CN101164552A - 蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂及制备方法。该胶囊剂由蜈蚣多糖蛋白复合物(Scolopendra Polysaccharide－Protein Complex，简称SPPC)、填充剂、抗氧化剂、崩解剂、湿润剂及润滑剂按一定比例构成。其制备步骤是：①首先向蜈蚣多糖蛋白复合物中分别加入填充剂、崩解剂及抗氧化剂后加入湿润剂混匀制成软材；②再将混匀的软材过50－200目尼龙筛制粒，70～80℃烘干30分钟，过50－200目铁筛整粒；③最后加入润滑剂灌装成胶囊。所得的药用组合物能有效杀伤肿瘤细胞和提高机体免疫力，疗效显著，且制备方法易行，操作简便，原料来源广泛。

Description

蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂及制备方法

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤药物，更具体涉及一种蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂，同时还涉及蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂的制备方法。该蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂可广泛应用于肺癌、口腔表皮癌、结肠癌、肝癌和乳腺癌等多种肿瘤的治疗。

背景技术

1.肿瘤已成为威胁人类健康的头号杀手

肿瘤是严重威胁人类生命的常见病和多发病之一，其发病率逐年增高。据世界卫生组织调查表明，全世界每年新发现癌症患者近1000万人。每年因癌症死亡的人数近700万人。最近统计资料表明，我国每年新发现癌症患者约2000万人，近150万人死于癌症。癌症的死亡人数占总死亡数的1/5。因此防癌、治癌已成为一项迫在眉睫的艰苦任务。

2.当前治疗肿瘤的方法与相关药品很多，但都存在一定的局限性

治疗肿瘤的传统方法有手术切除、放疗和化疗。但对于许多病人，在被确诊为肿瘤时，就已经失去了手术切除的机会；而放疗则存在局限性和对正常组织的损伤性；化疗普遍存在细胞毒性作用，特别对肝、肾、骨髓和消化系统的毒副作用非常严重，因此，大大制约了它们在临床上的应用。新兴的介入治疗对原发灶有一定的作用，但难以对付不断散发的转移灶；基因治疗给肿瘤患者带来曙光，但其载体构建、载体与弹头的交联及其在机体分布、代谢过程中的变化等诸多问题还在探讨之中。

