CN101130573A - 一种猪免疫性状相关蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种猪免疫性状相关蛋白及其编码基因与应用。该猪免疫性状相关蛋白，是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质：1)序列表中序列1；2)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与猪免疫性状相关的蛋白质。本发明的猪免疫性状相关蛋白及其编码基因是控制猪免疫性状的蛋白和基因，可用于检测猪的免疫性状，从而为猪的分子育种提供了一个新的遗传标记，并将在猪的育种中发挥重要作用。

Description

一种猪免疫性状相关蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及一种猪免疫性状相关蛋白及其编码基因与应用，特别涉及一种猪免疫性状相关蛋白及其编码基因以及利用该蛋白编码基因的单核苷酸多态性来检测猪免疫性能的方法。

背景技术

动物的免疫力直接反应出来就是抗病力，它与动物的生产能力是密切相关的。健康的畜禽生产性能高，养殖管理成本低。不健康的畜禽，生产性能低，养殖管理成本高。随着工厂化养殖规模地扩大，养殖密度的加大，畜禽发病的机率大大增加。另一方面，近年来烈性传染病频发，一些变异的毒株具有很强的致病性，甚至出现了一些感染人的强毒株。药物虽然可以控制疫病的爆发，然而，大量的使用药物不仅会造成药物残留，肉质变差，生产成本增加，更重要的是会导致一些耐药的突变毒株出现。通过抗病育种提高动物机体的免疫力是保证畜禽健康的根本之道。

抗病育种的途径有直接选择和间接选择两种方法。直接选择是在直接接触或人工接种病原体的情况下对抗病个体进行直接选择。该法具有很强的直观性，但由于很多疾病的发生难以定性，攻击的病原程度和标准难以确定，疾病性状遗传力较低，大规模疾病爆发的风险较大，所以直接选择很难被采用。目前主要通过间接选择进行来进行育种，主要是对一些免疫指标以及与免疫指标相关的分子标记来进行选育。随着分子生物学及其技术的发展，分子标记辅助育种已成为研究的热点和趋势。应用分子技术阐明免疫应答的分子机理和遗传控制机制，结合免疫性状指标进行抗病育种，必将大大加快动物抗病育种的进程。

分子标记辅助育种技术的核心是抗病主效基因以及抗病相关的分子标记的鉴定。近年来，国内外学者对猪免疫力相关的基因进行了大量的研究，找到了一些与猪抗病相关的遗传标记以及抗病基因。猪的MHC定名为猪的淋巴细胞抗原(SLA)。SLA有关基因涉及到一系列免疫应答的控制、补体成分及参与抗原传递的主要分子。猪单倍型SLA^a/a对感染支气管败血性波氏杆菌高反应存在关联(Rothschild等，Breedand swine lymphocyte antigen haplotype differences in agglutination titersfollowing vaccination with B.bronchiseptica.J Anim Sci 1984，59，643-9)，单倍型SLA^d/d、SLA^d/g、SLA^g/g在特定抗原反应上优于SLA^a/a、SLA^a/c、SLA^a/d、SLA^c/c、SLA^c/d(Mallard等，Genetic and other effects on antibody and cell mediatedimmune response in swine leucocyte antigen(SLA)-defined miniature pigs.AnimGenet 1989，20，167-78)。Sinclair微型猪的黑色素瘤由两个位点控制，一个在SLA内，控制其表型；另一为非SLA控制的突变基因，能启动瘤的发育(Tissot等，Esophageal Abrikosov’s tumor.preoperative diagnosis with echoendoscopy.1987 J Chir(Paris)，124，372-4)。引起断奶后仔猪腹泻和水肿病的E.coli F18受体的候选基因是α(1，2)岩藻糖转移酶基因1(FUT1)，在第103位碱基突变导致了氨基酸由Ala变成Thr，研究发现这个位点与大肠杆菌的易感性相关(Meijerink等，A DNA polymorphism influencing alpha(1，2)fucosyltransferaseactivity of the pig FUT1 enzyme determines susceptibility of small intestinalepithelium to Escherichia coli F18 adhesion.2000 Immunogenetics，52，129-36)。猪应激综合征(PSS)是由I型兰尼定受体基因(RYRI)控制，该基因物理定位于SSC6q1.1-1.2，又称钙离子释放通道基因(CRC)或氟烷敏感基因(Halⁿ)，隐性纯合子(HalⁿHalⁿ)发病。分子检测发现是cDNA第1843碱基由C突变成T，从而使编码的氨基酸由Arg⁶¹⁵改变成Cys⁶¹⁵，引起一系列生理变化导致PSS的发生(Fujii等，Identification of a mutation in porcine ryanodine receptorassociated with maiignant hyperthermia.1991 science，253，448-51)。

脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)即革兰氏阴性菌内毒素(endotoxin)是革兰氏阴性细菌的细胞壁组成成分，机体在受到革兰氏阴性细菌的感染时，LPS作为致病抗原，造成动物体严重感染，脏器损伤，败血症休克等多种疾病的发生发展。脂多糖结合蛋白(LPS binding protein，LBP)是LPS的结合蛋白，它与LPS形成LBP-LPS复合物，介导LPS信号传导，诱导促炎细胞因子TNF、白介素、粘附分子等的表达，引起免疫反应抑制细菌的感染(Aderem和Ulevitch，Toll-like receptorsin the induction of the innate immune response.2000 nature，406，782-7)。目前，人、鼠、牛、鸡的LBP基因已被克隆，猪的LBP研究尚未见报道。在人中研究发现，两个突变位点(98Cys/Gly；436Pro/Leu)与人细菌性败血症发病相关(Hubacek等，Gene variants of the bactericidal/permeability increasingprotein and lipopolysaccharide binding protein in sepsis patients：gender-specific genetic predisposition to sepsis.2001Critical Care Medicine，29.557-61)。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪免疫性状相关蛋白及其编码基因与应用。

本发明所提供的猪免疫性状相关蛋白，名称为LBP，来源于猪，是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由序列表中序列1的氨基酸残基序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有提高免疫力相关功能的由(a)衍生的蛋白质。

为了使(a)中的LBP分泌到细胞周质或培养基中或使其功能稳定，可在由序列表中序列1的氨基酸残基序列组成的蛋白质的N端连接上信号肽序列，为了(a)中的LBP便于纯化，可在由序列表中序列1的氨基酸残基序列组成的蛋白质的N端或C端连接上如表1所示的标签。

表1.标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tagII	8	WSHPQFEK
			c-myc	11	EQKLISEEDL

上述(b)中的LBP可人工合成，也可先合成其编码基因，再按照下述方法进行生物表达得到。上述(b)中的LBP的编码基因可通过将序列表中序列2的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端连上信号肽的编码序列，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

其中，序列表中的序列1由481个氨基酸残基组成。

所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述猪免疫性状相关蛋白的编码基因(猪LBP基因)也属于本发明的保护范围。

上述猪免疫性状相关蛋白的编码基因的cDNA，可具有下述核苷酸序列之一：

1)序列表中序列2的多核苷酸；

2)与序列表中序列2的多核苷酸具有90％以上同源性的编码免疫性状相关蛋白的核苷酸序列；

3)编码序列表中序列1蛋白质序列的DNA；

4)在高严谨条件下可与序列表中序列2限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。

所述高严谨条件为杂交后用含0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液在65℃下洗膜。

序列表中的序列2由1732个脱氧核苷酸组成，自5’端第1-37位核苷酸序列为5’非翻译区(UTR)，自5’端第1484-1732位核苷酸序列为3’UTR，自5’端第38-1483位核苷酸序列为开放阅读框。自序列表中序列2的5’端第392位核苷酸为多态性位点，为A或G。

含有上述的猪免疫性状相关蛋白编码基因的重组载体、转基因细胞系及宿主菌均属于本发明的保护范围。

本发明的第二个目的是提供一种检测猪免疫性状的方法。

本发明提供的检测猪免疫性状的方法，是检测自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸或自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸为A还是G，确定猪的基因型，然后通过基因型确定免疫力高低；

所述确定猪的基因型的方法为：如果自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸或自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸为A时，其纯合体的基因型为AA；自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸或自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸为G时，其纯合体的基因型为BB；它们的杂合体基因型为AB；

