CN101163491A - 利用氧化还原电位水溶液治疗皮肤溃疡的方法 - Google Patents

Abstract

提供了通过施用氧化还原电位(ORP)水溶液治疗患者的皮肤溃疡和相关并发症的方法，所述ORP水溶液保持稳定至少24小时。

Description

利用氧化还原电位水溶液治疗皮肤溃疡的方法

相关专利申请的相互引用

本专利申请要求2006年1月20日提交的美国临时专利申请No.60/760,635、2006年1月20日提交的60/760,567、2006年1月20日提交的60/760,645、2006年1月20日提交的60/760,557、2005年10月27日提交的60/730,743、2005年5月2日提交的60/676,883、2005年3月31日提交的60/667,101、和2005年3月23日提交的60/664,361的优先权，在此通过引用将其各自的全部内容并入本申请。

发明背景

皮肤溃疡是严重的临床问题，可以造成甚至更为严重的并发症例如坏疽、全身性炎症综合征和脓毒症。当肢体上的皮肤溃疡处发生这些并发症时，目前的治疗方案可能需要截肢包括膝上腿部截肢(AKA)、膝下腿部截肢(BKA)和指趾截肢，它们对患者具有明显的暗示。

皮肤溃疡有着多种原因，包括静脉功能不全、动脉功能不全、缺血性压迫和神经病。静脉性皮肤溃疡是最常见的腿部皮肤溃疡类型，女性受累多于男性。静脉性皮肤溃疡与静脉高压和静脉曲张有关。静脉性皮肤溃疡通常是表浅的和痛性的。常常在有心脏或脑血管病症、下肢跛行、阳痿和远端足部疼痛病史的老年患者中看到动脉性皮肤溃疡。多达25％的动脉性溃疡病例伴发有静脉疾病。压迫性皮肤溃疡是由组织缺血造成的。压迫性皮肤溃疡常常是深的以及常常位于骨性突起处。神经病性皮肤溃疡与患有例如糖尿病、神经疾病或麻风病的患者(通常是足跖面)的外伤、长时间压迫有关。

静脉功能不全是引起下肢皮肤溃疡最为常见的原因，占所有病例的多达80％。在美国患有静脉功能不全的约700万人中，近100万人发生静脉性腿部溃疡。在美国，估计静脉性腿部溃疡的花费是每年10亿美元，每个患者的平均费用超过40,000美元。静脉性皮肤溃疡随着年龄增加而变得更为常见，发病高峰年龄在60和80岁之间。但是，年轻患者也会发生静脉性皮肤溃疡，造成了显著的发病率和丧失劳动时间。见de Araujo et al.，Ann.Intern.Med.2003 138(4)：326-34。

压迫性皮肤溃疡是老年患者发病的另一个主要原因，也是养老院居住者中最重要的护理问题，显著增加了医疗和护理的花费。特别是，足部的压迫性皮肤溃疡在老年制动患者中是非常常见和难以治愈的。集中于缺少皮下组织的骨骼突起处的小片面积上的压力、剪切力或摩擦力是引起踝部、脚后跟或这两者处的压迫性皮肤溃疡的原因。未治疗的压迫性皮肤溃疡可能恶化并造成蜂窝组织炎、慢性感染或骨髓炎。见Landi et al.，Ann.Intern.Med.2003 139(8)：635-41。

糖尿病也是足部皮肤溃疡的常见病因。糖尿病在美国的发病率目前约为6％或超过1800万人，包括约500万未诊断的病例。另外，美国的2型糖尿病患者似乎在增加。糖尿病是美国截肢的首要的非外伤性病因。每年美国的糖尿病患者的下肢截肢(LEA)的总数超过了80,000例。糖尿病LEA后的3年死亡率是在35％和50％之间。2001年美国糖尿病LEA的直接花费是从足趾截肢的$22,700到膝上截肢的$51,300。糖尿病患者中约85％的LEA在此之前都有足部皮肤溃疡。美国糖尿病患者的新足部皮肤溃疡的1年发病率是从1.0到2.6％。见V.R.Driver et al.，Diabetes Care 2005 28：248-253。

糖尿病足溃疡的传统治疗包括清创、血运重建、敷裹包扎和治疗任何存在的感染。清创应当去除所有的碎片和坏死组织，使得更少地发生感染。普遍的推荐是非粘连性敷料应当始终覆盖住糖尿病足溃疡，封闭敷料可以降低感染危险。

糖尿病足可以发生湿性和干性坏疽。湿性坏疽是由脓毒性动脉炎引起的，继发于软组织感染或溃疡。干性坏疽是继发于动脉灌注的严重减少，并发生于慢性危急缺血。血运重建后再进行手术清创被推荐用于治疗糖尿病的足部溃疡。尽管抗生素是治疗的关键组成，但是单用抗生素治疗感染通常不足以缓解大多数糖尿病足感染。见AmericanDiabetes Association Consensus Statement，Diabetes Care 200326：3333-3341。因此，特别需要治疗糖尿病足部皮肤溃疡的其他方法。

其中感染发挥了临床作用的慢性皮肤溃疡的疾病谱包括危急肢体缺血(CLI)、糖尿病足溃疡、膝下截肢(BKA)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、和慢性静脉功能不全(CVI)。感染在这些病症中的作用可以从次要作用到严重作用，但是其在大多数病例中似乎都起到了重要作用。受感染的皮肤溃疡通常需要全身性抗生素，当出现在肢体时，可能需要截肢。

需要发展出能减少截肢需要的治疗皮肤溃疡的方法。在年龄超过85岁的患者中，早期截肢(PA)仍有着极高的死亡率，为13-17％。在最高危的患者中，截肢后的30天围手术期死亡率可以从4到30％，发病率是从20到37％，因为很多都是晚期病症。CLI患者将出现感染、脓毒症和进行性肾功能不全。只有不到三分之二患者实现了BKA后的成功康复；而在膝上截肢后，这个比例不到二分之一患者。总而言之，在所有需要截肢的患者中，只有不到50％的患者曾实现了完全活动。CLI患者的总体预后差，3年后死亡率超过50％，BKA后的死亡率是肢体补救治疗的2倍。另外，在美国治疗CLI的总费用估计为每年100-200亿美元。同样，截肢者的每年随诊或长期护理和治疗的费用要明显高于保留肢体者。

根据溃疡的类型和严重度，临床谱可以进展到急性全身性炎症应答综合征(SIRS)、脓毒症或感染性休克。急性全身性炎症应答综合征(SIRS)是一种包括全身炎症的特点但没有终末器官损伤或可识别的菌血症的综合征。SIRS独立且区别于脓毒症、严重脓毒症或感染性休克。从SIRS到脓毒症的关键转变是在血中存在经鉴定的病原体。SIRS的病理生理包括但不限于，补体活化、细胞因子和花生四烯酸代谢物分泌、刺激细胞介导的免疫、激活凝血级联以及体液免疫机制。SIRS的临床特点是心动过速、呼吸急促、低血压、低灌注、少尿、白细胞增多或白细胞减少、发热或低体温、代谢性酸中毒以及容量支持的需要。SIRS可以影响所有器官系统，并造成多器官功能不全综合征(MODS)。因此，甚至在早期(即SIRS)，在溃疡部位和血液中都蓄积有促炎症细胞因子，它们造成了多器官衰竭和死亡。

因此，仍然需要治疗皮肤溃疡的新方法。本发明提供了这种方法。通过在此所提供的发明描述，本发明的这些和其他的优点以及附加的发明特点是显而易见的。

发明简述

本发明提供了预防或治疗患者病症的方法，其中所述方法包括给患者施用治疗有效量的氧化还原电位(ORP)水溶液，其中溶液保持稳定至少约24小时。病症可以包括例如医学状况、疾病、损伤、过敏等，其可以用本发明的ORP水溶液治疗。

本发明提供了一种通过施用氧化还原电位(ORP)水溶液治疗患者皮肤溃疡的方法，其中溶液保持稳定至少约24个小时。本发明也涉及通过施用氧化还原电位水溶液治疗患者皮肤溃疡的方法，其中溶液包含阳极水和阴极水。在一个实施方式中，本发明的方法所用的ORP水溶液包含一种或多种游离氯种类，并保持稳定至少约2个月。ORP水溶液优选地包括阳极水和阴极水。

在另一个实施方式中，ORP水溶液包括量从约15ppm到约35ppm的次氯酸以及量从约25ppm到约50ppm的次氯酸钠，并保持稳定至少约1周，其pH值是从约6.2到约7.8。

本发明也提供了一种治疗患者皮肤溃疡的方法，所述方法包括用ORP水溶液冲洗和/或洗涤皮肤溃疡；用ORP水溶液浸泡皮肤溃疡；用经ORP水溶液饱和的伤口敷料敷裹包扎皮肤溃疡；以及任选地重复洗涤、冲洗、浸泡和敷裹包扎步骤，其中ORP水溶液的pH值优选地是从约6.4到约7.8。在一个实施方式中，皮肤溃疡被浸泡至少约2分钟，并且任选地干燥至少约2分钟，然后应用敷料敷裹包扎。

本发明还提供了降低患者的皮肤溃疡处的微生物负荷的方法，所述方法包括给患者施用能有效减少皮肤溃疡处的微生物负荷和局部炎症过程的量的ORP水溶液。本发明还提供了降低复发率、降低肢体溃疡相关的截肢可能性的方法，所述方法包括给患者施用有效量的ORP水溶液。

本发明还提供了预防继发于坏疽以及与SIRS或脓毒症的发生相关的多器官衰竭的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的氧化还原电位(ORP)水溶液，以抑制皮肤溃疡部位的炎症细胞分泌新的促炎症分子，并减少皮肤溃疡的细菌负荷，其中ORP水溶液保持稳定至少约24个小时。可以通过使溶液与患者的皮肤溃疡组织接触来施用ORP水溶液。

附图简要说明

图1是用于生产本发明所用的氧化还原电位水溶液的三室电解池的示意图。

图2图解说明了三室电解池以及描述了在用于生成本发明所用的氧化还原电位水溶液的示例生产过程中生成的离子种类。

图3是用于生产本发明施用的示例氧化还原电位水的方法的示意流程图。

图4显示了经对照和ORP水溶液(Dermacyn)治疗的患者所能行走的米数的图解比较。

图5显示了在对照和ORP水溶液治疗(M60)患者中溃疡愈合所需的月数的图解比较(＞＝12m：大于或等于12个月；10-11m：10到11个月；7-9m：7到9个月；4-6m：4到6个月；＜＝3m：小于或等于3个月)(占组中所有溃疡的百分比)。

图6显示了患者在ORP水溶液(Derma)治疗前后的功能状态(基于实施所列任务的能力)的图解比较。

图7显示了患者在ORP水溶液(M60)治疗前后所报告的溃疡相关性疼痛的图解比较。

图8A-8C显示了在经示例ORP水溶液(MCN)和过氧化氢(HP)处理的人皮肤成纤维细胞(HDF)的细胞生存力、凋亡和坏死的图解比较。

图9是在经示例ORP水溶液(MCN)和500μM过氧化氢(HP)处理的HDF中的8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OHdG)加合物水平的图解比较。

图10显示了在慢性暴露于低浓度的示例ORP水溶液(MCN)和过氧化氢(HP)后HDF中的衰老相关的β-半乳糖苷酶的表达。

图11显示了肥大细胞活化相关的生物学事件。

图12显示了不同浓度的示例ORP水溶液(ORP)对所处理的抗原活化的肥大细胞的脱颗粒作用的影响。

图13比较地显示了示例ORP水溶液(MCN)对经色甘酸盐处理的抗原活化的肥大细胞的脱颗粒作用的影响。

图14显示了不同浓度的示例ORP水溶液(MCN)对经处理的抗原活化的和钙离子载体(A23187)活化的肥大细胞的脱颗粒作用的影响。

图15A-15B是显示测定对照和ORP水溶液处理过的肥大细胞在抗原攻击后的细胞因子mRNA水平的RNA酶保护测定。

图16是经不同浓度示例ORP水溶液(MCN)处理过的抗原活化肥大细胞所分泌的TNF-α的图解比较。

图17是经不同浓度示例ORP水溶液(MCN)处理过的抗原活化肥大细胞所分泌的MIP1-α的图解比较。

图18是示例ORP水溶液(研究组)或标准治疗(对照组)治疗的儿科烧伤患者中的年龄分布的图解说明。

图19是示例ORP水溶液(研究组)或标准治疗(对照组)治疗的患者的住院天数的图解比较，按照烧伤的体表面积百分比进行分组。

发明详述

本发明提供了治疗患者的皮肤溃疡的方法，包括给患者施用能有效治疗皮肤溃疡的量的氧化还原电位(ORP)水溶液，其中溶液的pH值为约6.4到约7.8，所述溶液能保持稳定至少约1周。优选地，ORP水溶液能保持稳定至少约2个月，以及更优选地保持至少约1年。ORP水溶液的pH值优选地是从约7.4到约7.6。

本发明所用的ORP水溶液可以包括阳极水和阴极水。优选地，ORP水溶液所含的阴极水的量占溶液体积的约10％体积到约50％体积。更优选地所含的阴极水的量是从约20％溶液体积到约40％溶液体积。或者，ORP水溶液所含的阳极水的量是从约50％溶液体积到约90％溶液体积。

本发明所用的ORP水溶液可以包括至少一种游离氯种类。游离氯种类可以包括次氯酸、次氯酸盐离子或其组合。优选地，游离氯种类是次氯酸。可以存在其他的游离氯种类。

本发明所用的ORP水溶液可以例如包含量从约10ppm到约400ppm的游离氯种类。优选地，所含的游离氯种类的量是从约15ppm到约50ppm。更优选地，游离氯种类选自以下：含量从约15ppm到约35ppm的次氯酸、含量从约25ppm到约50ppm的次氯酸钠、或含量从约15ppm到约35ppm的次氯酸与含量从约25ppm到约50ppm的次氯酸钠的组合。

本发明提供了通过用任何合适的方式施用ORP水溶液治疗患者的皮肤溃疡的方法。例如，可以通过用溶液洗涤或冲洗皮肤溃疡给患者施用ORP水溶液。或者，可以通过将皮肤溃疡浸泡于溶液中给患者施用ORP水溶液。可以将皮肤溃疡浸泡于ORP水溶液中任何合适长度的时间，一般是至少约1分钟，以及优选地至少约2分钟。

在另一个实施方式中，可以通过用经溶液饱和的伤口敷料敷裹包扎皮肤溃疡给患者施用ORP水溶液。经饱和的伤口敷料可以保持与伤口接触足以治疗伤口的时间。优选地，定期更换饱和的伤口敷料，例如每日1次或每日多次，以便给伤口提供新鲜的敷料。

本发明还提供了一种治疗皮肤溃疡的方法，包括(1)用氧化还原电位(ORP)水溶液洗涤或冲洗溃疡；(2)将溃疡浸泡在ORP水溶液中；(3)用经ORP水溶液饱和的伤口敷料敷裹包扎溃疡；和(4)任选地重复步骤(1)-(3)。另外，也可以给覆盖伤口的敷料或纱布应用基于ORP水溶液技术的凝胶。可以按治疗皮肤溃疡的需要经常重复方法的步骤(1)-(3)。

任选地可以在给伤口施用ORP水溶液之前或之后对皮肤溃疡进行清创。优选地，在施用ORP水溶液之前对皮肤溃疡进行清创。也可以在施用经ORP水溶液饱和的伤口敷料之前对皮肤溃疡进行清创。

在头3-4天里，可以通过冲洗、洗涤和/或浸泡每日一次地清洁皮肤溃疡，以便适当地控制相关的感染。可以每日一次、二次、三次、四次或按需更频繁地将溃疡用肥皂和自来水洗涤、清创并喷ORP水溶液。在清洁之后，可以用ORP水溶液浸泡或以其他方式湿润溃疡任何合适的时间，一般是从约60到120分钟，优选地从约15到约60分钟，更优选地是从约5到约15分钟。溃疡可以任选地进行进一步的处理(漂洗)。在湿润皮肤溃疡之后，优选地用湿润凝胶(其活性组分可以是ORP水溶液)覆盖伤口，并施用干的敷料。湿润凝胶还可以包括ORP水溶液。任选地，在治疗的头72个小时内，每天重复该过程1次、2次、3次、4次或更多次。之后，可以任选地根据临床评价每3到4天重复该过程1次。

本发明所治疗的患者可以是人类或兽医患者(例如非人的哺乳动物)。被施用ORP水溶液的皮肤溃疡可以位于患者的任何部位，包括但不限于皮肤溃疡位于头部、颈部、上肢、手、手指、躯干、生殖器、下肢、足、趾、爪、蹄或其组合。可以同时治疗一个患者的多处皮肤溃疡。

本发明提供了对任何深度、形状或尺寸的皮肤溃疡的治疗方法。适合于治疗的皮肤溃疡包括例如仅限于浅表皮的溃疡、保存表皮基底层的溃疡、穿透表皮的溃疡、累及真皮的溃疡、穿透真皮到达皮下组织的溃疡和穿透到深部组织包括肌肉、脂肪和骨骼的溃疡。皮肤溃疡可以是任何形状例如圆形、椭圆形、线型或不规则形状。具有任何合适的表面积的皮肤溃疡都可以被治疗，包括例如表面积是至少约1mm²、至少约5mm²、至少约1cm²、或至少约2cm²。

本发明提供了治疗患者的皮肤溃疡的方法，其中皮肤溃疡是由例如动脉功能不全、静脉功能不全、淋巴管功能不全、神经病、压迫、外伤或其组合引起的。

可以用本发明的ORP水溶液治疗患者的各种类型的皮肤溃疡。例如，下面的皮肤溃疡适合于治疗：糖尿病足溃疡、缺血性溃疡、坏疽性溃疡、静脉淤滞性溃疡、褥疮或外伤性溃疡。另外，本发明提供了治疗动脉功能不全患者的皮肤溃疡的方法，其中动脉功能不全是由例如但不限于动脉粥样硬化、高血压、吸烟、栓子、糖尿病、动脉炎症、移植物抗宿主病、雷诺病、Buerger病(闭塞性血栓性脉管炎)或其组合造成的。

本发明还提供了治疗静脉功能不全患者的皮肤溃疡的方法，所述静脉功能不全是由例如但不限于充血性心衰、静脉炎、血凝块、静脉瓣膜异常、遗传因素或其组合造成的。也可以治疗血管内血流异常患者的皮肤溃疡，所述异常是由例如但不限于镰状细胞性贫血、高凝状态、白细胞淤积症、高粘滞综合征、DIC或其组合造成的。

本发明也提供了治疗淋巴管功能不全患者的皮肤溃疡的方法，其中淋巴管功能不全是由例如但不限于肿瘤栓子、丝虫病或其组合造成的。同样，本发明提供了治疗水肿患者的皮肤溃疡的方法，其中水肿是由例如但不限于充血性心衰、肝硬化、肾病综合征、营养不良或其组合造成的。

本发明包括用于治疗压迫性皮肤溃疡的方法，其中压迫性缺血是患者制动(immobility)、瘫痪、肥胖或其组合造成的。本发明还提供了治疗神经病患者的皮肤溃疡的方法，其中神经病是由例如但不限于糖尿病、尿毒症、毒素、淀粉样变、多发性硬化、遗传性神经病或其组合造成的。

本发明也提供了治疗患者的皮肤溃疡的方法，其中皮肤溃疡是由代谢性疾病(例如糖尿病、痛风)、炎性病症(例如狼疮、混合性结缔组织病、类风湿性关节炎、任何类型的原发或继发性血管炎、超敏反应、多形性红斑、大庖性皮肤病、寻常天疱疮)、感染性疾病(例如疱疹、麻风病、水痘-带状疱疹、脓毒症)、肿瘤(例如皮肤癌、血管瘤)、退行性疾病(例如硬皮病、局限性硬皮病)、遗传性疾病(例如镰状细胞贫血)、外伤/环境损伤(例如磨损、放射、手术后瘘管)或其组合造成的。

本发明的方法可以用于治疗具有单个皮肤溃疡或多个皮肤溃疡的患者。

根据本发明可以联合ORP水溶液和其他治疗一起治疗皮肤溃疡。例如但不限于可以通过施用ORP水溶液作为门诊综合治疗的一部分来治疗静脉淤滞性腿部溃疡，所述门诊综合治疗包括对所需的多条静脉的硬化治疗。在每次硬化治疗期之后，患者可以穿上2型弹力袜，以便有助于被治疗静脉的闭合。需要穿袜的时间长度从约3天到约3周不等，取决于所注射静脉的大小。任选地施用压迫绷带。对合适的患者也可以实施隐静脉切除术。

本发明还提供了治疗皮肤溃疡的方法，其中皮肤溃疡是糖尿病患者的足部溃疡。本发明提供了治疗糖尿病患者的足部溃疡的方法，包括：(1)对溃疡进行清创；(2)用ORP水溶液洗涤或冲洗溃疡；(3)将溃疡浸泡于溶液中至少约2分钟；(4)干燥溃疡至少约2分钟；(5)用经溶液饱和的伤口敷料敷裹包扎溃疡；和(6)任选地重复步骤(1)-(5)，其中溃疡是糖尿病患者的受感染的2级或3级足部溃疡，所述溃疡的表面积至少约2.0cm²。用于治疗糖尿病患者的足部溃疡的这种方法可以包括重复步骤(1)-(5)任何合适的次数，直到溃疡基本愈合。优选地，重复步骤(1)-(5)至少1次。

