采用表面等离子体谐振检测技术的测试分析仪器
技术领域
本发明关于一种分子间相互作用分析仪,尤其是关于一种采用表面等离子体谐振(SPR)检测技术进行分子间相互作用检测及分析的测试分析仪器。
背景技术
目前,表面等离子体谐振(SPR)检测技术已逐渐成为分子间相互作用分析的重要手段,特别是在生物分子相互作用分析的领域,并且已成为生化实验室的重要研究工具,如中国专利第200610066542.4号中公开的“高通量多参数图像表面等离子体谐振测试仪”。
现有表面等离子体谐振测试仪的工作原理如下:
如图1和图2所示,固定在光学平台115上的正三角棱镜100的一个镜面水平安置,将传感芯片101(已包被检测样品的镀金玻片)的镀金面朝上安放在棱镜100的顶面,再将反应流池组件102压在传感芯片101的镀金面上。
由于传感芯片101与棱镜100的贴合面存在有气隙,入射光将直接被棱镜100顶面反射掉,无法射入传感芯片101。要消除这个气隙,就要在传感芯片101与棱镜100顶面之间,加入极薄的一层折射率与棱镜100、传感芯片101相近的光耦合介质(图中未出)。这种介质一般为液态的香柏油或特制的可重复使用的透明柔性材料。
光源103与接收装置104分置于棱镜100两侧,光源103发出的平行光从棱镜100的一个侧面入射,经棱镜100顶面,通过光耦合介质射入传感芯片101,在传感芯片101的顶面即镀金面全反射后,从棱镜101的另一侧面出射,投射到接收装置104中,入射光路与出射光路完全对称。
机械扫描同步机构为设在基座116上由螺杆螺母驱动的平行四连杆机构,包括有连杆组105、滑块106、导轨107、螺杆108及电机109。其中光源103与接收装置104分别安装在平行四连杆机构的两个定心旋转的连杆组105上,通过机械扫描同步机构,以棱镜100对称垂面与镀金传感芯片101顶面的交线为旋转中心,光源103与接收装置104同步对称转动,实现入射光的角度扫描与出射光的同步接收。
机械扫描同步机构的输入端即驱动螺杆108的一端装有旋转编码器(角位移传感器)117,以测量螺杆108的旋转角度,通过传动来计算出定心连杆组105的旋转角度,即入射光的角位移。
反应流池组件102通过输入管118、输出管119与自动进样系统120相连通,提供检测所需的样品。
上述表面等离子体谐振测试仪在使用过程中存在有下面缺陷:
1、由于要消除传感芯片与棱镜贴合面所存在的气隙,需要在传感芯片与棱镜之间加入一层光耦合介质,如香柏油或可重复使用的透明柔性材料。其中加香柏油需要手工操作,对实验人员的操作技巧要求很高;同时容易污染传感芯片和棱镜;而且在检测过程中,香柏油的光学性能会发生变化,从而对检测结果产生不良影响。另对于可重复使用的透明柔性材料存在价格昂贵、要增加一套支撑结构且寿命有限等毛缺点。
2、传感芯片与棱镜是分体的,需要实验人员手工将传感芯片置入棱镜上方,同样需要良好的操作技巧,否则,会造成传感芯片安放位置不当、光耦合介质耦合不良或传感芯片破损的问题。
3、入射光的角位移通过间接测量的方法得到的,即:在传动系统的输入端装有旋转编码器,用于测量丝杆的旋转角度,通过传动计算,得出输出端一定心连杆的旋转角度为入射光的角位移。这样将整个传动系统的传动误差都累加到测量结果中,导致角位移测量结果的精度下降。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种功能齐备的采用表面等离子体谐振检测技术的测试分析仪器。
为了实现上述目的,本发明采用表面等离子体谐振检测技术的测试分析仪器,包括有主机箱体,在所述主机箱体内设有反应舱与样品舱,
所述主机箱体通过接口与计算机系统连接,在所述反应舱内部设有光学系统、机械扫描系统、自动上片系统及数据采集系统,在所述样品舱内设有自动进样系统,
所述光学系统、机械扫描系统、自动上片系统、数据采集系统及自动进样系统分别与嵌入式微控制器电连接,该微控制器又通过所述主机箱体上相应接口与安装有系统操作控制软件和数据处理分析软件的所述计算机系统相连,其特征在于,
