CN101180291B - 作为5-ht4受体激动剂的苯并咪唑甲酰胺化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)的苯并咪唑甲酰胺5-HT4受体激动剂化合物，其中R1和X如本说明书中所定义；或其医药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。本发明还涉及包含所述化合物的医药组合物；使用所述化合物治疗与5-HT4受体活性相关的疾病的方法；和可用于制备所述化合物的方法和中间物。本发明另外涉及式(I)化合物的结晶形式。

Description

作为5-HT4受体激动剂的苯并咪唑甲酰胺化合物
技术领域
本发明涉及可用作5-HT4受体激动剂的苯并咪唑甲酰胺化合物。本发明还涉及包含所述化合物的医药组合物；使用所述化合物治疗或预防由5-HT4受体活性介导的医学病况的方法；和可用于制备所述化合物的方法和中间物。
背景技术
血清素(5-羟色胺，5-HT)是一种在体内(中枢神经系统与周围系统)广泛分布的神经递质。现已鉴别出血清素受体的至少七种亚型，并且血清素与这些不同受体的相互作用与多种生理学功能有关。因此，关于研发靶向特异性5-HT受体亚型的治疗剂已引起人们的广泛关注。
具体说来，5-HT4受体的特征和对于与其相互作用的医药剂的鉴别已成为当前主要活动的关注焦点。(例如参看Langlois和Fischmeister，J.Med.Chem.2003，46，319-344的综述。)5-HT4受体激动剂可用于治疗胃肠道蠕动减弱的病症。所述病症包括肠易激综合症(IBS)、慢性便秘、功能性消化不良、胃排空延迟、胃食管返流病(GERD)、胃轻瘫、手术后肠梗阻、假性肠梗阻和药物诱导的运输延缓。此外，还提出，一些5-HT4受体激动剂可能用于治疗中枢神经系统病症，包括认知障碍、行为障碍、情绪障碍和自主神经功能控制障碍。
尽管可能广泛利用调节5-HT4受体活性的医药剂，但目前仅极少数5-HT4受体激动剂化合物在临床上使用。因此，需要能够实现所需的作用并且具有最小副作用的新颖5-HT4受体激动剂。优选药剂可具有改进的选择性、效力、药物动力学特性和/或作用持续时间等特性。
发明内容
本发明提供具有5-HT4受体激动剂活性的新颖化合物。尤其就其特性而言，已发现本发明的化合物为有效的选择性5-HT4受体激动剂。此外，还发现，本发明的优选化合物在动物模型中展现出有利的药物动力学特性，这预示着经口投与后其将具有良好的生物可用性。
因此，本发明提供一种式(I)的化合物：
Figure S200680017691XD00021
其中：
R1为视情况经-OH取代的C3-5烷基；且
X选自
(a)-C(O)OR2，其中R2为C1-4烷基或-(CH2)n-苯基，其中n为0或1；
(b)-C(O)R3，其中R3选自：
视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的苯基，
C1-5烷基，
C4-5环烷基，和
-(CH2)m-A，其中m为0或1，且A选自氨基、呋喃基、噻吩基、吗啉基、四氢呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代吗啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮杂环丁基、噻唑烷基、1，1-二氧代异噻唑烷基和2，4-二甲基异噁唑基；
(c)-C(O)NR4R5，其中R4为氢或C1-3烷基，且R5为视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；
(d)-C(O)C(R6R7)R8，其中R6为氢或C1-3烷基，且R7为氢、-OH或C1-3烷基；或R6和R7一起形成氧基或-(CH2)2-；且R8为苯基或环己基，其中苯基或环己基视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；
(e)-C(O)C(HR9)OR10，其中R9为氢或C1-3烷基，且R10为视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；
(f)-S(O)2R11，其中R11选自C1-3烷基、-CH2-苯基、呋喃基、噻吩基、吗啉基、四氢呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代吗啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮杂环丁基、噻唑烷基、1，1-二氧代异噻唑烷基、2，4-二甲基异噁唑基和苯基，其视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；
或其医药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
本发明还提供一种包含本发明的化合物和医药学上可接受的载剂的医药组合物。
另一方面，本发明提供一种结晶游离碱形式的式(I)的特殊化合物。已发现，结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯具有在约145℃到约155℃的范围内、通常介于约146℃与约148℃之间的熔点温度，大于约240℃的降解温度，并且当在室温下暴露于介于约2％与约90％之间的一系列相对湿度时，展现出小于约0.25％的重量改变。4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的其它结晶形式将在本发明的其它方面中提供。
在一方法方面中，本发明提供一种治疗与5-HT4受体活性相关的疾病或病况(例如，胃肠道蠕动减弱的病症)的方法，所述方法包含向哺乳动物投与治疗有效量的本发明的化合物。
另外，本发明提供一种治疗哺乳动物的与5-HT4受体活性相关的疾病或病况的方法，所述方法包含向所述哺乳动物投与治疗有效量的本发明的医药组合物。
本发明的化合物还可以用作研究工具，也就是用于研究生物系统或样本，或用于研究其它化学化合物的活性。因此，在另一个方法方面中，本发明提供一种使用式(I)的化合物或其医药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体作为用于研究生物系统或样本或用于发现新颖5-HT4受体激动剂的研究工具的方法，所述方法包含使生物系统或样本与本发明的化合物接触，和测定由所述化合物引起的对所述生物系统或样本的影响。
在单独且不同的方面中，本发明还提供可用于制备本发明的化合物的合成方法和本文所述的中间物。
本发明还提供一种如本文所述用于医学治疗中的本发明的化合物，以及本发明的化合物于制备供治疗哺乳动物的与5-HT4受体活性相关的疾病或病况(例如，胃肠道蠕动减弱病症)的调配物或药物的用途。
附图说明
本发明的各个方面将参考随附图示加以说明。
图1绘示结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式I)的粉末x射线衍射(PXRD)图。
图2绘示结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式I)的差示扫描量热(DSC)迹线(顶部迹线，右侧纵轴)和热重分析(TGA)迹线(底部迹线，左侧纵轴)。
图3绘示结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式I)的等温动态吸湿曲线(DMS)。
图4绘示结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式II)的差示扫描量热(DSC)迹线(顶部迹线，右侧纵轴)和热重分析(TGA)迹线(底部迹线，左侧纵轴)。
图5绘示结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式III)的粉末x射线衍射(PXRD)图。
图6绘示结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式III)的差示扫描量热(DSC)迹线(顶部迹线，右侧纵轴)和热重分析(TGA)迹线(底部迹线，左侧纵轴)。
具体实施方式
本发明提供式(I)的新颖苯并咪唑甲酰胺5-HT4受体激动剂，或其医药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。预期以下取代基和值将提供本发明各个方面的代表性实例。这些代表性值意欲进一步定义所述方面而不意欲排除其它值或限制本发明的范围。
在本发明的特定方面中，R1为视情况经-OH取代的C3-5烷基。
在另一特定方面中，R1为C3-5烷基。
在其它特定方面中，R1为C3-4烷基；或R1为异丙基或叔丁基。
在另一特定方面中，R1为异丙基。
在其它特定方面中，R1为1-羟基-1-甲基乙基或2-羟基-1-甲基乙基。
在特定方面中，X为-C(O)OR2，其中R2为C1-4烷基或-(CH2)n-苯基，其中n为0或1。
在另一特定方面中，X为-C(O)OR2，其中R2为C1-3烷基或苯基。
在其它特定方面中，X为-C(O)OR2，其中R2为甲基或苯基，或其中R2为甲基。
在特定方面中，X为-C(O)R3，其中R3选自视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的苯基；C1-5烷基；C4-5环烷基；和-(CH2)m-A，其中m为0或1，且A选自氨基、呋喃基、噻吩基、吗啉基、四氢呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代吗啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮杂环丁基、噻唑烷基、1，1-二氧代异噻唑烷基和2，4-甲基二甲基异噁唑基。
在另一特定方面中，X为-C(O)R3，其中R3为视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的苯基。
在另一特定方面中，X为-C(O)R3，其中R3为C1-5烷基或C4-5环烷基。
在另一特定方面中，X为-C(O)R3，其中R3为-(CH2)m-A，其中m为0，且A选自氨基、呋喃基、噻吩基、吗啉基、四氢呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代吗啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮杂环丁基、噻唑烷基、1，1-二氧代异噻唑烷基和2，4-二甲基异噁唑基。
在另一特定方面中，X为-C(O)R3，其中R3为视情况经1或2个选自C1-4烷基、卤基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃基；或噻吩基。
在其它特定方面中，X为-C(O)R3，其中R3为视情况经1或2个选自甲基、氯基、氟基和-CF3的取代基取代的苯基；或R3为呋喃-2-基或噻吩-2-基。
在特定方面中，X为-C(O)NR4R5，其中R4为氢或C1-3烷基，且R5为视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；
在另一特定方面中，X为-C(O)NR4R5，其中R4为氢。
在另一特定方面中，X为-C(O)NR4R5，其中R4为氢，且R5为视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代的苯基。
在其它特定方面中，X为-C(O)NR4R5，其中R4为氢，且R5为视情况经1个卤基或经1个氟基或氯基取代的苯基。
在特定方面中，X为-C(O)C(R6R7)R8，其中R6为氢或C1-3烷基，且R7为氢、-OH或C1-3烷基；或R6和R7一起形成氧基或-(CH2)2-；且R8为苯基或环己基，其中苯基或环己基视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；
在另一特定方面中，X为-C(O)C(R6R7)R8，其中R6为氢。
在另-特定方面中，X为-C(O)C(R6R7)R8，其中R8为视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的苯基。
在另一特定方面中，X为-C(O)C(R6R7)R8，其中R8为视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的环己基。
在其它特定方面中，X为-C(O)C(R6R7)R8，其中R6为氢，且R7为氢、-OH或甲基；或R6和R7一起形成氧基或-(CH2)2-；且R8为苯基或环己基，其中苯基或环己基视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代；或R8为苯基或环己基，其中苯基或环己基视情况经1或2个选自甲基、氟基和氯基的取代基取代。
在特定方面中，X为-C(O)C(HR9)OR10，其中R9为氢或C1-3烷基，且R10为视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基。
在另一特定方面中，X为-C(O)C(HR9)OR10，其中R9为氢或甲基。
在其它特定方面中，X为-C(O)C(HR9)OR10，其中R9为氢或甲基；且R10为视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代的苯基，或视情况经1或2个选自甲基、氟基和氯基的取代基取代的苯基。
在特定方面中，X为-S(O)2R11，其中R11选自C1-3烷基、-CH2-苯基、呋喃基、噻吩基、吗啉基、四氢呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代吗啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮杂环丁基、噻唑烷基、1，1-二氧代异噻唑烷基、2，4-二甲基异噁唑基和苯基，其视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代。
在另一特定方面中，X为-S(O)2R11，其中R11为C1-3烷基、2，4-二甲基异噁唑基或苯基，其视情况经1、2或3个选自C1-4烷基、卤基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代。
在其它特定方面中，X为-S(O)2R11，其中R11为甲基或苯基，其视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基或1或2个选自甲基、氟基和氯基的取代基取代。
一方面，本发明提供一种式(I)的化合物，其中
R1为C3-4烷基；且
X选自：
(a)-C(O)OR2，其中R2为C1-3烷基或苯基；
(b)-C(O)R3，其中R3为视情况经1或2个选自C1-4烷基、卤基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃基；或噻吩基；
(c)-C(O)NR4R5，其中R4为氢，且R5为视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代的苯基；
(d)-C(O)C(R6R7)R8，其中R6为氢，且R7为氢、-OH或甲基；或R6和R7一起形成氧基或-(CH2)2-；且R8为苯基或环己基，其中苯基或环己基视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代；
(e)-C(O)C(HR9)OR10，其中R9为氢或甲基，且R10为视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代的苯基；和
(f)-S(O)2R11，其中R11为甲基或苯基，其视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代。
本发明另外提供一种式(I)的化合物，其中：
R1为异丙基或叔丁基；且
X选自：
(a)-C(O)OR2，其中R2为甲基或苯基；
(b)-C(O)R3，其中R3为视情况经1或2个选自甲基、氯基、氟基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃-2-基；或噻吩-2-基；和
(c)-C(O)NR4R5，其中R4为氢，且R5为视情况经1个氟基或氯基取代的苯基。
在其它特定方面中，本发明提供实例和下表I到IX中所列的化合物。
以实例1的化合物来说明本文中所使用的化学命名习惯：
根据MDL Information Systems，GmbH(Frankfurt，Germany)所提供的AutoNom软件，将其命名为4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯。稠环结构“苯并咪唑(benzoimidazole)”另外称为“苯并咪唑(benzimidazole)”。如本文所使用，两个术语相同。
如通过下表中所列的特定化合物所例示，本发明的化合物可以含有手性中心。因此，除非另作指示，否则本发明包括外消旋混合物、纯立体异构体和所述异构体的富集立体异构体的混合物。当展示特定立体异构体时，所属领域技术人员应了解，除非另作指示，否则本发明的组合物中可能存在极少量的其它立体异构体，但所述组合物作为整体的任何效用不会因所述其它异构体的存在而消除。
一方面，本发明提供一种选自以下物质的化合物：
4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯；
4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸苯酯；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氯苯甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2，4-二氟-苯甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(呋喃-2-羰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(噻吩-2-羰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{ 1-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯甲酰基哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基]甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-苯基氨甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}-酰胺；
4-(4-{[(2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]-甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯；
2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；和
2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(4-氟苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺。
定义
当描述本发明的化合物、组合物和方法时，除非另作指示，否则以下术语具有以下含义。
术语“烷基”意谓可能为直链或支链或其组合的单价饱和烃基。除非另作定义，否则所述烷基通常含有1到10个碳原子。代表性烷基例如包括甲基(Me)、乙基、正丙基(n-Pr)、异丙基(iPr)、正丁基(n-Bu)、仲丁基、异丁基、叔丁基(tBu)、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。
术语“烷氧基”意谓单价基团-O-烷基，其中烷基如上文所定义。代表性烷氧基例如包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
术语“环烷基”意谓可能为单环或多环的单价饱和碳环基团。除非另作定义，否则所述环烷基通常含有3到10个碳原子。代表性环烷基例如包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。
术语“卤基”意谓氟基、氯基、溴基或碘基。
术语“氧基”意谓双键氧原子(＝O)。
术语“化合物”意谓合成性地制备或以任何其它方式(诸如代谢作用)产生的化合物。
术语“治疗有效量”意谓当投与需要治疗的患者时足以实现治疗作用的量。
如本文所使用，术语“治疗”意谓对于患者(诸如哺乳动物，尤其人类)的疾病、病症或医学病况的治疗，其包括：
(a)预防所述疾病、病症或医学病况发生，也就是对患者进行预防治疗；
(b)改善所述疾病、病症或医学病况，也就是消除患者的疾病、病症或医学病况或引起患者的疾病、病症或医学病况的消退；
(c)抑制所述疾病、病症或医学病况，也就是减缓或阻止患者的疾病、病症或医学病况的发展；或
(d)缓解患者的所述疾病、病症或医学病况的症状。
