CN101285822A - 一种肿瘤组织微阵列组织芯片 - Google Patents

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CN101285822A CNA2007100394747A CN200710039474A CN101285822A CN 101285822 A CN101285822 A CN 101285822A CN A2007100394747 A CNA2007100394747 A CN A2007100394747A CN 200710039474 A CN200710039474 A CN 200710039474A CN 101285822 A CN101285822 A CN 101285822A
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郜恒骏
张宝峰
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Abstract

本发明公开了一种组织微阵列芯片，该芯片上组织点由人肿瘤组织构成，从而可以在分子、细胞、组织水平上研究不同种类和分化程度的肿瘤组织之间关系。该芯片亦可筛选出特异性、有意义的基因和及其表达的蛋白质。

Description

一种肿瘤组织微阵列组织芯片
一、技术领域
本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及在片基上固定有组织芯片。
二、背景技术
随着组织学、病理学的发展，人们对人体或其他动植物的认识，从解剖学上的器官水平向组织、细胞水平发展。但由于完整的器官很难用显微镜观察，因此需要把器官切成很薄的切片进行染色观察，为了解决这个问题，出现了组织学技术。该方法的原理是通过把器官切成小块组织，用福尔马林固定后，利用酒精脱去该组织中的水分，再浸入二甲苯或苯溶液脱去酒精，最后组织块浸入熔化石蜡溶液中脱去二甲苯，放入模具内用石蜡溶液进行包埋，冷却后形成石蜡块。该石蜡块利用切片机进行切片，把蜡片裱于玻璃片上再进行烤片、脱蜡，染色、封片后就可以用显微镜进行观察研究。目前，组织学技术不仅是单纯染色显微镜观察，还出现了各种特殊染色、免疫组织化学技术、原位杂交技术、原位PCR技术。
近年来随着基因组学、蛋白组学研究发展，人们研究的生理和疾病已逐步从分子水平向细胞水平及组织水平发展，因此，如何利用组织开展研究，是目前研究中所要解决问题之一。采用传统组织技术的研究方法，由于组织标本需要量大，实验工作量大，难以适应研究的学要。近年来，出现了组织微阵列芯片技术，解决了上述问题。该技术将数十个、数百个乃至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上(通常是载玻片)而制作成微缩组织切片，其基本操作程序(如图1所示)包括：设计并拟定组织芯片的分类系列、核对组织或有关疾病的病理诊断、组织定位、阵列蜡块的制作、再从源蜡块上钻取组织并转移到空白石蜡块的相应位置、组织芯片切片。组织芯片的特点有：体积小、信息含量大、高通量；减少或避免了对原始组织蜡块的破坏；组织样本的定位准确，减少无效组织；批量制作及可能的结果分析自动化；不同来源的病例的处理、染色和分析条件相同。
人体的不同器官肿瘤组织，不同的分化程度在病理组织形态教学实验，抗体的表达筛选，肿瘤的组织来源研究，疾病的发生等领域有重要的研究价值。过去只能使用单一器官肿瘤组织制作成病理蜡块，单个肿瘤进行研究，很难平行比较，工作量大，标本获取困难。因此，本领域迫切需要建立起一种高通量，平行化实验，使用方便的工具以解决上述问题。
三、发明内容
本发明的目的是提供一种高效、简便和低成本的肿瘤组织微阵列组织芯片，从而可以在分子、细胞、组织水平上研究肿瘤组织。该芯片亦可筛选出特异性、有意义的基因和及其表达的蛋白质。
该微阵列芯片，包括片基、片基上连接有特异性组织点。片基可以是玻璃、生物膜、硅芯片、聚二氟乙烯膜或硝酸纤维膜。片基上组织点所需不同大小直径可为0.7mm，1.0mm，1.5mm，2.0mm，2.5mm，3.0mm，3.5mm，4.0mm，4.5mm，5.0mm，5.5mm，6.0mm等。密度为500个点/平方厘米~1个点/平方厘米，每张片基上可有1000点~10点不等。可以矩阵列方式、园形方式或其他形状排列。所述组织点至少选自以下食道癌，胃癌，肝癌，结肠癌，直肠癌，肺癌，肾癌，乳腺癌，子宫癌，卵巢癌，脑瘤，甲状腺癌，胰腺癌，膀胱癌，口腔癌肿瘤组织。
