CN101084010B - 抗日本脑炎病毒及西尼罗病毒的疫苗 - Google Patents

抗日本脑炎病毒及西尼罗病毒的疫苗 Download PDF

Info

Publication number
CN101084010B
CN101084010B CN200580043790.0A CN200580043790A CN101084010B CN 101084010 B CN101084010 B CN 101084010B CN 200580043790 A CN200580043790 A CN 200580043790A CN 101084010 B CN101084010 B CN 101084010B
Authority
CN
China
Prior art keywords
virus
sudden change
protein
chimerivax
banzi
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN200580043790.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101084010A (zh
Inventor
法沙德·吉拉克胡
刘江建
约翰·A·卡塔兰
托马斯·P·莫纳思
康斯坦廷·V·普加切夫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sanofi Pasteur Biologics LLC
Original Assignee
Sanofi Pasteur Biologics LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Pasteur Biologics LLC filed Critical Sanofi Pasteur Biologics LLC
Priority claimed from PCT/US2005/037369 external-priority patent/WO2006044857A2/en
Publication of CN101084010A publication Critical patent/CN101084010A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101084010B publication Critical patent/CN101084010B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了减毒黄病毒疫苗,如抗日本脑炎病毒和西尼罗病毒的疫苗,以及这些疫苗的制备和使用方法。

Description

抗日本脑炎病毒及西尼罗病毒的疫苗
发明领域
本发明涉及抗日本脑炎病毒(Japaneses encephalitis virus)及西尼罗病毒(West Nile virus)的疫苗。
发明背景
黄病毒科的黄病毒属包括大约70种病毒,大部分为虫媒病毒,其中的很多如黄热(YF)、登革(DEN)、日本脑炎(JE)以及蜱媒脑炎(TBE)病毒是主要的人类病原体(rev.in Burke and Monath,Fields Virology,4thEd.:1043-1126,2001)。例如,在亚洲,日本脑炎是病毒性脑炎的主要病因,每年报道有30,000至50,000例新病例。又如,自从1999年在纽约地区诊断出第一例病例,西尼罗病毒一直在北美迅速地蔓延。这种病毒迁移到南美并在不发达国家成为流行病的风险性非常高。需要有效的方法来预防这些病毒的感染,而疫苗接种是最合算的措施。
黄病毒颗粒包含由病毒RNA及衣壳蛋白C组成的核壳体。核壳体由含包膜糖蛋白E(50-60kDa)及小的膜蛋白M(7-8kDa)的包膜包围。基因组RNA经翻译生成多蛋白前体,该前体经细胞及病毒蛋白酶裂解依次形成病毒蛋白质:C,prM/M,E,NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,2K,NS4B,以及NS5,其中C至E为病毒体的结构成分,NS1至NS5为复制所需的非结构蛋白(Lindenbach and Rice,Fields Virology,4thEd.:991-1041,2001)。prM蛋白(~25kDa)是M的细胞内前体。包含prM的不成熟病毒体通过出芽(budding)到内质网的腔内来产生,然后通过胞吐途径运输到细胞表面。prM裂解发生在颗粒于后高尔基小泡中释放之前很短的时间内。成熟的细胞外病毒主要含M蛋白,但也会存在少部分未裂解的prM。
E蛋白是病毒体的主要的功能性和抗原性表面成分。已通过冷冻电子显微镜术分辨E的胞外结构域的分子结构,其在pH中性条件下在成熟病毒颗粒的表面上形成同型二聚体(Rey等,Nature375:291-298,1995)并已匹配(fitinto)到病毒颗粒的电子密度图中(Kuhn等,Cell108:717-725,2002)。感染期 间,E蛋白作为II级融合蛋白起作用(Modis等,Nature 427:313-319,2004)。在病毒结合到细胞受体并内化后,在所产生的内体里的酸性pH促使二聚体解离,从而使每个单体原先隐藏的疏水性融合环袢向外暴露。与此同时,这些环袢插入到细胞(内体)膜中,单体重排形成拉长的三聚体。三聚体的进一步再折叠使得细胞膜与病毒膜紧密相邻,并使它们融合,将病毒颗粒的内容物释放到细胞质中。先前的研究显示,通过在小鼠的脑细胞和培养的猴肾以及蚊细胞的连续传代物中选出的在DEN及JE的E蛋白上的一些替代,已经定位在该蛋白质3D结构的特定部位,并据报道与病毒融合功能的改变有关。这些研究表明,与对应的亲本病毒分离物相比,一些减毒疫苗的融合PH阈值降低了0.6至1个pH单位。在DEN3E蛋白六个残基(残基54,191,202,266,268以及277)中的一些改变位于结构域II的区域中。这个区域被提议作为低pH介导的构象改变的关注点,而该构象改变是使保守的疏水性cd融合环袢表面暴露所需的(Lee等,Virology232:28l-290,1997)。
没有证据表明小的(成熟)M蛋白在导致病毒自内体内化的事件中起作用或有任何其它明显的功能,但已知它的细胞内前体prM对于子代病毒颗粒的形态发生及运输是重要的。prM蛋白还利于E的正确折叠(Lorenz等,J.Virol.76:5480-5491,2002),并起作用避免E蛋白二聚体在通过酸性分泌区室向细胞表面排出新颗粒的阶段中发生成熟前构象重排(Guirakhoo等,J.Gen.Virol.72:1323-1329,1991;Guirakhoo等,Virology191:921-931,1992)。
已将ChimeriVaxTM技术应用于产生抗医疗重要性黄病毒的减毒活疫苗候选物。它应用YF17D疫苗病毒作为载体,其中的prM-E基因被异源黄病毒如JE、登革、西尼罗或圣·路易(St.Louis)脑炎病毒的prM-E基因代替(Monath等,Vaccine17:1869-1882,1999;Monath等,Curr.Drug Targets-Inf.Disorders 1:37-50,2001;Monath等,Vaccine 20:1004-1018,2002;Guirakhoo等,Virology 257:363-372,1999;Guirakhoo等,J.Viroi.75:7290-7304,2001;Guirakhoo等,Virology 298:146-159,2002;Pugachev等,Int.J.Parasitol.33:567-582,2003;Guirakhoo等,J.Virol.78:4761-4775,2004)。之前,包含来自SA14-14-2病毒(在中国使用的活的减毒JE疫苗)的prM-E基因的ChimeriVaxTM-JE疫苗病毒在非洲绿猴肾(Vero)细胞中增殖到高滴度,所述非洲绿猴肾细胞被培养在补充了胎牛血清(FBS)的培养基中(Monath等,Biologicals 33:131-144,2005)。在临床前及I期、II期临床试验中成功地对它 进行了试验(Monath等,Vaccine 20:1004-1018,2002;Monath等,J.Infect.Dis.188:1213-1230,2003)。类似地,已经用ChimeriVaxTM-WN疫苗候选物进行了成功的I期临床试验,这种疫苗候选物包含西尼罗病毒(NY99株)的prM-E序列,并且在E蛋白中掺入了三个特定氨基酸的改变以增加减毒作用(Arroyo等,J.Virol.78:12497-12507,2004)。
发明概述
本发明提供了重组黄病毒,其包含一或多个膜(M)蛋白突变(例如替代、缺失或插入),如使得所述黄病毒发生减毒的突变(例如降低所述黄病毒的趋内脏现象/病毒血症的突变),提高所述黄病毒在细胞培养物中增殖时的遗传稳定性的突变(例如在无血清培养基中制备),和/或提高疫苗病毒产量的突变。本发明的所述黄病毒可以是嵌合的黄病毒,所述黄病毒例如包含第一种黄病毒(例如黄热病毒如YF17D)的衣壳和非结构蛋白和第二种黄病毒(例如日本脑炎病毒、西尼罗病毒、登革病毒(1型登革、2型登革、3型登革或4型登革病毒)、圣·路易(St.Louis)脑炎病毒、墨累山谷(Murray Valley)脑炎病毒、蜱媒脑炎病毒、以及是来自YF、JE、DEN、和TBE血清复合体的人/动物病原体的任何其它黄病毒)的膜和/或包膜蛋白。
在本发明的黄病毒中,所述突变(例如替代)可在膜蛋白M的跨膜或胞外结构域内。例如,所述突变可在所述黄病毒膜蛋白M的预测的膜螺旋(membrane helix)的第40-75位氨基酸区域内。举个例子,所述突变可以是替代,该替代在黄病毒(如日本脑炎病毒)膜蛋白的第60位氨基酸中(如将日本脑炎病毒M蛋白质中的精氨酸替代为半胱氨酸),或在另一种黄病毒的对应氨基酸中。如本领域技术人员公知,可以用标准的氨基酸序列比对来确定给定黄病毒中哪一个氨基酸“对应于”另一种黄病毒中的氨基酸。举另外一个例子,所述突变可以是替代,该替代在黄病毒(如西尼罗病毒)膜蛋白的第66位氨基酸中(如将西尼罗病毒的M蛋白质中的亮氨酸替代为脯氨酸),或在另一种黄病毒的对应氨基酸中。在另一个例子中,所述突变在另一个膜锚定氨基酸中,例如选自M66残基侧翼氨基酸组成的组的一或多个氨基酸,包括日本脑炎病毒或西尼罗病毒的位置60、61、62、63、64、65、和66(或其它黄病毒的对应氨基酸)或跨膜区的其它氨基酸残基。
我们也首次提供了M蛋白质的胞外结构域有重要功能意义的证据,因 为在M5残基从谷氨酰胺到脯氨酸的改变提高了感染的pH阈值。因此现在预计,不仅其C-末端的疏水锚(anchor),可以在所述M蛋白质的氨基末端胞外结构域或表面部分作氨基酸改变或引入多种缺失或插入,以实现黄病毒减毒。因此在其它例子中,本发明的病毒包含本文所述的在M蛋白质胞外结构域(第1-40位残基)中的一或多个突变。如果这使黄病毒的成熟M蛋白质丧失任何已知功能,那么这个结果是十分意外的。
除了上面所述的膜蛋白突变,在包含西尼罗病毒的膜和包膜蛋白的嵌合黄病毒的情况下,本发明的病毒可包含一或多个包膜蛋白突变,所述突变在选自由第107、138、176、177、224、264、280、316、和440位氨基酸组成的组的氨基酸上。在其它的黄病毒中,所述突变可以在与这些氨基酸对应的氨基酸上。一个具体的例子是,所述黄病毒可包含突变,该突变对应于在西尼罗M蛋白质第66位氨基酸上的突变和在与西尼罗病毒第107、316、和440位氨基酸对应的氨基酸上的E蛋白质突变。除了上述的突变,本发明的黄病毒还可包含如本文其他处所述在包膜蛋白铰链区的疏水袋中的一或多个突变。本发明的病毒可包含的更多突变是如下面所述在3’UTR、衣壳蛋白、或其它包膜蛋白区的突变。
本发明也提供疫苗组合物,其包含上述及本文其他处所述的黄病毒以及可药用的载体或稀释剂,还提供通过施用这种疫苗组合物来诱导患者对黄病毒的免疫应答的方法。根据这种方法治疗的患者包括尚未但有风险被黄病毒感染的那些,以及被黄病毒感染的患者。进一步地,本发明包括本文所述黄病毒在本文所述的预防和治疗方法中的用途,以及在用于这些目的的药物制备中的用途。
本发明还提供了制备包含本文所述黄病毒的疫苗的方法,其涉及向所述黄病毒的膜蛋白引入降低趋内脏现象(viscerotropism)/病毒血症和/或增加遗传稳定性/产量的突变。进一步地,本发明提供了对应于本文所述黄病毒的基因组(或其互补物)的核酸分子(RNA或DNA),以及使用这些核酸分子来制备本发明病毒的方法。
本发明的黄病毒是有益处的,因为其具有降低的毒力(例如通过下降的趋内脏现象/病毒血症来显示),相对于它们的未突变的对应物(counterparts),在施用给患者时它们提供了更高水平的安全性。另一个益处是一些突变如在ChimeriVaxTM-JE中的M-60突变,排除了在没有它们时在疫苗制备中会损害 安全性的不理想突变的累积,并提高了制备产量。这些病毒的其它益处是由它们能包含黄热病毒株YF17D序列(例如编码衣壳和非结构性蛋白质的序列)的事实来提供的,YF17D(i)已经确认其安全性超过60多年,在这个阶段已经将3.5亿以上的剂量施用给人类,(ii)在单一剂量后诱导长期的免疫,和(iii)在接种的几天内迅速诱导免疫力。另外,本发明的疫苗病毒会主动感染被治疗患者。由于经过免疫接种的个体的细胞因子环境(milieu)和先天性免疫应答与在天然感染中的那些类似,因此抗原性物质(mass)会在宿主中扩散(expand),正确折叠的构象表位经有效加工,适应性免疫应答较强,并建立了记忆。
假如黄病毒的成熟M蛋白质丧失任何已知的功能,那么M蛋白质中的突变在疫苗安全性和细胞培养中制备的有利方面将是新的并且是出乎意料的。
通过如下具体的说明书、附图和权利要求,本发明的其它特征和益处将是明显的。
附图简述
图1A图示了黄热病毒的3’未翻译区的,它显示了此区内的结构域(重复序列(RS),保守序列CS2,CS1,和3’-末端的茎环-结构),以及在本发明病毒中包含的突变的例子(例如缺失dA,dB,dC,dD,d7,d14,CS2d5,和CS2d16)。
图1B图示了黄热17D病毒的3’未翻译区从第三RS元件的中部到UTR末端的序列和公布的二级结构预测(Proutski等,J.Gen.Virol.78:1543-1549,1999)(SEQ ID NO:31)。
图1C是用Zuker RNA折叠算法产生的最合理的YF 17D 3′UTR二级结构预测的示意图(SEQ ID NO:32)。
图1D是在最合理的YF 17D结构上3′UTR缺失(显示dC缺失;Zuker方法)的影响(与图1C相比)的示意图(SEQ ID NO:33)。
图2A图示了蜱媒脑炎病毒的衣壳蛋白的序列,以及在Kofler等,J.Virol.76:3534-3543,2002所报道的此蛋白中的缺失(SEQ ID NO:34)。
图2B图示了YF17D病毒的衣壳蛋白的序列。其中指出了在某些ChimeriVaxTM-WN病毒中通过计算机分析预测为具有α-螺旋二级结构(α-螺 旋I-IV)的区域,以及疏水区(实心柱)和引入此蛋白质中的缺失(例如缺失C1和C2;加框)(SEQ ID NO:35)。
图3显示了所示病毒(WN01,WN02P5,大蚀斑(plaque),小蚀斑,和YF/17D)在HepG2细胞中的生长。
图4显示了所示病毒(WN01,WN02P5,大蚀斑,小蚀斑,和YF/17D)在THLE-3细胞中的生长。
图5显示了由所示病毒(WN02P5;混合蚀斑),小蚀斑(PMS,P10),和大蚀斑(PMS,P10))诱导的仓鼠中的病毒血症。
图6图示了SF ChimeriVaxTM-JE病毒样品的传代物(g.s.,研究遗传稳定性的实验室传代物)。
图7是显示本发明SF ChimeriVaxTM-JE病毒(未克隆的P2,P3MS(E-107),P4PS(E-107),P5g.s.(M-60),和P5VB(E-107))在感染后指定时间的生长曲线,这显示了含M-60[精氨酸(R)→半胱氨酸(C)和E-107苯丙氨酸(F)→亮氨酸(L)]突变体的病毒样品与非突变体病毒(P2)相比在SF培养物中有较高的生长速度。
图8A是显示与P5未克隆的成批疫苗(vaccine bulk)和克隆I(E-107突变体),非-突变体(克隆A),和M-60突变体(克隆C)相比,在用一定范围的酸性pH处理后M-5ChimeriVaxTM-JE突变体(克隆E)的感染性。有意义的是斜坡的出现以及病毒丧失感染性的pH,而不是稀释样品的原始滴度(例如在pH6.8)。
图8B是ChimeriVaxTM-JE疫苗(经接种体反向滴定(back titration ofinocula)测定为1.9log10PFU/剂量)与ChimeriVaxTM-JE M5突变体(经接种体反向滴定测定为1.4log10PFU/剂量)相比,在通过脑内途径接种的3-4日龄乳鼠中的存活图谱。
图8C是ChimeriVaxTM-JE M5突变体病毒(经接种体反向滴定测定为1.4log10PFU/剂量)与(经接种体反向滴定测定为0.9log10PFU/剂量)相比,在通过脑内途径接种的3-4日龄乳鼠中的存活图谱。
图8D显示了间接融合试验(Indirect Fusion assay)的结果,其比较了ChimeriVaxTM-DEN1-4病毒的P7和P10。用标准蚀斑试验来测定每个试验的病毒产量(output)。A,ChimeriVaxTM-DEN1PMS P7(三角形)和P10(菱形);B,ChimeriVaxTM-DEN2PMS P7(三角形)和P10(菱形);C,ChimeriVaxTM-DEN3 PMS P7(三角形)和P10(菱形);D,ChimeriVaxTM-DEN4PMS P7(三角形)和P10(菱形)。
图8E显示ChimeriVaxTM-DEN3的间接融合试验的结果,其比较了PMS(P7)疫苗与疫苗批(lot)(P10)和P15病毒。用标准蚀斑试验来测定每个试验的病毒产量。ChimeriVaxTM-DEN3PMS P7(三角形),P10(菱形),和P15(方形)。
图8F显示了ChimeriVaxTM-DEN1病毒的DEN1E-蛋白质二聚体(1到394位氨基酸)的结构(Guirakhoo等,J.Virol.78:9998-10008,2004)。(A)带正电的赖氨酸(K)在P7病毒的204位残基(PMS,204K)的位置通过CPK(显示大小为范德华(van der Waal)半径的球形)示意图来显示。三个结构域用黑色(结构域I),浅灰(结构域II),和深灰(结构域III)来显示。(B)图A中标示区的局部放大图。(C)来自突变体DEN1病毒的E蛋白质模型与图B相同的区域(P10,204R用黑色显示)。在图B和C中所选的氨基酸用棍状示意图来显示。中灰(Medium grey),碳;深灰,氮;黑,氧;浅灰,硫。
图9A显示了ChimeriVaxTM-JE病毒M60突变体(克隆C),E107突变体(克隆I),和非-突变体(克隆A)在指定时间的穿透效率。这些结果表明M60突变在5和10分钟的时间点明显有利于穿透进入SF非洲绿猴肾细胞。用适当稀释的病毒(在无血清培养基中的克隆A,C,和I)感染SF非洲绿猴肾细胞5,10,20,或60分钟,然后用0.1M甘氨酸,0.1M NaCl,pH3.0的溶液处理3分钟,来灭活胞外病毒。用PBS洗涤孔两次,然后用甲基纤维素覆盖单细胞层,之后用结晶紫在第5天对蚀斑进行染色。穿透效率用在甘氨酸处理后观察到的蚀斑数占用PBS而不是甘氨酸处理的对照感染的孔的百分比来显示。
图9B是E-107,M-5,和M-60氨基酸残基在包膜蛋白E和M中的位置的示意图,显示了M-5残基对融合的假设作用。在含E-107残基的E蛋白质的结构域II的顶端的虚线序列(stretch)代表了插入细胞膜的融合肽(c-d环)(Rey等,Nature375:291-298,1995)。M-5残基在M蛋白质的胞外结构域的N末端部分。E蛋白质单体重排成三聚体复合物,通过它的折叠来迫使细胞和病毒膜融合(Modis等,Nature427(6972):313-319,2004)。M蛋白质可以是复合物中的功能组分,例如有利于病毒膜通过与E蛋白质的相互作用而与细胞膜融合。M-60残基在M的两个C-末端跨膜序列之间,并可以参与在融合中细胞与病毒的膜的相互作用。
说明书详述
本发明提供了用于预防和治疗黄病毒(例如日本脑炎(JE)或西尼罗(WN)病毒)感染的疫苗和方法。本发明的方法通常涉及给受试者免疫接种活的减毒嵌合黄病毒,该黄病毒由第一种黄病毒(例如黄热病毒)组成,其中一或多个结构蛋白(例如膜和/或包膜蛋白)已经用第二种黄病毒(例如日本脑炎(JE)和/或西尼罗(WN)病毒;也见下面)的那些替代。如下进一步所述,本发明的嵌合体的膜蛋白包含一或多个突变。也如下所述,其它黄病毒的结构蛋白如膜和/或包膜蛋白可用来替代在本发明嵌合病毒中的日本脑炎病毒或西尼罗病毒的那些。进一步地,本发明的膜蛋白突变也可用于完整的未嵌合的黄病毒(例如任何本文所列的那些),不包括对结构蛋白的任何替代,和可选的一或多个另外的突变,如本文所述的那些。
可包含在本发明疫苗中的嵌合病毒的具体例子是人类的黄热疫苗株,YF17D(例如YF17D-204(,Sanofi-Pasteur,Swiftwater,PA,USA; ,Sanofi-Pasteur,Marcy-L’Etoile,France;ARILVAXTM,Chiron,Speke,Liverpool,UK;,Berna Biotech,Bern,Switzerland);YF17D-204France(X15067,X15062);YF17D-204,234US(Rice等,Science229:726-733,1985)),其中所述膜和包膜蛋白已经被日本脑炎病毒的膜和包膜蛋白(包括M蛋白质突变,如M60中的替代,如本文所述)替代。在另一个例子中,YF17D的膜和包膜蛋白被西尼罗病毒的那些替代(包括M蛋白突变,如M66中的替代,如本文所述)。
在其它例子中,另一个黄病毒,如登革病毒(1,2,3或4血清型)、圣·路易脑炎病毒、Murray河谷脑炎病毒、黄热病毒,包括YF17D株,或任何其它黄病毒,可提供在这个嵌合病毒中的膜和/或包膜蛋白。其它根据本发明可被减毒的黄病毒,无论作为完整的未-嵌合病毒还是作为嵌合体中膜和/或包膜蛋白的来源,都包括任何其它蚊媒(mosquito-borne)的黄病毒,如Kunjin,Rocio脑炎和巴西(Ilheus)病毒;蜱媒黄病毒,如欧洲中部脑炎(CentralEuropean encephalitis),西伯利亚脑炎(Siberian encephalitis),俄罗斯春夏型脑炎(Russian Spring-Summer encephalitis),夸塞纳森林病(Kyasanur ForestDisease),鄂木斯克(Omsk)出血热,跳跃病(Louping ill),Powassan,Negishi,Absettarov,Hansalova,Apoi,和Hypr病毒;以及来自丙型肝炎病毒属(Hepacivirus genus)(例如丙型肝炎病毒)的病毒。其它黄热病毒株,例如 YF17DD(GenBank保藏号U17066),YF17D-213(GenBank保藏号U17067;dos Santos等,Virus Res.35:35-41,1995),和Galler等,Vaccines16(9/10):1024-1028,1998所述的黄热病毒17DD株也可用作根据本发明异源结构蛋白可插入的骨架病毒(backbone virus)。
每种上面所列的病毒都有感染内脏器官的一些倾向性。这些病毒的趋内脏现象可造成有活力的内脏器官的机能障碍,如在YF疫苗-相关性的不利疾病事件中观察的那样,只是很不频繁。病毒在这些器官中的复制也可造成病毒血症,并因此对侵入中枢神经系统起作用。因此,根据本发明通过诱变来降低这些病毒的趋内脏现象,能降低病毒导致不利的趋内脏疾病和/或侵入脑并导致脑炎的能力。
本发明的突变对病毒产生有利作用,包括例如,减毒作用、稳定性和/或复制增加。所述突变存在于膜蛋白,例如在膜蛋白的跨膜区或胞外结构域中。例如,突变可以在膜蛋白的第60位或66位氨基酸和/或在预测的跨膜区的其它氨基酸中(例如在40-75位氨基酸的任何一或多个),或在M蛋白质的N-末端胞外结构域(例如M-5)。作为一个具体例子,膜蛋白的第60位氨基酸(在野生型日本脑炎病毒中的精氨酸)可以被另一种氨基酸如半胱氨酸替代。在ChimeriVaxTM-JE病毒的M-60位置从精氨酸到半胱氨酸的替代显著地降低了临床试验中病毒在人类中的病毒血症(趋内脏现象),在临床试验中检验了带和不带M-60突变的疫苗变体(表11A和11B)。除了半胱氨酸,其它氨基酸如丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸等可以替代在膜蛋白第60位的野生型氨基酸。在另一个例子中,膜蛋白的第66位氨基酸(在野生型西尼罗病毒中的亮氨酸)可以被另一种氨基酸如脯氨酸替代。除了脯氨酸,其它疏水氨基酸如异亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸、或小氨基酸如丙氨酸或甘氨酸,可以替代在膜蛋白第66位的野生型氨基酸。如本文所述,这些突变也可存在于其它黄病毒的对应氨基酸中。
在膜蛋白序列可以进行的替代的其它例子,在第61,62,63,和/或64位的氨基酸可以被在第60位的突变、在第66位的突变、和/或其它突变以单独或彼此组合的方式来替代。在西尼罗病毒膜蛋白序列中的这些位置的替代例子包括:在61位的缬氨酸到丙氨酸,在62位的缬氨酸到谷氨酸或甲硫氨酸,在63位的苯丙氨酸到丝氨酸,和在64位的缬氨酸到异亮氨酸。如本文所述,这些突变也可存在于其它黄病毒的对应氨基酸中。
在JE病毒膜蛋白序列的这些位置或其周围的替代例子包括,剩下的20种氨基酸的任一种,预料到会获得对于趋内脏现象和/或在制备中疫苗病毒在细胞培养物中的复制/稳定性的理想效果。在嵌合的或非嵌合的黄病毒中的其它例子包括,在M蛋白质N-末端胞外结构域内由蛋白质的第1-~40位残基中的单独或组合的任何氨基酸替代,以及引入M蛋白质的胞外结构域和/或跨膜结构域的多种大小的缺失(例如1,2,3,4,5,等个氨基酸长)。
除了一或多个上述的膜蛋白突变,本发明的病毒也可包含一或多个其它突变。例如,对于西尼罗病毒,这种其它突变可以在西尼罗病毒包膜蛋白的第107位(例如L到F)、316位(例如A到V)、或440位(例如K到R)(或其组合)的区域。因此所述突变可以,例如,在西尼罗包膜蛋白的第102-112、138(例如E到K)、176(例如Y到V)、177(例如T到A)、244(例如E到G)、264(例如Q到H)、280(例如K到M)、311-321、和/或435-445位氨基酸的一或多个中。一个具体的例子是,用西尼罗病毒株NY99-火烈鸟(flamingo)382-99的序列(GenBank登录号AF196835)作为参照,在第107位的赖氨酸可以被替换为苯丙氨酸,在第316位的丙氨酸可以被替换为缬氨酸,和/或在第440位的赖氨酸可以被替换为精氨酸。可突变的氨基酸的其它组合的例子包括如下:176、177、和280;176、177、244、264、和280;以及138、176、177、和280。进一步地,如本文所述,这些突变也可以存在于其它黄病毒的对应氨基酸上。
ChimeriVaxTM-JE疫苗已经包含所有上述的SA14-14-2具体突变,因为它包含了SA14-14-2-特异性JE包膜。也可基于对E蛋白质的结构/功能的了解来选择并引入在E蛋白质中的其它氨基酸的改变以进行另外的减毒(例如如下所述)。如本文所述,这些突变也可以存在于其它黄病毒的对应氨基酸中。
除了上述的氨基酸,可以用其它氨基酸,如会产生上述的那些保守改变的氨基酸,来作替代。保守替代通常包括在如下组内的替代:甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、和亮氨酸;天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、和谷氨酰胺;丝氨酸和苏氨酸;赖氨酸和精氨酸;和苯丙氨酸和酪氨酸。
本发明的病毒(例如日本脑炎和西尼罗病毒,以及包含来自这些或其它黄病毒的膜和包膜蛋白的嵌合黄病毒)除了上面讨论的突变(例如膜蛋白突变),也可包含在包膜蛋白的铰链区或疏水袋中的一或多个突变,因为这些突变已经显示导致趋内脏现象减少(Monath等,J.Virol.76:1932-1943,2002; WO03/103571A2;WO05/082020;Guirakhoo等,J.Virol.78(18):9998-10008,2004)。包膜蛋白的多肽链折叠成三个独特的结构域:中心结构域(结构域I),二聚化结构域(结构域II),和免疫球蛋白样调控结构域(结构域III)。所述铰链区存在于结构域I和II之间,并在暴露于酸性pH时包膜蛋白三聚体形成的构象改变(因此命名为“铰链”),所述三聚体在通过受体介导的胞吞作用摄入病毒后参与病毒和内体(endosomal)膜的融合。在构象改变之前,蛋白质以二聚体形式存在。
大量包膜氨基酸存在于铰链区中,包括例如,黄热病毒的第48-61,127-131,和196-283位氨基酸(Rey等,Nature375:291-298,1995)。可以根据本发明来突变任何这些氨基酸,或紧邻的氨基酸(和在其它黄病毒包膜蛋白中的对应氨基酸),并检测减毒作用。特别感兴趣的是在铰链区疏水袋内的氨基酸。作为一个具体的例子,在包含插入黄热病毒载体内的登革1型包膜蛋白序列的嵌合黄病毒内,替代铰链区疏水袋内的包膜蛋白的第204位氨基酸(K到R),已经显示产生了减毒作用(Guirakhoo等,J.Virol.78:9998-10008,2004)。此替代会使包膜蛋白的结构改变,从而破坏在野生型蛋白质的一个和另一个包膜单体之间的分子间氢键,并用单体内的新的分子内相互作用来替代。此观察结果提出一种意见,此替代所产生的减毒作用是由于使融合前构象中的蛋白质结构发生改变的这些新的相互作用,这很可能是通过改变使病毒膜与宿主细胞融合所需的pH阈值,并为设计进一步的减毒突变体提供基础,在所述突变体中其它替代可用于提高在疏水袋中的分子内相互作用,导致减毒。可以在疏水袋内进行的、并包含在本发明病毒内的这些突变/替代的例子,包括在E202K、E204K、E252V、E253L、E257E、E258G、和E261H中的替代(和在其它黄病毒中的对应替代)。可以基于对同源蛋白质结构的了解,来设计并掺入在JE和WN病毒的E蛋白质的对应区中的任何氨基酸改变。
E基因包含功能性功能域,在其中的氨基酸改变可能会影响功能从而降低毒力,如Hurrelbrink和McMinn所述(Adv.Virus Dis.60:1-42,2003)。其中可以插入突变的E蛋白质功能区与本申请所述的膜缺失/突变一起,可以得到适当减毒的疫苗,该疫苗包含:a)在结构域III外表面上的公知受体结合区,b)结构域I和II之间的分子铰链区,该分子铰链区决定了内体中E蛋白质的酸性依赖性构象改变并降低了病毒内化的有效性;c)prM和E蛋白质的界面, 即在内体中暴露于低pH后从二聚体重排为三聚体之后,与prM交界的E蛋白质的区;d)结构域II的融合结构域的顶端,其涉及到在内化过程中与内体的膜的融合;和e)茎-锚定区,它也在酸性诱导的融合过程中在涉及E蛋白质的构象改变中起作用。
可以与一或多个膜蛋白突变一起本发明病毒中的其它减毒突变,包括在黄热病毒骨架的3’未翻译区中的突变。图1A显示了黄热病毒疫苗株YF17D的3’UTR的组构,这是所有ChimeriVaxTM病毒共同具有的。它从3’末端起顺序包含了(i)3’-末端茎-和-环结构,已经假设该结构起负链RNA合成启动子的作用并且在所有黄病毒都是保守的,(ii)两个保守的序列元件CS1和CS2,这两个元件与所有蚊媒的黄病毒共享高度的核苷酸序列同源性,和(iii)西非(West African)黄热病毒株包括YF17D疫苗病毒所特有的、位于3’UTR的上游部分的重复序列元件(RS)的三个拷贝(Chambers等,Annu.Rev.Microbiol.44:649-688,1990)。3’UTR也包含多个茎环-结构,如在RS元件下游的非保守区的那些,见图1B所示。
在本发明病毒中包含的3’UTR突变通常是短的减毒型缺失,例如不足30个核苷酸(例如1,2,3,等和最多29(例如2-25,3-20,4-15,5-10,或6-8个核苷酸长);美国专利申请60/674,546和60/674,415)。在一些例子中,设计短的3’UTR缺失来使3’UTR中一或多个茎结构的二级结构不稳定。除了缺失,这些结构中的突变也包含同样导致茎结构不稳定化的替代。在某些例子中,经过突变的茎环-结构存在于3’UTR的非保守区中或在能够耐受这些突变的保守区中(例如在CS2中)。例如,使茎不稳定的突变可以存在于图1B所示的任何一或多个预测的茎结构中,图1B显示了这些缺失的四个例子(dA,dB,dC,和dD)。因此,除了这些具体的例子外,在黄热病毒中的3’UTR突变的其它例子包括包含例如如下茎序列的1-2、3-8、4-7或5-6个核苷酸的突变,这些突变在图1B中从5’到3’显示为:TGGAG,CTCCA,GACAG,TTGTC,AGTTT,GGCTG,CAGCC,AACCTGG,TTCTGGG,CTACCACC,GGTGGTAG,GGGGTCT,AGACCCT,AGTGG,和TTGACG。如本文所述,这些突变也可存在于其它黄病毒的对应氨基酸上。
除了使茎不稳定的突变,3’UTR中的其它短缺失可以和一或多种膜(和可能的其它)突变一起包含在本发明病毒中。例如,可以使用之前描述的Δ30突变(Men等,J.Virol.70:3930-3937,1996;美国专利6,184,024B1)或在此序 列中的多个突变。因此,例如,本发明包含在此区域内的1,2,3,等并且最多29(例如1-25,2-20,3-15,4-14,5-13,6-12,7-11,8-10,或9)个核苷酸长的任何可行的缺失。作为具体的例子,本发明病毒可包含缺失d7,其中YF17D的此区域中的如下核苷酸缺失:核苷酸345-351(AAGACGG;从3’UTR的第一个核苷酸开始编号,在病毒ORF的UGA终止密码子之后;图1A)。本发明也包含包括从此序列3’或5’末端起缺失例如1,2,3,4,或5个另外的核苷酸的突变。在其它例子中,本发明包括在保守序列CS1和CS2中的短缺失。这些突变可以包括缺失这些序列的例如1-29,2-25,3-20,4-15,5-10,或6-8个核苷酸。作为两个具体的例子,从YF17D-特异性3’UTR的CS2缺失核苷酸360-364(GGTTA;CS2d5;图1A)和/或核苷酸360-375(GGTTAGAGGAGACCCT;(SEQ ID NO:17);CS2d16;图1A)。也可使用包括从此序列3’或5’末端起缺失例如1,2,3,4,或5个另外的核苷酸的突变。对于其它黄病毒的3’UTR,可以基于3’UTR’s的二级结构作类似的突变。已经公布了对其它黄病毒例如登革,Kunjin和TBE(见例如Proutski等,Virus Res.64:107-123,1999)和HCV(见例如Kolykhalov等,J.Virol.70:3363-3371,1996)的3′UTR的二级结构的预测。进一步的,从GenBank可以得到代表了所有四个主要血清复合物(YF,JE,登革,和TBE)的很多黄病毒株的多个3′UTR核苷酸序列。可以通过病毒测序来确定其他株的序列。用标准软件(例如mfold或RNAfold程序)可以简单地预测这些序列的二级结构,从而揭示可进行诱变的潜在茎-环结构。
应注意到黄病毒包括YF17D病毒的3’UTR的真实二级结构是未知的,因为现在没有方法可以通过试验来证实它们在完整病毒背景中的存在,因此已经公布的预测,例如由Proutski及合作工人(图1B)对YF17D所作的预测可能是不正确的。在相对长的RNA分子中可以预测形成很多可选择的结构(Zuker等,N.A.R.19:2707-2714,2001),并且在病毒生活周期的不同阶段可以形成不同的结构(正或负链)并起作用。真实的结构可以受到各种假结(pseudoknot)的形成(Olsthoorn等,RNA7:1370-1377,2001)和远程(longrange)RNA相互作用(例如RNA环化和其它相互作用(Alvarez等,J.Virol.79:6631-6643,2005)),以及可能的宿主与病毒蛋白质的RNA相互作用的影响。为使理论上的计算机预测的公布结果的解释复杂化,通常使用手工操作,如部分序列的最初折叠,随后使最初预测的结构进入较长RNA序列的结构 中,在最初折叠步骤中的N’s人工应用,和对优选结构元件的主观选择(例如Mutebi等,J.Virol.78:9652-9665,2004)。因此,我们用常用的Zuker’s预测算法来折叠YF17D的3’UTR RNA序列。图1C显示了预测的最佳结构,它与图1B所示的Proutsky预测不同。重要的是图1A和1B中的小缺失dA,dB,dC,dD,d7,和d14通常使预测的天然YF17D的最佳(图1C)和亚最佳(suboptimal)结构不稳定。图1D显示了一个这样改变的(对于dC突变体)最佳结构的例子。与此相对,CS2d5和CS2d16缺失(图1A和1B)不会明显改变最佳的天然结构,表明借助于改变CS2自身而不是3’UTR结构的序列或可选择的通过改变一些亚最佳结构,这些缺失可能使病毒减毒(在ChimeriVaxTM-WN的仓鼠模型中显示出减毒作用)。因此,即使一些缺失是基于Proutski结构预测设计的(图1B),它们的真实作用可能是由于使图1B中的不同结构元件而不是预测的茎-环不稳定。
本发明病毒包含的与膜蛋白(以及可能的其它)突变一起的其它突变是在衣壳蛋白内的短缺失突变(例如1,2,3,或4个氨基酸的突变)。假设参照YF17D病毒衣壳蛋白,这种突变的例子包括影响蛋白质螺旋I的可行的缺失(见图2A)。这样的突变的具体例子是突变C2,其包含螺旋I中氨基酸PSR的缺失(图2A)。可以检测在此区域中的其它短突变(以及在其它黄病毒序列中的对应突变)的可行性(viability)和减毒作用,并且也可将其在本发明中使用。已经公开了其它黄病毒例如TBE,WN,Kunjin,JE,和登革病毒的衣壳蛋白序列(例如Pletnev等,Virology174:250-263,1990)。
如下是嵌合黄病毒的具体例子,它们根据布达佩斯条约的条款保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)Manassas,Virginia,U.S.A,并给予1998年1月6日的保藏日期,它们可用于制备本发明的病毒:嵌合的黄热17D/2型登革病毒(YF/DEN-2;ATCC登录号ATCC VR-2593)和嵌合的黄热17D/日本脑炎SA14-14-2病毒(YF/JE A1.3;ATCC登录号ATCC VR-2594)。在本发明中可用的制备嵌合病毒的细节披露在例如,美国专利6,696,281B1;国际申请PCT/US98/03894(WO98/37911)和PCT/US00/32821(WO01/39802);和Chambers等,J.Virol.73:3095-3101,1999以及下文中。通过包括将本文所述的一或多个突变引入要插入序列(例如日本脑炎病毒或西尼罗病毒的膜蛋白或其它序列)的步骤来改进这些方法用于本发明。可用于制备本发明病毒的方法也披露在PCT/US03/01319(WO03/060088A2;也见下)中。
可以用标准方法如定点诱变来对本发明的病毒作突变。在本发明病毒中存在的突变类型的一个例子是替代,但也可使用其它类型的突变如缺失和插入。另外,如上所述,突变可以单独存在或在一或多个其它突变范围内存在,无论是在膜蛋白自身内还是在例如3’UTR、衣壳、或包膜的序列的任意组合中。
本发明的病毒(包括嵌合体)可以用本领域的标准方法来制备。例如,对应于病毒基因组的RNA分子可以被引入原代细胞(primary cell)、鸡胚胎、或二倍体细胞系,然后可以从其(或其上清)纯化后代病毒。可以用于制备所述病毒的其它方法使用了异倍体细胞,如非洲绿猴肾细胞(Yasumura等,NihonRinsho21:1201-1215,1963)。在此种方法中,将对应于病毒基因组的核酸分子(例如RNA分子)引入异倍体细胞,从已经培养了所述细胞的培养基中收获病毒,并且用核酸酶(例如降解DNA和RNA的内切核酸酶如BenzonaseTM;美国专利5,173,418)处理收获的病毒。在BenzonaseTM的情况下,可以用15单位/mL,并且将经调节的培养基在2-8℃冷冻约16小时或更长时间来消化核酸。然后浓缩(例如通过使用分子量阈值为例如500kDa(例如Pellicon-2Mini unltrafilter cassette)的滤器作超滤)用核酸酶处理的病毒,用无酚红或FBS的MEME透析滤过(diafiltered),通过加入乳糖来配制,并且过滤到无菌容器中。在WO03/060088A2中披露了这种方法的细节。进一步地,如下所述,用于本发明病毒的增殖的细胞可以在无血清培养基中生长。
本发明的病毒可作为初次预防性药剂(primary prophylactic agent)施用给处于感染风险的那些患者,或者可用作再次的(secondary)药剂用于治疗受感染的患者。因为病毒是减毒的,它们特别适于施用给“有风险的个体”如年老者、儿童或HIV感染者。所述疫苗也可用于兽医范围,例如对马进行抗西尼罗病毒感染的疫苗接种,或对家养宠物(例如猫、狗和禽类(birds))、牲畜(例如绵羊、牛、猪、禽类和山羊)、和有价值的动物如稀有鸟类进行疫苗接种。进一步地,本发明的疫苗可包含病毒如嵌合病毒,所述病毒包含具体的突变(例如M5,M60,和/或M66突变)并与缺乏这种突变的病毒混合。
可用本领域的标准方法配制本发明的病毒。用于疫苗配制的多种可药用的溶液是公知的,本领域技术人员可以容易地将它们适用于本发明中(见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences(18thedition),ed.A.Gennaro,1990,Mack Publishing Co.,Easton,PA)。在两个具体例子中,在含7.5%乳糖和2.5% 人血清清蛋白的极限必需培养基Earle’s Salt(MEME)中或含10%山梨醇的MEME中配制病毒。然而,可以在生理可接受的溶液如无菌生理盐水或无菌缓冲盐水中简单地稀释病毒。在另一个例子中,例如可以与黄热17D疫苗相同的方式,将病毒被给药和配制为例如被感染的鸡胚胎组织的澄清悬液,或从用嵌合的黄热病毒感染的细胞培养物收获的液体。
可以用本领域公知的方法施用本发明的疫苗,并且本领域技术人员可以容易地确定待施用疫苗的合适量。通过考虑因素如例如待施用病毒的受试者的大小和总体健康,可以确定待施用病毒的合适量。例如,可以将本发明的病毒配制为将要通过例如经肌肉内、皮下或皮内途径施用的、在0.1到1.0ml的剂量体积中包含102到108、例如103到107或104到106个感染单位(例如形成-蚀斑的单位或组织培养物感染剂量)的无菌水溶液。另外,因为黄病毒可能经粘膜途径如口服途径来感染人宿主(Gresikova等,“Tick-borneEncephalitis,”In The Arboviruses,Ecology and Epidemiology,Monath(ed.),CRC Press,Boca Raton,Florida,1988,Volume IV,177-203),也可以通过粘膜(例如口服)途径施用病毒。进一步地,本发明的疫苗可以以单一剂量施用,或可选地,施用可涉及使用致敏剂量随后是本领域技术人员确定的合适的在例如2-6个月后施用的一或多个加强剂量。
可选择地,在施用本发明的病毒中可以使用本领域技术人员已知的佐剂。可以用来提高病毒免疫原性的佐剂包括,例如脂质体配制剂、合成佐剂如(例如QS21)、胞壁酰二肽、单磷脂(monophosphoryl lipid)A、或polyphosphazine。尽管这些佐剂通常用于提高对灭活疫苗的免疫应答,它们也可与活疫苗一起使用。在经粘膜途径传递的病毒的情况下,可用例如,口服型或粘膜型佐剂如大肠杆菌(E.coli)的热不稳定毒素(LT)或LT的突变衍生物作为佐剂。另外,可将编码具有佐剂活性的细胞因子的基因插入病毒。因此,编码细胞因子(如GM-CSF,IL-2,IL-12,IL-13,或IL-5)的基因可与外源抗原基因一起插入来制备疫苗,所述疫苗会提高免疫应答或调控更具体针对细胞、体液或粘膜应答的免疫。可以在本发明中可选择应用的其它佐剂包括toll-样受体(TLR)调控物。
在登革病毒和/或包含登革病毒的膜和包膜蛋白的嵌合黄病毒的情况下,针对它们的最佳免疫接种可以涉及诱导对抗所有四种登革血清型的免疫,本发明的病毒可以用于四价疫苗的配制中。如本文所述,在这些四价配 制剂中使用的任何或所有病毒可以包含降低趋内脏现象的一或多个突变。可以在配制中的任何时间点混合病毒来形成四价制品,或可以连续地施用所述病毒。在四价疫苗的情况下,可以使用等量的每种病毒。可选择的,在所施用的疫苗中每种不同病毒的量可以变化(WO03/101397A2)。
本发明也包含对应于本文所述的本发明病毒基因组的核酸分子(例如RNA或DNA(例如cDNA)分子)或其互补物。例如,在本发明病毒的制备方法中可以使用这些核酸分子。在这些方法中,对应于病毒基因组的核酸分子被引入可产生并复制病毒的细胞(例如原代细胞、鸡胚胎、二倍体细胞系、或异倍体细胞系(例如非洲绿猴肾细胞))中,然后可从其(或其上清)纯化后代病毒。如本领域已知,这些方法进一步包含病毒的纯化步骤。
如上所述,制备在本发明可用的嵌合病毒的细节披露在例如,美国专利6,696,281B1;国际申请PCT/US98/03894(WO98/37911)和PCT/US00/32821(WO01/39802);和Chambers等,J.Virol.73:3095-3101,1999中。如下提供了构建包含日本脑炎病毒(或西尼罗病毒)的前体-膜(pre-membrane)和包膜蛋白、以及黄热病毒的衣壳和非结构蛋白的嵌合黄病毒的细节。本领域技术人员可以容易地对这些方法作改变来用于构建包含上述突变的嵌合体以及包含其它前体-膜和包膜序列的嵌合体。
简言之,YF/JE嵌合体的衍生化可以涉及如下内容。YF基因组序列在两个质粒(YF5′3′IV和YFM5.2)中复制,所述质粒编码YF序列的核苷酸1-2,276和8,279-10,861(YF5′3′IV)和1,373-8,704(YFM5.2)(Rice等,The NewBiologist1:285-296,1989)。通过连接从这些质粒衍生的适当限制片段来产生全长的cDNA模板。然后用从prM蛋白质的起始(478位核苷酸,128位氨基酸)到E/NS1切割位点(2,452位核苷酸,817位氨基酸)的对应JE序列替代在YF5′3′IV和YFM5.2质粒内的YF序列。
从JE SA14-14-2株制备真正的JE结构蛋白基因的克隆,JE SA14-14-2株是JE的活的减毒疫苗株;它可以从疾病控制中心(the Centers for DiseaseControl),Fort Collins,Colorado和耶鲁虫媒病毒研究组(the Yale ArbovirusResearch Unit),Yale University,New Haven,Connecticut得到,这两个机构是在美国由世界卫生组织-指定的虫媒病毒参考中心(Reference Centers))。获得在PDK-5传代水平的JE SA14-14-2病毒并在LLC-MK2细胞中传代来获得足够量的用于cDNA克隆的病毒。所用的策略涉及克隆在NheI位点(JE的1,125 位核苷酸)重叠的两个片段中的结构区,然后可将其用于体外连接。
从被感染的LLC-MK2细胞的单层细胞提取RNA,并且用逆转录酶和含嵌套式XbaI和NarI限制位点的负义(negative sense)引物(JE核苷酸序列2,456-71)进行负义cDNA的第一链(first strand)合成,这两个位点分别用于首先克隆到pBluescript II KS(+)中和随后克隆入YFM5.2(NarI)中。在第一链cDNA合成后,用相同负义引物和正义引物(JE核苷酸序列1,108-1,130)进行JE序列的核苷酸1,108-2,471的PCR扩增,所述正义引物含有分别用于克隆到pBluescript中和YFM5.2(NarI)中的嵌套式XbaI和NsiI限制位点。通过限制酶消化和核苷酸测序来确认JE序列。通过使用对应于JE的1,116到1,130位核苷酸的负义引物和对应于JE的1到18位核苷酸的正义引物作负链JEcDNA的PCR扩增,来衍生JE核苷酸序列的1到1,130位核苷酸,这两种引物都含有EcoRI限制位点。将PCR片段克隆到pBluescript中,通过核苷酸测序确认JE序列。总而言之,这表明克隆了JE序列的1-2,471位核苷酸(1-792位氨基酸)。
为了在YF E/NS1切割位点插入JE包膜蛋白的C末端,通过对在E/NS1切割位点(YF的2,447-2,452位核苷酸,816-817位氨基酸)的信号肽酶序列作寡核苷酸定点诱变,将独特的NarI限制位点引入YFM5.2质粒来产生YFM5.2(NarI)。检测自掺入此改变的模板衍生的转录物的感染性,并产生了类似于亲本模板的特异性感染性(约100个蚀斑-形成单位/250纳克转录物)。用独特的NsiI和NarI限制位点,将JE序列的1,108到2,471位核苷酸从多个独立的PCR-衍生的pBluescript/JE克隆亚克隆到YFM5.2(NarI)中。通过PCR扩增衍生含与JE prM-E区邻接的YF5′未翻译区(1-118位核苷酸)的YF5′3′IV/JE克隆。
为衍生出含YF衣壳和JE prM的接头的序列,用跨越此区的负义嵌合引物与对应于YF5′3′IV的6,625-6,639位核苷酸的正义引物来制备PCR片段,然后用该PCR片段作负义PCR引物,与正义引物联合扩增JE序列(在pBluescript载体中反向编码)的第477位核苷酸(prM蛋白质的N-末端)到在第1,125位核苷酸上的NheI位点,该正义引物互补于EcoRI位点上游的pBluescript载体序列。用NotI和EcoRI限制位点将所得的PCR片段插入YF5′3′IV质粒。此构建体包含在YF5′-未翻译区之前的SP6启动子,之后是序列:YF(C)JE(prM-E),并包含体外连接所需的NheI位点(JE的1,125位核 苷酸)。
为了使用JE包膜序列内的NheI位点作为5′体外连接位点,去除YFM5.2质粒中的多余NheI位点(5,459位核苷酸)。这通过YF序列在5,461位核苷酸(TC;丙氨酸,1820位氨基酸)的沉默突变来实现。将此位点通过与合适的限制片段连接来掺入YFM5.2,并通过与编码嵌合的YF/JE序列的NsiI/NarI片段交换来引入YFM5.2(NarI)/JE。
为产生用于体外连接的独特3′限制位点,改造在AatII位点下游的BspEI位点,其通常用于产生来自YF5′3′IV和YFM5.2的全长模板。(多重AatII位点存在于JE结构序列中,排除了此位点用于体外连接的用途)。通过YF的8,581位核苷酸(AC;丝氨酸,2,860位氨基酸)的沉默突变来产生BspEI位点,并通过与合适的限制片段交换来引入YFM5.2。此独特位点通过XbaI/SphI片段的交换来掺入YFM5.2/JE,并通过将合适限制片段作三个-片段的(three-piece)连接来掺入YF5′3′IV/JE(prM-E)质粒,所述限制片段来自这些亲本质粒和来自YFM5.2的衍生物(BspEI),所述衍生物缺失在1到6,912位核苷酸的EcoRI位点之间的YF序列。
来自JE Nakayama株的克隆(已经在表达实验中深入表征了其诱导保护性免疫的能力)的cDNA(见例如McIda等,Virology158:348-360,1987;JENakayama株得自疾病控制中心,Fort Collins,Colorado,和耶鲁虫媒病毒研究组,Yale University,New Haven,Connecticut),也用于嵌合黄病毒的构建。用现有的限制位点(HindIII到PvuII和BpmI到MunI)将Nakayama cDNA插入YF/JE嵌合质粒,来替代在两个质粒系统中的完整prM-E区,但只完整保留了一个氨基酸,在49位的丝氨酸,其用来利用用于体外连接的NheI位点。
产生全长cDNA模板的方法基本如Rice等,(The New Biologist1:285-96,1989)所述。在嵌合模板的情况,用NheI/BspEI消化质粒YF5′3′IV/JE(prM-E)和YFM5.2/JE,并用300纳克纯化片段在T4DNA连接酶存在时进行体外连接。用XhoI将连接产物线性化以允许失控(run-off)转录。用50纳克的纯化模板来合成SP6转录物,通过掺入3H-UTP来定量,并用非变性的琼脂糖凝胶电泳来证明RNA的完整性。使用此方法的产量在每个反应5到10微克RNA的范围,其大多以全长转录物存在。如Rice等,所述(见上文)在阳离子脂质体存在时进行YF17D的RNA转录物的转染,来制备嵌合病毒。
在嵌合黄病毒包含西尼罗病毒和黄热病毒序列的情况下,也可使用上述 的双-质粒系统。在一个例子中,从WNV火烈鸟分离物383-99,序列GenBank登录号AF196835,克隆所用的西尼罗(WN)病毒prM和E基因。通过RT-PCR(XL-PCR Kit,Perkin Elmer)获得病毒prME cDNA。用Pwo聚合酶(Roche)通过重叠-延伸PCR将WN prM基因的5’末端精确克隆到YF17D衣壳基因的3’末端。也通过重叠-延伸PCR将E基因的3’末端精确克隆到YF NS1编码序列的5’末端。将沉默突变引入prM和E的序列,产生独特的限制位点Bsp EI和Eag I。将这些酶消化两个质粒所产生的DNA片段经过凝胶纯化及体外连接来制备全长嵌合的cDNA。将cDNA用Xho I线性化来利于通过SP6聚合酶(Epicentre)作体外转录。将RNA产物引入允许病毒RNA翻译和病毒复制的真核生物细胞系。对于YF/JE嵌合体,如上所述,可将本发明的突变用标准方法引入如上所述的YF/WN嵌合体。
其它黄病毒嵌合体可用类似策略,用天然的或改造的限制位点,和例如表14所示的寡核苷酸引物来改造。
本发明部分基于在下述实施例所描述的试验结果。
实施例
实施例1:ChimeriVaxTM-WN
试验结果
背景和概述
嵌合的黄热-西尼罗(YE-WN)病毒ChimeriVaxTM-WN是通过将WN病毒(NY99)的前体-膜(prM)和包膜(E)基因插入YF17D骨架来制备的。在于无血清条件下的非洲绿猴肾细胞(第5代传代物,P5)中制备此病毒,评估它在临床前模型中的安全性、免疫原性和有效性,并已经在人的I期研究中进行了试验。疫苗病毒(P5)的另外的减毒是由在E蛋白质中的三个SA14-14-2-特异性突变(残基107,316,和440)决定的。在通过IC途径接种的小鼠和猴和经过单次接种受到保护的小鼠、仓鼠和猴中试验时,该疫苗病毒的神经毒力比 弱(Arroyo等,J.Virol.78:12497-12507,2004;Tesh等,Emer.Infect.Dis.8:1392-1397,2002)。该疫苗病毒含有混合种群(population)的病毒(显示出小的(S)和大的(L)蚀斑表型),它们在M蛋白质第66位(M66)上有单个氨基酸残基差异。此突变不影响此病毒对8日龄乳鼠的神经毒力(Arroyo等,J.Virol.78:12497-12507,2004)。在本发明中,我们描述了M66突变降低宿主中的病 毒血症因此可用于提高现有疫苗(ChimeriVaxTM-WN02,P5,亲本和突变体病毒的混合种群)或大蚀斑变体(非突变体的)病毒的安全性的发现。
在于无血清条件下的非洲绿猴肾细胞中产生的P5ChimeriVaxTM-西尼罗疫苗病毒的共有序列中,观察到T和C(CTA/CCA)的核苷酸异质性(~50%)。此突变会导致在膜(M)蛋白质的第66位残基(本文命名为M66突变)含有氨基酸脯氨酸(突变体)或亮氨酸(亲本野生型)的病毒的存在。在附带的序列附录中提供了ChimeriVaxTMWN02和ChimeriVaxTMWN02M66变体的序列,其中也包含了这些蛋白质的氨基酸序列的比对。
西尼罗病毒的M蛋白质含75个氨基酸。通过将此蛋白质序列提交到 http://www.predictprotein.org网站,来预测此蛋白质的结构并将其与JE SA14(AAA67174)、Kunjin(AAP78942)、MVE(CAA27184)、SLE MSI(AAP44973)、和SLE CORAN(AAP44972)的M蛋白质结构作比较。在所有预测的结构中,M蛋白质的开始40个氨基酸(SLTVQTHGESTLANKKGAWMDSTKATRYLVKTESW ILRN;(SEQ ID NO:18)被预测为非膜区,而剩余的35个氨基酸(40-75)(PGYALVAAVIGWMLGSNTMQRVVFVVLLLLVAPAYS;(SEQ IDNO:19)被预测为在病毒膜区内。另外,在开始40个氨基酸残基内有9-10个带电荷的氨基酸(3-4个酸性的,E或D)和6个碱性的(R或K),而在所有本文所述的5种黄病毒(WNV,SLE,MVE,JE,和Kuniin)只有第60位残基的一个带电荷的氨基酸(碱性的)。因此,在病毒的生物学中M60残基可能通过在其邻近氨基酸内的相互作用而起关键作用。
P5疫苗病毒的蚀斑形态学显示出L和S蚀斑大小表型的混合种群。对P2,P3,P4,和P5病毒测序表明,突变最开始出现在P4(占总体种群的10%)并在P5达到~50%。对疫苗病毒的S和L蚀斑分离物的测序显示,突变造成了蚀斑大小从L到S的改变。S和L病毒变体(制备为研究病毒)在它们对8日龄乳鼠的神经毒力方面无显著不同(p=<0.0001)。
自ChimeriVaxTM-WN02(p5),在“洁净实验室条件(clean laboratorycondition)”通过3轮直接的蚀斑到蚀斑纯化和2轮病毒扩增,在非洲绿猴肾细胞中制备L和S病毒的Pre-Master Seed(PMS,P10)原种。对P10S和L病毒的测序显示在M66残基的单个氨基酸差异(S病毒在M66残基含脯氨酸,而L病毒在此位点含亮氨酸)。M66突变在大规模制备条件下似乎是稳定的。当通过皮下接种将S蚀斑病毒(P10,PMS)接种到仓鼠中时,它诱导了与疫苗 病毒(P5)或L蚀斑病毒变体(P10,PMS)相比很低水平的病毒血症。在接种了ChimeriVaxTM-WN P5病毒(含~50:50的S和L蚀斑变体)的猴和人的血清中,大部分病毒是L蚀斑大小的表型。另外,显示S蚀斑在人肝癌细胞系中生长到比L蚀斑低的滴度。此数据表明S蚀斑病毒(带有M66突变的ChimeriVaxTM-WN02)可能在人类中诱导比ChimeriVaxTM-WN02(无M66突变)低的水平的病毒血症,因此可成为针对“有风险个体”(如老年人、儿童或HIV感染者)合适的(安全的)WN疫苗候选物。通过测序个别蚀斑发现在M区内的其它突变,这些个别蚀斑分离自来自P10到P12或接种了ChimeriVaxTM-WN02疫苗(例如M60,M61,和M63)的猴子的PMS S蚀斑的大规模制备传代物(例如M62,M63和M64)。这些突变可以用于本发明病毒的构建中。
在非洲绿猴肾细胞中S和L蚀斑病毒的PMS的制备
使ChimeriVaxTM-WN02疫苗材料(P5)在无血清非洲绿猴肾细胞中生长;挑取10个鉴定为“小的”(S)蚀斑和10个鉴定为“大的”(L)蚀斑。然后在无血清非洲绿猴肾细胞上传代每个分离物,并从每个分离物挑取一个蚀斑。再重复此过程一次,总共三轮蚀斑纯化。在含无血清非洲绿猴肾细胞的T25cm2烧瓶中扩增经过蚀斑纯化的分离物(P8)(并在无血清(SF)培养基中生长),然后收获并储存在-80℃。测序分离物以发现无假性(spurious)突变的PMS候选物。鉴定两个分离物为无表达(非沉默)突变:一个分离物被确认为小蚀斑(M66脯氨酸)(表1)而另一个包含wt序列(M66亮氨酸)(表2)。然后让这两个分离物在大烧瓶中生长,等量分份(aliquote),并作为LP和SP PMS(P10)病毒提交到QC目录(inventory)。
大规模制备的SP病毒的遗传稳定性
为确定S蚀斑表型在大规模制备过程中是否稳定,通过在生物反应器中感染非洲绿猴肾细胞并在无血清条件下令其生长来产生P12病毒,从而传代小蚀斑PMS病毒两次。收获P12病毒并在6-孔板中形成蚀斑(plaque)。大部分蚀斑是小尺寸的。挑取现存的二十个最大的蚀斑,在O-Vero上扩增(一次传代),并经Titan One-Tube RT-PCR试剂盒(Roche)转录/扩增prME区。测序含M区的cDNA片段,并用WN特异性单克隆抗体经免疫染色确认分离 物的形态学。在20个蚀斑中的十三个仅包含M66(导致SP形态学的遗传标记物),并且5个分离物含有除M66之外的其它突变。分离物#4包含M63(LP表型),而分离物#16包含wt和M66的混合种群。这些数据表明,尽管存在一些蚀斑显示出大尺寸的事实,它们还是包含M66突变并经扩增证明为S尺寸。20个中只有一个蚀斑(#4)显示为L尺寸,这明显是由于在M63从L到P的突变。蚀斑#16显示产生了大的和小的蚀斑尺寸病毒的混合种群,它们在M66位包含wtL和突变的P氨基酸(表3)。
ChimeriVax TM -WN病毒变体在肝细胞中的生长
用MOI0.005的ChimeriVaxTM-WN01(野生型prME)、ChimeriVaxTM-WN02P5(含在E107,E313,E316,E440,M66的混合L/P氨基酸的突变,混合的S和L蚀斑)、ChimeriVaxTM-WN LP(E107,E313,E316,和E440,WNL)、和ChimeriVaxTM-WN SP(E107,E313,E316,E440,和M66P,WNS)感染人肝癌细胞系HepG2和THLE-3细胞。每日收集上清并用标准的中性红双层琼脂糖覆盖(neutral red double agarose overlay)方法在O-非洲绿猴肾细胞上滴定。
在HepG2细胞中(图3),观察到WN01(野生型prME)在第5天有最高的病毒生长(7x106PFU/ml),随后是LP在第5天(2.7x106PFU/ml)。用的情况中在第3天达到病毒峰值(1.17x106PFU/ml),随后是WN02混合疫苗病毒在第4天达病毒峰值(6.4x105PFU/ml)。发现SP病毒生长最低(在第4天峰值滴度为6.1x105PFU/ml),其包含在M66的单个氨基酸替代(L到P)。在THLE-3细胞中(图4),观察到与HepG2细胞相同的模式,只是的滴度稍高于LP病毒。再次见到WN01出现最高滴度(1.3x105PFU/ml,第4天),随后是LP(5.7x104PFU/ml,第7天),(8.8x104PFU/ml,第4天),和混合的P5病毒(1.8x104PFU/ml,第4天)。再次观察到SP病毒出现最低滴度(9.2x103PFU/ml,第4天)。
每天记录每种病毒对致细胞病变效应(CPE)的诱导(表4)。在第5天首次观察到WN01和LP病毒的CPE,并且在2天后完成(100%),而SP或混合的蚀斑群在较早的时间点(第3天)诱导CPE,并且比WN01或LP早1天(第6天)完全破坏细胞单层。在第3天首次观察到的CPE诱导,并且在接种后第6天完全破坏单层细胞。在HepG2细胞中的CPE诱导可能是由 于M蛋白质的凋亡活性,如野生型登革病毒所示(Catteau等,J.Gen.Virol.84:2781-2793,2003)。这些数据显示SP病毒变体生长到比混合的或LP病毒低的滴度,这表明M66突变可能会降低病毒对人的肝趋性。
在用混合的(SP和LP病毒)P5疫苗病毒接种猴之后不能检测到ChimeriVax TM -WN,SP病毒
给总共8只缺乏对黄病毒如WN,JE,和YF病毒的可检测抗体的首次实验食蟹猴( cynomolgus monkeys)(通过蚀斑减少中和试验(PRNT)测定)通过皮下途径接种ChimeriVaxTM-WN02(P5)(n=4)或(n=4)。此试验目的是评估ChimeriVaxTM-WN02疫苗在3日观察期内的病毒血症、生物分布和可能的毒性。对于ChimeriVaxTM-WN02和,接种剂量分别为~1.25x105PFU/0.5mL和5.5x104PFU/mL。每日给动物放血并在接种后第4天处死。通过在非洲绿猴肾细胞上的标准蚀斑试验利用血来测定病毒血症水平,而收集到的组织要么速冻作病毒分析要么保存作组织病理评价。
评估从第1天(接种前)到第4天(安乐死(euthanization)前)收集到的猴血清的病毒血症。通过用琼脂糖双层覆盖物和中性红染色(来分离并测序各个蚀斑)或通过甲基纤维素覆盖物和结晶紫染色(来测定病毒血症水平),如Monath等,J.Virol.74(4):1742-1751,2000所述来进行试验。在接种了ChimeriVaxTM-WN02的猴中病毒血症的量级(magnitude)和持续时间高于 的所述情况(表5)。对于而言,病毒血症的最高滴度为200PFU/mL(动物MF21157,第4天)。对于ChimeriVaxTM-WN P5病毒而言,病毒血症的最高滴度为1000PFU/mL(动物MF21191F,第4天)。接种了ChimeriVaxTM-WN02病毒的所有动物(4/4)在接种后3天都是有病毒血症的,而只有2/4接种了的动物变成有病毒血症的(仅有2天)(表5)。
因为接种了ChimeriVaxTM-WN02病毒的动物已经接受了SP和LP病毒的混合物,需要从血清中分离多种SP和LP病毒来鉴定导致高水平病毒血症的病毒变体(S或L)。将在接种后第2天到第4天获得的所有4只猴子的血清稀释到1:2和1:10,并用于接种到已种了非洲绿猴肾细胞的6-孔板的一式两份的孔中。在加入含中性红的第二层琼脂糖覆盖物后,挑取各个蚀斑(4个S的和3个L的蚀斑),直接测序来鉴定M66突变体病毒的存在(表6)。这些分离的蚀斑无一含有M66突变(L到P替代),这表明M66突变体病毒不会 导致在这些动物中所检测的高水平病毒血症。有趣的是,在M区观察到3个其它突变(M60,M61,和M63)。这些病毒变体可能已经少量存在于ChimeriVaxTM-WN02疫苗病毒中(不能通过共有测序来检测),或者它们通过LP病毒变体基因组内的突变而在(猴)体内产生。
在接种了ChimeriVax TM -WN SP(PMS,P10)、LP(PMS,P10)、或混合(P5,SP,和LP)病毒的仓鼠中的病毒血症和中和型抗体应答
在整个试验中,在BL2下的显微分离器(microseparator)中饲养(maintained)此试验中所用的动物并根据IACUC批准的动物规程来处置它们。用三株ChimeriVaxTM-WN02病毒(SP,PMS,P10;LP,PMS,P10,和混合SP和LP疫苗病毒,P5)来感染来自Harlan Sprague-Dawley的7周龄雌性Golden Syrian仓鼠(金仓鼠(Mesocricetus auratus)),将每种病毒经皮下途径注射到一组15只仓鼠的腹股沟区。感染剂量为105pfu,接种体积为100μl。给另外一组5只动物类似地注射100μl的病毒稀释物作为假性(sham)对照。在病毒感染当天(第0天)和直到感染后5天的随后的每一天,通过对除假性对照组之外的所有动物进行眶后采血来收集血样。在采血并接种前通过吸入异氟烷来麻醉动物。通过将0.1mL的1:10稀释的血清样品在于12孔板中生长的非洲绿猴肾细胞培养物的一式双份孔中直接进行蚀斑形成,来测定被试样品中的病毒浓度(图5)。
如图5所示,在从LP病毒感染的仓鼠收集的血清样品中观察到较高水平(平均为pfu的3个log值(3logs of pfu on average))的峰值病毒血症,而在SP病毒接种的仓鼠的血样中可见很低水平(<10pfu)的病毒血症。当接种物中SP病毒的比率上升时(对于混合的蚀斑病毒达到50%),峰值病毒血症滴度降低到LP病毒诱导的病毒血症水平的大约一半。另外地,感染后病毒血症峰值时间延迟了至少1到4天。
这些数据表明,从相同亲本病毒ChimeriVaxTM-WN02分离的LP和SP变体有不同的生物性质。LP病毒与SP病毒相比在仓鼠中以较快速度增殖到较高水平。另外,将SP病毒与LP(P5病毒)混合明显抵消了LP病毒的一些性质。这显示于仓鼠感染试验中,其中病毒在血中的存在降到较低水平,在混合病毒感染的仓鼠中的病毒复制动力学下降。总而言之,在SP变体病毒中存在的M66突变(L到P)显著降低了仓鼠中的病毒血症。
实施例2:ChimeriVax TM -JE和ChimeriVax TM -DEN1-4
背景和概述 
在下面描述的试验中,我们用在无血清(SF)培养基中生长的非洲绿猴肾细胞制备并定性了新的ChimeriVaxTM-JE种病毒(seed virus),来消除对于疫苗可能被牛传播性脑病(bovine transmissible encephalopathy)的朊病毒因子(agent)污染的任何顾虑。在于SF培养物中增殖的过程中,未克隆的病毒累积了在含血清培养基中之前没有见到的突变,这些突变显示出对SF生长条件的适应性,即病毒复制速度提高。这些突变出现在E或M蛋白质(E-107的F到L或M-60的R到C突变)中,并提示M蛋白质在病毒复制过程中的功能性意义,这在病毒于SF条件下生长的过程中变得明显(见实施例1所示的M-蛋白质的60位氨基酸R(ChimeriVaxTM-WN)。定义了在M蛋白质中的突变(ChimeriVaxTM-JE中的M60,M5)或在E蛋白质中的突变(ChimeriVaxTM-JE中的E-107,ChimeriVaxTM-DEN1和-DEN3中的E202/204,和ChimeriVaxTM-DEN2中的E251)对于疫苗的生物性质的作用。所有这些嵌合病毒都已经在临床试验中经过了检测。
材料和方法
细胞和培养基
原来自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)得到非洲绿猴肾细胞(ATCC;Manassas,VA;CCL81;非洲绿猴肾细胞)。这些细胞适合于在SF培养基中生长,并且从Baxter(Orth,Austria)获得第133代传代物,然后通过接种到烧瓶来直接使用或在136代传代物从细胞库开始接种。在所有的实验中,非洲绿猴肾细胞的传代水平不超过第149代。在7.5%CO2、36℃的条件使细胞和病毒生长。在SF条件增殖细胞。
ChimeriVax TM -JE变体
通过用体外RNA转录物(储存在-80℃)电穿孔SF非洲绿猴肾细胞来启动(initiate)病毒(P1代),该体外RNA转录物与以前用于制备在临床前和临床试验中受检测的非-SF ChimeriVaxTM-JE疫苗候选物相同(Monath等,Vaccine20:1004-1018,2002),其制备如前所述(Chambers等,J.Virol.73:3095-3101, 1999)。通常在MOI为0.001pfu/细胞时作扩增传代,并在感染后3-4天收集病毒收获物(当CPE为~10%),通过慢速离心来使其澄清,补充10%的山梨醇,并储藏在-80℃。在γ-照射的FBS(HyClone;使用FBS是因为在用SF培养基制备的琼脂中细胞未形成蚀斑)存在时,通过用标准的琼脂-中性红覆盖物方法作三次连续的蚀斑纯化,随后在SF条件扩增,从而在Baxter非洲绿猴肾细胞中制备克隆的变体。用单层甲基纤维素覆盖物方法,进行测定指定标本中的病毒滴度的蚀斑试验,并在感染后第5天通过结晶紫来目测蚀斑。
ChimeriVax TM -DEN病毒
通过用从病毒cDNA制备的RNA转录物电穿孔非洲绿猴肾细胞,来制备ChimeriVaxTM-DEN1-4疫苗病毒。对子代病毒进行三轮蚀斑纯化来产生第7代(P7)的Pre-Master Seed(PMS)病毒。用美国现行的食品良好制造规范(Good Manufacturing Practices,cGMP)再进行三次传代,来制备成批疫苗(vaccine lot)(P10病毒)。在于非洲绿猴肾细胞中多次传代后,在嵌合体E基因中显示出一些突变(Guirakhoo等,J.Virol.78:4761-4775,2004)。这些突变中的一种(ChimeriVaxTM-DEN1中的E204)显著降低了病毒在非人的灵长类动物中的趋内脏现象(Guirakhoo等,J.Viro1.78:9998-10008,2004)。
共有测序
如上所述进行指定病毒样品的共有测序(Pugachev等,Vaccine20:996-999,2003)。简而言之,用Titan One-Tube RT-PCR试剂盒(Roche),将用TRIZOL LS试剂(Life Technologies-Gibco BRL)提取的病毒体RNA在~2-3kb长的5个重叠的cDNA扩增子中扩增。用正向的和反向的JE-和YF-特异性寡核苷酸引物的汇集物(collection)以及CEQ Dye Terminator CycleSequencing试剂盒(Beckman)来测序扩增子。用CEQ2000XL自动测序仪(Beckman Coulter)解析(resolve)测序反应产物。用Sequencher4.1.4(GeneCodes)软件比对并分析数据。当在反映正链和负链测序反应的所有色谱图(chromatogram)中观察到异质性信号时,记录核苷酸异质性。对于一些病毒,五个cDNA扩增子中只有第一个(Fragment I)经测序显示包括结构基因。
在乳鼠中的神经毒力
对小鼠的饲养和护理符合美国国立卫生研究院(National Institutes ofHealth)对实验室动物的人道使用的指南。从Taconic Farms(Germantown,NY)购买怀孕的杂交繁殖的(outbred)ICR雌鼠。养育新生小鼠并在接种前6天混合成新组。通过脑内(IC)途径给分组的8日龄乳鼠接种0.02ml的指定病毒样品。在MEM-10%FBS中对用于接种的病毒进行1:10连续稀释。反向滴定未稀释的接种物并计算每份稀释物的精确剂量。记录21天中的死亡率。YF17D对照病毒是从购买的疫苗小瓶重建的(Aventis Pasteur,Swiftwater,PA)。
在猴中的安全性和有效性试验
试验1.根据在食蟹猴中的GLP标准,研究新克隆C(M-60)ChimeriVaxTM-JE Vaccine Master Viral Bank(MVB;P11)和Production ViralBank(PVB;P12)原种与对照(YF17D疫苗病毒)相比的神经毒力/毒性分布图。将三十三只(33)首次用于实验的(experimentally-)、黄病毒-血清反应阴性的食蟹猴(用HAI试验确定)分配到表9所示的处理组。所有猴子都在第1天通过单次IC注射给予剂量,观察30天,然后安乐死并尸检。评价猴的临床指征(每日两次),和摄食(每日)、体重(每周)、和临床病理指数(pathology indices)的改变。根据国际卫生组织(World Health Organization,WHO)对黄热疫苗的要求(WHO,Technical Report Series,No.872,1998),根据临床计分系统来评临床得分。在第1天接种前和在第3、5、7、15和31天收集血样作临床病理分析(血清化学和血液学参数)。在第1天(给予剂量前(pre-dose))和第2-11天收集其它血样作定量病毒血症测定,以及在第1天(给予剂量前)和第31天收集其它血样作中和抗体滴度分析。在第31天作完整的尸检并收集组织来储藏。制备组织作肝、脾、心、肾和肾上腺的组织病理。根据Levenbook等(J.Biol.Stand.15:305,1987)所述的方法来进行脑和脊髓的组织病理,并引入WHO对黄热疫苗的要求(WHO,1998)。
试验2.进行此试验来比较在将ChimeriVaxTM-JE疫苗[原来未克隆的疫苗P5,之前它在有FBS(BB-IND#9167,Serial#000)存在时于LS5非洲绿猴肾细胞中制备,它除了在E蛋白质疏水尾部的E491的L到F改变之外不含突变]和新的克隆C(M-60突变体)ChimeriVaxTM-JE纯化的成批疫苗制品(P13)根据GLP标准单次皮下(SC)施用到食蟹猴后,在30天的时间段中的病毒血 症、免疫应答和安全性。将十八只(18)首次用于实验的、黄病毒-血清反应阴性的(通过HAI试验测定)食蟹猴如表10所示分配为处理组。给所有猴在第1天在一只臂的单个位置经SC注射给予一次剂量。评价猴的毒性临床指征(每日两次)、体重(每周)、和血清化学、血液学和凝血参数(coagulation parameter)改变。在第1天(接种前)和在第4、7、15和31天收集血样作血清化学、血液学和凝血参数分析。在第1天(接种前)和第2-11天收集其它血样作定量病毒血症分析,并在第1天(接种前)和在第31天收集其它血样作日本脑炎病毒-特异性血清抗体滴度分析。
病毒灭活的pH阈值(间接融合试验)
将黄病毒暴露于低pH(细胞膜不存在时)的结果之一是对E蛋白质的不可逆构象改变和病毒灭活(失去潜能)的诱导。在细胞膜存在时,这些构象改变是病毒膜和那些细胞膜融合所必需的,导致病毒基因组释放到宿主细胞中。蚊媒病毒如WN、DEN、YF和JE融合的pH阈值可通过用蚊细胞系C6/36的内源性融合(fusion from within,FFWI)来测量(Guirakhoo等,Virology169(1):90-99,1989)。然而,所有我们的ChimeriVaxTM病毒都显示不出任何FFWI,这可能是由于缺乏这些病毒在蚊和蚊细胞系内的充分生长所致(Johnson等,Am.J.Trop.Med.Hyg.70(1):89-97,2004)。因此,我们尝试在这里命名为“间接融合试验”的试验中,测量在暴露于不同pH水平后病毒效力的丧失。此试验间接测定了病毒膜与那些细胞膜出现融合时的pH阈值。
在pH7.0、6.8、6.6、6.4、6.2、6.0、5.8、5.6、5.4和5.0,用补充了2mML-谷氨酰胺、2.7%碳酸氢钠、10%HI FBS和1%抗生素/抗真菌溶液[(100U/ml青霉素,0.1mg/ml链霉素,0.25μg/ml Amphotericin(Sigma)]并用MES(Sigma)调节到合适pH的1X MEM进行融合。将等量分份的每种病毒以1x104蚀斑形成单位(PFU)/ml在每个pH培养基中稀释(10-1稀释度)。在暴露于每个pH值10分钟之后,将50%热灭活的(HI)FBS加到每个小瓶中并用碳酸氢钠中和每份溶液的pH。用体积100μl的每个pH值的每种病毒感染非洲绿猴肾细胞单层(以9x105细胞/孔的密度接种,在6-孔板中)来测定其滴度。进行一式双份的感染,以产生50PFU/孔;每个板保留两个未感染细胞的孔并用作阴性对照。取pH7.0和6.8的样品作为参照物。用标准蚀斑试验分析滴度。在此试验中,用病毒的连续稀释物(10-1到10-6)感染非洲绿猴肾细胞的一式双 份的孔。在感染后,用补充了2mML-谷氨酰胺、2.7%碳酸氢钠、5%HI FBS、1%抗生素/抗真菌溶液[100U/ml青霉素,0.1mg/ml链霉素,0.25μg/mlAmphotericin(Sigma)]、和44%的0.6%琼脂糖(Sigma)的1X MEM(Sigma)覆盖非洲绿猴肾单层细胞。在37℃,5%CO2温育细胞4天,然后用含1X MEM的第二层覆盖物覆盖,所述1X MEM中补充了2mM L-谷氨酰胺、2.6%碳酸氢钠、2%HI FBS、1%抗生素/抗真菌溶液、44%的0.6%琼脂糖、和3%中性红溶液(Neutral red solution)(Sigma)。在加入第二种覆盖物后24小时计数蚀斑,来测定用每毫升的蚀斑形成单位(PFU)定义的病毒滴度。
根据Vlaycheva等(J.Virol.76:6172-6184,2002)的病毒穿透入试验
为证明M-60突变(和E-107突变)利于穿透入SF非洲绿猴肾细胞,用在SF培养基中适当稀释的克隆A,C,和I病毒感染SF非洲绿猴肾细胞5,10、20或60分钟,然后用0.1M甘氨酸,0.1M NaCl,pH3.0处理3分钟来灭活胞外病毒。用PBS洗涤孔两次,然后用甲基纤维素覆盖单细胞层,之后用结晶紫在第5天染色蚀斑。穿透有效性用在甘氨酸处理后观察到的蚀斑数占用PBS而不是甘氨酸处理的对照感染孔的百分比来显示。
ChimeriVax TM -JE的临床试验
进行临床研究(规程H-040-003)。施用给健康成年雄性和雌性受试者的疫苗在M60(精氨酸)有天然序列。健康成年受试者/组接受了ChimeriVaxTM-JE疫苗的分级剂量的皮下剂量,包括多个对照组在内。每个剂量组试验11到33个受试者。通过在非洲绿猴肾细胞单层细胞中的蚀斑试验每日测定病毒血症。相同的实验和实验室测定了在两个实验中的病毒血症水平。
安全性评价包括对负面事件(adverse event)、体温、身体检查和实验室试验(包括病毒血症水平的测定)的记录。在大部分接受ChimeriVaxTM-JE的受试者中可见病毒血症。
在健康成年雄性和雌性受试者中进行第二项研究(规程H-040-007),其中每组31或32名受试者接受含M60半胱氨酸突变的ChimeriVaxTM-JE的分级皮下剂量(3,4,或5log10PFU)。剂量范围与在前面研究中接受了2.8,3.8,和4.8log10PFU的受试者的剂量范围类似。
结果
在未克隆的SF ChimeriVaxTM-JE病毒中的适应性突变,和克隆的变体的制品
在此研究中制备的病毒样品的图如图6所示。在SF培养物中通过用体外RNA转录本转染细胞然后作另外的扩增传代来得到原来未克隆的2代传代物(P2)样品(Pre-Master Seed候选物;PMS),所述体外RNA转录本已经用于在含FBS的培养基中制备疫苗以便用于之前的研究(Monath等,Vaccine20:1004-1018,2002)。测序此病毒的全基因组,并显示不含任何可检测的突变(表7)(注意共有测序方法不检测少数亚种群(minor subpopulation);突变的检出限为~10%)。在T25烧瓶中进行从此P2病毒到P10水平的小规模传代,来分析其在SF培养物中延长繁殖时的遗传稳定性(g.s.)(图6;g.s.传代物)。g.s.P5和g.s.P10传代物的全基因组序列在935位核苷酸有从C到T的一个核苷酸改变,导致在M-60残基从R到C的氨基酸替代(表7)。此突变在g.s.P4传代物而不是g.s.P3首先被检测为异质性。
不管小规模遗传稳定性分析的结果,当在滚瓶中从未克隆的P2PMS进行三次大规模SF传代物的制备以产生候选的未克隆主种子(Master Seed)(P3)和制备种子(Production Seed)(P4),然后在100L生物反应器中制备成批疫苗(P5)时,累积了不同的突变,以50:50%异质性观察到,由于在核苷酸1301的T到C的改变而导致了在E-107残基的F到L的氨基酸改变(表7)。这是不可接受的突变,因为它是在关键的减毒残基的从SA14-14-2序列到野生型JE序列的回复突变(Arroyo等,J.Virol.75:934-942,2001),因此可能会减弱疫苗的安全性。
基于下面提到的考虑因素,然后通过蚀斑纯化产生克隆的PMS候选物,从而稳定SF疫苗并避免不需要的突变如E-107的累积。蚀斑纯化去除了在未克隆病毒中通过体外转录引入的随机突变,该随机突变的特征为RNA合成的保真度比用YF17D特异性RNA聚合酶的病毒RNA合成的保真度低(Pugachev等,J.Virol.78:1032-1038,2004)。从未克隆的P2PMS病毒开始,通过三次连续的蚀斑纯化随后两次在SF培养基中的扩增传代得到没有发生任何氨基酸替代的处于P7的生物克隆,克隆A病毒,它被命名为非-突变体P7克隆A PMS。其基因组在6952和7147位核苷酸包含两个沉默的核苷酸改变(表7)。这些改变是可接受的,因为它们不改变病毒蛋白质的氨基酸序 列,并且位于高效病毒复制所需的顺式作用RNA元件之外。从P5g.s.病毒开始类似地制备含M-60突变的克隆C P10病毒(命名为M-60P10克隆CPMS变体)(图6)。除了需要的M-60突变之外,它只在3616位核苷酸包含沉默的核苷酸改变(表7)。另外,后来也通过单次蚀斑纯化(选择大蚀斑)和在非洲绿猴肾细胞中的一次扩增传代,从未克隆的P5成批疫苗病毒分离了研究级别的克隆I和克隆E病毒。克隆I在E-107残基含有单个氨基酸改变,这是从氨基酸F到氨基酸L的向野生型的回复突变。因此,克隆I代表了E-107回复体的纯种群。克隆E在M蛋白质的N末端包含了单个氨基酸突变,在M-5残基从Q到P的氨基酸改变。
为确认克隆的PMS变体的遗传稳定性,在SF培养物中进行相当大规模的g.s.传代物模拟制备(图6)(在T-225烧瓶中制备命名为S的连续传代物,而在5或15L的生物反应器中制备命名为F的传代物,其中非洲绿猴肾细胞生长在Cytodex I微载体珠子上)。对于两种候选物的SSS和SSF样品(分别通过三次静态(static)传代,或两次静态的和一次发酵罐(Fermenter)的传代来获得)和M-60变体的FFF样品,进行仅prM-E区(cDNA的片段I)的测序。三份g.s.样品无一在病毒的prM或E蛋白质具有任何可检测的突变,除了在克隆C的M-60突变。没有E-107突变的任何痕迹(表7)。这表明通过蚀斑纯化实现了可接受水平的遗传稳定性。随后在制备新的Master(P11)和Production Virus(P12)Seeds和最终成批疫苗(P13)的过程中确认了M-60变体的高遗传稳定性,所述新的Master(P11)和Production Virus(P12)Seeds在细胞工厂中制备,而最终成批疫苗(P13)在50L生物反应器中制备,它们都保留了M-60突变,但通过共有测序在它们的完整基因组中没有检测到其它改变。
M-60和E-107突变对于SF非洲绿猴肾细胞中的病毒生长的作用
为比较非突变体、M-60突变体、和E-107突变体病毒在SF培养物中的生长动力学,在0.001pfu/ml的MOI(通过反向滴定确认)用未克隆的P2PMS、未克隆的P5g.s.样品(M-60突变体)、或未克隆的P5成批疫苗变体(含E-107突变)、以及也包含一定比例的E-107突变的未克隆的P3主种子和P4制备种子病毒来感染细胞。收获每日等量分份的含病毒培养基,并通过蚀斑试验来滴定。如图7所示,M-60病毒生长得比非突变体P2病毒迅速,并在 感染后第3和第4天产生显著高(超过10倍)的滴度。与M-60突变相似,E-107突变也会增加病毒复制。因此,M-60和E-107突变明显赋予在SF培养物中的生长优势。为支持此结论,每日收集来自非突变体克隆A和M-60突变体克隆C病毒的S,SSS,和SSF g.s.传代物的样品(见图6),并滴定分析生长动力学,结果是M-60突变体总是产生比非突变体高最多10倍的峰值滴度(接近8log10pfu/ml)。另外,此结论通过比较克隆A,C,和I病毒在小规模SF培养物中的生长曲线得以确认,因为克隆C(M-60)和I(E-107)总是生长到比克隆A(非突变体)高的滴度。
M-60和E-107突变对于ChimeriVax TM -JE在乳鼠中的神经毒力的影响
已经用小鼠神经毒力试验来确保ChimeriVaxTM疫苗候选物的神经毒力不超过YF17D载体的情况。在IC接种后,YF17D疫苗对于所有年龄的小鼠都是致命的。与此相比,ChimeriVaxTM疫苗是显著减毒的。因为成熟小鼠通常对检测神经毒力的细微差异不敏感,例如由于单个氨基酸改变导致的差异,使用存活分析的更敏感乳鼠模型可以用于此目的(Guirakhoo等,Virology 257:363-372,1999;Guirakhoo等,Virology 298:146-159,2002;Monath等,J.Viro1.76:1932-1943,2002)。
给八日龄乳鼠IC接种克隆A P7病毒、克隆C P10病毒(M-60突变)、未克隆的P5成批疫苗(E-107突变)、以及之前制备的含FBS的对照ChimeriVaxTM-JE病毒(P5质控参照标准病毒(Quality Control ReferenceStandard virus);无突变)、YF17D阳性对照()的连续稀释物,或用稀释剂模拟接种。在21天阶段的死亡率、中值IC50%致死剂量值(LD50)、和死亡小鼠平均存活时间(AST)见表8所示。如预期,的神经毒力高。接种2.4log10PFU的此种病毒导致100%的死亡率和8.8天的短AST。P7非突变体和P10M-60突变体克隆与原来的含FBS型的嵌合体一样是高度减毒的,它们的LD50值>5log10PFU并且AST较长。因此,M-60突变不改变在此动物模型中疫苗的高度减毒的表型。未克隆的P5成批疫苗病毒比所述克隆的毒力明显要强,IC LD50为3.1log10PFU,但它比毒力低。后来,于GLP条件在此试验中检查克隆的M-60疫苗的制备用传代物(manufacturing passages)(主种子(Master Seed),制备种子(Production Seed), 和成批疫苗)得到类似结果。这证实了通过蚀斑纯化获得的高遗传/表型稳定性和M-60突变的用途。
在非人灵长类动物中的安全性和有效性的分析
试验1
在此试验中,用病毒作为对照,在IC施用给食蟹猴后比较克隆C(M-60突变体)、ChimeriVaxTM-JE Vaccine MasterViral Bank(MVB)和Production Viral Bank(PVB)的神经毒力(表9)。
没有观察到在摄食、体重、或血清化学方面疫苗-相关的临床指征或改变,并观察血液学参数。在1-3组的11只猴中分别有9只、4只和8只可见淋巴样增生(Lymphoid hyperplasia),其表现为脾中淋巴结的体积和数目增加。尽管此发现是在食蟹猴中常见的背景(background)发现,这些猴的组发生率高于正常,并且认为这是继发于预期的由疫苗诱导的免疫应答。值得注意在ChimeriVaxTM-JE处理组和对照参照组出现了类似的改变。[所有三组中的一些猴出现了持续时间短的低水平接种后病毒血症,这在可接受范围内,并且所有动物对用于接种的病毒发生了血清转化(seroconverted)。在第31天,在LNI试验中-处理过的猴的黄热病毒-特异性中和型抗体的滴度范围为从2.07到>6.13,并且在PRNT50试验中-处理过的猴都没有对JE病毒的交叉反应抗体。所有ChimeriVaxTM-JE MVB疫苗-处理过的猴都有≥320(从320到>20480)的JE中和抗体滴度并且在LNI试验中无对YF病毒的交叉反应抗体。所有ChimeriVaxTM-JE PVB疫苗-处理过的猴都有≥160(从160到>20480)的JE中和型抗体滴度并且无对YF病毒的交叉反应抗体。在可检测病毒血症的量级或持续时间和JE-中和型抗体滴度诱导的量级之间无可辨别的关系]。
在此试验中ChimeriVaxTM-JE MVB和PVB制品显示了最弱的神经毒力。在对于黄病毒疫苗的猴神经毒力试验中,最复杂的神经毒力测定是联合的组平均损害计分(combined group mean lesion score),它代表了平均靶面积和平均分辨区计分的均值(average of the mean target area and mean discriminatorarea scores)。食蟹猴的靶区域是黑质(substantia nigra)和脊髓的颈部和腰部膨大,并且代表了所有黄病毒都会损伤的中枢神经系统(CNS)区域。分辨区域是苍白球(globus pallidus)、壳核(putamen)、丘脑前内侧核,和丘脑外侧核, 并且代表了被具有不同毒力特性的YF17D株(和据推测的其它黄病毒)选择性损害以及区分参照株和神经毒力增加的株的CNS区域。用ChimeriVaxTM-JE MVB和PVB制品处理的猴的联合的平均损害计分显著低于参照对照组(p<0.05)。用ChimeriVaxTM-JE MVB和PVB处理的两组猴的平均分辨中心计分(mean discriminator center score)也显著低于 参照对照组的情况(p<0.05)(表9)。接受了ChimeriVaxTM-JE疫苗制品的两组猴的均值得分无统计学显著差异,并且两种制品在猴神经毒力试验中都显示了类似的低神经毒力。
因此,猴神经毒力试验的结果显示出新的(M60,克隆C)蚀斑-纯化的MVB和PVB有满意的安全性分布图。被试物品(test articles)不显示临床毒性,并且在神经病理性研究中的分辨和联合的损害计分显著低于参照对照 。通过定量病毒血症的测定,被试物品与参照对照在趋内脏现象上并无不同。
试验2
进行此试验是为了比较在食蟹猴中单次皮下(SC)施用后,原来未克隆的P5ChimeriVaxTM-JE疫苗[之前在FBS存在时在非洲绿猴肾细胞中制备,除了在E蛋白质疏水尾部的E491的L到F改变外无突变,它在生物表型方面表现为无害突变,并且在临床试验中已经对它进行了试验(Monath等,J.Infect.Dis.188:1213-1230,2003;Monath等,Vaccine20:1004-1018,2002)]和新克隆C(M-60突变体)ChimeriVaxTM-JE纯化成批疫苗(P13)的病毒血症、免疫应答和安全性。在接种了初始未克隆的P5ChimeriVaxTM-JE疫苗的5只血清反应阴性猴中,5只(100%)的血清中检测到ChimeriVaxTM-JE病毒。病毒血症的持续时间为2-5天,滴度从20到790PFU/mL。平均峰值病毒血症(±SD)为244(±310)PFU/mL,并且发生病毒血症的平均天数为3.4(±1.34)(表10)。
在接种了新的纯化的P13JE成批疫苗的4只血清反应阴性的猴子中,4只(100%)的血清中检测到ChimeriVaxTM-JE病毒。病毒血症的持续时间为2-5天,滴度从50到290PFU/mL。平均峰值病毒血症(±SD)为160(±123)PFU/mL,并且病毒血症的平均天数为3.75(±1.26)天(表10)。平均峰值病毒血症和病毒血症的天数在两个处理组中都没有显著差别(p-值分别为0.6290和0.7016;ANOVA)。
在用最初的未克隆的P5ChimeriVaxTM-JE疫苗或纯化的P13JE成批疫苗处理后,所有血清反应阴性的猴子都发生了血清转化(表10)。在第31天,在接种了未克隆的P5疫苗的5只猴中的5只(100%)的血清中,JE病毒中和型抗体的滴度的范围为从640到5120(几何均值滴度=1689)。在接种了P13ChimeriVaxTM-JE纯化的成批疫苗的4只猴中的4只(100%)的血清中,JE病毒中和型抗体的滴度的范围为从320到2560(几何均值滴度=761)。抗体滴度在处理组间无显著差别(p=0.2986,ANOVA)。
因此,将新的M-60疫苗与原来未克隆的ChimeriVaxTM-JE疫苗(除E491外无突变)在安全性(病毒血症)和免疫原性上作比较。新疫苗的趋内脏现象稍弱(理想的特征),但仍具有高度免疫原性。病毒血症和免疫原性的量级的差异是统计学上不显著的。
M-5,M-60,和E-107突变对于病毒感染性的pH阈值的影响
通过将JE病毒的SA14-14-2株的prM和E基因插入YF17D病毒骨架来制备ChimeriVaxTM-JE疫苗。SA14-14-2病毒的包膜(在ChimeriVaxTM-JE中存在)有10个氨基酸与其亲本SA14病毒不同:E107L到F、E138E到K、E176I到V、E177T到A、E227P到S、E244E到G、E264Q到H、E279K到M、E315A到V,和E439K到R的改变(Guirakhoo等,Virology257:363-372,1999)。通过定点诱变显示,这些残基中的一些参与了ChimeriVaxTM-JE病毒得到减毒作用。选择ChimeriVaxTM-JE的突变体或回复体来鉴定是否突变已经改变了这些病毒的pH阈值。为测定M-60、E-107或M-5突变是否以pH-依赖性方式影响了病毒的感染性,如材料和方法部分所述进行感染性的pH阈值的标准试验。试验了如下病毒:(1)ChimeriVaxTM-JE非突变体(在E蛋白质中含有所有10个SA14-14-2突变的克隆A,P7);(2)ChimeriVaxTM-JE E107F到L的回复体(含9个E蛋白质突变的克隆I,P6);(3)ChimeriVaxTM-JE M60R到C的突变体(含所有10个E蛋白质突变的克隆C,P10),和(4)M-5Q到P的突变体(含所有10个E蛋白质突变的克隆E,P6)(表12)。
用一系列降低的pH处理非突变体克隆A P7病毒,M-60突变体克隆CP10病毒,M-5突变体克隆E,和含E-107突变的未克隆的P5病毒,随后滴定残余的病毒感染性。三种病毒(克隆A对照病毒,克隆C M60突变体,和克隆IE-107突变体)在pH6.0后感染性开始均一地下降,并在pH5.8失 去感染性(pH阈值5.9),但M5突变体克隆E病毒除外。M-5突变体的pH阈值(pH6.3)显著高于所有其它病毒(pH5.9)(图8A)。这是M蛋白质的胞外结构域在黄病毒感染细胞的过程中起实质作用的第一个直接证据。因此,在吸收并内化病毒后由在内体中的低pH引发的融合中,M蛋白质的N-末端可能起作用,这种作用是先前认为仅由于包膜E蛋白质所致的作用。
ChimeriVaxTM-JE病毒的融合pH阈值为5.9,其低于对于其它野生型(wt)黄病毒描述的情况(Guirakhoo等,J.Gen.Virol.72:1323-1329,1991),并且可能与该病毒的减毒作用有关。
这些数据证明,ChimeriVaxTM-JE的E区中的E-107突变不改变融合的pH阈值。通常,低pH阈值意味着E-蛋白质要出现的构象改变需要特定氨基酸的更多质子化,而该构象改变是从二聚体转变为三聚体必需的。可能一或多个SA14-14-2特异性突变(除E107突变之外,该突变位于保守的融合肽内)造成保留融合的低pH阈值(pH5.9),从而保留该病毒对于所述宿主的减毒表型。M-5突变明显能够将此阈值从5.9提高到6.3,这与wt黄病毒的阈值较接近(Guirakhoo等,Virology:169(1):90-99,1989;Guirakhoo等,J.Gen.Virol.72:1323-1329,1991)。融合的pH阈值升高从理论上应该降低病毒的减毒表型,因为病毒能在较高pH融合,转变成融合活性状态所需的质子化较低。这显示是正确的,因为以1.4log10PFU通过经大脑内途径接种到3-4日龄乳鼠的M5病毒的毒力显著强于以1.7log10PFU接种的对照病毒(无M5突变的ChimeriVaxTM-JE疫苗病毒)(p=0.056)(图8B)。然而,在3-4日龄乳鼠中M5突变病毒(以1.4log10PFU的剂量)的神经毒力仍明显低于(以0.9log10PFU的剂量)(图8C),表明在疫苗病毒的包膜蛋白内的SA14-14-2突变仍提供此病毒的足够水平的减毒。
影响融合pH阈值的在其它嵌合体中的突变
用每种ChimeriVaxTM-DEN疫苗病毒的两个组进行间接融合试验:不含E蛋白质突变的ChimeriVaxTM-DEN1-4P7和在E蛋白质中含有单个突变的ChimeriVaxTM-DEN1-4P10,除ChimeriVaxTM-DEN4P10之外。将病毒与不同pH的培养基在室温温育10分钟。用标准蚀斑试验,在将pH回复到中性pH后,测定滴度。如表13所示,ChimeriVaxTM-DEN2和DEN4病毒的P7和P10的病毒灭活(融合)阈值是类似的(pH6.4)。与此相比, ChimeriVaxTM-DEN1P10的pH阈值比ChimeriVaxTM-DEN1P7病毒低0.4个单位(pH6.0与pH6.4)。对于ChimeriVaxTM-DEN3P10病毒,pH阈值的差异不太大(pH6.4与pH6.2)。
对于ChimeriVaxTM-DEN病毒的所有P7在pH6.2出现最大病毒灭活,只有ChimeriVaxTM-DEN4稍低(pH6.0)。显示出ChimeriVaxTM-DEN1P10需要显著较低的pH才能完全灭活(pH5.6)。ChimeriVaxTM-DEN1和-DEN3病毒都在E-204含有从K到R的氨基酸替代(DEN3的E-蛋白质比其它3个血清型少2个氨基酸,因此此病毒中的E-202残基与DEN1中的E-204同源)。对于DEN3嵌合体而言,融合阈值的不太大的差异可能是由于在P10病毒原种中存在WT(K)和突变的R氨基酸(E204K/R),如共同测序所显示(K:R=50:50)(Pugachev等,J.Virol.78:1032-1038,2004)。尽管存在E251突变,因为用DEN2P10嵌合体没有观察到病毒灭活的阈值有改变,可以得出结论在此残基的突变不参与病毒融合过程(图8D)。
为了确定在ChimeriVaxTM-DEN3的P10中存在K/R异质性是否会造成融合的pH阈值的不显著改变,用P7(无突变,E202K)、P10(50%突变,E202K/R)、和P15(完全突变,E202R)病毒进行间接融合测定。如图8E所示,ChimeriVaxTM-DEN3P10灭活(融合)的pH阈值是在pH6.2,介于ChimeriVaxTM-DEN3P7(pH6.4)和ChimeriVaxTM-DEN3P15(pH6.0)病毒的pH阈值之间。因为E202K到R的突变是在这些嵌合体的E-蛋白质中检测到的唯一氨基酸替代,很有可能此突变造成P15病毒融合的pH阈值发生0.4pH的偏移。
如上所述,在制备疫苗的细胞培养中出现的E204K到R的突变,会使融合的pH阈值降低0.4个pH单位。E204K到R的突变显示出产生了新的分子内H键和新的盐桥,这可能对于E二聚体的解离有显著影响。基于在存在去污剂n-辛基-B-D-葡糖苷时测定的DEN2E-蛋白质胞外结构域(S1株)的残基394的原子坐标,给ChimeriVaxTM-DEN1(PMS,P7)E蛋白质的结构建模(mode1ling)(Modis等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100:6986-6991,2003)。使204位的K残基变为R以模拟突变体病毒,并且重复建模来表示ChimeriVaxTM-DEN1(VL,P10)病毒的E-蛋白质结构(Guirakhoo等,J.Virol.78:9998-10008,2004)。在204位的K残基(204K)位于短环袢内,在已经显示影响神经毒力或融合的pH阈值的残基衬里(lined)的疏水袋内(Lee等, Virology 232:281-290,1997;Lindenbach等,2001 Flaviviridae:the viruses andtheir replication.Fields Virology,eds.Knipe D.M.,and Howley PM.[LippincottWilliams and Wilkins,Philadelphia],1,991-1004;Monath等,J.Virol.76:1932-1943,2002)。在图8F中比较了疫苗病毒(204R)与PMS(204K)病毒的E-同型二聚体结构的同源性模型。E单体之一的204K和261H的侧链显示出分别与在相对单体上的252V和253L残基的骨架原子形成H键。在204位,预测在疫苗病毒(VL P10)的E蛋白质中的R会自身再定向(reorient),从而会失去这些氢(H)键。然而,突变体R的侧链与261H和257E邻近,导致在204R和261H之间产生新的分子内H键,并可能在204R和257E之间产生新的盐桥。因为组氨酸的pk可能是大约6.0,稍微低于融合阈值(pH~6.4),Guirakhoo等,(J.Virol.78:9998-10008,2004)原来假设在204R和261H之间预测的新H键以及在204R和257E之间的盐桥可能会影响融合的pH阈值。此理论显示出是正确的,因为本文描述的试验显示ChimeriVaxTM-DEN1的融合阈值是大约6.0,比它的P7病毒(pH6.4)低0.4个pH单位。在残基204通过R引入的新的分子间键明显加强了E-二聚体的连接(association),因此转变成低pH需要合适残基(例如H 261)的更多质子化。较低的融合阈值影响了病毒在猴子中的趋内脏现象并降低了对通过i.c.途径接种的乳鼠的神经毒力(Guirakhoo等,J.Virol.78:9998-10008,2004)。
在ChimeriVaxTM-DEN3P10疫苗的E-蛋白质中的E202K到R的替代与ChimeriVaxTM-DEN1P10疫苗中的E204突变同源。与ChimeriVaxTM-DEN1P10一样,ChimeriVaxTM-DEN3P10(在含K和R残基的残基202上是异质的)显示了比P7低的融合pH阈值(~0.2pH单位)。当突变固定在ChimeriVaxTM-DEN3的P15时,融合的pH阈值进一步下降(0.4个pH单位,类似于ChimeriVaxTM-DEN1P10)。此数据显示残基202/204可以是所有登革病毒中减毒的通用决定簇。现在,ChimeriVaxTM-DEN3和-DEN4的P10疫苗病毒不含有此突变,而且这两种病毒在接种了四价疫苗配制剂的猴子中都诱导了较高的病毒血症水平(Guirakhoo等,J.Virol.78:4761-4775,2004)。仍需观察在ChimeriVaxTM-DEN3或ChimeriVaxTM-DEN4中的K到R突变是否会降低它们在它们的宿主中的趋内脏现象。
之前有报道WT-JE融合的pH阈值为6.4(Guirakhoo等,J.Gen.Virol.72:1323-1329,1991)。本研究中,ChimeriVaxTM-JE的所有变体的pH阈值都 是5.9。在这些实验中观察到的低pH阈值可能是由于在ChimeriVaxTM-JE包膜蛋白中存在10种减毒突变中的一或多个所致。此突变可能会加强E-蛋白质二聚体的连接,从而解离和转变为三聚体结构以及随后的融合需要较低的pH。这里的数据显示E107F到L的突变(位于E-蛋白质的结构域II的cd-环袢内)和E279M到K的突变(位于结构域II的疏水袋内)都不会造成pH阈值下降。可能在JE E蛋白质中的其它突变会影响融合的pH阈值。对十分类似JE E蛋白质的TBE病毒E蛋白质的晶体结构的分析,可有助于预测一经改变会改变融合的pH阈值的残基。基于此模型,可能是在残基E244G和/或E264H中的突变导致ChimeriVaxTM-JE病毒融合的pH阈值比WT JE低。
M-60和E-107突变对病毒穿透有效性的影响
用Chambers的方法(Vlaycheva等,J.Virol.76:6172-6184,2002)来检测M-60(克隆C病毒)和E-107(克隆I病毒)突变对病毒穿透SF非洲绿猴肾细胞的影响。在此试验中,用适当稀释的病毒(达到在每个时间点产生~50个蚀斑/孔)感染SF非洲绿猴肾细胞5,10,20,或60分钟。通过加入酸性甘氨酸溶液(silution)来灭活未内化的病毒,而用PBS(中性pH)处理对照的平行孔。用PBS洗涤细胞并用甲基纤维素覆盖物覆盖,随后在第5天目测并计数蚀斑。穿透的有效性表示为在甘氨酸-处理过的孔中的蚀斑平均数占对照(PBS处理过的孔)中蚀斑数的百分比。初步穿透试验结果如图9A所示。重要的是在5和10分钟的时间点,此时更可能检测到突变对穿透的作用,发生穿透的克隆C和克隆I病毒的百分比非突变体克隆A病毒高。结果不是如标准偏差条所显示的那样是统计学显著性的,并且需要在其它重复试验中予以确证。然而,此实验提示M-60和E-107突变都可以提高ChimeriVaxTM-JE病毒与在SF条件生长的细胞的膜融合有效性。M-60和E-107残基对膜融合过程起作用的可能机制见图9B所示。M-60残基位于病毒膜中,而E-107残基插入细胞膜中,并且在E蛋白质发生低pH-依赖性重排后这两个膜被迫融合(根据我们的数据,M蛋白质的胞外结构域可对其予以促进)。在这两个残基中任一个的更合适的氨基酸可以促进膜的融合。
因为我们的数据首次发现M蛋白质的胞外结构域及其跨膜结构域都有功能性意义,现在认为完整的M蛋白质是为了开发新的活减毒疫苗而作诱变来使黄病毒减毒的有吸引力的靶标。例如,可以将随机或特定的(在蛋白 质结构的进一步分析后)氨基酸改变、或长度渐增的例如1,2,3,4,5个氨基酸等等的缺失掺入整个蛋白质中,期待病毒的生物表型会改变,从而造成明显减毒。
临床试验的结果
表11A和B中比较了从上述临床试验获得的具有精氨酸和半胱氨酸M60残基的ChimeriVaxTM-JE的病毒血症图谱。与29-50%接受了ChimeriVaxTM-JE M60半胱氨酸的受试者相比,在接受了ChimeriVaxTM-JEM60精氨酸的受试者中,67-100%的受试者在一或多天是有病毒血症的。接受了ChimeriVaxTM-JE M60精氨酸的受试者的平均最高病毒血症水平在13到40PFU/ml的范围,而在ChimeriVaxTM-JE M60半胱氨酸的情况下,平均最高病毒血症水平为3.5-6.3PFU/ml。在ChimeriVaxTM-JE M60精氨酸的情况下,病毒血症的持续时间明显更长。
这些数据证明,在含M60突变的疫苗的情况下,病毒血症的水平明显较低。病毒血症是疫苗病毒的趋内脏现象(毒力)的指标。伴有低病毒血症的疫苗被认为是较安全的,因为支持病毒复制并造成病毒血症的器官的细胞损害和功能障碍下降,病毒会穿过血脑屏障并侵入中枢神经系统的可能性也下降。在其它试验中,显示M60突变体和非突变体一样对人类是高免疫原性的。
表1.小蚀斑(P10PMS)(P/N IT-0116;L/N I020504A)(从p5Run1疫苗批(lot)纯化的蚀斑)的共有序列。
  
