CN101115497A - 预防生活习惯病的食品 - Google Patents
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Abstract
本发明的生活习惯病预防食品含有绿豆蛋白分解物。这种绿豆蛋白分解物通过用蛋白酶水解绿豆来源的蛋白质而获得。优选绿豆蛋白分解物总肽中二肽或三肽的比率在10%以上。本发明的生活习惯病预防食品特别适用于预防高血压、动脉硬化、肥胖症等。此外,本发明提供含有这种绿豆蛋白分解物的抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂和抗肥胖药。按照本发明,还提供含有绿豆蛋白分解物的减肥食品。绿豆蛋白分解物由历来供食用的天然物来源的材料得到,因此副作用少且安全性高。并且,因为是由粉丝制造工程所得副产品制得,所以从废物利用的角度考虑对环境无害,预期可对循环型社会作出贡献。
Description
技术领域
本发明涉及预防生活习惯病的食品,更详细地说,涉及含有绿豆蛋白分解物的抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂和抗肥胖药、以及含有所述抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂或抗肥胖药的食品或药品和准药品。本发明还涉及含有绿豆蛋白分解物的具有减肥效果的食品。
背景技术
近年来生活习惯病增加,已经成为社会问题。要求尝试在日常生活中预防、改善生活习惯病,为此,希望摄取安全性高的功能性物质。由于食品中含有各种生理活性物质,因此对于食品来源的功能性物质或功能性食品的关注逐渐增加。
高血压是生活习惯病之一,虽然其自觉症状少,但若任其发展则成为促进动脉硬化、诱发心肌梗塞、脑梗塞、肾脏疾病等重症疾病的主要原因,所以其改善或预防是重要的。近年来,一直关注着清晨高血压与心脑血管疾病发病之间的关联,已经指出为抑制心脑血管疾病的发病而控制清晨血压的重要性(S.Noguchi等,Bio Clinica,2003年,18卷,5号,63-67页)。因此,对能够在睡前服用且直到清晨为止抑制血压的具有作用持续性的降压药的需求日益增加。此外,在日常生活的健康管理中,希望不仅具有一过性降压作用,而且也具有长期摄取的慢性作用或停药后的作用持续性。
从与血压上升机理或高血压发病、发展机理的相关性来看,可预期具有血管紧张转化酶(ACE)抑制作用或活性氧除去作用的制品有抗高血压效果。因此,作为评价抗高血压效果的第一阶段,对ACE抑制能力或活性氧除去能力进行了体外评价(日本特开2003-24012号公报和日本特开平9-309833号公报)。然而,物质在活体内受到各种各样的作用,体外评价是从其物质作用的一个方面进行的评价,其评价结果不一定同样反映体内的情况,仅在体外难以评价体内多种多样的局面。因此,希望也进行体内的评价。
近年来,探索了以食品来源的物质作为抗高血压药,确认了体内的降压作用或血压上升抑制作用。作为上述物质例如有小麦麦谷蛋白的胰凝乳蛋白酶水解物(日本特开平4-187643号公报)、芝麻蛋白分解物(日本特开平7-69922号公报)等。这些物质对自发性高血压大鼠(SHR)的一次给药,证实有降压作用,但其效果在给药后8小时内非常小。作为有作用持续性的降压药已报告有油菜籽蛋白分解物来源的三肽,但这种物质也有同样问题(日本特开2004-51636号公报)。此外,通过对SHR的反复给药,在大豆蛋白分解物的纯化物(日本特开平5-339166号公报)和干酪乳清中等所含的酪蛋白糖肽(日本特开平6-345664号公报)中确认了血压上升抑制效果。但是,尚未有关于其持续性的评论。
作为显示出长期给药后血压上升抑制作用的停药后持续性的物质已报告有脱脂乳来源的乳酸菌处理物(Y.Nakamura等,Biosci.Biotech.Biochem.,1996年,60卷,3号,488-489页)。将这种乳酸菌处理物与食物一起连续给予SHR 16周时,在停止给药后经过48小时测定证实了对血压的抑制作用。此外,有报告证实,将沙丁鱼来源的肽对人连续给药4周时,在停止给药后经过3周测定降压作用在停药后有持续性(日本特开平11-228599号公报)。但是,这里所用的试样是沙丁鱼蛋白分解后通过用ODS树脂分离而得到的物质,因此在制造上昂贵且麻烦。
另一方面,由于日本的饮食生活方式向欧美方式转变,过多摄取高热量食品的机会显著增加,作为生活习惯病之一的动脉硬化也因此伴随着增加。上述高热量食品中通常脂肪成分和胆固醇含量高,因此若日常过多摄取则对血管产生不良影响,从而诱发各种疾病。这与吸烟、饮酒、应激、年龄增加等相结合,就成为局部缺血性心脏病、脑血管障碍、慢性闭塞性动脉硬化等的动脉硬化性疾病增加的主要因素。如果这些疾病发病,则可能危及生命,也可能有因后遗症等引起的障碍而妨碍日常生活,导致生活质量(QOL)降低。另外,担心今后随着年龄的增加,动脉硬化等疾病也会增加。为了使上述疾病不发病,从预防医学的角度来看,在日常生活中持续摄取具有抗动脉硬化作用的天然物来源的食品是有效的。动脉硬化及其相关疾病的预防,是为了抑制年老后的QOL降低,进一步是为了使急剧增加的医疗保险费缩减的最佳手段之一。