下面结合实施例具体阐述本发明内容
1.90点15种肿瘤组织分化I级，II级，III级的微阵列芯片
90点15种肿瘤组织分化I级，II级，III级的微阵列芯片中每个点的组织类型信息如表格一所示，排列后形成的组织芯片效果图如图2所示：1为经过防脱片处理的在玻片，2为排列的组织样本，3为碳芯标记点(标记阵列截止最后一个点)。点的直径为1.5mm，点之间的间距为0.5mm。共有组织样本89个点，每行15个点，共6行。下面结合表格一详叙阵列中排列点的组织类型：从芯片左上角开始：第一行的第1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15点分别为食道癌患者1，胃癌患者1，肝癌患者1，结肠癌患者1，直肠癌患者1，肺癌患者1，肾癌患者1，乳腺癌患者1，子宫癌患者1，卵巢癌患者1，脑瘤患者1，甲状腺癌患者1，胰腺癌患者1，膀胱癌患者1，口腔癌患者1组织；第二行的第16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30点分别为食道癌患者2，胃癌患者2，肝癌患者2，结肠癌患者2，直肠癌患者2，肺癌患者2，肾癌患者2，乳腺癌患者2，子宫癌患者2，卵巢癌患者2，脑瘤患者2，甲状腺癌患者2，胰腺癌患者2，膀胱癌患者2，口腔癌患者2组织；第三行的第31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45点分别为食道癌患者3，胃癌患者3，肝癌患者3，结肠癌患者3，直肠癌患者3，肺癌患者3，肾癌患者3，乳腺癌患者3，子宫癌患者3，卵巢癌患者3，脑瘤患者3，甲状腺癌患者3，胰腺癌患者3，膀胱癌患者3，口腔癌患者3组织；第四行的第45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60点分别为食道癌患者4，胃癌患者4，肝癌患者4，结肠癌患者4，直肠癌患者4，肺癌患者4，肾癌患者4，乳腺癌患者4，子宫癌患者4，卵巢癌患者4，脑瘤患者4，甲状腺癌患者4，胰腺癌患者4，膀胱癌患者4，口腔癌患者4组织；第五行的第61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75点分别为食道癌患者5，胃癌患者5，肝癌患者5，结肠癌患者5，直肠癌患者5，肺癌患者5，肾癌患者5，乳腺癌患者5，子宫癌患者5，卵巢癌患者5，脑瘤患者5，甲状腺癌患者5，胰腺癌患者5，膀胱癌患者5，口腔癌患者5组织；第六行的第76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90点分别为食道癌患者6，胃癌患者6，肝癌患者6，结肠癌患者6，直肠癌患者6，肺癌患者6，肾癌患者6，乳腺癌患者6，子宫癌患者6，卵巢癌患者6，脑瘤患者6，甲状腺癌患者6，胰腺癌患者6，膀胱癌患者6组织，碳芯标记(标记阵列结束)；
这一张90点15种肿瘤组织分化I级，II级，III级的微阵列芯片用于组织形态学教学实验，免疫组化，原位杂交，免疫荧光等不同试验研究。
表格一
第一行   1   食道癌患者1   病理类型：食道鳞状细胞癌I级
第一行   2   胃癌患者1   病理类型：胃腺癌I级
第一行   3   肝癌患者1   病理类型：肝细胞肝癌I级
第一行   4   结肠癌患者1   病理类型：结肠腺癌I级
第一行   5   直肠癌患者1   病理类型：直肠腺癌I级
第一行   6   肺癌患者1   病理类型：肺鳞状细胞癌I级
第一行   7   肾癌患者1   病理类型：肾脏移行细胞癌I级
第一行   8   乳腺癌患者1   病理类型：乳腺浸润性导管癌I级
第一行   9   子宫癌患者1   病理类型：子宫/宫颈鳞状细胞癌I级
第一行   10   卵巢癌患者1   病理类型：卵巢腺癌I级
第一行   11   脑瘤患者1   病理类型：脑胶质瘤胶质母细胞瘤I级
第一行   12   甲状腺癌患者1   病理类型：甲状腺腺癌I级