术语“医药学上可接受的盐”意谓由向患者(诸如哺乳动物)投与可接受的酸或碱制备的盐。所述盐可以由医药学上可接受的无机或有机酸和医药学上可接受的碱衍生得到。通常，本发明化合物的医药学上可接受的盐是由酸制备。
由医药学上可接受酸衍生得到的盐包括(但不限于)乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烷磺酸、反丁烯二酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、乳酸、顺丁烯二酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、粘酸、硝酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸、xinafoic(1-羟基-2-萘甲酸)、萘-1，5-二磺酸等。
术语“溶剂化物”意谓由一个或一个以上溶质分子(也就是，本发明的化合物或其医药学上可接受的盐)与一个或一个以上溶剂分子形成的复合物或聚集体。所述溶剂化物通常为具有实质固定的溶质与溶剂摩尔比的结晶固体。代表性溶剂例如包括水、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸等。当溶剂为水时，所形成的溶剂化物为水合物。
应理解，术语“或其立体异构体的医药学上可接受的盐或溶剂化物”意欲包括盐、溶剂化物和立体异构体的所有排列，诸如式(I)化合物的立体异构体的医药学上可接受的盐的溶剂化物。
术语“氨基保护基”意谓适于防止氨基氮发生不合需要的反应的保护基。代表性氨基保护基包括(但不限于)甲酰基；酰基，例如烷酰基，诸如乙酰基；烷氧羰基，诸如叔丁氧羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，诸如苯甲氧基羰基(Cbz)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，诸如苯甲基(Bn)、三苯甲基(Tr)和1，1-二-(4′-甲氧基苯基)甲基；硅烷基，诸如三甲基硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)等。
通用合成程序
本发明的化合物可使用以下通用方法和程序由易于获得的原材料制备。尽管本发明的特定方面在下文的流程中得以说明，但所属领域技术人员将认识到，本发明的所有方面都可以使用本文所述的方法或通过使用所属领域技术人员已知的其它方法、试剂和原材料来制备。应了解，当给定典型或优选加工条件(也就是反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)时，除非另作说明，否则也可使用其它加工条件。最佳反应条件可随所使用的特定反应物或溶剂变化，但所述条件可由所属领域技术人员根据常规优化程序确定。
另外，如所属领域技术人员显而易见，需要常规保护基防止某些官能团遭受不合需要的反应。此项技术中众所周知特定官能团的适当保护基以及进行保护和去保护的适当条件的选择。举例来说，多种保护基和其引入与去除都已描述于T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups in Organic Synthesis，第3版，Wiley，New York，1999和其中所引用的参考文献中。
在一种合成方法中，式(I)的化合物是通过使式(II)的哌啶甲基-哌啶甲基中间物：
Figure S200680017691XD00101
与式(III)的试剂反应来制备：
L-X
(III)，
其中L为离去基团，例如，诸如氯基的卤基或酰氧基、磺酸酯或氧基琥珀酰亚胺；且R1和X如式(I)中所定义。
反应通常是在至少1当量胺碱(诸如，N，N-二异丙基乙胺)存在的情况下，通过使中间物(II)与介于约1当量与约1.5当量之间的中间物(III)在极性质子惰性稀释剂(诸如二氯甲烷)中接触来进行。用于这种方法和下文所述的方法中的适当惰性稀释剂还包括N，N-二甲基甲酰胺、三氯甲烷、1，1，2，2-四氯乙烷、四氢呋喃等。用于本发明的方法中的适当胺碱还包括三乙胺、吡啶等。反应通常是在约0℃到约30℃的范围内的温度下进行约一刻钟到约2小时的时间，或直到反应大体上完成为止。示范性试剂L-X(其中L为氯基)包括氯甲酸甲酯、氯甲酸苯酯、氯苯甲酰氯和甲烷磺酰氯。
在另一合成方法中，式(I)化合物(其中X选自-C(O)R3、-C(O)C(R6R7)R8和-C(O)C(HR9)OR10)可以通过式(II)中间物与式(IV)羧酸的酰胺偶合反应来制备：
Figure S200680017691XD00111
在式(IV)中，X′表示R3、C(R6R7)R8或C(HR9)OR10，因此-C(O)X′对应于如上式(IV)中所述的X。在中间物(II)的酰胺偶合反应中，首先使介于约1当量与约1.5当量之间的羧酸(IV)与介于1当量与约1.5当量之间的偶合剂(诸如，六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲(HATU))在极性质子惰性溶剂(诸如二甲基甲酰胺或上文所述的溶剂)中接触。随后，在介于约2当量与约4当量之间的胺碱(例如，N，N-二异丙基乙胺)存在的情况下，使酸混合物与中间物(II)接触。反应通常是在约0℃到约30℃范围内的温度下进行约一刻钟到约2小时的时间，或直到反应大体上完成为止。
适当的替代偶合剂包括N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳化二酰亚胺盐酸盐(EDC)、1，1′-羰基二咪唑(CDI)、1，3-二环己基碳化二酰亚胺(DCC)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷-鏻(PyBop)。偶合剂可以与增效剂组合，例如1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)、羟基苯并三唑(HOBt)或1，4-二氮杂双环[2，2，2]辛烷(DABCO)。
在另一替代方法中，可以通过使式(II)的中间物与以下形式的异氰酸酯反应来制备式(I)的化合物(其中X为-C(O)NHR5)：
O＝C＝N-R5
(V)。
反应通常是在介于约2当量与约4当量之间的胺碱存在的情况下通过使中间物(II)与介于约1当量与约1.5当量之间的中间物(V)在极性质子惰性稀释剂中接触来进行。反应通常是在约0℃到约30℃的范围内的温度下进行约一刻钟到约24小时的时间，或直到反应大体上完成为止。
通过常规程序对式(I)的产物进行分离和纯化。举例来说，可以在减压下将产物浓缩至干并且通过HPLC色谱法对残余物进行纯化。
式(II)的哌啶甲基-哌啶甲基中间物是由易于获得的原材料通过流程A中所述的程序制备。
流程A
其中P1和P2独立地表示氨基保护基，诸如叔丁氧羰基(Boc)。
首先，使式(VI)的羧酸与经保护的氨甲基哌啶反应以形成经保护的式(VII)的中间物。这一反应通常是在上文所述的酰胺偶合剂(例如，N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳化二酰亚胺盐酸盐(EDC)与羟基苯并三唑(HOBt)的组合或1，1′-羰基二咪唑(CDI)与1，4-二氮杂双环[2，2，2]辛烷(DABCO)的组合)存在的情况下，通过使(VI)与介于约1当量与约2当量之间的经保护氨甲基哌啶在极性质子惰性稀释剂中接触来进行。反应通常是在约0℃到约60℃的范围内的温度下进行介于约1小时到约24小时之间的时间，或直到反应大体上完成为止。
通过常规方式将保护基P1从中间物(VII)去除以提供中间物(VIII)。举例来说，当将Boc用作保护基时，可通过用诸如三氟乙酸或盐酸的酸处理来将其去除。
随后，通过用经保护哌啶-甲醛使中间物(VIII)还原胺化来形成式(IX)的中间物。这一反应通常是在介于约1当量与约2当量之间的还原剂存在的情况下，通过使(VIII)与介于约1当量与约2当量之间的经保护哌啶-甲醛在惰性稀释剂中接触来进行。视情况，可以包括约1当量弱酸(诸如乙酸)以加速反应。反应可以在介于约0℃与约30℃之间、通常介于约20℃与约30℃之间的温度下进行约0.25小时到约2小时，或直到反应大体上完成为止。
适当的惰性稀释剂包括二氯甲烷、三氯甲烷、1，1，2，2-四氯乙烷等。典型的还原剂包括三乙酰氧基硼氢化钠、硼氢化钠和氰基硼氢化钠。通过标准程序分离产物(IX)。当以酸盐的形式提供胺(VIII)时，反应中通常包括介于约1当量与约3当量之间的胺碱，诸如N，N-二异丙基乙胺。最后，通过常规程序将保护基P2从中间物(IX)中去除以提供哌啶甲基-哌啶甲基中间物(II)。
式(VI)的羧酸可以由二氨基苯甲酸或酯通过流程B中所述的方法制备：
流程B
Figure S200680017691XD00131
其中R表示甲基或氢。使中间物(XI)与羧酸R1C(O)OH反应以形成酸中间物(VI)。这一反应通常是通过使酸或酯(XI)与介于约2当量与约4当量之间的羧酸R1C(O)OH在酸性水溶液中接触来进行。所述反应通常是在约80℃与约100℃范围内的温度下进行约12小时到约72小时的时间。随后通过加入碱(诸如氢氧化钠)来升高溶液的pH值并且通过常规方式分离产物。
提供甲酯形式的中间物(XI)的常规方法中使用2-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯(X)：
作为原材料。通常，将2-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯(X)溶解于极性稀释剂中，并且通过在过渡金属催化剂存在的情况下使其暴露于氢气氛来进行还原，从而提供二氨基苯甲酸甲酯(XI)。所述反应通常是在环境温度下进行约12小时到约72小时。
当取代基R1的空间体积较大时，例如当R1为叔丁基时，可以通过如例如流程C中所述的两步骤方法转化甲酯(XI’)来制备叔丁基苯并咪唑甲酸(VI’)：
流程C
Figure S200680017691XD00141
如下文的制备3中所详述，首先使甲酯(XI′)与2，2-二甲基丙酰氯反应来提供中间物(XII)，在强酸溶液中使其回流通常介于约12小时与约72小时的时间，来提供叔丁基苯并咪唑甲酸(VI′)。
在其它合成方法中，可以根据流程D中所述的工艺路线使用还原胺化和上述其它反应，和/或使用所属领域技术人员众所周知的其它反应来制备式(I)的化合物。
流程D
Figure S200680017691XD00142
如工艺路线(i)中所示，使式(VIII)的中间物与式(XIII)的中间物反应以提供式(I)的化合物。所述反应通常是在上文流程A中关于胺(VIII)与经保护哌啶-甲醛的反应中所述的条件下进行。
可以通过使4-羟甲基哌啶与式(III)的试剂L-X反应，随后氧化所得中间物来制备中间物(XIII)。举例来说，对于X为-C(O)OCH3的特定情况而言，中间物(XIII)可以如流程E中所示来制备。
流程E
Figure S200680017691XD00151
首先，使4-羟甲基哌啶与氯甲酸甲酯反应来形成羟甲基哌啶中间物(XV)。通常通过在介于约3当量与约5当量之间的碱存在的情况下，使4-羟甲基哌啶水溶液与介于约3当量与约5当量之间的氯甲酸甲酯接触来进行所述反应。所述反应通常是在约0℃到约30℃的范围内的温度下进行约12小时到约72小时的时间，或直到反应大体上完成为止。随后，氧化中间物(XV)以形成甲酰基哌啶基中间物(XIII′)。氧化反应通常利用氧化试剂，诸如草酰氯与二甲亚砜(Swern氧化)、铬酸盐试剂(诸如氯铬酸吡锭)或氧化剂(诸如次氯酸钠)连同催化剂(诸如2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基(TEMPO))。
根据流程D的工艺路线(i)使用中间物(XIII′)制备式(I)化合物将描述于下文的实例214与216中。
如工艺路线(ii)所示，式(I)化合物还可通过使式(VI)的羧酸与式(XIV)的中间物反应来制备。如流程F中所述，可以通过使经保护的氨甲基哌啶与中间物(XIII)反应：
流程F
(其中P为氨基保护基)以提供经保护的式(XVI)的中间物，随后进行去保护步骤来制备中间物(XIV)。根据工艺路线(ii)制备化合物将于制备4和下文的实例14和15中予以描述。
试剂L-X(III)、X′C(O)OH(IV)、O＝C＝N＝R5(V)和R1C(O)OH为市售或易于通过标准程序由常用原材料制备。
有关特定反应条件的其它细节和制备本发明的代表性化合物或其中间物的其它程序将描述于下文的实例中。
因此，在一个方法方面中，本发明提供一种制备式(I)的化合物或其盐或立体异构体的方法，所述方法包含：(a)使式(II)的化合物与式(III)的化合物反应；(b)使式(VIII)的化合物与式(XIII)的化合物反应；或(c)使式(VI)的化合物与式(XIV)的化合物反应，从而提供式(I)的化合物或其盐或立体异构体。
在另一方法方面中，本发明提供一种制备式(I)的化合物(其中X选自-C(O)R3、-C(O)C(R6R7)R8和-C(O)C(HR9)OR10)或其盐或立体异构体的方法，所述方法包含使式(II)的化合物与式(IV)的化合物(其中X’表示R3、C(R6R7)R8或C(HR9)OR10)反应，从而提供式(I)的化合物或其盐或立体异构体。
本发明另外提供一种式(II)的化合物，或其盐或立体异构体或经保护衍生物，其中R1如式(I)中所定义。
结晶形式
另一方面，本发明提供结晶游离碱形式的4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯或其溶剂化物。已观察到三种可区别形式的结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(下文的化合物1)。
本发明的结晶形式I为结晶游离碱。形式I的特征在于粉末x射线衍射(PXRD)图在选自以下值的2θ值处具有两个或两个以上衍射峰：15.08±0.20、15.41±0.20、19.00±0.20、19.70±0.20和23.68±0.20。具体说来，形式I的特征在于粉末x射线衍射图在19.00±0.20和19.70±0.20的2θ值处具有衍射峰。
如粉末x射线衍射领域中众所周知，与相对峰高度相比，PXRD谱的峰位置对于诸如样本制备和仪器几何学细节的实验细节相对不太敏感。因此，一方面，结晶形式I的特征在于粉末x射线衍射图的峰位置大体上与图1中所示的峰位置一致。
形式I的特征还另外在于晶体结构的x射线衍射分析，提供以下晶格参数：单位晶格为尺寸a＝16.9053
Figure 200680017691X_0
、b＝9.5172
Figure 200680017691X_1
、c＝15.4659
Figure 200680017691X_2
的斜方晶系；空间群为Pna21；计算密度为1.22g/cm3。所得分子结构确定化学组成为化合物1的组成，并且不对称单元不含有水或其它溶剂分子。由所得原子位置预测的粉末x射线衍射峰与所观察的结果极为符合。
本发明结晶形式I的特征还在于如通过其差示扫描量热(DSC)曲线所证实的高温热稳定性，如图2所示，所述DSC曲线展现在约145℃到约155℃的范围内、通常介于约146℃与148℃之间的吸热热流的峰值，其可以确定为熔点。此外，热重分析(TGA)曲线展示在低于降解温度(其高于约240℃)时无显著重量改变事件。
另一方面，本发明结晶形式的特征在于其红外吸收光谱，所述光谱在约766、1097、1251、1413、1449、1579、1609、1640和1696cm-1处展示显著的吸收谱带。
如图3所示，经证实，本发明的结晶形式具有可逆的吸附/解吸附曲线和异常低的吸湿性水平(也就是，室温下，在2％相对湿度到90％相对湿度的湿度范围内小于约0.25％的重量增益)。
此外，已发现，当暴露于高温和高湿时，化合物1的结晶形式I稳定。在40℃和75％的相对湿度下存储3个月后，在DSC、TGA或PXRD曲线中无任何可检测到的改变，如通过HPLC分析所测定化学纯度也无任何改变，并且外观也无可观察到的改变。将形式I的颗粒从约470微米的基于体积的平均粒径研磨成约15微米、约22微米或约29微米的基于体积的平均粒径后，通过DSC、TGA或PXRD也未检测到任何改变。
化合物1的结晶形式II的特征在于图4的DSC和TGA曲线。TGA分析表明在约95℃到约105℃的温度范围内、通常在约100℃开始的重量损失在与水或溶剂损失一致的阶梯轮廓(step profile)中，而DCS曲线展现在介于约143℃到约145℃之间的温度下吸热热流的峰与熔解事件同时发生。形式II的PXRD图与形式I的PXRD图并无区别。尽管尚未作出准确鉴别，但形式II的TGA曲线与形式II为溶剂化物的解释相符。
本发明的第三种结晶形式已确定为一水合物。如图5所示，形式III的特征在于粉末x射线衍射(PXRD)图在选自以下值的2θ值处具有两个或两个以上衍射峰：9.14±0.20、12.41±0.20、12.74±0.20、17.75±0.20、18.47±0.20、20.63±0.20、21.13±0.20和27.05±0.20。具体说来，形式III的特征在于粉末x射线衍射图在9.14±0.20和20.63±0.20的2θ值处具有衍射峰。
图6中所示的形式III的DSC和TGA曲线表明，所述材料经受在约65℃到约75℃的温度范围内、通常在约70℃开始的具阶梯轮廓的重量损失，和在介于约90℃与约100℃之间的温度下的吸热热流峰，这与一水合物水损失和随后的熔解相符。形式III的特征还另外在于晶体结构的x射线衍射分析，提供以下晶格参数：单位晶格为尺寸a＝14.8101
Figure 200680017691X_3
、b＝9.9985、c＝17.9222
Figure 200680017691X_5
，β＝106.3020°的单斜晶系；空间群为P21/n；计算密度为1.23g/cm3。所得分子结构确定化学组成为化合物1的组成，并且不对称单元含有单一水分子。
本发明的单独结晶形式可能由以下程序可再现地获得。可以通过以每毫升稀释剂介于约15mg与约25mg之间的化合物1的比例将化合物1分散于选自乙腈、醚、环己烷和乙酸乙酯的惰性稀释剂中以形成混合物，并且使所述混合物在环境温度下蒸发，引起晶体形成，由此来制备结晶形式I。
或者，可以如下文实例216中所述，在不首先分离非晶形化合物1的情况下，通过溶液中的粗化合物1的溶剂交换过程来获得形式I。通常，制备化合物1的反应是在化合物高度可溶于其中的极性质子惰性稀释剂(诸如二氯甲烷)中进行。为制备结晶形式I，在真空蒸馏粗反应产物以去除二氯甲烷的同时，加入乙腈。由蒸馏后剩余的残余物来制备具有每毫升乙腈介于约1mg与约200mg之间的化合物1，通常每毫升乙腈介于约50mg与约125mg化合物1的混合物，并且将其加热到足以溶解残余物的温度，例如约75℃的温度。随后，将混合物冷却到不超过约20℃的温度，以提供结晶形式I，通过常规程序对其进行分离。在示范性方法中，将混合物冷却直到发生成核现象(通常在介于约55℃与约65℃之间的温度下)，并且在所述温度下保持约1小时。随后以每分钟介于约0.25℃与约0.4℃之间的速率将其冷却到约20℃的温度。为增加结晶形式I的产量，可以另外以每分钟介于约0.5℃与约0.75℃之间的速率将混合物冷却到介于约0℃到约5℃之间的温度。
为制备形式II，在环境温度下将非晶形化合物1分散于己烷中直到约10mg/mL的最终浓度并且通过超声波处理所得混合物。在环境温度下约24小时后，获得形式II的结晶固体。
通过在环境温度下，将非晶形化合物1溶解于1∶1的乙醇∶水溶剂混合物中直到约20mg/mL的最终浓度，并且用超声波处理所述溶液约30秒来制备形式III。使溶液在未封盖小瓶中进行部分蒸发。约24小时后，获得形式III的结晶固体。
医药组合物
本发明的苯并咪唑甲酰胺化合物通常是以医药组合物的形式投与患者。所述医药组合物可通过任何可接受的投药路线投与患者，包括(但不限于)经口、经直肠、经阴道、经鼻、吸入、局部(包括透皮)和不经肠投药模式。
因此，在有关其组合物的一个方面中，本发明涉及一种医药组合物，其包含医药学上可接受的载剂或赋形剂和治疗有效量的式(I)化合物或其医药学上可接受的盐或溶剂化物。视情况，所述医药组合物必要时可含有其它治疗剂和/或调配剂。
本发明的医药组合物通常含有治疗有效量的本发明的化合物或其医药学上可接受的盐。通常，所述医药组合物将含有约0.1重量％到约95重量％的活性剂，包括约5重量％到约70重量％和约10重量％到约60重量％的活性剂。
可将任何常规载剂或赋形剂用于本发明的医药组合物中。对特定载剂或赋形剂或载剂或赋形剂组合的选择将视用于治疗特定患者或医学病况或疾病状态类型的投药模式而定。从这一点看，用于特定投药模式的适当医药组合物的制备处于医药技术领域技术人员的技术范围内。
此外，所述组合物的成分是从例如Sigma，P.O.Box 14508，St.Louis，MO63178购得。借助进一步说明，常规调配技术描述于Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第20版，Lippincott Williams&White，Baltimore，Maryland(2000)；和H.C.Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，Lippincott Williams&White，Baltimore，Maryland(1999)中。
