同的R基团，尤其是R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13以形成环状体系。例如，R13和R12可均为亚乙基基团并可以在其各自的末端碳之间包括共价C-C键，在通式(II)化合物中产生额外的六元环。作为另一实例，通过对通式(II)中的R基团，尤其是R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13选择适当的化学物类可形成双环。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
其中R1选自：
Figure A200680034568D00902
Figure A200680034568D00903
和
Figure A200680034568D00904
其中Z是O或S；
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；并且
R14和R15均能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯和酸加合盐。
任何被任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
某些实施方案涉及具有下列结构的化合物：
Figure A200680034568D00921
其中R1能够例如是：
Figure A200680034568D00931
和
Figure A200680034568D00932
其中Z是O或S；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
及其前药酯和酸加合盐。
任何被任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
某些公开的化合物具有如通式(IIA)所示的结构。
Figure A200680034568D00941
通式(IIA)化合物的R基团可以下列方式选择。若R3-R5、R7、R8、R11-R13均不是氢，R2或R6不是甲基，R10不是CH2或者若R10是CH2OH并且R11是OH不成立，则R1选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、伯酰胺、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基。在这些条件下，R1优选选自COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团和C1-C12酯，并且最优选选自COOH和C1-C6酯。
若R3-R5、R7、R8、R11-R13均为氢，R2和R6均为甲基，并且R10是CH2或CH2OH，则R1选自氢、卤素、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C2-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C2-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C2-C12烷基、C2-C12取代烷基、C2-C12烯基和C2-C12取代烯基。在这些条件下，R1优选选自C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团和C2-C12酯，并且最优选是C4-C8酯。
R2选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12酰基、C1-C12醇和C5-C12芳基。优选地，R2和R9均分别选自烷基和烯基基团。最优选地，R2和R9均为甲基基团，尽管在通式(IIA)化合物优选的实施方案中R2和R9之一可以是甲基，另一个不是甲基。
R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基和C5-C12芳基。优选地，R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均为氢或C1-C6烷基，并且最优选地R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均为氢。虽然如此，在通式(IIA)化合物优选的实施方案中R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13中任一个或几个可以是氢，而其它的可以不是氢。
R6选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12炔基。优选地，R6选自氢、卤素、C1-C6烷基。更优选地，R6是C1-C6烷基，并且最优选地，R6是甲基。
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇和C5-C12芳基。连接R10与通式(IIA)化合物其余部分的键优选为C-C双键，但可以是C-C单键、C-H单键或杂原子单键。优选地，R10是CH2或CH2R’，其中R’是C1-C6烷基或C1-C6取代烷基。最优选地，R10是CH2，并且优选地，R1和R2不同时为甲基。
还应该理解，可选择不同的R基团，尤其是R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13以形成环状体系。例如，R13和R12可均为亚乙基基团并可以在其各自的末端碳之间包括共价C-C键，在通式(IIA)化合物中产生额外的六元环。另一实例是，通过对通式(IIA)中的R基团，尤其是R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13选择适当的化学物类可形成双环。
某些实施方案涉及具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568D00961
其中R1选自：
Figure A200680034568D00962
Figure A200680034568D00963
和
Figure A200680034568D00964
其中Z是O或S；
若R3-R5、R7、R8、R11-R13均不是氢，R6不是甲基，R10不是CH2或者若R10是CH2OH并且R11是OH，则R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基等等；
若R3-R5、R7、R8、R11-R13均为氢、R6是甲基并且R10是CH2或CH2OH，则R2能够例如是氢、卤素、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C2-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C2-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C2-C12烷基、C2-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基等等；
R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
其中所述化合物能够包括上述化合物的前药酯以及其酸加合盐。
一方面，R16能够例如是氢等等。另一方面，R3-R5、R7、R8、R11-R15均能够例如是氢等等。
任何被任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
另一实施方案中，所述化合物能够具有下列结构：
Figure A200680034568D00981
其中R1选自：
Figure A200680034568D00983
和
Figure A200680034568D00984
其中Z是O或S；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
以及其前药酯和酸加合盐。
任何被任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
某些公开的化合物，包括具有如通式(IIB)所述化学结构的本文指定为TTL1、TTL2、TTL3和TTL4的化合物。
Figure A200680034568D01001
通式(IIB)化合物的R基团可以下列方式选择：R1选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、伯酰胺、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基。在这些条件下，R1优选选自COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团和C1-C12酯，并且最优选选自COOH和C1-C6酯。
R2和R9均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12酰基、C1-C12醇和C5-C12芳基。优选地，R2和R9均分别选自烷基和烯基基团。最优选地，R2和R9均为甲基基团，尽管在通式(IIB)化合物的优选实施方案中R2和R9之一可以是甲基并且另一个不是甲基。
R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基和C5-C12芳基。优选地，R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均为氢或C1-C6烷基，并且最优选地，R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均为氢。虽然如此，在通式(IIB)化合物的优选实施方案中，R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13中的任一个或几个可以是氢，而其它的可以不是氢。
R6选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12炔基。优选地，R6选自氢、卤素、C1-C6烷基。更优选地，R6是C1-C6烷基，并且最优选地，R6是甲基。
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇和C5-C12芳基。连接R10与通式(II)化合物其余部分的键优选为C-C双键，但可以是C-C单键、C-H单键或杂原子单键。优选地，R10是CH2或CH2R’，其中R’是C1-C6烷基或C1-C6取代烷基。最优选地，R10是CH2，并且优选地，R1和R2不同时为甲基。
还应该理解，可选择不同的R基团，尤其是R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13以形成环状体系。例如，R13和R12可均为亚乙基基团并可以在其各自的末端碳之间包括共价C-C键，在通式(IIB)化合物中产生额外的六元环。作为另一实例，通过对通式(IIB)中的R基团，尤其是R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13选择适当的化学物类可形成双环。
某些公开的化合物，包括优选的通式(IIB-A1)，具有下列结构所述的化学结构：
Figure A200680034568D01011
其中：
R2选自氢、卤素、-COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基；
R16选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基；
R17是环状基团，例如包括C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基和C5-C12芳基；其中R16和R17能够形成3元至12元环结构；
R9选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基和C5-C12芳基；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基和C5-C12芳基；
R6选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12炔基；
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇和C5-C12芳基；
R14和R15分别选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇和C5-C6芳基；并且
其中所述化合物包括前药酯和酸加合盐，并且可以任何多种可能的立体形式存在，包括外消旋体和光学活性的对映异构体或非对映异构体。
某些实施方案涉及通式IIB-b化合物、其前药和盐，其中通式II-b具有下列结构：
R1能够例如是：
Figure A200680034568D01031
Figure A200680034568D01032
和
Figure A200680034568D01033
Z是O或S；
R2能够例如是氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C5-C12芳基等等；
R9能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基、C5-C12芳基等等；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C5-C12芳基等等；
R6能够例如是氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基等等；
R10能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇、C5-C12芳基等等；
R14和R15能够例如是氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇、C5-C6芳基等等；并且
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
其中所述化合物还包括上述混合物的前药酯以及其酸加合盐。
在某些方面，R16能够例如是氢。在某些方面，R3-R5、R7、R8、R11-R15均能够例如是氢。
任何被任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
某些实施方案涉及具有下列结构的化合物：
Figure A200680034568D01051
R1能够是例如：
Figure A200680034568D01052
Figure A200680034568D01053
和
Figure A200680034568D01054
其中Z是O或S；
R16和R17能够例如独立地选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基、C1-C12烷基磺酰基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基、C6-C12芳基磺酰基、C4-C12杂芳基磺酰基等等；
R16和R17能够任选地结合在一起以形成任选取代的C2-C12杂环烷基、任选取代的C4-C12杂环烯基、任选取代的C4-C12杂环炔基或任选取代的C4-C12杂芳基；
R18能够选自氢；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
R19、R20和R21能够独立地选自氢；卤素；羟基；羧基；氨基；硫代；硝基；氰基；下列基团的单取代的、多取代的或未取代的、直链或支链的变体：C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C2-C12烷氧基、C1-C12醚、C2-C12酰基烷基、C7-C24芳烷基和C5-C24杂芳烷基；以及下列基团的单取代的、多取代的或未取代的变体：C3-C12环烷基、C3-C12环烯基、C3-C12环烷氧基、C6-C12芳基、C4-C12杂芳基、C2-C12杂环烷基、C4-C12杂环烯基、C4-C12杂环炔基等等；
以及其前药酯和酸加合盐。
任何被任选取代的基团能够被一个或多个C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硫代、硝基或氰基任选取代。
定义
本文所用的术语“纯化(purify)”或“纯化的(purified)”或“纯化的(purifying)”或“纯化(purification)”是指至少某些通常与其缔合的组分被除去的任何物种。
本文所用的术语“烷基”是指任何直链的或支链的饱和烃，优选C1-C6直链的、饱和的、未取代的烃，并且最优选甲基、乙基、异丁基和叔丁基。在取代的饱和烃中，优选C1-C6单、二和全卤代的饱和烃和氨基取代的饱和烃，最优选全氟代甲基、全氯代甲基、全氟代叔丁基和全氯代叔丁基。术语“取代烷基”是指任何直链的或支链的、取代的饱和烃，直链的C1-C6烷基仲胺、取代的C1-C6仲烷基胺和直链的C1-C6烷基叔胺在“取代烷基”定义的范围内，但不是优选的。术语“取代烷基”是指任何直链的或支链的、取代的饱和烃。环状化合物，无论是环烃还是具有杂原子的环状化合物，均在“烷基”表示的范围内。
本文所用的术语“取代的”是指用官能团对氢原子的任何取代。
本文所用的术语“官能团”具有通常的定义，并且是指优选选自下列的化学基团：卤原子、C1-C20烷基、取代的C1-C20烷基、全卤代烷基、环烷基、取代环烷基、芳基、取代芳基、苄基、杂芳基、取代杂芳基、氰基和硝基。官能团还可选自-SRS、-ORO、-NRn1Rn2、-N+Rn1Rn2Rn3、-N＝N-Rn1、-P+Rn1Rn2Rn3、-CORC、-C(＝NORO)RC、-CSRC、-OCORC、-OCONRn1Rn2、-OCO2RC、-CONRn1Rn2、-C(＝N)NRn1Rn2、-CO2RO、-SO2NRn1Rn2、-SO3RO、-SO2RO、-PO(ORO)2、-NRn1CSNRn2Rn3。这些官能团Rn1、Rn2、Rn3、RO和RS的取代基均分别优选选自氢原子、C1-C20烷基、取代的C1-C20烷基、环烷基、取代环烷基、芳基、取代芳基、苄基、杂芳基、取代杂芳基，并且可组成部分脂肪杂环或芳香杂环。RC优选选自氢原子、C1-C20烷基、取代的C1-C20烷基、全卤代烷基、环烷基、取代环烷基、芳基、取代芳基、苄基、杂芳基、取代杂芳基和氰基。
本文所用的术语“卤素”和“卤原子”是指元素周期表的第17栏的任一放射稳定的原子，优选氟、氯、溴或碘，尤其优选氟和氯。
本文所用的术语“烯基”是指任何直链的或支链的、取代的或未取代的不饱和烃，优选C1-C6直链的、单不饱和及二不饱和的、未取代的烃，并且最优选单不饱和的二卤代烃。术语“取代烯基”是指任何被一个或多个官能团取代的、直链的或支链的、取代的不饱和烃，直链的C2-C6烯基仲胺、取代的C2-C6仲烯基胺和直链的C2-C6烯基叔胺在“取代烷基”定义的范围内。术语“取代烯基”是指任何直链的或支链的、取代的不饱和烃。环状化合物，不论是不饱和环烃还是具有杂原子的环状化合物，均在“烯基”表示的范围内。
本文所用的术语“醇”是指任何直链的或支链的、饱和或不饱和醇，优选C1-C6直链饱和未取代的醇，最优选甲醇、乙醇、异丁醇和叔丁醇。在取代的饱和醇中，优选C1-C6单和二取代的饱和醇。术语“醇”包括取代烷基醇和取代烯基醇。
本文所用的术语“芳基”涵盖术语“取代芳基”、“杂芳基”和“取代杂芳基”，其指芳香烃环，优选具有5个或6个原子组成的环。术语“杂芳基”和“取代杂芳基”是指至少一个杂原子与至少一个碳原子共同存在于环中的芳香烃环，所述杂原子例如是氧、硫或氮原子。“芳基”最广泛地，并且“取代芳基”、“杂芳基”和“取代杂芳基”最具体地，指芳香烃环，优选具有5个或6个原子组成的环，并且最优选具有6个原子组成的环。术语“取代芳基”包括被诸如烷基、芳基、烷氧基、叠氮基、胺和氨基等基团单取代的和多取代的芳基。“杂芳基”和“取代的杂芳基”若单独使用，尤其是指至少一个杂原子与至少一个碳原子共同存在于环中的芳香烃环，所述杂原子例如是氧、硫或氮原子。
术语“醚”和“烷氧基”是指任何直链的或支链的、取代的或未取代的、饱和或不饱和的醚，优选C1-C6直链的、饱和的、未取代的醚，最优选二甲醚、二乙醚、甲基异丁基醚和甲基叔丁基醚。术语“醚”和“烷氧基”最广泛地，并且“环烷氧基”和“环醚”更具体地，指任何非芳香烃环，所述非芳香烃环优选具有5至12个原子组成的环。
术语“酯”是指任何直链的或支链的、取代的或未取代的、饱和或不饱和的酯，优选C1-C6直链的、饱和的、未取代的酯，最优选甲基酯和异丁基酯。
术语“前药酯”，尤其是当指式(I)化合物的前药酯时，是指该化合物的化学衍生物，其在体内通过例如血液中的水解快速转变以产生该化合物。术语“前药酯”是指通过加入若干在生理条件下水解的成酯基团中的任一种而形成本发明化合物的衍生物。前药酯基团的实例包括新戊酰氧基甲基、乙酰氧基甲基、2-苯并[c]呋喃酮基、2，3-二氢化茚基和甲氧基甲基，以及本领域已知的其它这样的基团，包括(5-R-2-氧-1，3-二氧杂环戊烯-4-基)甲基基团。前药酯基团的其它实例能够在例如T.Higuchi和V.Stella的“Pro-drugs as Novel Delivery Systems(作为新颖传输系统的前药)”，Vol.14，A.C.S.Symposium Series，AmericanChemical Society(1975)和“Bioreversible Carriers in Drug Design：Theory and Application(药物设计中的生物可逆性载体：理论与应用)”，edited by E.B.Roche，Pergamon Press：New York，14-21(1987)(提供了用于含羧基化合物的前药的酯的实例)中找到。
术语“药物可接受的盐”，尤其是当指式(I)化合物的药物可接受盐时，是指化合物的任何药物可接受的盐，并且优选指化合物的酸加合盐。药物可接受盐的优选实例为碱金属盐(钠盐或钾盐)、碱土金属盐(钙盐或镁盐)或衍生自氨或药物可接受的有机胺的铵盐，所述有机胺例如是C1-C7烷基胺、环己胺、三乙醇胺、乙二胺或三(羟甲基)-氨基甲烷。对于公开的为碱性胺的化合物，药物可接受的盐的优选实例为药物可接受的无机或有机酸的酸加合盐，所述酸例如氢卤酸、硫酸、磷酸或脂肪族或芳香族羧酸或磺酸，例如乙酸、琥珀酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、烟酸、甲磺酸、对甲苯磺酸或萘磺酸。本发明优选的药物组合物包括通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的药物可接受盐和前药酯。
本文所用的术语“纯化的”、“基本纯化的”和“分离的”是指公开的化合物不含有通常以天然状态与该化合物缔合的其它不同的化合物，使得化合物包含至少0.5％、1％、5％、10％或20％重量比的给定样品，并且最优选至少50％或75％重量比的给定样品。在一优选实施方案中，这些术语是指所述化合物包含至少95％重量比的给定样品。
当术语“抗癌”、“抗肿瘤”和“肿瘤生长抑制”修饰术语“化合物”时，并且当术语“抑制”和“降低”修饰术语“化合物”和/或术语“肿瘤”时，指题述化合物的存在与肿瘤或癌体积生长速度的至少减缓相关。更优选地，术语“抗癌”、“抗肿瘤”、“肿瘤生长抑制”、“抑制”和“降低”是指题述化合物的存在与肿瘤生长或癌体积生长的暂时停止之间的关联。尤其是在最优选实施方案中，术语“抗癌”、“抗肿瘤”、“肿瘤生长抑制”、“抑制”和“降低”还指题述化合物的存在与肿瘤体积的至少暂时降低之间的关联。这些术语是指动物中，具体地是指哺乳动物中，最具体地是指人中的癌和各种恶性肿瘤。
术语“皮肤发红”是指任何皮肤发红，尤其是具有神经原性源的慢性皮肤发红，与EP 7744250中的含义相同，但不限于EP 7744250中的含义，该专利被全部并入本文作为参考。
术语“病毒感染”是指任何病毒源的感染，包括鼻病毒的感染，并且优选地而不排他地指人免疫缺陷病毒(HIV)，人细胞巨化病毒，甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎病毒。
术语“心血管疾病”是指心脏和血管系统的多种疾病，其包括但不限于充血性心力衰竭、心功能障碍、再灌注损伤和各种已知的外周循环异常。“心血管疾病”是指动物中，尤其是哺乳动物中，最尤其是人中这样的疾病。
本文所用的术语“糖尿病”是指多种涉及升高的胰岛素水平、胰岛素抵抗或包括1型糖尿病、2型糖尿病在内的糖尿病的疾病以及各种相关的疾病状态，包括但不限于Stein-Leventhal综合征或多囊性卵巢综合征(PCOS)。
本文所用的术语“移植排斥反应”是指被称为同种异体移植排斥反应、异种排斥反应和自体移植排斥反应的疾病状态和相关症状，并且在优选实施方案中是指人-人同种异体移植排斥反应。
本文所用的术语“调节剂”或“调节”是指在个体中化合物或治疗过程改变被调节化合物，尤其是TNF-α或IL-1的存在或产生的能力。最优选地，“调节剂”或“调节”是指化合物或治疗过程降低被调节化合物的存在或产生的能力。
本文所用的术语TTL1、TTL2、TTL3、TTL4和TTL5是指图17和其它图中确认的具体的化学基团。
本文所用的所有其它化学的、医学的、药理学的或其它技术术语均应被理解为本领域技术人员所理解的含义。
白细胞介素-1(IL-1)
IL-1是参与多种哺乳动物免疫和炎性机理以及其它防御机理的调节因子，尤其是在人体中(参见如Dinarello，D.A.，FASEB J.，2，108(1988))。IL-1首先被发现由活化的巨噬细胞生成，多种细胞分泌IL-1，例如成纤维细胞、角质形成细胞、T细胞、B细胞以及大脑的星形胶质细胞，IL-1具有多种功能，包括：刺激CD4+T细胞的增殖，参见Mizel，S.B.，Immunol.Rev.，63，51(1982)；刺激胸腺TC细胞通过与T细胞受体TCR结合而具有的细胞杀伤作用，参见McConkey，D.J.，et al.，J.Biol.Chem.，265，3009(1990)；诱导多种参与炎性机理的物质如PGE2、磷脂酶A2(PLA2)和胶原酶的产生，参见Dejana，E.，et al.，Bolid，69，695-699(1987))；诱导肝脏中急性期蛋白的产生，参见Andus，T.，etal.，Eur.J.Immunol.，123，2928(1988))；升高血管系统中的血压，参见Okusawa，S.，et al.，J.Clin.Invest.，81，1162(1988))；以及诱导其它细胞因子如IL-6和TNF-α的产生，参见Dinarello，C.A.，et al.，J.Immunol.，139，1902(1987)。还已知IL-1调节影响类风湿性关节炎，参见Nouri，A.M.，et al.，Clin.Exp.Immunol.，58，402(1984)；移植排斥反应，参见Mauriand Teppo，Transplantation，45，143(1988)；以及败血症，参见Cannon，J.G.，et al.，LymphokineRes.，7，457(1988)，并且IL-1在以大剂量给药时可以引起发烧和疼痛。参见Smith，J.，et al.，Am.Soc.Clin.Oncol.，9，710(1990))。
能够通过使用天然存在的IL-1受体抑制剂(IL-1Ra)来抑制IL-1与其受体结合而降低动物模型中败血症、关节炎、炎症和相关疾病状态的发生，参见Dinarello，C.A.和Thompson，R.C.，Immunol.Today，12，404(1991)，并且已提出了某些通过使用特定的抗体来抑制IL-1活性的方法，参见Giovine，D.F.S.和Duff，G.W.，Immunol.Today.11，13(1990)。对于IL-6，已通过使用抗IL-6或IL-6受体的抗体抑制骨髓瘤患者中骨髓细胞的增殖，参见Suzuki，H.，Eur.J.Immuno.，22，1989(1992))。本发明中通过由化合物诱导的TNF-α和IL-1调节而治疗的疾病状态包括但不必须限于本文所述的疾病状态。
肿瘤坏死因子α(TNF-α)
在1985年首先纯化了人TNF-α(Aggarwal，B.B.；Kohr，W.J.“Human tumor necrosis factor.Production，purification andcharacterization(人肿瘤坏死因子：产生、纯化与表征)”.J.Biol.Chem.1985，260，2345-2354)。不久之后，实现了TNF cDNA的分子克隆和人TNF位点的克隆(参见Pennica，D.；Nedwin，G.E.；Hayflick，J.S.et al“Human necrosis factor：precursor structure，expression and homology tolymphotoxin(人坏死因子：前体结构、表达和与淋巴毒素的同源性)”.Nature 1984，312，724-729.Wang，A.M.；Creasy，A.A.；Ladner，M.B.“Molecular cloning of the complementary DNA for human tumor necrosisfactor(人肿瘤坏死因子互补DNA的分子克隆)”.Nature 1985，313，803-806)。TNF-α是主要由巨噬细胞和多种其它细胞类型产生的三聚的17-KDa多肽。该肽最初被表达为26-KDa跨膜蛋白，由被称为TACE的酶进行蛋白水解切割，从中切割并释放17-KDa亚单位。该工作阐明了TNF-α的广泛的和多方面的生物学意义，并激励了以其过量生成为目标的治疗方法的开发。
TNF-α通常由多种细胞如活化的巨噬细胞和成纤维细胞产生。TNF-α诱导IL-1的产生，参见Dinarello，D.A.，FASEB J.，2，108(1988)；对纤维肉瘤L929细胞具有细胞毒性，参见Espevik和Nissen-Meyer，J.Immunol.Methods，95，99(1986)；刺激成纤维细胞的增殖，参见Sugarman，B.J.，et al.，Science，230，943(1985)；诱导PGE2和花生四烯酸的产生，二者均可以参与炎症应答，参见Suttys，et al.，Eur.J.Biochem.，195，465(1991)；并且诱导IL-6或其它生长因子的产生，参见Van Hinsbergh，et al.，Blood，72，1467(1988))。TNF-α还直接或间接参与多种疾病，如由疟原虫(Plasmodium)属的锥虫株携带的传染性疾病，参见Cerami，A.，et al.，Immunol.Today，9，28(1988))；自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮(SLE)和关节炎，参见Fiers，W.，FEBS，285，199(1991)；获得性免疫缺陷综合征(AIDS)，参见Mintz，M.，et al.，Am.J.Dis.Child.，143，771(1989)；败血症，参见Tracey，K.J.，et al.，Curr.Opin.Immunol.，1，454(1989)；以及某些类型的感染，参见Balkwill，F.R.，Cytokines in Cancer Therapy(癌治疗中的细胞因子)，OxfordUniversity Press(1989)。
TNF-α和炎症应答
感染和组织损伤诱导一系列引发免疫系统的反应的生物化学变化，其统称为炎症应答。该应答的进展至少部分地基于局部血管舒张或增强的血管渗透性和血管内皮的活化，这允许白细胞有效地循环并迁移至受损位点，因此增加其与抗原结合并破坏抗原的机会。然后血管内皮被认为是活化的或发炎的。通常，炎症是对各种意外刺激的受欢迎的免疫应答，因此其显示快速的发作和短的持续时间(急性炎症)。然而，其持久的或未受控的活性(慢性炎症)对身体具有有害的影响并导致数种免疫疾病的发病，如感染性休克、类风湿性关节炎、炎性肠疾病和充血性心力衰竭。参见“Tumor Necrosis Factors.The moleculesand their emerging role in medicine(肿瘤坏死因子：分子及其在医药中的新兴作用)”B.Beutler，Ed.，Raven Press，N.Y.1992，pages1-590。
有效免疫应答的显现通常要求多种细胞的募集以及一系列生物事件的控制。这种复杂的细胞内协调和相互作用是由局部分泌的低分子量蛋白介导的，这些蛋白统称细胞因子。这些蛋白与细胞表面上的特异性受体结合并引发信号转导途径，其最终改变靶细胞中的基因表达，从而调节有效的炎症应答。
细胞因子可显示多效作用(给定的蛋白对不同的细胞发挥不同的作用)、重复多余(两个或多个细胞因子介导类似的功能)、协同作用(两种细胞因子的组合作用大于每一单独蛋白的加性效应)和拮抗作用(一种细胞因子的作用抑制其它细胞因子的作用)等性质。为此，某些细胞因子是致炎的(诱导炎症)，而其它一些是抗炎的(抑制炎症)。致炎细胞因子种类包括：白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)。参见“Tumor Necrosis Factors.The molecules and theiremerging role in medicine(肿瘤坏死因子：分子及其在医学中的新兴作用)”B.Beutler，Ed.，Raven Press，N.Y.1992，pages1-590。这些细胞因子在炎症应答开始后不久由巨噬细胞分泌并且诱导凝固、增加血管渗透性并活化血管内皮细胞上粘附分子的表达(例如TNF-α刺激E-选择的表达，E-选择与损伤位点结合并为损伤位点补充嗜中性粒细胞)。随后，并且在更系统的免疫应答过程中，这些细胞因子对包括骨髓和肝在内的身体数个器官起作用，以保证增加产生白细胞和合成适当的激素和急性期蛋白。此外，它们对下丘脑起作用并诱导发热，这有助于抑制病原体的生长并增强总的免疫反应。
TNF-α与多种疾病和疾病状态的发病机理
与任何细胞因子一样，TNF-α对宿主既不是完全有益也不是完全破坏性的。而是，保持其产生和调节的平衡以保证宿主能够有效地对入侵的微生物起反应，而在该过程中不危及宿主的健康。作为炎症的介体，TNF-α有助于身体与细菌感染和组织损伤做斗争。然而，TNF-α的过量产生导致慢性炎症，对身体具有有害的影响并在数种疾病的发病机理中起主要作用，其中某些疾病概述如下。
细菌感染性休克
这种疾病通常在被某些革兰氏阴性细菌感染后发生，所述细菌如大肠杆菌(E.coli)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)和脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)。这些细菌的细胞壁上带有某些脂多糖(内毒素)，其刺激巨噬细胞过量产生IL-1和TNF-α，从而又引起感染性休克。该疾病状态的症状经常是致命的，其包括血压降低、发热、腹泻和广泛凝血。仅在美国，每年约500,000人患该疾病状态并造成超过70,000死亡。治疗该疾病的年支出估计为50至100亿美元。
类风湿性关节炎
这是最常见的人自身免疫疾病，影响约1％的西方人口并且是造成残疾的主要原因，其严重的形式导致死亡。参见Szekanecz，Z.；Kosh，A.E.；Kunkel，S.L.；Strieter，R.M.“Cytokines in rheumatoid arthritis.Potential targets for pharmacological applications(类风湿性关节炎中的细胞因子：药理学应用的潜在靶)”.ClinicalP harmacol.1998，12，377-390。Camussi，G.；Lupin，E.“The future role of anti-tumor necrosisfactor products in the treatment of rheumatoid arthritis(抗肿瘤坏死因子产物未来在治疗类风湿性关节炎中的作用)”.Drugs 1998，55，613-620。该疾病状态的特征在于滑膜的炎症和细胞增殖，这导致邻近的软骨基质的入侵、其后续的侵蚀和最终的骨破坏。尽管对炎症应答的起源了解不多，已发现在软骨侵蚀区域TNF-α和IL-1的增加的表达。更最近地，已广泛研究并已通过实验证实了TNF-α在该病症中的致病作用。此外，临床数据表明TNF-α的中和可能是降低侵蚀过程的治疗方法。然而，到目前为止，治疗仅提供暂时的缓解而不改变该疾病的进展或过程的基本机理。
炎性肠疾病和相关疾病状态
包括克隆病和溃疡性结肠炎的这类疾病是使人虚弱的病症，其特征在于肠粘膜和固有层的慢性炎症。尽管引起其发作的事件是未知的，它们与严重的白细胞浸润和可溶性介体的局部产生有关。因此，或者通过直接的细胞毒性作用、或者作为炎症级联的协调者，TNF-α被认为是这些疾病状态的发病机理中关键的介体。例如参见Armstrong，A.M.；Gardiner，K.R.；Kirk，S.J.；Halliday，M.J.；Rowlands，B.J.“Tumournecrosis factor and inflammatory bowel disease(肿瘤坏死因子和炎性肠疾病)”.Brit.J.Surgery 1997，84，1051-1058。基于公认动物模型的数据也支持了人IBD中进行的以降低TNF的作用为目标的治疗研究的原理。参见Van Deventer，S.J.H.“Tumour necrosis factor and Crohn′sdisease(肿瘤坏死因子与克隆病)”Gut，1997，40，443。
充血性心力衰竭
细胞因子、尤其是TNF-α的活化发生在患有慢性心力衰竭和急性心肌梗死的患者中。参见Ferrari，R.“Tumor necrosis factor in CHF：adouble facet cytokine(CHF中的肿瘤坏死因子：双面细胞因子)”.Cardiovascular Res.1998，37，554-559。此外，已经证明TNF-α在心肌细胞中直接(通过与这些细胞结合并对这些细胞进行遗传再编程)和间接(通过局部NO生成，其也导致细胞死亡)引发凋亡过程。
HIV复制
HIV的复制是被可诱导的转录因子NF-KB活化的，而NF-KB又是由TNF-α诱导的。在被病毒慢性感染的巨噬细胞系和T-细胞克隆中TNF能够诱导HIV表达。在少数患有AIDS相关的卡波西肉瘤的患者中，重组TNF的输注似乎导致HIV p24抗原水平的升高，而HIV p24抗原是病毒复制活性的标记物。参见“Therapeutic modulation ofcytokines(细胞因子的治疗调节)”CRC Press，Inc.，N.Y.1996，pages221-236。这些结果为考虑使用TNF阻断剂来降低感染的HIV负担提供了机理基础。
其它TNF介导的病理学
存在某些证据证明涉及TNF的疾病状态的名单在不断增长。“Therapeutic modulation of cytokines(细胞因子的治疗调节)”CRCPress，Inc.，N.Y.1996，pages 221-236。在某些情况下，例如移植、移植物抗宿主病和缺血/再灌注损伤中，潜在的发病机理涉及TNF-α对多种组织细胞的致炎活性。在其它情况下，如在非胰岛素依赖的糖尿病中胰岛素应答的抑制，涉及TNF-α的更选择性的作用，这似乎落在标准致炎模型之外。在患有中耳炎(内耳感染，出现或不出现渗出物)的患者中，例如参见Willett，D.N.，Rezaee，R.P.，Billy，J.M.，Tighe，M.A.，andDeMaria，T.F.，Ann.Rhinol Laryngol，107(1998)；Maxwell，K.，Leonard，G.，and Kreutzer，D.L，Arch Otolarygol Head Neck Surg，vol.123，p.984(Sept.1997)和患有窦炎的患者中，例如参见Nonoyana，T.，Harada，T.，Shinogi，J.，Yoshimura，E.，Sakakura，Y.，Auris Nasus Larynx，27(1)，51-58(Jan 2000)；Buehring I.，Friedrich B.，Schaff，J.，SchmidtH.，Ahrens P.，Zielen S.，CLinExp Immul，109(3)，468-472，Sept 1997)，已局部检测到TNF-α。
使用方法
其它实施方案涉及公开的化合物和包含公开的化合物的药物组合物在治疗上文详述的疾病中的用途，所述疾病包括炎症、癌、恶病质、中耳炎、窦炎和移植排斥反应，以及在降低或停止与癌和/或其治疗相关的疲劳中的用途。
