CN101199484B - 一种CTLA4-Ig融合蛋白制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种CTLA4-Ig融合蛋白制剂，含有CTLA4-Ig融合蛋白、保护剂、赋型剂和缓冲剂。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，更具体地说，本发明属于一种生物制剂。
背景技术
类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种世界性疾病，临床表现为四肢关节红、肿、疼痛，严重影响患者的生活质量，如不治疗，一般2年内就可以造成关节强直畸形等永久性后遗症。在美国该病的发病率为将近1％，随年龄增长而发病率增高，在35岁以下成年人发病率约0.3％，而65岁以上者发病率超过10％。国内发病率略低，约0.3％左右，但考虑到我国的人口基数，总发病人数仍很高(约4百万人)。RA是严重影响人民健康的疾病，对社会造成的损失是难以估计的。
1991年由Linsley等利用基因工程的方法将细胞膜表面CTLA4分子与免疫球蛋白组合起来，形成一种人工构建的融合蛋白分子CTLA4-Ig，它与B7的亲和力大大高于CD28，可以封闭APC上的B7，阻断共刺激通路，抑制T细胞的激活。
目前已经上市的CTLA4-Ig融合蛋白制剂为冻干制剂(百时美施贵宝公司的产品，商品名ORENCIA)，主药为CTLA4-Ig融合蛋白，辅料为麦芽糖、磷酸二氢钠和氯化钠。该制剂在制备过程中不易控制，制剂冻干后冻干饼塌陷或形状不佳，而且辅料是价格较贵的麦芽糖，增加了患者的用药成本。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的申请人对可能应用于生物制剂的辅料的种类及用量进行了大量的筛选实验，最终得到了较为廉价、生产过程中容易控制且具有较好形状的冻干饼的CTLA4-Ig融合蛋白制剂。
更具体地，本发明公开了一种CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，含有CTLA4-Ig融合蛋白、保护剂、赋型剂和缓冲剂。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，为冻干制剂。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，其中保护剂是蔗糖、麦芽糖、海藻糖、谷氨酸单钠、组氨酸、三元醇之一或其组合。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，其中保护剂为蔗糖。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，其中赋形剂为甘氨酸、丙三醇、甘露醇之一。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，其中赋形剂为甘露醇。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，缓冲剂可以为Tris、柠檬酸缓冲液、组氨酸缓冲液之一。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，其中缓冲剂为Tris。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，其中CTLA4-Ig融合蛋白、保护剂、赋型剂和缓冲剂的含量分别为：CTLA4-Ig融合蛋白5～40mg/ml，保护剂5～50mg/ml，赋型剂10～60mg/ml，缓冲剂1～50mmol。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，其中CTLA4-Ig融合蛋白20mg/ml，保护剂10mg/ml，赋型剂40mg/ml，缓冲剂10.8mmol。
本发明公开的上述CTLA4-Ig融合蛋白的制剂，还含有等渗调节剂氯化钠。
本发明的申请人以CTLA4-Ig为主药，加入了保护剂、缓冲剂、赋形剂，加入保护剂的目的是阻止或减少蛋白质在冻干和后续保藏时的化学和/或物理不稳定性，典型的保护剂包括糖类如蔗糖或海藻糖、麦芽糖；氨基酸如谷氨酸或组氨酸；易溶的盐类包括硫酸镁，较佳的保护剂是蔗糖或海藻糖。赋形剂是一种加入冻干混合物中形成冻干饼物理结构(如使基本上均一的维持开孔结构的冻干饼生产更容易)的化合物，典型的赋形剂包括甘露醇、甘氨酸和丙三醇，优选甘露醇，缓冲液在本发明中可以使用磷酸盐缓冲液、Tris、组氨酸缓冲液和柠檬酸缓冲液，优选Tris。
