CN101122604B - 一种固蓝b盐法测定血清胆红素的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种测定血清中胆红素的试剂,具体为一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒,解决现有用于测定血清胆红素的方法在临床应用中存在各自不同的缺点等问题,由用于测定总胆红素的试剂:固蓝B盐3-6g/L,浓盐酸45-65ml/L,尿素40-60g/L,二甲基亚砜300-500ml/L和用于测定直接胆红素的试剂:固蓝B盐3-6g/L,浓盐酸45-65ml/L,尿素40-60g/L构成。所述的固蓝B盐一步比色法测定血清总胆红素和直接胆红素的试剂盒配制简单,采用单一试剂,操作只有一步,操作简便、反应速度快、灵敏度高、结果准确,抗干扰强,试剂盒稳定、保存时间长,可提高化验速度,保证化验结果的准确性,提高诊断水平,而且既可用于手工操作和半自动生化仪,又可用于自动化生化分析仪,值得广泛推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定血清中胆红素的试剂,具体为一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒。
背景技术
血清胆红素测定是肝胆疾病、溶血性疾病诊断和鉴别诊断的重要指标,是临床上常用的检测项目。《全国临床检验操作规程》推荐的方法有改良J-G法、氧化酶法和钒酸盐氧化法。目前国内外临床常用商品试剂盒为改良J-G法、氧化酶法和钒酸盐氧化法,近几年国内外没有新的胆红素方法的报道。
上述几种试剂盒在临床应用中都存在各自不同的缺点,其中改良J-G法为国际临床化学协会推荐的总胆红素测定参考方法,其灵敏度、准确度和特异性均较高,但操作步骤多,共有四步,测定直接胆红素时需要严格控制时间(1分钟),适用于手工或半自动分析仪,不能用于全自动生化分析仪;氧化酶法是测定总胆红素较好的一种方法,该法特异性强、灵敏度高、重复性好,对溶血、脂血等抗干扰性强,操作简单,适用于自动化测定,但该法所涉及的工具酶价格昂贵,在临床难以广泛普及推广应用;矾酸盐法是近来应用较多的方法,它继承了氧化酶法的抗溶血、抗黄疸、抗脂血等许多优点,能够测定总胆红素和直接胆红素,同时该试剂具有良好的稳定性,特别适用于全自动生化分析仪,但矾酸盐法采用双试剂,两次比色,加1次试剂,反应5分钟比色1次,加第2试剂,反应5分钟,再比色1次,因此,不适合手工操作和半自动分析仪。
此外,固蓝B盐法也是用于血清胆红素测定的一种方法,固蓝B盐是一种稳定的重氮盐,该法首先是由Roberto Bonora等报道的,方法采用65%尿素为加速剂,在硫酸介质中反应,反应需15分钟,速度慢,而且在硫酸介质所提供的酸性环境下,灵敏度较低。
发明内容
本发明为了解决现有用于测定血清胆红素的方法在临床应用中存在各自不同的缺点等问题,提供一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒,具有操作简单,反应速度快,灵敏度高,抗干扰强,既可用于手工操作,又可用于自动化生化分析仪等优点。
本发明是采用如下技术方案实现的:一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒,由用于测定总胆红素的试剂和用于测定直接胆红素的试剂构成,
其中,用于测定总胆红素的试剂为:固蓝B盐3-6g/L,浓盐酸45-65ml/L,尿素40-60g/L,二甲基亚砜300-500ml/L;
用于测定直接胆红素的试剂为:固蓝B盐3-6g/L,浓盐酸45-65ml/L,尿素40-60g/L。
所述的用于测定总胆红素的试剂的最佳浓度为:固蓝B盐4g/L,浓盐酸50ml/L,尿素50g/L,二甲基亚砜400ml/L;用于测定直接胆红素的试剂的最佳配比为固蓝B盐4g/L,浓盐酸50ml/L,尿素50g/L。