3.多糖蛋白复合物的抗肿瘤活性

多糖蛋白复合物(Polysaccharide-protein Complex)广泛存在于动植物体内，其生理功能除了粘附和支持作用外，在细胞识别、信号传导、调控机体免疫功能以及控制细胞的迁移、增殖、分化、代谢等方面都有十分重要的作用。近年来，从植物、动物中提取的多糖蛋白复合物类药物的抗肿瘤活性引起了人们的广泛关注，通过对其作用机理的研究发现多糖蛋白复合物的抗肿瘤作用主要在于其能增强机体的体液免疫和细胞免疫功能，有的能直接杀伤肿瘤细胞(F.Liu et al.，.Immunomodulation and Anti-Cancer Activity of Polysaccharide-Protein Complexes，Current Medicinal Chemistry，2000，7(7)，715-729)。已有研究表明一些新型结构的多糖蛋白复合物在增强机体免疫和控制肿瘤细胞增殖方面具有显著作用：①从宁夏枸杞中(Lycium barbarum)提取得到的多糖蛋白复合物(LBP)具有具有增强机体免疫功能、抗癌抑瘤的作用及抗氧化抗衰老等作用(Lu Gan et al.，Immunomodulation and antitumor activity by a polysaccharide-protein complexfrom Lycium barbarum.2004；4(4)：563-9.)，且经研究发现其抗肿瘤作用机理是抑制原癌基因c-myc的表达(赵荣国.冬虫夏草的药理研究进展[J].新疆中医药，1992，(4)：46-49)；②从担子菌纲云芝菌丝体中提取得到的分子量在50～200KD左右的云芝多糖蛋白复合物(Polysaccharide-protein complexes ofCoriolusversicolor，PSK)作为一种具有增强免疫作用的生物调节剂，在日本已被广泛用于临床。实验表明，PSK不仅可以通过增强肿瘤抗原的免疫原性而促使机体对肿瘤细胞的识别和杀灭，而且体外、体内给药均可显著增强小鼠脾淋巴细胞的转化和功能，并促进其分泌IL-2和IFN-γ等免疫活性因子，并能增强荷瘤小鼠和正常小鼠脾淋巴细胞产生抗体的能力(Jian Cui et al.，polysaccharide-protein complexof Coriolus versicolor：physiological activity，uses，and production.2003；21(2)：109-22.)。③从螺旋藻中提取得到的多糖蛋白复合物(spirulina platensispolysaccharide-protein complex，SPP)可提高不同病期白血病患者NK细胞活性，但不影响正常人NK细胞活性。另外，体外研究表明，SPP能抑制B₃₇乳癌细胞和K₅₆₂白血病细胞；体内研究表明，SPP能抑制H₂₂肝癌细胞、ECA肿瘤细胞以及S₁₈₀癌细胞，同时发现SPP能增加脾和胸腺的重量，提高活化的NK细胞的活性和数量以及激活荷瘤小鼠脾淋巴细胞产生IL-2，对化疗导致的白细胞下降也有治疗作用(曲显俊，等.螺旋藻多糖抗癌作用的实验研究[J].中国海洋药物，2000，19(3)：10-14)。④从海洋软体动物和传统中药土鳖虫中提取的多糖蛋白复合物均具有显著的抗肿瘤活性(顾谦群等.扇贝糖蛋白的化学组成与抗肿瘤活性的研究[J].中国海洋药物，1998(3)：23-26；韩雅莉，谢昆.土鳖虫糖蛋白的提取及抗肿瘤活性初步研究.汕头大学学报(自然科学版)，2006(11)，21(4)：46-50)。⑤此外，海绵体多糖蛋白复合物，4-硒硫酸酯多糖蛋白复合物(SE-CARRA)，人参多糖蛋白复合物(Ginseng polysaccharide-proteincomplex，GP)也有抗肿瘤活性。戴氏虫草多糖蛋白复合物(Cordyceps taiipolysaccharide-protein complex，CDP)能引起T、NK以及单核-巨嗜细胞的活化、增殖，同时对小鼠T淋巴细胞分泌IL-2和TNFβ具有促进作用。鲍鱼多糖(Abalone polysaccharide-protein complex，AP)对裸鼠移植人鼻咽癌细胞具有明显的抑制作用，能明显抑制人鼻咽癌的生长，诱导肿瘤细胞凋亡和坏死。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种蜈蚣多糖蛋白复合物抗肿瘤胶囊剂。配方合理，用于恶性肿瘤的治疗，具有给药方便，抗肿瘤活性强，毒副作用小以及减毒增效等优点。

本发明的另一个目的是在于提供了一种蜈蚣多糖蛋白复合物抗肿瘤胶囊剂的制备方法，方法易行，操作简便，原料来源广泛。

本发明以蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)为有效成份加以药学上可接受的辅料制成抗肿瘤胶囊剂，其中蜈蚣多糖蛋白复合物在胶囊中的重量百分比可以是0.1～30％，优选0.5～15％，最优选1～10％；其在每粒胶囊中的含量范围是0.1～100mg，优选1～50mg，最优选5～30mg；可药用辅料的重量百分比分别是70～99.9％，优选75～99.5％，最优选90～97％，具体如下：

