CN101133061B - 8-氟-2-{4-[（甲基氨基）甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂卓并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的多晶型物和非晶物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基｝-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的新的多晶型物和非晶物，并涉及它们的制备方法。这样的多晶型物可以是药物组合物的组分，并可用于治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症，包括癌症。

Description

8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1,3,4,5-四氢-6H-氮杂卓并[5,4,3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的多晶型物和非晶物

本申请要求2004年9月22日提交的美国临时申请No.60/612,459和2005年5月9日提交的美国临时申请No.60/679,296的权益，并通过引用将其整体结合于此。

技术领域

本发明涉及8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的新的多晶型物和非晶物，并涉及它们的制备方法。本发明还涉及包含至少一种多晶型物或非晶物的药物组合物，并且涉及这样的多晶型物和非晶物以及组合物的治疗或预防用途。

背景技术

化合物8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮由式1表示，

其为聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的小分子抑制剂。式1的化合物及其盐可以通过下列文献中描述的方法制备：美国专利No.6,495,541、PCT申请No.PCT/IB2004/000915、国际公布No.WO 2004/087713和美国临时专利申请No.60/612,457，通过引用将这些文献的公开内容全部结合在本文中。

目前，已经通过DNA序列同源性在PARP族中确认了18种酶，已经研究了其中7种的生物化学性质和酶性质：PARP-1和PARP-2受DNA链断裂激发；PARP-3与PARP-1和中心体相互作用；PARP-4也称为窟窿体(vault)PARP(VPARP)，其为最大的PARP，并与胞浆窟窿体相关；端锚聚合酶1和2(PARP-5a和5b)与端粒蛋白质相关；PARP-7(TiPARP)的功能目前并不清楚，但它与T细胞功能有关，并且它可以聚(ADP-核糖化)组蛋白(Ame JC，Splenlehauer C and de Murcia G.ThePARP Superfamily.Bioessays 26 882-893(2004))。药理学研究已表明，式1的化合物是PARP-1(K_i＝1.4nM)和PARP-2(K_i＝0.17nM)的抑制剂。基于这些PARP酶之间的氨基酸序列的结构类似性，式1的化合物也很可能以高亲合度与该族的其他成员结合。

对DNA中单链或双链的断裂进行酶致修复，这是其抵抗机制依赖于DNA损坏的放射疗法或细胞毒性药物的可能机制。因此，增强这些药剂作用的策略是抑制DNA修复酶。PARP-1是PARP族中被最好地表征的成员，它是一种核酶，在被DNA损坏活化后，引起ADP-核糖碎片从NAD⁺转移到多个受体蛋白质上。根据DNA损坏发生的程度，PARP-1活化并随后进行聚(ADP-核糖)化反应，引起破损DNA的修复或导致细胞死亡。当DNA损坏程度为中等时，PARP-1在DNA修复过程中起到主要作用。相反地，在DNA大量损坏的情况下，PARP-1的过度活化(在补充NAD⁺的过程中)耗尽了体内贮存的ATP，这最终导致细胞坏死而调亡(TentoriL，Portarena I，Graziani G.Potential applications of poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitors.Pharmacol Res 2002，45，73-85)。这种PARP的活化还可导致AIF(调亡诱导因子)的释放，触发caspase独立的调亡途经。(Hong SJ，Dawson TM and Dawson VL.Nuclear and mitochondrial conversations in cell death：PARP-1 and AIF.Trends inPharmacological Sciences 25 259-264(2004))。

由于PARP-1的双重作用，这种酶的抑制剂，例如式1表示的8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮，可能具有化学敏化剂(通过防止DNA修复，例如在抗癌治疗后)的作用，或具有治疗各种与氧化或氧化氮诱导应激和随后的PARP过度活化相关的疾病和中毒状态的作用。这样的病症包括神经病和神经变性病(例如帕金森症、老年痴呆症)(Love S，Barber R，Wilcock GK.Increasedpoly(ADP-ribosyl)ation of nuclear proteins in Alzheimer’s disease.Brain1999；122：247-53；Mandir AS，Przedborski S，JacksonLewis V等.Poly(ADP-ribose)polymerase activation mediates 1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine(MPTP)-induced parkinsonism.Proc Natl Acad Sci USA1999；96：5774-9)；心血管病(例如心肌梗塞、缺血再灌注损伤)(Pieper AA，Walles T，Wei G等.Myocardial Postischemic injury is reducedby poly(ADP-ribose)polymerase-1 gene disruption.J Mol Med 2000；6：271-82；Szabo G，BahrleS，Stumpf N等.Poly(ADP-ribose)polymeraseinhibition reduces reperfusion injury after heart transplantation.Circ Res 2002；90：100-6；美国专利6,423,705)；炎性疾病(Szabo C，Dawson B.Roleof poly(ADP-ribose)synthetase in inflammation and ischaemia-reperfusion.TIPS 1998；19：287-98)；糖尿病性血管功能障碍(Soriano FG，ViragL，Szabo C.Diabetic endothelial dysfunction：role of reactive oxygen andnitrogen species production and poly(ADP-ribose)polymerase activation.J MolMed 2001；79：437-48)；关节炎(Szabo C，Virag L，Cuzzocrea S等.Protection against peroxynitrite-induced fibroblast injury and arthritisdevelopment by inhibition of poly(ADP-ribose)synthase.Proc Natl Acad SciUSA 1998；95：3867-72)；和顺铂所致肾中毒(Racz I，Tory K，GallyasF等.BGP-15-a novel poly(ADP-ribose)polymerase inhibitor-protectsagainst nephrotoxicity of cisplatin without compromising its antitumor activity.Biochem Pharmacol 2002；63：1099-111)。此外，还表明BRCA2缺陷肿瘤细胞仅对PARP-1抑制剂极为敏感(Bryant HE，Schultz N，ThomasHD，Parker KM，Flower D，Lopez E，Kyle S，Meuth M，Curtin NJ andHelleday T.“Specific killing of BRCA2 deficient tumors with inhibitors ofpoly(ADP-ribose)polymerase”，出版中的Nature)。PARP抑制剂还涉及增强对β细胞中的Reg基因和HGF基因表达的诱导，因此促进朗格罕氏岛的胰腺β细胞的增殖(美国专利申请公布2004/0091453；PCT公布No.WO 02/00665)。此外，PARP抑制剂还用于制造化妆品，特别是晒后涂霜(PCT公布No.WO 01/82877)。目前还不存在市场化的PARP抑制剂。

癌症仍然是一种亟待治疗的疾病。细胞毒性化疗仍然是对大部分癌症特别是晚期疾病进行系统治疗的主要方法。然而，对于患有晚期或转移性疾病的患者，能够有效地提高总体存活率的细胞毒性化疗剂或疗法很少。此外，与细胞毒性剂相关的治疗窗口小，这导致毒性很大而疗效不够理想。因此，可在合适的耐药剂量下提高细胞毒性药物效力的化学敏化剂会满足对于癌症患者的苛刻要求。美国临时专利申请No.60/612,458和标题为“Therapeutic Combinations Comprising Poly(ADP-Ribose)PolymerasesInhibitor”的60/683,006(通过引用将其整体结合于此)描述了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的药物组合。

为了制备对哺乳动物给药的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的药物组合物，需要以具有适于可靠配制的物理性质的形式制造此种化合物。因此，本领域需要提供8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的改善形式，所述改善形式具有增强的性质，例如改善的溶解度或生物有效性以及对热、水和光的稳定性。

发明概述

在一个方面，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的六种多晶型物和一种非晶物。

在一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的I型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的II型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的III型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的IV型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的V型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的VI型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的非晶物。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的I型多晶型物，具有包括在10.9、19.3、22.9和25.0的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的II型多晶型物，具有包括在11.2、14.0、20.1和23.1的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的III型多晶型物，具有包括在10.7、11.0、19.4和25.1的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的IV型多晶型物，具有包括在8.2、16.5、23.0和24.8的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的V型多晶型物，具有包括在10.8、14.8、21.6和25.8的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的VI型多晶型物，具有包括在14.8、20.0、22.3和23.5的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的I型多晶型物，具有包括在与图1所示基本相同的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的II型多晶型物，具有包括在与图4所示基本相同的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的III型多晶型物，具有包括在与图7所示基本相同的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的IV型多晶型物，具有包括在与图10所示基本相同的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的V型多晶型物，具有包括在与图13所示基本相同的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的VI型多晶型物，具有包括在与图18所示基本相同的衍射角(2θ)处的峰的X射线粉末衍射图样。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的非晶物，其中所述非晶物的X射线粉末衍射图样在4～40°范围的衍射角(2θ)处呈现宽峰，而没有任何结晶物的尖峰特征。更具体地，所述非晶物由与图21所示基本相同的X射线粉末衍射图样来表征。甚至更具体地，所述非晶物包括由与图23所示基本相同的位移峰(cm^-1)的拉曼光谱来表征。