可用作医药学上可接受的载剂的材料的代表性实例包括(但不限于)下述材料：(1)糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素，诸如微晶纤维素和其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；(9)油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇类，诸如丙二醇；(11)多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)褐藻酸；(16)无热原质水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液(Ringer’s solution)；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)用于医药组合物中的其它无毒可相容物质。
本发明的医药组合物通常是通过将本发明的化合物与医药学上可接受的载剂和一种或一种以上可选成分充分且紧密混合或掺合来制备。如果必需或需要，那么随后可使用常规程序和设备使所得均匀掺合的混合物成形为片剂、胶囊、丸剂等或装载入片剂、胶囊、丸剂等。
优选将本发明的医药组合物包装成单位剂型。术语“单位剂型”是指适于向患者给药的物理上离散的单位，也就是各单位都含有经计算以单独或与一个或一个以上其它单位组合产生所需治疗作用的预定量的活性剂。举例来说，所述单位剂型可为胶囊、片剂、丸剂等。
在优选实施例中，本发明的医药组合物适于经口投与。经口投与的适当医药组合物可为胶囊、片剂、丸剂、糖锭、扁囊剂、糖衣丸、散剂、颗粒剂的形式；或为于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液的形式；或为水包油型或油包水型液体乳液的形式；或为酏剂或糖浆的形式等；其各自含有预定量的本发明的化合物作为活性成分。
当打算以固体剂型(也就是，以胶囊、片剂、丸剂等形式)经口投药时，本发明的医药组合物通常将包含作为活性成分的本发明的化合物，和一种或一种以上医药学上可接受的载剂，诸如柠檬酸钠或磷酸氢钙。视情况或另外，所述剂型也可包含：(1)填充剂或增量剂，诸如淀粉、微晶纤维素、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(b)粘合剂，诸如羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，诸如甘油；(4)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐和/或碳酸钠；(5)溶解延缓剂，诸如石蜡；(6)吸收促进剂，诸如季铵化合物；(7)润湿剂，诸如十六烷醇和/或单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，诸如高岭土和/或膨润土；(9)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和/或其混合物；(10)着色剂；和(11)缓冲剂。
本发明的医药组合物中也可存在脱模剂、润湿剂、涂布剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。医药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，诸如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。用于片剂、胶囊、丸剂等的涂布剂包括用于肠包衣的涂布剂，诸如邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三酸乙酸纤维素(CAT)、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、乙酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)等。
必要时也可使用例如各种比例的羟丙基甲基纤维素或其它聚合物基质、脂质体和/或微球体调配本发明的医药组合物以提供活性成分的缓释或控释。
此外，本发明的医药组合物可视情况含有遮光剂，并且可经调配从而使其仅在胃肠道某部分中或优先在胃肠道某部分中视情况以延缓的方式释放活性成分。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。适当时，活性成分也可为与一种或一种以上上述赋形剂一起微封装的形式。
经口投与的适当液体剂型举例来说包括医药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。所述液体剂型通常包含活性成分和诸如水或其它溶剂的惰性稀释剂；增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃甲醇、聚乙二醇和山梨聚糖脂肪酸酯和其混合物。除活性成分外，悬浮液还可含有悬浮剂，诸如乙氧化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和山梨聚糖酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄芪胶，和其混合物。
或者，本发明的医药组合物经调配以供吸入投药。通过吸入投与的适当医药组合物通常将为气雾剂或粉末的形式。所述组合物一般是使用众所周知的传递装置投与，诸如定计量吸入器、干粉吸入器、喷雾器或类似传递装置。
当使用加压容器通过吸入投与时，本发明的医药组合物通常将包含活性成分和适当推进剂，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适当的气体。
此外，医药组合物可为包含本发明化合物的胶囊或药筒(例如由明胶制成)和适用于粉末吸入器中的粉末的形式。适当粉末基质包括(例如)乳糖或淀粉。
本发明的化合物还可使用已知的透皮传递系统和赋形剂透皮投与。举例来说，可将本发明的化合物与渗透增强剂(诸如丙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、氮杂环烷-2-酮等)混合且并入贴片或类似传递系统中。可视需要将包括胶凝剂、乳化剂和缓冲剂的其它赋形剂用于所述透皮组合物中。
以下调配物说明本发明的代表性医药组合物：
调配物实例A
经口投与的硬质明胶胶囊制备如下：
成分                     量
本发明的化合物      50mg
乳糖(经喷雾干燥)    200mg
硬脂酸镁                 10mg
代表性程序：将所述成分充分掺合且随后将其装载于硬质明胶胶囊中(每粒胶囊260mg组合物)。
调配物实例B
经口投与的硬质明胶胶囊制备如下：
成分                  量
本发明的化合物    20mg
淀粉              89mg
微晶纤维素        89mg
硬脂酸镁              2mg
代表性程序：将所述成分充分掺合且随后使其通过45号筛目的美国标准筛网(No.45mesh U.S.sieve)，并且将其装载于硬质明胶胶囊中(每粒胶囊200mg组合物)。
调配物实例C
经口投与的胶囊制备如下：
成分                               量
本发明的化合物              10mg
聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯    50mg
淀粉粉末                            250mg
代表性程序：将所述成分充分掺合且随后将其装载于明胶胶囊中(每粒胶囊310mg组合物)。
调配物实例D
经口投与的片剂制备如下：
成分                                     量
本发明的化合物                    5mg
淀粉                              50mg
微晶纤维素                        35mg
聚乙烯吡咯烷酮(10重量％的水溶液)  4mg
羧甲基淀粉钠                      4.5mg
硬脂酸镁                          0.5mg
滑石                                      1mg
代表性程序：使活性成分、淀粉和纤维素通过45号筛目的美国标准筛网并充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，且随后使所述混合物通过14号筛目的美国标准筛网。在50-60℃下干燥由此得到的颗粒并使其通过18号筛目的美国标准筛网。然后将羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石(先前已通过60号筛目的美国标准筛网)加到所述颗粒中。混合后，在制片机上压制混合物以得到重100mg的片剂。
调配物实例E
经口投与的片剂制备如下：
成分                     量
本发明的化合物    25mg
微晶纤维素        400mg
烟雾状二氧化硅    10mg
硬脂酸                   5mg
代表性程序：将所述成分充分掺合且随后进行压制以形成片剂(每片片剂440mg组合物)。
调配物实例F
经口投与的单刻痕片剂制备如下：
成分                          量
本发明的化合物        15mg
玉米淀粉              50mg
交联羧甲基纤维素钠    25mg
乳糖                  120mg
硬脂酸镁                    5mg
代表性程序：将所述成分充分掺合且进行压制以形成单刻痕片剂(每片片剂215mg组合物)。
调配物实例G
经口投与的悬浮液制备如下：
成分                        量
本发明的化合物       0.1g
反丁烯二酸           0.5g
氯化钠               2.0g
对羟基苯甲酸甲酯     0.15g
对羟基苯甲酸丙酯     0.05g
砂糖                 25.5g
山梨糖醇(70％溶液)   12.85g
Veegum k(Vanderbilt Co.)    1.0g
调味剂                      0.035mL
着色剂                      0.5mg
蒸馏水                            补足到100mL
代表性程序：将所述成分混合以形成每10mL悬浮液含有10mg活性成分的悬浮液。
调配物实例H
经吸入投与的干粉制备如下：
成分                    量
本发明的化合物    1.0mg
乳糖                     25mg
代表性程序：将活性成分微粉化且随后与乳糖掺合。然后将这一经掺合混合物装载于明胶吸入药筒中。所述药筒中的内容物是使用粉末吸入器投与。
调配物实例I
通过在定剂量吸入器中吸入来投与的干粉制备如下：
代表性程序：通过将10g平均尺寸小于10μm的微粉化颗粒状活性化合物分散于由0.2g卵磷脂溶解于200mL去矿物质水中所形成的溶液中来制备含有5重量％本发明的化合物和0.1重量％卵磷脂的悬浮液。对所述悬浮液进行喷雾干燥并且使所得物质微粉化成平均直径小于1.5μm的颗粒。将所述颗粒装载于具有加压1，1，2，2-四氟乙烷的药筒中。
调配物实例J
可注射调配物制备如下：
成分                           量
本发明的化合物             0.2g
乙酸钠缓冲溶液(0.4M)       40mL
HCl(0.5N)或NaOH(0.5N)      补足到pH4
水(经蒸馏，无菌)                  补足到20mL
代表性程序：将上述成分掺合并且使用0.5N HCl或0.5N NaOH将pH值调节到4±0.5。
调配物实例K
经口投与的胶囊制备如下：
成分                                       量
本发明的化合物               4.05mg
微晶纤维素(Avicel PH103)     259.2mg
硬脂酸镁                            0.75mg
代表性程序：将所述成分充分掺合且随后将其装载于明胶胶囊(1号尺寸，白色，不透明)中(每粒胶囊264mg组合物)。
调配物实例L
经口投与的胶囊制备如下：
成分                                 量
本发明的化合物               8.2mg
微晶纤维素(Avicel PH103)     139.05mg
硬脂酸镁                            0.75mg
代表性程序：将所述成分充分掺合且随后将其装载于明胶胶囊(1号尺寸，白色，不透明)中(每粒胶囊148mg组合物)。
应了解，适于特定投药模式的本发明化合物的任何形式(也就是，游离碱形式、医药盐的形式或溶剂化物的形式)可以用于上文所述的医药组合物中。
效用
本发明的苯并咪唑甲酰胺化合物为5-HT4受体激动剂，且因此，预期其可用于治疗由5-HT4受体介导或与5-HT4受体活性相关的医学病况，也就是通过用5-HT4受体激动剂治疗可得以改善的医学病况。所述医学病况包括(但不限于)肠易激综合症(IBS)、慢性便秘、功能性消化不良、胃排空延迟、胃食管返流病(GERD)、胃轻瘫、手术后肠梗阻、假性肠梗阻和药物诱导的运输延缓。此外，还提出，一些5-HT4受体激动剂可能用于治疗中枢神经系统病症，包括认知障碍、行为障碍、情绪障碍和自主神经功能控制障碍。
具体来说，本发明的化合物会增加胃肠(GI)道蠕动且因此预期其可用于治疗哺乳动物(包括人类)的由蠕动减弱引起的胃肠道病症。所述胃肠蠕动病症包括(举例来说)慢性便秘、便秘型肠易激综合症(C-IBS)、糖尿病性和特发性胃轻瘫和功能性消化不良。
因此，一方面，本发明提供一种增加哺乳动物胃肠道蠕动的方法，所述方法包含向所述哺乳动物投与治疗有效量的包含医药学上可接受的载剂和本发明的化合物的医药组合物。
当用于治疗胃肠道蠕动减弱病症或由5-HT4受体介导的其它病况时，本发明的化合物通常将以单一每日剂量或以每日多剂量经口投与，但也可使用其它投药形式。每次给药所投与的活性剂的量或每日所投与的总量通常将由医师根据相关情况确定，所述情况包括待治疗的病况、所选择的投药路线、所投与的实际化合物和其相对活性、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度等。
用于治疗胃肠道蠕动减弱病症或由5-HT4受体介导的其它病症的适当剂量将在约0.0007毫克/千克/天到约20毫克/千克/天的活性剂、包括约0.0007毫克/千克/天到约1毫克/千克/天的范围内。对于一个平均体重为70千克的人来说，这将为约每天0.05毫克活性剂到约每天70毫克活性剂的量。
在本发明的一个方面中，本发明的化合物用于治疗慢性便秘。当用于治疗慢性便秘时，本发明的化合物通常将以单一每目剂量或每天多剂量经口投与。用于治疗慢性便秘的剂量优选将在约每天0.05毫克到约每天70毫克的范围内。
在本发明的另一方面中，将本发明的化合物用于治疗肠易激综合症。当用于治疗便秘型肠易激综合症时，本发明的化合物通常将以单一每日剂量或以每天多剂量经口投与。用于治疗便秘型肠易激综合症的剂量优选将在约每天0.05毫克到约每天70毫克的范围内。
在本发明的另一方面中，将本发明的化合物用于治疗糖尿病性胃轻瘫。当用于治疗糖尿病性胃轻瘫时，本发明的化合物通常将以单一每日剂量或以每天多剂量经口投与。用于治疗糖尿病性胃轻瘫的剂量优选将在约每天0.05毫克到约每天70毫克的范围内。
在本发明的另一方面中，将本发明的化合物用于治疗功能性消化不良。当用于治疗功能性消化不良时，本发明的化合物通常将以单一每日剂量或以每天多剂量经口投与。用于治疗功能性消化不良的剂量优选将在约每天0.05毫克到约每天70毫克的范围内。
本发明还提供一种治疗患有与5-HT4受体活性相关的疾病或病况的哺乳动物的方法，所述方法包含向所述哺乳动物投与治疗有效量的本发明的化合物，或包含本发明化合物的医药组合物。
如上文所述，本发明的化合物为5-HT4受体激动剂。因此，本发明另外提供一种使哺乳动物的5-HT4受体激动的方法，所述方法包含向所述哺乳动物投与本发明的化合物。此外，本发明的化合物还可用作调查或研究具有5-HT4受体的生物系统或样本或用于发现新颖5-HT4受体激动剂的研究工具。此外，由于当相比与其它5-HT亚型的受体、尤其5-HT3受体的结合时，本发明的化合物展现出对5-HT4受体的结合选择性，故所述化合物尤其可用于研究生物系统或样本中5-HT4受体的选择性激动作用。具有5-HT4受体的任何适当的生物系统或样本都可用于可在活体外或活体内进行的所述研究中。适于所述研究的代表性生物系统或样本包括(但不限于)细胞、细胞提取物、质膜、组织样本、哺乳动物(诸如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猪等)等。
在本发明的这个方面中，使包含5-HT4受体的生物系统或样本与5-HT4受体激动量的本发明的化合物接触。随后使用常规程序和设备(诸如放射性配体结合分析和功能分析)测定使5-HT4受体激动的作用。所述功能分析包括配体介导的胞内环磷酸腺苷(cAMP)改变；配体介导的酶腺苷酰基环化酶(其合成cAMP)活性改变；经由受体催化的以GDP类似物交换GTP类似物来将鸟苷三磷酸(GTP)类似物(诸如[35S]GTPγS，也就是鸟苷5′-O-(γ-硫基)三磷酸；或GTP-Eu)并入分离膜的配体介导的改变；配体介导的游离胞内钙离子改变(例如，通过荧光成像平板读取器或购自Molecular Devices，Inc.的FLIPR
Figure 200680017691X_6
测量)；和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化的测量。本发明的化合物可在上文所列的任何功能分析或具有类似性质的分析中激动或增强5-HT4受体的活化。5-HT4受体激动量的本发明的化合物通常将在约1纳莫尔浓度到约500纳摩尔浓度的范围内。
此外，本发明的化合物可以用作发现新颖5-HT4受体激动剂的研究工具。在这一实施例中，将测试化合物或一组测试化合物的5-HT4受体结合或功能数据与本发明化合物的5-HT4受体结合或功能数据相比较，以鉴别(如果有)具有优良结合或功能活性的测试化合物。本发明的这个方面包括作为单独实施例的产生比较数据(使用适当分析)和分析测试数据以鉴别所关注的测试化合物。
在众多特性中，已发现本发明的化合物为有效的5-HT4受体激动剂，并且在放射性配体结合分析中对5-HT4受体亚型展现出优于5-HT3受体亚型的实质选择性。此外，经证实，特别提及的本发明的化合物在大鼠模型中具有优良的药物动力学特性。因此，经口投与后，预期所述化合物具有高度的生物可用性。另外，还证实，这些化合物在使用表达hERG心脏钾通道的分离全细胞进行的活体外电压钳模型中并未展现对钾离子电流的不可接受的抑制水平。电压钳分析是一种公认的评定医药剂改变心脏复极模式、尤其引起与心律不齐有关的所谓QT延长的可能的临床前方法。(Cavero等人，Opinion onPharmacotherapy，2000，1，947-73，Fermini等人，Nature Reviews Drug Discovery，2003，2，439-447。)因此，预期包含本发明的化合物的医药组合物具有可接受的心脏概况。
本发明化合物的这些特性以及效用可以使用所属领域技术人员众所周知的各种活体外和活体内分析来证实。代表性分析将于以下实例中予以详细描述。
实例
提供以下合成和生物学实例以说明本发明，且不应将其解释为以任何方式限制本发明的范围。在以下实例中，除非另作说明，否则以下缩写将具有以下含义。下文未定义的缩写将具有其通常所接受的含义。
Boc   ＝    叔丁氧羰基
DMSO  ＝    二甲亚砜
MeCN  ＝    乙腈
TFA   ＝    三氟乙酸
Rf    ＝    保留因子
试剂和溶剂都是从贸易供应商(Aldrich、Fluka、Sigma等)购得，并且不经进一步纯化即使用。除非另作说明，否则反应都是在氮气氛下进行。反应混合物的进程是通过薄层色谱(TLC)、分析型高效液相色谱(分析型HPLC)和质谱监测，所述技术的细节将于下文且在特定反应实例中单独提供。如在各反应中进行的具体描述对反应混合物进行处理；通常，所述混合物是通过萃取和诸如温度和溶剂依赖性结晶和沉淀的其它纯化方法予以纯化。此外，反应混合物通常通过制备型HPLC进行纯化。一种通用方案描述于下文中。反应产物通常是通过质谱和1H-NMR谱表征。对于NMR测量来说，将样本溶解于氘化溶剂(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)中，并且用Varian Gemini 2000仪器(300MHz)在标准观察条件下获取1H-NMR谱。化合物的质谱鉴别是用Applied Biosystems(Foster City，CA)型API 150 EX仪器或Agilent(Palo Alto，CA)型1100LC/MSD仪器通过电喷雾电离方法(ESMS)进行。
