CN101355940A

CN101355940A - 用于检测具有至少一种促淀粉样变蛋白的淀粉样沉积物的体内或体外方法

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Publication number: CN101355940A
Application number: CNA2006800338609A
Authority: CN
Inventors: 威廉·E·克伦克; 小切斯特·A·马西斯
Original assignee: University of Pittsburgh
Current assignee: University of Pittsburgh
Priority date: 2005-09-16
Filing date: 2006-09-14
Publication date: 2009-01-28
Anticipated expiration: 2026-09-14
Also published as: EP1937260A2; CN101355940B; WO2007035405A3; WO2007035405A2; US20080305040A1; JP2009508863A

Abstract

可通过下述步骤检测淀粉样沉积物：给对象施用或向样品应用如所述的式(I)或式(II)或结构1－45的化合物，然后成像以检测所述化合物与淀粉样沉积物的结合，其中所述沉积物的所述促淀粉样变蛋白可以是AL、AH、ATTR、Aβ2M、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、AFib、ACys、ABri、ADan、APrP、ACal、AIAPP、AANF、APro、AIns、AMed、AKer、A(tbn)、和/或ALac。

Description

用于检测具有至少一种促淀粉样变蛋白的淀粉样沉积物的体内或体外方法

背景技术

淀粉样变性是一种缓慢进展的病症，其可导致显著的病态和死亡。多种疾病过程落入“淀粉样变性”的范畴，其特征在于在一个或更多器官中数量足以损害正常功能的各种不溶性纤维状蛋白的细胞外组织沉积，这些蛋白通称为“淀粉样蛋白”。

淀粉样沉积物在细胞外且不被机体代谢或清除。淀粉样蛋白可通过与碘发生淀粉样染色反应而粗略辨别；因此命名为淀粉样蛋白。微观上来说，可以通过其细胞外分布、通过当用刚果红染色时其染色性质和光学性质、以及通过其蛋白纤丝结构区分淀粉样蛋白。因此，在光学显微镜下，在固定组织内和在体内，淀粉样蛋白是对刚果红染料有亲和力的均匀的、高度折光的物质。在电子显微镜下，淀粉样蛋白由100A°(10nm)的线性非分支纤丝组成；在x-射线衍射下，其具有交叉β模式(cross-betapattern)。

与淀粉样变性相关的疾病均以淀粉样沉积物的累积为特征。所述淀粉样沉积物的特征在于存在一种或多种促淀粉样变蛋白(amyloidogenicprotein)，所述促淀粉样变蛋白源于具有异常结构或在血清中异常增加的前体蛋白。

淀粉样蛋白形成及其在组织中沉积的原因是未知的。在不同生物化学类型的淀粉样变性中，病因机制可能不同。例如，在继发性淀粉样变中，可能存在前体蛋白(急性期反应物：血清淀粉样蛋白A)代谢的缺陷；而在遗传性淀粉样变性中，似乎存在遗传性变体蛋白。在原发性淀粉样变性中，骨髓细胞的单克隆群产生轻链的片段或整个轻链，所述轻链可被异常加工而形成淀粉样蛋白。

已从生物化学角度定义了三种主要类型的淀粉样蛋白和几种较不常见的形式。第一种类型具有与免疫球蛋白轻链可变区的一部分同源的N末端序列，其称为AL，出现于原发性淀粉样变性和与多发性骨髓瘤相关的淀粉样变性中。第二种类型具有非免疫球蛋白的独特N末端序列，其称为AA蛋白，出现于具有继发性淀粉样变性的患者中。第三种类型与家族性淀粉样多神经病相关，其通常是具有单一氨基酸替换的转甲状腺素蛋白(前清蛋白)分子。已发现其它一些遗传性淀粉样蛋白由一些家族中的突变型凝溶胶蛋白、一些其它家族中的突变型脱辅基脂蛋白A-I、以及遗传性脑动脉淀粉样蛋白中的其它突变型蛋白组成。在与长期血液透析相关的淀粉样蛋白中，2-微球蛋白已组成淀粉样蛋白。与皮肤衰老和内分泌器官相关的淀粉样蛋白可能代表了另一些生物化学形式的淀粉样变性。在阿尔茨海默病的组织病理学损伤中发现的淀粉样蛋白由蛋白质组成。关于对各种形式淀粉样蛋白的化学分析已导致更精确的分类。一种独特的蛋白，称为五聚环蛋白(pentraxin)的AP(或血清AP)与所有形式的淀粉样蛋白普遍相关并形成诊断检查的基础。

目前公认有三种主要的全身性临床形式。当没有并发疾病时，淀粉样变性被分类为原发性或特发性(AL形式)的；当并发感染性(结核病、支气管扩张症、骨髓炎、麻风)或炎症性(类风湿性关节炎、肉芽肿性回肠炎)慢性疾病时，淀粉样变性被分类为继发的、获得的或反应性的(AA形式)。淀粉样蛋白还与多发性骨髓瘤(AL)、霍奇金病(AA)、其它肿瘤、以及家族性地中海热(AA)相关。淀粉样变性可能伴随衰老。第三种主要类型以与其它疾病不相关的家族性形式出现，常常不与神经病、肾病和心脏病的区分性类型相关。

在原发性(AL)淀粉样变性中，可涉及心脏、肺、皮肤、舌、甲状腺和肠道。局限性的淀粉样蛋白“肿瘤”可见于呼吸道或其它部位。常涉及实质性器官(肝、脾、肾)和血管系统，尤其是心脏。

继发(AA)淀粉样变性表现为易见于脾、肝、肾、肾上腺和淋巴结。然而，没有器官系统不受伤害，并且可能广泛累及血管，虽然临床上显著的心脏累及很少见。肝和脾经常是扩大的、牢固的且有弹力的。肾通常是扩大的。脾的切面具有大的、透明的蜡样区域，其中正常肾小体被苍白淀粉样蛋白所代替，产生西米脾(sago spleen)。

遗传性淀粉样变性的特征在于周围感觉和运动神经病变，常常是自主神经病变、和心血管和肾的淀粉样蛋白。可能发生腕管综合征和玻璃体异常。

与某些恶性肿瘤(例如多发性骨髓瘤)相关的淀粉样蛋白具有与特发性(AL)淀粉样蛋白同样的分布；对于另一些恶性肿瘤(例如甲状腺髓样癌)而言，其可仅与所述肿瘤相关地局部性发生或在转移瘤中发生。淀粉样蛋白常见于发病于成人的糖尿病个体的胰腺中。

虽然在具体临床症状和征候的基础上可怀疑是淀粉样变性，但其只有通过活组织检查才可明确诊断。目前，腹部皮下脂肪垫抽取和直肠粘膜活组织检查是最好的筛选检查。其它可用的活组织检查部位是齿龈、皮肤、神经、肾和肝。组织切片应用刚果红染料染色并以偏光显微镜观察淀粉样蛋白的特征性绿色双折射。同位素标记的血清AP已被用于闪烁扫描检查以确认淀粉样变性的诊断。需要开发更好的诊断方法以便提供早期诊断，从而使有效治疗成为可能。

发明内容

本发明涉及用于检测对象中包含至少一种促淀粉样变蛋白的至少一种淀粉样沉积物的体内或体外方法，其包括以下步骤：

(a)给患有淀粉样变性相关疾病的对象施用可检测量的药物组合物，所述药物组合物包含药学可接受载体和至少一种式I化合物，

其中，

(i)Z是S、NR’、O或C(R’)₂，使得当Z是C(R’)₂时，所述杂环的互变异构形式可形成吲哚：

其中R’是H或低级烷基，

(ii)Y是NR¹R²、OR²或SR²，

(iii)R¹选自H、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、(C＝O)-R’、R_ph、和(CH₂)_nR_ph(其中n＝1、2、3或4且R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’和COOR’，其中R’是H或低级烷基)；

(iv)R²选自H、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、(C＝O)-R’、R_ph和(CH₂)_nR_ph(其中n＝1、2、3或4且R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’和COOR’，其中R’是H或低级烷基)；

(v)R³选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph、CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(vi)R⁴选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph、CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(vii)R⁵选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph、CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(viii)R⁶选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph、CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(ix)R⁷选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph、CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(x)R⁸选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph、CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(xi)R⁹选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph、CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(xii)R¹⁰选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph、CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

作为替代，R³至R¹⁰中之一可以是具有或不具有螯合金属基团的螯合基团，所述螯合基团是W-L或V-W-L的形式，其中V选自-COO-、-CO-、-CH₂O-和-CH₂NH-；W是-(CH₂)_n，其中n＝0、l、2、3、4或5，并且L是：

其中M选自Tc和Re，

及其放射性标记的衍生物和药学可接受盐，其中至少一个所述取代基结构包含可检测标记；

以及

(b)检测所述化合物与包含至少一种促淀粉样变蛋白的淀粉样沉积物的结合，其中所述促淀粉样变蛋白选自AL、AH、ATTR、Aβ2M、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、AFib、ACys、ABri、ADan、APrP、ACal、AIAPP、AANF、APro、AIns、AMed、AKer、A(tbn)和ALac。

本发明还涉及用于检测包含至少一种促淀粉样变蛋白的至少一种淀粉样沉积物的体内方法。本发明的方法包括以下步骤：

(a)给患有淀粉样变性相关疾病的对象施用可检测量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种如上所定义之式I化合物和药学可接受载体，

由此所述化合物结合至所述含有至少一种促淀粉样变蛋白的淀粉样沉积物上，所述促淀粉样变蛋白选自AL、AH、ATTR、Aβ2M、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、AFib、ACys、ABri、ADan、APrP、ACal、AIAPP、AANF、APro、AIns、AMed、AKer、A(tbn)和ALac；

(b)辐照所述对象并采集由所述化合物发出的成像数据；然后

(c)处理所述成像数据。

另外，本发明还包含如上所定义的式(I)化合物用于检测患有淀粉样变性相关疾病的对象中至少一种淀粉样沉积物的用途。在一个相关的方面，本发明还包含式(I)化合物在制备用于检测这类对象中至少一种淀粉样沉积物的药物中的用途。

在一个实施方案中，所述促淀粉样变蛋白源自选自以下的至少一种蛋白质前体：免疫球蛋白轻链、免疫球蛋白重链、转甲状腺素蛋白、β2-微球蛋白、血清(脱辅基)脂蛋白AA、脱辅基脂蛋白AI、脱辅基脂蛋白AII、凝溶胶蛋白、溶菌酶、纤维蛋白原α-链、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatinC)、ABriPP、ADanPP、朊病毒蛋白、降钙素(原)、胰岛淀粉样多肽、心房钠利尿因子、催乳素、胰岛素、乳粘附蛋白(lactadherin)、角膜上皮蛋白(kerato-epithelin)、Pindborg肿瘤相关的前体蛋白(tbn)和乳铁蛋白。

在一个实施方案中，所述患者群包括患有与系统性淀粉样变性相关的疾病的对象。

在另一个实施方案中，所述患者群包括患有脑淀粉样血管病变的对象。

在另一个实施方案中，所述至少一种淀粉样沉积物位于所述对象的中胚层组织中。在本实施方案的一个方面，所述组织选自周围神经、皮肤、舌、关节、心或肝。

在又一个实施方案中，淀粉样蛋白位于实质性器官内。在本实施方案的一个方面，所述器官选自脾、肾、肝和肾上腺。

在又一个实施方案中，所述与系统性淀粉样变性相关的疾病选自多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴瘤、慢性炎性疾病、类风湿性关节炎、感染性疾病、皮肌炎、硬皮病、局限性肠炎、溃疡性结肠炎、结核病、慢性骨髓炎、支气管扩张症、皮肤脓肿、肺脓肿、癌症、霍奇金病、家族遗传性淀粉样变性、家族性地中海热、家族性痴呆和家族性淀粉样蛋白多神经病。在本实施方案的一个方面，所述皮肤脓肿或肺脓肿由皮下使用海洛因而引起。