在另一种实施方式中，本发明提供了8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的固体形式，其中所述固体形式是包括下列形式中的至少两种：I、II、III、IV、V、VI型多晶型物和非晶物。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的I型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的II型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的III型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的IV型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的V型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的VI型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的非晶物。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的固体形式的药物组合物，其中所述固体形式是包括下列形式中的至少两种：I、II、III、IV、V、VI型多晶型物或非晶物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症的方法，所述方法包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的I型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症的方法，所述方法包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的II型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症的方法，所述方法包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的III型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症的方法，所述方法包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的IV型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症的方法，所述方法包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的V型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症的方法，所述方法包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的VI型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症的方法，所述方法包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的非晶物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症的方法，所述方法包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的固体形式的药物组合物，其中所述固体形式是包括下列形式中的至少两种：I、II、III、IV、V、VI型多晶型物和非晶物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包括对哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的I型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包括对哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的II型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包括对哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的III型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包括对哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的IV型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包括对哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的V型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包括对哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的VI型多晶型物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包括对哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的药物组合物，其中所述盐为基本上纯净的非晶物。

在另一种实施方式中，本发明提供了治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包括对哺乳动物给药治疗有效量的包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的固体形式的药物组合物，其中所述固体形式是包括下列形式中的至少两种：I、II、III、IV、V、VI型多晶型物或非晶物。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的剂型，其中所述剂型是用于注射的冻干粉末，在用灭菌注射水重悬(reconstitution)之后，所述剂型提供的作为游离碱的8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的最终浓度在8.0-3.0的pH下为1.0-4.5mg/mL。

在另一种实施方式中，本发明提供了包含8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的剂型，其中所述剂型是用于注射的冻干粉末，在用灭菌注射水重悬之后，所述剂型提供的作为游离碱的8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的最终浓度在5.0-6.0的pH下为2-3mg/mL。

定义

术语“化合物I”是指8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐。术语“式1的化合物”是指8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮，游离碱。

术语“活性剂”或“活性成分”是指8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐(“化合物I”)的多晶型物，或指包含两种或多种8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐(化合物I)的多晶型物或非晶物的固体形式。

术语“环境温度”是指通常在实验室出现的温度条件，包括约20-30℃的温度范围。

术语“非晶”是指化合物的非晶形式。

术语“含水碱”是指任何有机碱或无机碱。含水碱包括(仅作为示例)金属碳酸氢盐例如碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸铯等。

术语“芳族溶剂”是指具有芳族部分的有机溶剂，包括(仅作为示例)苯、甲苯、二甲苯异构体或其混合物等。

术语“化学稳定性”是指具体化合物保持其化学完整性的一类稳定性，包括但不限于，热稳定性、光稳定性和水稳定性。

术语“可检测的量”是指可用例如X射线粉末衍射、差示扫描量热、HPLC、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、拉曼光谱等的常规技术检测的量或单位体积的量。

术语“暴露在湿度下”是指在加湿器、湿度箱或任何能够控制相对湿度的装置中将物质暴露于水蒸汽中的过程。此术语还可描述在存储过程中将物质暴露于环境湿度的过程。

术语“癌症”包括但不限于，肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头部或颈部癌症、皮肤或眼内黑色素癌、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤，或上述癌症的一种或多种的组合。在所述方法的另一种实施方式中，所述异常细胞生长是良性的增殖疾病，包括但不限于，银屑病、良性前列腺肥大或再狭窄(restinosis)。

术语“惰性溶剂”是指不与溶液或浆液中的其他组分化学反应的任何溶剂或浆液的液体组分。惰性溶剂包括(仅作为示例)疏质子溶剂，例如芳族溶剂、乙酸乙酯、丙酮、甲基叔丁醚、二噁烷、四氢呋喃(THF)等。质子溶剂包括(仅作为示例)甲醇、乙醇、丙醇异构体、丁醇异构体等。

术语“由聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)活性介导”是指由PARP活性调控、调节或抑制的生物或分子过程。对于某些应用，与癌症相关的PARP活性抑制是优选的。本发明包括例如在哺乳动物中通过给药8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐(化合物I)的多晶型物或包含两种或多种化合物I的多晶型物的固体形式来调节或抑制PARP活性的方法。化合物I的多晶型物或者或包含两种或多种化合物I的多晶型物的固体形式的活性或效力可以按照例如美国专利No.6,495,541和美国临时专利申请No.60/612,458中所述来测量，通过引用将这两篇文献整体结合于此。

术语“最小量”是指在给定温度下完全溶解物质所需溶剂的最少量。

本文所用术语“多晶型”是指相同化合物的不同晶型以及其他固态分子形式，包括假多晶型，例如相同化合物的水合物(例如，在晶体结构中存在结合水)和溶剂化物(例如，结合非水溶剂)。不同的结晶多晶型物由于晶格中分子的不同排列方式而具有不同的晶体结构。这导致不同的晶体对称性和/或晶胞参数，直接影响其物理性质，例如晶体或粉末的X射线衍射特性。例如，不同的多晶型物通常会在不同的一系列角度下衍射并且得到不同的强度值。因此，X射线粉末衍射可被用于以可重复且可靠的方法识别不同的多晶型物或包含多于一种多晶型物的固体形式(S.Byrn等，Pharmaceutical Solids：A Strategic Approach to Regulatory Considerations，Pharmaceutical research，Vol.12，No.7，p.945-954，1995；J.K.Haleblian和W.McCrone，Pharmacetical Applications of Polymorphism，Journal ofPharmaceutical Sciences，Vol.58，No.8，p.911-929，1969)。结晶多晶型物特别是在合适剂型的开发中涉及的那些多晶型物对于制药业十分重要。如果在临床或稳定性研究过程中多晶型物不能保持不变，则所使用或研究的确切剂型的批量之间可能不具有可比性。当在临床研究或商业产品中使用化合物时，由于存在的杂质可能会产生不期望的毒性作用，因此还期望存在以高纯度制备具有选定多晶型物的化合物的方法。某些多晶型物可能具有增强的热力学稳定性或可以更方便地以高纯度大量制备，从而更适合于包含在药物配制剂中。某些多晶型物可能由于不同的晶格能而呈现出其他有利的物理性质，例如不易吸湿、溶解度增大和溶解速率提高。

术语“峰强度”是指给定的X射线衍射图样内的相对信号强度。能够影响相对峰强度的因素是样品厚度和优选取向(即，结晶颗粒并不随机分布)。

本文所用术语“峰位置”是指在X射线粉末衍射实验中测量和观察到的X射线折射位置。峰位置与晶胞大小直接相关。由其各自的峰位置来识别的峰已经从8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐(化合物I)的各种多晶型物I、II、III、IV、V和VI的衍射图样中取得。

术语“PEG”是指聚(乙二醇)。聚合物链长度不同因而粘度不同的PEG是可以购得的。PEG 400溶于醇、丙酮、苯、氯仿、乙酸、CCl₄和水。

术语“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”是指可以与特定的药物试剂一起被包含而形成药物组合物并且可以是固体或液体的一种材料(或多种材料)。示例性的固体载体为乳糖、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。示例性液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、水等。类似地，载体或稀释剂可包括本领域已知的延时或缓释材料，例如带蜡或不带蜡的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸甲酯等。

术语“药物组合物”是指一种或多种本文所述的化合物或多晶型物或其生理上/药学上可接受的盐或溶剂化物与其他化学组分例如生理上/药学上可接受的载体或赋形剂的混合物。药物组合物的目的在于便于对生物体给药化合物。

术语“重结晶”是指在加热(如果需要)下将固体完全溶解在第一溶剂中，然后通常通过冷却该溶液或通过添加较少地溶解所述固体的第二溶剂而引起沉淀的过程。

术语“相对湿度”是指给定温度下空气中的水蒸气量与可以在该温度和压力下存在的水蒸气的最大量的比值，以百分数表示。

术语“相对强度”是指由样品的X射线衍射图样导出的强度值。衍射图样的整个纵坐标范围标度被指定为值100。强度落在此标度强度的约50％与约100％之间的峰被称为极强(vs)峰；强度落在约50％与约25％之间的峰被称为强(s)峰。其他较弱的峰存在于典型的衍射图样中，并且也是给定多晶型物的特征峰。

术语“浆液”是指悬浮于液体介质(通常为水和有机溶剂)中的固体物质。

术语“分离”是指合成中的步骤，其中将期望试剂与其他不期望试剂分离，包括但不限于任何下列步骤：过滤、用额外的溶剂或水洗涤、在加热或真空下干燥。

与8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐(化合物I)的具体多晶型物相关的术语“基本上纯净”意指，该多晶型物包含小于10wt％、优选小于5wt％、优选小于3wt％、优选小于1wt％的杂质，所述杂质包括化合物I的其他多晶型物。这种纯度可以例如通过X射线粉末衍射确定。

“有效量”意指药剂的一定量，该量能够显著抑制真核细胞(例如，哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞)的增殖和/或防止其去分化，并且对于指定用途(例如特定的治疗处理)是有效的。

术语“治疗有效量”是指所给药的化合物或多晶型物的将在一定程度上缓解被治疗疾病的一种或多种症状的量。对于癌症的治疗，治疗有效量是指具有至少一种以下效果的量：

(1)减小肿瘤尺寸；

(2)抑制(即，在一定程度上延缓，优选停止)肿瘤转移；

(3)一定程度上抑制(即，在一定程度上延缓，优选停止)肿瘤生长；

(4)一定程度上缓解(或优选消除)与癌症相关的一种或多种症状。

术语“2θ值”或“2θ”是指基于X射线衍射实验的实验设置的峰位置，并且是衍射图样中常用的横坐标单位。实验设置要求，如果当入射光束与特定晶格平面形成θ角时反射被衍射，则在2θ角度处纪录到反射光束。