上述试剂盒的配方中,测定总胆红素时,由于间接胆红素水溶性低,与固蓝B盐反应慢,所以必须加入加速剂,申请人曾试验了甲醇、乙醇、苯甲酸钠—咖啡因、尿素、TritionX-100、OP乳化剂、吐温-20、吐温-80、十六烷基三甲基溴化铵等,发现均存在这样和那样的不足,如浑浊、反应慢、灵敏度低等问题,申请人经过上述大量试验数据分析及经验判断,最后选定二甲基亚砜作为总胆红素测定的加速剂,反应速度随二甲基亚砜浓度的增加而加快,申请人又经过大量的优选试验,确定二甲基亚砜的浓度为300-500ml/L,在此条件下,可保证总胆红素浓度达到其线性范围内的最大浓度684umol/L时,在37℃水浴中反应8分钟即达到终点,所述的二甲基亚砜至少可从天津化学试剂一厂购得;所述的浓盐酸是为固蓝B盐与血清胆红素反应提供酸性环境,随着其浓度的增加,反应灵敏度增加,而且各试剂的化学性能较稳定,保存期限较长,同时反应生成的蓝色物质更稳定,但是浓盐酸浓度太高,又会降低反应速度,所以申请人经过大量优选试验,确定浓盐酸的浓度为45-65ml/L,至少可从北京化工厂购得;所述的少量尿素可有效防止标本测定时发生混浊,同时可提高反应的灵敏度,至少可从北京化工厂购得;所述的固蓝B盐(Fast Blue B salt Fluka AG)为现有公知产品,可从市场上直接购得。
本发明所述的总胆红素和直接胆红素的测定原理为,在浓盐酸提供的酸性条件下,固蓝B盐与血清胆红素反应生成蓝色物质,在610nm处有最大吸收波长,反应液在610nm处的吸光度与胆红素浓度在一定范围内成正比;所述的试剂盒可置于棕色瓶内并放在4℃冰箱内避光保存,保质期为9个月,所述的两种试剂的配制量可根据实际需要确定。
采用本发明所述的试剂盒并分别采取手工操作和自动分析仪测定血清胆红素的具体方法如下:
1、标本采集:使用美国BD负压分离胶采血管空腹静脉采血,离心分离血清。胆红素对光敏感,标本与标准品应避光;
2、总胆红素测定
a、手工测定按表1操作
表1总胆红素手工操作步骤
将血清、总胆红素校准品、去离子水分别加入测定管、标准管和空白管,然后在每个管内加入本发明所述的总胆红素试剂,混匀,在37℃水浴中加热8分钟,分光光度计以空白调零点,用1cm光径比色杯,在610nm波长处测定各管吸光度值(A),计算结果,
b、采用AU-640自动分析仪测定,其主要参数:温度37℃,波长600nm,标本体积8μl,试剂体积200μl,读数时间0-27;
3、直接胆红素测定
a、手工测定按表2操作
表2直接胆红素手工操作步骤
将血清、直接胆红素校准品、去离子水分别加入测定管、标准管和空白管,然后在每个管内加入本发明所述的直接胆红素试剂,混匀,在37℃水浴中加热4分钟,分光光度计以空白调零点,用1cm光径比色杯,在610nm波长处测定各管吸光度值(A),计算结果,
b、采用AU-640自动分析仪测定,其主要参数:温度37℃,波长600nm,标本体积8μl,试剂体积200μl,读数时间0-12。
为了进一步证明本发明所述的试剂在测定血清胆红素时的使用效果,分别进行了以下试验:
一、总胆红素和直接胆红素吸收曲线的确定:按照上述所说的测定方法对对空白管、标准管、测定管进行显色,以试剂空白调零点,在UV-754分光光度计上从波长500-700nm扫描,记录吸光值,绘制吸光值曲线,结果总胆红素测定管、标准管最大吸收峰在610nm(如图1所示),直接胆红素标准管、测定管最大吸收峰在610nm(如图2所示),因此,确定本发明所述的固蓝B盐法的工作波长为610nm。
二、反应终点时间及稳定性:按照上述所说的测定方法,总胆红素浓度为684umol/L时,添加本发明所述的用于测定总胆红素的试剂,并在37℃水浴中加热8分钟后,反应达终点,2小时内吸光值稳定不变,直接胆红素浓度为342umol/L时,添加本发明所述的用于测定直接胆红素的试剂,并在37℃水浴中加热4分钟后,反应达终点。
三、线性范围的确定:按要求配制不同浓度的总(直接)胆红素标准液,0、85.5、171.0、342.0、684.0μ mol/L,按本发明所述的测定方法进行测定各标准液的吸光度值,结果表明总胆红素在0~684μ mol/L范围内线性良好,直接胆红素在0~342μ mol/L范围内线性良好,超过此范围的标本用生理盐水稀释,测定结果乘以稀释倍数;