这种可与眼、鼻和/或耳特异性相关的可治疗的疾病的其它具体实例包括甲状腺相关的疾病(Hunt et al.，Clin Endocrinol，55(4)：491-9(2001))，如格雷夫斯眼病(Villanueva et al.，Thyroid，10(9)：791-8(2000)；Jones et al.，Thyroid，10(8)：701-7(2000)；Wakelkamp etal.，Clin.Exp.Immunol.，121(3)453-7(2000)；Song et al.，Horm.Metabl.Res.，32(7)：277-82(2000))、桥本甲状腺炎(Paolieri et al.，Ann.NYAcad.Sci.，876：221-8(1999))、甲状腺相关眼病(TAO)(Pappa et al.，Clin.Exp.Immunol.，109(2)：362-9(1997))以及结节性甲状腺肿(Nygaard et al.，Horm.Metabl.Res.，32(7)：283-7(2000))；疱疹性角膜基质炎(Keadle etal.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，41(1)：96-102(2000))以及微生物性角膜炎和周边溃疡性角膜炎(Dana et al.，Cornea，19(5)：625-43(2000)；贝赫切特病(Sfikakis et al.，Lancet.，358(9278)：295-6(2001))；Goossens etal.，Ann.Rheum.Dis，60(6)：637(2001))；Robertson et al.，Rheumatology，40(4)：473-4(2001))；Hassard et al.，Gastroenterology，120(4)：995-9(2001)；Sakane et al.，Expert Opin.Investig.Drugs，9(9)：1993-2005(2000))；眼色素层炎(Lemaitre et al.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，42(9)：2022-30(2001))；Shao et al.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，42(9)：2016-21(2001)；Baatz et al.，Exp.Eye Res.，73(1)：101-9(2001))；干燥综合征(Magnusson et al.，Scand.J.Immunol.，54(1-2)：55-61(2001)；Koski et al.，Clin.Exp.Rheumatol.，19(2)：131-7(2001)；Fox，R.，ExpertOpin.Investig.Drugs，9(9)：2007-16(2000)；Nakamura et al.，Lab Invest，80(9)：1421-7(2000)；Guggenbuhl et al.，JointBoneSpine，67(4)：290-5(2000))；肺结核(Saita et al.，68(10)：5991-7(2000))；炎性疾病，如耳蜗炎症(Ichimiya et al.，Int.J.Pediatr.Otorhinolaryngol.，56(1)：45-51(2000))和炎性眼病(Smith et al.，Arthritis Rheum.，45(3)：252-7(2001))；玻璃体视网膜增生病(Limb et al.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，42(7)：1586-91(2001)；El-Ghrably et al.，Br.J.Ophthalmol.，85(4)：461-70(2001)；狂犬病病毒眼病(Camelo et al.，J.Virol.，75(7)：3427-34(2001))；伏格特-小柳-原田病(Kitaichi et al.，Microbiol.Immunol.，44(12)：107507(2000))；视网膜病(Yossuck et al.，Mol.Genet.Metab.，72(2)：164-7(2001))；春季角结膜炎(Leonardi et al.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，41(13)：4175-81(2000))；视网膜激光凝固术(Er et al.，Ophthalmic SurgLasers，31(6)：479-83(2000))；急性视网膜坏死综合征(Sato et al.，Nippon Ganka Gakkai Zasshi，104(5)：354-62(2000))；系统性血管炎(McKibbin et al.，Br.J.Ophthalmol.，84(4)：395-8(2000))；结节性肌病(Peris et al，Clin.Rheumatol.，18(6)：488-91(1999))；复发性口疮性口炎(RAS)(Freysdottir et al.，Clin.Exp.Immunol.，118(3)：451-7(1999))；新生血管性青光眼(Chen et al.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，40(11)：2627-32(1999))；细菌性眼部感染，如金黄色葡萄球菌眼内炎(Giese et al.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，39(13)：2785-90(1998))和绿脓杆菌角膜感染(Kernacki et al.，Infect.Immun.，66(1)：376-9(1998))；眼过敏病(Hingorani et al.，J.Allergy Clin.Immunol.，102(5)：821-30(1998))，如过敏性结膜(Macleod et al.，Clin.Exp.Allergy，27(11)：1328-34(1997))；结节病(Maniwa et al.，Intern.Med.，37(9)：757-61(1998))；视网膜脱离(Bakunowicz-Lazarczk et al.，Klin.Oczna，99(2)：87-9(1997))；视神经炎(Boiko et al.，J.Neurovirol.，6(Suppl2)：S152-5(2000)；Kivisakk et al.，Neurology，50(1)：217-23(1998))；眼红斑痤疮(Barton et al.，Ophthalmology，104(11)：1868-74(1997))、多发性硬化(Cooper et al.，Med.Hypotheses，49(4)：307-11(1997))和系统性硬化病(Hebbar et al.，Arthritis Rheum.，38(3)：406-12(1995))；遗传性视网膜变性(de Kozak et al.，Ocul.Immunol.Inflamm.，5(2)：85-94(1997))；视网膜发育不良(Cotinet et al.，Glia.，20(1)：59-69(1997))；沙眼(Conway et al.，Infect.Immun.，65(3)：1003-6(1997))；自身免疫性疾病，包括自身免疫性泪腺炎(Takahashi et al.，Clin.Exp.Immunol.，109(3)：555-61(1997))、自身免疫性葡萄膜视网膜炎(Thillaye-Goldenberg et al.，J.Neuroimmunol，110(1-2)：31-44(2000))和AIDS(Lin et al.，Curr.Eye Res.，16(10)：1064-8(1997))以及自身免疫性涎腺炎(Mustafaet al.，Clin.Exp.Immunol.，112(3)：389-96(1998))；巩膜炎(Di Girolamoet al.，Am.J.Pathol.，150(2)：653-66(1997))；风湿性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎(al-Janadi et al.，J.Clin.Immunol.，13(1)：58-67(1993)，上述的风湿性心脏病(Miller et al.，J.Rheumatol.，1989)和类风湿性血管炎(Flipo et al.，Ann.Rheum.Dis.，56(1):41-4(1997))；视神经病变(Madigan et al.，Neurol.Res.，18(3)：233-6(1996))；眼弓形体病(Davidson et al.，Antimicrob.AgentsChemother.，40(6)：1352-9(1996))；玻璃体视网膜病症(Esser et al.，Ger.J.Ophthalmol.，4(5)：269-74(1995))；新生血管性眼病(Spranger et al.，Med.Klin.，90(3)：134-7(1995)；内分泌眼眶病(Heufelder et al.，MedKlin.，88(4)：181-4(1993))；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF病(Lang et al.，Growth Factors，6(2)：131-8(1992))；非瘤形成疾病(Billington，Drug Des.Discov.，8(1)：3-35(1991))；韦格纳肉芽肿病(Mayet et al.，J.Immunol.Methods，143(1)：57-68(1991))；圆锥角膜(Fabre et al.，Curr.Eye Res.，10(7)：585-92(1991))；眼内肿瘤(Wong etal.，Cornea，10(2)：131-5(1991))，如眼内黑素瘤(Ma et al.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，39(7)：1067-75(1998))、视网膜母细胞瘤(Detrick etal.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，32(6)：1714-22(1991))和结肠直肠癌(Kemeny et al.，Cancer，66(4)：659-63(1990))；鼻息肉病(Saji et al.，Auris Nasus Larynx，27(3)：247-52(2000))；胆脂瘤(Amar et al.，J.Laryngol Otol.，110(6)：534-9(1996)；血栓性血小板减少性紫癜和溶血性尿毒症综合征(Mauro et al.，Am.J.Hematol.，66(1)：12-22(2001))；斯蒂尔病(Cavagna et al.，Clin.Exp.Rheumatol.，19(3)：329-32(2001))；扁桃体肥大和反复扁桃体炎(Agren et al.，ORL J.Otorhinolaryngol Relat.Spec.，60(1)：35-41(1998))、银屑病(Mizutani et al.，J.Dermatol.Sci.，14(2)：145-53(1997))；单核细胞增多症(Andersson et al.，Clin.Exp.Immunol.，92(1)：7-13(1993))；自身免疫性脑脊髓炎(Weissert，J.Immunol.，166(12)：7588-99(2001))、慢性增生性皮炎(HogenEsch et al.，J.Immunol.，162(7)：3890-6(1999))；视网膜静脉阻塞(Conway et al.，Int.Ophthalm.，19(4)：249-52(1995))；Irvine-Gass综合征；以及年龄相关性黄斑变性(Abe et al.，Tohoku J.Exp.Med.，189(3)：179-89(1999))。按照本发明可以治疗的炎症相关疾病的其它具体实例包括影响眼、鼻、喉或耳的自身免疫性疾病，例如影响上和下呼吸道的自身免疫性疾病、韦格纳肉芽肿病(Hewins et al.，Curr.Opin.Rheumatol.，12(1)：3-10(2000)；Yi et al.，Semin.Diagn.Pathol.，18(1)：34-46(2001))以及影响视觉、嗅觉和味觉的自身免疫性疾病、干燥综合征(Carsons，S.，Am J.Manag.Care，7(14)：S433-43(2001)；Lash et al.，Nurse Pract.，26(8)：50(2001))。更具体地，影响关节的炎性疾病，如涉及脊柱和骶髂关节的全身性炎性风湿性疾病、强直性脊柱炎(Toussirto et al.，Expert Opin.Investig.Drugs，10(1)：21-9(2001))，炎性关节疾病、脊椎关节病(Braunet al.，Curr.Opin.Rheumatol，8(4)：275-87(1996)；Gladman，DD，Am.J.Med.Sci.，316(4)：234-8(1998)))。还包括了关节和脊柱影响的关节炎、银屑病关节炎(Gladman et al.，Expert Opin.Investig.Drugs，9(7)：1511-22(2000)；Scarpa et al.，Curr.Opin.Rheumatol.，12(4)：274-80(2000))和关节病症，如颞下颌关节病症(Stack et al.，Am.Fam.Physician，46(1)：143-50(1992))。
按照本发明可以治疗的疾病的其它实例包括与经口气道相关的疾病，例如臼齿拔除、化疗相关的粘膜损伤(Spijkervet et al.，Curr.Opin.Oncol.，10(Suppl.1)：S23-7(1998)；Khan et al.，J.Natl.Cancer Inst.Monogr.，29：31-6(2001))、骨髓移植后的非感染性肺损伤，如呼吸窘迫综合征(Hite et al.，Drugs，61(7)：897-907(2001))和毛细支气管炎闭塞性肺炎(Nagai et al.，Curr.Opin.Pulm.Med.，2(5)：419-23(1996)；Epler，GR，Semin.Respir.Infect.，10(2)：65-77(1995))。
作为治疗方法的TNF-α和IL-1调节
在分离TNF-α之前，对上述疾病所用的治疗方法的目标是降低慢性炎症，并且这些方法是基于类固醇和非类固醇的抗炎治疗。然而，最近对TNF-α的理解已导致其它策略的开发，这是基于其选择性抑制。下面对这些一般性策略进行概述。
类固醇治疗
该治疗包括皮质类固醇的使用，造成免疫系统细胞数目和活性的下降。皮质类固醇的作用机理涉及在跨越质膜并在胞质溶胶中结合在受体上。然后将得到的配合物转运至细胞核，其中其与特异性调节DNA序列结合，由此下调细胞因子的产生。尽管目前使用该策略，但由于该策略对TNF-α不是特异性的，而且还下调数种其它可能在有效免疫反应中起重要作用的细胞因子，因此其具有一些缺点。此外，类固醇的使用还被暗示与癌(例如前列腺癌)的发展有关。
非类固醇抗炎治疗
该策略包括使用间接降低炎症的化合物，例如阿司匹林。这通常是通过抑制环氧合酶途径，由此产生前列腺素和血栓素而实现的。该作用降低血管渗透性并提供暂时的缓解。为此，该策略不调节细胞因子的产生，并且在与慢性炎症相关的疾病中效果很小或没有效果。
工程化单克隆抗TNF抗体
该策略涉及能够与TNF-α结合并中和TNF-α的单克隆抗体的选择。尽管初步的临床研究已显示某些阳性结果，但该方法仍然处于初期并没有被广泛接受。待解决的问题之一是单克隆抗体来自鼠科，并且在人中引起抗免疫球蛋白免疫应答，这限制了其临床应用。正在寻求重组工程技术以创造能够维持对TNF-α的活性并更容易被人免疫系统接受的啮齿动物抗体的“人源化”版本。
可溶性TNF-α受体的应用
抗TNF-α可溶性受体的应用是新的治疗方法。尽管创造这些受体是为了与TNF-α结合并中和TNF-α，但是这些受体还通过延长TNF-α在血液循环中的存在时间而增强其活性。此外，正在评价对这类治疗的长期免疫应答。
基因疗法
该方法的目标是降低炎症，但不是通过降低TNF-α的表达，而是通过增加抗炎细胞因子的局部产生。该治疗包括向发炎区域直接注射编码抗炎细胞因子的cDNA表达载体，这能够拮抗TNF的作用。目前正在临床前研究该方法的效果，但是其对免疫应答的长期作用仍然是未知的。
其它疾病状态和疾病
另外，更最近地，TNF-α和/或IL-1已被确认参与调节血管生成的血管内皮生长因子(VEGF)，参见E.M.Paleolog et al.，Arthritis &Rheumatism，41，1258(1998)，并可以参与结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎和其它免疫病症，参见T.
Figure A200680034568D0121154955QIETU
Eur.Respir.J.，9，1652(1996)。还报道了TNF-α影响用于多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药蛋白(LRP)的某些癌细胞基因的表达，参见V.Stein，J.Nat.Canc.Inst.，89，807(1997)，并且参与慢性和充血性心力衰竭和相关的心血管疾病，例如参见R.Ferrari，Cardiovascular Res.，37，554(1998)；C.Ceconi et al.，Prog.Cardiovascular Dis.，41，25(1998)并且直接或间接介导病毒感染，参见D.K.Biswas，et al.，J.Acquired Immune Defic Syndr.HumRetrovirol.，18，426-34(1998)(HIV-1复制)；R.LeNauor，et al.，Res.Virol.，145，199-207(1994)(HIV-1复制)；T.Harrer，et al.，J.Acquir.Immune Defic.Syndr.，6，865-71(1993)(HIV-1复制)；E.Fietz，et al.，Transplantation，58(6)，675-80(1994)(人细胞巨化病毒(CMV)调节)；D.F.Zhang，et al.，Chin.Med.J.，106，335-38(1993)(HCV和HBV感染)。此外，已显示TNF-α的拮抗剂可用于治疗神经源性起源的皮肤发红。参见欧洲专利EPO-774250-B1(De Lacharriere等人)。
TNF-α还被确认在被诊断为肥胖症或具有胰岛素抵抗的人中以升高的水平表达，并且因此是糖尿病的调节剂。参见Hotamisligil，G.，Arner，P.，Atkuinson，R.，Speigelman，B.(1995)，“Increased adiposetissue expression of tumor necrosis factor-α(TNF-α)in human obesityand insulin resistance(人肥胖症和胰岛素抵抗中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的增加的脂肪组织表达).”J.Clin.Invest.95：2409-2415。TNF-α还被确认为移植排斥反应的重要调节剂。参见Imagawa，D.，Millis，J.，Olthoff，K.，Derus，L.，Chia，D.，Sugich，L.，Ozawa，M.，Dempsey，R.，Iwaki，Y.，Levy，P.，Terasaki，P.，Busuttil，R.(1990)“The role of tumornecrosis factor in allograft rejection(肿瘤坏死因子在移植排斥反应中的作用)”Transplantation，vol.50，No.2，219-225。
药物组合物
其它实施方案涉及用于治疗多种疾病和疾病状态的药物组合物。这些公开的药物组合物可包含制药领域公知的和例如Remington’sPharmaceutical Sciences(雷明顿制药学)，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)中所述的药物可接受的载体或稀释剂以及药物有效量的化合物。这样的组合物还可包含防腐剂、稳定剂、染料、矫味剂、抗氧化剂和悬浮剂。本文还公开了多种制药领域公知的用于包括眼内、鼻内和耳内输送的药物组合物。用于眼内输送的药物制剂包括诸如滴眼液的水溶形式、吉兰糖胶形式(Shedden et al.，Clin.Ther.，23(3)：440-50(2001))或水凝胶形式(Mayer et al.，Ophthalmologica，210(2)：101-3(1996))的活性化合物的眼用水溶液；眼膏；眼用混悬液，例如微粒、悬浮在液体载体介质中的含药物的小聚合物颗粒(Joshi，A.，J.Ocul.Pharmacol.，10(1)：29-45(1994))、脂质可溶制剂(Alm et al.，Prog.Clin.Biol.Res.，312：447-58(1989))和微球(Mordenti，Toxicol.Sci.，52(1)：101-6(1999))；以及眼插入物。用于眼内输送的适当药物制剂最经常并且为了稳定和舒适，优选无菌、等渗且缓冲地进行组方。用于鼻内输送的药物组合物包括滴液和喷雾剂，其经常被制备以便在很多方面模拟鼻分泌物以保证维持正常的纤毛作用。如Remington’sPharmaceutical Sciences(雷明顿制药学)(Mack Publishing，18th Edition)中所公开的并且对本领域技术人员公知的，适当的鼻制剂最经常并且优选是等渗、稍微缓冲的以保持pH为5.5至6.5，并且最经常和优选地包括抗微生物防腐剂和适当的药物稳定剂。用于耳内输送的药物制剂包括用于在耳中局部应用的混悬液和膏剂。通常用于这样的耳制剂的溶剂包括甘油和水。
给药方法
其它实施方案涉及所公开的化合物和所公开的药物组合物的给药方法。其中，这些公开的方法包括(a)经口服途径给药，这包括以胶囊、片剂、颗粒、喷雾剂、糖浆或其它这样的形式给药；(b)经非口服途径给药，这包括以水混悬液、油制剂等等或以滴剂、栓剂、药膏、软膏等等形式给药；通过皮下、腹膜内、静脉内、肌内、皮内注射等等形式给药；以及(c)局部给药，(d)直肠给药，或(e)本领域技术人员认为合适的使化合物与活组织接触的阴道给药；和(f)通过控释制剂、储库制剂和输液泵输送给药。作为这些给药方式的进一步实例和给药方式的进一步公开，本文公开了用于所公开的化合物和药物组合物给药的多种方法，包括通过眼内、鼻内和耳内途径的给药方式。
这些观察突出了识别新颖的策略和/或新颖的化合物和化合物类型的重要性和期望，所述化合物选择性地影响TNF-α和/或IL-1产生。因此选择性地抑制这些细胞因子的小分子在医学和生物学方面尤其重要，例如在保持活跃的免疫系统中和在治疗基于炎症的疾病中。
本发明优选的合成方法
某些实施方案涉及所公开的化合物，包括例如具有通式(II)、(IIA)或(IIB)化学结构的化合物的新颖的制备方法，以及已知的具有通式(II)、(IIA)或(IIB)化学结构的化合物的已知类似物，例如通式(I)和(IA)化合物的新颖的制备方法。
本发明化合物，并且尤其是具有通式(II)、(IIA)或(IIB)化学结构的化合物可通过合成或半合成方法制备。若通过合成方法制备，可使用通常可得的起始原料，包括但不限于具有反应性卤化物基团的二环化合物。可按照多种闭环反应合成本发明的至少三环的化合物。这种反应包括但不限于Diels-Alder反应和Dieckmann缩合反应。Diels-Alder反应优选地涉及二烯与取代烯基基团的反应，以形成预期化合物的第三个环。可优选地在Dieckmann缩合反应之后进行所得环酮基团的还原。可依照这些合成方法和其它公知的合成，通过使用本领域技术人员公知的诸如色谱或HPLC的过程对本发明化合物进行纯化和分离。
或者，按照本发明，可由朝鲜五加的根皮中至少以含有五加酸的粗提取物形式提取和分离具有式(I)和(IA)化学结构的化合物及其某些特定的类似物和衍生物。可优选地按照下列方法得到这样的提取物：
取约1公斤朝鲜五加的干根皮，切碎并用1L至3L，优选2L适当的溶剂覆盖，最优选甲醇。将该混合物保持在20℃至60℃的温度，并可在室温保持至少10小时，优选12小时。然后将该混合物过滤以除去并保留滤液。重复该过程，优选至少另外两次，并且将合并的滤液减压浓缩以得到提取物。
使用200mL至400mL、优选300mL的水溶液，优选水和200mL至400mL、优选300mL的有机溶液，优选二乙醚对约100克的提取物用进行分配。从中分离有机部分，然后减压浓缩以得到进一步的提取物。将所述进一步的提取物纯化，优选通过柱色谱并且更优选通过使用硅胶柱，使用适当的有机溶剂的混合物、优选己烷和乙酸乙酯作为洗脱液以得到分离的五加酸。
然后可将分离的通式(I)和(IA)化合物通过合成修饰以得到特定的本发明化合物，尤其是具有通式(II)或(IIA)化学结构的化合物。例如，可根据烷基醇与五加酸的羧酸基团的酸催化的亲核加成形成五加酸的酯R1类似物。可按照Williamson醚合成法由伯烷基卤化物或醇或通过伯醇基团的还原形成五加酸的醚R1类似物。可通过烯基基团的催化氢化或通过优选的HC1或HBr或其它适当的烷基卤化物的亲电加成形成五加酸的烷基、烯基和醇R10类似物。若使用适当的活泼基团和相关的保护基团以鼓励预期的反应，可通过涉及烷基卤化物的取代反应形成五加酸的其它R位置的取代类似物。按照这些反应和其它公知的合成反应，有了本文提供的那些化合物的描述，本发明全部化合物的制备在本领域技术人员的能力范围内。
本文描述了用于制备包括通式(I)、(IA)、(II)、(IIA)和(IIB)的化合物在内的本发明化合物的全合成方法。该方法可用于本文所述的任何化合物，包括通式(I)、(IA)、(II)、(IIA)和(IIB)化合物的亚类，例如通式IIAA、IIA-A1、IIBB、IIB-A1、II2、II2-1等等化合物。该合成包括五加酸及其类似物的一种或多种逆合成分析、放射性标记的五加酸及其类似物的合成、通式(I)、(IA)、(II)、(IIA)和(IIB)化合物的二聚体和结合物的合成。本领域技术人员还会理解，这些方法也完全可用于制备贝壳杉酸及其类似物。
式(I)化合物及其天然类似物
大韩民国济州岛特有的朝鲜五加(Araliaceae)的根皮已被传统用作补品和镇静剂，以及治疗风湿病和糖尿病的药物。在其对该民间药物的研究中，Chung和同事由其药理活性提取物中识别了两种新颖的三环二萜：五加酸(化合物1)及其甲酯(化合物2)，如图1所示。参见Kim，Y.H.；Chung，B.S.；Sankawa，U.“Pimaradiene diterpenes fromAcanthopax Koreanum(来自朝鲜五加的海松二烯二萜)”.J.Nat.Prod.1988，51，1080-1083。五加酸是海松烷(3)。然而，与海松烷家族其它成员截然相反，1的特点是C8和C10中心之间异常的立体化学关系，这提供了BC环体系的独特连接方式。五加酸也能够通过下文描述的合成通式II2-1和IIA-A1化合物的过程而得到。
从Coleonema pulchrum的根中提取和分离五加酸
在本发明之前，对于具有式(I)结构的化合物或其类似物的制备不存在全化学合成。重要的是，式(I)化学结构1(图1)具有作为抗炎剂的生物学特征。更具体地，用活化的(发炎的)单核细胞/巨噬细胞进行的体外研究揭示了用1进行治疗(约0.1至约1.0μg/ml，48小时)导致TNF-α和IL-1产生的约90％抑制。该抑制是浓度依赖的和细胞因子特异性的，这是因为在相同的条件下，IL-6或IFN-γ(干扰素-γ)的产生不受影响。在患有矽肺(慢性肺炎症)和肝硬化(肝炎症和肝纤维化)的小鼠中评价了五加酸的体内作用。组织学分析显示，用化合物1治疗导致纤维化肉芽肿的显著缩小和硬化肝细胞的显著恢复。这些引人注目的结果能够至少部分归因于1介导的诸如TNF-α和IL-1的致炎细胞因子的抑制。化合物1还在小鼠中显示极小的毒性，并且仅仅是当以高浓度口服给药时(LD>300mg/100g体重)。参见Kang，H.-S.；Kim，Y.-H.；Lee，C.-S.；Lee，J.-J.；Choi，I.；Pyun，K.-H.，Cellular Immunol.1996，170，212-221.Kang，H.-S.；Song，H.K.；Lee，J.-J.；Pyun，K.-H.；Choi，I.，Mediators Inflamm.1998，7，257-259。
因此，式(I)化学结构具有有效的抗炎和抗纤维化效果并且降低TNF-α和IL-1的表达。因此五加酸被用作开发新颖化合物的化学原型。
通式(I)、(II)和(IIB)化合物的逆合成分析
可根据本发明的一方面合成通式(I)、(II)和(IIB)化合物，尤其是式(I)化合物和本文指定为TTL1、TTL2、TTL3和TTL4的通式(IIB)化合物。图2中显示式(I)化合物的化学键断裂。BC环的新颖的结构排列以及四价C13中心的存在构成不寻常的特征，并导致新的策略，这是本发明的一方面。在一步骤中通过使用Diels-Alder法，将该特征固定到期望的立体化学中。二烯如14和亲二烯体如15(Y：基于噁唑烷酮的助剂)被确认为合适的内型选择性Diels-Alder反应的起始原料。为了进一步保证该环加成的期望的立体选择性结果，用杂原子(例如X＝OTBS或SPh)对二烯14进行暂时的官能化，该官能化随后将从产物13中去除。该反应通常观察到的内型优选被用于预测产物13中所示的C12和C13中心之间的立体化学关系，可通过亲二烯体的羰基处的手性助剂或通过使用手性催化剂来控制该过程的非对映面(diastereofacial)选择性。参见Xiang，A.X.；Watson，D.A.；Ling.T.；Theodorakis，E.A.“Total Synthesis of Clerocidin via a Novel，EnantioselectiveHomoallenylboration Methodology(通过新颖的对映选择性高丙二烯基硼酸化方法进行Clerocidin的全合成)”.J.Org.Chem.1998，63，6774-6775。
可通过钯(0)催化的C8-C11键的构建形成二烯14，显示酮16作为其合成起源。从已知的Wieland-Miescher酮(17)形成酮16，而酮(17)又很容易通过甲基乙烯基酮(19)与2-甲基-1，3-环己烷二酮(18)缩合得到(图2)。
在本发明的一方面，认识到五加酸(1)的AB环体系的官能化和相对立体化学与罗汉松酸(20)结构中的类似。参见“The total synthesis ofnatural products(天然产物的全合成).”ApSimon，Ed.；John Wiley &Sons，Inc.，1973，Volume 8，pages 1-243。在20的数种合成策略中，图5突出显示了与所提出的1的合成相关的那些。按照本发明，这些方法允许预测合成通式(I)、(II)化合物的立体化学结果以及本文中指定为TTL1、TTL2、TTL3和TTL4的化合物通式(IIB)化合物的相反的立体化学。
Figure A200680034568D01271
罗汉松酸(20)
通式(I)、(II)和(IIB)化合物的全合成
合成五加酸(1)以及所有通式(I)、(II)和(IIB)化合物的初始步骤涉及Wieland-Miesher酮(17)的反应。该化合物很容易使用催化量的(R)-脯氨酸通过Michael加成/Robinson成环顺序从化合物18和19以单一对映异构体的形式得到。对17的更具碱性的C9羰基基团的进行选择性保护，然后用氰基甲酸甲酯对烯酮34进行还原烷基化得到酮酯36。如图3所述，36转化成39是基于以往的研究，参见Welch，S.C.；Hagan，C.P.“A new stereoselective method for developing ring A of podocapricacid compounds(新的形成罗汉松酸化合物A环的立体选择性方法)”Synthetic Commun.1972，2，221-225。进行39的酯官能团的还原，然后对得到的醇进行硅烷化并对缩酮单元进行酸催化脱保护得到酮40。通过两步程序将40转化为期望的二烯42，所述两步程序涉及将40转化为其相应的烯醇三氟甲基磺酸酯衍生物，然后与乙烯基锡烷41进行钯催化的偶联。参见Farine，V.；Hauck，S.I.；Firestone，R.A.“Synthesisof cephems bearing olefinic sulfoxide side chains as potential b-lactamaseinhibitors(带有烯亚砜侧链的作为潜在b-内酰胺酶抑制剂的头孢菌素的合成)”Bioorg.& Medicinal Chem.Lett.1996，6，1613-1618。
用于完成五加酸(1)合成以及用于完成通式(I)、(II)和(IIB)化合物合成的步骤描述于图5中，作为方案2。进行二烯42和亲二烯体43之间的Diels-Alder环加成，然后用Raney Ni进行还原脱硫得到具有期望立体化学的三环体系44。44转化为Weinreb酰胺，然后用DIBALH还原，产生醛45，其进行Wittig反应得到烯46。进行46的氟化物诱导脱硅烷化，然后通过将得到的醇转化成羧酸的两步氧化生成五加酸(1)，通过替换合适的中间体，该过程可被用于生成通式(I)、(II)和(IIB)化合物。
合成式(I)和(IA)化合物以及通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的一重要步骤是Diels-Alder反应。该反应以及一种或多种适当取代的二烯和/或亲二烯体的使用和选择允许选择性合成通式(II)化合物或选择性合成通式(IIB)化合物。例如可使用下列优选的亲二烯体代替如本文的图5、7、8、21和23中作为反应方案2、3、4、5和6所述的诸如化合物43和海松烷(103)的亲二烯体，以选择性地得到通式(II)和(IIB)化合物。亲二烯体的实例包括通式(III)的化合物：
Figure A200680034568D01291
其中编号的R基团(R9、R14和R15)与上文通式(IIB)化合物中的定义相同，并且未编号的R基团可以是上文通式(IIB)化合物中定义的任一R1至R15。
此外，例如本文的图5、7、8、21和23中作为反应方案2、3、4、5和6分别描述的诸如化合物(42)和化合物(112)的二烯的电子构象可通过供电子或吸电子基团如pHS与二烯的共价键而改变。如本文所例示的这样的共价键连接的供电子或吸电子基团影响引入的亲二烯体的定位。
因此，根据本发明的一方面，二烯42的手性性质使其可用于在环加成中诱导不对称。对42的最小化模型的考察表明C10处的角甲基影响反应的面选择性并且允许亲二烯体更有效地从二烯的顶面接近。该接近产生加成物，其导致通式(IIB)化合物的生成。该接近还允许开发Diels-Alder反应的催化不对称变化。与手性助剂相反，使用手性催化剂的好处是明显的并且在最近的文献中有很好的评述。
一优选的实施方案是催化剂49的使用，它是由Corey开发并用于改善cassiol的不对称合成(方案3)。参见Corey，E.J.；Imai，N.；Zhang，H.-Y.J.Am.Chem.Soc.1994，116，3611。化合物49显示允许富含电子的二烯47与异丁烯醛(48)进行Diels-Alder环加成并专一地以优异的收率和对映体过量(收率83％，对映体过量97％)产生内型加成物。
上述方法在一优选合成中的应用如图8中作为方案4所述。催化剂49的使用提供额外的通用性并显著缩短完成1的全合成所需的总步骤数。
放射性标记的式(I)化合物的合成
可合成式(I)、(II)、(IIA)或(IIB)化合物的放射性标记样品并用于药理学和药物动力学研究。例如，使用醛52作为起始原料将C14标记的亚甲基碳并入式(I)化合物(如图4的方案4中所述)。Wittig化学所需的C14标记的产物是从C14标记的碘甲烷和三苯基膦，然后用碱如NaHMDS处理的两步反应制备的。碱诱导的甲酯脱保护生成放射性标记的式(I)、(II)、(IIA)或(IIB)化合物。
Figure A200680034568D01301
1*：14C标记的五加酸
通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的合成目的
本发明的一方面是确定具有通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物结构的新颖的抗炎药物。对合成中间体以及合理设计的通式(II)化合物的生物筛选提供了信息并引导设计的要求。
通式(II)化合物类似物的设计和合成是基于下列目的：(a)定义负责TNF-α和IL-1调节活性的通式(II)化合物的最小的结构和功能要求(最小药效基团)；(b)通过改变结构，尤其是最小药效基团的R基团，改善通式(II)化合物的TNF-α和IL-1调节活性(例如，SAR研究和分子识别实验)；(c)通过光亲和标记研究考察通式(II)化合物的作用方式；(d)改变和改善通式(II)化合物的溶解性和膜渗透性；(e)合成并研究通式(II)化合物的二聚体或结合物；选择性输送单元以及(f)通过对得到的生物学数据进行评价以重新设计和改善目标结构。
对合理设计新颖的通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物尤其重要的是最近报道的如图9所述的石竹素(53)的A和C环的修饰导致增强的抗增殖和抗炎活性。参见Honda，T.；Rounds，B.V.；Gribble，G.W.；Suh，N.；Wang，Y.；Sporn，M.B.“Design and synthesis of2-cyano-3，12-dioxolean-1，9-dien-28-oic acid，a novel and highly activeinhibitor of nitric oxide production in mouse macrophages(对小鼠巨噬细胞中一氧化氮生成的新颖的和高活性的抑制剂——2-氰基-3，12-二氧杂齐墩果-1，9-二烯-28-酸的设计与合成)”Biorg.& Medic.Chem.Lett.1998，8，2711-2714。Suh，N.et al“A novel synthetic oleananetriterpenoid，2-cyano-3，12-dioxoolean-1，9-dien-28-oic acid，with potentdifferentiating，antiproliferative and anti-inflammatory activity(具有有效的分化、抗增殖和抗炎活性的新颖的合成齐墩果烷三萜系化合物——2-氰基-3，12-二氧杂齐墩果-1，9-二烯-28-酸)”Cancer Res.1999，59，336-341。更具体地，用可商购的53及其半合成衍生物进行的SAR研究导致下列识别：(a)在C2位置附加吸电子基团如腈增加53的生物效用(图9)；(b)C环的α，β不饱和酮官能团显著增强效用。这些评论的结合导致所设计的三萜系化合物54的半合成(图9)，其在抑制炎性酶iNOS(可诱导的一氧化氮合成酶)和COX-2(环加氧酶-2)方面显示比其它任何已知的三萜系化合物活泼500倍。
通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的合成
通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的十三步合成(分别如图4和8，方案1和4所示)是有效的，因而可以制备用于SAR研究的多种类似物。通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的不寻常的三环骨架的生物学重要性(使用适当的Diels-Alder催化剂构建C8差向异构体)。通过本发明的合成方法或通过对本文的合成中间体的标准修饰而容易改变的位点示于图10，并且通式(II)化合物的代表性实例示于图11。
也可将通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的期望化学骨架并入到固体支持物如王氏树脂(Wang resin)中。这允许很容易地构建通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的组合库。此外，根据本发明，可以比目前可能的方法更快速识别并筛选优选的TNF-α和IL-1调节剂。
光亲和标记研究
优选地，也可使用可用于光亲和标记研究的活泼交联剂对通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的骨架进行标记。这些研究有助于识别通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的体内靶，并提供关于五加酸的作用方式和活化TNF-α的基本理解。C19羧酸或C15醛(1的前体)与适当的光敏试剂用于交联实验(参见图12，60和61)。
通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的二聚体和结合物的合成
通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的二聚体形式，例如62(n＝1)，已从天然来源中分离，并且地塞米松-五加酸结合物63提供了关于在癌研究中具有潜在涵义的类固醇受体的药物的生物学上令人感兴趣的结果。参见Chamy，M.C.；Piovano，M.；Garbarino，J.A.；Miranda，C.；Vicente，G.Phytochemistry 1990，9，2943-2946。由于没有进行过对这类化合物的生物学研究，根据本发明，评价了通式(II)、(IIA)和(IIB)化合物的二聚体。合成的五加酸或1的生物活性类似物被用作单体伴侣(monomeric partner)并且使用包括本文所述的技术在内的标准技术进行其偶联。
实验技术
除非另外指明，所有反应均在氩气气氛下，在干燥的、现蒸馏的溶剂中，在无水条件下进行。四氢呋喃(THF)和二乙醚(Et2O)从钠/苯甲酮中蒸馏；二氯甲烷(CH2Cl2)、六甲基磷酰胺(HMPA)和甲苯从氢化钙中蒸馏；并且二甲基甲酰胺(DMF)从氯化钙中蒸馏。除非另外指明，收率是指色谱和光谱(1H NMR)均质物质。除非另外指明，购买最高商业品质的试剂并且不经过进一步纯化而使用。通过薄层色谱监控反应，薄层色谱在0.25mm E.Merck硅胶板(60F-254)上进行，使用UV光作为观察剂并使用7％乙醇磷钼酸或茴香醛溶液和热作为显色剂。使用E.Merck硅胶(60，粒径0.040-0.063mm)进行快速层析。在0.25或0.50mm E.Merck硅胶板(60F-254)上进行制备薄层色谱分离。在Varian400和/或500Mhz仪器上记录NMR谱图并且使用残余的未氘代溶剂作为内标进行标定。使用下列缩写解释重数：s＝单重；d＝二重、t＝三重；q＝四重、m＝多重、b＝宽。在Nicolet Avatar 320 FT-IR光谱仪上记录IR谱图。在Perkin Elmer 241旋光仪上记录旋光性。在VG 7070 HS质谱仪上于化学电离(CI)条件下或在VG ZAB-ZSE质谱仪上于快原子轰击(FAB)条件下记录高分辨率质谱(HRMS)。
Figure A200680034568D01331
三酮2.将二酮1(50g，0.40mol)的乙酸乙酯(500ml)溶液用三乙胺(72ml，0.52mol)和甲基乙烯基酮(36ml，0.44mol)处理。将反应混合物于70℃回流10小时，然后冷却至25℃。减压除去溶剂并且将得到的粗物质直接进行色谱分离(10％至40％的醚的己烷溶液)以得到三酮2(61g，0.31mol，78％)。2：无色油状物；Rf＝0.25(硅胶，50％的醚的己烷溶液)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 2.75-2.59(m，4H)，2.34(t，2H，J＝7.2Hz)，2.10(s，3H)，2.07-2.05(m，3H)，1.98-1.94(m，1H)，1.24(s，3H)。
Figure A200680034568D01332
Wieland-Miescher酮(3)将三酮2(61g，0.31mol)的二甲基亚砜(400ml)溶液用磨细的D-脯氨酸(1.7g，0.01mol)处理。(如下文所述，参见实施例18至21，还可将三酮2的二甲基亚砜(400ml)溶液用磨细的L-脯氨酸处理以得到Wieland-Miescher酮(3)的对映异构体)。将溶液在25℃下搅拌4天，然后在40℃下再搅拌1天。将得到的紫色溶液冷却至25℃，用水(300ml)和盐水(100ml)稀释，并倾入分液漏斗中。将化合物用乙醚(3×800ml)萃取。将有机层浓缩(无需干燥)并进行色谱分离(10％至40％的醚的己烷溶液)，得到59g的红紫色粗油状物。将该物质再次进行色谱分离(10％至40％的醚的己烷溶液)并浓缩，得到57g的黄色油状物。将该油状物溶于乙醚(400ml)并在4℃下保持30分钟，然后在醚上面加入己烷层(100ml)。在该双层溶液中加入少量晶种，并置于冷冻机中(-28℃)过夜。通过过滤收集得到的晶体，用冰冷的己烷(2×100ml)清洗并带压干燥。浓缩母液得到另一批产物，并且将晶体合并得到Wieland-Miescher酮(3)(43g，0.24mol，78％)。3：棕黄色晶体；Rf＝0.25(硅胶，50％的醚的己烷溶液)；[α]25D：-80.0(c＝1，C6H6)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 5.85(s，1H)，2.72-2.66(m，2H)，2.51-2.42(m，4H)，2.14-2.10(m，3H)，1.71-1.68(m，1H)，1.44(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 210.7，198.0，165.6，125.7，50.6，37.7，33.7，31.8，29.7，23.4，23.0。
Figure A200680034568D01341
缩醛4.将酮3(43g，0.24mol)的苯(700ml)溶液用对甲苯磺酸(4.6g，0.024mol)和乙二醇(15ml，0.27mol)处理。用Dean-Stark装置和冷凝器使反应于120℃下回流。一旦停止在Dean-Stark装置中收集水，则反应完成(约4小时)。使反应进行更长时间会使反应混合物颜色变深并降低总收率。将反应冷却至25℃，用三乙胺(5ml，0.036mol)淬灭，并倾入含有水(300ml)和饱和碳酸氢钠(200ml)的分液漏斗中。然后将得到的化合物用醚(3×800ml)萃取。合并有机层，用MgSO4干燥，浓缩，并进行色谱分离(10％至40％的醚的己烷溶液)，得到缩醛4(48g，0.22mol，90％)。4：黄色油状物；Rf＝0.30(硅胶，50％的醚的己烷溶液)；[α]25D：-77(c＝1，C6H6)；IR(膜)vmax 2943，2790，1667，1450，1325，1250；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 5.80(s，1H)，3.98-3.93(m，4H)，2.43-2.35(m，3H)，2.34-2.20(m，3H)，1.94-1.82(m，1H)，1.78-1.60(m，3H)，1.34(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 198.9，167.5，125.5，112.2，65.4，65.1，45.1，34.0，31.5，30.1，26.9，21.8，20.6。