术语“治疗”是指减轻或消除过度增殖疾病和/或其伴生症状的方法。针对癌症，此术语简单地意指患有癌症的个体的预期寿命将被延长，或该疾病的一种或多种症状将被减轻。

术语“在真空下”是指可以通过实验室的含油或无油隔膜式真空泵得到的典型压力。

术语“X射线粉末衍射图样”是指实验观察到的衍射图或由其得到的参数。X射线粉末衍射图样通过峰位置(横坐标)和峰强度(纵坐标)来表征。

附图说明

图1为8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐(化合物I)的I型多晶型物(水合物A)的X射线粉末衍射图；

图2为化合物I的I型多晶型物(水合物A)的红外吸收光谱图；

图3为化合物I的I型多晶型物(水合物A)的差示扫描量热分析(DSC)热谱图，典型的热谱图示出，在5℃/分钟的扫描速率下，吸热开始于202℃；

图4为化合物I的II型多晶型物(无水形式)的X射线粉末衍射图；

图5为化合物I的II型多晶型物(无水形式)的红外吸收光谱图；

图6为化合物I的II型多晶型物(无水形式)的差示扫描量热分析(DSC)热谱图，典型的热谱图示出，在5℃/分钟的扫描速率下，吸热开始于205℃；

图7为化合物I的III型多晶型物(水合物B)的X射线粉末衍射图；

图8为化合物I的III型多晶型物(水合物B)的红外吸收光谱图；

图9为化合物I的III型多晶型物(水合物B)的差示扫描量热分析(DSC)热谱图，典型的热谱图示出，在5℃/分钟的扫描速率下，吸热开始于203℃；

图10为化合物I的IV型多晶型物(MeOH溶剂化物)的X射线粉末衍射图；

图11为化合物I的IV型多晶型物(MeOH溶剂化物)的红外吸收光谱图；

图12为化合物I的IV型多晶型物(MeOH溶剂化物)的差示扫描量热分析(DSC)热谱图，典型的热谱图示出，在5℃/分钟的扫描速率下，吸热开始于204℃；

图13为化合物I的V型多晶型物(水合物C)的X射线粉末衍射图；

图14为化合物I的V型多晶型物(水合物C)的含水浆液拉曼光谱图；

图15为化合物I的II型多晶型物(无水形式)的pH溶解度图；

图16为化合物I的V型多晶型物(水合物C)的红外吸收光谱图；

图17为化合物I的V型多晶型物(水合物C)的差示扫描量热分析(DSC)热谱图；

图18为化合物I的VI型多晶型物的X射线粉末衍射图；

图19为化合物I的VI型多晶型物的红外吸收光谱图；

图20为化合物I的VI型多晶型物的差示扫描量热分析(DSC)热谱图；

图21为化合物I的非晶物的X射线粉末衍射图；

图22为化合物I的非晶物的红外吸收光谱图；

图23为化合物I的非晶物的拉曼光谱图；

图24为化合物I的非晶物的差示扫描量热分析(DSC)热谱图。

发明详述

已令人惊讶地发现，8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐(化合物I)可以存在多于一种的多晶型结晶形式。这些形式可用于治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症(包括癌症)的配制产品中。每种形式较之其他形式在生物有效性、稳定性或可制造性方面具有一个或多个优点。已经发现了可能比其他多晶型物更适合大量制备和加工的化合物I的结晶多晶型物。还提供了化合物I的非晶物。本文描述了以高纯度制备这些多晶型物和非晶物的方法。还提供了制备基本上不含化合物I的其他多晶型物的化合物I的每种多晶型物和非晶物的方法。此外，本发明提供了包含如上所述的不同多晶型物和非晶物的化合物I的药物配制剂，以及通过给药这种药物配制剂治疗由聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的哺乳动物疾病病症的方法。

I.8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲 哚-6-酮的磷酸盐(化合物I)的多晶型物

本发明提供了化合物I的数种多晶型结晶形式。化合物I的每种结晶形式可以通过下列中的一种或多种来表征：X射线粉末衍射图样(即，不同衍射角(2θ)处的X射线衍射峰)；用差示扫描量热分析(DSC)热谱图的吸热所表示的熔点开始(以及水合物形式的脱水开始)；FT-IR光谱图图样；拉曼光谱图图样；水溶性；在国际协调会(InternationalConference on Harmonization，ICH)高强度光条件下的光稳定性；以及物理和化学存储稳定性。例如，化合物I的I、II、III、IV、V和VI型多晶型物样品均通过它们的X射线粉末衍射图样中的峰的位置和相对强度来表征。化合物I的I、II、III、IV、V和VI型多晶型物每一种的X射线粉末衍射参数存在差异。因此可用X射线粉末衍射来区分化合物I的这些多晶型物。

在装有分别在40kV和30mA或40kV和40mA下操作的Cu X射线源的Shimadzu XRD-6000或Bruker Discover D8 X射线衍射仪上对本发明的每种多晶型物进行X射线粉末衍射图样测量。对于Shimadzu XRD-6000X射线衍射仪，样品被置于样品夹持器中，然后用载玻片压紧并平整。在分析过程中，样品以60rpm旋转，并且在5°/min下以0.04°的步长或在2°/min下以0.02°的步长从4°至40°(θ-2θ)的角度对样品进行分析。如果可用的材料有限，则样品被置于硅板(零背景)上并在不旋转的条件下分析。从化合物I的每种多晶型物的X射线粉末衍射图中获得由峰位置和强度值表征的X射线衍射峰。对于Bruker Discover D8，样品被置于载玻片上并用称量纸平整。从4°至40°(θ-2θ)的角度对样品进行分析。本领域的技术人员应认识到，峰位置(2θ)会呈现一定的仪器间的差异，通常约为0.1°。因此，当多晶型物由X射线粉末衍射特征峰来描述时，峰位置(2θ)应被理解为涵盖了这种差异。类似地，当本发明的固体形式被描述成具有与给定的图中所示基本相同的粉末X射线衍射图样时，术语“基本相同”意在涵盖上述的衍射峰位置的仪器间差异。此外，本领域的技术人员应认识到，相对峰强度也会呈现仪器间的差异以及由结晶度、优选取向、所制备的样品表面和本领域的技术人员已知的其他因素造成的差异，因而只能用于定性分析。

化合物I的不同多晶型物还可用差示扫描量热分析(DSC)区分。DSC测量样品溶液与合适的参比溶剂之间随温度升高的吸收热能的差异。DSC热谱图通常在样品加热时由吸热(表示能量吸收)、也由放热(表示能量释放)来表征。

使用TA仪器DSC Q1000和Mettler Toledo DSC821e仪器以5℃/min的扫描速率在25-250℃的温度范围上得到DSC(差示扫描量热分析)热谱图。对于DSC分析，称量样品并将其置入密封并开有一个孔的气密铝器皿中。依赖于数个因素，本发明的化合物所表现出来的吸热可能或高或低地不同于附图中所示的吸热(对于晶体多晶型物熔融，差异约为0.01-5℃)。造成这样的差异的因素包括进行DSC分析的加热速率(即扫描速率)、定义和确定DSC开始温度的方式、所用的校准标准、仪器校准、相对湿度以及样品的化学纯度。对于任意给定的样品，仪器不同，则观察到的吸热也可能不同；然而，如果这些仪器用类似的方法校准，则差异通常在本文定义的范围之内。

通过使用来自Kaiser光学仪器的Dispersive拉曼光谱计Ramen RXN1来获得拉曼散射光谱。激发光源为785nm的外腔稳定的二极管激光器。检测器为电荷耦合器件(CCD)。分辨率为4cm^-1。

在Bruker Vector33 FT-IR分光光度计上记录红外光谱。将药物样品与溴化钾一起磨碎并压制成小片。从4000cm^-1至400cm^-1对小片进行扫描。标记3400cm^-1至500cm^-1之间的主要的峰。

还可以通过不同的稳定性和不同的溶解性来区分化合物I的不同多晶型物。

在一种实施方式中，本发明的多晶型物基本上是纯净的，即化合物I的每种多晶型物所包含的杂质小于10wt％，例如小于5wt％，或例如小于3wt％，或甚至例如小于1wt％，其中所述杂质包括化合物I的其他多晶型物。

本发明的固体形式也可以包含多于一种的多晶型物。本领域的技术人员应当认识到，给定化合物的结晶形式可以以基本上纯净的单一多晶型物存在，并且也可以以包含两种或多种不同多晶型物的结晶形式存在。如果固体形式包含两种或多种多晶型物，则X射线衍射图样将具有本发明的每种多晶型物的特征峰。例如，包含两种多晶型物的固体形式的粉末X射线衍射图样将为相应的基本上纯净的多晶型物的两个X射线衍射图样的卷积。例如，在一种实施方式中，含有第一和第二多晶型物的本发明的固体形式包含至少10％的第一多晶型物。在另一种实施方式中，固体形式包含至少20％的第一多晶型物。又一实施方式包含至少30％、至少40％或至少50％的第一多晶型物。本领域的技术人员应当认识到，可以存在很多这样的不同量的数种多晶型物的这样的组合。

在下面的讨论中，给出了各种多晶型物的X射线衍射和红外吸收数据。尽管所测量的衍射角表示成小数点后两位，但应当理解，衍射角的精度如上所述为±0.1°。

A.IV型多晶型物(甲醇溶剂化物)