本发明提供了用于减少患者的皮肤溃疡的复发率的方法，用于降低患者的皮肤溃疡裂开的可能性的方法以及用于降低患者的皮肤溃疡造成的截肢的可能性的方法，包括通过施用氧化还原电位(ORP)水溶液治疗患者的皮肤溃疡。

在另一个实施方式中，本发明涉及用于降低皮肤溃疡造成的全身性炎症反应综合征(SIRS)的发生率的方法，包括施用ORP水溶液。本发明还包括用于降低皮肤溃疡造成的脓毒症的发生率的方法，包括施用ORP水溶液。全身性炎症应答综合征(SIRS)是一种包括全身炎症的特点但没有终末器官损伤或可识别的菌血症的综合征。SIRS独立且不同于脓毒症、严重脓毒症或感染性休克。从SIRS到脓毒症的关键转变是血液中存在经鉴定的病原体。SIRS的病理生理包括但不限于，补体活化、细胞因子和花生四烯酸代谢物分泌、刺激细胞介导的免疫、激活凝血级联以及体液免疫机制。本发明的SIRS或脓毒症发生率的降低可以是任何数量的降低，一般降低至少约10％，优选地至少约15％，更优选地至少约20％，所述降低是通过ORP水溶液治疗患者的SIRS或脓毒症发生率相对于聚维酮碘治疗患者的发生率的降低来衡量的。

本发明还提供了降低患者的皮肤溃疡的微生物负荷的方法，包括通过施用ORP水溶液治疗患者的皮肤溃疡。

在本发明的上下文中，给患者例如动物(特别是人)施用的治疗有效量应当足以在合理的时间框内在患者中实现治疗性或预防性反应。利用本领域熟知的方法可以容易地确定出剂量。本领域技术人员将认识到，任何特定患者的具体剂量水平将取决于多种因素。例如，根据所采用的具体的ORP水溶液的强度、病症的严重性、患者的体重、患者的年龄、患者的体能和精神状态、一般健康情况、性别、饮食等可以确定出剂量。根据施用具体的ORP水溶液可能伴发的任何不良副作用的发生情况、性质和程度也可以确定出剂量的大小。在任何可能的情况下都希望保持不良副作用最小。

对于具体剂量可能需要结合考虑的因素可以包括例如生物利用度、代谢谱、施用时间、施用途径、排泄率、具体的ORP水溶液在具体患者中的药物动力学等。其他因素可以包括例如ORP水溶液相对于所治疗的具体病症的效力或有效性、在治疗过程之前或期间出现的症状的严重度等。在一些情况中，通过使用一种或多种检测法也可以部分地确定出构成治疗有效量的剂量，例如能合理地预测出具体ORP水溶液用于治疗或预防具体病症的临床疗效的生物检测法。

可以单独地或联合一种或多种其他的治疗剂给患者例如人治疗性地施用本发明的ORP水溶液，例如以便治疗已有的病症。也可以单独地或联合一种或多种其他的治疗剂给患者例如人预防性地施用本发明的ORP水溶液，所述患者已经暴露于一种或多种与病症相关的致病因素。例如，可以给已经暴露于一种或多种引起感染的微生物(例如病毒、细菌和/或真菌)的糖尿病患者适当地预防性地施用本发明的ORP水溶液，以抑制或降低患者中感染的可能性或降低这种暴露所造成的感染的严重度。也就是说，ORP水溶液可以预防在受污染的、定殖的或严重定殖的皮肤溃疡中发生感染。

本领域技术人员知道可以获得施用本发明的ORP水溶液的合适方法，尽管可以使用一种以上的施用途径，但是特定的途径可以提供比另一种途径更为快速的和更为有效的反应。治疗有效量可以是在个体患者中获得ORP水溶液的“有效水平”所必需的剂量。治疗有效量例如可以被定义为施用给个体患者以获得本发明ORP水预防或治疗患者病症的血液水平、组织水平、和/或细胞内水平所需的量。

当有效水平用作为给药的优选终点时，实际的剂量和时间表可以有所不同，取决于例如个体间在药物动力学、分布、代谢等方面的差异。当与除本发明的ORP水溶液外的一种或多种治疗剂联合使用本发明的ORP水溶液时，有效水平也可以有所不同，所述治疗剂例如是一种或多种抗感染药物、一种或多种“缓和剂”、“调节剂”或“中和剂”(例如美国专利Nos.5,334,383和5,622,848所述)、一种或多种抗炎剂等。

适当的指示可以被用于确定和/或监测有效水平。例如，通过对合适的患者样品(例如血液和/或组织)的直接分析(例如分析化学)或间接分析(例如临床化学指示物)可以确定出有效水平。例如，通过对例如尿代谢物浓度、病症相关标记物的变化(例如病毒感染中的病毒计数)、组织病理学和免疫化学分析、病症相关症状的减轻等的直接或间接观察也可以确定出有效水平。

利用本领域已知的任何合适的施用方法都可以施用本发明所用的ORP水溶液。可以联合一种或多种本领域已知的可药用载体、媒介、佐剂、赋形剂或稀释剂施用本发明所用的ORP水溶液。本发明所用的ORP水溶液也可以是凝胶、软膏等的活性组分。本领域技术人员可以容易地确定出用于施用本发明的ORP水的合适的制剂和施用方法。根据其他因素例如副作用、患者的总体情况的变化等，本领域熟练技术人员可以容易地进行任何必要的剂量调整，使得更符合所治疗的病症的性质或严重度。

本发明所施用的ORP水溶液也可以作为用于负压设备的冲洗溶液，所述设备用于减轻水肿和增加血流。合适的负压设备可以包括例如一种或多种真空辅助伤口闭合设备例如Kinetic Concepts公司在美国出售的V.A.C.^和V.A.C.^Instill^TM设备。据信ORP水溶液可以与所述设备协同发挥作用，控制炎症-过敏过程，同时减少微生物负荷。因此，根据本发明，该设备可以被施用于开放性溃疡，进行间断或连续的冲洗，以便治疗或预防组织感染或坏死。

根据本发明施用的ORP水溶液也可以用作用于皮肤溃疡清创的水疗手术(hydrosurgery)设备的冲洗溶液。合适的水疗手术设备可以包括例如Smith和Nephew在美国出售的VersaJet设备、Medaxis在欧洲出售的Debritom、DeRoyal在美国和欧洲出售的JetOx或意大利的PulsaVac。据信ORP水溶液可以与所述设备协同作用，减少伤口处的微生物负荷以及避免在清创过程中形成感染性雾。因此，根据本发明，可以用所述设备在连续冲洗下进行溃疡清创，减少感染过程以及避免感染性雾的形成。

任选地，根据本发明也可以利用一些辅助治疗，包括生物工程皮肤(Apligraf，Organogenesis，Inc.，Canton)、无细胞皮肤代替物((Oasis Wound Matrix，Healthpoint)、超声波施用ORP水溶液、以及局部氧置换或高压氧治疗(例如高压箱、Vent-Ox系统)。

优选地，以液体或凝胶的形式施用ORP水溶液，例如接触患者的皮肤溃疡。也可以以蒸汽或喷雾的形式施用本发明的ORP溶液。另外，可以通过气雾化、喷雾或雾化施用本发明的ORP水溶液。当通过气雾化、喷雾或雾化施用本发明的ORP水溶液时，优选地以直径范围为约0.1微米到约100微米的微滴形式施用ORP水溶液，优选地是从约1微米到约10微米。

在美国专利5,312,281、5,287,847、和6,598,602中描述了示例的雾化器。美国专利No.5,312,281描述了一种超声波雾化器，其可以在低温下雾化水或液体，并且据说可以调节雾的大小。另外，美国专利No.5,287,847描述了具有可变流速和输出体积的气动雾化器，可以用于向新生儿、儿童和成人递送药物气雾剂。另外，美国专利No.5,063,922描述了一种超声波喷雾器。

本发明的方法也可以用于预防或治疗感染，所述感染是可以被本发明的ORP水溶液所治疗的。感染可以是由一种或多种感染性病原体例如感染性微生物引起的。这些微生物可以包括例如病毒、细菌和真菌。病毒可以包括例如一种或多种选自由疱疹病毒、痘病毒和乳头瘤病毒组成的组中的病毒。细菌可以包括例如一种或多种选自由大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、和结核分枝杆菌组成的组中的细菌。真菌可以包括例如一种或多种选自由白色念珠菌、荚膜组织胞浆菌、曲霉菌属和皮肤癣菌组成的组中的真菌。

本发明还提供了治疗受损的或损伤的组织例如坏死性皮肤溃疡床的方法，所述方法包括用治疗有效量的本发明的ORP水溶液接触受损的或损伤的组织。可以用任何合适的方法接触受损的或损伤的组织，以便根据本发明治疗受损的或损伤的组织。例如，通过用本发明的ORP水溶液冲洗组织使得受损的或损伤的组织与ORP水接触，可以根据本发明治疗受损的或损伤的组织。或者(和另外)，可以以蒸汽或喷雾的形式或者通过在此所述的气雾作用、喷雾或雾化施用本发明的ORP水溶液，使得受损的或损伤的组织与ORP水接触。

本发明的方法可以用于治疗已经被例如手术所损坏或损伤的组织。例如，本发明的方法可以用于治疗已经被切割所损坏或损伤的组织或者遗留有瘘道的组织。另外，本发明的方法可以用于治疗已经被口腔手术、嫁接手术、植入手术、移植手术、烧灼、截肢、辐射、化疗及其组合所损坏或损伤的组织。口腔手术可包括例如牙科手术例如牙根管手术、拔牙、牙龈手术等。

本发明的方法还包括治疗已经被一种或多种烧伤、切割、磨损、刮擦、皮疹、溃疡、刺伤及其组合等损坏或损伤的组织，这些损坏或损伤不一定是由手术造成的。本发明的方法还可以用于治疗受感染的受损的或损伤的组织或者由于感染而受损的或损伤的组织。这些感染可以是由一种或多种感染性病原体引起的，例如一种或多种选自由病毒、细菌和真菌组成的组中的微生物，如本文所述。

根据本发明施用的ORP水溶液也可以用于消毒表面，包括生物学表面例如皮肤，所述方法包括用抗感染量的本发明的ORP水溶液接触表面。根据本发明的方法，可以用任何合适的方法接触表面。例如，通过用本发明的ORP水溶液冲洗表面可以接触表面，以便根据本发明消毒表面。另外，可以向表面施用蒸汽或喷雾形式的本发明的ORP水溶液或者通过在此所述的气雾作用、喷雾或雾化作用接触表面，以便根据本发明消毒表面。此外，可以用在此所述的清洗擦向表面施用本发明的ORP水溶液。通过根据本发明消毒表面，可以清除表面的感染性微生物，据此例如降低与例如糖尿病患者的足部溃疡相关的感染或其他并发症(例如复发、开裂、和/或截肢)的可能性。或者(或另外)，可以给表面施用本发明的ORP水溶液，以便提供对感染的屏障，据此根据本发明消毒表面。也可以在长时间手术过程中用ORP水溶液消毒器械或保持器械的无菌性。

ORP水溶液可以用于消毒表面，所述表面是生物学的、无生命的表面或其组合。生物学表面可以包括例如一种或多种体腔内的组织，例如口腔、窦腔、颅腔、腹腔和胸腔。口腔内的组织包括例如口组织、牙龈组织、舌组织和咽喉组织。生物学组织也可以包括皮肤、肌肉组织、骨骼组织、器官组织、粘膜组织、无细胞的或细胞的皮肤替代物、其他生物工程组织、皮肤移植物、胚胎和成体干细胞或分化细胞(例如成纤维细胞、角质形成细胞)及其组合。无生命的表面可以包括例如手术植入的设备、假体设备和医疗器械以及在手术期间可能被暴露的内部器官、内脏、肌肉等的表面。

对于局部施用，可以单独地或联合载体例如增稠剂施用ORP水溶液，以提供强化的效力。

本发明的制剂所含的水量一般是从制剂重量的约10％重量到约95％重量。优选地，所含的水量是从约50％重量到约90％重量。

已经发现根据本发明施用的ORP水溶液事实上对正常组织和正常哺乳动物细胞都没有毒性。根据本发明施用的ORP水溶液不会造成真核细胞生存力的显著下降、凋亡的显著增加、细胞衰老的显著加速和/或哺乳动物细胞的显著的氧化性DNA损伤。无毒性是特别有益的，甚至可能是令人惊讶的，因为根据本发明施用的ORP水溶液的消毒能力与过氧化氢的消毒能力大致相同，但是其对正常组织和正常哺乳动物细胞的毒性却显著小于过氧化氢。这些发现证实根据本发明施用的ORP水溶液可以安全地应用于例如哺乳动物包括人。

对于根据本发明施用的ORP水溶液而言，在暴露于ORP水溶液约30分钟之后，细胞生存力率优选地是至少约65％，更优选地至少约70％，仍更优选地至少约75％。另外，当与ORP水溶液接触长达约30分钟或更短时间(例如在与ORP水溶液接触约30分钟之后或接触约5分钟之后)时，根据本发明施用的ORP水溶液优选地最多只造成约10％细胞、更优选地最多只造成约5％细胞以及仍更优选地最多只造成约3％细胞于其细胞表面上暴露Annexin-V。此外，根据本发明施用的ORP水溶液优选地造成小于约15％细胞，更优选地小于约10％细胞，以及仍更优选地小于5％细胞在慢性暴露于ORP水溶液之后表达SA-β-半乳糖苷酶。根据本发明施用的ORP水溶液优选地造成与盐水溶液造成的氧化DNA加合物形成相同分数的氧化DNA加合物形成，例如是过氧化氢在经等同条件下处理的细胞中正常造成的氧化DNA加合物形成的约20％以下，约10％以下，或约5％或以下。

根据本发明施用的ORP水溶液不会造成显著的RNA降解。因此，从暴露于ORP水溶液约30分钟之后或约30分钟暴露之后3个小时的人细胞培养物中提取到的并经变性凝胶电泳分析的RNA通常不会显示出显著的RNA降解，通常将展现两条离散的对应于核糖体真核RNA(即28S和18S)的条带，说明根据本发明施用的ORP水溶液使得RNA基本上保持完整。同样，从暴露于ORP水溶液30分钟之后或者暴露约3个小时之后的人细胞培养物中提取到的RNA可以进行逆转录并扩增(RT-PCR)组成型人GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因，在RT-PCR产物的凝胶电泳上形成强的GAPDH条带。相比之下，经HP处理相同时间的细胞显示出显著的RNA降解以及很少的(如果有的话)GAPDH RT-PCR产物。

令人惊讶的是，已经发现根据本发明施用的ORP水溶液是非常有效的肥大细胞脱颗粒的抑制剂，所述肥大细胞脱颗粒是主要的引起炎症的生物学级联之一。根据本发明施用的ORP水溶液抑制了肥大细胞的脱颗粒，无论它们是经抗原或钙离子载体激活的。也令人惊讶的是，已经发现根据本发明施用的ORP水溶液非选择性地抑制肥大细胞分泌组胺和促炎症细胞因子。例如，本发明的ORP水溶液可以抑制肥大细胞分泌例如TNF-α和MIP1-α。据信根据本发明施用的ORP水溶液也能抑制其他分泌细胞因子的细胞分泌促炎症细胞因子。这些发现证实根据本发明施用的ORP水溶液应当表现出广谱的抗过敏和抗炎症的效力，这是治疗或预防发生会恶化患有受感染的皮肤溃疡的患者的预后的SIRS和多器官衰竭所期望的。

根据本发明，ORP水溶液可以作为用于局部给药的制剂施用，还包含增稠剂。任何合适的增稠剂都可以用于生产具有所需粘度的制剂，所述粘度通常比单用ORP水溶液更高。所用的增稠剂优选与ORP水溶液以及制剂中的其他任选的组分相容。合适的增稠剂包括但不限于聚合物和羟乙基纤维素。合适的聚合物可以是同聚物或共聚物，并且是任选交联的。其他合适的增稠剂是本领域公知的(见例如Handbook of Cosmetic and Personal Care Additives，2nd ed.，Ashe et al.eds.(2002)，和Handbook of Pharmaceutical Excipients，4th ed.，Roweet al.eds.(2003))。

在一个实施方式中，增稠剂选自由基于丙烯酸的聚合物组成的组，其可以包括高分子量的、交联的、基于丙烯酸的聚合物，例如具有下面通式结构的聚合物：

Noveon所出售的这种聚合物的商品名是Carbopol。Carbopol聚合物通常被作为流变学修饰剂，用作各种个人护理产品、药品、和家居清洁剂中的增稠剂、悬浮剂和稳定剂。可以使用固体(例如粉末)或液体形式的Carbopol聚合物。

适用于本发明的基于丙烯酸的聚合物可以是同聚物或共聚物。合适的同聚物可以优选地与烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇交联。合适的丙烯酸共聚物可以被长链(C₁₀-C₃₀)烷基丙烯酸酯所修饰，并且可以例如与烯丙基季戊四醇交联。

优选地中和Carbopol聚合物，以便获得最大的粘度。所提供的Carbopol聚合物可以是干的、紧密卷曲的酸性分子，通过氢键保持卷曲结构。一旦其被分散于水或另一种溶剂时，它们开始变成水合物并部分解卷曲。通过Carbopol聚合物实现最大的增稠作用的一个方法是将酸性聚合物转化成盐。通过常用碱例如氢氧化钠(NaOH)或三乙醇胺(TEA)的中和作用容易实现这一点，这种中和作用使得长链聚合物“解卷曲”，并提供了有效的增稠形式。

合适的增稠剂优选将为制剂提供所需的粘度以及其他特征例如外观、剪切抗性、离子抗性和热稳定性。例如对于粘度大于3000厘泊(cps)的悬浮液或乳状液(而不是透明凝胶)制剂而言，Carbopol934是优选的。由于其有益的生物粘附性能，也可以使用Carbopol974P。

为了产生制剂所需的粘度，本发明的制剂可以包含任何合适量的增稠剂。增稠剂的量一般可以是从制剂重量的约0.1％重量到约50％重量。优选地，增稠剂的量是从约0.1％到约10％重量。

增稠剂的量也可以是基于ORP水溶液体积，例如约0.1％重量/体积(mg/mL)到约50％重量/体积(mg/mL)。在一个实施方式中，增稠剂的量是从约0.1％w/v到约10％w/v。

示例制剂可以包括量从约0.1g/250mL到约50mg/250mL ORP水溶液，从约1mg/250mL到约20mg/250mL ORP水溶液或从约3mg/250mL到约15mg/250mL ORP水溶液的增稠剂。

当使用低浓度的基于丙烯酸的聚合物时，制剂容易相当平滑地流动。当含有更高浓度的增稠剂时，本发明的制剂可具有高粘度并且是假塑性的和难以流动的。当通过混合器或泵施加剪切力时，可减低表观粘度，并且可以泵出制剂。

本发明的制剂可以任选地包括中和剂。任何合适的中和剂都可以被用于生成制剂所需的pH值。合适的中和剂包括例如氢氧化钠、三乙醇胺、氨、氢氧化钾、L-精氨酸、AMP-95、Neutrol TE、Tris Amino、Ethomeen、二异丙醇胺、和三异丙醇胺。其他中和剂通常是本领域已知的(见，例如Handbook of Cosmetic and Personal Care Additives，2nd ed.，Ashe et al.eds.(2002)，和Handbook of Pharmaceutical Excipients，4th ed.，Rowe et al.eds.(2003))。合适的中和剂可以是液体或固体形式。

优选地，当增稠剂是基于丙烯酸的聚合物例如Carbopol时，使用中和剂三乙醇胺。中和剂将制剂转化成了凝胶。

本发明的制剂可以包括任何合适量的中和剂。通常，中和剂的量是从制剂重量的约0.1％重量到约50％重量。优选地，中和剂的量是从制剂重量的约0.1％到约10％重量。就体积而言，所含的中和剂的量是从ORP水溶液体积的约1％到约50％体积。

当加入液体形式的中和剂时，所加入的中和剂的量可以是从约1mL/250mL到约100mL/250mL ORP水溶液。优选地，中和剂的量是从约10mL/250mL到约90mg/250mL ORP水溶液。

制剂还可以包含附加的组分例如着色剂、芳香剂、缓冲剂、生理上可接受的载体和/或赋形剂等。合适的着色剂的实例包括但不限于二氧化钛、氧化铁类、咔唑紫、铬-钴-铝氧化物、4-二[(2-羟乙基)氨基]-9，10-蒽二酮双(2-丙烯酸)酯共聚物等。可以使用任何合适的芳香剂。

用任何合适的方法都可以制备出本发明的制剂。可以按任何方式将制剂的组分例如ORP水溶液和增稠剂混合在一起，生成均匀的混合物。优选地，利用电动混合器或其他合适的设备将组分混合在一起数分钟，以保证均匀度。通常从约400rpm到约1000rpm，优选地从约500rpm到约800rpm以及更优选地从约500rpm到约600rpm地混合制剂的组分。