范围：蜈蚣多糖蛋白复合物0.1-30％，填充剂60-95％，抗氧化剂2-4％，崩解剂2-4％，润滑剂1-2％

优选范围：蜈蚣多糖蛋白复合物0.5-15％，填充剂70-92％，抗氧化剂2.5-3.5％，崩解剂2.5-3.5％，润滑剂1.2-1.8％

最优选范围：蜈蚣多糖蛋白复合物3-10％，填充剂80-90％，抗氧化剂2.8-3.2％，崩解剂2.8-3.2％，润滑剂1.5-1.7％

其制备步骤是：

①首先向蜈蚣多糖蛋白复合物中分别加入填充剂，崩解剂及抗氧化剂后加入湿润剂混匀制成软材；

②再将混匀的软材过50-200目尼龙筛制粒，70～80℃烘干30分钟，过50-200目铁筛整粒；

③最后加入润滑剂灌装成胶囊。

所述的蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)是从节肢动物蜈蚣全虫中提取、分离、纯化得到的，其制备步骤为：①以少棘蜈蚣作为原料母体，清洗3～5次，烘干2～4小时，烘干温度控制在60～80℃；②研磨第1步骤中干燥后的原料母体并过50～200目筛得蜈蚣粉；③将第2步骤中的蜈蚣粉用5倍体积蒸馏水抽提1～3小时，温度控制在80～90℃，纱布过滤(得一份提取液)，取残渣再用4倍体积蒸馏水重复提取三次(得三份提取液)，合并以上四份提取液，2500r/min离心20～30分钟，获取上清；④将第3步骤中的上清减压0.1Mpa后浓缩，温度控制在在50～70℃，加入5倍体积95％乙醇，于4℃静置过夜，倾去上清，取沉淀，2500r/min离心10分钟，收集沉淀；⑤将第4步骤中的沉淀用500ml蒸馏水溶解，计量40％饱和度所需要的固体硫酸铵量，于4℃缓慢加入，搅拌4h、10000r/min离心20分钟后，收集上清并计量体积，重复此步骤的操作，收集60％饱和度的沉淀物；⑥将第5步骤中的沉淀物用30ml蒸馏水溶解后，上DEAE-50离子交换层析柱(2.6×40cm)纯化，以蒸馏水平衡，用0.05～0.25mol/LNaCl溶液洗脱，收集洗脱液，用透析袋在双蒸水中透析48小时脱盐，再用聚乙二醇20000浓缩；⑦将第6步骤中的浓缩液上Sephadex G-200层析柱(2.6×60cm)纯化，用0.02mol/L pH为7.2的Tris-HCl溶液洗脱后，经真空冷冻干燥，预冻温度控制在-45～-15℃，加热温度控制在20～40℃，干燥8～12小时后得蜈蚣多糖蛋白复合物纯品。且经实验证明，蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂的有效成分，即所述的蜈蚣多糖蛋白复合物具有明显的调节机体免疫功能、抑制肿瘤生长、与化疗药合用减轻其毒副作用和增强抑瘤效果的协同作用：①蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)可明显提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和胸腺指数，恢复荷瘤小鼠低下的DTH反应，通过影响T细胞数量、增强NK细胞毒性和IL-2的活性，起到调节机体免疫功能的作用。②蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)可剂量依赖性的抑制S₁₈₀肉瘤株，三个剂量组的抑瘤率分别为56.6％、49.6％、35.7％，对艾氏腹水癌小鼠的生存期有延长作用；同时与低于治疗剂量的环磷酰胺合用时，可产生抑瘤的协同作用，提高抑瘤率。③蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)对环磷酰胺造成的大鼠血小板减少和骨髓有核细胞数量减少具有保护作用，提示其与化疗药联合应用，具有减毒作用。

所述的填充剂可以是淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙或其他药学上可接受的填充剂的其中一种或其任意混合物；

所述的抗氧化剂可以是亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、维生素E或其他药学上可接受的抗氧化剂的其中一种或其任意混合物；

所述的崩解剂可以是交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、酸酐、碳酸钠或其他药学上可接受的崩解剂的其中一种或其任意混合物；

所述的润滑剂可以是硬脂酸镁、滑石粉、苯甲酸钠、微粉硅胶的其任意一种。

本发明的优点：

1.蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)抗肿瘤胶囊剂可通过增强巨噬细胞吞噬能力、影响T细胞数量、增强NK细胞毒性和IL-2的活性等作用提高机体的免疫功能。

2.蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)抗肿瘤胶囊剂可直接杀伤肿瘤细胞，产生抑瘤效应。

3.蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)抗肿瘤胶囊剂与化疗药物联合应用具有减毒增效作用。

4.蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)抗肿瘤胶囊剂没有化疗和放疗的剧烈毒副作用。

5.本发明采用常规给药剂型，技术成熟，生产工艺简单易行。

6.本发明采用常规给药方式，给药方便，无痛苦。

具体实施方式

下面将描述本发明的实施例，但本发明的内容完全不限于此。

	蜈蚣多糖蛋白复合物	填充剂	抗氧化剂	崩解剂	润滑剂
						实施例1	1％	淀粉94％	抗坏血酸2％	羟丙基淀粉2％	硬脂酸镁1％
实施例2	5％	糊精88％	维生素E3％	羧甲基淀粉钠3％	滑石粉1％
						实施例3	12％	淀粉83％	抗坏血酸2％	羟丙基淀粉2％	硬脂酸镁1％
实施例4	18％	糊精74％	维生素E4％	羧甲基淀粉钠3％	滑石粉1％
						实施例5	20％	糊精70％	抗坏血酸4％	羟丙基淀粉4％	硬脂酸镁2％
实施例6	25％	淀粉70％	维生素E2％	羟丙基淀粉2％	硬脂酸镁1％
						实施例7	28％	糊精65％	抗坏血酸3％	碳酸氢钠2％	滑石粉2％
实施例8	30％	糊精61％	维生素E4％	碳酸氢钠3％	滑石粉2％