位置 氨基酸改变 NT位置 NT改变
M(66) 亮氨酸→脯氨酸 954 CTA→CCA
E(313) 甘氨酸→精氨酸 1919 GGG→AGG
  天冬酰胺(沉默) 2926 AAC→AAT
  甘氨酸(沉默) 7126 GGA→GGG
表2.大蚀斑PMS(P10,PMS)(P/N IT-0117;L/N I030804A)(源自p5Run1疫苗批)的共有序列。
  
位置 氨基酸改变 NT位置 NT改变
E(313) 甘氨酸→精氨酸 1919 GGG→AGG
  
  甘氨酸(沉默) 7126 GGA→GGG
表3.在无血清条件下在非洲绿猴肾细胞中对S蚀斑PMS(p10)作另外2次传代后分离的大蚀斑的序列。
表4.对于HepG2观察到的CPE。
  
感染后天数 0 1 2 3 4 5 6 7 8
WN01 0% 0% 0% 0% 0% 30% 90% ~100% 100%
WN02P5 0% 0% 0% 5% 30% 50% ~100% 100%  
WNL 0% 0% 0% 0% 0% 30% 90% ~100% 100%
WNS 0% 0% 0% 5% 30% 50% ~100% 100%  
YF/17D 0% 0% 0% 20% 50% 70% ~100% 100%  
表5.接种了ChimeriVaxTM-WN02疫苗或的猴的病毒血症。
*病毒血症用pfu/mL表示
**第1天:研究的第1天,猴在研究第1天接种
0PFU/mL表示在检出限以下,理论的试验截留值(assay cutoff)=10PFU/mL
表6.从蚀斑分离物直接获得的YF-WN嵌合体的M区序列,所述蚀斑分离物来自用WN02疫苗病毒接种的有病毒血症的猴。
  
猴# 病毒血症天数 蚀斑分离物# 可见蚀斑形态(挑取时) M66存在? 其它M突变
21205 4 #4 SP
2808 3 #8 SP
2808 3 #9 LP M60(R到G)
21191 2 #10 LP
21191 1 #14 SP M61(V到A)
21191 1 #15 SP
21191 1 #16 LP M63(F到S)
表7.未克隆的和克隆的SF ChimeriVaxTM-JE样品(见表6)的核苷酸和氨基酸序列。
a:从基因组的开始起b:从指定蛋白质N-末端起
表8.克隆A P7、克隆C P10、未克隆的P5、含FBS的标准品、和病毒在8日龄乳鼠中的神经毒力。
表9.M-60(克隆C)主种子及制备种子与对照相比对食蟹猴的神经毒力。
1PFU=蚀斑-形成单位
2第1、2和3组中分别有11只中的4只、11只中的2只和11只中的1只动物被排除在分数的计算之外,这是因为在第1天(接种前)在回顾性PRNT50试验中发现它们是JE-血清阳性的,PRNT50试验比用于预筛选的HAI试验更灵敏。
表10.食蟹猴的病毒血症和免疫原性的量级的比较,所述食蟹猴SC接种了在含FBS培养基中产生的原本未克隆的P5ChimeriVaxTM-JE疫苗(除E491外不含突变)和新的克隆C P13纯化的成批疫苗(M-60突变体)。
1第1、2和3组中分别有6只中的2只、6只中的1只、6只中的2只动物被排除在值的计算之外,这是因为在第1天(接种前)在回顾性PRNT50试验中发现它们是JE-血清阳性的,PRNT50试验比用于预筛选的HAI试验更灵敏。
表11A.参与了试验H-040-003的受试者的病毒血症图谱,其中给所述受试者施用了带有M60精氨酸的ChimeriVaxTM-JE。黑体的剂量范围与另一试验(H-040-007)中给予的类似,在所述另一试验中施用了突变体M-60半胱氨酸疫苗。
表11B.参与了试验H-040-007的受试者的病毒血症图谱,其中给所述受试者施用了带有M60半胱氨酸的ChimeriVaxTM-JE。
表12.通过每种ChimeriVaxTM-JE疫苗的融合试验发现的融合pH阈值
表13.通过每对ChimeriVaxTM-DEN P7和P10的间接融合试验发现的融合pH阈值
  