所述光学系统:包括有光源、图像接收装置及一体化传感组件,所述一体化传感组件包括有棱镜芯片、用于固定所述棱镜芯片的棱镜芯片支架及可将所述棱镜芯片支架装入的棱镜芯片盒,所述棱镜芯片的顶面镀金膜,金膜表面进行化学修饰后包被有生物样品;
所述机械扫描系统:包括有机架、驱动装置及与所述驱动装置连接并由丝杆螺母驱动的平行四连杆机构,所述四连杆机构包含有两个以棱镜芯片的顶面中心相向同步转动的定心摆动连杆,在该定心摆动连杆上分别安装所述光源和所述图像接收装置,在所述机架下方固定有轴线与所述定心摆动连杆转动中心重合的圆光栅,同时,在任意一所述定心摆动连杆上通过测量臂固定连接有可精确、直接读出所述定心摆动连杆旋转角度的圆光栅读数头;
所述自动上片系统:包括有舱门开关/闭锁机构、自动装片/退片机构和自动压片机构;
所述自动进样系统:包括有紧贴在所述棱镜芯片上的反应流池、自动采样针装置、样品流路及缓冲液流路;
所述数据采集系统:包括所述光学系统中的接收装置及机械扫描系统中的圆光栅读数头。
所述测试分析仪器还包括有温度控制系统,所述温度控制系统包括有温度控制器、热源、冷源、温度设定装置及紧贴所述反应流池的温度传感器,该温度传感器将所述反应流池的温度数据反馈传输到所述温度控制器中,并与设定反应流池温度进行比较,当温度传感器数据与设定温度有差异时,接通冷源或热源对反应流池进行降温或升温,使反应流池温度与设定温度趋于一致。
所述舱门开关/闭锁机构包括有舱门、自动开关锁及缓动阻尼器,所述自动装片/退片机构由放置所述一体化传感器组件的滑板座及滑板座上的定位销钉、推板、推杆及无杆气缸组成;所述自动压片机构包括有双向行程气缸及压紧结构。
所述自动采样针装置由采样针与驱动所述采样针进行采样动作的数控位移控制装置。
所述样品流路包括有提供液体压力将样品液从被检样品管进入反应流池的蠕动泵,并在所述蠕动泵与所述被检样品管之间设有用于调节流量的调节流阀,被检后的样品液流回回收皿中。
所述缓冲液流路包括有提供压力的柱塞泵,该柱塞泵通过单向阀与缓冲液瓶连通,同时通过2位3通阀与缓冲液容池及洗针池连通。
所述数据处理分析软件的主要任务是对获取的数据进行实时计算、描绘SPR谱线、计算SPR角度的精确坐标进而绘制出实时反应曲线及绘制反应动力学曲线。
本发明由于将棱镜与芯片制成一体,即将棱镜作为一种成本适当的耗材使用,形成一体化传感器组件,可以免除人工加入光耦合介质(如香柏油)的步骤;同时采用自动上片机构,实现不需要人工上片的目的;并且在同步扫描机构的输出端,通过安装高精度圆光栅,直接测量定心连杆的角位移,消除传动系统的误差,具有精度高的优点。
此外,增加反应流池的温度控制系统,对反应流池的温度进行调节和控制。
附图说明
图1为专利第200610066542.4号中表面等离子体谐振测试仪的机械扫描机构的结构示意图;
图2为专利第200610066542.4号中表面等离子体谐振测试仪的系统光路与流通光路的结构示意图;
图3为本发明中测试分析仪器的系统原理框图;
图4为本发明中测试分析仪器一个实施例的外观示意图;
图5为本发明中光学系统的结构示意图;
图6a---图6c为本发明中一体化传感器组件的结构示意图,在该图中示出一体化传感器组件的组装过程;
图7a和图7b为本发明中机械扫描系统的仰视和主视示意图,在该两图中示出了一体化传感器组件、反应流池及光学系统整合在一起的结构;
图8a至图8c为本发明中自动上片系统的结构示意图,在图中示出了系统中舱门开关的动作过程;
图8d至图8f为本发明中自动上片系统中自动装片/退片机构和自动压片机构的结构示意图,在图中示出了自动装片、退片及压片的动作过程;
图9a为本发明中自动进样系统的结构示意图;
图9b为本发明中自动进样系统的流路原理图;
图9c为本发明另一实施例中自动进样系统的流路原理图;
图10为图9a中所示反应流池的立体结构示意图,该图中示出了反应流池底部流池沟道的结构;
图11a为本发明中温度控制系统的结构示意框图;
图11b为本发明中温度控制系统的操作流程示意图;
图12a为本发明中软件的接口框图;