其制备步骤是：

①首先向蜈蚣多糖蛋白复合物中分别加入填充剂，崩解剂及抗氧化剂后加入湿润剂混匀制成软材；

②再将混匀的软材过50-200目尼龙筛制粒，70～80℃烘干30分钟，过50-200目铁筛整粒；

③最后加入润滑剂灌装成胶囊。

所述的蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)是从节肢动物蜈蚣全虫中提取、分离、纯化得到的，其制备步骤为：①以少棘蜈蚣作为原料母体，清洗3～5次，烘干2～4小时，烘干温度控制在60～80℃；②研磨第1步骤中干燥后的原料母体并过50～200目筛得蜈蚣粉；③将第2步骤中的蜈蚣粉用5倍体积蒸馏水抽提1～3小时，温度控制在80或83或85或88或90℃，纱布过滤得一份提取液，取残渣再用4倍体积蒸馏水重复提取三次得三份提取液，合并四份提取液，2500r/min离心20～30分钟，获取上清；④将第3步骤中的上清减压浓缩，温度控制在在50或52或55或61或64或67或70℃，加入5倍体积95％乙醇，于4℃静置过夜，倾去上清，取沉淀，2500r/min离心10分钟，收集沉淀；⑤将第4步骤中的沉淀用500ml蒸馏水溶解，计量40％饱和度所需要的固体硫酸铵量，于4℃缓慢加入，搅拌4h、10000r/min离心20分钟后，收集上清并计量体积，重复此步骤的操作，收集60％饱和度的沉淀物；⑥将第5步骤中的沉淀物用30ml蒸馏水溶解后，上DEAE-50离子交换层析柱(2.6×40cm)纯化，以蒸馏水平衡，用0.05～0.25mol/L NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，用透析袋在双蒸水中透析48小时脱盐，再用聚乙二醇20000浓缩；⑦将第6步骤中的浓缩液上Sephadex G-200层析柱(2.6×60cm)纯化，用0.02mol/L pH为7.2的Tris-HCl溶液洗脱后，经真空冷冻干燥，预冻温度控制在-45或-42或-39或-36或-32或-28或-23或-19或-15℃，加热温度控制在20或25或30或36或40℃，干燥8或9或10或11或12小时后得蜈蚣多糖蛋白复合物纯品。

所述的填充剂可以是淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙或其他药学上可接受的填充剂的其中一种或其任意混合物；

所述的抗氧化剂可以是亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、维生素E或其他药学上可接受的抗氧化剂的其中一种或其任意混合物；

所述的崩解剂可以是交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、酸酐、碳酸钠或其他药学上可接受的崩解剂的其中一种或其任意混合物；

所述的润滑剂可以是硬脂酸镁、滑石粉、苯甲酸钠、微粉硅胶的其任意一种。

药效学实验

为了公开本发明的实质，本发明从免疫调节、抑瘤作用、减毒增效等三个方面对蜈蚣多糖蛋白复合物(SPPC)抗肿瘤制剂进行药效学研究：

(一)实验材料

1、药品：少棘蜈蚣(Scolopendra Subspinipes Mutilans L.Koch)成体由湖北当阳市养殖场提供，体重3g左右，由中国科学院武汉植物研究所江明喜研究员鉴定。呋喃氟脲嘧啶(FT207)由济南制药厂生产，批号：031003；环磷酰胺由江西恒瑞医药股份有限公司生产，批号：21156-21160；复方阿胶浆由山东阿胶股份有限公司生产，批号：040672。

2、动物：昆明种小鼠、BALB/c小鼠、SD种大鼠，雌雄兼用，由武汉大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(鄂)2003-0004。

3、癌细胞株和靶细胞：S₁₈₀瘤株、艾氏腹水癌细胞，A549肺癌细胞、口腔表皮癌KB细胞、KM-12结肠癌细胞、BEL-7402肝癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞株由中国医科院药物所引进、传代；NK敏感细胞Yac-1株和IL-2依赖株CTLL细胞引自武汉大学典型生物保藏中心。

4、试剂：MTT(Sigma)；IL-2由中国军事医学科学院提供，效价400IU/Amp；CD₄(L₃T₄抗体)和CD₈(Lyt-2抗体)试剂盒，由北京医科大学免疫教研室提供；

5、仪器：450型酶标仪由美国BioRad生产；ZT-N型多头细胞收集器由浙江东浦医疗器械厂生产；EG 2101型液体闪烁计数器，国产；荧光显微镜(Olimpus)。