本发明的方法包括通过选自以下的方法进行检测：γ成像、磁共振成像、和磁共振波谱。在本实施方案的一个方面，通过PET或SPECT的γ成像进行所述检测。

在又一个实施方案中，通过静脉内注射施用所述药物组合物。

在一个不同的实施方案中，所述患者群包括因慢性肾衰竭而接受血液透析的对象。在另一个实施方案中，所述对象正患有与局限性淀粉样变性相关的疾病。在本实施方案的一个方面，所述至少一种淀粉样沉积物位于选自以下的组织中：腱滑膜(tenosynovium)组织、关节组织、主动脉组织、甲状腺组织、胰岛组织、衰老中垂体组织、医源性组织、心房组织和角膜组织。在本实施方案的一个方面，所述至少一种淀粉样沉积物位于胰中。在本实施方案的一个方面，所述与局限性淀粉样变性相关的疾病选自原发性骨髓瘤、家族性痴呆、海绵状脑病、c-细胞甲状腺瘤、胰岛素瘤、催乳素瘤和pindborg瘤。

在一些实施方案中，式(I)化合物包含式(II)化合物或所述化合物的放射性标记衍生物、药学可接受盐、水合物、溶剂化物或前药，

其中：

R¹是氢、-OH、-NO₂、-CN、-COOR、-OCH₂OR、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基或卤素；

R是C₁-C₆烷基；

R²是氢或卤素；

R³是氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；和

R⁴是氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基，其中当R²是氢或非放射性卤素时，所述烷基、烯基或炔基包含放射性碳，或者被放射性卤素所取代；

前提是当R¹是氢或-OH、R²是氢且R⁴是-¹¹CH₃时，则R³是C₂-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；并且

另一个前提是当R¹是氢、R²是氢且R⁴是-(CH₂)₃ ¹⁸F时，则R³是C₂-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基，其中至少一个所述取代基结构含有可检测标记。

在又一个实施方案中，式(I)的所述淀粉样蛋白成像剂选自结构1-45或其放射性标记的衍生物，其中所述化合物包含至少一个可检测标记。

附图说明

图1显示了使柯胺G衍生物X-34和硫代黄素衍生物6-CN-BTA-l与心组织、肺组织、膀胱组织、淋巴结组织和骨的淀粉样沉积物的结合。

发明详述

如所指出，“淀粉样变性”意指与淀粉样蛋白沉积相关的病理状况。这种状况的举例说明是阿尔茨海默病、唐氏综合征、2型糖尿病、遗传性脑出血淀粉样变性(荷兰型)、淀粉样蛋白A(反应性)、继发性淀粉样变性、MCI、家族性地中海热、伴有荨麻疹和耳聋的家族性淀粉样肾病(Muckle-wells综合征)、淀粉样蛋白λL-链或淀粉样蛋白κL-链(特发性，与骨髓瘤或巨球蛋白血症相关)Aβ2M(长期血液透析)、ATTR(家族性淀粉样多神经病(葡萄牙型、日本型、瑞典型))、家族性淀粉样心肌病(丹麦型)、分离的心脏淀粉样蛋白、系统性老年淀粉样变性、AIAPP或淀粉样蛋白胰岛素瘤(amylin insulinoma)、心房钠利尿因子(分离的心房淀粉样蛋白)、降钙素原(甲状腺髓样癌)、凝溶胶蛋白(家族性淀粉样变性(芬兰型))、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(伴随淀粉样变性的遗传性脑出血(冰岛型))、AApo-A-I(家族性淀粉样多神经病-衣阿华型)、AApo-A-II(小鼠加速衰老)、与纤维蛋白原相关的淀粉样蛋白、以及Asor或Pr P-27(瘙痒病，克-雅氏病，格-施-沙综合征，牛海绵状脑病)。还包括在脱辅基脂蛋白E4等位基因纯合的人中、和在临床上诊断有亨廷顿病的患者中检测淀粉样变性疾病。本发明包括与淀粉样蛋白斑块沉积相关的疾病。本发明主要关注在非脑组织中检测淀粉样蛋白沉积。

根据本发明，对于具有至少一种淀粉样沉积物(即包含至少一种促淀粉样变蛋白的沉积物)的对象或处于此风险中的对象，通过下述方法进行体内或体外检测，所述方法包括：

(a)给患有淀粉样变性相关疾病的对象施用可检测量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种下式化合物：

其中

其中R’是H或低级烷基，

(ii)Y是NR¹R²、OR²或SR²，

作为替代，R³至R¹⁰中之一可以是W-L或V-W-L形式的螯合基团(具有或不具有螯合金属基团)，其中V选自-COO-、-CO-、-CH₂O-和-CH₂NH-；W是-(CH₂)_n，其中n＝0、l、2、3、4或5，并且L是：

其中M选自Tc和Re，

及其放射性标记的衍生物和药学可接受盐，其中至少一个所述取代基结构包含可检测标记；以及

在原发性系统性淀粉样变性(AL)中，所述促淀粉样变蛋白是由克隆的浆细胞产生的构象异常的单克隆免疫球蛋白轻链(κ或λ)。纤丝沉积于肾、心、肝和其它器官/组织中。

在一些情况下，免疫球蛋白链淀粉样变性纤丝仅含有重链序列而不是轻链序列。在此情况下，所述疾病称为“重链淀粉样变性”(AH)。

在转甲状腺素蛋白淀粉样变性中，所述前体蛋白是正常的或突变型序列TTR’是一种在肝脏和脉络丛中合成的转运蛋白。TTR是4个同样亚基的四聚物，每个亚基有127个氨基酸。正常序列的TTR在老年个体(＞70岁)的心室中形成淀粉样沉积物；此疾病也称为“老年性心脏淀粉样变性”。TTR心脏淀粉样变性的发病率随年龄而日益增加，影响着25％或更多的超过90岁的人群。正常序列的ATTR可偶然通过尸检所见，或其可引起临床症状(例如心力衰竭和心律失常)。

TTR中的点突变增加了TTR形成淀粉样蛋白的趋势。促淀粉样变性TTR突变是作为具有可变外显率的常染色体显性疾病而遗传的。已知超过60种促淀粉样变性TTR突变。最常见的TTR突变是TTR Val30Met(常见于葡萄牙、日本和瑞典)和TTR Val122Ile(由3.9％的非洲裔美国人携带)。促淀粉样变性TTR突变主要导致在周围神经、心、胃肠道和玻璃体中的沉积物。

在β2-微球蛋白淀粉样变性中，所述前体蛋白是正常的β-微球蛋白(β2M)，其为所述主要组织相容性复合体的轻链组分。在临床环境中，Aβ2M与透析的患者相关，并且很少有肾衰竭患者不进行透析。

β2M通常在肾脏中发生分解代谢。在肾衰竭的患者中，所述蛋白在血清中积聚。普通透析膜不除去β2M；因此，在血液透析患者中血清水平可高达参考范围值的30-60倍。通常涉及的器官包括腕骨韧带，以及可能的滑膜(导致关节病和骨囊肿)和心脏、胃肠道、肝、肺、前列腺、肾上腺和舌。

在世界范围内，淀粉样蛋白A(AA)淀粉样变性是系统性淀粉样变性的最常见形式。其发生在感染性或非感染性病因的慢性炎性疾病的过程中。在AA中，肾、肝和脾是涉及的主要受累部位。

脱辅基脂蛋白(apolipoprotein)AI淀粉样变性(AApoAI)是由apoAI基因的点突变引起的常染色体显性的淀粉样变性。通常，此淀粉样变性是占优势的肾淀粉样蛋白。某些家系具有周围性神经病或心脏病。ApoAI(可能具有正常序列)也是在老年人主动脉中在局限性淀粉样斑块内的纤丝前体。

脱辅基脂蛋白AII淀粉样变性(AApoAII)是由apoAII基因的点突变引起的常染色体显性的淀粉样变性。已经描述具有此病症的两个家族各自携带终止密码子中的点突变，这导致形成异常长度的蛋白。

凝溶胶蛋白淀粉样变性(AGel)中的前体蛋白是激动蛋白调节蛋白凝溶胶蛋白。淀粉样蛋白纤丝包括含点突变的凝溶胶蛋白片段。

纤维蛋白原淀粉样变性(AFib)是由纤维蛋白原α链基因的点突变引起的常染色体显性的淀粉样变性。

溶菌酶淀粉样变性(ALys)是由溶菌酶基因的点突变引起的常染色体显性的淀粉样变性。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C淀粉样变性(ACys)中的前体蛋白是半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，其为含有点突变的半胱氨酸蛋白酶抑制剂。这一状况临床上称为冰岛型HCHWA。ACys是常染色体显性的。临床表现包括始于生命的第二个或第三个十年中的多发性中风和精神状态改变。发病机制在于突变的半胱氨酸蛋白酶抑制剂之一，其广泛分布于组织中，但仅在脑血管中形成纤丝；因此，相信局部病症在纤丝形成中起作用。

朊病毒蛋白淀粉样变性(APrP)中的前体蛋白是朊病毒蛋白，其为一种质膜糖蛋白。病因是感染性的(即库鲁病)或遗传性的(即克-雅氏病(CJD)、格-施-沙(GSS)综合征、致死性家族性失眠(FFI))。感染单位是朊病毒蛋白，其诱导由宿主染色体基因编码的同源蛋白发生构象改变。患有CJD、GSS和FFI的患者在所述朊病毒蛋白基因中携带常染色体显性的淀粉样变性突变；因此，甚至在缺少感染引发物(infectious trigger)的情况下形成所述淀粉样变性。

在降钙素淀粉样变性(ACal)中，所述前体蛋白是降钙素，其为由甲状腺合成的钙调控激素。患有甲状腺髓样癌的患者可能在肿瘤中发生由正常序列的降钙素原(ACal)组成的局限性淀粉样沉积。假定的致病原因是局部降钙素形成增加，导致所述肽的足够高的局部浓度，引起聚合和纤丝形成。

在胰岛淀粉样多肽的淀粉样变性(AIAPP)中，所述前体蛋白是胰岛淀粉样多肽(IAPP)，也称为胰岛淀粉样多肽(amylin)。IAPP是一种由胰岛β细胞分泌的蛋白质，其与胰岛素一起存储于分泌颗粒中并随胰岛素而释放。通常，IAPP调控骨骼肌中的胰岛素活性。IAPP淀粉样蛋白发现于胰岛素瘤中和很多患有2型糖尿病的患者的胰腺中。

心房钠利尿因子淀粉样变性与前体蛋白心房钠利尿因子(atrialnariuretic factor，ANF)相关，其为一种由心房合成的调控盐和水体内平衡的激素。淀粉样沉积物局限于心房。此病症在老年人中非常普遍。心房钠利尿因子淀粉样变性(AANF)在长期存在充血性心力衰竭的患者中非常普遍，大概是由于持续产生ANF的缘故。

在催乳素淀粉样蛋白(APro)中，催乳素或催乳素片段发现于垂体淀粉样蛋白中。此病症常见于老年人并也有报道在产生催乳素的垂体瘤患者的淀粉瘤(amyloidoma)中。

皮肤的淀粉样蛋白与一些抗角蛋白抗体反应而产生局限化形式的淀粉样变性。然而，角蛋白淀粉样蛋白中所述纤丝的确切身份并未经化学确认，但它们被称为角蛋白淀粉样蛋白(AKer)。

主动脉中间淀粉样蛋白出现在多数超过60岁的人中。中间淀粉样蛋白(Medin amyloid(AMed))源于乳粘附蛋白(lactadherin)的蛋白水解片段，其为一种由乳腺上皮表达的糖蛋白。

家族性英国型痴呆(FBD)的神经病理学特征为独特的淀粉样形成蛋白ABri的沉积。其为一种异常形式的前体蛋白BRI的片段。

在家族性丹麦型痴呆(FDD)中，在BRI基因3′区密码子265和266之间的十聚体复制产生了名为ADan的淀粉样肽，其比由正常BRI基因产生的野生型肽长11个残基。已经发现，ADan沉积物广泛地分布于FDD病例的CNS中。ADan沉积物主要是非纤丝状的聚集体。

ABri和ADan肽是源自更大的称为BRI前体蛋白的膜锚定前体蛋白的片段，其由13号染色体上的BRI基因所编码。

Pindborg瘤的特征在于产生大量的淀粉样蛋白并存在钙化的层状体(lamellar bodies)。与此综合征相关的淀粉样蛋白尽管已经命名，但其通常称为A(tbn)。