制剂被混合足够长的一段时间，以生成均匀的混合物，所述时间一般是从已经组合了所有组分之后约1分钟到约10分钟。

当增稠剂是粉末形式时，可以先过筛增稠剂，打碎大的团块，以便容许制备均匀的制剂。

随后可以往含有ORP水溶液和增稠剂的制剂中加入中和剂例如三乙醇胺。如上所述，三乙醇胺的加入可以容许增稠剂例如Carbopol解卷曲，据此生成具有所需粘度的制剂。

也可以在将增稠剂例如Carbopol溶解于ORP水之前或之后向混合物中加入着色剂或芳香剂，但是一定要在中和步骤之前。

本发明的制剂中的ORP水溶液的化学性能通常与单独的ORP水溶液的化学性能相同。甚至在加入增稠剂和任选的中和剂之后，仍优选保留了ORP水溶液的性能。例如，优选ORP水溶液本身和含有ORP水溶液的制剂的pH值和消毒能力一般都是相同的。最优选地，在此所述的ORP水溶液的所有的临床相关特性都适用于本发明的制剂。

例如，本发明的制剂优选地保持稳定至少约24小时，优选地至少约2天。更优选地，制剂保持稳定至少约1周(例如1周、2周、3周、4周等)，甚至更优选地至少约2个月。

制剂的pH值优选地是从约6到约8。更优选地是从约6.2到约7.8，以及最优选地是从约7.4到约7.6。

制剂可以任何适用于给患者局部施用的形式存在，所述形式包括但不限于凝胶、洗剂、乳霜、糊剂、软膏等，这些形式都是本领域已知的(见例如Modern Pharmaceutics，3rd ed.，Banker et al.ed.(1996))。凝胶一般是具有三维结构的半固体的乳状液或悬浮液。在另一个实施方式中，制剂是凝胶形式。

糊剂一般都是半固体的悬浮液，其常常含有大部分被分散于水性或脂肪载体中的固体(例如从约20％到约50％)。洗剂通常是含有基于水的载体和挥发剂(超过约50％)的液体乳状液，其具有足够低的可以被倾倒出的粘度(小于30,000cps)。软膏和乳霜优选地是半固体的乳状液或悬浮液，其可以含有作为载体一部分的碳氢化合物或聚乙二醇以及其他的挥发性组分。

当本发明的制剂是凝胶形式时，凝胶的粘度范围优选地是从约10,000到约100,000厘泊(cps)(例如约15,000cps、约20,000cps、约25,000cps、约30,000cps、约35,000cps、约40,000cps、约45,000cps、约50,000cps、约55,000cps、约60,000cps、约65,000cps、约70,000cps、约75,000cps、约80,000cps、约85,000cps、约90,000cps、约95,000cps、或其范围或这类数值范围之内的粘度)。

凝胶的pH值优选是从约6.0到约8.0。当高于该pH值时，增稠剂例如Carbopol聚合物的粘度可以(下降)。优选地，凝胶的pH值是从约6.4到约7.8，以及更优选地是从约7.4到约7.6。

本发明的制剂适合于局部施用给患者包括人和/或动物，以便治疗各种病症。具体而言，制剂可以被施用给动物(例如小鼠、大鼠、猪、牛、马、狗、猫、兔、豚鼠、仓鼠、鸟)和人。局部施用包括施用于皮肤和生物学组织以及其他的施用途径。

本发明可以治疗的患者的病症包括例如下面的病症：手术/开发性伤口清洁剂、皮肤病原体消毒(例如细菌、支原体、病毒、真菌、朊病毒)、伤口消毒(例如战伤)、促进伤口愈合、促进烧伤愈合、治疗皮肤真菌、牛皮癣、运动员足、耳部感染(例如游泳者耳)、外伤性伤口、急性、亚慢性和慢性感染(例如糖尿病足感染是后者的实例)、压迫性溃疡、皮肤磨损、经清创的伤口、激光表面重建、供体部位/移植物、渗出的部分和全层的伤口、浅表损伤(划破、切割、磨损、小的皮肤刺激)、任何伴有急性或慢性炎症或超敏反应的皮肤溃疡以及人或动物机体上或内的其他医学应用。本发明所治疗的溃疡可以具有或不具有脓肿、分泌物或坏死组织存在。

可以使用或施用治疗有效量的根据本发明施用的ORP水溶液，以便提供所需的对细菌、病毒和/或病菌的治疗作用。治疗有效量包括造成所治疗的或预防的病症得到改善的制剂的量。例如，当用于治疗感染时，治疗有效量可以包括能有效地减轻感染的程度和/或预防进一步的感染的量。本领域的技术人员知道，通过施用制剂所获得的制剂的效力可以是短期的(即数天)和/或长期的(例如数月)。

还可以施用ORP水溶液或制剂一段足够长的时间，例如约1、约2、数天、约1周或数周，直到在患者身上观察到所需的作用。

可以通过任何合适的方式施用ORP水溶液或其制剂。例如，可以将一定量的ORP水溶液或其制剂施用到被治疗的患者的表面，然后患者用自己的手指将其均匀地涂抹。或者，医务工作者可以将制剂施用到患者的组织。可以用合适的装置例如一次性擦或布施用制剂。

可通过氧化还原方法生产根据本发明施用的ORP水溶液，例如电解方法或氧化还原反应，其中用电能产生水性溶液中的一种或多种化学变化。在例如美国专利公开No.US 2005/0139808和US 2005/0142157中描述了用于制备合适的ORP水溶液的示例方法。

在电解方法中，通过以电流的形式将电荷从一个点传导到另一个点可以将电能引入到并传送经过水。为了发生并保持电流，水中必须具有电荷载体，以及必须具有使得载体发生移动的力。对于金属和半导体而言，电荷载体可以是电子，或者对于溶液而言，它们可以是正离子和负离子。在阴极发生还原反应，同时在阳极发生氧化反应。在国际申请WO 03/048421 A1中描述了据信发生的至少一些还原和氧化反应。

如本文中所用，在阳极生成的水在此称作阳极水，在阴极生成的水在此称作阴极水。阳极水通常含有从电解反应中生成的氧化的种类，同时阴极水通常含有从反应中生成的还原的种类。阳极水一般具有低的pH值，通常从约1到约6.8。阳极水优选含有各种形式的氯，包括例如氯气、氯离子、氢氯酸和/或次氯酸，或一种或多种其前体。优选地也可以存在各种形式的氧，包括例如氧气、和可能地在生产过程中形成的一种或多种其他的氧化水种类(例如过氧化物和/或臭氧的产物)或其一种或多种前体。阴极水一般具有高的pH值，通常从约7.2到约11。阴极水可以含有氢气、羟基自由基、和/或钠离子。

本发明的ORP水溶液可以是酸性的、中性的或碱性的，pH值一般是从约1到约14。在该pH值时，可以将合适量的ORP水溶液安全地施用到硬的表面，且不损伤表面或伤害与ORP水溶液接触的对象例如人体皮肤。ORP水溶液的pH值通常是从约3到约8。更优选地，ORP水溶液的pH值是从约6.4到约7.8，以及最优选地，pH值是从约7.4到约7.6。

根据本发明施用的ORP水溶液的氧化-还原电位可以是从约-1000毫伏(mV)到约+1150毫伏(mV)。该电位是对溶液接受或转移被金属电极感知的电子的趋势(即潜能)的衡量，并与相同溶液中的参比电极进行比较。可以用标准技术测定出该电位，包括例如通过测定ORP水溶液相对于标准的参比例如银/氯化银电极的毫伏电位。根据本发明施用的ORP水溶液的电位优选地是从约-400mV到约+1300mV。更优选地，ORP水溶液的电位是从约0mV到约+1250mV，仍更优选地是从约+500mV到约+1250mV。甚至更优选地，根据本发明施用的ORP水溶液的电位是从约+800mV到约+1100mV，以及最优选地是从约+800mV到约+1000mV。

根据本发明施用的ORP水溶液中可以具有多种离子种类和其他种类。例如，ORP水溶液可以含有氯(例如游离氯和任选地结合氯)和溶解的氧，以及任选地含有臭氧和过氧化物(例如过氧化氢)。据信-种或多种这些种类的存在使得ORP水溶液至少具有了杀死各种微生物例如细菌、真菌和病毒的消毒能力。

游离氯通常包括但不限于次氯酸(HClO)、次氯酸盐离子(ClO^-)和次氯酸钠(NaOCl)、其他的分子或基团的氯种类、及其前体。次氯酸和次氯酸盐离子的比例取决于pH值。在pH值为7.4时，次氯酸水平是从约25ppm到约75ppm。温度也影响游离氯组分的比例。

结合氯通常表示氯和含氮化合物的产物，例如氯和氨或有机胺(例如氯胺)的产物。ORP水溶液可以任选地包含结合氯，结合氯的量优选地是小于约20ppm。

在本发明的ORP水溶液中可以存在任何合适量的一种或多种氯种类和氧及任选地臭氧及过氧化氢。用任何合适的方法包括本领域已知的方法可以测定出这些组分的水平。

总氯含量(包括游离氯以及任选包括结合氯)可以是从约10百万分之一(ppm)到约400ppm，例如从约10ppm到约200ppm，从20ppm到约150ppm，从约30ppm到约100ppm，从约30到约80ppm，或者例如从约50ppm到约200ppm或从约80ppm到约150ppm。

用本领域已知的方法可以测定出氯含量，例如DPD比色法(LamotteCompany，Chestertown，Maryland)或诸如环境保护署建立的方法的其他已知的方法。在DPD比色法中，游离氯和N，N-二乙基-对苯二胺(DPD)反应生成黄色，用经校准的比色计测定出强度，其提供百万分之一为单位的输出结果。再进一步加入碘化钾可以将溶液转化成粉色，以提供总氯数值。然后通过总氯减去游离氯可以测定出结合氯的含量。

ORP水溶液所含的氧化化学种类的总量范围优选地是约2毫摩尔浓度(mM)，其可以包括前述的氯种类、一种或多种另外的氧化水种类(例如一种或多种氧种类)以及可能难以测定的其它种类例如Cl^-、ClO₃、Cl₂ ^-、和ClO_x。

根据本发明施用的ORP水溶液优选地包括一种或多种氧化水种类，其在暴露于铁之后可以生成自由基(例如羟基自由基)。ORP水可以任选地包括一种或多种在其生产过程中生成的化合物，例如氢氧化钠(NaOH)、二氧化氯(ClO2)、过氧化物(例如过氧化氢(H₂O₂))和臭氧(O3)，尽管氢氧化钠、二氧化氯、过氧化氢和臭氧可能与次氯酸盐反应，造成其消耗以及其他化学种类的形成。

本发明的ORP水溶液一般保持稳定至少约24个小时，通常至少约2天。更常见的，水溶液保持稳定至少约1周(例如约1周、约2周、约3周、约4周等)，以及优选地至少约2个月。更优选地，ORP水溶液在其制备之后保持稳定至少约6个月。甚至更优选地，ORP水溶液保持稳定至少约1年，以及最优选地保持稳定至少约3年。

传统的ORP水溶液只有极为有限的存放期，通常只有数个小时。由于这种短的寿命，使用传统ORP水溶液要求在非常邻近于使用点的地方进行生产。从实践的角度出发，这就意味着机构如卫生保健单位例如医院必须购买、放置和维护生产传统ORP水溶液所必需的设备。另外，传统的生产技术还不能生产足够的商品规模量，以容许其被广泛地用作为例如卫生保健单位的一般消毒剂。

与传统的ORP水溶液不同，根据本发明施用的ORP水溶液在其制备之后保持稳定至少约24个小时。另外，根据本发明施用的ORP水溶液一 般是环境安全的，因此避免了昂贵的处理过程的需要。

优选地，根据本发明施用的ORP水溶液保持稳定至少约1周(例如约1周、约2周、约3周、约4周等)，以及更优选地至少约2个月。仍更优选地，根据本发明施用的ORP水溶液能保持稳定至少约6个月。甚至更优选地，根据本发明施用的ORP水溶液保持稳定至少约1年，以及最优选地保持稳定超过约1年，例如至少约2年或至少约3年。

根据ORP水溶液在其制备之后一段指定的时间内在正常的储存条件(例如室温)下保持适用于一种或多种用途例如抑制肥大细胞脱颗粒、抑制组胺和细胞因子的分泌、去污、消毒、灭菌、抗微生物清洁和伤口清洁的能力可以测定出稳定性。根据在加速条件(例如从约30℃到约60℃)下的储存情况也可以测定出根据本发明施用的ORP水溶液的稳定性，其中ORP水溶液优选地保持稳定长达约90天，以及更优选地最长达到约180天。

通过溶液所含的一种或多种种类(或其前体)在ORP水溶液的存放期期间随时间的浓度也可以测定出稳定性。优选地，一种或多种种类例如游离氯、次氯酸和一种或多种另外的氧化水种类的浓度维持于其初始浓度的约70％或更高，至少维持到制备出ORP水溶液后约2个月。更优选地，一种或多种这些种类的浓度维持于其初始浓度的约80％或更高，至少维持到制备出ORP水溶液后约2个月。仍更优选地，一种或多种这些种类的浓度维持于其初始浓度的约90％或更高，最优选地约95％或更高，至少维持到制备出ORP水溶液后约2个月。

根据在暴露于ORP水溶液之后样品中所含的生物体的量的减少也可以测定出稳定性。根据任何合适的生物体包括例如细菌、真菌、酵母菌或病毒都可以进行对生物体浓度的降低的测定。合适的生物体可包括例如：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和Bacillusathrophaeus(先前称作枯草芽孢杆菌)。

根据在暴露于ORP水溶液之后样品中所含的内毒素(例如脂多糖)、生长因子、细胞因子和其他蛋白及脂类的减少也可以确定出稳定性。

根据本发明施用的ORP水溶液可以用作为能够降低活体微生物浓度约4个对数级(10⁴)的低水平的消毒剂，也能够作为能够降低活体微生物浓度约6个对数级(10⁶)的高水平的消毒剂。优选地，当在制备出溶液后至少约2个月进行测定时，在暴露1分钟之后，根据本发明施用的ORP水溶液能够造成生物体总浓度减少至少约4个对数级(10⁴)。更优选地，当在制备出溶液后至少约6个月进行测定时，ORP水溶液能够使得生物体浓度减少约10⁴-约10⁶。仍更优选地，当在制备出ORP水溶液后至少约1年进行测定时，最优选地，当在制备出ORP水溶液后约1年以上例如至少约2年或至少约3年进行测定时，ORP水溶液能够使得生物体浓度减少约10⁴-约10⁶。

例如，当在制备出ORP水溶液后至少2个月进行测定时，ORP水溶液能够在暴露30秒钟内将活体微生物样品的浓度减少至少约5个对数级(10⁵)，所述活体微生物选自由铜绿假单胞菌、大肠杆菌、希氏肠球菌、鲍曼不动杆菌、不动杆菌属、脆弱拟杆菌、产气肠杆菌、粪肠球菌、耐万古霉素的屎肠球菌(VRE、MDR)、流感嗜血杆菌、产酸克雷伯氏菌、肺炎克雷伯氏菌、藤黄细球菌、奇异变形菌、粘质沙雷菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、人葡萄球菌、腐生葡萄球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌、白色念珠菌和热带念珠菌组成的组。

在一个实施方式中，当在制备出ORP水溶液后至少约2个月进行测定时，根据本发明施用的ORP水溶液能够在暴露约1分钟内将活体微生物样品从约1×10⁶到约1×10⁸生物体/ml的初始浓度减少到约0个生物体/ml的终浓度，所述活体微生物包括但不限于大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌。这对应于生物体浓度减少约6个对数级(10⁶)到约8个对数级(10⁸)。优选地，当在制备后至少约6个月进行测定时，以及更优选地当在制备后约1年时进行测定时，ORP水溶液能够实现大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌或白色念珠菌等生物体减少约10⁶到约10⁸。

或者，当在制备出ORP水溶液后至少约2个月进行测定时，根据本发明施用的ORP水溶液能够在暴露约5分钟内将Bacillus athrophaeus孢子的孢子悬浮液的浓度减少约6个对数级(10⁶)。优选地，当在制备后至少约6个月进行测定时，以及更优选地当在制备后约1年时进行测定时，根据本发明施用的ORP水溶液能够实现Bacillus athrophaeus孢子的浓度减少约10⁶。当在制备出ORP水溶液后至少约2个月进行测定时，ORP水溶液还能够在暴露约30秒钟内将Bacillus athrophaeus孢子的孢子悬浮液的浓度减少约4个对数级(10⁴)。优选地，当在制备后至少约6个月进行测定时，以及更优选地当在制备后约1年时进行测定时，ORP水溶液能够实现这种水平的Bacillus athrophaeus孢子浓度的减少。

当在制备出ORP水溶液后至少约2个月进行测定时，ORP水溶液也能够在暴露约5到10分钟内将真菌孢子例如黑曲霉孢子的浓度减少约6个对数级(10⁶)。优选地，当在制备后至少6个月进行测定时，以及更优选地当在制备后至少1年时进行测定时，ORP水溶液能够实现这种水平的真菌孢子浓度的减少。

当在制备出ORP水溶液后至少约2个月进行测定时，根据本发明施用的ORP水溶液还能够在暴露约5到10分钟之后将病毒例如人类免疫缺陷病毒(HIV)和腺病毒的浓度减少超过3个对数级(10³)。优选地，当在制备后至少约6个月进行测定时，以及更优选地当在制备后至少约1年进行测定时，ORP水溶液能够实现病毒浓度减少＞10³。

当在制备出ORP水溶液后至少约2个月进行测定时，根据本发明施用的ORP水溶液还能够在暴露约5分钟内完全抑制牛分枝杆菌的生长。优选地，当在制备后至少约6个月进行测定时，以及更优选地当在制备后至少约1年进行测定时，ORP水溶液能够实现对分枝杆菌浓度的完全抑制。

在一个实施方式中，本发明的ORP水溶液包括一种或多种氯种类。所含的氯种类优选地是游离氯种类。游离氯种类可以选自由次氯酸(HOCl)、次氯酸盐离子(OCl^-)、次氯酸钠(NaOCl)、氯离子(Cl^-)、溶解的氯气(Cl₂)及其混合物组成的组。

游离氯种类的总量可以是从约10百万分之一(ppm)到约400ppm，例如从约20ppm到约150ppm，从约30ppm到约100ppm，从约30ppm到约80ppm，或者例如从约50ppm到约200ppm，从约80ppm到约150ppm，从约10ppm到约400ppm，优选地是从约50ppm到约200ppm，以及最优选地是从约50ppm到约80ppm。次氯酸的量一般是从约15ppm到约75ppm，优选从约25ppm到约35ppm。次氯酸钠的量的范围一般是从约25ppm到约50ppm。二氧化氯水平任选存在小于5ppm。在一个实施方式中，ORP水溶液包含一种或多种氯种类或一种或多种其前体以及一种或多种另外的氧化水种类或一种或多种其前体，任选地包含过氧化氢，并且ORP水溶液在其制备之后能保持稳定至少约24个小时，优选地至少约1周，更优选地至少约2个月，仍更优选地至少约6个月。甚至更优选地，这种ORP水溶液能保持稳定至少约1年以及最优选地能保持稳定约1年以上例如至少约2年或至少约3年。

也优选地是，ORP水溶液包含一种或多种氯种类(例如次氯酸和次氯酸钠)或一种或多种它的前体以及一种或多种另外的氧化水种类(例如氧气)或一种或多种它的前体，所述溶液的pH值是从约6到约8，更优选地是从约6.2到约7.8，最优选地是从约7.4到约7.6。根据本发明施用的示例ORP水溶液可以包括例如约15ppm到约35ppm的次氯酸、约25ppm到约50ppm的次氯酸钠、约1ppm到约4ppm的一种或多种另外的氧化水种类，其pH值是从约6.2到约7.8，并能保持稳定至少约1周例如至少约2个月，至少约6个月，至少约1年，或约1年以上例如至少约2年或至少约3年。

根据本发明，可以单独地或联合一种或多种附加的治疗剂施用治疗有效量的ORP水溶液，以便治疗或预防腹膜炎或者预防与此相关的粘连或脓肿的形成。例如，ORP水溶液可以联合一种或多种附加的治疗剂施用，例如一种或多种选自由抗感染剂(例如抗细菌剂(例如抗生素)、抗真菌剂和抗病毒剂)、抗炎剂、重组蛋白或抗体、一种或多种合成药物及其组合组成的组中的化合物。联合ORP水溶液施用这些治疗剂可以包括在施用ORP水溶液之前、期间(例如同时、共施用或联合施用)或之后施用一种或多种这些附加的药剂。

合适的抗生素可以包括但不限于青霉素、头孢菌素或其他β-内酰胺类、大环内酯类(例如红霉素、6-O-甲基红霉素和阿奇霉素)、氟喹诺酮类、磺胺类、四环素类、氨基糖甙类、克林霉素、喹诺酮类、甲硝唑、万古霉素、氯霉素、其抗细菌有效的衍生物及其组合。合适的抗感染剂也可以包括抗真菌剂例如两性霉素B、氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、咪康唑、其衍生物及其组合。合适的抗炎剂可以包括例如一种或多种抗炎症药物，例如一种或多种抗炎症甾体或一种或多种非甾体抗炎药物(NSAID)。示例的抗炎症药物可以包括例如cyclophilins、FK结合蛋白、抗细胞因子抗体(例如抗TNF)、甾体类和NSAID。