作为为预防动脉硬化而开发的食品,例如有从米糠、罗汉果、玉蕈、菊、黑麦、白桦和玉桃中至少一种提取的提取物(日本特开2005-68132号公报)、含有岩藻甾醇-3-酮型和/或岩藻甾醇的食品(日本特开2005-104887号公报)、亚麻仁种子或其压榨物(日本特开2004-83428号公报)、紫檀烷(pterocarpan)(日本特开2003-155236号公报)、从桉树属植物提取的提取物(日本特开2001-270833号公报)、含有原花色素和异黄酮的食品(日本特许第3510526号公报)、含有原花青素的食品(日本特开平9-291039号公报)、壳聚糖和肽的混合物(日本特许第3108675号公报)等。此外,作为为治疗动脉硬化而开发的肽,例如有载脂蛋白A-1 C末端区肽(日本特开平8-157492号公报)、具有丝氨酸蛋白酶抑制作用的肽(日本特开2004-67583号公报)、六肽(日本特许第2803477号公报)等。然而,这些食品和具有抗动脉硬化作用的物质在许多情况下以对培养细胞的细胞增殖抑制作用、细胞分泌的激素量、动物血液中的甘油三酯浓度、血液中胆固醇浓度等的血液参数作为指标,例如以中膜/内腔比等作为指标对血管结构本身的抗动脉硬化作用的直接评价很少。因此,这些食品或物质的动脉硬化抑制效果不一定能十分满意。并且,这些发明中还有化学合成物,由于担心为预防动脉硬化而持续摄取时会产生副作用,因此如果重视更高的安全性,则希望开发天然物来源的抗动脉硬化预防药。
作为人的动脉硬化诊断方法,有通过对颈动脉超声回波检查来测定颈动脉内膜中膜复合体厚度(IMT)、将其作为诊断基准的方法(日本特开2005-390号公报)。若IMT超过1.1mm,则认为脑血管障碍或局部缺血性心脏病发病率增高,也有定期实施IMT测量的设备。在实验动物的情况下计算出血管的中膜/内腔比,以此作为抗动脉硬化指标(K.L.Christensen等,Journal of Hypertension,1989年,7卷,83-90页)。这一比率的值越小,则表示造成抗动脉硬化。
对冠状动脉变狭窄的部分或堵塞的部分,有使用顶端配有球囊导管的扩张治疗。如果让球囊在冠状动脉变狭窄的部分膨胀,则因其压力导致血管壁扩张,由此变狭窄的血管得以改善。然而,这种治疗方法中,治疗部位在3-6个月后有所谓的再狭窄问题。认为这是由于血管扩张的刺激引起血管逐渐肥厚所致。作为用于预防这种再狭窄的方法,例如将支架(小的金属制网状管)永久性地留在病变部位的方法等,进行了各种检讨,但是迄今未发现划时代的对策方法。
成为种种生活习惯病病因的肥胖被认为是由于进食过多、运动不足、代谢障碍、遗传等各种原因所致的摄取过剩能量和能量消耗降低所诱导的。一般而言,为了改善肥胖,实施限制摄取过剩能量的食物疗法。摄取上述食物疗法中所用的减肥食品,在热量降低的同时,蛋白质不足的情况较多。
因此,对减肥食品进行了各种研究以使蛋白质充足。例如,作为低热量、高蛋白和高营养的减肥食品,有人提出了含有将蛋白质混合物(粘多糖蛋白、乳蛋白、脱脂乳、大豆分离蛋白、玉米蛋白和/或可溶性胶原、蛋清粉、大豆肽)、碳水化合物、脂质、抗便秘药、维生素和矿物质组合的食品(日本特开2001-120227号公报)。特别是,发现通过用经酶处理的蛋白分解物作为蛋白质替代物,可以得到抗肥胖作用。例如,已知含有经酶处理牛肉得到的水溶性肽的减肥食材(日本特开平10-66542号公报)、含有大豆蛋白或大豆蛋白分解物代替酪蛋白的抗肥胖食品(日本特开平10-71号公报)、含有经酶分离得到的植物(大麦、小麦、马铃薯、大豆、木梨或酒糟)来源的肽和海洋性来源的肽(鱼类肽)的食品(日本特开2002-142723号公报)、含有大豆蛋白酶分解物的饮料(日本特开2002-10764号公报)等。
发明内容
本发明基于从作为食用豆之一的绿豆的蛋白分解物中发现即便持续摄取也不必担心副作用、具有优良的抗高血压作用、抗动脉硬化作用、减肥作用等的物质。本发明的目的是以作为用于添加到预防生活习惯病用的功能性食品或健康食品中的材料、或者作为这种功能性食品或健康食品自身提供该物质。
本发明提供含有绿豆蛋白分解物的生活习惯病预防食品。
在一个实施方式中,所述生活习惯病是高血压、动脉硬化或肥胖症。
本发明还提供含有绿豆蛋白分解物的抗高血压药。
本发明进一步提供含有绿豆蛋白分解物的抗动脉硬化药和血管肥厚抑制剂。
本发明另外还提供含有绿豆蛋白分解物的抗肥胖药。