Figure A200680034568D01351
酮酯5.在-78℃下将锂(0.72g，0.10mol)的液氨(400ml)溶液用缩醛4(10g，0.045mol)和叔丁醇(3.7ml，0.045mol)的醚溶液(40ml)逐滴处理。将得到的蓝色化合物加温并回流(-33℃)搅拌15分钟，然后再次冷却至-78℃。滴入足量的异戊二烯(约8ml)以除去反应混合物的残余蓝色。然后将反应在水浴(50℃)中加温，并在干燥的氮气流下将氨迅速蒸发。带压除去剩余的醚，剩下白色泡沫。在高真空下再保持5分钟后，恢复氮气气氛，将烯醇化锂悬浮于干燥的醚(150ml)中并冷却至-78℃。然后加入氰基甲酸甲酯(4.0ml，0.050mol)并且将反应在-78℃下搅拌40分钟。将反应加温至0℃并且再搅拌1小时。加入水(300ml)和醚(200ml)并将混合物倾入含有饱和氯化钠(100ml)的分液漏斗中。分出有机层后，将水相用醚(2×400ml)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，浓缩，并进行色谱分离(10％至40％的醚的己烷溶液)，得到酮酯5(7.0g，0.025mol，55％)。5：白色粉末状沉淀；Rf＝0.40(硅胶，50％的醚的己烷溶液)；[α]25D：-2.9(c＝1，C6H6)；IR(膜)2943，1746，1700；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.00-3.96(m，2H)，3.95-3.86(m，2H)，3.74(s，3H)，3.23(d，1H，J＝13.2Hz)，2.50-2.42(m，3H)，2.05-1.92(m，1H)，1.79-1.50(m，5H)，1.32-1.28(m，2H)，1.21(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 205.4，170.0，111.9，65.2，65.1，59.9，52.0，43.7，41.6，37.5，30.3，29.8，26.2，22.5，14.0；HRMS，对于C15H22O5(M+Na+)，计算值为305.1359，测量值为305.1354。
酯6.将酮酯5(7.0g，0.025mol)的HMPA(50ml)溶液用氢化钠(0.71g，0.030mol)处理。在25℃下搅拌3小时后，将得到的黄棕色反应混合物用氯甲基甲基醚(2.3ml，0.030mol)淬灭并将反应在25℃下继续搅拌2小时。然后将得到的淡黄色混合物倾入含有冰水(100ml)、饱和碳酸氢钠(50ml)和醚(200ml)的分液漏斗中。分开层后，将水层用醚(3×200ml)萃取。将合并的醚萃取物用MgSO4干燥，浓缩并进行色谱分离(硅胶，10％至40％的醚的己烷溶液)，得到酯6(7.7g，0.024mol，95％)。6：黄色油状物；Rf＝0.45(硅胶，50％的醚的己烷溶液)；[α]25D：+26.3(c＝1，C6H6)；IR(膜)vmax 2951，1728，1690，1430，1170；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.89(dd，2H，J＝22.8，6.4Hz)，3.93-3.91(m，2H)，3.90-3.84(m，2H)，3.69(s，3H)，3.40(s，3H)，2.72-2.68(m，1H)，2.24(bs，2H)，1.80-1.42(m，4H)，1.37-1.15(m，2H)，0.960(s，3H)，0.95-0.80(m，2H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 167.8，150.5，115.8，112.1，93.0，65.2，65.1，56.3，51.3，40.7，40.3，30.3，26.4，23.6，22.9，22.3，13.9；HRMS，对于C17H26O6(M+Na+)，计算值为349.1622，测量值为349.1621。
Figure A200680034568D01371
缩醛7.在-78℃下将锂(1.1g，0.17mol)的液氨(400ml)溶液用酯6(7.7g，0.024mol)的1，2-DME(30ml)溶液逐滴处理。将蓝色反应混合物加温并回流(-33℃)搅拌20分钟。然后将反应混合物再次冷却至-78℃，并用过量的碘甲烷(15ml，0.24mol)迅速淬灭。将得到的白色浆状物回流(-33℃)搅拌1小时，然后将反应用水浴(50℃)加温并搅拌1小时，使氨蒸发。将反应混合物用水(100ml)、碳酸氢钠(100ml)和醚(200ml)淬灭，并倾入分液漏斗中。分开层后，将水层用醚(3×200ml)萃取。将合并的醚萃取物用MgSO4干燥，浓缩，并进行色谱分离(硅胶，10％至30％的醚的己烷溶液)，得到缩醛7(4.1g，0.014mol，61％)。7：半结晶黄色油状物；Rf＝0.80(硅胶，50％的醚的己烷溶液)；[α]25D：+16.9(c＝10，C6H6)；IR(膜)vmax 2934，1728，1466，1379，1283，1125，942；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ 3.95-3.80(m，4H)，3.64(s，3H)，2.17-2.15(m，1H)，1.84-1.37(m，11H)，1.16(s，3H)，1.05-1.00(m，1H)，0.87(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 177.7，112.9，65.2，64.9，51.2，44.0，43.7，38.1，30.7，30.3，28.8，23.4，19.1，14.7；HRMS，对于C16H26O4(M+H+)，计算值为283.1904，测量值为283.1904。
Figure A200680034568D01372
酮8.在25℃、搅拌下将缩醛7(4.1g，0.014mol)的THF(50ml)溶液用1M HCl(约15ml)逐滴处理。通过薄层色谱监控反应，并且一旦起始原料消失即用碳酸氢钠(30ml)中和。将得到的混合物倾入含有水(100ml)和醚(100ml)的分液漏斗中。分开层后，将水层用醚(3×100ml)萃取。将合并的醚萃取物用MgSO4干燥，浓缩，并进行色谱分离(硅胶，10％至20％的醚的己烷溶液)，得到酮8(3.3g，0.014mol，95％)。8：白色晶体；Rf＝0.70(硅胶，50％的醚的己烷溶液)；[α]25D：+3.5(c＝1.0，C6H6)；IR(膜)vmax 2943，1728，1449，1239，1143，1095，985；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 3.62(s，3H)，2.55-2.45(m，1H)，2.92-1.95(m，5H)，1.8-1.6(m，2H)，1.50-1.30(m，4H)，1.14(s，3H)，0.98-0.96(m，1H)，0.90(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 214.8，177.0，54.4，51.3，49.3，44.2，37.9，37.7，33.1，28.6，26.4，22.8，18.8，17.0；HRMS，对于C14H22O3(M+Na+)，计算值为261.1461，测量值为261.1482。
Figure A200680034568D01381
炔9.将酮8(2.0g，8.3mmol)的醚(50ml)溶液用乙炔基锂(0.40g，13mmol)处理。将反应在25℃下搅拌1小时，然后用碳酸氢钠(20ml)和水(30ml)淬灭。将混合物倾入分液漏斗中，并分离层。将水层用醚(3×50ml)萃取。将有机层合并，用MgSO4干燥，浓缩，并进行色谱分离(硅胶，10％至30％的醚的己烷溶液)，得到炔9(2.0g，7.6mmol，90％)。9：白色固体；Rf＝0.65(硅胶，50％的醚的己烷溶液)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 3.64(s，3H)，2.56(s，1H)，2.18-2.10(m，1H)，1.92-1.40(m，12H)，1.18(s，3H)，1.17-1.01(m，1H)，0.81(s，3H)；13CNMR(100MHz，CDCl3)177.6，86.8，76.5，75.0，51.2，50.5，43.9，52.5，37.9，35.3，33.4，28.8，23.5，22.5，19.1，11.5；HRMS，对于C16H24O3(M+H+-H2O)，计算值为247.1693，测量值为247.1697。
Figure A200680034568D01391
烯10.将炔9(0.50g，1.9mmol)的1，4-二噁烷(20ml)和吡啶(2ml)溶液用Lindlar催化剂(100mg)处理。将混合物在压力(301bs/in2)下进行氢化7分钟。然后将反应混合物用醚(10ml)稀释，用Celite垫进行过滤，并用醚(2×50ml)洗涤。减压蒸发溶剂，得到烯10(0.48g，1.8mmol，95％)。10：无色油状物；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 6.58(dd，1H)，5.39(d，1H)，5.14(d，1H)，3.64(s，3H)，2.20-2.11(m，2H)，1.93-1.65(m，4H)，1.61(s，2H)，1.52-1.25(m，4H)，1.19(s，3H)，1.17-0.90(m，2H)，0.89(s，3H)。
Figure A200680034568D01392
二烯11.将烯10(0.48g，1.8mmol)的苯(80ml)和THF(20ml)溶液用三氟化硼乙醚配合物(1ml，7.9mmol)处理，并将反应混合物在100℃下回流5小时。冷却后，将反应用1N NaOH(1ml，26mmol)淬灭，将混合物倾入含有水(100ml)和醚(100ml)的分液漏斗中。分开层后，将水层用醚(3×100ml)萃取。合并有机层，用MgSO4干燥，浓缩，并进行色谱分离(硅胶，己烷中5％醚)，得到二烯11(0.42g，1.7mmol，95％)。11：无色油状物；Rf＝0.95(硅胶，50％的醚的己烷溶液)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 6.26-6.23(dd，1H)，5.70(s，1H)，5.253(d，1H，J＝19.2Hz)，4.91(d，1H，J＝12.8Hz)，3.64(s，3H)，2.22-2.12(m，2H)，2.10-1.94(m，2H)1.92-1.67(m，3H)，1.60-1.44(m，3H)，1.378(d，1H，J＝13.6)，1.21(s，1H)，1.19-1.00(m，2H)，0.86(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 177.7，146.7，136.1，121.9，113.3，53.0，51.2，43.9，38.0，37.9，37.4，28.5，27.8，20.5，19.5，18.3。
Figure A200680034568D01401
醛12.在干净的条件下将异丁烯醛(0.5ml，5.2mmol)和二烯11(0.1g，0.40mmol)的溶液在25℃下搅拌8小时。然后减压除去过量的异丁烯醛。将粗产品进行色谱分离(硅胶，10％至20％的醚的己烷溶液)，得到醛12和12＊(0.13g，0.40mmol，100％)，为非对映异构体的混合物(C13处3:1至4:1的比率)。12和12＊：无色油状物；Rf＝0.55(硅胶，25％的醚的己烷溶液)；12：IR(膜)vmax 3441，2936，1726，1451，1233，1152；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 9.70(s，1H)，5.58(m，1H)，3.62(s，3H)，2.38-2.25(m，1H)，2.21-2.18(m，1H)，2.17-1.98(m，4H)，1.96-1.62(m，6H)，1.61-1.58(m，1H)，1.57-1.43(m，2H)，1.40-1.23(m，1H)，1.17(s，3H)，1.04(s，3H)，0.92(s，3H)；13C(100MHz，CDCl3)δ 207.6，177.7，148.3，188.6，51.3，47.8，47.0，44.2，41.2，39.3，38.8，38.1，29.5，28.4，22.9，22.5，21.8，20.6，20.5，19.7；12＊：[α]25D：+36.8(c＝0.7，C6H6)；IR(膜)vmax 3441，2936，1726，1451，1233，1152；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 9.64(s，1H)，5.42(m，1H)，3.66(s，3H)，2.29-2.10(m，4H)，2.09-1.84(m，4H)，1.81-1.77(m，2H)，1.75-1.63(m，2H)，1.62-1.58(m，2H)，1.57-1.45(m，1H)，1.43(s，1H)，1.13(s，3H)，1.03(s，3H)，0.87(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 207.3，177.5，147.4，114.6，55.8，51.3，47.3，44.5，40.7，40.4，38.4，37.5，31.5，28.6，25.0，24.2，21.9，19.9，19.6，18.7。
纯化非对映异构醛的优选方式是将其在MeOH中用硼氢化钠还原并分离醇。然后通过用Dess-Martin过碘烷处理能够将主要化合物(最高非对映异构体)氧化成期望的醛12。
Figure A200680034568D01411
烯13(TTL3).将(甲基)-三苯基-溴化鳞(357mg，1.0mmol)的THF(40ml)溶液用1M NaHMDS的THF(0.86ml，0.86mmol)溶液处理。将得到的黄色混合物在25℃下搅拌30分钟。然后通过套管向反应中加入醛12(91mg，0.29mmol)的THF(10ml)溶液。将反应混合物在25℃下搅拌8小时，然后用碳酸氢钠(30ml)和水(20ml)淬灭。将混合物倾入含有醚(50ml)的分液漏斗中。分开层后，将水层用醚(3×50ml)萃取。合并有机层，用MgSO4干燥，浓缩，并进行色谱分离(硅胶，10％的醚的己烷溶液)，得到烯13(84mg，0.28mmol，97％)。13：无色油状物；Rf＝0.75(硅胶，25％的醚的己烷溶液)；13：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 5.96(dd，1H，J＝16.8，11.6Hz)，5.50(m，1H)，4.98(m，2H)，3.62(s，3H)，2.20-2.11(m，1H)，2.10-1.91(m，4H)，1.90-1.70(m，4H)，1.69-1.51(m，3H)，1.50-1.38(m，3H)，1.36-1.24(m，1H)，1.17(s，3H)，1.04(s，3H)，0.90(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 177.9，149.1，143.8，117.9，111.7，51.2，47.7，44.4，41.4，41.2，38.9，38.3，37.7，34.8，30.4，28.4，24.8，23.1，22.3，22.2，20.6，19.8。
Figure A200680034568D01421
酸14(TTL1).将烯13(84mg，0.28mmol)的二甲基亚砜(20ml)溶液用LiBr(121mg，1.4mmol)处理。将反应混合物在180℃回流2天。冷却后，将反应用水(30ml)稀释并用醚(3×50ml)萃取。合并有机层，用MgSO4干燥，浓缩，并进行色谱分离(硅胶，30％的醚的己烷溶液)以得到羧酸14(TTL1)(78mg，0.26mmol)。14：白色固体；Rf＝0.30(硅胶，30％的醚的己烷溶液)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 5.96(dd，1H，J＝14.4，9.6Hz)，5.52(m，1H)，4.98-4.95(m，2H)，2.20-1.72(m，10H)，1.64-1.58(m，3H)，1.57-1.37(m，4H)，1.22(s，3H)，1.04(s，3H)，0.99(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 182.9，149.3，143.9，118.1，111.9，47.5，44.2，41.3，41.2，38.9，38.0，37.6，34.8，28.4，24.7，23.0，22.4，21.9，20.3，19.5。
Ph3P＝14CH2的制备.
将三苯基膦(0.16g，0.61mmol)加入到15ml反应烧瓶中，并在真空和25℃下干燥过夜。向该烧瓶中加入2ml的THF(干燥并真空脱气的)，然后加入溶于1ml THF中的14CH3I(50mCi，53mCi/mmol，0.9mmol)并将混合物在氩气下搅拌24小时。然后加入六甲基二甲硅烷基酰胺钾(2.5ml，1.25mmol，0.5M甲苯溶液)并将红黄色混合物在25℃下搅拌3小时。
Ph3P＝14CH2的Wittig反应.
将上述混合物冷却至-78℃并用醛12(63mg，0.2mmol)的干燥THF(1.5ml)溶液处理。使混合物缓慢加温至25℃，搅拌8小时并用碳酸氢钠(10ml)和水(10ml)淬灭。将混合物用醚(3×50ml)萃取并将有机层合并，用MgSO4干燥，浓缩，并进行硅胶色谱分离(硅胶，10％的醚的己烷溶液)，得到烯13。
Figure A200680034568D01431
醇15.将炔9(1.10g，4.2mmol)、苯硫酚(1.37g，12.4mmol)和2，2’-偶氮二异丁腈(AIBN，34.5mg，0.21mmol)的二甲苯(25ml)溶液于110℃(氩气下)搅拌18小时。将反应混合物冷却至25℃并用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)淬灭。将有机层用乙醚(3×50ml)萃取，收集，干燥(MgSO4)，浓缩并将残余物进行色谱分离(硅胶，2％至5％的乙醚的己烷溶液)，得到醇15(1.35g，3.6mmol，85.7％)；15：无色液体；Rf＝0.51(硅胶，5％的乙醚的己烷溶液)；[α]25D：+24.20(c＝1.0，苯)；IR(膜)vmax2946.8，1724.5，1472.6，1438.4，1153.5，740.0，690.9；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.20-7.60(m，5H)，5.23(d，1H，J＝10.5Hz)，5.12(d，1H，J＝10.0Hz)，3.62(s，3H)，2.08-2.24(m，2H)，1.16-1.92(m，9H)，1.09(s，3H)，0.86-1.02(m，2H)，0.68(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ177.8，151.7，133.9，133.7，128.8，127.9，118.2，54.9，53.5，51.1，44.3，40.4，38.1，37.3，28.7，27.7，25.5，23.5，19.5，18.5。
Figure A200680034568D01441
二烯16.向醇15(1.10g，2.94mmol)的六甲基磷酰胺(HMPA，10ml)溶液中滴加三氯氧磷(0.50g，3.3mmol)，并将混合物在25℃下搅拌至澄清。然后加入吡啶(0.26ml，3.23mmol)并将混合物在150℃(氩气下)搅拌18小时。将反应混合物冷却至25℃并用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)淬灭。将有机层用乙醚(3×60ml)萃取，收集，干燥(MgSO4)并浓缩并将残余物进行色谱分离(硅胶，2％至5％的乙醚的己烷溶液)，得到二烯16(0.85g，2.38mmol，81％)；16：无色液体；Rf＝0.60(硅胶，5％的乙醚的己烷溶液)；[α]25D：-17.30(c＝1.08，苯)；IR(膜)vmax 2957.0，1726.6，1581.6，1478.3，1439.0，1234.7，1190.8，1094.8，1024.4，739.1；1HNMR(500MHz，CDCl3)δ 7.20-7.60(m，5H)，6.43(d，1H，J＝15.0Hz)，6.36(d，1H，J＝14.5Hz)，5.72(m，1H)，3.64(s，3H)，1.48-2.32(m，10H)，1.43(s，3H)，1.21(s，3H)，1.05(m，1H)，0.88(s，3H)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ 177.9，133.7，129.1，128.9，128.6，127.5，126.2，123.4，120.9，52.8，51.1，43.7，37.7，37.3，30.2，28.3，27.7，20.1，19.3，18.3。
Figure A200680034568D01442
醛17.在-20℃和氩气下向二烯16(0.51g，1.43mmol)和异丁烯醛(0.30g，4.30mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中滴加氯化锡(IV)(0.29ml的1M二氯甲烷溶液，0.29mmol)。将得到的混合物在1小时内加温至0℃并在0℃下搅拌18小时。将反应用饱和碳酸氢钠水溶液(15ml)淬灭并将有机层用乙醚(3×20ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并浓缩并将残余物进行色谱分离(硅胶，10％至15％的乙醚的己烷溶液)，得到醛17(0.51g，1.19mmol，83.7％)；4：无色液体；Rf＝0.48(硅胶，10％的乙醚的己烷溶液)；[α]25D：+30.0(c＝1.13，苯)；IR(膜)vmax 2930.8，2871.4，1724.9，1458.4，1226.4，1149.8；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.51(s，1H)，7.20-7.60(m，5H)，5.57(m，1H)，3.65(s，3H)，1.20-2.32(m，15H)，1.17(s，3H)，1.05(s，3H)，0.91(s，3H)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ 203.6，177.9，153.7，133.6，133.5，128.9，127.8，117.1，51.3，49.1，47.7，44.2，41.6，38.7，38.1，31.2，28.3，27.8，26.9，21.7，20.2，19.3，18.6。
Figure A200680034568D01451
醇18.向醛17(0.50g，1.17mmol)的无水乙醇(5ml)溶液中分批加入硼氢化钠(50mg，1.32mmol)并将混合物搅拌30分钟。然后加入饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)并将混合物用乙醚(3×20ml)萃取。收集有机层，干燥(MgSO4)并浓缩。将残余物再次溶于四氢呋喃(5ml)并用过量的Raney镍在氩气和65℃下处理10分钟。将反应混合物过滤，将滤液干燥(MgSO4)并浓缩，并且将残余物进行色谱分离(硅胶，2％至5％的乙醚的己烷溶液)，得到主要化合物醇18(0.21g，0.65mmol，总收率56.1％。注：以上两步的总收率为91％)；18：无色液体；Rf＝0.39(硅胶，30％的乙醚的己烷溶液)；[α]25D：-6.70(c＝1.0，苯)；IR(膜)vmax3436.8，2929.0，2872.2，1728.1，1433.9，1260.6，1029.7，801.6；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 5.37(m，1H)，3.62(s，3H)，2.28(bs，1H)，2.06-2.20(m，2H)，1.20-2.00(m，12H)，1.16(s，3H)，0.99(m，1H)，0.86(s，3H)，0.84(s，3H)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ 178.2，150.4，116.4，73.6，51.2，47.9，44.2，41.9，38.8，38.2，34.3，33.9，28.3，28.2，27.8，22.1，20.3，20.1，18.9。
Figure A200680034568D01461
烯19.向醇18(20.0mg，0.062mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中分批加入Dess-Martin过碘烷(35mg，0.08mmol)，并将混合物在25℃下搅拌30分钟。将反应用饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)淬灭并用乙醚(3×10ml)萃取。将有机层收集，干燥(MgSO4)并浓缩。将残余物再次溶于四氢呋喃(0.5ml)并在氩气下加入到(甲基)三苯基-溴化鏻(60mg，0.17mmol)和双(三甲基硅烷基)酰胺钠(0.14ml的1.0M THF溶液)的THF(1.5ml)的黄色悬浮液中。在25℃搅拌18小时后，将混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)稀释并用乙醚(3×10ml)萃取。将有机层收集，干燥(MgSO4)，浓缩并将残余物进行色谱分离(硅胶，2％至5％的乙醚的己烷溶液)，得到烯19(16.8mg，0.05mmol，两步反应总收率为86％)；19：无色液体；Rf＝0.74(硅胶，5％的乙醚的己烷溶液)；[α]25D：-14.40(c＝0.50，苯)；IR(膜)vmax 2929.5，2873.4，1726.8，1637.7，1460.7，1376.8，1225.1，1150.4，997.8，908.7；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 5.82(dd，1H)，5.39(m，1H)，4.85-4.94(dd，2H)，3.64(s，3H)，2.30(bs，1H)，2.14(m，1H)，2.02(m，1H)，1.80-1.98(m，2H)，1.68-1.80(m，2H)，1.20-1.68(m，7H)，1.18(s，3H)，0.96-1.08(m，2H)，0.95(s，3H)，0.88(s，3H)；13CNMR(125MHz，CDCl3)δ 178.3，150.4，125.6，116.6，109.2，51.2，47.9，44.3，41.9，41.8，38.3，38.2，37.4，34.8，30.2，29.6，28.6，28.4，27.8，22.1，20.4，19.0。
Figure A200680034568D01471
式(I)化合物
向烯19(16.8mg，0.05mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液中加入溴化锂(5.0mg，0.06mmol)并将混合物在190℃搅拌1小时。然后将反应混合物冷却至25℃，用水(5ml)稀释，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。将有机层收集，干燥(MgSO4)并浓缩并将残余物进行色谱分离(硅胶，15％至20％的乙醚的己烷溶液)，得到式(I)(14.9mg，0.05mmol，92.6％)；
式(I)化合物是无色液体；Rf＝0.20(硅胶，30％的乙醚的己烷溶液)；[α]25D：-6.0(c＝0.33，苯)；IR(膜)vmax 3080.6，2928.9，2857.6，1693.6，1638.2，1464.7，1413.8，1376.4，1263.1，1179.3，1095.9，1027.5，999.2，909.2，801.7；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 5.82(dd，1H)，5.40(m，1H)，4.85-4.95(dd，2H)，2.30(bs，1H)，2.16(m，1H)，2.02(m，1H)，1.80-1.98(m，2H)，1.70-1.84(m，2H)，1.10-1.70(m，7H)，1.24(s，3H)，1.00-1.10(m，2H)，0.99(s，3H)，0.95(s，3H)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ 150.3，149.9，116.7，109.2，47.9，41.8，41.7，38.3，38.2，37.4，34.8，31.8，28.6，28.5，27.7，22.6，22.4，22.1，20.3，18.9。
(式(IIB-A1))：带有环状取代基的酰胺
Figure A200680034568D01481
TTL的N-环己基酰胺衍生物的制备(式IIB-A1)
在N2下向TTL-3(1.0g，3.8mmol)的干燥N-甲基吡咯烷酮(6mL)溶液中加入一份丙烷硫醇钠(0.37g，3.8mmol)，并将混合物小心加热至绝大部分固体溶解。在室温下搅拌1小时后，加入水并将混合物用己烷中的10％醚(3×)洗涤。将水性混合物用稀HCl酸化至pH 2，然后用醚萃取(2×)。将有机相合并，用盐水洗涤，干燥(无水硫酸钠)并浓缩。将白色固体用己烷洗涤以除去任何丙烷硫醇，得到干净的酸TTL-1。
向4mL小瓶中加入羧酸(320mg，1.06mmol)、1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)(218mg，1.06mmol)和催化剂4-二甲基氨基吡啶(DMAP)。立即将混合物插入热沙浴并在160℃下加热5至10分钟。将混合物进行色谱分离(2％的乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物，式(IIB-A1)，其为粘稠的油状物。
(式(IIB-A1))：带有环状取代基的酰胺
Figure A200680034568D01482
i)N-甲基吡咯烷酮、丙烷硫醇钠；ii)DCC、DMAP、160℃带有环状取代基的酰胺(式(IIB-A1))的合成
式II2-1和IIA-A1化合物的合成
五加酸和异贝壳杉烯酸能够分别用于式II2-1和IIA-A1化合物的合成。五加酸和异贝壳杉烯酸能够得自任何可用的来源。下文描述了从Coleonema pulchrum中提取五加酸及其分离的方法。
从Coleonema pulchrum的根中提取和分离五加酸
在每一提取步骤中通过将Coleonema pulchrum的干根(440g)在甲醇(3×3L)中浸泡48小时而进行提取。通过旋转蒸发将合并的甲醇提取液浓缩至500ml并加入水以形成9:1的甲醇/水溶液，将其用己烷(3×500mL)萃取。将合并的己烷萃取物浓缩并高真空干燥，得到5.1g含有五加酸的粗提取物。
五加酸的分离
通过正相真空液相色谱(VLC)，使用下列己烷/乙酸乙酯不连续梯度，将上述己烷粗提取物(4.5g)分离为不同的部分：
柱尺寸：15×3.4cm
溶剂梯度：部分
1)300mL的100％己烷
2)200mL的95％己烷/5％乙酸乙酯
3)200mL的90％己烷/10％乙酸乙酯
4)200mL的85％己烷/15％乙酸乙酯
5)200mL的80％己烷/20％乙酸乙酯
6)200mL的75％己烷/25％乙酸乙酯
7)200mL的50％己烷/50％乙酸乙酯
8)200mL的0％己烷/100％乙酸乙酯
用TLC和质谱分析上述所有部分以确定含有五加酸的部分。部分3(963mg)和4(327mg)含有五加酸。
通过制备HPLC，使用下列条件纯化部分3和4：
柱：       Ace 5μ C18
尺寸：     15cm×20mm ID
流速：     14.5ml/min
检测：     UV双波长(设定为210nm和250nm)
溶剂：     8分钟内由80％乙腈/水至100％乙腈并保持100％乙腈7分钟
根据210nm和250nm处的UV峰高收集了7个部分。部分6含有五加酸，将其浓缩得到约90％纯度的化合物。
使用下文所述的半制备HPLC方法将上述馏分6进一步纯化得到超过97％纯度的五加酸：
柱：       ACE 5 C18-HL
尺寸：     25cm×9.4mm ID
流速：     3ml/min
检测：     UV双波长(设定为210nm和250nm)
溶剂：     8分钟内由80％乙腈/水至100％乙腈并保持100％乙腈7分钟
制备五加酸的N-环己基酰胺衍生物(式II2-1)
能够将包括通过上述方法得到的化合物在内的五加酸溶于干燥的CH2Cl2中并用10当量的(COCl)2处理，然后用两滴DMF处理。当反应停止鼓泡时，能够真空蒸发CH2Cl2溶剂和(COCl)2并且能够将反应残余物再次溶于干燥的苯中，然后用5当量的环己胺处理，得到五加酸的N-环己基酰胺衍生物。
Figure A200680034568D01511
制备异贝壳杉烯酸的N-环己酰胺衍生物(式IIA-A1)
能够将异贝壳杉烯酸溶于干燥的CH2Cl2并用10当量的(COCl)2处理，然后用两滴DMF处理。当反应停止鼓泡时，能够在真空下将CH2Cl2溶剂和(COCl)2蒸发并能够将反应残余物再次溶于干燥的苯，然后用5当量的环己胺处理，得到异贝壳杉烯酸的N-环己基酰胺衍生物。
Figure A200680034568D01512
制备通式II-b化合物的方法
方案1.具有酰胺官能团的五加酸类似物的合成
Figure A200680034568D01521
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1菲基](1-吡咯烷基)甲酮 (2)
在室温和催化量的DMF存在下将五加酸1(30mg，0.10mmol)的CH2Cl2(3.0ml)溶液用草酰氯(0.013ml，0.15mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌3小时，减压蒸馏，然后加入3ml的CH2Cl2。向反应混合物中加入三乙胺(0.03ml，0.20mmol)和吡咯烷(0.02ml，0.20mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，用水淬灭并用5ml的CH2Cl2萃取。将有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并减压浓缩。将残余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷＝1:10)，得到25mg的类似物2(71％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.75(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.35(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，3.40-3.53(m，4H)，2.38-2.43(m，3H)，0.95-2.1(m，17H)，1.18(s，3H)，1.05(s，3H)，0.95(s，3H)；IR(无溶剂)2922，1624，1459，1361cm-1；LRMS(EI)m/z 355(M+)。
(1S，4aS，7R)-N-异丁基-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲甲酰胺(3)(SP103)
按照与类似物2相同的操作，使用异丁胺代替吡咯烷，制备了类似物3(收率82％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.80(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.75(m，1H)，5.35(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，3.03(m，2H)，2.05-2.38(m，2H)，0.84-2.01(m，15H)，1.17(s，3H)，0.92(s，3H)，0.88(s，3H)；IR(无溶剂)3390，2924，1640，1518，1462cm-1；LRMS(EI)m/z 357(M+)。
(1S，4aS，7R)-N-己基-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲甲酰胺(4)(SP105)
按照与类似物2相同的操作，使用正己胺代替吡咯烷，制备了类似物4(收率74％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.77(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.60(m，1H)，5.36(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，3.15-3，21(m，2H)，2.05-2.38(m，2H)，0.83-2.02(m，25H)，1.17(s，3H)，0.96(s，3H)，0.92(s，3H)；IR(无溶剂)3387，2926，1636，1522，1459cm-1；LRMS(EI)m/z 385(M+)。
(1S，4aS，7R)-N-苄基-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲甲酰胺(5)(SP104)
按照与类似物2相同的操作，使用苄胺代替吡咯烷，制备了类似物5(收率75％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.19-7.28(m，5H)，5.83(m，1H)，5.73(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.32(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.34(d，2H，J＝5.4Hz)，2.05-2.38(m，2H)，0.85-2.02(m，14H)，1.18(s，3H)，0.91(s，3H)，0.88(s，3H)；IR(无溶剂)3384，2923，1640，1515，1455cm-1；LRMS(EI)m/z 391(M+)。
方案2.具有肽官能团的五加酸类似物的合成
2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a- 十二氢-1-菲基]羰基}氨基)乙酸(6)(SP111)
在室温和催化量的DMF存在下将五加酸1(40mg，0.13mmol)的CH2Cl2(5.0mL)溶液用草酰氯(0.017mL，0.20mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌3小时，减压浓缩，然后加入5ml的CH2Cl2。向反应混合物中加入三乙胺(0.04mL，0.26mmol)和甘氨酸甲酯(14mg，0.16mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，用水淬灭，并用5ml的CH2Cl2萃取。将有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并减压浓缩。将残余物用硅胶柱色谱分离(乙酸乙酯:己烷＝1:5)，得到41mg的肽中间体(83％)。向上述肽中间体(41mg，0.11mmol)的MeOH/THF(1:1，6ml)溶液中加入2N LiOH(0.11ml，0.22mmol)。将反应混合物搅拌3小时，然后真空浓缩。将残余物用2N HCl水溶液酸化并用10ml的乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并真空浓缩，得到37的类似物6(96％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 6.22(m，1H)，5.72(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.31(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.40(bs，1H)，4.00(m，2H)，0.78-2.30(m，16H)，1.15(s，3H)，0.89(s，3H)，0.85(s，3H)；IR(无溶剂)3396，2925，1734，1643，1519，1457，1217cm-1；LRMS(EI)m/z 359(M+)。
3-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a- 十二氢-1-菲基]羰基}氨基)丙酸(7)(SP116)
按照与类似物6相同的操作，使用3-氨基丙酸甲酯代替甘氨酸甲酯，制备了类似物7(两步收率76％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 6.26(m，1H)，5.75(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.31(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.50(bs，1H)，4.01(m，2H)，0.78-2.30(m，18H)，1.15(s，3H)，0.89(s，3H)，0.85(s，3H)；IR(无溶剂)3434，2925，1714，1607，1530，1455，1192cm-1；LRMS(EI)m/z 373(M+)。
(2R)-2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]羰基}氨基)丙酸(8) (SP113)
按照与类似物6相同的操作，使用D-丙氨酸甲酯代替甘氨酸甲酯，制备了类似物8(两步收率73％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.70(bs，1H)，6.19(m，1H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.37(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.51(m，1H)，2.29(m，1H)，0.66-2.11(m，15H)，1.43(d，3H，J＝6.8Hz)，1.15(s，3H)，0.97(s，3H)，0.93(s，3H)；IR(无溶剂)3433，2928，1734，1642，1514，1453，1214cm-1；LRMS(EI)m/z373(M+)。
(2S)-2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]羰基}氨基)丙酸(9) (SP114)
按照与类似物6相同的操作，使用L-丙氨酸甲酯代替甘氨酸甲酯，制备了类似物9(两步收率75％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.73(bs，1H)，6.19(m，1H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.37(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.51(m，1H)，2.29(m，1H)，0.66-2.11(m，15H)，1.43(d，3H，J＝6.8Hz)，1.15(s，3H)，0.97(s，3H)，0.93(s，3H)；IR(无溶剂)3432，2926，1726，1640，1513，1464，1186cm-1；LRMS(EI)m/z373(M+)。