通过用根据本发明使用的ORP水溶液进行处理可以控制、减少、杀灭或清除的生物体包括例如铜绿假单胞菌、大肠杆菌、希氏肠球菌、鲍曼不动杆菌、不动杆菌属、脆弱拟杆菌、产气肠杆菌、粪肠球菌、耐万古霉素的屎肠球菌(VRE、MDR)、流感嗜血杆菌、产酸克雷伯氏菌、肺炎克雷伯氏菌、藤黄细球菌、奇异变形菌、粘质沙雷菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、人葡萄球菌、腐生葡萄球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌、猪霍乱沙门菌、痢疾志贺菌、和其他敏感细菌，以及酵母菌例如须疮癣菌、白色念珠菌和热带念珠菌。根据本发明也可以用ORP水溶液控制、减少、杀灭或清除病毒，包括例如腺病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、鼻病毒、流感病毒(例如流感病毒A)、肝炎病毒(例如甲肝病毒)、冠状病毒(造成例如严重急性呼吸综合征(SARS))、轮状病毒、禽流感病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘带状疱疹病毒、风疹病毒、和其他敏感病毒。

根据本发明，可以单独地或联合一种或多种可药用载体例如媒介、佐剂、赋形剂、稀释剂或其组合等施用ORP水溶液，其中所述载体优选地与ORP水溶液所含的一种或多种种类相容。本领域技术人员可以容易地确定出用于施用本发明的ORP水溶液的合适制剂和施用方法。例如，可以通过施用含有ORP水溶液的凝胶基制剂保持腹腔的水化，同时提供抗微生物的屏障。在例如美国专利申请公开No.US 2005/0142157中描述了合适的凝胶制剂。

根据一种或多种临床相关因素例如副作用、患者的总体情况的变化等，本领域熟练的实践者可以容易地进行任何必要的剂量调整，使得其更符合所治疗的病症的性质或严重度。例如通过用约25％(wt./wt.或vol./vol.)合适载体、约50％(wt./wt.或vol./vol.)合适的载体、约75％(wt./wt.或vol./vol.)合适载体、约90％(wt./wt.或vol./vol.)合适载体、约95％(wt./wt.或vol./vol.)合适载体、或甚至约99％(wt./wt.或vol./vol.)或更多的合适载体联合或稀释ORP水溶液可以配制ORP水溶液。合适的载体可以包括例如水(例如蒸馏水、无菌水例如无菌注射用水、无菌盐水等)。合适的载体也可以包括在美国专利申请No.10/916,278中所述的一种或多种载体。示例的制剂可以包括例如其中ORP水溶液经无菌水或无菌盐水稀释的溶液，其中ORP水溶液被约25％(vol./vol.)、约50％(vol./vol.)、约75％(vol./vol.)、约90％(vol./vol.)、约95％(vol./vol.)、或约99％(vol./vol.)或更多的(无菌水或盐水)稀释，取决于治疗应用和/或任何其他的治疗相关因素。

ORP水溶液也可以包括不同量的离子和碳水化合物，以便制备出与机体组织、器官和体腔相容的低渗、等渗或高渗的溶液。示例的制剂可以包括例如溶液，其中在其制备之前、期间或之后在ORP水溶液中加入氯化钠和葡萄糖以增加待施用到肾脏患者的腹腔的溶液的渗透压。或者，可以获得氯化钠终浓度为0.9％的ORP溶液，使得其为等渗并与肠外注射液相容。

也可以按需处理ORP水溶液，以降低致热源、内毒素或其他会污染溶液的物质的含量。

在制备之后，ORP水溶液可以被转移到一个或多个合适的容器内，例如密封容器，用于分配并销售给终端用户例如卫生保健单位包括医院、疗养所、医生办公室、门诊手术中心、牙科诊所等等。合适的容器可以包括例如密封容器，其保持了容器所装的ORP水溶液的无菌性和稳定性。容器可以由与ORP水溶液相容的任何材料制成。优选地，容器一般不会与ORP水溶液中所含的一种或多种离子或其他种类发生反应。

优选地，容器是由塑料或玻璃制成。塑料可以是硬的，使得容器能被储存于物架上。或者，容器可以是柔性的，例如由柔性的塑料制成的容器如柔性的袋子。合适的塑料可包括例如聚丙烯、聚对苯二甲酸酯(PET)、聚烯烃、环烯烃、聚碳酸酯、ABS树脂、聚乙烯、聚氯乙烯及其混合物。优选地，容器包括选自由高密度聚乙烯(HDPE)、低密度聚乙烯(LDPE)和线性低密度聚乙烯(LLDPE)组成的组中的一种或多种聚乙烯。最优选地，容器是由高密度聚乙烯制成的。

容器优选地具有容许分配ORP水溶液的开口。可以用任何合适的方式密封容器开口。例如，可以用扭转帽或塞子密封容器。任选地，还可以用箔片密封开口。

密封容器的顶部气体可以是空气或者其他不会与ORP水溶液或含ORP水溶液的制剂中的其他组分反应的合适的气体。合适的顶部气体包括氮气、氧气及其混合物。

根据本发明施用的ORP水溶液可包括阳极水(例如在电解池的阳极室中生成的水)和阴极水(例如在电解池的阴极室中生成的水)的混合物。优选地，根据本发明施用的ORP水溶液包含量占溶液体积约10％体积到约90％体积的阴极水。更优选地，ORP水溶液所含的阴极水的量是从约10％体积到约50％体积，仍更优选地是从约20％溶液体积到约40％溶液体积，例如从约20％溶液体积到约30％溶液体积。另外，ORP水溶液所含的阳极水的量可以是从约50％溶液体积到约90％溶液体积。示例ORP水溶液可以含有从约10％体积到约50％体积的阴极水和从约50％体积到约90％体积的阳极水。用图3所示的三室电解池可以生成阳极水和阴极水。

含有阳极水和阴极水的ORP水溶液可以是酸性的、中性的或碱性的，pH值优选地是从约1到约14，最优选地是从约3到约8，仍更优选地是从约6.4到约7.8，以及最优选地是从约7.4到约7.6。

在一个优选的实施方式中，给患有受感染的足部溃疡的糖尿病患者施用有效治疗受感染的足部溃疡的量的ORP水溶液。可以施用ORP水溶液的这类患者可以被诊断为I型或II型糖尿病。适合于治疗的糖尿病患者可以具有大于或等于0.8的踝-臂指数(通过Doppler测量)、大于或等于30mmHg的经皮氧分压值(TcPO₂)、和经足部可触及的脉搏(足背动脉或胫后动脉)证实的充分的足部循环。此外，也可以治疗低踝-臂指数的患者，以便例如但不限于预防截肢。如果截肢是必需的，也可以用ORP水溶液治疗截肢残肢。

适合于本发明治疗的足部溃疡一般(但并非仅仅)位于足的内踝或外踝(踝部骨骼突起)处或以下。这些溃疡可以深至真皮并直到皮下组织，可能暴露出肌肉和肌腱，但不暴露出骨骼和/或关节囊。任选地溃疡中可能存在肉芽组织。所治疗的溃疡的表面积可以大于或等于约2.0cm²。

优选地，本发明的方法包括施用量足以有效治疗受感染的糖尿病足部溃疡的ORP水溶液，所述溃疡是按PEDIS分级为2级或3级的溃疡。2级(轻微)感染只累及皮肤和皮下组织，但不累及深部组织且没有全身征象。患者还可以表现出以下的一种或多种：(1)局部肿胀或硬结；(2)局部皮温高；(3)局部压痛或疼痛；(4)距离溃疡边缘0.5-2cm的红斑；和(5)排脓。3级(中度)感染的特点是大于约2cm的红斑和至少一种2级感染或者累及皮肤及皮下组织之下的深部结构的感染例如脓肿、感染性关节炎和筋膜炎所表现出的病症。

利用任何合适的方式可以给患有任何部位的皮肤溃疡的患者施用ORP水溶液，例如通过洗涤、冲洗、浸泡或敷裹包扎溃疡局部地施用。优选地，洗涤和浸泡、洗涤和敷裹包扎、或浸泡和敷裹包扎溃疡。最优选地，洗涤、浸泡和敷裹包扎溃疡。可以根据本发明进行溃疡冲洗。溃疡冲洗的传输压力是促进溃疡愈合的重要因素。根据本发明可以施用从约5psi到约10psi的传输压力去除溃疡处的碎片和细菌，同时使得对周围正常组织的损伤最小化。

在施用ORP水溶液之前，优选地对皮肤溃疡进行清创治疗，以便去除角化过度的、坏死的和其他不健康的组织，直到暴露出健康外观的组织。在清创溃疡中，切除伤口边缘直到健康的出血组织。在清创之后，可以清除溃疡处的碎片。

在洗涤、敷裹包扎和浸泡之间，可容许皮肤溃疡风干任何合适的时间段。优选地，容许皮肤溃疡风干约2分钟。

可以通过给溃疡表面直接施用ORP水溶液洗涤皮肤溃疡，例如通过将ORP水溶液倾倒到溃疡之上。通过将溃疡部分或全部地浸没于ORP水溶液中浸泡皮肤溃疡。溃疡可以浸泡任何合适的时间段。一般而言，将皮肤溃疡浸泡于ORP水溶液中至少1分钟。优选地，将皮肤溃疡浸泡至少约2分钟以及长达数小时，优选地长达60分钟，优选地长达约15分钟。在头1周内可以每日进行所述施用，或每周2次，仅仅在溃疡被严重感染的情况下并且直到溃疡改善。通过施用经ORP水溶液饱和的湿的伤口敷料可以敷裹包扎溃疡。除了湿的伤口敷料外，可以任选地用干纱布和粘性覆盖物敷裹包扎溃疡。

在给皮肤溃疡施用伤口敷料时，纱布通常被切成溃疡的大小。可以用ORP水溶液饱和纱布，并拧掉纱布中的过多的溶液。优选地，不用ORP水溶液使得敷料过饱和，尽管过饱和的敷料能有效地实施本发明的方法。优选地用足够量的经浸泡的纱布填充而不是包裹伤口。然后给经浸泡的纱布施用干纱布和胶带，使其固定在位于足部溃疡之上。

在本发明的一个实施方式中，首先用ORP水溶液洗涤患者的皮肤溃疡。用于洗涤溃疡的ORP水溶液的量优选地是足以去除碎片。接下来，将皮肤溃疡浸泡于ORP水溶液中一段合适的时间，优选地是至少约2分钟。然后任选地将足部溃疡风干一段合适的时间，优选地是至少约2分钟。在干燥之后，可以用已经经ORP水溶液饱和的湿的伤口敷料敷裹包扎足部溃疡。可以任选地将干纱布和粘性覆盖物施用到湿的伤口敷料上方。

可以以合适的间隔重复洗涤、浸泡和敷裹包扎皮肤溃疡的过程。优选地，大约每月1次、约每周1次、约每日1次或每日数次地重复冲洗、浸泡和敷裹包扎溃疡的过程。利用ORP水溶液治疗溃疡的过程可以持续到溃疡充分愈合，这可能需要至少重复过程1次。通过从伤口活检培养中获得的细菌计数的减少或伤口闭合率可以衡量皮肤溃疡的愈合情况。

在另一个实施方式中，本发明的方法包括在3周时间内进行3次洗涤、浸泡和敷裹包扎皮肤溃疡的治疗。优选地，在治疗期间每日都进行敷料更换，其中给足部溃疡施用经ORP水溶液湿润的新的纱布敷料。如果敷料变脏，可以每日一次以上例如每日2次或每日3次地更换溃疡上的敷料。优选地，在每周的操作之前进行伤口的清创，以便去除坏死的或过度角化的组织。

本发明也提供了降低患者的皮肤溃疡中的微生物负荷的方法，包括给患者施用量足以有效降低皮肤溃疡中的微生物负荷的氧化还原电位水溶液。优选地，所述溶液的pH值是从约6.4到约7.8，并保持稳定至少约1周；或者所述溶液的pH值是从约6.4到约7.8，并包括阳极水和阴极水。通过足部溃疡的阳性的治疗前和治疗后培养的数目以及从足部溃疡的治疗前和治疗后培养中分离到的细菌菌株的数目可以确定出微生物负荷。微生物负荷可以来自于一种或多种生物体包括例如病毒、细菌、和真菌。

相对于传统治疗而言，施用本发明的ORP水可以加速皮肤溃疡的愈合。本发明的加速愈合可以提供但不限于更快的伤口闭合、更快的肉芽组织的生长、预防全身性并发症、减少抗生素的使用和缩短住院期。相对于聚维酮碘治疗的患者，本发明的加速愈合可以将经ORP水溶液治疗的患者的愈合时间缩短约5天或更多，例如缩短约7天，例如缩短约10天。

本发明仍还提供了一种减少给患者施用量足以有效治疗溃疡的氧化还原电位水溶液所造成的副作用的可能性的方法。

本发明另外提供了一种降低患者的皮肤溃疡的复发率(例如治疗后复发)的方法，所述方法包括给患者施用量足以有效降低皮肤溃疡的复发可能性的氧化还原电位水溶液。优选地，溶液的pH值是从约6.4到约7.8，并保持稳定至少约1周；或者所述溶液的pH值是从约6.4到约7.8，并包括阳极水和阴极水。

本发明还提供了一种降低患者的皮肤溃疡开裂(例如治疗后)的可能性的方法，所述方法包括给患者施用量足以有效降低足部溃疡开裂的可能性的氧化还原电位水溶液。优选地，溶液的pH值是从约6.4到约7.8，并保持稳定至少约1周；或者所述溶液的pH值是从约6.4到约7.8，并包括阳极水和阴极水。本发明的降低开裂的可能性可以包括将可能性降低例如至少约10％，优选地至少约20％，更优选地至少约30％，所述降低通过在ORP水溶液治疗的患者中开裂的发生率相对于经聚维酮碘治疗的患者的降低来衡量。

本发明还提供了一种减少患者的皮肤溃疡所造成的截肢的可能性的方法，所述方法包括给患者施用量足以有效减少截肢的可能性的氧化还原电位水溶液。优选地，溶液的pH值是从约6.4到约7.8，并保持稳定至少约1周；或者所述溶液的pH值是从约6.4到约7.8，并包括阳极水和阴极水。本发明的减少截肢的可能性可以包括将可能性降低例如至少约10％，优选地至少约15％，更优选地至少约20％，所述减少通过在ORP水溶液治疗的患者中的截肢数目相对于经聚维酮碘治疗的患者的减少来衡量。

还可以施用ORP水溶液进行消毒和灭菌。例如，为了消毒和灭菌医疗设备或牙科设备，将设备与ORP水溶液保持接触一段足够长的时间，以便将设备上存在的生物体水平降低到所需水平。为了硬表面的消毒和灭菌，可以从储存ORP水溶液的容器中将ORP水溶液直接施用到硬表面上。例如，可以将ORP水溶液倾倒、喷射或以其他方式直接地施用到硬表面上。然后，可以用合适的基材(substrate)例如布、织物或纸巾将ORP水溶液分布到整个硬表面上。在医院施用中，基材优选地是无菌的。或者，可以首先将ORP水溶液施用到基材例如布、织物或纸巾。然后将湿基材与硬表面接触。或者，可以通过如在此所述地将溶液分散到空气中而将ORP水溶液施用到硬表面上。或者，可以以凝胶的形式施用ORP水溶液，以保持湿润并保护皮肤溃疡。通过相似的方式可以将ORP水溶液施用于人和动物。

可以任选地用器具将ORP水溶液施用到硬表面例如地板、墙和天花板。例如，可以将ORP水溶液施用到拖把头上，以便施用于地板。在美国专利6,663,306中描述了用于将ORP水溶液施用到硬表面上的其他合适的器具。

本发明还提供了清洁擦，包括不溶于水的基材和在此所述的ORP水溶液，其中ORP水溶液被调配到基材之上。可以用ORP水溶液浸泡、包被、覆盖或以其他方式应用到基材。优选地，在分配之前，用ORP水溶液预处理基材。

合适的基材可以包括例如由任何合适的不溶于水的吸收性或吸附性材料制成的清洁擦。多种材料都可以作为基材。其应当具有足够的湿强度、冲蚀度、loft和多孔性，并且基材不应当不利地影响ORP水溶液的稳定性而妨碍预期用途。实例包括无纺基材、纺织基材、hydroentangled基材和海绵。

基材可以具有一层或多层。每一层都可以具有相同的或不同的质地构造和磨损性。不同的质地构造可以源自应用不同的材料组合或源自应用不同的生产过程或其组合。基材可为将ORP水溶液转运到所处理的基材提供载体。

基材可以是单个无纺片或多个无纺片。无纺片可以由木质纸浆、合成纤维、天然纤维、和其掺和物制成。基材所用的合适的合成纤维包括但不限于聚酯、人造丝、尼龙、聚丙烯、聚乙烯、其他纤维素聚合物和这些纤维的混合物。无纺材料可以包括无纺纤维片材料，其包括熔喷、coform、气流铺置、纺黏、wet laid、黏合-粗梳纤维网材料、hydroentangled(也叫做射流喷网成布)材料及其组合。这些材料可以包括合成的或天然的纤维或其组合。基材可任选地含有黏合剂。

合适的无纺、不溶于水的基材的实例包括100％纤维素WaddingGrade 1804、100％聚丙烯needlepunch材料NB 701-2.8-W/R、纤维素和合成纤维的掺和物Hydraspun 8579、以及70％Viscose/30％PES Code9881。在美国专利4,781,974、615,937、4,666,621、和5,908,707，以及国际专利申请公开WO 98/03713、WO 97/40814、和WO 96/14835中都描述了适用于清洁擦的无纺基材的其他实例。

基材也可以由纺织材料制成，例如棉花纤维、棉花/尼龙掺和物、或其他纺织品。用于制备海绵的再生纤维素、聚氨酯泡沫等也适用。

基材的液体负荷能力至少应当是其干重的约50％-1000％，优选地至少约200％-800％。这表示为负荷量是基材重量的约1/2到10倍。基材的重量可从每平方米约0.01到约1000克不等，但并不限于此，最优选地是从约25到约120克/m²(称作“基础重量”)，通常被制成为片或网，其可以被切割、模切或以其他方式形成合适的形状和大小。清洁擦优选地具有一定的湿拉伸强度，其优选地是从约25到约250牛顿/m，更优选地是约75-170牛顿/m。

用任何合适的方法可以将ORP水溶液分配、浸泡、包被、覆盖或以其他方式施用于基材。例如，可以用不同量的ORP水溶液处理基材的单个部分。优选地，进行ORP水溶液对基材材料的连续网的集中处理。整个基材材料网都可以浸泡于ORP水溶液中。或者，当轴串基材网时或者甚至在生成无纺基材期间，都可以将ORP水溶液喷雾或计量到网上。生产商可以用ORP水溶液在其容器中浸泡或包被一叠分别切割并有一定大小的基材部分。

清洁擦可以任选地含有附加的组分，以便提高清洁擦的性能。例如，清洁擦还可以包括聚合物、表面活性剂、多糖、聚羧酸酯、聚乙烯醇、溶剂、螯合剂、缓冲液、增稠剂、染料、着色剂、芳香剂和其混合物，以便提高清洁擦的性能。这些任选的组分应当不会不利地影响ORP水溶液的稳定性而妨碍预期用途。在美国专利6,340,663、6,649,584和6,624,135中描述了清洁擦可以任选包含的各种组分的实例。在美国专利申请公开No.2005/0139808中还描述了合适的清洁擦。

本发明的ORP水溶液可以通过气态介质例如空气被分散到环境中。ORP水溶液可以通过任何合适的方式被分散到空气中。例如，ORP水溶液可以形成任何合适尺寸的小液滴并分散到房间中。在美国专利申请公开No.2005/0139808中描述了将ORP水溶液分散到环境中的合适的方法。

ORP水溶液可以任选地包含漂白剂和合适的家居添加剂，例如在美国专利申请公开No.2005/0139808中所述。

优选地利用至少一个电解池生产根据本发明施用的ORP水溶液，所述电解池包括阳极室、阴极室和位于阳极室与阴极室之间的盐溶液室，其中组合至少一些阳极水和阴极水，使得ORP水溶液包括阳极水和阴极水。图1显示了可用于制备示例ORP水溶液所用的示例的三室电解池的示意图。

电解池100具有阳极室102、阴极室104和盐溶液室106。盐溶液室位于阳极室102和阴极室104之间。阳极室102具有入口108和出口110，以便容许水流经过阳极室102。阴极室104同样具有入口112和出口114，以便容许水流经过阴极室104。盐溶液室106具有入口116和出口118。电解池100优选地包括装盛所有组分在一起的槽。

通过阳极电极120和阳极离子交换膜122分开阳极室102和盐溶液室。阳极电极120可以邻近于阳极室102，而膜122位于阳极电极120和盐溶液室106之间。或者，膜122可以邻近于阳极室102，而阳极电极120位于膜122和盐溶液室106之间。

通过阴极电极124和阴极离子交换膜126分开阴极室104和盐溶液室。阴极电极124可以邻近于阴极室104，而膜126位于阴极电极124和盐溶液室106之间。或者，膜126可以邻近于阴极室104，而阴极电极124位于膜122和盐溶液室106之间。

电极优选地都是由金属构成的，容许在阳极室和阴极室之间施加电压电位。金属电极优选地都是平面的，与离子交换膜具有相似的尺寸和横截表面积。电极优选地被配置成使得离子交换膜的大部分表面都暴露于它们相应的阳极室和阴极室中的水。这容许离子种类在盐溶液室、阳极室和阴极室之间移动。优选地，电极具有多个均匀地分布于电极表面上的通道或孔。