病毒 用于融合的pH阈值
ChimeriVaxTM-DEN1PMS P7 6.4
ChimeriVaxTM-DEN1VL P10 6.0
ChimeriVaxTM-DEN2PMS P7 6.4
ChimeriVaxTM-DEN2VL P10 6.4
ChimeriVaxTM-DEN3PMS P7 6.4
ChimeriVaxTM-DEN3VL P10 6.2
ChimeriVaxTM-DEN4PMS P7 6.4
ChimeriVaxTM-DEN4VL P10 6.4
                                   表14
                            YF/黄病毒嵌合物的改造
病毒      嵌合的C/prM接合1         嵌合的E/NS1接合2             5′     3′      去除或(产
                                                                连接3  连接4     生)的位点5
YF/WN     X-cactgggagagcttgaaggtc  aaagccagttgcagccgcggtttaa    AatII    NsiI 
          (SEQ ID NO:1)            (SEQ ID NO:2)
YF/DEN-1  X-aaggtagactggtgggctccc  gatcctcagtaccaaccgcggtttaa   AatII    SphI    DEN中的SphI
          (SEQ ID NO:3)            (SEQ ID NO:4)
YF/DEN-2  X-aaggtagattggtgtgcattg  aaccctcagtaccacccgcggtttaa   AatII    SphI 
          (SEQ ID NO:5)            (SEQ ID NO:6)
YF/DEN-3  X-aaggtgaattgaagtgctcta  acccccagcaccacccgcggtttaa    AatII    SphI    DEN中XhoI
          (SEQ ID NO:7)            (SEQ ID NO:8)                                    (DEN中的SphI)
YF/DEN-4  X-aaaaggaacagttgttctcta  acccgaagtgtcaaccgcggtttaa    AatII    NsiI 
          (SEQ ID NO:9)            (SEQ ID NO:10)
YF/SLE    X-aacgtgaatagttggatagtc  accgttggtcgcacccgcggtttaa    AatII    SphI    SLE中的AatII
          (SEQ ID NO:11)           (SEQ ID NO:12)
YF/MVE    X-aatttcgaaaggtggaaggtc  gaccggtgtttacagccgcggtttaa   AatII    AgeI          (Y中的AgeI)
          (SEQ ID NO:13)          (SEQ ID NO:14)
YF/TBE    X-tactgcgaacgacgttgccac  actgggaacctcacccgcggtttaa    AatII    AgeI         (YF中的AgeI)
          (SEQ ID NO:15)           (SEQ ID NO:16)
1,2:这两列显示了用于产生与C/prM或E/NS1接合对应的嵌合YF/黄病毒引物的寡核苷酸。(见正文)。X=YF衣壳的羧基末端编码序列。下划线区对应于紧邻NarI位点(反义-ccgcgg)上游的靶向异源序列。此位点允许将PCR产物插入产生全长cDNA模板所需的Yfm5.2(NarI)质粒。其它核苷酸对于异源病毒是特异的。寡核苷酸引物按5′到3′方向列举。
3,4:列举了用于产生限制片段的独特限制位点,所述限制片段可以被分离并体外连接以产生全长的嵌合cDNA模板。因为一些序列不包含方便的位点,有时需要对合适位点作改造(注脚5)。
5:括号中是必须在YF骨架或异源病毒中产生的限制性酶位点,从而允许高效的体外连接。必须去除不在括号中的位点。通过对各个克隆作cDNA沉默诱变来进行所有这些修饰。空白间隔表明不需要对cDNA克隆作修饰。
ChimerivaxWN02 改为装瓶终产物(Run1)L/N# 02H01; P/N#FP-0008
                          [链]
SEQ ID NOS:20与21
1      NGTAAATCCT GTGTGCTAAT TGAGGTGCAT TGGTCTGCAA 
41     ATCGAGTTGC TAGGCAATAA ACACATTTGG ATTAATTTTA 
81     ATCGTTCGTT GAGCGATTAG CAGAGAACTG ACCAGAACAT 
                                                 M 
121    GTCTGGTCGT AAAGCTCAGG GAAAAACCCT GGGCGTCAAT 
         S  G  R   K  A  Q  G   K  T  L   G  V  N 
161    ATGGTACGAC GAGGAGTTCG CTCCTTGTCA AACAAAATAA 
        M  V  R  R   G  V  R   S  L  S   N  K  I 
201    AACAAAAAAC AAAACAATT GGAAACAGAC CTGGACCTTC 
       K  Q  K  T   K  Q  I  G  N  R  P   G  P  S 
241    AAGAGGTGTT CAAGGATTTA TCTTTTTCTT TTTGTTCAAC 
         R  G  V   Q  G  F  I   F  F  F   L  F  N 
281    ATTTTGACTG GAAAAAAGAT CACAGCCCAC CTAAAGAGGT 
        I  L  T  G   K  K  I   T  A  H   L  K  R 
321    TGTGGAAAAT GCTGGACCCA AGACAAGGCT TGGCTGTTCT 
       L  W  K  M   L  D  P   R  Q  G  L   A  V  L 
361    AAGGAAAGTC AAGAGAGTGG TGGCCAGTTT GATGAGAGGA 
         R  K  V   K  R  V  V   A  S  L   M  R  G 
401    TTGTCCTCAA GGAAACGCCG TTCCCATGAT GTTCTGACTG 
        L  S  S  R   K  R  R   S  H  D  V   L  T 
441    TGCAATTCCT AATTTTGGGA ATGCTGTTGA TGACGGGTGG 
       V  Q  F  L   I  L  G  M   L  L  M   T  G  G 
481    AGTTACCCTC TCTAACTTCC AAGGGAAGGT GATGATGACG 
         V  T  L   S  N  F  Q  G   K  V   M  M  T 
521    GTAAATGCTA CTGACGTCAC AGATGTCATC ACGATTCCAA 
        V  N  A  T   D  V  T   D  V  I  T   I  P 
561    CAGCTGCTGG AAAGAACCTA TGCATTGTCA GAGCAATGGA 
       T  A  A  G   K  N  L  C   I  V  R   A  M  D 
601    TGTGGGATAC ATGTGCGATG ATACTATCAC TTATGAATGC 
         V  G  Y   M  C  D  D   T  I  T   Y  E  C 
641    CCAGTGCTGT CGGCTGGTAA TGATCCAGAA GACATCGACT 
        P  V  L  S   A  G  N   D  P  E   D  I  D
ChimerivaxWN02 改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                           [链]
681     GTTGGTGCAC AAAGTCAGCA GTCTACGTCA GGTATGGAAG 
        C  W  C  T   K  S  A   V  Y  V  R   Y  G  R 
721     ATGCACCAAG ACACGCCACT CAAGACGCAG TCGGAGGTCA 
          C  T  K   T  R  H  S   R  R  S   R  R  S 
761     CTGACAGTGC AGACACACGG AGAAAGCACT CTAGCGAACA 
         L  T  V  Q   T  H  G   E  S  T  L   A  N 
801     AGAAGGGGGC TTGGATGGAC AGCACCAAGG CCACAAGGTA 
        K  K  G  A   W  M  D   S  T  K  A   T  R  Y 
841     TTTGGTAAAA ACAGAATCAT GGATCTTGAG GAACCCTGGA 
          L  V  K   T  E  S  W   I  L  R   N  P  G 
881     TATGCCCTGG TGGCAGCCGT CATTGGTTGG ATGCTTGGGA 
         Y  A  L  V   A  A  V   I  G  W   M  L  G 
921     GCAACACCAT GCAGAGAGTT GTGTTTGTCG TGCTATTGCT 
        S  N  T  M   Q  R  V  V   F  V  V   L  L  L 
961     TTTGGTGGCC CCAGCTTACA GCTTCAACTG CCTTGGAATG 
          L  V  A   P  A  Y  S   F  N  C   L  G  M 
1001    AGCAACAGAG ACTTCTTGGA AGGAGTGTCT GGAGCAACAT 
         S  N  R  D   F  L  E   G  V  S   G  A  T 
1041    GGGTGGATTT GGTTCTCGAA GGCGACAGCT GCGTGACTAT 
        W  V  D  L   V  L  E   G  D  S  C   V  T  I 
1081    CATGTCTAAG GACAAGCCTA CCATCGACGT CAAGATGATG 
          M  S  K  D   K  P  T   I  D  V   K  M  M 
1121    AATATGGAGG CGGCCAACCT GGCAGAGGTC CGCAGTTATT 
         N  M  E  A   A  N  L   A  E  V   R  S  Y 
1161    GCTATTTGGC TACCGTCAGC GATCTCTCCA CCAAAGCTGC 
        C  Y  L  A   T  V  S   D  L  S  T   K  A  A 
1201    ATGCCCGACC ATGGGAGAAG CTCACAATGA CAAACGTGCT 
         C   P  T   M  G  E  A   H  N  D   K  R  A 
1241    GACCCAGCTT TTGTGTGCAG ACAAGGAGTG GTGGACAGGG 
         D  P  A  F   V  C  R   Q  G  V  V   D  R 
1281    GCTGGGGCAA CGGCTGCGGA TTTTTTGGCA AAGGATCCAT 
        G  W  G  N   G  C  G   F  F  G  K   G  S  I 
1321    TGACACATGC GCCAAATTTG CCTGCTCTAC CAAGGCAATA 
         D   T  C  A   K  F  A   C  S  T   K  A  I
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                        [链]
1361   GGAAGAACCA TCTTGAAAGA GAATATCAAG TACGAAGTGG 
        G  R  T  I   L  K   E  N  I  K   Y  E  V 
1401   CCATTTTTGT CCATGGACCA ACTACTGTGG AGTCGCACGG 
       A  I  F  V   H  G  P   T  T  V  E  S  H  G 
1441   AAATTACTCC ACACAGGTTG GAGCCACTCA GGCCGGCCGA 
         N  Y  S   T  Q  V  G   A  T  Q  A  G  R 
1481   TTCAGCATCA CTCCTGCTGC GCCTTCATAC ACACTAAAGC 
        F  S  I  T   P  A  A   P  S  Y   T  L  K 
1521   TTGGAGAATA TGGAGAGGTG ACAGTGGACT GTGAACCACG 
       L  G  E  Y   G  E  V   T  V  D  C   E  P  R 
1561   GTCAGGGATT GACACCAATG CATACTACGT GATGACTGTT 
         S  G  I   D  T  N  A   Y  Y  V   M  T  V 
1601   GGAACAAAGA CGTTCTTGGT CCATCGTGAG TGGTTCATGG 
        G  T  K  T   F  L  V   H  R  E   W  F  M 
1641   ACCTCAACCT CCCTTGGAGC AGTGCTGGAA GTACTGTGTG 
       D  L  N  L   P  W  S   S  A  G  S   T  V  W 
1681   GAGGAACAGA GAGACGTTAA TGGAGTTTGA GGAACCACAC 
         R  N  R   E  T  L  M   E  F  E  E   P  H 
1721   GCCACGAAGC AGTCTGTGAT AGCATTGGGC TCACAAGAGG 
        A  T  K  Q   S  V  I   A  L  G   S  Q  E 
1761   GAGCTCTGCA TCAAGCTTTG GCTGGAGCCA TTCCTGTGGA 
       G  A  L  H  Q   A  L   A  G  A  I   P  V  E 
1801   ATTTTCAAGC AACACTGTCA AGTTGACGTC GGGTCATTTG 
         F  S  S   N  T  V  K  L  T   S   G  H  L 
1841   AAGTGTAGAG TGAAGATGGA AAAATTGCAG TTGAAGGGAA 
        K  C  R  V   K  M  E   K  L  Q   L  K  G 
1881   CAACCTATGG CGTCTGTTCA AAGGCTTTCA AGTTTCTTAG 
       T  T  Y  G   V  C  S   K  A  F  K  F   L  R 
1921   GACTCCCGTG GACACCGGTC ACGGCACTGT GGTGTTGGAA 
         T  P  V   D  T  G  H   G  T  V  V   L  E 
1961   TTGCAGTACA CTGGCACGGA TGGACCTTGC AAAGTTCCTA 
        L  Q  Y  T   G  T  D   G  P  C   K  V  P 
2001   TCTCGTCAGT GGCTTCATTG AACGACCTAA CGCCAGTGGG 
       I  S  S  V   A  S  L   N  D  L  T   P  V  G
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                        [链]
2041   CAGATTGGTC ACTGTCAACC CTTTTGTTTC AGTGGCCACG 
         R  L  V  T  V   N  P  F    V  S  V  A  T 
2081   GCCAACGCTA AGGTCCTGAT TGAATTGGAA CCACCCTTTG 
        A  N  A   K  V  L   I  E  L   E  P  P  F 
2121   GAGACTCATA CATAGTGGTG GGCAGAGGAG AACAACAGAT 
         G  D  S   Y  I  V   V  G  R   G  E  Q  Q  I 
2161   CAATCACCAT TGGCACAAGT CTGGAAGCAG CATTGGCAAA 
         N  H  H   W  H  K  S  G  S  S  I  G  K 
2201   GCCTTTACAA CCACCCTCAA AGGAGCGCAG AGACTAGCCG 
       A  F  T  T  T  L  K  G  A  Q  R  L  A 
2241   CTCTAGGAGACACAGCTTGG GACTTTGGGAT CAGTTGGAGG 
          A  L  G  D  T  A  W  D  F  G  S  V  G  G 
2281   GGTGTTCACTAGTGTTCGGC GGGCTGTCCA TCAAGTGTTC 
          V  F  T  S  V  G  R  A  V  H  Q  V  F 
2321   GGAGGAGCAT TCCGCTCACT GTTCGGAGGC ATGTCCTGGA 
          G  G  A  F  R  S  L  F  G  G  M  S  W 
2361   TAACGCAAGG ATTGCTGGGG GCTCTCCTGT TGTGGATGG 
          I  T  Q  G  L  L  G  A  L  L  L  W  M  G 
2401   CATCAATGCT CGTGATAGGT CCATAGCTCT CACGTTTCTC 
          I  N  A  R  D  R  S  I  A  L  T  F  L 
2441   GCAGTTGGAG GAGTTCTGCT CTTCCTCTDC GTGAACGTGG 
        A  V  G  G   V  L  L   F  L  S   V  N  V 
2481   GCGCCGATCA AGGATGCGCC ATCAACTTTG GCAAGAGAGA 
       G  A  D  Q   G  C  A   I  N   F G   K  R  E 
2521   GCTCAAGTGC GGAGATGGTA TCTTCATATT TAGAGACTCT 
         L  K  C   G  D  G  I  F   I  F   R  D  S 
2561   GATGACTGCC TGAACAAGTA CTCATACTAT CCAGAAGATC 
        D  D  W  L   N  K  Y   S  Y  Y   P  E  D 
2601   CTGTGAAGCT TGCATCAATA GTGAAAGCCT CTTTTGAAGA 
       P  V  K  L   A  S  I   V  K  A  S   F  E  E 
2641   AGGGAAGTGT GGCCTAAATT CAGTTGACTC CCTTGAGCAT 
         G   K  C  G  L  N  S   V  D  S   L  E  H 
2681   GAGATGTGGA GAAGCAGGGC AGATGAGATC AATGCCATTT 
        E  M  W  R   S  R  A   D  E  I   N  A  I
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                        [链]
2721   TTGAGGAAAA CGAGGTGGAC ATTTCTGTTG TCGTGCAGGA 
       F  E  E  N   E  V  D   I  S  V  V   V  Q  D 
2761   TCCAAAGAAT GTTTACCAGA GAGGAACTCA TCCATTTTCC 
         P  K  N   V  Y  Q  R   G  T  H   P  F  S 
2801   AGAATTCGGG ATGGTCTGCA GTATGGTTGG AAGACTTGGG 
        R  I  R  D   G  L  Q   Y  G  W   K  T  W 
2841   GTAAGAACCT TGTGTTCTCC CCAGGGAGGA AGAATGGAAG 
       G  K  N  L   V  F  S   P  G  R  K   N  G  S 
2881   CTTCATCATA GATGGAAAGT CCAGGAAAGA ATGCCCGTTT 
         F  I  I   D  G  I  S   R  K  E   C  P  F 
2921   TCAAACCGGG TCTGGAATTC TTTCCAGATA GAGGAGTTTG 
        S  N  R  V   W  N  S   F  Q  I   E  E  F 
2961   GGACGGGAGT GTTCACCACA CGCGTGTACA TGGACGCAGT 
       G  T  G  V   F  T  T   R  V  Y  M   D  A  V 
3001   CTTTGAATAC ACCATAGACT GCGATGGATC TATCTTGGGT 
         F  E  Y   T  I  D  C   D  G  S   I  L  G 
3041   GCAGCGGTGA ACGGAAAAAA GAGTGCCCAT GGCTCTCCAA 
        A  A  V  N   G  K  K   S  A  H   G  S  P 
3081   CATTTTGGAT GGGAAGTCAT GAAGTAAATG GGACATGGAT 
       T  F  W  M   G  S  H   E  V  N  G   T  W  M 
3121   GATCCACACC TTGGAGGCAT TAGATTACAA GGAGTGTGAG 
         I  H  T   L  E  A  L   D  Y  K   E  C  E 
3161   TGGCCACTGA CACATACGAT TGGAACATCA GTTGAAGAGA 
        W  P  L  T   H  T  I   G  T  S   V  E  E 
3201   GTGAAATGTT CATGCCGAGA TCAATCGGAG GCCCAGTTAG 
       S  E  M  F   M  P  R   S  I  G  G   P  V  S 
3241   CTCTCACAAT CATATCCCTG GATACAAGGT TCAGACGAAC 
         S  H  N   H  I  P  G   Y  K  V   Q  T  N 
3281   GGACCTTGGA TGCAGGTACC ACTAGAAGTG AAGAGAGAAG 
        G  P  W  M   Q  V  P   L  E  V   K  R  E 
3321   CTTGCCCAGG GACTAGCGTG ATCATTGATG GCAACTGTGA 
       A  C  P  G   T  S  V   I  I  D  G   N  C  D 
3361   TGGACGGGGA AAATCAACCA GATCCACCAC GGATAGCGGG 
         G  R  G   K   S T  R   S  T  T   D  S  G
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                        [链]
3401   AAAGTTATTC CTGAATGGTG TTGCCGCTCC TGCACAATGC 
        K  V  I  P   E  W  C   C  R  S   C  T  M 
3441   CGCCTGTGAG CTTCCATGGT AGTGATGGGT GTTGGTATCC 
       P  P  V  S   F  H  G   S  D  G  C   W  Y  P 
3481   CATGGAAATT AGGCCAAGGA AAACGCATGA AAGCCATCTG 
         M  E  I   R  P  R  K   T  H  E   S  H  L 
3521   GTGCGCTCCT GGGTTACAGC TGGAGAAATA CATGCTGTCC 
        V  R  S  W   V  T  A   G  E  I   H  A  V 
3561   CTTTTGGTTT GGTGAGCATG ATGATAGCAA TGGAAGTGGT 
       P  F  G   L  V  S  M   M  I  A  M   E  V  V 
3601   CCTAAGGAAA AGACAGGGAC CAAAGCAAAT GTTGGTTGGA 
         L  R  K   R  Q  G  P   K  Q  M   L  V  G 
3641   GGAGTAGTGC TCTTGGGAGC AATGCTGGTC GGGCAAGTAA 
        G  V  V  L   L  G  A   M  L  V   G  Q  V 
3681   CTCTCCTTGA TTTGCTGAAA CTCACAGTGG CTGTGGGATT 
       T  L  L  D   L  L  K   L  T  V  A   V  G  L 
3721   GCATTTCCAT GAGATGAACA ATGGAGGAGA CGCCATGTAT 
         H  F  H   E  M  N  N   G  G  D   A  M  Y 
3761   ATGGCGTTGA TTGCTGCCTT TTCAATCAGA CCAGGGCTGC 
        M  A  L  I   A  A  F   S  I  R   P  G  L 
3801   TCATCGGCTT TGGGCTCAGG ACCCTATGGA GCCCTCGGGA 
       L  I  G  F   G  L  R   T  L  W  S   P  R  E 
3841   ACGCCTTGTG CTGACCCTAG GAGCAGCCAT GGTGGAGATT 
         R  L  V   L  T  L  G   A  A  M   V  E  I 
3881   GCCTTGGGTG GCGTGATGGG CGGCCTGTGG AAGTATCTAA 
        A  L  G  G   V  M  G   G  L  W   K  Y  L 
3921   ATGCAGTTTC TCTCTGCATC CTGACAATAA ATGCTGTTGC 
       N  A  V  S   L  C  I   L  T  I  N   A  V  A 
3961   TTCTAGGAAA GCATCAAATA CCATCTTGCC CCTCATGGCT 
         S  R  K   A  S  N  T   I  L  P   L  M  A 
4001   CTGTTGACAC CTGTCACTAT GGCTGAGGTG AGACTTGCCG 
        L  L  T  P   V  T  M   A  E  V   R  L  A 
4041   CAATGTTCTT TTGTGCCATG GTTATCATAG GGGTCCTTCA 
       A  M  F  F   C  A  M   V  I  I  G   V  L H
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                         [链]
4081   CCAGAATTTC AAGGACACCT CCATGCAGAA GACTATACCT 
         Q  N  F   K  D  T  S   M  Q  K   T  I  P 
4121   CTGGTGGCCC TCACACTCAC ATCTTACCTG GGCTTGACAC 
        L  V  A  L   T  L  T   S  Y  L   G  L  T 
4161   AACCTTTTTT GGGCCTGTGT GCATTTCTGG CAACCCGCAT 
       Q  P  F  L   G  L  C   A  F  L  A   T  R  I 
4201   ATTTGGGCGA AGGAGTATCC CAGTGAATGA GGCACTCGCA 
         F  G  R   R  S  I  P   V  N  E   A  L  A 
4241   GCAGCTGGTC TAGTGGGAGT GCTGGCAGGA CTGGCTTTTC 
        A  A  G  L   V  G  V   L  A  G   L  A  F 
4281   AGGAGATGGA GAACTTCCTT GGTCCGATTG CAGTTGGAGG 
       Q  E  M  E   N  F  L   G  P  I  A   V  G  G 
4321   ACTCCTGATG ATGCTGGTTA GCGTGGCTGG GAGGGTGGAT 
         L  L  M   M   L V  S   V  A  G   R  V  D 
4361   GGGCTAGAGC TCAAGAAGCT TGGTGAAGTT TCATGGGAAG 
        G  L  E  L   K  K  L   G  E  V   S  W  E 
4401   AGGAGGCGGA GATCAGCGGG AGTTCCGCCC GCTATGATGT 
       E  E  A  E   I  S  G   S  S  A  R   Y  D  V 
4441   GGCACTCAGT GAACAAGGGG AGTTCAAGCT GCTTTCTGAA 
         A  L  S   E  Q  G  E   F  K  L   L  S  E 
4481   GAGAAAGTGC CATGGGACCA GGTTGTGATG ACCTCGCTGG 
        E  K  V  P   W  D  Q   V  V  M   T  S  L 
4521   CCTTGGTTGG GGCTGCCCTC CATCCATTTG CTCTTCTGCT 
       A  L  V  G   A  A  L   H  P  F  A   L  L  L 
4561   GGTCCTTGCT GGGTGGCTGT TTCATGTCAG GGGAGCTAGG 
         V  L  A   G  W  L  F   H  V  R   G  A  R 
4601   AGAAGTGGGG ATGTCTTGTG GGATATTCCC ACTCCTAAGA 
        R  S  G  D   V  L  W   D  I  P  T   P  K 
4641   TCATCGAGGA ATGTGAACAT CTGGAGGATG GGATTTATGG 
       I  I  E  E   C  E  H   L  E  D  G   I  Y  G 
4681   CATATTCCAG TCAACCTTCT TGGGGGCCTC CCAGCGAGGA 
         I  F  Q   S  T  F  L   G  A  S   Q  R  G 
4721   GTGGGAGTGG CACAGGGAGG GGTGTTCCAC ACAATGTGGC 
        V  G  V  A   Q  G  G   V  F  H   T  M  W
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                         [链]
4761   ATGTCACAAG AGGAGCTTTC CTTGTCAGGA ATGGCAAGAA 
       H  V  T  R   G  A  F   L  V  R  N   G  K  K 
4801   GTTGATTCCA TCTTGGGCTT CAGTAAAGGA AGACCTTGTC 
         L  I  P   S  W  A  S   V  K  E   D  L  V 
4841   GCCTATGGTG GCTCATGGAA GTTGGAAGGC AGATGGGATG 
        A  Y  G  G   S  W  K   L  E  G   R  W  D 
4881   GAGAGGAAGA GGTCCAGTTG ATCGCGGCTG TTCCAGGAAA 
       G  E  E  E   V  Q  L   I  A  A  V   P  G  K 
4921   GAACGTGGTC AACGTCCAGA CAAAACCGAG CTTGTTCAAA 
         N  V  V   N  V  Q  T   K  P  S   L  F  K 
4961   GTGAGGAATG GGGGAGAAAT CGGGGCTGTC GCTCTTGACT 
        V  R  N  G   G  E  I   G  A  V   A  L  D 
5001   ATCCGAGTGG CACTTCAGGA TCTCCTATTG TTAACAGGAA 
       Y  P  S  G   T  S  G   S  P  I  V   N  R  N 
5041   CGGAGAGGGTG ATTGGGCTGT ACGGCAATGG CATCCTTGTC 
         G  E   V   I  G  L  Y   G  N  G   I  L  V 
5081   GGTGACAACT CCTTCGTGTC CGCCATATCC CAGACTGAGG 
        G  D  N  S   F  V  S   A  I  S   Q  T  E 
5121   TGAAGGAAGA AGGAAAGGAG GAGCTCCAAG AGATCCCGAC 
       V  K  E  E   G  K  E   E  L  Q  E   I  P  T 
5161   AATGCTAAAG AAAGGAATGA CAACTGTCCT TGATTTTCAT 
         M  L  K   K  G  M  T   T  V  L   D  F  H 
5201   CCTGGAGCTG GGAAGACAAG ACGTTTCCTC CCACAGATCT 
        P  G  A  G   K  T  R   R  F  L   P  Q  I 
5241   TGGCCGAGTG CGCACGGAGA CGCTTGCGCA CTCTTGTGTT 
       L  A  E  C   A  R  R   R  L  R  T   L  V  L 
5281   GGCCCCCACC AGGGTTGTTC TTTCTGAAAT GAAGGAGGCT 
         A  P  T   R  V  V  L   S  E  M   K  E  A 
5321   TTTCACGGCC TGGACGTGAA ATTCCACACA CAGGCTTTTT 
        F  H  G  L   D  V  K   F  H  T   Q  A  F 
5361   CCGCTCACGG CAGCGGGAGA GAAGTCATTG ATGCCATGTG 
       S  A  H  G   S  G  R   E  V  I  D   A  M  C 
5401   CCATGCCACC CTAACTTACA GGATGTTGGA ACCAACTAGG 
         H  A  T   L  T  Y  R   M  L  E   P  T  R
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                       [链]
5441   GTTGTTAACT GGGAAGTGAT CATTATGGAT GAAGCCCATT 
        V  V  N  W   E  V  I   I  M  D   E  A  H 
5481   TTTTGGATCC AGCCAGCATA GCCGCTAGAG GTTGGGCAGC 
       F  L  D  P   A  S  I   A  A  R  G   W  A  A 
5521   GCACAGAGCT AGGGCAAATG AAAGTGCAAC AATCTTGATG 
         H  R  A   R  A  N  E   S  A  T   I  L  M 
5561   ACAGCCACAC CGCCTGGGAC TAGTGATGAA TTTCCACATT 
        T  A  T  P   P  G  T   S  D  E   F  P  H 
5601   CAAATGGTGA AATAGAAGAT GTTCAAACGG ACATACCCAG 
       S  N  G  E   I  E  D   V  Q  T  D   I  P  S 
5641   TGAGCCCTGG AACACAGGGC ATGACTGGAT CCTGGCTGAC 
         E  P  W   N  T  G  H   D  W  I   L  A  D 
5681   AAAAGGCCCA CGGCATGGTT CCTTCCATCC ATCAGAGCIG 
        K  R  P  T   A  W  F   L  P  S   I  R  A 
5721   CAAATGTCAT GGCTGCCTCT TTGCGTAAGG CTGGAAAGAG 
       A  N  V  M   A  A  S   L  R  K  A   G  K  S 
5761   TGTGGTGGTC CTGAACAGGA AAACCTTTGA GAGAGAATAC 
         V  V  V   L  N  R  K   T  F  E   R  E  Y 
5801   CCCACGATAA AGCAGAAGAA ACCTGAGTTT ATATTGGCCA 
        P  T  I  K   Q  K  K   P  D  F   I  L  A 
5841   CTGACATAGC TGAAATGGGA GCCAACCTTT GCGTGGAGCG 
       T  D  I  A   E  M  G   A  N  L  C   V  E  R 
5881   AGTGCTGGAT TGCAGGACGG CTTTTAAGCC TGTGCTTGTG 
         V  L  D   C  R  T  A   F  K  P   V  L  V 
5921   GATGAAGGGA GGAAGGTGGC AATAAAAGGG CCACTTCGTA 
        D  E  G  R   K  V  A   I  K  G   P  L  R 
5961   TCTCCGCATC CTCTGCTGCT CAAAGGAGGG GGCGCATTGG 
       I  S  A  S   S  A  A   Q  R  R  G   R  I  G 
6001   GAGAAATCCC AACAGAGATG GAGACTCATA CTACTATTCT 
         R  N  P   N  R  D  G   D  S  Y   Y  Y  S 
6041   GAGCCTACAA GTGAAAATAA TGCCCACCAC GTCTGCTGGT 
        E  P  T  S   E  N  N   A  H  H   V  C  W 
6081   TGGAGGCCTC AATGCTCTTG GACAACATGG AGGTGAGGGG 
       L  E  A  S   M  L  L   D  N  M  E   V  R  G
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                        [链]
6121   TGGAATGGTC GCCCCACTCT ATGGCGTTGA AGGAACTAAA 
         G  M  V   A  P  L  Y   G  V  E   G  T  K 
6161   ACACCAGTTT CCCCTGGTGA AATGAGACTG AGGGATGACC 
        T  P  V  S   P  G  E   M  R  L   R  D  D 
6201   AGAGGAAAGT CTTCAGAGAA CTAGTGAGGA ATTGTGACCT 
       Q  R  K  V   F  R  E   L  V  R  N   C  D  L 
6241   GCCCGTTTGG CTTTCGTGGC AAGTGGCCAA GGCTGGTTTG 
         P  V  W   L  S  W  Q   V  A  K   A  G  L 
6281   AAGACGAATG ATCGTAAGTG GTGTTTTGAA GGCCCTGAGG 
        K  T  N  D   R  K  W   C  F  E   G  P  E 
6321   AACATGAGAT CTTGAATGAC AGCGGTGAAA CAGTGAAGTG 
       E  H  E  I   L  N  D   S  G  E  T   V  K  C 
6361   CAGGGCTCCT GGAGGAGCAA AGAAGCCTCT GCGCCCAAGG 
         R  A  P   G  G  A  K   K  P  L   R  P  R 
6401   TGGTGTGATG AAAGGGTGTC ATCTGACCAG AGTGCGCTGT 
        W  C  D  E   R  V  S   S  D  Q   S  A  L 
6441   CTGAATTTAT TAAGTTTGCT GAAGGTAGGA GGGGAGCTGC 
       S  E  F  I   K  F  A   E  G  R  R   G  A  A 
6481   TGAAGTGCTA GTTGTGCTGA GTGAACTCCC TGATTTCCTG 
         E  V  L   V  V  L  S   E  L  P   D  F  L 
6521   GCTAAAAAAG GTGGAGAGGC AATGGATACC ATCAGTGTGT 
        A  K  K  G   G  E  A   M  D  T   I  S  V 
6561   TCCTCCACTC TGAGGAAGGC TCTAGGGCTT ACCGCAATGC 
       F  L  H  S  E   E  G   S  R  A  Y   R  N  A 
6601   ACTATCAATG ATGCCTGAGG CAATGACAAT AGTCATGCTG 
         L  S  M   M  P  E  A   M  T  I   V  M  L 
6641   TTTATACTGG CTGGACTACT GACATCGGGA ATGGTCATCT 
        F  I  L  A   G  L  L   T  S  G   M  V  I 
6681   TTTTCATGTC TCCCAAAGGC ATCAGTAGAA TGTCTATGGC 
       F  F  M  S   P  K  G   I  S  R  M   S  M  A 
6721   GATGGGCACA ATGGCCGGCT GTGGATATCT CATGTTCCTT 
         M  G  T   M  A  G  C   G  Y  L   M  F  L 
6761   GGAGGCGTCA AACCCACTCA CATCTCCTAT GTCATGCTCA 
        G  G  V  K   P  T  H   I  S  Y   V  M  L
ChimeriVaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                         [链]
6801   TATTCTTTGT CCTGATGGTG GTTGTGATCC CCGAGCCAGG 
       I  F  F  V   L  M  V   V  V  I  P   E  P  G 
6841   GCAACAAAGG TCCATCCAAG ACAACCAAGT GGCATACCTC 
         Q  Q  R   S  I  Q  D   N  Q  V   A  Y  L 
6881   ATTATTGGCA TCCTGACGCT GGTTTCAGCG GTGGCAGCCA 
        I  I  G  I   L  T  L   V  S  A   V  A  A 
6921   ACGAGCTAGG CATGCTGGAG AAAACCAAAG AGGACCTCTT 
       N  E  L  G   M  L  E   K  T  K  E   D  L  F 
6961   TGGGAAGAAG AACTTAATTC CATCTAGTGC TTCACCCTGG 
         G  K  K   N  L  I  P   S  S  A   S  P  W 
7001   AGTTGGCCGG ATCTTGACCT GAAGCCAGGA GCTGCCTGGA 
        S  W  P  D   L  D  L   K  P  G   A  A  W 
7041   CAGTGTACGT TGGCATTGTT ACAATGCTCT CTCCAATGTT 
       T  V  Y  V   G  I  V   T  M  L  S   P  M  L 
7081   GCACCACTGG ATCAAAGTCG AATATGGCAA CCTGTCTCTG 
         H  H  W   I  K  V  E   Y  G  N   L  S  L 
7121   TCTGGAATAG CCCAGTCAGC CTCAGTCCTT TCTTTCATGG 
        S  G  I  A   Q  S  A   S  V  L   S  F  M 
7161   ACAAGGGGAT ACCATTCATG AAGATGAATA TCTCGGTCAT 
       D  K  G  I   P  F  M   K  M  N  I   S  V  I 
7201   AATGCTGCTG GTCAGTGGCT GGAATTCAAT AACAGTGATG 
         M  L  L   V  S  G  W   N  S  I   T  V  M 
7241   CCTCTGCTCT GTGGCATAGG GTGCGCCATG CTCCACTGGT 
        P  L  L  C   G  I  G   C  A  M   L  H  W 
7281   CTCTCATTTT ACCTGGAATC AAAGCGCAGC AGTCAAAGCT 
       S  L  I  L   P  G  I   K  A  Q  Q   S  K  L 
7321   TGCACAGAGA AGGGTGTTCC ATGGCGTTGC CAAGAACCCT 
         A  Q  R   R  V  F  H   G  V  A   K  N  P 
7361   GTGGTTGATG GGAATCCAAC AGTTGACATT GAGAAGCTC 
        V  V  D  G   N  P  T   V  D  I   E  E  A 
7401   CTGAAATGCC TGCCCTTTAT GAGAAGAAAC TGGCTCTATA 
       P  E  M  P   A  L  Y   E  K  K  L   A  L  Y 
7441   TCTCCTTCTT GCTCTCAGCC TAGCTTCTGT TGCCATGTGC 
         L  L  L   A  L  S  L   A  S  V   A  M  C
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                        [链]
7481   AGAACGCCCT TTTCATTGGC TGAAGGCATT GTCCTAGCAT 
        R  T  P  F   S  L  A   E  G  I   V  L  A 
7S21   CAGCTGCCTT AGGGCCGCTC ATAGAGGGAA ACACCAGCCT 
       S  A  A  L   G  P  L   I  E  G  N   T  S  L 
7561   TCTTTGGAAT GGACCCATGG CTGTCTCCAT GACAGGAGTC 
         L  W  N   G  P  M  A   V  S  M   T  G  V 
7601   ATGAGGGGGA ATCACTATGC TTTTGTGGGA GTCATGTACA 
        M  R  G  N   H  Y  A   F  V  G   V  M  Y 
7641   ATCTATGGAA GATGAAAACT GGACGCCGGG GGAGCGCGAA 
       N  L  W  K   M  K  T   G  R  R  G   S  A  N 
7681   TGGAAAAACT TTGGGTGAAG TCTGGAAGAG GGAACTGAAT 
         G  K  T   L  G  E  V   W  K  R   E  L  N 
7721   CTGTTGGACA AGCGACAGT TGAGTTGTAT AAAAGGACCG 
        L  L  D  K   R  Q  F  E  L  Y   K  R  T 
7761   ACATTGTGGA GGTGGATCGT GATACGGCAC GCAGGCATTT 
       D  I  V  E   V  D  R   D  T  A  R   R  H  L 
7801   GGCCGAAGGG AAGGTGGACA CCGGGGTGGC GGTCTCCAGG 
         A  E  G   K  V  D  T   G  V  A   V  S  R 
7841   GGGACCGCAA AGTTAAGGTG GTTCCATGAG CGTGGCTATG 
        G  T  A  K   L  R  W   F  H  E   R  G  Y 
7881   TCAAGCTGGA AGGTAGGGTG ATTGACCTGG GGTGTGGCCG 
       V  K  L  E   G  R  V   I  D  L  G   C  G  R 
7921   CGGAGGCTGG TGTTACTACG CTGCTGCGCA AAAGGAAGTG 
         G  G  W   C  Y  Y  A   A  A  Q   K  E  V 
7961   AGTGGGGTCA AAGGATTTAC TCTTGGAAGA GACGGCCATG 
        S  G  V  K   G  F  T   L  G  R   D  G  H 
8001   AGAAACCCAT GAATGTGCAA AGTCTGGGAT GGAACATCAT 
       E  K  P  M   N  V  Q   S  L  G  W   N  I  I 
8041   CACCTTCAAG GACAAAACTG ATATCCACCG CCTAGAACCA 
         T  F  K   D  K  T  D   I  H  R   L  E  P 
8081   GTGAAATGTG ACACCCTTTT GTGTGACATT GGAGAGTCAT 
        V  K  C  D   T  L  L   C  D  I   G  E  S 
8121   CATCGTCATC GGTCACAGAG GGGGAAAGGA CCGTGAGAGT 
       S  S  S  S   V  T  E   G  E  R  T   V  R  V
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                         [链]
8161   TCTTGATACT GTAGAAAAAT GGCTGGCTTG TGGGGTTGAC 
         L  D  T   V  E  K  W   L  A  C   G  V  D 
8201   AACTTCTGTG TGAAGGTGTT AGCTCCATAC ATGCCAGATG 
        N  F  C  V   K  V  L   A  P  Y   M  P  D 
8241   TTCTTGAGAA ACTGGAATTG CTCCAAAGGA GGTTTGGCGG 
       V  L  E  K   L  E  L   L  Q  R  R   F  G  G 
8281   AACAGTGATC AGGAACCCTC TCTCCAGGAA TTCCACTCAT 
         T  V  I   R  N  P  L   S  R  N   S  T  H 
8321   GAAATGTACT ACGTGTCTGG AGCCCGCAGC AATGTCACAT 
        E  M  Y  Y   V  S  G   A  R  S   N  V  T 
8361   TTACTGTGAA CCAAACATCC CGCCTCCTGA TGAGGAGAAT 
       F  T  V  N   Q  T  S   R  L  L  M   R  R  M 
8401   GAGGCGTCCA ACTGGAAAAG TGACCCTGGA GGCTGACGTC 
         R  R  P   T  G  K  V   T  L  E   A  D  V 
8441   ATCCTCCCAA TTGGGACACG CAGTGTTGAG ACAGACAAGG 
        I  L  P  I   G  T  R   S  V  E   T  D  K 
8481   GACCCCTGGA CAAAGAGGCC ATAGAAGAAA GGGTTGAGAG 
       G  P  L  D   K  E  A   I  E  E  R   V  E  R 
8521   GATAAAATCT GAGTACATGA CCTCTTGGTT TTATGACAAT 
         I  K  S   E  Y  M  T   S  W  F   Y  D  N 
8561   GACAACCCCT ACAGGACCTG GCACTACTGT GGCTCCTATG 
        D  N  P  Y   R  T  W   H  Y  C   G  S  Y 
8601   TCACAAAAAC CTCCGGAAGT GCGGCGAGCA TGGTAAATGG 
       V  T  K  T   S  G  S   A  A  S  M   V  N  G 
8641   TGTTATTAAA ATTCTGACAT ATCCATGGGA CAGGATAGAG 
         V  I  K   I  L  T  Y   P  W  D   R  I  E 
8681   GAGGTCACAA GAATGGCAAT GACTGACACA ACCCCTTTTG 
        E  V  T  R   M  A  M   T  D  T   T  P  F 
8721   GACAGCAAAG AGTGTTTAAA GAAAAAGTTG ACACCAGAGC 
       G  Q  Q  R   V  F  K   E  K  V  D   T  R  A 
8761   AAAGGATCCA CCAGCGGGAA CTAGGAAGAT CATGAAAGTT 
         K  D  P   P  A  G  T   R  K  I   M  K  V 
8801   GTCAACAGGT GGCTGTTCCG CCACCTGGCC AGAGAAAAGA 
        V  N  R  W   L  F  R   H  L  A   R  E  K
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                     [链]
8841   ACCCCAGACT GTGCACAAAG GAAGAATTTA TTGCAAAAGT 
       N  P  R  L   C  T  K   E  E  F  I   A  K  V 
8881   CCGAAGTCAT GCAGCCATTG GAGCTTACCT GGAAGAACAA 
         R  S  H   A  A  I  G   A  Y   L  E  E  Q 
8921   GAACAGTGGA AGACTGCCAA TGAGGCTGTC CAAGACCCAA 
        E  Q  W  K   T  A  N  E  A   V   Q  D  P 
8961   AGTTCTGGGA ACTGGGGAT GAAGAAAGGA AGCTGCACCA 
       K  F  W  E   L  V  D   E  E  R   K  L  H  Q 
9001   ACAAGGCAGG TGTCGGACTT GTGTGTACAA CATGATGGGG 
         Q  G  R   C  R  T  C   V  Y  N  M  M   G 
9041   AAAAGAGAGA AGAAGCTGTC AGAGTTTGGG AAAGCAAAGG 
        K  R  E  K   K  L  S   E  F  G   K  A  K 
9081   GAAGCCGTGC CATATGGTAT ATGTGGCTGG GAGCGCGGTA 
       G  S  R  A   I  W  Y   M  W  L  G   A  R  Y 
9121   TCTTGAGTTT GAGGCCCTGG GATTCCTGAA TGAGGACCAT 
          L  E  F  E  A  L  G  F   L  N  E   D  H 
9161   TGGGCTTCCA GGGAAAACTC AGGAGGAGGA GTGGAAGGCA 
         W  A  S  R   E  N  S  G  G  G   V  E  G 
9201   TTGGCTTACA ATACCTAGGA TATGTGATCA GAGACCTGGC 
       I  G  L  Q   Y  L  G  Y  V  I   R   D  L  A 
9241   TGCAATGGAT GGTGGTGGAT TCTACGCGGA TGACACCGCT 
         A  M  D   G  G  G  F  Y  A   D   D  T  A 
9281   GGATGGGACA CGCGCATCAC AGAGGCAGAC CTTGATGATG 
         G  W  D  T   R  I  T   E  A  D   L  D  D 
9321   AACAGGAGAT CTTGACTAC ATGAGCCCAC ATCACAAAAA 
       E  Q  E  I   L  N  Y  M  S  P  H   H  K  K 
9361   ACTGGCACAA GCAGTGATGG AAATGACATA CAAGAACAAA 
          L  A  Q  A  V  M  E   M  T  Y   K  N  K 
9401   GTGGTGAAAG TGTTGAGACC AGCCCCAGGA GGGAAAGCCT 
       V  V  K  V   L  R  P   A  P  G   G  K  A 
9441   ACATGGATGT CATAAGTCGA CGAGACCAGA GAGGATCCGG 
       Y  M  D  V   I  S  R   R  D  Q  R   G  S  G 
9481   GCAGGTAGTG ACTTATGCTC TGAACACCAT CACAACTTG 
         Q  V  V   T  Y  A  L   N  T  I  T  N  L
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                        [链]
9521    AAAGTCCAAT TGATCAGAAT GGCAGAAGCA GAGATGGTGA 
         K  V  Q  L   I  R  M   A  E  A  E   M  V 
9561    TACATCACCA ACATGTTCAA GATTGTGATG AATCAGTTCT 
        I  H  H  Q  H   V  Q   D  C  D  E   S  V  L 
9601    GACCAGGCTG GAGGCATGGC TCACTGAGCA CGGATGTGAC 
          T  R  L   E  A  W  L   T  E  H   G  C  D 
9641    AGACTGAAGA GGATGGCGGT GAGTGGAGAC GACTGTGTGG 
         R  L  K  R   M  A  V   S  G  D   D  C  V 
9681    TCCGGCCCAT CGATGACAGG TTCGGCCTGG CCCTGTCCCA 
        V  R  P  I   D  D  R   F  G  L  A   L  S  H 
9721    TCTCAACGCC ATGTCCAAGG TTAGAAGGA CATATCTGAA 
         L   N  A   M  S  K  V  R  K  D   I  S  E 
9761    TGGCAGCCAT CAAAAGGGTG GAATGATTGG GAGAATGTGC 
         W  Q  P  S   K  G  W   N  D  W   E  N  V 
9801    CCTTCTGTTC CCACCACTTC CATGAACTAC AGCTGAAGGA 
        P  F  C  S   H  H  F   H  E  L  Q   L  K  D 
9841    TGGCAGGAGG ATTGTGGTGC CTTGCCGAGA ACAGGACGAG 
          G  R  R   I  V  V  P   C  R  E   Q  D  E 
9881    CTCATTGGGA GAGGAAGKGGT GTCTCCAGGA AACGGCTGGA 
         L  I  G  R   G  R   V   S  P  G   N  G  W 
9921    TGATCAAGGA AACAGCTTGC CTCAGCAAAG CCTATGCCAA 
        M  I  K  E   T  A  C   L  S  K  A   Y  A  N 
9961    CATGTGGTCA CTGATGTATT TTCACAAAAG GGACATGAGG 
          M  W  S   L  M  Y  F   H  K  R   D  M  R 
10001   CTACTGTCAT TGGCTGTTTC CTCAGCTGTT CCCACCTCAT 
         L  L  S  L   A  V  S   S  A  V   P  T  S 
10041   GGGTTCCACA AGGACGCACA ACATGGTCGA TTCATGGGAA 
        W  V  P  Q   G  R  T   T  W  S  I   H  G  K 
10081A  AGGGGAGTGG ATGACCACGG AAGACATGCT TGAGGTGTGG 
          G  E  W   M  T  T  E   D  M  L   E  V  W 
10121A  AACAGAGTAT GGATAACCAA CAACCCACAC ATGCAGGACA 
         N  R  V  W   I  T  N   N  P  H   M  Q  D 
10161A  AGACAATGGT GAAAAAATGG AGAGATGTCC CTTATCTAAC 
        K  T  M  V   K  K  W   R  D  V  P  Y  L  T
ChimerivaxWN02改为装瓶终产物(Run1)L/N#02H01;P/N#FP-0008
                         [链]
10201   CAAGAGACAA GACAAGCTGT GCGGATCACT GATTGGAATG 
           K  R  Q  D  K  L  C   G  S  L   I  G  M 
10241   ACCAATAGGG CCACCTGGGC CTCCCACATC CATTTAGTCA 
         T  N  R  A  T  L   A   S  H  I   H  L  V 
10281   TCCATCGTAT CCGAACGCTG ATTG3ACAGG AGAAATACAC 
        I  H  R  I   R  T  L   I  G  Q  E   K  Y  T 
10321   TGACTACCTA ACAGTCATGG ACAGGTATTC TGTGGATGCT 
          D  Y  L  T  V  M  D   R  Y  S   V  D  A 
10361   GACCTGCAAC TGGGTGAGCT TATCTGAAAC AC1TCTAAC 
         D  L  Q  L   G  E  L   I 
10401   AGGAATAACC GGGATACAAA CCACGGGTGG AGAACCGGAC 
10441   TCCCCACAAC CTGAAACCGG GATATAAACC ACGGCTGGAG 
10481   AACCGGACTC CGCACTTAAA ATGAAACAGA AACCGGGATA 
20521   AAAACTACGG ATGGAGAACC GGACTCCACA CATTGAGACA 
10561   GAAGAAGTTG TCAGCCCAGA ACCCCACACG AGTTTTGCCA 
10601   CTGCTAAGCT GTGAGGCAGT GCAGGCTGGG ACAGCCGACC 
10641   TCCAGGTTGC GAAAAACCTG GTTTCTGGGA CCTCCCACCC 
20681   CAGAGTAAAA AGAACGGAGC CTCCGCTACC ACCCTCCCAC 
10721   GTGGTGGTAG AAAGACGGGG TCTAGAGGTT AGAGGAGACC 
10761   CTCCAGGGAA CAAATAGTGG GACCATATTG ACGCCAGGGA 
10801   AAGACCGGAG TGGTTCTCTG CTTTTCCTCC AGAGGTCTGT 
10841   GAGCACAGTT TGCTCAAGAA TAAGCAGACC TTTGGATGAC 
10881   AAACACAAAA CCACAA
                  Chimerivax WN02M66变体
                              [链]
SEQ ID NOS:22与23
1      NGTAAATCCT GTGTGCTAAT TGAGGTGCAT TGGTCTGCAA 
41     ATCGAGTTGC TAGGCAATAA ACACATTTGG ATTAATTTTA 
81     ATCGTTCGTT GAGCGATTAG CAGAGAACTG ACCAGAACAT 
                                                 M 
121    GTCTGGTCGT AAAGCTCAGG GAAAAACCCT GGGCGTCAAT 
         S  G  R   K  A  Q  G   K  T  L   G  V  N 
161    ATGGTACGAC GAGGAGTTCG CTCCTTGTCA AACAAAATAA 
        M  V  R  R   G  V  R   S  L  S   N  K  I 
201    AACAAAAAAC AAAACAAATT GGAAACAGAC CTGGACCTTC 
       K  Q  K  T  K  Q   I    G  N  R  P   G  P  S 
241    AAGAGGTGTT CAAGGATTTA TCTTTTTCTT TTTGTTCAAC 
         R  G  V   Q  G  F  I   F  F  F   L  F  N 
281    ATTTTGACTG GAAAAAAGAT CACAGCCCAC CTAAAGAGGT 
        I  L  T  G   K  K  I   T  A  H   L  K  R 
321    TGTGGAAAAT GCTGGACCCA AGACAAGGCT TGGCTGTTCT 
       L  W  K  M   L  D  P   R  Q  G  L  A  V   L 
361    AAGGAAAGTC AAGAGAGTGG TGGCCAGTTT GATGAGAGGA 
         R  K  V   K  R  V  V   A  S  L   M  R  G 
401    TTGTCCTCAA GGAAACGCCG TTCCCATGAT GTTCTGACTG 
        L  S  S  R   K  R  R   S  H  D   V  L  T 
441    TGCAATTCCT AATTTTGGGA ATGCTGTTGA TGACGGGTGG 
       V  Q  F  L   I  L   G  M  L  L  M   T  G  G 
481    AGTTACCCTC TCTAACTTCC AAGGGAAGGT GATGATGACG 
         V  T  L   S  N  F  Q   G  K  V   M  M  T 
521    GTAAATGCTA CTGACGTCAC AGATGTCATC ACGATTCCAA 
        V  N  A  T   D  V  T   D  V  I   T  I  P 
561    CAGCTGCTGG AAAGAACCTA TGCATTGTCA GAGCAATGGA 
       T  A  A  G   K  N  L   C  I  V  R   A  M  D 
601    TGTGGGATAC ATGTGCGATG ATACTATCAC TTATGAATGC 
         V  G  Y  M  C  D  D   T  I  T   Y   E  C 
641    CCAGTGCTGT CGGCTGGTAA TGATCCAGAA GACATCGACT 
        P  V  L  S   A  G  N   D  P  E   D  I  D
              Chimerivax WN02M66变体
                          [链]
681   GTTGGTGCAC AAAGTCAGCA GTCTACGTCA GGTATGGAAG 
      C  W  C  T   K  S  A  V  Y  V  R   Y  G  R 
721   ATGCACCAAG ACACCCACT CAAGACGCCAG TCGGAGGTCA 
        C  T  K   T  R  H  S   R  R  S   R  R  S 
761   CTGACAGTGC AGACACACGG AGAAAGCACT CTAGCGAACA 
       L  T  V  Q   T  H  G   E  S  T   L  A  N 
801   AGAAGGGGGC TTGGATGGAC AGCACCAAGG CCACAAGGTA 
      K  K  G  A   W  M  D   S  T  K  A   T  R  Y 
841   TTTGGTAAA ACAGAATCAT GGATCTTGAG GAACCCTGGA 
        L  V  K  T  E  S  W   I  L  R   N  P  G 
881   TATGCCCTGG TGGCAGCCGT CATTGGTTGG ATGCTTGGGA 
       Y  A  L  V   A  A  V   I  G  W   M  L  G 
921   GCAACACCAT GCAGAGAGTT GTGTTTGTCG TGCCATTGCT 
      S  N  T  M  Q  R  V   V  F  V   V   P  L  L 
961   TTTGGTGGCC CCAGCTTACA GCTTCAACTG CCTTGGAATG 
        L  V  A   P  A  Y  S   F  N  C   L  G  M 
1001  AGCAACAGAG ACTTCTTGGA AGGAGTGTCT GGAGCAACAT 
       S  N  R  D   F  L  E   G  V  S   G  A  T 
1041  GGGTGGATTT GGTTCTCGAA GGCGACAGCT GCGTGACTST 
      W  V  D  L   V  L  E   G  D  S  C   V  T  I 
1081  CATGTCTAAG GACAAGCCTA CCATCGACGT CAAGATGATG 
        M  S  K   D  K  P  T   I  D  V   K  M  M 
1121  AATATGGAGG CGGCCAACCT GGCAGAGGTC CGCAGTTATT 
       N  M  E  A   A  N  L   A  E  V   R  S  Y 
1161  GCTATTTGGC TACCGTCAGC GATCTCTCCA CCAAAGCTGC 
      C  Y  L  A   T  V  S   D  L  S   T  K  A  A 
1201  ATGCCCGACC ATGGGAGAAG CTCACAATGA CAAACGTGCT 
        C  P  T   M  G  E  A   H  N  D   K  R  A 
1241  GACCCAGCTT TTGTGTGCAG ACAAGGAGTG GTGGACAGGG 
       D  P  A  F   V  C  R   Q  G  V   V  D  R 
1281  GCTGGGGCAA CGGCTGCGGA TTTTTTGGCA AAGGATCCAT 
      G  W  G  N   G  C  G   F  F  G  K   G  S  I 
1321  TGACACATGC GCCAAATTTG CCTGCTCTAC CAAGGCAATA 
        D  T  C   A  K  F  A   C  S  T  K  A  I
        Chimerivax WNO2M66变体
                     [链]
1361  GGAAGAACCA TCTTGAAAGA GAATATCAAG TACGAAGTGG 
       G  R  T  I   L  K  E   N  I  K  Y  E   V 
1401  CCATTTTTGT CCATGGACCA ACTACTGTGG AGTCGCACGG 
      A  I  F  V   H  G  P   T  T  V  E   S  H  G 
1441  AAATTACTCC ACACAGGTTG GAGCCACTCA GGCCGGCCGA 
        N  Y  S   T  Q  V  G   A  T  Q   A  G  R 
1481  TTCAGCATCA CTCCTGCTGC GCCTTCATAC ACACTAAAGC 
       F  S  I  T   P  A  A   P  S  Y   T  L  K 
1521  TTGGAGAATA TGGAGAGGTG ACAGTGGACT GTGAACCACG 
      L  G  E  Y   G  E  V   T  V  D  C   E  P  R 
1561  GTCAGGGATT GACACCAATG CATACTACGT GATGACTGTT 
         S  G  I   D  T  N  A  Y  Y  V   M  T  V 
1601  GGAACAAAGA CGTTCTTGGT CCATCGTGAG TGGTTCATGG 
       G  T  K   T  F  L  V   H  R  E   W  F  M 
1641  ACCTCAACCT CCCTTGGAGC AGTGCTGGAA GTACTGTGTG 
      D  L  N  L   P  W  S   S  A  G  S   T  V  W 
1681  GAGGAACA GAGAGACGTTAA TGGAGTTTGA GGAACCACAC 
        R  N  R   E  T  L  M   E  F  E   E  P  H 
1721  GCCACGAAGC AGTCTGTGAT AGCATTGGGC TCACAAGAGG 
       A  T  K  Q   S  V  I   A  L  G   S  Q  E 
1761  GAGCTCTGCA TCAAGCTTTG GCTGGAGCCA TTCCTGTGGA 
      G  A  L  H   Q  A  L  A  G  A   I   P  V  E 
1801  ATTTTCAAGC AACACTGTCA AGTTGACGTC GGGTCATTTG 
        F  S  S   N  T  V  K   L  T  S   G  H  L 
1841  AAGTGTAGAG TGAAGATGGA AAAATTGCAG TTGAAGGGAA 
       K  C  R  V   K  I  E   K  L  Q   L  K  G 
1881  CAACCTATGG CGTCTGTTCA AAGGCTTTCA AGTTTCTTAG 
      T  T  Y  G   V  C  S   K  A  F  K   F  L  R 
1921  GACTCCCGTG GACACCGGTC ACGGCACTGT GGTGTTGGAA 
        T  P  V   D  T  G  H   G  T  V   V  L  E 
1961  TTGCAGTACA CTGGCACGGA TGGACCTTGC AAAGTTCCTA 
       L  Q  Y  T   G  T  D   G  P  C   K  V  P 
2001  TCTCGTCAGT GGCTTCATTG AACGACCTAA CGCCAGTGGG 
      I  S  S  V   A  S  L   N  D  L  T   P  V  G
         Chimerivax WNO2 M66变体
                      [链]
2041   CAGATTGGTC ACTGTCAACC CTTTGTTTC AGTGGCCACG 
         R  L  V   T  V  N  P   F  V  S   V  A  T 
2081   GCCAACGCTA AGGTCCTGAT TGAATTGGAA CCACCCTTTG 
        A  N  A  K   V  L  I   E  L  E   P  P  F 
2121   GAGACTCATA CATAGTGGTG GGCAGAGGAG AACAACAGAT 
       G  D  S  Y   I  V  V   G  R  G  E   Q  Q  I 
2161   CAATCACCAT TGGCACAAGT CTGGAAGCAG CATTGGCAAA 
         N  H  H  W  H  K  S   G  S  S   I  G  K 
2201   GCCTTTACAA CCACCCTCAA AGGAGCGCAG AGACTAGCCG 
        A  F  T  T   T  L  K   G  A  Q   R  L  A 
2241   CTCTAGGAGA CACAGCTTGG GACTTTGGAT CAGTTGGAGG 
       A  L  G  D   T  A  W   D  F  G  S   V  G  G 
2281   GGTGTTCACT AGTGTTGGGC GGGCTGTCCA TCAAGTGTTC 
         V  F  T   S  V  G  R   A  V  H   Q  V  F 
2321   GGAGGAGCAT TCCGCTCACT GTTCGGAGGC ATGTCCTGGA 
        G  G  A  F   R  S  L   F  G  G   M  S  W 
2361   TAACGCAAGG ATTGCTGGGG GCTCTCCTGT TGTGGATGGG 
       I  T  Q  G   L  L  G   A  L  L  L   W  M  G 
2401   CATCAATGCT CGTGATAGGT CCATAGCTCT CACCTTTCTC 
         I  N  A   R  D  R   S  I  A  L   T  F  L 
2441   GCAGTTGGAG GAGTTCTGCT CITCCICTCC GTGAACGTGG 
        A  V  G  G   V  L  L   F  L  S   V  N  V 
2481   GCGCCGATCA AGGATGCGCC ATCAACTTTG GCAAGAGAGA 
       G  A  D  Q   G  C  A   I  N  F  G   K  R  E 
2521   GCTCAAGTGC GGAGATGGTA TCTTCATATT TAGAGACTCI 
         L  K  C   G  D  G  I   F  I  F   R  D  S 
2562   GATGACTGGC TGAACAAGIA CICATACTAT CCAGAAGAIC 
        D  D  W  L   N  K  Y   S  Y  Y   P  E  D 
2601   CTGTGAAGCT TACATCAATA GIGAAAGCCT CTTTTGAAGA 
       P  V  K  L   A  S  I   V  K  A  S   F  E  E 
2641   AGGGAAGTGT GGCCTAAATT CAGTTGACTC CCTTGAGCAT 
         C  K  C   G  L  N  S   V  D  S   L  E  H 
2681   GAGATGTGGA GAAGCAGGGC AGATGAGATC AATGCCATTT 
        E  M  W  R   S  R  A   D  E  I   N  A  I
           ChimerivaxWN02M66变体
                       [链]
2721   TTGAGGAAAA CGAGGTGGAC ATTTCTGTTG TCGTGCAGGA 
       F  E  E  N   E  V  D   I  S  V  V   V  Q  D 
2761   TCCAAAGAAT GTTTACCAGA GAGGAACTCA TCCATTTTCC 
         P  K  N   V  Y  Q  R   G  T  H   P  F  S 
2801   AGAATTCGGG ATGGTCTGCA GTATGGTTGG AAGACTTGGG 
        R  I  R  D   G  L  Q   Y  G  W   K  T  W 
2841   GTAAGAACCT TGTGTTCTCC CCAGGGAGGA AGAATGGAAG 
       G  K  N  L   V  F  S   P  G  R  K   N  G  S 
2881   CTTCATCATA GATGGAAAGT CCAGGAAAGA ATGCCCGTTT 
         F  I  I   D  G  K  S   R  K  E   C  P  F 
2921   TCAAACCGGG TCTGGAATTC TTTCCAGATA GAGGAGTTTG 
        S  N  R  V   W  N  S   F  Q  I   E  E  F 
2961   GGACGGGAGT GTTCACCACA CGCGTGTACA TGGACGCAGT 
       G  T  G  V   F  T  T   R  V  Y  M   D  A  V 
3001   CTTTGAATAC ACCATAGACT GCGATGGATC TATCTTGGGT 
         F  E  Y   T  I  D  C   D  G  S   I  L  G 
3041   GCAGCGGTGA ACGGAAAAAA GAGTGCCCAT GGCTCTCCAA 
        A  A  V  N   G  K  K   S  A  H   G  S  P 
3081   CATTTTGGAT GGGAAGTCAT GAAGTAAATG GGACATGGAT 
       T  F  W  M   G  S  H   E  V  N  G   T  W  M 
3121   GATCCACACC TTGGAGGCAT TAGATTACAA GGAGTGTGAG 
         I  H  T   L  E  A  L   D  Y  K   E  C  E 
3161   TGGCCACTGA CACATACGAT TGGAACATCA GTTGAAGAGA 
        W  P  L  T   H  T  I   G  T  S   V  E  E 
3201   GTGAAATGTT CATGCCGAGA TCAATCGGAG GCCCAGTTAG 
       S  E  M  F   M  P  R   S  I  G  G   P  V  S 
3241   CTCTCACAAT CATATCCCTG GATACAAGGT TCAGACGAAC 
         S  H  N   H  I  P  G   Y  K  V   Q  T  N 
3281   GGACCTTGGA TGCAGGTACC ACTAGAAGTG AAGAGAGAAG 
        G  P  W  M   Q  V  P   L  E  V   K  R  E 
3321   CTTGCCCAGG GACTAGCGTG ATCATTGATG GCAACTGTGA 
       A  C  P  G   T  S  V   I  I  D  G   N  C  D 
3361   TGGACGGGGA AAATCAACCA GATCCACCAC GGATAGCGGG 
         G  R  G   K  S   T  R   S  T  T  D  S  G
        Chimerivax WN02M66变体
                     [链]
3401   AAAGTTATTC CTGAATGGTG TTGCCGCTCC TGCACAATGC 
        K  V  I  P   E  W  C   C  R  S   C  T  M 
3441   CGCCTGTGAG CTTCCATGGT AGTGATGGGT GTTGGTATCC 
       P  P  V  S   F  H  G   S  D  G  C   W  Y  P 
3481   CATGGAAATT AGGCCAAGGA AAACGCATGA AAGCCATCTG 
         M  E  I   R  P  R  K   T  H  E   S  H  L 
3521   GTGCGCTCCT GGGTTACAGC TGGAGAAATA CATGCTGTCC 
        V  R  S  W   V  T  A   G  E  I   H  A  V 
3561   CTTTTGGTTT GGTGAGCATG ATGATAGCAA TGGAAGTGGT 
       P  P  G  L   V  S  M   M  I  A  M   E  V  V 
3601   CCTAAGGAAA AGACAGGGAC CAAAGCAAAT GTTGGTTGGA 
         L  R  K   R  Q  G  P   K  Q  M   L  V  G 
3641   GGAGTAGTGC TCTTGGGAGC AATGCTGGTC GGGCAAGTAA 
        G  V  V  L   L  G  A   M  L  V   G  Q  V 
3681   CTCTCCTTGA TTTGCTGAAA CTCACAGTGG CTGTGGGATT 
       T  L  L  D   L  L  K   L  T  V  A   V  G  L 
3721   GCATTTCCAT GAGATGAACA ATGGAGGAGA CGCCATGTAT 
          H  F  H   E  M  N  N   G  G  D   A  M  Y 
3761   ATGGCGTTGA TTGCTGCCTT TTCAATCAGA CCAGGGCTGC 
        M  A  L  I   A  A  F   S  I  R   P  G  L 
3802   TCATCGGCTT TGGGCTCAGG ACCCTATGGA GCCCTCGGGA 
       L  I  G  F   G  L  R   T  L  W  S   P  R  E 
3841   ACGCCTTGTG CTGACCCTAG GAGCAGCCAT GGTGGAGATT 
          R  L  V   L  T  L  G  A  A  M   V  E  I 
3881   GCCTTGGGTG GCGTGATGGG CGGCCTGTGG AAGTATCTAA 
        A  L  G  G   V  M  G  G  L  W   K  Y   L 
3921   ATGCAGTTTC TCTCTGCATC CTGACAATAA ATGCTGTTGC 
       N  A  V  S   L  C  I   L  T  I  N   A  V  A 
3961   TTCTAGGAAA GCATCAAATA CCATCTTGCC CCTCATGGCT 
         S  R  K   A  S  N  T   I  L  P   L  M  A 
4001   CTGTTGACAC CTGTCACTAT GGCTGAGGTG AGACTTGCCG 
        L  L  T  P   V  T  M   A  E  V   R  L  A 
4041   CAATGTTCTT TTGTGCCATG GTTATCATAG GGGTCCTTCA 
       A  M  F  F  C  A   M   V  I  I  G   V  L  H
         Chimerivax WN02M66变体
                      [链]
4081   CCAGAATTTC AAGGACACCT CCATGCAGAA GACTATACCT 
         Q  N  F   K  D  T  S   M  Q  K   T  I  P 
4121   CTGGTGGCCC TCACACTCAC ATCTTACCTG GGCTTGACAC 
        L  V  A  L   T  L  T   S  Y  L   G  L  T 
4161   AACCTTTTTT GGGCCTGTGT GCATTTCTGG CAACCCGCAT 
       Q  P  F  L   G  L  C   A  F  L  A   T  R  I 
4201   ATTTGGGCGA AGGAGTATCC CAGTGAATGA GGCACTCGCA 
         F  G  R   R  S  I  P  V  N  E   A  L  A 
4241   GCAGCTGGTC TAGTGGGAGT GCTGGCAGGA CTGGCTTTTC 
        A  A  G  L   V  G  V   L  A  G   L  A  F 
4281   AGGAGATGGA GAACTTCCTT GGTCCGATTG CAGTTGGAGG 
       Q  E  M  E   N  F  L   G  P  I  A   V  G  G 
4321   ACTCCTGATG ATGCTGGTTA GCGTGGCTGG GAGGGTGGAT 
         L  L  M   M  L  V  S   V  A  G   R  V  D 
4361   GGGCTAGAGC TCAAGAAGCT TGGTGAAGTT TCATGGGAAG 
        G  L  E  L   K  K  L   G  E  V   S  W  E 
4401   AGGAGGCGGA GATCAGCGGG AGTTCCGCCC GCTATGATGT 
       E  E  A  E   I  S  G   S  S  A  R   Y  D  V 
4441   GGCACTCAGT GAACAAGGGG AGTTCAAGCT GCTTTCTGAA 
         A  L  S   E  Q  G  E   F  K  L   L  S  E 
4481   GAGAAAGTGC CATCGGACCA GGTTGTGATG ACCTCGCTGG 
       E  K  V  P   V   D  Q   V  V  M   T   S L 
4521   CCTTGGTTGG GGCTGCCCTC CATCCATTTG CTCTTCTGCT 
       A  L  V  G   A  A  L   H  P  F  A   L  L  L 
4561   GGTCCTTGCT GGGTGGCTGT TTCATGTCAG GGGAGCTAGG 
          V  L  A   G  W  L  F  H  V  R   G  A  R 
4601   AGAAGTGGGG ATGTCTTGTG GGATATTCCC ACTCCTAAGA 
        R  S  G  D   V  L  W   D  I  P   T  P  K 
4641   TCATCGAGGA ATGTGAACAT CTGGAGGATG GGATTTATGG 
       I  I  E  E   C  E  H   L  E  D  G   I  Y  G 
4681   CATATTCCAG TCAACCTTCT TGGGGGCCTC CCAGCGAGGA 
         I  F  Q   S  T  F  L   G  A  S   Q  R  G 
4721   GTGGGAGTGG CACAGGGAGG GGTGTTCCAC ACAATGTGGC 
        V  G  V  A   Q  G  G   V  F  H   T  M  W
           Chimerivax WN02M66变体
                        [链]
4761   ATGTCACAAG AGGAGCTTTC CTTGTCAGGA ATGGCAAGAA 
       H  V  T  R   G  A  F   L  V  R  N   G  K  K 
4801   GTTGATTCCA TCTTGGGCTT CAGTAAAGGA AGACCTTGTC 
         L  I  P   S  W  A  S   V  K  E   D  L  V 
4841   GCCTATGGTG GCTCATGGAA GTTGGAAGGC AGATGGATG 
        A  Y  G  G   S  W   K  L  E  G   R  W  D 
4881   GAGAGGAAGA GGTCCAGTTG ATCGCGGCTG TTCCAGGAAA 
       G  E  E  E   V  Q  L   I  A  A  V  P  G  K 
4922   GAACGTGGTC AACGTCCAGA CAAAACCGAG CTTGTTCAAA 
         N  V  V   N  V  Q  T   K  P  S   L  F  K 
4961   GTGAGGAATG GGGGAGAAAT CGGGGCTGTC GCTCTTGACT 
        V  R  N  G   G  E  I   G  A  V   A  L  D 
5001   ATCCGAGTGG CACTTCAGGA TCTCCTATTG TTAACAGGAA 
       Y  P  S  G   T  S  G   S  P  I  V   N  R  N 
5041   CGGAGAGGTG ATTGGGCTGT ACGGCAATGG CATCCTTGTC 
         G  E  V   I  G  L  Y   G  N  G   I  L  V 
5081   GGTGACAACT CCTTCGTGTC CGCCATATCC CAGACTGAGG 
        G  D  N  S   F  V  S   A  I  S   Q  T  E 
5121   TGAAGGAAGA AGGAAAGGAG GAGCTCCAAG AGATCCCGAC 
       V  K  E  E   G  K  E   E  L  Q  E   I  P  T 
5161   AATGCTAAAG AAAGGAATGA CAACTGTCCT TGATTTTCAT 
         M  L  K   K  G  M  T   T  V  L   D  F  H 
5201   CCTGGAGCTG GGAAGACAAG ACGTTTCCTC CCACAGATCT 
        P  G  A  G   K  T  R   R  F  L   P  Q  I 
5241   TGGCCGAGTG CGCACGGAGA CGCTTGCGCA CTCTTGTGTT 
       L  A  E  C   A  R  R   R  L  R  T  L  V  L 
5281   GGCCCCCACC AGGGTTGTTC TTTCTGAAAT GAAGGAGGCT 
          A  P  T  R  V  V  L   S  E  M   K  E  A 
5321   TTTCACGGCC TGGACGTGAA ATTCCACACA CAGGCTTTTT 
        F  H  G  L   D  V  K   F  H  T   Q  A  F 
5361   CCGCTCACGG CAGCGGGAGA GAAGTCATTG ATGCCATGTG 
       S  A  H  G   S  G  R   E  V  I  D   A  M  C 
5401   CCATGCCACC CTAACTTACA GGATGTTGGA ACCAACTAGG 
         H  A  T   L  T  Y  R   M  L  E   P  T  R
         Chimerivax WN02M66变体
                      [链]
5441   GTTGTTAACT GGGAAGTGAT CATTATGGAT GAAGCCCATT 
        V  V  N  W   E  V  I   I  M  D   E  A  H 
5481   TTTTGGATCC AGCCAGCATA GCCGCTAGAG GTTGGGCAGC 
       F  L  D  P   A  S  I   A  A  R   G  W  A  A 
5521   GCACAGAGCT AGGGCAAATG AAAGTGCAAC AATCTTGATG 
         H  R  A   R  A  N  E   S  A  T   I  L  M 
5561   ACAGCCACAC CGCCTGGGAC TAGTGATGAA TTTCCACATT 
        T  A  T  P   P  G  T   S  D  E   F  P  H 
5601   CAAATGGTGA AATAGAAGAT GTTCAAACGG ACATACCCAG 
       S  N  G  E   I  E  D   V  Q  T  D   I  P  S 
5641   TGAGCCCTGG AACACAGGGC ATGACTGGAT CCTGGCTGAC 
         E  P  W   N  T  G  H   D  W  I  L  A   D 
5681   AAAAGGCCCA CGGCATGGTT CCTTCCATCC ATCAGAGCTG 
        K  R  P  T   A  W  F  L  P   S   I  R  A 
5721   CAAATGTCAT GGCTGCCTCT TTGCGTAAGG CTGGAAAGAG 
       A  N  V  M   A  A  S   L  R  K  A   G  K  S 
5761   TGTGGTGGTC CTGAACAGGA AAACCTTTGA GAGAGAATAC 
         V  V  V   L  N  R  K   T  F  E  R   E  Y 
5801   CCCACGATAA AGCAGAAGAA ACCTGACTTT ATATTGGCCA 
        P  T  I  K   Q  K  K   P  D  F   I  L  A 
5841   CTGACATAGC TGAAATGGGA GCCAACCTTT GCGTGGAGCG 
       T  D  I  A   E  M  G   A  N  L  C   V  E  R 
5881   AGTGCTGGAT TGCAGGACGG CTTTTAAGCC TGTGCTTGTG 
         V  L  D   C  R  T  A   F  K  P   V  L  V 
5921   GATGAAGGGA GGAAGGTGGC AATAAAAGGG CCACTTCGTA 
        D  E  G  R   K  V  A   I  K  G   P  L  R 
5961   TCTCCGCATC CTCTGCTGCT CAAAGGAGGG GGCGCATTGG 
       I  S  A  S   S  A  A   Q  R  R  G   R  I  G 
6001   GAGAAATCCC AACAGAGATG GAGACTCATA CTACTATTCT 
         R  N  P   N  R  D  G   D  S  Y   Y  Y  S 
6041   GAGCCTACAA GTGAAAATAA TGCCCACCAC GTCTGCTGGT 
        E  P  T  S   E  N  N   A  H  H   V  C  W 
6081   TGGAGGCCTC AATGCTCTTG GACAACATGG AGGTGAGGGG 
       L  E  A  S   M  L  L   D  N  M  E   V  R  G
              Chimerivax WN02M66变体
                           [链]
6121   TGGAATGGTC GCCCCACTCT ATGGCGTTGA AGGAACTAAA 
         G  M  V   A  P  L  Y   G  V  E  G  T  K 
6161   ACACCAGTTT CCCCTGGTGA AATGAGACTG AGGGATGACC 
        T  P  V  S   P  G  E   M  R  L   R  D  D 
6201   AGAGGAAAGT CTTCAGAGAA CTAGTGAGGA ATTGTGACCT 
       Q  R  K  V   F  R  E   L  V  R  N   C  D  L 
6241   GCCCGTTTGG CTTTCGTGGC AAGTGGCCAA GGCTGGTTTG 
         P  V  W   L  S  W  Q   V  A  K  A  G  L 
6281   AAGACGAATG ATCGTAAGTG GTGTTTTGAA GGCCCTGAGG 
        K  T  N  D   R  K  W   C  F  E   G  P  E 
6321   AACATGAGAT CTTGAATGAC AGCGGTGAAA CAGTGAAGTG 
       E  H  E  I   L  N  D   S  G  E  T   V  K  C 
6361   CAGGGCTCCT GGAGGAGCAA AGAAGCCTCT GCGCCCAAGG 
         R  A  P   G  G  A  K   K  P  L   R  P  R 
6401   TGGTGTGATG AAAGGGTGTC ATCTGACCAG AGTGCGCTGT 
        W  C  D  E   R  V  S   S  D  Q   S  A  L 
6441   CTGAATTTAT TAAGTTTGCT GAAGGTAGGA GGGGAGCTGC 
       S  E  F  I   K  F  A   E  G  R  R   G  A  A 
6481   TGAAGTGCTA GTTGTGCTGA GTGAACTCCC TGATTTCCTG 
         E  V  L   V  V  L  S   E  L  P  D  F  L 
6521   GCTAAAAAAG GTGGAGAGGC AATGGATACC ATCAGTGTGT 
        A  K  K  G   G  E  A   M  D  T   I  S  V 
6561   TCCTCCACTC TGAGGAAGGC TCTAGGGCTT ACCGCAATGC 
       F  L  H  S   E  E  G   S  R  A  Y   R  N  A 
6601   ACTATCAATG ATGCCTGAGG CAATGACAAT AGTCATGCTG 
         L  S  M   M  P  E  A   M  T  I   V  M  L 
6641   TTTATACTGG CTGGACTACT GACATCGGGA ATGGTCATCT 
        F  I  L  A   G  L  L   T  S  G   M  V   I 
6681   TTTTCATGTC TCCCAAAGGC ATCAGTAGAA TGTCTATGGC 
       F  F  M  S   P  K  G   I  S  R  M   S  M  A 
6721   GATGGGCACA ATGGCCGGCT GTGGATATCT CATGTTCCTT 
         M  G  T   M  A  G  C   G  Y  L   M  F  L 
6761   GGAGGCGTCA AACCCACTCA CATCTCCTAT GTCATGCTCA 
        G  G  V  K   P  T  H   I  S  Y   V  M  L
                Chimerivax WN02M66变体
                             [链]
6801   TATTCTTTGT CCTGATGGTG GTTGTGATCC CCGAGCCAGG 
       I  F  F  V   L  M  V   V  V  I  P   E  P  G 
6841   GCAACAAAGG TCCATCCAAG ACAACCAAGT GGCATACCTC 
         Q  Q  R   S  I  Q  D   N  Q  V   A  Y  L 
6881   ATTATTGGCA TCCTGACGCT GGTTTCAGCG GTGGCAGCCA 
        I  I  G  I   L  T  L   V  S  A   V  A  A 
6921   ACGAGCTAGG CATGCTGGAG AAAACCAAAG AGGACCTCTT 
       N  E  L  G   M  L   E   K  T  K  E   D  L  F 
6961   TGGGAAGAAG AACTTAATTC CATCTAGTGC TTCACCCTGG 
         G  K  K   N  L  I  P   S  S  A   S  P  W 
7001   AGTTGGCCGG ATCTTGACCT GAAGCCAGGA GCTGCCTGGA 
        S  W  P  D   L  D  L   K  P  G   A  A  W 
7041   CAGTGTACGT TGGCATTGTT ACAATGCTCT CTCCAATGTT 
       T  V  Y  V   G  I  V   T  M  L  S   P  M  L 
7081   GCACCACTGG ATCAAAGTCG AATATGGCAA CCTGTCTCTG 
         H  H  W   I  K  V  E   Y  G  N   L  S  L 
7121   TCTGGAATAG CCCAGTCAGC CTCAGTCCTT TCTTTCATGG 
        S  G  I  A   Q  S  A   S  V  L   S  F  M 
7161   ACAAGGGGAT ACCATTCATG AAGATGAATA TCTCGGTCAT 
       D  K  G  I   P  F  M  K   M  N  I   S  V  I 
7201   AATGCTGCTG GTCAGTGGCT GGAATTCAAT AACAGTGATG 
          M  L  L   V  S  G   W  N  S   I  T  V  M 
7241   CCTCTGCTCT GTGGCATAGG GTGCGCCATG CTCCACTGGT 
        P  L  L  C   G  I  G   C  A  M   L  H  W 
7281   CTCTCATTTT ACCTGGAATC AAAGCGCAGC AGTCAAAGCT 
       S  L  I  L   P  G  I  K   A  Q  Q  S  K  L 
7321   TGCACAGAGA AGGGTGTTCC ATGGCGTTGC CAAGAACCCT 
         A  Q   R  R  V   F  H   G  V  A   K  N  P 
7361   GTGGTTGATG GGAATCCAAC AGTTGACATT GAGGAAGCTC 
        V  V  D  G   N  P  T   V  D  I   E  E  A 
7401   CTGAAATGCC TGCCCTTTAT GAGAAGAAAC TGGCTCTATA 
       P  E  M  P   A  L  Y   E  K  K  L   A  L  Y 
7441   TCTCCTTCTT GCTCTCAGCC TAGCTTCTGT TGCCATGTGC 
          L  L  L   A  L  S  L   A  S  V  A  M  C
        Chimerivax WN02M66变体
                     [链]
7481    AGAACGCCCT TTTCATTGGC TGAAGGCATT GTCCTAGCAT 
         R  T  P  F   S  L  A   E  G  I   V  L  A 
7521    CAGCTGCCTT AGGGCCGCTC ATAGAGGGAA ACACCAGCCT 
        S  A  A  L   G  P  L   I  E  G  N  T  S  L 
7561    TCTTTGGAAT GGACCCATGG CTGTCTCCAT GACAGGAGTC 
          L  W  N  G  P  M  A   V  S  M   T  G  V 
7601    ATGAGGGGGA ATCACTATGC TTTTGTGGGA GTCATGTACA 
         M  R  G  N   H  Y  A   F  V  G   V  M  Y 
7641    ATCTATGGAA GATGAAAACT GGACGCCGGG GGAGCGCGAA 
         N  L  W  K   M  K  T   G  R  R   G  S  A  N 
7681    TGGAAAAACT TTGGGTGAAG TCTGGAAGAG GGAACTGAAT 
          G  K  T   L  G  E  V   W  K  R   E  L  N 
7721    CTGTTGGACA AGCCACAGTT TGAGTTGTAT AAAAGGACCG 
          L  L  D  K  R  Q  F   E  L  Y   K  R  T 
7761    ACATTGTGGA GGTGGATCGT GATACGGCAC GCAGGCATTT 
        D  I  V  E  V  D  R    D  T  A  R   R  H  L 
7801    GGCCGAACGG AACGTGGACA CCGGGGTGGC GGTCTCCAGG 
          A  E  G   K  V  D  T  G  V  A   V  S  R 
7841    GGGACCGCAA AGTTAAGGTG GTTCCATGAG CGTGGCTATG 
         G  T  A  K   L  R  W   F   H  E   R  G  Y 
7881    TCAAGCTGGA AGGTAGGGTG ATTGACCTGG GGTGTGGCCG 
        V  K  L  E   G  R  V  I  D   L  G   C  G  R 
7921    CGGAGGCTGG TGTTACTACG CTGCTGCGCA AAAGGAAGTG 
          G  G  W  C   Y  Y  A  A  A  Q   K  E  V 
7961    AGTGGGGTCA AAGGATTTAC TCTTGGAAGA GACGGCCATG 
         S  G  V  K  G  F  T    L  G  R   D  G  H 
8001    AGAAACCCAT GAATGTGCAA AGICIGGGAT GGAACATCAT 
        E  K  P  M   N  V  Q   S  L  G  W  N  I  I 
8041    CACCTTCAAG GACAAAACTG ATATCCACCG CCTAGAACCA 
          T  F  K   D  K  T  D   I  H  R   L  E  P 
8081    GTGAAATGTG ACACCCTTTT GTGTGACATT GGAGAGTCAT 
         V  K  C  D   T  L  L   C  D  I   G  E  S 
8121    CATCGTCATC GGTCACAGAG GGGGAAAGGA CCGTGAGAGT 
        S  S  S  S   V  T  E   G  E  R  T   V  R  V
            Chimerivax WN02M66变体
                         [链]
8161   TCTTGATACT GTAGAAAAAT GGCTGGCTTG TGGGGTTGAC 
         L  D  T   V  E  K  W   L  A  C   G  V  D 
8201   AACTTCTGTG TGAAGGTGTT AGCTCCATAC ATGCCAGATG 
        N  F  C  V   K  V  L   A  P  Y   M  P  D 
8241   TTCTTGAGAA ACTGGAATTG CTCCAAAGGA GGTTTGGCGG 
       V  L  E  K   L  E  L  L  Q  R  R   F  G  G 
8281   AACAGTGATC AGGAACCCTC TCTCCAGGAA TTCCACTCAT 
         T  V  I   R  N  P  L   S  R  N   S  T  H 
8321   GAAATGTACT ACGTGTCTGG AGCCCGCAGC AATGTCACAT 
        E  M  Y  Y   V  S  G   A  R  S   N  V  T 
8361   TTACTGTGAA CCAAACATCC CGCCTCCTGA TGAGGAGAAT 
       F  T  V  N   Q  T  S   R  L  L  M   R  R  M 
8401   GAGGCGTCCA ACTGGAAAAG TGACCCTGGA GGCTGACGTC 
         R  R  P   T  G  K  V   T  L  E  A  D  V 
8441   ATCCTCCCAA TTGGGACACG CAGTGTTGAG ACAGACAAGG 
        I  L  P  I   G  T  R  S  V   E   T  D  K 
8481   GACCCCTGGA CAAAGAGGCC ATAGAAGAAA GGGTTGAGAG 
       G  P  L D    K  E   A  I  E  E  R  V  E  R 
8521   GATAAAATCT GAGTACATGA CCTCTTGGTT TTATGACAAT 
         I  K  S   E  Y  M  T  S  W  F   Y  D  N 
8561   GACAACCCCT ACAGGACCTG GCACTACTGT GGCTCCTATG 
        D  N  P  Y   R  T  W   H  Y  C   G  S  Y 
8601   TCACAAAAAC CTCCGGAAGT GCGGCGAGCA TGGTAAATGG 
       V  T  K  T   S  G  S   A  A  S  M   V  N  G 
8641   TGTTATTAAA ATTCTGACAT ATCCATGGGA CAGGATAGAG 
         V  I  K  I  L  T  Y   P  W  D   R  I  E 
8681   GAGGTCACAA GAATGGCAAT GACTGACACA ACCCCTTTTG 
        E  V  T  R   M  A  M   T  D  T   T  P   F 
8721   GACAGCAAAG AGTGTTTAAA GAAAAAGTTG ACACCAGAGC 
       G  Q  Q  R   V  F  K   E  K  V  D   T  R  A 
8761   AAAGGATCCA CCAGCGGGAA CTAGGAAGAT CATGAAAGTT 
         K  D  P   P  A  G  T   R  K  I   M  K  V 
8801   GTCAACAGGT GGCTGTTCCG CCACCTGGCC AGAGAAAAGA 
        V  N  R  W   L  F  R   H  L  A  R  E  K
      Chimerivax WN02M66变体
                   [链]
8841   ACCCCAGACT GTGCACAAAG GAAGAATTTA TTGCAAAAGT 
       N  P  R  L   C  T  K  E  E   F  I   A  K  V 
8881   CCGAAGTCAT GCAGCCATTG GAGCTTACCT GGAAGAACAA 
         R  S  H   A  A  I  G   A  Y  L   E  E  Q 
8921   GAACAGTGGA AGACTGCCAA TGAGGCTGTC CAAGACCCAA 
        E  Q  W  K   T  A  N   E  A  V   Q  D  P 
8961   AGTTCTGGGA ACTGGTGGAT GAAGAAAGGA AGCTGCACCA 
       K  F  W  E   L  V  D   E  E  R  K   L  H  Q 
9001   ACAAGGCAGG TGTCGGACTT GTGTGTACAA CATGATGGGG 
         Q  G  R   C  R  T  C   V  Y  N   M  M  G 
9041   AAAAGAGAGA AGAAGCTGIC AGAGTTTGGG AAAGCAAAGG 
        K  R  E  K   K  L  S   E  F  G   K  A  K 
9081   GAAGCCGTGC CATATGGTAT ATGTGGCTGG GAGCGCGGTA 
       G  S  R  A   I  W  Y   M  W  L  G   A  R  Y 
9121   TCTTGAGTTT GAGGCCCTGG GATTCCTGAA TGAGGACCAT 
         L  E  F   E  A  L  G   F  L  N   E  D  H 
9161   TGGGCTTCCA GGGAAAACTC AGGAGGAGGA GTGGAAGGCA 
        W  A  S  R   E  N  S   G  G  G   V  E  G 
9201   TTGGCTTACA ATACCTAGGA TATGTGATCA GAGACCTGGC 
       I  G  L  Q   Y  L  G   Y  V  I  R   D  L  A 
9241   TGCAATGGAT GGTGGTGGAT TCTACGCGGA TGACACCGCT 
         A  M  D   G  G  G  F   Y  A  D   D  T  A 
9281   GGATGGGACA CGCGCATCAC AGAGGCAGAC CTTGATGATG 
        G  W  D  T   R  I  T   E  A  D   L  D  D 
9321   AACAGGAGAT CTTGAACTAC ATGAGCCCAC ATCACAAAAA 
       E  Q  E  I  L  N  Y   M  S   P  H   H  K  K 
9362   ACTGGCACAA GCAGTGATGG AAATGACATA CAAGAACAAA 
         L  A  Q   A  V  M  E   M  T  Y   K  N  K 
9401   GTGGTGAAAG TGTTGAGACC AGCCCCAGGA GGGAAAGCCT 
        V  V  K  V   L  R  P   A  P  G   G  K  A 
9441   ACATGGATGT CATAAGTCGA CGAGACCAGA GAGGATCCGG 
       Y  M  D  V   I  S  R   R  D  Q  R   G  S  G 
9481   GCAGGTAGTG ACTTATGCTC TGAACACCAT CACCAACTTG 
         Q  V  V   T  Y  A  L   N  T  I   T  N  L
          Chimerivax WN02M66变体
                       [链]
9521   AAAGTCCAAT TGATCAGAAT GGCAGAAGCA GAGATGGTGA 
        K  V  Q  L   I  R  M   A  E  A   E  M  V 
9561   TACATCACCA ACATGTTCAA GATTGTGATG AATCAGTTCT 
       I  H  H  Q   H  V  Q   D  C  D  E  S   V  L 
9601   GACCAGGCTG GAGGCATGGC TCACTGAGCA CGGATGTGAC 
         T  R  L  E   A  W   L  T  E  H   G  C  D 
9641   AGACTGAAGA GGATGGCCGT GAGTGGAGAC GACTGTGTGG 
        R  L  K  R   M  A  V   S  G  D   D  C  V 
9681   TCCGGCCCAT CGATGACAGG TTCGGCCTGG CCCTGTCCCA 
       V  R  P  I   D  D  R   F  G  L  A   L  S  H 
9721   TCTCAACGCC ATGTCCAAGG TTAGAAAGGA CATATCTGAA 
         L  N  A   M  S  K  V   R  K  D   I  S  E 
9761   TGGCAGCCAT CAAAAGGGTG GAATGATTGG GAGAATGTGC 
        W  Q  P  S   K  G  W  N   D  W   E  N  V 
9801   CCTTCTGTTC CCACCACTTC CATGAACTAC AGCTGAAGGA 
       P  F  C  S   H  H  F   H  E  L  Q  L  K  D 
9841   TGGCAGGAGG ATTGTGGTGC CTTGCCGAGA ACAGGACGAG 
          G  R  R  I  V  V  P   C  R  E  Q  D  E 
9881   CTCATTGGGA GAGGAAGGGT GTCTCCAGGA AACGGCTGGA 
        L  I  G  R   G  R  V   S  P  G   N  G  W 
9921   TGATCAAGGA AACAGCTTGC CTCAGCAAAG CCTATGCCAA 
       M  I  K  E   T  A  C   L  S  K  A   Y  A  N 
9961   CATGTGGTCA CTGATGTATT TTCACAAAAG GGAGATGAGG 
         M  W  S   L  M  Y  F   H  K  R   D  M  R 
10001  CTACTGTCAT TGGCTGTTTC CTCAGCTGTT CCCACCTCAT 
        L  L  S  L   A  V  S   S  A  V   P  T  S 
10041  GGGTTCCACA AGGACGCACA ACATGGTCGA TTCATGGGAA 
       W  V  P  Q   G  R  T   T  W  S  I   H  G  K 
10081  AGGGCAGTCG ATGACCACGG AAGACATGCT TGAGGTGTGG 
         G  E  W   M  T  T  E   D  M  L   E  V  W 
10121  AACAGAGTAT GGATAACCAA CAACCCACAC ATGCAGGACA 
        N  R  V  W   I  T  N   N  P  H   M  Q  D 
10161  AGACAATGGT GAAAAAATGG AGAGATGTCC CTTATCTAAC 
       K  T  M  V   K  K  W   R  D  V  P   Y  L  T
         Chimerivax WN02M66变体
                      [链]
10201  CAAGAGACAA GACAAGCTGT GCGGATCACT GATTGGAATG 
          K  R  Q  D  K  L  C   G  S  L  I   G  M 
10241  ACCAATAGGG CCACCTGGGC CTCCCACATC CATTTAGTCA 
        T  N  R  A   T  W  A   S  H  I   H  L  V 
10281  TCCATCGTAT CCGAACGCTG ATTGGACAGG AGAAATACAC 
       I  H  R  I   R  T  L  I   G  Q  E   K  Y  T 
10321  TGACTACCTA ACAGTCATGG ACAGGTATTC TGTGGATGCT 
         D  Y  L  T  V  M  D  R  Y  S  V  D  A 
10361  GACCTGCAAC TGGGTGAGCT TATCTGAAAC ACCATCTAAC 
        D  L  Q  L   G  E  L   I 
10401  AGGAATAACC GGGATACAAA CCACGGGTGG AGAACCGGAC 
10441  TCCCCACAAC CTGAAACCGG GATATAAACC ACGGCTGGAG 
10481  AACCGGACTC CGCACTTAAA ATAAAACAGA AACCGGGATA 
10521  AAAACTACGG ATGGAGAACC GGACTCCACA CATTGAGACA 
10561  GAAGAAGTTG TCAGCCCAGA ACCCCACACG AGTTTTGCCA 
10601  CTGCTAAGCT GTGAGGCAGT GCAGGCTGGG ACAGCCGACC 
10641  TCCAGGTTGC GAAAAACCTG GTTTCTGGGA CCTCCCACCC 
10681  CAGAGTAAAA AGAACGGAGC CTCCGCTACC ACCCTCCCAC 
10721  GTGGTGGTAG AAAGACGGGG TCTAGAGGTT AGAGGAGACC 
10761  CTCCAGGGAA CAAATAGTGG GACCATATTG ACGCCAGGGA 
10801  AAGACCGGAG TGGTTCTCTG CTTTTCCTCC AGAGGTCTGT 
10841  GAGCACAGTT TGCTCAAGAA TAAGCAGACC TTTGGATGAC 
10881  AAACACAAAA CCACAA
###DNA StriderTM13f7 ###
WN02x M66变体DNA比对
DNA序列  10896  bp  *G TAAATCCTGT...ACAAAACCACAA   linear SEQ ID NOS:36与37
DNA序列  10896  bp  *G TAAATCCTGT...ACAAAACCACAA  linear SEQ ID NOS:36与37
Layout:               Compacted 
Metbod:               Blooks(Martimez) 
Mismatch penalty:     Smaller(1) 
Gap penalty:          Mediom(2) 
Translation:        Off    SEQ ID NOS:24与38 
1    *G TAAATCCTGTGTGCTAATTGAGGTGCATTGGTCTGCAAATCGAGTTGCTAGGCAATAAACACATTTGGATTAATTTTA  80 
1    ................................................................................  80 
81   ATCGTTCGTTGAGCGATTAGCAGAGAACTGACCAGACATGTCTGGTCGTAAAGCTCAGGGAAAAACCCTGGGCGTCAAT   160 
81   ................................................................................  160 
161  ATCGTACGACGAGGAGTTCGCTCCTTGTCAAACAAAATAAAACAAAAAACAAAACAAATTGGAAACAGACCTGGACCTTC  240 
161  ................................................................................  240 
241  AAGAGGTTGTCAAGGAATTTATCTTTTTCTTTTTGTTCAACATTTTGACTGGAAAAAAGATCACAGCCCACCTAAAGAGGT 320 
241  ................................................................................  320 
321  TGTGGAAAATGCTGGGACCCAAGACAAGGCTTGGCTGTTCTAAGGAAAGTCAAGAGAGTGGTGGCCAGTTTGATGAGAGGA 400 
321  ................................................................................  400 
401  TTGTCCTCAAGGAAACGCCGTTCCCATGATGTTCTGACTGTGCAATTCCTAATTTTGGGAATGCTGTTGATGACGGTGG   480 
401  ................................................................................  480 
481  AGTTACCCTCTCTAACTTCCAAGGGAAGGTGATGATGACGGTAAATGCTACTGAGTCACAGATGTCATCACGATTCCAA   560 
481  ................................................................................  560 
561  CAGCTGCTGGAAAGAACCTATGCATTGTCAGAGCAATGGATGTGGGATACATGTGCGATGATACTATCACTTATGAATGC  640 
561  ................................................................................  640 
641  CCAGTGCTGTCGGCTGGTAATGATCCAGAAGACATCGACTGTTGGTGCACAAAGTCAGCAGTCTACGTCAGGTATGGAAG  720 
641  ................................................................................  720 
721  ATGCACCAAGACACGCCACTCAGACGCAGTCGGAGGTCACTGACAGTGCAGACACACGGAGAAAGCACTCTAGCGAACA   800 
721  ................................................................................  800 
801  AGAAGGGGGCTTGGATGGACAGCACCAAGGCCACAAGGTATTTGGTAAAAACAGAATCATGGATCTTGAGGAACCCTGGA  880 
801  ................................................................................  880 
881  TATGCCCTGGTGGCAGCCGTCATTGGTTGGATGCTTGGGAGCAACACCATGCAGAGAGTTGTHTTTGTCGTGCTATTGCT  960 
881  .........................................................................C......  960 
961  TTTGGTGGCCCCAGCTTACAGCTTCAACTGCCTTGGAATGAGCAACAGAGACTTCTTGGAAGGAGTGTCGGAGCAACAT   1040 
961  ................................................................................  1040 
1041 GGGTGGATTTGGTTCTCGAAGGCGACAGCTGCGTGACTATCATGTCTAAGGACAAGCCTACCATCGACGTCAAGATGATG  1120 
1041 ................................................................................  1120 
1121 AATATGGAGGCGGCCAACCTGGCAGAGGTCCGCAGTTATTGCTATTTGGCTACCGTCAGCGATCTCTCCACCAAAGCTGC  1200 
1121 ...............................................................................   1200 
1201 ATGCCCGACCATGGGAGAAGCTCACAATGACAAACGTGCTGACCCAGTTTTGTGTGCAGACAAGGAGTGGTGGACAGGG   1280 
1201 ...............................................................................   1280 
1281 GCTGGGCAACGGCTGCGGATTTTTTGGCAAAGGATCCATTGACACATGCGCCAAATTTGCCTGCTCTACCAAGGCAATA   1360 
1281 ...............................................................................   1360 
1361 GGAAGAACCATCTTGAAAGAGAATATCAAGTACGAAGTGGCCATTTTTGTCCATGGACCACTACTGTGGAGTCGCACGG   1440 
1361 ...............................................................................   1440
WN02xM66变体DNA比对
1441   AAATTACTCCACACAGGTTGGAGCCACTCAGGCCGGCCGATTCAGCATCACTCCTGCTGCGCCTTCATACACACTAAAGC   1520 
1441   ................................................................................   1520 
1521   TTGGAGAATATGGAGAGGTGACAGTGGACTGTGAACCACGGTCAGGGATTGACACCAATGCATACTACGTGATGACTGTT   1600 
1521   ................................................................................   1600 
1601   GGAACAAAGACGTTCTTGGTCCATCGTGAGTGGTTCATGGACCTCAACCTCCCTTGGAGCAGTGCTGGAAGTACTGTGTG   1680 
1601   ................................................................................   1680 
1681   GAGGAACAGAGAGACGTTAATGGAGTTTGAGGAACCACACGCCACGAAGCAGTCTGTGATAGCATTGGGCTCACAAGAGG   1760 
1681   ................................................................................   1760 
1761   GAGCTCTGCATCAAGCTTTGGCTGGAGCCATTCCTGTGGAATTTTCAAGCAACACTGTCAAGTTGACGTCGGGTCATTTG   1840 
1761   ................................................................................   1840 
1841   AAGTGTAGAGTGAAGATGGAAAAATTGCAGTTGAAGGGAACAACCTATGGCGTCTGTTCAAAGGCTTTCAAGTTTCTTAG   1920 
1841   ................................................................................   1920 
1921   GACTCCCGTGGACACCGGTCACGGCACTGTGGTGTTGGAATTGCAGTACACTGGCACGGATGGACCTTGCAAAGTTCCTA   2000 