本发明还提供含有上述抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂或抗肥胖药的药品和准药品。
本发明也提供治疗和预防生活习惯病的方法,该方法包括摄取含有绿豆蛋白分解物的食品、药品或准药品的步骤。
本发明还提供将绿豆蛋白分解物用于治疗和预防生活习惯病的方法,该方法包括以下步骤:制备含有绿豆蛋白分解物的食品、药品或准药品,摄取该食品、药品或准药品。
在一个实施方式中,所述生活习惯病是高血压、动脉硬化或肥胖症。
在另一实施方式中,上述绿豆蛋白分解物的总肽中二肽或三肽的比率在10%以上,更优选在50%以上。在进一步的实施方式中,上述绿豆蛋白分解物通过用蛋白酶水解绿豆来源的蛋白质而得到。在另一实施方式中,含有上述绿豆蛋白分解物的食品、药品或准药品含有0.1-100%质量的该蛋白分解物、更优选含有1-100%质量的该蛋白分解物。
本发明提供含有绿豆蛋白分解物的减肥食品。
在另一个实施方式中,上述减肥食品中,所述绿豆蛋白分解物的总肽中二肽或三肽的比率在10%以上,更优选在50%以上。
在一个实施方式中,所述绿豆蛋白分解物通过用蛋白酶水解绿豆来源的蛋白质而得到。
在另一实施方式中,所述减肥食品含有0.1-100%质量的该绿豆蛋白分解物、更优选含有1-100%质量的该绿豆蛋白分解物。
附图简述
图1图示含有绿豆蛋白分解物的饲料在长期给药试验中SHR的收缩压(A)、舒张压(B)和平均血压(C)随时间的变化。
图2图示含有绿豆蛋白分解物的饲料在长期给药后的停药期间中SHR的收缩压(A)、舒张压(B)和平均血压(C)随时间的变化。
图3图示含有绿豆蛋白分解物的饲料在一次给药试验中SHR的收缩压(A)、舒张压(B)和平均血压(C)随时间的变化。
图4图示各组小鼠给药前后的体重增加量。
图5图示各组小鼠给药结束后附睾周围脂肪组织的重量。
图6图示各组小鼠给药结束后相对于体重的附睾周围脂肪组织的重量。
实施发明的最佳方式
作为本发明所用绿豆蛋白分解物之原料植物的绿豆是豆科植物,其豆部分为绿色至褐色,其大小也比小豆要小。绿豆即使发芽也可作为豆芽,而且已知绿豆淀粉作为粉丝的原料。
本发明所用的含有绿豆来源蛋白质的原料(以下称为“原料”)可以是绿豆破碎物或其榨汁、或它们的水、酸或碱的提取物。此外,绿豆加工处理中的副产品也可以用作原料,举例来说,例如以绿豆淀粉作为主要成分、粉丝制造过程中产生的含有绿豆来源蛋白质的副产品。其形态可以是液体、粉状、糊状等的任意形态。另外,除绿豆来源蛋白质之外,也可以含有糖类、食物纤维类、盐分、水分、油脂类等。原料中的蛋白质含量(以下称为“粗蛋白含量”)并无具体限定,但优选在15%质量以上,更优选在30%质量以上。
在此,粗蛋白含量通过乘以转换为蛋白质中氮量的系数来计算出来。氮量例如可以用半微量基耶达测氮法来测定。具体而言,粗蛋白含量如下求出。首先,在长颈烧瓶中准确称量50mg试样。其次,将10g硫酸钾与1g硫酸铜混合作为分解促进剂,取1g加入烧瓶中,再加入5ml浓硫酸。放置一夜后,缓慢加热烧瓶,液体变透明,加热至烧瓶内壁上碳化物消失为止。冷却后,加入20ml蒸馏水,充分混合后用冰冷却,将烧瓶与预先通入水蒸气洗净的蒸馏装置连接。向接受馏出液体的容器中加入10ml 0.1N硫酸和2-3滴指示剂(甲基红与亚甲蓝试液的混合液),将蒸馏装置的冷却器下端浸入这种液体中。由与蒸馏装置相连的漏斗向烧瓶中添加20ml 40%氢氧化钠,通入水蒸气蒸馏6-7分钟。将冷却器的下端与液面分离,用少量水洗涤该部分,用0.1N氢氧化钠滴定。另外,不添加试样,用同样的方法进行测定作为空白。按照下式计算出粗蛋白含量:
粗蛋白含量(%(w/w))={([B]-[A])×F×1.4007×6.25/[C]}×100式中,[A]为添加试样时滴定所需的0.1N氢氧化钠的容量(ml),而[B]为空白滴定所需的0.1N氢氧化钠容量(ml)。另外,[C]为试样质量(mg),而[F]为滴定所用的氢氧化钠的因数,[1.4007]相当于相对于1ml0.1N硫酸的氮的质量(mg)。此外,本发明中由氮质量转换为蛋白量的换算系数使用“6.25”。
本发明中,所谓绿豆蛋白分解物是指通过用一切手段水解绿豆来源蛋白质而得到的分解物、用酸或蛋白酶之类的酶分解的分解物。从反应是温和和不易生成副产品的角度考虑,优选用作为蛋白分解酶的蛋白酶所产生的分解物。