在缺少血清淀粉样蛋白P(SAP)组分和硫酸肝素蛋白聚糖的情况下，可以从几种天然多肽(比如胰岛素)形成淀粉样蛋白纤丝。这产生了淀粉样蛋白AIns，其前体是胰岛素。

据报道另一种蛋白乳铁蛋白是家族性上皮下角膜淀粉样变性中的主要纤丝蛋白。人们推测血清中的结构异常或浓度异常增加形成了淀粉样蛋白ALac。

通过本发明的硫代黄素化合物对促淀粉样变蛋白进行检测。所述硫代黄素化合物靶向至少一种促淀粉样变蛋白，所述至少一种促淀粉样变蛋白源于至少一种选自以下的蛋白质前体：免疫球蛋白轻链、免疫球蛋白重链、转甲状腺素蛋白、β2-微球蛋白、血清(脱辅基)脂蛋白AA、脱辅基脂蛋白AI、脱辅基脂蛋白AII、凝溶胶蛋白、溶菌酶、纤维蛋白原α链、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、ABriPP、ADanPP、朊病毒蛋白、降钙素(原)、胰岛淀粉样多肽、心房钠利尿因子、催乳素、胰岛素、乳粘附蛋白、角膜上皮蛋白、Pindborg肿瘤相关的前体蛋白(tbn)和乳铁蛋白。相信是这些蛋白标靶引起了受累组织的不同的综合征或疾病。参见Buxbaum，Curr.Opin Rheumatol 16：67-75(2003)。还参见Merlini and Westermark，JIntern Med 255：159-178(2004)。

所述可检测标记包括可使用本领域技术人员已知的成像技术检测的任何原子或结构。通常，所述可检测标记选自³H、¹³¹I、¹²⁵I、¹²³I、⁷⁶Br、⁷⁵Br、¹⁸F、CH₂-CH₂-X^＊、O-CH₂-CH₂-X^＊、CH₂-CH₂-CH₂-X^＊、O-CH₂-CH₂-CH₂-X^＊(其中X^＊＝¹³¹I、¹²³I、⁷⁶Br、⁷⁵Br或¹⁸F)、¹⁹F、¹²⁵I，选自以下的含碳取代基：低级烷基、(CH₂)_nOR’、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、COOR’、CR’＝CR’-R_ph和CR₂’-CR₂’-R_ph，其中至少一个碳是¹¹C、¹³C或¹⁴C，以及W-L^＊或V-W-L^＊形式的螯合基团(具有螯合金属基团)，其中V选自-COO-、-CO-、-CH₂O-和-CH₂NH-；W是-(CH₂)_n，其中n＝0、1、2、3、4或5；并且L^＊是：

其中M^＊是^99mTc。

在一个优选的实施方案中，所述可检测标记是放射性标记。

以下化合物在制备用于检测对象中至少一种淀粉样沉积物的体内方法的药物中的用途，所述淀粉样沉积物包含至少一种促淀粉样变蛋白，其中所述化合物是式(I)化合物

其中

其中R’是H或低级烷基，

(ii)Y是NR¹R²、OR²或SR²，

作为替代，R³至R¹⁰中之一可以是具有或不具有螯合金属基团的螯合基团，所述螯合基团具有W-L或V-W-L的形式，其中V选自-COO-、-CO-、-CH₂O-和-CH₂NH-；W是-(CH₂)_n，其中n＝0、l、2、3、4或5，并且L是：

其中M选自：Tc和Re，

及其放射性标记衍生物和药学可接受盐，其中至少一个所述取代基结构包含可检测标记，

所述方法包括以下步骤：

(a)给患有淀粉样变性相关疾病的对象施用可检测量的药物组合物，所述药物组合物包含药学可接受载体和至少一种式I化合物，以及

在一个实施方案中，上述式(I)化合物的用途是用于蛋白质的检测，其中所述至少一种促淀粉样变蛋白源于选自以下的至少一种蛋白质前体：免疫球蛋白轻链、免疫球蛋白重链、转甲状腺素蛋白、β2-微球蛋白、血清(脱辅基)脂蛋白AA、脱辅基脂蛋白AI、脱辅基脂蛋白AII、凝溶胶蛋白、溶菌酶、纤维蛋白原α链、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、ABriPP、ADanPP、朊病毒蛋白、降钙素(原)、胰岛淀粉样多肽、心房钠利尿因子、催乳素、胰岛素、乳粘附蛋白、角膜上皮蛋白、Pindborg肿瘤相关的前体蛋白(tbn)和乳铁蛋白。

在一个实施方案中，上述式(I)化合物在制备用于检测淀粉样变性的体内方法的药物中的用途涉及患有系统性淀粉样变性相关疾病的对象。在一个优选的实施方案中，所述与系统性淀粉样变性相关的疾病选自多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴瘤、慢性炎性疾病、类风湿性关节炎、感染性疾病、皮肌炎、硬皮病、局限性肠炎、溃疡性结肠炎、结核病、慢性骨髓炎、支气管扩张、皮肤脓肿、肺脓肿、癌症、霍奇金病、家族遗传性淀粉样变性、家族性地中海热、家族性痴呆和家族性淀粉样蛋白多神经病。

在一个实施方案中，式(I)化合物在制备用于检测淀粉样病变的体内方法的药物中的用途涉及检测位于对象中胚层组织中或实质性器官中的至少一种淀粉样沉积物。在一个优选的实施方案中，所述中胚层组织选自周围神经、皮肤、舌、关节、心脏或肝。在一个优选的实施方案中，所述器官选自脾、肾、肝和肾上腺。在一个实施方案中，所述皮肤或肺脓肿是由于皮下使用海洛因而导致。

在涉及式(I)化合物在制备用于体内检测淀粉样变性的药物中的用途的一个实施方案中，所述检测通过选自γ成像、磁共振成像和磁共振光谱的方法而实现。在一个优选的实施方案中，所述γ成像是PET或SPECT。

在涉及式(I)化合物在制备用于体内检测淀粉样变性的药物中的用途的一个实施方案中，所述药物通过静脉内注射施用。

在涉及式(I)化合物在制备用于体内检测淀粉样变性的药物中的用途的一个实施方案中，所述对象因慢性肾衰竭而正在接受血液透析。

在涉及式(I)化合物在制备用于体内检测淀粉样变性的药物中的用途的一个实施方案中，所述对象正患有与局限性淀粉样变性相关的疾病。在一个优选的实施方案中，所述至少一种淀粉样沉积物位于选自以下的组织中：腱滑膜组织、关节组织、主动脉组织、甲状腺组织、胰岛组织、衰老中垂体组织、医源性组织、心房组织和角膜组织。在一个实施方案中，所述至少一种淀粉样沉积物位于胰腺内。在此实施方案中，所述与局限性淀粉样变性相关的疾病选自原发性骨髓瘤、家族性痴呆、海绵状脑病、c-细胞甲状腺瘤、胰岛素瘤、催乳素瘤和pindborg瘤。

在一个实施方案中，所述式(I)化合物在制备用于体内检测方法的药物中的用途包括式(II)化合物：

或所述化合物的放射性标记衍生物、药学可接受盐、水合物、溶剂化物或前药，其中：

R是C₁-C₆烷基；

R²是氢或卤素；

R³是氢、C₁-C₆烷基，C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；和

R⁴是氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基，其中当R²是氢或非放射性卤素时，所述烷基、烯基或炔基包含放射性碳或被放射性卤素取代；

另一个前提是当R¹是氢、R²是氢且R⁴是-(CH₂)₃ ¹⁸F时，则R³是C₂-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基，其中至少一个所述取代基结构包含可检测标记。

在一个实施方案中，所述式(I)化合物在制备用于体内检测方法的药物中的用途包括选自结构1-45的化合物或其放射性衍生物，其中所述化合物包含至少一个可检测标记：

淀粉样蛋白探针

本发明的淀粉样蛋白探针是上述式(I)的任何化合物。在一些实施方案中，所述淀粉样蛋白探针是式(II)的化合物

或所述化合物(II)的放射性标记衍生物、药学可接受盐、水合物、溶剂化物或前药，其中：

R是C₁-C₆烷基；

R²是氢或卤素；

R³是氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；和

前提是当R¹是氢或-OH、R²是氢且R⁴是-¹¹CH₃时，则R³是C₂-C₆烷基，C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；

在一个实施方案中，式(II)化合物中的R²含有放射性卤素。

“烷基”指饱和的直链或支链烃基。实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基和正己基。术语“低级烷基”指C₁-C₆烷基。

“烯基”指包含至少一个碳碳双键的不饱和的直链或支链烃基。实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、叔丁烯基、正戊烯基和正己烯基。

“炔基”指包含至少一个碳碳叁键的不饱和的直链或支链烃基。实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、异丙炔基、丁炔基、异丁炔基、叔丁炔基、戊炔基和己炔基。

“烷氧基”指通过氧连接其键合的烷基。

“卤素”指氟、氯、溴或碘基团。

“放射性卤素”指放射性的卤素，即放射性氟、放射性氯、放射性溴或放射性碘。

在另一个实施方案中，式(I)的所述硫代黄素化合物选自结构1-45中之一的放射性标记的衍生物：

在优选的实施方案中，所述淀粉样蛋白探针是{N-甲基-¹¹C}2-[4′-(甲基氨基)苯基]6-羟基苯并噻唑(“[¹¹C]PIB”)或{N-甲基-³H}2-[4′-(甲基氨基)苯基]6-羟基苯并噻唑(“[³H]PIB”)。

“有效量”指产生期望作用所需要的量。“有效量”的实例包括能在体内或体外检测和成像淀粉样沉积物的量，其产生对于药物用途来说可接受的毒性和生物利用度水平，和/或防止细胞变性以及与纤丝形成相关的毒性。

在本文中，式(I)、(II)的化合物以及结构1-45还称为“硫代黄素化合物”、“硫代黄素衍生物”或“淀粉样蛋白探针”，其具有以下特征：特异性结合包含至少一种促淀粉样变蛋白的淀粉样沉积物，其中所述促淀粉样变蛋白选自AL、AH、ATTR、Aβ2M、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、AFib、ACys、ABri、ADan、APrP、ACal、AIAPP、AANF、APro、AIns、AMed、AKer、A(tbn)和ALac。

本发明的化合物是硫代黄素S和T的非季铵衍生物，已知硫代黄素S和T在组织切片中染色淀粉样蛋白并在体外与合成的Aβ结合。Kelenyi J.Histochem.Cytochem.15：172(1967)；Bums等J. Path.Bact.94：337(1967)；Guntern等Experientia 48：8(1992)；LeVine Meth.Enzymol.309：274(1999)。

本发明的一种方法确定了淀粉样沉积物在患者器官或身体区域中的存在和定位。该方法包括施用可检测量的式(I)或(II)和结构1-45的淀粉样蛋白探针。在一些实施方案中，所述淀粉样蛋白探针选自如上所示的结构1-45。淀粉样蛋白探针可作为药物组合物或其药学可接受的水溶性盐施用给患者。

“药学可接受盐”指本发明化合物的酸或碱盐，所述盐具有所期望的药理活性，并且既没有生物学不利作用也没有其它不利作用。所述盐可由酸形成，其包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐(glucoheptanoate)、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷-磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。碱盐的实例包括但不限于铵盐，碱金属盐如钠盐和钾盐，碱土金属盐如钙盐和镁盐，与有机碱形成的盐如二环己基胺盐、N-甲基-D-葡萄糖胺，以及与氨基酸(比如精氨酸和赖氨酸)形成的盐。在一些实施方案中，可使用试剂将所述碱性含氮基团季铵化，所述试剂包括低级烷基卤化物比如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯比如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链卤化物比如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；以及芳烷基卤化物比如苯乙基溴化物。

通常，可检测标记的硫代黄素衍生物的剂量将根据一些考虑因素比如患者年龄、健康状况、性别和疾病严重程度、以及可能的禁忌症、伴随治疗和其它变量而变化，并可由本领域医师进行调整。剂量可在0.001μg/kg至10μg/kg之间变化，优选0.01μg/kg至1.0μg/kg。