四、精密度试验:用新鲜混合血清,分成20人份,采用AU-640自动分析仪测定,总胆红素批内变异系数(CV)0.68%(x±s=38.4±0.77μ mol/L n=20),直接胆红素批内变异系数(CV)1.43%(x±s=13.5±0.29μ mol/L n=20):将测定后的血清加盖冰冻保存,每天测定1份,总胆红素批间变异系数(CV)2.9%(x±s=37.5±1.09μ mol/L n=20),直接胆红素批间变异系数(CV)3.1%(x±s=13.1±0.41μ mol/L n=20)。用RANDOX(HE1532)定值质控血清,按以上同样方式测定,总胆红素批内变异系数(CV)0.82%(x±s=67.18±0.56μ mol/L n=20),直接胆红素批内变异系数(CV)1.45%(x±s=21.45±0.31μ mol/L n=20),总胆红素批间变异系数(CV)2.8%(x±s=66.4±1.86μ mol/L n=20),直接胆红素批间变异系数(CV)3.0%(x±s=21.0±0.63μ mol/L n=20),上述x为测定结果的平均值,s为标准差。用RAND0X定值质控血清做批间变异系数观察,实际上就等于模拟做了20天室内质控,测定结果重复性非常好,说明本发明所述的固蓝B盐法非常稳定。
五、回收试验:在含总胆红素32.49μ mol/L的血清标本中分别加入42.75、85.5、128.25μ mol/L总胆红素标准液进行回收试验,回收率分别为98.2、102.2、100.6,平均回收率为100.3%;在含直接胆红素6.9μ mol/L的血清标本中分别加入20.6、40.3、60.5μ mol/L直接胆红素进行回收试验,回收率分别为103.9、102.2、98.6,平均回收率为101.5%,表明本发明所述的试剂盒以及所用的测定方法特异性好。
六、方法对比试验:由于改良J-G法为国际临床化学协会推荐的总胆红素测定参考方法,改良J-G法试剂严格按照《全国临床检验操作规程》配制,所以本发明与其进行对比。用本发明所述试剂盒、测定方法与改良J-G法分别测定100例病人血清标本的总胆红素和直接胆红素,其测定结果如下:本发明所述方法测定总胆红素的平均值为28.44μ mol/L,改良J-G法测得的平均值为28.04μ mol/L,回归方程Y(本发明)=1.016X-0.048,r=0.997,经配对t检验,两者差异无显著意义(p>0.05),直线回归图(如图3所示);本发明所述方法测定直接胆红素的平均值为9.82μ mol/L,改良J-G法测得的平均值为9.86μ mol/L,回归方程Y(本发明)=0.992X+0.039,r=0.988,经配对t检验(是本领域的技术人员所熟知的一种统计学的处理方法),两者差异无显著意义(p>0.05),直线回归图(如图4所示),其中x为测定结果的平均值,s为标准偏差。
七、抗干扰试验:
(1)溶血标本血红蛋白对结果的干扰试验:在本发明所述测定条件下,在含总胆红素235μ mol/L,直接胆红素83μ mol/L的血清中分别加入不同浓度血红蛋白,血红蛋白对胆红素测定为负干扰(表3)。根据美国CLIA’88能力比对检验的分析质量要求,总胆红素最大允许误差为靶值±20%,标本中含有Hb10g/L,总胆红素降低19.1%,标本中含有Hb6g/L时,直接胆红素降低18.1%,溶血对直接胆红素的影响大于总胆红素。
表3 溶血对实验结果的影响
(2)NaN3干扰试验:NaN3为质控血清常用的防腐剂,常用浓度为500-1000mg/L。在本发明所述的测定条件下,在含总胆红素106.0μ mol/L,直接胆红素59.1μ mol/L的血清中分别加入不同浓度的NaN3,结果当NaN3浓度小于2000mg/L时,对本发明的测定结果几乎无影响(表4),而现有资料表明,当NaN3浓度大于40mg/L时,可引起改良J-G法反应不完全,甚至不显色,
表4NaN3对实验结果的影响
(3)维生素C干扰试验:在本发明所述的测定条件下,在血清中分别加入不同浓度维生素C,结果维生素C浓度小于400mg/L时,对本发明所述的结果无影响(表5),而现有资料表明,当维生素C浓度大于40mg/L时,可引起改良J-G法反应不完全,甚至不显色,