作为蛋白酶,例如有Rhizopus delemar、雪白根霉(Rhizopus niveus)等根霉属(Rhizopus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillusoryzae)等曲霉属(Aspergillus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sutilis)、种名待定的芽孢杆菌(Bacillus sp.)等芽孢杆菌属(Bacillus)等的微生物来源的酶;胃蛋白酶、胰酶等动物来源的酶;木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等植物来源的酶。在本发明中,从分解程度容易调节的角度考虑,希望是曲霉属来源的酸性蛋白酶。蛋白酶也可以是市售的纯化品或粗制品,也可以使用一种或两种以上。关于水解的反应条件(反应温度、pH、时间、酶用量等),可以根据所用蛋白酶的最适作用条件来设定。通常,温度为10-80℃,pH为2-11,反应时间为2-48小时,酶的用量为每1g粗蛋白10-30,000单位。优选反应温度为30-60℃,pH为3-8,反应时间为4-20小时,酶量为每1g粗蛋白100-7000单位。
在上述蛋白酶处理后,从所得的蛋白酶处理物中经过滤或离心除去不溶物。用减压浓缩、冷冻干燥、喷雾干燥等方法使所得的上清液干燥,得到绿豆蛋白分解物。在上述步骤中,也可以在干燥前用活性炭或树脂等进行适当纯化。所得绿豆蛋白分解物的形态可以是液体、粉末、糊状中的任意形态。所得的绿豆蛋白分解物通常无臭味,有良好的风味。
上述绿豆蛋白分解物在其总肽中二肽或三肽的比率优选在10%以上。更优选二肽或三肽的比率在40%以上。从摄取时吸收性优良的角度考虑,更优选在50%以上。需要说明的是,所谓二肽或三肽具体而言是在以下详述的分子量分布分析中分子量在约130-580范围内所含有的肽。
本发明中,绿豆蛋白分解物的分子量分布以及二肽或三肽含量的分析按照下述方法进行。
分子量的测定通过使用凝胶过滤柱(Superdex Peptide HR 10/30,Pharmacia Biotech Ltd.)的高速液相色谱法来测定。流动相为含有0.1%三氟乙酸的30%乙腈水溶液,流速为0.3ml/分钟,通过紫外(220nm)吸收进行检测。通过使用甘氨酸(分子量75.07)、分子量已知的寡肽丙氨酰脯氨酸(分子量186.2)、血管紧张素II(分子量1046.2)和P物质(分子量134.7)制作标准曲线,求出分子量。分子量分布使用数据处理器(D-2500 chromato-Integrator,日立制作所公司制备)以积分图面积比来表示。对于二肽或三肽的含量,由上述积分图求出平均分子量在130-580范围内的肽的总量,将该量作为二肽或三肽的量,求出相对于总肽总量的比率。
本发明的生活习惯病预防食品含有上述绿豆蛋白分解物,可以以各种食品形态提供。这里所述的生活习惯病是指中年以后多患的非感染性慢性疾病,例如有高血压、动脉硬化、局部缺血性心脏病、脑中风等循环系统疾病;糖尿病、恶性肿瘤等。本发明的生活习惯病预防食品对于预防这些生活习惯病有效,特别适用于预防高血压和动脉硬化。此外,也可用于预防、改善成为上述生活习惯病病因的肥胖症。因此,本发明也包括肥胖症作为生活习惯病的情况。
本发明的生活习惯病预防食品除上述绿豆蛋白分解物之外,还可以含有蛋白质、纤维(包含食物纤维)、淀粉、糖、脂质、矿物质、维生素、食品中常用的添加剂等。在这种情况下,食品中的绿豆蛋白分解物的比率优选为0.1-100%质量,更优选为1-100%质量。上述食品例如有粥、面包、稍加油轻炸的豆腐块等的谷物、豆制品;香肠、火腿等畜产制品;鱼糕、鱼卷等水产制品;酸乳酪、豆奶等乳制品;布丁、蒸鸡蛋羹等蛋制品;饼干、酥脆饼干等糕点类、冷冻炸肉饼、冷冻炸大虾等烹调加工食品;果汁、可可粉等饮料;杯装方便面调味料、酱油、佐料等调味料。这些食品不仅可以是通常的食品,也可以是健康饮食品、特定保健用食品等。另外,这些食品也可以是液体、固体、块状、粉状、半流体等的任意形态。
这些食品可以标示“担心生活习惯病者用”、“血压高者用”、“担心高血压者用”、“动脉硬化程度高者用”、“担心动脉硬化者用”、“有肥胖倾向者用”、“担心体重者用”、“担心体脂肪者用”等来出售。
上述绿豆蛋白分解物可以用作本发明的抗高血压药。或者,上述绿豆蛋白分解物可以用作本发明的抗动脉硬化药和血管肥厚抑制剂。这里所述的抗动脉硬化药和血管肥厚抑制剂是指能够预防、治疗或改善动脉硬化和血管肥厚的物质。所谓动脉硬化和血管肥厚的改善是指抑制动脉硬化和血管肥厚的进展。另外,上述绿豆蛋白分解物还可以用作本发明的抗肥胖药。
本发明的含有以绿豆蛋白分解物作为有效成分的抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂或抗肥胖药的药品,其给药途径可以为经口、直肠内和静脉内中的任一种,但优选经口给药。