化合物I的IV型多晶型物可以通过在甲醇中对由式1表示的化合物8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮进行磷酸化来制备。

在75％的相对湿度下，化合物I的IV型多晶型物可在40℃下物理和化学稳定至少3个月。

化合物I的IV型多晶型物的水溶解度在pH为5.4时为4.5mg/mL。

如本文所述测量IV型的X射线粉末衍射图样，在下列近似衍射角(2θ)处具有峰：8.20、13.52、14.88、16.48、18.08、19.14、20.26、21.06、22.08、23.00、24.80、25.54、26.42、27.14、28.36、29.02、29.92、30.58、32.48、33.42、34.8、35.32、36.22、36.78、37.44、39.08。图10提供了IV型的X射线粉末衍射图样。

如本文所述测量IV型的红外吸收光谱，在下列近似位置(cm^-1)具有谱带：536.57、600.07、634.53、657.47、792.30、840.23、859.36、873.69、896.83、951.68、1021.79、1092.70、1135.05、1215.91、1259.88、1320.12、1352.07、1366.62、1418.17、1449.57、1468.60、1508.23、1578.49、1613.42、2366.47、2741.05、3020.46、3316.12。图11提供了IV型多晶型物的红外吸收光谱。

图12所示的IV型的DSC热谱图表明，在5℃/分钟的扫描速率下，吸热开始于204.0℃。

B.I型多晶型物(水合物A)

化合物I的I型多晶型物是水合物。化合物I的I型多晶型物可以通过用水处理IV型多晶型物(MeOH溶剂化物)来制备。

在75％的相对湿度下，化合物I的I型多晶型物可在40℃下化学稳定至少3个月，但在此条件下，它会在一星期后转化为III型(水合物B)。I型可在环境条件下物理稳定至少3个月。

化合物I的I型多晶型物的水溶解度在pH为5.4时为2.8mg/mL。

如本文所述测量I型的X射线粉末衍射图样，在下列近似衍射角(2θ)处具有峰：10.56、10.88、11.14、11.54、13.46、13.90、14.30、15.20、16.34、17.12、18.02、19.30、20.02、20.72、21.22、21.76、22.50、22.94、23.70、24.00、24.32、25.02、25.54、26.22、26.60、27.20、27.76、29.02、29.38、29.74、31.26、31.76、32.12、33.52、35.78。图1提供了I型的X射线粉末衍射图样。

如本文所述测量I型的红外吸收光谱，在下列近似位置(cm^-1)具有谱带：520.70、605.60、669.72、705.80、785.46、840.18、870.55、895.86、958.01、1017.72、1066.76、1131.33、1220.68、1257.70、1321.43、1346.32、1366.48、1421.79、1452.75、1476.19、1509.10、1578.58、1609.21。图2提供了I型多晶型物的红外吸收光谱。

图3所示的I型的DSC热谱图表明，在5℃/分钟的扫描速率下，吸热开始于202℃。

C.II型多晶型物(无水形式)

化合物I的II型多晶型物是无水形式。II型可以通过I型的脱水来制备。

化合物I的II型多晶型物可在环境条件下稳定至少3个月。化合物I的II型多晶型物可在75％的相对湿度下、在40℃下一星期后，或在90％的相对湿度下、在25℃下隔夜后转化为III型(水合物B)。

化合物I的II型多晶型物的水溶解度在pH为5.4时为3.0mg/mL。在3.0-8.0的pH范围内对II型的pH溶解度进行研究。此研究中使用的缓冲体系对于3.0和4.0的pH为50mM磷酸铵，对于5.0-8.0的pH为50mM磷酸钠缓冲液。溶解度结果示于表1和图15。可以看出，II型的溶解度随着pH从3.0升至8.0而降低。因为II型是磷酸盐并且在pH溶解度研究中使用了磷酸盐缓冲液，所以在这些缓冲系统中测定的溶解度由于共离子效应而低于水中的溶解度。

表1.II型的pH溶解度特性

缓冲液pH	溶解度(mg/mL)
		3	0.46
4	0.39
		5	0.37
6	0.32
		7	0.25
8	0.19

如本文所述测量II型的X射线粉末衍射图样，在下列近似衍射角(2θ)处具有峰：7.02、11.22、12.12、14.00、14.44、15.36、18.12、20.12、20.92、22.52、23.12、25.28、26.96、28.00、30.02、31.40、32.04、33.72、34.62、36.66、37.26、39.04。图4提供了II型的X射线粉末衍射图样。

如本文所述测量II型的红外吸收光谱，在下列近似位置(cm^-1)具有谱带：514.55、552.15、595.96、662.04、683.16、784.79、842.83、878.85、958.55、1017.68、1057.72、1129.87、1259.81、1320.16、1342.76、1367.10、1455.18、1508.93、1578.68、1610.29、2345.53、2375.37、2756.52、3015.19、3277.71。图5提供了II型多晶型物的红外吸收光谱。

图6所示的II型的DSC热谱图表明，在5℃/分钟的扫描速率下，吸热开始于205℃。

D.III型多晶型物(水合物B)

化合物I的III型多晶型物是水合物。化合物I的III型多晶型物可以通过I型或II型的水合来制备。

在75％的相对湿度下，化合物I的III型多晶型物可在40℃下物理和化学稳定至少3个月。

化合物I的III型多晶型物的水溶解度在pH为5.4时为2.7mg/mL。

如本文所述测量III型的X射线粉末衍射图样，在下列近似衍射角(2θ)处具有峰：10.66、10.96、11.62、13.54、15.28、16.42、19.36、20.80、21.30、21.86、22.56、23.28、23.78、24.06、24.42、25.12、26.30、26.62、27.32、27.84、28.32、29.10、29.50、29.80、30.24、31.84、32.20、32.58、35.86。图7提供了III型的X射线粉末衍射图样。

如本文所述测量III型的红外吸收光谱，在下列近似位置(cm^-1)具有谱带：521.02、545.63、599.97、672.96、704.78、786.38、811.92、839.21、870.68、897.67、956.56、1017.24、1076.05、1131.23、1222.77、1256.88、1325.51、1346.28、1365.33、1421.86、1451.44、1478.91、1509.39、1578.35、1607.08、2300.20、2346.17、2502.23、2828.24、3011.62、3299.59、3536.14。图8提供了III型多晶型物的红外吸收光谱。

图9所示的III型的DSC热谱图表明，在5℃/分钟的扫描速率下，吸热开始于203℃。

E.V型多晶型物(水合物C)

在II型的稳定性研究过程中，当将其在75％的相对湿度下、在40℃下保存6个月时，形成化合物I的V型多晶型物。化合物I的V型多晶型物可在室温下物理和化学稳定至少3个月。

化合物I的V型多晶型物的水溶解度在pH为5.4时为3.0mg/mL。

如本文所述测量V型的X射线粉末衍射图样，在下列近似衍射角(2θ)处具有峰：8.64、9.05、10.26、10.56、10.84、13.88、14.85、15.24、16.24、16.59、17.07、18.26、18.56、19.26、19.56、20.31、21.16、21.61、22.38、22.96、23.40、24.04、24.34、24.92、25.46、25.78、26.22、26.59、27.10、27.60、27.88、28.24、29.03、30.08、30.44、31.54、32.08、32.52、36.45、36.90、37.14、37.58、37.74、38.30、39.00。图13提供了V型的X射线粉末衍射图样。

如本文所述测量V型的红外吸收光谱，在下列近似位置(cm^-1)具有谱带：955.28、1019.70、1045.84、1067.25、1092.06、1104.99、1133.50、1260.13、1320.27、1366.85、1418.85、1450.75、1470.01、1579.05、1613.39、1632.61、2761.48、3024.44、3278.09、3312.93。图16提供了V型多晶型物的红外吸收光谱。

图17所示的V型的DSC热谱图在199.40℃处具有吸热，并分别在57.29℃和110.73℃处具有去溶剂峰。

F.VI型多晶型物

通过获得II型的含水浆液并在100℃下整夜加热，可以制备化合物I的VI型多晶型物。如图14所示，转化在80℃时开始，并在100℃下整夜保存之后转化完全。

如本文所述测量VI型的X射线粉末衍射图样，在下列近似衍射角(2θ)处具有峰：8.44、8.71、14.78、15.10、15.73、16.06、16.24、16.9、17.2、19.99、22.32、22.60、22.94、23.49、23.84、24.55、25.30、25.48、27.74、26.02、27.47、27.84、28.10、28.40、34.02、35.12、35.54、35.88。图18提供了VI型多晶型物的X射线粉末衍射图样。

如本文所述测量VI型的红外吸收光谱，在下列近似位置(cm^-1)具有谱带：535.82、786.11、841.00、954.18、1020.17、1133.96、1216.98、1260.79、1320.11、1367.35、1418.66、1450.88、1470.60、1508.44、1579.24、1613.51、2410.94、2760.82、3025.77、3277.18。图19提供了VI型多晶型物的红外吸收光谱。

图20所示的VI型的DSC热谱图在219.68℃处具有吸热，并分别在88.42℃和112℃处具有去溶剂峰。

G.非晶物

非晶物可以通过化合物I的水溶液的冷冻干燥来制备。

所述非晶物的X射线粉末衍射图样的特征是从4-40°的典型的非晶物的宽峰，而没有任何结晶物的尖峰特征。图21提供了所述非晶物的X射线粉末衍射图样。

如本文所述测量所述非晶物的红外吸收光谱(示于图22)，在下列近似位置(cm^-1)具有谱带：433、505、518、596、609、664、674、705、746、785、856、896、937、955、1020、1066、1106、1132、1217、1260、1319、1349、1367、1419、1452、1472、1508、1579、2300、2349、2407、2830、3031、3256。