(2S)-2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]羰基}氨基)-3-甲基丁酸 (10)(SP153)
按照与类似物6相同的操作，使用L-缬氨酸甲酯代替甘氨酸甲酯，制备了类似物10(两步收率72％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 6.13(m，1H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.37(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.54(m，1H)，2.05-2.26(m，2H)，0.66-2.01(m，15H)，1.21(s，3H)，0.99(m，6H)，0.95(s，3H)，0.93(s，3H)；IR(无溶剂)2925，1724，1638，1511，1469，1180cm-1；LRMS(EI)m/z 401(M+)。
(2S)-2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]羰基}氨基)-4-甲基戊酸 (11)(SP115)
按照与类似物6相同的操作，使用L-亮氨酸甲酯代替甘氨酸甲酯，制备了类似物11(两步收率75％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 9.65(bs，1H)，5.98(m，1H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.38(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.57(m，1H)，1.10-2.31(m，19H)，0.88-1.05(m，12H)，1.19(s，3H)；IR(无溶剂)2926，1727，1639，1513，1462，1186cm-1；LRMS(EI)m/z 415(M+)。
(2S)-2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]羰基}氨基)-2-苯基乙酸 (12)(SP154)
按照与类似物6相同的操作，使用L-苯基甘氨酸甲酯代替甘氨酸甲酯，制备了类似物12(两步收率74％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 8.21(bs，1H)，7.33(m，5H)，6.60(m，1H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.51(m，1H)，5.34(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，0.72-2.31(m，16H)，1.21(s，3H)，0.95(s，3H)，0.86(s，3H)；IR(无溶剂)2923，1730，1643，1517，1471，1182cm-1；LRMS(EI)m/z 435(M+)。
(2S)-2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]羰基}氨基)-3-苯基丙酸 (13)(SP155)
按照与类似物6相同的操作，使用L-苯基丙氨酸甲酯代替甘氨酸甲酯，制备了类似物13(两步收率72％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.16-7.32(m，5H)，5.96(m，1H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.33(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.77(m，1H)，3.02-3.29(m，2H)，0.79-2.31(m，16H)，1.07(s，3H)，0.93(s，3H)，0.79(s，3H)；IR(无溶剂)2925，1724，1640，1518，1459cm-1；LRMS(EI)m/z 449(M+)。
(2S)-2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]羰基}氨基)-丁二酸(14) (SP156)
按照与类似物6相同的操作，使用L-天冬氨酸二甲酯代替甘氨酸甲酯，制备了类似物14(两步收率70％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 6.85(m，1H)，5.75(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.31(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.64(m，1H)，2.71-2.96(m，2H)，0.79-2.31(m，16H)，1.12(s，3H)，0.92(s，3H)，0.86(s，3H)；IR(无溶剂)3431，1925，1734，1720，1642cm-1；LRMS(EI)m/z 417(M+)。
(2S)-2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]羰基}氨基)-戊二酸(15) (SP157)
按照与类似物6相同的操作，使用L-谷氨酸二甲酯代替甘氨酸甲酯，制备了类似物15(两步收率73％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 6.48(m，1H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.36(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.61(m，1H)，2.51(m，2H)，0.83-2.41(m，18H)，1.13(s，3H)，0.92(s，3H)，0.86(s，3H)；IR(无溶剂)3429，2927，1736，1721，1644，1513cm-1；LRMS(EI)m/z 431(M+)。
(2S)-2-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]羰基}氨基)-3-(1H-咪唑-5- 基)丙酸甲酯(16)(SP158)
按照与类似物2相同的操作，使用L-组氨酸甲酯代替吡咯烷，制备了类似物16(收率82％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.55(s，1H)，7.37(m，1H)，6.78(s，1H)，5.77(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.33(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.72(m，1H)，3.65(s，3H)，3.09(m，2H)，2.51(m，2H)，0.83-2.31(m，18H)，1.12(s，3H)，0.92(s，3H)，0.89(s，3H)；IR(无溶剂)3420，2924，1730，1644cm-1；LRMS(EI)m/z 453(M+)。
方案3.具有醇官能团的五加酸类似物的合成
Figure A200680034568D01591
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲醇(17)(SP033)
向五加酸1(830mg，2.7mmol)的THF(30ml)溶液中加入LAH(310mg，8.2mmol)。将反应混合物搅拌12小时并用水(1.55ml)和10％NaOH溶液(0.31ml)淬灭，并通过celite过滤。将滤液真空浓缩，并用乙酸乙酯(40ml)稀释。将有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并减压浓缩。将残余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷＝1:5)，得到670mg的类似物17(85％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.75(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.29(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，3.78(d，1H，J＝10.9Hz)，3.47(d，1H，J＝10.9Hz)，0.84-1.99(m，16H)，0.97(s，3H)，0.91(s，3H)，0.90(s，3H)；IR(无溶剂)3368，2926，1328cm-1；LRMS(EI)m/z 288(M+)。
(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1菲甲醛(18)
在MS-4A粉末的存在下向类似物17(180mg，0.64mmol)的CH2Cl2(7ml)溶液中加入NMO(116mg，0.96mmol)和催化量的TPAP。将反应混合物在室温下搅拌2小时并通过硅胶过滤。将滤液减压浓缩，并将残余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷＝1:20)，得到160mg的类似物18(89％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 9.86(s，1H)，5.75(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.33(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，0.86-1.99(m，16H)，0.96(s，3H)，0.90(s，3H)，0.86(s，3H)；IR(无溶剂)1717cm-1；LRMS(EI)m/z 286(M+)。
(1S)-1-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]-1-乙醇(19)(SP108)
向类似物18(20mg，0.07mmol)的THF(5ml)溶液中滴加MeLi(1.6M THF溶液，0.087mL，0.14mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，并用饱和NH4Cl溶液淬灭。将得到的混合物真空浓缩，并用乙酸乙酯(10ml)萃取。将有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并减压浓缩。将残余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷＝1:10)，得到20mg的类似物19(95％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.76(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.34(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.33(m，1H)，0.85-2.03(m，19H)，0.97(s，3H)，0.88(s，3H)，0.85(s，3H)；IR(无溶剂)3443，2922，1644，1539，1458，1372cm-1；LRMS(EI)m/z 302(M+)。
(1S)-1-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]-2-丙烯-1-醇(20)(SP099)
按照与类似物19相同的操作，使用乙烯基溴化镁溶液代替甲基锂溶液，制备了类似物20(收率82％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.80(m，1H)，5.74(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.31(m，1H)，5.02-5.14(m，2H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.59(m，1H)，0.81-2.33(m，16H)，0.92(s，3H)，0.88(s，3H)，0.84(s，3H)；IR(无溶剂)3307，2928，1641，1453cm-1；LRMS(EI)m/z 314(M+)。
(1S，2E)-1-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]-2-丁烯-1-醇(21)(SP137)
按照与类似物19相同的操作，使用1-丙烯基溴化镁溶液代替甲基锂溶液，制备了类似物21(收率85％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.65(m，2H)，5.35(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.54(m，1H)，0.81-2.33(m，16H)，1.68(d，2H，J＝6.1Hz)，1.23(s，3H)，0.94(s，3H)，0.91(s，3H)；IR(无溶剂)3358，2925，1645，1302cm-1；LRMS(EI)m/z 328(M+)。
(S)-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a- 十二氢-1-菲基](苯基)甲醇(22)(SP101)
按照与类似物19相同的操作，使用苯基溴化镁溶液代替甲基锂溶液，制备了类似物22(收率83％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.17-7.29(m，5H)，5.73(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.26(m，1H)，5.24(s，1H)，4.88(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，0.79-2.33(m，16H)，1.68(d，2H，J＝6.1Hz)，1.26(s，3H)，0.92(s，3H)，0.90(s，3H)；IR(无溶剂)3382，2934.1642，1431cm-1；LRMS(EI)m/z 364(M+)。
方案4.具有酮官能团的五加酸类似物的合成
Figure A200680034568D01621
1-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十 二氢-1-菲基]-1-乙酮(23)(SP138)
在MS-4A粉末的存在下向类似物19(10mg，0.03mmol)的CH2Cl2(3ml)溶液中加入NMO(5.8mg，0.05mmol)和催化量的TPAP。将反应混合物在室温下搅拌2小时并通过硅胶过滤。将滤液减压浓缩，并将残余物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷＝1:20)，得到9.4mg的类似物23(95％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.26(m，1H)，4.88(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，0.79-2.33(m，16H)，2.13(s，3H)，1.23(s，3H)，0.94(s，3H)，0.89(s，3H)；IR(无溶剂)2924，1698，1538，1458cm-1；LRMS(EI)m/z 300(M+)。
1-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十 二氢-1-菲基]-2-丙烯-1-酮(24)(SP100)
按照与类似物23所述相同的操作，从类似物20制备了类似物24(收率93％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 6.79(dd，1H，J＝20.4，5.7Hz)，6.22(dd，1H，J＝20.4，3.1Hz)，5.76(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.57(dd，1H，J＝5.7，3.1Hz)，5.34(m，1H)，4.93(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.86(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，0.74-2.33(m，16H)，1.15(s，3H)，0.93(s，3H)，0.84(s，3H)；IR(无溶剂)3396，2927，1684，1459cm-1；LRMS(EI)m/z 312(M+)。
(E)-1-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基 -1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二氢-1-菲基]-2-丁烯-1-酮(25)(SP139)
按照与类似物23所述相同的操作，从类似物21制备了类似物25(收率91％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 6.77(m，1H)，5.49(d，1H，J＝16.7Hz)，5.76(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.28(m，1H)，4.93(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.86(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，0.74-2.33(m，19H)，1.15(s，3H)，0.93(s，3H)，0.84(s，3H)；IR(无溶剂)2924，1682，1621，1457cm-1；LRMS(EI)m/z 326(M+)。
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基](苯基)甲酮(26)(SP102)
按照与类似物23所述相同的操作，从类似物22制备了类似物26(收率90％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.29-7.41(m，5H)，5.72(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.23(m，1H)，4.88(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，0.74-2.33(m，16H)，1.15(s，3H)，0.98(s，3H)，0.87(s，3H)；IR(无溶剂)2924，1680，1539，1457cm-1；LRMS(EI)m/z 362(M+)。
方案5.具有肟官能团的五加酸类似物的合成
Figure A200680034568D01641
(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲甲醛肟(27)(SP109)
向类似物18(20mg，0.07mmol)的吡啶(3ml)溶液中加入盐酸羟胺(5.8mg，0.08mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌1小时，冷却至室温，并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷＝1:10)，得到16mg的类似物27(77％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.55(s，1H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.35(m，1H)，4.88(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，0.74-2.33(m，16H)，1.05(s，3H)，0.96(s，3H)，0.91(s，3H)；IR(无溶剂)3307，2928，1641，1453cm-1；LRMS(EI)m/z 301(M+)。
(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲甲醛-O-甲基肟(28)(SP140)
按照与类似物27相同的操作，使用O-甲胺盐酸盐代替盐酸羟胺制备了类似物28(收率72％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.48(s，1H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.35(m，1H)，4.88(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，3.74(s，3H)，0.74-2.33(m，16H)，1.05(s，3H)，0.96(s，3H)，0.91(s，3H)；IR(无溶剂)2927，1716，1647，1458cm-1；LRMS(EI)m/z315(M+)。
(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙，烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲甲醛-O-苄基肟(29)(SP141)
按照与类似物27相同的操作，使用O-苄胺盐酸盐代替盐酸羟胺制备了类似物29(收率72％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.54(s，1H)，7.18-7.34(m，5H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.35(m，1H)，5.03(s，2H)，4.88(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，3.74(s，3H)，0.74-2.33(m，16H)，1.05(s，3H)，0.96(s，3H)，0.91(s，3H)；IR(无溶剂)2927，1646，1456cm-1；LRMS(EI)m/z 391(M+)。
(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲甲醛-O-(4-氟苄基)肟(30)(SP142)
按照与类似物27相同的操作，使用O-(4-氟苄基)胺盐酸盐代替盐酸羟胺制备了类似物30(收率71％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.93(s，1H)，7.02-7.29(m，4H)，5.78(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.35(m，1H)，5.03(s，2H)，4.88(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，3.74(s，3H)，0.74-2.33(m，16H)，1.05(s，3H)，0.96(s，3H)，0.91(s，3H)；IR(无溶剂)2925，1654，1473cm-1；LRMS(EI)m/z 409(M+)。
方案6.具有磺酸官能团的五加酸类似物的合成
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基甲磺酸酯(31)(SP143)
向类似物17(20mg，0.070mmol)的吡啶(3ml)溶液中加入甲磺酰氯(0.0064ml，0.083mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷＝1:5)，得到21mg的类似物31(85％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.76(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.34(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.43(d，1H，J＝10.9Hz)，4.24(d，1H，J＝10.9Hz)，2.98(s，3H)，0.72-2.03(m，19H)，1.12(s，3H)，0.88(s，3H)，0.85(s，3H)；IR(无溶剂)2927，1647，1539，1355cm-1；LRMS(EI)m/z 366(M+)。
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基苯磺酸酯(32)(SP144)
按照与类似物31相同的操作，使用苯磺酰氯代替甲磺酰氯制备了类似物32(收率78％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.47-7.85(m，5H)，5.70(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.34(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.19(d，1H，J＝10.9Hz)，3.87(d，1H，J＝10.9Hz)，2.98(s，3H)，0.79-2.03(m，16H)，1.12(s，3H)，0.90(s，3H)，0.87(s，3H)；IR(无溶剂)：2926，1646，1365，1185，957cm-1；LRMS(EI)m/z428(M+)。
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基-4-甲氧基苯磺酸酯(33)(SP145)
按照与类似物31相同的操作，使用4-甲氧基苯磺酰氯代替甲磺酰氯制备了类似物33(收率83％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.78(m，2H)，6.95(m，2H)，5.70(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.28(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.13(d，1H，J＝10.9Hz)，3.82(s，3H)，3.80(d，1H，J＝10.9Hz)，0.79-2.03(m，16H)，0.96(s，3H)，0.91(s，3H)，0.86(s，3H)；IR(无溶剂)2927，1596，1361，1262，1026cm-1；LRMS(EI)m/z458(M+)。
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基4-碘苯磺酸酯(34)(SP146)
按照与类似物31相同的操作，使用4-碘苯磺酰氯代替甲磺酰氯制备了类似物34(收率81％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.91(m，2H)，7.61(m，2H)，5.76(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.33(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.25(d，1H，J＝10.9Hz)，3.88(d，1H，J＝10.9Hz)，0.79-2.03(m，16H)，0.92(s，3H)，0.91(s，3H)，0.86(s，3H)；IR(无溶剂)2926，1645，1176cm-1；LRMS(EI)m/z 554(M+)。
4-({[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a- 十二氢-1-菲基]甲氧基}磺酰基)苯甲酸(35)(SP147)
按照与类似物31相同的过程，使用4-(氯磺酰基)苯甲酸代替甲磺酰氯制备了类似物35(收率78％)。
1H-NMR(CD3OD，300MHz)δ 8.05(m，2H)，7.91(m，2H)，5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.43(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.65(d，1H，J＝10.9Hz)，4.18(d，1H，J＝10.9Hz)，0.79-2.03(m，16H)，1.23(s，3H)，1.17(s，3H)，0.87(s，3H)；IR(无溶剂)3498，2926，1721，1539，1188cm-1；LRMS(EI)m/z 472(M+)。
方案7.具有酯官能团的五加酸类似物的合成
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基2-溴乙酸酯(36)
于0℃下向类似物17(107mg，0.37mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中加入Et3N(0.15mL，1.1mmol)和溴乙酰溴(0.064mL，0.74mmol)。将反应混合物搅拌10分钟，用NaHCO3水溶液(5ml)淬灭，并用CH2Cl2(10ml)萃取。将有机层用硫酸镁干燥，并减压浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷＝1:10)，得到11mg的类似物36(93％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.35(m，1H)，4.93(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.43(d，1H，J＝10.9Hz)，4.10(d，1H，J＝10.9Hz)，3.81(s，2H)，0.79-2.03(m，16H)，1.10(s，3H)，1.05(s，3H)，0.97(s，3H)。
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基2-哌嗪基乙酸酯(37)(SP148)
向类似物36(108mg，0.26mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中加入哌嗪(68mg，0.80mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时并用盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥。将有机层减压浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷＝3:1)，得到102mg的类似物37(93％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.34(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.37(d，1H，J＝10.9Hz)，4.04(d，1H，J＝10.9Hz)，3.19(s，2H)，2.57-2.97(m，8H)，0.76-2.03(m，16H)，1.05(s，3H)，0.94(s，3H)，0.93(s，3H)；IR(无溶剂)3396，2926，1741，1622，1456cm-1；LRMS(EI)m/z414(M+)。
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基2-(4-乙酰基哌嗪基)乙酸酯(38)(SP152)
向类似物37(15mg，0.04mmol)的CH2Cl2(3ml)溶液中加入Et3N(0.01mL，0.07mmol)和乙酰氯(0.003mL，0.04mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时并用NaHCO3水溶液(1ml)淬灭。将得到的混合物用CH2Cl2(10ml)萃取。将有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(氯仿:甲醇＝10:1)，得到15mg的类似物38(94％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.34(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.37(d，1H，J＝10.9Hz)，4.04(d，1H，J＝10.9Hz)，3.49-3.66(m，4H)，3.26(s，2H)，2.48-2.61(m，4H)，0.76-2.03(m，16H)，2.02(s，3H)，1.05(s，3H)，0.95(s，3H)，0.94(s，3H)；IR(无溶剂)2926，1741，1645，1434cm-1；LRMS(EI)m/z 456(M+)。
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基2-[(4-(甲基磺酰基)哌嗪基)乙酸酯(39)(SP149)
按照与类似物38相同的操作，使用甲磺酰氯代替乙酰氯制备了类似物39(收率93％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.34(m，1H)，4.93(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.84(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.40(d，1H，J＝10.9Hz)，4.08(d，1H，J＝10.9Hz)，3.35(m，4H)，2.81(s，2H)，2，78-2.80(m，9H)，2.48-2.61(m，4H)，0.76-2.03(m，16H)，2.02(s，3H)，1.05(s，3H)，0.95(s，3H)，0.94(s，3H)；IR(无溶剂)2925，1735，1642，1539，1182cm-1；LRMS(EI)m/z 492(M+)。
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基2-{4-[(4-(甲基苯基)磺酰基)哌嗪基]乙酸酯(40) (SP150)
按照与类似物38相同的操作，使用对甲苯磺酰氯代替乙酰氯制备了类似物40(收率93％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.62(m，2H)，7.31(m，2H)，5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.34(m，1H)，4.93(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.84(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.37(d，1H，J＝10.9Hz)，4.08(d，1H，J＝10.9Hz)，2.64-3.18(m，10H)，2.41(s，3H)，0.74-1.97(m，16H)，1.08(s，3H)，0.95(s，3H)，0.93(s，3H)；IR(无溶剂)2924，1742，1455，1351，1166cm-1；LRMS(EI)m/z 568(M+)。
[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十二 氢-1-菲基]甲基2-{4-[(4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪基]乙酸酯(41) (SP151)
按照与类似物38相同的操作，使用4-(甲氧基)苯磺酰氯代替乙酰氯制备了类似物41(收率92％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 7.82(m，2H)，7.65(m，2H)，5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.34(m，1H)，4.93(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.84(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.37(d，1H，J＝10.9Hz)，4.03(d，1H，J＝10.9Hz)，3.85(s，3H)，2.66-3.19(m，10H)，0.74-1.97(m，16H)，1.03(s，3H)，0.94(s，3H)，0.88(s，3H)；IR(无溶剂)2926，1742，1450，1065cm-1；LRMS(EI)m/z 584(M+)。
方案8.具有酯官能团的五加酸类似物的合成
Figure A200680034568D01711
4-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十 二氢-1-菲基]甲氧基-4-氧代丁酸(42)(SP117)
向类似物17(30mg，0.10mmol)的吡啶(3ml)溶液中加入琥珀酸酐(12mg，0.12mmol)。将反应混合物回流3小时并冷却至室温。将得到的混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯:正己烷＝2:1)，得到26mg的类似物42(67％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.31(m，1H)，4.89(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.84(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.37(d，1H，J＝10.9Hz)，3.98(d，1H，J＝10.9Hz)，2.64(m.4H)，0.80-2.22(m，16H)，1.00(s，3H)，0.89(s，3H)，0.87(s，3H)；IR(无溶剂)2928，1732，1708，1459cm-1；LRMS(EI)m/z 388(M+)。
4-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十 二氢-1-菲基]甲氧基-2，2-二甲基-4-氧代丁酸(43)(SP118)
按照与类似物42相同的操作，使用2，2-二甲基琥珀酸酐代替琥珀酸酐制备了类似物43(收率79％)。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.31(m，1H)，4.87(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.30(d，1H，J＝10.9Hz)，3.94(d，1H，J＝10.9Hz)，2.56(s，2H)，0.81-2.25(m，16H)，1.23(s，6H)，1.00(s，3H)，0.90(s，3H)，0.89(s，3H)；IR(无溶剂)2926，1735，1706，1467cm-1；LRMS(EI)m/z 416(M+)。
5-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十 二氢-1-菲基]甲氧基-2，2-二甲基-5-氧代戊酸(44)(SP119)
按照与类似物42相同的操作，使用2，2-二甲基戊二酸酐代替琥珀酸酐制备了类似物44(收率99％)。
1H-NMR(CDC13，300MHz)δ 5.79(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.31(m，1H)，4.88(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.83(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.27(d，1H，J＝10.9Hz)，3.95(d，1H，J＝10.9Hz)，2.78(t，2H，J＝6.96Hz)，1.82(t，2H，J＝6.96Hz)，0.68-2.30(m，16H)，1.29(s，6H)，1.15(s，3H)，1.01(s，3H)，0.90(s，3H)；IR(无溶剂)2927，1735，1714cm-1；LRMS(EI)m/z 430(M+)。
5-1(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a-十 二氢-1-菲基]甲氧基-3，3-二甲基-5-氧代戊酸(45)(SP120)
按照与类似物42相同的操作，使用3，3-二甲基戊二酸酐代替琥珀酸酐制备了类似物45(收率74％)。
1H-NMR(CDC13，300MHz)δ 5.80(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.31(m，1H)，5.23(s，2H)，4.89(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.82(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.43(d，1H，J＝10.9Hz)，4.20(s，2H)，4.09(d，1H，J＝10.9Hz)，0.71-2.25(m，16H)，0.96(s，6H)，1.01(s，3H)，0.89(s，3H)，0.87(s，3H)；IR(无溶剂)2925，1748，1455cm-1；LRMS(EI)m/z 430(M+)。
2-(2-[(1S，4aS，7R)-1，4a，7-三甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，6，7，8，8a，9，10，10a- 十二氢-1-菲基1甲氧基-2-氧代乙氧基1乙酸(46)(SP121)
按照与类似物42相同的操作，使用二甘醇酸酐代替琥珀酸酐制备了类似物46(收率72％)。
1H-NMR(CDC13，300MHz)δ 5.74(dd，1H，J＝17.6，10.8Hz)，5.26(m，1H)，4.84(dd，1H，J＝10.8，1.4Hz)，4.78(dd，1H，J＝5.5，1.4Hz)，4.24(d，1H，J＝10.9Hz)，3.89(d，1H，J＝10.9Hz)，2.35(m，4H)，0.82-1.93(m，16H)，0.96(s，3H)，0.85(s，3H)，0.82(s，3H)；IR(无溶剂)2930，1765，1704，1020cm-1；LRMS(EI)m/z 404(M+)。
NPI-1387和NPI-1388的合成和纯化 方案-9
Figure A200680034568D01731
将五加酸(1)和异贝壳杉烯酸的混合物用氢化铝锂处理，得到其相应的羟基衍生物，将其用TPAP氧化得到醛混合物。将五加酸和异贝壳杉烯酸衍生物的醛混合物用乙烯基溴化镁处理得到其相应的乙烯醇衍生物，将其氧化得到NPI-1387(24)和NPI-1388的混合物(参见将异贝壳杉烯酸转变为NPI-1388的方案-II；类似地，将五加酸(1)转变为NPI-1387(24)示于方案3和4)。
NPI-1387(24)和NPI-1388的纯化：将NPI-1387(24)和NPI-1388的混合物溶于丙酮(20mg/mL)并通过下述的制备HPLC纯化：
 