给所述对象的施用可以是局部的或全身性的，并可通过静脉内、动脉内、鞘内(通过脊髓液)等实现。根据检查的身体部位，也可以经皮内或腔内施用。在所述化合物与所述淀粉样蛋白经过足够时间(例如30分钟到48小时)结合后，通过常规成像技术比如MRS/MRI、SPECT、平面闪烁成像、PET、以及新兴的成像技术检查患者待检区域。必要时，具体方案将根据如上指出的患者的具体因素，以及根据待检身体部位、施用方法和所用标记种类而变化；对于本领域技术人员而言，具体方法的确定将是常规的工作。对于器官成像而言，优选地，测定本发明放射性标记硫代黄素衍生物或类似物的结合量(总量或特异性结合量)并与结合至所述患者所述器官的标记硫代黄素衍生物的量进行比较(作为比率)。然后，将此比率与年龄相配的正常器官中的相同比率进行比较。

所述放射性标记的淀粉样蛋白探针将通过静脉内注射。PET扫描方案将可能涉及在注射放射性药物之后15-60分钟完成的标准全身扫描(从头覆盖至骨盆)，或者对特定身体区域(例如心、肺、肝、肾)进行的扫描。该扫描方案可能与使用[F-18]2-氟-2-脱氧葡萄糖(FDG)进行的全身扫描或聚焦身体区域PET肿瘤扫描相似。就是说，静脉内注射所述淀粉样蛋白特异性的放射性药物，给放射性示踪剂分布全身分配出时间，放射性示踪剂在所感兴趣的器官内被吸收，从血液和缺乏淀粉样蛋白的其它器官中清除，以及对全身或特定身体区域进行20-40分钟的扫描以使结合淀粉样蛋白的放射性示踪剂成像。另外，所述成像扫描可用于随后指导对所述扫描组织进行活组织检查取样。

本发明的淀粉样蛋白探针有利地可以可注射组合物的形式施用，但也可配制成众所周知的药物递送系统(例如口服、直肠、胃肠外(静脉内、肌肉内或皮下)、脑池内(intracisternal)、阴道内、腹膜内、局部(粉末、软膏或滴剂)、或作为含服制剂或鼻喷雾剂)。用于此目的的典型组合物包含药学可接受载体。例如，所述组合物可包含每毫升含NaCl的磷酸盐缓冲液中约10mg人血清白蛋白和约0.5到约500微克所述标记的硫代黄素衍生物。其它药学可接受载体包括含水溶液、无毒赋形剂，包括盐、防腐剂、缓冲剂等，例如REMINGTON′S PHARMACEUTICALSCIENCES，15th Ed.Easton：Mack Publishing Co.pp.1405-1412和1461-1487(1975)以及THE NATIONAL FORMULARY XIV.，14th Ed.Washington：American Pharmaceutical Association(1975)中所述，所述文献的内容均通过参考并入本文中。

特别优选的本发明淀粉样蛋白探针是这样的，除了在体内特异性结合淀粉样蛋白以外，在合适的剂量水平下其还是无毒的以及具有令人满意的作用持续时间。

非水溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射有机酯比如油酸乙酯。含水载体包括水、醇/水溶液、盐水溶液、胃肠外载体比如氯化钠、林格氏葡萄糖等。静脉内载体包括流体和营养补充剂。防腐剂包括抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体。根据本领域的常规技术，对所述药物组合物中的各种组分的pH和确切浓度进行调节。参见Goodman andGilman′s THE PHARMACOLOGICAL BASIS FOR THERAPEUTICS(7th Ed.)。

根据本发明，给预期有淀粉样蛋白或淀粉样沉积物的对象(例如，临床上诊断有淀粉样沉积相关疾病的患者)施用包含式(I)或式(II)或结构1-45中之一的淀粉样蛋白探针的药物组合物。

成像

本发明使用淀粉样蛋白探针，连同非侵入性成像技术比如磁共振波谱(MRS)或磁共振成像(MRI)、或γ成像比如正电子发射断层显像(PET)或单光子发射计算机断层显像(SPECT)用于体内或体外定量淀粉样沉积。

术语“体内或体外检测方法”指可检测式(I)或式(II)或结构1-45中之一的已标记硫代黄素衍生物的任何方法。作为实例，对于γ成像而言，测量从所检查器官或区域发出的辐射，并表示为总结合或比率，其中将在一种组织中的总结合根据在同一体内成像期间在同一对象的另一组织中的总结合进行归一化(例如前者除以后者)。体内总结合被定义为通过体内成像技术在组织内检测的全部信号，不需要通过二次注射同样量的标记化合物以及大大过量的未标记但化学相同的化合物进行校正。同样，体外方法涉及获取新鲜或冷冻的组织样品并将所述组织的切片或所述组织的匀浆物与式(I)或式(II)或结构1-45之一的放射性标记硫代黄素衍生物一起孵育，然后通过清洗所述组织切片或者过滤并清洗所述组织匀浆物而分离结合的和游离的放射性标记。通过标准的放射自显影技术或通过液体闪烁或γ计数技术来测量结合放射性，并与来自同一组织的已添加过量未标记硫代黄素衍生物的对照进行比较。

“对象”是哺乳动物，优选是人，最优选是怀疑患有淀粉样蛋白沉积相关疾病比如AD和/或痴呆的人。术语“对象”和“患者”在本文中可互换使用。

为体内和体外成像的目的，在选择给定的标记物时，可获得的检测仪器的类型是主要因素。例如，放射性同位素和¹⁸F特别适于本发明方法中的体内和体外成像。所用仪器的种类将指导放射性核素或稳定同位素的选择。例如，所选的放射性核素必须具有可通过给定类型仪器检测的衰变类型。另一个考虑因素涉及所述放射性核素的半衰期。所述半衰期应足够长，使得其在标靶的最大吸收时间时仍可被检测到，并且还应足够短，使得所述宿主不承受有害辐射。可使用γ成像检测本发明的放射性标记化合物，其中检测所发射的合适波长的γ辐射。γ成像的方法包括但不限于SPECT和PET。优选地，对于SPECT检测而言，所选择的放射性标记将缺少粒子发射，但产生大量的140-200keV范围的光子。对于PET检测而言，所述放射性标记将是发射正电子的放射性核素，比如¹⁸F，其将湮灭而形成两束511keV的γ射线，所述γ射线将通过PET照相机检测到。

在本发明中，将可用于体内和体外成像和定量淀粉样沉积的淀粉样蛋白结合化合物/探针施用于患者。这些化合物将与非侵入性神经成像技术联用，所述非侵入性神经成像技术比如磁共振波谱(MRS)或磁共振成像(MRI)、正电子发射断层显像(PET)、单光子发射计算机断层显像(SPECT)。根据本发明，可通过本领域已知的普通有机化学技术，采用¹⁸F或¹³C标记所述硫代黄素衍生物用于MRS/MRI。参见March，J.ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY：REACTIONS，MECHANISMS，AND STRUCTURE(3rd Edition，1985)，其内容由此通过引用并入本文中。也可以通过本领域众所周知的以及由Fowler，J.和Wolf，A.在POSITRONEMISSION TOMOGRAPHY AND AUTORADIOGRAPHY(Phelps，M.，Mazziota，J.，and Schelbert，H.eds.)391-450(Raven Press，NY 1986)中描述的技术，用¹⁸F、¹¹C、⁷⁵Br或⁷⁶Br放射标记所述硫代黄素衍生物用于PET，所述文献的内容由此通过引用并入本文中。还可以通过本领域已知的任何的多种技术，用¹²³I放射标记所述硫代黄素衍生物用于SPECT。参见例如Kulkarni，Int.J.Rad.Appl.&Inst.(Part B)18：647(1991)，其内容由此通过参考并入本文中。另外，可通过直接经重氮化碘来碘化重氮化的氨基衍生物，采用任何合适的放射性碘同位素(例如但不限于¹³¹I、¹²⁵I或¹²³I)来标记所述硫代黄素衍生物，参见Greenbaum，F.Am.J.Pharm.108：17(1936)，或者通过将不稳定的重氮化胺转变为稳定的三氮烯，或通过将非放射性卤化前体转变为稳定的三烷基锡衍生物，所述三烷基锡衍生物然后可通过本领域众所周知的数种方法转变为碘代化合物。参见Satyamurthyand Barrio J.Org.Chem.48：4394(1983)，Goodman et al，J.Org.Chem.49：2322(1984)，以及Mathis et al，J.Labell.Comp.and Radiopharm.1994：905；Chumpradit et al，J.Med.Chem.34：877(1991)；Zhuang et al.，J.Med.Chem.37：1406(1994)；Chumpradit et al.，J.Med.Chem.37：4245(1994)。例如，使硫代黄素或其类似物的稳定的三氮烯或三烷基锡衍生物与含有¹³¹I、¹²⁵I、¹²³I、⁷⁶Br、⁷⁵Br、¹⁸F或¹⁹F的卤化剂反应。因此，所述硫代黄素及其类似物的稳定的三烷基锡衍生物是可用于合成很多本发明的放射标记化合物的新型前体。同样，这些三烷基锡衍生物也是本发明的一个实施方案。

还可使用已知的金属放射性标记比如锝-99m(^99mTc)放射性标记所述硫代黄素衍生物。放射标记领域的普通技术人员不需要进行过多的实验，就可以对取代基进行修饰以引入结合这些金属离子的配体。然后可使用所述金属放射性标记的硫代黄素衍生物来检测淀粉样沉积物。制备Tc^99m的放射性标记衍生物在本领域内是众所周知的。参见例如Zhuang et al.，“Neutral and stereospecific Tc-99m complexes：[99mTc]N-benzyl-3，4-di-(N-2-mercaptoethyl)-amino-pyrrolidines(P-BAT)”Nuclear Medicine&Biology 26(2)：217-24，(1999)；Oya et al.，“Small and neutral Tc(v)O BAT，bisaminoethanethiol(N2S2)complexes for developing new brain imagingagents”Nuclear Medicine&Biology 25(2)：135-40，(1998)；以及Horn et al.，“Technetium-99m-labeled receptor-specific small-moleculeradiopharmaceuticals：recent developments and encouraging results”Nuclear Medicine&Biology 24(6)：485-98，(1997)。

对于体内或体外成像和波谱的目的而言，本发明的方法可使用通过核磁共振波谱可检测的同位素。特别可用于磁共振波谱的元素包括¹⁸F和¹³C。

对于本发明来说，合适的放射性同位素包括β发射物、γ发射物、正电子发射物、和X-射线发射物。这些放射性同位素包括¹³¹I、¹²³I、¹⁸F、¹¹C、⁷⁵Br和⁷⁶Br。根据本发明，用于磁共振成像(MRI)或磁共振波谱(MRS)的合适的稳定同位素包括¹⁸F和¹³C。用于活组织检查或尸体检查组织的匀浆物中的淀粉样蛋白的体外定量的合适的放射性同位素包括¹²⁵I、¹⁴C和³H。优选的放射性标记是用于PET体内成像的¹¹C或¹⁸F，用于SPECT成像的¹²³I，用于MRS/MRI的¹⁹F、以及用于体外研究的³H或¹⁴C。然而，根据本发明，可使用任何常规方法用于视觉显示已在靶点处积聚至可检测水平的诊断探针。

根据本发明的一个方面，其涉及检测活检组织中淀粉样沉积物的方法，所述方法涉及将福尔马林固定的组织与选自如上所述式(I)和式(II)或结构1-45的化合物的硫代黄素淀粉样蛋白结合化合物的溶液一起孵育。优选地，所述溶液是用根据本发明的式(I)或式(II)或结构1-45的硫代黄素淀粉样蛋白结合化合物饱和的25-100％乙醇(余量为水)。通过孵育，所述化合物将组织中所述淀粉样蛋白染色或标记，并且可通过任何标准方法检测或视觉观察所述染色或标记的沉积物。这些检测方法包括显微镜技术比如明视野显微术、荧光显微术、激光-共聚焦显微术和正交偏振显微术。

定量生物活检组织中淀粉样蛋白的量的方法涉及将生物活检组织或尸检组织的匀浆物与本发明的标记的硫代黄素衍生物、或其水溶性无毒性盐一起孵育。通过众所周知的技术获取所述组织并匀浆化。尽管可得到合适的其它标记，比如酶、化学发光化合物和免疫荧光化合物，但优选的标记是放射性标记。所述优选的放射性标记是¹²⁵I、¹⁴C或³H，其包含于在式(I)和式(II)或结构1-45的化合物之一上取代的取代基中。含有淀粉样沉积物的组织将与本发明的淀粉样蛋白结合硫代黄素化合物的标记衍生物结合。然后通过任何常规方法(比如过滤)将所述结合组织与未结合组织相分离。然后可通过任何的多种已知方法定量所述结合的组织。然后通过与通过孵育已知量的淀粉样蛋白与放射性标记的硫代黄素衍生物而得到的标准曲线相比较，将结合组织的放射性标记的硫代黄素衍生物的单位转化为每100mg组织的淀粉样蛋白的微克单位。