图23所示的所述非晶物的拉曼光谱图包括拉曼位移峰(cm^-1)，所述位移峰的位置约为1068、1323、1350、1371、1453、1556、1581、1616。

图24所示的所述非晶物的DSC热谱图的特征是缺少孤立的峰。

II.本发明的药物组合物

本发明的活性剂(即，本文所述的化合物I的多晶型物或包含两种或多种这样的多晶型物或非晶物的固体形式)可以被配制成适于哺乳动物医疗用途的药物组合物。可以采用任何合适的给药途径向患者提供有效剂量的化合物I的I、II、III、IV、V、VI型多晶型物和非晶物的任何一种。例如，可以使用口服配制剂或肠胃外配制剂等。剂型包括胶囊、片剂、分散液、悬浮液等，例如肠衣胶囊和/或片剂、包含化合物I的肠衣颗粒的胶囊和/或片剂。在所有剂型中，化合物I的I、II、III、IV、V、VI型多晶型物和非晶物可以与其他合适的成分混合。组合物可以常规地存在于单位剂型中，并通过药学领域中的任何方法制备。本发明的药物组合物包括治疗有效量的活性剂、一种或多种惰性的药学上可接受的载体、可选的任何其他的治疗成分、稳定剂等。载体必须是药学上可接受的，这是指载体与配制剂中的其他成分相容并且不会不利地对其接收者造成损害。此组合物还可包括稀释剂、缓冲剂、粘结剂、崩解剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂(包括抗氧化剂)、调味剂、掩味剂、无机盐(例如氯化钠)、抗菌剂(例如苯扎氯铵)、甜味剂、抗静电剂、表面活性剂(例如，可从BASF购得的聚山梨酸酯如“TWEEN 20”和“TWEEN 80”，以及Pluronic嵌段共聚物如F68和F88)、脱水山梨醇酯、脂类(例如，磷脂如卵磷脂和其他磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、脂肪酸和脂肪酯、类固醇(例如胆固醇))以及螯合剂(例如EDTA、锌和其他合适的阳离子)。适用于本发明的组合物中的其他药物赋形剂和/或添加剂被列于“Remington：The Science & Practiceof Pharmacy”，第19版，Williams & Williams，(1995)、“Physician’sDesk Reference”，第52版，Medical Economics，Montvale，NJ(1998)和“Handbook of Pharmaceutical Excipients”，第3版，Ed.A.H.Kibbe，Pharmaceutical Press，2000。本发明的活性剂所配制成的组合物包括适合口服给药、直肠给药、局部给药、鼻腔给药、眼部给药或肠道外给药(包括腹腔、静脉、皮下或肌肉注射)的那些。

配制剂中活性剂的量可以根据各种因素(包括剂型、治疗的病症、目标患者人群和其他考虑)而改变，并且通常容易由本领域的技术人员确定。治疗有效量应当是调控、调节或抑制PARP酶所需的量。实际上，该量依赖于具体活性剂、治疗的病症的严重程度、患者人群、配制剂稳定性等可以有很大的变化。组合物通常包含从约0.001wt％至约99wt％之间任何量的活性剂，优选约0.01wt％至约5wt％的活性剂，更优选约0.01wt％至约2wt％的活性剂，该量还依赖于组合物中所含的赋形剂/添加剂的相对量。

以常规剂型对本发明的药物组合物进行给药，常规剂型通过依照传统方法使治疗有效量的作为活性成分的活性剂与一种或多种合适的药物载体相结合来制备。这些方法可以包括混合、粒化及压缩或者溶解这些成分以形成所需制剂。

所用的药物载体可为固体或液体。示例性的固体载体包括糖(例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇)、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。示例性的液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、水等。类似地，载体可包括本领域已知的延时或缓释材料，例如带蜡或不带蜡的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸甲酯等。

可以使用各种药物形式。因此，如果使用固体载体，则制剂可被制成片剂，以粉末或颗粒形式装入硬明胶胶囊，或者以圆形或菱形药片的形式。固体载体的量可以变化，但是通常应为约25mg至约1g。如果使用液体载体，则制剂的形式可为糖浆、乳剂、软明胶胶囊、在安瓿或小瓶中的无菌的可注射溶液或悬浮液或者无水的液体悬浮液。

为了得到稳定的水溶性剂型，化合物I可被溶解在有机或无机酸的水溶液(例如，0.3M的琥珀酸或柠檬酸溶液)中。如果不能得到可溶盐形式，则活性剂可以被溶解在合适的共溶剂或共溶剂组合中。合适的共溶剂的例子包括但不限于，乙醇、丙二醇、聚乙二醇300、聚山梨酸酯80、甘油等，其浓度范围为总体积的0-60％。组合物也可以是化合物I在合适的含水介质(例如水或等渗盐水或右旋糖溶液)中的溶液形式。

应当认识到，根据所用的具体结晶形式、配制成的具体组合物、给药方式和具体位置、宿主以及所治疗的疾病，本发明的组合物中所用的活性剂的实际剂量可以改变。本领域的技术人员采用常规的确定剂量的试验并结合试验数据，可以确定给定条件下的一种药剂的最佳剂量。对于口服给药，通常采用的示例性的每日剂量为约0.001-1000mg/kg体重，更优选约0.001-50mg/kg体重，治疗过程以合适的时间间隔重复。前药给药通常以与完全活性形式的重量水平化学等价的重量水平计量。在实施本发明时，最适合的给药途径以及治疗剂量大小依赖于治疗的疾病的性质和严重程度。剂量和剂量频率也可以根据各个患者的年龄、体重和反应而变化。通常，合适的口服剂型可以包括每日总剂量为5-250mg的剂量范围，可以单次给药或平均分成多次给药。优选的剂量范围为10-80mg。通常，合适的肠胃外剂型可以包括每日总剂量为5-200mg的剂量范围，可以单次给药或平均分成多次给药。优选的剂量范围为10-100mg。

本发明的组合物可以以通常已知的用于制备药物组合物的方法来制造，例如使用常规技术，如混合、溶解、粒化、糖衣丸制作、细磨、乳化、包胶、包埋或冷冻干燥。可以以使用一种或多种生理上可接受的载体的常规方式来配制药物组合物，其中载体可以选自赋形剂和辅助剂，以便于将活性化合物加工成可用作药物的制剂。

对于口服给药，可以通过将活性剂与本领域已知的药学上可接受的载体相结合来配制化合物。这样的载体可使本发明的化合物被配制成可被待治疗的患者口服的片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等。使用与活性剂混合的固体赋形剂，可以得到用于口服的药物制剂，可选地对所得混合物进行研磨，并且在添加合适的辅助剂之后处理颗粒混合物(如果需要)，从而得到片剂或糖衣丸核。合适的赋形剂包括：填料，例如包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇的糖；以及纤维素制品，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、树胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以添加崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐(例如海藻酸钠)。

对糖衣丸核提供合适的包衣。为此目的，可以使用浓缩的糖溶液，其可以可选地包含阿拉伯树胶、聚乙烯吡咯烷酮、Carbopol凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可被添加到片剂或糖衣包衣中，用于标识或描述不同的活性剂组合。

可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推合式(push-fit)胶囊以及由明胶和增塑剂(例如甘油或山梨糖醇)制成的柔软的密封胶囊。推合式胶囊可以包含与填料(例如乳糖)、粘结剂(例如淀粉)和/或润滑剂(例如滑石或硬脂酸镁)以及可选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性剂可以溶解或悬浮在合适的液体(例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇)中。此外，可以添加稳定剂。用于口服给药的所有配制剂应当是以适于此种给药的剂量。对于颊给药，组合物可以是以常规方法配制的片剂或锭剂。

对于鼻腔给药或吸入式给药，根据本发明使用的化合物适合以加压包装或喷雾器形成的喷雾形式来输送，并使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。当采用加压喷雾时，可以通过提供用来输送经计量的量的阀来确定剂量单位。用于吸入器或吹入器等的明胶胶囊和药盒可被配制成包含本化合物与合适的粉末基料(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

活性剂可被配制成用于通过注射的肠胃外给药，例如通过团注或连续输液。用于注射的制剂可以以单位剂量形式存在，例如存在于添加保护剂的安瓿或多剂量容器中。该组合物可以具有如含油或含水载体中的悬浮液、溶液或乳液形式，并且可以包含例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的调配剂。

用于肠胃外给药的药物配制剂包括活性剂的悬浮液，并且可以被制成适当的含油的注射悬浮液。合适的亲油性溶剂或载体包括脂肪油(例如芝麻油)或合成的脂肪酸酯(例如油酸乙酯或甘油三酸酯)或脂质体。含水的注射悬浮液可以包含可增大悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或右旋糖苷。可选地，悬浮液还可包含合适的稳定剂或可提高活性剂的溶解度的试剂，从而可以制备高浓度溶液。