柱 Ace C18 5u
尺寸 15cm×21mm ID
流速 14.5m1/min
检测 DAD
溶剂 50％至90％CH3CN/水梯度：8分钟90％CH3CN/水：10分钟90-100％CH3CN/水梯度：1分钟100％CH3CN：10分钟           
化合物NPI-1387(24)和NPI-1388分别在23.5分钟和25.5分钟被洗脱。基于存在的化合物的组成而收集含有化合物NPI-1387和NPI-1388的部分，并在旋转蒸发器上减压蒸发。该过程得到纯化合物NPI-1387和NPI-1388。
NPI-1387的1H-NMR(CDCl3，500MHz)，参见图VI。
NPI-1387的13C-NMR(CDCl3，125MHz)，参见图VII。
NPI-1388的1H-NMR(CDCl3，500MHz)，参见图VIII。
通式IIA-b化合物的制备方法
按照用于制备通式II-b化合物的上述操作制备通式IIA-b化合物，不同之处在于使用异贝壳杉烯酸作为起始物质代替五加酸(1)：
Figure A200680034568D01751
异贝壳杉烯酸。
通式IIB-b化合物的制备方法
按照上述制备通式II-b化合物的操作，使用TTL化合物如TTL-1、TTL-2、TTL-3、TTL-4等代替五加酸(1)作为起始原料，制备了通式IIB-b化合物。
NPI-1390的制备方法
如方案9所示制备了化合物NPI-1390(TTL3的乙烯基酮衍生物)：
Figure A200680034568D01752
化合物NPI-1308：在-78℃下向化合物NPI-1301(315mg，1mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中缓慢加入DIBAL-H(3.0mL，1M的己烷溶液，3mmol)。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时并用MeOH(2mL)淬灭。将反应混合物升温至室温，加入1N HCl(30mL)并搅拌约30分钟。将得到的混合物用CH2Cl2(3×50mL)萃取，并将有机层合并并且在减压下浓缩得到NPI-1308(275mg，收率96％)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)参见图IV。
13C-NMR(CDCl3，125MHz)参见图V。
化合物NPI-1374：在分子筛(3A)的存在下向化合物NPI-1308(40mg，0.14mmol)的CH2Cl2(3ml)溶液中加入NMO(116mg，0.36mmol)和催化量的TPAP。将反应混合物在室温下搅拌1小时，并倾倒在硅胶柱(15×30mm)上。将柱用0至15％EtOAc/己烷洗脱以得到NPI-1374(38mg，收率96％)。
化合物NPI-1391：于-78℃和N2下将正丁基锂(0.2mL，2.5M的己烷溶液，0.5mmol)加入到四乙烯基锡(35mg，0.15mmol)的THF(1.5mL)溶液中。将混合物在相同温度下搅拌约20分钟，然后在室温下搅拌约45分钟。于-78℃下将醛NPI-1374(115mg，0.04mmol)的THF(0.6mL)溶液加入到反应混合物中并将反应混合物在-78℃下搅拌约30分钟，然后在室温下搅拌约20分钟。然后将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(8mL)淬灭，并用乙醚(3×25mL)萃取。将合并有机层减压浓缩并将得到的残余物通过硅胶柱色谱纯化(15×30mm；0至10％EtOAc/己烷)，得到NPI-1391(10.3mg，收率83％)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)参见III。
化合物NPI-1390：在分子筛(3A)的存在下向化合物NPI-1391(8.3mg，0.026mmol)的CH2Cl2(1.5ml)溶液中加入NMO(10mg，0.09mmol)和催化量的TPAP。将反应混合物在室温下搅拌2小时并通过硅胶塞过滤。将滤液减压浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱纯化(10×200mm；0至3％ EtOAc/己烷)，得到NPI-1390(2.2mg)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)参见图I。
13C-NMR(CDCl3，125MHz)参见图II。
本发明的应用方法
上述体外和体内方法作为本发明的一部分还证实了TNF-α或IL-1的选择性。已认可化学物能够调节多种生物学过程或是选择性的。基于本发明的细胞组能够用于确定候选调节剂的特异性。在例如化疗领域中选择性是明显的，其中显然期望化合物对癌细胞具有毒性而对非癌细胞不具有毒性的选择性。优选选择性调节剂，因为它们在临床应用中具有更小的副作用。能够在体外通过检测候选调节剂对显示多种细胞途径和敏感性的多种细胞系的毒性和功效来确定候选调节剂的选择性。由这些体外毒性研究得到的数据可以延伸至动物模型，包括公认动物模型研究和人临床试验，以测定候选调节剂的毒性、功效和选择性。
本发明还涵盖在为储存和随后给药而制备的包含药物可接受的载体的药物组合物中通过该方法产生的组合物，其在药物可接受的载体或稀释剂中具有药物有效量的上文公开的产物。用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂在制药领域是公知的并且被描述于例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿制药学)，Mack PublishingCo.(A.R.Gennaro edit.1985)。药物组合物中可提供防腐剂、稳定剂、染料、甚至矫味剂。例如，可加入苯甲酸钠、抗坏血酸和对羟基苯甲酸酯作为防腐剂。另外，可使用抗氧化剂和悬浮剂。
可将这些TNF-α或IL-1调节剂组合物组方并用作用于口服给药的片剂、胶囊或酏剂；用于直肠给药的栓剂；用于注射给药的无菌溶液、混悬液；用于透皮给药的贴片，以及皮下沉积物等等。注射剂能够制备成常规的形式，作为液体溶液或混悬液、适于注射前溶解或混悬于液体中的固体形式，或者作为乳剂。适当的赋形剂例如是水、盐水、葡萄糖、甘露醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸钠、盐酸半胱氨酸等等。另外，如果需要，注射药物组合物可包含少量无毒辅助物质，如润湿剂、pH缓冲剂等等。如果需要，可使用吸收增强制剂(例如脂质体)。
作为剂量所要求的药物有效量的TNF-α或IL-1调节剂组合物取决于给药途径、待治疗动物的类型、以及所考虑的特定动物的身体特征。能够调节所述剂量以达到期望的功效，但取决于诸如体重、食谱、共同用药等因素以及医药领域技术人员知道的其它因素。
在实施所述方法时，产物或组合物能够单独使用或互相联合使用，或与其它治疗或诊断剂联合使用。这些产物通常能够在哺乳动物，优选人的体内使用，或体外使用。当体内使用时，产物或组合物能够以多种方式利用多种剂型给予哺乳动物，所述方式包括肠胃外、静脉内、皮下、肌内、结肠、直肠、阴道、鼻或腹膜内。这样的方法还可用于体内检测化学活性。
对于本领域技术人员显而易见的是，有用的体内给药剂量以及具体的给药方式会根据年龄、体重和所治疗的哺乳动物种类、所使用的具体化合物、以及使用这些化合物的特殊用途而变化。有效剂量水平，即为达到期望的结果所必需的剂量水平的确定能够由本领域技术人员使用常规的药理学方法完成。通常，在较低的剂量水平开始产物的人临床应用，增加剂量水平直至达到期望的功效。或者，使用确立的药理学方法，可接受的体外研究能够用于确定通过本方法确认的组合物的有用的剂量和给药途径。
在非人类动物研究中，在较高的剂量水平开始应用潜在的产物，降低剂量直至不再达到期望的功效或副作用消失。根据期望的功效和治疗适应症，本发明产物的剂量能够在很宽的范围内。通常，剂量可以是约10μg/kg体重至100mg/kg体重，优选约100μg/kg体重至10mg/kg体重。或者，如本领域技术人员理解的，可根据患者体表面积计算剂量。给药优选为口服，每日一次或每日两次。
能够通过各个医师根据患者的情况选择确切的制剂、给药途径、疗程和剂量。参见例如Fingl et al.，The Pharmacological Basis ofTherapeutics(治疗的药理学基础)，1975。应该注意，主治医师会知道如何以及何时因毒性或器官功能障碍而终止、中断或调整给药。反过来，主治医师还会知道如果临床响应不够(排除毒性)则将治疗调整至较高水平。在处理所关注的病症中，给药剂量的大小会根据待治疗的疾病状态的严重性和给药途径而变化。可例如通过标准的预后评价方法部分评价疾病状态的严重性。此外，剂量以及或许是剂量频率也会根据各个患者的年龄、体重和响应而变化。与上文讨论的相当的程序可用于兽医学中。
根据被治疗的具体疾病状态，可组方并全身或局部给予这样的药剂。在Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿制药学)，18th Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990)中可找到各种组方和给药的技术。适宜的给药途径可包括口、直肠、透皮、阴道、透粘膜或肠内给药；肠胃外给药，包括肌内、皮下、髓内注射，以及鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。
为了注射，可将药剂组方为水溶液，优选为生理相容的缓冲液，例如Hanks溶液、Ringer溶液，或生理盐水缓冲液。为了这样的透膜给药，制剂中使用对待透过的屏障合适的渗透剂。这样的渗透剂是本领域公知的。对于本发明的实践，使用药物可接受的载体以将本文公开的化合物组方为适于全身给药的剂量是在本发明的范围内。通过适当选择载体和适当的制造实践，本发明组合物，尤其是那些组方为溶液的组合物，可被肠胃外给药，如通过静脉内注射。使用本领域公知的药物可接受的载体，能够很容易地将化合物组方为适于口服给药的剂量。这样的载体能够使化合物组方为用于被待治疗的患者口服的片剂、丸剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆、混悬液等等。
旨在细胞内给予的药剂可通过本领域普通技术人员公知的技术进行给予。例如，这样的药剂可被包囊在脂质体中，然后如上所述进行给予。在脂质体形成时，水溶液中存在的所有分子均被并入水性内部。脂质体内含物被外部微环境所保护，并且由于脂质体与细胞膜融合，其可有效地输送至细胞质。此外，由于其疏水性，可直接细胞内给予有机小分子。
适用于本文所述的药物组合物包括这样的组合物，其中含有有效量的TNF-α或IL-1调节剂以达到TNF-α或IL-1调节目的。有效量的确定是在本领域技术人员的能力范围内，尤其是在参考本文所提供的详细公开的条件下。除了活性成分，这些药物组合物可含有适当的药物可接受的载体，包含有助于将活性化合物制成能够用于药物的制剂的赋形剂和辅助剂。为口服给药组方的制剂可以是片剂、糖衣丸、胶囊或溶液的形式。本发明的药物组合物可以本身已知的方式制造，例如通过常规的混合、溶解、造粒、制备糖衣丸、漂浮、乳化、包囊、俘获或冻干方法。
用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的混悬液可被制备成适当的油性注射混悬液。适当的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油如芝麻油，或其它有机油如大豆油、柚子油或杏仁油，或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酸酯，或脂质体。水性注射混悬液可包含能增加混悬液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或右旋糖酐。任选地，混悬液还可包含适当的稳定剂或增加化合物的溶解性以制备高浓度溶液的试剂。
用于口服使用的药物制剂能够通过将活性化合物与固体赋形剂混合得到，任选地将得到的混合物磨细，并且，如果需要，在加入适当的辅助剂后处理颗粒混合物以得到片剂或糖衣丸的核。适当的赋形剂尤其是填充剂如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、土豆淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐如海藻酸钠。为糖衣丸的核提供适当的包衣。为此，可使用浓缩的糖溶液，其任选地可包含阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及适当的有机溶剂或溶剂混合物。可向片剂或糖衣丸包衣中加入染料或颜料，用于确认或表征活性化合物剂量的不同组合。为此，可使用浓缩的糖溶液，其任选地可包含阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及适当的有机溶剂或溶剂混合物。可向片剂或糖衣丸包衣中加入染料或颜料，用于确认或表征活性化合物剂量的不同组合。能够使用本领域已知的方法制备这样的制剂(参见例如美国专利第5,733,888号(注射组合物)；第5,726,181号(水难溶化合物)；第5,707,641号(治疗活性蛋白或肽)；第5,667,809号(亲脂试剂)；第5,576,012号(可溶聚合试剂)；第5,707,615号(抗病毒制剂)；第5,683,676号(微粒药物)；第5,654,286号(局部制剂)；第5,688,529号(口服混悬液)；第5,445,829号(缓释制剂)；第5,653,987号(液体制剂)；第5,641,515号(控释制剂)和第5,601,845号(球状制剂)。
能够使用已知方法评价本发明化合物的功效和毒性。例如，通过测定对细胞系的体外毒性能够建立本发明具体化合物或具有特定化学基团的本发明化合物子集的毒理学，所述细胞系如哺乳动物细胞系，优选人细胞系。该研究的结果通常可预测在动物如哺乳动物或更具体地在人中的毒性。或者，可使用已知的方法测定本发明具体化合物在动物模型，如小鼠、大鼠、家兔或猴中的毒性。可使用数种本领域公认的方法，如体外方法、动物模型或人临床试验，确定本发明具体化合物的功效。对几乎每一类疾病状态均存在本领域公认的体外模型，所述疾病状态包括被本发明所缓解的疾病状态，其包括癌、心血管疾病和多种免疫功能障碍。类似地，可接受的动物模型可用于确定化学品治疗这样的疾病状态的功效。当选择模型来确定功效时，本领域技术人员能够由现有技术引导以选择适当的模型、剂量和给药途径以及方案。当然，人临床试验也能够用于确定本发明化合物在人中的功效。
当用作抗炎剂、抗癌剂、肿瘤生长抑制化合物，或用作治疗心血管疾病的方法时，能够通过口服或非口服途径给给予通式(II)、(IIA)化合物。在某些方面，能够通过这样的途径给予通式(IIB)化合物，包括例如IIB-a，b、IIA-a，b和II-a，b和(112)。当口服给药时，能够将其以胶囊、片剂、颗粒剂、喷雾剂、糖浆剂或其它这样的形式给药。当非口服给药时，能够将其以水性混悬液、油性制剂等等的形式给药，或当通过注射、皮下、腹膜内、静脉内、肌内、皮内等等方式给药时，以滴剂、栓剂、药膏、软膏剂等等形式给药。类似地，可将其以局部、直肠或阴道给药等本领域技术人员认为合适的方式将化合物与肿瘤进行最佳接触，从而抑制肿瘤的生长。也可以考虑在肿瘤切除之前或之后，或作为本领域公认的疾病状态的治疗方法的一部分而在肿瘤或其它疾病状态部位进行局部给药。类似地考虑了控释制剂、储库制剂和灌注泵输送。
包括通式(II)和(IIA)以及优选的(IIB)在内的本文所述化合物，当被用作抗肿瘤剂或用作对上述疾病状态的治疗时，可以约0.0007mg/天至约7,000mg/天活性成分的量，并且更优选地以约0.07mg/天至约70mg/天活性成分的量口服或非口服给予人类患者，优选每日一次，或不那么优选地，每日2次至约10次。或者，并且也是优选的，可将化合物以规定的量优选通过如静脉内滴注连续给予。因此，对于体重为70公斤的患者，活性抗肿瘤成分的优选每日剂量为约0.0007mg/kg/天至约35mg/kg/天，并且更优选0.007mg/kg/天至约0.035mg/kg/天。然而，本领域技术人员会理解，在某些情况下，可能必需将抗肿瘤化合物以过量或甚至大大超过上述优选的剂量范围的量给予以有效并迅速地治疗特别晚期的或致命的肿瘤。
为了将包括通式(II)、通式(IIA)、或通式(IIB)化合物在内的本文所述化合物组方为肿瘤生长抑制或抗病毒化合物，可使用已知的表面活性剂、赋形剂、光滑剂、混悬剂以及药物可接受的成膜物质和包被助剂等等。优选地，醇、酯、硫酸化脂肪醇等等可被用作表面活性剂；蔗糖、葡萄糖、乳糖、淀粉、结晶纤维素、甘露醇、轻质无水硅酸盐、铝酸镁、甲硅酸铝酸镁、合成硅酸铝、碳酸钙、碳酸氢钠、磷酸氢钙、羧甲基纤维素钙等等可被用作赋形剂；硬脂酸镁、滑石、硬化油等等可被用作光滑剂；椰子油、橄榄油、芝麻油、花生油、大豆油可被用作混悬剂或润滑剂；纤维素乙酸酯邻苯二甲酸酯作为碳水化合物如纤维素或糖的衍生物或乙酸甲酯-甲基丙烯酸酯共聚物作为聚乙烯基衍生物可被用作混悬剂；并且增塑剂如邻苯二甲酸酯等等可被用作混悬剂。除前述优选的成分之外，还可向所述化合物的给药制剂中加入甜味剂、香料、着色剂、防腐剂等等，尤其是当化合物口服给药时。
在将通式(II)、通式(IIA)和/或通式(IIB)化合物用作治疗皮肤发红的方法的情况下，或者可将化合物与药物可接受的载体组合以药膏或软膏的形式局部给药。
在将通式(II)、通式(IIA)和/或通式(IIB)化合物用作上文所述的生化检测试剂的情况下，可将化合物溶于有机溶剂或含水的有机溶剂中并直接应用于多种培养的细胞体系。可用的有机溶剂例如包括甲醇、甲基亚砜等等。制剂能够例如是粉末、颗粒或其它固体抑制剂，或使用有机溶剂或含水有机溶剂制备的液体抑制剂。尽管用作细胞周期抑制剂的化合物的优选浓度通常为约1μg/ml至约1001μg/ml，但本领域技术人员会理解，最适当的使用量根据培养的细胞体系的类型和使用目的而不同。此外，在某些应用中，对于本领域技术人员可能必需或优选地使用上述范围以外的量。
本发明还涵盖在包含药物可接受的载体的药物组合物中的通式(II)、通式(IIA)和/或通式(IIB)组合物。可制备这样的组合物用于储存并用于后续给药。可接受的用于治疗用途的载体或稀释剂在制药领域是公知的，并且被描述于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences(雷明顿制药学)，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)。例如，这样的组合物可被组方并用作口服给药的片剂、胶囊或溶液；直肠或阴道给药的栓剂；注射给药的无菌溶液或混悬液。能够制备常规形式的注射剂，其可为液体溶液或混悬液，适于在注射前溶解或悬浮于液体的固体形式、或乳剂。适当的赋形剂包括，但不限于盐水、葡萄糖、甘露醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸钠、半胱氨酸盐酸盐等等。此外，如果需要，注射药物组合物可含有少量的无毒辅助物质，如润湿剂、pH缓冲剂等等。如果需要，可使用吸收增强制剂(例如脂质体)。
作为剂量所要求的组合物的药物有效量取决于给药途径、被治疗动物的类型、以及所考虑的特定动物的身体特征。能够调节所述剂量以达到期望的功效，但取决于诸如体重、食谱、共同用药等因素以及其它医药领域技术人员知道的因素。
上述产物或组合物可以被单独使用或互相联合使用，或与其它治疗或诊断剂组合使用。这些产物能够在体内或体外使用。有用的剂量和最有用的给药方式根据年龄、体重和所治疗的动物、所使用的具体化合物、以及使用这些组合物或组合物的具体用途而变化。在处理和治疗具体的疾病状态中，剂量的大小会根据所治疗的疾病状态的严重性和给药途径而变化，并且根据疾病状态及其严重性，可组方本发明的组合物并全身或局部给药。各种组方和给药的技术可在Remington’sPharmaceutical Sciences(雷明顿制药学)，18th ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990)中找到。
本文引用了多种参考文献、出版物和专利。在法律允许的范围内，这些参考文献、出版物和专利中的每一种均全部并入本文作为参考。
实施例
下列实施例意在说明本发明具体的优选实施方案，并且无意限制本发明提供的保护范围。下列实施例，尤其是实施例1-8，说明已合成了本文所述的化合物类型的代表性化合物。实施例9-17显示，在为人的功效和安全性而提出的可接受的初步模型的哺乳动物细胞中，用增加剂量的如实施例1中合成的式(I)化合物以及按照实施例1的方法，并且更具体地，如实施例2-5中合成的在本文中被指定为TTL1至TTL4的通式(IIB)化合物处理，在高至10μg/m1的浓度下，被处理的细胞与未处理的对照相比显示相似的存活率，这表明被评价化合物对TNF-α合成的抑制作用不是由直接毒性作用介导的。
用某些优选化合物进行的后续研究表明，TTL1与合成的式(I)化合物相比，在抑制TNF-α和IL-1合成中具有约高十(10)倍的活性。含有附加化学修饰的TTL3具有比TTL1高约100倍的活性。重要的是，注意到TTL1或TTL3与式(I)化合物类似，均不能显著抑制IL-6合成。
实施例1
式(I)和(111化合物的立体选择性合成
已完成了式(I)化合物的第一立体选择性合成。我们的合成计划从(-)Wieland-Miesher酮(107)开始，参见图18，并且使用Diels-Alder环加成反应构建101的C环。所述合成证实了所提出的101的立体化学，并代表有效地进入一类未研究过的生物活性二萜。
生长在大韩民国的落叶灌木——朝鲜五加的根皮传统上用作补剂、镇静剂并用作风湿病和糖尿病的药物。(Medicinal Plants of Eastand Southeast Asia(东亚和东南亚的药用植物)，Perry，L.M.；Metzger，J.Eds.；MIT Press，Cambridge，MA and London，1980)。在对该民间药物的药理学活性提取物的研究中，Chung及其同事已分离和结构表征了新颖的二萜，其随后被命名为五加酸(101)。((a)Kim，Y.-H.；Chung，B.S.；Sankawa，U.J.Nat.Prod.1988，51，1080-1083；(b)Kang，H.-S.；Kim，Y.-H.；Lee，C.-S.；Lee，J.-J.；Choi，I.；Pyun，K.-H.CellularImmunol.1996，170，212-221；(c)Kang，H.-S.；Song，H.K.；Lee，J.-J.；Pyun，K.-H.；Choi，I.Mediators Inflamm.1998，7，257-259)。
从生物合成的观点来看，101属于较大的海松二烯二萜家族，其最佳代表可以是海松酸(102)。(Ruzicka，L；Sternbach，L；J.Am.Chem.Soc.1948，70，2081-2085；Ireland，R.E.；Schiess，P.W.Tetrahedron Lett.1960，25，37-43；Wenkert，E.；Buckwalter，B.L.J.Am.Chem.Soc.1972，94，4367-4372；Wenkert，E.；Chamberlin，J.W.J.Am.Chem.Soc.1959，81，688-693)。式(I)化合物的结构不同之处在于刚性三环核的罕见连接，这可以解释其药理学谱。事实上，最近对该化合物的分离已允许对其生物活性进行研究并证实了其医药潜力。(Kang，H.-S.；Kim，Y.-H.；Lee，C.-S.；Lee，J.-J.；Choi，I.；Pyun，K.-H.Cellular Immunol.1996，170，212-221；Kang，H.-S.；Song，H.K.；Lee，J.-J.；Pyun，K.-H.；Choi，I.Mediators Inflamm.1998，7，257-259))。更具体地，发现五加酸具有有前途的抗炎和抗纤维化活性，该活性大概是通过抑制致炎细胞因子：肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)而产生的。参见Tumor Necrosis Factors.The Molecules and theirEmerging Role in Medicine(肿瘤坏死因子：分子及其在医药中的新兴作用)，B.Beutler，Ed.；Raven Press，N.Y.1992；Aggarwal，B.；Puri，R.Human Cytokines：Their Role in Disease and Therapy(人细胞因子：其在疾病和治疗中的作用)；B1ackwell Science，Inc.：U.S.A.，1995；Thorpe，R.；Mire-S1uis，A.Cytokines(细胞因子)；Academic Press：San Diego，1998；Kurzrock，R.；Talpaz，M.Cytokines：Interkeukins and TheirReceptors(细胞因子：白细胞介素及其受体)；K1uwer AcademicPublishers：U.S.A.，1995；Szekanecz，Z.；Kosh，A.E.；Kunkel，S.L.；Strieter，R.M.Clinical Pharmacol.1998，12，377-390；Camussi，G.；Lupin，E.Drugs 1998，55，613-620；Newton，R.C.；Decicco，C.P.J.Med.Chem.1999，42，2295-2314。
该抑制是浓度依赖的并且是细胞因子特异性的，这是由于在相同条件下，IL-6或IFN-γ(干扰素-γ)的产生不受影响。此外，发现五加酸在口服给药时具有活性，并在小鼠和大鼠中进行的实验中显示最小的毒性。
101所显示的罕见结构和有前途的药理学活性的组合促使我们扩展我们的合成研究，对于这个生物学重要的代谢物家族，参见Xiang，A.X.；Watson，D.A.；Ling.T.；Theodorakis，E.A.J.Org.Chem.1998，63，6774-6775；Ling，T.；Xiang，A.X.；Theodorakis，E.A.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1999，38，3089-3091。该实例提供了(-)五加酸和通式(II)化合物的立体选择性全合成，并且如实施例2-6所示，提供了通式(IIB)化合物全合成的基础。该实施例还证实了101的结构和绝对立体化学。
五加酸的逆合成策略示于图20。想象通过Diels-A1der环加成反应来构建101的C环，从而表明作为理想偶联伙伴的亲二烯体103和适当取代的二烯，如104。参见Oppolzer，W，Comprehensive Org.Synthesis(综合有机合成)，Trost，B.M.Ed.；Oxford，N.Y.；Pergamon Press，1991，315-399。该反应在C9-C11键处引入不饱和键并在C8和C13碳处引入期望的立体化学，允许式(II)化合物和通式(IIB)化合物的合成之间方便的分支点。可通过酮105的官能化生成二烯104，酮105的C4四价中心被设计为通过β-酮酯107的立体受控烷基化来形成。该分析建议使用(-)Wieland-Miesher酮107作为推定的起始原料。合成五加酸的这样的计划的应用被描述于图21和23，方案5和6。所有化合物显示满意的光谱和分析数据。
合成由光学纯的烯酮107开始，其通过D-脯氨酸介导的不对称Robinson成环反应可很容易得到(收率75％至80％，ee>95％)。参见Buchschacher，P.；Fuerst，A.；Gutzwiller，J.Org.Synth.Coll.Vol.VII1990，368-3372)。进行107的C9酮基团的选择性缩酮化，然后用氰基甲酸甲酯跨过烯酮官能团进行还原烷基化以50％的总收率得到酮酯106。参见Crabtree，S.R.；Mander，L.N.；Sethi，P.S.Org.Synth.1992，70，256-263。为了在C4位置引入期望的官能团，进行第二还原烷基化过程，参见Coates，R.M.；Shaw，J.E.J.Org.Chem.1970，35，2597-2601；Coates，R.M.；Shaw，J.E.J.Org.Chem.1970，35，2601-2605。化合物106首先转变为相应的甲氧基甲基醚108，使用锂的液氨溶液和碘甲烷对其进行处理，以58％的总收率得到单一非对映异构体酯110。参见Welch，S.C.；Hagan，C.P.Synthetic Comm.1973，3，29-32；Welch，S.C.；Hagan，C.P.；Kim，J.H.；Chu，P.S.J.Org.Chem.1977，42，2879-2887；Welch，S.C.；Hagan，C.P.；White，D.H.；Fleming，W.P.；Trotter，J.W.J.Amer.Chem.Soc.1977，99，549-556。该加成的立体选择性来自中间体烯醇化物109强烈地优选在更少位阻的平伏侧进行烷基化。
得到二环核之后，构建了C环。参见例如图21，通过异丁烯醛103和含硫的二烯104之间的Diels-Alder反应形成C环。104的合成由110的C9缩酮的酸催化脱保护开始，然后是将得到的酮105用乙烯基锂·乙二胺配合物进行烷基化。参见Das，J.；Dickinson，R.A.；Kakushima，M.；Kingston，G.M.；Reid，G.R.；Sato，Y.；Valenta，Z.Can.J.Chem.1984，62，1103-1111)。该次序给出炔111，其为C9处8:1的的非对映异构混合物(示出有利的异构体)，总收率为86％。在这一点上，评价了Diels-Alder反应的非对映面选择性，如使用非官能化的二烯如112的全部可能性。为此，将炔丙基醇111的非对映异构混合物部分还原(H2，Lindlar催化剂)并脱水(BF3·Et2O)，得到二烯112，收率为90％(Coisne，J.-M.；Pecher，J.；Declercq，J.-P.；Germain，G.；vanMeerssche，M.Bull.Soc.Chim.Belg.1980，89，551-557)。112和异丁烯醛(103)之间在干净条件和25℃下进行的Diels-Alder环加成以定量收率给出两种非对映异构醛的混合物，其在用硼氢化钠还原后分离。得到的醇114和115被转变成相应的对溴苯甲酸酯(分别为化合物116和117)，将其用二氯甲烷/乙醇进行重结晶得到适于X射线分析的晶体(图22)。
X射线分析的结果确定，三环体系在C4位置具有预期的立体化学并证实Diels-Alder反应以排他的内型取向进行。在与环戊二烯反应时异丁烯醛显示生成外型Diels-Alder产物：Kobuke，Y.；Fueno，T.；Furukawa，J.J.Am.Chem.Soc.1970，92，6548-6553。基于甲基基团所显示的空间排斥解释了这个令人惊奇的发现：Yoon，T.；Danishefsky，S.J.；de Gala，S.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1994，33，853-855)。第二，还原后，显示环加成的主要产物是醇114，其在C8中心具有期望的立体化学，因此说明二烯112强烈优选从α面(底侧进攻)进行与103的反应，例如参见图21。另外，这些数据说明五加酸的合成会要求引入的亲二烯体取向的反转。
如下文实施例2-8中所讨论的，合成了全新的通式(IIB)化合物，而不存在引入的亲二烯体的反转。适当取代的亲二烯体的选择基本允许通式(IIB)化合物的R11和R12基团无限制的选择。
式(I)化合物、其天然存在的类似物以及式(II)和(IIA)化合物的合成所要求的亲二烯体的反转是通过改变二烯端点的原子轨道系数而实现的，这支持在环加成过程中使用含杂原子的二烯，如104。通常参见Overman，L.E.；Petty，C.B.；Ban，T.；Huang，G.T.J.Am.Chem.Soc.1983，105，6335-6338；Trost，B.M.；Ippen，J.；Vladuchick，W.C.J.Am.Chem.Soc.1977，99，8116-8118；Cohen，T.；Kozarych，Z.J.Org.Chem.1982，47，4008-4010；Hopkins，P.B.；Fuchs，P.L.J.Org.Chem.1978，43，1208-1217；Petrzilka，M.；Grayson，J.I.Synthesis，1981，753-786)。二烯104的构建及其在101合成中的应用示于图23，方案6。
通过苯硫酚在炔111上进行自由基加成(Greengrass，C.W.；Hughman，J.A.；Parsons，P.J.J.Chem.Soc.Chem.Commun.1985，889-890)，然后将得到的烯丙基醇进行POCl3介导的脱水反应而生成化合物104(Trost，B.M.；Jungheim，L.N.J.Am.Chem.Soc.1980，102，7910-7925；Mehta，G.；Murthy，A.N.；Reddy，D.S.；Reddy，A.V.J.Am.Chem.Soc.1986，108，3443-3452)(2步收率70％)。有趣的是，也尝试了用BF3·Et2O进行该脱水反应，但在该情况下证明为无效。得到足够量的104后，我们使用103作为亲二烯体研究了Diels-Alder反应。检测了数种热催化的(-78℃至80℃)和路易斯酸催化的(BF3·Et2O、TiCl4、AlCl3和SnCl4)Diels-Alder条件。用SnCl4的二氯甲烷溶液，在-20℃下得到最佳的结果，并得到醛118，收率84％，其为4.2:1的非对映异构体混合物。为了简化产物表征并允许充分的分离，将该混合物用NaBH4还原并用Raney Ni还原脱硫。这样得到醇119和120，总收率91％。通过与103和112之间的反应中分离的产物进行对比，对这些化合物的结构进行了归属。用Dess-Martin过碘烷处理主要的非对映异构体120，然后通过Wittig亚甲基化在C13中心引入烯官能团并生成121，总收率86％。然后将C-19羧酸脱保护。将121在回流的DMF中与LiBr接触，通过酰氧基官能团的SN 2型取代得到五加酸101，收率93％。参见Bennet，C.R.；Cambie，R.C.Tetrahedron 1967，23，927-941。合成的101具有与天然产物所报道的相同的光谱和分析数据。
该实施例提供了化合物101的精确的立体选择性合成。该合成策略的突出之处在于进行了二烯104和异丁烯醛(103)之间的Diels-Alder反应，这在C13和C8碳中心处建立了立体化学。101的所述合成需要14步(由烯酮107开始)并以约9％的总收率进行。我们的策略的总效率和通用性建立了制备所设计的具有改善的药理学特征的类似物的基础。
实施例2-8
通式(IIB)化合物的立体选择性合成
实施例1中的并在图23，方案6中所述的操作要点可被修改或删减以得到通式(II)或通式(IIB)化合物。
实施例2
按照如图21所述的实施例1的操作合成本文指定为TTL4的化合物，以得到本文指定为TTL4的化合物114。
实施例3
按照如图21所述的实施例1的操作合成本文指定为TTL2的化合物，以得到化合物114。与图23，步骤(h)中所述的反应类似，然后将化合物114与3.0当量的LiBr的DMF溶液于160℃下反应约3小时，以得到约93％的本文指定为TTL2的化合物。
实施例4
按照如图14所述的操作合成本文指定为TTL3的化合物，以得到化合物13。该化合物在本文中被指定为TTL3。
实施例5
按照如图14所述的操作合成本文指定为TTL1的化合物，以得到化合物13。该化合物在本文中被指定为TTL1。
实施例6
按照实施例1所述的操作，除了亲二烯体选自通式(III)化合物之一，其中如本实施例中，R15是氢并且R9和R15分别选自C1-C6烷基和C1-C6取代烷基，合成了通式(IIB)化合物，其中R15是氢并且R9和R15分别选自C1-C6烷基和C1-C6取代烷基。
实施例7
具体地，按照实施例1所述的操作，除了亲二烯体选自通式(III)化合物之一，其中如本实施例中，R14是氢并且R9和R15分别选自C1-C6烷基和C1-C6取代烷基，合成了通式(IIB)化合物，其中R14是氢并且R9和R15分别选自C1-C6烷基和C1-C6取代烷基。
实施例8
按照实施例1所述的操作，除了亲二烯体选自通式(III)化合物之一，其中如本实施例中，R14是氢并且R9和R15分别选自C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇和C5-C6芳基，合成了通式(IIB)化合物，其中R14是氢并且R9和R15分别选自C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇和C5-C6芳基。
实施例9-17
材料和方法
在用多种试剂如脂多糖(LPS)或革兰氏阳性试剂如热杀灭的金黄色葡萄球菌(Staph aureus)(SAC)进行刺激之前，将鼠巨噬细胞RAW264.7(1×106/ml)用不同剂量的合成的式(I)化合物和类似物组(在0.5％DMSO中稀释)预处理30至60分钟。通过酶联免疫吸附试验或生物测定来测定72小时内收集的上清液的TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10、IL-12及其它细胞因子的水平。还进行了其它研究以评价合成通式(I)、(II)、(IIA)和(IIB)化合物对细胞因子信号途径例如半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)活性(Nr-1、Nr.3)，转录因子如NF-κB、MAP-激酶活性(p38、ERK和JNK)的影响。
结果
临床前研究表明，用增加剂量的合成的通式(I)和(IIB)化合物，尤其是在本文中被指定为TTL1和TTL3的化合物处理的鼠RAW 264.7细胞，在高至10μg/ml的浓度下，与未处理的对照相比显示相似的存活率，这表明合成的通式(I)和(IIB)化合物对TNF-α合成的抑制作用不是由直接的毒性作用介导的。
用根据实施例1合成的式(I)化合物TTL1(根据实施例2合成的)和TTL3(根据实施例4合成的)进行的后续研究表明，TTL1与根据实施例1合成的式(I)化合物相比，在抑制TNF-α和IL-1合成中显示约高10倍的活性。根据实施例4合成的TTL3含有额外的化学修饰，其显示比根据实施例2合成的TTL1高约100倍的活性。注意到，与根据实施例1合成的式(I)化合物类似，类似物TTL1或TTL3均不能显著抑制IL-6合成。与根据实施例1合成的式(I)化合物相比，TTL1在抑制TNF-α和IL-1的合成中显示高十(10)倍的活性。
含有额外化学修饰的TTL3显示比TTL1高约100倍的活性。再次重要的是，注意到，与根据实施例1合成的式(I)化合物类似，TTL1或TTL3均不能显著抑制IL-6合成。
实施例18
化合物的合成在与R6共价结合的环位置具有可供选择的立体结构。通过(a)在三酮2到烯酮3的Robinson成环反应中使用L-脯氨酸代替D-脯氨酸和/或(b)纯化通过二烯104和异丁烯醛(103)之间的Diels-Alder反应生成的C14位置的立体异构体，制备和分离了本文中被指定为TTL1-TTL5的化合物的多种非对映异构体。这两个手性中心处的立体结构的选择允许选择并分离与本文所述的每一TNF-α调节剂对应的四种不同的非对映异构体。
更具体地，通过如下对图14中所述的操作进行修改，合成在环位置与R6基团共价结合的对映异构体：在三酮2到烯酮3的Robinson成环反应中用(L)-脯氨酸代替(D)-脯氨酸。这样，使用L-脯氨酸的环化反应得到烯酮3的(+)对映异构体。使用与所示相同的反应和条件，另外进行图14的反应。得到的产物是TTL3的(+)对映异构体。
类似地，如上文指出的，根据亲二烯体的取向，二烯104和异丁烯醛(103)之间的Diels-Alder反应在C13和C8碳中心建立立体化学，或在C14和C8碳中心建立立体化学。因此，本文公开的方法允许合成和纯化并因此使用至少下列化合物的非对映异构体：
和
Figure A200680034568D01931
其中R1-R15如前文所定义，并且在与R6直接共价结合的环位置以及在指定为C14的环位置(在前一结构中与R14和R15直接共价结合并在后一结构中与R9直接共价结合)的手性可分别选自(-)或(+)，或者可代表对映异构体的外消旋混合物。如那些本文所使用的术语，这些结构应被理解为在通式(II)和(IIB)结构的含义内。
合成路线和分离路线的实例，以及某些公开的非对映异构体示于图24、25、26、27、28和29。
实施例19-21
完成基于鼠巨噬细胞和人巨噬细胞的测定以检测如实施例19所述生成和分离的化合物TTL3的立体异构体的活性。
实施例19
人巨噬细胞细胞系THP-1的LPS刺激。在完全RPMI-1640培养基(CRPMI；含有10％热灭活的胎牛血清、2mM L-谷氨酸、10mMHepes、1mM丙酮酸钠、4.5g/L葡萄糖、1.5gL碳酸氢盐和0.05mM2-巯基乙醇)中于1000rpm下将人单核THP-1细胞洗涤5分钟并计数。为了诱导成熟，将THP-1细胞以1×106细胞/ml的浓度接种在24或96孔板(Costar)中并用5nM佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸酯(PMA)预处理3天。3天后，将CRPMI弃去，并加入新的培养基。将脂多糖(LPS，大肠杆菌血清型0111:B4或055:B5)在磷酸缓冲的盐水中稀释成1mg/ml储液并在-80℃下保存。使用前，将LPS解冻并旋转振荡30分钟。为了评价TTL3的不同亚型(包括对映异构体、类似物、非对映异构体)对LPS诱导的TNF-α产生的影响，将细胞用化合物处理1小时，然后与2μg的LPS孵育5小时。使用p38激酶抑制剂SB203580(Sigma)作为阳性对照。
实施例20
鼠巨噬细胞细胞系RAW-264.7的LPS刺激 将RAW264.7细胞以1×105细胞/孔接种在24孔板中，并允许其在37℃下附着并扩散过夜。第二天，用新鲜的培养基(1ml/孔)代替培养基，并在用抑制剂预处理之前允许将细胞孵育15至20分钟。被测的抑制剂包括TTL3对映异构体峰A和B以及p38 MAP激酶的对照抑制剂SB203580。在硼硅酸盐玻璃小瓶中，在100％ DMSO中制备每一抑制剂的200×储液，并且在每一孔中加入5μl的该溶液并立即混合。单独的DMSO(培养基中0.5％ DMSO)用作载体对照。在37℃下，用10pg/ml至10ug/ml的最终浓度范围内的抑制剂将细胞预处理1小时。制备了培养基中LPS的100×储液并以1ug/ml的最终浓度加入到细胞中。将细胞刺激12至24小时，然后收集上清液并用ELISA(Biosource)测定TNF-α。
实施例21
人TNF-α ELISA方法的实施例。收集上清液并在-80℃下保存直至在特定的TNF-α ELISA中检测。在4℃下，用100μL/孔的TNF-α捕获抗体以5μg/ml包被ELISA板20小时。用洗涤缓冲液洗涤板2次并通过在室温下加入300μL/孔的封闭溶液进行封闭2小时。将板洗涤4次并用标准物和以100μL/孔加入的样品重建。同时，加入50μL/孔的生物素化的抗体(4μg/mL)并在室温下连续振荡(700rpm)孵育2小时。将板洗涤4次并在室温下加入链霉抗生物素-HRP工作溶液30分钟。加入100μL/孔的TMB 30分钟并且通过加入50μL/孔的1.8NH2SO4终止反应。
实施例19-21还表明TTL3的A和B对映异构体令人惊奇的抑制TNF-α合成的能力。在上述实施例19-21的测定中，对于这些立体异构体抑制TNF-α合成的能力未观察到显著的不同。
实施例22
TTL3类似物的合成策略
A.策略1
按照如图30所述的策略合成了本文指定为CC-3-02、CC-3-09、TTL-1、LT-1-73、LT-1-73、LT-1-78、LT-1-85和LT-1-74的化合物。
B.策略2
按照如图31所述的策略合成了本文指定为CC-3-02、LT-1-46、CC-3-19、CC-3-17和CC-3-18的化合物。
C.策略3
按照如图32所述的策略合成了本文指定为CC-3-02、CC-3-09、CC-3-14、C-3-13、CC-3-13P、CC-3-15和CC-3-14x的化合物。
实施例23
TTL3类似物的合成方案
TTL3类似物的合成如图33-37所示，并如下文进一步详细描述：
化合物1(TTL3)：无色油状物；Rf＝0.75(硅胶，25％的醚的己烷溶液)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 5.96(dd，1H，J＝16.8，11.6Hz)，5.50(m，1H)，4.98(m，2H)，3.62(s，3H)，2.20-2.11(m，1H)，2.10-1.91(m，4H)，1.90-1.70(m，4H)，1.69-1.51(m，3H)，1.50-1.38(m，3H)，1.36-1.24(m，1H)，1.17(s，3H)，1.04(s，3H)，0.90(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 177.9，149.1，143.8，117.9，111.7，51.2，47.7，44.4，41.4，41.2，38.9，38.3，37.7，34.8，30.4，28.4，24.8，23.1，22.3，22.2，20.6，19.8。
化合物2：在-78℃下将充分搅拌的酯1(480mg，1.50mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液用DIBAL(6.0mmol，6.0ml，1M in CH2Cl2)处理。搅拌30分钟后，将全部反应混合物加温至室温，再搅拌2小时。加入甲醇(5ml)以淬灭反应混合物，并将全部反应混合物用醚(30ml)和罗谢尔盐(20ml，1N水溶液)稀释。在室温下再剧烈搅拌2小时后，将有机层用醚(3×40ml)萃取并浓缩。将棕色残余物通过硅胶快速层析纯化，使用20％的醚的己烷溶液作为洗脱剂，得到期望的产物2(372mg，86％)。白色固体，[α]D＝+70(c＝1，苯)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.95(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.46(m，1H)，4.98(t，J＝8HZ，2H)，3.82(d，J＝12Hz，1H)，3.52(d，J＝12Hz，1H)，2.07-1.57(m，6H)，1.51-1.42(m，5H)，1.27-1.23(m，6H)，1.05(s，3H)，1.02(s，3H)，0.95(s，3H)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ 150.39，142.47，117.05，112.34，64.85，45.74，42.11，41.10，38.46，37.46，35.36，29.78，26.32，26.02，24.95，23.36，19.14，18.49；对于C20H32O，HRMS的计算值为288.24；测量值为288(GC-MS)。