如上所述，检测的具体方法将根据所使用和检测材料的化学和物理性质而变化。因此，对于γ放射性的材料而言，可使用标准的可商业获得的单光子和正电子检测方法。对于磁核自旋检测而言，可使用标准的可商业获得的磁共振成像和磁共振波谱技术。

在本文所描述的方法中，根据涉及全身成像技术的标准临床成像方案进行利用这些技术的数据采集，例如在整个扫描期间中反复移动对象通过扫描器。或者，可通过对身体的一个或多个目标部位的选择性成像而实现数据采集，例如通过在图像扫描器中使用有限的患者身体覆盖范围而强调肺、肝、心或肾。在施用式(I)化合物之后，可马上开始成像数据采集并在施用后采用动态成像方案继续进行若干小时。或者，可在所述化合物体内分布之后采用标准静态后期成像方案，进行约30分钟的后期快照。然后以自动化和常规方式采集并电子存储成像数据，用于以后的处理和分析。

通常利用商业软件包进行数据处理和分析，其常常由制造商安装在单光子、正电子发射、或磁共振扫描器的操作系统计算机中。对于正电子发射方法而言，用于检测、采集和处理成像数据的这些过程和方法的实例已在现有技术中建立(参见J.C.Price et al.，“Kinetic modeling of amyloidbinding in humans using PET imaging and Pittsburgh Compound-B，”25 J.Cerebral Blood Flow and Metabolism(2005)1528-47和B.J.Lopresti et al.“Simplified Quantification of Pittsburgh Compound-B Amyloid ImagingPET Studies：A Comparative Analysis，”46 J.Nuclear Medicine(2005)1959-72。同样，对于全身性淀粉样沉积物而言，使用标准的商业可获得的扫描器、数据采集技术和数据处理技术在脑以外身体部位进行单光子、正电子和磁共振材料的类似的数据采集和处理。

除非上下文另外明确指出，当在本申请中出现时，单数术语的定义可推广应用到其对应的复数形式；同样，当在本申请中出现时，复数术语的定义可推广应用到其对应的单数形式。

提供以下实施例以举例说明本发明。然而，应当理解，本发明并非限制于在这些实施例中所描述的具体情形或细节。在整个说明书中，对可公开获得的文献包括美国专利的任何和全部的引用，均逐一通过参考并入本专利申请中。

合成实施例

可通过本领域众所周知的方法制备式(I)和式(II)、以及结构式1-45的化合物。参见例如WO 2002/16333、公开于2003年12月25日的美国专利公开No.2003/0236391、以及WO 2004/083195，其全部内容均通过参考并入本文中。

除非另外说明，用于合成的所有试剂均购自Aldrich ChemicalCompany且不经进一步纯化而使用。在Mel-TEMP II上测定熔点且未校正。采用TMS作为内标物，在Bruker 300上测定所有化合物的¹H NMR数据并且与所指定的结构一致。使用来自EM Sciences的硅胶60F₂₅₄进行TLC并在UV灯下检识。在购自Mallinckrodt Company的硅胶60(230-400目)上进行快速色谱。反相TLC购自Whiteman Company。

式(I)化合物的通用合成方法：

R¹是氢、-OH、-NO₂、-CN、-COOR、-OCH₂OR、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基或卤素，其中R¹的一个或多个原子可以是放射性标记的原子；

R是C₁-C₆烷基，其中一个或多个所述碳原子可以是放射性标记的原子；

通过以下两种方法之一水解：

通过水解制备2-氨基苯硫酚：

将6-取代的2-氨基苯并噻唑(172mmol)悬于50％KOH(180g KOH溶于180mL水中)和乙二醇(40mL)中。将所述悬液加热至回流48小时。当冷却至室温时，加入甲苯(300mL)并用乙酸(180mL)中和所述反应混合物。分离有机层并再用200mL甲苯萃取水层。合并甲苯层，以水清洗并以MgSO₄干燥。蒸发溶剂得到期望的产物。

通过肼解制备2-氨基苯硫酚：

将6-取代的苯并噻唑(6.7mmol)悬于乙醇(11mL，无水)中，并在氮气氛下于室温下加入肼(2.4mL)。将反应化合物加热至回流1小时。蒸发溶剂并将残留物溶于水(10mL)，以乙酸将pH调至5。通过过滤收集沉淀并以水清洗以得到期望的产物。

使所得的以下形式的5-取代-2-氨基-1-苯硫酚

与以下形式的苯甲酸偶联：

其中R²是氢，R³和R⁴独立地是氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基，

其中所述偶联通过以下方法进行：

将5-取代-2-氨基-1-苯硫酚(4.0mmol)、所述苯甲酸(4.0mmol)和多磷酸(PPA)(10g)的混合物加热到220℃持续4小时。将所述反应混合物冷却至室温并倾倒于10％碳酸钾溶液(～400mL)中。通过减压过滤收集沉淀以得到期望的产物，其可通过快速色谱或重结晶而纯化。

可通过以下反应，用非放射性卤素或放射性卤素取代R²的氢：

向在密封瓶中的6-取代的2-(4’-氨基苯基)-苯并噻唑(1mg)在250μL乙酸中的溶液中加入40μL氯胺-T溶液(28mg溶于500μL乙酸中)，随后加入27μL(约5mCi)的[¹²⁵I]碘化钠(比活性2175Ci/mmol)。在室温下搅拌反应混合物2.5小时并以饱和亚硫酸氢钠溶液猝灭反应。以20ml水稀释后，将所述反应混合物加载于C8Plus SepPak上并以2ml甲醇洗脱。取决于6位取代基的性质，可能需要使用保护基团。例如，将6-羟基保护成甲磺酰基(甲磺酰氧基)衍生物。为脱除甲磺酰基的保护，将0.5ml的1M NaOH加入到放射性碘标记的中间体的洗脱溶液中。将混合物在50℃加热2小时。在用500μL 1M乙酸猝灭后，将所述反应混合物以40mL水稀释并加载于C8Plus SepPak上。以2mL甲醇将具有约3mCi放射性的放射性碘标记的产物从所述SepPak上洗脱下来。通过氮气流将溶液浓缩至300μL，并在Phenomenex ODS柱上通过HPLC纯化所述粗产物(MeCN/TEA缓冲液，35∶65，pH 7.5，流速0.5mL/分钟至第4分钟，在4-6分钟1.0mL/分钟，6分钟后2.0mL/分钟，保留时间23.6)。将收集的级分加载于C8Plus SepPak上。以1mL乙醇洗脱，得到约1mCi的放射性碘标记的终产物。

当R³和R⁴中之一是氢或两者都是氢时，则通过在以下条件下与烷基卤化物、烯基卤化物或炔基卤化物反应，可将R³和R⁴转化为C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基：

对于二烷基化：向6-取代的2-(4’-氨基苯基)-苯并噻唑(0.59mmol)在DMSO(无水，2ml)中的溶液中加入烷基卤化物、烯基卤化物或炔基卤化物(2.09mmol)和K₂CO₃(500mg，3.75mmol)。将反应混合物在140℃加热16小时。当冷却到室温时，将所述反应混合物倾倒入水中并以乙酸乙酯萃取(3×10mL)。合并有机层并蒸发溶剂。残留物通过快速柱色谱纯化以得到期望的6-取代的二甲基氨基苯基)-苯并噻唑。

对于单烷基化：向6-取代的2-(4’-氨基苯基)-苯并噻唑(0.013mmol)在DMSO(无水，0.5ml)中的溶液中加入烷基卤化物、烯基卤化物或炔基卤化物(0.027mmol)和无水K₂CO₃(100mg，0.75mmol)。将反应混合物在100℃加热16小时。当冷却到室温时，将所述反应混合物以正相制备性TLC直接纯化以得到期望的6-取代的2-(4’-甲基氨基苯基)-苯并噻唑衍生物。

当R²是氢或非放射性卤素，R⁴是C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基，其中所述烷基、烯基或炔基包含放射性碳或被放射性卤素取代时，可通过以下次序之一合成所述化合物：

对于放射性碳的引入：

使用CTI/Siemens RDS 112负离子回旋加速器，采用40μA的11MeV质子的束电流，通过用含1％氧气的氮气(¹⁴N₂)靶辐照60分钟，产生约1Ci的二氧化碳[¹¹C]。通过以下方法将二氧化碳[¹¹C]转化为碘甲烷[¹¹C]：首先使二氧化碳[¹¹C]与氢化铝锂在THF中的饱和溶液反应，然后在回流温度下加入氢碘酸以产生碘甲烷[¹¹C]。所述碘甲烷[¹¹C]在氮气流中被运送至含有前体的反应瓶以进行放射性标记。将所述前体6-取代的2-(4’-氨基苯基)-苯并噻唑(～3.7μmole)溶于400μL DMSO。加入干燥的KOH(10mg)，并将3mL V形瓶涡旋混合5分钟。在室温下以30mL/分钟将不添加载体的碘甲烷[¹¹C]鼓泡通入所述溶液。使用油浴在95℃将所述反应加热5分钟。通过半制备性HPLC纯化反应产物，其中使用Prodigy ODS-Prep柱，以60％乙腈/40％三乙胺的pH7.2磷酸盐缓冲液洗脱(在0-7分钟流速为5mL/分钟，然后在7-30分钟增至15mL/分钟)。收集含有[N-甲基-¹¹C]6-取代的2-(4’-甲基氨基苯基)-苯并噻唑的级分(在约15分钟时)，以50mL水稀释，并洗脱通过Waters C18SepPak Plus筒(cartridge)。以10mL水清洗所述C18SepPak，并以1mL乙醇(无水)将产物洗脱进无菌瓶中，随后是14mL盐水。通过分析性HPLC测定，放射化学纯度和化学纯度＞95％(k’＝4.4，使用Prodigy ODS(3)分析柱，以65/35的乙腈/三乙胺的pH7.2磷酸盐缓冲液洗脱)。在EOS上基于碘甲烷[¹¹C]的放射化学产率平均为17％，在合成终点的比活性平均约为160GBq/μmol(4.3Ci/μmol)。

对于放射性卤素的引入：

将6-取代的2-(4’-氨基苯基)-苯并噻唑(根据以上所指出的6-取代基的性质，保护基团可能是必需的)(0.22mmol)、NaH(4.2mmol)和2-(-3-溴代丙氧基)四氢-2-H-吡喃(0.22mmol)在THF(8mL)中的混合物加热至回流23小时。通过蒸馏除去溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯和水中，分离有机层，以乙酸乙酯萃取水层(10mL×6)。合并有机层，以MgSO₄干燥，蒸发至干。向残留物中加入AcOH/THF/H₂O溶液(5mL，4/2/1)并加热至100℃持续4小时。通过蒸发除去溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(～10mL)，以NaHCO₃溶液清洗，以MgSO₄干燥，蒸发至干，以得到残留物，将所述残留物以制备性TLC纯化(己烷∶乙酸乙酯＝60∶40)而得到期望的6-取代的2-(4’-(3”-羟基丙基氨基)-苯基)-苯并噻唑(45％)。

向6-取代的2-(4’-(3”-羟基丙基氨基)-苯基)-苯并噻唑(0.052mmol)和Et₃N(0.5ml)溶于丙酮(5mL)的溶液中加入(Boc)₂O(50mg，0.22mmol)。在室温下搅拌反应混合物6小时，然后加入甲苯磺酰氯(20mg，0.11mmol)。在室温下搅拌反应混合物24小时。除去溶剂并将残留物溶于乙酸乙酯(10mL)，以NaCO₃溶液清洗，以MgSO₄干燥，蒸发，并以快速柱纯化(己烷/乙酸乙酯＝4/1)以得到期望的6-取代的2-(4’-(3”-甲苯磺酰氧基丙基氨基)苯基)-苯并噻唑(13％)。然后通过以下的标准方法，将此6-取代的2-(4’-(3”-甲苯磺酰氧基丙基氨基)苯基)-苯并噻唑进行放射性氟标记：