对于向眼部给药，活性剂可在药学上可接受的眼用载体中被输送，以使化合物保持与眼睛表面接触足够长的时间，来允许化合物渗透眼睛的角膜和内部区域，包括例如前房、后房、玻璃体、房水、玻璃液、角膜、虹膜/睫状体、晶状体、脉络膜/视网膜和巩膜。药学上可接受的眼用载体可以例如是油膏、植物油或封装材料。本发明的化合物也可被直接注射进玻璃液和房水或者进行结膜下(subtenon)注射。

或者，活性成分可以是粉末形式，在使用之前与合适的载体(例如无菌的无热原的水)组合。化合物还可以被配制成例如包含如可可油或其他甘油酯的常规栓剂基料的直肠或阴道组合物，例如栓剂或滞留型灌肠剂。

除了上述配制剂以外，多晶型物还可被配制成储存制剂。这样的长效配制剂可以通过植入(例如皮下植入或肌内植入)或通过肌肉注射来给药。因此，例如，多晶型物可以与合适的聚合或疏水材料(例如，作为可接受的油中的乳液)或离子交换树脂一起配制，或者配置为略溶性衍生物(例如作为略溶性盐)。

此外，可使用缓释系统来输送活性剂，例如使用含治疗剂的固体疏水性聚合物的半透性基体。已经存在各种缓释材料，这些缓释材料对于本领域的技术人员是已知的。缓释胶囊可以根据其化学特性用数周直到超过100天的时间来释放化合物。依赖于治疗剂的化学特性和生物稳定性，可以使用用于蛋白质稳定化的附加方案。

药物组合物还可以包含合适的固相和凝胶相的载体或赋形剂。这样的载体或赋形剂的例子包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和例如聚乙二醇的聚合物。

III.本发明的多晶型物的使用方法

本发明的化合物I的多晶型物适用于调节聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的活性。更具体地，此多晶型物适合用作化疗增敏剂，其可以增强放射疗法或细胞毒性药物(其机理依赖于DNA破坏)的效力。这些药物包括但不限于，替莫唑胺(temozolomide)(SCHERING)、依立替康(irinotecan)(PFIZER)、托泊替康(topotecan)(GLAXOSMITHKLINE)、顺铂(cisplatin)(BRISTOL MEYERS SQUIBB；AMPHARM PARTNERS；BEDFORD；GENSIA SICOR PHARMS；PHARMACHEMIE)和阿霉素氢氯化物(AM PHARM PARTNERS；BEDFORD；GENSIA；SICOR PHARMS；PHARMACHEMIE；ADRIA；ALZA)。

本发明的化合物I的多晶型物还适用于增强对β细胞中的Reg基因和HGF基因表达的诱导，因此促进朗格罕氏岛的胰腺β细胞的增殖并抑制这些细胞调亡。此外，本发明的化合物I的多晶型物适用于制造化妆品，例如晒后涂霜。

通常以药物组合物的形式来给药治疗有效量的本发明的药剂，从而通过调控或调节PARP来治疗疾病。“有效量”意指当因治疗需要向哺乳动物(包括人类)进行给药时，药剂的量足以对由一种或多种PARP酶的活性介导的疾病产生治疗作用。因此，本发明的化合物的治疗有效量是足以调控、调节或抑制一种或多种PARP酶活性的量，以使受该活性介导的疾病病症得到减轻或缓解。给定的化合物的有效量会根据例如疾病病症及其严重程度以及需要治疗的哺乳动物的特征和条件(例如重量)的因素而变化，但是仍然可由本领域的技术人员通过常规方法来确定。“治疗”意指至少使哺乳动物(包括人类)的至少部分地受一种或多种PARP酶的活性影响的疾病病症缓解，并且包括：防止哺乳动物体内出现疾病病症，特别是当发现该哺乳动物倾向于具有该疾病病症但并未作出诊断时；调控和/或抑制该疾病病症；和/或减轻该疾病病症。示例性的疾病病症包括癌症。

通过本领域的技术人员已知的包括体内和/或体外化验的任何方法，可以测定作为PARP活性调节剂的本发明的多晶型物的活性。合适的用于测定活性的化验方法的例子包括那些描述在下列文献中的化验方法：美国专利No.6,495,541和美国临时专利申请No.60/612,458，通过引用将其整体结合于此。

本发明还涉及治疗由PARP活性介导的疾病病症的治疗方法，所述疾病病症例如是癌症以及各种与氧化或氧化氮诱导应激和随后的PARP过度活化相关的疾病和中毒状态。这样的病症包括但不限于，神经病和神经变性病(例如帕金森症、老年痴呆症)、心血管病(例如心肌梗塞、缺血再灌注损伤)、糖尿病性血管功能障碍、顺铂所致肾中毒。本发明的治疗方法包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含任何一种多晶型物的药物组合物或以上讨论的药物组合物。

本发明还涉及治疗由PARP活性介导的疾病病症的组合治疗方法，包括对需要治疗的哺乳动物给药治疗有效量的包含任何一种多晶型物的药物组合物或以上讨论的药物组合物，以及治疗有效量的一种或多种选自抗肿瘤剂、抗血管生成剂、信号转导抑制剂和抗增殖剂的物质。这样的物质包括公开在PCT公布WO 00/38715、WO 00/38716、WO 00/38717、WO00/38718、WO 00/38719、WO 00/38730、WO 00/38665、WO 00/37107和WO 00/38786中的那些，通过引用将这些文献整体结合于此。

抗肿瘤剂的例子包括替莫唑胺(SCHERING)、依立替康(PFIZER)、托泊替康(GLAXO SMITHKLINE)、顺铂(BRISTOLMEYERS SQUIBB；AM PHARM PARTNERS；BEDFORD；GENSIASICOR PHARMS；PHARMACHEMIE)和阿霉素氢氯化物(AM PHARMPARTNERS；BEDFORD；GENSIA；SICOR PHARMS；PHARMACHEMIE；ADRIA；ALZA)。

抗肿瘤剂的其他例子包括有丝分裂抑制剂，例如，诸如长春瑞宾(vinorelbine)、vindescine和长春新碱之类的长春花碱衍生物、秋水仙碱allochochine、halichondrine、N-苯甲酰基三甲基-甲基醚秋水仙酸、dolastatin 10、maystansine、rhizoxine、紫杉烷，例如紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(泰索帝(Taxotere))、2’-N-[3-(二甲基氨基)丙基]戊二酸盐(紫杉醇衍生物)、硫代秋水仙素、三苯甲基半胱氨酸、替尼泊苷(teniposide)、氨甲喋呤、硫唑嘌呤、fluorouricil、阿糖胞苷、2’2’-二氟脱氧胞苷(吉西他宾(gemcitabine))、阿霉素和丝裂霉素。烷基化剂，例如卡铂(carboplatin)、奥铂(oxiplain)、异丙铂、N-乙酰基-DL-肌氨酸-L-亮氨酸的乙基酯(Asaley或Asalex)、1，4-环己二烯-1，4-二氨基甲酸、2，5-二(1-吖丙啶基)-3，6-二氧-二乙基酯(地吖醌(diaziquone))、1，4-二(甲磺酰氧)丁烷(bisulfan或leucosulfan)、氯脲菌素(chlorozotocin)、克罗米松(clomesone)、氰吗啉代阿霉素、cyclodisone、dianhydroglactitol、氟多潘(fluorodopan)、hepsulfam、丝裂霉素C、羟胺硫蒽酮丝裂霉素C、米托唑酰胺、1-(2-氯乙基)-4-(3-氯丙基)-哌嗪二氢氯化物、哌嗪二酮、哌泊溴烷、甲基丝裂霉素、螺旋乙内酰脲芥、替罗昔隆(teroxirone)、四价铂、硫替派、三乙烯蜜胺、尿嘧啶氮芥、二(3-甲磺酰氧丙基)胺氢氯化物、丝裂霉素、亚硝基脲药剂例如环己基-氯乙基亚硝基脲、甲基环己基-氯乙基亚硝基脲、1-(2-氯乙基)-3-(2，6-二氧-3-哌啶基)-1-亚硝基脲、二(2-氯乙基)亚硝基脲、甲基苄肼、氮烯咪胺、氮芥相关的化合物例如甲基氯乙胺、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、雌氮芥磷酸钠和strptozoin。DNA抗代谢剂，例如5-氟脲嘧啶、阿糖胞嘧啶、羟基脲、2-[(3-羟基-2-吡啶基)亚甲基]-肼胺硫脲、脱氧氟脲嘧啶、5-羟基-2-甲酰基吡啶、缩氨基硫脲、α-2’-脱氧-6-硫鸟苷、阿非迪霉素(aphidicolin)甘氨酸酯、5-阿扎脱氧胞苷、β-硫鸟嘌呤脱氧核苷、环胞苷、胍唑、肌苷甘氨二醛、macbecin II、吡唑并咪唑、克拉屈滨(cladribine)、喷司他丁(pentostatin)、硫鸟嘌呤、巯基嘌呤、争光霉素、2-氯脱氧腺苷、胸苷酸合成酶抑制剂例如雷替曲塞(raltitrexed)和培美曲塞(pemetrexed)二钠、克罗拉滨(clofarabine)、氟脲苷和氟达拉滨(fludarabine)。DNA/RNA抗代谢剂，例如L-阿拉诺新(alanosine)、5-氮杂胞苷、阿西维辛(acivicin)、氨基喋呤及其衍生物例如N-[2-氯-5-[[(2，4-二氨基-5-甲基-6-喹唑啉基)甲基]氨基]苯甲酰基]-L-天冬氨酸、N-[4-[[(2，4-二氨基-5-乙基-6-喹唑啉基)甲基]氨基]苯甲酰基]-L-天冬氨酸、N-[2-氯-4-[[(2，4-二氨基喋呤基)甲基]氨基]苯甲酰基]-L-天冬氨酸、可溶性贝克抗叶酸剂、二氯烯丙基指甲花醌、布喹那(brequinar)、ftoraf、二氢-5-氮杂胞苷、氨甲喋呤、N-(磷基乙酰基)-L-天冬氨酸四钠盐、吡唑并呋喃、三甲曲沙(trimetrexate)、普卡霉素(plicamycin)、放线菌素D、cryptophycin和类似物例如cryptophycin-52，或例如公开在欧洲专利申请No.239362中的优选的抗代谢剂中的一种，例如N-(5-[N-(3，4-二氢-2-甲基-4-氧喹唑啉基-6-甲基)-N-甲基氨基]-2-噻吩基)-L-谷氨酸；生长因子抑制剂；细胞周期抑制剂；插入型抗生素，例如阿霉素和争光霉素；蛋白质，例如干扰素；以及抗激素剂，例如抗雌激素剂如Nolvadex^TM(它莫西芬(tamoxifen))，或例如抗雄激素剂如Casodex^TM(4’-氰基-3-(4-氟苯基磺酰基)-2-羟基-2-甲基-3’-(三氟甲基)丙烯苯胺)。这种联合治疗可以通过同时、顺序或分别服用单个治疗组分的方式来实现。