制备1：2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺的合成
a.2，3-二氨基苯甲酸甲酯的制备
向经氮气饱和的2-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯(Chess GmbH，50g，0.26mol)于无水乙醇(800mL)中的溶液中加入氢氧化钯(Deguss，20％w/w于碳上，58.75％w/w水，10g)。使浆液脱气随后在室温下在氢气氛(4个大气压)下用力振荡48小时。将催化剂过滤并且在真空中浓缩滤液得到呈深橙色油状物的2，3-二氨基苯甲酸甲酯，静置后凝固(43g，0.26mol，100％)。(m/z)：C8H10N2O2的[M-OCH3]+计算值：135.05，实验值135.3。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)3.74(s，3H)，4.80(br s，1H)，6.20(br s，1H)，6.38(t，1H)，6.70(d，1H)，7.06(d，1H)。
b.2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸的制备
回流下，将2，3-二氨基苯甲酸甲酯(21.5g，0.13mol)和异丁酸(36.2mL，0.39mol)于盐酸水溶液(4M，210mL)中的浆液搅拌24小时以提供均匀溶液。将溶液冷却到10℃，并且在保持低于30℃的温度的同时，使用氢氧化钠水溶液(4M，约210mL)将pH值升高到3.5。在室温下将反应混合物搅拌2小时，将其冷却到10℃并且滤出所得沉淀。将固体滤饼转移到烧杯中并且加入乙腈(300mL)。在室温下搅拌浆液1小时并且过滤以提供灰色固体。真空下干燥固体从而提供标题中间物(23g，0.11mol，87％)。(m/z)：C11H12N2O2的[M+H]+计算值：205.09，实验值205.3。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)1.27(d，6H)，3.39(m，1H)，7.29(t，1H)，7.78(m，2H)。
c.4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
向2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(9.0g，44.1mmol)于无水N，N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中加入4-氨甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.4g，44.1mmol)，随后加入N，N-二异丙基乙胺(16.9 mL，97.0 mmol)。室温下将溶液搅拌15分钟，随后加入羟基苯并三唑(5.9g，44.1mmol)、N-乙基-N-(3-二甲基氨基丙基)碳化二酰亚胺盐酸盐(8.4g，44.1mmol)和额外的N，N-二甲基甲酰胺(50mL)。在室温下将反应混合物搅拌16小时，用二氯甲烷(300mL)进行稀释，并且依次用1M磷酸水溶液、1M氢氧化钠水溶液和盐水加以洗涤。随后将溶液用硫酸钠干燥并且真空浓缩以提供褐色油状物，加入己烷后凝固。过滤固体得到呈浅褐色固体状的标题中间物(13.8g，36.0mmol，78％)。(m/z)：C22H32N4O3的[M+H]+计算值为401.26，实验值为401.5；[M-Boc+H]+为301.5。保留时间(分析型HPLC：2-90％MeCN/H2O，历时6分钟)＝3.7min。1HNMR(300MHz，DMSO-d6):δ(ppm)1.20(m，2H)，1.37(s，9H)，1.37(s，6H)，1.72(m，1H)，1.75(m，2H)，2.73(br s，2H)，3.22(七重峰，1H)，3.36(m，2H)，3.95(m，2H)，7.26(t，1H)，7.63(d，1H)，7.79(d，1H)，10.11(t，1H)。
d.2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺的合成
0℃下，向溶解于二氯甲烷(50mL)4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯(10.8g，27.0mmo1)溶液中以每份5mL缓慢加入三氟乙酸(50mL)。将溶液温到室温，再搅拌20分钟，随后真空干燥。通过与甲苯共蒸发去除过量的三氟乙酸。随后，在0℃下将残余物溶解于极少体积的二氯甲烷中并且将其缓慢加入乙醚(1L)中。室温下，将所得浆液搅拌2小时，随后过滤得到呈浅褐色固体状的标题化合物的双-三氟乙酸盐(12.7g，24.0mmol，89％)。(m/z)：C17H24N4O的[M+H]+计算值：301.21，实验值301.5。保留时间(分析型HPLC：2-50％MeCN/H2O，历时6分钟)＝1.65min。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)1.59(d，6H)，1.60(m，1H)，2.03(m，2H)，2.04(m，1H)，3.00(m，2H)，3.43(m，2H)，3.45(m，2H)，3.63(七重峰，1H)，7.63(t，1H)，7.90(d，1H)，7.96(d，1H)，9.04(t，1H)。
制备2：2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺的合成
a.4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸叔 丁酯的制备
室温下，在氮气下，向2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺双-三氟乙酸盐(6.84g，12.95mmol)于二氯甲烷(65mL)中的悬浮液中依次加入N，N-二异丙基乙胺(1.67g，2.25mL)、1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-甲醛(3.16g，14.89mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液和三乙酰氧基硼氢化钠(3.84g，18.13mmol)。在室温下将所得混合物搅拌1.5小时，随后用1M盐酸水溶液将其酸化到pH值1。将水层去除，并且用1M盐酸水溶液萃取有机层直到有机相中无产物残留为止。将已合并的水层用二氯甲烷洗涤，将其冷却到0℃并且用氢氧化钠颗粒将其碱化到pH值12。随后，将溶液用二氯甲烷萃取直到水相中无产物残留为止，并且将已合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且浓缩得到呈褐色油状物的所需产物(5.4g，10.8mmol，84％)，不经进一步纯化即加以使用。(m/z)：C28H43N5O3的[M+H]+计算值：498.35，实验值498.5。
b.2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺的合成
将前一步骤中的产物(5.4g，10.8mmol)溶解于二氯甲烷(40mL)中并且将其冷却到0℃。加入三氟乙酸(30mL)并且在0℃将溶液再搅拌0.5小时。随后，将混合物浓缩并且在真空下将其与二氯甲烷共蒸发两次。将所得残余物溶解于二氯甲烷(20mL)中，将其冷却到0℃并且用20％w/w氢氧化钠水溶液(50mL)进行碱化。经10分钟将溶液温到室温，随后过滤。将固体用乙腈漂洗并且真空干燥得到浅灰色粉末(3.09g，7.8mmol，72％)，不经进一步纯化即加以使用。(m/z)：C23H35N5O的[M+H]+计算值：398.29，实验值398.4。
制备3：2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺的合成
a.2-氨基-3-(2，2-二甲基丙酰胺基)苯甲酸甲酯的制备
室温下，向2，3-二氨基苯甲酸甲酯(2.3g，13.8mmol)于吡啶(40mL)中的溶液中加入2，2-二甲基丙酰氯(1.7g，14.0mmol)。将溶液搅拌16h，并且使残余物在乙酸乙酯(100mL)与1M盐酸水溶液(100mL)之间分配。分离有机相，用1M盐酸水溶液(100mL)加以洗涤，用硫酸钠干燥并且蒸发得到呈深色油状物的标题化合物(2.7g，10.8mmol，78％)，不经进一步纯化即加以使用。(m/z)：C13H18N2O3的[M+H]+计算值：251.14，实验值250.8。
b.2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸的制备
回流下，将前一步骤中的产物(2.7g，10.8mmol)于4M盐酸水溶液(100mL)中的浆液搅拌24小时以提供均匀溶液。蒸发溶剂以提供呈砖红色固体状的标题中间物的盐酸盐(2.5g，9.8mmol，91％)。(m/z)：C12H14N2O2的[M+H]+计算值：219.12，实验值219.3。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)1.45(d，9H)，3.39(m，1H)，7.91(d，1H)，7.95(d，1H)。
c.4-{[(2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
向2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸盐酸盐(1.11g，4.37mmol)于无水N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入1，1′-羰基二咪唑(0.77g，4.75mmol)。50℃下将溶液搅拌2小时，随后加入4-氨甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.94g，4.39mmol)，接着加入1，4-二氮杂双环[2，2，2]辛烷(1.46g，13mmol)。50℃下将溶液搅拌16小时，使其冷却并且用水(20mL)和乙酸乙酯(60mL)加以稀释。去除水层，将有机层用水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥并且在真空中浓缩以提供标题中间物(1.32g，3.18mmol，73％)，不经进一步纯化即加以使用。(m/z)：C23H34N4O3的[M+H]+计算值：415.27，实验值415.5。
d.2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺的制备
将4-{[(2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯(13.5g，32.6mmol)溶解于二噁烷(200mL)中的4N HCl中并且在室温下搅拌0.5小时。过滤所得固体以提供标题中间物的二盐酸盐(11.3g，29.3mmol，89％)。(m/z)：C18H26N4O的[M+H]+计算值：315.22，实验值315.3。1HNMR(300MHz，D2O+MeOD-d3)：1.54(s，8H)，1.96(m，4H)5 2.91(m，4H)，3.31(br s，1H)，3.45(d，2H)，7.56(t，1H)，7.89-7.92(m，2H)。
e.4-(4-{[(2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸叔 丁酯的制备
室温下，向2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺二盐酸盐(4.28g，11.06mmol)于二氯甲烷(55mL)中的悬浮液中依次加入N，N-二异丙基乙胺(1.71g，2.31mL)、1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-甲醛(2.58g，12.17mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(3.28g，15.48mmol)。在室温下将所得混合物搅拌2小时，随后用1M盐酸水溶液进行萃取。将已合并的水层用氢氧化钠颗粒碱化到pH值12，随后用二氯甲烷进行萃取。将已合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并且蒸发。在高真空下，干燥所得残余物得到浅褐色泡沫状物(4.9g，9.6mmol，87％)，不经进一步纯化即加以使用。(m/z)：C29H45N5O3的[M+H]+计算值：512.35，实验值512.4。
f.2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺的合成
室温下，将如前一步骤中所述制备的粗4-(4-{[(2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.1g，10mmol)用三氟乙酸(40mL)和二氯甲烷(40mL)处理0.5小时。在真空中浓缩混合物，将其再溶解于二氯甲烷(25mL)中并且用1M氢氧化钠水溶液(15mL)进行碱化。去除有机层并且用二氯甲烷对水层进行再萃取。将已合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并且真空浓缩以得到呈褐色泡沫状的所需产物(3.6g，8.8mmol，88％)。(m/z)：C24H37N5O的[M+H]+计算值：412.31，实验值412.6。
制备4：4-(4-氨甲基哌啶-1-基甲基)-哌啶-1-甲酸甲酯的合成
a.4-[4-(叔丁氧羰基氨基-甲基)哌啶-1-基甲基]-哌啶-1-甲酸甲酯的制备
向4-叔丁氧羰基氨甲基哌啶(3.62g，16.9mmol)于二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入4-甲酰基哌啶-1-甲酸甲酯(2.89g，16.9mmol)和乙酸(0.96mL)。在室温下将混合物搅拌10分钟，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(5.4g，25.5mmol)。室温下将最终混合物搅拌1小时。通过加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)终止反应。用二氯甲烷(100mL)萃取混合物，并且将有机层用MgSO4干燥。蒸发有机溶液得到浅黄色油状残余物。通过快速硅胶柱色谱(CH2Cl2到5％MeOH/CH2Cl2)加以纯化得到标题中间物(4.4g)。(m/z)：C19H35N3O4的[M+H]+计算值：370.27，实验值370.5。
b.4-(4-氨甲基哌啶-1-基甲基)-哌啶-1-甲酸甲酯的合成
向4-[4-(叔丁氧羰基氨基-甲基)哌啶-1-基甲基]-哌啶-1-甲酸甲酯(4.4g，10.8mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三氟乙酸(20mL)。在室温下搅拌20分钟后，在真空中蒸发溶液得到呈浅黄色油状物的标题化合物的双-三氟乙酸盐，不经进一步纯化即加以使用。(m/z)：C14H27N3O2的[M+H]+计算值：270.22，实验值270.5。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)4.0(br d，2H)，3.6(m，5H)，2.9-2.7(m，6H)，2.1-1.9(m，2H)，1.7-1.5(m，6H)，1.2-1.0(m，4H)。
实例1：4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的合成
向2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(2.9g，7.3mmol)于二氯甲烷(50mL)中的悬浮液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.05mL，7.3mmol)。将所得溶液冷却到0℃并且逐滴加入氯甲酸甲酯(576μL，7.3mmol)。在0℃下将混合物搅拌1.5小时，用乙酸(1L)中止并且在真空中蒸发得到浅褐色固体(4.8g)，通过制备型反相HPLC[5-10-25％的梯度(5-10％历时10min；10-25％历时50min)；流速15mL/min；在280nm下检测]纯化得到呈白色固体状的标题化合物的双三氟乙酸盐(3.5g，5.1mmol，70％)。(m/z)：C25H37N5O3的[M+H]+计算值：456.30，实验值456.3。保留时间(分析型HPLC：2-50％MeCN/H2O，历时6分钟)＝3.06min。
实例2：4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸苯酯的合成
向2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(0.22g，0.55mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.19mL)于二氯甲烷(5.0mL)中的溶液中加入氯甲酸苯酯(70μL)。在室温下将混合物搅拌10分钟，随后在真空中进行浓缩并且通过制备型反相HPLC加以纯化得到呈白色固体状的标题化合物的双三氟乙酸盐(98.4mg，0.13mmol，24％)。(m/z)：C30H39N5O3的[M+H]+计算值：518.32，实验值518.6。1H NMR(300MHz，MeOD-d3)：δ(ppm)1.14-1.28(m，2H)，1.39-1.53(m，6H)，1.52-1.62(m，2H)，1.70-1.78(m，2H)，1.92-2.06(m，4H)，2.82-2.97(m，6H)，3.32-3.38(m，2H)，3.43-3.50(m，1H)，3.52-3.69(m，2H)，4.04-4.12(m，1H)，4.18-4.26(m，1H)，6.91-6.98(m，1H)，7.08-7.13(m，1H)，7.21-7.28(m，1H)，7.45-7.50(m，1H)，7.73-7.77(m，1H)，7.81-7.87(m，1H)，9.02-9.32(brs，1H)。
实例3：2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氯苯甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺的合成
室温下，向2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(2.1g，5.29mmol)于四氢呋喃(26mL)中的悬浮液中加入N，N-二异丙基乙胺(2.05g，15.87mmol)、二氯甲烷(12mL)和N，N-二甲基甲酰胺(5mL)。向所得悬浮液中缓慢加入邻氯苯甲酰氯(1.02g，5.82mmol)并且在室温下将反应混合物搅拌0.5小时。真空浓缩溶液，将所得残余物用乙酸(7.5mL)和水(0.5mL)稀释并且通过反相制备型HPLC纯化产物。使经纯化的盐在二氯甲烷与1M氢氧化钠水溶液之间分溶，去除有机层并且用二氯甲烷对水层进行再萃取，并且将已合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并在真空中浓缩得到呈白色泡沫状的标题化合物(1.75g，3.26mmol，62％)。(m/z)：C30H38N5O2的[M+H]+计算值：536.28，实验值536.3。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：0.90(br m，2H)，1.24(d，6H)，1.45(br m，2H)，1.68(br m，8H)，1.96(m，1H)，2.72(br m，5H)，3.08(m，2H)，(3.20，m，3H)，4.40(br m，1H)，7.14(t，1H)，7.28(m，2H)，7.39(m，1H)，7.49(dd，1H)，7.66(dd，1H)。
实例4-6
使用与实例3类似地方法，以适当的氯化物试剂替代邻氯苯甲酰氯来制备实例4-6的化合物。
实例4：2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2，4-二氟-苯甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z)：C30H37N5O2的[M+H]+计算值：538.30，实验值538.2。保留时间(分析型HPLC：2-60％MeCN/H2O，历时4分钟)＝2.12min。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：0.92(m，2H)，1.30(m，2H)，1.38(d，6H)，1.53(m，2H)，1.60-1.90(m，6H)，2.07(d，2H)，2.73-2.85(br m，3H)，3.05(t，1H)，3.22(七重峰，1H)，3.38(br m，3H)，4.44(br d，1H)，7.10-7.50(m，4H)，7.62(d，1H)，7.77(d，1H)，10.10(brs，1H)。