(二)实验方法与结果

1.免疫试验

(1)ConA/LPS刺激荷瘤小鼠脾淋巴细胞体外增殖实验

分别制备NS组和50mg.kg^-1、100mg.kg^-1、200mg.kg^-1 SPPC给药组的荷瘤小鼠脾淋巴细胞。颈椎脱臼处死以上各实验组荷瘤小鼠(每组5只)，75％乙醇浸泡1-2分钟，在无菌操作台内迅速取出脾脏，置于盛有5-10ml冷Hanks液的平皿内，平皿内预先放置一块略大于平皿的孔径为400目的尼龙筛网。用无菌针芯轻捻脾组织，使单个脾细胞滤过筛网进入平皿内。吸取冷Hanks冲洗筛网，将细胞悬液吸入离心管。4℃离心(1500r/min，5min)，弃上清，加入适量的Tris-NH₄Cl(0.16mol.L^-1，pH7.2)以溶解红细胞，吹打均匀，静置1-2分钟。再次离心并用冷Hanks液悬浮并离心洗涤细胞2次，弃上清，用完全RPMI-1640培养基悬浮细胞，作细胞计数，调细胞浓度至1×10⁷.mL^-1。取96孔平底细胞培养板，每组每孔加入1×10⁶个荷瘤小鼠脾淋巴细胞及终浓度为2.5μg.ml^-1的ConA或5μg.ml^-1的LPS共孵育，各组处理均作6个平行孔。在5％O₂、37℃水蒸气饱和的二氧化碳培养箱内培养68小时，培养结束后用MTT法检测细胞增殖。

表1.SPPC对荷瘤小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响(n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	淋巴细胞增殖(A570)
			正常对照组荷瘤对照组	--	0.43±0.0112.50±0.17△△

SPPC低剂量组SPPC中剂量组SPPC高剂量组

51020

18.94±2.22**22.81±1.93**26.93±2.26**

与正常对照组比较，^△△p＜0.01；与荷瘤对照组比较，^**P＜0.01

由表1结果可见，荷瘤对照组的脾淋巴细胞体外增殖明显低于正常对照组，表明荷瘤组小鼠的脾淋巴细胞功能低下，而SPPC大、中、小三个剂量组的淋巴细胞增殖均明显高于荷瘤对照组，说明SPPC可明显刺激荷瘤小鼠的脾淋巴细胞体外增殖。

(2)对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

取体重20～24g健康小鼠，参照文献《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》方法进行实验，计算巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，结果见表2。

由表2结果可见，荷瘤对照组的腹腔巨噬细胞吞噬率与吞噬指数均明显低于正常对照组，表明荷瘤组小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能低下，而SPPC大、中、小三个剂量组的上述指标均明显高于荷瘤对照组，说明SPPC可明显提高荷瘤小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能。

表2.蜈蚣SPPC对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(

n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	吞噬率(％)	吞噬指数
				正常对照组荷瘤对照组SPPC低剂量组SPPC中剂量组SPPC高剂量组	--51020	43.50±5.4234.27±3.38△△48.11±4.99**57.22±6.38**40.40±4.17**	0.70±0.120.18±0.06△△0.68±0.19**0.80±0.10**0.55±0.09**

与正常对照组比较，^△△P＜0.01；与荷瘤对照组比较，^**P＜0.01

吞噬百分率＝[吞噬CRBC的吞噬细胞数/200个巨噬细胞数(吞与未吞)]×100％吞噬指数＝被吞噬的CRBC数/200个巨噬细胞

(3)对荷瘤小鼠迟发性变态反应的影响

取体重19～21g健康小鼠，参照文献《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》第135页方法进行实验，结果见表3。

表3结果显示，荷瘤对照组的DTH值明显低于正常对照组，与未致敏的荷瘤空白组基本相同；而SPPC三个剂量组的DTH值则明显高于荷瘤对照组，与正常对照组比较无显著性差异；表明SPPC可提高荷瘤小鼠的DTH反应，使其受损的免疫功能恢复正常。

表3.SPPC对荷瘤小鼠DTH反应的影响(

n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	DTH(mg)
			正常对照组荷瘤对照组SPPC低剂量组SPPC中剂量组SPPC高剂量组	--51020	2.60±0.591.33±1.00△△3.45±1.28*3.66±1.33**3.90±1.60**