抗血管生成剂包括MMP-2(基质金属蛋白酶2)抑制剂、MMP-9(基质金属蛋白酶9)抑制剂和COX-II(环氧合酶II)抑制剂。可用的COX-II抑制剂的例子包括CELEBREX^TM(alecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)、罗非考昔(rofecoxib)。可用的基质金属蛋白酶抑制剂的例子公开在WO96/33172(1996年10月24日公布)、WO 96/27583(1996年3月7日公布)、欧洲专利申请No.97304971.1(1997年7月8日提交)、欧洲专利申请No.99308617.2(1999年10月29日提交)、WO 98/07697(1998年2月26日公布)、WO 98/03516(1998年1月29日公布)、WO 98/34918(1998年8月13日公布)、WO 98/34915(1998年8月13日公布)、WO 98/33768(1998年8月6日公布)、WO 98/30566(1998年7月16日公布)、欧洲专利申请606,046(1994年7月13日公布)、欧洲专利公布931,788(1999年7月28日公布)、WO 90/05719(1990年3月31日公布)、WO 99/52910(1999年10月21日公布)、WO 99/52889(1999年10月21日公布)、WO 99/29667(1999年6月17日公布)、PCT国际申请No.PCT/IB98/01113(1998年7月21日提交)、欧洲专利申请No.99302232.1(1999年3月25日提交)、英国专利申请No.9912961.1(1999年6月3日提交)、美国临时专利申请No.60/148,464(1999年8月12日提交)、美国专利5,863,949(1999年1月26日授权)、美国专利5,861,510(1999年1月19日授权)和欧洲专利公布780,386(1997年6月25日公布)中，通过引用将这些文献的全部结合于此。优选的MMP-2和MMP-9抑制剂是具有很小或无活性的抑制MMP-1的那些。更优选相对其他基质金属蛋白酶(即MMP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、MMP-11、MMP-12和MMP-13)选择性抑制MMP-2和/或MMP-9的那些。

MMP抑制剂的例子包括AG-3340、RO32-3555、RS 13-0830和以下化合物：3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基]-(1-羟基氨基甲酰基-环戊基)-氨基]-丙酸；3-外-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-8-氧杂-双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸羟基酰胺；(2R，3R)1-[4-(2-氯-4-氟-苯甲基氧)-苯磺酰基]-3-羟基-3-甲基-哌啶-2-羧酸羟基酰胺；4-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-四氢-吡喃-4-羧酸羟基酰胺；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基]-(1-羟基氨基甲酰基-环丁基)-氨基]-丙酸；4-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-四氢-吡喃-4-羧酸羟基酰胺；3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-四氢-吡喃-3-羧酸羟基酰胺；(2R，3R)1-[4-(4-氟-2-甲基-苯甲基氧)-苯磺酰基]-3-羟基-3-甲基-哌啶-2-羧酸羟基酰胺；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基]-(1-羟基氨基甲酰基-1-甲基-乙基)-氨基]-丙酸；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰基]-(4-羟基氨基甲酰基-四氢-吡喃-4-基)-氨基]-丙酸；3-外-3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-8-氧杂-双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸羟基酰胺；3-内-3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰基氨基]-8-氧杂-双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸羟基酰胺；3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯甲酰基氨基]-四氢-呋喃-3-羧酸羟基酰胺；及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物。

信号转导抑制剂的例子包括可抑制EGFR(表皮生长因子受体)应答的药剂，例如EGFR抗体、EGF抗体和为EGFR抑制剂的分子；VEGF(血管内皮生长因子)抑制剂；和erbB2受体抑制剂，例如与erbB2受体结合的有机分子或抗体，例如HERCEPTIN^TM(Genentech，Inc.of SouthSan Francisco，California，USA)。

EGFR抑制剂描述在例如WO 95/19970(1995年7月27日公布)、WO 98/14451(1998年4月9日公布)、WO 98/02434(1998年1月22日公布)和美国专利5,747,498(1998年5月5日授权)中。EGFR抑制剂包括但不限于，单克隆抗体C225和抗EGFR 22Mab(ImClone SystemsIncorporated of New York，New York，USA)、化合物ZD-1839(AstraZeneca)、BIBX-1382(Boehringer Ingelheim)、MDX-447(Medarex Inc.of Annandale，New Jersey，USA)以及OLX-103(Merck &Co.of Whitehouse Station，New Jersey，USA)VRCTC-310(VentechResearch)和EGF融合毒素(Seragen Inc.of Hopkinton，Massachusetts)。

VEGF抑制剂，例如SU-5416和SU-6668(Sugen Inc.of South SanFrancisco，California，USA)，也可以与本发明的组合物组合或共同给药。VEGF抑制剂描述在例如WO 99/24440(1999年5月20日公布)、PCT国际申请PCT/IB99/00797(1999年5月3日)、WO 95/21613(1995年8月17日公布)、WO 99/61422(1999年12月2日公布)、美国专利5,834,504(1998年11月10日授权)、WO 98/50356(1998年11月12日公布)、美国专利5,883,113(1999年3月16日授权)、美国专利5,886,020(1999年3月23日授权)、美国专利5,792,783(1998年8月11日授权)、WO 99/10349(1999年3月4日公布)、WO 97/32856(1997年9月12日公布)、WO 97/22596(1997年6月26日公布)、WO98/54093(1998年12月3日公布)、WO 98/02438(1998年1月22日公布)、WO 99/16755(1999年4月8日公布)和WO 98/02437(1998年1月22日公布)，通过引用将这些文献的全部结合于此。某些具体VEGF抑制剂的其他例子是IM862(Cytran Inc.of Kirkland，Washington，USA)；抗VEGF单克隆抗体bevacizumab(Genentech，Inc.of South San Francisco，California)；以及angiozyme，来自Ribozyme(Boulder，Colorado)和Chiron(Emeryville，California)的合成核酸性酶。

ErbB2受体抑制剂，例如GW-282974(GlaxoWellcome plc)以及单克隆抗体AR-209(Aronex Pharmaceuticals Inc.of The Woodlands，Texas，USA)和2B-1(Chiron)，可以与本发明的组合物组合给药。这样的erbB2抑制剂包括描述在WO 98/02434(1998年1月22日公布)、WO99/35146(1999年7月15日公布)、WO 99/35132(1999年7月15日公布)、WO 98/02437(1998年1月22日公布)、WO 97/13760(1997年4月17日公布)、WO 95/19970(1995年7月27日公布)、美国专利5,587,458(1996年12月24日授权)和美国专利5,877,305(1999年3月2日授权)中的那些，通过引用将这些文献的全部结合于此。可用于本发明的erbB2受体抑制剂还描述在1999年1月27日提交的美国临时申请No.60/117,341和1999年1月27日提交的美国临时申请No.60/117,346中，通过引用将二者全部结合于此。

可以使用的其他抗增殖剂包括法尼基蛋白质转移酶的抑制剂和酪氨酸激酶PDGFr受体的抑制剂，包括在下列美国专利申请中公开和要求保护的化合物：09/221946(1998年12月28日提交)、09/454058(1999年12月2日提交)、09/501163(2000年2月9日提交)、09/539930(2000年3月31日提交)、09/202796(1997年5月22日提交)、09/384339(1999年8月26日提交)和09/383755(1999年8月26日提交)，以及在下列美国临时专利申请中公开和要求保护的化合物：60/168207(1999年11月30日提交)、60/170119(1999年12月10日提交)、60/177718(2000年1月21日提交)、60/168217(1999年11月30日提交)和60/200834(2000年5月1日提交)。通过引用将上述所有专利申请和临时专利申请的整体结合于此。