第一行   13   胰腺癌患者1   病理类型：胰腺腺癌I级
第一行   14   膀胱癌患者1   病理类型：膀胱鳞状细胞癌I级
第一行   15   口腔癌患者1   病理类型：口腔鳞状细胞癌I级
  第二行   16   食道癌患者2   病理类型：食道鳞状细胞癌I级
  第二行   17   胃癌患者2   病理类型：胃腺癌I级
  第二行   18   肝癌患者2   病理类型：肝细胞肝癌I级
  第二行   19   结肠癌患者2   病理类型：结肠腺癌I级
  第二行   20   直肠癌患者2   病理类型：直肠腺癌I级
  第二行   21   肺癌患者2   病理类型：肺鳞状细胞癌I级
  第二行   22   肾癌患者2   病理类型：肾脏移行细胞癌I级
  第二行   23   乳腺癌患者2   病理类型：乳腺浸润性导管癌I级
  第二行   24   子宫癌患者2   病理类型：子宫/宫颈鳞状细胞癌I级
  第二行   25   卵巢癌患者2   病理类型：卵巢腺癌I级
  第二行   26   脑瘤患者2   病理类型：脑胶质瘤胶质母细胞瘤I级
  第二行   27   甲状腺癌患者2   病理类型：甲状腺腺癌I级
  第二行   28   胰腺癌患者2   病理类型：胰腺腺癌I级
  第二行   29   膀胱癌患者2   病理类型：膀胱鳞状细胞癌I级
  第二行   30   口腔癌患者2   病理类型：口腔鳞状细胞癌I级
  第三行   31   食道癌患者3   病理类型：食道鳞状细胞癌II级
  第三行   32   胃癌患者3   病理类型：胃腺癌II级
  第三行   33   肝癌患者3   病理类型：肝细胞肝癌II级
  第三行   34   结肠癌患者3   病理类型：结肠腺癌II级
  第三行   35   直肠癌患者3   病理类型：直肠腺癌II级
  第三行   36   肺癌患者3   病理类型：肺鳞状细胞癌II级
  第三行   37   肾癌患者3   病理类型：肾脏移行细胞癌II级
  第三行   38   乳腺癌患者3   病理类型：乳腺浸润性导管癌II级
  第三行   39   子宫癌患者3   病理类型：子宫/宫颈鳞状细胞癌II级
  第三行   40   卵巢癌患者3   病理类型：卵巢腺癌II级
  第三行   41   脑瘤患者3   病理类型：脑胶质瘤胶质母细胞瘤II级
  第三行   42   甲状腺癌患者3   病理类型：甲状腺腺癌II级
  第三行   43   胰腺癌患者3   病理类型：胰腺腺癌II级
  第三行   44   膀胱癌患者3   病理类型：膀胱鳞状细胞癌II级
  第三行   45   口腔癌患者3   病理类型：口腔鳞状细胞癌II级
  第四行   46   食道癌患者4   病理类型：食道鳞状细胞癌II级
  第四行   47   胃癌患者4   病理类型：胃腺癌II级
  第四行   48   肝癌患者4   病理类型：肝细胞肝癌II级
  第四行   49   结肠癌患者4   病理类型：结肠腺癌II级
  第四行   50   直肠癌患者4   病理类型：直肠腺癌II级
  第四行   51   肺癌患者4   病理类型：肺鳞状细胞癌II级
  第四行   52   肾癌患者4   病理类型：肾脏移行细胞癌II级
  第四行   53   乳腺癌患者4   病理类型：乳腺浸润性导管癌II级
  第四行   54   子宫癌患者4   病理类型：子宫/宫颈鳞状细胞癌II级
  第四行   55   卵巢癌患者4   病理类型：卵巢腺癌II级
  第四行   56   脑瘤患者4   病理类型：脑胶质瘤胶质母细胞瘤II级
  第四行   57   甲状腺癌患者4   病理类型：甲状腺腺癌II级
  第四行   58   胰腺癌患者4   病理类型：胰腺腺癌II级
  第四行   59   膀胱癌患者4   病理类型：膀胱鳞状细胞癌II级
  第四行   60   口腔癌患者4   病理类型：口腔鳞状细胞癌II级
  第五行   61   食道癌患者5   病理类型：食道鳞状细胞癌III级
  第五行   62   胃癌患者5   病理类型：胃腺癌III级