1921   ................................................................................   2000 
2001   TCTCGTCAGTGGCTTCATTGAACGACCTAACGCCAGTGGGCAGATTGGTCACTGTCAACCCTTTTGTTTCAGTGGCCACG   2080 
2001   ................................................................................   2080 
2081   GCCAACGCTAAGGTCCTGATTGAATTGGAACCACCCTTTGGAGACTCATACATAGTGGTGGGCAGAGGAGAACAACAGAT   2160 
2081   ................................................................................   2160 
2161   CAATCACCATTGGCACAAGTCTGGAAGCAGCATTGGCAAAGCCTTTACAACCACCCTCAAAGGAGCGCAGAGACTAGCCG   2240 
2161   ................................................................................   2240 
2241   CTCTAGGAGACACAGCTTGGGACTTTGGATCAGTTGGAGGGGTGTTCACTAGTGTTGGGCGGGCTGTCCATCAAGTGTTC   2320 
2241   ................................................................................   2320 
2321   GGAGGAGCATTCCGCTCACTGTTCGGAGGCATGTCCTGGATAACGCAAGGATTGCTGGGGGCTCTCCTGTTGTGGATGGG   2400 
2321   ................................................................................   2400 
2401   CATCAATGCTCGTGATAGGTCCATAGCTCTCACGTTTCTCGCAGTTGGAGGAGTTCTGCTCTTCCTCTCCGTGAACGTGG   2480 
2401   ................................................................................   2480 
2481   GCGCCGATCAAGGATGCGCCATCAACTTTGGCAAGAGAGAGCTCAAGTGCGGAGATGGTATCTTCATATTTAGAGACTCT   2560 
2481   ................................................................................   2560 
2561   GATGACTGGCTGAACAAGTACTCATACTATCCAGAAGATCCTGTGAAGCTTGCATCAATAGTGAAAGCCTCTTTTGAAGA   2640 
2561   ................................................................................   2640 
2641   AGGGAAGTGTGGCCTAAATTCAGTTGACTCCTTGAGCATGAGATGTGGAGAAGCAAGGGCAGATGAGATCAATGCCATTT   2720 
2641   ................................................................................   2720 
2721   TTGAGGAAAACGAGGTGGACATTTCTGTTGTCGTGGAGGATCCAAAGAATGTTTACCAGAGAGGAACTCATCCATTTTCC   2800 
2721   ................................................................................   2800 
2801   AGAATTCGGGATGGTCTGCAGTATGGTTGGAAGACTTGGGGTAAGAACCTTGTGTTCTCCCCAGGGAGGAAGAATGGAAG   2880 
2801   ................................................................................   2880 
2881   CTTCATCATAAGATGGAAAGTCCAGGAAAGAATGCCCGTTTTCAAACCGGGTCTGGAATTCTTTCCAGATAGAGGAGTTG   2960 
2881   ................................................................................   2960 
2961   GGACGGGAGTGTTCACCACACGCGTGTACATGGACCCAGTCTTTGAATACACCATAGACTGCGATGGATCTATCTTGGGT   3040 
2961   ................................................................................   3040 
3041   GCAGCGGTGAACGGAAAAAAGAGTGCCCATGGCTCTCCAACATTTTGGATGGGAAGTCATGAAGTAAATGGGACATGGAT   3120 
3041   ................................................................................   3120 
3121   GATCCACACCTTGGAGGCATTAGATTACAAGGAGTGTGAGTGGCCACTGACACATACGATTGGAACATCAGTTGAAGAGA   3200 
3121   ................................................................................   3200
WN02x M66变体DNA比对
3201   GTGAAATGTTCATGCCGAGATCAATCGGAGGCCCAGTTAGCTCTCACAATCATATCCCTGGATACAAGGTTCAGACGAAC   3280 
3201   ................................................................................   3280 
32B1   GGACCTTGGATGCAGGTACCACTAGAAGTGAAGAGAGAAGCTTGCCCAGGGACTAGCGTGATCATTGATGGCAACTGTGA   3360 
281    ................................................................................   3360 
3361   TGGACGGGGAAAATCAACCAGATCCACCACGGATAGCGGGAAAGTTATTCCTGAATGGTGTTGCCGCTCCTGCACAATGC   3440 
3361   ................................................................................   3440 
3441   CGCCTGTGAGCTTCCATGGTAGTGATGGGTGTTGGTATCCCATGGAAATTAGGCCAAGGAAAACGCATGAAAGCCATCTG   3520 
3441   ................................................................................   3520 
3521   GTGCGCTCCTGGGTTACACCTGGAGAAATACATGCTGTCCCTTTTGGTTTGGTGAGCATGATGATAGCAATGGAAGTGGT   3600 
3521   ................................................................................   3600 
3601   CCTAAGGAAAAGACAGGGACCAAAGCAAATGTTGGTTGGAGGAGTAGTGCTCTTGGGAGCAATGCTGGTCGGGCAAGTAA   3680 
3601   ................................................................................   3680 
36B1   CTCTCCCTTGATTTGCTGAAACTCACAGTGGCTGTGGGATTGCATTCCATGAGATGAACAATGGAGGAGACGCCATGTAT   3760 
3681   ................................................................................   3760 
3761   ATGGCGTTGATTGCTGCCTTTTCAATCAGACCAGGGCTGCTCATCGGCTTTGGGCTCAGGACCCTATGGAGCCCTCGGGA   3840 
3761   ................................................................................   3840 
3841   ACGCCTTGTGCTGACCCTAGGAGCAGCCATGGTGGAGATTGCCTTGGGTGGCGTGATGGGCGGCCTGTGGAAGTATCTAA   3920 
3841   ................................................................................   3920 
3921   ATGCAGTTTCTCTCTGCATCCTGACAATAAATGCTGTTGCTTCTAGGAAAGCATCAAATACCATCTTGCCCCTCATGGCT   4000 
3921   ................................................................................   4000 
4001   CTGTTGACACCTGGTCACTATGGCTGAGGTTGAGCTGCCGCAATGTTCTTTTGTGCCATGGTTATCATAGGGTTCCTTCA   4080 
4001   .................................................................................  4080 
4081   CCAGAATTTCAAGGACACCTCCATGCAGAAGACTATACCTCTGGTGGCCCTCACACTCACATCTTACCTGGGCTTGACAC   4160 
4081   ................................................................................   4160 
4161   AACCTTTTTTGGGCCTGTGTGCATTTCTGGCAACCGCATATTTGGGCGAAGGAGTATCCCAGTGAATGAAGGCACTCGCA   4240 
4161   ................................................................................   4240 
4241   GCAGCTGGTCTAGTGGGAGTGCTGGCAGGACTGGCTTTTCAGGAGATGGAGAACTTCCTTGGTCCGATTGCAGTTGGAGG   4320 
4241   ................................................................................   4320 
4321   ACTCCTGATGATGCTGGTTAGCGTGGCTGGGAGGGTGGATGGGCTAGAGCTCAAGAAGCTTGGTGAAGTTTCATGGGAAG   4400 
4321   ................................................................................   4400 
4401   AGGAGGCGGAGATCAGCGGGAGTTCCGCCCGCTATGATGTGGCACTCAGTGAACAAGGGGAGTTCAAGCTGCTTTCTGAA   4480 
4401   ................................................................................   4480 
4481   GAGAAAGTGCCATGGGACCAGGTTGTGATGACCTCGCTGGCCTTGGTTGGGGCTGCCCTCCATCCATTTGCTCTTCTGCT   4560 
4481   ................................................................................   4560 
4561   GGTCCTTGCTGGGTGGCTGTTTCATGTCAGGGGAGCTAGGAGAAGTGGGGATGTCTTGTGGGATATTCCCACTCCTAAGA   4640 
4561   ................................................................................   4640 
4641   TCATCGAGGAATGTGAACATCTGGAGGATGGGATTTATGGCATATTCCAGTCAACCTTCTTGGGGGCCTCCCAGCGAGGA   4720 
4641   ................................................................................   4720 
4721   GTGGGAGTGGCACAGGGAGGGGTGTTCCACACAATGTGGCATGTCACAAGAGGAGCTTTCCTTGTCAGGAATGGCAAGAA   4800 
4721   ................................................................................   4800 
4801   GTTGATTCCATCTTGGGCTTCAGTAAAGGAAGACCTTGTCGCCTATGGTGGCTCATGGAAGTTGGAAGGCAGATGGGGATG  4880 
4801   ................................................................................   4880 
4881   GAGAGGAAGAGGTCCAGTTGATCGCGGCTGTTCCAGGAAAGAACGTGGTCAACGTCCAGACAAAACCGAGCTTGTTCAAA   4960 
4881   ................................................................................   4960
WN02x M66变体DNA比对
4961    GTGAGGAATGGGGGAGAAATCGGGGCTGTCGCTCTTGACTATCCGAGTGGCACTTCAGGATCTCCTATTGTTAACAGGAA   5040 
4961    ................................................................................   5040 
5041    CGGAGAGGTGATTGGGCTGTACGGCAATGGCATCCTTGTCGGTGACAACTCCTTCGTGTCCGCCATATCCCAGACTGAGG   5120 
5041    ................................................................................   5120 
5122    TGAAGGAAGAAGGAAAGGAGGAGCTCCAAGAGATCCCGACAATGCTAAAGAAAGGAATGACAACTGTCCTTGATTTTCGT   5200 
5121    ................................................................................   5200 
5201    CCTGGAGCTGGGAAGACAAGACGTTTCCTCCCACAGATCTTGGCCGAGTGCGCACGGAGACGCTTGCGCACTCTTGTGTT   5280 
5201    ...............................................................................    5280 
5281    GGCCCCCACCAGGGTTGTTCTTTCTGAAATGAAGGAGGCTTTTCACGGCCTGGACGTGAAATTCCACACACAGGCTTTTT   5360 
5281    ................................................................................   5360 
5361    CCGCTCACGGCAGCGGGAGAGAAGTCATTTGATGCCATGTGCCATGCCACCCTAACTTACAGATGTTGGAACCAACTAGG   5440 
5361    ................................................................................   5440 
5441    GTTGTTAACTGGGAAGTGATCATTATGGATGAAGCCCATTTTTTGGATCCAGCCAGCATAGCCGCTAGAGGTTGGGCAGC   5520 
5441    ................................................................................   5520 
5521    GCACAGAGCTAGGGCAAATGAAAGTGCAACAATCTTGATGACAGCCACACCGCCTGGGACTAGTGATGAATTTCCACATT   5600 
5521    ................................................................................   5600 
5601    CAAATGGTGAAATAGAAGATGTTCAAACGGACATACCCAGTGAGCCCTGGAACACAGGGCATGACTGCATCCTGGCTGAC   5680 
5601    ................................................................................   5680 
5681    AAAAGGCCCACGGCATGGTTCCTTCCATCCATCAGAGCTGCAAATGTCATGGCTGCCTCTTTGCGTAAGGCTGGAAAGAG   5760 
5681    ................................................................................   5760 
5761    TGTGGTGGTCCTGAACAGGAAAACCTTTGAGAGAGAATACCCCACGATAAAGCAGAAGAAACCTGACTTTATATTGGCCA   5840 
5761    ................................................................................   5840 
5841    CTGACATAAGCTGAAATGGGAGCCAACCTTTGCGTGGAGCGAGTGCTGGATTGCAGGACGCTTTTAAGCCTGTGCTTGTG   5920 
5841    ................................................................................   5920 
5921    GATGAAGGGAGGAAGGTGGCAATAAAAGGGCCACTTCGTATCTCCGCATCCTCTGCTGCTCAAAGGAGGGGGCGCATTGG   6000 
5921    ................................................................................   6000 
6001    GAGAAATCCCAACAGAGATGGAGACTCATACTACTATTCTGAGCCTACAAGTGAAAATAATGCCCAACCAGTCTGCTGGT   6080 
6001    ................................................................................   6080 
6081    TGGAGGCCTCAATGCTCTTGGACAACATGGAGGTGAGGGGTGGAATGGTCGCCCCACTCTATGGCGTTGAAGGAACTAAA   6160 
6081    ................................................................................   6160 
6161    ACACCAGTTTCCCCTGGTGAAATGAGACTGAGGGACGACCAGAGGAAAGTCTTCAGAGAACTAGTGAGGAATTGTGACCT   6240 
6161    ................................................................................   6240 
6241    GCCCGTTTGGCTTTCGTGGCAAGTGGCCAAGGCTGGTTTGAAGACGAATGATCGTAAGTGGTGTTTTGAAGGCCCTGAGG   6320 
6241    ................................................................................   6320 
6321    AACATGAGATCTTGAATGACAGCGGTGAAACAGTGAAGTGCAGGGCTCCTGGAGGAGCAAAGAAGCCTCTGCGCCCAAGG   6400 
6321    ................................................................................   6400 
6401    TGGTGTGATGAAAGGGTGTCATCTGACCAGAGTGCGCTGTCTGAATTTATTAAGTTTGCTGAAGGTAGGAGGGGAGCTGC   6480 
5401    ................................................................................   6480 
6481    TGAAGTGCTAGTTGTGCTGAGTGAACTCCTGATTTCCTGGCTAAAAAAGGTGGAGAGGCAAATGGATACCATCAGTGTGT   6560 
6481    ................................................................................   6560 
6561    TCCTCCACTCTGAGGAAGGCTCTAGGGCTTACCGCAATGCACTATCAATGATGCCTGAGGCAATGACAATAGTCATGCTG   6640 
6561    ................................................................................   6640 
6641    TTTATACTGGCTGGACTACTGACATCGGGAATGGTCATCTTTTTCATGTCTCCCAAAGGCATCAGTAGAATGTCTATGGC   6720 
6641................................................................................       6720
WN02x M66变体DNA比对
6721  GATGGGCACAATGGCCGGCTGTGGATATCTCATGTTCCTTGGAGGCGTCAAACCCACTCACATCTCCTATGTCATGCTCA  6800 
6721  ................................................................................  6800 
6801  TATTCTTTGTCCTGATGGTGGTTGTGATCCCCGAGCCAGGGCAACAAAGGTCCATCCAAGACAACCAAGTGGCATACCTC  6880 
6801  ................................................................................  6880 
6881  ATTATTGGCATCCTGACGCTGGTTTCAGCGGTGGCAGCCAACGAGCTAGGCATGCTGGAGAAAACCAAAGAGGACCTCTT  6960 
6881  ................................................................................  6960 
6961  TGGGAAGAAGAACTTAATTCCATCTAGTGCTTCACCCTGGAGTTGGCCGGATCTTGACCTGAAGCCAGGAGCTGCCTGGA  7040 
6961  ................................................................................  7040 
7041  CAGTGTACGTTGGCATTGTTACAATGCTCTCTCCAATGTTGCACCACTGGATCAAAGTCGAATATGGCAACCTGTCTCTG  7120 
7041  ................................................................................  7120 
7121  TCTGGAATAGCCCAGTCAGCCTCAGTCCTTTCTTTCATGGACAAGGGGATACCATTCATGAAGATGAATATCTCGGTCAT  7200 
7121  ................................................................................  7200 
7201  AATGCTGCTGGTCAGTGGCTGGAATTCAATAACAGTGATGCCTCTGCTCTGTGGCATAGGGTGCGCCATGCTCCACTGGT  7280 
7201  ................................................................................  7280 
7281  CTCTCATTTTACCTGGAATCAAAGCGCAGCAGTCAAAGCTTGCACAGAGAAGGGTGTTCCATGGCGTTGCCAAGAACCCT  7360 
7281  ................................................................................  7360 
7361  GTGGTTGATGGGAATCCAACAGTTGACATTGAGGAAGCTCCTGAAATGCCTGCCCTTTATGAGAAGAAACTGGCTCTATA  7440 
7361  ................................................................................  7440 
7441  TCTCCTTCTTGCTCTCAGCCTAGCTTCTGTTGCCATGTGCAGAACGCCCTTTTCATTGGCTGAAGGCATTGTCCTAGCAT  7520 
7441  ................................................................................  7520 
7521  CAGCTTGCCTTAGGGCCGCTCATAGAGGGAAACACCAGCCTTCTTTGGAATGGACCATGGCTGTCTCCATGACAGGAGTC  7600 
7521  ................................................................................  7600 
7601  ATGAGGGGGAATCACTATGCTTTTGTGGGAGTCATGTACAATCTATGGAAGATGAAAACTGGACGCCGGGGGAGCGCGAA  7680 
7601  ................................................................................  7680 
7681  TGGAAAACTTTGGGTGAAGTCTGGAAGAGGGAACTGAATCTGTTGGACAAGCTGACAGTTTGCAGTTGTATAAAGGACCG  7760 
7681  ................................................................................  7760 
7761  ACATTGTGGAGGTGGATCGTGATACGGCACGCAGGCATTTGGCCGAAGGGAAGGTGGACACCGGGGTGGCGGTCTCCAGG  7840 
7761  ................................................................................  7840 
7841  GGGACCGCAAAGTTAAGGTGGTTCCATGAGCGTGGCTATGTCAAGCTGGAAGGTAGGGTGATTGACCTGGGGTGTGGCCG  7920 
7841  ................................................................................  7920 
7921  CGGAGGCTGGTGTTACTACGCTGCTGCGCAAAAGGAAGTGAGTGGGGTCAAAGGATTTACTCTTTGGAGAGACGGCCATG  8000 
7921  ................................................................................  8000 
8001  AGAAACCCATGAATGTGCAAAGTCTGGGATGGAACATCATCACCTTCAAGGACAAAACTGATATCCACCGCCTAGAACCA  8080 
8001  ................................................................................  8080 
8081  GTGAAATGTGACACCCTTTTGTGTGACATTGGAGAGTCATCATCGTCATCGGTCACAGAGGGGGAAAGGACCGTGAGAGT  8160 
8081  ................................................................................  8160 
8161  TCTTGATACTGTAGAAAAATGGCTGGCTTGTGGGGTTGACAACTTCTGTGTGAAGGTGTTAGCTCCATACATGCCAGATG  8240 
8161  ................................................................................  8240 
8241  TTCTTGAGAAACTGGAATTGCTCCAAAGGAGGTTTGGCGGAACAGTGATCAGGAACCCTCTCTCCAGGAATTCCACTCAT  8320 
8241  ................................................................................  8320 
8321  GAAATGTACTACGTGTCTGGAGCCCGCAGCAATGTCACATTTACTGTGAACCAAACATCCCGCCTCCTGATGAGGAGAAT  8400 
8321  ................................................................................  8400 
8401  GAGGCGTCCAACTGGAAAAGTGACCCTGGAGGCTGACGTCATCCTCCCAATTGGGACACGCAGTGTTGAGACAGACAAGG  8480 
8401  ................................................................................  8480
WN02x M66变体CNA比对
8481  GACCCCTGGACAAAGAGGCCATAGAAGAAAGGGTTGAGAGGATAAAATCTGAGTACATGACCTCTTGGTTTTATGACAAT  8560 
8481  ................................................................................  8560 
8561  GACAACCCCTACAGGACCTGGCACTACTGTGGCTCCTATGTCACAAAAACCTCCGGAAGTGCGGCGAGCATGGTAAATGG  8640 
8561  ...............................................................................   8640 
8641  TGT1TATTAAAATTTCCTGACATATCCATGGGACAGGATAGAGGAGGTCACAAGAATGGCAATGACTACAACCCCTTTTG  8720 
8641  ................................................................................  8720 
8721  GACAGCAAAGAGTGTTTAAAGAAAAAGTTGACACCAGAGCAAAGGATCCACCAGCGGGAACTAGGAAGATCATGAAAGTT  8800 
8721  ................................................................................  8800 
8801  GTCAACAGGTGGCTGTTCCGCCACCTGGCCAGAGAAAAGAACCCCAGACTGTGCACAAAGGAAGAATTTATTGCAAAAGT  8880 
8801  ................................................................................  8880 
8881  CCGAAGTCATGCAGCCATTGGAGCTTACCTGGAAGAACAAGAACAGTGGAAGACTGCCAATGAGGCTGTCCAAGACCCAA  8960 
8881  ................................................................................  8960 
8961  AGTTCTGGGAACTGGTGGATGAAGAAAGGAAGCTGCACCAACAAGGCAGGTGTCGGACTTGTGTGTACAACATGATGGGG  9040 
8961  ................................................................................  9040 
9041  AAAAGAGAGAAGAAGCTGTCAGAGTTTGGGAAAGCAAAGGGAAGCCGTGCCATATGGTATATCTGGCTGGGAGCGCGGTA  9120 
9041  ................................................................................  9120 
9121  TCTTGAGTTTGAGGCCCTGGGATTCCTGAATGAGGACCATTGGGCTTCCAGGGAAAACTCAGGAGGAGGAGTGGAAGGCA  9200 
9121  ................................................................................  9200 
9201  TTGGCTTACAATACCTAGGATATGTGATCAGAGACCTGGCTGCAATGGATGGTGGTGGATTCTACGCGGATGACACCGCT  9280 
9201  ................................................................................  9280 
9281  GGATGGGACACGCGCATCACAGAGGCAGACCTTGATGATGAACAGGAGATCTTGAACTACATGAGCCCACATCACAAAAA  9360 
9281  ................................................................................  9350 
9361  ACTGGCACAAGCAGTGATGGAAATGACATACAAGAACAAAGTGGTGAAAGTGTTGAGACCAGCCCCAGGAGGGAAAGCCT  9440 
9361  ................................................................................  9440 
9441  ACATGGATGTCATAAGTCGACGAGACCAGAGAGGATCCGGGCAGGTAGTGACTTATGCTCTGAACACCATCACCAACTTG  9520 
9441  ................................................................................  9520 
9521  AAAGTCCAATTGATCAGAATGGCAGAAGCAGAGATCGTGATACATCACCAACATGTTCAAGATTGTGATGAATCAGTTCT  9600 
9521  ...............................................................................   9600 
9601  GACCAGGCTGGAGGCATGGCTCACTGAGCACGGATGTGACAGACTGAAGAGGATGGCGGTGAGTGGAGACGACTGTGTGG  9680 
9601  ................................................................................  9680 
9681  TCCGGCCCATCGATGACAGGTTCGGCCTGGCCCTGTCCCATCTCAACGCCATGTCCAAGGTTAGAAAGGACATATCTGAA  9760 
9681  ................................................................................  9760 
9761  TGGCAGCCATCAAAAGGGTGGAATGATTGGGAGAATGTGCCCTTCTGTTCCCACCACTTCCATGAACTACAGCTGAAGGA  9840 
9761  ................................................................................  9840 
9841  TGGCAGGAGGATTGTGGTGCCTTGCCGAGAACAGGACGAGCTCATTGGGAGAGGAAGGGTGTCTCCAGGAAACGGCTGGA  9920 
9841  ................................................................................  9920 
9921  TGATCAAGGAAACAGCTTGCCTCAGCAAAGCCTATGCCAACATGTGGTCACTGATGTATTTTCACAAAAGGGACATGAGG  10000 
9921  ................................................................................  10000 
10001 CTACTGTCATTGGCTGTTTCCTCAGCTGTTCCCACCTCATGGGTTCCACAAGGACCCACAACATGGTCGATTCATGGGAA  20080 
10001 ................................................................................  10080 
10081 AGGGGAGTGGATGACCACGGAAGACATGCTTGAGGTGTGGAACAGAGTATGGATAACCAACAACCCACACATGCAGGACA  10160 
10081 ................................................................................  10160 
10161 AGACAATGGTGAAAAAATGGAGAGATGTCCCTTATCTAACCAAGAGACAAGACAAGCTGTGCGGATCACTGATTGGAATG  10240 
10161 ................................................................................  10240
### DNA StriderTM13f7###周四,2004年10月21日3:10:16PM
WN02M Prot.x M66 M Prot.蛋白质比对
蛋白质  序列     75  aa  SLTVQTHGBSTL...VVLLLLVAPAY S SEQ ID NOS:25与26
蛋白质  序列     75  aa  SLTVQTHGKSIL...VVPLLLVAPAY S SEQ ID NOS:25与27
Layout:          Standard
Hetthod:         Singla Block
Blocck Length s:  6-aa
Mismatch Penalty:Smaller(1)
Gap penalty:     Medium(2) SEQ ID NOS:28-30
Weighting;        BLOSOH62 
             .       20         .         40        .       60       . 
1   SLTVQTHGESTLANKKGAWMIDSTKATRYLVKTESWILLRNPGYALAAVIGWMLGSNIMQRVVFVVLLLVAPAYS  75 
    SLTVQTHGESTLANKKGAWMDSTKATRYLVKTESWILRNPGYALVAAVIGWMLGSNTMQRVVFVV LLLVAPAYS 
1   SLTVQTEGESTLANNKKGAWMDSTKATRYLVKTESWILRNPGYALVAAVIGWMLGSNTMQVVFVVPLLLVAPAYS  75 
             .        20         .       40         .       60        . 
%同一性=98.7(74/75)
序列表
<110>阿卡姆比斯股份有限公司(Acambis Inc.)
<120>抗日本脑炎病毒及西尼罗病毒的疫苗
<130>06132/099WO3
<140>PCT/US05/37369
<141>2005-10-19
<150>US 60/718,923
<151>2005-09-19
<150>US 60/674,546
<151>2005-04-25
<150>US 60/674,415
<151>2005-04-24
<150>US 60/620,948
<151>2004-10-21
<150>US 60/620,466
<151>2004-10-20
<160>38
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒(Yellow Fever virus)和西尼罗病毒(West Nile virus)
<400>1
cactgggaga gcttgaaggt c                                              21
<210>2
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和西尼罗病毒
<400>2
aaagccagtt gcagccgcgg tttaa                                          25
<210>3
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和1型登革病毒(Dengue-1 virus)
<400>3
aaggtagact ggtgggctcc c                                              21
<210>4
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和1型登革病毒
<400>4
gatcctcagt accaaccgcg gtttaa                                         26
<210>5
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和2型登革病毒(Dengue-2 virus)
<400>5
aaggtagatt ggtgtgcatt g                                              21
<210>6
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和2型登革病毒
<400>6
aaccctcagt accacccgcg gtttaa                                         26
<210>7
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和3型登革病毒(Dengue-3 virus)
<400>7
aaggtgaatt gaagtgctct a                                              21
<210>8
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和3型登革病毒
<400>8
acccccagca ccacccgcgg tttaa                                          25
<210>9
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和4型登革病毒(Dengue-4 virus)
<400>9
aaaaggaaca gttgttctct a                                              21
<210>10
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和4型登革病毒
<400>10
acccgaagtg tcaaccgcgg tttaa                                          25
<210>11
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和圣路易士脑炎病毒(St.Louis Encephalitis virus)
<400>11
aacgtgaatag ttggatagt c                                              21
<210>12
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和圣路易士脑炎病毒
<400>12
accgttggtc gcacccgcgg tttaa                                          25
<210>13
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和墨累谷脑炎病毒(Murray Valley Encephalitis virus)
<400>13
aatttcgaaa ggtggaaggt c                                              21
<210>14
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和墨累谷脑炎病毒
<400>14
gaccggtgtt tacagccgcg gtttaa                                         26
<210>15
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和蜱传脑炎病毒(Tick-Borne Encephalitis virus)
<400>15
tactgcgaac gacgttgcca c                                              21
<210>16
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和蜱传脑炎病毒
<400>16
actgggaacc tcacccgcgg tttaa                                          25
<210>17
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒
<400>17
ggttagagga gaccct                                                    16
<210>18
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于西尼罗病毒
<400>18
Ser Leu Thr Val Gln Thr His Gly Glu Ser Thr Leu Ala Asn Lys Lys
1               5                   10                  15
Gly Ala Trp Met Asp Ser Thr Lys Ala Thr Arg Tyr Leu Val Lys Thr
            20                  25                  30
Glu Ser Trp Ile Leu Arg Asn
        35
<210>19
<211>36
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于西尼罗病毒
<400>19
Pro Gly Tyr Ala Leu Val Ala Ala Val Ile Gly Trp Met Leu Gly Ser
1               5                   10                  15
Asn Thr Met Gln Arg Val Val Phe Val Val Leu Leu Leu Leu Val Ala
            20                  25                  30
Pro Ala Tyr Ser
        35
<210>20
<211>10896
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和西尼罗病毒
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(1)
<223>n是a,c,g,或t
<220>
<221>CDS
<222>(119)..(10384)
<400>20
ngtaaatcct gtgtgctaat tgaggtgcat tggtctgcaa atcgagttgc taggcaataa    60
acacatttgg attaatttta atcgttcgtt gagcgattag cagagaactg accagaac     118
atg tct ggt cgt aaa gct cag gga aaa acc ctg ggc gtc aat atg gta     166
Met Ser Gly Arg Lys Ala Gln Gly Lys Thr Leu Gly Val Asn Met Val
1               5                   10                  15
cga cga gga gtt cgc tcc ttg tca aac aaa ata aaa caa aaa aca aaa     214
Arg Arg Gly Val Arg Ser Leu Ser Asn Lys Ile Lys Gln Lys Thr Lys
            20                  25                  30
caa att gga aac aga cct gga cct tca aga ggt gtt caa gga ttt atc     262
Gln Ile Gly Asn Arg Pro Gly Pro Ser Arg Gly Val Gln Gly Phe Ile
        35                  40                  45
ttt ttc ttt ttg ttc aac att ttg act gga aaa aag atc aca gcc cac     310
Phe Phe Phe Leu Phe Asn Ile Leu Thr Gly Lys Lys Ile Thr Ala His
    50                  55                  60
cta aag agg ttg tgg aaa atg ctg gac cca aga caa ggc ttg gct gtt     358
Leu Lys Arg Leu Trp Lys Met Leu Asp Pro Arg Gln Gly Leu Ala Val
65                  70                  75                   80
cta agg aaa gtc aag aga gtg gtg gcc agt ttg atg aga gga ttg tcc     406
Leu Arg Lys Val Lys Arg Val Val Ala Ser Leu Met Arg Gly Leu Ser
                85                  90                  95
tca agg aaa cgc cgt tcc cat gat gtt ctg act gtg caa ttc cta att     454
Ser Arg Lys Arg Arg Ser His Asp Val Leu Thr Val Gln Phe Leu Ile
            100                 105                 110
ttg gga atg ctg ttg atg acg ggt gga gtt acc ctc tct aac ttc caa     502
Leu Gly Met Leu Leu Met Thr Gly Gly Val Thr Leu Ser Asn Phe Gln
        115                 120                 125
ggg aag gtg atg atg acg gta aat gct act gac gtc aca gat gtc atc     550
Gly Lys Val Met Met Thr Val Asn Ala Thr Asp Val Thr Asp Val Ile
    130                 135                 140
acg att cca aca gct gct gga aag aac cta tgc att gtc aga gca atg     598
Thr Ile Pro Thr Ala Ala Gly Lys Asn Leu Cys Ile Val Arg Ala Met
145                 150                 155                 160
gat gtg gga tac atg tgc gat gat act atc act tat gaa tgc cca gtg     646
Asp Val Gly Tyr Met Cys Asp Asp Thr Ile Thr Tyr Glu Cys Pro Val
                165                 170                 175
ctg tcg gct ggt aat gat cca gaa gac atc gac tgt tgg tgc aca aag     694
Leu Ser Ala Gly Asn Asp Pro Glu Asp Ile Asp Cys Trp Cys Thr Lys
            180                 185                 190
tca gca gtc tac gtc agg tat gga aga tgc acc aag aca cgc cac tca     742
Ser Ala Val Tyr Val Arg Tyr Gly Arg Cys Thr Lys Thr Arg His Ser
        195                 200                 205
aga cgc agt cgg agg tca ctg aca gtg cag aca cac gga gaa agc act     790
Arg Arg Ser Arg Arg Ser Leu Thr Val Gln Thr His Gly Glu Ser Thr
    210                 215                 220
cta gcg aac aag aag ggg gct tgg atg gac agc acc aag gcc aca agg     838
Leu Ala Asn Lys Lys Gly Ala Trp Met Asp Ser Thr Lys Ala Thr Arg
225                 230                 235                 240
tat ttg gta aaa aca gaa tca tgg atc ttg agg aac cct gga tat gcc     886
Tyr Leu Val Lys Thr Glu Ser Trp Ile Leu Arg Asn Pro Gly Tyr Ala
                245                 250                 255
ctg gtg gca gcc gtc att ggt tgg atg ctt ggg agc aac acc atg cag     934
Leu Val Ala Ala Val Ile Gly Trp Met Leu Gly Ser Asn Thr Met Gln
            260                 265                 270
aga gtt gtg ttt gtc gtg cta ttg ctt ttg gtg gcc cca gct tac agc     982
Arg Val Val Phe Val Val Leu Leu Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser
        275                 280                 285
ttc aac tgc ctt gga atg agc aac aga gac ttc ttg gaa gga gtg tct    1030
Phe Asn Cys Leu Gly Met Ser Asn Arg Asp Phe Leu Glu Gly Val Ser
    290                 295                 300
gga gca aca tgg gtg gat ttg gtt ctc gaa ggc gac agc tgc gtg act    1078
Gly Ala Thr Trp Val Asp Leu Val Leu Glu Gly Asp Ser Cys Val Thr
305                 310                 315                 320
atc atg tct aag gac aag cct acc atc gac gtc aag atg atg aat atg    1126
Ile Met Ser Lys Asp Lys Pro Thr Ile Asp Val Lys Met Met Asn Met
                325                 330                 335
gag gcg gcc aac ctg gca gag gtc cgc agt tat tgc tat ttg gct acc    1174
Glu Ala Ala Asn Leu Ala Glu Val Arg Ser Tyr Cys Tyr Leu Ala Thr
            340                 345                 350
gtc agc gat ctc tcc acc aaa gct gca tgc ccg acc atg gga gaa gct    1222
Val Ser Asp Leu Ser Thr Lys Ala Ala Cys Pro Thr Met Gly Glu Ala
        355                 360                 365
cac aat gac aaa cgt gct gac cca gct ttt gtg tgc aga caa gga gtg    1270
His Asn Asp Lys Arg Ala Asp Pro Ala Phe Val Cys Arg Gln Gly Val
    370                 375                 380
gtg gac agg ggc tgg ggc aac ggc tgc gga ttt ttt ggc aaa gga tcc    1318
Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys Gly Phe Phe Gly Lys Gly Ser
385                 390                 395                 400
att gac aca tgc gcc aaa ttt gcc tgc tct acc aag gca ata gga aga    1366
Ile Asp Thr Cys Ala Lys Phe Ala Cys Ser Thr Lys Ala Ile Gly Arg
                405                 410                 415
acc atc ttg aaa gag aat atc aag tac gaa gtg gcc att ttt gtc cat    1414
Thr Ile Leu Lys Glu Asn Ile Lys Tyr Glu Val Ala Ile Phe Val His
            420                 425                 430
gga cca act act gtg gag tcg cac gga aat tac tcc aca cag gtt gga    1462
Gly Pro Thr Thr Val Glu Ser His Gly Asn Tyr Ser Thr Gln Val Gly
        435                 440                 445
gcc act cag gcc ggc cga ttc agc atc act cct gct gcg cct tca tac    1510
Ala Thr Gln Ala Gly Arg Phe Ser Ile Thr Pro Ala Ala Pro Ser Tyr
    450                 455                 460
aca cta aag ctt gga gaa tat gga gag gtg aca gtg gac tgt gaa cca    1558
Thr Leu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Glu Val Thr Val Asp Cys Glu Pro
465                 470                 475                 480
cgg tca ggg att gac acc aat gca tac tac gtg atg act gtt gga aca    1606
Arg Ser Gly Ile Asp Thr Asn Ala Tyr Tyr Val Met Thr Val Gly Thr
                485                 490                 495
aag acg ttc ttg gtc cat cgt gag tgg ttc atg gac ctc aac ctc cct    1654
Lys Thr Phe Leu Val His Arg Glu Trp Phe Met Asp Leu Asn Leu Pro
            500                 505                 510
tgg agc agt gct gga agt act gtg tgg agg aac aga gag acg tta atg    1702
Trp Ser Ser Ala Gly Ser Thr Val Trp Arg Asn Arg Glu Thr Leu Met
        515                 520                 525
gag ttt gag gaa cca cac gcc acg aag cag tct gtg ata gca ttg ggc    1750
Glu Phe Glu Glu Pro His Ala Thr Lys Gln Ser Val Ile Ala Leu Gly
    530                 535                 540
tca caa gag gga gct ctg cat caa gct ttg gct gga gcc att cct gtg    1798
Ser Gln Glu Gly Ala Leu His Gln Ala Leu Ala Gly Ala Ile Pro Val
545                 550                 555                 560
gaa ttt tca agc aac act gtc aag ttg acg tcg ggt cat ttg aag tgt    1846
Glu Phe Ser Ser Asn Thr Val Lys Leu Thr Ser Gly His Leu Lys Cys
                565                 570                 575
aga gtg aag atg gaa aaa ttg cag ttg aag gga aca acc tat ggc gtc    1894
Arg Val Lys Met Glu Lys Leu Gln Leu Lys Gly Thr Thr Tyr Gly Val
            580                 585                 590
tgt tca aag gct ttc aag ttt ctt agg act ccc gtg gac acc ggt cac    1942
Cys Ser Lys Ala Phe Lys Phe Leu Arg Thr Pro Val Asp Thr Gly His
        595                 600                 605
ggc act gtg gtg ttg gaa ttg cag tac act ggc acg gat gga cct tgc    1990
Gly Thr Val Val Leu Glu Leu Gln Tyr Thr Gly Thr Asp Gly Pro Cys
    610                 615                 620
aaa gtt cct atc tcg tca gtg gct tca ttg aac gac cta acg cca gtg    2038
Lys Val Pro Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu Asn Asp Leu Thr Pro Val
625                 630                 635                 640
ggc aga ttg gtc act gtc aac cct ttt gtt tca gtg gcc acg gcc aac    2086
Gly Arg Leu Val Thr Val Asn Pro Phe Val Ser Val Ala Thr Ala Asn
                645                 650                 655
gct aag gtc ctg att gaa ttg gaa cca ccc ttt gga gac tca tac ata    2134
Ala Lys Val Leu Ile Glu Leu Glu Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile
            660                 665                 670
gtg gtg ggc aga gga gaa caa cag atc aat cac cat tgg cac aag tct    2182
Val Val Gly Arg Gly Glu Gln Gln Ile Asn His His Trp His Lys Ser
        675                 680                 685
gga agc agc att ggc aaa gcc ttt aca acc acc ctc aaa gga gcg cag    2230
Gly Ser Ser Ile Gly Lys Ala Phe Thr Thr Thr Leu Lys Gly Ala Gln
    690                 695                 700
aga cta gcc gct cta gga gac aca gct tgg gac ttt gga tca gtt gga    2278
Arg Leu Ala Ala Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly
705                 710                 715                 720
ggg gtg ttc act agt gtt ggg cgg gct gtc cat caa gtg ttc gga gga    2326
Gly Val Phe Thr Ser Val Gly Arg Ala Val His Gln Val Phe Gly Gly
                725                 730                 735
gca ttc cgc tca ctg ttc gga ggc atg tcc tgg ata acg caa gga ttg    2374
Ala Phe Arg Ser Leu Phe Gly Gly Met Ser Trp Ile Thr Gln Gly Leu
            740                 745                 750
ctg ggg gct ctc ctg ttg tgg atg ggc atc aat gct cgt gat agg tcc    2422
Leu Gly Ala Leu Leu Leu Trp Met Gly Ile Asn Ala Arg Asp Arg Ser
        755                 760                 765
ata gct ctc acg ttt ctc gca gtt gga gga gtt ctg ctc ttc ctc tcc    2470
Ile Ala Leu Thr Phe Leu Ala Val Gly Gly Val Leu Leu Phe Leu Ser
    770                 775                 780
gtg aac gtg ggc gcc gat caa gga tgc gcc atc aac ttt ggc aag aga    2518
Val Asn Val Gly Ala Asp Gln Gly Cys Ala Ile Asn Phe Gly Lys Arg
785                 790                 795                 800
gag ctc aag tgc gga gat ggt atc ttc ata ttt aga gac tct gat gac    2566
Glu Leu Lys Cys Gly Asp Gly Ile Phe Ile Phe Arg Asp Ser Asp Asp
                805                 810                 815
tgg ctg aac aag tac tca tac tat cca gaa gat cct gtg aag ctt gca    2614
Trp Leu Asn Lys Tyr Ser Tyr Tyr Pro Glu Asp Pro Val Lys Leu Ala
            820                 825                 830
tca ata gtg aaa gcc tct ttt gaa gaa ggg aag tgt ggc cta aat tca    2662
Ser Ile Val Lys Ala Ser Phe Glu Glu Gly Lys Cys Gly Leu Asn Ser
        835                 840                 845
gtt gac tcc ctt gag cat gag atg tgg aga agc agg gca gat gag atc    2710
Val Asp Ser Leu Glu His Glu Met Trp Arg Ser Arg Ala Asp Glu Ile
    850                 855                 860
aat gcc att ttt gag gaa aac gag gtg gac att tct gtt gtc gtg cag    2758
Asn Ala Ile Phe Glu Glu Asn Glu Val Asp Ile Ser Val Val Val Gln
865                 870                 875                 880
gat cca aag aat gtt tac cag aga gga act cat cca ttt tcc aga att    2806
Asp Pro Lys Asn Val Tyr Gln Arg Gly Thr His Pro Phe Ser Arg Ile
                885                 890                 895
cgg gat ggt ctg cag tat ggt tgg aag act tgg ggt aag aac ctt gtg    2854
Arg Asp Gly Leu Gln Tyr Gly Trp Lys Thr Trp Gly Lys Asn Leu Val
            900                 905                 910
ttc tcc cca ggg agg aag aat gga agc ttc atc ata gat gga aag tcc    2902
Phe Ser Pro Gly Arg Lys Asn Gly Ser Phe Ile Ile Asp Gly Lys Ser
        915                 920                 925
agg aaa gaa tgc ccg ttt tca aac cgg gtc tgg aat tct ttc cag ata    2950
Arg Lys Glu Cys Pro Phe Ser Asn Arg Val Trp Asn Ser Phe Gln Ile
    930                 935                 940
gag gag ttt ggg acg gga gtg ttc acc aca cgc gtg tac atg gac gca    2998
Glu Glu Phe Gly Thr Gly Val Phe Thr Thr Arg Val Tyr Met Asp Ala
945                 950                 955                 960
gtc ttt gaa tac acc ata gac tgc gat gga tct atc ttg ggt gca gcg    3046
Val Phe Glu Tyr Thr Ile Asp Cys Asp Gly Ser Ile Leu Gly Ala Ala
                965                 970                 975
gtg aac gga aaa aag agt gcc cat ggc tct cca aca ttt tgg atg gga    3094
Val Asn Gly Lys Lys Ser Ala His Gly Ser Pro Thr Phe Trp Met Gly
            980                 985                 990
agt cat gaa gta aat ggg aca tgg atg atc cac acc ttg gag gca tta    3142
Ser His Glu Val Asn Gly Thr Trp Met Ile His Thr Leu Glu Ala Leu
        995                 1000                1005
gat tac aag gag tgt gag tgg cca ctg aca cat acg att gga aca        3187
Asp Tyr Lys Glu Cys Glu Trp Pro Leu Thr His Thr Ile Gly Thr
    1010                1015                1020
tca gtt gaa gag agt gaa atg ttc atg ccg aga tca atc gga ggc        3232
Ser Val Glu Glu Ser Glu Met Phe Met Pro Arg Ser Ile Gly Gly
    1025                1030                1035
cca gtt agc tct cac aat cat atc cct gga tac aag gtt cag acg        3277
Pro Val Ser Ser His Asn His Ile Pro Gly Tyr Lys Val Gln Thr
    1040                1045                1050
aac gga cct tgg atg cag gta cca cta gaa gtg aag aga gaa gct        3322
Asn Gly Pro Trp Met Gln Val Pro Leu Glu Val Lys Arg Glu Ala
    1055                1060                1065
tgc cca ggg act agc gtg atc att gat ggc aac tgt gat gga cgg        3367
Cys Pro Gly Thr Ser Val Ile Ile Asp Gly Asn Cys Asp Gly Arg
    1070                1075                1080
gga aaa tca acc aga tcc acc acg gat agc ggg aaa gtt att cct        3412
Gly Lys Ser Thr Arg Ser Thr Thr Asp Ser Gly Lys Val Ile Pro
    1085                1090                1095
gaa tgg tgt tgc cgc tcc tgc aca atg ccg cct gtg agc ttc cat        3457
Glu Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Met Pro Pro Val Ser Phe His
    1100                1105                1110
ggt agt gat ggg tgt tgg tat ccc atg gaa att agg cca agg aaa        3502
Gly Ser Asp Gly Cys Trp Tyr Pro Met Glu Ile Arg Pro Arg Lys
    1115                1120                1125
acg cat gaa agc cat ctg gtg cgc tcc tgg gtt aca gct gga gaa        3547
Thr His Glu Ser His Leu Val Arg Ser Trp Val Thr Ala Gly Glu
    1130                1135                1140
ata cat gct gtc cct ttt ggt ttg gtg agc atg atg ata gca atg        3592
Ile His Ala Val Pro Phe Gly Leu Val Ser Met Met Ile Ala Met
    1145                1150                1155
gaa gtg gtc cta agg aaa aga cag gga cca aag caa atg ttg gtt        3637
Glu Val Val Leu Arg Lys Arg Gln Gly Pro Lys Gln Met Leu Val
    1160                1165                1170
gga gga gta gtg ctc ttg gga gca atg ctg gtc ggg caa gta act        3682
Gly Gly Val Val Leu Leu Gly Ala Met Leu Val Gly Gln Val Thr
    1175                1180                1185
ctc ctt gat ttg ctg aaa ctc aca gtg gct gtg gga ttg cat ttc        3727
Leu Leu Asp Leu Leu Lys Leu Thr Val Ala Val Gly Leu His Phe
    1190                1195                1200
cat gag atg aac aat gga gga gac gcc atg tat atg gcg ttg att        3772
His Glu Met Asn Asn Gly Gly Asp Ala Met Tyr Met Ala Leu Ile
    1205                1210                1215
gct gcc ttt tca atc aga cca ggg ctg ctc atc ggc ttt ggg ctc        3817
Ala Ala Phe Ser Ile Arg Pro Gly Leu Leu Ile Gly Phe Gly Leu
    1220                1225                1230
agg acc cta tgg agc cct cgg gaa cgc ctt gtg ctg acc cta gga        3862
Arg Thr Leu Trp Ser Pro Arg Glu Arg Leu Val Leu Thr Leu Gly
    1235                1240                1245
gca gcc atg gtg gag att gcc ttg ggt ggc gtg atg ggc ggc ctg        3907
Ala Ala Met Val Glu Ile Ala Leu Gly Gly Val Met Gly Gly Leu
    1250                1255                1260
tgg aag tat cta aat gca gtt tct ctc tgc atc ctg aca ata aat        3952
Trp Lys Tyr Leu Asn Ala Val Ser Leu Cys Ile Leu Thr Ile Asn
    1265                1270                1275
gct gtt gct tct agg aaa gca tca aat acc atc ttg ccc ctc atg        3997
Ala Val Ala Ser Arg Lys Ala Ser Asn Thr Ile Leu Pro Leu Met
    1280                1285                1290
gct ctg ttg aca cct gtc act atg gct gag gtg aga ctt gcc gca        4042
Ala Leu Leu Thr Pro Val Thr Met Ala Glu Val Arg Leu Ala Ala
    1295                1300                1305
atg ttc ttt tgt gcc atg gtt atc ata ggg gtc ctt cac cag aat        4087
Met Phe Phe Cys Ala Met Val Ile Ile Gly Val Leu His Gln Asn
    1310                1315                1320
ttc aag gac acc tcc atg cag aag act ata cct ctg gtg gcc ctc        4132
Phe Lys Asp Thr Ser Met Gln Lys Thr Ile Pro Leu Val Ala Leu
    1325                1330                1335
aca ctc aca tct tac ctg ggc ttg aca caa cct ttt ttg ggc ctg        4177
Thr Leu Thr Ser Tyr Leu Gly Leu Thr Gln Pro Phe Leu Gly Leu
    1340                1345                1350
tgt gca ttt ctg gca acc cgc ata ttt ggg cga agg agt atc cca        4222
Cys Ala Phe Leu Ala Thr Arg Ile Phe Gly Arg Arg Ser Ile Pro
    1355                1360                1365
gtg aat gag gca ctc gca gca gct ggt cta gtg gga gtg ctg gca        4267
Val Asn Glu Ala Leu Ala Ala Ala Gly Leu Val Gly Val Leu Ala
    1370                1375                1380
gga ctg gct ttt cag gag atg gag aac ttc ctt ggt ccg att gca        4312
Gly Leu Ala Phe Gln Glu Met Glu Asn Phe Leu Gly Pro Ile Ala
    1385                1390                1395
gtt gga gga ctc ctg atg atg ctg gtt agc gtg gct ggg agg gtg        4357
Val Gly Gly Leu Leu Met Met Leu Val Ser Val Ala Gly Arg Val
    1400                1405                1410
gat ggg cta gag ctc aag aag ctt ggt gaa gtt tca tgg gaa gag        4402
Asp Gly Leu Glu Leu Lys Lys Leu Gly Glu Val Ser Trp Glu Glu
    1415                1420                1425
gag gcg gag atc agc ggg agt tcc gcc cgc tat gat gtg gca ctc        4447
Glu Ala Glu Ile Ser Gly Ser Ser Ala Arg Tyr Asp Val Ala Leu
    1430                1435                1440
agt gaa caa ggg gag ttc aag ctg ctt tct gaa gag aaa gtg cca        4492
Ser Glu Gln Gly Glu Phe Lys Leu Leu Ser Glu Glu Lys Val Pro
    1445                1450                1455
tgg gac cag gtt gtg atg acc tcg ctg gcc ttg gtt ggg gct gcc        4537
Trp Asp Gln Val Val Met Thr Ser Leu Ala Leu Val Gly Ala Ala
    1460                1465                1470
ctc cat cca ttt gct ctt ctg ctg gtc ctt gct ggg tgg ctg ttt        4582
Leu His Pro Phe Ala Leu Leu Leu Val Leu Ala Gly Trp Leu Phe
    1475                1480                1485
cat gtc agg gga gct agg aga agt ggg gat gtc ttg tgg gat att        4627
His Val Arg Gly Ala Arg Arg Ser Gly Asp Val Leu Trp Asp Ile
    1490                1495                1500
ccc act cct aag atc atc gag gaa tgt gaa cat ctg gag gat ggg        4672
Pro Thr Pro Lys Ile Ile Glu Glu Cys Glu His Leu Glu Asp Gly
    1505                1510                1515
att tat ggc ata ttc cag tca acc ttc ttg ggg gcc tcc cag cga        4717
Ile Tyr Gly Ile Phe Gln Ser Thr Phe Leu Gly Ala Ser Gln Arg
    1520                1525                1530
gga gtg gga gtg gca cag gga ggg gtg ttc cac aca atg tgg cat        4762
Gly Val Gly Val Ala Gln Gly Gly Val Phe His Thr Met Trp His
    1535                1540                1545
gtc aca aga gga gct ttc ctt gtc agg aat ggc aag aag ttg att        4807
Val Thr Arg Gly Ala Phe Leu Val Arg Asn Gly Lys Lys Leu Ile
    1550                1555                1560
cca tct tgg gct tca gta aag gaa gac ctt gtc gcc tat ggt ggc        4852
Pro Ser Trp Ala Ser Val Lys Glu Asp Leu Val Ala Tyr Gly Gly
    1565                1570                1575
tca tgg aag ttg gaa ggc aga tgg gat gga gag gaa gag gtc cag        4897
Ser Trp Lys Leu Glu Gly Arg Trp Asp Gly Glu Glu Glu Val Gln
    1580                1585                1590
ttg atc gcg gct gtt cca gga aag aac gtg gtc aac gtc cag aca        4942
Leu Ile Ala Ala Val Pro Gly Lys Asn Val Val Asn Val Gln Thr
    1595                1600                1605
aaa ccg agc ttg ttc aaa gtg agg aat ggg gga gaa atc ggg gct        4987
Lys Pro Ser Leu Phe Lys Val Arg Asn Gly Gly Glu Ile Gly Ala
    1610                1615                1620
gtc gct ctt gac tat ccg agt ggc act tca gga tct cct att gtt        5032
Val Ala Leu Asp Tyr Pro Ser Gly Thr Ser Gly Ser Pro Ile Val
    1625                1630                1635
aac agg aac gga gag gtg att ggg ctg tac ggc aat ggc atc ctt        5077
Asn Arg Asn Gly Glu Val Ile Gly Leu Tyr Gly Asn Gly Ile Leu
    1640                1645                1650
gtc ggt gac aac tcc ttc gtg tcc gcc ata tcc cag act gag gtg        5122
Val Gly Asp Asn Ser Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Thr Glu Val
    1655                1660                1665
aag gaa gaa gga aag gag gag ctc caa gag atc ccg aca atg cta        5167
Lys Glu Glu Gly Lys Glu Glu Leu Gln Glu Ile Pro Thr Met Leu
    1670                1675                1680
aag aaa gga atg aca act gtc ctt gat ttt cat cct gga gct ggg        5212
Lys Lys Gly Met Thr Thr Val Leu Asp Phe His Pro Gly Ala Gly
    1685                1690                1695
aag aca aga cgt ttc ctc cca cag atc ttg gcc gag tgc gca cgg        5257
Lys Thr Arg Arg Phe Leu Pro Gln Ile Leu Ala Glu Cys Ala Arg
    1700                1705                1710
aga cgc ttg cgc act ctt gtg ttg gcc ccc acc agg gtt gtt ctt        5302
Arg Arg Leu Arg Thr Leu Val Leu Ala Pro Thr Arg Val Val Leu
    1715                1720                1725
tct gaa atg aag gag gct ttt cac ggc ctg gac gtg aaa ttc cac        5347
Ser Glu Met Lys Glu Ala Phe His Gly Leu Asp Val Lys Phe His
    1730                1735                1740
aca cag gct ttt tcc gct cac ggc agc ggg aga gaa gtc att gat        5392
Thr Gln Ala Phe Ser Ala His Gly Ser Gly Arg Glu Val Ile Asp
    1745                1750                1755
gcc atg tgc cat gcc acc cta act tac agg atg ttg gaa cca act        5437
Ala Met Cys His Ala Thr Leu Thr Tyr Arg Met Leu Glu Pro Thr
    1760                1765                1770
agg gtt gtt aac tgg gaa gtg atc att atg gat gaa gcc cat ttt        5482
Arg Val Val Asn Trp Glu Val Ile Ile Met Asp Glu Ala His Phe
    1775                1780                1785
ttg gat cca gec agc ata gcc gct aga ggt tgg gca gcg cac aga        5527
Leu Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly Trp Ala Ala His Arg
    1790                1795                1800
gct agg gca aat gaa agt gca aca atc ttg atg aca gcc aca ccg        5572
Ala Arg Ala Asn Glu Ser Ala Thr Ile Leu Met Thr Ala Thr Pro
    1805                1810                1815
cct ggg act agt gat gaa ttt cca cat tca aat ggt gaa ata gaa        5617
Pro Gly Thr Ser Asp Glu Phe Pro His Ser Asn Gly Glu Ile Glu
    1820                1825                1830
gat gtt caa acg gac ata ccc agt gag ccc tgg aae aca ggg cat        5662
Asp Val Gln Thr Asp Ile Pro Ser Glu Pro Trp Asn Thr Gly His
    1835                1840                1845
gac tgg atc ctg gct gac aaa agg ccc acg gca tgg ttc ctt cca        5707
Asp Trp Ile Leu Ala Asp Lys Arg Pro Thr Ala Trp Phe Leu Pro
    1850                1855                1860
tcc atc aga gct gca aat gtc atg gct gcc tct ttg cgt aag gct        5752
Ser Ile Arg Ala Ala Asn Val Met Ala Ala Ser Leu Arg Lys Ala
    1865                1870                1875
gga aag agt gtg gtg gtc ctg aac agg aaa acc ttt gag aga gaa        5797
Gly Lys Ser Val Val Val Leu Asn Arg Lys Thr Phe Glu Arg Glu
    1880                1885                1890
tac ccc acg ata aag cag aag aaa cct gac ttt ata ttg gcc act        5842
Tyr Pro Thr Ile Lys Gln Lys Lys Pro Asp Phe Ile Leu Ala Thr
    1895                1900                1905
gac ata gct gaa atg gga gcc aac ctt tgc gtg gag cga gtg ctg        5887
Asp Ile Ala Glu Met Gly Ala Asn Leu Cys Val Glu Arg Val Leu
    1910                1915                1920
gat tgc agg acg gct ttt aag cct gtg ctt gtg gat gaa ggg agg        5932
Asp Cys Arg Thr Ala Phe Lys Pro Val Leu Val Asp Glu Gly Arg
    1925                1930                1935
aag gtg gca ata aaa ggg cca ctt cgt atc tcc gca tcc tct gct        5977
Lys Val Ala Ile Lys Gly Pro Leu Arg Ile Ser Ala Ser Ser Ala
    1940                1945                1950
gct caa agg agg ggg cgc att ggg aga aat ccc aac aga gat gga        6022
Ala Gln Arg Arg Gly Arg Ile Gly Arg Asn Pro Asn Arg Asp Gly
    1955                1960                1965
gac tca tac tac tat tct gag cct aca agt gaa aat aat gcc cac        6067
Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Glu Pro Thr Ser Glu Asn Asn Ala His
    1970                1975                1980
cac gtc tgc tgg ttg gag gcc tca atg ctc ttg gac aac atg gag        6112
His Val Cys Trp Leu Glu Ala Ser Met Leu Leu Asp Asn Met Glu
    1985                1990                1995
gtg agg ggt gga atg gtc gcc cca ctc tat ggc gtt gaa gga act        6157
Val Arg Gly Gly Met Val Ala Pro Leu Tyr Gly Val Glu Gly Thr
    2000                2005                2010
aaa aca cca gtt tcc cct ggt gaa atg aga ctg agg gat gac cag        6202
Lys Thr Pro Val Ser Pro Gly Glu Met Arg Leu Arg Asp Asp Gln
    2015                2020                2025
agg aaa gtc ttc aga gaa cta gtg agg aat tgt gac ctg ccc gtt        6247
Arg Lys Val Phe Arg Glu Leu Val Arg Asn Cys Asp Leu Pro Val
    2030                2035                2040
tgg ctt tcg tgg caa gtg gcc aag gct ggt ttg aag acg aat gat        6292
Trp Leu Ser Trp Gln Val Ala Lys Ala Gly Leu Lys Thr Asn Asp
    2045                2050                2055
cgt aag tgg tgt ttt gaa ggc cct gag gaa cat gag atc ttg aat        6337
Arg Lys Trp Cys Phe Glu Gly Pro Glu Glu His Glu Ile Leu Asn
    2060                2065                2070
gac agc ggt gaa aca gtg aag tgc agg gct cct gga gga gca aag        6382
Asp Ser Gly Glu Thr Val Lys Cys Arg Ala Pro Gly Gly Ala Lys
    2075                2080                2085
aag cct ctg cgc cca agg tgg tgt gat gaa agg gtg tca tct gac        6427
Lys Pro Leu Arg Pro Arg Trp Cys Asp Glu Arg Val Ser Ser Asp
    2090                2095                2100
cag agt gcg ctg tct gaa ttt att aag ttt gct gaa ggt agg agg        6472
Gln Ser Ala Leu Ser Glu Phe Ile Lys Phe Ala Glu Gly Arg Arg
    2105                2110                2115
gga gct gct gaa gtg cta gtt gtg ctg agt gaa ctc cct gat ttc        6517
Gly Ala Ala Glu Val Leu Val Val Leu Ser Glu Leu Pro Asp Phe
    2120                2125                2130
ctg gct aaa aaa ggt gga gag gca atg gat acc atc agt gtg ttc        6562
Leu Ala Lys Lys Gly Gly Glu Ala Met Asp Thr Ile Ser Val Phe
    2135                2140                2145
ctc cac tct gag gaa ggc tct agg gct tac cgc aat gca cta tca        6607
Leu His Ser Glu Glu Gly Ser Arg Ala Tyr Arg Asn Ala Leu Ser
    2150                2155                2160
atg atg cct gag gca atg aca ata gtc atg ctg ttt ata ctg gct        6652
Met Met Pro Glu Ala Met Thr Ile Val Met Leu Phe Ile Leu Ala
    2165                2170                2175
gga cta ctg aca tcg gga atg gtc atc ttt ttc atg tct ccc aaa        6697
Gly Leu Leu Thr Ser Gly Met Val Ile Phe Phe Met Ser Pro Lys
    2180                2185                2190
ggc atc agt aga atg tct atg gcg atg ggc aca atg gcc ggc tgt        6742
Gly Ile Ser Arg Met Ser Met Ala Met Gly Thr Met Ala Gly Cys
    2195                2200                2205
gga tat ctc atg ttc ctt gga ggc gtc aaa ccc act cac atc tcc        6787
Gly Tyr Leu Met Phe Leu Gly Gly Val Lys Pro Thr His Ile Ser
    2210                2215                2220
tat gtc atg ctc ata ttc ttt gtc ctg atg gtg gtt gtg atc ccc        6832
Tyr Val Met Leu Ile Phe Phe Val Leu Met Val Val Val Ile Pro
    2225                2230                2235
gag cca ggg caa caa agg tcc atc caa gac aac caa gtg gca tac        6877
Glu Pro Gly Gln Gln Arg Ser Ile Gln Asp Asn Gln Val Ala Tyr
    2240                2245                2250
ctc att att ggc atc ctg acg ctg gtt tca gcg gtg gca gcc aac        6922
Leu Ile Ile Gly Ile Leu Thr Leu Val Ser Ala Val Ala Ala Asn
    2255                2260                2265
gag cta ggc atg ctg gag aaa acc aaa gag gac ctc ttt ggg aag        6967
Glu Leu Gly Met Leu Glu Lys Thr Lys Glu Asp Leu Phe Gly Lys
    2270                2275                2280
aag aac tta att cca tct agt gct tca ccc tgg agt tgg ccg gat        7012
Lys Asn Leu Ile Pro Ser Ser Ala Ser Pro Trp Ser Trp Pro Asp
    2285                2290                2295
ctt gac ctg aag cca gga gct gcc tgg aca gtg tac gtt ggc att        7057
Leu Asp Leu Lys Pro Gly Ala Ala Trp Thr Val Tyr Val Gly Ile
    2300                2305                2310
gtt aca atg ctc tct cca atg ttg cac cac tgg atc aaa gtc gaa        7102
Val Thr Met Leu Ser Pro Met Leu His His Trp Ile Lys Val Glu
    2315                2320                2325
tat ggc aac ctg tct ctg tct gga ata gcc cag tca gcc tca gtc        7147
Tyr Gly Asn Leu Ser Leu Ser Gly Ile Ala Gln Ser Ala Ser Val
    2330                2335                2340
ctt tct ttc atg gac aag ggg ata cca ttc atg aag atg aat atc        7192
Leu Ser Phe Met Asp Lys Gly Ile Pro Phe Met Lys Met Asn Ile
    2345                2350                2355
tcg gtc ata atg ctg ctg gtc agt ggc tgg aat tca ata aca gtg        7237
Ser Val Ile Met Leu Leu Val Ser Gly Trp Asn Ser Ile Thr Val
    2360                2365                2370
atg cct ctg ctc tgt ggc ata ggg tgc gcc atg ctc cac tgg tct        7282
Met Pro Leu Leu Cys Gly Ile Gly Cys Ala Met Leu His Trp Ser
    2375                2380                2385
ctc att tta cct gga atc aaa gcg cag cag tca aag ctt gca cag        7327
Leu Ile Leu Pro Gly Ile Lys Ala Gln Gln Ser Lys Leu Ala Gln
    2390                2395                2400
aga agg gtg ttc cat ggc gtt gcc aag aac cct gtg gtt gat ggg        7372
Arg Arg Val Phe His Gly Val Ala Lys Asn Pro Val Val Asp Gly
    2405                2410                2415
aat cca aca gtt gac att gag gaa gct cct gaa atg cct gcc ctt        7417
Asn Pro Thr Val Asp Ile Glu Glu Ala Pro Glu Met Pro Ala Leu
    2420                2425                2430
tat gag aag aaa ctg gct cta tat ctc ctt ctt gct ctc agc cta        7462
Tyr Glu Lys Lys Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Leu Ala Leu Ser Leu
    2435                2440                2445
gct tct gtt gcc atg tgc aga acg ccc ttt tca ttg gct gaa ggc        7507
Ala Ser Val Ala Met Cys Arg Thr Pro Phe Ser Leu Ala Glu Gly
    2450                2455                2460
att gtc cta gca tca gct gcc tta ggg ccg ctc ata gag gga aac        7552
Ile Val Leu Ala Ser Ala Ala Leu Gly Pro Leu Ile Glu Gly Asn
    2465                2470                2475
acc agc ctt ctt tgg aat gga ccc atg gct gtc tcc atg aca gga        7597
Thr Ser Leu Leu Trp Asn Gly Pro Met Ala Val Ser Met Thr Gly
    2480                2485                2490
gtc atg agg ggg aat cac tat gct ttt gtg gga gtc atg tac aat        7642
Val Met Arg Gly Asn His Tyr Ala Phe Val Gly Val Met Tyr Asn
    2495                2500                2505
cta tgg aag atg aaa act gga cgc cgg ggg agc gcg aat gga aaa        7687
Leu Trp Lys Met Lys Thr Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asn Gly Lys
    2510                2515                2520
act ttg ggt gaa gtc tgg aag agg gaa ctg aat ctg ttg gac aag        7732
Thr Leu Gly Glu Val Trp Lys Arg Glu Leu Asn Leu Leu Asp Lys
    2525                2530                2535
cga cag ttt gag ttg tat aaa agg acc gac att gtg gag gtg gat        7777
Arg Gln Phe Glu Leu Tyr Lys Arg Thr Asp Ile Val Glu Val Asp
    2540                2545                2550
cgt gat acg gca cgc agg cat ttg gcc gaa ggg aag gtg gac acc        7822
Arg Asp Thr Ala Arg Arg His Leu Ala Glu Gly Lys Val Asp Thr
    2555                2560                2565
ggg gtg gcg gtc tcc agg ggg acc gca aag tta agg tgg ttc cat        7867
Gly Val Ala Val Ser Arg Gly Thr Ala Lys Leu Arg Trp Phe His
    2570                2575                2580
gag cgt ggc tat gtc aag ctg gaa ggt agg gtg att gac ctg ggg        7912
Glu Arg Gly Tyr Val Lys Leu Glu Gly Arg Val Ile Asp Leu Gly
    2585                2590                2595
tgt ggc cgc gga ggc tgg tgt tac tac gct gct gcg caa aag gaa        7957
Cys Gly Arg Gly Gly Trp Cys Tyr Tyr Ala Ala Ala Gln Lys Glu
    2600                2605                2610
gtg agt ggg gtc aaa gga ttt act ctt gga aga gac ggc cat gag        8002
Val Ser Gly Val Lys Gly Phe Thr Leu Gly Arg Asp Gly His Glu
    2615                2620                2625
aaa ccc atg aat gtg caa agt ctg gga tgg aac atc atc acc ttc        8047
Lys Pro Met Asn Val Gln Ser Leu Gly Trp Asn Ile Ile Thr Phe
    2630                2635                2640
aag gac aaa act gat atc cac cgc cta gaa cca gtg aaa tgt gac        8092
Lys Asp Lys Thr Asp Ile His Arg Leu Glu Pro Val Lys Cys Asp
    2645                2650                2655
acc ctt ttg tgt gac att gga gag tca tca tcg tca tcg gtc aca        8137
Thr Leu Leu Cys Asp Ile Gly Glu Ser Ser Ser Ser Ser Val Thr
    2660                2665                2670
gag ggg gaa agg acc gtg aga gtt ctt gat act gta gaa aaa tgg        8182
Glu Gly Glu Arg Thr Val Arg Val Leu Asp Thr Val Glu Lys Trp
    2675                2680                2685
ctg gct tgt ggg gtt gac aac ttc tgt gtg aag gtg tta gct cca        8227
Leu Ala Cys Gly Val Asp Asn Phe Cys Val Lys Val Leu Ala Pro
    2690                2695                2700
tac atg cca gat gtt ctt gag aaa ctg gaa ttg ctc caa agg agg        8272
Tyr Met Pro Asp Val Leu Glu Lys Leu Glu Leu Leu Gln Arg Arg
    2705                2710                2715
ttt ggc gga aca gtg atc agg aac cct ctc tcc agg aat tcc act        8317
Phe Gly Gly Thr Val Ile Arg Asn Pro Leu Ser Arg Asn Ser Thr
    2720                2725                2730
cat gaa atg tac tac gtg tct gga gcc cgc agc aat gtc aca ttt        8362
His Glu Met Tyr Tyr Val Ser Gly Ala Arg Ser Asn Val Thr Phe
    2735                2740                2745
act gtg aac caa aca tcc cgc ctc ctg atg agg aga atg agg egt        8407
Thr Val Asn Gln Thr Ser Arg Leu Leu Met Arg Arg Met Arg Arg
    2750                2755                2760
cca act gga aaa gtg acc ctg gag gct gac gtc atc ctc cca att        8452
Pro Thr Gly Lys Val Thr Leu Glu Ala Asp Val Ile Leu Pro Ile
    2765                2770                2775
ggg aca cgc agt gtt gag aca gac aag gga ccc ctg gac aaa gag        8497
Gly Thr Arg Ser Val Glu Thr Asp Lys Gly Pro Leu Asp Lys Glu
    2780                2785                2790
gcc ata gaa gaa agg gtt gag agg ata aaa tct gag tac atg acc        8542
Ala Ile Glu Glu Arg Val Glu Arg Ile Lys Ser Glu Tyr Met Thr
    2795                2800                2805
tct tgg ttt tat gac aat gac aac ccc tac agg acc tgg cac tac        8587
Ser Trp Phe Tyr Asp Asn Asp Asn Pro Tyr Arg Thr Trp His Tyr
    2810                2815                2820
tgt ggc tcc tat gtc aca aaa acc tcc gga agt gcg gcg agc atg        8632
Cys Gly Ser Tyr Val Thr Lys Thr Ser Gly Ser Ala Ala Ser Met
    2825                2830                2835
gta aat ggt gtt att aaa att ctg aca tat cca tgg gac agg ata        8677
Val Asn Gly Val Ile Lys Ile Leu Thr Tyr Pro Trp Asp Arg Ile
    2840                2845                2850
gag gag gtc aca aga atg gca atg act gac aca acc cct ttt gga        8722
Glu Glu Val Thr Arg Met Ala Met Thr Asp Thr Thr Pro Phe Gly
    2855                2860                2865
cag caa aga gtg ttt aaa gaa aaa gtt gac acc aga gca aag gat        8767
Gln Gln Arg Val Phe Lys Glu Lys Val Asp Thr Arg Ala Lys Asp
    2870                2875                2880
cca cca gcg gga act agg aag atc atg aaa gtt gtc aac agg tgg        8812
Pro Pro Ala Gly Thr Arg Lys Ile Met Lys Val Val Asn Arg Trp
    2885                2890                2895
ctg ttc cgc cac ctg gcc aga gaa aag aac ccc aga ctg tgc aca        8857
Leu Phe Arg His Leu Ala Arg Glu Lys Asn Pro Arg Leu Cys Thr
    2900                2905                2910
aag gaa gaa ttt att gca aaa gtc cga agt cat gca gcc att gga        8902
Lys Glu Glu Phe Ile Ala Lys Val Arg Ser His Ala Ala Ile Gly
    2915                2920                2925
gct tac ctg gaa gaa caa gaa cag tgg aag act gcc aat gag gct        8947
Ala Tyr Leu Glu Glu Gln Glu Gln Trp Lys Thr Ala Asn Glu Ala
    2930                2935                2940
gtc caa gac cca aag ttc tgg gaa ctg gtg gat gaa gaa agg aag        8992
Val Gln Asp Pro Lys Phe Trp Glu Leu Val Asp Glu Glu Arg Lys
    2945                2950                2955
ctg cac caa caa ggc agg tgt cgg act tgt gtg tac aac atg atg        9037
Leu His Gln Gln Gly Arg Cys Arg Thr Cys Val Tyr Asn Met Met
    2960                2965                2970
ggg aaa aga gag aag aag ctg tca gag ttt ggg aaa gca aag gga        9082
Gly Lys Arg Glu Lys Lys Leu Ser Glu Phe Gly Lys Ala Lys Gly
    2975                2980                2985
agc cgt gcc ata tgg tat atg tgg ctg gga gcg cgg tat ctt gag        9127
Ser Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg Tyr Leu Glu
    2990                2995                3000
ttt gag gcc ctg gga ttc ctg aat gag gac cat tgg gct tcc agg        9172
Phe Glu Ala Leu Gly Phe Leu Asn Glu Asp His Trp Ala Ser Arg
    3005                3010                3015
gaa aac tca gga gga gga gtg gaa ggc att ggc tta caa tac cta        9217
Glu Asn Ser Gly Gly Gly Val Glu Gly Ile Gly Leu Gln Tyr Leu
    3020                3025                3030
gga tat gtg atc aga gac ctg gct gca atg gat ggt ggt gga ttc        9262
Gly Tyr Val Ile Arg Asp Leu Ala Ala Met Asp Gly Gly Gly Phe
    3035                3040                3045
tac gcg gat gac acc gct gga tgg gac acg cgc atc aca gag gca        9307
Tyr Ala Asp Asp Thr Ala Gly Trp Asp Thr Arg Ile Thr Glu Ala
    3050                3055                3060
gac ctt gat gat gaa cag gag atc ttg aac tac atg agc cca cat        9352
Asp Leu Asp Asp Glu Gln Glu Ile Leu Asn Tyr Met Ser Pro His
    3065                3070                3075
cac aaa aaa ctg gca caa gca gtg atg gaa atg aca tac aag aac        9397
His Lys Lys Leu Ala Gln Ala Val Met Glu Met Thr Tyr Lys Asn
    3080                3085                3090
aaa gtg gtg aaa gtg ttg aga cca gcc cca gga ggg aaa gcc tac        9442
Lys Val Val Lys Val Leu Arg Pro Ala Pro Gly Gly Lys Ala Tyr
    3095                3100                3105
atg gat gtc ata agt cga cga gac cag aga gga tcc ggg cag gta        9487
Mct Asp Val Ile Ser Arg Arg Asp Gln Arg Gly Ser Gly Gln Val
    3110                3115                3120
gtg act tat gct ctg aac acc atc acc aac ttg aaa gtc caa ttg        9532
Val Thr Tyr Ala Leu Asn Thr Ile Thr Asn Leu Lys Val Gln Leu
    3125                3130                3135
atc aga atg gca gaa gca gag atg gtg ata cat cac caa cat gtt        9577
Ile Arg Met Ala Glu Ala Glu Met Val Ile His His Gln His Val
    3140                3145                3150
caa gat tgt gat gaa tca gtt ctg acc agg ctg gag gca tgg ctc        9622
Gln Asp Cys Asp Glu Ser Val Leu Thr Arg Leu Glu Ala Trp Leu
    3155                3160                3165
act gag cac gga tgt gac aga ctg aag agg atg gcg gtg agt gga        9667
Thr Glu His Gly Cys Asp Arg Leu Lys Arg Met Ala Val Ser Gly
    3170                3175                3180
gac gac tgt gtg gtc cgg ccc atc gat gac agg ttc ggc ctg gcc        9712
Asp Asp Cys Val Val Arg Pro Ile Asp Asp Arg Phe Gly Leu Ala
    3185                3190                3195
ctg tcc cat ctc aac gcc atg tcc aag gtt aga aag gac ata tct        9757
Lcu Ser His Leu Asn Ala Met Ser Lys Val Arg Lys Asp Ile Ser
    3200                3205                3210
gaa tgg cag cca tca aaa ggg tgg aat gat tgg gag aat gtg ccc        9802
Glu Trp Gln Pro Ser Lys Gly Trp Asn Asp Trp Glu Asn Val Pro