将含有0.35mL 95％富集[O-18]的水的回旋加速器靶以20μA束电流用11MeV质子辐照60分钟，并将内容物转移至含有在乙腈(57μL)中的Kryptofix 222(22.3mg)和K₂CO₃(7.9mg)的5mL反应瓶中。在加入1mL等分量的乙腈后，将所述溶液在110℃在氩气流下蒸发至干3次。向此干燥的[F-18]氟化物中加入在1mL DMSO中的3mg 6-取代的2-(4’-(3”-甲苯磺酰氧基丙基氨基)苯基)-苯并噻唑，将所述反应瓶密封并加热到85℃30分钟。向此反应瓶加入0.5mL MeOH/HCl(浓)(2/1v/v)，并将此反应瓶在120℃加热10分钟。加热后，向反应溶液加入0.3mL 2M乙酸钠缓冲液，然后通过半制备性HPLC使用Phenomenex Prodigy ODS-prepC18柱(10μm 250×10mm)纯化，以pH 7.2的40％乙腈/60％60mM三乙胺-磷酸盐缓冲液(v/v)以流速5mL/分钟洗脱15分钟，然后对于以后的分离流速增加至8mL/分钟。产物[F-18]6-取代的2-(4’-(3”-氟丙基氨基)苯基)-苯并噻唑在约20分钟时洗脱到约16mL体积中。将含有[F-18]6-取代的2-(4’-(3”-氟丙基氨基)苯基)-苯并噻唑的级分以50mL水稀释并洗脱通过Waters C18SepPak Plus筒。然后以10mL水清洗所述SepPak筒，并用1mL乙醇(无水)将所述产物洗脱进无菌瓶中。以10mL无菌生理盐水稀释所述溶液用于静脉注射给动物。在120分钟放射合成(未校正衰减)的终点，以2-12％的放射化学产率得到产物[F-18]6-取代的2-(4’-(3”-氟丙基氨基)苯基)-苯并噻唑，其平均比活性为1500Ci/mmol。

实施例1：根据反应路线I合成[N-甲基-¹¹C]2-(4’-二甲基氨基苯基)-6-甲氧基-苯并噻唑

反应路线I

使用CTI/Siemens RDS 112负离子回旋加速器，采用40μA的11MeV质子的束电流，通过含1％氧气的氮气(¹⁴N₂)靶辐照60分钟，产生约1Ci的二氧化碳[¹¹C]。通过以下方法将二氧化碳[¹¹C]转化为碘甲烷[¹¹C]：首先使二氧化碳[¹¹C]与氢化铝锂在THF中的饱和溶液反应，然后在回流温度下加入氢碘酸以产生碘甲烷[¹¹C]。所述碘甲烷[¹¹C]在氮气流中被运送至含有前体的反应瓶以进行放射性标记。将所述前体6-CH₃O-BTA-1(1.0mg，3.7μmole)溶于400μL DMSO。加入干燥的KOH(10mg)，并将3mL V形瓶涡旋混合5分钟。在室温下以30mL/分钟将未添加载体的碘甲烷[¹¹C]鼓泡通入所述溶液。使用油浴在95℃将所述反应加热5分钟。通过半制备性HPLC纯化反应产物，其中使用Prodigy ODS-Prep柱，以60％乙腈/40％三乙胺的pH7.2磷酸盐缓冲液洗脱(在0-7分钟流速为5mL/分钟，然后在7-30分钟增至15mL/分钟)。收集含有[N-甲基-¹¹C]2-(4’-二甲基氨基苯基)-6-甲氧基-苯并噻唑的级分(在约15分钟时)，以50mL水稀释并洗脱通过Waters C18SepPak Plus筒。以10mL水清洗所述C18SepPak，并用1mL乙醇(无水)将所述产物洗脱进无菌瓶中，然后是14mL盐水。通过分析性HPLC测定，放射化学纯度和化学纯度＞95％(k’＝4.4，使用Prodigy ODS(3)分析柱，以65/35乙腈/三乙胺的pH 7.2磷酸盐缓冲液洗脱)。在EOS上基于碘甲烷[¹¹C]的放射化学产率平均为17％，在合成终点的比活性平均约为160GBq/μmol(4.3Ci/μmol)。

实施例2：根据反应路线II合成2-(3’-¹²⁵I-碘-4’-氨基-苯基)-苯并噻唑-6-醇

反应路线II

向在密封瓶中的2-(4’-氨基苯基)-6-甲磺酰氧基-苯并噻唑(1mg)在250μL乙酸中的溶液中加入40μL氯胺T溶液(28mg溶于500μL乙酸中)，随后加入27μL(约5mCi)的碘化钠[¹²⁵I](比活性2175Ci/mmol)。在室温下搅拌反应混合物2.5小时并以饱和亚硫酸氢钠溶液猝灭反应。以20ml水稀释后，将所述反应混合物加载于C8Plus SepPak上并以2ml甲醇洗脱。为脱除甲磺酰基的保护，向放射性碘化中间体的洗脱液中加入0.5ml1M NaOH。将混合物在50℃加热2小时。在以500μL 1M乙酸猝灭反应后，将所述反应混合物以40mL水稀释并加载于C8Plus SepPak上。将具有约3mCi放射活性的放射性碘化的产物用2mL甲醇洗脱下来。通过氮气流将溶液浓缩至300μL，通过HPLC在Phenomenex ODS柱(MeCN/TEA缓冲液，35∶65，pH 7.5，流速为0.5mL/分钟直到4分钟，在4-6分钟流速为1.0mL/分钟，6分钟以后为2.0mL/分钟，保留时间为23.6)上将粗产物纯化。将收集的级分加载于C8Plus SepPak上。以1mL乙醇洗脱，得到约1mCi的放射性碘标记的终产物。

与以上概述的合成方法相似，进行¹²³I放射性标记衍生物的制备。例如，在所述合成方法中以[¹²³I]碘化钠代替[¹²⁵I]碘化钠将得到¹²³I放射性标记的化合物。这种以一种放射性卤原子取代另一种放射性卤原子是本领域众所周知的，参见例如Mathis CA，Taylor SE，Biegon A，Enas JD.[¹²⁵I]5-Iodo-6-nitroquipazine：a potent and selective ligand for the5-hydroxytryptamine uptake complex I.In vitro studies.Brain Research1993；619：229-235；Jagust W，Eberling JL，Roberts JA，Brennan KM，Hanrahan SM，Van Brocklin H，Biegon A，Mathis CA.In vivo imaging ofthe 5-hydroxytryptamine reuptake site in primate brain using SPECT and[¹²³I]5-iodo-6-nitroquipazine.European Journal of Pharmacolgy 1993；242：189-193；Jagust WJ，Eberling JL，Biegon A，Taylor SE，VanBrocklinH，Jordan S，Hanrahan SM，Roberts JA，Brennan KM，Mathis CA.[Iodine-123]5-Iodo-6-Nitroquipazine：SPECT Radiotracer to Image theSerotonin Transporter.Journal of Nuclear Medicine 1996；37：1207-1214.)。

实施例3：根据反应路线II I合成2-(3-¹⁸F-氟-4-甲基氨基-苯基)-苯并噻唑-6-醇

反应路线III

将含0.35mL 95％富集[O-18]的水的回旋加速器靶以20μA束电流的11MeV质子辐照60分钟，并将内容物转移至含有在乙腈(57μL)中的2mg Cs₂CO₃的5mL反应瓶中。使用1mL等分量的乙腈，将所述溶液在110℃在氩气流下蒸发至干3次。向干燥的[F-18]氟化物中加入在1mLDMSO中的6mg的6-MOMO-BT-3’-Cl-4’-NO₂，将反应瓶密封并加热至120℃持续20分钟(该第一放射合成步骤的放射化学引入是约20％的已溶解[F-18]氟化物。向粗反应混合物中加入8mL水和6mL乙醚，将所述混合物振摇并使其分离。移除醚相并在氩气流下于120℃蒸发至干。向干燥的样品中加入0.5mL无水EtOH以及3mg乙酸铜(II)和8mg NaBH₄。在室温下使还原反应进行10分钟(所述还原步骤的粗产率是约40％)。向反应混合物中加入8mL水和6mL乙醚，振摇混合物并分离醚相。在氩气流下于120℃干燥醚相。向反应瓶中加入700μL含有30微摩尔CH₃I和20mg干燥KOH的DMSO。将反应瓶在120℃加热10分钟。加入700μL2∶1MeOH/HCl(浓)的溶液并在120℃加热15分钟。加热后，向反应溶液加入1mL 2M乙酸钠缓冲液，然后通过半制备性HPLC使用Phenomenex Prodigy ODS-Prep C18柱(10μm 250×10mm)纯化，以pH7.2的35％乙腈/65％60mM三乙胺-磷酸盐缓冲液(v/v)以流速5mL/分钟洗脱2分钟，然后对于以后的分离流速增加至15mL/分钟。产物2-(3-¹⁸F-氟-4-甲基氨基-苯基)-苯并噻唑-6-醇在约15分钟时洗脱到约16mL体积中。将含有2-(3-¹⁸F-氟-4-甲基氨基-苯基)-苯并噻唑-6-醇的级分以50mL水稀释并洗脱通过Waters C18 SepPak Plus筒。然后以10mL水清洗所述SepPak筒，并用1mL乙醇(无水)将所述产物洗脱进无菌瓶中。以10mL无菌生理盐水稀释所述溶液用于向动物静脉注射。在120分钟放射合成(未校正衰减)的终点，以0.5％(n＝4)的放射化学产率得到2-(3-¹⁸F-氟-4-甲基氨基-苯基)-苯并噻唑-6-醇，其平均比活性为1000Ci/mmol。通过放射性HPLC，采用在350nm的UV检测，使用Phenomenex Prodigy ODS(3)C18柱(5μm，250×4.6mm)，以pH 7.2的40％乙腈/60％60mM三乙胺-磷酸盐缓冲液(v/v)洗脱，评价2-(3-¹⁸F-氟-4-甲基氨基-苯基)-苯并噻唑-6-醇的放射化学纯度和化学纯度。在2mL/分钟(k’＝5.5)的流速下，2-(3-¹⁸F-氟-4-甲基氨基-苯基)-苯并噻唑-6-醇的保留时间约为11分钟。放射化学纯度＞99％，化学纯度＞90％。通过反相放射性HPLC，使用与真(冷)标准共注射的放射化学终产品的质量控制样品，进行2-(3-¹⁸F-氟-4-甲基氨基-苯基)-苯并噻唑-6-醇身份的放射化学确认。

实施例4：根据反应路线IV合成2-[4-(3-¹⁸F-氟-丙基氨基)-苯基]-苯并噻唑-6-醇

反应路线IV

将含0.35mL 95％富集[O-18]的水的回旋加速器靶以20μA束电流的11MeV质子辐照60分钟，并将内容物转移至含有在乙腈(57μL)中的Kryptofix 222(22.3mg)和K₂CO₃(7.9mg)的5mL反应瓶中。在加入1mL等分量的乙腈后，将所述溶液在110℃在氩气流下蒸发至干3次。向此干燥的[F-18]氟化物中加入在1mL DMSO中的3mg6-MOMO-BTA-N-Pr-Ots，将所述反应瓶密封并加热到85℃持续30分钟。向此反应瓶加入0.5mL MeOH/HCl(浓)(2/1v/v)，并将此反应瓶在120℃加热10分钟。加热后，向反应溶液加入0.3mL 2M乙酸钠缓冲液，然后通过半制备性HPLC使用Phenomenex Prodigy ODS-prep C18柱(10μm 250×10mm)纯化，以pH 7.2的40％乙腈/60％60mM三乙胺-磷酸盐缓冲液(v/v)以流速5mL/分钟洗脱15分钟，然后对于以后的分离流速增加至8mL/分钟。产物[F-18]6-HO-BTA-N-PrF在约20分钟时洗脱到约16mL体积中。将含有[F-18]6-HO-BTA-N-PrF的级分以50mL水稀释并洗脱通过Waters C18SepPak Plus筒。然后以10mL水清洗所述SepPak筒，并用1mL乙醇(无水)将所述产物洗脱进无菌瓶中。以10mL无菌生理盐水稀释所述溶液用于向动物静脉注射。在120分钟放射合成(未校正衰减)的终点，以8±4％(n＝8)的放射化学产率得到[F-18]6-HO-BTA-N-PrF，其平均比活性为1500Ci/mmol。通过放射性HPLC，采用在350nm的UV检测，使用Phenomenex Prodigy ODS(3)C18柱(5μm，250×4.6mm)，以pH 7.2的40％乙腈/60％60mM三乙胺-磷酸盐缓冲液(v/v)洗脱，评价[F-18]6-HO-BTA-N-PrF的放射化学纯度和化学纯度。在2mL/分钟(k’＝6.1)的流速下，[F-18]6-HO-BTA-N-PrF的保留时间约为12分钟。放射化学纯度＞99％，化学纯度＞90％。通过反相放射性HPLC，使用与真(冷)标准共注射的放射化学终产品的质量控制样品，进行[F-18]6-HO-BTA-N-PrF身份的放射化学确认。