  第五行   63   肝癌患者5   病理类型：肝细胞肝癌III级
  第五行   64   结肠癌患者5   病理类型：结肠腺癌III级
  第五行   65   直肠癌患者5   病理类型：直肠腺癌III级
  第五行   66   肺癌患者5   病理类型：肺鳞状细胞癌III级
  第五行   67   肾癌患者5   病理类型：肾脏移行细胞癌III级
  第五行   68   乳腺癌患者5   病理类型：乳腺浸润性导管癌III级
  第五行   69   子宫癌患者5   病理类型：子宫/宫颈鳞状细胞癌III级
  第五行   70   卵巢癌患者5   病理类型：卵巢腺癌III级
  第五行   71   脑瘤患者5   病理类型：脑胶质瘤胶质母细胞瘤III级
  第五行   72   甲状腺癌患者5   病理类型：甲状腺腺癌III级
  第五行   73   胰腺癌患者5   病理类型：胰腺腺癌III级
  第五行   74   膀胱癌患者5   病理类型：膀胱鳞状细胞癌III级
  第五行   75   口腔癌患者5   病理类型：口腔鳞状细胞癌III级
  第六行   76   食道癌患者6   病理类型：食道鳞状细胞癌III级
  第六行   77   胃癌患者6   病理类型：胃腺癌III级
  第六行   78   肝癌患者6   病理类型：肝细胞肝癌III级
  第六行   79   结肠癌患者6   病理类型：结肠腺癌III级
  第六行   80   直肠癌患者6   病理类型：直肠腺癌III级
  第六行   81   肺癌患者6   病理类型：肺鳞状细胞癌III级
Figure A20071003947400111
附图说明：
图1为组织芯片制作基本流程。
图2为组织芯片示意图其中：1为经过防脱片处理的在玻片；
2为排列的组织样本；3为碳芯标记点(标记阵列截止点)。
应理解，本说明书之题目及本说明书所述及之实施例仅用于说明本发明而不用于对本发明的范围进行限制。

Claims (7)

1、 一种组织微阵列芯片，包括片基和组织点，组织点以点阵方式排列并附于片基之上，其特征在于所述组织点由人类肿瘤组织构成。
2、 根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述片基可以是玻璃、胶片、生物膜、硅芯片、聚二氟乙烯膜或硝酸纤维膜。
3、 根据权利要求2所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述片基可以是经过防脱片处理。
4、 根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于，所述组织点直径为，0.7mm，1.0mm，1.5mm，2.0mm，2.5mm，3.0mm，3.5mm，4.0mm，4.5mm，5.0mm，5.5mm或6.0mm。
5、 根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述点阵方式可以为矩阵列方式或园形方式排列，密度为500至1个点/平方厘米，数量为1000点至10点。
6、 根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述及的人类肿瘤组织至少包括食道鳞状细胞癌、胃腺癌、肝细胞肝癌、结肠腺癌、直肠腺癌、肾脏移行细胞癌、乳腺浸润性导管癌、肺鳞状细胞癌、宫颈鳞状细胞癌、卵巢腺癌、脑胶质瘤胶质母细胞瘤、甲状腺腺癌、胰腺腺癌、膀胱鳞状细胞癌和口腔鳞状细胞癌，分化程度为I至III级。
7、 根据权利要求6所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述及的人类肿瘤组织数量为89点，按点矩阵列方式排列，每行15个点，共6行，点的直径为1.5mm，点之间的间距为0.5mm。
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PB01 Publication
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
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