CN101361679A - 食蟹猴脑出血模型的建立方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了食蟹猴脑出血模型的建立方法，包括以下步骤：(1)抽取食蟹猴自体动脉血，麻醉；(2)使用五点法，将所述食蟹猴头部固定在灵长类动物立体定向仪上，将所指坐标设为坐标原点，将前后向为16mm、深度为16mm、侧向为14mm的坐标点设定为注射点；(3)颅骨钻孔；(4)利用定位微量注射器针分多次将1.2－1.8ml，所述自体动脉血分别注射到从所述注射点向上3.5mm的范围内；(5)缝合头皮，解除麻醉。利用本发明提供的食蟹猴脑出血模型的建立方法建立的脑出血模型能够建立稳定有效的脑出血模型，动物无死亡。

Description

食蟹猴脑出血模型的建立方法

技术领域

本发明涉及动物脑出血模型的建立方法，具体地讲，涉及食蟹猴脑出血模型的建立方法。

背景技术

美国脑出血(ICH)病人占全部脑卒中患者的10％～15％，在中国和日本则占到所有脑卒中病人的20％-30％。尽管其发病率在全部脑卒中病人中只占少数，但死亡率是缺血性脑卒中病人的2～6倍。而目前临床上现有的治疗方法，无论是外科治疗还是内科治疗，ICH愈后均不佳。探索其它治疗方法迫在眉睫。而建立较真实模拟ICH病理改变的灵长类动物模型是研究的基础。脑实质内注入自体血是大动物实验中最为常用的方法，可以较好的模拟ICH的病理改变。但是现在还没有稳定的、重复性良好的灵长类脑出血模型的建立方法，容易造成动物死亡。所以，有必要建立稳定的脑出血灵长类动物模型，为各种药物及生物制品的动物实验提供更接近于人类种属的模型。

发明内容

本研究的目的是通过脑实质内注入自体血建立稳定有效、不会致死的食蟹猴脑出血模型。

本发明提供的食蟹猴脑出血模型的建立方法包括以下步骤：

(1)抽取食蟹猴自体动脉血，对所述食蟹猴进行麻醉；

(2)使用五点法，通过上颌托、双侧外耳道和双侧眶下缘中点将所述食蟹猴头部固定在灵长类动物立体定向仪上，将所述灵长类动物立体定向仪的所指坐标设为坐标原点，将前后向为16mm、深度为16mm、侧向为14mm的坐标点设定为注射点；

(3)以所述注射点颅顶部投影点为钻孔点，切开所述钻孔点的头皮，进行钻孔处理，得到颅骨钻孔；

(4)通过所述颅骨钻孔，利用微量注射器针分多次，较佳为2-4次，将1.2-1.8ml所述自体动脉血分别注射到从所述注射点向上3.5mm的范围内；

(5)缝合头皮，解除麻醉。

其中，步骤(1)中所述麻醉用的药剂为体积比为1：3的氯胺酮/速眠新II，用量按每千克体重注射0.1ml。

交加地，步骤(4)为分3次将1.5ml所述自体动脉血分别注射到所述注射点、所述注射点向上1.5mm和所述注射点向上3mm的位置，每个位置注血0.5ml，前两次注射后留针5min，全部注血结束后留针15min。