实例5：2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(呋喃-2-羰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z)：C28H37N5O3的[M+H]+计算值：492.30，实验值492.2。保留时间(分析型HPLC：2-65％MeCN/H2O，历时4分钟)＝1.68min。
实例6：2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(噻吩-2-羰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z)：C28H37N5O2的[M+H]+计算值：508.28，实验值508.2。保留时间(分析型HPLC：2-65％MeCN/H2O，历时4分钟)＝1.94min。
实例7：2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺的合成
室温下，向2-氟-5-三氟甲基苯甲酸(100mg，0.48mmol)于二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲(200mg，0.48mmol)。在室温下，将混合物搅拌0.25小时，随后加入2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(210mg，0.48mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.184mL，0.96mmol)并且再持续搅拌0.5小时。真空中蒸发溶液并且通过反相HPLC[5-10-25％的梯度(5-10％历时10min；10-25％历时50min)；流速15mL/min；在280nm下检测]纯化粗产物得到呈白色固体状的标题化合物的双三氟乙酸盐(70mg，0.09mmol，18％)。(m/z)：C31H37F4N5O2的[M+H]+计算值：588.30，实验值588.2。保留时间(分析型HPLC：2-60％MeCN/H2O，历时4分钟)＝2.39min。
实例8：2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-苯基氨甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺的合成
室温下，将2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(220mg，0.55mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中。向这一溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(143.2mg，1.1mmol)，随后加入邻氟苯基异氰酸酯(75.4mg，0.55mmol)。在室温下将所得混合物搅拌整夜，在真空中进行浓缩并且通过制备型反相HPLC纯化残余物得到呈白色固体状的标题化合物的双三氟乙酸盐(92.6mg，0.12mmol，22％)。(m/z)：C30H39FN6O2的[M+H]+计算值：535.32，实验值535.2。保留时间(分析型HPLC：2-65％MeCN/H2O，历时4分钟)＝2.09min。
实例9：2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸[1-(1-甲烷磺酰基哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基甲基]酰胺的合成
室温下，将2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(1-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(40mg，0.1mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中。向这一溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.175mL，1mmol)，随后加入甲烷磺酰氯(11.5mg，0.1mmol)。在室温下将混合物搅拌16小时，随后在真空中进行浓缩并且通过制备型反相HPLC纯化残余物得到呈白色固体状的标题化合物的双三氟乙酸盐(27.2mg，0.04mmol，40％)。(m/z)：C24H37N5O3S的[M+H]+计算值：476.27，实验值476.2。保留时间(分析型HPLC：2-65％MeCN/H2O，历时4分钟)＝1.66min。
实例10：4-(4-{[(2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的合成
室温下，向二氯甲烷(29mL)中的制备3的粗产物(2.4g，5.8mmol)中加入N，N-二异丙基乙胺(1.5g，11.6mmol)。将所得混合物冷却到0℃并且逐滴加入氯甲酸甲酯(660mg，6.98mmol)。使反应温到室温并且再搅拌10分钟。将溶液浓缩，将其再溶解于50％乙酸水溶液中，过滤并且通过反相制备型HPLC加以纯化。将所得固体溶解于二氯甲烷中并且用1M氢氧化钠水溶液加以洗涤。将水层用二氯甲烷萃取两次，并且将已合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且浓缩得到呈白色泡沫状的标题化合物(1.3g，2.8mmol，48％)。(m/z)：C26H39N5O3的[M+H]+计算值：470.32，实验值470.6。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)1.02-1.16(m，2H)，1.49(s，9H)，1.47-1.7(m，4H)，1.82-2.03(m，4H)，2.74-2.94(m，6H)，3.31-3.40(m，2H)，3.54-3.58(m，2H)，3.56(s，3H)，3.98-4.03(m，2H)，7.41-7.46(m，1H)，7.71-7.74(m，1H)，7.79-7.82(m，1H)，9.35(brs，1H)。
实例11-13
使用与实例10类似地方法，以适当的氯化物试剂替代氯甲酸甲酯来制备实例11-13的化合物。
实例11：2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z)：C31H40FN5O2的[M+H]+计算值：534.33，实验值534.4。保留时间(分析型HPLC：2-65％ MeCN/H2O，历时4分钟)＝2.09min。
实例12：2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z)：C32H43N5O2的[M+H]+计算值：530.35，实验值530.42。保留时间(分析型HPLC：2-65％ MeCN/H2O，历时4分钟)＝2.22。
实例13：2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(4-氟苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z)：C31H40FN5O2的[M+H]+计算值：534.33，实验值534.4。保留时间(分析型HPLC：2-65％ MeCN/H2O，历时4分钟)＝2.17。
实例14：4-[4-({[2-(1-羟基-1-甲基乙基)-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的合成
a.2-(1-羟基-1-甲基乙基)-1H-苯并咪唑-4-甲酸的制备
向2，3-二氨基苯甲酸甲酯(1.5g，9.2mmol)于4M HCl(50mL)中的溶液中加入2-羟基异丁酸(2.87g，27.6mmol)。在约90℃下搅拌混合物24小时。通过使用氢氧化钠水溶液将其中和到pH值约3，并且浓缩至干。将残余物悬浮于甲醇中并且使其滤过滤纸。浓缩滤液并且用醚漂洗残余物。将剩余固体残余物溶解于乙酸乙酯中，并且用盐水溶液加以洗涤。用MgSO4干燥后，在真空中蒸发有机溶液得到呈浅黄色油状物的标题中间物(约800mg)。不经进一步纯化即将粗产物用于下一步骤中。(m/z)：C11H12N2O3的[M+H]+计算值：221.09，实验值221.1。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.8(dd，1H)，7.7(dd，1H)，7.2(m，1H)，1.3(s，6H)。
b.4-[4-({(2-(1-羟基-1-甲基乙基-1H-苯并咪唑-4-羰基]氨基}甲基)哌啶-1-基甲基]哌啶 -1-甲酸甲酯的合成
向前一步骤的苯并咪唑甲酸产物(0.7g，3.18mmol)、双三氟乙酸盐形式的制备4的氨甲基哌啶产物(1.2g，3.13mmol)和羟基苯并三唑(HOBt)(0.43g，3.18mmol)于二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入三乙胺(1.3mL，9.3mmol)和N-乙基-N-(3-二甲基氨基丙基)碳化二酰亚胺盐酸盐(EDC)(0.67g，3.5mmol)。在室温下将混合物搅拌12小时并且在真空中浓缩至干。使残余物在二氯甲烷(150mL)与饱和碳酸氢钠之间分配。将有机层用MgSO4干燥，并且蒸发至干，得到浅黄色油状残余物。通过制备型HPLC加以纯化得到标题化合物的双-三氟乙酸盐；(m/z)：C25H37N5O4的[M+H]+计算值：472.29，实验值472.5。保留时间(分析型HPLC：5-30％ MeCN/H2O，历时6分钟)＝3.67min。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.9-7.8(m，2H)，7.6-7.5(t，1H)，4.0(br d，2H)，3.6(s，5H)，2.9-2.75(br m，5H)，2.05-1.9(br d，3H)，1.68(m，6H)，1.15(m，4H)。
实例15：4-[4-({[2-(2-羟基-1-甲基乙基)-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的合成
a.2-(2-羟基-1-甲基乙基)-1H-苯并咪唑-4-甲酸的制备
向2，3-二氨基苯甲酸甲酯(2.1g，14.1mmol)于4M HCl(90mL)中的溶液中加入2-甲基-3-羟基丙酸甲酯(5g，42.3mmol)。在约90℃下搅拌混合物24小时。通过使用氢氧化钠水溶液将其中和到pH值约3，并且浓缩至干。将残余物悬浮于甲醇中并且使其滤过滤纸。对滤液进行浓缩后，将剩余固体残余物溶解于水中并且用乙酸乙酯加以洗涤。在真空中蒸发水溶液得到呈浅黄色油状物的标题中间物(约800mg)。不经进一步纯化即将粗产物用于下一步骤中。(m/z)：C11H12N2O3的[M+H]+计算值：221.09，实验值221.3。1H NMR(CD3OD)δ(ppm)8.1(d，1H)，7.9(m，1H)，7.6(t，1H)，3.8(m，2H)，3.6(m，1H)，1.4(d，3H)。
b.4-[4-({[2-(2-羟基-1-甲基乙基)-1H-苯并咪唑-4-羰基]-氨基}甲基)哌啶-1-基甲基]哌 啶-1-甲酸甲酯的合成
向前一步骤的苯并咪唑甲酸产物(0.45g，1.75mmol)、双三氟乙酸盐形式的制备4的氨甲基哌啶产物(0.8g，1.6mmol)和HOBt(0.237g，1.75mmol)于二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入三乙胺(0.98mL，7.0mmol)和EDC(0.353g，1.84mmol)。在室温下将混合物搅拌12小时并且在减压下浓缩至干。使残余物在二氯甲烷(150mL)与饱和碳酸氢钠之间分配。将有机层用MgSO4干燥，并且蒸发至干，得到浅黄色油状残余物。通过制备型HPLC加以纯化得到标题化合物的双-三氟乙酸盐(0.2g)。(m/z)：C25H37N5O4的[M+H]+计算值：472.29，实验值472.5。保留时间(分析型HPLC：10-40％MeCN/H2O，历时6分钟)＝3.31min。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.9-7.8(m，2H)，7.6-7.5(m，1H)，4.0(br d，2H)，3.85-3.7(m，2H)，3.6(br s，6H)，3.3(br，2H)，2.9-2.6(br m，6H)，2.0-1.8(br，4H)，1.7-1.5(m，6H)，1.4(m，3H)，1.1-1.0(m，4H)。
本发明的其它化合物
使用实例1-13的程序和其变更形式，制备表I到表IX的化合物并且通过质谱加以表征。在下表中，空白引入线表示氢。
表I
Figure S200680017691XD00371
实例编号  R1 R2 分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    16  iPr -CH2-苯基 C31H41N5O3  532.32  532.2
    17  iPr iPr C27H41N5O3  484.32  484.2
    18  tBu 苯基 C31H41N5O3  532.32  532.2
    19  tBu -CH2-苯基 C32H43N5O3  546.34  546.4
    20  tBu iPr C28H43N5O3  498.34  498.4
表II
实例编号  R1  R3a  R3b  R3c  R3d R3e  分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    21  tBu  Cl  C31H40ClN5O2  550.29  550.6
    22  iPr  C30H39N5O2  502.31  502.4
    23  iPr  F  C30H38FN5O2  520.30  520.2
    24  iPr  CH3  C31H41N5O2  516.33  516.4
    25  iPr  CF3  C31H38F3N5O2  570.30  570.2
    26  iPr  F  C30H38FN5O2  520.30  520.2
    27  iPr  CH3  C31H41N5O2  516.33  516.4
    28  iPr  CF3  C31H38F3N5O2  570.30  570.2
实例编号  R1  R3a  R3b  R3c  R3d  R3e   分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    29  iPr  Cl  C30H38ClN5O2  536.27  536.2
    30  iPr  CF3  C31H38F3N5O2  570.30  570.2
    31  iPr  CH3  C31H41N5O2  516.33  516.4
    32  iPr  Cl  C30H38ClN5O2  536.27  536.2
    33  iPr  OCH3  C31H41N5O3  532.32  532.2
    34  iPr  F  C30H38FN5O2  520.30  520.2
    35  iPr  F  F  C30H37F2N5O2  538.29  538.2
    36  iPr  F  F  C30H37F2N5O2  538.29  538.2
    37  iPr  F  F  C30H37F2N5O2  538.29  538.2
    38  iPr  F  F  C30H37F2N5O2  538.29  538.2
    39  iPr  F  F  C30H37F2N5O2  538.29  538.2
    40  iPr  F  Cl  C30H37ClFN5O2  554.26  554.4
    41  iPr  CF3  CF3  C32H37F6N5O2  638.29  638.2
    42  iPr  Cl  F  C30H37ClFN5O2  554.26  554.2
    43  iPr  Cl  Cl  C30H37Cl2N5O2  570.23  570.2
    44  iPr  OCF3  C31H38F3N5O3  586.29  586.2
    45  iPr  CF3  F  C31H37F4N5O2  588.29  588.2
    46  iPr  Cl  F  C30H37ClFN5O2  554.26  554.2
    47  iPr  OCH3  Cl  C31H40ClN5O3  566.28  566.2
    48  iPr  CN  C31H38N6O2  527.31  527.2
    49  iPr  Cl  Cl  C30H37Cl2N5O2  570.23  570.2
    50  iPr  F  CF3  C31H37F4N5O2  588.29  588.2
    51  iPr  CN  C31H38N6O2  527.31  527.2
    52  iPr  OCHF2  C31H39F2N5O3  568.30  568.8
    53  tBu  Cl  F  C31H39ClFN5O2  568.28  568.2
    54  tBu  Cl  Cl  C31H39Cl2N5O2  584.25  584.2
    55  tBu  CN  C32H40N6O2  541.32  541.4
    56  tBu  OCF3  C32H40F3N5O3  600.31  600.2
    57  tBu  CF3  F  C32H39F4N5O2  602.30  602.2
    58  tBu  Cl  F  C31H39ClFN5O2  568.28  568.2
    59  tBu  OCH3  Cl  C32H42ClN5O3  580.30  580.2
    60  tBu  CN  C32H40N6O2  541.32  541.4
    61  tBu  Cl  Cl  C31H39Cl2N5O2  584.25  584.2
实例编号  R1  R3a  R3b  R3c  R3d  R3e   分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    62  tBu  F  CF3  C32H39F4N5O2  602.30  602.2
    63  tBu  F  CF3  C32H39F4N5O2  602.30  602.4
    64  tBu  CN  C32H40N6O2  541.32  541.2
    65  tBu  OCHF2  C32H41F2N5O3  582.32  582.4
    66  tBu  C31H41N5O2  516.33  516.2
    67  tBu  CH3  C32H43N5O2  530.34  530.4
    68  tBu  CF3  C32H40F3N5O2  584.31  584.4
    69  tBu  F  C31H40FN5O2  534.32  534.2
    70  tBu  CF3  C32H40F3N5O2  584.31  584.4
    71  tBu  Cl  C31H40ClN5O2  550.29  550.2
    72  tBu  CF3  C32H40F3N5O2  584.31  584.4
    73  tBu  CH3  C32H43N5O2  530.34  530.4
    74  tBu  Cl  C31H40ClN5O2  550.29  550.2
    75  tBu  OCH3  C32H43N5O3  546.34  546.4
    76  tBu  F  F  C31H39F2N5O2  552.31  552.4
    77  tBu  F  F  C31H39F2N5O2  552.31  552.2
    78  tBu  F  F  C31H39F2N5O2  552.31  552.2
    79  tBu  F  F  C31H39F2N5O2  552.31  552.4
    80  tBu  F  F  C31H39F2N5O2  552.31  552.4
    81  tBu  F  F  C31H39F2N5O2  552.31  552.2
    82  tBu  F  Cl  C31H39ClFN5O2  568.28  568.2
    83  tBu  CF3  CF3  C33H39F6N5O2  6523.0  652.2
    84  iPr  OCF3  C31H38F3N5O3  586.29  586.2
    85  iPr  OCF3  C31H38F3N5O3  586.29  586.2
    86  tBu  OCF3  C32H40F3N5O3  600.31  600.2