    3215                3220                3225
ttc tgt tcc cac cac ttc cat gaa cta cag ctg aag gat ggc agg        9847
Phe Cys Ser His His Phe His Glu Leu Gln Leu Lys Asp Gly Arg
    3230                3235                3240
agg att gtg gtg cct tgc cga gaa cag gac gag ctc att ggg aga        9892
Arg Ile Val Val Pro Cys Arg Glu Gln Asp Glu Leu Ile Gly Arg
    3245                3250                3255
gga agg gtg tct cca gga aac ggc tgg atg atc aag gaa aca gct        9937
Gly Arg Val Ser Pro Gly Asn Gly Trp Met Ile Lys Glu Thr Ala
    3260                3265                3270
tgc ctc agc aaa gcc tat gcc aac atg tgg tca ctg atg tat ttt        9982
Cys Leu Ser Lys Ala Tyr Ala Asn Met Trp Ser Leu Met Tyr Phe
    3275                3280                3285
cac aaa agg gac atg agg cta ctg tca ttg gct gtt tcc tca gct       10027
His Lys Arg Asp Met Arg Leu Leu Ser Leu Ala Val Ser Ser Ala
    3290                3295                3300
gtt ccc acc tca tgg gtt cca caa gga cgc aca aca tgg tcg att       10072
Val Pro Thr Ser Trp Val Pro Gln Gly Arg Thr Thr Trp Ser Ile
    3305                3310                3315
cat ggg aaa ggg gag tgg atg acc acg gaa gac atg ctt gag gtg       10117
His Gly Lys Gly Glu Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Glu Val
    3320                3325                3330
tgg aac aga gta tgg ata acc aac aac cca cac atg cag gac aag       10162
Trp Asn Arg Val Trp Ile Thr Asn Asn Pro His Met Gln Asp Lys
    3335                3340                3345
aca atg gtg aaa aaa tgg aga gat gtc cct tat cta acc aag aga       10207
Thr Met Val Lys Lys Trp Arg Asp Val Pro Tyr Leu Thr Lys Arg
    3350                3355                3360
caa gac aag ctg tgc gga tca ctg att gga atg acc aat agg gcc       10252
Gln Asp Lys Leu Cys Gly Ser Leu Ile Gly Met Thr Asn Arg Ala
    3365                3370                3375
acc tgg gcc tcc cac atc cat tta gtc atc cat cgt atc cga acg       10297
Thr Trp Ala Ser His Ile His Leu Val Ile His Arg Ile Arg Thr
    3380                3385                3390
ctg att gga cag gag aaa tac act gac tac cta aca gtc atg gac       10342
Leu Ile Gly Gln Glu Lys Tyr Thr Asp Tyr Leu Thr Val Met Asp
    3395                3400                3405
agg tat tct gtg gat gct gac ctg caa ctg ggt gag ctt atc           10384
Arg Tyr Ser Val Asp Ala Asp Leu Gln Leu Gly Glu Leu Ile
    3410                3415                3420
tgaaacacca tctaacagga ataaccggga tacaaaccac gggtggagaa ccggactccc 10444
cacaacctga aaccgggata taaaccacgg ctggagaacc ggactccgca cttaaaatga 10504
aacagaaacc gggataaaaa ctacggatgg agaaccggac tccacacatt gagacagaag 10564
aagttgtcag cccagaaccc cacacgagtt ttgccactgc taagctgtga ggcagtgcag 10624
gctgggacag ccgacctcca ggttgcgaaa aacctggttt ctgggacctc ccaccccaga 10684
gtaaaaagaa cggagcctcc gctaccaccc tcccacgtgg tggtagaaag acggggtcta 10744
gaggttagag gagaccctcc agggaacaaa tagtgggacc atattgacgc cagggaaaga 10804
ccggagtggt tctctgcttt tcctccagag gtctgtgagc acagtttgct casgaataag 10864
cagacctttg gatgacaaac acaaaaaccac aa                              10896
<210>21
<211>3422
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>合成的构建体
<400>21
Met Ser Gly Arg Lys Ala Gln Gly Lys Thr Leu Gly Val Asn Met Val
1               5                   10                  15
Arg Arg Gly Val Arg Ser Leu Ser Asn Lys Ile Lys Gln Lys Thr Lys
            20                  25                  30
Gln Ile Gly Asn Arg Pro Gly Pro Ser Arg Gly Val Gln Gly Phe Ile
        35                  40                  45
Phe Phe Phe Leu Phe Asn Ile Leu Thr Gly Lys Lys Ile Thr Ala His
    50                  55                  60
Leu Lys Arg Leu Trp Lys Met Leu Asp Pro Arg Gln Gly Leu Ala Val
65                  70                  75                  80
Leu Arg Lys Val Lys Arg Val Val Ala Ser Leu Met Arg Gly Leu Ser
                85                  90                  95
Ser Arg Lys Arg Arg Ser His Asp Val Leu Thr Val Gln Phe Leu Ile
            100                 105                 110
Leu Gly Met Leu Leu Met Thr Gly Gly Val Thr Leu Ser Asn Phe Gln
        115                 120                 125
Gly Lys Val Met Met Thr Val Asn Ala Thr Asp Val Thr Asp Val Ile
    130                 135                 140
Thr Ile Pro Thr Ala Ala Gly Lys Asn Leu Cys Ile Val Arg Ala Met
145                 150                 155                 160
Asp Val Gly Tyr Met Cys Asp Asp Thr Ile Thr Tyr Glu Cys Pro Val
                165                 170                 175
Leu Ser Ala Gly Asn Asp Pro Glu Asp Ile Asp Cys Trp Cys Thr Lys
            180                 185                 190
Ser Ala Val Tyr Val Arg Tyr Gly Arg Cys Thr Lys Thr Arg His Ser
        195                 200                 205
Arg Arg Ser Arg Arg Ser Leu Thr Val Gln Thr His Gly Glu Ser Thr
    210                 215                 220
Leu Ala Asn Lys Lys Gly Ala Trp Met Asp Ser Thr Lys Ala Thr Arg
225                 230                 235                 240
Tyr Leu Val Lys Thr Glu Ser Trp Ile Leu Arg Asn Pro Gly Tyr Ala
                245                 250                 255
Leu Val Ala Ala Val Ile Gly Trp Met Leu Gly Ser Asn Thr Met Gln
            260                 265                 270
Arg Val Val Phe Val Val Leu Leu Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser
        275                 280                 285
Phe Asn Cys Leu Gly Met Ser Asn Arg Asp Phe Leu Glu Gly Val Ser
    290                 295                 300
Gly Ala Thr Trp Val Asp Leu Val Leu Glu Gly Asp Ser Cys Val Thr
305                 310                 315                 320
Ile Met Ser Lys Asp Lys Pro Thr Ile Asp Val Lys Met Met Asn Met
                325                 330                 335
Glu Ala Ala Asn Leu Ala Glu Val Arg Ser Tyr Cys Tyr Leu Ala Thr
            340                 345                 350
Val Ser Asp Leu Ser Thr Lys Ala Ala Cys Pro Thr Met Gly Glu Ala
        355                 360                 365
His Asn Asp Lys Arg Ala Asp Pro Ala Phe Val Cys Arg Gln Gly Val
    370                 375                 380
Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys Gly Phe Phe Gly Lys Gly Ser
385                 390                 395                 400
Ile Asp Thr Cys Ala Lys Phe Ala Cys Ser Thr Lys Ala Ile Gly Arg
                405                 410                 415
Thr Ile Leu Lys Glu Asn Ile Lys Tyr Glu Val Ala Ile Phe Val His
            420                 425                 430
Gly Pro Thr Thr Val Glu Ser His Gly Asn Tyr Ser Thr Gln Val Gly
        435                 440                 445
Ala Thr Gln Ala Gly Arg Phe Ser Ile Thr Pro Ala Ala Pro Ser Tyr
    450                 455                 460
Thr Leu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Glu Val Thr Val Asp Cys Glu Pro
465                 470                 475                 480
Arg Ser Gly Ile Asp Thr Asn Ala Tyr Tyr Val Met Thr Val Gly Thr
                485                 490                 495
Lys Thr Phe Leu Val His Arg Glu Trp Phe Met Asp Leu Asn Leu Pro
            500                 505                 510
Trp Ser Ser Ala Gly Ser Thr Val Trp Arg Asn Arg Glu Thr Leu Met
        515                 520                 525
Glu Phe Glu Glu Pro His Ala Thr Lys Gln Ser Val Ile Ala Leu Gly
    530                 535                 540
Ser Gln Glu Gly Ala Leu His Gln Ala Leu Ala Gly Ala Ile Pro Val
545                 550                 555                 560
Glu Phe Ser Ser Asn Thr Val Lys Leu Thr Ser Gly His Leu Lys Cys
                565                 570                 575
Arg Val Lys Met Glu Lys Leu Gln Leu Lys Gly Thr Thr Tyr Gly Val
            580                 585                 590
Cys Ser Lys Ala Phe Lys Phe Leu Arg Thr Pro Val Asp Thr Gly His
        595                 600                 605
Gly Thr Val Val Leu Glu Leu Gln Tyr Thr Gly Thr Asp Gly Pro Cys
    610                 615                 620
Lys Val Pro Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu Asn Asp Leu Thr Pro Val
625                 630                 635                 640
Gly Arg Leu Val Thr Val Asn Pro Phe Val Ser Val Ala Thr Ala Asn
                645                 650                 655
Ala Lys Val Leu Ile Glu Leu Glu Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile
            660                 665                 670
Val Val Gly Arg Gly Glu Gln Gln Ile Asn His His Trp His Lys Ser
        675                 680                 685
Gly Ser Ser Ile Gly Lys Ala Phe Thr Thr Thr Leu Lys Gly Ala Gln
    690                 695                 700
Arg Leu Ala Ala Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly
705                 710                 715                 720
Gly Val Phe Thr Ser Val Gly Arg Ala Val His Gln Val Phe Gly Gly
                725                 730                 735
Ala Phe Arg Ser Leu Phe Gly Gly Met Ser Trp Ile Thr Gln Gly Leu
            740                 745                 750
Leu Gly Ala Leu Leu Leu Trp Met Gly Ile Asn Ala Arg Asp Arg Ser
        755                 760                 765
Ile Ala Leu Thr Phe Leu Ala Val Gly Gly Val Leu Leu Phe Leu Ser
    770                 775                 780
Val Asn Val Gly Ala Asp Gln Gly Cys Ala Ile Asn Phe Gly Lys Arg
785                 790                 795                 800
Glu Leu Lys Cys Gly Asp Gly Ile Phe Ile Phe Arg Asp Ser Asp Asp
                805                 810                 815
Trp Leu Asn Lys Tyr Ser Tyr Tyr Pro Glu Asp Pro Val Lys Leu Ala
            820                 825                 830
Ser Ile Val Lys Ala Ser Phe Glu Glu Gly Lys Cys Gly Leu Asn Ser
        835                 840                 845
Val Asp Ser Leu Glu His Glu Met Trp Arg Ser Arg Ala Asp Glu Ile
    850                 855                 860
Asn Ala Ile Phe Glu Glu Asn Glu Val Asp Ile Ser Val Val Val Gln
865                 870                 875                 880
Asp Pro Lys Asn Val Tyr Gln Arg Gly Thr His Pro Phe Ser Arg Ile
                885                 890                 895
Arg Asp Gly Leu Gln Tyr Gly Trp Lys Thr Trp Gly Lys Asn Leu Val
            900                 905                 910
Phe Ser Pro Gly Arg Lys Asn Gly Ser Phe Ile Ile Asp Gly Lys Ser
        915                 920                 925
Arg Lys Glu Cys Pro Phe Ser Asn Arg Val Trp Asn Ser Phe Gln Ile
    930                 935                 940
Glu Glu Phe Gly Thr Gly Val Phe Thr Thr Arg Val Tyr Met Asp Ala
945                 950                 955                 960
Val Phe Glu Tyr Thr Ile Asp Cys Asp Gly Ser Ile Leu Gly Ala Ala
                965                 970                 975
Val Asn Gly Lys Lys Ser Ala His Gly Ser Pro Thr Phe Trp Met Gly
            980                 985                 990
Ser His Glu Val Asn Gly Thr Trp Met Ile His Thr Leu Glu Ala Leu
        995                 1000                1005
Asp Tyr Lys Glu Cys Glu Trp Pro Leu Thr His Thr Ile Gly Thr
    1010                1015                1020
Ser Val Glu Glu Ser Glu Met Phe Met Pro Arg Ser Ile Gly Gly
    1025                1030                1035
Pro Val Ser Ser His Asn His Ile Pro Gly Tyr Lys Val Gln Thr
    1040                1045                1050
Asn Gly Pro Trp Met Gln Val Pro Leu Glu Val Lys Arg Glu Ala
    1055                1060                1065
Cys Pro Gly Thr Ser Val Ile Ile Asp Gly Asn Cys Asp Gly Arg
    1070                1075                1080
Gly Lys Ser Thr Arg Ser Thr Thr Asp Ser Gly Lys Val Ile Pro
    1085                1090                1095
Glu Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Met Pro Pro Val Ser Phe His
    1100                1105                1110
Gly Ser Asp Gly Cys Trp Tyr Pro Met Glu Ile Arg Pro Arg Lys
    1115                1120                1125
Thr His Glu Ser His Leu Val Arg Ser Trp Val Thr Ala Gly Glu
    1130                1135                1140
Ile His Ala Val Pro Phe Gly Leu Val Ser Met Met Ile Ala Met
    1145                1150                1155
Glu Val Val Leu Arg Lys Arg Gln Gly Pro Lys Gln Met Leu Val
    1160                1165                1170
Gly Gly Val Val Leu Leu Gly Ala Met Leu Val Gly Gln Val Thr
    1175                1180                1185
Leu Leu Asn Leu Leu Lys Leu Thr Val Ala Val Gly Leu His Phe
    1190                1195                1200
His Glu Met Asn Asn Gly Gly Asp Ala Met Tyr Met Ala Leu Ile
    1205                1210                1215
Ala Ala Phe Ser Ile Arg Pro Gly Leu Leu Ile Gly Phe Gly Leu
    1220                1225                1230
Arg Thr Leu Trn Ser Pro Arg Glu Arg Leu Val Leu Thr Leu Gly
    1235                1240                1245
Ala Ala Met Val Glu Ile Ala Leu Gly Gly Val Met Gly Gly Leu
    1250                1255                1260
Trp Lys Tyr Leu Asn Ala Val Ser Leu Cys Ile Leu Thr Ile Asn
    1265                1270                1275
Ala Val Ala Ser Arg Lys Ala Ser Asn Thr Ile Leu Pro Leu Met
    1280                1285                1290
Ala Leu Leu Thr Pro Val Thr Met Ala Glu Val Arg Leu Ala Ala
    1295                1300                1305
Met Phe Phe Cys Ala Met Val Ile Ile Gly Val Leu His Gln Asn
    1310                1315                1320
Phe Lys Asn Thr Ser Met Gln Lys Thr Ile Pro Leu Val Ala Leu
    1325                1330                1335
Thr Leu Thr Ser Tyr Leu Gly Leu Thr Gln Pro Phe Leu Gly Leu
    1340                1345                1350
Cys Ala Phe Leu Ala Thr Arg Ile Phe Gly Arg Arg Ser Ile Pro
    1355                1360                1365
Val Asn Glu Ala Leu Ala Ala Ala Gly Leu Val Gly Val Leu Ala
    1370                1375                1380
Gly Leu Ala Phe Gln Glu Met Glu Asn Phe Leu Gly Pro Ile Ala
    1385                1390                1395
Val Gly Gly Leu Leu Met Met Leu Val Ser Val Ala Gly Arg Val
    1400                1405                1410
Asp Gly Leu Glu Leu Lys Lys Leu Gly Glu Val Ser Trp Glu Glu
    1415                1420                1425
Glu Ala Glu Ile Ser Gly Ser Ser Ala Arg Tyr Asp Val Ala Leu
    1430                1435                1440
Ser Glu Gln Gly Glu Phe Lys Leu Leu Ser Glu Glu Lys Val Pro
    1445                1450                1455
Trp Asp Gln Val Val Met Thr Ser Leu Ala Leu Val Gly Ala Ala
    1460                1465                1470
Leu His Pro Phe Ala Leu Leu Leu Val Leu Ala Gly Trp Leu Phe
    1475                1480                1485
His Val Arg Gly Ala Arg Arg Ser Gly Asp Val Leu Trp Asp Ile
    1490                1495                1500
Pro Thr Pro Lys Ile Ile Glu Glu Cys Glu His Leu Glu Asp Gly
    1505                1510                1515
Ile Tyr Gly Ile Phe Gln Ser Thr Phe Leu Gly Ala Ser Gln Arg
    1520                1525                1530
Gly Val Gly Val Ala Gln Gly Gly Val Phe His Thr Met Trp His
    1535                1540                1545
Val Thr Arg Gly Ala Phe Leu Val Arg Asn Gly Lys Lys Leu Ile
    1550                1555                1560
Pro Ser Trp Ala Ser Val Lys Glu Asp Leu Val Ala Tyr Gly Gly
    1565                1570                1575
Ser Trp Lys Leu Glu Gly Arg Trp Asp Gly Glu Glu Glu Val Gln
    1580                1585                1590
Leu Ile Ala Ala Val Pro Gly Lys Asn Val Val Asn Val Gln Thr
    1595                1600                1605
Lys Pro Ser Leu Phe Lys Val Arg Asn Gly Gly Glu Ile Gly Ala
    1610                1615                1620
Val Ala Leu Asp Tyr Pro Ser Gly Thr Ser Gly Ser Pro Ile Val
    1625                1630                1635
Asn Arg Asn Gly Glu Val Ile Gly Leu Tyr Gly Asn Gly Ile Leu
    1640                1645                1650
Val Gly Asp Asn Ser Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Thr Glu Val
    1655                1660                1665
Lys Glu Glu Gly Lys Glu Glu Leu Gln Glu Ile Pro Thr Met Leu
    1670                1675                1680
Lys Lys Gly Met Thr Thr Val Leu Asp Phe His Pro Gly Ala Gly
    1685                1690                1695
Lys Thr Arg Arg Phe Leu Pro Gln Ile Leu Ala Glu Cys Ala Arg
    1700                1705                1710
Arg Arg Leu Arg Thr Leu Val Leu Ala Pro Thr Arg Val Val Leu
    1715                1720                1725
Ser Glu Met Lys Glu Ala Phe His Gly Leu Asp Val Lys Phe His
    1730                1735                1740
Thr Gln Ala Phe Ser Ala His Gly Ser Gly Arg Glu Val Ile Asp
    1745                1750                1755
Ala Met Cys His Ala Thr Leu Thr Tyr Arg Met Leu Glu Pro Thr
    1760                1765                1770
Arg Val Val Asn Trp Glu Val Ile Ile Met Asp Glu Ala His Phe
    1775                1780                1785
Leu Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly Trp Ala Ala His Arg
    1790                1795                1800
Ala Arg Ala Asn Glu Ser Ala Thr Ile Leu Met Thr Ala Thr Pro
    1805                1810                1815
Pro Gly Thr Ser Asp Glu Phe Pro His Ser Asn Gly Glu Ile Glu
    1820                1825                1830
Asp Val Gln Thr Asp Ile Pro Ser Glu Pro Trp Asn Thr Gly His
    1835                1840                1845
Asp Trp Ile Leu Ala Asp Lys Arg Pro Thr Ala Trp Phe Leu Pro
    1850                1855                1860
Ser Ile Arg Ala Ala Asn Val Met Ala Ala Ser Leu Arg Lys Ala
    1865                1870                1875
Gly Lys Ser Val Val Val Leu Asn Arg Lys Thr Phe Glu Arg Glu
    1880                1885                1890
Tyr Pro Thr Ile Lys Gln Lys Lys Pro Asp Phe Ile Leu Ala Thr
    1895                1900                1905
Asp Ile Ala Glu Met Gly Ala Asn Leu Cys Val Glu Arg Val Leu
    1910                1915                1920
Asp Cys Arg Thr Ala Phe Lys Pro Val Leu Val Asp Glu Gly Arg
    1925                1930                1935
Lys Val Ala Ile Lys Gly Pro Leu Arg Ile Ser Ala Ser Ser Ala
    1940                1945                1950
Ala Gln Arg Arg Gly Arg Ile Gly Arg Asn Pro Asn Arg Asp Gly
    1955                1960                1965
Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Glu Pro Thr Ser Glu Asn Asn Ala His
    1970                1975                1980
His Val Cys Trp Leu Glu Ala Ser Met Leu Leu Asp Asn Met Glu
    1985                1990                1995
Val Arg Gly Gly Met Val Ala Pro Leu Tyr Gly Val Glu Gly Thr
    2000                2005                2010
Lys Thr Pro Val Ser Pro Gly Glu Met Arg Leu Arg Asp Asp Gln
    2015                2020                2025
Arg Lys Val Phe Arg Glu Leu Val Arg Asn Cys Asp Leu Pro Val
    2030                2035                2040
Trp Leu Ser Trp Gln Val Ala Lys Ala Gly Leu Lys Thr Asn Asp
    2045                2050                2055
Arg Lys Trp Cys Phe Glu Gly Pro Glu Glu His Glu Ile Leu Asn
    2060                2065                2070
Asp Ser Gly Glu Thr Val Lys Cys Arg Ala Pro Gly Gly Ala Lys
    2075                2080                2085
Lys Pro Leu Arg Pro Arg Trp Cys Asp Glu Arg Val Ser Ser Asp
    2090                2095                2100
Gln Ser Ala Leu Ser Glu Phe Ile Lys Phe Ala Glu Gly Arg Arg
    2105                2110                2115
Gly Ala Ala Glu Val Leu Val Val Leu Ser Glu Leu Pro Asp Phe
    2120                2125                2130
Leu Ala Lys Lys Gly Gly Glu Ala Met Asp Thr Ile Ser Val Phe
    2135                2140                2145
Leu His Ser Glu Glu Gly Ser Arg Ala Tyr Arg Asn Ala Leu Ser
    2150                2155                2160
Met Met Pro Glu Ala Met Thr Ile Val Met Leu Phe Ile Leu Ala
    2165                2170                2175
Gly Leu Leu Thr Ser Gly Met Val Ile Phe Phe Met Ser Pro Lys
    2180                2185                2190
Gly Ile Ser Arg Met Ser Met Ala Met Gly Thr Met Ala Gly Cys
    2195                2200                2205
Gly Tyr Leu Met Phe Leu Gly Gly Val Lys Pro Thr His Ile Ser
    2210                2215                2220
Tyr Val Met Leu Ile Phe Phe Val Leu Met Val Val Val Ile Pro
    2225                2230                2235
Glu Pro Gly Gln Gln Arg Ser Ile Gln Asp Asn Gln Val Ala Tyr
    2240                2245                2250
Leu Ile Ile Gly Ile Leu Thr Leu Val Ser Ala Val Ala Ala Asn
    2255                2260                2265
Glu Leu Gly Met Leu Glu Lys Thr Lys Glu Asp Leu Phe Gly Lys
    2270                2275                2280
Lys Asn Leu Ile Pro Ser Ser Ala Ser Pro Trp Ser Trp Pro Asp
    2285                2290                2295
Leu Asp Leu Lys Pro Gly Ala Ala Trp Thr Val Tyr Val Gly Ile
    2300                2305                2310
Val Thr Met Leu Ser Pro Met Leu His His Trp Ile Lys Val Glu
    2315                2320                2325
Tyr Gly Asn Leu Ser Leu Ser Gly Ile Ala Gln Ser Ala Ser Val
    2330                2335                2340
Leu Ser Phe Met Asp Lys Gly Ile Pro Phe Met Lys Met Asn Ile
    2345                2350                2355
Ser Val Ile Met Leu Leu Val Ser Gly Trp Asn Ser Ile Thr Val
    2360                2365                2370
Met Pro Leu Leu Cys Gly Ile Gly Cys Ala Met Leu His Trp Ser
    2375                2380                2385
Leu Ile Leu Pro Gly Ile Lys Ala Gln Gln Ser Lys Leu Ala Gln
    2390                2395                2400
Arg Arg Val Phe His Gly Val Ala Lys Asn Pro Val Val Asp Gly
    2405                2410                2415
Asn Pro Thr Val Asp Ile Glu Glu Ala Pro Glu Met Pro Ala Leu
    2420                2425                2430
Tyr Glu Lys Lys Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Leu Ala Leu Ser Leu
    2435                2440                2445
Ala Ser Val Ala Met Cys Arg Thr Pro Phe Ser Leu Ala Glu Gly
    2450                2455                2460
Ile Val Leu Ala Ser Ala Ala Leu Gly Pro Leu Ile Glu Gly Asn
    2465                2470                2475
Thr Ser Leu Leu Trp Asn Gly Pro Met Ala Val Ser Met Thr Gly
    2480                2485                2490
Val Met Arg Gly Asn His Tyr Ala Phe Val Gly Val Met Tyr Asn
    2495                2500                2505
Leu Trp Lys Met Lys Thr Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asn Gly Lys
    2510                2515                2520
Thr Leu Gly Glu Val Trp Lys Arg Glu Leu Asn Leu Leu Asp Lys
    2525                2530                2535
Arg Gln Phe Glu Leu Tyr Lys Arg Thr Asp Ile Val Glu Val Asp
    2540                2545                2550
Arg Asp Thr Ala Arg Arg His Leu Ala Glu Gly Lys Val Asp Thr
    2555                2560                2565
Gly Val Ala Val Ser Arg Gly Thr Ala Lys Leu Arg Trp Phe His
    2570                2575                2580
Glu Arg Gly Tyr Val Lys Leu Glu Gly Arg Val Ile Asp Leu Gly
    2585                2590                2595
Cys Gly Arg Gly Gly Trp Cys Tyr Tyr Ala Ala Ala Gln Lys Glu
    2600                2605                2610
Val Ser Gly Val Lys Gly Phe Thr Leu Gly Arg Asp Gly His Glu
    2615                2620                2625
Lys Pro Met Asn Val Gln Ser Leu Gly Trn Asn Ile Ile Thr Phe
    2630                2635                2640
Lys Asp Lys Thr Asp Ile His Arg Leu Glu Pro Val Lys Cys Asp
    2645                2650                2655
Thr Leu Leu Cys Asp Ile Gly Glu Ser Ser Ser Ser Ser Val Thr
    2660                2665                2670
Glu Gly Glu Arg Thr Val Arg Val Leu Asp Thr Val Glu Lys Trp
    2675                2680                2685
Leu Ala Cys Gly Val Asp Asn Phe Cys Val Lys Val Leu Ala Pro
    2690                2695                2700
Tyr Met Pro Asp Val Leu Glu Lys Leu Glu Leu Leu Gln Arg Arg
    2705                2710                2715
Phe Gly Gly Thr Val Ile Arg Asn Pro Leu Ser Arg Asn Ser Thr
    2720                2725                2730
His Glu Met Tyr Tyr Val Ser Gly Ala Arg Ser Asn Val Thr Phe
    2735                2740                2745
Thr Val Asn Gln Thr Ser Arg Leu Leu Met Arg Arg Met Arg Arg
    2750                2755                2760
Pro Thr Gly Lys Val Thr Leu Glu Ala Asp Val Ile Leu Pro Ile
    2765                2770                2775
Gly Thr Arg Ser Val Glu Thr Asn Lys Gly Pro Leu Asn Lys Glu
    2780                2785                2790
Ala Ile Glu Glu Arg Val Glu Arg Lle Lys Ser Glu Tyr Met Thr
    2795                2800                2805
Ser Trp Phe Tyr Asp Asn Asp Asn Pro Tyr Arg Thr Trp His Tyr
    2810                2815                2820
Cys Gly Ser Tyr Val Thr Lys Thr Ser Gly Ser Ala Ala Ser Met
    2825                2830                2835
Val Asn Gly Val Ile Lys Ile Leu Thr Tyr Pro Trn Asn Arg Ile
    2840                2845                2850
Glu Glu Val Thr Arg Met Ala Met Thr Asp Thr Thr Pro Phe Gly
    2855                2860                2865
Gln Gln Arg Val Phe Lys Glu Lys Val Asp Thr Arg Ala Lys Asp
    2870                2875                2880
Pro Pro Ala Gly Thr Arg Lys Ile Met Lys Val Val Asn Arg Trp
    2885                2890                2895
Leu Phe Arg His Leu Ala Arg Glu Lys Asn Pro Arg Leu Cys Thr
    2900                2905                2910
Lys Glu Glu Phe Ile Ala Lys Val Arg Ser His Ala Ala Ile Gly
    2915                2920                2925
Ala Tyr Leu Glu Glu Gln Glu Gln Trp Lys Thr Ala Asn Glu Ala
    2930                2935                2940
Val Gln Asp Pro Lys Phe Trp Glu Leu Val Asp Glu Glu Arg Lys
    2945                2950                2955
Leu His Gln Gln Gly Arg Cys Arg Thr Cys Val Tyr Asn Met Met
    2960                2965                2970
Gly Lys Arg Glu Lys Lys Leu Ser Glu Phe Gly Lys Ala Lys Gly
    2975                2980                2985
Ser Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg Tyr Leu Glu
    2990                2995                3000
Phe Glu Ala Leu Gly Phe Leu Asn Glu Asp His Trp Ala Ser Arg
    3005                3010                3015
Glu Asn Ser Gly Gly Gly Val Glu Gly Ile Gly Leu Gln Tyr Leu
    3020                3025                3030
Gly Tyr Val Ile Arg Asp Leu Ala Ala Met Asp Gly Gly Gly Phe
    3035                3040                3045
Tyr Ala Asp Asp Thr Ala Gly Trp Asp Thr Arg Ile Thr Glu Ala
    3050                3055                3060
Asp Leu Asp Asp Glu Gln Glu Ile Leu Asn Tyr Met Ser Pro His
    3065                3070                3075
His Lys Lys Leu Ala Gln Ala Val Met Glu Met Thr Tyr Lys Asn
    3080                3085                3090
Lys Val Val Lys Val Leu Arg Pro Ala Pro Gly Gly Lys Ala Tyr
    3095                3100                3105
Met Asp Val Ile Ser Arg Arg Asp Gln Arg Gly Ser Gly Gln Val
    3110                3115                3120
Val Thr Tyr Ala Leu Asn Thr Ile Thr Asn Leu Lys Val Gln Leu
    3125                3130                3135
Ile Arg Met Ala Glu Ala Glu Met Val Ile His His Gln His Val
    3140                3145                3150
Gln Asp Cys Asp Glu Ser Val Leu Thr Arg Leu Glu Ala Trp Leu
    3155                3160                3165
Thr Glu His Gly Cys Asp Arg Leu Lys Arg Met Ala Val Ser Gly
    3170                3175                3180
Asp Asp Cys Val Val Arg Pro Ile Asp Asp Arg Phe Gly Leu Ala
    3185                3190                3195
Leu Ser His Leu Asn Ala Met Ser Lys Val Arg Lys Asp Ile Ser
    3200                3205                3210
Glu Trp Gln Pro Ser Lys Gly Trp Asn Asp Trp Glu Asn Val Pro
    3215                3220                3225
Phe Cys Ser His His Phe His Glu Leu Gln Leu Lys Asp Gly Arg
    3230                3235                3240
Arg Ile Val Val Pro Cys Arg Glu Gln Asn Glu Leu Ile Gly Arg
    3245                3250                3255
Gly Arg Val Ser Pro Gly Asn Gly Trp Met Ile Lys Glu Thr Ala
    3260                3265                3270
Cys Leu Ser Lys Ala Tyr Ala Asn Met Trp Ser Leu Met Tyr Phe
    3275                3280                3285
His Lys Arg Asp Met Arg Leu Leu Ser Leu Ala Val Ser Ser Ala
    3290                3295                3300
Val Pro Thr Ser Trp Val Pro Gln Gly Arg Thr Thr Trp Ser Ile
    3305                3310                3315
His Gly Lys Gly Glu Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Glu Val
    3320                3325                3330
Trp Asn Arg Val Trp Ile Thr Asn Asn Pro His Met Gln Asp Lys
    3335                3340                3345
Thr Met Val Lys Lys Trp Arg Asp Val Pro Tyr Leu Thr Lys Arg
    3350                3355                3360
Gln Asp Lys Leu Cys Gly Ser Leu Ile Gly Met Thr Asn Arg Ala
    3365                3370                3375
Thr Trp Ala Ser His Ile His Leu Val Ile His Arg Ile Arg Thr
    3380                3385                3390
Leu Ile Gly Gln Glu Lys Tyr Thr Asp Tyr Leu Thr Val Met Asp
    3395                3400                3405
Arg Tyr Ser Val Asp Ala Asp Leu Gln Leu Gly Glu Leu Ile
    3410                3415                3420
<210>22
<211>10896
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和西尼罗病毒
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(1)
<223>n是a,c,g,或t
<220>
<221>CDS
<222>(119)..(10384)
<400>22
ngtaaatcct gtgtgctaat tgaggtgcat tggtctgcaa atcgagttgc taggcaataa    60
acacatttgg attaatttta atcgttcgtt gagcgattag cagagaactg accagaac     118
atg tct ggt cgt aaa gct cag gga aaa acc ctg ggc gtc aat atg gta     166
Met Ser Gly Arg Lys Ala Gln Gly Lys Thr Leu Gly Val Asn Met Val
1               5                   10                  15
cga cga gga gtt cgc tcc ttg tca aac aaa ata aaa caa aaa aea aaa     214
Arg Arg Gly Val Arg Ser Leu Ser Asn Lys Ile Lys Gln Lys Thr Lys
            20                  25                  30
caa att gga aac aga cct gga cct tca aga ggt gtt caa gga ttt atc     262
Gln Ile Gly Asn Arg Pro Gly Pro Ser Arg Gly Val Gln Gly Phe Ile
        35                  40                  45
ttt ttc ttt ttg ttc aac att ttg act gga aaa aag atc aca gcc cac     310
Phe Phe Phe Leu Phe Asn Ile Leu Thr Gly Lys Lys Ile Thr Ala His
    50                  55                  60
cta aag agg ttg tgg aaa atg ctg gac cca aga caa ggc ttg gct gtt     358
Leu Lys Arg Leu Trp Lys Met Leu Asp Pro Arg Gln Gly Leu Ala Val
65                  70                  75                  80
cta agg aaa gtc aag aga gtg gtg gcc agt ttg atg aga gga ttg tcc     406
Leu Arg Lys Val Lys Arg Val Val Ala Ser Leu Met Arg Gly Leu Ser
                85                  90                  95
tca agg aaa cgc cgt tcc cat gat gtt ctg act gtg caa ttc cta att     454
Ser Arg Lys Arg Arg Ser His Asp Val Leu Thr Val Gln Phe Leu Ile
            100                 105                 110
ttg gga atg ctg ttg atg acg ggt gga gtt acc ctc tct aac ttc caa     502
Leu Gly Met Leu Leu Met Thr Gly Gly Val Thr Leu Ser Asn Phe Gln
        115                 120                 125
ggg aag gtg atg atg acg gta aat gct act gac gtc aca gat gtc atc     550
Gly Lys Val Met Met Thr Val Asn Ala Thr Asp Val Thr Asp Val Ile
    130                 135                 140
acg att cca aca gct gct gga aag aac cta tgc att gtc aga gca atg     598
Thr Ile Pro Thr Ala Ala Gly Lys Asn Leu Cys Ile Val Arg Ala Met
145                 150                 155                 160
gat gtg gga tac atg tgc gat gat act atc act tat gaa tgc cca gtg     646
Asp Val Gly Tyr Met Cys Asp Asp Thr Ile Thr Tyr Glu Cys Pro Val
                165                 170                 175
ctg tcg gct ggt aat gat cca gaa gac atc gac tgt tgg tgc aca aag     694
Leu Ser Ala Gly Asn Asp Pro Glu Asp Ile Asp Cys Trp Cys Thr Lys
            180                 185                 190
tca gca gtc tac gtc agg tat gga aga tgc acc aag aca cgc cac tca     742
Ser Ala Val Tyr Val Arg Tyr Gly Arg Cys Thr Lys Thr Arg His Ser
        195                 200                 205
aga cgc agt cgg agg tca ctg aca gtg cag aca cac gga gaa agc act     790
Arg Arg Ser Arg Arg Ser Leu Thr Val Gln Thr His Gly Glu Ser Thr
    210                 215                 220
cta gcg aac aag aag ggg gct tgg atg gac agc acc aag gcc aca agg     838
Leu Ala Asn Lys Lys Gly Ala Trp Met Asp Ser Thr Lys Ala Thr Arg
225                 230                 235                 240
tat ttg gta aaa aca gaa tca tgg atc ttg agg aac cct gga tat gcc     886
Tyr Leu Val Lys Thr Glu Ser Trp Ile Leu Arg Asn Pro Gly Tyr Ala
                245                 250                 255
ctg gtg gca gcc gtc att ggt tgg atg ctt ggg agc aac acc atg cag     934
Leu Val Ala Ala Val Ile Gly Trp Met Leu Gly Ser Asn Thr Met Gln
            260                 265                 270
aga gtt gtg ttt gtc gtg cca ttg ctt ttg gtg gcc cca gct tac agc     982
Arg Val Val Phe Val Val Pro Leu Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser
        275                 280                 285
ttc aac tgc ctt gga atg agc aac aga gac ttc ttg gaa gga gtg tct    1030
Phe Asn Cys Leu Gly Met Ser Asn Arg Asp Phe Leu Glu Gly Val Ser
    290                 295                 300
gga gca aca tgg gtg gat ttg gtt ctc gaa ggc gac agc tgc gtg act    1078
Gly Ala Thr Trp Val Asp Leu Val Leu Glu Gly Asp Ser Cys Val Thr
305                 310                 315                 320
atc atg tct aag gac aag cct acc atc gac gtc aag atg atg aat atg    1126
Ile Met Ser Lys Asp Lys Pro Thr Ile Asp Val Lys Met Met Asn Met
                325                 330                 335
gag gcg gcc aac ctg gca gag gtc cgc agt tat tgc tat ttg gct acc    1174
Glu Ala Ala Asn Leu Ala Glu Val Arg Ser Tyr Cys Tyr Leu Ala Thr
            340                 345                 350
gtc agc gat ctc tcc acc aaa gct gca tgc ccg acc atg gga gaa gct    1222
Val Ser Asp Leu Ser Thr Lys Ala Ala Cys Pro Thr Met Gly Glu Ala
        355                 360                 365
cac aat gac aaa cgt gct gac cca gct ttt gtg tgc aga caa gga gtg    1270
His Asn Asp Lys Arg Ala Asp Pro Ala Phe Val Cys Arg Gln Gly Val
    370                 375                 380
gtg gac agg ggc tgg ggc aac ggc tgc gga ttt ttt ggc aaa gga tcc    1318
Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys Gly Phe Phe Gly Lys Gly Ser
385                 390                 395                 400
att gac aca tgc gcc aaa ttt gcc tgc tct acc aag gca ata gga aga    1366
Ile Asp Thr Cys Ala Lys Phe Ala Cys Ser Thr Lys Ala Ile Gly Arg
                405                 410                 415
acc atc ttg aaa gag aat atc aag tac gaa gtg gcc att ttt gtc cat    1414
Thr Ile Leu Lys Glu Asn Ile Lys Tyr Glu Val Ala Ile Phe Val His
            420                 425                 430
gga cca act act gtg gag tcg cac gga aat tac tcc aca cag gtt gga    1462
Gly Pro Thr Thr Val Glu Ser His Gly Asn Tyr Ser Thr Gln Val Gly
        435                 440                 445
gcc act cag gcc ggc cga ttc agc atc act cct gct gcg cct tca tac    1510
Ala Thr Gln Ala Gly Arg Phe Ser Ile Thr Pro Ala Ala Pro Ser Tyr
    450                 455                 460
aca cta aag ctt gga gaa tat gga gag gtg aca gtg gac tgt gaa cca    1558
Thr Leu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Glu Val Thr Val Asp Cys Glu Pro
465                 470                 475                 480
cgg tca ggg att gac acc aat gca tac tac gtg atg act gtt gga aca    1606
Arg Ser Gly Ile Asp Thr Asn Ala Tyr Tyr Val Met Thr Val Gly Thr
                485                 490                 495
aag acg ttc ttg gtc cat cgt gag tgg ttc atg gac ctc aac ctc cct    1654
Lys Thr Phe Leu Val His Arg Glu Trp Phe Met Asp Leu Asn Leu Pro
            500                 505                 510
tgg agc agt gct gga agt act gtg tgg agg aac aga gag acg tta atg    1702
Trp Ser Ser Ala Gly Ser Thr Val Trp Arg Asn Arg Glu Thr Leu Met
        515                 520                 525
gag ttt gag gaa cca cac gcc acg aag cag tct gtg ata gca ttg ggc    1750
Glu Phe Glu Glu Pro His Ala Thr Lys Gln Ser Val Ile Ala Leu Gly
    530                 535                 540
tca caa gag gga gct ctg cat caa gct ttg gct gga gcc att cct gtg    1798
Ser Gln Glu Gly Ala Leu His Gln Ala Leu Ala Gly Ala Ile Pro Val
545                 550                 555                 560
gaa ttt tca agc aac act gtc aag ttg acg tcg ggt cat ttg aag tgt    1846
Glu Phe Ser Ser Asn Thr Val Lys Leu Thr Ser Gly His Leu Lys Cys
                565                 570                 575
aga gtg aag atg gaa aaa ttg cag ttg aag gga aca acc tat ggc gtc    1894
Arg Val Lys Met Glu Lys Leu Gln Leu Lys Gly Thr Thr Tyr Gly Val
            580                 585                 590
tgt tca aag gct ttc aag ttt ctt agg act ccc gtg gac acc ggt cac    1942
Cys Ser Lys Ala Phe Lys Phe Leu Arg Thr Pro Val Asp Thr Gly His
        595                 600                 605
ggc act gtg gtg ttg gaa ttg cag tac act ggc acg gat gga cct tgc    1990
Gly Thr Val Val Leu Glu Leu Gln Tyr Thr Gly Thr Asp Gly Pro Cys
    610                 615                 620
aaa gtt cct atc tcg tca gtg gct tca ttg aac gac cta acg cca gtg    2038
Lys Val Pro Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu Asn Asp Leu Thr Pro Val
625                 630                 635                 640
ggc aga ttg gtc act gtc aac cct ttt gtt tca gtg gcc acg gcc aac    2086
Gly Arg Leu Val Thr Val Asn Pro Phe Val Ser Val Ala Thr Ala Asn
                645                 650                 655
gct aag gtc ctg att gaa ttg gaa cca ccc ttt gga gac tca tac ata    2134
Ala Lys Val Leu Ile Glu Leu Glu Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile
            660                 665                 670
gtg gtg ggc aga gga gaa caa cag atc aat cac cat tgg cac aag tct    2182
Val Val Gly Arg Gly Glu Gln Gln Ile Asn His His Trp His Lys Ser
        675                 680                 685
gga agc agc att ggc aaa gcc ttt aca acc acc ctc aaa gga gcg cag    2230
Gly Ser Ser Ile Gly Lys Ala Phe Thr Thr Thr Leu Lys Gly Ala Gln
    690                 695                 700
aga cta gcc gct cta gga gac aca gct tgg gac ttt gga tca gtt gga    2278
Arg Leu Ala Ala Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly
705                 710                 715                 720
ggg gtg ttc act agt gtt ggg cgg gct gtc cat caa gtg ttc gga gga    2326
Gly Val Phe Thr Ser Val Gly Arg Ala Val His Gln Val Phe Gly Gly
                725                 730                 735
gca ttc cgc tca ctg ttc gga ggc atg tcc tgg ata acg caa gga ttg    2374
Ala Phe Arg Ser Leu Phe Gly Gly Met Ser Trp Ile Thr Gln Gly Leu
            740                 745                 750
ctg ggg gct ctc ctg ttg tgg atg ggc atc aat gct cgt gat agg tcc    2422
Leu Gly Ala Leu Leu Leu Trp Met Gly Ile Asn Ala Arg Asp Arg Ser
        755                 760                 765
ata gct ctc acg ttt ctc gca gtt gga gga gtt ctg ctc ttc ctc tcc    2470
Ile Ala Leu Thr Phe Leu Ala Val Gly Gly Val Leu Leu Phe Leu Ser
    770                 775                 780
gtg aac gtg ggc gcc gat caa gga tgc gcc atc aac ttt ggc aag aga    2518
Val Asn Val Gly Ala Asp Gln Gly Cys Ala Ile Asn Phe Gly Lys Arg
785                 790                 795                 800
gag ctc aag tgc gga gat ggt atc ttc ata ttt aga gac tct gat gac    2566
Glu Leu Lys Cys Gly Asp Gly Ile Phe Ile Phe Arg Asp Ser Asp Asp
                805                 810                 815
tgg ctg aac aag tac tca tac tat cca gaa gat cct gtg aag ctt gca    2614
Trp Leu Asn Lys Tyr Ser Tyr Tyr Pro Glu Asp Pro Val Lys Leu Ala
            820                 825                 830
tca ata gtg aaa gcc tct ttt gaa gaa ggg aag tgt ggc cta aat tca    2662
Ser Ile Val Lys Ala Ser Phe Glu Glu Gly Lys Cys Gly Leu Asn Ser
        835                 840                 845
gtt gac tcc ctt gag cat gag atg tgg aga agc agg gca gat gag atc    2710
Val Asp Ser Leu Glu His Glu Met Trp Arg Ser Arg Ala Asp Glu Ile
    850                 855                 860
aat gcc att ttt gag gaa aac gag gtg gac att tct gtt gtc gtg cag    2758
Asn Ala Ile Phe Glu Glu Asn Glu Val Asp Ile Ser Val Val Val Gln
865                 870                 875                 880
gat cca aag aat gtt tac cag aga gga act cat cca ttt tcc aga att    2806
Asp Pro Lys Asn Val Tyr Gln Arg Gly Thr His Pro Phe Ser Arg Ile
                885                 890                 895
cgg gat ggt ctg cag tat ggt tgg aag act tgg ggt aag aac ctt gtg    2854
Arg Asp Gly Leu Gln Tyr Gly Trp Lys Thr Trp Gly Lys Asn Leu Val
            900                 905                 910
ttc tcc cca ggg agg aag aat gga agc ttc atc ata gat gga aag tcc    2902
Phe Ser Pro Gly Arg Lys Asn Gly Ser Phe Ile Ile Asp Gly Lys Ser
        915                 920                 925
agg aaa gaa tgc ccg ttt tca aac cgg gtc tgg aat tct ttc cag ata    2950
Arg Lys Glu Cys Pro Phe Ser Asn Arg Val Trp Asn Ser Phe Gln Ile
    930                 935                 940
gag gag ttt ggg acg gga gtg ttc acc aca cgc gtg tac atg gac gca    2998
Glu Glu Phe Gly Thr Gly Val Phe Thr Thr Arg Val Tyr Met Asp Ala
945                 950                 955                 960
gtc ttt gaa tac acc ata gac tgc gat gga tct atc ttg ggt gca gcg    3046
Val Phe Glu Tyr Thr Ile Asp Cys Asp Gly Ser Ile Leu Gly Ala Ala
                965                 970                 975
gtg aac gga aaa aag agt gcc cat ggc tct cca aca ttt tgg atg gga    3094
Val Asn Gly Lys Lys Ser Ala His Gly Ser Pro Thr Phe Trp Met Gly
            980                 985                 990
agt cat gaa gta aat ggg aca tgg atg atc cac acc ttg gag gca tta    3142
Ser His Glu Val Asn Gly Thr Trp Met Ile His Thr Leu Glu Ala Leu
        995                 1000                1005
gat tac aag gag tgt gag tgg cca ctg aca cat acg att gga aca        3187
Asp Tyr Lys Glu Cys Glu Trp Pro Leu Thr His Thr Ile Gly Thr
    1010                1015                1020
tca gtt gaa gag agt gaa atg ttc atg ccg aga tca atc gga ggc        3232
Ser Val Glu Glu Ser Glu Met Phe Met Pro Arg Ser Ile Gly Gly
    1025                1030                1035
cca gtt agc tct cac aat cat atc cct gga tac aag gtt cag acg        3277
Pro Val Ser Ser His Asn His Ile Pro Gly Tyr Lys Val Gln Thr
    1040                1045                1050
aac gga cct tgg atg cag gta cca cta gaa gtg aag aga gaa gct        3322
Asn Gly Pro Trp Met Gln Val Pro Leu Glu Val Lys Arg Glu Ala
    1055                1060                1065
tgc cca ggg act agc gtg atc att gat ggc aac tgt gat gga cgg        3367
Cys Pro Gly Thr Ser Val Ile Ile Asp Gly Asn Cys Asp Gly Arg
    1070                1075                1080
gga aaa tca acc aga tcc acc acg gat agc ggg aaa gtt att cct        3412
Gly Lys Ser Thr Arg Ser Thr Thr Asp Ser Gly Lys Val Ile Pro
    1085                1090                1095
gaa tgg tgt tgc cgc tcc tgc aca atg ccg cct gtg agc ttc cat        3457
Glu Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Met Pro Pro Val Ser Phe His
    1100                1105                1110
ggt agt gat ggg tgt tgg tat ccc atg gaa att agg cca agg aaa        3502
Gly Ser Asp Gly Cys Trp Tyr Pro Met Glu Ile Arg Pro Arg Lys
    1115                1120                1125
acg cat gaa agc cat ctg gtg cgc tcc tgg gtt aca gct gga gaa        3547
Thr His Glu Ser His Leu Val Arg Ser Trp Val Thr Ala Gly Glu
    1130                1135                1140
ata cat gct gtc cct ttt ggt ttg gtg agc atg atg ata gca atg        3592
Ile His Ala Val Pro Phe Gly Leu Val Ser Met Met Ile Ala Met
    1145                1150                1155
gaa gtg gtc cta agg aaa aga cag gga cca aag caa atg ttg gtt        3637
Glu Val Val Leu Arg Lys Arg Gln Gly Pro Lys Gln Met Leu Val
    1160                1165                1170
gga gga gta gtg ctc ttg gga gca atg ctg gtc ggg caa gta act        3682
Gly Gly Val Val Leu Leu Gly Ala Met Leu Val Gly Gln Val Thr
    1175                1180                1185
ctc ctt gat ttg ctg aaa ctc aca gtg gct gtg gga ttg cat ttc        3727
Leu Leu Asp Leu Leu Lys Leu Thr Val Ala Val Gly Leu His Phe
    1190                1195                1200
cat gag atg aac aat gga gga gac gcc atg tat atg gcg ttg att        3772
His Glu Met Asn Asn Gly Gly Asp Ala Met Tyr Met Ala Leu Ile
    1205                1210                1215
gct gcc ttt tca atc aga cca ggg ctg ctc atc ggc ttt ggg ctc        3817
Ala Ala Phe Ser Ile Arg Pro Gly Leu Leu Ile Gly Phe Gly Leu
    1220                1225                1230
agg acc cta tgg agc cct cgg gaa cgc ctt gtg ctg acc cta gga        3862
Arg Thr Leu Trp Ser Pro Arg Glu Arg Leu Val Leu Thr Leu Gly
    1235                1240                1245
gca gcc atg gtg gag att gcc ttg ggt ggc gtg atg ggc ggc ctg        3907
Ala Ala Met Val Glu Ile Ala Leu Gly Gly Val Met Gly Gly Leu
    1250                1255                1260
tgg aag tat cta aat gca gtt tct ctc tgc atc ctg aca ata aat        3952
Trp Lys Tyr Leu Asn Ala Val Ser Leu Cys Ile Leu Thr Ile Asn
    1265                1270                1275
gct gtt gct tct agg aaa gca tca aat acc atc ttg ccc ctc atg        3997
Ala Val Ala Ser Arg Lys Ala Ser Asn Thr Ile Leu Pro Leu Met
    1280                1285                1290
gct ctg ttg aca cct gtc act atg gct gag gtg aga ctt gcc gca        4042
Ala Leu Leu Thr Pro Val Thr Met Ala Glu Val Arg Leu Ala Ala
    1295                1300                1305
atg ttc ttt tgt gcc atg gtt atc ata ggg gtc ctt cac cag aat        4087
Met Phe Phe Cys Ala Met Val Ile Ile Gly Val Leu His Gln Asn
    1310                1315                1320
ttc aag gac acc tcc atg cag aag act ata cct ctg gtg gcc ctc        4132
Phe Lys Asp Thr Ser Met Gln Lys Thr Ile Pro Leu Val Ala Leu
    1325                1330                1335
aca ctc aca tct tac ctg ggc ttg aca caa cct ttt ttg ggc ctg        4177
Thr Leu Thr Ser Tyr Leu Gly Leu Thr Gln Pro Phe Leu Gly Leu
    1340                1345                1350
tgt gca ttt ctg gca acc cgc ata ttt ggg cga agg agt atc cca        4222
Cys Ala Phe Leu Ala Thr Arg Ile Phe Gly Arg Arg Ser Ile Pro
    1355                1360                1365
gtg aat gag gca ctc gca gca gct ggt cta gtg gga gtg ctg gca        4267
Val Asn Glu Ala Leu Ala Ala Ala Gly Leu Val Gly Val Leu Ala
    1370                1375                1380
gga ctg gct ttt cag gag atg gag aac ttc ctt ggt ccg att gca        4312
Gly Leu Ala Phe Gln Glu Met Glu Asn Phe Leu Gly Pro Ile Ala
    1385                 1390                1395
gtt gga gga ctc ctg atg atg ctg gtt agc gtg gct ggg agg gtg        4357
Val Gly Gly Leu Leu Met Met Leu Val Ser Val Ala Gly Arg Val
    1400                1405                1410
gat ggg cta gag ctc aag aag ctt ggt gaa gtt tca tgg gaa gag        4402
Asp Gly Leu Glu Leu Lys Lys Leu Gly Glu Val Ser Trp Glu Glu
    1415                1420                1425
gag gcg gag atc agc ggg agt tcc gcc cgc tat gat gtg gca ctc        4447
Glu Ala Glu Ile Ser Gly Ser Ser Ala Arg Tyr Asp Val Ala Leu
    1430                1435                1440
agt gaa caa ggg gag ttc aag ctg ctt tct gaa gag aaa gtg cca        4492
Ser Glu Gln Gly Glu Phe Lys Leu Leu Ser Glu Glu Lys Val Pro
    1445                1450                1455
tgg gac cag gtt gtg atg acc tcg ctg gcc ttg gtt ggg gct gcc        4537
Trp Asp Gln Val Val Met Thr Ser Leu Ala Leu Val Gly Ala Ala
    1460                1465                1470
ctc cat cca ttt gct ctt ctg ctg gtc ctt gct ggg tgg ctg ttt        4582
Leu His Pro Phe Ala Leu Leu Leu Val Leu Ala Gly Trp Leu Phe
    1475                1480                1485
cat gtc agg gga gct agg aga agt ggg gat gtc ttg tgg gat att        4627
His Val Arg Gly Ala Arg Arg Ser Gly Asp Val Leu Trp Asp Ile
    1490                1495                1500
ccc act cct aag atc atc gag gaa tgt gaa cat ctg gag gat ggg        4672
Pro Thr Pro Lys Ile Ile Glu Glu Cys Glu His Leu Glu Asp Gly
    1505                1510                1515
att tat ggc ata ttc cag tca acc ttc ttg ggg gcc tcc cag cga        4717
Ile Tyr Gly Ile Phe Gln Ser Thr Phe Leu Gly Ala Ser Gln Arg
    1520                1525                1530
gga gtg gga gtg gca cag gga ggg gtg ttc cac aca atg tgg cat        4762
Gly Val Gly Val Ala Gln Gly Gly Val Phe His Thr Met Trp His
    1535                1540                1545
gtc aca aga gga gct ttc ctt gtc agg aat ggc aag aag ttg att        4807
Val Thr Arg Gly Ala Phe Leu Val Arg Asn Gly Lys Lys Leu Ile
    1550                 1555                 1560
cca tct tgg gct tca gta aag gaa gac ctt gtc gcc tat ggt ggc        4852
Pro Ser Trp Ala Ser Val Lys Glu Asp Leu Val Ala Tyr Gly Gly
    1565                1570                1575
tca tgg aag ttg gaa ggc aga tgg gat gga gag gaa gag gtc cag        4897
Ser Trp Lys Leu Glu Gly Arg Trp Asp Gly Glu Glu Glu Val Gln
    1580                1585                1590
ttg atc gcg gct gtt cca gga aag aac gtg gtc aac gtc cag aca        4942
Leu Ile Ala Ala Val Pro Gly Lys Asn Val Val Asn Val Gln Thr
    1595                1600                1605
aaa ccg agc ttg ttc aaa gtg agg aat ggg gga gaa atc ggg gct        4987
Lys Pro Ser Leu Phe Lys Val Arg Asn Gly Gly Glu Ile Gly Ala
    1610                1615                1620
gtc gct ctt gac tat ccg agt ggc act tca gga tct cct att gtt        5032
Val Ala Leu Asp Tyr Pro Ser Gly Thr Ser Gly Ser Pro Ile Val
    1625                1630                1635
aac agg aac gga gag gtg att ggg ctg tac ggc aat ggc atc ctt        5077
Asn Arg Asn Gly Glu Val Ile Gly Leu Tyr Gly Asn Gly Ile Leu
    1640                1645                1650
gtc ggt gac aac tcc ttc gtg tcc gcc ata tcc cag act gag gtg        5122
Val Gly Asp Asn Ser Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Thr Glu Val
    1655                1660                1665
aag gaa gaa gga aag gag gag ctc caa gag atc ccg aca atg cta        5167
Lys Glu Glu Gly Lys Glu Glu Leu Gln Glu Ile Pro Thr Met Leu
    1670                1675                1680
aag aaa gga atg aca act gtc ctt gat ttt cat cct gga gct ggg        5212
Lys Lys Gly Met Thr Thr Val Leu Asp Phe His Pro Gly Ala Gly
    1685                1690                1695
aag aca aga cgt ttc ctc cca cag atc ttg gcc gag tgc gca cgg        5257
Lys Thr Arg Arg Phe Leu Pro Gln Ile Leu Ala Glu Cys Ala Arg
    1700                1705                1710
aga cgc ttg cgc act ctt gtg ttg gcc ccc acc agg gtt gtt ctt        5302
Arg Arg Leu Arg Thr Leu Val Leu Ala Pro Thr Arg Val Val Leu
    1715                1720                1725
tct gaa atg aag gag gct ttt cac ggc ctg gac gtg aaa ttc cac        5347
Ser Glu Met Lys Glu Ala Phe His Gly Leu Asp Val Lys Phe His
    1730                1735                1740
aca cag gct ttt tcc gct cac ggc agc ggg aga gaa gtc att gat        5392
Thr Gln Ala Phe Ser Ala His Gly Ser Gly Arg Glu Val Ile Asp
    1745                1750                1755
gcc atg tgc cat gcc acc cta act tac agg atg ttg gaa cca act        5437
Ala Met Cys His Ala Thr Leu Thr Tyr Arg Met Leu Glu Pro Thr
    1760                1765                1770
agg gtt gtt aac tgg gaa gtg atc att atg gat gaa gcc cat ttt        5482
Arg Val Val Asn Trp Glu Val Ile Ile Met Asp Glu Ala His Phe
    1775                1780                1785
ttg gat cca gcc agc ata gcc gct aga ggt tgg gca gcg cac aga        5527
Leu Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly Trp Ala Ala His Arg
    1790                1795                1800
gct agg gca aat gaa agt gca aca atc ttg atg aca gcc aca ccg        5572
Ala Arg Ala Asn Glu Ser Ala Thr Ile Leu Met Thr Ala Thr Pro
    1805                1810                1815
cct ggg act agt gat gaa ttt cca cat tca aat ggt gaa ata gaa        5617
Pro Gly Thr Ser Asp Glu Phe Pro His Ser Asn Gly Glu Ile Glu
    1820                1825                1830
gat gtt caa acg gac ata ccc agt gag ccc tgg aac aca ggg cat        5662
Asp Val Gln Thr Asp Ile Pro Ser Glu Pro Trp Asn Thr Gly His
    1835                1840                1845
gac tgg atc ctg gct gac aaa agg ccc acg gca tgg ttc ctt cca        5707
Asp Trp Ile Leu Ala Asp Lys Arg Pro Thr Ala Trp Phe Leu Pro
    1850               1855                1860
tcc atc aga gct gca aat gtc atg gct gcc tct ttg cgt aag gct        5752
Ser Ile Arg Ala Ala Asn Val Met Ala Ala Ser Leu Arg Lys Ala
    1865                1870                1875
gga aag agt gtg gtg gtc ctg aac agg aaa acc ttt gag aga gaa        5797
Gly Lys Ser Val Val Val Leu Asn Arg Lys Thr Phe Glu Arg Glu
    1880                1885                1890
tac ccc acg ata aag cag aag aaa cct gac ttt ata ttg gcc act        5842
Tyr Pro Thr Ile Lys Gln Lys Lys Pro Asp Phe Ile Leu Ala Thr
    1895                1900                1905
gac ata gct gaa atg gga gcc aac ctt tgc gtg gag cga gtg ctg        5887
Asp Ile Ala Glu Met Gly Ala Asn Leu Cys Val Glu Arg Val Leu
    1910                1915                1920
gat tgc agg acg gct ttt aag cct gtg ctt gtg gat gaa ggg agg        5932
Asp Cys Arg Thr Ala Phe Lys Pro Val Leu Val Asp Glu Gly Arg
    1925                1930                1935
aag gtg gca ata aaa ggg cca ctt cgt atc tcc gca tcc tct gct        5977
Lys Val Ala Ile Lys Gly Pro Leu Arg Ile Ser Ala Ser Ser Ala
    1940                1945                1950
gct caa agg agg ggg cgc att ggg aga aat ccc aac aga gat gga        6022
Ala Gln Arg Arg Gly Arg Ile Gly Arg Asn Pro Asn Arg Asp Gly
    1955                1960                1965
gac tca tac tac tat tct gag cct aca agt gaa aat aat gcc cac        6067
Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Glu Pro Thr Ser Glu Asn Asn Ala His
    1970                1975                1980
cac gtc tgc tgg ttg gag gcc tca atg ctc ttg gac aac atg gag        6112
His Val Cys Trp Leu Glu Ala Ser Met Leu Leu Asp Asn Met Glu
    1985                1990                1995
gtg agg ggt gga atg gtc gcc cca ctc tat ggc gtt gaa gga act        6157
Val Arg Gly Gly Met Val Ala Pro Leu Tyr Gly Val Glu Gly Thr
    2000                2005                2010
aaa aca cca gtt tcc cct ggt gaa atg aga ctg agg gat gac cag        6202
Lys Thr Pro Val Ser Pro Gly Glu Met Arg Leu Arg Asp Asp Gln
    2015                2020                2025
agg aaa gtc ttc aga gaa cta gtg agg aat tgt gac ctg ccc gtt        6247
Arg Lys Val Phe Arg Glu Leu Val Arg Asn Cys Asp Leu Pro Val
    2030                2035                2040
tgg ctt tcg tgg caa gtg gcc aag gct ggt ttg aag acg aat gat        6292
Trp Leu Ser Trp Gln Val Ala Lys Ala Gly Leu Lys Thr Asn Asp
    2045                2050                2055
cgt aag tgg tgt ttt gaa ggc cct gag gaa cat gag atc ttg aat        6337
Arg Lys Trp Cys Phe Glu Gly Pro Glu Glu His Glu Ile Leu Asn
    2060                2065                2070
gac agc ggt gaa aca gtg aag tgc agg gct cct gga gga gca aag        6382
Asp Ser Gly Glu Thr Val Lys Cys Arg Ala Pro Gly Gly Ala Lys
    2075                2080                2085
aag cct ctg cgc cca agg tgg tgt gat gaa agg gtg tca tct gac        6427
Lys Pro Leu Arg Pro Arg Trp Cys Asp Glu Arg Val Ser Ser Asp
    2090                2095                2100
cag agt gcg ctg tct gaa ttt att aag ttt gct gaa ggt agg agg        6472
Gln Ser Ala Leu Ser Glu Phe Ile Lys Phe Ala Glu Gly Arg Arg
    2105                2110                2115
gga gct gct gaa gtg cta gtt gtg ctg agt gaa ctc cct gat ttc        6517
Gly Ala Ala Glu Val Leu Val Val Leu Ser Glu Leu Pro Asp Phe
    2120                2125                2130
ctg gct aaa aaa ggt gga gag gca atg gat acc atc agt gtg ttc        6562
Leu Ala Lys Lys Gly Gly Glu Ala Met Asp Thr Ile Ser Val Phe
    2135                2140                2145
ctc cac tct gag gaa ggc tct agg gct tac cgc aat gca cta tca        6607
Leu His Ser Glu Glu Gly Ser Arg Ala Tyr Arg Asn Ala Leu Ser
    2150                2155                2160
atg atg cct gag gca atg aca ata gtc atg ctg ttt ata ctg gct        6652
Met Met Pro Glu Ala Met Thr Ile Val Met Leu Phe Ile Leu Ala
    2165                2170                2175
gga cta ctg aca tcg gga atg gtc atc ttt ttc atg tct ccc aaa        6697
Gly Leu Leu Thr Ser Gly Met Val Ile Phe Phe Met Ser Pro Lys
    2180                2185                2190
ggc atc agt aga atg tct atg gcg atg ggc aca atg gcc ggc tgt        6742
Gly Ile Ser Arg Met Ser Met Ala Met Gly Thr Met Ala Gly Cys
    2195                2200                2205
gga tat ctc atg ttc ctt gga ggc gtc aaa ccc act cac atc tcc        6787
Gly Tyr Leu Met Phe Leu Gly Gly Val Lys Pro Thr His Ile Ser
    2210                2215                2220
tat gtc atg ctc ata ttc ttt gtc ctg atg gtg gtt gtg atc ccc        6832
Tyr Val Met Leu Ile Phe Phe Val Leu Met Val Val Val Ile Pro
    2225                2230                2235
gag cca ggg caa caa agg tcc atc caa gac aac caa gtg gca tac        6877
Glu Pro Gly Gln Gln Arg Ser Ile Gln Asp Asn Gln Val Ala Tyr
    2240                2245                2250
ctc att att ggc atc ctg acg ctg gtt tca gcg gtg gca gcc aac        6922
Leu Ile Ile Gly Ile Leu Thr Leu Val Ser Ala Val Ala Ala Asn
    2255                2260                2265
gag cta ggc atg ctg gag aaa acc aaa gag gac ctc ttt ggg aag        6967
Glu Leu Gly Met Leu Glu Lys Thr Lys Glu Asp Leu Phe Gly Lys
    2270                2275                2280
aag aac tta att cca tct agt gct tca ccc tgg agt tgg ccg gat        7012
Lys Asn Leu Ile Pro Ser Ser Ala Ser Pro Trp Ser Trp Pro Asp
    2285                2290                2295
ctt gac ctg aag cca gga gct gcc tgg aca gtg tac gtt ggc att        7057
Leu Asp Leu Lys Pro Gly Ala Ala Trp Thr Val Tyr Val Gly Ile
    2300                2305                2310
gtt aca atg ctc tct cca atg ttg cac cac tgg atc aaa gtc gaa        7102
Val Thr Met Leu Ser Pro Met Leu His His Trp Ile Lys Val Glu
    2315                2320                2325
tat ggc aac ctg tct ctg tct gga ata gcc cag tca gcc tca gtc        7147
Tyr Gly Asn Leu Ser Leu Ser Gly Ile Ala Gln Ser Ala Ser Val
    2330                2335                2340
ctt tct ttc atg gac aag ggg ata cca ttc atg aag atg aat atc        7192
Leu Ser Phe Met Asp Lys Gly Ile Pro Phe Met Lys Met Asn Ile
    2345                2350                2355
tcg gtc ata atg ctg ctg gtc agt ggc tgg aat tca ata aca gtg        7237
Ser Val Ile Met Leu Leu Val Ser Gly Trp Asn Ser Ile Thr Val
    2360                2365                2370
atg cct ctg ctc tgt ggc ata ggg tgc gcc atg ctc cac tgg tct        7282
Met Pro Leu Leu Cys Gly Ile Gly Cys Ala Met Leu His Trp Ser
    2375                2380                2385
ctc att tta cct gga atc aaa gcg cag cag tca aag ctt gca cag        7327
Leu Ile Leu Pro Gly Ile Lys Ala Gln Gln Ser Lys Leu Ala Gln
    2390                2395                2400
aga agg gtg ttc cat ggc gtt gcc aag aac cct gtg gtt gat ggg        7372
Arg Arg Val Phe His Gly Val Ala Lys Asn Pro Val Val Asp Gly
    2405                2410                2415
aat cca aca gtt gac att gag gaa gct cct gaa atg cct gcc ctt        7417
Asn Pro Thr Val Asp Ile Glu Glu Ala Pro Glu Met Pro Ala Leu
    2420                2425                2430
tat gag aag aaa ctg gct cta tat ctc ctt ctt gct ctc agc cta        7462
Tyr Glu Lys Lys Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Leu Ala Leu Ser Leu
    2435                2440                2445
gct tct gtt gcc atg tgc aga acg ccc ttt tca ttg gct gaa ggc        7507
Ala Ser Val Ala Met Cys Arg Thr Pro Phe Ser Leu Ala Glu Gly
    2450                2455                2460
att gtc cta gca tca gct gcc tta ggg ccg ctc ata gag gga aae        7552
Ile Val Leu Ala Ser Ala Ala Leu Gly Pro Leu Ile Glu Gly Asn
    2465                 2470                 2475
acc agc ctt ctt tgg aat gga ccc atg gct gtc tcc atg aca gga        7597
Thr Ser Leu Leu Trp Asn Gly Pro Met Ala Val Ser Met Thr Gly
    2480                2485                2490
gtc atg agg ggg aat cac tat gct ttt gtg gga gtc atg tac aat        7642
Val Met Arg Gly Asn His Tyr Ala Phe Val Gly Val Met Tyr Asn
    2495                2500                2505
cta tgg aag atg aaa act gga cgc cgg ggg agc gcg aat gga aaa        7687
Leu Trp Lys Met Lys Thr Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asn Gly Lys
    2510                2515                2520
act ttg ggt gaa gtc tgg aag agg gaa ctg aat ctg ttg gac aag        7732
Thr Leu Gly Glu Val Trp Lys Arg Glu Leu Asn Leu Leu Asn Lys
    2525                 2530                 2535
cga cag ttt gag ttg tat aaa agg acc gac att gtg gag gtg gat        7777
Arg Gln Phe Glu Leu Tyr Lys Arg Thr Asp Ile Val Glu Val Asp
    2540                 2545                 2550
cgt gat acg gca cgc agg cat ttg gcc gaa ggg aag gtg gac acc        7822
Arg Asp Thr Ala Arg Arg His Leu Ala Glu Gly Lys Val Asp Thr
    2555                2560                2565
ggg gtg gcg gtc tcc agg ggg acc gca aag tta agg tgg ttc cat        7867
Gly Val Ala Val Ser Arg Gly Thr Ala Lys Leu Arg Trp Phe His
    2570                2575                2580
gag cgt ggc tat gtc aag ctg gaa ggt agg gtg att gac ctg ggg        7912
Glu Arg Gly Tyr Val Lys Leu Glu Gly Arg Val Ile Asp Leu Gly
    2585                2590                2595
tgt ggc cgc gga ggc tgg tgt tac tac gct gct gcg caa aag gaa        7957
Cys Gly Arg Gly Gly Trp Cys Tyr Tyr Ala Ala Ala Gln Lys Glu
    2600                2605                2610
gtg agt ggg gtc aaa gga ttt act ctt gga aga gac ggc cat gag        8002
Val Ser Gly Val Lys Gly Phe Thr Leu Gly Arg Asp Gly His Glu
    2615                2620                2625
aaa ccc atg aat gtg caa agt ctg gga tgg aac atc atc acc ttc        8047
Lys Pro Met Asn Val Gln Ser Leu Gly Trp Asn Ile Ile Thr Phe
    2630                2635                2640
aag gac aaa act gat atc cac cgc cta gaa cca gtg aaa tgt gac        8092
Lys Asp Lys Thr Asp Ile His Arg Leu Glu Pro Val Lys Cys Asp
    2645                2650                2655
acc ctt ttg tgt gac att gga gag tca tca tcg tca tcg gtc aca        8137
Thr Leu Leu Cys Asp Ile Gly Glu Ser Ser Ser Ser Ser Val Thr
    2660                2665                2670
gag ggg gaa agg acc gtg aga gtt ctt gat act gta gaa aaa tgg        8182
Glu Gly Glu Arg Thr Val Arg Val Leu Asp Thr Val Glu Lys Trp
    2675                2680                2685
ctg gct tgt ggg gtt gac aac ttc tgt gtg aag gtg tta gct cca        8227
Leu Ala Cys Gly Val Asp Asn Phe Cys Val Lys Val Leu Ala Pro
    2690                2695                2700
tac atg cca gat gtt ctt gag aaa ctg gaa ttg ctc caa agg agg        8272
Tyr Met Pro Asp Val Leu Glu Lys Leu Glu Leu Leu Gln Arg Arg
    2705                2710                2715
ttt ggc gga aca gtg atc agg aac cct ctc tcc agg aat tcc act        8317
Phe Gly Gly Thr Val Ile Arg Asn Pro Leu Ser Arg Asn Ser Thr
    2720                2725                2730
cat gaa atg tac tac gtg tct gga gcc cgc agc aat gtc aca ttt        8362
His Glu Met Tyr Tyr Val Ser Gly Ala Arg Ser Asn Val Thr Phe
    2735                2740                2745
act gtg aac caa aca tcc cgc ctc ctg atg agg aga atg agg cgt        8407
Thr Val Asn Gln Thr Ser Arg Leu Leu Met Arg Arg Met Arg Arg
    2750                2755                2760
cca act gga aaa gtg acc ctg gag gct gac gtc atc ctc cca att        8452
Pro Thr Gly Lys Val Thr Leu Glu Ala Asp Val Ile Leu Pro Ile
    2765                2770                2775
ggg aca cgc agt gtt gag aca gac aag gga ccc ctg gac aaa gag        8497
Gly Thr Arg Ser Val Glu Thr Asp Lys Gly Pro Leu Asp Lys Glu
    2780                2785                2790
gcc ata gaa gaa agg gtt gag agg ata aaa tct gag tac atg acc        8542
Ala Ile Glu Glu Arg Val Glu Arg Ile Lys Ser Glu Tyr Met Thr
    2795                2800                2805
tct tgg ttt tat gac aat gac aac ccc tac agg acc tgg cac tac        8587
Ser Trp Phe Tyr Asp Asn Asp Asn Pro Tyr Arg Thr Trp His Tyr
    2810                2815                2820
tgt ggc tcc tat gtc aca aaa acc tcc gga agt gcg gcg agc atg        8632
Cys Gly Ser Tyr Val Thr Lys Thr Ser Gly Ser Ala Ala Ser Met
    2825                2830                2835
gta aat ggt gtt att aaa att ctg aca tat cca tgg gac agg ata        8677
Val Asn Gly Val Ile Lys Ile Leu Thr Tyr Pro Trp Asp Arg Ile
    2840                2845                2850
gag gag gtc aca aga atg gca atg act gac aca acc cct ttt gga        8722
Glu Glu Val Thr Arg Met Ala Met Thr Asp Thr Thr Pro Phe Gly
    2855                2860                2865
cag caa aga gtg ttt aaa gaa aaa gtt gac acc aga gca aag gat        8767
Gln Gln Arg Val Phe Lys Glu Lys Val Asp Thr Arg Ala Lys Asp