电位源与阳极电极120和阴极电极124相连，使得能诱发阳极室102中的氧化反应和阴极室104中的还原反应。

电解池100所用的离子交换膜122和126可以由任何合适的材料构成，以容许盐溶液室106和阳极室102之间的离子交换(例如氯离子Cl^-)以及盐溶液室106和阴极室104之间的离子交换(例如Na⁺)。阳极离子交换膜122和阴极离子交换膜126可以由相同的或不同的材料制成。优选地，阳极离子交换膜包括氟化聚合物。合适的氟化聚合物包括例如全氟磺酸聚合物和共聚物例如全氟磺酸/PTFE共聚物和全氟磺酸/TFE共聚物。离子交换膜可以由单层材料或多层材料制成。合适的离子交换膜聚合物可以包括一种或多种商品名为Nafion^的离子交换膜聚合物。

电解池100的阳极室102和阴极室104的水源可以是任何合适的供水系统。水可以来自市政供水系统或者可以在用于电解池之前被预处理。优选地，水被预处理并选自由软化水、纯净水、蒸馏水、和去离子水组成的组。更优选地，预处理的水源是通过反渗和UV线纯化装置获得的超纯水。

在盐溶液室106中所用的盐水溶液可以是任何水性盐溶液，其含有生产ORP水溶液的合适的离子种类。优选地，盐水溶液是水性氯化钠(NaCl)盐溶液，也常称作盐水溶液。其他合适的盐溶液包括其他氯化物盐例如氯化钾、氯化铵和氯化镁以及其他的卤盐例如钾盐和溴盐。盐溶液可以包含盐的混合物。

图2显示了据信是在本发明所用的三室电解池中生成的各种离子种类。三室电解池200包括阳极室202、阴极室204和盐溶液室206。在给阳极208和阴极210施加合适的电流之后，流经盐溶液室206的盐溶液所含的离子分别迁移通过阳极离子交换膜212和阴极离子交换膜214进入流经阳极室202和阴极室204的水中。

正离子从流经盐溶液室206的盐溶液216中移行到流经阴极室204的阴极水218中。负离子从流经盐溶液室206的盐溶液216移行到流经阳极室202的阳极水220中。

优选地，盐溶液216是含有钠离子(Na+)和氯离子(Cl-)离子的氯化钠(NaCl)水溶液。正的Na+离子从盐溶液216移行到阴极水218中。负的Cl-离子从盐溶液216移行到阳极水220中。

钠离子和氯离子在阳极室202和阴极室204中都还可以进行反应。例如，氯离子可以与阳极水220所含的各种含氧离子和其他种类(例如氧自由基、O2、O3)反应生成ClOn-和ClO-。也可以在阳极室202中发生其他反应，包括形成氧自由基、氢离子(H+)、氧气(O2)以及任选地臭氧(O3)和过氧化物(例如过氧化氢)。在阴极室204中，可以形成氢气(H2)、氢氧化物离子(OH-)、氢氧化钠(NaOH)、和其他基团。

用于生产ORP水溶液的方法和装置也可以利用至少两个三室电解池。图3显示了利用两个本发明的电解池生产ORP水溶液的方法的示意图。

方法300包括两个三室电解池，具体的是第一个电解池302和第二个电解池304。将水从水源305转移、泵入或以其他方式分配到第一个电解池302的阳极室306和阴极室308以及第二个电解池304的阳极室310和阴极室312中。本发明的方法通常可以生产从约1升/分钟到约50升/分钟的ORP水溶液。通过利用附加的电解池可以提高生产能力。例如，可以用3、4、5、6、7、8、9、10或更多个三室电解池增加本发明的ORP水溶液的输出量。

将阳极室306和阳极室310所产的阳极水收集到混合罐314中。将阴极室308和阴极室312所产的一部分阴极水收集到混合罐314中，并与阳极水混合。倒掉本方法所产的剩余部分的阴极水。在加入到混合罐314之前，阴极水可以任选地经过气体分离器316和/或气体分离器318的处理。气体分离器去除在生产过程期间在阴极水中所形成的气体例如氢气。

混合罐314可以任选地与循环泵315相连接，以便容许均匀地混合来自电解池302和304的阳极水和部分阴极水。此外，混合罐314可以任选地包括用于监测ORP水溶液的水平和pH值的合适设备。经泵317可以将ORP水溶液从混合罐314转移以应用于混合罐位置处或附近进行消毒或灭菌。或者，ORP水溶液可以被分配到合适的容器内，以便运送到远处(例如仓库、医院等)。

方法300还包括盐溶液循环系统，以便给第一个电解池302的盐溶液室322和第二个电解池304的盐溶液室324提供盐溶液。在盐罐320中制备盐溶液。经泵321将盐溶液转移到盐溶液室322和324中。优选地，盐溶液依次首先流过盐溶液室322，随后是盐溶液室324。或者，可以将盐溶液同时泵入到两个盐溶液室中。

在返回到盐罐320之前，盐溶液可以流经混合罐314中的热交换器326，以便按需控制ORP水溶液的温度。

随着时间第一个电解池302和第二个电解池304中的盐溶液中的离子被消耗。可以定期地往混合罐320中加入额外的离子来源，以取代被转移到阳极水和阴极水的离子。可以用额外的离子来源保持盐溶液的恒定的pH值，所述pH值随着时间会倾向于下降(即成为酸性)。额外的离子来源可以是任何合适的化合物，包括例如盐如氯化钠。优选地，向混合罐320中加入氯化钠，以取代被转移到阳极水和阴极水中的钠离子(Na+)。

当方法利用至少两个三室电解池时，每个电解池都优选地包括阳极室、阴极水以及分隔阳极室与阴极室的盐溶液室。装置优选地包括用于收集电解池生成的阳极水和一个或多个电解池生成的一部分阴极水的混合罐。优选地，装置还包括容许循环提供给电解池的盐溶液室的盐溶液的盐循环系统。

下面的实施例进一步地描述例示了发明，当然这不应当构成对发明范围的任何限制。

实施例1-3

这些实施例表明了本发明的ORP水溶液的独特特征。根据在此所述的方法分析实施例1-3中的ORP水溶液样品，以确定出每个样品中存在的离子种类和其他化学种类的物理性质和水平。所获得的二氧化氯、臭氧和过氧化氢的结果都是依据于用于测定这些种类的标准测试方法；但是，结果可能指示也可以产生阳性测试结果的不同种类。此外，已经报道二氧化氯、臭氧和过氧化氢可以与次氯酸盐反应，造成它们的消耗以及其他种类(例如HCl和O₂)的生成。表1显示了每个ORP水溶液样品的pH值、氧化还原电位(ORP)和所存在的离子种类。

表1：ORP水溶液样品的物理特征和所含的离子种类

	实施例1	实施例2	实施例3
				pH	7.45	7.44	7.45
ORP(mV)	+879	+881	+874
				总Cl-(ppm)	110	110	120
结合Cl-(ppm)	5	6	6

ORP水溶液具有适用于消毒、灭菌和/或清洁的合适的物理特征。

实施例4-10

这些实施例展示了向本发明的ORP水溶液中加入不同量的漂白剂。特别是，这些实施例表明了组合物的抗微生物活性和织物漂白能力。

用蒸馏水制备出10％Clorox漂白溶液。然后用10％漂白溶液制备出下面的溶液：80％ORP水溶液/20％漂白剂(实施例4)；60％ORP水溶液/40％漂白剂(实施例5)；40％ORP水溶液/60％漂白剂(实施例6)；20％ORP水溶液/80％漂白剂(实施例7)；和0％ORP水溶液/100％漂白剂(实施例8)。也用两种对照溶液进行比较，包括100％ORP水溶液/0％漂白剂(实施例9)和含0.01％Tween20去污剂的ORP水溶液(实施例10)。确定出这些样品的物理特征，特别是pH值、氧化还原电位(ORP)、总氯(Cl^-)含量、次氯酸(HClO^-)含量、二氧化氯含量和过氧化物含量，

表2显示了这些数据。

表2：ORP水溶液/漂白剂组合物的物理特征

	pH	ORP(mV)	总Cl-(ppm)	HClO-(ppm)
					实施例4	8.92	+789	1248	62
实施例5	9.20	+782	2610	104
					实施例6	9.69	+743	4006	80
实施例7	9.86	+730	4800	48
					实施例8	9.80	+737	5000	50
实施例9	7.06	+901	64	32
					实施例10	6.86	+914	51	26

加入作为漂白剂的一部分的大量的氟离子阻止了对二氧化氯和过氧化物水平的准确测定，如标记n.d.所示。所获得的二氧化氯和过氧化物的结果也都是依据于用于测定这些种类的标准测试方法；但是，结果可能指示也可以产生阳性测试结果的不同种类。此外，已经报道二氧化氯、臭氧和过氧化氢可以与次氯酸盐反应，造成它们的消耗以及其他种类(例如HCl和O₂)的生成。如这些实施例所示，加入或未加入漂白剂的ORP水溶液中的次氯酸水平是相似的。

利用枯草芽孢杆菌黑色变种孢子(从SPS Medical of Rush，NewYork获得的ATCC#9372)对实施例4-10的样品进行高孢子计数测定。将孢子悬浮液浓缩(通过无菌罩中蒸发)到每100微升4×10⁶个孢子。将100微升孢子悬浮液样品与900微升实施例4-10的各个样品混合。如表3所示，将样品在室温下温育1到5分钟时间。在所示的时间，将100微升经温育的样品铺板到单个TSA板上并在35℃±2℃下温育24个小时，之后确定出每个板上所形成的菌落的数目。对照平板证实起始孢子浓度＞1×10⁶孢子/100微升。表3显示出了不同样品在不同温育时间的芽孢杆菌孢子的浓度(两次测定的平均值)。

表3：芽孢杆菌孢子浓度(孢子/100微升)

	1分钟	2分钟	3分钟	4分钟	5分钟
						实施例4	＞＞1000	411	1	0	2
实施例5	＞＞1000	1000	1	0	0
						实施例6	＞＞1000	＞＞1000	＞1000	22	0
实施例7	＞＞1000	＞＞1000	＞1000	15	0
						实施例8	＞＞1000	＞＞1000	＞1000	3	1
实施例9	＞＞1000	74	0	0	0
						实施例10	＞＞1000	239	3	0	0

这些结果表明，随着漂白剂浓度(10％水性漂白溶液)的增加，温育2-3分钟的样品中杀死的杆菌孢子的数目减少。但是，对于温育5分钟的样品，漂白剂浓度不会影响对杆菌孢子的杀灭作用。此外，结果表明向OPR水溶液中加入0.01％去污剂不会减少孢子杀死。

用实施例4-10的样品进行织物漂白测试。用于样品测试的织物是100％人造丝的具有深蓝色染料斑点的儿童T恤。将2平方英寸经染色的织物片放入到50mL塑料管中。用实施例4-10中的溶液样品覆盖住每片织物。表4显示了直到实现了完全漂白作用所耗费的时间(通过织物变白确定)。

表4：完全漂白织物样品所耗费的时间

实施例	时间
		实施例4	39分钟
实施例5	23分钟
		实施例6	18分钟
实施例7	19分钟
		实施例8	10分钟
实施例9	＞6小时
		实施例10	＞6小时

这些实施例表明，当增加组合物中的ORP水溶液的浓度时，实现完全漂白所耗费的时间增加。

实施例11

本实施例表明了示例ORP水溶液Microcyn作为有效的抗微生物溶液的用途。

用Microcyn氧化还原电位水实施了体外时间-杀伤评价。评价了Microcyn对抗50种不同的微生物菌株的攻击悬浮液的能力，其中25种美国标准菌库(ATCC)菌株，25种这些相同物种的临床分离株，如Tentative Final Monograph，Federal Register，17 June 1994，vol.59：116，pg.31444所述。在暴露于Microcyn 30秒钟、1分钟、3分钟、5分钟、7分钟、9分钟、11分钟、13分钟、15分钟和20分钟之后，测定出每种攻击菌株自初始菌群数量减少的百分比和Log10减少。所有的琼脂铺板都重复进行两次，所评价的Microcyn浓度是99％(v/v)。根据Good Laboratory Practices(如21 C.F.R第58部分所述)进行所有的测试。

下面的表总结了在30秒钟暴露标记处减少超过5.0 Log₁₀的所有测试群的上面提及的体外时间-杀死评价的结果。

表5：体外30秒杀菌

No.	微生物物种	初始数量(CFU/mL)	暴露后数量(CFU/mL)	Log10减少	减少百分比
						1	鲍曼不动杆菌(ATCC#19003)	2.340×109	＜1.00×103	6.3692	99.9999
2	鲍曼不动杆菌临床分离株BSLI  #061901Ab3	1.8150×109	＜1.00×103	6.2589	99.9999
						3	脆弱拟杆菌(ATCC#43858)	4.40×1010	＜1.00×103	7.6435	99.9999
4	脆弱拟杆菌临床分离株BSLI  #061901Bf6	2.70×1010	＜1.00×103	7.4314	99.9999
						5	白色念珠菌(ATCC#10231)	2.70×1010	＜1.00×103	6.3345	99.9999
6	白色念珠菌临床分离株BSLI#042905Ca	5.650×109	＜1.00×103	6.7520	99.9999
						7	产气肠杆菌(ATCC#29007)	1.2250×109	＜1.00×103	6.0881	99.9999
8	产气肠杆菌临床分离株BSLI  #042905Ea	1.0150×109	＜1.00×103	6.0065	99.9999
						9	粪肠球菌(ATCC#29212)	2.610×109	＜1.00×103	6.4166	99.9999
10	粪肠球菌临床分离株BSLI#061901Efs2	1.2850×109	＜1.00×103	6.1089	99.9999
						11	屎肠球菌VRE，MDR(ATCC#51559)	3.250×109	＜1.00×103	6.5119	99.9999
12	屎肠球菌临床分离株BSLI  #061901Efm1	1.130×109	＜1.00×103	6.0531	99.9999
						13	大肠杆菌(ATCC#11229)	5.00×108	＜1.00×103	5.6990	99.9998
14	大肠杆菌临床分离株BSLI#042905Ec1	3.950×108	＜1.00×103	5.5966	99.9997
						15	大肠杆菌(ATCC#25922)	6.650×108	＜1.00×103	5.8228	99.9998
16	大肠杆菌临床分离株BSLI#042905Ec2	7.40×108	＜1.00×103	5.8692	99.9998
						17	流感嗜血杆菌(ATCC#8149)	1.5050×109	＜1.00×104	5.1775	99.9993

18	流感嗜血杆菌临床分离株BSLI#072605Hi	1.90×109	＜1.00×104	5.2788	99.9995
						19	产酸克雷伯氏菌MDR(ATCC#15764)	1.120×109	＜1.00×103	6.0492	99.9999
20	产酸克雷伯氏菌临床分离株BSLI#061901Ko1	1.810×109	＜1.00×103	6.2577	99.9999
						21	肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(ATCC#29019)	1.390×109	＜1.00×103	6.1430	99.9999
22	肺炎克雷伯氏菌临床分离株BSLI#061901Kpn2	9.950×108	＜1.00×103	5.9978	99.9999
						23	藤黄微球菌(ATCC#7468)	6.950×108	＜1.00×103	5.8420	99.9999
24	藤黄微球菌临床分离株BSLI#061901M12	1.5150×109	＜1.00×103	6.1804	99.9999
						25	奇异变形菌(ATCC#7002)	1.5950×109	＜1.00×103	6.2028	99.9999
26	奇异变形菌临床分离株BSLI#061901Pm2	2.0950×109	＜1.00×103	6.3212	99.9999
						27	铜绿假单胞菌(ATCC#15442)	6.450×108	＜1.00×103	5.8096	99.9999
28	铜绿假单胞菌临床分离株BSLI#072605Pa	1.3850×109	＜1.00×103	6.1414	99.9999
						29	铜绿假单胞菌(ATCC#27853)	5.550×108	＜1.00×103	5.7443	99.9999
30	铜绿假单胞菌临床分离株BSLI#061901Pa2	1.1650×109	＜1.00×103	6.0663	99.9999
						31	粘质沙雷菌(ATCC#14756)	9.950×108	＜1.00×103	5.9978	99.9999
32	粘质沙雷菌临床分离株BSLI#042905Sm	3.6650×109	＜1.00×103	6.5641	99.9999
						33	金黄色葡萄球菌(ATCC#6538)	1.5050×109	＜1.00×103	6.1775	99.9999
34	金黄色葡萄球菌临床分离株BSLI#061901Sa1	1.250×109	＜1.00×103	6.0969	99.9999
						35	金黄色葡萄球菌(ATCC#29213)	1.740×109	＜1.00×103	6.2405	99.9999
36	金黄色葡萄球菌临床分离株BSLI#061901Sa2	1.1050×109	＜1.00×103	6.0434	99.9999
						37	表皮葡萄球菌(ATCC#12228)	1.0550×109	＜1.00×103	6.0233	99.9999

38	表皮葡萄球菌临床分离株BSLI#072605Se	4.350×108	＜1.00×103	5.6385	99.9998
						39	溶血性葡萄球菌(ATCC#29970)	8.150×108	＜1.00×103	5.9112	99.9999
40	溶血性葡萄球菌临床分离株BSLI#042905Sha	8.350×108	＜1.00×103	5.9217	99.9999
						41	人葡萄球菌(ATCC#27844)	2.790×108	＜1.00×103	5.4456	99.9996
42	人葡萄球菌临床分离株BSLI#042905Sho	5.20×108	＜1.00×103	5.7160	99.9998
						43	腐生葡萄球菌(ATCC#35552)	9.10×108	＜1.00×103	5.9590	99.9999
44	腐生葡萄球菌临床分离株BSLI#042905Ss	1.4150×109	＜1.00×103	6.1508	99.9999
						45	肺炎链球菌(ATCC#33400)	2.1450×109	＜1.00×104	5.3314	99.9995
46	酿脓链球菌(ATCC#19615)	5.20×109	＜1.00×103	6.7160	99.9999
						47	酿脓链球菌临床分离株BSLI#061901Spy7	2.5920×109	＜1.00×103	6.4141	99.9999

对于表5没有包含的剩余3种菌株而言，尽管测定其微生物减少小于5.0Log₁₀，但是Microcyn也显示出了对抗这3种菌株的抗微生物活性。更具体而言，对Microcyn的30秒钟的暴露使得肺炎链球菌(临床分离株；BSLI#072605Spn1)的数量减少超过4.5Log₁₀，这是这种菌种的检出限。此外，当用热带念珠菌(ATCC#750)攻击时，Microcyn在暴露30秒钟后使得微生物减少超过了3.0Log₁₀。另外，当用热带念珠菌(BSLI#042905Ct)攻击时，Microcyn在暴露20分钟之后使得微生物减少超过了3.0Log₁₀。

体外时间-杀死评价的示例结果表明Microcyn氧化还原电位水具有快速的(即大多数情况中都小于30秒钟)抗广谱攻击性微生物的抗微生物活性。在暴露于该产物30秒钟内，所评价的50种革兰氏阳性、革兰氏阴性和酵母菌种中的47种菌株的微生物量都减少了5.0Log₁₀以上。

实施例12

本实施例表明了示例ORP水溶液Microcyn与HIBICLENS^葡萄糖酸洗必泰溶液4.0％(w/v)和0.9％氯化钠冲洗液(USP)的抗微生物活性的比较。

利用HIBICLENS^葡萄糖酸洗必泰溶液4.0％(w/v)和无菌的0.9％氯化钠冲洗液(USP)作为参照产物，如实施例11所述的进行体外时间-杀伤评价。用在Tentative Final Monograph特别指定的10种美国标准菌库(ATCC)菌株的悬浮液评价每种参照产物。然后分析所收集的数据，并与实施例11所记录的Microcyn的降低微生物的活性进行比较。

Microcyn氧化还原电位水使得5种攻击菌株的数量减少的水平与对HIBICLENS^葡萄糖酸洗必泰溶液观察到的水平相当。Microcyn和HIBICLENS^在下面的菌种暴露30秒钟之后都使得其微生物减少5.0Log₁₀以上：大肠杆菌(ATCC#11229和ATCC#25922)、铜绿假单胞菌(ATCC#15442和ATCC#27853)、和粘质沙雷菌(ATCC#14756)。此外，如表5所示，Microcyn显示出极好的抗藤黄微球菌(ATCC#7468)的抗微生物活性，在30秒暴露后减少了5.8420Log₁₀。但是，直接比较HIBICLENS^的抗藤黄微球菌(ATCC#7468)的活性是不可能的，因为在暴露30秒钟后，HIBICLENS^使得菌株数量的减少达到了测试的检出限(在这个具体实例中是超过了4.8Log₁₀)。值得注意的是，无菌的0.9％氯化钠冲洗溶液在充分暴露20分钟后只使得上面所讨论的6种攻击菌株每一种的微生物数量减少小于0.3Log₁₀。

对于4种测试攻击菌株：粪肠球菌(ATCC#29212)、金黄色葡萄球菌(ATCC#6538和ATCC#29213)、和表皮葡萄球菌(ATCC#12228)而言，Microcyn氧化还原电位水提供比HIBICLENS^和氯化钠冲洗更高的抗微生物活性。下面的表总结了这4种菌种的体外时间-杀伤评价的微生物减少的结果：

表6：比较杀菌结果

微生物种类	暴露时间	Log10减少
					Microcyn	HIBICLENS	NaCl冲洗
		粪肠球菌(ATCC#29212)	30秒钟	6.4166				1.6004	0.3180
1分钟	6.4166				2.4648	0.2478
			3分钟	6.4166			5.2405	0.2376