与正常对照组比较，^△△P＜0.01；与荷瘤对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

(4)对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响

取18～22g昆明种小鼠，无菌条件下抽取传代7天的S₁₈₀肉瘤细胞混悬液，用生理盐水稀释(约相当于1×10⁷个瘤细胞/ml)，与小鼠右腋皮肤碘酒消毒后，皮下注入瘤细胞稀释悬液0.2ml/只；24小时后随机分为：模型对照组、FT207阳性对照组(0.15g/kg)和SPPC大、中、小(20、10、5mg/kg)三个剂量组，除模型对照组灌胃生理盐水外，其余各组动物每日灌胃给药一次，连续9天(灌胃体积均为0.25ml/10g)，于末次给药后2日，脱颈椎处死小鼠，取胸腺、脾脏，称重，计算胸腺指数与脾指数，结果见表4。表4结果表明，化疗药FT207可使荷瘤小鼠的胸腺和脾指数明显降低，而蜈蚣PSPC则可明显提高荷瘤小鼠的胸腺和脾指数。

表4.SPPC对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响(

n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	胸腺指数(mg/10g)	脾指数(mg/10g)
				荷瘤对照组FT207组SPPC低剂量组SPPC中剂量组SPPC高剂量组	-0.1551020	26.6±6.315.6±5.528.8±7.9##31.6±6.2##35.6±13.0##	80.6±11.962.3±13.576.5±15.775.9±13.291.8±19.7#

与FT207组比较，^#P＜0.05，^#P＜0.01

(5)对荷瘤小鼠IL-2活性的影响

结果见表5。SPPC可使荷瘤小鼠的IL-2水平明显升高，对调节荷瘤小鼠机体免疫功能，抑制肿瘤有积极的作用。

表5.SPPC对荷瘤小鼠IL-2水平的影响(

n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	体重变化(g)	IL-2活性(U/ml)
				空白对照组荷瘤对照组FT207组SPPC低剂量组SPPC中剂量组SPPC高剂量组	--0.1551020	-1.7-0.8-3.5-1.9-1.6-1.6	24.29±4.7015.55±3.95△38.38±4.9840.43±5.82**48.21±5.37**52.47±6.98**

与空白对照组比较，^△P＜0.05；与荷瘤对照组比较，^**P＜0.01

(6)对荷瘤小鼠NK细胞活性的影响

结果见表6。荷瘤对照组的NK细胞活性明显低于正常对照组，而SPPC大、中、小三个剂量组的上述指标均明显高于荷瘤对照组，NK细胞活性的增强，表明对抑制肿瘤生长发挥了积极作用。

表6.SPPC对荷瘤小鼠NK细胞活性的影响

组别	剂量(mg/kg)	动物数(只)		NK细胞活性(％)
					开始	结束
		空白对照组荷瘤对照组FT207组SPPC低剂量组SPPC中剂量组SPPC高剂量组	--0.1551020				101010101010	101010999	24.58±4.8515.66±4.39△32.68±10.5546.75±11.28**52.69±9.88**64.79±10.78**

与空白对照组比较，^△P＜0.05；与荷瘤对照组比较，^**P＜0.01

(7)对荷瘤小鼠T细胞亚群的影响

在T淋巴细胞静活化期，其细胞膜表面出现的抗原性不同的糖蛋白分子，其作用也不同。存在于小鼠成熟的杀伤(TC)/抑制(TS)T细胞表面的Lyt-2抗原，称为CD₈分子，它能增强抗原识别受体(TCR)对外来抗原和自身MHCI类抗原的结合，以增强识别；存在于小鼠成熟的杀伤/抑制T细胞表面的L₃T₄分子称为CD₄分子，它能增强抗原识别受体(TCR)对外来抗原和自身MHC II类抗原的结合。检测T细胞亚群中的CD₄、CD₈表面分子的表达与比例关系，有助于了解药物的抗肿瘤活性与免疫功能之间的关系，因此，我们进行了SPPC对纯系荷瘤小鼠(S₁₈₀)的T细胞亚群影响的试验，结果见表7～10。

表7结果显示，各荷瘤组小鼠CD₄亚群和CD₈亚群与正常组比较均有显著性差异，说明接种肿瘤后，对动物的辅助性T细胞是有影响的。SPPC各给药组对CD₄的变化影响不大，而SPPC各剂量组与荷瘤对照组比较，CD₈有显著性差异，说明SPPC对荷瘤动物的细胞毒性T细胞CD₈亚群有明显影响；由于荷瘤小鼠体内受到瘤细胞的侵蚀，其正常的T细胞亚群比例因受到多方面因素的影响而失去平衡，而给药后CD₄/CD₈恢复较明显，SPPC大、中、小剂量组与荷瘤对照组比较均有显著性差异。