所述食蟹猴较佳为3-4岁，4-4.5kg。

利用本发明提供的食蟹猴脑出血模型的建立方法建立的脑出血模型能够建立稳定有效的脑出血模型，不会使食蟹猴致死。

附图说明

图1为用灵长类立体定向仪固定食蟹猴头部的示意图；

图2为建模后的T2WI冠状位图像。

图中：

1-上颌；2-眶下缘中点；3-外耳道；4-钻孔点；5-血肿信号影；6-水肿信号。

具体实施方式

所用食蟹猴为雄性，约3.5岁，约4.2kg，由军事医学科学院实验动物中心提供。普通级，许可证号：SCXK(军)2002-001。动物用悬挂在脖颈处刻有档案号的标牌作为该动物的编号，动物进入动物室检疫2周。动物实验室为中国医学科学院实验动物研究所非啮齿类动物设施，普通级环境，许可证号：SYXK(京)2005-0042，温度18-28℃，相对湿度：40-70％，机械送排风，照度150-300Lux，照明时间12h/12h。笼架具在投入前进行消毒，单笼饲养。每天上下午各加料一次，每天给水果一次。一级猴料，普通级，供应商为中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，合格证号SCXK-(军)2002-018。自由进食，市政管线自来水，自动饮水系统，自由饮水。

所用试剂出处如下

灵长类立体定向仪为美国Stoelting公司的51851型立体定向仪。

食蟹猴脑出血模型的建立方法如下所述。

术前晚禁食，术前4小时禁水。用肝素化(肝素钠40U/ml)的采血针抽取食蟹猴自体股动脉血2ml备用。氯胺酮/速眠新II按1：3混合后0.1mL/kg，肌肉注射。

将食蟹猴头部固定在Stoelting 51851立体定向仪上，五点法固定食蟹猴头部，读取坐标并设为坐标原点，所述五点分别为上颌托、双侧外耳道、双侧眶下缘中点。注射点坐标为(AP16mm，D16，L14)，其中AP代表前后方向，D代表深度，L代表侧方坐标。头顶部备皮，碘伏消毒术野，切开皮肤、皮下组织，骨膜剥离器向两侧分开骨膜，以注射点颅顶部投影点为中心，颅骨钻孔。尖刀片切开硬膜约1mm，定位微量注射器针末端于注射坐标点。分3次注射，每点注血0.5ml后留针5min，向上移动1.5mm继续注射。全部注血结束后留针15min。拔出微量注射器，缝合头皮。

术毕用和麻醉药等体积，即0.1mL/kg的氯醒宁，肌肉注射，以解除麻醉。电热毯保温，心电监护心率、呼吸、血压、血氧饱和度。食蟹猴清醒后放回猴笼，术后第1日通过胃管给以牛奶80ml，每日3次，次日恢复正常饮食。术后前3天青霉素40万单位，肌肉注射。

如图1所示，食蟹猴通过上颌1、双侧眶下缘中点2、双侧外耳道3固定于立体定向仪，按注射靶点体表投影点确定右顶颅骨钻孔的钻孔点4。

如图2所示，建模后1天食蟹猴T2WI冠状位图像，从图像中可以看出黑色的血肿信号影5和白色环状的水肿信号6。

按照以上方法，建立了24个食蟹猴脑出血模型，无动物死亡，所得模型稳定有效。

Claims (3)

1、食蟹猴脑出血模型的建立方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

(1)抽取食蟹猴自体动脉血，对所述食蟹猴进行麻醉；

(2)使用五点法，通过上颌托、双侧外耳道和双侧眶下缘中点将所述食蟹猴头部固定在灵长类动物立体定向仪上，将所述灵长类动物立体定向仪的所指坐标设为坐标原点，将前后向为16mm、深度为16mm、侧向为14mm的坐标点设定为注射点；

(3)以所述注射点颅顶部投影点为钻孔点，切开所述钻孔点的头皮，进行颅骨钻孔；

(4)利用微量注射器针分多次将1.2-1.8ml所述自体动脉血分别注射到从所述注射点向上3.5mm的范围内；

(5)缝合头皮，解除麻醉。

2、根据权利要求1所述的食蟹猴脑出血模型的建立方法，其特征在于：步骤(1)中所述麻醉用的药剂为体积比为1：3的氯胺酮/速眠新II。

3、根据权利要求1所述的食蟹猴脑出血模型的建立方法，其特征在于：步骤(4)为分3次将1.5ml所述自体动脉血分别注射到所述注射点、所述注射点向上1.5mm和所述注射点向上3mm的位置，每个位置注血0.5ml，前两次注射后留针5min，全部注血结束后留针15min。

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