通过基因型确定免疫性状的方法为：所述AA或AB基因型的猪免疫力低于BB基因型。

所述检测自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸或自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸为A还是G确定基因型的方法包括先PCR扩增含有自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸的基因组片段，然后对扩增产物进行测序或者用MspI酶切扩增产物；或者RT-PCR扩增自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸的cDNA片段，然后对扩增产物进行测序或者用MspI酶切扩增产物；

所述含有自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸的基因组片段PCR扩增产物可为自序列表中序列3所述287bp的核苷酸片段；MspI酶切所述287bp PCR扩增产物，若得到287bp一个片段，其基因型为AA纯合体；当若得到189bp及98bp两个片段，其基因型为BB纯合体；若得到287bp、189bp和98bp三个片段，其基因型为AB杂合体。

通过对猪群体各基因型群体的免疫性状性能进行评估：结果表明基因型为BB的群体的红细胞压积均值、平均红细胞容积均值、免疫球蛋白含量均值以及迟发性变态反应与基因型为AB或AA的个体间存在显著性差异(P＜0.05)，个体免疫性状能力要高于后两者。

本发明的猪免疫性状相关蛋白及其编码基因是控制猪免疫性状的蛋白和基因，可用于检测猪的免疫性状，从而为猪的分子育种提供了一个新的遗传标记，并将在猪的育种中发挥重要作用。

附图说明

图1为本发明猪免疫性状相关基因(猪LBP基因)制备及其定位和多态性分析的流程图

图2为本发明中猪免疫性状相关基因(猪LBP基因)cDNA序列

图3为本发明中猪免疫性状相关基因(猪LBP基因)包括多态性位点的部分DNA序列。

图4为本发明中猪LBP基因的多态性检测的三种基因型(AA，AB，BB)电泳结果M：DNA分子量标准(100-3000bp ladder)。

具体实施方式

下述实施例中提到的实验方法，如无特别说明均为常规方法。

本发明的猪免疫性状相关基因(猪LBP基因)制备及其定位和多态性分析的流程图如图1所示，具体方法如下述实施例所述。

实施例1、猪免疫性状相关蛋白(LBP)及其全长编码区和部分基因组序列(猪LBP基因)的获得

1、猪免疫性状相关蛋白(LBP)及其全长编码区的获得

用人LBP基因cDNA(GenBank收录号：NM_006263)为信息探针，利用NCBI中的BLAST工具在GenBank猪EST数据库中做同源序列筛选，获得一系列同源性为80％以上的ESTs(片段长度大于100bp)，然后用DNAstar软件中的seqman程序进行EST拼接序列，根据拼接序列设计引物。引物序列如下：

F1：5’-CTGCATCGGACCTGACCCA-3’(序列表中序列4)

R1：5’-TGCCCTTCAAGAAAGTACCAGC-3’(序列表中序列5)

提取一只通城猪肝脏组织总RNA，反转录合成第一链cDNA；然后以该第一链cDNA为模板以上述设计的引物对F1和R1为引物进行RT-PCR扩增，PCR反应体系为：反应总体积为20μL，包含1×PCR buffer，MgCl₂ 1.5mmol/L，引物0.3μmol/L，dNTP 75μmol/L，Taq DNA聚合酶1U，cDNA 200ng。PCR扩增程序是94℃ 3min，94℃ 30s，61℃ 30s，72℃ 90s，循环35次，最后72℃延伸5min。PCR反应产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明获得约1700bp的片段。将PCR产物凝胶回收纯化后克隆测序，测序结果表明该片段具有序列表中序列2的核苷酸序列(图2)，自5’端第1-37位核苷酸序列为5’非翻译区(UTR)，自5’端第1484-1732位核苷酸序列为3’UTR，自5’端第38-1483位核苷酸序列为开放阅读框，编码序列表中序列1的氨基酸残基序列，将序列1所示的蛋白命名为猪LBP。自序列表中序列2的5’端第329位核苷酸为多态性位点，为A或G。通过美国国家生物技术信息中心(NCBI，National Center for Biotechnology Information，http://www.ncbi.nlm.nih.gov)网站的BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)软件，将测序后获得的cDNA序列与GenBank数据库中公布的人的LBP基因cDNA序列进行序列同源性比较，以鉴定和所获得猪LBP的cDNA的正确性；将所获得的含有329G/A突变位点的DNA片段与所公布的猪DNA片段进行比对，以鉴定其正确性。结果表明，该猪LBP编码区与人LBP编码区的同源性达80％，该猪LBP氨基酸与人LBP基因的同源性达74.7％。