    2870                2875                2880
cca cca gcg gga act agg aag atc atg aaa gtt gtc aac agg tgg        8812
Pro Pro Ala Gly Thr Arg Lys Ile Met Lys Val Val Asn Arg Trp
    2885                 2890                 2895
ctg ttc cgc cac ctg gcc aga gaa aag aac ccc aga ctg tgc aca        8857
Leu Phe Arg His Leu Ala Arg Glu Lys Asn Pro Arg Leu Cys Thr
    2900                2905                2910
aag gaa gaa ttt att gca aaa gtc cga agt cat gca gcc att gga        8902
Lys Glu Glu Phe Ile Ala Lys Val Arg Ser His Ala Ala Ile Gly
    2915                2920                2925
gct tac ctg gaa gaa caa gaa cag tgg aag act gcc aat gag gct        8947
Ala Tyr Leu Glu Glu Gln Glu Gln Trp Lys Thr Ala Asn Glu Ala
    2930                2935                2940
gtc caa gac cca aag ttc tgg gaa ctg gtg gat gaa gaa agg aag        8992
Val Gln Asp Pro Lys Phe Trp Glu Leu Val Asp Glu Glu Arg Lys
    2945                2950                2955
ctg cac caa caa ggc agg tgt cgg act tgt gtg tac aac atg atg        9037
Leu His Gln Gln Gly Arg Cys Arg Thr Cys Val Tyr Asn Met Met
    2960                2965                2970
ggg aaa aga gag aag aag ctg tca gag ttt ggg aaa gca aag gga        9082
Gly Lys Arg Glu Lys Lys Leu Ser Glu Phe Gly Lys Ala Lys Gly
    2975                2980                2985
agc cgt gcc ata tgg tat atg tgg ctg gga gcg cgg tat ctt gag        9127
Ser Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg Tyr Leu Glu
    2990                2995                3000
ttt gag gcc ctg gga ttc ctg aat gag gac cat tgg gct tcc agg        9172
Phe Glu Ala Leu Gly Phe Leu Asn Glu Asp His Trp Ala Ser Arg
    3005                3010                3015
gaa aac tca gga gga gga gtg gaa ggc att ggc tta caa tac cta        9217
Glu Asn Ser Gly Gly Gly Val Glu Gly Ile Gly Leu Gln Tyr Leu
    3020                3025                3030
gga tat gtg atc aga gac ctg gct gca atg gat ggt ggt gga ttc        9262
Gly Tyr Val Ile Arg Asp Leu Ala Ala Met Asp Gly Gly Gly Phe
    3035                3040                3045
tac gcg gat gac acc gct gga tgg gac acg cgc atc aca gag gca        9307
Tyr Ala Asp Asp Thr Ala Gly Trp Asp Thr Arg Ile Thr Glu Ala
    3050                3055                3060
gac ctt gat gat gaa cag gag atc ttg aac tac atg agc cca cat        9352
Asp Leu Asp Asp Glu Gln Glu Ile Leu Asn Tyr Met Ser Pro His
    3065                3070                3075
cac aaa aaa ctg gca caa gca gtg atg gaa atg aca tac aag aac        9397
His Lys Lys Leu Ala Gln Ala Val Met Glu Met Thr Tyr Lys Asn
    3080                3085                3090
aaa gtg gtg aaa gtg ttg aga cca gcc cca gga ggg aaa gcc tac        9442
Lys Val Val Lys Val Leu Arg Pro Ala Pro Gly Gly Lys Ala Tyr
    3095                3100                3105
atg gat gtc ata agt cga cga gac cag aga gga tcc ggg cag gta        9487
Met Asp Val Ile Ser Arg Arg Asp Gln Arg Gly Ser Gly Gln Val
    3110                3115                3120
gtg act tat gct ctg aac acc atc acc aac ttg aaa gtc caa ttg        9532
Val Thr Tyr Ala Leu Asn Thr Ile Thr Asn Leu Lys Val Gln Leu
    3125                3130                3135
atc aga atg gca gaa gca gag atg gtg ata cat cac caa cat gtt        9577
Ile Arg Met Ala Glu Ala Glu Met Val Ile His His Gln His Val
    3140                3145                3150
caa gat tgt gat gaa tca gtt ctg acc agg ctg gag gca tgg ctc        9622
Gln Asp Cys Asp Glu Ser Val Leu Thr Arg Leu Glu Ala Trp Leu
    3155                3160                3165
act gag cac gga tgt gac aga ctg aag agg atg gcg gtg agt gga        9667
Thr Glu His Gly Cys Asp Arg Leu Lys Arg Met Ala Val Ser Gly
    3170                3175                3180
gac gac tgt gtg gtc cgg ccc atc gat gac agg ttc ggc ctg gcc        9712
Asp Asp Cys Val Val Arg Pro Ile Asp Asp Arg Phe Gly Leu Ala
    3185                3190                3195
ctg tcc cat ctc aac gcc atg tcc aag gtt aga aag gac ata tct        9757
Leu Ser His Leu Asn Ala Met Ser Lys Val Arg Lys Asp Ile Ser
    3200                3205                3210
gaa tgg cag cca tca aaa ggg tgg aat gat tgg gag aat gtg ccc        9802
Glu Trp Gln Pro Ser Lys Gly Trp Asn Asp Trp Glu Asn Val Pro
    3215                3220                3225
ttc tgt tcc cac cac ttc cat gaa cta cag ctg aag gat ggc agg        9847
Phe Cys Ser His His Phe His Glu Leu Gln Leu Lys Asp Gly Arg
    3230                3235                3240
agg att gtg gtg cct tgc cga gaa cag gac gag ctc att ggg aga        9892
Arg Ile Val Val Pro Cys Arg Glu Gln Asp Glu Leu Ile Gly Arg
    3245                3250                3255
gga agg gtg tct cca gga aac ggc tgg atg atc aag gaa aca gct        9937
Gly Arg Val Ser Pro Gly Asn Gly Trp Met Ile Lys Glu Thr Ala
    3260                3265                3270
tgc ctc agc aaa gcc tat gcc aac atg tgg tca ctg atg tat ttt        9982
Cys Leu Ser Lys Ala Tyr Ala Asn Met Trp Ser Leu Met Tyr Phe
    3275                3280                3285
cac aaa agg gac atg agg cta ctg tca ttg gct gtt tcc tca gct       10027
His Lys Arg Asp Met Arg Leu Leu Ser Leu Ala Val Ser Ser Ala
    3290                3295                3300
gtt ccc acc tca tgg gtt cca caa gga cgc aca aca tgg tcg att       10072
Val Pro Thr Ser Trp Val Pro Gln Gly Arg Thr Thr Trp Ser Ile
    3305                3310                3315
cat ggg aaa ggg gag tgg atg acc acg gaa gac atg ctt gag gtg       10117
His Gly Lys Gly Glu Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Glu Val
    3320                3325                3330
tgg aac aga gta tgg ata acc aac aac cca cac atg cag gac aag       10162
Trp Asn Arg Val Trp Ile Thr Asn Asn Pro His Met Gln Asp Lys
    3335                3340                3345
aca atg gtg aaa aaa tgg aga gat gtc cct tat cta acc aag aga       10207
Thr Met Val Lys Lys Trp Arg Asp Val Pro Tyr Leu Thr Lys Arg
    3350                3355                3360
caa gac aag ctg tgc gga tca ctg att gga atg acc aat agg gcc       10252
Gln Asp Lys Leu Cys Gly Ser Leu Ile Gly Met Thr Asn Arg Ala
    3365                3370                3375
acc tgg gcc tcc cac atc cat tta gtc atc cat cgt atc cga acg       10297
Thr Trp Ala Ser His Ile His Leu Val Ile His Arg Ile Arg Thr
    3380                3385                3390
ctg att gga cag gag aaa tac act gac tac cta aca gtc atg gac       10342
Leu Ile Gly Gln Glu Lys Tyr Thr Asp Tyr Leu Thr Val Met Asp
    3395                3400                3405
agg tat tct gtg gat gct gac ctg caa ctg ggt gag ctt atc           10384
Arg Tyr Ser Val Asp Ala Asp Leu Gln Leu Gly Glu Leu Ile
    3410                3415                3420
tgaaacacca tctaacagga ataaccggga tacaaaccac gggtggagaa ccggactccc 10444
cacaacctga aaccgggata taaaccacgg ctggagaacc ggactccgca cttaaaatga 10504
aacagaaacc gggataaaaa ctacggatgg agaaccggac tccacacatt gagacagaag 10564
aagttgtcag cccagaaccc cacacgagtt ttgccactgc taagctgtga ggcagtgcag 10624
gctgggacag ccgacctcca ggttgcgaaa aacctggttt ctgggacctc ccaccccaga 10684
gtaaaaagaa cggagcctcc gctaccaccc tcccacgtgg tggtagaaag acggggtcta 10744
gaggttagag gagaccctcc agggaacaaa tagtgggacc atattgacgc cagggaaaga 10804
ccggagtggt tctctgcttt tcctccagag gtctgtgagc acagtttgct caagaataag 10864
cagacctttg gatgacaaac acaaaaccac aa                               10896
<210>23
<211>3422
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>合成的构建体
<400>23
Met Ser Gly Arg Lys Ala Gln Gly Lys Thr Leu Gly Val Asn Met Val
1               5                   10                  15
Arg Arg Gly Val Arg Ser Leu Ser Asn Lys Ile Lys Gln Lys Thr Lys
            20                  25                  30
Gln Ile Gly Asn Arg Pro Gly Pro Ser Arg Gly Val Gln Gly Phe Ile
        35                  40                  45
Phe Phe Phe Leu Phe Asn Ile Leu Thr Gly Lys Lys Ile Thr Ala His
    50                  55                  60
Leu Lys Arg Leu Trp Lys Met Leu Asp Pro Arg Gln Gly Leu Ala Val
65                  70                  75                  80
Leu Arg Lys Val Lys Arg Val Val Ala Ser Leu Met Arg Gly Leu Ser
                85                  90                  95
Ser Arg Lys Arg Arg Ser His Asp Val Leu Thr Val Gln Phe Leu Ile
            100                 105                 110
Leu Gly Met Leu Leu Met Thr Gly Gly Val Thr Leu Ser Asn Phe Gln
        115                 120                 125
Gly Lys Val Met Met Thr Val Asn Ala Thr Asp Val Thr Asp Val Ile
    130                 135                 140
Thr Ile Pro Thr Ala Ala Gly Lys Asn Leu Cys Ile Val Arg Ala Met
145                 150                 155                 160
Asp Val Gly Tyr Met Cys Asp Asp Thr Ile Thr Tyr Glu Cys Pro Val
                165                 170                 175
Leu Ser Ala Gly Asn Asp Pro Glu Asp Ile Asp Cys Trp Cys Thr Lys
            180                 185                 190
Ser Ala Val Tyr Val Arg Tyr Gly Arg Cys Thr Lys Thr Arg His Ser
        195                 200                 205
Arg Arg Ser Arg Arg Ser Leu Thr Val Gln Thr His Gly Glu Ser Thr
    210                 215                 220
Leu Ala Asn Lys Lys Gly Ala Trp Met Asp Ser Thr Lys Ala Thr Arg
225                 230                 235                 240
Tyr Leu Val Lys Thr Glu Ser Trp Ile Leu Arg Asn Pro Gly Tyr Ala
                245                 250                 255
Leu Val Ala Ala Val Ile Gly Trp Met Leu Gly Ser Asn Thr Met Gln
            260                 265                 270
Arg Val Val Phe Val Val Pro Leu Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser
        275                 280                 285
Phe Asn Cys Leu Gly Met Ser Asn Arg Asp Phe Leu Glu Gly Val Ser
    290                 295                 300
Gly Ala Thr Trp Val Asp Leu Val Leu Glu Gly Asp Ser Cys Val Thr
305                 310                 315                 320
Ile Met Ser Lys Asp Lys Pro Thr Ile Asp Val Lys Met Met Asn Met
                325                 330                 335
Glu Ala Ala Asn Leu Ala Glu Val Arg Ser Tyr Cys Tyr Leu Ala Thr
            340                 345                 350
Val Ser Asp Leu Ser Thr Lys Ala Ala Cys Pro Thr Met Gly Glu Ala
        355                 360                 365
His Asn Asp Lys Arg Ala Asp Pro Ala Phe Val Cys Arg Gln Gly Val
    370                 375                 380
Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys Gly Phe Phe Gly Lys Gly Ser
385                 390                 395                 400
Ile Asp Thr Cys Ala Lys Phe Ala Cys Ser Thr Lys Ala Ile Gly Arg
                405                 410                 415
Thr Ile Leu Lys Glu Asn Ile Lys Tyr Glu Val Ala Ile Phe Val His
            420                 425                 430
Gly Pro Thr Thr Val Glu Ser His Gly Asn Tyr Ser Thr Gln Val Gly
        435                 440                 445
Ala Thr Gln Ala Gly Arg Phe Ser Ile Thr Pro Ala Ala Pro Ser Tyr
    450                 455                 460
Thr Leu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Glu Val Thr Val Asp Cys Glu Pro
465                 470                 475                 480
Arg Ser Gly Ile Asp Thr Asn Ala Tyr Tyr Val Met Thr Val Gly Thr
                485                 490                 495
Lys Thr Phe Leu Val His Arg Glu Trp Phe Met Asp Leu Asn Leu Pro
            500                 505                 510
Trp Ser Ser Ala Gly Ser Thr Val Trp Arg Asn Arg Glu Thr Leu Met
        515                 520                 525
Glu Phe Glu Glu Pro His Ala Thr Lys Gln Ser Val Ile Ala Leu Gly
    530                 535                 540
Ser Gln Glu Gly Ala Leu His Gln Ala Leu Ala Gly Ala Ile Pro Val
545                 550                 555                 560
Glu Phe Ser Ser Asn Thr Val Lys Leu Thr Ser Gly His Leu Lys Cys
                565                 570                 575
Arg Val Lys Met Glu Lys Leu Gln Leu Lys Gly Thr Thr Tyr Gly Val
            580                 585                 590
Cys Ser Lys Ala Phe Lys Phe Leu Arg Thr Pro Val Asp Thr Gly His
        595                 600                 605
Gly Thr Val Val Leu Glu Leu Gln Tyr Thr Gly Thr Asp Gly Pro Cys
    610                 615                 620
Lys Val Pro Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu Asn Asp Leu Thr Pro Val
625                 630                 635                 640
Gly Arg Leu Val Thr Val Asn Pro Phe Val Ser Val Ala Thr Ala Asn
                645                 650                 655
Ala Lys Val Leu Ile Glu Leu Glu Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile
            660                 665                 670
Val Val Gly Arg Gly Glu Gln Gln Ile Asn His His Trp His Lys Ser
        675                 680                 685
Gly Ser Ser Ile Gly Lys Ala Phe Thr Thr Thr Leu Lys Gly Ala Gln
    690                 695                 700
Arg Leu Ala Ala Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly
705                 710                 715                 720
Gly Val Phe Thr Ser Val Gly Arg Ala Val His Gln Val Phe Gly Gly
                725                 730                 735
Ala Phe Arg Ser Leu Phe Gly Gly Met Ser Trp Ile Thr Gln Gly Leu
            740                 745                 750
Leu Gly Ala Leu Leu Leu Trp Met Gly Ile Asn Ala Arg Asp Arg Ser
        755                 760                 765
Ile Ala Leu Thr Phe Leu Ala Val Gly Gly Val Leu Leu Phe Leu Ser
    770                 775                 780
Val Asn Val Gly Ala Asp Gln Gly Cys Ala Ile Asn Phe Gly Lys Arg
785                 790                 795                 800
Glu Leu Lys Cys Gly Asp Gly Ile Phe Ile Phe Arg Asp Ser Asp Asp
                805                 810                 815
Trp Leu Asn Lys Tyr Ser Tyr Tyr Pro Glu Asp Pro Val Lys Leu Ala
            820                 825                 830
Ser Ile Val Lys Ala Ser Phe Glu Glu Gly Lys Cys Gly Leu Asn Ser
        835                 840                 845
Val Asp Ser Leu Glu His Glu Met Trp Arg Ser Arg Ala Asp Glu Ile
    850                 855                 860
Asn Ala Ile Phe Glu Glu Asn Glu Val Asp Ile Ser Val Val Val Gln
865                 870                 875                 880
Asp Pro Lys Asn Val Tyr Gln Arg Gly Thr His Pro Phe Ser Arg Ile
                885                 890                 895
Arg Asp Gly Leu Gln Tyr Gly Trp Lys Thr Trp Gly Lys Asn Leu Val
            900                 905                 910
Phe Ser Pro Gly Arg Lys Asn Gly Ser Phe Ile Ile Asp Gly Lys Ser
        915                 920                 925
Arg Lys Glu Cys Pro Phe Ser Asn Arg Val Trp Asn Ser Phe Gln Ile
    930                 935                 940
Glu Glu Phe Gly Thr Gly Val Phe Thr Thr Arg Val Tyr Met Asp Ala
945                 950                 955                 960
Val Phe Glu Tyr Thr Ile Asp Cys Asp Gly Ser Ile Leu Gly Ala Ala
                965                 970                 975
Val Asn Gly Lys Lys Ser Ala His Gly Ser Pro Thr Phe Trp Met Gly
            980                 985                 990
Ser His Glu Val Asn Gly Thr Trp Met Ile His Thr Leu Glu Ala Leu
        995                 1000                1005
Asp Tyr Lys Glu Cys Glu Trp Pro Leu Thr His Thr Ile Gly Thr
    1010                1015                1020
Ser Val Glu Glu Ser Glu Met Phe Met Pro Arg Ser Ile Gly Gly
    1025                1030                1035
Pro Val Ser Ser His Asn His Ile Pro Gly Tyr Lys Val Gln Thr
    1040                1045                1050
Asn Gly Pro Trp Met Gln Val Pro Leu Glu Val Lys Arg Glu Ala
    1055                1060                1065
Cys Pro Gly Thr Ser Val Ile Ile Asp Gly Asn Cys Asp Gly Arg
    1070                1075                1080
Gly Lys Ser Thr Arg Ser Thr Thr Asp Ser Gly Lys Val Ile Pro
    1085                1090                1095
Glu Trp Cys Cys Arg Ser Cys Thr Met Pro Pro Val Ser Phe His
    1100                1105                1110
Gly Ser Asp Gly Cys Trp Tyr Pro Met Glu Ile Arg Pro Arg Lys
    1115                1120                1125
Thr His Glu Ser His Leu Val Arg Ser Trp Val Thr Ala Gly Glu
    1130                1135                1140
Ile His Ala Val Pro Phe Gly Leu Val Ser Met Met Ile Ala Met
    1145                1150                1155
Glu Val Val Leu Arg Lys Arg Gln Gly Pro Lys Gln Met Leu Val
    1160                1165                1170
Gly Gly Val Val Leu Leu Gly Ala Met Leu Val Gly Gln Val Thr
    1175                1180                1185
Leu Leu Asp Leu Leu Lys Leu Thr Val Ala Val Gly Leu His Phe
    1190                1195                1200
His Glu Met Asn Asn Gly Gly Asp Ala Met Tyr Met Ala Leu Ile
    1205                1210                1215
Ala Ala Phe Ser Ile Arg Pro Gly Leu Leu Ile Gly Phe Gly Leu
    1220                1225                1230
Arg Thr Leu Trp Ser Pro Arg Glu Arg Leu Val Leu Thr Leu Gly
    1235                1240                1245
Ala Ala Met Val Glu Ile Ala Leu Gly Gly Val Met Gly Gly Leu
    1250                1255                1260
Trp Lys Tyr Leu Asn Ala Val Ser Leu Cys Ile Leu Thr Ile Asn
    1265                1270                1275
Ala Val Ala Ser Arg Lys Ala Ser Asn Thr Ile Leu Pro Leu Met
    1280                1285                1290
Ala Leu Leu Thr Pro Val Thr Met Ala Glu Val Arg Leu Ala Ala
    1295                1300                1305
Met Phe Phe Cys Ala Met Val Ile Ile Gly Val Leu His Gln Asn
    1310                1315                1320
Phe Lys Asp Thr Ser Met Gln Lys Thr Ile Pro Leu Val Ala Leu
    1325                1330                1335
Thr Leu Thr Ser Tyr Leu Gly Leu Thr Gln Pro Phe Leu Gly Leu
    1340                1345                1350
Cys Ala Phe Leu Ala Thr Arg Ile Phe Gly Arg Arg Ser Ile Pro
    1355                1360                1365
Val Asn Glu Ala Leu Ala Ala Ala Gly Leu Val Gly Val Leu Ala
    1370                1375                1380
Gly Leu Ala Phe Gln Glu Met Glu Asn Phe Leu Gly Pro Ile Ala
    1385                1390                1395
Val Gly Gly Leu Leu Met Met Leu Val Ser Val Ala Gly Arg Val
    1400                1405                1410
Asp Gly Leu Glu Leu Lys Lys Leu Gly Glu Val Ser Trp Glu Glu
    1415                1420                1425
Glu Ala Glu Ile Ser Gly Ser Ser Ala Arg Tyr Asp Val Ala Leu
    1430                1435                1440
Ser Glu Gln Gly Glu Phe Lys Leu Leu Ser Glu Glu Lys Val Pro
    1445                1450                1455
Trp Asp Gln Val Val Met Thr Ser Leu Ala Leu Val Gly Ala Ala
    1460                1465                1470
Leu His Pro Phe Ala Leu Leu Leu Val Leu Ala Gly Trp Leu Phe
    1475                1480                1485
His Val Arg Gly Ala Arg Arg Ser Gly Asp Val Leu Trp Asp Ile
    1490                1495                1500
Pro Thr Pro Lys Ile Ile Glu Glu Cys Glu His Leu Glu Asp Gly
    1505                1510                1515
Ile Tyr Gly Ile Phe Gln Ser Thr Phe Leu Gly Ala Ser Gln Arg
    1520                1525                1530
Gly Val Gly Val Ala Gln Gly Gly Val Phe His Thr Met Trp His
    1535                1540                1545
Val Thr Arg Gly Ala Phe Leu Val Arg Asn Gly Lys Lys Leu Ile
    1550                1555                1560
Pro Ser Trp Ala Ser Val Lys Glu Asp Leu Val Ala Tyr Gly Gly
    1565                1570                1575
Ser Trp Lys Leu Glu Gly Arg Trp Asp Gly Glu Glu Glu Val Gln
    1580                1585                1590
Leu Ile Ala Ala Val Pro Gly Lys Asn Val Val Asn Val Gln Thr
    1595                1600                1605
Lys Pro Ser Leu Phe Lys Val Arg Asn Gly Gly Glu Ile Gly Ala
    1610                1615                1620
Val Ala Leu Asp Tyr Pro Ser Gly Thr Ser Gly Ser Pro Ile Val
    1625                1630                1635
Asn Arg Asn Gly Glu Val Ile Gly Leu Tyr Gly Asn Gly Ile Leu
    1640                1645                1650
Val Gly Asp Asn Ser Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Thr Glu Val
    1655                1660                1665
Lys Glu Glu Gly Lys Glu Glu Leu Gln Glu Ile Pro Thr Met Leu
    1670                1675                1680
Lys Lys Gly Met Thr Thr Val Leu Asp Phe His Pro Gly Ala Gly
    1685                1690                1695
Lys Thr Arg Arg Phe Leu Pro Gln Ile Leu Ala Glu Cys Ala Arg
    1700                1705                1710
Arg Arg Leu Arg Thr Leu Val Leu Ala Pro Thr Arg Val Val Leu
    1715                1720                1725
Ser Glu Met Lys Glu Ala Phe His Gly Leu Asp Val Lys Phe His
    1730                1735                1740
Thr Gln Ala Phe Ser Ala His Gly Ser Gly Arg Glu Val Ile Asp
    1745                1750                1755
Ala Met Cys His Ala Thr Leu Thr Tyr Arg Met Leu Glu Pro Thr
    1760                1765                1770
Arg Val Val Asn Trp Glu Val Ile Ile Met Asp Glu Ala His Phe
    1775                1780                1785
Leu Asp Pro Ala Ser Ile Ala Ala Arg Gly Trp Ala Ala His Arg
    1790                1795                1800
Ala Arg Ala Asn Glu Ser Ala Thr Ile Leu Met Thr Ala Thr Pro
    1805                1810                1815
Pro Gly Thr Ser Asp Glu Phe Pro His Ser Asn Gly Glu Ile Glu
    1820                1825                1830
Asp Val Gln Thr Asp Ile Pro Ser Glu Pro Trp Asn Thr Gly His
    1835                1840                1845
Asp Trp Ile Leu Ala Asp Lys Arg Pro Thr Ala Trp Phe Leu Pro
    1850                1855                1860
Ser Ile Arg Ala Ala Asn Val Met Ala Ala Ser Leu Arg Lys Ala
    1865                1870                1875
Gly Lys Ser Val Val Val Leu Asn Arg Lys Thr Phe Glu Arg Glu
    1880                1885                1890
Tyr Pro Thr Ile Lys Gln Lys Lys Pro Asp Phe Ile Leu Ala Thr
    1895                1900                1905
Asp Ile Ala Glu Met Gly Ala Asn Leu Cys Val Glu Arg Val Leu
    1910                1915                1920
Asp Cys Arg Thr Ala Phe Lys Pro Val Leu Val Asp Glu Gly Arg
    1925                1930                1935
Lys Val Ala Ile Lys Gly Pro Leu Arg Ile Ser Ala Ser Ser Ala
    1940                1945                1950
Ala Gln Arg Arg Gly Arg Ile Gly Arg Asn Pro Asn Arg Asp Gly
    1955                1960                1965
Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Glu Pro Thr Ser Glu Asn Asn Ala His
    1970                1975                1980
His Val Cys Trp Leu Glu Ala Ser Met Leu Leu Asp Asn Met Glu
    1985                1990                1995
Val Arg Gly Gly Met Val Ala Pro Leu Tyr Gly Val Glu Gly Thr
    2000                2005                2010
Lys Thr Pro Val Ser Pro Gly Glu Met Arg Leu Arg Asp Asp Gln
    2015                2020                2025
Arg Lys Val Phe Arg Glu Leu Val Arg Asn Cys Asp Leu Pro Val
    2030                2035                2040
Trp Leu Ser Trp Gln Val Ala Lys Ala Gly Leu Lys Thr Asn Asp
    2045                2050                2055
Arg Lys Trp Cys Phe Glu Gly Pro Glu Glu His Glu Ile Leu Asn
    2060                2065                2070
Asp Ser Gly Glu Thr Val Lys Cys Arg Ala Pro Gly Gly Ala Lys
    2075                2080                2085
Lys Pro Leu Arg Pro Arg Trp Cys Asp Glu Arg Val Ser Ser Asp
    2090                2095                2100
Gln Ser Ala Leu Ser Glu Phe Ile Lys Phe Ala Glu Gly Arg Arg
    2105                2110                2115
Gly Ala Ala Glu Val Leu Val Val Leu Ser Glu Leu Pro Asp Phe
    2120                2125                2130
Leu Ala Lys Lys Gly Gly Glu Ala Met Asp Thr Ile Ser Val Phe
    2135                2140                2145
Leu His Ser Glu Glu Gly Ser Arg Ala Tyr Arg Asn Ala Leu Ser
    2150                2155                2160
Met Met Pro Glu Ala Met Thr Ile Val Met Leu Phe Ile Leu Ala
    2165                2170                2175
Gly Leu Leu Thr Ser Gly Met Val Ile Phe Phe Met Ser Pro Lys
    2180                2185                2190
Gly Ile Ser Arg Met Ser Met Ala Met Gly Thr Met Ala Gly Cys
    2195                2200                2205
Gly Tyr Leu Met Phe Leu Gly Gly Val Lys Pro Thr His Ile Ser
    2210                2215                2220
Tyr Val Met Leu Ile Phe Phe Val Leu Met Val Val Val Ile Pro
    2225                2230                2235
Glu Pro Gly Gln Gln Arg Ser Ile Gln Asp Asn Gln Val Ala Tyr
    2240                2245                2250
Leu Ile Ile Gly Ile Leu Thr Leu Val Ser Ala Val Ala Ala Asn
    2255                2260                2265
Glu Leu Gly Met Leu Glu Lys Thr Lys Glu Asp Leu Phe Gly Lys
    2270                2275                2280
Lys Asn Leu Ile Pro Ser Ser Ala Ser Pro Trp Ser Trp Pro Asp
    2285                2290                2295
Leu Asp Leu Lys Pro Gly Ala Ala Trp Thr Val Tyr Val Gly Ile
    2300                2305                2310
Val Thr Met Leu Ser Pro Met Leu His His Trp Ile Lys Val Glu
    2315                2320                2325
Tyr Gly Asn Leu Ser Leu Ser Gly Ile Ala Gln Ser Ala Ser Val
    2330                2335                2340
Leu Ser Phe Met Asp Lys Gly Ile Pro Phe Met Lys Met Asn Ile
    2345                2350                2355
Ser Val Ile Met Leu Leu Val Ser Gly Trp Asn Ser Ile Thr Val
    2360                2365                2370
Met Pro Leu Leu Cys Gly Ile Gly Cys Ala Met Leu His Trp Ser
    2375                2380                2385
Leu Ile Leu Pro Gly Ile Lys Ala Gln Gln Ser Lys Leu Ala Gln
    2390                2395                2400
Arg Arg Val Phe His Gly Val Ala Lys Asn Pro Val Val Asp Gly
    2405                2410                2415
Asn Pro Thr Val Asp Ile Glu Glu Ala Pro Glu Met Pro Ala Leu
    2420                2425                2430
Tyr Glu Lys Lys Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Leu Ala Leu Ser Leu
    2435                2440                2445
Ala Ser Val Ala Met Cys Arg Thr Pro Phe Ser Leu Ala Glu Gly
    2450                2455                2460
Ile Val Leu Ala Ser Ala Ala Leu Gly Pro Leu Ile Glu Gly Asn
    2465                2470                2475
Thr Ser Leu Leu Trp Asn Gly Pro Met Ala Val Ser Met Thr Gly
    2480                2485                2490
Val Met Arg Gly Asn His Tyr Ala Phe Val Gly Val Met Tyr Asn
    2495                2500                2505
Leu Trp Lys Met Lys Thr Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asn Gly Lys
    2510                2515                2520
Thr Leu Gly Glu Val Trp Lys Arg Glu Leu Asn Leu Leu Asp Lys
    2525                2530                2535
Arg Gln Phe Glu Leu Tyr Lys Arg Thr Asp Ile Val Glu Val Asp
    2540                2545                2550
Arg Asp Thr Ala Arg Arg His Leu Ala Glu Gly Lys Val Asp Thr
    2555                2560                2565
Gly Val Ala Val Ser Arg Gly Thr Ala Lys Leu Arg Trp Phe His
    2570                2575                2580
Glu Arg Gly Tyr Val Lys Leu Glu Gly Arg Val Ile Asp Leu Gly
    2585                2590                2595
Cys Gly Arg Gly Gly Trp Cys Tyr Tyr Ala Ala Ala Gln Lys Glu
    2600                2605                2610
Val Ser Gly Val Lys Gly Phe Thr Leu Gly Arg Asp Gly His Glu
    2615                2620                2625
Lys Pro Met Asn Val Gln Ser Leu Gly Trp Asn Ile Ile Thr Phe
    2630                2635                2640
Lys Asp Lys Thr Asp Ile His Arg Leu Glu Pro Val Lys Cys Asp
    2645                2650                2655
Thr Leu Leu Cys Asp Ile Gly Glu Ser Ser Ser Ser Ser Val Thr
    2660                2665                2670
Glu Gly Glu Arg Thr Val Arg Val Leu Asp Thr Val Glu Lys Trp
    2675                2680                2685
Leu Ala Cys Gly Val Asp Asn Phe Cys Val Lys Val Leu Ala Pro
    2690                2695                2700
Tyr Met Pro Asp Val Leu Glu Lys Leu Glu Leu Leu Gln Arg Arg
    2705                2710                2715
Phe Gly Gly Thr Val Ile Arg Asn Pro Leu Ser Arg Asn Ser Thr
    2720                2725                2730
His Glu Met Tyr Tyr Val Ser Gly Ala Arg Ser Asn Val Thr Phe
    2735                2740                2745
Thr Val Asn Gln Thr Ser Arg Leu Leu Met Arg Arg Met Arg Arg
    2750                2755                2760
Pro Thr Gly Lys Val Thr Leu Glu Ala Asp Val Ile Leu Pro Ile
    2765                2770                2775
Gly Thr Arg Ser Val Glu Thr Asp Lys Gly Pro Leu Asp Lys Glu
    2780                2785                2790
Ala Ile Glu Glu Arg Val Glu Arg Ile Lys Ser Glu Tyr Met Thr
    2795                2800                2805
Ser Trp Phe Tyr Asp Asn Asp Asn Pro Tyr Arg Thr Trp His Tyr
    2810                2815                2820
Cys Gly Ser Tyr Val Thr Lys Thr Ser Gly Ser Ala Ala Ser Met
    2825                2830                2835
Val Asn Gly Val Ile Lys Ile Leu Thr Tyr Pro Trp Asp Arg Ile
    2840                2845                2850
Glu Glu Val Thr Arg Met Ala Met Thr Asp Thr Thr Pro Phe Gly
    2855                2860                2865
Gln Gln Arg Val Phe Lys Glu Lys Val Asp Thr Arg Ala Lys Asp
    2870                2875                2880
Pro Pro Ala Gly Thr Arg Lys Ile Met Lys Val Val Asn Arg Trp
    2885                2890                2895
Leu Phe Arg His Leu Ala Arg Glu Lys Asn Pro Arg Leu Cys Thr
    2900                2905                2910
Lys Glu Glu Phe Ile Ala Lys Val Arg Ser His Ala Ala Ile Gly
    2915                2920                2925
Ala Tyr Leu Glu Glu Gln Glu Gln Trp Lys Thr Ala Asn Glu Ala
    2930                2935                2940
Val Gln Asp Pro Lys Phe Trp Glu Leu Val Asp Glu Glu Arg Lys
    2945                2950                2955
Leu His Gln Gln Gly Arg Cys Arg Thr Cys Val Tyr Asn Met Met
    2960                2965                2970
Gly Lys Arg Glu Lys Lys Leu Ser Glu Phe Gly Lys Ala Lys Gly
    2975                2980                2985
Ser Arg Ala Ile Trp Tyr Met Trp Leu Gly Ala Arg Tyr Leu Glu
    2990                2995                3000
Phe Glu Ala Leu Gly Phe Leu Asn Glu Asp His Trp Ala Ser Arg
    3005                3010                3015
Glu Asn Ser Gly Gly Gly Val Glu Gly Ile Gly Leu Gln Tyr Leu
    3020                3025                3030
Gly Tyr Val Ile Arg Asp Leu Ala Ala Met Asp Gly Gly Gly Phe
    3035                3040                3045
Tyr Ala Asp Asp Thr Ala Gly Trp Asp Thr Arg Ile Thr Glu Ala
    3050                3055                3060
Asp Leu Asp Asp Glu Gln Glu Ile Leu Asn Tyr Met Ser Pro His
    3065                3070                3075
His Lys Lys Leu Ala Gln Ala Val Met Glu Met Thr Tyr Lys Asn
    3080                3085                3090
Lys Val Val Lys Val Leu Arg Pro Ala Pro Gly Gly Lys Ala Tyr
    3095                3100                3105
Met Asp Val Ile Ser Arg Arg Asp Gln Arg Gly Ser Gly Gln Val
    3110                3115                3120
Val Thr Tyr Ala Leu Asn Thr Ile Thr Asn Leu Lys Val Gln Leu
    3125                3130                3135
Ile Arg Met Ala Glu Ala Glu Met Val Ile His His Gln His Val
    3140                3145                3150
Gln Asp Cys Asp Glu Ser Val Leu Thr Arg Leu Glu Ala Trp Leu
    3155                3160                3165
Thr Glu His Gly Cys Asp Arg Leu Lys Arg Met Ala Val Ser Gly
    3170                3175                3180
Asp Asp Cys Val Val Arg Pro Ile Asp Asp Arg Phe Gly Leu Ala
    3185                3190                3195
Leu Ser His Leu Asn Ala Met Ser Lys Val Arg Lys Asp Ile Ser
    3200                3205                3210
Glu Trp Gln Pro Ser Lys Gly Trp Asn Asp Trp Glu Asn Val Pro
    3215                3220                3225
Phe Cys Ser His His Phe His Glu Leu Gln Leu Lys Asp Gly Arg
    3230                3235                3240
Arg Ile Val Val Pro Cys Arg Glu Gln Asp Glu Leu Ile Gly Arg
    3245                3250                3255
Gly Arg Val Ser Pro Gly Asn Gly Trp Met Ile Lys Glu Thr Ala
    3260                3265                3270
Cys Leu Ser Lys Ala Tyr Ala Asn Met Trp Ser Leu Met Tyr Phe
    3275                3280                3285
His Lys Arg Asp Met Arg Leu Leu Ser Leu Ala Val Ser Ser Ala
    3290                3295                3300
Val Pro Thr Ser Trp Val Pro Gln Gly Arg Thr Thr Trp Ser Ile
    3305                3310                3315
His Gly Lys Gly Glu Trp Met Thr Thr Glu Asp Met Leu Glu Val
    3320                3325                3330
Trp Asn Arg Val Trp Ile Thr Asn Asn Pro His Met Gln Asp Lys
    3335                3340                3345
Thr Met Val Lys Lys Trp Arg Asp Val Pro Tyr Leu Thr Lys Arg
    3350                3355                3360
Gln Asp Lys Leu Cys Gly Ser Leu Ile Gly Met Thr Asn Arg Ala
    3365                3370                3375
Thr Trp Ala Ser His Ile His Leu Val Ile His Arg Ile Arg Thr
    3380                3385                3390
Leu Ile Gly Gln Glu Lys Tyr Thr Asp Tyr Leu Thr Val Met Asp
    3395                3400                3405
Arg Tyr Ser Val Asp Ala Asp Leu Gln Leu Gly Glu Leu Ile
3410                3415                3420
<210>24
<211>10239
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和西尼罗病毒
<400>24
gtaaatcctg tgtgctaatt gaggtgcatt ggtctgcaaa tcgagttgct aggcaataaa    60
cacatttgga ttaattttaa tcgttcgttg agcgattagc agagaactga ccagaacatg   120
tctggtcgta aagctcaggg aaaaaccctg ggcgtcaata tggtacgacg aggagttcgc   180
tccttgtcaa acaaaataaa acaaaaaaca aaacaaattg gaaacagacc tggaccttca   240
agaggtgttc aaggatttat ctttttcttt ttgttcaaca ttttgactgg aaaaaagatc   300
acagcccacc taaagaggtt gtggaaaatg ctggacccaa gacaaggctt ggctgttcta   360
aggaaagtca agagagtggt ggccagtttg atgagaggat tgtcctcaag gaaacgccgt   420
tcccatgatg ttctgactgt gcaattccta attttgggaa tgctgttgat gacgggtgga   480
gttaccctct ctaacttcca agggaaggtg atgatgacgg taaatgctac tgacgtcaca   540
gatgtcatca cgattccaac agctgctgga aagaacctat gcattgtcag agcaatggat   600
gtgggataca tgtgcgatga tactatcact tatgaatgcc cagtgctgtc ggctggtaat   660
gatccagaag acatcgactg ttggtgcaca aagtcagcag tctacgtcag gtatggaaga   720
tgcaccaaga cacgccactc aagacgcagt cggaggtcac tgacagtgca gacacacgga   780
gaaagcactc tagcgaacaa gaagggggct tggatggaca gcaccaaggc cacaaggtat   840
ttggtaaaaa cagaatcatg gatcttgagg aaccctggat atgccctggt ggcagccgtc   900
attggttgga tgcttgggag caacaccatg cagagagttg tgtttgtcgt gctattgctt   960
ttggtggccc cagcttacag cttcaactgc cttggaatga gcaacagaga cttcttggaa  1020
ggagtgtctg gagcaacatg ggtggatttg gttctcgaag gcgacagctg cgtgactatc  1080
atgtctaagg acaagcctac catcgacgtc aagatgatga atatggaggc ggccaacctg  1140
gcagaggtcc gcagttattg ctatttggct accgtcagcg atctctccac caaagctgca  1200
tgcccgacca tgggagaagc tcacaatgac aaacgtgctg acccagcttt tgtgtgcaga  1260
caaggagtgg tggacagggg ctggggcaac ggctgcggat tttttggcaa aggatccatt  1320
gacacatgcg ccaaatttgc ctgctctacc aaggcaatag gaagaaccat cttgaaagag  1380
aatatcaagt acgaagtggc catttttgtc catggaccaa ctactgtgga gtcgcacgga  1440
aattactcca cacaggttgg agccactcag gccggccgat tcagcatcac tcctgctgcg  1500
ccttcataca cactaaagct tggagaatat ggagaggtga cagtggactg tgaaccacgg  1560
tcagggattg acaccaatgc atactacgtg atgactgttg gaacaaagac gttcttggtc  1620
catcgtgagt ggttcatgga cctcaacctc ccttggagca gtgctggaag tactgtgtgg  1680
aggaacagag agacgttaat ggagtttgag gaaccacacg ccacgaagca gtctgtgata  1740
gcattgggct cacaagaggg agctctgcat caagctttgg ctggagccat tcctgtggaa  1800
ttttcaagca acactgtcaa gttgacgtcg ggtcatttga agtgtagagt gaagatggaa  1860
aaattgcagt tgaagggaac aacctatggc gtctgttcaa aggctttcaa gtttcttagg  1920
actcccgtgg acaccggtca cggcactgtg gtgttggaat tgcagtacac tggcacggat  1980
ggaccttgca aagttcctat ctcgtcagtg gcttcattga acgacctaac gccagtgggc  2040
agattggtca ctgtcaaccc ttttgtttca gtggccacgg ccaacgctaa ggtcctgatt  2100
gaattggaac caccctttgg agactcatac atagtggtgg gcagaggaga acaacagatc  2160
aatcaccatt ggcacaagtc tggaagcagc attggcaaag cctttacaac caccctcaaa  2220
ggagcgcaga gactagccgc tctaggagac acagcttggg actttggatc agttggaggg  2280
gtgttcacta gtgttgggcg ggctgtccat caagtgttcg gaggagcatt ccgctcactg  2340
ttcggaggca tgtcctggat aacgcaagga ttgctggggg ctctcctgtt gtggatgggc  2400
atcaatgctc gtgataggtc catagctctc acgtttctcg cagttggagg agttctgctc  2460
ttcctctccg tgaacgtggg cgccgatcaa ggatgcgcca tcaactttgg caagagagag  2520
ctcaagtgcg gagatggtat cttcatattt agagactctg atgactggct gaacaagtac  2580
tcatactatc cagaagatcc tgtgaagctt gcatcaatag tgaaagcctc ttttgaagaa  2640
gggaagtgtg gcctaaattc agttgactcc cttgagcatg agatgtggag aagcagggca  2700
gatgagatca atgccatttt tgaggaaaac gaggtggaca tttctgttgt cgtgcaggat  2760
ccaaagaatg tttaccagag aggaactcat ccattttcca gaattcggga tggtctgcag  2820
tatggttgga agacttgggg taagaacctt gtgttctccc cagggaggaa gaatggaagc  2880
ttcatcatag atggaaagtc caggaaagaa tgcccgtttt caaaccgggt ctggaattct  2940
ttccagatag aggagtttgg gacgggagtg ttcaccacac gcgtgtacat ggacgcagtc  3000
tttgaataca ccatagactg cgatggatct atcttgggtg cagcggtgaa cggaaaaaag  3060
agtgcccatg gctctccaac attttggatg ggaagtcatg aagtaaatgg gacatggatg  3120
atccacacct tggaggcatt agattacaag gagtgtgagt ggccactgac acatacgatt  3180
ggaacatcag ttgaagagag tgaaatgttc atgccgagat caatcggagg cccagttagc  3240
tctcacaatc atatccctgg atacaaggtt cagacgaacg gaccttggat gcaggtacca  3300
ctagaagtga agagagaagc ttgcccaggg actagcgtga tcattgatgg caactgtgat  3360
ggacggggaa aatcaaccag atccaccacg gatagcggga aagttattcc tgaatggtgt  3420
tgccgctcct gcacaatgcc gcctgtgagc ttccatggta gtgatgggtg ttggtatccc  3480
atggaaatta ggccaaggaa aacgcatgaa agccatctgg tgcgctcctg ggttacagct  3540
ggagaaatac atgctgtccc ttttggtttg gtgagcatga tgatagcaat ggaagtggtc  3600
ctaaggaaaa gacagggacc aaagcaaatg ttggttggag gagtagtgct cttgggagca  3660
atgctggtcg ggcaagtaac tctccttgat ttgctgaaac tcacagtggc tgtgggattg  3720
catttccatg agatgaacaa tggaggagac gccatgtata tggcgttgat tgctgccttt  3780
tcaatcagac cagggctgct catcggcttt gggctcagga ccctatggag ccctcgggaa  3840
cgccttgtgc tgaccctagg agcagccatg gtggagattg ccttgggtgg cgtgatgggc  3900
ggcctgtgga agtatctaaa tgcagtttct ctctgcatcc tgacaataaa tgctgttgct  3960
tctaggaaag catcaaatac catcttgccc ctcatggctc tgttgacacc tgtcactatg  4020
gctgaggtga gacttgccgc aatgttcttt tgtgccatgg ttatcatagg ggtccttcac  4080
cagaatttca aggacacctc catgcagaag actatacctc tggtggccct cacactcaca  4140
tcttacctgg gcttgacaca accttttttg ggcctgtgtg catttctggc aacccgcata  4200
tttgggcgaa ggagtatccc agtgaatgag gcactcgcag cagctggtct agtgggagtg  4260
ctggcaggac tggcttttca ggagatggag aacttccttg gtccgattgc agttggagga  4320
ctcctgatga tgctggttag cgtggctggg agggtggatg ggctagagct caagaagctt  4380
ggtgaagttt catgggaaga ggaggcggag atcagcggga gttccgcccg ctatgatgtg  4440
gcactcagtg aacaagggga gttcaagctg ctttctgaag agaaagtgcc atgggaccag  4500
gttgtgatga cctcgctggc cttggttggg gctgccctcc atccatttgc tcttctgctg  4560
gtccttgctg ggtggctgtt tcatgtcagg ggagctagga gaagtgggga tgtcttgtgg  4620
gatattccca ctcctaagat catcgaggaa tgtgaacatc tggaggatgg gatttatggc  4680
atattccagt caaccttctt gggggcctcc cagcgaggag tgggagtggc acagggaggg  4740
gtgttccaca caatgtggca tgtcacaaga ggagctttcc ttgtcaggaa tggcaagaag  4800
ttgattccat cttgggcttc agtaaaggaa gaccttgtcg cctatggtgg ctcatggaag  4860
ttggaaggca gatgggatgg agaggaagag gtccagttga tcgcggctgt tccaggaaag  4920
aacgtggtca acgtccagac aaaaccgagc ttgttcaaag tgaggaatgg gggagaaatc  4980
ggggctgtcg ctcttgacta tccgagtggc acttcaggat ctcctattgt taacaggaac  5040
ggagaggtga ttgggctgta cggcaatggc atccttgtcg gtgacaactc cttcgtgtcc  5100
gccatatccc agactgaggt gaaggaagaa ggaaaggagg agctccaaga gatcccgaca  5160
atgctaaaga aaggaatgac aactgtcctt gattttcatc ctggagctgg gaagacaaga  5220
cgtttcctcc cacagatctt ggccgagtgc gcacggagac gcttgcgcac tcttgtgttg  5280
gcccccacca gggttgttct ttctgaaatg aaggaggctt ttcacggcct ggacgtgaaa  5340
ttccacacac aggctttttc cgctcacggc agcgggagag aagtcattga tgccatgtgc  5400
catgccaccc taacttacag gatgttggaa ccaactaggg ttgttaactg ggaagtgatc  5460
attatggatg aagcccattt tttggatcca gccagcatag ccgctagagg ttgggcagcg  5520
cacagagcta gggcaaatga aagtgcaaca atcttgatga cagccacacc gcctgggact  5580
agtgatgaat ttccacattc aaatggtgaa atagaagatg ttcaaacgga catacccagt  5640
gagccctgga acacagggca tgactggatc ctggctgaca aaaggcccac ggcatggttc  5700
cttccatcca tcagagctgc aaatgtcatg gctgcctctt tgcgtaaggc tggaaagagt  5760
gtggtggtcc tgaacaggaa aacctttgag agagaatacc ccacgataaa gcagaagaaa  5820
cctgacttta tattggccac tgacatagct gaaatgggag ccaacctttg cgtggagcga  5880
gtgctggatt gcaggacggc ttttaagcct gtgcttgtgg atgaagggag gaaggtggca  5940
ataaaagggc cacttcgtat ctccgcatcc tctgctgctc aaaggagggg gcgcattggg  6000
agaaatccca acagagatgg agactcatac tactattctg agcctacaag tgaaaataat  6060
gcccaccacg tctgctggtt ggaggcctca atgctcttgg acaacatgga ggtgaggggt  6120
ggaatggtcg ccccactcta tggcgttgaa ggaactaaaa caccagtttc ccctggtgaa  6180
atgagactga gggatgacca gaggaaagtc ttcagagaac tagtgaggaa ttgtgacctg  6240
cccgtttggc tttcgtggca agtggccaag gctggtttga agacgaatga tcgtaagtgg  6300
tgttttgaag gccctgagga acatgagatc ttgaatgaca gcggtgaaac agtgaagtgc  6360
agggctcctg gaggagcaaa gaagcctctg cgcccaaggt ggtgtgatga aagggtgtca  6420
tctgaccaga gtgcgctgtc tgaatttatt aagtttgctg aaggtaggag gggagctgct  6480
gaagtgctag ttgtgctgag tgaactccct gatttcctgg ctaaaaaagg tggagaggca  6540
atggatacca tcagtgtgtt cctccactct gaggaaggct ctagggctta ccgcaatgca  6600
ctatcaatga tgcctgaggc aatgacaata gtcatgctgt ttatactggc tggactactg  6660
acatcgggaa tggtcatctt tttcatgtct cccaaaggca tcagtagaat gtctatggcg  6720
atgggcacaa tggccggctg tggatatctc atgttccttg gaggcgtcaa acccactcac  6780
atctcctatg tcatgctcat attctttgtc ctgatggtgg ttgtgatccc cgagccaggg  6840
caacaaaggt ccatccaaga caaccaagtg gcatacctca ttattggcat cctgacgctg  6900
gtttcagcgg tggcagccaa cgagctaggc atgctggaga aaaccaaaga ggacctcttt  6960
gggaagaaga acttaattcc atctagtgct tcaccctgga gttggccgga tcttgacctg  7020
aagccaggag ctgcctggac agtgtacgtt ggcattgtta caatgctctc tccaatgttg  7080
caccactgga tcaaagtcga atatggcaac ctgtctctgt ctggaatagc ccagtcagcc  7140
tcagtccttt ctttcatgga caaggggata ccattcatga agatgaatat ctcggtcata  7200
atgctgctgg tcagtggctg gaattcaata acagtgatgc ctctgctctg tggcataggg  7260
tgcgccatgc tccactggtc tctcatttta cctggaatca aagcgcagca gtcaaagctt  7320
gcacagagaa gggtgttcca tggcgttgcc aagaaccctg tggttgatgg gaatccaaca  7380
gttgacattg aggaagctcc tgaaatgcct gccctttatg agaagaaact ggctctatat  7440
ctccttcttg ctctcagcct agcttctgtt gccatgtgca gaacgccctt ttcattggct  7500
gaaggcattg tcctagcatc agctgcctta gggccgctca tagagggaaa caccagcctt  7560
ctttggaatg gacccatggc tgtctccatg acaggagtca tgagggggaa tcactatgct  7620
tttgtgggag tcatgtacaa tctatggaag atgaaaactg gacgccgggg gagcgcgaat  7680
ggaaaaactt tgggtgaagt ctggaagagg gaactgaatc tgttggacaa gcgacagttt  7740
gagttgtata aaaggaccga cattgtggag gtggatcgtg atacggcacg caggcatttg  7800
gccgaaggga aggtggacac cggggtggcg gtctccaggg ggaccgcaaa gttaaggtgg  7860
ttccatgagc gtggctatgt caagctggaa ggtagggtga ttgacctggg gtgtggccgc  7920
ggaggctggt gttactacgc tgctgcgcaa aaggaagtga gtggggtcaa aggatttact  7980
cttggaagag acggccatga gaaacccatg aatgtgcaaa gtctgggatg gaacatcatc  8040
accttcaagg acaaaactga tatccaccgc ctagaaccag tgaaatgtga cacccttttg  8100
tgtgacattg gagagtcatc atcgtcatcg gtcacagagg gggaaaggac cgtgagagtt  8160
cttgatactg tagaaaaatg gctggcttgt ggggttgaca acttctgtgt gaaggtgtta  8220
gctccataca tgccagatgt tcttgagaaa ctggaattgc tccaaaggag gtttggcgga  8280
acagtgatca ggaaccctct ctccaggaat tccactcatg aaatgtacta cgtgtctgga  8340
gcccgcagca atgtcacatt tactgtgaac caaacatccc gcctcctgat gaggagaatg  8400
aggcgtccaa ctggaaaagt gaccctggag gctgacgtca tcctcccaat tgggacacgc  8460
agtgttgaga cagacaaggg acccctggac aaagaggcca tagaagaaag ggttgagagg  8520
ataaaatctg agtacatgac ctcttggttt tatgacaatg acaaccccta caggacctgg  8580
cactactgtg gctcctatgt cacaaaaacc tccggaagtg cggcgagcat ggtaaatggt  8640
gttattaaaa ttctgacata tccatgggac aggatagagg aggtcacaag aatggcaatg  8700
actgacacaa ccccttttgg acagcaaaga gtgtttaaag aaaaagttga caccagagca  8760
aaggatccac cagcgggaac taggaagatc atgaaagttg tcaacaggtg gctgttccgc  8820
cacctggcca gagaaaagaa ccccagactg tgcacaaagg aagaatttat tgcaaaagtc  8880
cgaagtcatg cagccattgg agcttacctg gaagaacaag aacagtggaa gactgccaat  8940
gaggctgtcc aagacccaaa gttctgggaa ctggtggatg aagaaaggaa gctgcaccaa  9000
caaggcaggt gtcggacttg tgtgtacaac atgatgggga aaagagagaa gaagctgtca  9060
gagtttggga aagcaaaggg aagccgtgcc atatggtata tgtggctggg agcgcggtat  9120
cttgagtttg aggccctggg attcctgaat gaggaccatt gggcttccag ggaaaactca  9180
ggaggaggag tggaaggcat tggcttacaa tacctaggat atgtgatcag agacctggct  9240
gcaatggatg gtggtggatt ctacgcggat gacaccgctg gatgggacac gcgcatcaca  9300
gaggcagacc ttgatgatga acaggagatc ttgaactaca tgagcccaca tcacaaaaaa  9360
ctggcacaag cagtgatgga aatgacatac aagaacaaag tggtgaaagt gttgagacca  9420
gccccaggag ggaaagccta catggatgtc ataagtcgac gagaccagag aggatccggg  9480
caggtagtga cttatgctct gaacaccatc accaacttga aagtccaatt gatcagaatg  9540
gcagaagcag agatggtgat acatcaccaa catgttcaag attgtgatga atcagttctg  9600
accaggctgg aggcatggct cactgagcac ggatgtgaca gactgaagag gatggcggtg  9660
agtggagacg actgtgtggt ccggcccatc gatgacaggt tcggcctggc cctgtcccat  9720
ctcaacgcca tgtccaaggt tagaaaggac atatctgaat ggcagccatc aaaagggtgg  9780
aatgattggg agaatgtgcc cttctgttcc caccacttcc atgaactaca gctgaaggat  9840
ggcaggagga ttgtggtgcc ttgccgagaa caggacgagc tcattgggag aggaagggtg  9900
tctccaggaa acggctggat gatcaaggaa acagcttgcc tcagcaaagc ctatgccaac  9960
atgtggtcac tgatgtattt tcacaaaagg gacatgaggc tactgtcatt ggctgtttcc 10020
tcagctgttc ccacctcatg ggttccacaa ggacgcacaa catggtcgat tcatgggaaa 10080
ggggagtgga tgaccacgga agacatgctt gaggtgtgga acagagtatg gataaccaac 10140
aacccacaca tgcaggacaa gacaatggtg aaaaaatgga gagatgtccc ttatctaacc 10200
aagagacaag acaagctgtg cggatcactg attggaatg                        10239
<210>25
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于西尼罗病毒
<400>25
Ser Leu Thr Val Gln Thr His Gly Glu Ser Thr Leu
1               5                   10
<210>26
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于西尼罗病毒
<400>26
Val Val Leu Leu Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser
1               5                   10
<210>27
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于西尼罗病毒
<400>27
Val Val Pro Leu Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser
1               5                   10
<210>28
<211>75
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于西尼罗病毒
<400>28
Ser Leu Thr Val Gln Thr His Gly Glu Ser Thr Leu Ala Asn Lys Lys
1               5                   10                  15
Gly Ala Trp Met Asp Ser Thr Lys Ala Thr Arg Tyr Leu Val Lys Thr
            20                  25                  30
Glu Ser Trp Ile Leu Arg Asn Pro Gly Tyr Ala Leu Val Ala Ala Val
        35                  40                  45
Ile Gly Trp Met Leu Gly Ser Asn Thr Met Gln Arg Val Val Phe Val
    50                  55                  60
Val Leu Leu Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser
65                  70                  75
<210>29
<211>74
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于西尼罗病毒
<400>29
Ser Leu Thr Val Gln Thr His Gly Glu Ser Thr Leu Ala Asn Lys Lys
1               5                   10                  15
Gly Ala Trp Met Asp Ser Thr Lys Ala Thr Arg Tyr Leu Val Lys Thr
            20                  25                  30
Glu Ser Trp Ile Leu Arg Asn Pro Gly Tyr Ala Leu Val Ala Ala Val
        35                  40                  45
Ile Gly Trp Met Leu Gly Ser Asn Thr Met Gln Arg Val Val Phe Val
    50                  55                  60
Val Leu Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser
65                  70
<210>30
<211>75
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于西尼罗病毒
<400>30
Ser Leu Thr Val Gln Thr His Gly Glu Ser Thr Leu Ala Asn Lys Lys
1               5                   10                  15
Gly Ala Trp Met Asp Ser Thr Lys Ala Thr Arg Tyr Leu Val Lys Thr
            20                  25                  30
Glu Ser Trp Ile Leu Arg Asn Pro Gly Tyr Ala Leu Val Ala Ala Val
        35                  40                  45
Ile Gly Trp Met Leu Gly Ser Asn Thr Met Gln Arg Val Val Phe Val
    50                  55                  60
Val Pro Leu Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser
65                  70                  75
<210>31
<211>377
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒
<400>31
taaaaactac ggatggagaa ccggactcca cacattgaga cagaagaagt tgtcagccca    60
gaaccccaca cgagttttgc cactgctaag ctgtgaggca gtgcaggctg ggacagccga   120
cctccaggtt gcgataaacc tggtttctgg gacctcccac cccagagtaa aaagaacgga   180
gcctccgcta ccaccttccc acgtggtggt agaaagacgg ggtctagagg ttagaggaga   240
ccctccaggg aacaaatagt gggaccatat tgacgccagg gaaagaccgg agtggttctc   300
tgcttttcct ccagaggtct gtgagcacag tttgctcaag aataagcaga cctttggatg   360
acaaacacaa aaccact                                                  377
<210>32
<211>343
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒
<400>32
uugagacaga agaaguuguc agcccagaac cccacacgag uuuugccacu gcuaagcugu    60
gaggcagugc aggcugggac agccgaccuc cagguugcga aaaaccuggu uucugggacc   120
ucccacccca gaguaaaaag aacggagccu ccgcuaccac ccucccacgu ggugguagaa   180
agacgggguc uagagguuag aggagacccu ccagggaaca aauaguggga ccauauugac   240
gccagggaaa gaccggagug guucucugcu uuuccuccag aggucuguga gcacaguuug   300
cucaagaaua agcagaccuu uggaugacaa acacaaaacc acu                     343
<210>33
<211>338
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒
<400>33
uugagacaga agaaguuguc agcccagaac cccacacgag uuuugccacu gcuaagcugu    60
gaggcagugc aggcugggac agccgaccuc cagguugcga aaaaccuggu uucugggacc   120
ucccaccgua aaaagaaggg agccucggcu accacccucc cacguggugg uagaaagacg   180
gggucuagag guuagaggag acccuccagg gaacaaauag ugggaccaua uugaggccag   240
ggaaagaccg gagugguucu cugcuuuucc uccagagguc ugugagcaca guuugcucaa   300
gaauaagcag accuuuggau gacaaacaga aaaccacu                           338
<210>34
<211>116
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于蜱传脑炎病毒
<400>34
Met Val Lys Lys Ala Ile Leu Lys Gly Lys Gly Gly Gly Pro Pro Arg
1               5                   10                  15
Arg Val Ser Lys Glu Thr Ala Thr Lys Thr Arg Gln Pro Arg Val Gln
            20                  25                  30
Met Pro Asn Gly Leu Val Leu Met Arg Met Met Gly Ile Leu Trp His
        35                  40                  45
Ala Val Ala Gly Thr Ala Arg Asn Pro Val Leu Lys Ala Phe Trp Asn
    50                  55                  60
Ser Val Pro Leu Lys Gln Ala Thr Ala Ala Leu Arg Lys Ile Lys Arg
65                  70                  75                  80
Thr Val Ser Ala Leu Met Val Gly Leu Gln Lys Arg Gly Lys Arg Arg
                85                  90                  95
Ser Ala Thr Asp Trp Met Ser Trp Leu Leu Val Ile Thr Leu Leu Gly
            100                 105                 110
Met Thr Leu Ala
        115
<210>35
<211>121
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒
<400>35
Met Ser Gly Arg Lys Ala Gln Gly Lys Thr Leu Gly Val Asn Met Val
1               5                   10                  15
Arg Arg Gly Val Arg Ser Leu Ser Asn Lys Ile Lys Gln Lys Thr Lys
            20                  25                  30
Gln Ile Gly Asn Arg Pro Gly Pro Ser Arg Gly Val Gln Gly Phe Ile
        35                  40                  45
Phe Phe Phe Leu Phe Asn Ile Leu Thr Gly Lys Lys Ile Thr Ala His
    50                  55                  60
Leu Lys Arg Leu Trp Lys Met Leu Asp Pro Arg Gln Gly Leu Ala Val
65                  70                  75                  80
Leu Arg Lys Val Lys Arg Val Val Ala Ser Leu Met Arg Gly Leu Ser
                85                  90                  95
Ser Arg Lys Arg Arg Ser His Asp Val Leu Thr Val Gln Phe Leu Ile
            100                 105                 110
Leu Gly Met Leu Leu Met Thr Gly Gly
        115                 120
<210>36
<211>11
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<400>36
gtaaatcctg t                                                         11
<210>37
<211>12
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<400>37
acaaaaccac aa                                                        12
<210>38
<211>10239
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>衍生于黄热病病毒和西尼罗病毒
<400>38
gtaaatcctg tgtgctaatt gaggtgcatt ggtctgcaaa tcgagttgct aggcaataaa    60
cacatttgga ttaattttaa tcgttcgttg agcgattagc agagaactga ccagaacatg   120
tctggtcgta aagctcaggg aaaaaccctg ggcgtcaata tggtacgacg aggagttcgc   180
tccttgtcaa acaaaataaa acaaaaaaca aaacaaattg gaaacagacc tggaccttca   240
agaggtgttc aaggatttat ctttttcttt ttgttcaaca ttttgactgg aaaaaagatc   300
acagcccacc taaagaggtt gtggaaaatg ctggacccaa gacaaggctt ggctgttcta   360
aggaaagtca agagagtggt ggccagtttg atgagaggat tgtcctcaag gaaacgccgt   420
tcccatgatg ttctgactgt gcaattccta attttgggaa tgctgttgat gacgggtgga   480
gttaccctct ctaacttcca agggaaggtg atgatgacgg taaatgctac tgacgtcaca   540
gatgtcatca cgattccaac agctgctgga aagaacctat gcattgtcag agcaatggat   600
gtgggataca tgtgcgatga tactatcact tatgaatgcc cagtgctgtc ggctggtaat   660
gatccagaag acatcgactg ttggtgcaca aagtcagcag tctacgtcag gtatggaaga   720
tgcaccaaga cacgccactc aagacgcagt cggaggtcac tgacagtgca gacacacgga   780
gaaagcactc tagcgaacaa gaagggggct tggatggaca gcaccaaggc cacaaggtat   840
ttggtaaaaa cagaatcatg gatcttgagg aaccctggat atgccctggt ggcagccgtc   900
attggttgga tgcttgggag caacaccatg cagagagttg tgtttgtcgt gccattgctt   960
ttggtggccc cagcttacag cttcaactgc cttggaatga gcaacagaga cttcttggaa  1020
ggagtgtctg gagcaacatg ggtggatttg gttctcgaag gcgacagctg cgtgactatc  1080
atgtctaagg acaagcctac catcgacgtc aagatgatga atatggaggc ggccaacctg  1140
gcagaggtcc gcagttattg ctatttggct accgtcagcg atctctccac caaagctgca  1200
tgcccgacca tgggagaagc tcacaatgac aaacgtgctg acccagcttt tgtgtgcaga  1260
caaggagtgg tggacagggg ctggggcaac ggctgcggat tttttggcaa aggatccatt  1320
gacacatgcg ccaaatttgc ctgctctacc aaggcaatag gaagaaccat cttgaaagag  1380
aatatcaagt acgaagtggc catttttgtc catggaccaa ctactgtgga gtcgcacgga  1440
aattactcca cacaggttgg agccactcag gccggccgat tcagcatcac tcctgctgcg  1500
ccttcataca cactaaagct tggagaatat ggagaggtga cagtggactg tgaaccacgg  1560
tcagggattg acaccaatgc atactacgtg atgactgttg gaacaaagac gttcttggtc  1620
catcgtgagt ggttcatgga cctcaacctc ccttggagca gtgctggaag tactgtgtgg  1680
aggaacagag agacgttaat ggagtttgag gaaccacacg ccacgaagca gtctgtgata  1740
gcattgggct cacaagaggg agctctgcat caagctttgg ctggagccat tcctgtggaa  1800
ttttcaagca acactgtcaa gttgacgtcg ggtcatttga agtgtagagt gaagatggaa  1860
aaattgcagt tgaagggaac aacctatggc gtctgttcaa aggctttcaa gtttcttagg  1920
actcccgtgg acaccggtca cggcactgtg gtgttggaat tgcagtacac tggcacggat  1980
ggaccttgca aagttcctat ctcgtcagtg gcttcattga acgacctaac gccagtgggc  2040
agattggtca ctgtcaaccc ttttgtttca gtggccacgg ccaacgctaa ggtcctgatt  2100
gaattggaac caccctttgg agactcatac atagtggtgg gcagaggaga acaacagatc  2160
aatcaccatt ggcacaagtc tggaagcagc attggcaaag cctttacaac caccctcaaa  2220
ggagcgcaga gactagccgc tctaggagac acagcttggg actttggatc agttggaggg  2280
gtgttcacta gtgttgggcg ggctgtccat caagtgttcg gaggagcatt ccgctcactg  2340
ttcggaggca tgtcctggat aacgcaagga ttgctggggg ctctcctgtt gtggatgggc  2400
atcaatgctc gtgataggtc catagctctc acgtttctcg cagttggagg agttctgctc  2460
ttcctctccg tgaacgtggg cgccgatcaa ggatgcgcca tcaactttgg caagagagag  2520
ctcaagtgcg gagatggtat cttcatattt agagactctg atgactggct gaacaagtac  2580
tcatactatc cagaagatcc tgtgaagctt gcatcaatag tgaaagcctc ttttgaagaa  2640
gggaagtgtg gcctaaattc agttgactcc cttgagcatg agatgtggag aagcagggca  2700
gatgagatca atgccatttt tgaggaaaac gaggtggaca tttctgttgt cgtgcaggat  2760
ccaaagaatg tttaccagag aggaactcat ccattttcca gaattcggga tggtctgcag  2820
tatggttgga agacttgggg taagaacctt gtgttctccc cagggaggaa gaatggaagc  2880
ttcatcatag atggaaagtc caggaaagaa tgcccgtttt caaaccgggt ctggaattct  2940
ttccagatag aggagtttgg gacgggagtg ttcaccacac gcgtgtacat ggacgcagtc  3000
tttgaataca ccatagactg cgatggatct atcttgggtg cagcggtgaa cggaaaaaag  3060
agtgcccatg gctctccaac attttggatg ggaagtcatg aagtaaatgg gacatggatg  3120
atccacacct tggaggcatt agattacaag gagtgtgagt ggccactgac acatacgatt  3180
ggaacatcag ttgaagagag tgaaatgttc atgccgagat caatcggagg cccagttagc  3240
tctcacaatc atatccctgg atacaaggtt cagacgaacg gaccttggat gcaggtacca  3300
ctagaagtga agagagaagc ttgcccaggg actagcgtga tcattgatgg caactgtgat  3360
ggacggggaa aatcaaccag atccaccacg gatagcggga aagttattcc tgaatggtgt  3420
tgccgctcct gcacaatgcc gcctgtgagc ttccatggta gtgatgggtg ttggtatccc  3480
atggaaatta ggccaaggaa aacgcatgaa agccatctgg tgcgctcctg ggttacagct  3540
ggagaaatac atgctgtccc ttttggtttg gtgagcatga tgatagcaat ggaagtggtc  3600
ctaaggaaaa gacagggacc aaagcaaatg ttggttggag gagtagtgct cttgggagca  3660
atgctggtcg ggcaagtaac tctccttgat ttgctgaaac tcacagtggc tgtgggattg  3720
catttccatg agatgaacaa tggaggagac gccatgtata tggcgttgat tgctgccttt  3780
tcaatcagac cagggctgct catcggcttt gggctcagga ccctatggag ccctcgggaa  3840
cgccttgtgc tgaccctagg agcagccatg gtggagattg ccttgggtgg cgtgatgggc  3900
ggcctgtgga agtatctaaa tgcagtttct ctctgcatcc tgacaataaa tgctgttgct  3960
tctaggaaag catcaaatac catcttgccc ctcatggctc tgttgacacc tgtcactatg  4020
gctgaggtga gacttgccgc aatgttcttt tgtgccatgg ttatcatagg ggtccttcac  4080
cagaatttca aggacacctc catgcagaag actatacctc tggtggccct cacactcaca  4140
tcttacctgg gcttgacaca accttttttg ggcctgtgtg catttctggc aacccgcata  4200
tttgggcgaa ggagtatccc agtgaatgag gcactcgcag cagctggtct agtgggagtg  4260
ctggcaggac tggcttttca ggagatggag aacttccttg gtccgattgc agttggagga  4320
ctcctgatga tgctggttag cgtggctggg agggtggatg ggctagagct caagaagctt  4380
ggtgaagttt catgggaaga ggaggcggag atcagcggga gttccgcccg ctatgatgtg  4440
gcactcagtg aacaagggga gttcaagctg ctttctgaag agaaagtgcc atgggaccag  4500
gttgtgatga cctcgctggc cttggttggg gctgccctcc atccatttgc tcttctgctg  4560
gtccttgctg ggtggctgtt tcatgtcagg ggagctagga gaagtgggga tgtcttgtgg  4620
gatattccca ctcctaagat catcgaggaa tgtgaacatc tggaggatgg gatttatggc  4680
atattccagt caaccttctt gggggcctcc cagcgaggag tgggagtggc acagggaggg  4740
gtgttccaca caatgtggca tgtcacaaga ggagctttcc ttgtcaggaa tggcaagaag  4800
ttgattccat cttgggcttc agtaaaggaa gaccttgtcg cctatggtgg ctcatggaag  4860
ttggaaggca gatgggatgg agaggaagag gtccagttga tcgcggctgt tccaggaaag  4920
aacgtggtca acgtccagac aaaaccgagc ttgttcaaag tgaggaatgg gggagaaatc  4980
ggggctgtcg ctcttgacta tccgagtggc acttcaggat ctcctattgt taacaggaac  5040
ggagaggtga ttgggctgta cggcaatggc atccttgtcg gtgacaactc cttcgtgtcc  5100
gccatatccc agactgaggt gaaggaagaa ggaaaggagg agctccaaga gatcccgaca  5160
atgctaaaga aaggaatgac aactgtcctt gattttcatc ctggagctgg gaagacaaga  5220
cgtttcctcc cacagatctt ggccgagtgc gcacggagac gcttgcgcac tcttgtgttg  5280
gcccccacca gggttgttct ttctgaaatg aaggaggctt ttcacggcct ggacgtgaaa  5340
ttccacacac aggctttttc cgctcacggc agcgggagag aagtcattga tgccatgtgc  5400
catgccaccc taacttacag gatgttggaa ccaactaggg ttgttaactg ggaagtgatc  5460
attatggatg aagcccattt tttggatcca gccagcatag ccgctagagg ttgggcagcg  5520
cacagagcta gggcaaatga aagtgcaaca atcttgatga cagccacacc gcctgggact  5580
agtgatgaat ttccacattc aaatggtgaa atagaagatg ttcaaacgga catacccagt  5640
gagccctgga acacagggca tgactggatc ctggctgaca aaaggcccac ggcatggttc  5700
cttccatcca tcagagctgc aaatgtcatg gctgcctctt tgcgtaaggc tggaaagagt  5760
gtggtggtcc tgaacaggaa aacctttgag agagaatacc ccacgataaa gcagaagaaa  5820
cctgacttta tattggccac tgacatagct gaaatgggag ccaacctttg cgtggagcga  5880
gtgctggatt gcaggacggc ttttaagcct gtgcttgtgg atgaagggag gaaggtggca  5940
ataaaagggc cacttcgtat ctccgcatcc tctgctgctc aaaggagggg gcgcattggg  6000
agaaatccca acagagatgg agactcatac tactattctg agcctacaag tgaaaataat  6060
gcccaccacg tctgctggtt ggaggcctca atgctcttgg acaacatgga ggtgaggggt  6120
ggaatggtcg ccccactcta tggcgttgaa ggaactaaaa caccagtttc ccctggtgaa  6180
atgagactga gggatgacca gaggaaagtc ttcagagaac tagtgaggaa ttgtgacctg  6240
cccgtttggc tttcgtggca agtggccaag gctggtttga agacgaatga tcgtaagtgg  6300
tgttttgaag gccctgagga acatgagatc ttgaatgaca gcggtgaaac agtgaagtgc  6360
agggctcctg gaggagcaaa gaagcctctg cgcccaaggt ggtgtgatga aagggtgtca  6420
tctgaccaga gtgcgctgtc tgaatttatt aagtttgctg aaggtaggag gggagctgct  6480
gaagtgctag ttgtgctgag tgaactccct gatttcctgg ctaaaaaagg tggagaggca  6540
atggatacca tcagtgtgtt cctccactct gaggaaggct ctagggctta ccgcaatgca  6600
ctatcaatga tgcctgaggc aatgacaata gtcatgctgt ttatactggc tggactactg  6660
acatcgggaa tggtcatctt tttcatgtct cccaaaggca tcagtagaat gtctatggcg  6720
atgggcacaa tggccggctg tggatatctc atgttccttg gaggcgtcaa acccactcac  6780
atctcctatg tcatgctcat attctttgtc ctgatggtgg ttgtgatccc cgagccaggg  6840
caacaaaggt ccatccaaga caaccaagtg gcatacctca ttattggcat cctgacgctg  6900
gtttcagcgg tggcagccaa cgagctaggc atgctggaga aaaccaaaga ggacctcttt  6960
gggaagaaga acttaattcc atctagtgct tcaccctgga gttggccgga tcttgacctg  7020
aagccaggag ctgcctggac agtgtacgtt ggcattgtta caatgctctc tccaatgttg  7080
caccactgga tcaaagtcga atatggcaac ctgtctctgt ctggaatagc ccagtcagcc  7140
tcagtccttt ctttcatgga caaggggata ccattcatga agatgaatat ctcggtcata  7200
atgctgctgg tcagtggctg gaattcaata acagtgatgc ctctgctctg tggcataggg  7260
tgcgccatgc tccactggtc tctcatttta cctggaatca aagcgcagca gtcaaagctt  7320
gcacagagaa gggtgttcca tggcgttgcc aagaaccctg tggttgatgg gaatccaaca  7380
gttgacattg aggaagctcc tgaaatgcct gccctttatg agaagaaact ggctctatat  7440
ctccttcttg ctctcagcct agcttctgtt gccatgtgca gaacgccctt ttcattggct  7500
gaaggcattg tcctagcatc agctgcctta gggccgctca tagagggaaa caccagcctt  7560
ctttggaatg gacccatggc tgtctccatg acaggagtca tgagggggaa tcactatgct  7620
tttgtgggag tcatgtacaa tctatggaag atgaaaactg gacgccgggg gagcgcgaat  7680
ggaaaaactt tgggtgaagt ctggaagagg gaactgaatc tgttggacaa gcgacagttt  7740
gagttgtata aaaggaccga cattgtggag gtggatcgtg atacggcacg caggcatttg  7800
gccgaaggga aggtggacac cggggtggcg gtctccaggg ggaccgcaaa gttaaggtgg  7860
ttccatgagc gtggctatgt caagctggaa ggtagggtga ttgacctggg gtgtggccgc  7920
ggaggctggt gttactacgc tgctgcgcaa aaggaagtga gtggggtcaa aggatttact  7980
cttggaagag acggccatga gaaacccatg aatgtgcaaa gtctgggatg gaacatcatc  8040
accttcaagg acaaaactga tatccaccgc ctagaaccag tgaaatgtga cacccttttg  8100
tgtgacattg gagagtcatc atcgtcatcg gtcacagagg gggaaaggac cgtgagagtt  8160
cttgatactg tagaaaaatg gctggcttgt ggggttgaca acttctgtgt gaaggtgtta  8220
gctccataca tgccagatgt tcttgagaaa ctggaattgc tccaaaggag gtttggcgga  8280
acagtgatca ggaaccctct ctccaggaat tccactcatg aaatgtacta cgtgtctgga  8340
gcccgcagca atgtcacatt tactgtgaac caaacatccc gcctcctgat gaggagaatg  8400
aggcgtccaa ctggaaaagt gaccctggag gctgacgtca tcctcccaat tgggacacgc  8460
agtgttgaga cagacaaggg acccctggac aaagaggcca tagaagaaag ggttgagagg  8520
ataaaatctg agtacatgac ctcttggttt tatgacaatg acaaccccta caggacctgg  8580
cactactgtg gctcctatgt cacaaaaacc tccggaagtg cggcgagcat ggtaaatggt  8640
gttattaaaa ttctgacata tccatgggac aggatagagg aggtcacaag aatggcaatg  8700
actgacacaa ccccttttgg acagcaaaga gtgtttaaag aaaaagttga caccagagca  8760
aaggatccac cagcgggaac taggaagatc atgaaagttg tcaacaggtg gctgttccgc  8820
cacctggcca gagaaaagaa ccccagactg tgcacaaagg aagaatttat tgcaaaagtc  8880
cgaagtcatg cagccattgg agcttacctg gaagaacaag aacagtggaa gactgccaat  8940
gaggctgtcc aagacccaaa gttctgggaa ctggtggatg aagaaaggaa gctgcaccaa  9000
caaggcaggt gtcggacttg tgtgtacaac atgatgggga aaagagagaa gaagctgtca  9060
gagtttggga aagcaaaggg aagccgtgcc atatggtata tgtggctggg agcgcggtat  9120
cttgagtttg aggccctggg attcctgaat gaggaccatt gggcttccag ggaaaactca  9180
ggaggaggag tggaaggcat tggcttacaa tacctaggat atgtgatcag agacctggct  9240
gcaatggatg gtggtggatt ctacgcggat gacaccgctg gatgggacac gcgcatcaca  9300
gaggcagacc ttgatgatga acaggagatc ttgaactaca tgagcccaca tcacaaaaaa  9360
ctggcacaag cagtgatgga aatgacatac aagaacaaag tggtgaaagt gttgagacca  9420
gccccaggag ggaaagccta catggatgtc ataagtcgac gagaccagag aggatccggg  9480
caggtagtga cttatgctct gaacaccatc accaacttga aagtccaatt gatcagaatg  9540
gcagaagcag agatggtgat acatcaccaa catgttcaag attgtgatga atcagttctg  9600
accaggctgg aggcatggct cactgagcac ggatgtgaca gactgaagag gatggcggtg  9660
agtggagacg actgtgtggt ccggcccatc gatgacaggt tcggcctggc cctgtcccat  9720
ctcaacgcca tgtccaaggt tagaaaggac atatctgaat ggcagccatc aaaagggtgg  9780
aatgattggg agaatgtgcc cttctgttcc caccacttcc atgaactaca gctgaaggat  9840
ggcaggagga ttgtggtgcc ttgccgagaa caggacgagc tcattgggag aggaagggtg  9900
tctccaggaa acggctggat gatcaaggaa acagcttgcc tcagcaaagc ctatgccaac  9960
atgtggtcac tgatgtattt tcacaaaagg gacatgaggc tactgtcatt ggctgtttcc 10020
tcagctgttc ccacctcatg ggttccacaa ggacgcacaa catggtcgat tcatgggaaa 10080
ggggagtgga tgaccacgga agacatgctt gaggtgtgga acagagtatg gataaccaac 10140
aacccacaca tgcaggacaa gacaatggtg aaaaaatgga gagatgtccc ttatctaacc 10200
aagagacaag acaagctgtg cggatcactg attggaatg                        10239