    87  tBu  OCF3  C32H40F3N5O3  600.31  600.2
表III
Figure S200680017691XD00401
  实例编号  R1 R3 分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    88  iPr N(CH3)2 C26H40N6O2  469.32  469.4
    89  iPr 吗啉-1-基 C28H42N6O3  511.33  511.4
    90  iPr CH3 C25H37N5O2  440.30  440.2
    91  iPr 四氢呋喃-2-基 C28H41N5O3  496.32  496.4
    92  iPr -CH2-噻吩-3-基 C29H39N5O2S  522.28  522.2
    93  iPr 2，2-二甲基丙基 C29H45N5O2  496.36  496.4
    94  iPr -CH2-噻吩-3-基 C29H39N5O2S  522.28  522.2
    95  iPr 环己基 C30H45N5O2  508.36  508.4
    96  iPr (S)-1-甲基丙基 C28H43N5O2  482.34  482.4
    97  iPr -CH2-萘-1-基 C35H43N5O2  566.34  566.4
    98  iPr 环戊基 C30H45N5O2  508.36  508.4
    99  iPr (R)-四氢呋喃-2-基 C28H41N5O3  496.32  496.4
    100  tBu 呋喃-2-基 C29H39N5O3  506.31  506.2
    101  tBu -CH2-噻吩-3-基 C30H41N5O2S  536.30  536.2
    102  tBu 2，2-二甲基丙基 C30H47N5O2  510.37  510.4
    103  tBu -CH2-噻吩-2-基 C30H41N5O2S  536.30  536.2
    104  tBu (S)-1-甲基丙基 C29H45N5O2  496.36  496.4
    105  tBu -CH2-萘-1-基 C36H45N5O2  580.36  580.4
    106  tBu (R)-四氢呋喃-2-基 C29H43N5O3  510.34  510.4
    107  tBu (S)-4-氧代-氮杂环丁-2基 C28H40N6O3  509.32  510.4
    108  tBu 吡啶-2-基 C31H42N6O2  531.34  531.2
表IV
Figure S200680017691XD00411
实例编号  R1  R5a  R5b  R5c  R5d  R5e  分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    109  iPr  CH3  C31H42N6O2  531.34  531.4
    110  iPr  F  C30H39FN6O2  535.31  535.2
    111  iPr  CF3  C31H39F3N6O2  585.31  585.2
    112  iPr  OCF3  C31H39F3N6O3  601.30  601.2
    113  iPr  OCHF2  C31H40F2N6O3  583.31  583.2
    114  iPr  C30H40N6O2  517.32  517.4
    115  iPr  CH3  CH3  C32H44N6O2  545.35  545.4
    116  iPr  OCF3  C31H39F3N6O3  601.30  601.2
    117  iPr  tBu  C34H48N6O2  573.38  573.4
    118  iPr  Cl  C30H39ClN6O2  551.28  551.2
    119  tBu  Cl  C31H41ClN6O2  565.30  565.2
    120  tBu  CH3  C32H44N6O2  545.35  545.5
    121  tBu  F  C31H41FN6O2  549.33  549.2
    122  tBu  CF3  C32H41F3N6O2  599.32  599.2
    123  tBu  OCF3  C32H41F3N6O3  615.32  615.2
    124  tBu  OCHF2  C32H42F2N6O3  597.33  597.4
    125  tBu  F  C31H41FN6O2  549.33  549.2
    126  tBu  C31H42N6O2  531.34  531.4
    127  tBu  CH3  CH3  C33H46N6O2  559.37  559.4
    128  tBu  OCF3  C32H41F3N6O3  615.32  615.2
    129  tBu  tBu  C35H50N6O2  587.40  587.4
表V
Figure S200680017691XD00421
实例编号  R1  R6 R7  R8a  R8b  R8c R8d  分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    130  iPr (S)-OH  C31H41N5O3  532.32  532.2
    131  iPr   氧基  C31H39N5O3  530.31  530.2
    132  iPr  Cl  C31H40ClN5O2  550.29  550.2
    133  iPr (S)-CH3  C32H43N5O2  530.34  530.4
    134  iPr   -(CH2)2-  C33H43N5O2  542.34  542.4
    135  iPr  F  F  C31H39F2N5O2  552.31  552.2
    136  iPr  F  C31H40FN5O2  534.32  534.2
    137  iPr  Cl  C31H40ClN5O2  550.29  551.2
    138  iPr  F  F  C31H39F2N5O2  552.31  552.2
    139  iPr  F  F  C31H39F2N5O2  552.31  553.2
    140  iPr  C31H41N5O2  516.33  516.4
    141  tBu (S)-OH  C32H43N5O3  546.34  546.4
    142  tBu  F  C32H42FN5O2  548.33  548.2
    143  tBu   氧基  C32H41N5O3  544.32  544.4
    144  tBu  Cl  C32H42ClN5O2  564.30  565.2
    145  tBu CH3 2-甲基丙基 C37H53N5O2 600.42 600.4
    146  tBu (S)-CH3  C33H45N5O2  544.36  544.4
    147  tBu   -(CH2)2-  C34H45N5O2  556.36  556.4
    148  tBu  Cl  Cl  C32H41Cl2N5O2  598.26  599.2
    149  tBu  F  F  C32H41F2N5O2  566.32  566.2
    150  tBu  F  C32H42FN5O2  548.33  548.4
    151  tBu  CF3  C33H41F3N5O2  598.33  598.4
    152  tBu  CF3  C33H42F3N5O2  598.33  598.2
    153  tBu  Cl  C32H42ClN5O2  564.30  564.2
   154  tBu  F  F  C32H41F2N5O2  566.32  566.2
实例编号  R1  R6 R7  R8a  R8b  R8c  R8d  分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    155  tBu  F  F  C32H41F2N5O2  566.32  566.4
    156  tBu  C32H43N5O2  530.34  530.4
表VI
Figure S200680017691XD00441
实例编号  R1 R7  R8a  分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    157  iPr (R)-OH  C31H47N5O3  538.37  538.4
    158  iPr  C31H47N5O2  522.37  522.4
    159  tBu (R)-OH  C32H49N5O3  552.38  552.4
    160  tBu  C32H49N5O2  536.39  536.4
表VII
Figure S200680017691XD00442
实例编号  R1  R9  R10a  R10b  分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    161  iPr  CH3  C32H43N5O3  546.34  546.4
    162  iPr  Cl  Cl  C31H39Cl2N5O3  600.24  601.2
    163  iPr  CH3  Cl  C32H42ClN5O3  580.30  581.2
    164  iPr  CH3  C32H43N5O3  546.34  546.4
    165  tBu  CH3  C33H45N5O3  560.35  560.4
    166  tBu  Cl  Cl  C32H41Cl2N5O3  614.26  615.2
    167  tBu  CH3  Cl  C33H44ClN5O3  594.31  595.2
    168  tBu  CH3  C33H45N5O3  560.35  560.4
表VIII
Figure S200680017691XD00451
实例编号  R1 R11 分子式 [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    169  iPr CH3 C24H37N5O3S  476.26  476.2
    170  iPr 2，4-二甲基异噁唑-2-基 C28H40N6O4S  557.28  557.2
    171  iPr -CH2-苯基 C30H41N5O3S  552.29  552.2
    172  tBu 2，4-二甲基异噁唑-2-基 C29H42N6O4S  571.30  571.2
    173  tBu -CH2-苯基 C31H43N5O3S  566.31  566.2
表IX
Figure S200680017691XD00452
实例编号  R1  R11a  R11b  R11c  R11d  分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    174  iPr  CF3  C30H38F3N5O3S  606.27  606.2
    175  iPr  CN  C30H38N6O3S  563.27  563.2
    176  iPr  OCH3  C30H41N5O4S  568.29  568.2
    177  iPr  Cl  C29H38ClN5O3S  572.24  572.2
    178  iPr  F  C29H38FN5O3S  556.27  556.2
    179  iPr  CF3  C30H38F3N5O3S  606.27  606.2
    180  iPr  iPr  C32H45N5O3S  580.32  580.4
    181  iPr  Cl  C29H38ClN5O3S  572.24  572.2
    182  iPr  CH3  F  C30H40FN5O3S  570.28  570.2
    183  iPr  Cl  F  C29H37ClFN5O3S  590.23  590.2
    184  iPr  CH3  Cl  C30H40ClN5O3S  586.25  586.2
    185  iPr  tBu  C33H47N5O3S  594.34  594.4
    186  iPr  OCH3  Cl  C30H40ClN5O4S  602.25  602.2
    187  iPr  Cl  C29H38ClN5O3S  572.24  572.2
实例编号  R1  R11a  R11b  R11c  R11d  分子式  [M+H]+计算值  [M+H]+实验值
    188  iPr  C29H39N5O3S  538.28  538.2
    189  iPr  F  C29H38FN5O3S  556.27  556.2
    190  iPr  CH3  C30H41N5O3S  552.29  552.2
    191  iPr  CH3  C30H41N5O3S  552.29  552.2
    192  iPr  CF3  C30H38F3N5O3S  606.27  606.2
    193  iPr  CH3  C30H41N5O3S  552.29  552.2
    194  tBu  CN  C31H40N6O3S  577.29  577.2
    195  tBu  CF3  C31H40F3N5O3S  620.28  620.2
    196  tBu  iPr  C33H47N5O3S  594.34  594.4
    197  tBu  Cl  C30H40ClN5O3S  586.25  586.2
    198  tBu  CH3  F  C31H42FN5O3S  584.30  584.2
    199  tBu  Cl  F  C30H39ClFN5O3S  604.24  604.2
    200  tBu  CH3  Cl  C31H42ClN5O3S  600.27  600.2
    201  tBu  tBu  C34H49N5O3S  608.36  608.4
    202  tBu  OCH3  Cl  C31H42ClN5O4S  616.26  616.2
    203  tBu  CH3  C31H43N5O3S  566.31  566.4
    204  tBu  CH3  C31H43N5O3S  566.31  566.2
    205  tBu  CF3  C31H40F3N5O3S  620.28  620.2
    206  tBu  CH3  C31H43N5O3S  566.31  566.2
    207  tBu  CF3  C31H40F3N5O3S  620.28  620.2
    208  tBu  OCH3  C31H43N5O4S  582.30  582.2
    209  tBu  Cl  C30H40ClN5O3S  586.25  586.2
    210  tBu  F  C30H40FN5O3S  570.28  570.2
    211  tBu  Cl  C30H40ClN5O3S  586.25  586.2
    212  tBu  C30H41N5O3S  552.29  552.2
    213  tBu  F  C30H40FN5O3S  570.28  570.2
实例214：4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的备用合成
a.4-羟甲基-哌啶-1-甲酸甲酯的制备
将4-羟甲基哌啶(1.0g，8.6mmol)溶解于水(15mL)中并且将其冷却到0℃。向这一溶液中逐滴加入碳酸钾(4.8g，34.7mmol)于水(10mL)中的溶液，随后加入氯甲酸甲酯(2.68mL，34.7mmol)。用力搅拌混合物并且经2小时将其温到室温。搅拌整夜(16小时)后，用6M盐酸水溶液将反应混合物酸化并且用二氯甲烷(3×60mL)进行萃取。将萃取液合并，用硫酸钠干燥并且过滤。将滤液蒸发得到呈无色油状物的标题中间物(1.4g，8.1mmol，93％)。(m/z)：C8H15NO3的[M-H2O+H]+计算值：173.11，实验值156.2。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)0.98(m，2H)，1.52(m，1H)，1.63(br d，2H)，2.72(br m，2H)，3.23(d，2H)，3.56(s，3H)，3.95(br d，2H)，4.48(br s，1H)。
b.4-甲酰基哌啶-1-甲酸甲酯的制备
-78℃下，向草酰氯(4.1mL，8.2mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中逐滴加入二甲亚砜(1.2mL，16.4mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液。搅拌5分钟后，加入4-羟甲基-哌啶-1-甲酸甲酯(1.3g，7.5mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液。将所得溶液再搅拌5分钟，随后加入三乙胺(5.2mL，37.3mmol)并且将混合物温到-10℃。搅拌1小时后，加入二氯甲烷(100mL)并且用1 M磷酸水溶液、1M氢氧化钠水溶液和盐水洗涤有机层。将溶液用硫酸钠干燥，随后蒸发得到呈小麦色油状物的标题中间物(1.0g，5.8mmol，78％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)1.36(m，2H)，1.83(m，2H)，2.48(br m，1H)，2.93(br t，2H)，3.56(s，3H)，3.80(br d，2H)，9.56(s，1H)。
c.4-(4{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲 酯的合成
将2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺(双三氟乙酸盐，1.1g，2.0mmol)悬浮于二氯甲烷(20mL)中并且加入N，N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol)。当悬浮液变为澄清溶液时，加入乙酸(0.13mL，2.0mmol)，随后加入4-甲酰基哌啶-1-甲酸甲酯(0.54g，3.1mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液。在室温下搅拌5分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.628g，3.1mmol)并且将反应再搅拌1小时。随后，用1M氢氧化钠(35mL)水溶液使水层成碱性并且用二氯甲烷(2×20mL)加以萃取。将已合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并且蒸发得到呈褐色固体状的粗产物(1.41g)。
将粗产物经由制备型HPLC(反相)[5-10-25％的梯度：5％MeCN/水(0.1％TFA)到10％MeCN线性梯度，历时10min；10％MeCN到25％MeCN线性梯度，历时50min；流速＝15mL/min；在280nm下检测]纯化从而提供双三氟乙酸盐形式的标题化合物，随后将其冻干。将1M氢氧化钠和二氯甲烷(1∶1，100mL)的混合物加到经冻干的双三氟乙酸盐中。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，并且将所得固体冻干得到呈白色固体状的标题化合物(0.93g，2mmol，98％产率，纯度97.5％)。(m/z)：C25H37N5O3的[M+H]+计算值：456.30，实验值456.3。保留时间(分析型HPLC：2-50％MeCN/H2O，历时6分钟)＝3.06min。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：0.92(m，2H)，1.30(m，2H)，1.38(d，6H)，1.53(m，1H)，1.60-1.90(m，7H)，2.07(d，2H)，2.73(brm，2H)，2.83(br d，2H)，3.22(七重峰，1H)，3.33(t，2H)，3.56(s，3H)，3.93(br d，2H)，7.23(t，1H)，7.62(d，1H)，7.77(d，1H)，10.10(br s，1H)。
实例215：4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式I)的合成