	5分钟	6.4166	5.4166	0.2305
					7分钟	6.4166	5.4166	0.2736
	9分钟	6.4166	5.4166	0.2895
					11分钟	6.4166	5.4166	0.2221
	13分钟	6.4166	5.4166	0.2783
					15分钟	6.4166	5.4166	0.2098
	20分钟	6.4166	5.4166	0.2847
					金黄色葡萄球菌(ATCC#6538)	30秒钟	6.1775	1.1130	0.0000
1分钟	6.1775	1.7650	0.0191
				3分钟		6.1775	4.3024	0.0000
5分钟	6.1775	5.1775	0.0000
				7分钟		6.1775	5.1775	0.0000
9分钟	6.1775	5.1775	0.0000
				11分钟		6.1775	5.1775	0.0267
13分钟	6.1775	5.1775	0.0000
				15分钟		6.1775	5.1775	0.0191
20分钟	6.1775	5.1775	0.0000
				金黄色葡萄球菌(ATCC#29213)		30秒钟	6.2405	0.9309	0.0000
1分钟	6.2405	1.6173	0.0000
					3分钟	6.2405	3.8091	0.0460
5分钟	6.2405	5.2405	0.0139
					7分钟	6.2405	5.2405	0.0000
9分钟	6.2405	5.2405	0.0113
					11分钟	6.2405	5.2405	0.0283
13分钟	6.2405	5.2405	0.0000
					15分钟	6.2405	5.2405	0.0000
20分钟	6.2405	5.2405	0.0615
					表皮葡萄球菌(ATCC#12228)	30秒钟	5.6385	5.0233	0.0456
1分钟	5.6385	5.0233	0.0410
				3分钟		5.6385	5.0233	0.0715
5分钟	5.6385	5.0233	0.0888
				7分钟		5.6385	5.0233	0.0063
9分钟	5.6385	5.0233	0.0643
				11分钟		5.6385	5.0233	0.0211
13分钟	5.6385	5.0233	0.1121
				15分钟		5.6385	5.0233	0.0321
20分钟	5.6385	5.0233	0.1042

这项比较体外时间-杀伤评价的结果证实Microcyn氧化还原电位水不仅表现出与HIBICLENS^相当的抗大肠杆菌(ATCC#11229和ATCC#25922)、铜绿假单胞菌(ATCC#15442和ATCC#27853)、粘质沙雷菌(ATCC#14756)和藤黄微球菌(ATCC#7468)的抗微生物活性，而且还提供了更为有效地抗粪肠球菌(ATCC#29212)、金黄色葡萄球菌(ATCC#6538和ATCC#29213)、和表皮葡萄球菌(ATCC#12228)的治疗。如表6所示，Microcyn在一些菌种中表现出了更为快速的抗微生物效应(即小于30秒钟)。此外，Microcyn暴露造成了表6所列所有菌种的更大的总体微生物的减少。

实施例13

本实施例描述了本发明所用的示例ORP水溶液Microcyn的稳定性、无毒性和抗微生物活性。

Microcyn是具有中性pH值的超氧化溶液，其具有杀菌、灭菌和伤口防腐的活性。用纯净水和盐(NaCl)制备出Microcyn，其具有低浓度的钠(例如＜55ppm)和氯(例如＜80ppm)，pH值范围是从7.2到7.8以及氧化还原电位的范围是从840mV到960mV。只制备一个浓度的Microcyn 60，不需要活化或稀释。用经反渗透获得的水制备该溶液，然后用高电压和氯化钠生成的电化学梯度进行处理。以这种方式，按可控的方式选择出在其中生成电化学梯度的多个室中所形成的反应性种类以生成Microcyn。结果是获得了具有可控的自由基含量的溶液，所述自由基提供了高的氧化还原电位(+840mV到+960mV)，溶液因此具有高的抗微生物活性。

次氯酸和次氯酸钠是Microcyn所含的最为丰富的组分，Microcyn还含有其他较低浓度的种类例如氯离子等。尽管申请者不愿受到特殊理论的限制，据信抗感染作用不必定仅仅依赖于氯的量，而是还可依赖于氧的反应种类和/或氧或其一个或多个前体的含量。另外，并与文献已经报道的其他超氧化溶液不同的是，Microcyn具有中性的pH值(6.4-7.8)，其是无腐蚀性的，并最长可以稳定储存2年。所有这些特征都使得可以生成能有效地作为高水平的消毒剂以及可以兼用于无生命的表面和生物学表面(例如组织)的超氧化溶液。

加速稳定性测试已经证实Microcyn可以被储存于非常不同的温度条件下(例如从4到65℃)，且在2年内都不丢失其消毒活性。这种在货架上的超长稳定性也不同于先前报道的超氧化溶液，后者仅仅在制备后即刻使用才有效。换句话说，甚至可以在极端条件下储存和分配Microcyn且不丢失其抗微生物活性，但是其他溶液必须由想使用溶液的每个医院内的专门的和昂贵的机器生成。尽管如此，产商仍推荐，为了保证其均一的活性和恒定的效果，一旦打开了Microcyn的容器，应当在30天内施用溶液。

只能通过每单位皮肤面积所施用的体积的变化改变Microcyn的剂量。在毒理学研究中，给完整皮肤局部施用的Microcyn的剂量是在0.05和0.07mL/cm²之间，在急性皮肤毒性研究和皮肤刺激研究中，剂量最高达8.0mL/cm²，在探讨其在深部伤口的应用的研究中，所施用的Microcyn的剂量是0.09mL/cm²。

进行毒理学研究，其中给完整皮肤局部施用Microcyn，单次施用，暴露4到24h。评价Microcyn在大鼠深部伤口的多次施用，每天1或2次共7天。

在兔的完整皮肤上进行两项研究，评价Microcyn的急性刺激作用和皮肤毒性。在暴露于Microcyn的任何动物中都没有发现临床征象、皮肤刺激或尸检时的皮肤异常。

用大鼠评价了给深部伤口局部施用Microcyn所引起的局部和全身毒性的特征。没有观察到血液生化或血液细胞学参数的任何异常、显著差异，尸检也没有观察到异常。伤口和施用部位周围的组织的皮肤刺激分级和组织病理学都没有发现经Microcyn处理过的伤口和经盐水溶液处理过的对照组的伤口之间的任何不同。通过免疫组织化学方法的检测发现用Microcyn也不改变伤口愈合过程中的II型胶原的沉积。

通过小鼠的腹膜内注射也评价了Microcyn的全身毒性。对此，经腹膜内途径给5只小鼠注射单次剂量(50mL/kg)Microcyn。用相同的方式给5只对照小鼠注射单次剂量(50mL/kg)盐水溶液(0.9％氯化钠)。在本研究中，在接受单次腹膜内剂量Microcyn的任何动物中都没有观察到死亡率或任何全身毒性的证据，其LD50大于50mL/kg。

通过口服途径给大鼠施用Microcyn，以便容许其吸收并表征产品的任何内在固有的毒作用。为此，通过食道管给3只Sprague-Dawley系白化大鼠施用单次剂量(4.98mL/kg)。在暴露于单次口服剂量Microcyn的所有动物中都没有死亡率、没有临床征象或尸检异常。

也用兔子评价了局部施用Microcyn引起眼睛刺激的可能性。在暴露于经眼睛途径局部施用的Microcyn的所有动物中都没有观察到眼睛刺激和任何其他的临床征象。

通过吸入途径给大鼠施用Microcyn，以测定吸入造成的可能的急性毒性。在暴露之后，所有动物都显示出非常轻微的或轻微的活动减低和立毛，但是它们在之后的日子里都是无症状的。在经吸入暴露于Microcyn的动物中没有观察到死亡率或尸检异常。

利用修饰的occlusion patch方法(Buehler)在豚鼠身上进行了对Microcyn致敏皮肤的可能性的评价。在单次处理攻击之后的对照组的动物以及在处理攻击之后的所评价的动物(经诱导处理)中都没有观察到刺激。因此，Microcyn不会引发致敏反应。

用大鼠评价了Microcyn在体内减少腹部伤口的微生物负荷的作用。手术打开腹壁，用合成网孔关闭伤口，然后用已知负荷的大肠杆菌感染伤口。在这些试验中，Microcyn显示出其具有优于盐水溶液的减少细菌负荷的作用。在大体评价中，只有盐水组的伤口才受到了严重的感染。唯独Microcyn组中的网孔被整合到动物的腹壁内。每组3只动物的定量培养显示出Microcyn更好的减少微生物负荷的作用，其减少微生物负荷达99.997％，而盐水溶液只减少了99.969％负荷。此外，在7只经Microcyn治疗的动物以及17只经盐水溶液治疗的动物中出现了脓肿形成。

因此，当通过口服和吸入途径或通过腹膜内注射将Microcyn施用于完整皮肤、深部开放性皮肤伤口、结膜囊时，Microcyn没有显示出与产品相关的不良作用。也有着治疗500多例具有非常不同性质的皮肤和粘膜伤口的患者的经验，有着极好的抗菌和美容结果。因此，在本临床试验中，局部施用Microcyn应当是有效的和较好耐受的。

Microcyn被包装于透明的240mL PET瓶内。在室温下保存该产品，如果瓶子不被打开，其可以在货架上保持稳定长达2年。一旦已经打开瓶子，推荐所有的产品应当在90天内用完。从高的生物安全性方面看，Microcyn可以被倒入水槽中，没有污染或腐蚀的危险。

在美国和墨西哥已经进行了多项Microcyn的微生物试验。在头数秒钟的暴露中可以清除90％以上的细菌。表7总结了根据此标准Microcyn所表现出的抗细菌和抗真菌的活性。

表7

细菌	编号	作用时间(减少低于99.999％)
铜绿假单胞菌				ATCC 25619	1min
	金黄色葡萄球菌	ATCC 6538	1min
大肠杆菌				ATCC 11229	1min
	伤寒沙门氏菌	CDC 99	1min
白色念珠菌				ATCC	1min
	枯草芽孢杆菌	9372
低孢子(104)					10min
	高孢子(106)		15min

依据PAHO[全美卫生组织]/WHO方案进行杀孢子活性试验。

发现Microcyn在5分钟内将人免疫缺陷病毒(SF33株)的病毒负荷减少了3个对数级以上。通过经Microcyn处理过的病毒试验中的细胞致病作用的缺失和Agp24水平证实了这一点(根据美国环境保护署的杀病毒剂方案(DIS/TSS-7/1981年11月12日)实施这些试验)。

在美国进行的抗HIV的研究中已经证实了Microcyn的杀病毒活性，也已经证实了其抗单核细胞增多性李斯特菌、MRSA和牛分枝杆菌的活性。因此，已经证实当如推荐的施用Microcyn时，Microcyn能在1到15分钟暴露后清除细菌、真菌、病毒和孢子。

实施例14

本实施例提供了适用于局部施用给患者的本发明的制剂。制剂包含下面的组分：

组分                          数量

ORP水溶液                     250mL

Carbopol聚合物粉(增稠剂)    15g

三乙醇胺(中和剂)              80mL

实施例15

本实施例提供了适用于局部施用给患者的本发明的制剂。制剂包含下面的组分：

组分                          数量

ORP水溶液                     1000mL

Carbopol聚合物粉(增稠剂)    15g

三乙醇胺(中和剂)              80mL

实施例16

本实施例提供了适用于局部施用给患者的本发明的制剂。制剂包含下面的组分：

组分                          数量

ORP水溶液                     250mL

Carbopol聚合物粉(增稠剂)    7g

三乙醇胺(中和剂)              12mL

实施例17

本实施例描述了包括ORP水溶液和增稠剂的本发明制剂的生产。

将ORP水溶液倒入到合适的容器例如玻璃烧杯或瓶内。将Carbopol974P聚合物经粗筛(或滤网)，其容许快速筛选，同时能打碎所有大的凝结块。然后加入聚合物Carbopol974P作为增稠剂。缓慢加入Carbopol聚合物，以避免凝块的形成，并因此避免过长的混合周期。

在加入Carbopol聚合物期间快速地混合溶液，使得粉末在室温下溶解。然后向溶液中加入中和剂三乙醇胺，并用电动混合器或其他合适的设备混合，直到获得均匀的凝胶。向Carbopol聚合物组合物中加入中和剂使得制剂变成了凝胶。

实施例18

本研究显示了本发明的示例ORP水溶液Microcyn用于治疗受感染的糖尿病足部溃疡的用途的有效性，并与传统伤口治疗进行比较。

本研究是比较Microcyn方案和“对照”方案治疗受感染的糖尿病足部溃疡的前瞻性、单盲、随机对照研究。将符合研究入选标准以及就诊于糖尿病足诊所的患者随机分组。通过交替分配将患者随机分到Microcyn或对照组。不告知患者是接受Microcyn治疗或对照治疗。但是，如果患者碰巧知道了自己所正在接受的治疗时，他们不会从研究中被剔除。

45例患者入选，进行20周的研究。对患有受感染的糖尿病足部溃疡的患者进行了筛选研究。在接受任何研究相关的治疗之前，患者签署了知情同意书。在研究人群中，45例随机分组的患者中8例(18％)患者在初次评价后被排除研究，因为在研究腿中发生了严重的动脉阻塞。患者被转入血管外科进行肢体挽救性治疗或大截肢。在整个研究中，没有其他的患者退出研究。

在任何人口统计学特征方面，Microcyn和对照组之间都没有统计学显著性差异(表8和9)。

表8：患者特征

参数	治疗组	N	平均值	S.D.	P值
						年龄(岁)糖尿病病程(年)平均空腹血糖溃疡病程(周)臂/踝指数	Microcyn对照Microcyn对照Microcyn对照Microcyn对照Microcyn对照	21162116211621162116	61.967.816.417.0163.0152.08.588.670.91.14	11.911.68.110.259.065.88.508.500.50.7	NSNSNSNSNS

表9：患者的性别和体重

参数	类别	Microcynn(％)	对照n(％)	P值
					性别肥胖	MF≤27kg/m≥27kg/m	9(45.0)12(55.0)15(71.4)6(28.6)	8(50.0)8(50.0)12(75.0)4(16.0)	NSNS

在研究期间，对患者的受研究的溃疡进行彻底的清创术，以去除坏死的或过度角化的组织。两个研究组中的患者都接受了相似的处理方案，除了用肥皂和Microcyn取代了聚维酮碘和盐水冲洗。所有的研究伤口都接受了相同的敷裹包扎，包括施用用于提供湿的伤口环境的凝胶、纱布和粘性覆盖物。除了尽可能避免承重的要求外，如果溃疡处于承重区，则给患者提供缓解溃疡部位的压力的去承重定做模制插件。最初每天访视两个处理组的所有患者，然后取决于伤口的情况要求每3天或每周1次访视患者。

研究的终点如下：主要终点-减轻臭味、蜂窝组织炎、愈合，和安全性-严重不良事件。分析数据发现了治疗与臭味减轻、蜂窝组织炎和愈合之间的关系(表10)。Microcyn干预组的所有患者(100％)都显示出臭味减轻，而对照组只有四分之一患者(25％)。Microcyn干预组中表现出蜂窝组织炎减少的患者的百分比是近81％，而对照组约为44％。愈合被定义为1)伤口从感染进展到肉芽组织形成和2)在伤口周围出现健康组织，两者在Microcyn干预组中被观察到的比例分别是约90％和94％。而对照组的这两个数值分别是63％和31％。

表10：结局

结局	MicrocynN(％)	对照N(％)	P值[1]	NNT[2]
					臭味减轻蜂窝组织炎减少愈合：从感染进展到肉芽组织溃疡周围的组织和皮肤的改善	21(100.0)17(80.9)19(90.4)19(90.4)	4(25.0)7(43.7)10(62.5)5(31.2)	0.0010.010.050.001	2342

[1]基于卡方检验的Yates校正的P值

[2]NNT＝需要治疗的数目。NNT显著临床疗效范围＝2-4

因此，在臭味减轻、蜂窝组织炎减少和愈合方面，当与经单独传统疗法治疗的患者比较时，经Microcyn治疗的患者都显示出了重要的临床益处。

实施例19

本实施例显示了示例ORP水溶液Dermacyn用于治疗糖尿病足部溃疡和用于减少与糖尿病足部溃疡相关的微生物负荷和/或并发症(具体是复发、开裂和截肢)的疗效。

存在周围血管病情况下的感染被认为是糖尿病足疾病中截肢危险的最重要的预后因素之一。抗生素治疗、深部感染的手术治疗和抗感染敷料常常被用于治疗糖尿病足的感染。局部控制感染在愈合糖尿病伤口中的价值被认为是伤口愈合的关键因素。

这是一个开放标记(非盲的)、单中心的研究。所有对象的整体治疗包括总的抗生素治疗、手术和减轻承重。前瞻性地募集Dermacyn治疗组(D组)。一旦该组中的所有对象都已经接受了治疗，从医疗记录中回顾性地收集经聚维酮碘治疗的对象的对照组(C组)的数据。

对象都是年龄大于18岁的男性和女性，有糖尿病病史和至少一次HbAC1计数和II/IIIB-D期溃疡(利用德州大学分期标准T.U.C.)，溃疡都位于踝部以下。在完成D组的治疗之后，匹配C组的年龄、糖尿病病程和T.U.C.的溃疡分期，然后收集其数据。

遵循临床医师的标准治疗方案治疗所有对象，使得两组都接受相同的治疗(除了施用Dermacyn或聚维酮碘)。在开始治疗之前，所有对象都至少接受了1周的抗生素治疗。在入组(或对照组中相同的开始治疗的时间)时取得微生物学标本，然后每月取1次，直到进行手术闭合治疗。每日都用纱布和Dermacyn或纱布和聚维酮碘进行局部治疗。

分两个阶段实施治疗：

I期：对对象的溃疡进行清创。然后在接下来的24小时给他们的伤口部位施用经Dermacyn或聚维酮碘浸泡的纱布。每日更换这些敷料。在进行任何的选择性手术之前，所有周围血管病患者都接受利用血管内技术或搭桥手术的血运重建治疗。在患有T.U.C.IIIB/D病损的患者中，对其骨感染实施手术治疗(骨切除术或小截肢)。在实施最后的闭合手术之前，患者出院10-20天。

II期：然后患者再次入院进行清创和所需的手术(即保守手术、小手术或大手术)。在手术之后，给对象的伤口部位施用经Dermacyn或聚维酮碘(按前面所分配的)浸泡过的纱布，并保留在位24个小时。然后，每日更换这些敷料。

主要的结局测定值是微生物负荷的减少(通过入组时和手术时或随诊期间的阳性培养的数目证实)。次要的结局测定值是：愈合时间(天)、复发(天)、再手术类型(保守、小或大手术)、开裂和局部不良作用。分析包括基本的描述性统计学和对治疗对手术时的微生物结局的作用的统计学分析。为了分析Dermacyn治疗对手术时的微生物负荷的影响，手术时的微生物负荷被分成了成功或不成功的结局，其中0个细菌菌株被认为是成功结局，而任何非0数目的细菌菌株都被认为是不成功的结局。利用Fisher精确检验检验了两个治疗组之间的成功的微生物学结局比例的差异的统计学显著性。此外，通过对数回归计算了成功结局的机率的优势比。这些分析是post-hoc分析。

记录了218例患者的数据，其中110例接受了Dermacyn治疗(D组)，108例接受聚维酮碘治疗(C组)。对象的平均年龄是69.6岁，其中33.5％是女性。入组时的平均糖尿病病程是17.4年。两组间的人口统计学特征得到了很好的平衡。表11和12显示了基线人口统计学数据。

表11：年龄(岁)总结

	治疗组
				D组	C组	所有对象
	N	110	108				218
平均值				69.4	69.8	69.6
	SD	8.45	7.53				7.99
中位值				70	70	70
	最小值	40	50				40
最大值				91	88	91

表12：性别总结

	治疗组(n和％)
							D组		C组		所有对象
	n	％	n	％	n	％
							男性	69	62.7	76	70.4	145	66.5
女性	41	37.3	32	29.6	73	33.5

两组之间的细菌菌株的平均数目很好地平衡，尽管D组(39)比C组(27)中有更多的对象在入组时只有1个细菌菌株。D组在手术(或随诊)时的微生物负荷的减少要明显高于C组。如果成功结局被定义为手术后的0个细菌菌株，D组中的治疗成功的对象的数目是97例，而C组为74例。两个治疗组之间的微生物学成功的比例的差异是显著的((p＜0.001，Fisher精确检验)。与之相一致的是，经Dermacyn治疗的患者的成功结局的优势比是3.4(95％CI：1.7-7.0)。

表13显示了在手术前后(按分组)的细菌菌株的数目的总结，表14显示了成功的微生物学结局(成功结局被定义为手术后0个细菌菌株)的总结。

表13：手术前后(按分组)的细菌菌株的数目的总结

细菌菌株数目	D组		C组		所有对象
							手术前n (％)	手术后n(％)	手术前n(％)	手术后n(％)	手术前n(％)	手术后n(％)
	1	39(35.8)	97(88.2)	27(25.2)	74(68.5)	66(30.6)							171(78.4)
2							28(25.7)	12(10.9)	39(36.4)	25(23.1)	67(31.0)	37(17.0)
	3	34(31.2)	1(0.9)	38(35.5)	9(8.3)	72(33.3)							10(4.6)
4							7(6.4)	-	2(1.9)	-	9(4.2)	-
	5	1(0.9)	-	1(0.9)	-	2(0.9)							-

表14：成功的微生物学结局(成功结局被定义为手术后0个细菌菌株)的总结

成功治疗	D组		C组		所有对象
							n	(％)	n	(％)	n	(％)
	是	97	88.2	74	68.5	171							78.4
否							13	11.8	34	31.5	47	21.6