Claims (12)

1.减毒的嵌合黄病毒,其包含黄热病毒,其中膜和包膜蛋白已经用日本脑炎病毒或西尼罗病毒的膜和包膜蛋白替代,其中所述嵌合黄病毒在用日本脑炎病毒的膜和包膜蛋白进行替代时包含嵌合黄病毒膜蛋白的氨基酸60内的突变,所述突变使在所述膜蛋白的第60位氨基酸的精氨酸被半胱氨酸替代;或在用西尼罗病毒的膜和包膜蛋白进行替代时包含嵌合黄病毒膜蛋白的氨基酸66内的突变,所述突变使在所述膜蛋白的第66位氨基酸的亮氨酸被脯氨酸替代,其中所述日本脑炎病毒是SA14-14-2株,西尼罗病毒是NY99株。
2.权利要求1的黄病毒,其中所述突变降低了该黄病毒的趋内脏现象/病毒血症。
3.权利要求1的黄病毒,其中所述突变使得相对于缺乏所述突变的对应黄病毒而言细胞内的病毒复制提高。
4.权利要求1的黄病毒,其中所述突变使该黄病毒减毒。
5.权利要求1-4任一项的黄病毒,其中所述黄热病毒是YF-17D。
6.权利要求1-5任一项的黄病毒,其中黄热病毒的膜和包膜蛋白已经用日本脑炎病毒的膜和包膜蛋白替代。
7.权利要求1-5任一项的黄病毒,其中黄热病毒的膜和包膜蛋白已经用西尼罗病毒的膜和包膜蛋白替代。
8.权利要求7的黄病毒,其中所述黄病毒包含突变,所述突变在与西尼罗病毒包膜蛋白的第107、316、和440位相对应的残基上,且其中在第107位的赖氨酸被替换为苯丙氨酸,在第316位的丙氨酸被替换为缬氨酸,而在第440位的赖氨酸被替换为精氨酸。
9.制备权利要求1的嵌合黄病毒的方法,该方法包括引入所述突变。
10.权利要求9的方法,其中所述突变使该黄病毒相对于缺乏所述突变的对应黄病毒而言发生减毒。
11.权利要求9的方法,其中所述突变使得该黄病毒相对于缺乏所述突变的对应黄病毒而言其复制增加。
12.核酸分子,其对应于权利要求1-8任一项的黄病毒的基因组或其互补物。
CN200580043790.0A 2004-10-20 2005-10-19 抗日本脑炎病毒及西尼罗病毒的疫苗 Active CN101084010B (zh)