化合物3：向充分搅拌的醇2(360mg，1.23mmol)的CH2Cl2溶液中分批加入Dess-Martin试剂(483mg，1.61mmol)并将混合物在室温下搅拌3小时直至TLC显示起始原料完全消耗。将全部反应混合物用CH2Cl2(3×50ml)萃取，用NaHCO3洗涤并浓缩。将棕色残余物通过硅胶柱色谱纯化，使用15％的醚的己烷溶液(v/v)作为洗脱剂，得到期望的产物3(266mg，74％)。3：白色固体。[α]D＝-142.2(c＝1，苯)。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 9.94(s，1H)，5.94(dd，J＝11.6Hz，J＝12Hz，1H)，5.53(m，1H)，4.96(t，J＝8Hz，2H)，2.10-2.03(m，4H)，1.95-1.86(m，3H)，1.71-1.42(m，7H)，1.28-1.23(m，2H)，1.07(s，3H)，1.02(s，3H)，0.96(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 206.39，148.13，142.42，118.10，112.39，48.22，46.55，41.80，40.67，37.70，36.70，35.05，24.96，24.47，23.92，23.27，20.54，19.64，18.47。对于C20H30O，HRMS计算值为309.21(M+Na)+，测量值为309(ESI质谱)。
乙酯4：于0℃下向充分搅拌的NaH(67mg，0.43mmol)的THF(20ml)溶液中加入膦酰乙酸三乙酯(500mg，0.60mmol)。将反应混合物升至室温，保持4小时并用醛3(76mg，0.27mmol)的溶液(THF，10ml)处理，然后将反应混合物加热回流16小时。用水淬灭后，将有机层用醚(2×60ml)萃取。将醚萃取物浓缩并用硅胶纯化(5％醚/己烷，v/v)，得到期望的酯4(68mg，70％)。4：油状物(Rf＝0.4，10％醚/己烷，v/v)，1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 7.34(d，J＝16Hz，1H)，5.90(dd，J＝11.6Hz，J＝12Hz，1H)，5.76(d，J＝16Hz，1H)，5.48(m，1H)，4.97(m，2H)，4.18(q，J＝8Hz，2H)，2.09-1.74(m，6H)，1.66-1.42(m，8H)，1.30-1.17(m，5H)，1.06(s，3H)，0.98(s，3H)，0.95(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 167.10，154.47，149.15，142.41，118.13，117.43，112.33，60.18，46.75，42.38，41.07，39.93，38.66，37.74，37.03，29.67，25.04，24.81，23.35，20.19，19.11，14.45；对于C24H36O2，HRMS计算值为356.54，测量值为356.54。
甲酯5：向充分搅拌的酯4(60mg，0.168mmol)的甲醇(10ml)溶液中加入镁粉(50mg，6.25mmol)，并且将全部反应混合物在室温下搅拌12小时。向反应混合物中加入HCl(10ml，2M)以溶解剩余的镁。将反应混合物减压浓缩并用醚(2×50ml)萃取并将有机层浓缩。将期望的产物5通过柱色谱纯化，使用10％醚/己烷(v/v)作为洗脱剂。5：油状物(50mg，收率87％)；1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.95(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.45(m，1H)，4.98(m，2H)，3.66(s，3H)，3.26-1.87(m，7H)，1.69-1.51(m，11H)，1.24-1.19(m，2H)，1.09(s，3H)，1.04(s，3H)，0.93(s，3H)；对于C23H36O2，HRMS计算值为344.56；测定值为344.56。
酸6：将酯5(50mg，0.14mmol)溶于THF/H2O(v/v，1:1，4ml)的混合溶液中，并加入LiOH(30mg)。搅拌30分钟后将反应混合物加热回流12小时。将反应混合物用水稀释，用HCl溶液(3N)酸化并用醚(2×50ml)萃取。使用50％醚/己烷(v/v)，将期望的产物6通过硅胶柱色谱进行纯化。6：白色固体(34mg，71％)；1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.95(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.46(m，1H)，5.00-4.95(m，2H)，2.27-2.17(m，3H)，2.09-1.88(m，10H)，1.69-1.37(m，7H)，1.24-1.18(m，1H)，1.09(s，3H)，1.04(s，3H)，0.83(s，3H)；1C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 178.62，152.06，143.69，118.13，113.52，67.09，48.16，43.67，42.52，39.42，38.38，36.98，31.02，30.45，29.48，28.43，27.33，26.26，24.64，21.17，20.41，19.86，16.62；对于C22H34O2，HRMS计算值为329.24(M-H)+，测量值为329.20。
不饱和酸7：于室温下向甲酯4(60mg，0.17mmol)的THF/H2O(1:1，v/v，8ml)溶液中加入LiOH(40mg，过量)。搅拌30分钟后，将反应混合物回流12小时。将反应混合物用水稀释并用HCl溶液(3N，40ml)酸化并用醚(2×50ml)萃取。使用醚/己烷(1:1，v/v)，将期望的产物通过硅胶柱色谱进行纯化。7：白色固体(42mg，76％)，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ 7.45(d，J＝16Hz，1H)，5.94(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.76(d，J＝16Hz，1H)，5.48(m，1H)，5.00-4.95(m，2H)，2.15-1.74(m，5H)，1.64-1.50(m，7H)，1.47-1.42(m，5H)，1.06(s，3H)，0.99(s，3H)，0.95(s，3H)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ 171.03，157.41，149.02，142.37，117.55，117.20，112.37，46.82，42.36，41.01，40.18，38.50，38.21，37.75，37.01，29.82，25.04，24.75，23.35，20.18，19.11；对于C22H32O2，HRMS计算值为351(M+Na)+，测量值为351(ESI质谱)。
乙烯基醚8：将甲氧基甲基三苯基氯化鳞在THF(476.1mg，1.39mmol)中搅拌并用4.8当量的叔丁醇钾处理，然后加入醛3(80mg，0.28mmol)。反应在30分钟内完成。将反应混合物浓缩后，将残余物再次溶于乙醚并用NaCl溶液萃取。用色谱柱纯化后，得到87mg的产物(收率99％)。
醛9：向充分搅拌的化合物8(50mg，0.159mmol)的丙酮(10ml)溶液中加入对甲苯磺酸(50mg，0.26mmol)并将反应在室温下搅拌2小时。TLC显示完全形成期望的产物。除去溶剂并将反应混合物用醚(3×40ml)萃取并用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤。将粗产物通过柱色谱纯化，使用4％醚/己烷作为洗脱剂。9：油状物(88％)，[α]D＝+4.4(c＝1，苯)，1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.94(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.48(m，1H)，5.01-4.96(m，2H)，2.55(d，J＝12Hz，1H)，2.37(d，J＝12Hz，1H)，2.09-1.93(m，3H)，1.76-1.71(m，2H)，1.63-1.13(m，12H)，1.09(s，3H)，1.07(s，3H)，1.06(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 204.26，150.23，142.24，117.26，112.46，47.22，42.43，40.81，39.02，38.08，37.03，29.06，25.59，25.00，23.39，19.90，19.07；对于C21H32O，HRMS计算值为323.25，测量值为323.23。
酸10：向17mg醛10(0.056mmol)的tBuOH/H2O(3:1)溶液中加入23.3mg的NaH2PO4.H2O(0.17mmol)并将反应混合物搅拌至盐全部溶解，然后加入84.5μl的2M1-甲基-2-丁烯的THF溶液。将反应搅拌30分钟，然后用15.3mg的NaClO2(0.17mmol)处理。当反应完成时，用NH4Cl中和。通过用CH2Cl2萃取而收集产物并将其通过色谱柱纯化，得到17.0mg的酸10(96％)。10：1H-NMR(CDC13，300MHz)δ6.00-5.90(m，1H)，5.48(d，J＝3Hz，1H)，5.02-4.95(m，2H)，2.58(d，J＝12.6Hz，1H)，2.30(d，J＝12.6Hz，1H)，1.25(s，3H)，1.07(s，3H)，1.02(s，3H)。
酸12：向充分搅拌的醇2(70mg，0.24mmol)的DCM(8ml)溶液中加入DMAP(5mg，催化剂)和琥珀酸酐(30mg，0.28mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌8小时。将反应混合物用DCM(2×40ml)萃取并用水(30ml)洗涤。使用12％至16％的醚的己烷溶液，将期望的产物通过硅胶柱色谱纯化，得到酸12。12：固体(73mg，78％)。IR(无溶剂)3312，2920，1732，1708cm-1；1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.95(dd，J＝11.2Hz，12Hz，1H)，5.48(m，1H)，5.0-4.96(m，2H)，4.34(d，J＝12Hz，1H)，4.03(d，J＝12Hz，1H)，2.70-2.61(m，4H)，2.09-1.91(m，4H)，1.80-1.39(m，10H)，1.25-1.08(m，6H)，1.05(s，3H)，0.91(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 177.32，172.02，150.09，142.32，117.24，112.41，67.12，45.88，42.19，40.99，37.97，37.21，36.11，29.80，29.01，26.77，25.97，25，00，23.39，19.94，19.10，18.78；对于C24H36O4，HRMS计算值为411.25(M+Na)+，测量值为411.25。
酸11：使用上述对酸12的操作制备该化合物。在这样的情况下，使用马来酸酐代替琥珀酸酐。11：(68mg，71％)；1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ 6.01(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.46(brd，1H)，5.09-4.95(m，2H)，4.36(d，J＝8Hz，1H)，4.02(d，J＝8Hz，1H)，2.48-2.36(m，3H)，2.16-1.92(m，5H)，1.86-1.38(m，9H)，1.35-1.11(m，10H)，0.98-0.81(m，5H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 173.96，169.08，146.28，138.46，113.29，108.44，93.15，88.18，62.60，41.65，37.95，36.75，33.71，32.93，29.11，28.66，25.54，25.46，25.43，22.54，20.69，19.06，15.61，14.45；对于C25H38O4，HRMS计算值为425.26，测量值为425.26。
酯13：向充分搅拌的醇2(22mg，0.079mmol)和12(24mg，0.0617mmol)的DCM(10ml)溶液中加入DCC(17mg，0.080mmol)和DMAP(5mg，催化剂)并将反应混合物在室温下搅拌12小时。将混合物用DCM(20×2ml)萃取并用水(15ml)洗涤。将期望的产物通过硅胶柱分离。13：固体(30mg，70％)；1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.95(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，2H)，5.48(m，2H)，5.00-4.95(m，4H)，4.32(d，J＝12Hz，2H)，4.03(d，J＝12Hz，2H)，2.62(s，4H)，2.05-1.70(m，6H)，1.76-1.70(m，3H)，1.56-1.42(m，23H)，1.20(s，6H)，0.98(s，6H)，0.93(s，6H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 172.18，150.10，142.32，117.23，112.41，66.95，45.87，42.18，40.99，37.97，37.19，36.13，29.40，26.82，25.98，25.00，23.39，19.95，19.13，18.77；对于C44H66O4，HRMS计算值为681.48(M+Na)+，测量值为681.48。
氯乙酰基衍生物14：于0℃下向充分搅拌的醇2(40mg，0.1389mmol)和DMAP(10mg，cat.)的DCM(10ml)溶液中加入氯乙酰氯(23mg，0.20mmol)。将反应混合物在室温下再搅拌2小时然后用水淬灭，并用醚(2×40ml)萃取。将合并的醚层浓缩并通过柱色谱纯化。用8％醚/己烷洗脱期望的产物。14：固体(39mg，82％)。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.93(dd，J＝11.2Hz，J＝13Hz，1H)，5.48(brd，1H)，5.01-4.96(m，2H)，4.43(d，J＝8Hz，1H)，4.13(d，J＝8Hz，1H)，4.06(s，2H)，2.09-1.96(m，3H)，1.92-1.71(m，2H)，1.65-1.42(m，14H)，1.22(s，3H)，1.14(s，3H)0.97(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 167.28，149.96，142.26，117.37，112.47，68.58，45.91，42.19，41.06，40.93，37.95，37.70，37.37，36.04，29.80，26.69，25.95，25.01，23.39，19.94，19.09，18.82。
吗啉衍生物15：向充分搅拌的氯乙酰基衍生物14(24mg，0.066mmol)的DCM溶液中加入吗啉(15mg，0.17mmol)。将反应混合物加热回流12小时并将反应混合物用DCM(2×30ml)萃取并用水(15ml)洗涤。将期望的产物酮进行硅胶柱色谱纯化。15：油状物(20mg，71％)；1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.94(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.47(m，1H)，5.00-4.95(m，2H)，4.36(d，J＝12Hz，1H)，4.05(d，J＝12Hz，1H)，3.75-3.73(m，4H)，3.20(s，2H)，2.58-2.56(m，4H)，2.08-1.42(m，16H)，1.24(s，3H)，1.05(s，3H)，0.92(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 170.15，150.02，142.27，117.28，112.43，81.54，66.82，59.62，53.32，52.0，45.87，42.17，37.96，37.67，37.18，29.78，26.89，25.95，24.99，19.93，19.10.，18.79；对于C26H41NO3，HRMS计算值为416.31(M+H)+，测量值为416.31。
哌嗪衍生物16：按照上述操作，使用哌嗪代替吗啉制备化合物16。16：油状物(77％)，1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.93(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.48(brd，1H)，5.00-4.95(m.2H)，4.37(d，J＝10Hz，1H)，4.05(d，J＝10Hz，1H)，3.20(s，2H)，2.63(brd，2H)，2.60-2.57(m，5H)，2.4-2.2(brd，3H)，2.08-1.94(m，5H)，1.71-1.42(m，10H)，1.20(s，3H)，1.05(s，3H)，0.87(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 170.90，150.28，117.21，112.39，66.71，59.78，53.75，53.47，51.58，51.25，45.84，42.15，40.94，37.93，37.66，37.17，36.16，29.78，26.88，25.95，24.96，23.25，19.92，19.10，18.76；对于C26H42N2O2，HRMS计算值为415.33(M+H)+，测量值为415.33。
化合物17：向充分搅拌的产物16(30mg，0.072mmol)的DCM溶液中，加入三乙胺(0.4ml)和甲苯磺酰氯(19mg，0.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15小时然后用水淬灭并用二氯甲烷(3×30ml)萃取。将期望的产物在硅胶上纯化，使用25％至30％醚/己烷作为洗脱剂。17：白色固体(40mg，69％)；1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 7.62(d，J＝8Hz，2H)，7.31(d，J＝8Hz，2H)，5.92(dd，J＝11.2Hz，12Hz，1H)，5.47(m，1H)，5.0-4.95(m，2H)，4.36(d，J＝12Hz，1H)，4.03(d，J＝12Hz，1H)，3.24(brd，1H)，3.08(brd，4H)，2.72(brd，3H)，2.44(s，3H)，2.42-1.90(m，4H)，1.63-1.40(m，10H)，1.24-1.05(m，4H)，1.05(s，3H)，1.03(s，3H)，0.89(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 194.25，149.93，142.28，131.92，129.56，127.72，117.32，112.45，55.87，51.90，45.50，42.15，40.89，37.93，37.68，36.15，29.80，26.85，25.94，24.98，23.37，19.92，19.08，18.79。对于C33H48N2O4S，HRMS计算值为591.32，测量值为591.32。
酯18：将醇2(20mg，0.069mmol)和4-甲基吗啉(20mg，0.173mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液冷却至0℃并用丙酸乙酯(10mg，0.10mmol)处理。将全部反应混合物搅拌过夜。向反应混合物中加入水(25ml)并用二氯甲烷(2×30ml)萃取。将有机萃取物合并并浓缩。最后将期望的产物酮硅胶色谱纯化，使用20％醚/己烷(v/v)作为洗脱剂。油状物(18mg，64％)，1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 7.61(d，J＝12Hz，1H)，5.93(dd，J＝11.2Hz，J＝13Hz，1H)，5.48(brd，1H)，5.16(d，J＝13Hz，1H)，5.02-4.96(m，2H)，4.13(q，J＝8Hz，2H)，3.99(d，J＝8Hz，1H)，3.69(d，J＝8Hz，1H)，2.09-1.78(m，6H)，1.62-1.40(m，15H)，1.06(s，3H)，1.04(s，3H)，0.97(s，3H)；1C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 167.80，163.03，149.96，142.25，117.39，112.46，95.71，73.70，59.72，45.76，42.15，40.90，37.94，37.60，35.87，26.70，25.96，24.98，23.37，19.93，19.09，18.79，14.52。
乙酸酯19：将8.7mg的醇2溶于0.5ml CH2Cl2，并用5当量的吡啶和2.5当量的乙酸酐处理。将反应在室温下搅拌2小时然后用NaHCO3/H2O淬灭，并用醚萃取。色谱柱分离后，得到8.3mg的醇产物19(84％)。19：1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.95(q，J＝11.6Hz，1H)，5.48(d，J＝4.4Hz，1H)，5.01-4.96(m，2H)，4.29(d，J＝11.2Hz，1H)，4.01(d，J＝10.8Hz，1H)，2.05(s，3H)，1.25(s，3H)，1.06(s，3H)，0.94(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 18.77，19.14，19.95，21.17，23.39，25.00，25.99，26.83，29.81，36.14，37.11，37.22，37.70，41.01，42.20，45.86，66.67，112.42，117.23，142.36，150.15，171.22。
胺20：在室温下将醛3(40mg，0.14mmol)的干燥MeOH(12ml)溶液用乙二胺(0.4ml，3.36mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌4小时直至TLC确认起始原料消失。然后将混合物冷却至0℃并分批加入NaBH4(11mg，0.28mmol)。将反应混合物再次搅拌过夜然后用饱和氯化铵溶液(25ml)淬灭。用二氯甲烷(2×35ml)萃取。将期望的产物通过硅胶柱色谱纯化。20：油状物(42mg，90％)；IR(无溶剂)3382，2924cm-1；1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.95(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.45(brd，1H)，5.00-4.95(m，2H)，2.78-2.75(m，3H)，2.66-2.63(m，2H)，2.47(d，J＝11.6Hz，1H)，2.10-1.83(m，6H)，1.63-1.44(m，10H)，1.42(s，3H)，1.05(s，3H)，0.85(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 150.69，142.47，116.85，112.24，53.38，51.68，46.35，42.24，41.31，38.14，37.34，37.24，36.54，30.38，27.64，26.18，24.98，23.38，20.00，19.33，18.54；对于C22H38N2，HRMS计算值为331.31(M+H)+，测量值为331.31。
胺21：按照上述胺19的相同操作，使用醛9作为起始原料，合成胺21。21：1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.98(dd，J＝11.2Hz，J＝12Hz，1H)，5.45(brd，1H)，5.00-4.95(m，2H)，2.94(brd，1H)，2.80(brd，1H)，2.82-2.79(m，2H)，2.60-2.35(brd，4H)，2.09-1.90(m，6H)，1.67-1.42(m，7H)，1.24-1.17(m，5H)，1.24(s，3H)，1.10(s，3H)，0.85(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 150.82，142.46，125，38，116.89，112.31，51.47，47.14，45.82，42.46，41.28，38.23，37.73，37.28，35.65，31.22，30.41，28.63，26.11，25.03，23.43，19.99，19.36，18.76；对于C23H40N2，HRMS计算值为344.55，测量值为344.31。
化合物22：将150mg的酯1(0.475mmol)和173mg的LiBr溶于DMF并在165℃下加热2天。将反应用H2O淬灭并将产物用乙醚萃取并使用色谱柱纯化。反应得到74.6mg白色结晶产物22(52％)。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.60(q，J＝10.4Hz，1H)，4.98(dd，J＝8.4Hz，1H)，4.76(dd，J＝15.2Hz，1H)，1.26(s，3H)，1.05(s，3H)，0.93(s，3H)；αD＝-144.06。
化合物23：将10mg的化合物22(0.33mmol)溶于2.5ml的甲醇，并用2.5ml的(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷和2.5ml的苯处理。将反应在室温下搅拌20分钟，然后加入H2O，并用醚萃取。将混合物用硅胶柱纯化，得到8.2mg的化合物23。23：白色固体(收率82％)。1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.61(q，J＝10.2Hz，1H)，4.97(dd，J＝8.7Hz，1H)，4.76(dd，J＝15.3Hz，1H)，3.63(s，3H)，1.19(s，3H)，1.05(s，3H)，0.82(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 19.22，20.22，20.93，22.20，26.29，27.44，29.73，30.00，37.76，38.86，39.00，40.25，42.56，45.13，52.42，54.81，113.80，131.17，140.28，147.83，179.27；αD＝-121.6。
化合物24：将7.8mg的酯23(0.025mmol)溶于干燥的CH2Cl2并在-78℃下用4.0当量DIBALH处理10分钟。将用罗谢尔盐溶液淬灭并将产物通过用醚萃取而收集并通过色谱柱纯化。24：(6.5mg，收率94％)。1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.62(q，J＝10.5Hz，1H)，4.96(dd，J＝8.4Hz，1H)，4.75(dd，J＝15.3Hz，1H)，3.78(d，J＝10.8Hz，1H)，3.48(d，J＝10.8Hz，1H)，1.25(s，3H)，1.04(s，3H)，0.99(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 14.15，14.37，14.75，16.09，20.27，21.57，22.09，23.75，30.75，31.70，32.97，33.77，34.03，36.48，61.10，107.97，124.66，135.63，142.29；αD＝-53.8。
化合物25：将53.2mg的醛3(0.19mmol)溶于tBuOH/H2O(3:1)，并用76.45mg的NaH2PO4·H2O(0.56mmol)处理。将反应混合物搅拌以将盐完全溶解，然后加入277.5μl的2M 1-甲基-2-丁烯的THF溶液。将反应搅拌30分钟，然后用50.2mg的NaClO2(0.56mmol)处理。当反应完成时，将其用NH4Cl中和。通过用CH2Cl2萃取而收集产物并将其通过色谱柱纯化以生成44mg的化合物25(78％)。25：白色固体；Rf＝0.30(硅胶，30％醚/己烷)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 5.96(dd，1H，J＝14.4，9.6Hz)，5.52(m，1H)，4.98-4.95(m，2H)，2.20-1.72(m，10H)，1.64-1.58(m，3H)，1.57-1.37(m，4H)，1.22(s，3H)，1.04(s，3H)，0.99(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ 182.9，149.3，143.9，118.1，111.9，47.5，44.2，41.3，41.2，38.9，38.0，37.6，34.8，28.4，24.7，23.0，22.4，21.9，20.3，19.5。
化合物26.将3.5mg的酸25(0.012mmol)溶于干燥的CH2Cl2并用10当量的(COCl)2处理，然后用两滴DMF处理。当反应停止鼓泡时，真空蒸发CH2Cl2溶剂和过量的(COCl)2并将反应残余物再次溶解在干燥的苯中，然后用5当量的N-甲基哌嗪处理。当反应完成时，真空蒸发溶剂，并通过用醚和NH4Cl溶液萃取而收集产物。用色谱柱分离后，得到3.0mg的纯产物26(收率65％)。26：1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.95(q，J＝11.6Hz，1H)，5.46(d，J＝2.4Hz，1H)，5.00-4.94(m，2H)，3.73-3.68(m，4H)，2.48(s，3H)，2.10-2.03(m，4H)，1.25(s，3H)，1.09(s，3H)，1.03(s，3H)；αD＝+8.6。
化合物27.将10mg的酸25(0.033mmol)溶于干燥的CH2Cl2并用10当量的(COCl)2处理，然后用两滴DMF处理。当反应停止鼓泡时，真空蒸发CH2Cl2溶剂和过量的(COCl)2并将反应残余物再次溶解在干燥的苯中，然后用5当量的二乙醇胺处理。当反应完成时，真空蒸发溶剂，并通过用醚和NH4Cl溶液萃取而收集产物。用色谱柱分离后，得到9.2mg的纯产物(收率75％)。1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ 5.95(q，J＝11.6Hz，1H)，5.46(s，1H)，4.96(m，2H)，2.99(s，7H)，2.37(d，1H)，1.29(s，3H)，1.09(s，3H)，1.02(s，3H)；αD＝-41.2。
胺28：将5.0mg的酸25(0.017mmol)溶于干燥的CH2Cl2并用10当量的(COCl)2处理，然后用两滴DMF处理。当反应停止鼓泡时，真空蒸发CH2Cl2溶剂和过量的(COCl)2并将反应残余物再次溶解在干燥的苯中，然后用5当量的乙二胺处理。当反应完成时，真空蒸发溶剂，并通过用醚和NH4Cl溶液萃取而收集产物。用色谱柱分离后，得到3.0mg的纯产物(收率52％)。
化合物29.将5.0mg的酸25(0.017mmol)溶于干燥的CH2Cl2并用10当量的(COCl)2处理，然后用两滴DMF处理。当反应停止鼓泡时，真空蒸发CH2Cl2溶剂和过量的(COCl)2并将反应残余物再次溶解在干燥的苯中，然后用5当量的丙胺处理。当反应完成时，真空蒸发溶剂，并通过用醚和NH4Cl溶液萃取而收集产物。用色谱柱分离后，得到3.7mg的纯产物(收率63％)。
化合物30.将4.5mg的酸25(0.015mmol)溶于干燥的CH2Cl2并用10当量的(COCl)2处理，然后用两滴DMF处理。当反应停止鼓泡时，真空蒸发CH2Cl2溶剂和过量的(COCl)2并将反应残余物再次溶解在干燥的苯中，然后用5当量的吗啉处理。当反应完成时，真空蒸发溶剂，并通过用醚和NH4Cl溶液萃取而收集产物。用色谱柱分离后，得到5.0mg的纯产物(收率89％)。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.95(q，J＝11.6Hz，1H)，5.47(s，1H)，4.99-4.95(m，2H)，3.64-3.60(m，8H)，1.29(s，3H)，1.11(s，3H)，1.03(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 21.24，22.82，23.22，24.90，25.16，27.35，34.36，37.65，39.71，40.37，41.42，41.62，46.32，46.47，46.71，51.29，67.02，111.68，117.10，143.89，149.84；αD＝-47.1。
化合物31.向14.5mg的酸25(0.048mmol)的THF溶液中加入溶于200μl水的1当量的KOH并将混合物搅拌1小时。蒸发溶剂得到纯的盐31(100％)。
化合物31.向24.5mg的酸25(0.072mmol)的THF溶液中加入溶于200μl水的1当量的NaOH并将混合物搅拌1小时。蒸发溶剂得到纯的盐32(100％)。
化合物33.向20.1mg的酸25(0.052mmol)的THF溶液中加入溶于200μl甲醇的1当量的三乙醇胺并将混合物搅拌1小时。蒸发溶剂得到纯的盐33(100％)。
化合物34.向20.1mg的酸25(0.052mmol)的THF溶液中加入溶于200μl甲醇的1当量的二乙醇胺并将混合物搅拌1小时。蒸发溶剂得到纯的盐34(100％)。
酯35.将(三苯基亚膦基)乙酸甲酯(90.7mg，0.27mmol)和醛9(27.3mg，0.09mmol)溶于干燥的CH2Cl2并在室温下搅拌。反应在1天内完成，然后用NH4Cl中和。通过用CH2Cl2萃取而收集反式和顺式产物。将其通过色谱柱分离。得到24.4mg和2.5mg的反式和顺式酯并且其是可以通过柱色谱分离的(总收率84％)。反式35：1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 7.00-6.92(m，1H)，5.96(q，J＝11.6Hz，1H)，5.80(d，J＝15.2Hz，1H)，4.47(d，J＝4.4Hz，1H)，5.00-4.96(m，2H)，3.72(s，3H)，2.45(m，1H)，2.35(m，1H)，1.08(s，3H)，1.06(s，3H)，0.89(s，1H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 18.82，19.01，19.90，23.37，24.97，28.84，35.94，37.15，37.22，37.69，37.85，38.11，40.98，42.40，46.55，51.42，112.38，117.04，122.38，142.45，148.03，150.67，166.73；αD＝-12.02。顺式：1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 6.32-6.25(m，1H)，5.97(q，J＝11.6Hz，1H)，5.83(d，J＝11.6Hz，1H)，5.47(d，J＝8Hz，1H)，5.00-4.96(m，2H)，3.71(s，3H)，3.19-3.13(m，1H)，2.61-2.55(m，1H)，1.15(s，3H)，1.07(s，3H)，0.90(s，3H)。
酸36.将8mg的反式酯35(0.023mmol)和2.70mg的LiOH(0.113mmol)溶于1ml的THF/H2O(1:1)。将反应混合物60℃回流过夜。将完成的反应用HCl(1M)中和并用CH2Cl2萃取。用色谱柱纯化后，得到7.3mg的纯产物36(95％)。36：1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ7.12-7.04(m，1H)，5.96(q，J＝11.6Hz，1H)，5.82(d，J＝15.6Hz，1H)，5.48(d，J＝4.4Hz，1H)，5.01-4.97(m，2H)，2.53-2.46(m，1H)，2.23-2.19(m，1H)，1.09(s，3H)，1.07(s，3H)，0.88(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ 38.12，42.76，42.93，43.82，47.29，48.87，48.91，49.74，52.77，53.70，60.01，61.21，61.64，61.84，62.05，64.90，66.35，70.54，136.46，141.09，141.19，146.10；αD＝-15.17。
酯37.在无水烧瓶中，将5mg的反式酯35(0.14mmol)溶于干燥的甲醇。将1.7mg新鲜热活化的Mg(0.07mmol)加入到反应烧瓶中。将反应在室温下搅拌过夜。当反应完成时，用HCl(2M)溶解剩余的Mg，然后将混合物用醚萃取。色谱柱分离后得到2.9mg的黄色固体(收率54％)。36：1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.96(q，J＝11.6Hz，1H)，5.45(d，J＝4Hz，1H)，5.00-4.95(m，2H)，3.679s，3H)，2.27(m，2H)，1.25(s，3H)，1.05(s，3H)，0.83(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ18.59，19.31，19.99，20.26，23.44，25.05，26.16，28.58，29.81，32.01，35.25，36.11，37.3，37.35，37.75，38.28，41.41，42.46，46.94，112.25，116.75.116.73，142.60，151.09；αD＝-22.1。
酸38.将5mg的酯37(0.014mmol)和1.70mg的LiOH(0.07mmol)溶于1ml的THF/H2O(1:1)。将反应混合物在65℃下回流过夜。将完成的反应用HCl(1M)中和，并用CH2Cl2萃取。色谱柱纯化后，得到3.9mg的纯产物38(81％)。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 5.96(q，J＝11.6Hz，1H)，5.45(d，J＝4Hz，1H)，5.00-4.95(m，2H)，2.37(m，2H)，1.25(s，3H)，1.05(s，3H)，0.84(s，3H)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ18.58，19.28，19.98，23.42，25.03，26.12，28.55，29.79，30.40，31.94，34.91，36.09，37.32，37.73，38.25，41.38，42.44，46.93，112.24，116.73，116.75，142.55，151.04；αD＝+3.4。
实施例24
分析了七种不同的TTL3类似物对THP-1细胞的活力和TNF-α合成的影响。
THP-1细胞是广泛用于评价单核细胞功能的人急性单核细胞性白血病细胞系，在THP-1细胞中分析了抑制TNF-α产生的能力。为了诱导成熟，将THP-1细胞以1×106细胞/ml接种并用5nM PMA预处理2天。将分化的THP-1细胞用不同浓度的TTL3或其类似物预处理1小时，然后使用1μg的LPS(Sigma，St.Louse，MO)孵育4小时。使用p38抑制剂(SB 203580；Sigma，St.Louis，MO)作为阳性对照。收集上清液并将其保存在-80℃下直至测定TNF-α活性。对于每一类似物进行刃天青测定以评价其对细胞代谢和活力的影响。
使用可作为alamarBlueTM(Biosource International Inc.，820 FlynnRoad，Camarillo，California)商购的染料刃天青的制剂，用于本文所述的细胞毒性测定。本文所述的测定和实验以与科学文献中所述的方式基本相同的方式进行，所述科学文献例如Magnani，E和Bettini，E.，“Resazurin detection of energy metabolism changes in serum-starvedPC12 cells and of neuroprotective agent effect(血清饥饿的PC12细胞中能量代谢变化以及神经保护试剂效应的刃天青检验)，”Brain ResProtoc.，2000 Jul；5(3)：266-72和Nociari M.M.，Shalev A.，Benias P.，andRusso C.J，“A novel one-step，highly sensitive fluorometric assay toevaluate cell-mediated cytotoxicity(评价细胞介导的细胞毒性的新颖的一步高灵敏度荧光测定)，”Immunol.Methods 213，157-167(1998)。另外参见题目为“使用刃天青和平衡剂的抗生素和细胞毒性药物易感性测定”美国专利第5,501,959号，其全部说明书在此引入作为参考。
为了检测人TNF-α的存在，开发并优化了荧光连接的免疫吸收测定或FLISA。将100μl用山羊抗小鼠IgG(1mg/ml，R和D系统)包被的小珠(6μm，Spherotech)与4μl的生物素抗hTNFα小鼠IgG(0.1mg/ml，R和D体系)和2μl的FMAT蓝-链霉抗生物素(0.1mg/ml，Applied Biosystems)混合。将50μl的混合物与50μl由处理的THP-1细胞中分离的上清液组合并加入到黑壁FLISA板上(AppliedBiosystems)并孵育过夜。以工厂设置的PMT设置对板进行扫描，并且将值作图，并用Applied Biosystems软件分析。
表10至23还总结了7种TTL3类似物家族对THP-1细胞活力和TNF-α合成的影响。
实施例25
式(IIB-A1)和类似物在LPS刺激的人外周血单核细胞中
降低TNF-α水平
将80μl的3.1×105/ml人外周血单核细胞(HPBMC)接种于Costar390496孔板的LGM-3培养基中并在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下培养12小时。将在LGM-3培养基中制备的10μl的LT-1-85、CC-3-19、CC-3-13P、式(IIB-A1)和CC-3-22的8点半对数系列稀释加入到细胞中并孵育1小时。然后，将10μl的在LGM-3培养基中由1mg/ml储液稀释的500ng/ml脂多糖(LPS)加入到细胞中，并在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下进行孵育4小时。已知的p38MAP激酶抑制剂SB203580和DMSO被分别用作阳性和阴性对照。用LPS刺激4小时后，通过使用人TNF-α cytoset ELISA试剂盒分析每一样品中TNF-α的水平。使用标准S形剂量响应曲线拟合算法(Prism2.0，GraphPad Software Inc)确定EC50值(抑制50％的最大实测TNF-α产生时的药物浓度)。在用测试化合物孵育细胞24小时后，使用刃天青染料对双份的细胞板测定细胞活力。使用具有λex＝535nm和λem＝590nm滤光器的Fusion微板荧光计(Packard Bioscience)测定刃天青还原产物的荧光。使用标准S形剂量响应曲线拟合算法(Prism 2.0，GraphPadSoftware Inc)确定EC50值(当确定50％的最大实测生长抑制时的药物浓度)。
LT-1-85、CC-3-19、CC-3-13P、式(IIB-A1)和CC-3-22在HPBMC中对TNF-α产生和细胞活力的影响总结于表24。结果表明，EC50为1.4μM的式(IIB-A1)有效抑制LPS刺激的HPBMC中TNF-α的产生。在测试条件下，式(IIB-A1)在高至26μM的浓度下不抑制HPBMC的细胞生长。
表24.LT-1-85、CC-3-19、CC-3-13P、式(IIB-A1)和CC-3-22化合物对HPBMC中LPS刺激的TNF-α产生和细胞活力的影响
Figure A200680034568D02091
Figure A200680034568D02101
*5小时药物暴露
#24小时药物暴露
实施例26
式(IIB-A1)降低LPS刺激的人外周血单核细胞中IκBα的磷酸化水平