图12b为本发明中软件的流程图;
图13为本发明中的数据处理分析软件的流程示意图;
图14a为本发明实际应用中所得的实时反应曲线图;
图14b为本发明实际应用中所得的反应动力学曲线图。
具体实施方式
有关本发明的详细说明及技术内容,配合附图说明如下,然而所附附图仅提供参考与说明用,并非用来对本发明加以限制。
如图3和图4所示,本发明中采用表面等离子体谐振检测技术的测试分析仪器包括有主机箱体,在主机箱体内设置有反应舱7与样品舱15,在主机箱体上设有可以与计算机8连接的RS232和1394接口,如图12a所示,在主机箱体内部设有光学系统1、机械扫描系统2、自动上片系统3、自动进样系统4、温度控制系统5及数据采集系统6,各系统分别与嵌入式微控制器9电连接,微控制器9又通过相应接口与安装有系统操作控制软件和数据处理分析软件的计算机8相连,其中微控制器9、计算机8及接口技术均为现有技术,在此不在详细描述。
如图3和图5所示,光学系统1包括有光源10、一体化传感器组件11及图像接收装置12,其中:
光源10是以半导体激光器或LED为发光源的平行光管,本实施例中选用的是以半导体激光器为发光源的平行光管;
图像接收装置12可以是光电二极管阵列、线阵CCD或面阵CCD,本实施例中选用的是面阵CCD;
一体化传感器组件11包括有棱镜芯片110、棱镜芯片支架111及棱镜芯片盒112,如图6a所示,棱镜芯片110的顶面镀金膜113,厚度约为50~60nm,金膜表面进行化学修饰,然后包被生物样品114,即成为棱镜/芯片一体化SPR传感器。该棱镜芯片110可用光学玻璃经光学加工制成,也可用一种光学塑料一聚碳酸酯(PC)用注塑方法制成,棱镜芯片110装入棱镜芯片支架111中,如图6b所示,棱镜芯片支架111上设有四个弹性卡钩1110,将棱镜芯片110牢固卡住。棱镜芯片支架111的底面上有两个定位销孔(图中未示出),用于与自动上片机构准确定位,棱镜芯片110与棱镜芯片支架111装好后,再将其推入棱镜芯片盒112中,组成棱镜/芯片一体化传感器组件11,如图6c所示。
其中棱镜芯片支架111和棱镜芯片盒112用工程塑料注塑而成。
如图5所示,本发明中光学系统由光源10发出一束平行光,入射到棱镜芯片110的顶面上,被金膜113反射后,仍以平行光出射,由图像接收装置12接收,其中入射光路与出射光路完全对称。本发明的光学系统中除了一体化传感器组件11的结构外均为现有技术,即在棱镜芯片110表面镀金膜113及包被生物样品114的技术采用现有在玻片上处理的技术,对本领域的技术人员来说是很熟悉的技术,因此不再详细说明。
如图7a和图7b所示,本发明中的机械扫描系统2与光学系统1、自动上片系统3组装在一起,位于图4中所示的反应舱7内,用于驱动光学系统1进行同步扫描及接收。本发明中的机械扫描系统2包括有机架20、驱动装置(图中未示出)及与驱动装置连接并由丝杆螺母驱动的平行四连杆机构(该平行四连杆机构为现有技术,因此不再描述),该四连杆机构中有两个以棱镜芯片110的顶面中心相向同步转动的定心摆动连杆21和22,在定心摆动连杆21和22上分别安装光学系统1中的光源10和图像接收装置12,当定心摆动连杆21和22做往复相向同步摆动时,带动光源10和图像接收装置12进行同步扫描及接收。在机架20下方固定有轴线与定心摆动连杆21和22的转动中心重合的圆光栅23,同时,在定心摆动连杆22上通过测量臂24固定连接有圆光栅读数头25,该读数头25也可以固定在连杆21上,由于入射光路与出射光路完全对称,定心摆动连杆21和22的转动也完全同步对称,所以,读数头25无论是装在哪个定心摆动连杆21还是22上,结果完全相同。
光源10的入射角度用高精度圆光栅23进行测量,当定心摆动连杆21和22同步转动时,可带动读数头25绕圆光栅中心旋转,从而精确地直接读出定心摆动连杆21或22的旋转角度,即为入射光的角度。
本发明中的自动上片系统3包括有舱门开关/闭锁机构、自动装片/退片机构和自动压片机构。其中:
舱门开关/闭锁机构包括有舱门31、自动开关锁32及缓动阻尼器33,如图8a所示。舱门31位于图4中所示反应舱7的前面板上,当舱门31处于关闭状态时,用手向前轻按舱门31的上部,如图8a所示,自动开关锁32打开,舱门31在缓动阻尼器33的作用下缓缓打开,自动装片/退片机构随之伸出,如图8b所示;要关闭舱门31时(此时自动装片/退片机构已收入反应舱内),用手托起舱门31向前轻推关闭舱门31,自动开关锁32即自动锁住舱门31,如图8a所示。由于自动开关锁32、缓动阻尼器33均采用市售成熟产品,且在本申请的动作过程描述下,对本技术领域的普通技术人员来说是很容易实现的,因此对舱门31、自动开关锁32、缓动阻尼器33的具体结构及工作原理不再另行描述。
如图8b及8d、8e所示,自动装片/退片机构主要由放置一体化传感器组件11的滑板座34及滑板座上的定位销钉35、推板36、推杆37及无杆气缸38组成。
当舱门31打开后,按动装片/退片开关(图中未示出),无杆气缸38动作,推动推杆37及推板36组成的连杆机构,如图8d和图8e所示,将滑板座34向外推至舱门口,如图8b所示;此时,将一体化传感器组件11底面的销钉孔对准定位销钉35,安放在滑板座34上,如图8c和图8d所示。
将一体化传感器组件11安放好以后,按动装片/退片开关,无杆气缸38动作,推杆37及推板36将滑板座34向内拉动,滑板座34上的定位销钉35将棱镜芯片支架111及棱镜芯片110自棱镜芯片盒112中拉出,使棱镜芯片110到达反应舱7内的检测位置,如图8e所示。
一体化传感器组件11的自动压片机构包括有双向行程气缸39及压紧结构,反应流池600装在双向行程气缸39的活塞杆顶端,可执行向下压紧和向上释放动作,如图8e和图8f所示。当棱镜芯片110到检测位置后,关上舱门31,双向行程气缸39即自动启动,气缸的活塞杆将反应流池600紧压在棱镜芯片110上,如图8f所示。至此,整个自动装片过程结束,处于待检测状态。检测完成后退片时,按照以上流程相反的过程既可完成退片,在此不再详述。另,本发明中自动装片/退片机构与自动压片机构的各部件均采用市售成熟产品,在本发明的说明下对本领域的技术人员来说可以安装实现,因此对每个部件的具体结构与工作原理再另行说明。
本发明中的自动进样系统4以并行四流路四检测点为例加以说明,但并不限于四流路与四检测点,可以根据不同需求而另行设置。该自动进样系统4包括有装在自动压片机构上的反应流池600,及位于样品舱内的自动采样针装置、样品流路和缓冲液流路。
如图9a所示,自动采样针装置由四支采样针701和驱动其进行采样动作的两轴数控位移装置702构成。按照不同的检测流程,数控位移装置702带动采样针701沿X轴移动,在样品台上选择相应的被检样品管703、缓冲液容池712或洗针池713;定位后,数控位移装置702带动采样针701沿Z轴运动进行吸取试剂、采样或洗针动作。
样品流路和缓冲液流路的管路布置如图9b所示,所有管路选用医用硅胶管。在样品流路中,反应流池600与棱镜芯片110紧密压合,反应流池600上的四个流池沟道601的敞口面被棱镜芯片110封闭,如图10所示,构成四个反应池,使四条样品流路形成各自的完整回路;四个反应池所包容的棱镜芯片110上的金膜113及其上所包被的检测样品构成四个反应检测点,即构成并行四流路四检测点的样品流路。
样品流路由并列四路蠕动泵704提供液体流动的压力,在蠕动泵704的泵轮转动时,采样针701吸取被测样品,经由可调节流阀705、蠕动泵704进入反应流池600,被检样品与检测样品发生反应后,生成的反应样品流入反应样品回收皿706进行回收,或者流入废液瓶714。由于管路较长,而各管路的内径存在微小差异,将导致四路被测样品到达反应流池的时刻不一致,为此,在管路中安装可调节流阀705,用以各自调整四路管路的流速,使被测样品在同一时刻到达反应流池。
缓冲液流路由柱塞泵711提供压力,当柱塞泵711执行抽液动作时,2位3通阀716截止,缓冲液自缓冲液瓶715被吸入泵管中;当柱塞泵711执行注液动作时,单向阀717截止,缓冲液被注入2位3通阀716,通过控制2位3通阀716输出端的开向,并在单向阀718的作用下,选择将缓冲液注入缓冲液容池712或洗针池713中。2位2通阀719控制洗针池中洗液的排放。