将根据实例214的方法制备的非晶形固体形式的4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(300mg)溶解于乙腈(15mL)中，混合直到完全溶解为止，并且将其暴露于气氛中，导致部分蒸发。据观察，晶体在2小时内成核。通过1H NMR、液相色谱/质谱(LC/MS)和x射线结构分析确定所述晶体的化学组成。通过粉末x射线衍射、差示扫描量热和x射线结构分析来确定固体产物的结晶结构。
实例216：结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式I)的合成
a.4-羟甲基-哌啶-1-甲酸甲酯的制备
将4-羟甲基哌啶(47.6g，1.0eq)和水(300mL)装入烧瓶中。将所得混合物冷却到0-10℃。在将温度保持在10℃以下的同时，加入溶解于水(150mL)中的碳酸钾(85.7g，1.5eq)和氯甲酸甲酯(38.4mL，1.1eq)。当加入完成后，将反应混合物温到20-30℃历时1小时。反应完成后，将二氯甲烷(500mL)加到反应混合物中。对有机层进行收集，并用1M磷酸溶液(200mL)、饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤。将有机层用硫酸钠(50g，1w/weq)干燥且随后在真空下蒸馏得到标题中间物(67.0g，90％产率)。
b.4-甲酰基哌啶-1-甲酸甲酯的制备
将4-羟甲基哌啶-1-甲酸甲酯(34.7g，1.0eq)溶解于二氯甲烷中并且将其冷却到0-10℃。在将温度保持在0-10℃的同时，经15min加入碳酸氢钠(2.35g，0.14eq)和溴化钠(2.40g，0.10eq)于水(100mL)中的溶液。在将温度保持在0-10℃的同时，在充分搅动下，将2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基(TEMPO)(0.32g，0.01eq)加到混合物中，随后经1小时加入10-13％w/v次氯酸钠溶液(135mL，1.1eq)。反应完成后，分离各层并且将有机层用水(150mL)洗涤并用硫酸钠(30g，1w/weq)加以干燥。通过蒸馏去除溶剂从而提供标题化合物(31.0g，90％产率)。
c.2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺的制备
在将温度保持在10℃以下的同时，将三氟乙酸(56.0mL，10eq)加到含有约5℃的4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯(30.0g，1.0eq)于二氯甲烷(300mL)中的溶液的烧瓶中。在20-30℃下将所得混合物搅拌2小时。当反应完成时，加入三乙胺(73.2mL，7.0eq)和乙酸(4.3mL，1.0eq)以提供表观pH值约为4的标题中间物的溶液，直接将其用于下一步骤中。
d.4-(4-{[2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲 酯的合成
在将温度保持在20-30℃的同时，将4-甲酰基哌啶-1-甲酸甲酯(25.7g，2.0eq)加到前一步骤中所制备的溶液中。搅拌30min后，在温度保持在20-30℃的同时，加入三乙酰氧基硼氢化钠(24.3g，1.5eq)。在20-30℃下将反应混合物搅拌30min。反应完成后，加入1M盐酸(300mL)以中止反应。收集含有产物的水层并且用二氯甲烷(150mL)加以洗涤。用活性碳(Darco G60，6g，20％w/w)处理水层以去除颜色。将悬浮液搅拌1小时，且随后使其滤过硅藻土床。将二氯甲烷(300mL)加到水溶液中，并且使用4N氢氧化钠通过将水层的pH值调到12-13来使产物游离碱化。收集有机层并且用水(300mL)加以洗涤。在80℃下蒸馏有机层并且用乙腈(2×300mL)替换溶剂以去除二氯甲烷和残余的三乙胺。将固体悬浮于乙腈(600mL)中，并且将混合物加热直到固体溶解(约75℃)。将溶液冷却直到出现成核现象(约55-65℃)并且保持1小时。经2小时将浆液冷却到20℃且随后经30分钟将其冷却到0-5℃，随后在0-5℃下搅拌30min。将固体过滤并且用冷的乙腈(60mL)洗涤。真空下，在60℃下干燥潮湿滤饼历时6小时从而提供标题化合物(28.3g，85％产率)。
实例217：4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式I)的合成
将根据实例214的方法制备的非晶形固体形式的4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯分散于下表X中所列的惰性稀释剂中。将混合物暴露于所述气氛中并且使其完全蒸发。通过粉末x射线衍射来表征所得固体。经证实，所有固体都为结晶，其具有与下文中从实例215的样本获得的实例220中所报导的粉末x射线衍射图相符的图。
表X：结晶形式的合成
  稀释剂     式(I)的化合物(mg)   稀释剂的体积(mL)
  乙醚     4.60     0.230
  环己烷     4.87     0.486
  乙酸乙酯     5.67     0.284
实例218：结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式II)的合成
环境温度下，将非晶形固体形式的4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(42.2mg)分散于己烷(4.22mL)中直到最终浓度为10mg/mL。用超声波处理溶液以分散较大固体。在环境温度(约22℃)下24小时后，出现结晶。通过真空过滤分离结晶固体，随后进行分析。
实例219：4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式III)的合成
环境温度下，将非晶形固体形式的4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(38mg)溶解于1∶1的甲醇∶水溶剂混合物(1.9mL)中直到最终浓度为20mg/mL。用超声波处理溶液30秒以确保完全溶解。随后，使溶液在未封盖小瓶中缓慢蒸发。在环境温度下24小时后，出现结晶。通过真空过滤分离结晶固体。用1∶1的乙醇∶水溶剂混合物洗涤滤饼一次，随后进行分析。
实例220：粉末X射线衍射
用X’TRA型Thermo ARL X射线衍射仪(Thermo ARL SA，Switzerland)使用1.542埃的Cu Kα辐射(45kV，40mA)和Si(Li)固态检测器获得粉末x射线衍射图。所述分析通常是在2°/min的扫描速率和每点0.03°的步长于2°到35°的2θ角范围内进行。将以原样使用或研磨成细粉的样本小心包装于经设计以适合仪器顶部装载样本杯的直径为7.8mm且深度为0.5mm的石英插管中以供分析。每周通过与硅金属标准品相比较来核实仪器校准处在±0.02°的2θ角内。手工研磨成粉末状的实例215的结晶化合物(形式I)的代表性PXRD图绘示于图1中。用Rigaku衍射仪使用Cu Kα(30kV，15mA)辐射获得的结晶形式III的样本的代表性PXRD图绘示于图5中。
实例221：X射线结构分析
a.形式I
将尺寸为0.33×0.17×0.11mm的实例215中所制备的块状晶体安放在玻璃纤维上。使用通过SMART 5.630版软件(Bruker，2003)控制的具有13.5cm的窗口直径的BrukerSMART 6K CCD射线区域检测仪使用Cu Kα辐射获得X射线结构数据。样本与检测仪的距离为5.039cm。在-153±1℃的温度下收集数据并且使用SHELXS 6.14版(Bruker，2003)软件进行分析。得到以下晶格参数：单位晶格为尺寸a＝16.9053
Figure 200680017691X_7
、b＝9.5172、c＝15.4659
Figure 200680017691X_9
的斜方晶系；空间群为Pna21；计算密度为1.22g/cm3。如表XI所示，由所得原子位置预测的粉末x射线衍射峰与如实例220中所述获得的观察结果极为符合。
表XI：PXRD峰位置
  观察到的2θ值(度数)   预测到的2θ值(度数)
    15.08±0.20     15.1±0.2
    15.41±0.20     15.6±0.2
    19.00±0.20     19.2±0.2
    19.70±0.20     19.5±0.2
    23.68±0.20     23.7±0.2
b.形式III
通过上文所述的方法分析由实例219的方法制备的尺寸为0.35×0.12×0.09mm的块状晶体。得到以下晶格参数：单位晶格为尺寸a＝14.8101
Figure 200680017691X_10
、b＝9.9985
Figure 200680017691X_11
、c＝17.9222
Figure 200680017691X_12
，β＝106.3020°的单斜晶系；空间群为P21/n；计算密度为1.23g/cm3。
实例222：热分析
使用TA Instruments Model Q-100模块进行差示扫描量热测定(DSC)。收集数据并且使用Q SeriesTM软件的TA Instruments Thermal Advantage进行分析。将约7mg样本精确称取到带盖子的铝盘中。使用10℃/min的线性加热速率从5℃缓慢升高到约200℃来评估样本。使用过程中用干燥氮气净化DSC室。
使用TA Instruments Model Q-500模块进行热重分析(TGA)。收集数据并且使用TAInstruments Thermal Advantage for Q SeriesTM软件进行分析。将重约2mg的样本放入铂支架上的铝盘中并且在以10℃/min的线性加热速率将环境温度升到约300℃的过程中进行扫描。使用期间用氮气净化平衡室和炉腔。
结晶形式I(根据实例216的方法制备)、形式II和形式III材料的代表性DSC和TGA迹线分别绘示于图2、4和6中。
实例223：动态吸湿评定
动态吸湿(DMS)评定是在25℃下使用VTI大气微平衡SGA-100系统(VTI Corp.，Hialeah，FL 33016)进行。使用约5-10mg的样本规格且在开始分析时将湿度设置在环境值。典型的DMS分析是由三次扫描组成：以每步骤5％相对湿度(RH)的扫描速率由环境RH到2％RH、2％RH到90％RH、90％RH到5％RH。每两分钟对质量进行测量并且当5个连续点的样本质量在0.02％内保持稳定时，将RH变成下一个值(±5％RH)。实例215的结晶化合物(形式I)的代表性等温动态吸湿曲线绘示于图3中。
本发明的结晶化合物在2％到90％RH的整个范围内展现可逆的吸附/解吸附曲线和小于0.25％的重量改变，且在40％到75％RH的临界湿度范围内具有小于0.1％的重量改变。
实例224：红外分析
实例215的结晶化合物(形式I)的红外(IR)吸收光谱是在4000到675cm-1的频率范围内使用装备有Nicolet衰减全反射(ATR)样本固定器的Avatar 360 FT-IR光谱仪测定。本发明的结晶化合物样本的代表性IR吸收光谱在766±1、1097±1、1251±1、1413±1、1449±1、1579±1、1609±1、1640±1和1696±1cm-1处具有显著吸收谱带。
实例225：固态稳定性评定
在40℃和75％RH下，将根据实例216的方法制备的形式I的结晶化合物样本存储于多个敞开的玻璃小瓶中。以特定的间隔移出代表性小瓶中的内容物并且通过DSC、TGA、PXRD和HPLC分析化学纯度。存储3个月后，DSC或TGA温谱图和PXRD图都无任何可检测到的改变。所存储的样本的化学纯度为99.5％。
分析1：关于5-HT4(c)人类受体的放射性配体结合分析
a.5-HT4(c)的膜制备
在5％CO2的潮湿恒温箱中于37℃下，使经人类5-HT4(c)受体cDNA稳定转染的HEK-293(人胚肾)细胞(如使用[3H]-GR113808膜放射性配体结合分析所测定，Bmax＝约6.0皮摩尔/毫克蛋白质)在T-225烧瓶中的含有4,500mg/L D-葡萄糖和吡哆醇盐酸盐且补充有10％胎牛血清(FBS)(GIBCO-Invitrogen Corp.：目录编号10437)、2mM L-谷氨酰胺和(100单位)盘尼西林(penicillin)-(100微克)链霉素/毫升(GIBCO-InvitrogenCorp.：目录编号15140)的杜贝卡氏经修饰依格氏培养基(Dulbecco′s Modified EaglesMedium，DMEM)(GIBCO-Invitrogen Corp.，Carlsbad CA：目录编号11965)中生长。通过将800μg/mL遗传霉素(geneticin)(GIBCO-Invitrogen Corp.：目录编号10131)加到培养基中而使细胞在连续选择压力下生长。
使细胞生长到约60-80％长满(＜35个次培养传代)。在采集前20-22小时，洗涤细胞2次并且用无血清DMEM加以喂养。膜制备的所有步骤都是在冰上进行。通过用25mL移液管轻柔地机械搅动并捣碎而使细胞单层上升。通过以1000rpm离心(5min)收集细胞。
对于膜制备来说，将细胞小球再悬浮于冰冷的50mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)(pH7.4)(膜制备缓冲液)中(40mL/从30-40个T225烧瓶得到的总细胞产量)并使用Polytron破碎仪(设置19，2×10s)在冰上使其均质化。4℃下，以1200g将所得匀浆离心5分钟。丢弃离心块且以40,000g将上清液离心(20min)。通过再悬浮于膜制备缓冲液中并以40,000g离心(20min)来洗涤离心块一次。将最终离心块再悬浮于50mM HEPES(pH7.4)(分析缓冲液)(相当于1个T225烧瓶/1mL)中。通过Bradford(Bradford，1976)方法测定膜悬浮液中的蛋白质浓度。将膜以等分试样形式冷冻存储于-80℃下。
b.放射性配体结合分析
放射性配体结合分析是在1.1mL的96深孔聚丙烯分析板(Axygen)中以在50mMHEPES(pH7.4)(含有0.025％胎牛血清(BSA))中含有2μg膜蛋白的400μL总分析体积进行。用于测定放射性配体Kd值的饱和结合研究是使用[3H]-GR113808(Amersham Inc.，Bucks，UK：目录编号TRK944；比活性约82Ci/mmol)以8-12种在0.001nM-5.0nM范围内的不同浓度进行。用于测定化合物pKi值的置换分析是使用[3H]-GR113808在0.15nM下和在10pM-100μM范围内的11种不同化合物浓度下进行。
测试化合物以于DMSO中的10mM储备溶液形式使用，并且在25℃下于含有0.1％BSA的50mM HEPES(pH7.4)中稀释到400μM，且随后在同一种缓冲液中进行连续稀释(1∶5)。在存在1μM未经标记的GR113808的情况下测定非特异性结合。在室温下将分析物培育60分钟，且随后通过迅速滤过预浸于0.3％聚乙烯亚胺中的96孔GF/B玻璃纤维过滤板(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)来终止结合反应。用过滤缓冲液(冰冷的50mM HEPES，pH7.4)洗涤过滤板3次以去除未结合的放射性。将板干燥，将35μL Microscint-20液体闪烁液(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)加到各孔中并且在Packard Topcount液体闪烁计数器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中对板进行计数。
通过用GraphPad Prism软件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)使用单位点竞争的3参数模型进行的非线性回归分析来分析结合数据。如在存在1μM GR113808的情况下所测定，BOTTOM(曲线最小值)固定在非特异性结合值。测试化合物的Ki值是以Prism由最佳拟合的IC50值计算，且放射性配体的Kd值是使用Cheng-Prusoff等式(Cheng和Prusoff，Biochemical Pharmacology，1973，22，3099-108)：Ki＝IC50/(1+[L]/Kd)计算，其中[L]＝[3H]-GR113808的浓度。结果表示为Ki值的以十为底的负对数pKi。
在本分析中，具有较高pKi值的测试化合物对5-HT4受体具有较高结合亲和力。在本分析中，所测试的本发明的化合物具有在约7.0到约10.0的范围内的pKi值。
分析2：关于5-HT3A人类受体的放射性配体结合分析：受体亚型选择性的测定
a.5-HT3A膜制备
经人类5-HT3A受体cDNA稳定转染的HEK-293(人胚肾)细胞是从Dr.Michael Bruess(University of Bonn，GDR)获得(如使用[3H]-GR65630膜放射性配体结合分析所测定，Bmax＝约9.0皮摩尔/毫克蛋白)。在5％CO2的潮湿恒温箱中于37℃下，使细胞在T-225烧瓶或细胞工厂中的补充有10％热灭活胎牛血清(FBS)(Hyclone，Logan，UT：目录编号SH30070.03)和(50单位)盘尼西林-(50微克)链霉素/毫升(GIBCO-Invitrogen Corp.：目录编号15140)的50％杜贝卡氏经修饰依格氏培养基(DMEM)(GIBCO-InvitrogenCorp.，Carlsbad，CA：目录编号11965)和50％Ham′s F12(GBCO-Invitrogen Corp.：目录编号11765)中生长。
使细胞生长到约70-80％长满(＜35个次培养传代)。膜制备的所有步骤都是在冰上进行。为采集细胞，抽吸培养基并且用无Ca2+、Mg2+的杜贝卡氏磷酸盐缓冲盐水(dPBS)漂洗细胞。通过轻柔地机械搅动使细胞单层上升。通过以1000rpm离心(5min)收集细胞。膜制备的后续步骤是遵循上文关于表达5-HT4(c)受体的膜所述的方案进行。
b.放射性配体结合分析
放射性配体结合分析是在96孔聚丙烯分析板中以在50mM HEPES(pH7.4)(含有0.025％BSA分析缓冲液)中含有1.5-2μg膜蛋白的200μL总分析体积进行。用于测定放射性配体Kd值的饱和结合研究是使用[3H]-GR65630(PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA：目录编号NET1011；比活性约85Ci/mmol)以12种在0.005nM到20nM范围内的不同浓度进行。用于测定化合物pKi值的置换分析是使用[3H]-GR65630在0.50nM下和在10pM到100μM范围内的11种不同化合物浓度下进行。化合物以于DMSO中的10mM储备溶液形式使用(参看3.1部分)，在25℃下于含有0.1％BSA的50mMHEPES(pH7.4)中稀释到400μM，且随后在同一种缓冲液中进行连续(1∶5)稀释。在存在10μM未经标记的MDL72222的情况下测定非特异性结合。在室温下将分析物培育60分钟，随后通过迅速滤过预浸于0.3％聚乙烯亚胺中的96孔GF/B玻璃纤维过滤板(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)来终止结合反应。用过滤缓冲液(冰冷的50mMHEPES，pH7.4)洗涤过滤板3次以去除未结合的放射性。将板干燥，将35μL Microscint-20液体闪烁液(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)加到各孔中并且在Packard Topcount液体闪烁计数器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中对板进行计数。
使用上文所述的非线性回归程序分析结合数据以测定Ki值。如在存在10μMMDL72222的情况下所测定，BOTTOM(曲线最小值)固定在非特异性结合值。将Cheng-Prusoff等式中[L]的量定义为[3H]-GR65630的浓度。
5-HT4受体亚型相对于5-HT3受体亚型的选择性是以Ki(5-HT3A)/Ki(5-HT4(c))比率计算。在本分析中，所测试的本发明的化合物具有在约4000到400,000以上的范围内的5-HT4/5-HT3受体亚型选择性。
分析3：用表达人类5-HT4(c)受体的HEK-293细胞进行的全细胞cAMP积累Flashplate分析
在本分析中，通过测量当表达5-HT4受体的HEK-293细胞与不同浓度的测试化合物接触时所产生的环AMP的量来测定测试化合物的功能效力。
a.细胞培养
制备经克隆人5-HT4(c)受体cDNA稳定转染的HEK-293(人胚肾)细胞，其表达两种不同密度的受体：(1)如使用[3H]-GR113808膜放射性配体结合分析所测定，约0.5-0.6皮摩尔/毫克蛋白质的密度；和(2)约6.0皮摩尔/毫克蛋白质的密度。在5％CO2的潮湿恒温箱中于37℃下，使细胞在T-225烧瓶中的含有4,500mg/L D-葡萄糖且补充有10％胎牛血清(FBS)(GIBCO-Invitrogen Corp.：目录编号10437)和(100单位)盘尼西林-(100微克)链霉素/毫升(GIBCO-Invitrogen Corp.：目录编号15140)的杜贝卡氏经修饰依格氏培养基(DMEM)(GIBCO-Invitrogen Corp.：目录编号11965)中生长。通过将遗传霉素(800μg/mL，GIBCO-Invitrogen Corp.：目录编号10131)加到培养基中而使细胞在连续选择压力下生长。