本发明的抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂、抗肥胖药可根据给药途径,以上述绿豆蛋白分解物原有形态或将其制成制剂后给药。本发明的抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂和抗肥胖药的剂型可根据给药途径适当地选择,例如为锭剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂、混悬剂、注射剂等。这些制剂按照本领域技术人员通常采用的方法制备。这些制剂含有0.1%质量以上、优选1-100%质量比率的上述绿豆蛋白分解物。
这种制剂可以含有制药领域中所使用的药学上可接受的载体。作为药学上可接受的载体例如有乳糖、糊精、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、山梨醇等的赋形剂、结晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等的辅助剂,这些载体可以单独使用或者适当组合使用。此外,也可以适当地使用缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、香料、着色剂、甜味剂等的添加剂。这些添加剂的含量可以由本领域技术人员适当决定。或者,这种制剂也可以含有不妨碍抗高血压作用的其它药效成分。
本发明的抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂和抗肥胖药的给药量随给药方法或患者的症状、年龄等而有所不同,然而作为上述绿豆蛋白分解物的粗蛋白含量,通常为每日1-200000mg,优选100-20000mg,更优选500-10000mg。
本发明的抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂和抗肥胖药不仅可以作为药品也可以作为准药品或食品提供。
通过摄取本发明的抗高血压药和含有该抗高血压药的食品或药品或准药品,可缓慢降低血压。例如,对高血压大鼠一次给药时,血压下降至少持续8小时。这样,由于效果维持时间较长,因此即使在难以给药的睡眠中或清晨也可以抑制血压。另外,除了一次给药后显示短期效果的降压作用之外,还具有对高血压大鼠长期给药而引起的血压上升抑制作用。这种效果在给药终止后也可持续一段时间。因此,可以预期,其优点是通过长期摄取本发明的抗高血压药或食品,即便忘记服用时也可无需担心血压急剧上升等。从这些方面考虑,本发明的抗高血压药适用于日常摄取和长期摄取。
通过摄取本发明的抗动脉硬化药和血管肥厚抑制剂以及含有抗动脉硬化药或血管肥厚抑制剂的食品或药品或准药品,可抑制血管肥厚的进展,即抑制动脉硬化。例如,通过使高血压大鼠长期摄取上述食品,与对照大鼠相比,其胸部大动脉的中膜/内腔比保持显著低,而且胸部大动脉和腹部大动脉的血管重量也降低。
通过摄取本发明的抗肥胖药和含有抗肥胖药的食品或药品或准药品,可以抑制摄取高脂肪食物或高热量食物引起的肥胖。例如,在与高脂肪食物一起给予小鼠时,体重和脂肪重量的增加受到抑制。
上述绿豆蛋白分解物也可以用作本发明的减肥食品。本发明的减肥食品除上述绿豆蛋白分解物之外,还可以含有蛋白质、纤维(含有食物纤维)、淀粉、糖、脂质、矿物质、维生素、食品中常用的添加剂等。在这种情况下,食品中绿豆蛋白分解物的比率优选为0.1-100%质量。为了更有成效地利用,优选1-100%质量。为了进一步有成效地利用,优选5-100%质量。
本发明的减肥食品与上述生活习惯病预防食品一样,作为含有绿豆蛋白分解物的各种食品提供。这些减肥食品可以标示“担心体重者用”、“有肥胖倾向者用”、“担心体脂肪者用”等来出售。本发明的减肥食品在与高脂肪食物一起摄取时可防止摄取过多脂肪引起的肥胖。
实施例
制备例1:绿豆蛋白分解物的制备-1
将粉丝制造工程得到的副产品即含有绿豆蛋白的排出液的干燥物用粉碎机粉碎,加入自来水进行分散,使粗蛋白含量为6%质量。用盐酸将其调整为pH 3,然后每1g粗蛋白加入3000单位酸性蛋白酶(デナプシン、ナガセケムツテクス公司制备),搅拌下于40℃反应16小时。反应结束后,于80-85℃加热20分钟使酶失活。将该酶反应液离心,添加氢氧化钠将上清液调整为pH 8,然后进行活性炭处理、过滤和过滤除菌,再进行冷冻干燥,得到绿豆蛋白分解物。按照上述程序,测定这种分解物的分子量分布。这种分解物总肽中二肽或三肽的比率为59.3%。
制备例2:绿豆蛋白分解物的制备-2
按照与制备例1相同的方法,制备粗蛋白含量为6%质量的分散液。用氢氧化钠将其调整为pH 7后,每1g粗蛋白添加1万单位的碱性蛋白酶(ビオプラ-ゼSP15-FG(商品名),ナガセケムテツクス公司制备),缓慢搅拌的同时在40℃下反应16小时。反应结束后,在80-85℃下加热20分钟使酶失活。将该酶反应液离心,将上清液冷冻干燥,得到绿豆蛋白分解物。按照上述程序,测定这种分解物的分子量分布。这种分解物的总肽中二肽和三肽的比率为61.1%。
制备例3:含有绿豆蛋白分解物的饲料的制备