D组(45.2天)的平均愈合时间要稍短于C组(58天)。表15显示了对愈合时间的总结。C组(12例复发)的复发率要稍高于D组(10例复发)。表16显示了对再次溃疡(复发)的总结。

表15：愈合时间的总结(天)

	治疗组(n和％)
					D组	C组	所有对象
N	110	108	218
				平均值	45.2	58	51.6
SD	14.4	20	18.5
				中位值	43	55	48
最小值	20	21	20
				最大值	87	125	125

表16：再次溃疡(复发)的总结

	治疗组(n和％)
							再次溃疡发生	D组		C组		所有对象
n	％	n	％	n	％
						是		10	9.1	12	11.1	22	10.1
否	100	90.9	96	88.9	196		89.9

D组(60)比C组(47)有更多的对象接受了保守的手术治疗，D组中有50名对象需要一些形式的截肢，而C组中有61例(表17)。表18显示了对手术类型的总结。

表17：手术类别的总结

	治疗组(n和％)
							手术类型	D组		C组		所有对象
n	％	n	％	n	％
						保守治疗		60	54.5	47	43.5	107	49.1
小截肢	45	40.9	51	47.2	96		44
						大截肢		5	4.5	10	9.3	15	6.9

表18：详细的手术类型的总结

	治疗组(n和％)
							手术操作	D组		C组		所有对象
n	％	n	％	n	％
						膝上截肢		0	0.0	3	2.8	3	1.4
膝下截肢	5	4.5	7	6.5	12		5.5
						Chopart截肢		2	1.8	1	0.9	3	1.4
清创术	2	1.8	2	1.9	4		1.8
						敷裹包扎		14	12.7	7	6.5	21	9.6
Lisfranc截肢	2	1.8	2	1.9	4		1.8
						全趾骨头切除(切除所有的趾骨头)		8	7.3	7	6.5	15	6.9
趾列截肢(单个)	15	13.6	17	15.7	32		14.7
						趾列截肢(多个)		3	2.7	3	2.8	6	2.8
皮肤移植	7	6.4	7	6.5	14		6.4
						经趾骨截肢		11	10.0	19	17.6	30	13.8
截趾(单个)	8	7.3	5	4.6	13		6.0
						截趾(多个)		4	3.6	4	3.7	8	3.7
溃疡切除术	1	0.9	3	2.8	4		1.8
						溃疡切除术和骨切除(死骨切除术)		28	25.5	21	19.4	49	22.5

C组(21)中的手术开裂(在手术后因为感染或缺血而不愈合的情况)的发生率要稍高于D组(14)。表19显示了对手术开裂的总结。

表19：手术开裂的总结

	治疗组(n和％)
							手术开裂	D组		C组		所有对象
n	％	n	％	n	％
						是		14	12.7	21	19.4	35	16.1
否	96	87.3	87	80.6	183		83.9

在D组中没有报告局部不良作用，而C组报告了18例。表20显示了对局部不良作用率的总结。

表20：局部不良作用的总结

	治疗组(n和％)
							事件发生	D组		C组		所有对象
n	％	n	％	n	％
						是		0	0.0	18	16.7	18	8.3
否	110	100	90	83.3	100		91.7

本实施例表明与对传统治疗观察到的相比，用示例ORP水溶液Dermacyn的治疗造成了更少的分离到的细菌菌株、更少的局部不良作用、更少的手术开裂以及更短的愈合时间。因此，相信本实施例表明了用Dermacyn治疗糖尿病足部溃疡比传统的聚维酮碘局部治疗具有治疗优势。

实施例20

本研究表明了示例ORP水溶液Dermacyn(M60)用于治疗静脉淤滞性皮肤溃疡的疗效。

总共入选了61例成人患者(56例女性、5例男性)，他们都患有至少10年病程的静脉曲张造成的静脉淤滞性皮肤溃疡，溃疡的长度或宽度至少是3cm，以及踝：臂压力指数至少为0.8。在12个月时间内，35例患者(31例女性，4例男性)接受了静脉硬化治疗、弹力绷带和Dermacyn治疗。将结果与在经静脉硬化治疗、弹力绷带和聚维酮碘治疗的历史对照组(25例女性、1例男性)中得到的结果进行比较。两组的年龄分布(表21)和溃疡部位(表22)都相似。

表21：年龄分布

年龄(y)	MicrocynNo.	％	对照No.	％
					20-29	-	-	2	7.7
30-39	2	5.7	2	7.7
					40-49	4	11.4	4	15.4
50-59	6	17.1	6	23.0
					60-69	18	51.4	7	26.9
70-79	4	11.4	4	15.4
					80-89	1	2.9	1	3.8
总计	35	100.0	26	100.0

表22：溃疡部位

静脉功能不全	Microcyn	对照
			浅表	14	21
双侧	5	3
			内侧	7	0
左腿	5	2
			右腿	4	0

对照组包括82处溃疡，Dermacyn治疗组包括100处溃疡。

推荐用药物(即Dermacyn或聚维酮碘)每日进行伤口消毒1次。给65.4％对照患者和68.6％Dermacyn治疗患者施用抗生素。随诊持续到患者的腿部溃疡愈合或者最短12个月。

主要终点是生活质量。为此，使用经验证的QOL-SF35量表(Sam et.al.，Eur J Vasc Endovasc Surg.2004，28：253-256.)。次要结局是试验腿上的溃疡的完全愈合和不良事件。图4显示了Dermacyn组患者与对照相比总体体能活动的改善。另外，到9个月时，78％经Dermacyn治疗的溃疡愈合，而对照组只有47％(见图5)。

在施用时发现的唯一的副作用是至多30％经Dermacyn治疗的患者出现了烧灼感。该感觉是自限性的，最多持续数分钟。其在施用的第2天或第3天消失，并且不会影响愈合过程，如图6中所观察到的那样，图6显示了经Dermacyn治疗的患者取得的功能改善。另外，经Dermacyn治疗的患者显示出ORP水治疗改善了疼痛强度(图7)。经Dermacyn治疗的患者也显示出活力、社会功能和总体精神健康的改善。

该研究说明治疗期间用Dermacyn治疗静脉性腿部皮肤溃疡比用聚维酮碘治疗获得了更好的生活质量。

实施例21

本研究可以被用于证实本发明所用的示例ORP水溶液Dermacyn作为Versajet^TM(Smith&Nephew)喷洗系统的替代溶液用于治疗踝远端的坏死组织(溃疡)的安全性和疗效，并与标准方案进行比较。

这是前瞻性、随机对照、双盲研究。研究入选约30例患者(约20例在Dermacyn组，约10例在对照组)。该研究的人群是患有下肢溃疡(例如糖尿病足溃疡、静脉淤滞性溃疡)的患者。在第0天时，所有合格入选研究的患者都必须满足所有的研究入选和排除标准。入选标准是：患者年龄大于等于18岁；患者的下肢溃疡显露出坏死组织以及是经喷洗系统的机械性清创术的候选者；患者的溃疡位于踝部远端；患者的溃疡表面积大于或等于1.0cm²；患者的溃疡延伸通过真皮进入皮下组织(可以出现肉芽组织)，以及可能暴露出肌肉或肌腱，但没有骨和/或关节囊的受累；经Doppler测定到的患者的踝-臂指数(ABI)大于或等于0.8，或者患者的趾压大于或等于40mmHg。

排除标准是：患者的治疗肢体的任何部位出现坏疽的临床证据；在研究期间预计患者的溃疡需要被切除或截肢；患者具有下面的全身性炎症反应综合征(SIRS)的征象；患者的溃疡的总表面积小于1cm²；患者具有一种或多种医学病症(包括肾脏、肝脏、血液、神经或免疫疾病)，使得研究者认为患者不适合于本研究；患者已知有活跃的酗酒或药物滥用；患者正在接受口服或肠外的糖皮质激素、免疫抑制剂或细胞毒性剂，或者预期在研究期间需要这些药物；患者已知对氯过敏；患者的溃疡伴发有骨髓炎；以及患者患有任何会严重地妨碍患者完成本研究的能力的病症。

在签署知情同意书和满足入选及排除标准之后，患者被随机分组(2∶1随机分组)到以下治疗的其中一组：治疗组：用喷洗系统施用Dermacyn，加上使用水凝胶伤口敷料方案；对照组：盐水(用喷洗系统的标准治疗)，加上施用水凝胶伤口敷料方案。

被随机分组到Dermacyn的每个患者在对患者伤口进行机械性清创期间都将接受经Versajet喷洗系统施用研究产物Dermacyn。Versajet上的标准压力装置将被用于位于踝远端的糖尿病足溃疡。在清创之后，将Dermacyn施用于伤口上，其量足以冲洗掉伤口床上的所有碎片。用水凝胶敷料覆盖伤口。在每次敷料更换时，用Dermacyn冲洗伤口并用新的水凝胶敷料覆盖伤口。每3天更换敷料一次，除非研究者有其他不同的说明。在每周访视期间确定出临床反应因子(CFR)((1)伤口细菌的减少；(2)伤口面积的缩小；和(3)肉芽组织的发生)。

每个对照患者在对患者伤口进行机械性清创期间都将接受经Versajet喷洗系统施用对照产品(盐水溶液)。在清创之后，将盐水施用于伤口上，其量足以冲洗掉伤口床上的所有碎片。用水凝胶敷料覆盖伤口。在每次敷料更换时，用盐水冲洗伤口并用新的水凝胶敷料覆盖伤口。每3天更换敷料一次，除非研究者有其他不同的说明。在每周访视期间确定出临床反应因子。

在每周访视时可以进行伤口清创。在伤口评价之前，用喷洗系统清除掉任何坏死组织。用Dermacyn或盐水(取决于随机分组)冲洗掉溃疡上的碎片。在访视之间，在每次敷料更换时患者将用Dermacyn或盐水(取决于随机分组)冲洗伤口。在每次访视时在清创之后，都拍摄伤口的照片。

主要疗效终点是：(1)伤口细菌的减少；(2)伤口面积的缩小；和(3)肉芽组织的发生。对研究中所有被随机分组的患者都评价安全性。记录下对紧急和严重不良事件的治疗。

实施例22

本研究将证实示例ORP水溶液Dermacyn作为Jet-Ox ND冲洗系统的替代溶液用于治疗下肢溃疡中的坏死组织的安全性和疗效，并与Jet-Ox ND系统所用的标准方案进行比较。

Jet-Ox ND系统通过受控的无菌盐水的喷洗而去除慢性伤口中的坏死组织，且不损伤下面的健康组织。本研究将用Dermacyn取代盐水，预计这能提供相同的喷洗作用，还能减少可能会抑制伤口闭合的伤口中的细菌负荷。

研究20例患者(随机分组成10例Dermacyn患者和10例对照患者)。入选标准是：患者年龄大于18岁；患者具有出现坏死组织的下肢膝盖以下的溃疡，并且是用Jet-Ox ND冲洗系统进行机械性清创的候选者；在筛选访视之前，患者的溃疡已经存在＞30天；溃疡表面积＞1cm²；溃疡延伸通过真皮进入皮下组织(可以出现肉芽组织)，以及可能暴露出肌肉或肌腱，但没有暴露的骨和/或关节囊；经Doppler测定到的患者的踝/臂指数＞0.8和/或患者的趾压＞40mmHg；可触及患者的足背动脉和/或胫后动脉的搏动。

排除标准如下：肾脏、肝脏、血液、神经或免疫功能受损的患者，包括有人免疫缺陷病毒(HIV)或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)；其中研究者认为患者不适合于参加本研究；具有下面的感染临床征象的伤口；治疗肢的任何部位的坏疽；溃疡显露出骨骼(可探及骨骼)或具有溃疡部位潜在骨髓炎的其他证据；预计受感染的溃疡在治疗期间将被截肢或切除；严重的营养不良，如白蛋白＜2.0所示；已知的酗酒或药物滥用；患者正在接受口服或肠外糖皮质激素、免疫抑制剂或细胞毒药物、香豆素类、肝素或预计在治疗期间需要这些药物；以及患者已知对氯过敏。

每个个体都被随机分组到两个治疗组中的一组：Dermacyn或盐水。靶溃疡将接受机械性清创，之后用Dermacyn或盐水冲洗伤口，并用水凝胶敷料敷裹包扎伤口。取出中心伤口活检用于定量培养，以及进行实验室研究(适宜的血液学、血清化学以及妊娠检查)、非侵入性周围血管研究、病史和体格检查、溃疡追踪和溃疡照片。

Jet-Ox ND冲洗系统可以与Dermacyn或盐水、水凝胶和敷裹包扎材料一起被施用。提供家庭施用的指导。访视包括筛选、入组(第0天)和随机分组、每周访视进行清创、拍照和评价。通过研究期间(1)伤口细菌的减少；(2)伤口面积的缩小；和(3)肉芽组织的发生评价疗效。对研究中所有被随机分组的患者都评价安全性。记录下对紧急和严重不良事件的治疗。

实施例23

本实施例显示了示例ORP水溶液和过氧化氢(HP)对人二倍体成纤维细胞(HDF)的生存力的作用。为了研究该潜在的毒性，将HDF体外暴露于ORP水溶液和过氧化氢(HP)。已知HP对真核细胞是有毒的，增加了细胞凋亡和坏死以及降低了细胞生存力。在本实施例中，测定了暴露于纯ORP水溶液和880mM HP(HP的抗菌用途所采用的浓度)5分钟和30分钟的HDF的细胞生存力、凋亡和坏死。

从3个不同的包皮中获得HDF培养物，将其汇集并冷藏在一起用于本研究。所有试验只使用二倍体细胞。在细胞周期分析中，DNA二倍性被定义为在所收集到的至少20,000个总事件中存在CV＜7％的单个G0-G1峰以及相应的G2/M峰。图8A-8C描述了结果，其中分别用白条和黑条描述暴露时间为5和30分钟的结果。利用：A)7-氨基放线菌素D(7AAD)、B)膜联蛋白V-FITC和C)碘化丙锭通过流式细胞术对相同的细胞群进行这些参数的同时分析。图8A-8C描述了百分比值，用平均值±SD(n＝3)表示。

在暴露于ORP水溶液和HP5分钟后的细胞生存力分别是75％和55％(图8A)。如果将暴露延长到30分钟，细胞生存力分别进一步降低到60％和5％。ORP水溶液显然通过坏死诱导了细胞死亡，因为在两个时间点的流式细胞分析中都有15％细胞掺入了碘化丙锭(图8C)。虽然不想受任何特殊理论的束缚，这个结果可能是因为Microcyn的低张性(13mOsm)诱导的渗透作用，因为细胞只用ORP水溶液维持，没有添加生长因子或离子。凋亡似乎不是ORP水溶液诱导细胞死亡的机制，因为只有3％经ORP水溶液处理过的细胞在其细胞表面上暴露出膜联蛋白V(凋亡的标记物)(图8B)。该百分比事实上与在对照组测定到的结果相似。相反地，HP在暴露5分钟和30分钟之后分别诱导了20％和75％处理细胞的坏死以及15％和20％的凋亡。这些结果一起表明(未稀释的)ORP水溶液对HDF的毒性远低于抗菌浓度的HP。

实施例24

本实施例描述了示例ORP水溶液相对于过氧化氢(HP)对HDF中的氧化DNA损伤和DNA加合物8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OHdG)形成的作用。已知细胞内的8-OHdG加合物形成是DNA的特定残基处的氧化损伤的标记物。另外，细胞内高水平的这种加合物与诱变、致癌和细胞衰老相关。

图9显示了在对照处理、ORP水溶液处理和HP处理30分钟后来自HDF的DNA样品中所含的8-OHdG加合物的水平。在暴露后即刻(T0，白条)或在攻击期后3个小时(T3，黑条)提取出DNA。消化DNA，并根据商品说明书用ELISA试剂盒测定8-OHdG加合物。数值(ng/mL)用平均值±SD(n＝3)表示。与温育30分钟后的对照细胞相比较，ORP水溶液暴露30分钟不增加处理细胞内的加合物的形成。相反的，高度稀释的HP(低到亚致死和无治疗作用的HP浓度(500μM HP))的处理(用500μM HP处理30分钟)使得8-OHdG加合物的数量比对照处理的或ORP水溶液处理的细胞中的数量增加了约25倍。

如果在暴露于ORP水溶液之后，将细胞留在补充DMEM中3个小时，经ORP水溶液处理过的细胞能够降低8-OHdG加合物的水平。尽管容许存在相同的3个小时的恢复期，经HP处理过的细胞仍具有比对照处理过的或ORP水溶液处理过的细胞高约5倍的加合物。总之，这些结果证实了对ORP水溶液的急性暴露不会诱导显著的DNA氧化损伤。这些结果也表明ORP水溶液在体外或体内都不太可能诱导诱变或致癌作用。

实施例25

本实施例描述了对低浓度的示例ORP水溶液和HP的慢性暴露对HDF的作用。已知慢性氧化应激能诱导细胞的过早衰老。为了模拟延长的氧化应激，在20次群体倍增期间，将原代HDF培养物慢性地暴露于低浓度的ORP水溶液(10％)或非致死性的HP浓度(5μM)。先前已经发现SA-β-半乳糖苷酶的表达和活性与体内和体外的衰老过程相关。在本实施例中，在HDF连续暴露于ORP水溶液或HP 1个月后分析SA-β-半乳糖苷酶的表达。图10显示了结果。通过计数20个显微镜视野中的蓝色细胞的数目分析SA-β-半乳糖苷酶的表达(示例的染色模式见小图A)。小图B显示只有HP处理加速了细胞的衰老，如过度表达SA-β-半乳糖苷酶的细胞数目(n＝3)所示。低剂量HP的慢性处理增加了86％细胞中的SA-β-Ga1的表达，而ORP水溶液的处理不诱导这种蛋白的过度表达。从这个实施例中可以得出结论，即ORP水溶液不是过早细胞衰老的诱导剂。

实施例26

本实施例描述了利用示例ORP水溶液的毒性研究的结果。

在小鼠中进行急性全身毒性研究，以便确定出示例ORP水溶液Microcyn 60的可能的全身毒性。给5只小鼠腹膜内注射单次剂量(50mL/kg)的Microcyn 60。给5只对照小鼠注射单次剂量(50mL/kg)的盐水(0.9％氯化钠)。在注射后即刻、注射后4小时观察所有动物的死亡率和不良反应，然后每天观察1次共7天。在注射之前还称量所有动物，第7天再次称量一次。在研究期间都没有死亡率。所有动物在整个研究期间的临床表现都正常。所有动物都增加了体重。从本研究估计的Microcyn 60的急性腹膜内LD50大于50mL/kg。本实施例证实了Microcyn 60缺乏显著的毒性，对于本发明的治疗性应用应当是安全的。

实施例27

本实施例描述了为了测定示例ORP水溶液的潜在的细胞遗传学毒性而实施的研究。

利用示例ORP水溶液(Microcyn 10％)进行微核试验，以评价给小鼠腹膜内注射ORP水溶液的诱变可能性。哺乳动物体内微核试验被用于鉴定引起鼠的多染性红细胞的染色体或有丝分裂装置的损伤的物质。该损伤造成了“微核”的形成，这是一种含有落后染色体片段或孤立全染色体的细胞内结构。ORP水溶液研究包括3个组，每组10只小鼠(5只雄性/5只雌性)：测试组(施用ORP水溶液)、阴性对照组(施用0.9％NaCl溶液)和阳性对照组(施用可诱变的环磷酰胺溶液)。测试组和阴性对照组分别接受了腹膜内注射(12.5mL/kg)ORP水溶液或0.9％NaCl溶液，共连续2天(第1和2天)。阳性对照小鼠在第2天接受单次腹膜内注射环磷酰胺(8mg/mL，12.5mL/kg)。在注射后即刻观察所有小鼠的任何不良反应。所有动物在整个研究期间在临床上都表现正常，在任一组中都没有发现毒性征象。在第3天，给所有动物称重，并处死动物。

从处死小鼠中切下股骨，取出骨髓，对每只小鼠都制备一式两份骨髓涂片。在40X放大下阅读每只动物的骨髓片。通过计数总共至少200个红细胞测定出每只小鼠的多染性红细胞(PCE)与正染性红细胞(NCE)的比值，这是骨髓毒性的指标。然后每只小鼠最少评价2000个可评分的PCE，计算出微核的多染性红细胞的发生率。用统计软件包(Statview 5.0，SAS Institute Inc.，USA)中的Mann和Whitney检验(5％危险阈值)对数据进行统计学分析。

当与它们相应的阴性对照比较时，阳性对照小鼠具有统计学显著更低的PCE/NCE比值(雄鼠：0.77对0.90，雌鼠：0.73对1.02)，显示出了环磷酰胺对处理过的骨髓的毒性。但是，在ORP水溶液处理过的小鼠和阴性对照的PCE/NCE比值之间没有统计学显著差异。同样，阳性对照小鼠比ORP水溶液处理过的小鼠(雄鼠：11.0对1.4，雌鼠：12.6对0.8)和阴性对照(雄鼠：11.0对0.6，雌鼠：12.6对1.0)具有统计学显著更高数目的具有微核的多染性红细胞。在ORP水溶液处理过的小鼠和阴性对照小鼠中具有微核的多染性红细胞数目之间没有统计学显著差异。