2、猪免疫性状相关蛋白(LBP)的部分DNA片段的获得

用猪LBP的cDNA去搜索猪DNA序列，根据搜到的包含329位碱基突变的DNA序列设计正、反向引物扩增猪基因组DNA。引物序列如下：

F2：5’-GAACCACCTGTCTGCCTGAAG-3’(序列表中序列6)

R2：5’-CGGGAGCAGAGTCAACTTACAG-3’(序列表中序列7)

提取一只通城猪的基因组DNA，做为模板，以F2和R2为引物进行PCR反应，PCR反应总体积为20μL，其中猪基因组DNA约100ng，含1×buffer(Promega)，1.5mmol/L MgCl₂，dNTP终浓度为150μmol/L引物终浓度为0.3μmol/L，2U Taq DNA聚合酶(Promega)。PCR扩增程序是：94℃ 4min，然后循环35次94℃ 30s，62℃30s，72℃ 30s，最后72℃延伸5min。PCR反应产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明获得287bp的片段，经测序表明该片段具有序列表中序列3的核苷酸序列。自序列表中序列3的5’端第191位核苷酸为多态性位点，为A或G。

实施例2、猪LBP基因PCR-RFLP诊断方法建立及该基因标记性状关联分析

1、猪LBP基因PCR-RFLP诊断方法建立

实施例1的步骤2获得的猪LBP的部分基因组基因序列表明，自序列表中序列3的5’端第191位核苷酸为多态性位点，为A或G。当序列表中序列3的5’端第191位核苷酸为A时，该基因假定为由A等位基因控制，当序列表中序列3的5’端第191位核苷酸为G时，该基因假定为由B等位基因控制，这两个等位基因可组成三种基因型：纯和体AA、BB，杂和体AB。

当序列表中序列3的5’端第191位核苷酸为G时，存在1个MspI酶切位点(C↓CGG)，因此将实施例1的步骤2扩增获得的猪LBP的部分基因组基因片段用MspI酶切鉴定其基因型。当基因型为AA时，按照实施例1的步骤2的方法扩增获得的猪LBP的部分基因组基因片段经MspI酶切后只有287bp一个片段；当基因型为BB时，按照实施例1的步骤2的方法扩增获得的猪LBP的部分基因组基因片段经MspI酶切后为189bp、98bp两个片段；当基因型为AB时，扩增片段经MspI酶切后为287bp、189bp、98bp三个片段。

其中，MspI酶切反应体积是10μL，其中包含10×buffer 1μL，PCR产物5μL，限制性内切酶MspI为1μL(10U)，双蒸水3μL。样品加完后混匀，稍离心，37℃水浴4h，用2.5％琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果，记录基因型。

2、猪LBP基因标记性状检测

对145只猪(长白猪13头，通城猪41头，大白猪16头，长大通39头，大长通36头)进行猪LBP基因与免疫性状进行关联分析：分别提取这些猪的基因组DNA，按照实施例1步骤2的方法扩增287bp的包含多态位点的猪LBP的部分基因组基因片段，然后按照MspI-RFLP方法进行检测其基因型。

对猪LBP基因MspI-RFLP多态性位点基因型检测结果表明在145个猪个体中AA基因型有64个，AB基因型有42个个体，BB基因型有39个个体，三种基因型的电泳检测结果如图4所示。

同时用血细胞自动分析仪(MEK-5216K)测定上述猪的部分免疫性状包括红细胞数(RBC)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞容积(MCV)以及红血球分布宽度指标(RDW)；用放射免疫扩散法测定免疫球蛋白(IgG)含量；用植物血凝素(PHA)皮肤试验测定迟发性变态反应(DHA)指标。将这些性状的检测结果与猪的基因型进行关联分析。

关联分析结果如表2所示，结果表明，该LBP基因MspI-RFLP多态性位点突变与红细胞压积、红细胞容积、免疫球蛋白含量以及迟发性变态反应呈显著相关(P＜0.05)，BB基因型猪的红细胞压积均值、平均红细胞容积均值、免疫球蛋白含量均值以及迟发性变态反应均值都比AA或AB基因型猪高(P＜0.05)，说明BB基因型的猪的免疫力均比AA或AB基因型的猪的免疫力高。AA与AB基因型相比差异不显著(P＞0.05)。