本发明得到的制剂与利用Orencia的配方得到的制剂经过相同的冻干过程后进行比较，结果见表1：
表1：冻干后目检两种不同制剂的不合格产品
以上结果表明，本发明的制剂与利用Orencia的配方得到的制剂相比具有较为廉价、生产过程中容易控制且具有较好形状的冻干饼的优点。
具体实施方式
以下结合实施例进一步说明本发明，下述实施例不应理解为对本发明的限制。
CTLA4-Ig融合蛋白制备参见：Linsley PS，Brady W，Urnes M，GrosmaireLS，Damle NK，Ledbetter JA.J Exp Med.1991 Sep 1；174(3)：561-9。CTLA-4is a second receptor for the B cell activation antigen B7.本发明所述的CTLA4-Ig融合蛋白不仅仅限于此，本领域的技术人员利用通用的基因工程技术得到的CTLA4-Ig融合蛋白也在本发明所述的CTLA4-Ig融合蛋白之列。除非特别说明，其它原辅料均为市售药用辅料级别。
CTLA4-Ig融合蛋白的制剂的制备
实施例1
配方：
组分 用量
CTLA4-Ig融合蛋白 20mg/ml
蔗糖 10mg/ml
甘露醇 40mg/ml
Tris 1.2mg/ml
制备过程：纯化过程的最后一步纯化采用分子排阻层析的方法，流动相为如下缓冲液：2.51mg/ml Tris，pH＝7.5±0.5。
经过该步骤纯化获得重组人CTLA4-Ig融合蛋白的原液。原液中重组人CTLA4-Ig融合蛋白的浓度应大于20mg/ml。
制剂的配制：
根据原液的体积计算所需的蔗糖及甘露醇的用量(终浓度分别为10mg/ml及40mg/ml)，并加入原液中。
配制制剂缓冲液：
蔗糖 10mg/ml
甘露醇 40mg/ml
Tris 1.2mg/ml
用配制好的制剂缓冲液稀释加入蔗糖及甘露醇的原液，使重组抗EGFR人鼠嵌合单克隆抗体的浓度为10mg/ml，获得半成品。
将半成品无菌分装入西林瓶中，加盖橡胶塞，冷冻干燥，加盖铝塑盖获得成品。
冻干过程如表2所述：
表2 冻干过程的控制：
| 步骤 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 温度 | -30℃ | -30℃ | -10℃ | 0℃ | 30℃ |
| 时间 | 5h | 20h | 4h | 4h | 4h |
| 真空度 | - | ～100μB | ～100μB | ～100μB | ～100μB |
实施例2
配方：
组分 用量
CTLA4-Ig融合蛋白 25mg/ml
麦芽糖 50mg/ml
磷酸二氢钠 1.72mg/ml
氯化钠 1.46mg/ml
制备方法同实施例1
实施例3：
配方
组分 含量
CTLA4-Ig融合蛋白 20mg/ml
蔗糖 10mg/ml
甘氨酸 20mg/ml
L-组氨酸 2.9mg/ml
L-组氨酸盐酸盐一水合物 4.5mg/ml
制备方法同实施例1。
实施例4
配方
组分 含量
CTLA4-Ig融合蛋白 20mg/ml
海藻糖 10mg/ml
丙三醇 20mg/ml
柠檬酸一水合物 0.12mg/ml
柠檬酸钠 7.2mg/ml
制备方法同实施例1
实施例5
配方
组分 含量
CTLA4-Ig融合蛋白 20mg/ml
蔗糖 5mg/ml
甘露醇 10mg/ml
Tris 0.4mg/ml
制备方法同实施例1
实施例6
配方
组分 含量
CTLA4-Ig融合蛋白 5mg/ml
蔗糖 10mg/ml
甘露醇 60mg/ml
Tris 0.8mg/ml
制备方法同实施例1
实施例7
配方
组分 含量
CTLA4-Ig融合蛋白 40mg/ml
蔗糖 20mg/ml
甘露醇 20mg/ml
Tris 2.0mg/ml
氯化钠 4mg/ml
制备方法同实施例1。
Claims (1)
1.一种含CTLA4-Ig融合蛋白的冻干制剂，含有CTLA4-Ig融合蛋白、保护剂、赋型剂和缓冲剂，其中CTLA4-Ig融合蛋白20mg/ml，保护剂蔗糖10mg/ml，赋型剂甘露醇40mg/ml，缓冲剂Tris 1.2mg/ml。
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