作为用于以下实施例1中所用的大鼠试验饲料,将上述制备例1所得的绿豆蛋白分解物作为粗蛋白混入CRF-1(オリェンタル酵母株式会社)的粉末饲料中,使其分别含有0.25%w/w、1.25%w/w和2.50%w/w粗蛋白,用打锭机制备颗粒状。
制备例4:绿豆蛋白分解物的制备-3
按照与制备例1相同的方法,从绿豆蛋白排出液干燥物中得到绿豆蛋白分解物。按照上述程序测定这种分解物的分子量分布。本制备例4所得分解物的总肽中二肽或三肽的含量为64.4%。
实施例1:对自发性高血压大鼠(SHR)长期给药的血压测定
将4周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)(日本ェスェルシ-株式会社)驯化2周,其间可自由获取固体饲料(CRF-1:オリェンタル酵母株式会社)和自来水。驯化后,将SHR分成4组,1组6只;作为试验组,设定低用量组、中用量组和高用量组,另外1组作为对照组。各试验组可自由摄取上述制备例3所得的含有各浓度的绿豆蛋白分解物的饲料,而对照组可自由摄取普通食物-CRF-1固体饲料,试验进行6周。试验期间,每2周测定血压、心率、摄食量和体重。对于血压,用非观血式自动血压测定装置(BP-97A:株式会社ソフトロン)测定尾动静脉血压。舒张压、收缩压和平均血压的测定结果示于表1-3和图1中。表1-3显示长期给予含绿豆蛋白分解物饲料的试验中试验开始至6周时SHR的收缩压(表1)、舒张压(表2)和平均血压(表3)的变化。各数据以平均值±标准误差表示,作为统计学分析,通过Bartlett的等分散性检验进行分散分析后,进行Dunnett检验。显著性水平设定为5%。
表1
收缩压(mmHg)
给药期间(周) | 给药前 | 2 | 4 | 6 |
对照 | 143±2.9 | 168±4.1 | 196±3.4 | 205±4.1 |
低用量 | 141±3.3 | 168±4.1 | 189±3.3 | 194±3.3 |
中用量 | 143±2.7 | 163±2.7 | 184±3.1* | 190±4.6* |
高用量 | 142±2.2 | 166±4.4 | 182±2.6* | 188±2.4* |
*p<0.05(Dunnett检验)
表2
舒张压(mmHg)
给药期间(周) | 给药前 | 2 | 4 | 6 |
对照 | 102±3.0 | 126±4.2 | 147±6.7 | 173±7.2 |
低用量 | 97±3.1 | 124±5.7 | 125±3.2* | 140±4.0** |
中用量 | 98±3.2 | 117±2.9 | 122±5.6* | 142±5.2** |
高用量 | 99±2.6 | 113±8.5 | 129±6.5 | 144±3.7** |
*p<0.05 **p<0.01(Dunnett检验)
表3
平均血压(mmHg)
给药期间(周) | 给药前 | 2 | 4 | 6 |
对照 | 115±2.6 | 140±3.7 | 163±5.5 | 183±6.2 |
低用量 | 112±2.8 | 139±5.9 | 147±3.1 | 158±3.7** |
中用量 | 113±2.9 | 132±2.0 | 143±4.4* | 157±4.9** |
高用量 | 113±2.0 | 131±7.0 | 147±4.9 | 159±2.9** |
*p<0.05 **p<0.01(Dunnett检验)
由表1-3和图1可知,对照组中从试验开始血压缓慢上升,而试验组中都抑制了血压的上升。第4周后,确认了相对于对照组有显著的血压上升抑制效果(p<0.05)。血压中,收缩压和舒张压中的上升都被抑制,但发现对舒张压有效果更大的倾向。由这些结果可知,绿豆蛋白分解物抑制血压的上升。需要说明的是,从试验开始至6周期间,对于心率、摄食量和体重,未发现各试验组与对照之间有显著差异。
实施例2:长期给药后停药引起的血压变化
对上述实施例1的对照组和高用量组,再继续给予饲料至第8周,高用量组的饲料变为普通食物(以下称为停药),再过2周测定随时间变化的血压。在停药前、停药开始1天后、2天后、9天后和14天后进行测定。停药期间的舒张压、收缩压和平均血压的测定结果示于图2中。
由图2可见,高用量组在停药开始到至少9天内,与对照组相比血压有降低的倾向。由此可见,长期给予含绿豆蛋白分解物饲料的血压上升抑制效果在给药终止后也可持续一段时间。
实施例3:对自发性高血压大鼠(SHR)一次给药的血压测定