表2.LBP基因MspI-RFLP多态性与部分免疫性状的关联分析

基因型	头数	RBC	HCT	MCV	IgG	DHA	RDW
								AA	64	6.27±0.21	36.59±1.27a	58.88±0.71a c	44.50±2.31a	9.04±0.25ac	18.37±0.31
AG	42	6.35±0.21	36.22±1.25a	57.32±0.69a	44.18±2.24a	8.55±0.25a	18.64±0.31

GG	39	6.84±0.17	41.04±1.00c	60.07±0.56c	53.79±1.79c	9.60±0.20c	18.75±0.24
								P值		0.059	0.003	0.010	＜0.001	0.004	0.623

实施例3、猪LBP基因基因型在不同猪品种中的分布

按照实施例2的方法对不同品种猪(表1所示的五指山猪(34只)、莱芜猪(32只)、通城猪(41只)、长白猪(26只)、大白猪(26只)，分别购自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所五指山小型猪保种场；山东省莱芜市莱芜黑猪保种场；湖北通城县畜牧局通城猪保种场)的猪LBP基因基因型进行分析

结果如表3所示，根据表3的基因型和基因频率的结果显示，在所检测的五指山、通城、莱芜3个国内品种中B等位基因占优势；而在国外品种长白、大白中A等位基因占优势。

表3LBP 329G/A突变Msp I多态性在5个猪品种中的分布

品种	基因型			等位基因频率
						AA	AB	BB	A	B
	五指山	0	3	31	0.04						0.96
通城						2	0	39	0.05	0.95
	莱芜	0	2	30	0.03						0.97
长白						23	3	0	0.94	0.06
	大白	23	2	1	0.92						0.08

                  序列表

<160>7

<210>1

<211>481

<212>PRT

<213>野猪属猪(Sus scrofa domestica Brisson)