本发明的组合物还可以与可用于治疗异常细胞生长或癌症的其他药剂一起使用，这些药剂包括但不限于，能够增强抗肿瘤免疫应答的药剂，例如CTLA4(细胞毒性淋巴细胞抗原4)抗体和其他能够阻断CTLA4的药剂，以及抗增殖剂，例如其他法尼基蛋白质转移酶抑制剂。可用于本发明的具体CTLA4抗体包括公开在美国临时专利申请60/113,647(1998年12月23日提交)中的那些，通过引用此文献的整体结合于此。

通过引用将所有参考文献的公开内容的整体结合在本文中。

实施例

以下实施例用于进一步说明本发明的各种多晶型物(即，化合物I的I、II、III、IV、V、VI型多晶型物和非晶物)的制备方法，但这些实施例无意限制本文定义或权利要求中要求的本发明的范围。除非另有说明，所用的所有温度均以摄氏度表示，所有份数和百分比均以重量计。

实施例1：化合物I的IV型多晶型物(甲醇溶剂化物)的制备和表征

通过以下方法制备化合物I的IV型多晶型物。在500mL的圆底烧瓶中装入由式1表示的化合物8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮(1.65g，5.10mmol，1.0当量)和甲醇(200mL)。搅拌混合物直到获得澄清溶液(约10分钟)。添加0.5M磷酸在甲醇中的溶液(11.0mL，5.87mmol，1.15当量，通过将0.7g 85％的磷酸溶解在11.0mL甲醇中来制备)。将所得混合物在环境温度下搅拌30分钟。将得到的固体过滤并在45℃下干燥，得到8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的磷酸盐的IV型多晶型物(1.43g)。

图10为化合物I的IV型多晶型物的X射线粉末衍射图。图11为IV型多晶型物的红外吸收光谱图。化合物I的IV型多晶型物通过差示扫描量热分析来进一步表征(图12)。

实施例2：化合物I的I型多晶型物(水合物A)的制备和表征

通过以下方法制备化合物I的多晶型物I。在50mL的圆底烧瓶中装入用10mL水浆化的化合物I的IV型多晶型物(甲醇溶剂化物)(1.0g)，并在环境温度下搅拌18-24小时。将得到的固体过滤、在45℃下干燥，得到化合物I的I型多晶型物(0.67g)。通过NMR对产物进行不含甲醇的分析。

图1为化合物I的I型多晶型物的X射线粉末衍射图。图2为I型多晶型物的红外吸收光谱图。化合物I的I型多晶型物通过差示扫描量热分析来进一步表征(图3)。

实施例3：化合物I的II型多晶型物(无水形式)的制备和表征

II型如下制备：

(a)在60℃下整夜加热I型；

(b)在室温下在真空下整夜保持I型；或

(c)在0％的相对湿度下在25℃下保持I型5小时以上。

图4为化合物I的II型多晶型物的X射线粉末衍射图。图5为II型多晶型物的红外吸收光谱图。化合物I的II型多晶型物通过差示扫描量热分析来进一步表征(图6)。

在干燥剂的存在下，在2-8℃下保存II型。

实施例4：化合物I的III型多晶型物(水合物B)的制备和表征

化合物I的III型多晶型物如下制备：

(a)在25℃下，使I型暴露在90％的相对湿度下5小时以上；

(b)在40℃下，使I型暴露在75％的相对湿度下1星期；或

(c)在40℃下，使II型整夜暴露在75％的相对湿度下。

图7为化合物I的III型多晶型物的X射线粉末衍射图。图8为III型多晶型物的红外吸收光谱图。化合物I的III型多晶型物通过差示扫描量热分析来进一步表征(图9)。

实施例5：化合物I的V型多晶型物(水合物C)的制备和表征

在75％的相对湿度下在40℃下保存6个月后，在对II型进行稳定性研究时形成化合物I的V型多晶型物。化合物I的V型多晶型物可在室温下物理和化学稳定至少3个月。

化合物I的V型多晶型物的水溶解度在pH为5.4时为3.0mg/mL。

图13提供了化合物I的V型多晶型物的X射线粉末衍射图。图16为V型多晶型物的红外吸收光谱图。V型的DSC热谱图在199.40℃处具有吸热，并分别在57.29℃和110.73℃处具有去溶剂峰(图17)。

实施例6：化合物I的VI型多晶型物的制备和表征

通过获得II型的含水浆液并在100℃下整夜加热，可以制备化合物I的VI型多晶型物。如图14所示，转化在80℃时开始，并在100℃下整夜保存之后转化完全。

VI多晶型物具有上文所述的特征。图18为化合物I的VI型的X射线粉末衍射图。图19为化合物I的VI型多晶型物的红外吸收光谱。图20为化合物I的VI型多晶型物的差示扫描量热分析(DSC)热谱图。

实施例7：使用化合物I的II型多晶型物(无水形式)制备药物组合物

A.完整组合物

下面提供了使用化合物I的II型多晶型物(无水形式)制备临床用途的注射用冻干粉末12mg/小瓶(作为游离碱)。

首先将药物产品配制成用于冻干的化合物I溶液。用于冻干的化合物I溶液的定量组合物示于表2。

表2.用于冻干的化合物I溶液，3mg/mL(作为游离碱)

用于注射的化合物I的冻干粉末的定量单位组合物示于表3。

表3.用于注射的干燥粉末，12mg/小瓶(作为游离碱)

B.超额量

用于注射的化合物I的冻干粉末的临床组合物，12mg/小瓶(作为游离碱)，包含0.45mg/小瓶(作为游离碱)的理论超额量(overage)。此超额量补偿了用6mL灭菌注射水(SWFI)重悬后小瓶中的固体体积，并确保2.02mg/mL(作为游离碱)药物溶液的输送。

C.容器

下面列出了化合物I的注射用冻干粉末的封装系统的部件：

D.用于剂型选择的开发药学原理

注射用冻干粉末是用于给药的常规剂型。临床配制剂包含作为填充剂和渗透压调节剂的甘露醇。用6mL SWFI重悬药物产品，得到澄清、低渗的2.02mg/mL(作为游离碱)溶液。重悬的药物产品将用可接受的等渗灭菌稀释剂进行稀释，用于输液。

临床药物产品最初被设计成用4mL的SWFI重悬，以得到得到澄清、等渗的3mg/mL(作为游离碱)溶液。在药物产品稳定性评价过程中，观察和研究溶液中的朦胧度/浑浊度。朦胧度/浑浊度是药物多晶型物(水合物B)的药物结晶造成的。III型多晶型物(水合物B)的水溶解度在pH为5.4时为2.7mg/mL，因而非常接近最初期望的药物产品重悬浓度(3mg/mL)。将SWFI重悬体积从4mL变为6mL，以确保药物完全溶解。得到的药物产品溶液的最终浓度为2.02mg/mL(作为游离碱)，适当地低于III型多晶型物(水合物B)的水溶解度。

E.临床制造配方、制造工艺、工艺中控制和装配工艺

下面列出了化合物I的注射用冻干粉末(12mg/小瓶(作为游离碱))的制造工艺。现在的临床批量为9.3L每制造期。制造配方与临床组合物相同(参见表2和表3)。

a)将注射用水(WFI)总量的大约75％加入混合容器；

b)在搅拌的同时添加所需量的甘露醇并使其完全溶解；

c)将WFI/甘露醇溶液加热至约58℃，添加所需量的化合物I药物物质，并混合直到完全溶解；

d)用WFI使溶液达到最终体积(重量)，混合10分钟，并将该溶液冷却至室温；

e)取等量小份，用于工艺中控制测试(即外观、pH、密度和UV分析)；

f)通过0.45μm和0.22μm的膜过滤器对用于冻干的本体溶液进行无菌过滤，并在无菌条件下将4.15mL(包括0.15mL的过量)填充到10mL/20mm的I型琥珀色玻璃小瓶内；

g)将具有部分插入的塞子的被充满的小瓶冷冻干燥；

h)在冷冻干燥周期结束时，在室温下在低真空下用氮和塞子回填小瓶；

i)用铝端盖密封冻干小瓶；

j)将小瓶进行冷藏。

实施例8：化合物I的非晶物的制备和表征

通过将化合物I的II型多晶型物(无水形式)以4.46mg的浓度溶解在灭菌注射水中来制备化合物I的非晶物。将2mL此溶液填充到10mL的清洁的I型小瓶中，并在FTS LyoStar冷冻干燥器(S/N LSACC3)中冷冻干燥。冷冻干燥周期描述如下。

将产品冷冻至-50℃，然后在-30℃、-20℃和-15℃下分别真空干燥12小时，完成第一干燥步骤。保持真空压力在200mtorr。将产品在25℃和200mtorr的真空下进一步干燥24小时，完成第二干燥步骤。

得到白色/浅黄色冻干饼状的化合物I的非晶物。化合物I的非晶物可用2mL灭菌注射水重悬，以得到澄清的黄色溶液。

Claims (3)

1.8-氟-2-{4-[(甲基氨基)甲基]苯基}-1，3，4，5-四氢-6H-氮杂卓并[5，4，3-cd]吲哚-6-酮的结晶磷酸盐，其中所述盐为基本上纯净的II型多晶型物，其X射线粉末衍射图样在7.02、11.2、12.12、14.0、20.1和23.1的衍射角(2θ)处具有峰。

2.包含权利要求1的盐的药物组合物。

3.治疗有效量的如权利要求1的盐在药物制造中的用途，所述药物用于治疗由需要治疗的患者体内的聚(ADP-核糖)聚合酶活性介导的疾病。

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