本实施例证实了Microcyn 10％在给小鼠腹膜内注射之后不诱导毒性或诱变作用。

实施例28

本研究证实了示例ORP水溶液Dermacyn缺乏毒性。

根据ISO 10993-5：1999标准进行本研究，以确定出示例ORP水溶液Dermacyn引起细胞毒性的可能性。将含有0.1mL Dermacyn的滤纸片放置到琼脂糖表面，直接压在单层小鼠成纤维细胞(L-929)之上。在存在5％CO₂、37℃下温育24个小时之后，观察所制备的样品的细胞毒损伤。将观察结果与阳性和阴性对照样品进行比较。含有Dermacyn的样品没有表现出任何细胞裂解或毒性的证据，而阳性和阴性对照有着预期的表现。

根据这项研究，结论是Dermacyn不会对小鼠成纤维细胞产生细胞毒作用。

实施例29

用16只大鼠进行本研究，以评价示例ORP水溶液Dermacyn的局部耐受性以及其对全层皮肤伤口愈合模型中的伤口床的组织病理学的作用。在对象大鼠的两侧制成伤口。在愈合过程中，取下左侧或右侧的皮肤切片(例如分别经Dermacyn处理和盐水处理)。

经委员会认证的兽医病理学家评价Dermacyn和盐水处理过的手术伤口部位的Masson三色染色切片和II型胶原染色切片。评价切片中的作为结缔组织增生表现的2型胶原表达的数量、成纤维细胞形态学和胶原形成、横切面中的新生表皮的出现、炎症和皮肤溃疡的程度。

结果表明大鼠很好地耐受Dermacyn。在任一侧伤口(分别经Dermacyn处理和盐水处理)的皮肤切片中都没有治疗相关的组织病理学病损。在盐水处理和Dermacyn处理的伤口部位之间没有相关的组织病理学差异，说明Dermacyn处理是被很好耐受的。在盐水处理和Dermacyn处理的伤口部位之间没有2型胶原表达的显著差异，说明Dermacyn对成纤维细胞或对伤口愈合期间的胶原产生加工都没有不良作用。

实施例30

本实施例显示了示例ORP水溶液(Mycrocyn)抑制肥大细胞脱颗粒作用的有效性。肥大细胞已经被认为是I型超敏疾病中的主要参与者。在特应性皮炎、过敏性鼻炎和特应性哮喘中观察到的多种临床症状都是IgE抗原刺激位于不同受累组织中的肥大细胞造成的。特应性哮喘的发病机理的目前公认的观点是过敏原在所谓的反应早期通过触发带有IgE的肺肥大细胞(MC)释放出介质例如组胺、白三烯、前列腺素、激肽类、血小板活化因子(PAF)等而启动哮喘过程。这些介质继而又诱发了支气管收缩并增强血管通透性以及粘液生成。根据这个模型，在肥大细胞活化之后，这些细胞分泌各种促炎症细胞因子包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-4、IL-5和IL-6，这些因子参与了其他炎症细胞例如嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、T淋巴细胞、血小板和单核吞噬细胞的局部募集和活化。这些受募集的细胞又造成了炎症应答的发生，所述炎症应答可以变成自发性的，并加重哮喘症状。这种晚期应答造成了长期的炎症过程，这可以诱导周围组织的可塑性改变(见图11)。因此，MC提供了抗原刺激的炎症/免疫系统细胞释放细胞因子的模型。

对肥大细胞的抗原刺激是通过高亲和力的IgE受体(FcεRI受体)的激活来实现的，所述FcεRI受体是结合IgE的多聚体蛋白，其通过受体结合的IgE与特异性抗原的相互作用可以发生聚集。其结构包括4个多肽：结合IgE的α链、作用为扩增其信号传导能力的β链、和2个二硫键相连的γ链，其是主要的通过所编码的基于免疫受体酪氨酸(ITAM)的活化基序的信号传导物。利用骨髓衍生的肥大细胞(BMMC)、大鼠白血病细胞系RBL 2H3、小鼠和大鼠的腹膜肥大细胞和其他肥大细胞系例如MC-9已经表征了经这种受体的交联所活化的信号途径，其中抗原与IgE的结合引起肥大细胞脱颗粒、钙动员、细胞骨架重排以及不同的转录因子(NFAT、NFκB、AP-1、PU.1、SP1、Ets等)的活化，所述转录因子激活了细胞因子基因转录，随着细胞因子的生成达到了最高点。

在37℃下4个小时内给成熟小鼠BMMC负载单克隆抗二硝基酚IgE(300ng/百万个细胞)。去除培养基，将细胞重悬于生理缓冲液(Tyrode缓冲液/BSA)中。然后，用不同浓度的ORP水溶液(Microcyn)在37℃下处理细胞15分钟。去除缓冲液，将细胞重悬于新鲜的Tyrode’s/BSA中，并用不同浓度的抗原(与二硝基酚结合的人白蛋白)刺激细胞，在37℃下温育30分钟。利用依据β-己糖胺酶水解不同的碳水化合物的能力的比色反应，通过测定受刺激细胞的上清液和沉淀中的β-己糖胺酶活性来测定脱颗粒作用(已经发现β-己糖胺酶位于肥大细胞中含有组胺的相同颗粒内)。结果(图12)显示脱颗粒作用随着ORP水溶液浓度的增加而显著减少。

令人惊讶的是，ORP水溶液(Microcyn)对肥大细胞脱颗粒作用的抑制作用至少与用临床有效的“肥大细胞稳定剂”和确立的抗过敏化合物色甘酸钠(Intel^TM)所观察到的抑制作用相似(图13)。利用依据β-己糖胺酶水解不同的碳水化合物的能力的比色反应，通过测定受刺激细胞的沉淀和上清液中的β-己糖胺酶活性再次测定脱颗粒作用。在有或没有色甘酸钠(Intel^TM)预温育15分钟的情况下，刺激负载抗DNP单克隆IgE的细胞。在减少脱颗粒作用方面，色甘酸钠不比ORP水溶液更为有效(比较图12和图13，两者都使得脱颗粒作用减少了至少约50％)。

实施例31

本实施例显示了示例ORP水溶液对钙离子载体活化肥大细胞的抑制活性。

可以通过钙离子载体诱导的钙离子流的活化来刺激肥大细胞。利用骨髓衍生的肥大细胞(BMMC)、大鼠白血病细胞系RBL 2H3、小鼠和大鼠的腹膜肥大细胞和其他肥大细胞系例如MC-9已经表征了钙离子载体活化的信号传导途径。在所有这些系统中，钙动员引起了肥大细胞脱颗粒(例如组胺释放)、细胞骨架重排以及不同的转录因子(NFAT、NFκB、AP-1、PU.1、SP1、Ets等)的活化，所述转录因子激活了细胞因子基因转录，随着细胞因子的生成和分泌达到了最高点。

在37℃下4个小时内给成熟小鼠骨髓衍生的肥大细胞(BMMC)负载单克隆抗二硝基酚IgE(300ng/百万个细胞)。去除培养基，将细胞重悬于生理缓冲液(Tyrode缓冲液/BSA)中。然后，用不同浓度的ORP水溶液(Microcyn)在37℃下处理细胞15分钟。去除缓冲液，将细胞重悬于新鲜的Tyrode’s/BSA中，并用钙离子载体(100mM A23187)刺激细胞，在37℃下温育30分钟。利用依据β-己糖胺酶水解不同的碳水化合物的能力的比色反应，通过测定受刺激细胞的上清液和沉淀中的β-己糖胺酶活性来测定脱颗粒作用(已经发现β-己糖胺酶位于肥大细胞中含有组胺的相同颗粒内)。结果(图14)显示了脱颗粒作用随着ORP水溶液浓度的增加而显著减少。

这些结果说明ORP水溶液是非特异的组胺释放抑制剂。因此，ORP水溶液(甚至不同浓度的ORP水溶液)能抑制肥大细胞的脱颗粒作用，而且这与刺激物无关(例如抗原或离子载体)。虽然不想受到任何理论的束缚，ORP水溶液可能修饰了质膜和/或细胞骨架水平的分泌途径系统。因为据信OPR水溶液的作用机制是非特异的，因此相信ORP水溶液可以具有广泛潜在的临床应用。

实施例32

本实施例显示了示例ORP水溶液对肥大细胞细胞因子基因转录的活化的作用。

图15A和15B是肥大细胞的RNA酶保护测定，如实施例30所述，所述肥大细胞已经被不同浓度的ORP水溶液处理15分钟并且还被抗原刺激过。在刺激之后，用亲和层析柱(RNAeasy试剂盒，Qiagene)提取出mRNA，用标准试剂盒条件(Clontech，Becton&Dickinson)进行RNA酶保护测定，以便检测出在抗原攻击之后的不同细胞因子的mRNA生成。细胞因子包括TNF-α、LIF、IL-13、M-CSF、IL-6、MIF和L32。

图15A和15B显示ORP水溶液(Microcyn)不改变肥大细胞中抗原攻击之后的细胞因子mRNA水平，无论试验所用的ORP水溶液或抗原的浓度。

在本研究中，在经不同浓度的抗原刺激之后，经ORP水溶液处理过的肥大细胞中的促炎症基因的转录物水平(即经刺激的肥大细胞的RNA含量)没有变化。因此，ORP水溶液抑制了这些细胞因子的分泌途径，而不影响它们的转录。

实施例33

本实施例显示了示例ORP水溶液对肥大细胞分泌TNF-α的抑制活性。

如实施例30所述，用不同浓度的ORP水溶液处理肥大细胞15分钟，并进一步用抗原刺激肥大细胞。在此之后，更换组织培养基，并收集不同时间段(2到8个小时)的新鲜培养基样品测定TNF-α水平。冷冻样品，并根据产商的说明书用商品化的ELISA试剂盒(Biosource)分析样品。

图16显示与未处理的细胞相比较，在抗原刺激之后经ORP水溶液处理过的细胞分泌到培养基中的TNF-α水平显著减少。

因此，ORP水溶液抑制了经抗原刺激的肥大细胞分泌TNF-α。这些结果与临床观察相一致，其中ORP水溶液的应用可以减少在手术处理后各种伤口的炎症反应。

实施例34

本实施例显示了示例ORP水溶液对肥大细胞分泌MIP1-α的抑制活性。

如实施例30所述，用不同浓度的示例ORP水溶液(Microcyn)处理肥大细胞15分钟，并进一步用抗原刺激肥大细胞。在此之后，更换组织培养基，并收集不同时间段(2到8个小时)的新鲜培养基样品测定MIP1-α水平。冷冻样品，并根据产商的说明书用商品化的ELISA试剂盒(Biosource)分析样品。

图17显示与未处理的细胞相比较，在抗原刺激之后经ORP水溶液处理过的细胞分泌到培养基中的MIP1-α水平显著减少。

因此，ORP水溶液抑制了经抗原刺激的肥大细胞分泌MIP1-α。这些结果与临床观察相一致，其中ORP水溶液的应用可以减少在手术处理后各种伤口炎症反应。

实施例30-33和本实施例还说明ORP水溶液能够抑制IgE受体交联启动的早期和晚期过敏反应。

实施例35

本实施例显示了示例ORP水溶液Microcyn对1度、2度和3度儿童烧伤的抗微生物活性、减少住院日以及改善的美容结果。

依据ORP水溶液的临床结果以及已知了ORP水溶液在动物烧伤模型中的安全性和清除铜绿假单胞菌的疗效而设计本研究。

该试验的主要终点是感染的局部控制。

从2004年3月到2005年3月期间因诊为表浅部分、深部部分和全层的皮肤热损伤收入墨西哥的Civil de Guadalajara医院的64例连续患者进入了研究组(即ORP水溶液)(35例男性、29例女性)。对2003年期间该医院内的相似烧伤的配对病例的回顾性分析作为对照组(40例男性、24例女性)。对照组已经接受了银溶液/软膏的治疗。两组的年龄分布相似(图18)。两组的烧伤病因也相似，包括火、沸水和电。

表23显示了烧伤的范围。

表23：烧伤的范围

	患者数目
			研究组	对照组
	0-9％10-19％20-29％30-39％40-49％50-59％60-69％	1027118413			202864303

在入组时，研究组中的所有患者都进行了手术清创以及用Jetox系统进行ORP水溶液的高压冲洗。只用经ORP水溶液浸泡过的纱布覆盖有大量分泌物的3度全层烧伤。但是，用开放模式治疗大多数患者。在进行过程中，大多数儿童可以每天洗澡，并接受ORP水溶液每天3次(喷雾形式)，在病损上方并不施用凝胶或敷料。在入组和治疗1周后，从伤口床中取出组织活检进行定性细菌学分析。按需在全层烧伤中使用皮肤移植物。对照组的患者接受了相似方式的治疗，除了用银溶液取代ORP水溶液。作为医院治疗方案的一部分，对于金黄色葡萄球菌培养阳性的患者或者当患者从另一个医院转入时，给这些患者施用抗生素。

在这个试验中，ORP水溶液组只有6例患者接受了抗生素，而对照组有46例(表24)。尽管这样，在治疗后分别从6例和22例患者获得了阳性培养(见表25)。但是，ORP水溶液组中没有1例患者在其住院期间或者在出院之后表现出明显的感染迹象。

表23：抗生素施用情况

组	施用抗生素的患者数目	施用抗生素和具有阳性培养的患者数目	施用抗生素的患者的平均住院天数
				对照组研究组	466	226	28.617.5

表25：微生物学结果

对照组(n＝22)	％	研究组(n＝6)	％
				金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌白色念珠菌阴沟肠杆菌克雷伯氏菌属总计	56.019.012.08.05.0100.0	金黄色葡萄球菌阴沟肠杆菌溶血葡萄球菌总计	57.128.614.2100.0

接受ORP水溶液治疗的儿童也表现出更少的疼痛主诉。

ORP水溶液组的住院时间比对照组减少了近50％(分别是14.8天对28.6天)。当分别分析1度、2度和3度烧伤时，经ORP水溶液治疗的患者也比对照患者的住院时间有所减少(表26)。

表26：烧伤严重度和住院日

烧伤分级	研究组	平均住院日	对照组	平均住院日
					1°2°3°	64414	4.610.629.5	45910	19.226.939.8

但是，对依据烧伤大小的结果的分析不能证实哪种治疗更为优越(图19)。

因为在该医院的每日住院费用是每名患者约1800美元，ORP水溶液给医院节约了平均每名患者24,660美元。还表明，与使用先前的标准烧伤治疗相比较，在经ORP水治疗的患者中，直径达10cm的3度烧伤完全愈合而不需要皮肤移植物，获得了更好的美容结果和更少的螯合作用。

因此，示例ORP水溶液减少了部分和全层热损伤患者的微生物负荷和住院长度。本研究也表明了其他益处例如减轻疼痛和改善瘢痕。

通过引用将在此引用的所有参考文献包括出版物、专利申请和专利都并入本申请，程度如同单独地且具体地指示在此通过引用将每篇参考文献都并入本申请并在本文中全文列出。

术语“一”和“该”以及在描述本发明的上下文中(特别是在下面权利要求书的上下文中)相似的指代的使用应理解为涵盖单数和复数，除非在本文中有其他不同的说明或清楚的否定。术语“包括”、“具有”、  “包含”和“含有”应理解为开放式术语(即表示“包括但不限于”)，除非有其他不同的说明。在此对数值范围的陈述只打算作为单个地表示落在范围之内的每个单独数值的速记法，除非在此有其他不同的说明，且每个单独数值都被整合到说明书中，如同它们在此被单个地陈述。可以按任何合适的次序进行在此所述的所有方法，除非在此有其他不同的说明或上下文中有清楚的否定。任何和所有实施例或在此所提供的示例语言(例如“例如”)都只打算更好地举例说明发明，并不打算限制本发明的范围，除非有不同的要求。说明书中的所有语言都不应当理解为指示任何未要求的元素是实践本发明所必不可少的。

在此描述了本发明的优选的实施方式，包括发明者已知的实现发明的最好的模式。在阅读上述的描述之后，那些优选实施方式的变异对于本领域一般技术人员将是显而易见的。发明者预期熟练技术人员会合适地采用这些变异，发明者打算可以用与在此具体所述的方式不同的方式实践发明。因此，本发明包括适用法律容许的在所附权利要求书中所陈述的主题的所有修饰和等同方案。此外，本发明包括在所有可能的变异中的上述元素的任何组合，除非在此有其他不同的说明或上下文中有清楚的否定。

Claims (41)

1.治疗患者的皮肤溃疡的方法，包括给患者施用有效治疗皮肤溃疡的量的氧化还原电位(ORP)水溶液，其中所述溶液的pH为约6.4到约7.8，并且其保持稳定至少约1周。

2.权利要求1的方法，其中所述溶液保持稳定至少约2个月。

3.权利要求2的方法，其中所述溶液保持稳定至少约1年。

4.权利要求1到3中任一项的方法，其中pH是从约7.4到约7.6。

5.权利要求1到3中任一项的方法，其中所述溶液包括阳极水和阴极水。

6.权利要求5的方法，其中所含的阴极水的量占溶液体积的约10％到约50％。

7.权利要求5的方法，其中所含的阴极水的量占溶液体积的约20％到约40％。

8.权利要求1到7中任一项的方法，其中所含的阳极水的量占溶液体积的约50％到约90％。

9.权利要求1到8中任一项的方法，其中所述溶液包括至少1种游离氯种类。

10.权利要求9的方法，其中游离氯种类包括次氯酸、次氯酸盐离子或其组合。

11.权利要求9或10的方法，其中游离氯种类的量是从约10ppm到约400ppm。

12.权利要求9到11中任一项的方法，其中游离氯种类是次氯酸，含量是从约15ppm到约35ppm。

13.权利要求12的方法，其中游离氯种类是次氯酸钠，含量是从约25ppm到约50ppm。

14.权利要求1到8中任一项的方法，其中溶液包括量从约15ppm到约35ppm的次氯酸和量从约25ppm到约50ppm的次氯酸钠。

15.权利要求1到14中任一项的方法，其中通过用溶液洗涤或冲洗皮肤溃疡给患者施用所述溶液。

16.权利要求1到15中任一项的方法，其中通过用溶液浸泡皮肤溃疡给患者施用所述溶液。

17.权利要求16的方法，其中皮肤溃疡在溶液中浸泡至少约1分钟。

18.权利要求16的方法，其中皮肤溃疡在溶液中浸泡至少约2分钟。

19.权利要求15到18中任一项的方法，其中通过用经溶液饱和的伤口敷料敷裹包扎皮肤溃疡给患者施用所述溶液。

20.权利要求19的方法，其中每日更换伤口敷料。

21.权利要求1到14中任一项的方法，包括：(1)用氧化还原电位(ORP)水溶液洗涤或冲洗溃疡；(2)用ORP水溶液浸泡溃疡；(3)用经ORP水溶液饱和的伤口敷料敷裹包扎溃疡；和(4)任选地重复步骤(1)-(3)。

22.权利要求1到21中任一项的方法，其中皮肤溃疡被清创。

23.权利要求1到22中任一项的方法，其中皮肤溃疡是糖尿病患者的足部溃疡。

24.权利要求23的方法，包括(1)对溃疡清创；(2)用ORP水溶液洗涤或冲洗溃疡；(3)用溶液浸泡溃疡至少2分钟；(4)干燥溃疡至少约2分钟；(5)用经溶液饱和的伤口敷料敷裹包扎溃疡；和(6)任选地重复步骤(1)-(5)，其中所述皮肤溃疡是糖尿病患者的受感染的2级或3级足部溃疡，所述溃疡的表面积至少约2.0cm²。

25.权利要求24的方法，还包括重复步骤(1)-(5)至少1次。

26.权利要求24的方法，其中重复步骤(1)-(5)，直到所述溃疡基本上愈合。

27.权利要求1到22中任一项的方法，其中所述皮肤溃疡位于上肢。

28.权利要求27的方法，其中所述皮肤溃疡位于手或手指。

29.权利要求1到22中任一项的方法，其中所述溃疡位于下肢。

30.权利要求29的方法，其中所述溃疡位于足部。

31.权利要求1到22中任一项的方法，其中所述皮肤溃疡是由动脉功能不全、静脉功能不全、淋巴管功能不全、压迫、神经病、外伤或其组合引起的。

32.权利要求1到22中任一项的方法，其中所述皮肤溃疡是由代谢性疾病、炎症性疾病、感染性疾病、肿瘤性疾病、退行性疾病或遗传性疾病或其组合引起的。

33.权利要求31或32的方法，其中所述溃疡是由糖尿病引起的。

34.权利要求31或32的方法，其中所述溃疡是由动脉粥样硬化引起的。

35.权利要求31或32的方法，其中所述压迫是患者制动、瘫痪或肥胖的结果。

36.减少患者皮肤溃疡的微生物负荷的方法，包括按照权利要求1到35中任一项的方法治疗皮肤溃疡。

37.降低患者皮肤溃疡的复发率的方法，包括按照权利要求1到35中任一项的方法治疗皮肤溃疡。

38.减少患者皮肤溃疡开裂的可能性的方法，包括按照权利要求1到35中任一项的方法治疗皮肤溃疡。

39.减少患者因皮肤溃疡造成的截肢的可能性的方法，包括按照权利要求1到35中任一项的方法治疗皮肤溃疡。

40.减少患者因皮肤溃疡造成的全身性炎症应答综合征的可能性的方法，包括按照权利要求1到35中任一项的方法治疗皮肤溃疡。

41.减少患者因皮肤溃疡造成的脓毒症的可能性的方法，包括按照权利要求1到35中任一项的方法治疗皮肤溃疡。

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