实施例5：2-(3’-碘-4’-氨基苯基)-6-羟基苯并噻唑的合成

4-甲氧基-4’-硝基苯甲酰苯胺的制备

将对氨基苯甲醚(1.0g，8.1mmol)溶于无水吡啶(15ml)中，加入4-硝基苯甲酰氯(1.5g，8.1mmol)。使反应混合物置于室温下16小时。将反应混合物倾倒入水中，减压下过滤收集沉淀并以5％碳酸氢钠(2×10ml)清洗。产物不经进一步纯化而用于下一步骤。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d₆)δ：10.46(s，1H，NH)，8.37(d，J＝5.5Hz，2H，H-3’，5’)，8.17(d，J＝6.3Hz，2H，H-2’，6’)，7.48(d，J＝6.6Hz，2H)，6.97(d，J＝6.5Hz，2H)，3.75(s，3H，MeO).

4-甲氧基-4’-硝基硫代苯甲酰苯胺的制备

将在氯苯(15mL)中的4-甲氧基-4’-硝基硫代苯甲酰苯胺(1.0g，3.7mmol)和Lawesson′s试剂(0.89g，2.2mmol，0.6当量)的混合物加热至回流4小时。蒸发溶剂，将残留物以快速柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)以得到820mg(77.4％)橙色固体产物。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d₆)δ：8.29(d，2H，H-3’，5’)，8.00(d，J＝8.5Hz，2H，H-2’，6’)，7.76(d，2H)，7.03(d，J＝8.4Hz，2H)，3.808.37(d，J＝5.5Hz，2H，H-3’，5’)，8.17(d，J＝6.3Hz，2H，H-2’，6’)，7.48(d，J＝6.6Hz，2H)，6.97(d，J＝6.5Hz，2H)，3.75(s，3H，MeO).(s，3H，MeO).

6-甲氧基-2-(4-硝基苯基)苯并噻唑的制备

将4-甲氧基-4’-硝基硫代苯甲酰苯胺(0.5g，1.74mmol)以少许乙醇(约0.5mL)润湿，加入30％氢氧化钠水溶液(556mg，13.9mmol，8当量)。以水稀释混合物而得到10％氢氧化钠的最终水溶液/悬液。在80-90℃以1分钟的时间间隔将此混合物等分样加入搅拌的铁氰化钾(2.29g，6.9mmol，4当量)水(5mL)溶液中。将所述反应混合物再加热0.5小时，然后使其冷却。通过减压下过滤收集沉淀，以水清洗，以快速柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)而得到130mg(26％)产物。

¹HNMR(300MHz，丙酮-d₆)δ：8.45(m，4H)，8.07(d，J＝8.5Hz，1H，H-4)，7.69(s，1H，H-7)，7.22(d，J＝9.0Hz，1H，H-5)，3.90(s，3H，MeO)

6-甲氧基-2-(4-氨基苯基)苯并噻唑的制备

将6-甲氧基-2-(4-硝基苯基)苯并噻唑(22mg，0.077mmol)和氯化锡(II)(132mg，0.45mmol)在沸乙醇中的混合物在氮气下搅拌4小时。蒸发乙醇，将残留物溶于乙酸乙酯(10mL)，以1N氢氧化钠(2mL)和水(5mL)清洗，以MgSO₄干燥。蒸发溶剂，得到19mg(97％)黄色固体产物。

2-(3’-碘-4’-氨基苯基)-6-甲氧基苯并噻唑的制备

在N₂气氛下向2-(4’-氨基苯基)-6-甲氧基苯并噻唑(22mg，0.09mmol)在冰醋酸(2.0mL)中的溶液中注射在CH₂Cl₂(0.10mL，0.10mmol，1.2当量)中的1M氯化碘溶液。将反应混合物在室温下搅拌16小时。在减压下除去冰醋酸并将残留物溶于CH₂Cl₂中。在以NaHCO₃中和溶液后，分离水层并以CH₂Cl₂萃取。合并有机层，以MgSO₄干燥。蒸发溶剂后，将残留物通过制备性TLC(己烷∶乙酸乙酯＝6∶1)纯化以得到棕色固体2-(4’-氨基-3’-碘代苯基)-6-甲氧基苯并噻唑(25mg，76％)。¹HNMR(300MHz)CDCl₃)δ(ppm)：8.35(d，J＝2.0Hz，1H)，7.87(dd，J₁＝2.0Hz，J₂＝9.0Hz，1H)，7.31(d，J＝2.2Hz，1H)，7.04(dd，J₁＝2.2Hz，J₂＝9.0Hz，1H)，6.76(d，J＝9.0Hz，1H)，3.87(s，3H).

2-(3’-碘-4’-氨基苯基)-6-羟基苯并噻唑的制备

在N₂气氛下向2-(4’-氨基-3’-碘代苯基)-6-甲氧基苯并噻唑(5)(8.0mg，0.02mmol)在CH₂Cl₂(2.0mL)中的溶液中注入在CH₂Cl₂(0.20ml，0.20mmol)中的1M BBr₃溶液。将反应混合物在室温下搅拌18小时。在以水猝灭反应后，以NaHCO₃中和混合物。以乙酸乙酯(3×3mL)萃取水层。合并有机层，以MgSO₄干燥。然后在减压下蒸发溶剂，通过制备性TLC(己烷∶乙酸乙酯＝7∶3)纯化残留物以得到棕色固体2-(3’-碘-4’-氨基苯基)-6-羟基苯并噻唑(4.5mg，58％)。¹HNMR(300MHz，丙酮-d₆)δ(ppm)：8.69(s，1H)，8.34(d，J＝2.0Hz，1H)，7.77(dd，J₁＝2.0Hz，J₂＝8.4Hz，1H)，7.76(d，J＝8.8Hz，1H)，7.40(d，J＝2.4Hz，1H)，7.02(dd，J₁＝2.5Hz，J₂＝8.8Hz，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，1H)，5.47(br.，2H)，HRMSm/z 367.9483(M⁺ calcd for C₁₃H₉N₂OSI 367.9480).

实施例6：2-(3’-碘-4’-甲基氨基苯基)-6-羟基苯并噻唑的合成

6-甲氧基-2-(4-甲基氨基苯基)苯并噻唑的制备

在N₂气氛下将4-甲基氨基苯甲酸(11.5g，76.2mmol)和5-甲氧基-2-氨基苯硫酚(12.5，g，80mmol)的混合物在PPA(约30g)中加热到170℃1.5小时。然后将反应混合物冷却至室温并倾倒入10％K₂CO₃溶液中。在减压下过滤沉淀。以丙酮/水和THF/水将粗产物重结晶两次，然后以活性炭处理而得到4.6g(21％)黄色固体6-甲氧基-2-(4-甲基氨基苯基)苯并噻唑。¹HNMR(300MHz，丙酮-d₆)δ：7.84(d，J＝8.7Hz，2H，H-2’6’)，7.78(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝1.3Hz，1H，H-4)，7.52(d，J＝2.4Hz，1H，H-7)，7.05(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.4Hz，H-5)，6.70(d，J＝7.6Hz，2H，H-3’5’)，5.62(s，1H，NH)，3.88(s，3H，OCH₃)，2.85(d，J＝6.2Hz，3H，NCH₃)

2-(3’-碘-4’-甲基氨基苯基)-6-甲氧基苯并噻唑的制备

在N₂下向溶解于冰醋酸(2mL)的2-(4’-甲基氨基苯基)-6-甲氧基苯并噻唑(20mg，0.074mmol)的溶液中加入Icl(90μL，0.15mmol，1.2当量，1M在CH₂Cl₂中)。使反应在室温下搅拌18小时。然后在减压下除去冰醋酸。将残留物溶于CH₂Cl₂并以NaHCO₃中和。以CH₂Cl₂萃取水层，合并有机层，以MgSO₄干燥并蒸发。以制备性TLC(己烷∶EA＝2∶1)纯化残留物以得到棕色固体2-(4’-甲基氨基-3’-碘代苯基)-6-甲氧基苯并噻唑(8mg，27％)。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：8.39(d，J＝2.0Hz，1H)，7.88(d，J＝9.0Hz，1H)，7.33(d，J＝2.2Hz，1H)，7.06(dd，J₁＝2.2Hz，J₂＝9.0Hz，1H)，6.58(d，J＝9.0Hz，1H)，3.89(s，3H，OCH₃).

2-(3’-碘-4’-甲基氨基苯基)-6-羟基苯并噻唑的制备

在N₂下向溶解于CH₂Cl₂(4mL)中的2-(4’-甲基氨基-3’-碘代苯基)-6-甲氧基苯并噻唑(12mg，0.03mmol)的溶液中加入BBr₃(400μl，0.4mmol，1M在CH₂Cl₂中)。使反应在室温下搅拌18小时。然后加入水猝灭反应，用NaHCO₃中和所述溶液，以乙酸乙酯萃取(3×5mL)。合并有机层，以MgSO₄干燥并蒸发。以制备性TLC(己烷∶EA＝7∶3)纯化残留物以得到棕色固体2-(4’-甲基氨基-3’-碘代苯基)-6-羟基苯并噻唑(5mg，43％)。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：8.37(d，H＝20Hz，1H)，7.88(dd，J₁＝2.0Hz，J₂＝8.4Hz，1H)，7.83(d，J＝8.8Hz，1H)，7.28(d，J＝2.4Hz，1H)，6.96(dd，J₁＝2.5Hz，J₂＝8.8Hz，1H)，6.58(d，J＝8.5Hz，1H)，2.96(s，3H，CH₃).

实施例7：[¹²⁵I]6-OH-BTA-0-3’-I的制备

2-(4’-硝基苯基)-6-羟基苯并噻唑的制备

向2-(4’-硝基苯基)-6-甲氧基苯并噻唑(400mg，1.5mmol)在CH₂Cl₂(10mL)中的悬液中加入BBr₃(1M在CH₂Cl₂中，10mL，10mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24小时。然后以水猝灭反应，以乙酸乙酯萃取(3×20mL)。合并有机层，以水清洗，以MgSO₄干燥并蒸发。通过快速色谱(硅胶，己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)纯化残留物以得到黄色固体产物(210mg，55％)。

¹HNMR(300MHz，丙酮-d₆)δ(ppm)：9.02(s，OH)，8.41(d，J＝9.1Hz，1H)，8.33(d，J＝9.1Hz，1H)，7.96(d，J＝8.6Hz，1H)，7.53(d，J＝2.4Hz，1H)，7.15(dd，J1＝8.6Hz，J2＝2.4Hz，1H).

2-(4’-硝基苯基)-6-甲基磺酰氧基苯并噻唑的制备

向2-(4’-硝基苯基)-6-羟基苯并噻唑(50mg，0.l8mmol)溶解于丙酮(7mL，无水)的溶液中加入K₂CO₃(100mg，0.72mmol，粉末)和MsCl(200μl)。搅拌2小时后，过滤反应混合物。将滤液浓缩，将残留物通过快速色谱(硅胶，己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化残留物以得到浅黄色固体2-(4-硝基苯基)-6-甲基磺酰氧基苯并噻唑(44mg，68％)。

¹HNMR(300MHz，丙酮-d₆)δ(ppm)：8.50-8.40(m，4H)，8.29(d，J＝2.3Hz，1H)，8.23(d，J＝8.9Hz，1H)，7.61(dd，J₁＝2.3Hz，J₂＝8.9Hz，1H).