<400>1

Met Gly Ala Ser Ala Gly Ala Leu Pro Ser Leu Leu Leu Gly Ile Leu

1               5                   10                  15

Leu Thr Ser Ile Leu Gly Ser Leu Gly Ala Asn Pro Gly Leu Val Ala

            20                  25                  30

Arg Ile Thr Asn Lys Gly Leu Glu Tyr Val Ala Arg Glu Gly Val Ala

        35                  40                  45

Thr Leu Gln Ser Lys Leu His Glu Val Thr Leu Pro Asp Phe Asn Gly

    50                  55                  60

Asp Phe Lys Ile Lys Tyr Met Gly Arg Gly His Tyr Glu Phe His Ser

65                  70                  75                  80

Leu Asp Ile His Ser Cys Glu Leu Leu Gly Ser Thr Leu Thr Pro Leu

               85                   90                  95

Pro Gly Gln Gly Leu Tyr Leu Ala Ile Ser Asp Ser Ser Ile Arg Val

            100                 105                 110

Lys Gly Lys Trp Lys Val Arg Lys Gly Ile Leu Lys Leu Asp Gly Ser

        115                 120                 125

Phe Asp Val Lys Val Lys Gly Ile Thr Ile Ser Val Asn Leu Leu Leu

    130                 135                 140

Gly Ser Gly Ser Ser Gly Arg Pro Thr Val Ala Val Ser Ser Cys Ser

145                 150                 155                 160

Ser His Ile Asp Asp Val Glu Thr His Met Ser Gly Asp Leu Ser Trp

                165                 170                 175

Leu Leu Asn Leu Phe His Asn Gln Ile Glu Ser Arg Phe Arg Arg Thr

            180                 185                 190

Leu Glu Ser Lys Ile Cys Glu Glu Ile Gln Asp Leu Val Ala Ser Asp

        195                 200                 205

Leu Gln Pro Tyr Leu Gln Thr Val Pro Val Thr Thr Glu Ile Asp Asn

    210                 215                 220

Leu Ala Gly Ile Asp Tyr Ser Leu Val Glu Ala Pro Arg Ala Thr Ala

225                 230                 235                 240

Gln Met Leu Asp Val Met Ile Lys Gly Glu Ile Phe Ser Leu Asp His

                245                 250                 255

Arg Ser Pro Val Gly Phe Leu Ala Pro Val Met Arg Leu Pro Glu Glu

            260                 265                 270

His Ser Arg Met Val Tyr Phe Ala Val Ser Asp Tyr Val Phe Lys Thr

        275                 280                 285

Ala Ser Leu Val Tyr Asn Glu Ala Gly Phe Leu Asn Phe Ser Ile Thr

    290                 295                 300

Asp Asp Leu Val Pro Pro Thr Ser Asn Ile Arg Leu Thr Thr Asn Ser

305                 310                 315             320

Phe Arg Thr Phe Val Pro Arg Leu Ala Arg Leu Tyr Pro Asn Met Asn

                325                 330             335

Leu Glu Leu Trp Gly Ala Met Val Ser Ala Pro Phe Leu Asn Phe Gly

            340                 345             350

Ser Gly Asn Leu Ser Ser Thr Pro Gln Ile Glu Val Glu Gly Phe Val

        355                 360             365

Leu Leu Pro Asn Ser Val Arg Glu Pro Val Phe Arg Leu Gly Met Ala

    370                 375             380

Thr Asn Val Ser Ala Ala Leu Thr Phe Asn Thr Ser Lys Ile Thr Gly

385                 390             395                     400

Phe Leu Lys Pro Gly Lys Ile Gln Val Glu Leu Lys Glu Ser Lys Val

                405             410                     415

Gly Ile Phe Asn Val Glu Leu Leu Glu Ala Leu Leu Asn Tyr Tyr Leu

            420             425                     430

 Leu Asn Asn Leu Tyr Pro Lys Val Asn Asp Lys Leu Ala Glu Gly Phe

         435             440                     445

 Pro Leu Pro Leu Leu Asn Tyr Ile Gln Leu His Asp Pro Val Leu Gln

    450                 455                 460

Ile His Lys Asp Phe Leu Leu Leu Gly Thr Asn Ile Arg Tyr Leu Arg

465                 470                 475                 480

Val

<210>2

<211>1732

<212>DNA

<213>野猪属猪(Sus scrofa domestica Brisson)

<220>

<221>misc-feature

<222>(329)