将1ml/孔的3×106/ml HPBMC接种于6孔板中的LGM-3培养基中，并在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下培养12小时。将最终浓度为13μM的式(IIB-A1)(或10μM的TTL3)加入到HPBMC中保持1小时。使用DMSO作为对照。然后用20ng/ml脂多糖(LPS)刺激细胞30分钟、1小时、2小时和4小时，所述LPS是在LGM-3培养基中由1mg/ml储液稀释的。在每一时间点的最后，通过离心分离采集细胞并将细胞沉淀物在冰冷的1×Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(DPBS)中洗涤一次。为了制备用于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的样品，将细胞在RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 7.4、0.9％NaCl、1％TritonX-100、0.25％脱氧胆酸钠、1mM EDTA、2mM Na3VO4和1×蛋白酶抑制剂混合物)中于冰上溶解15分钟。通过在14,000rpm、4℃下进行离心分离10分钟将细胞溶解产物变澄清。在进行SDS-PAGE之前，通过BCA蛋白测定试剂盒确定细胞溶解产物的蛋白浓度。按照生产商的说明书，将来自不同细胞溶解产物的等量蛋白在10％ NuPage MES预制凝胶上溶解并转移至硝酸纤维素膜。转移后，首先将膜在室温下在BLOTTO(5％脱脂乳粉的含0.1％吐温-20的1×DPBS缓冲液的溶液)中封闭2小时，然后使用适当的第一抗体：抗磷IκBα(1:1000)或抗微管蛋白(1:2000)孵育2小时。使用抗微管蛋白抗体作为对照以证实每一样品的相等加载。第一抗体孵育后，将膜用BLOTTO简单洗涤2至3次，每次10分钟，并且再次使用绵羊抗小鼠HRP结合的第二抗体孵育1小时。第二抗体孵育后，将膜用PBST(1×DPBS和0.1％吐温-20)充分洗涤4次，每次15分钟。通过增强的化学发光(ECL)检测系统观察HRP活性。
图38表明，与DMSO对照相比，式(IIB-A1)有效地抑制LPS刺激的HPBMC中IκBα磷酸化的水平。
实施例27
式(IIB-A1)降低RPMI8226细胞中LPS诱导的IκBα磷酸化水平
将1ml/孔的2×106/ml RPMI 8226细胞(#CCL-155C，美国标准菌库)接种于6孔板中的LGM-3培养基中并在37℃、5％ CO2和95％潮湿空气下培养过夜。将TTL3和式(IIB-A1)分别以10μM和13μM的最终浓度加入到RPMI 8226细胞中保持1小时。使用DMSO作为对照。然后用50ng/ml的LPS刺激细胞30分钟、1小时、2小时和4小时，所述LPS是在LGM-3培养基中由1mg/ml储液稀释的。在每一时间点的最后，通过离心分离采集细胞并将细胞沉淀物在冰冷的1×DPBS中洗涤一次。为了制备用于SDS-PAGE的样品，将细胞在RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.4、0.9％NaCl、1％Triton X-100、0.25％脱氧胆酸钠、1mM EDTA、2mM Na3VO4和1×蛋白酶抑制剂混合物)中于冰上溶解15分钟。通过在14,000rpm、4℃下进行离心分离10分钟将细胞溶解产物变澄清。在进行SDS-PAGE之前，通过BCA蛋白测定试剂盒确定细胞溶解产物的蛋白浓度。按照生产商的说明书，将来自不同细胞溶解产物的等量蛋白在10％NuPage MES预制凝胶上溶解并转移至硝酸纤维素膜。转移后，首先将膜在室温下在BLOTTO(5％脱脂乳粉的含0.1％吐温-20的1×DPBS缓冲液的溶液)中封闭2小时，然后使用适当的第一抗体：抗磷IκBα(1:1000)或抗微管蛋白(1:2000)孵育2小时。使用抗微管蛋白抗体作为对照以证实每一样品的相等加载。第一抗体孵育后，将膜用BLOTTO简单洗涤2至3次，每次10分钟，并且再次使用绵羊抗小鼠HRP结合的第二抗体孵育1小时。第二抗体孵育后，将膜用PBST(1×DPBS和0.1％吐温-20)充分洗涤4次，每次15分钟。通过增强的化学发光(ECL)检测系统观察HRP活性。
图39表明，在式(IIB-A1)处理后，与DMSO对照处理的细胞相比，RPMI 8226细胞中LPS刺激诱导的IκBα磷酸化的水平被大大降低。在TTL3的存在下，LPS对IκBα磷酸化的水平的抑制作用很小(图39B)。
实施例28
式(IIB-A1)特异性抑制RPMI8226细胞中IκBα和p38MAP激酶的LPS 诱导的磷酸化
将1ml/孔的2×106/ml RPMI 8226细胞(#CCL-155C，美国标准菌库)接种于6孔板中的LGM-3培养基中并在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下培养过夜。将式(IIB-A1)以13μM的最终浓度加入到RPMI8226细胞中保持1小时。使用DMSO作为对照。然后用LPS(50ng/ml)或TNF-α(10ng/ml)以不同长度的时间刺激细胞。在每一刺激时间段的最后，通过离心分离采集细胞并将细胞沉淀物在冰冷的1×Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(DPBS)中洗涤一次。为了制备用于SDS-PAGE的样品，将细胞在RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.4、0.9％ NaCl、1％ TritonX-100、0.25％脱氧胆酸钠、1mM EDTA、2mM Na3VO4和1×蛋白酶抑制剂混合物)中于冰上溶解15分钟。通过在14，000rpm、4℃下进行离心分离10分钟将细胞溶解产物变澄清。在进行SDS-PAGE之前，通过BCA蛋白测定试剂盒确定细胞溶解产物的蛋白浓度。按照生产商的说明书，将来自不同细胞溶解产物的等量蛋白在10％NuPage MES预制凝胶上溶解并转移至硝酸纤维素膜。转移后，首先将膜在室温下在BLOTTO(5％脱脂乳粉的含0.1％吐温-20的1×DPBS缓冲液的溶液)中封闭2小时，然后使用适当的第一抗体：抗磷IκBα、抗p38和抗磷p38(1:1000)或抗微管蛋白(1:2000)孵育2小时。使用抗微管蛋白抗体作为对照以证实每一样品的相等加载。第一抗体孵育后，将膜用BLOTTO简单洗涤2至3次，每次10分钟，并且再次使用绵羊抗小鼠或山羊抗家兔HRP结合的第二抗体孵育1小时。第二抗体孵育后，将膜用PBST(1×DPBS和0.1％吐温-20)充分洗涤4次，每次15分钟。通过增强的化学发光(ECL)检测系统观察HRP活性。
比较式(IIB-A1)处理对在RPMI8226细胞中LPS和TNF-α诱导的IκBα和p38 MAP激酶的磷酸化水平的影响(图40)，数据表明式(IIB-A1)特异性地降低IκBα和p38 MAP激酶的LPS诱导的磷酸化。
实施例29
式(IIB-A1)抑制RPMI8226细胞中由Toll样受体配体诱导的IκBα的磷 酸化
将1ml/孔的3×106/ml HPBMC接种于6孔板中的LGM-3培养基中，并在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下培养过夜。将式(IIB-A1)以13μM的最终浓度加入到RPMI8226细胞中保持1小时。使用DMSO作为对照。然后用50ng/ml LPS、2μg/ml脂磷壁酸(LTA)和CpGDNA以不同长度的时间刺激细胞。在每一刺激时间段的最后，通过离心分离采集细胞并将细胞沉淀物在冰冷的1×Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(DPBS)中洗涤一次。为了制备用于SDS-PAGE的样品，将细胞在RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.4、0.9％NaCl、1％Triton X-100、0.25％脱氧胆酸钠、1mM EDTA、2mM Na3VO4和1×蛋白酶抑制剂混合物)中于冰上溶解15分钟。通过在14,000rpm、4℃下进行离心分离10分钟将细胞溶解产物变澄清。在进行SDS-PAGE之前，通过BCA蛋白测定试剂盒确定细胞溶解产物的蛋白浓度。按照生产商的说明书，将来自不同细胞溶解物的等量蛋白在10％NuPage MES预制凝胶上溶解并转移至硝酸纤维素膜。转移后，首先将膜在室温下在BLOTTO(5％脱脂乳粉的含0.1％吐温-20的1×DPBS缓冲液的溶液)中封闭2小时，然后使用适当的第一抗体：抗磷IκBα(1:1000)或抗微管蛋白(1:2000)孵育2小时。使用抗微管蛋白抗体作为对照以证实每一样品的相等加载。第一抗体孵育后，将膜用BLOTTO简单洗涤2至3次，每次10分钟，并且再次使用绵羊抗小鼠HRP结合的第二抗体孵育1小时。第二抗体孵育后，将膜用PBST(1×DPBS和0.1％吐温-20)充分洗涤4次，每次15分钟。通过增强的化学发光(ECL)检测系统观察HRP活性。
除了已证明的式(IIB-A1)对在HPBMC和RPMI8226细胞中由LPS通过良好表征的Toll样受体4(TLR4)诱导的IκBα的磷酸化的影响(图38、39和40)之外，式(IIB-A1)还抑制由其它Toll样受体配体诱导的IκBα的磷酸化。如图41所示，式(IIB-A1)抑制由被认为是分别通过Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体9(TLR9)起作用的LTA和CpGDNA诱导的IκBα磷酸化。
实施例30
式(IIB-A1)降低RPMI8226细胞中LPS刺激的IL-8和IL-10水平
将90μl的2.8×105/ml和0.5ml的5×105/ml的RPMI8226细胞(#CCL-155C，美国标准菌库)分别接种于96孔和6孔板中的LGM-3培养基中。将细胞在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下培养过夜。将TTL3或式(IIB-A1)以20μM至0.16μM最终浓度范围的8点系列稀释加入到细胞中，保持1小时。使用DMSO作为对照。1小时后，加入50ng/ml的LPS刺激细胞10小时，所述LPS是由1mg/ml储液在LGM-3培养基中稀释的。收集上清液并使用人IL-8和IL-10 cytosetELISA试剂盒分析IL-8和IL-10水平。
图42A和42B均表明式(IIB-A1)在RPMI 8226中以剂量依赖的方式抑制LPS诱导的IL-8和IL-10产生。TTL3在RPMI 8226细胞中以剂量依赖的方式抑制IL-10产生。
实施例31
细胞系的生长抑制
人前列腺腺癌(PC-3；CRL-1435)、多发性骨髓瘤(RPMI8226；CCL-155)和胚肾(HEK-293；CRL-1573)细胞均购自ATCC并保持在适当的的培养基中。将细胞在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下在培养箱中培养。
为了进行细胞生长抑制测定，将PC-3和HEK-293细胞分别以90μl含1％(v/v)FBS的培养基中的5×103和1.5×103细胞/孔接种在96孔(Corning；3904)黑壁、底部透明的组织培养板中并将板孵育过夜以允许细胞建立并进入对数相生长。在测定日，将RPMI 8226细胞以90μl含1％(v/v)FBS的培养基中的2×104细胞/孔接种在96孔板中。在100％DMSO中制备化合物的4mg/ml储液并在-20℃下保存。将化合物进行系列稀释，并以一式三份加入到测试孔中。在27μM至8.6nM的浓度范围测试LT-1-85。对于CC-3-13P，测试30μM至9.7nM的浓度范围。在26μM至8.4nM的浓度范围测试式(IIB-A1)。将板放回培养箱，保持48小时。在所有样品中DMSO的最终浓度为0.25％。
48小时的药物暴露之后，向每一孔中加入10μl的0.2mg/ml刃天青的不含Mg2+、Ca2+的磷酸盐缓冲的盐水溶液并将板放回培养箱，保持3至6小时。由于活细胞代谢刃天青，所以使用具有λex＝535nm和λem＝590nm滤光器的Fusion微板荧光计(Packard Bioscience)测量刃天青还原产物的荧光。在没有细胞的培养基中刃天青染料用于确定背景，并将背景从所用实验孔的数据中扣除。将数据归一化为用培养基+0.25％DMSO(100％细胞生长)处理的细胞的平均荧光，并且使用标准S形剂量响应曲线拟合算法(Prism 2.0，GraphPad Software Inc)确定EC50值(当确定50％的最大实测生长抑制时的药物浓度)。当细胞生长的最大抑制低于50％时，不测定EC50值。表25的数据总结了LT-1-85、CC-3-13P和式(IIB-A1)对HEK-293、PC-3和RPMI 8226细胞的生长抑制效果。EC50值表明LT-1-85和CC-3-13P对HEK-293、PC-3和RPMI8226细胞具有毒性。式(IIB-A1)对RPMI8226细胞具有毒性。
25，LT-1-85、CC-3-13P和式(IIB-A1)对HEK-293、PC-3和RPMI8226 细胞的EC 50 值
化合物                            EC50(μM)
             HEK-293              PC-3                 RPMI 8226
             23                   22                   14
LT-1-85
             22                   19                   13
             2.6                  4.0                  2.7
CC-3-13P
             1.2                  3.7                  2.3
式(IIB-A1)   >26                  >26                  21
             >26                  >26                  21
药物暴露48小时后测定细胞活力
实施例32
TTL3、TTL1、LT-1-45、LT-1-85和式(IIB-A1)抑制鼠巨噬细胞细胞系 RAW264.7中介导炎症的基因的表达
将RAW264.7细胞以6×104至8×104细胞/cm2接种于含有2mM谷氨酸、10％胎牛血清(FCS)和50μg/ml盘尼西林、链霉素和庆大霉素的RPMI 1640培养基中。培养2天后，用不含苯酚红、添加有0.5mM精氨酸和2％ FCS的RPMI 1640培养基代替培养基，然后加入指定的刺激物。将TTL3、TTL1、LT-1-45、LT-1-85和式(IIB-A1)以10μM的最终浓度加入到细胞中并保持15分钟。使用DMSO作为对照。然后将细胞用200ng/ml的LPS和20单位/ml的IFNγ刺激18小时。测量NO释放作为孵育培养基(不含苯酚红)中亚硝酸盐和硝酸盐的积累。用硝酸盐还原酶将硝酸盐还原成亚硝酸盐并用Griess试剂通过分光光度法测定。为了测定COX-2和NOS-2的蛋白水平，将细胞(1.5×106)用PBS洗涤并通过离心分离收集。将细胞沉淀物用100μl的缓冲液A(10mM Hepes、pH 7.9、1mM EDTA、1mM EGTA、100mM KCl、1mM二硫苏糖醇、0.5mM苯甲磺酰氟、2μg/ml抑肽酶、10μg/ml亮抑蛋白酶肽、2μg/ml Nα-p-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮、5mM NaF、1mM Na3VO4、10mM Na2MoO4)均质化。在4℃下保持10分钟后，加入诺乃洗涤剂P-40至0.5％的浓度。将试管轻轻地涡旋振荡15秒并以8，000×g离心15分钟。将上清液保存在-80℃下直至使用。使用Bio-Rad蛋白试剂测定蛋白含量。通过10％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白提取物。将凝胶点在Hybond P膜上，然后使用适当的抗体：抗NOS-2或抗环加氧酶-2孵育。使用抗β-肌动蛋白抗体作为对照以证实每一样品的加载。用ECL显示印迹。膜的不同暴露时间用于确保带不饱和。用激光密度测定法对膜进行定量化。
为了确定测试化合物是否诱导凋亡，按照公开的方案，在使用0.005％碘吡锭(PI)孵育细胞后，进行PI染色的流动细胞计数测量。在备有25mW氩激光的FACScan细胞计数器中对细胞进行分析。使用向前散射的点曲线相对于PI荧光定量计算凋亡细胞百分数。进行活力和凋亡种群的细胞分类和分析以确认门控的标准。
如图43A所示，当细胞用TTL3、LT-1-45、LT-1-85和式(IIB-A1)处理时，LPS/IFNγ刺激的细胞中NOS-2的蛋白水平下降50％至70％。与这些观察相一致，LPS/IFNγ诱导的NO合成也被降低(图43B)。当测量COX-2水平时(图43C)，根据测试化合物，观察到约30％至40％的下降。
根据图43D，当在10μM测试时，TTL3、TTL1、LT-1-45、LT-1-85和式(IIB-A1)不影响RAW264.7细胞活力。
实施例33
TTL3、TTL1、LT-1-45、LT-1-85和式(IIB-A1)对NIK/NF-κB途径的 影响
(κB3)ConA.LUC质粒含有来自与最小伴清蛋白A启动子连接的人免疫缺陷病毒长末端重复增强子的κB基序的三份拷贝，并且其被用于测量NF-κB活性。缺乏KB串联的ConA.LUC载体在测定中用作对照。pRK5-myc-NIK和激酶缺乏的(K429A/K430A，NIK-KD)NIK表达载体用于短暂转染RAW264.7细胞。使用EndoFree Qiagen柱纯化质粒。当进行共转染测定时，NIK和κB-LUC质粒之间的比率是3:1摩尔比。将分会合细胞培养物(RAW264.7细胞)用磷酸盐缓冲的盐水洗涤2次，并使用2ml的RPMI1640培养基和2％FCS将其保持在6cm直径的盘中。按照供应商的说明，将细胞用JetPEI转染24小时。在用LPS/IFNγ刺激之前，用测试化合物进行处理30分钟。按照供应商的建议进行报道测定以测量firefly/renilla双转染体系的荧光素酶活性。
如图44A所示，所有的测试化合物，除了TTL1，在(KB)3-LUC转染的RAW 264.7细胞中显著抑制NF-κB介导的荧光素酶报道基因活性。当细胞被myc-NIK质粒和(KB)3-LUC报道构建体共转染时。当将细胞用测试化合物处理时，NF-κB介导的荧光素酶活性被基本消除(图44B)。这些数据表明NIK是这些化合物的作用中相关的靶。当细胞被激酶死亡NIK质粒(DN-NIK)和(κB)3-LUC报道构建体共转染时，进一步支持了这些观察结果。如图44C所示，测试化合物对NF-KB介导的荧光素酶活性的抑制作用被降低。
实施例34
TTL3和式(IIB-A1)对NIK活性的影响
在用pRK5-myc-NIK构建体转染RAW264.7细胞之后，在缓冲液A(10mM Hepes、pH 7.9、1mM EDTA、1mM EGTA、100mM KCl、1mM二硫苏糖醇、0.5mM苯甲磺酰氟、2μg/ml抑肽酶、10μg/ml亮抑蛋白酶肽、2μg/ml Nαp-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮、5mMNaF、1mM Na3VO4、10mM Na2MoO4)中将1×107个转染细胞均质化。将试管小心涡旋振荡15秒并以8,000×g离心15分钟。将上清液(1ml)预先变澄清，并用1μg的抗myc抗体将NIK进行免疫沉淀。用缓冲液A对免疫沉淀进行充分洗涤后，将细胞沉淀物再次悬浮在激酶缓冲液(修饰的缓冲液A，其含有0.1mM EDTA、5mM MgCl2和10nM冈田酸)中。在100μl含有100ng的免疫沉淀、50μM[γ32p]ATP(0.5μCi)和100ng作为底物的MBP的激酶缓冲液中测定激酶活性。
当使用pRK5-myc-NIK质粒转染细胞并在TTL3和式(IIB-A1)的存在下使用LPS/IFNγ刺激细胞时，观察到NIK激酶活性的70％抑制(图45A)。为了进一步支持该观察结果，将1μM的TTL3由LPS/IFNγ刺激的细胞直接加入到体外NIK激酶测定中。如图45B所示，NIK激酶活性被抑制48％。
实施例35
TTL3和式(IIB-A1)在小鼠耳水肿模型中抑制髓过氧化物酶活性
将溶于20μl DMSO中的2.5μg TPA涂覆于每一小鼠右耳的两面。左耳(对照)接受媒介物(DMSO)。将测试化合物与TPA的涂覆同时局部给药(20μl DMSO中500ng每耳)。以相同的剂量给予参考药物吲哚美辛。4小时后，通过颈脱位法将动物宰杀，并用金属穿孔器从每一耳除去6mm直径的圆盘并称重。通过从右耳(处理)的重量减去左耳(载体)的重量来计算耳水肿。将耳的部分在750μl的盐水中均质化。在4℃下以10000×g进行离心15分钟，测量上清液中髓过氧化物酶(MPO)的活性。
如图46的上组所示，当动物接受TTL3或式(IIB-A1)时，由于浸润的嗜中性粒细胞以及向耳局部涂覆TPA的诱导，髓过氧化物酶活性被显著削弱。通过对相同耳部分称重而测定水肿，并且该参数在TTL3或式(IIB-A1)处理的动物中显著降低。
实施例36
TTL3和式(IIB-A1)保护小鼠不产生由D-GalN/LPS诱导的致死率
8至10周龄的雄性BALB/c小鼠被诱导内毒素性休克。通过腹膜内(i.p.)联合注射LPS(2μg/kg)与D-GalN(800mg/kg)产生致命的损伤。在D-GalN/LPS激发之前1小时，通过腹腔内注射(0.5ml)5μmol/kg的TTL3或式(IIB-A1)。向对照动物给予盐水。监控致死率直至给予D-GalN/LPS后的24小时。
图47显示TTL3和式(IIB-A1)对由急性剂量的D-GalN/LPS诱导的致死率均表现出显著的保护，相对于用载体处理的对照，其延长了三倍的小鼠生存时间。
实施例37
五加酸类似物的TNF-α抑制测定
RAW264.7LPS/TNF测定：
将7.5×103/孔的RAW264.7细胞接种于96孔板中，过夜，并在LPS(10ng/ml)刺激之前1小时加入适当浓度的五加酸类似物。LPS刺激4小时后，采集上清液，并通过ELISA分析TNF产生。
使用DMSO作为对照。不被LPS刺激的相同组的板用于细胞毒性评价。
表24.具有酰胺和肽官能团的五加酸类似物的TNF-α抑制活性
表25.具有醇官能团的五加酸类似物的TNF-α抑制活性
Figure A200680034568D02211
表26.具有酮官能团的五加酸类似物的TNF-α抑制活性
Figure A200680034568D02212
表27.具有肟官能团的五加酸类似物的TNF-α抑制活性
Figure A200680034568D02213
表28.具有磺酸酯官能团的五加酸类似物的TNF-α抑制活性
Figure A200680034568D02214
表29.具有酯官能团的五加酸类似物的TNF-α抑制活性
Figure A200680034568D02221
实施例38
抗癌测定
对抗国家癌症研究所(NCI)筛选组检测了本文公开的化合物，该组由60种人肿瘤细胞系组成，这细胞系代表白血病，黑素瘤以及肺、结肠、脑、卵巢、乳腺、前列腺和肾的癌。筛选程序的详细描述能够在超文本传送协议(http://)“dtp.nci.nih.gov/branches/btb/ivclsp.html”中找到。下文是癌的名单：
肺：NCI-H23、NCI-H522、A549-ATCC、EKVX、NCI-H226、NCI-H332M、H460、H0P62、HOP92；结肠：HT29、HCC-2998、HCT116、SW620、COLO205、HCT15、KM12；乳腺：MCF7、MCF7ADRr、MDAMB231、HS578T、MDAMB435、MDN、BT549、T47D；卵巢：OVCAR3、OVCAR4、OVCAR5、OVCAR8、IGROV1、SKOV3；白血病：CCRFCEM、K562、MOLT4、HL60、RPMI8266、SR；肾：UO31、SN12C、A498、CAKI1、RXF393、7860，、ACHN、TK10；黑素瘤：LOXIMVI、MALME3M、SKMEL2、SKMEL5、SKMEL28、M14、UACC62、UACC257；前列腺：PC3、DU145；以及CNS：SNB19、SNB75、U251、SF268、SF295、SM539。
简单地说，将60种人肿瘤细胞系的每一种在添加有5％肽牛血清和2mM L-谷氨酸的RPMI1640培养基中生长。将细胞以其适当的密度接种于96孔微滴定板中，并在37℃、5％ CO2和95％空气以及100％相对湿度下孵育。24小时后，将通式II、IIA或IIB化合物的100μL不同10倍系列稀释加入到含有100μL细胞的适当的孔中，得到10nM至100μM的最终化合物浓度。将细胞继续孵育48小时并用磺酰罗丹明B蛋白测定以估计细胞活力或生长。
三种剂量响应参数计算如下：
GI50表示抑制50％生长的浓度。
TGI表示完全抑制生长的浓度。
LC50表示50％细胞致死的浓度。
实施例39
肿瘤细胞系的生长抑制
将B16-F10(ATCC；CRL-6475)、DU 145(ATCC；HTB-81)、HEK293(ATCC；CRL-1573)、HT-29(ATCC；HTB-38)、LoVo(ATCC；CCL-229)、MDA-MB-231(ATCC；HTB-26)、MIA PaCa-2(ATCC；CRL-1420)、NCI-H292(ATCC；CRL-1848)、OVCAR-3(ATCC；HTB-161)、PANC-1(ATCC；CRL-1469)、PC-3(ATCC；CRL-1435)、RPMI 8226(ATCC；CCL-155)和U266(ATCC；TIB-196)保持在适当的培养基中。将细胞在培养箱中于37℃、5％CO2和95％潮湿空气下进行培养。
为进行细胞生长抑制测定，将B16-F10、DU145、HEK293、HT-29、LoVo、MDA-MB-231、MIA PaCa-2、NCI-H292、OVCAR-3、PANC-1、PC-3、RPMI8226和U266细胞在90μl完全培养基中分别以1.25×103、5×103、1.5×104、5×103、5×103、1×104、2×103、4×103、1×104、7.5×103、5×103、2×104、2.5×104细胞/孔接种于Corning 3904黑壁、底部透明的组织培养板中。在100％DMSO中制备通式II、IIA和IIB化合物的20mM储液，将其等分并在-80℃下储存。将通式II、IIA和IIB化合物进行系列稀释并以一式三份加入到测试孔中得到20μM至0.2pM的最终浓度。将板放回培养箱，培养48小时。所有样品中DMSO的最终浓度为0.25％。
48小时的药物暴露之后，将10μl的0.2mg/ml刃天青的不含Mg2+、Ca2+的磷酸盐缓冲的盐水溶液(得自Sigma-Aldrich Chemical Co.)加入到每一孔中，并将板放回培养箱，培养3至6小时。由于活细胞代谢刃天青，可使用具有λex＝535nm和λem＝590nm滤光器的Fusion微板荧光计(Packard Bioscience)测量刃天青还原产物的荧光。在没有细胞的培养基中，刃天青染料用于测定背景，并将背景从所有实验孔的数据中扣除。将数据归一化为用培养基+0.25％DMSO(100％细胞生长)处理的细胞的平均荧光，并且使用标准S形剂量响应曲线拟合算法(由XLfit3.0，ID Business Solutions Ltd或Prism 3.0，GraphPad Software Inc生成)确定EC50值(当确定50％的最大实测生长抑制时的药物浓度)。
实施例40
肿瘤细胞系的生长抑制
如实施例39所述，测试化合物1387和1388对抗RPMI 8226、U266、PC-3、HT-29、MDA-MB-231和B16-F10黑素瘤。结果示于下表30-31。
表30：
NPI-1387和NPI-1388对不同肿瘤细胞系的体外细胞毒性(48小时)
Figure A200680034568D02241
Figure A200680034568D02251
表31：
对鼠B16-F10黑素瘤细胞的体外细胞毒性(48小时)
示出了单个值
实施例40
耐多发性骨髓瘤的治疗/抑制
转录因子NF-KB与多发性骨髓瘤(MM)细胞的生长与存活以及NF-KB活性的阻断相关。NPI-1387(式IIB-b1；上文方案4所示的化合物24)，是NF-KB的上游活化剂的有效的小分子抑制剂，将其给予MM细胞并显示其对包括那些耐常规试剂地塞米松或阿霉素的细胞在内的MM细胞的活力的影响。用NF-KB抑制剂处理MM细胞系(MM.1S、MM.1R、OCI-MyS、OPM-1、Dox-40)48小时，在所有细胞系中在药理学可达到的浓度(IC50范围25μM至40μM)，诱导细胞活力显著的(P<0.004；n＝2)、剂量依赖的降低。为了确定NF-KB抑制剂诱导的MM细胞活力的降低是否由于凋亡，将多种MM细胞系在其各自的IC50处理48小时；采集；并分析其凋亡。
在相差显微镜下观察到的DAP1的密集染色图案表明核浓集的显著增加，由此测量在这些细胞中的NF-KB抑制剂引发的显著凋亡。相反，未处理的细胞显示均一的、完整的核。除了核浓集，NF-KB抑制剂引发聚(ADP核糖)聚合酶(PARP)的蛋白水解切割，这是凋亡的特点。对纯化的患者MM细胞的考察证明了类似的结果。NF-KB抑制剂在体外条件下降低得自耐硼替佐米的MM患者的细胞活力。相反，没有观察到NF-KB抑制剂对来自健康捐赠者的外周血单核细胞的显著毒性。此外，NF-KB抑制剂不影响来自MM患者的骨髓基质细胞(BMSCs)的活力。参见图62。
基因和生物化学证据表明，凋亡通过两种主要的细胞死亡途径进行：内在途径，其涉及线粒体膜通透性以及数种致凋亡因子的释放，和后续的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-9活化；以及外在凋亡信号途径，其通过半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-8活化而发生。半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-8和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-9均活化下游半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3。NF-KB抑制剂(25μM)诱导半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-8、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-9的活化，然后发生半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3切割。这些发现共同显示NF-KB抑制剂引发的MM细胞凋亡主要通过半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-8/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-9>半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3信号途径进行。这些发现共同显示NF-KB抑制剂增强MM细胞杀灭的效率，克服了耐药性，并改善了MM中的患者预后。
实施例41
来自五加酸的新颖的二萜类NFκB抑制剂(NPI-1342(式IIB-a1)和NPI-1387；上述方案4的化合物24)对人胰腺癌细胞系在体外显示可测量的作用。9种细胞系中的7种对死亡受体配体肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的凋亡适度敏感。NPI-1342和NPI-1387在细胞系Panc1和HS766T中逆转TRAIL抵抗性，而细胞系Panc1和HS766T被发现在基线耐TRAIL。NFkB/p65表达的特异性沉默模拟这些作用。此外，如通过PI FACS分析测量到的，Salinosporamide A与NPI-1342或NPI-1387的联合处理导致凋亡的诱导。具体地，DNA断裂水平在HS766T细胞中从4％升至50％并在Panc1细胞中从4％升至52％。NPI-1342、NPI-1387对NFκB的抑制作用通过电迁移率位移测定进行评价并通过共聚焦显微镜得以证实。
实施例42
体外研究已证实了五加酸抑制致炎细胞因子如TNF-α和IL-1的产生。使用两种基于细胞的测定筛选半合成五加酸类似物库。在这些类似物中，NPI-1387在鼠巨噬细胞样RAW264.7细胞系中最有效地抑制LPS诱导的TNF-α合成。此外，NPI-1387还在HEK293 NF-κB/荧光素酶报道细胞系中降低TNF-α诱导的核因子-κB(NF-κB)活化，这表明NPI-1387是NF-κB信号途径中的抑制剂。
NF-κB是调节多种细胞存活的关键转录因子，并且活化的NF-κB的升高水平已显示出保护癌细胞(即多发性骨髓瘤和前列腺)不凋亡。在多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226或前列腺癌细胞系PC-3中，通过使用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测了NPI-1387对TNF-α或LPS诱导的NF-KB DNA结合活性的影响。结果显示NPI-1387在两种细胞系中均抑制TNF-α或LPS诱导的NF-κB DNA结合活性。此外，NPI-1387在抑制多发性骨髓瘤RPMI8226细胞系的增殖中最有效(IC50＝5.1±1μM)，而在PC-3集落生成测定中，暴露于20μM的NPI-1387之下6小时足以完全消除PC-3菌落形成。为了阐明NPI-1387在NF-κB信号途径中的分子靶，在LPS刺激之前用NPI-1387处理RAW264.7细胞，并进行蛋白质印记和荧光显微镜分析。结果表明，NPI-1387不仅以剂量依赖方式抑制内源性IRAK1及其下游靶IκBα的磷酸化，而且抑制活化的IRAK1和NF-κB的核转位，这表明NPI-1387在NF-κB途径中作为上游抑制剂起作用。
实施例43
将耐CDDP的B-NHL Ramos细胞系用多种浓度的通式II、IIA和IIB化合物(包括1387)处理1小时，然后用预先确定的无毒浓度的CDDP(15ug/ml)再处理20小时。然后采集细胞并使用碘吡锭(PI)技术通过流式细胞术检测DNA断裂来检测其凋亡。用一种或多种所述化合物与CDDP进行联合处理导致细胞毒性的显著增强。此外，单独处理显示细胞毒性并且观察到显著的协同细胞毒性。用Daudi B-NHL细胞系进行了类似的研究。观察到显著的细胞毒性。
利妥昔单抗(嵌合抗CD20单克隆抗体)已被单独或与化疗联合用于治疗非霍奇金淋巴瘤。临床响应很令人鼓舞；然而，某些患者在治疗后起初无响应或发生耐药性。研究了耐利妥昔单抗诱导的信号的Daudi RR1克隆。与Daudi野生型不同，利妥昔单抗不能使Daudi RR1对药物诱导的凋亡敏感。此外，与野生型相比，Daudi RR1还发生最高程度的抗药性。通式II、IIA和IIB化合物使细胞对利妥昔单抗敏感。检测化合物以确定其使细胞对利妥昔单抗敏感的能力。一种或多种所述化合物使细胞对利妥昔单抗敏感。
实施例44
NPI-1387在LPS刺激的RAW264.7细胞中以剂量依赖的方式抑制 NF-κB p65亚单位核转位
将RAW264.7细胞以0.5×105细胞/孔的密度接种在12孔板的盖玻片上，并使其在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下附着过夜。将细胞用NPI-1387(上述方案4的化合物24)以5μM、10μM和20μM预处理1小时，然后用50ng/ml LPS刺激30分钟。将盖玻片转移至干净的板，在Dulbecco磷酸盐缓冲的盐水(DPBS)中洗涤两次，在10％甲醛中固定10分钟，并用0.2％Triton X-100再通透10分钟。加入阻断培养基(DPBS，2％BSA，0.1％ Triton X-100)，保持2小时，并通过抽吸除去。以1:1000稀释加入多克隆山羊抗p65抗体(Santa CruzBiotechnology)，保持1小时。将孔用含有0.1％Triton X-100的DPBS洗涤3次，并加入100ml Alexa-488-结合的抗山羊抗体(1:1000稀释，Molecular Probes)，保持30分钟。将孔再次洗涤，并使用Vectashield(Vector)封固剂将盖玻片面朝下安放在显微镜玻片上。在Olympus荧光显微镜下观察玻片，使用Magnafire数码相机获得图像，并使用AdobePhotoshop处理。
NPI-1387在RAW264.7细胞中对NF-κB p65亚单位核转位的影响示于图66。不受具体理论的约束，结果表明NPI-1387在LPS刺激的RAW264.7细胞中以剂量依赖的方式抑制NF-κB p65亚单位核转位。
实施例45
NPI-1387克服MM骨髓微环境的保护作用
体外研究显示NPI-1387不影响骨髓干细胞的活力，但NPI-1387不克服IL-6或IGF-1的保护作用。这些数据表明，不受任何具体理论的约束，通过阻断由与骨髓干细胞的附着以及相关细胞因子的分泌诱导的MM细胞生长，NPI-1387起作用。
实施例46
NPI-1387克服硼替佐米耐药性与Bc1-2介导的耐药性
体外研究表明NPI-1387克服硼替佐米耐药性与bc1-2介导的耐药性。将两种基于细胞的测定用浓度为0、12uM、25uM和50uM的NPI-1387处理48小时。使用Bcl-2过表达MM.1S细胞和耐硼替佐米的DHL-4淋巴瘤细胞并记录每一种中活力细胞的百分数。结果显示随着NPI-1387浓度的增加，Bc1-2过表达MM.1S细胞和耐硼替佐米的DHL-4淋巴瘤细胞的活力细胞百分数显著的降低(参见图67)。
实施例47
NPI-1387对来自健康捐献者的对外周血单核细胞(PBMNC)显示最小 的作用
体外研究显示，当用不同浓度的NPI-1387处理活力PMBNCs时，活力PMBNCs的百分数的变化相对最小(参见图68)。
实施例48
已显示在MM细胞中凋亡信号是被NPI-1387以内在的和外在的途径引发的(参见图69)。
实施例49
NPI-1387与其它药物的共同给药引发附加的抗MM活性
用硼替佐米和地塞米松与NPI-1387合作进行测量48小时后MM细胞死亡的百分数的体外测定。这些测定表明，不受任何具体理论的约束，每一药物与NPI-1387共同给药导致增加MM细胞死亡百分数的附加作用(参见图70和71)。
实施例50
NPI-1387在LPS刺激的RAW264.7细胞中抑制TNF-α合成
将7.5×103/孔的RAW264.7细胞接种于96孔板中并在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下培养过夜。将在DMSO中制备的多种浓度的NPI-1387在LPS(10ng/ml)刺激之前1小时加入到细胞中。使用DMSO作为对照。LPS刺激4小时后，采集上清液，并通过使用人TNF-αcytoset ELISA试剂盒(Biosource Internationals)分析每一样品中的TNF-α水平。使用标准S形剂量响应曲线拟合算法(Prism 2.0，GraphPadSoftware Inc)测定IC50值(当抑制50％的最大实测TNF-α产生时的药物浓度)。
NPI-1387对RAW264.7细胞中TNF-α产生的影响示于图72。不受具体理论的约束，结果表明NPI-1387在LPS刺激的RAW264.7细胞中有效地抑制TNF-α生成。
实施例51
NPI-1387在LPS刺激的RAW264.7细胞中以剂量依赖的方式抑制 IRAK1的磷酸化和IKKα的激酶活性
将5×105/孔的RAW264.7细胞接种于6孔板中并在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下培养过夜。将细胞用1μM、5μM、10μM和20μM的NPI-1387处理1小时，然后用10ng/ml LPS刺激10或30分钟。为了测定IRAK1的磷酸化，在RIPA缓冲液[0.9％NaCl、50mM Tris-HCl(pH7.4)、1％ Triton X-100、1mM EDTA、0.25％脱氧胆酸钠、0.1％ SDS、1mM Na3VO4、1mM NaF和蛋白酶抑制剂]中制备全细胞提取物。通过离心除去不溶物，使用BCA蛋白测定试剂盒(Pierce Biotechnology)测定蛋白浓度，并将15μg等份的样品溶解在10％ NuPAGE MES预制凝胶(Invitrogen)上。在电转移后，将膜在Blotto(5％，w/v)脱脂乳的1×TBST[20mM Tris、0.8％(w/v)NaCl、pH 7.6、0.1％(v/v)吐温20]溶液中阻断。然后将膜与抗IRAK1(Santa Cruz Biotechnology)、全IκBα(Cell Signaling Technology)、磷IκBα(Cell Signaling Technology)和微管蛋白(Lab Vision)的第一抗体在Blotto中孵育2小时。将膜在TBST中洗涤并(若有必要)在用TBST充分洗涤之前与HRP结合的第二抗体在Blotto中孵育1小时。通过使用SuperSignal West Pico或Dura化学发光检测系统(Pierce Biotechnology)观察HRP活性。为了测定免疫沉淀的IKKα的体外激酶活性，在溶解缓冲液[150mM NaCl、20mMTris-HCl(pH7.5)、1％Triton X-100、1mM EDTA、1mM EGTA、1mMβ-甘油磷酸盐、1mM NaF、1mM Na3VO4和蛋白酶抑制剂]中制备全细胞提取物。通过离心除去不溶物。将抗IKKα抗体(CellSignalingTechnology)加入到澄清的上清液中并在4℃下孵育2小时。加入免疫纯固定化蛋白G小球(Pierce Biotechnolgy)，并将IKKα在4℃下进行免疫沉淀过夜。将小球在溶解缓冲液中简单洗涤后，将其与GST-IκBα底物(Santa Cruz Biotechnology)在添加有ATP的激酶测定缓冲液中于30℃孵育1小时。用10％ Nu PAGE MES预制凝胶(Invitrogen)分离蛋白样品并且通过蛋白质印迹法使用抗磷IκBα抗体(Cell SignalingTechnology)评价GST-IκBα磷酸化程度。
NPI-1387对在RAW 264.7细胞中由LPS活化的IRAK1的磷酸化以及IKKα激酶活性的影响示于图73。不受具体理论的约束，结果表明NPI-1387在RAW264.7细胞中在LPS刺激后以剂量依赖的方式抑制IRAK1的磷酸化并降低IKKα的激酶活性。
实施例52
NPI-1387在癌细胞中抑制TNF-α或LPS诱导的NF-κB DNA结合活性
将接种在6cm组织培养盘中的RPMI 8226或PC-3细胞用指定浓度的NPI-1387预处理1小时。0.25％(v/v)DMSO用作载体对照。对于RPMI 8226细胞，使用50ng/ml的LPS刺激细胞2小时。对于PC-3细胞，使用10ng/ml的TNF-α刺激细胞0.5小时。0.2％(v/v)DPBS用于未刺激的对照。使用NE-PER核与细胞质提取试剂盒(PierceBiotechnology)，根据生产商的说明，在蛋白酶抑制剂的存在下制备核提取物。使用BCA蛋白测定试剂盒(Pierce Biotechnology)，根据生产商的方案，测定核提取物的蛋白浓度。使用供应商详述的LightShift化学发光EMSA试剂盒(Pierce Biotechnology)测定核提取物的NF-κBDNA结合活性。通过将5’-生物素-AGT TGA GGG GAC TTT CCCAGG C和5’-GCC TGG GAA AGT CCC CTC AAC T在10mMTris-HCl、1mM EDTA和50mM NaCl中，于pH 8.0下使用热PCR循环仪器退火来制备生物素NF-κB探针。简而言之，结合反应由在总体积为20μl的1×结合缓冲液、2.5％(v/v)甘油、5mM MgCl2、50ng/μl聚(dI.dC)、0.05％(v/v)NP-40和100fmol生物素NF-κB探针中的核提取物的归一化质量组成。将结合反应在室温下孵育60分钟。当指明时，30分钟后将2μg的抗p65(Santa Cruz Biotechnology)或抗c-Jun(SantaCruz Biotechnolgy)抗体加入到结合反应中。在转移至Biodyne B尼龙膜(Pierce Biotechnology)上之前，将结合反应溶解于在0.5×TBE(Invitrogen)中预跑的6％聚丙烯酰胺DNA阻滞凝胶(Invitrogen)上。在UV透射仪上进行交联后，将印迹用链霉抗生物素-HRP结合物探测并用化学发光底物进行可视化。
NPI-1387在RPMI 8226和PC-3癌细胞中对DNA结合活性的影响示于图74。不受具体理论的约束，结果显示NPI-1387在LPS或TNF-α刺激的癌细胞系中以剂量依赖的方式抑制NF-κB的DNA结合活性。
实施例53
NPI-1387抑制PC-3菌落形成
将10cm组织培养盘中的PC-3细胞(200细胞/盘)用5μM、10μM和20μM NPI-1387以一式三份处理0.5小时至24小时。使用DMSO作为载体对照。在药物处理的每一时间点，除去培养基，将盘用Dulbecco磷酸盐缓冲的盐水(DPBS)洗涤两次，并为其提供新鲜的培养基。将细胞培养10天，每3天补充培养基。在第10天，将盘用冷DPBS洗涤，于4℃下，在冰冷的100％甲醇中固定10分钟，并将菌落用0.5％(w/v)结晶紫染色。将菌落进行手工计数，并将结果表示为相对于其各自载体对照的菌落％。
不同浓度的NPI-1387对PC-3细胞菌落形成的抑制示于图75。不受具体理论的约束，结果表明NPI-1387以时间依赖和剂量依赖的方式抑制PC-3癌细胞的菌落形成。
实施例54
48小时细胞毒性：NPI-1387在人癌细胞系中的IC 50 值
人结肠腺癌HT-29(ATCC# HTB-38)、前列腺癌PC-3(ATCC#CRL-1435)、乳腺癌MDA-MB231(ATCC# HTB-26)、多发性骨髓瘤RPMI 8226(ATCC# CCL-155)和U266(ATCC # TIB-196)细胞系以及人正常成纤维细胞CCD-27sk(ATCC# CRL-1475)均购自ATCC(Manassas，VA)。在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下将细胞保持在其各自ATCC推荐的培养基中。
细胞毒性测定的进行是通过将各个细胞系以适当的浓度接种于96孔平底板中，并使其在37℃、5％CO2和95％潮湿空气下附着24小时(在加入化合物当天将RPMI 8226和U266细胞接种到96孔板中)。以一式三份和160nM至20μM的浓度范围将系列稀释的NPI-1387加入到细胞中。最终浓度为0.25％(v/v)的DMSO被用作载体对照。48小时后通过具有λex＝535nm和λem＝590nm滤光器的Fusion微板荧光计(PerkinElmer)测量刃天青还原产物的荧光而评价细胞活力。使用S形剂量响应模型在XLFit 3.0或XLFit 4.0(ID Business Solutions Ltd)中计算IC50值(当确定50％的最大实测细胞毒性时的药物浓度)。
NPI-1387对不同人癌细胞系和正常皮肤成纤维细胞的48小时细胞毒性的IC50值示于表32。不受具体理论的约束，结果显示NPI-1387在体外对正常细胞的毒性较小并显示抗癌活性。
表32：NPI-1387在人癌细胞系中细胞毒性谱
Figure A200680034568D02331
Figure A200680034568D02341
 