表5维生素C对实验结果的影响
八、试剂稳定性观察:将新配的用于测定总(直接)胆红素的试剂与4℃冰箱避光保9个月的试剂测定同一标本,结果无差异。x±sμ mol/L,其中x为测定结果的平均值,s为标准差(新试剂总胆红素42.8±0.86,旧试剂43.3±0.89;新试剂直接胆红素22±0.66,旧试剂22.1±0.67,n=10)。
九、参考值范围确定:用本发明所述的测定方法测定120名体检合格的成人男女,年龄在18—62岁,新鲜标本无黄疸、无脂浊、无溶血,测定血清总胆红素和直接胆红素,取95%可信限值为参考范围,结果总胆红素含量(x±s)10.9±3.76μ mol/L,参考值范围(x±1.96s)为3.5—18.3μmol/L;直接胆红素(x±s)2.74±1.37μ mol/L,参考值范围(x±1.96s)为0.1—5.4μmol/L。
总之,本发明所述的固蓝B盐一步比色法测定血清总胆红素和直接胆红素的试剂盒配制简单,采用单一试剂,操作只有一步,操作简便、反应速度快、灵敏度高、结果准确可靠,抗干扰强,试剂盒稳定、保存时间长,可提高化验速度,保证化验结果的准确性,提高诊断水平,而且既可用于手工操作和半自动生化仪,又可用于自动化生化分析仪,与国际临床化学学会推荐的改良J-G法相比,具有良好的相关性,在AU640全自动生化分析仪多年的临床应用观察,结果稳定可靠,该试剂盒经省内多家医院试用,反映结果非常满意,是一种比较理想的胆红素测定方法,值得广泛推广应用。
附图说明
图1为本发明所述的总胆红素的吸收曲线图
图2为本发明所述的直接胆红素的吸收曲线图
图3为本发明所述的测定方法与改良J-G法在测定总胆红素后结果的比较示意图
图4为本发明所述的测定方法与改良J-G法在测定直接胆红素后结果的比较示意图
具体实施方式
实施例1:
一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒,由用于测定总胆红素的试剂和用于测定直接胆红素的试剂构成,其中,用于测定总胆红素的试剂为:固蓝B盐3g/L,浓盐酸45ml/L,尿素40g/L,二甲基亚砜300ml/L,配制1L该试剂时,将上述四种物质混合并加少量水溶解,然后加去离子水稀释至1L;用于测定直接胆红素的试剂为:固蓝B盐3g/L,浓盐酸45ml/L,尿素40g/L,其配制方法与总胆红素试剂一致,
1、总胆红素的测定采用手工测定,操作步骤按下表操作:
将血清、总胆红素校准品、去离子水分别加入测定管、标准管和空白管,然后在每个管内加入本发明所述的总胆红素试剂,混匀,在37℃水浴中加热8分钟,分光光度计以空白调零点,用1cm光径比色杯,在610nm波长处测定各管吸光度值(A),计算结果,
2、直接胆红素的测定采用手工测定,操作步骤按下表操作:
将血清、直接胆红素校准品、去离子水分别加入测定管、标准管和空白管,然后在每个管内加入本发明所述的直接胆红素试剂,混匀,在37℃水浴中加热4分钟,分光光度计以空白调零点,用1cm光径比色杯,在610nm波长处测定各管吸光度值(A),计算结果,
实施例2:
一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒,由用于测定总胆红素的试剂和用于测定直接胆红素的试剂构成,其中,用于测定总胆红素的试剂为:固蓝B盐6g/L,浓盐酸65ml/L,尿素60g/L,二甲基亚砜500ml/L;用于测定直接胆红素的试剂为:固蓝B盐6g/L,浓盐酸65ml/L,尿素60g/L,
1、总胆红素的测定采用AU-640自动分析仪测定,其主要参数:温度37℃,波长600nm,标本体积8μl,试剂体积200μl,读数时间0-27;
2、直接胆红素的测定采用AU-640自动分析仪测定,其主要参数:温度37℃,波长600nm,标本体积8μl,试剂体积200μl,读数时间0-12。
实施例3:
一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒,由用于测定总胆红素的试剂和用于测定直接胆红素的试剂构成,其中,用于测定总胆红素的试剂为:固蓝B盐4g/L,浓盐酸50ml/L,尿素50g/L,二甲基亚砜400ml/L;用于测定直接胆红素的试剂为:固蓝B盐4g/L,浓盐酸50ml/L,尿素50g/L,本实施例的测定方法与实施例1相同。
实施例4:
一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒,由用于测定总胆红素的试剂和用于测定直接胆红素的试剂构成,其中,用于测定总胆红素的试剂为:固蓝B盐5g/L,浓盐酸60ml/L,尿素55g/L,二甲基亚砜450ml/L;用于测定直接胆红素的试剂为:固蓝B盐3g/L,浓盐酸48ml/L,尿素55g/L,本实施例的测定方法与实施例2相同。
Claims (2)
1. 一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒,其特征是由用于测定总胆红素的试剂和用于测定直接胆红素的试剂构成,
其中,用于测定总胆红素的试剂为:固蓝B盐3-6g/L,浓盐酸45-65ml/L,尿素40-60g/L,二甲基亚砜300-500ml/L;
用于测定直接胆红素的试剂为:固蓝B盐3-6g/L,浓盐酸45-65ml/L,尿素40-60g/L。
2. 根据权利要求1所述的一种固蓝B盐法测定血清胆红素的试剂盒,其特征是用于测定总胆红素的试剂为:固蓝B盐4g/L,浓盐酸50ml/L,尿素50g/L,二甲基亚砜400ml/L;用于测定直接胆红素的试剂为:固蓝B盐4g/L,浓盐酸50ml/L,尿素50g/L。
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3814586A (en) * | 1973-01-02 | 1974-06-04 | Miles Lab | Composition,method and device for determining bilirubin and urobilinogen |
US3825411A (en) * | 1972-08-30 | 1974-07-23 | Medico Electronic Inc | Reagent and method for bilirubin determination |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3825411A (en) * | 1972-08-30 | 1974-07-23 | Medico Electronic Inc | Reagent and method for bilirubin determination |
US3814586A (en) * | 1973-01-02 | 1974-06-04 | Miles Lab | Composition,method and device for determining bilirubin and urobilinogen |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
杨昌国 等.单一试剂显色法测定血清总与结合胆红素.《临床检验杂志》.1984,第2卷(第3期),14-16. * |
石同才.固蓝B盐法测定血清胆红素.《中国检验医学研究进展--中国检验医学中青年论坛文集》.2005,42-43. * |
郭连兴 等.固蓝B法测定血清胆红素的改进.《承德医学院学报》.1995,第12卷(第4期),309-314. * |
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US5955374A (en) | Method of detection of bilirubin in urine on an automated analyzer |
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PB01 | Publication | ||
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