<223>n＝a或g

<400>2

ctgcatcgga cctgacccag ctctctggga atccaggatg ggggcctcgg ctggggccct    60

gccctcccta ctgctgggaa ttctgctcac gtccatcctg gggagcctgg gggccaaccc    120

cggcctggtt gccaggatca ccaacaaggg cttggagtac gtggccagag agggggtggc    180

gactctgcag agtaagctgc acgaagtcac actccccgac ttcaatgggg acttcaagat    240

caaatacatg ggccgagggc actatgagtt ccacagcctg gacatccaca gctgtgagct    300

gctcggctcc actctgacgc ctctccccng ccagggcctg tatttggcca tctccgactc    360

ctccatcagg gtcaagggca agtggaaagt gcgcaagggg atactgaaac tagacggctc    420

ctttgacgtg aaggttaaag gcatcaccat ttcagtcaat cttctcctgg gcagtgggtc    480

ctccgggagg ccaacggtcg cagtctccag ctgcagcagc cacatcgacg atgtggagac    540

gcacatgtcg ggagatctga gctggctgct gaatctcttc cacaaccaga tcgagtccag    600

gttccgaaga acattggaga gcaagatttg tgaagagatc caggatttgg tggcctctga    660

cctacagcct tacctccaaa ctgtgccagt cacgacagag attgacaacc ttgctggcat    720

tgattacagt ttagtggagg cccctcgggc aacagcccaa atgctggatg tgatgattaa    780

gggtgaaatt tttagccttg atcaccgctc cccagttggc ttccttgctc ctgtcatgag    840

acttcctgag gaacacagcc gaatggtcta ctttgccgtc tctgattatg tcttcaaaac    900

tgccagtctg gtttataacg aagcagggtt cttgaacttt tccatcacag atgacttggt    960

tccacctact tctaacatcc gactgaccac caactccttc cgcaccttcg tcccccggtt    1020

agccagactg taccccaaca tgaacttgga gctctgggga gcaatggtct cagccccgtt    1080

cctgaacttc ggctccggga atctatcctc aaccccccag atagaggtcg agggctttgt    1140

gctcttgccc aactccgtca gggagcctgt cttccggctt ggtatggcca ctaatgtgtc    1200

cgccgcgctg accttcaata ccagcaagat cactggattc ctaaagccgg ggaagataca    1260

agtggaactg aaagaatcta aagttggaat attcaatgtg gagctgttgg aggcgctgct    1320

caattactac cttctcaaca acctctaccc caaggtcaat gataagttgg cagaaggctt    1380

ccccctccct ctgctaaatt atattcagct ccacgaccct gttctccaga tccacaagga    1440

cttcctgctt ttgggcacca acatccggta cctgagagtc tgagggcagg gccaaaaaga    1500

cagggcttgg aggccacagc tggatgggca agtcccacct ccagatatgc agcgtagtcc    1560

tggagagtct gggaggatga agacttttct gtcaccagct ctgggggcct ggcctctgcc    1620

cccacactcc tccttttccg caggggcacc cacaccctct ttgtctccag actttactct    1680

ccagccagaa gagaccatct tcccctactg gctggtactt tcttgaaggg ca            1732

<210>3

<211>287

<212>DNA

<213>野猪属猪(Sus scrofa domestica Brisson)

<220>

<221>misc-feature

<222>(191)

<223>n＝a或g

<400>3

gaaccacctg tctgcctgaa gcaggctctg caggcctggt ccccatgggg tgggggtgag    60

agcaagaccc ctgctgaggc tggaaccgcc ttcaccttga tgctgatgcc acgtccttcc    120

gcgggtctct ctccccagcc tggacatcca cagctgtgag ctgctcggct ccactctgac    180

gcctctcccc ngccagggcc tgtatttggc catctccgac tcctccatca gggtcaaggg    240

caagtggaaa gtgcgcaagg ggatactgta agttgactct gctcccg                  287

<210>4

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>4

ctgcatcgga cctgaccca                                                 19

<210>5

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>5

tgcccttcaa gaaagtacca gc    22

<210>6

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>6

gaaccacctg tctgcctgaa g     21

<210>7

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>7

cgggagcaga gtcaacttac ag    22

Claims (8)

1.一种猪免疫性状相关蛋白，是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质：

1)序列表中序列1；

2)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与猪免疫性状相关的蛋白质。

2.权利要求1所述的猪免疫性状相关蛋白的编码基因。

3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于：所述猪免疫性状相关蛋白的编码序列为自序列表中序列2的5′端第38-1483位核苷酸。

4.根据权利要求3所述的编码基因，其特征在于：所述猪免疫性状相关蛋白的的cDNA基因具有下述核苷酸序列之一：

1)序列表中序列2的多核苷酸；

2)与序列表中序列2的多核苷酸具有90％以上同源性的编码免疫性状相关蛋白的核苷酸序列；

3)编码序列表中序列1蛋白质序列的DNA；

4)在高严谨条件下可与序列表中序列2限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。

5.含有权利要求3或4所述编码基因的重组表达载体。

6.含有权利要求3或4所述编码基因的转基因细胞系或宿主菌。

7.一种检测猪免疫力性状的方法，是检测自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸或自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸为A还是G，确定猪的基因型，然后通过基因型确定免疫力高低；

所述确定猪的基因型的方法为：如果自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸或自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸为A时，其纯合体的基因型为AA；自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸或自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸为G时，其纯合体的基因型为BB；它们的杂合体基因型为AB；

通过基因型确定免疫性状的方法为：所述AA基因型的猪免疫力低于AB基因型，AB基因型的猪免疫力低于BB基因型。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述检测自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸或自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸为A还是G确定基因型的方法包括先PCR扩增含有自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸的基因组片段，然后对扩增产物进行测序或者用Msp I酶切扩增产物；或者RT-PCR扩增自序列表中序列2的5′端第329位核苷酸的cDNA片段，然后对扩增产物进行测序或者用Msp I酶切扩增产物；

所述含有自序列表中序列3的5′端第191位核苷酸的基因组片段PCR扩增产物可为自序列表中序列3所述287bp的核苷酸片段；MspI酶切所述287bp PCR扩增产物，若得到287bp一个片段，其基因型为AA纯合体；当若得到189bp及98bp两个片段，其基因型为BB纯合体；若得到287bp、189bp和98bp三个片段，其基因型为AB杂合体。

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