表7.SPPC对T细胞亚群CD₄、CD₈、CD₄/CD₈的影响(

n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	CD4	CD8	CD4/CD8
					空白对照组荷瘤对照组FT207组SPPC低剂量组SPPC中剂量组SPPC高剂量组	--0.1551020	28.50±4.6019.77±5.23##18.36±2.3316.55±3.6119.21±5.8416.62±5.84	23.23±4.888.60±3.04##12.58±2.99*16.20±5.94**29.06±7.23**23.08±8.77**	1.29±0.402.55±0.88##1.58±0.38*0.99±0.26**0.65±0.30**0.85±0.57**

与空白对照组比较，##P＜0.01；与荷瘤对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

上述试验结果显示，SPPC具有较好的机体免疫调节作用；通过增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、调节机体免疫功能、影响T细胞亚群的活性、提高NK细胞活性及诱导IL-2活性的增强，对抑制肿瘤生长发挥了积极的作用。

2.抑瘤试验

(1)对多种癌细胞系的体外抑制作用

用SPPC 50、100、200mg.kg^-1处理小鼠，制备含药血清；用0.25％胰酶消化、传代细胞。用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液调整细胞浓度至2×10⁴.ml^-1，96孔培养板每孔加入100μl，37℃，5％CO₂孵育24h，弃培养液，加入10％过滤除菌的含药血清，37℃，5％CO₂共孵育18h，采用MTT法检测细胞增殖，结果见表8。

表8.SPPC对不同癌细胞株细胞生长的影响(

n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	抑制率(％)
							A549	KB	KM-12	BEL-7402	MCF-7
		空白对照组SPPC组	-51020	1.3±0.221.1±2.9**50.6±2.5**70.0±2.1**	0.9±0.110.4±1.6**23.1±1.7**41.9±2.8**	1.4±0.310.8±1.2**38.9±2.5**70.2±1.4**						1.2±0.510.9±1.2*35..3±2.4**56.2±1.8**	0.8±0.123.1±1.7**36.9±2.3**50.33±1.8**

与空白对照组比较，^**P＜0.01

结果，与空白对照组比较，SPPC大、中、小三个剂量组对人A549肺癌细胞、口腔表皮癌KB细胞、KM-12结肠癌细胞、BEL-7402肝癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞的生长均有明显的抑制作用，且存在一定的量效关系(表8)。

(2)对S₁₈₀肉瘤株的抑制作用

取肿瘤细胞(荷瘤小鼠腹腔S₁₈₀肉瘤细胞2×10⁶接种于雄性健康BALB/c裸鼠腋下，随机分组。于接种后第2天开始灌胃给药，1次/天，剂量分别为5mg.kg^-1、10mg.kg^-1、20mg.kg^-1SPPC，对照给予相应体积的生理盐水，连续灌胃10天，于试验结束时，摘眼球取血，摘瘤、称瘤重。

结果见表9。与荷瘤对照组比较，SPPC大、中剂量组对S₁₈₀瘤体生长均有明显的抑制作用，抑瘤率分别为56.6％和49.6％；结果表明，SPPC对小鼠S₁₈₀瘤体生长有明显的抑制作用，且存在一定的量效关系。

表9.蜈蚣SPPC对S₁₈₀荷瘤小鼠瘤体生长的影响

与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

(3)对艾氏腹水癌小鼠生存期的影响

表10结果表明：SPPC大、中剂量组均延长艾氏腹水癌小鼠存活期，与荷瘤组比较有显著性差异；SPPC小剂量组的作用不明显。三次试验结果均表明SPPC具有延长荷瘤小鼠生存期的作用。

表10SPPC对艾氏腹水癌小鼠生存期的影响

与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

3.减毒增效试验

(1)减毒试验

检验结果见表11～13。表11结果表明，大鼠注射环磷酰胺后，可使骨髓有核细胞数下降48.9％，而SPPC大、中剂量给药组可明显改善环磷酰胺引起的大鼠骨髓有核细胞数降低。说明大、中剂量的SPPC对骨髓有核细胞具有保护作用，对化疗药造成的骨髓造血功能抑制具有一定的减毒效果。

表11SPPC对环磷酰胺大鼠骨髓有核细胞数的影响(

n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	骨髓有核细胞数(×109/L)
			正常对照组环磷酰胺对照组SPPC组	--51020	6.97±2.303.56±1.24△5.88±2.557.80±2.59*7.64±2.79 *

与正常对照组比较，^△P＜0.05；与模型对照组比较，*P＜0.05

表12结果表明，大鼠注射环磷酰胺后使白细胞和血小板数显著下降；蜈蚣SPPC大、中、小剂量组的血小板数降低幅度均显著减小，其检测值明显高于模型对照组。提示SPPC大、中、小剂量对环磷酰胺造成的血小板减少均有较好的对抗作用，可以在一定程度上减轻化疗药的毒副作用。