b.细胞制备
使细胞生长到约60-80％长满。在分析前20-22小时，洗涤细胞2次并且用含有4,500mg/L D-葡萄糖的无血清DMEM(GIBCO-Invitrogen Corp.：目录编号11965)喂养。为采集细胞，抽吸培养基并且将10mL Versene(GIBCO-Invitrogen Corp.：目录编号15040)加到各T-225烧瓶中。在室温下培育细胞5分钟，且随后通过机械搅动使其从烧瓶中移位。将细胞悬浮液转移到含有等体积预先加温(37℃)的dPBS的离心管中，并且以1000rpm离心5分钟。丢弃上清液且将离心块再悬浮于预先加温(37℃)的刺激缓冲液(每2-3个T-225烧瓶相当于10mL)中。这一时刻标注且标为零点。用Coulter计数器对细胞进行计数(计数超过8μm的细胞，烧瓶产量为每个烧瓶1-2×107个细胞)。将细胞以5×105个细胞/毫升的浓度再悬浮于预先加温(37℃)的刺激缓冲液(如flashplate试剂盒中所提供)中并且在37℃下预先培育10分钟。
根据制造商的说明，使用具有125I-cAMP的Flashplate腺苷酰基环化酶活化分析系统(SMP004B，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)以放射免疫分析格式进行cAMP分析。
如上所述生长和制备细胞。分析中的最终细胞浓度为每孔25×103个细胞且最终分析体积为100μL。测试化合物以于DMSO中的10mM储备溶液形式使用，在25℃下于含有0.1％BSA的50mM HEPES(pH7.4)中稀释到400μM，且随后在同一种缓冲液中进行连续(1∶5)稀释。用11种在10pM到100μM(最终分析浓度)范围内的不同化合物浓度进行环AMP积累分析。每个板上都包括5-HT浓度-反应曲线(10pM到100μM)。振荡下，在37℃下将细胞培育15分钟并通过将100μL冰冷的检测缓冲液(如Flashplate试剂盒中所提供)加到各孔中来终止反应。密封板并在4℃下培育整夜。使用Topcount(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)通过闪烁亲近光谱测定结合放射性的量。
根据制造商的用户手册中所提供的说明，从cAMP标准曲线外推每毫升反应所产生的cAMP的量。通过用GraphPad Prism软件包使用3参数∑形剂量-反应模型(斜率被限制为一致)进行的非线性回归分析来分析数据。以pEC50值(即，EC50值的以10为底的负对数)报导效力数据，其中EC50为50％最大反应的有效浓度。
在本分析中，展现较高pEC50值的测试化合物具有使5-HT4受体激动的较高效力。在本分析中于具有约0.5-0.6皮摩尔/毫克蛋白质密度的细胞系(1)中所测试的本发明的化合物具有在约7.5到约9.5的范围内的pEC50值。
分析4：关于表达hERG心脏钾通道的全细胞中钾离子电流的抑制作用的活体外电压钳分析
经hERG cDNA稳定转染的CHO-K1细胞是从University of Wisconsin的GailRobertson获得。将细胞低温存储待用。使细胞在补充有10％胎牛血清和200μg/mL遗传霉素的杜贝卡氏经修饰依格培养基/F12中繁殖并传代。将细胞以使得能够选择经分离细胞用于全细胞电压钳研究的密度接种于35mm2培养皿(含有2mL培养基)中经聚D-赖氨酸(100μg/mL)涂覆的玻璃盖玻片上。将培养皿保持在37℃下含5％CO2的潮湿环境中。
至少每7天制备胞外溶液并且在不使用时于4℃下存储。胞外溶液含有(mM)：NaCl(137)、KCl(4)、CaCl2(1.8)、MgCl2(1)、葡萄糖(10)、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)(10)，pH值经NaOH调至7.4。在不存在或存在测试化合物的情况下，将胞外溶液放入储槽中，所述溶液以约0.5mL/min的速度由储槽流入记录室。制备胞内溶液，将其等分并且存储于-20℃下待用。胞内溶液含有(mM)：KCl(130)、MgCl2(1)、乙二醇-双(β-氨基乙醚)N，N，N′，N′-四乙酸盐(EGTA)(5)、MgATP(5)、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)(10)，pH值经KOH调至7.2。所有实验都是在室温(20-22℃)下进行。
将接种有细胞的盖玻片转移到记录室中并持续灌注。细胞与膜片电极之间形成千兆欧姆阻抗封接。获得稳定膜片后，在电压钳模式下以-80mV的初始钳制电位开始记录。在获得稳定的全细胞电流后，将细胞暴露到测试化合物下。标准电压方案为以下步骤：经4.8秒由-80mV的钳制电位升到+20mV；经5秒恢复极化到-50mV；和随后回到最初钳制电位(-80mV)。每15秒(0.067Hz)执行这一电压方案1次。使用pClamp软件测定恢复极化期过程中的峰值电流幅值。经5分钟将3μM浓度的测试化合物灌注到细胞上，随后在不存在化合物的情况下进行为时5分钟的冲洗。最后，将阳性对照(西沙必利(cisapride)，20nM)加到灌注液中以测试细胞的功能。从-80mV到+20mV的步骤将活化hERG通道，从而产生外向电流。回到-50mV的步骤将由于通道从失活恢复并失活而产生外向尾电流。
使用pCLAMP软件测定恢复极化期过程中的峰值电流幅值。将对照和测试物品的数据输出到Origin
Figure 200680017691X_13
(OriginLab Corp.，Northampton MA)，其中将个别电流幅值标准化为不存在化合物时的初始电流幅值。计算各条件下的标准化电流平均值和标准误差，并相对于实验时程作图。
对暴露到测试物品或媒剂对照(通常为0.3％DMSO)5分钟后所观察的K+电流抑制作用进行比较。使用两组独立t检验(Microcal Origin v.6.0)进行两个实验组之间的统计学比较。将p＜0.05的差异视为显著。
在本分析中，钾离子电流的抑制百分比越低，那么测试化合物当用作治疗剂时改变心脏恢复极化模式的可能性就越小。举例来说，在本分析中所测试的3μM浓度的实例1-14的化合物展现小于约30％、包括小于约20％的钾离子电流抑制作用。
分析5：口服生物可用性的活体外模型：Caco-2渗透分析
进行Caco-2渗透分析以模仿测试化合物经口投与后穿过肠进入血流的能力。对溶液形式之测试化合物渗透经设计以模拟人小肠单层的紧密接合的细胞单层的速率进行测定。
Caco-2(结肠，腺癌；人类)细胞是从ATCC(American Type Culture Collection；Rockville，MD)获得。对于渗透研究来说，将细胞以63,000个细胞/平方厘米的密度接种于预先润湿的Transwell聚碳酸酯过滤器(Costar；Cambridge，MA)上。培养21天后形成细胞单层。在Transwell培养板中进行细胞培养后，将含有细胞单层的膜从Transwell培养板分离并且将其插入扩散室(Costar；Cambridge，MA)中。将扩散室插入加热恒温器中，所述加热恒温器装备有恒温调控于37℃的外部循环水以控制温度。空气歧管将95％O2/5％CO2传递到每一半扩散室中并且产生穿过细胞单层的层流模式，这将有效减少没有被搅动过的边界层。
用100μM浓度的测试化合物和14C-甘露糖醇进行渗透研究以监测单层的完整性。所有实验都是在37℃下进行60分钟。在0、30和60分钟时从所述室的供体侧与接收体侧取样。通过HPLC或液体闪烁计数来分析样本中测试化合物和甘露糖醇的浓度。计算渗透系数(Kp)(以cm/sec为单位)。
在本分析中，将大于约10×10-6cm/sec的Kp值视作良好生物可用性的指示。在本分析中所测试的本发明的那些化合物通常展现出介于约10×10-6cm/sec与约50×10-6cm/sec之间的Kp值
分析6：大鼠的药物动力学研究
制备pH值介于约5与约6之间的测试化合物于0.1％乳酸中的水溶液调配物。经由静脉内投与(IV)2.5mg/kg剂量或口灌(PO)5mg/kg剂量的测试化合物对雄性Sprague-Dawley大鼠(CD品系，Charles River Laboratories，Wilmington，MA)给药。IV投药的给药量为1mL/kg且PO投药的给药量为2mL/kg。在给药前和给药后2分钟(仅IV)、5分钟、15分钟和30分钟和1小时、2小时、4小时、8小时和24小时时，收集动物的连续血样。通过液相色谱-质谱分析(LC-MS/MS)(MDS SCIEX，API 4000，AppliedBiosystems，Foster City，CA)测定血浆中测试化合物的浓度，其中定量下限为1ng/mL。
通过使用WinNonlin(4.0.1版，Pharsight，Mountain View，CA)进行的非房室分析(对于IV为201型且对于PO为200型)评定标准药物动力学参数。血浆中测试化合物浓度比时间的曲线中的最大值被称为Cmax。通过线性梯形法则计算浓度比时间曲线下从给药时间到最后可测量浓度的面积(AUC(0-t))。以下式计算口服生物可用性(F(％))，即PO投药的AUC(0-t)比IV投药的AUC(0-t)的剂量标准化比率：
F(％)＝AUCPO/AUCIV×剂量IV/剂量PO×100％。
预期在本分析中当经口投与时展现较大参数Cmax、AUC(0-t)和F(％)值的测试化合物具有较高生物可用性。本发明的优选化合物具有通常在0.06μg/mL到约0.8μg/mL范围内的Cmax值和通常在约0.14μg·hr/mL到约1.2μg·hr/mL范围内的AUC(0-t)值。举例来说，实例1的化合物在大鼠模型中具有0.8μg/mL的Cmax值、1.2μg·hr/mL的AUC(0-t)值和约75％的口服生物可用性(F(％))。
尽管已参考本发明的特定实施例描述本发明，但所属领域技术人员应了解，可在不偏离本发明的真实精神和范围的情况下进行多种改变并且可进行相当内容的替代。此外，可进行许多修改以使特定情形、材料、相关组合物、方法、方法步骤与本发明的目的、精神和范围相适应。所有所述修改都打算处在随附权利要求的范围内。另外，上文所引用的所有公开案、专利和专利文献都是以全文引用的方式并入本文，就如同个别地以引用的方式并入一样。

Claims (17)

1.一种式(I)的化合物：
Figure FSB00000698957200011
其中：
R1为C3-4烷基；且
X选自：
(a)-C(O)OR2，其中R2为C1-3烷基或苯基；
(b)-C(O)R3，其中R3为视情况经1或2个选自C1-4烷基、卤基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃基；或噻吩基；
(c)-C(O)NR4R5，其中R4为氢，且R5为视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代的苯基；
和
(f)-S(O)2R11，其中R11为甲基或苯基，其视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代；
或其医药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中：
R1为异丙基或叔丁基；且
X选自：
(a)-C(O)OR2，其中R2为甲基或苯基；
(b)-C(O)R3，其中R3为视情况经1或2个选自甲基、氯基、氟基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃-2-基；或噻吩-2-基；和
(c)-C(O)NR4R5，其中R4为氢，且R5为视情况经1个氟基或氯基取代的苯基。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中所述化合物选自：
4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯；
4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸苯酯；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氯苯甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2，4-二氟-苯甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(呋喃-2-羰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(噻吩-2-羰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯甲酰基哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基]甲基}酰胺；
2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-苯基氨甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}-酰胺；
4-(4-{[(2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯；
2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；
2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(4-氟苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；和
其医药学上可接受的盐。
4.根据权利要求2所述的化合物，其中所述化合物选自：
4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯；
4-(4-{[(2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯；
2-叔丁基-1H-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；和
其医药学上可接受的盐。
5.一种结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯，其具有实质上根据图1的粉末x射线衍射图。
6.根据权利要求5所述的结晶化合物，其中所述结晶化合物的特征进一步在于差示扫描量热曲线在约146℃到约148℃范围内的温度下吸热热流展示最大值。
7.一种结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯一水合物，其具有实质上根据图5的粉末x射线衍射图。
8.一种医药组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1至7中任一权利要求所述的化合物和医药学上可接受的载剂。
9.一种根据权利要求1至7中任一权利要求所述的化合物的用途，其是用于制备药物。
10.根据权利要求9所述的用途，其中所述药物是用于治疗哺乳动物与5-HT4受体活性相关的医学病况。
11.根据权利要求10所述的用途，其中所述医学病况为胃肠道蠕动减弱病症。
12.根据权利要求11所述的用途，其中所述蠕动减弱病症为慢性便秘、便秘型肠易激综合症、糖尿病性和特发性胃轻瘫或功能性消化不良。
13.一种用于制备式(I)化合物的方法，
Figure FSB00000698957200031
其中：
R1为C3-4烷基；且
X选自：
(a)-C(O)OR2，其中R2为C1-3烷基或苯基；
(b)-C(O)R3，其中R3为视情况经1或2个选自C1-4烷基、卤基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃基；或噻吩基；
(c)-C(O)NR4R5，其中R4为氢，且R5为视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代的苯基；和
(f)-S(O)2R11，其中R11为甲基或苯基，其视情况经1或2个选自C1-4烷基和卤基的取代基取代；
或其医药学上可接受的盐；所述方法包含：
(i)使式(II)的化合物：
Figure FSB00000698957200041
与式(III)的化合物反应：
L-X
(III)，
其中L为离去基团；
(ii)使式(VIII)的化合物：
与式(XIII)的化合物反应：
Figure FSB00000698957200043
(iii)使式(VI)的化合物：
Figure FSB00000698957200051
与式(XIV)的化合物反应：
以提供式(I)的化合物、或其医药学上可接受的盐。
14.一种用于制备式(I)化合物的方法，
Figure FSB00000698957200053
其中：
R1为C3-4烷基；且
X选自：
(b)-C(O)R3，其中R3为视情况经1或2个选自C1-4烷基、卤基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃基；或噻吩基；
或其医药学上可接受的盐；所述方法包含：
使式(II)的化合物：
Figure FSB00000698957200061
与式(IV)的化合物反应：
Figure FSB00000698957200062
其中X′是R3，以提供式(I)的化合物或其医药学上可接受的盐。
15.一种式(II)的化合物：
Figure FSB00000698957200063
其中R1为C3-5烷基，
或其盐。
16.一种制备如权利要求5所述的结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的方法，所述方法包含：
(a)将4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯以每毫升惰性稀释剂介于约15mg与25mg之间的4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的比例分散于选自乙腈、环己烷和乙酸乙酯的惰性稀释剂中，从而形成混合物；和
(b)使所述混合物蒸发以提供结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯。
17.一种制备如权利要求5所述的结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的方法，所述方法包含：
(a)使2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺与4-甲酰基哌啶-1-甲酸甲酯在二氯甲烷中反应；
(b)蒸馏步骤(a)的产物的同时，加入乙腈以将所述极性质子惰性稀释剂从所述步骤(a)的产物中去除；
(c)在足以溶解从步骤(b)蒸馏得到的残余物的温度下，以每毫升乙腈有介于约50mg与约125mg之间的4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的浓度来制备所述残余物于乙腈中的混合物；和
(d)将所述步骤(c)的混合物冷却到不超过约20℃的温度，从而提供结晶4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004277318A (ja) * 2003-03-14 2004-10-07 Dainippon Pharmaceut Co Ltd １−（１−置換カルボニル−４−ピペリジニルメチル）ピペリジン誘導体およびそれを含有する医薬組成物

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004277318A (ja) * 2003-03-14 2004-10-07 Dainippon Pharmaceut Co Ltd １−（１−置換カルボニル−４−ピペリジニルメチル）ピペリジン誘導体およびそれを含有する医薬組成物

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
&acute
a L. Lo&acute
guez等.3-D-QSAR/CoMFA and Recognition Models of Benzimidazole Derivatives at the 5-HT4 Receptor.《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》.2001,第11卷(第21期),2807-2811.
Mar&#305
Marı´a L. Lo´pez-Rodrıguez等.3-D-QSAR/CoMFA and Recognition Models of Benzimidazole Derivatives at the 5-HT4 Receptor.《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》.2001,第11卷(第21期),2807-2811. *
pez-Rodr&#305

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