2-(4’-氨基苯基)-6-甲基磺酰氧基苯并噻唑的制备

向2-(4’-硝基苯基)-6-甲基磺酰氧基苯并噻唑(35mg，0.10mmol)溶解在乙醇(10mL)中的溶液中加入SnCl₂.2H₂O(50mg)。将反应混合物加热回流1.5小时。然后在减压下除去溶剂。将残留物溶于乙酸乙酯(10mL)，以1N NaOH、水清洗，以MgSO₄干燥。蒸发溶剂得到浅棕色固体2-(4’-氨基苯基)-6-甲基磺酰氧基苯并噻唑(21mg，65％)。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：8.02(d，J＝6.2Hz，1H)，7.92(d，J＝8.7Hz，2H)，7.84(d，J＝2.4Hz，1H)，7.38(dd，J₁＝2.4Hz，J₂＝6.2Hz，1H)，6.78(d，J＝8.7Hz，2H)，2.21(s，3H，CH₃).

实施例8：[¹²⁵I]6-OH-BTA-1-3’-I的放射合成

向2-(4’-甲基氨基苯基)-6-羟基苯并噻唑(300mg，1.17mmol)溶于CH₂Cl₂(20mmL)中的溶液中加入Et₃N(2mL)和三氟乙酸(1.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。在减压下除去溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(30mL)中，以NaHCO₃溶液、盐水、水清洗，以MgSO₄干燥。蒸发溶剂后，将残留物溶于丙酮(20ml，以K₂CO₃预干燥)中，加入K₂CO₃(1.0g，粉末)，然后加入MsCl(400mg，3.49mmol)。将反应混合物在室温下搅拌并以TLC检测，直到起始原料消失。然后过滤残留物。在减压下蒸发滤液。将残留物溶于乙酸乙酯(30mL)，以NaHCO₃溶液、盐水、水清洗，以MgSO₄干燥。蒸发溶剂后，将残留物溶于EtOH中并加入NaBH₄。将反应混合物在室温下搅拌2小时。蒸发溶剂，将残留物溶于水，以乙酸乙酯萃取(20ml×3)，合并萃取物并以MgSO₄干燥。蒸发溶剂后，将残留物以快速柱色谱(己烷/乙酸乙酯＝8∶1)纯化而得到棕色固体产物(184mg，47.0％)。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：7.94(d，J＝8.8Hz，1H)，7.87(d，J＝8.7Hz，2H)，7.77(d，J＝2.3Hz，1H)，7.30(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.3Hz，1H)，6.63(d，J＝8.7Hz，2H)，3.16(s，CH₃)，2.89(s，NCH₃).

放射性标记的一般步骤：

向2-(4’-氨基苯基)-6-甲磺酰氧基苯并噻唑或2-(4’-甲基氨基苯基)-6-甲磺酰氧基苯并噻唑(1mg)在250μL醋酸在密封瓶中的溶液中加入40μL氯胺T溶液(28mg溶于500μL醋酸中)，然后再加入27μL(约5mCi)的[¹²⁵I]碘化钠(比活性为2175Ci/mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2.5小时并以饱和亚硫酸氢钠溶液猝灭反应。在以20ml水稀释后，将反应混合物加载于C8Plus SepPak上并以2ml甲醇洗脱。为脱除甲磺酰基保护基，向放射性碘化中间体的洗脱溶液中加入0.5ml的1M NaOH。将混合物在50℃加热2小时。在以500μL 1M乙酸猝灭后，将反应混合物以40mL水稀释，并加载于C8Plus SepPak柱上。以2mL甲醇将具有约3mCi放射活性的放射性碘化产物洗脱下来。将溶液通过氮气流浓缩至300μL，将粗产物通过HPLC在Phenomenex ODS柱上纯化(MeCN/TEA缓冲液，35∶65，pH 7.5，流速0.5mL/分钟直至4分钟，在4-6分钟流速为1.0mL/分钟，在6分钟以后为2.0mL/分钟，保留时间为23.6)。将所收集的级分加载到C8Plus SepPak柱上。用1mL乙醇洗脱，得到约1mCi的放射性碘化终产物。

生物样品

实施例9：来自AL淀粉样变性对象的组织的成像

将来自AL淀粉样变性之对象的心、肺、膀胱、淋巴结和骨的石蜡切片在二甲苯中脱蜡，并在20％乙醇/80％150mM Tris缓冲液(pH 7.4)中的100nM X-34[Styren et al.J Histochem Cytochem 48：1223-1232(2000)]或在PBS(pH7.4)中的100nM 2-(4’-甲基氨基苯基)-6-氰基苯并噻唑(6-CN-BTA-1)[Mathis et al.J Med Chem 46：2740-2754(2003)]中染色60分钟，然后以水进行简短的、5秒钟清洗，盖上盖玻片，然后用UV滤光片观察(图1)。

对于本领域技术人员而言，考虑到说明书和本文中所公开的本发明的实践，本发明的其它实施方案将是显而易见的。说明书仅被认为是示例性的，本发明的实际范围和精神通过以下权利要求来指明。

如本文中以及以下权利要求中所用，不加数量词时意思涵盖单数或复数。

Claims

1.一种用于检测对象中包含至少一种促淀粉样变蛋白的至少一种淀粉样沉积物的体内方法，其包括以下步骤：

其中，

其中R’是H或低级烷基，

(ii)Y是NR¹R²、OR²或SR²，

(v)R³选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph，CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(vi)R⁴选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph，CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(vii)R⁵选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph，CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(viii)R⁶选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph，CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(ix)R⁷选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph，CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(x)R⁸选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph，CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(xi)R⁹选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph，CR₂’-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

(xii)R¹⁰选自H、F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’、R_ph、CR’＝CR’-R_ph，CR₂-CR₂’-R_ph(其中R_ph代表未取代或取代的苯基，所述苯基取代基选自F、Cl、Br、I、低级烷基、(CH₂)_nOR’(其中n＝1、2或3)、CF₃、CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂X、CH₂-CH₂-CH₂X、O-CH₂-CH₂-CH₂X(其中X＝F、Cl、Br或I)、CN、(C＝O)-R’、N(R’)₂、NO₂、(C＝O)N(R’)₂、O(CO)R’、OR’、SR’、COOR’，其中R’是H或低级烷基)和三烷基锡；

作为替代，R³至R¹⁰之一可以是具有或不具有螯合金属基团的螯合基团，所述螯合基团是W-L或V-W-L的形式，其中V选自-COO-、-CO-、-CH₂O-和-CH₂NH-；W是-(CH₂)_n，其中n＝0、1、2、3、4或5，并且L是：

其中M选自Tc和Re，

及其放射性标记衍生物和药学可接受盐，其中至少一个所述取代基结构包含可检测标记；

以及

2.一种用于检测对象中包含至少一种促淀粉样变蛋白的至少一种淀粉样沉积物的体外方法，其包括以下步骤：

(a)获取新鲜或冷冻的组织样品并孵育所述组织的切片或所述组织的匀浆物与式(I)的放射性标记的硫代黄素衍生物：

式I和药学可接受载体，

其中

其中R’是H或低级烷基，

(ii)Y是NR¹R²、OR²或SR²，

其中M选自Tc和Re，

(b)然后通过清洗所述组织切片或过滤并清洗所述组织匀浆物而分离结合的和游离的放射性标记物；以及

(c)检测所述化合物与包含至少一种促淀粉样变蛋白的淀粉样沉积物的结合，其中所述促淀粉样变蛋白选自AL、AH、ATTR、Aβ2M、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、AFib、ACys、ABri、ADan、APrP、ACal、AIAPP、AANF、APro、AIns、AMed、AKer、A(tbn)和ALac。

3.权利要求1或2的方法，其中所述至少一种促淀粉样变蛋白源自选自以下的至少一种蛋白质前体：免疫球蛋白轻链、免疫球蛋白重链、转甲状腺素蛋白、β2-微球蛋白、血清(脱辅基)脂蛋白AA、脱辅基脂蛋白AI、脱辅基脂蛋白AII、凝溶胶蛋白、溶菌酶、纤维蛋白原α-链、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、ABriPP、ADanPP、朊病毒蛋白、降钙素(原)、胰岛淀粉样多肽、心房钠利尿因子、催乳素、胰岛素、乳粘附蛋白、角膜上皮蛋白、Pindborg肿瘤相关的前体蛋白(tbn)和乳铁蛋白。

4.权利要求1的方法，其中所述对象患有与系统性淀粉样变性相关的疾病。

5.权利要求3的方法，其中所述至少一种淀粉样沉积物位于所述对象的中胚层组织中。

6.权利要求4的方法，其中所述组织选自周围神经、皮肤、舌、关节、心或肝。

7.权利要求3的方法，其中所述至少一种淀粉样沉积物位于实质性器官中。

8.权利要求6的方法，其中所述器官选自脾、肾、肝和肾上腺。

9.权利要求3的方法，其中所述与系统性淀粉样变性相关的疾病选自多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴瘤、慢性炎性疾病、类风湿性关节炎、感染性疾病、皮肌炎、硬皮病、局限性肠炎、溃疡性结肠炎、结核病、慢性骨髓炎、支气管扩张症、皮肤脓肿、肺脓肿、癌症、霍奇金病、家族遗传性淀粉样变性、家族性地中海热、家族性痴呆和家族性淀粉样蛋白多神经病。

10.权利要求8的方法，其中所述皮肤脓肿或肺脓肿由皮下使用海洛因而引起。

11.权利要求1的方法，其中所述疾病是脑淀粉样血管病变。

12.权利要求1的方法，其中所述检测选自γ成像、磁共振成像和磁共振波谱。

13.权利要求1的方法，其中所述检测通过γ成像进行，并且所述γ成像是PET或SPECT。

14.权利要求1的方法，其中所述药物组合物通过静脉内注射施用。

15.权利要求1的方法，其中所述对象因慢性肾衰竭而正在接受血液透析。

16.权利要求1的方法，其中所述对象正患有与局限性淀粉样变性相关的疾病。

17.权利要求15的方法，其中所述至少一种淀粉样沉积物位于选自以下的组织中：腱滑膜组织、关节组织、主动脉组织、甲状腺组织、胰岛组织、衰老中垂体组织、医源性组织、心房组织和角膜组织。

18.权利要求15的方法，其中所述至少一种淀粉样沉积物位于胰中。

19.权利要求15的方法，其中所述与局限性淀粉样变性相关的疾病选自原发性骨髓瘤、家族性痴呆、海绵状脑病、c-细胞甲状腺瘤、胰岛素瘤、催乳素瘤和pindborg瘤。

20.权利要求1的方法，其中所述式(I)化合物包含式(II)化合物或所述化合物的放射性标记衍生物、药学可接受盐、水合物、溶剂化物或前药，

其中：

R是C₁-C₆烷基；

R²是氢或卤素；

R³是氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；和

R⁴是氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基，其中当R²是氢或非放射性卤素时，所述烷基、烯基或炔基包含放射性碳、或者被放射性卤素所取代；

21.权利要求1的方法，其中所述式(I)的淀粉样蛋白成像剂选自结构式1-45或其放射性标记的衍生物，其中所述化合物包含至少一个可检测标记：

22.一种用于检测对象中包含至少一种促淀粉样变蛋白的至少一种淀粉样沉积物的体内方法，其包括以下步骤：

其中，

其中R’是H或低级烷基，

(ii)Y是NR¹R²、OR²或SR²，

其中M选自Tc和Re，

由此所述化合物结合至所述含有至少一种促淀粉样变蛋白的淀粉样沉积物，其中所述促淀粉样变蛋白选自AL、AH、ATTR、Aβ2M、AA、AApoAI、AApoAII、AGel、ALys、AFib、ACys、ABri、ADan、APrP、ACal、AIAPP、AANF、APro、AIns、AMed、AKer、A(tbn)和ALac；

(b)辐照所述对象并采集由所述化合物发出的成像数据；以及

(c)处理所述成像数据。

23.以下化合物用于检测患有淀粉样变性相关疾病的对象中至少一种淀粉样沉积物的用途，其中所述化合物是式(I)化合物：