表12环磷酰胺大鼠试验后血液学指标检测值(n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	WBC(×109/L)	Hb(g/L)	RBC(×1012/L)	PLC(×109/L)
						正常对照组模型对照组SPPC组	--51020	10.39±5.314.13±2.02△△4.98±2.614.43±1.374.11±2.42	134.60±5.10121.20±8.12118.50±6.34126.20±6.48122.80±7.27	8.40±3.337.00±0.727.33±0.557.10±0.517.12±0.78	617.20±47.53289.60±52.14△△537.80±104.19589.00±96.72608.60±123.39

与正常对照组比，^△△P＜0.01；与模型对照组比，^**P＜0.01

(2)增效试验

结果见表13。单独用药组：环磷酰胺(25mg/kg)、SPPC(5mg/kg)的抑瘤率分别为37.4％和46.6％，而联合用药组(环磷酰胺25mg/kg+SPPC 5mg/kg)的抑瘤率则为77.9％，与单独用药组比较，抑瘤率均有所提高；从上述试验结果可以看出：SPPC与小剂量的化疗药合用，不仅可减轻化疗药的毒副作用，同时还可提高抑瘤率，显示了联合用药的优势。

表13SPPC与环磷酰胺合用对S₁₈₀瘤株生长的影响(

n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	瘤体重(g)	抑瘤率(％)
				生理盐水组环磷酰胺组SPPC组SPPC+环磷酰胺组	-251010+25	1.31±0.210.82±0.44**0.83±0.49**0.29±0.21**	-37.436.677.9

与生理盐水组比较，^**P＜0.01

Claims (8)

1.一种蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂，它由下述原料重量百分比制成：蜈蚣多糖蛋白复合物0.1-30％，填充剂60-95％，抗氧化剂2-4％，崩解剂2-4％，润滑剂1-2％；所述的填充剂为淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙或其他药学上可接受的填充剂的其中一种或其任意混合物；所述的抗氧化剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、维生素E或其他药学上可接受的抗氧化剂的其中一种或其任意混合物；所述的崩解剂为交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、酸酐、碳酸钠或其他药学上可接受的崩解剂的其中一种或其任意混合物；所述的润滑剂为硬脂酸镁、滑石粉、苯甲酸钠、微粉硅胶或其他药学上可接受的润滑剂和助流剂的其中一种或其任意混合物。

2.根据权利要求1所描述的一种蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂，其特征在于由下述原料重量百分比制成：蜈蚣多糖蛋白复合物0.5-15％，填充剂70-92％，抗氧化剂2.5-3.5％，崩解剂2.5-3.5％，润滑剂1.2-1.8％。

3.根据权利要求1所描述的一种蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂，其特征在于由下述原料重量百分比制成：蜈蚣多糖蛋白复合物3-10％，填充剂80-90％，抗氧化剂2.8-3.2％，崩解剂2.8-3.2％，润滑剂1.5-1.7％。

4.根据权利要求1所描述的一种蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂，其特征在于由下述原料重量百分比制成：蜈蚣多糖蛋白复合物1％，淀粉94％，抗坏血酸2％，羟丙基淀粉2％，硬脂酸镁1％。

5.根据权利要求1所描述的一种蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂，其特征在于由下述原料重量百分比制成：蜈蚣多糖蛋白复合物18％，糊精74％，维生素E4％，羧甲基淀粉钠3％，滑石粉1％。

6.根据权利要求1所描述的一种蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂，其特征在于由下述原料重量百分比制成：蜈蚣多糖蛋白复合物25％，淀粉70％，维生素E2％，羟丙基淀粉2％，硬脂酸镁1％。

7.根据权利要求1所描述的一种蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂，其特征在于由下述原料重量百分比制成：蜈蚣多糖蛋白复合物30％，糊精61％，维生素E4％，碳酸氢钠3％，滑石粉2％。

8.一种实现要求1所述的蜈蚣多糖蛋白抗肿瘤胶囊剂的制备方法，包括以下步骤：

①首先向蜈蚣多糖蛋白复合物中分别加入填充剂，崩解剂及抗氧化剂后加入湿润剂混匀制成软材；

②再将混匀的软材过50-200目尼龙筛制粒，70～80℃烘干30分钟，过50-200目铁筛整粒；

③最后加入润滑剂灌装成胶囊。