对上述实施例1的对照组和高用量组SHR,在上述实施例2的停药后,为了使高用量组血压完全恢复,再饲养3周并继续停药。其后,确认两组血压没有差异,实施一次给药试验。即将上述制备例1所得的绿豆蛋白分解物用注射用水悬浮,以300mg粗蛋白/5ml/kg体重,使用口服用细管对上述停药后的高用量组SHR(19周龄,雄性)进行强制口服给药。对照组用同样方法给予注射用水。随时间推移测定各组给药后的舒张压和收缩压。结果示于图3。由图3可知,在绿豆蛋白分解物给药组中给药后血压慢慢下降,给药后8小时内血压持续下降,发现给药后8小时时与对照组有显著差异(p<0.05)。由此可见,绿豆蛋白分解物显示出持续的降压作用。血压中,收缩压和舒张压都降低,特别是发现对舒张压效果大的倾向。
实施例4:对自发性高血压大鼠(SHR)持续给药
对于上述实施例1所用的低用量组和中用量组SHR,其后也继续给予试验食物,总计摄取16周绿豆蛋白分解物。另外,对于上述实施例3中所用的SHR,也再开始给予高用量组与上述实施例1同样的试验食物,对照组则继续给予普通食物,再继续饲养4周。即,对于对照组以及低用量、中用量和高用量的各试验食物组,继续给予16-17周上述实施例1的饲料,仅高用量组用于实施例2和实施例3的实施,从第8周至第13周的5周为停药期间。
实施例5:对自发性高血压大鼠(SHR)持续给药的胸部和腹部大动脉
的血管重量测定
上述实施例4所示的各组SHR饲养结束后,在戊巴比妥麻醉下解剖大鼠,摘取胸部大动脉和腹部大动脉,用生理盐水洗净除去血液,然后除去残余水分,测定各重量。将所测的重量转换为各大鼠平均体重的重量(100g重量比),进行统计学分析(用Bartlett的等分散性检验进行分散分析后,进行Dunnett检验)。结果示于表4。
表4
胸部大动脉 | 腹部大动脉 | |
对照组 | 37.5±3.83 | 16.3±1.48 |
低用量组 | 37.2±2.22 | 16.5±1.51 |
中用量组 | 30.3±2.26 | 16.5±0.82 |
高用量组 | 34.2±2.21 | 10.8±0.75* |
数值为mg/100g体重 *p<0.05
发现与对照组相比,各绿豆蛋白分解物给药组倾向于胸部和腹部大动脉相对于大鼠平均体重的重量轻。
实施例6:对自发性高血压大鼠(SHR)持续给药的胸部大动脉的中膜/
内腔比的测定
在上述实施例5所摘取的胸部大动脉中,使用中用量组和对照组的胸部大动脉,进行苏木精-伊红染色。将染色图像输入计算机中,利用图像分析系统(WinROOF Ver.3.6,三谷商事株式会社)进行中膜/内腔比的分析。对试验组和对照组的比较进行统计学分析(用F检验进行分散分析后,进行t检验)。结果示于表5。
表5
中膜/内腔比 | |
对照组 | 0.288±0.015 |
绿豆蛋白分解物组 | 0.258±0.023* |
*p<0.05
持续摄取绿豆蛋白分解物的试验组中,中膜/内腔比显著降低(p<0.05)。
由以上结果可知,绿豆蛋白分解物抑制胸部和腹部大动脉的动脉硬化,可以预期可预防血管肥厚和动脉硬化引起的血管疾病。
实施例7:摄取含高脂肪饲料的小鼠的体重变化
给予5周龄雄性C57BL/6J小鼠(日本クレア社)通常的饲养繁殖用饲料(“Rodent diet CE-2”,日本クレア社),进行2周驯化。然后以1组8只,将饲料置换为试验饮食,自由摄取5周。在试验饮食中,在含高脂肪的基础饲料(表6的组成:由オリェンタルバイオサ-ビス公司制备)中混合了乳酪蛋白和绿豆蛋白分解物中任一种,使得粗蛋白相对于饲料总量为10%质量比。所用的绿豆蛋白分解物是上述制备例4所得的分解物,在制备过程中含有较多NaCl。为避免上述NaCl对试验的影响,在酪蛋白食物中加入NaCl,使其与试验食物中的NaCl量相等(饲料组成记载于表7中)。需要说明的是,为了进行比较,设定了摄取无高脂肪食物的通常饲料的普通食物组。
表6
含高脂肪的基础饲料 | |
原料 | 比率(质量份) |
玉米淀粉 | 25.08 |
酪蛋白 | 10.66 |
蔗糖 | 27.52 |
纤维素粉 | 6.27 |
AIN93G矿物质混合物 | 4.39 |
AIN93维生素混合物 | 1.25 |
L-胱氨酸 | 0.38 |
重酒石酸胆碱 | 0.31 |
t-丁基氢醌 | 0.0018 |
牛脂 | 22.57 |
胆固醇 | 1.25 |
胆酸钠 | 0.31 |
表7
饲料组成 | 混合试样 | |
酪蛋白食物 | 绿豆蛋白分解物食物 | |
含高脂肪的基础饲料 | 79.75 | 79.75 |
乳酪蛋白(粗蛋白) | 10.00 | - |
绿豆蛋白分解物(粗蛋白) | - | 10.00 |
NaCl | 1.76 | 1.76 |
其它蛋白原料来源的成分 | 2.59 | 2.42 |
余量(蔗糖) | 5.90 | 6.07 |
单位为质量份
最后一次给药后禁食16小时,测定体重后,在戊巴比妥麻醉下放血处死,摘取附睾周围脂肪组织,测定重量。体重测定结果示于表8中。另外,体重的增加量、附睾周围脂肪组织重量和相对于体重的附睾周围脂肪组织重量分别示于图4-6中。对于统计处理,进行クリスカルウオ-リス顺位检验,当确认有显著性差异时,用ボンフェロ-ニ修正的マンホイツトニ-进行各组间的比较。显著性水平设定为5%。