CCD-27sk(人正常皮肤结缔组织细胞) ＝20 11
*48小时药物暴露
表1
式(I)化合物和TTL1抑制LPS诱导的TNF-α合成
 
LPS 式(I)(0.1μg/ml) 式(I)(1μg/ml) 式(I)(10μg/ml) TTL1(0.1μg/ml) TTL1(1μg/ml) TTL1(5.4μg/ml)
TNF-α(ng/ml) 120 108 67 50 57 60 38
表2
式(I)化合物和TTL1抑制SAC诱导的TNF-α合成
 
SAC 式(I)(0.1μg/ml) 式(I)(1μg/ml) 式(I)(10μg/ml) TTL1(0.1μg/ml) TTL1(1μg/ml) TTL1(5.4μg/ml)
TNF-α(ng/ml) 385 410 275 165 250 285 150
表3
式(I)化合物和TTL1抑制SAC诱导的IL-1合成
 
SAC 式(I)(0.1μg/ml) 式(I)(1μg/ml) 式(I)(10μg/ml) TTL1(0.1μg/ml) TTL1(1μg/ml) TTL1(5.4μg/ml)
IL-1α(pg/ml) 700 1350 1050 350 950 400 300
表4
式(I)化合物和TTL1不抑制SAC诱导的IL-6合成
 
SAC 通式(I)(0.1μg/ml)  通式(I)(1μg/ml)  通式(I)(10μg/ml)  TTL1(0.1μg/ml) TTL1(1μg/ml) TTL1(5.4μg/ml)
IL-6(ng/ml) 75 65 90 80 83 86 65
表5
TTL3抑制SAC诱导的TNF-α合成
 
未刺激的 SAC 0.001μg/ml 0.01μg/ml 0.1μg/ml 1μg/ml 10μg/ml
TNF-α(ng/ml) 5 375 80 75 85 60 80
表6
TTL3抑制SAC诱导的IL-1合成
 
未刺激的 SAC 0.001μg/ml 0.01μg/ml 0.1μg/ml 1μg/ml 10μg/ml
IL-1α(pg/ml) 0 650 200 220 190 180 170
表7
   TTL3抑制LPS诱导的TNF-α合成(TNF-α(ng/ml))
表8
PS/D-Gal给药后TTL3抑制死亡率
 
处理* 死亡率24小时 死亡率48小时
LPS/D-Gal 10/10 10/10
LPS/D-Gal+DMSO 8/10 9/10
LPS/D-Gal+TTL3 2/10 2/10
*所有处理均为腹膜内，LPS之前TTL3给药45分钟
表9
                    反映实施例19-21的测定
Figure A200680034568D02361
表10
系列1类似物对细胞活力的影响
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
TTL-1 85* 100 100
TTL-3 100 100 100
TTL-4 100 100 100
TTL-7 100 100 100
TTL-14 NA 100 100
 
TTL-15 100 100 100
LT-1-33 75** 80* 100
LT-1-37 55** 50** NA
LT-1-39 80* 100 100
LT-1-45 90* 100 100
LT-4-32 100 100 100
*活力轻微下降
**活力显著下降
NA：数据不可得
表11
系列1类似物对TNF-α的抑制百分数
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
TTL-1 50 30 10
TTL-3 70 55 30
TTL-4 0 0 0
TTL-7 0 0 0
TTL-14 45 30 25
TTL-15 0 0 0
LT-1-33 40 20 0
LT-1-37 50 45 0
LT-1-39 50 30 15
LT-1-45 50 30 0
LT-4-32 0 0 0
表12
系列2类似物对细胞活力的影响
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
TTL-1 70** 100 100
TTL-1Na 80* 90* NA
 
TTL-1K NA NA NA
LT-1-43 90* 100 NA
LT-1-44 90* 100 NA
表13
系列2类似物对TNF-α的抑制百分数
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
TTL-1 50 30 10
TTL-1Na 50 40 NA
TTL-1K NA 50 10
LT-1-43 20 10 NA
LT-1-44 0 0 0
表14
系列3类似物对细胞活力的影响
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
LT-1-73 NA 100 100
LT-1-74 NA 100 100
LT-1-78 100 100 100
LT-1-83 70** 100 100
LT-1-85 80* 100 100
LT-1-89 100 100 100
表15
系列3类似物对TNF-α的抑制百分数
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
LT-1-73 25 25 0
LT-1-74 NA 30 25
LT-1-78 20 0 0
LT-1-83 50 0 0
 
LT-1-85 55 45 10
LT-1-89 20 10 10
表16
系列4类似物对细胞活力的影响
 
化合物 10ug/ml 1ug/ml 100ng/ml
LT-1-90ra 45** 90* 100
CC-3-13ra 20** 75** 95*
CC-3-15ra 100 100 NA
CC-3-19P 70** 100 100
CC-3-22 100 100 100
CC-3-23 100 100 100
表17
系列4类似物对TNF-α的抑制百分数
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
LT-1-90ra NA 50 0
CC-3-13ra 95 50 10
CC-3-15ra 65 25 NA
CC-3-19P 50 0 0
CC-3-22 20 0 0
CC-3-23 0 0 0
表18
系列5类似物对细胞活力的影响
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
LT-1-98 100 100 100
LT-1-97 100 100 100
LT-1-104 100 100 100
CC-3-17 75** 85* 90*
 
CC-3-20 100 100 100
CC-3-25 90* 100 100
CC-3-27 100 100 100
表19
系列5类似物对TNF-α的抑制百分数
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
LT-1-98 55 0 0
LT-1-97 50 20 0
LT-1-104 25 0 0
CC-3-17 25 20 10
CC-3-20 50 20 0
CC-3-25 30 10 0
CC-3-27 15 0 0
表20
系列6类似物对细胞活力的影响
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
CC-3-09 100 100 100
CC-3-14 NA 100 100
表21
系列6类似物对TNF-α的抑制百分数
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
CC-3-09 10 0 0
CC-3-14 NA 30 25
表22
系列7类似物对细胞活力的影响
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
 
LT-1-99 100 100 100
LT-1-96(反式) 100 100 100
LT-1-96(顺式) 100 100 100
LT-1-102 100 100 100
CC-3-24 100 100 100
CC-3-26 100 100 100
CC-3-45 100 100 100
LT-1-46 90* 90* 100
CC-3-69 NA 100 100
CC-3-21 NA 100 100
表23
系列7类似物1对的TNF-α抑制百分数
 
化合物 10μg/ml 1μg/ml 100ng/ml
LT-1-99 50 50 20
LT-1-96(反式) 50 0 0
LT-1-96(顺式) 50 0 0
LT-1-102 0 0 0
CC-3-24 55 25 0
CC-3-26 20 0 0
CC-3-45 0 0 0
LT-1-46 20 0 0
CC-3-69 NA 20 0
CC-3-21 NA 0 0
虽然示出并详细描述并例示了广泛公开的发明的具体实施方案以说明本发明的应用和基本原则，但本领域技术人员应该理解，可在不偏离这些原则的情况下将本发明以另外方式实施。

Claims (61)

1.具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568C00021
其中：
R2选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基；
R17选自C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基和C5-C12芳基；
R9选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基和C5-C12芳基；R3-R5、R7、R8和R11-R13均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基和C5-C12芳基；
R6选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12炔基；
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇和C5-C12芳基；
R14和R15分别选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇和C5-C6芳基；并且
R16选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯，及其酸加合盐。
2.如权利要求1所述的化合物，其中R16是氢。
3.如权利要求1所述的化合物，其中R17是环己烷；R16是氢；并且R3-R5、R7、R8、R11-R15均为氢。
4.如权利要求1所述的化合物，其中R16和R17形成3元至12元的环。
5.下式化合物及其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00031
6.治疗动物中疾病状态的方法，其包括：将权利要求1所述的化合物与所述动物的活组织接触，所述疾病状态选自炎症、结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、癌、与癌或其治疗相关的疲劳降低、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述化合物是下列化合物及其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00041
8.治疗动物中炎性疾病状态的方法，其包括：
将权利要求1所述的化合物与所述动物的活组织接触。
9.如权利要求8所述方法，其中所述炎性疾病状态选自：
结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤。
10.如权利要求8所述的方法，其中所述化合物具有下列结构及其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00051
11.治疗动物中癌的方法，包括：
使权利要求1所述的化合物与所述动物的活组织接触。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述癌选自多发性骨髓瘤和人前列腺腺癌。
13.如权利要求11所述的方法，其中所述化合物具有下列结构及其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00061
14.具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568C00071
其中：
若R3-R5、R7、R8、R11-R13均不是氢、R6不是甲基、R10不是CH2或若R10是CH2OH并且R11是OH，则R2选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基；若R3-R5、R7、R8、R11-R13均为氢、R6是甲基并且R10是CH2或CH2OH，则R2选自氢、卤素、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C2-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、C2-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C2-C12烷基、C2-C12取代烷基、C2-C12烯基和C2-C12取代烯基；
R3、R4、R5、R7、R8和R11-R13均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基和C5-C12芳基；
R6选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12炔基；
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇和C5-C12芳基；
R16选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基；并且
R17选自C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基和C5-C12芳基；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
15.如权利要求14所述的化合物，其中R16是氢。
16.如权利要求14所述的化合物，其中R17是环己烷；R16是氢；并且R3-R5、R7、R8、R11-R15均为氢。
17.如权利要求18所述的化合物，其中R16和R17形成3至12元环。
18.具有下列结构的化合物及其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00091
19.治疗动物中疾病状态的方法，其包括：将权利要求14所述的化合物与所述动物的活组织接触，所述疾病状态选自炎症、结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、癌、与癌或其治疗相关的疲劳降低、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤。
20.如权利要求19所述的方法，其中R16和R17形成3至12元环。
21.如权利要求19所述的方法，其中所述化合物是下列化合物及其前药酯和酸加合盐：
22.治疗动物中炎性状态的方法，包括：将权利要求14所述的化合物与所述动物的活组织接触。
23.如权利要求21所述的方法，其中所述炎性疾病状态选自：
结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤。
24.如权利要求22所述的方法，其中所述化合物具有下列结构及其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00111
25.治疗动物中癌的方法，其包括：
将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568C00112
其中：
R2选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基；
R3-R5、R7、R8和R1-R13均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基和C5-C12芳基；
R6选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12炔基；
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇和C5-C12芳基；并且
R14和R15分别选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇和C5-C6芳基；
R16选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基；
R17选自C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基和C5-C12芳基；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述癌选自多发性骨髓瘤和人前列腺腺癌。
27.如权利要求25所述的方法，其中化合物具有下列结构，包括其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00131
28.如权利要求25所述的方法，其中R16和R17形成3至12元环。
29.具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568C00132
其中：
R2选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基；
R9选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基、C1-C12醇、C1-C12酰基和C5-C12芳基；
R3-R5、R7、R8和R11-R13均分别选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基、C2-C12炔基和C5-C12芳基；
R6选自氢、卤素、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C2-C12炔基；
R10选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C12醇和C5-C12芳基；
R14和R15分别选自氢、卤素、CH2、C1-C6烷基、C1-C6取代烷基、C2-C6烯基、C2-C6取代烯基、C1-C6醇和C5-C6芳基；并且
R16选自氢、卤素、COOH、C1-C12羧酸、C1-C12酰卤、C1-C12酰基基团、C1-C12酯、C1-C12仲酰胺、(C1-C12)(C1-C12)叔酰胺、(C1-C12)环酰胺、(C1-C12)胺、C1-C12醇、(C1-C12)(C1-C12)醚、C1-C12烷基、C1-C12取代烷基、C2-C12烯基、C2-C12取代烯基和C5-C12芳基；
R17选自C5-C12环烷基；C5-C12环烯基；C5-C12取代环烷基；C5-C12取代环烯基；苯基和C5-C12芳基；
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
30.如权利要求29所述的化合物，其中R16是氢。
31.如权利要求29所述的化合物，其中R17是环己烷；R16是氢；并且R3-R5、R7、R8、R11-R15均为氢。
32.如权利要求29所述的化合物，其中R16和R17形成3至12元环。
33.下列化合物及其前药酯和酸加合盐：
34.治疗动物中疾病状态的方法，其包括：将权利要求29所述的化合物与所述动物的活组织接触，所述疾病状态选自炎症、结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、癌、与癌或其治疗相关的疲劳降低、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤。
35.如权利要求41所述的方法，其中所述化合物是下列化合物及其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00161
36.如权利要求34所述的方法，其中R16和R17形成3至12元环。
37.治疗动物中炎性疾病状态的方法，包括：
将权利要求29所述的化合物与所述动物的活组织接触。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述炎性疾病状态选自：结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤。
39.如权利要求37所述的方法，其中所述化合物具有下列结构及其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00171
40.如权利要求37所述的方法，其中R16和R17形成3至12元环。
41.治疗动物中癌的方法，包括：
将权利要求29所述的化合物与所述动物的活组织接触。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述癌选自多发性骨髓瘤和人前列腺腺癌。
43.如权利要求41所述的方法，其中所述化合物具有下列结构，包括其前药酯和酸加合盐：
Figure A200680034568C00181
44.如权利要求41所述的方法，其中R16和R17形成3至12元环。
45.具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568C00182
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐。
46.具有下列化学结构的合成化合物的制备方法：
Figure A200680034568C00191
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯及其酸加合盐，所述制备方法包括下列步骤：
进行Diels-Alder反应，其使具有2个或多个环的二烯与亲二烯化合物反应，以得到具有3个或多个环的结果化合物；以及
产生所述合成化合物。
47.具有下列化学结构的化合物的纯化方法：
Figure A200680034568C00192
其包括色谱过程。
48.治疗动物中炎性疾病状态或瘤形成疾病状态的方法，其包括：
将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568C00201
49.如权利要求48所述的方法，其中所述炎性疾病选自：结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤。
50.如权利要求48所述的方法，其中所述瘤形成疾病是癌。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述癌选自乳癌、肉瘤、白血病、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌、黑素瘤、血管瘤和脑或中枢神经系统(CNS)癌。
52.具有下列化学结构的化合物：
Figure A200680034568C00211
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯，及其酸加合盐。
53.具有下列化学结构的合成化合物的制备方法：
其中所述化合物包括上述化合物的前药酯，及其酸加合盐，所述制备方法包括下列步骤：
进行Diels-Alder反应，其使具有2个或多个环的二烯与亲二烯化合物反应，以得到具有3个或多个环的结果化合物；以及
产生所述合成化合物。
54.具有下列化学结构的化合物的纯化方法：
Figure A200680034568C00221
其包括色谱过程。
55.治疗动物中炎性疾病状态或瘤形成疾病状态的方法，其包括：
将化合物与所述动物的活组织接触，其中所述化合物具有下列化学结构：
Figure A200680034568C00222
56.如权利要求55所述的方法，其中所述炎性疾病选自：结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病以及化疗相关的粘膜损伤。
57.如权利要求55所述的方法，其中所述瘤形成疾病是癌。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述癌选自乳癌、肉瘤、白血病、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌、黑素瘤、血管瘤以及脑或中枢神经系统(CNS)癌。
59.具有下列化学结构的化合物在制备治疗疾病的药物中的用途：
Figure A200680034568C00231
所述疾病选自：结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病和化疗相关的粘膜损伤、乳癌、肉瘤、白血病、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌、黑素瘤、血管瘤以及脑或中枢神经系统(CNS)癌。
60.具有下列化学结构的化合物在制备治疗疾病的药物中的用途：
所述疾病选自：结节性胸膜炎、类风湿性胸膜炎、心血管疾病、皮肤发红、糖尿病、移植排斥反应、中耳炎(内耳感染)、窦炎和病毒感染、感染性休克、移植、移植物抗宿主病、缺血/再灌注损伤、格雷夫斯眼病、桥本甲状腺炎、甲状腺相关眼病、结节性甲状腺肿、疱疹性角膜基质炎、微生物性角膜炎、周边溃疡性角膜炎、贝赫切特病、眼色素层炎、玻璃体视网膜增生病、狂犬病病毒眼病、伏格特-小柳-原田病、视网膜病、视网膜激光凝固术、急性视网膜坏死综合征、系统性血管炎、复发性口疮性口炎、新生血管性青光眼、眼感染、眼过敏病、视网膜脱离、视神经炎、多发性硬化、系统性硬化病、遗传性视网膜变性、沙眼、自身免疫性疾病和化疗相关的粘膜损伤、乳癌、肉瘤、白血病、卵巢癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、肝癌、肾癌、内分泌癌、皮肤癌、黑素瘤、血管瘤以及脑或中枢神经系统(CNS)癌。
61.药物组合物，其包含药物可接受的载体和至少一种下列化合物：
Figure A200680034568C00251
和
Figure A200680034568C00252
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