缓冲液流路的作用是:1)为样品流路提供缓冲液(或其它试剂),用于标定反应基准线;2)为冲洗样品管路及采样针提供缓冲液。
图9c中所示的是本发明的另一个实施例中所采用的自动进样系统的流路原理图。该自动进样系统为并行六流路六检测点自动进样系统。该系统的反应流池有六个并行流池沟道,自动采样针装置装六支采样针,数控位移装置与图9a中所示相同。而样品流路与缓冲液流路共用六支一组的柱塞泵,其功能与图9a所示的实施例基本相同,流路控制原理与相同,在此不再赘述。
另,在此强调一点,本发明中样品流路并不限于四条或六条,也可以是一条样品流路或更多,也就是说样品流路可以是串行单路多检测点的,也可以是并行多路多检测点的;流路中的液体流动压力可由蠕动泵提供,也可由柱塞泵提供;采样针的数控位移装置可以是2轴的,也可以是3轴的,可以根据不同需求而加以调整。
图11a和图11b为本发明中的温度控制系统的原理示意图及控制流程图。如图11a和图11b所示,该温度控制系统5对反应流池的温度进行控制,包括有紧贴在反应流池的部位的温度传感器、温度控制器、温度设定装置、用于制冷或加热的冷热源、室温传感器及气阀。该温度传感器将反应流池的温度数据反馈传输到温度控制器中,并与设定反应流池温度进行比较,如果温度传感器数据与设定温度有差异,则接通冷源或热源对反应流池进行降温或升温,使反应流池温度与设定温度趋于一致。冷源和热源可以有多种选择,在本实施例中,冷热源采用的是半导体制冷或制热装置或制冷压缩机及电热装置。
图12a是本发明中软件的接口框图,图12b是本发明中软件的流程图。本发明中的操作控制软件可以对设备进行有效的操作和控制。如图12a所示,该计算机中的操作控制软件与分析仪器主机的数据接口共有4个,分别为3个串口和1个1394接口。系统操作控制软件通过嵌入式微控制器9与图3中所示的各个系统进行数据通讯,并对这些系统进行操作及控制,如图12b所示。
该系统操作控制软件为仪器整机提供了一个简明高效的用户操作界面,从而使该分析仪器的大部分功能可由计算机自动控制和执行,各种操作指令也可在计算机的屏幕发出,从而最大限度地简化了操作,构成了一台光/机/电/软一体化的、功能齐备的自动化测试分析仪器,由于具体的软件及计算机等硬件设备都采用现有技术,因此不再详细描述。
图13是本发明中数据处理分析软件的流程示意图。本发明中软件的主要任务是对获取的数据进行实时计算、描绘SPR谱线、计算SPR角度的精确坐标进而绘制出实时反应曲线(如图14a所示)及绘制反应动力学曲线(如图14b所示)等。其中原始数据由实时采集的CCD图像、圆光栅的角位移数据组成,软件的计算方法如下,如图13所示:
首先计算实时采集的CCD图像,得到反应流池区域的平均灰度值,同时获取光栅尺的位置,记录入一个二维数组;
程序将得到的数据进行平滑,并进行数字滤波,去掉粗大的误差;
经过滤波处理的数据,用最小二乘法进行拟合,并求取极值(最小值);
综合判断各个反应流池所得到的极值,根据经验判据进行判断,如果数据有效,则计录下来;
程序对于记录下来的谐振角再次使用中值法进行数字滤波,去掉系统的脉动干扰,作为最后的谐振角数据,据此制实时反应曲线及反应动力学曲线。由于该计算方法及所使用的软件也为现有技术,同时不是本发明的发明点所在,因此不再作详细描述。
综上所述,本发明中采用表面等离子体谐振检测技术的测试分析仪器具有下述优点:
1、由于本发明采用了自动上片系统以及一体化传感器组件,从而避免了手工将芯片置入仪器内部的棱镜上的繁琐步骤,简化了操作;同时也避免了芯片安放位置不当、光耦合介质耦合不良或芯片破损等缺陷。
2、由于数据处理分析软件所用的角位移数据来自于高精度圆光栅,所以大幅提高了系统的测量精度,其中谐振角的分辨率为0.5毫度,重复测量精度已达±1.5毫度。
3、增加反应流池的温度控制系统,对反应流池的温度进行调节和控制。