表8
给药组 | 给药当天的体重(g) | 给药结束后的体重(g) |
酪蛋白食物 | 22.3±1.3 | 25.8±1.8 |
绿豆蛋白分解物食物 | 22.1±1.1 | 22.9±1.0* |
普通食物 | 22.5±1.7 | 23.3±1.8 |
*p<0.05,相对于酪蛋白食物
如表8所示,给药开始前的体重在各组间无差异。给药结束后,绿豆蛋白分解物食物组与酪蛋白食物组相比,体重(表8)和体重增加量(表4)显著降低,与普通食物的程度相同。此外,对于绿豆蛋白分解物食物组,发现附睾周围脂肪组织重量和平均体重的同一脂肪组织重量,也有比酪蛋白食物组更低的倾向,成为与普通食物组大致相同的程度(图5、图6)。需要说明的是,任一组的摄食量都没有明显差异。由此可知,绿豆蛋白分解物与作为一般动物性蛋白质的酪蛋白相比,显示出优良的减肥效果。
工业应用性
按照本发明,提供安全、价廉且风味也优异的预防高血压、动脉硬化等生活习惯病的食品。另外,按照本发明,提供具有更优异的减肥效果的食品。这些本发明的食品在与高脂肪食物一起摄取时,能够防止因过多摄取脂肪而引起的肥胖,因此,能够预防由肥胖引起的生活习惯病。
本发明的抗高血压药可用于抑制血压上升或降压,可作为药品或准药品、或者健康饮食品、特定保健用食品等的食品使用。本发明的抗高血压药有持续降压和抑制血压上升的效果,长期摄取后即使停药其效果也可持续一段时间。因此,可以抑制睡眠中和清晨时的血压。另外,即便忘记服用血压也不会急剧上升,因此适用于长期摄取。
按照本发明,还提供具有优异的抗动脉硬化作用的抗动脉硬化药和血管肥厚抑制剂。另外,还提供具有抑制体重和脂肪重量增加的作用的抗肥胖药。这些与上述抗高血压药一样,可以用作添加到功能性食品或健康食品中用的材料、或者用作功能性食品或健康食品自身、药品或准药品、或者用作健康饮食品、特定康健用食品等的食材。
本发明的抗高血压药、抗动脉硬化药、血管肥厚抑制剂、抗肥胖药以及生活习惯病预防食品和减肥食品中所使用的绿豆蛋白分解物,得自历来供食品用的天然物来源的材料,因此副作用少而安全性高。此外,由于是从粉丝制备工程所得的副产品制得,从废物利用的角度考虑对环境无害,而从成本方面考虑也是有利的。并且,在制备工程中,不需要用树脂等进行烦杂而昂贵的纯化,所以从这一角度考虑在成本方面也是有利的。
Claims (24)
1.生活习惯病预防食品,其含有绿豆蛋白分解物。
2.权利要求1的食品,其中所述生活习惯病为高血压、动脉硬化或肥胖症。
3.权利要求1或2的食品,其中所述绿豆蛋白分解物通过用蛋白酶水解绿豆来源的蛋白质而得到。
4.权利要求1-3中任一项的食品,其中所述绿豆蛋白分解物的总肽中二肽或三肽的比率在10%以上。
5.抗高血压药,其含有绿豆蛋白分解物。
6.权利要求5的抗高血压药,其中所述绿豆蛋白分解物通过用蛋白酶水解绿豆来源的蛋白质而得到。
7.权利要求5或6的抗高血压药,其中所述绿豆蛋白分解物的总肽中二肽或三肽的比率在10%以上。
8.药品和准药品,其含有权利要求5-7中任一项的抗高血压药。
9.抗动脉硬化药,其含有绿豆蛋白分解物。
10.权利要求9的抗动脉硬化药,其中所述绿豆蛋白分解物通过用蛋白酶水解绿豆来源的蛋白质而得到。
11.权利要求9或10的抗动脉硬化药,其中所述绿豆蛋白分解物的总肽中二肽或三肽的比率在10%以上。
12.血管肥厚抑制剂,其含有绿豆蛋白分解物。
13.权利要求12的血管肥厚抑制剂,其中所述绿豆蛋白分解物通过用蛋白酶水解绿豆来源的蛋白质而得到。
14.权利要求12或13的血管肥厚抑制剂,其中所述绿豆蛋白分解物的总肽中二肽或三肽的比率在10%以上。
15.药品和准药品,其含有权利要求9-14中任一项的抗动脉硬化药或血管肥厚抑制剂。
16.抗肥胖药,其含有绿豆蛋白分解物。
17.权利要求16的抗肥胖药,其中所述绿豆蛋白分解物通过用蛋白酶水解绿豆来源的蛋白质而得到。
18.权利要求16或17的抗肥胖药,其中所述绿豆蛋白分解物的总肽中二肽或三肽的比率在10%以上。
19.药品和准药品,其含有权利要求16-18中任一项的抗肥胖药。
20.减肥食品,其含有绿豆蛋白分解物。
21.权利要求20的减肥食品,其中所述绿豆蛋白分解物的总肽中二肽或三肽的比率在10%以上。
22.权利要求21的减肥食品,其中所述绿豆蛋白分解物的总肽中二肽或三肽的比率在50%以上。
23.权利要求20-22中任一项的食品,其中所述绿豆蛋白分解物通过用蛋白酶水解绿豆来源的蛋白质而得到。
24.权利要求20-23中任一项的食品,其中所述绿豆蛋白分解物的含量为0.1-100%质量。
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