Applications Claiming Priority (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US62046604P 2004-10-20 2004-10-20
US60/620,466 2004-10-20
US62094804P 2004-10-21 2004-10-21
US60/620,948 2004-10-21
US67441505P 2005-04-24 2005-04-24
US60/674,415 2005-04-24
US67454605P 2005-04-25 2005-04-25
US60/674,546 2005-04-25
US71892305P 2005-09-19 2005-09-19
US60/718,923 2005-09-19
PCT/US2005/037369 WO2006044857A2 (en) 2004-10-20 2005-10-19 Vaccines against japanese encephalitis virus and west nile virus

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101084010A CN101084010A (zh) 2007-12-05
CN101084010B true CN101084010B (zh) 2015-05-06

Family

ID=38913110

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200580043790.0A Active CN101084010B (zh) 2004-10-20 2005-10-19 抗日本脑炎病毒及西尼罗病毒的疫苗

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN101084010B (zh)
ZA (1) ZA200704033B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101235085B (zh) * 2008-01-24 2011-01-12 中国科学院微生物研究所 抗西尼罗病毒膜蛋白e的单克隆抗体及其应用
EP3031923A1 (en) * 2014-12-11 2016-06-15 Institut Pasteur Lentiviral vector-based japanese encephalitis immunogenic composition
CN105400799B (zh) * 2015-12-22 2018-12-28 成都生物制品研究所有限责任公司 一种乙脑/黄热嵌合病毒及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Clinical proof of principle for ChimeriVaxTM: recombinant live, attenuated vaccines against flavivirus infections;Thomas P. Monath等;<Vaccine>;20021231;第20卷;第1004-1018页 *
Efficacy of Killed Virus Vaccine, Live Attenuated Chimeric Virus Vaccine, and Passive Immunization for Prevention of West Nile virus Encephalitis in Hamster Model;Robert B. Tesh等;<Emerging Infectious Diseases>;20021231;第8卷(第12期);第1392-1397页 *
Growth characteristics of the veterinary vaccine candidate ChimeriVaxTM-West Nile (WN) virus in Aedes and Culex mosquitoes;B. W. JOHNSON等;<Medical and Veterinary Entomology>;20031231;第17卷;第235–243页 *
Molecular Basis for Attenuation of Neurovirulence of a Yellow Fever Virus/Japanese Encephalitis Virus Chimera Vaccine (ChimeriVax-JE);JUAN ARROYO等;<JOURNAL OF VIROLOGY>;20010131;第75卷(第2期);第934-942页 *

Also Published As

Publication number Publication date
ZA200704033B (en) 2008-09-25
CN101084010A (zh) 2007-12-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8691550B2 (en) Vaccines against japanese encephalitis virus and west nile virus
US20190192649A1 (en) Flavivirus vaccines
JP5469336B2 (ja) 組換えフラビウイルスワクチン
US20130095136A1 (en) Tetravalent Dengue Vaccines
WO2005082020A2 (en) Flavivirus vaccines
CN101084010B (zh) 抗日本脑炎病毒及西尼罗病毒的疫苗
EP1261701B1 (en) FULL-LENGTH INFECTIOUS cDNA CLONES OF TICK BORNE FLAVIVIRUS
AU2013204985B2 (en) Recombinant flavivirus vaccines
Jayadev et al. Genomics in Pathogenicity and Diversity of Flaviviruses

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1106723

Country of ref document: HK

C53 Correction of patent of invention or patent application
CB02 Change of applicant information

Address after: Massachusetts, USA

Applicant after: Sanofi Pasteur Biologics, LLC

Address before: Massachusetts, USA

Applicant before: Senauer Faye Basudeb biopharmaceutical

Address after: Massachusetts, USA

Applicant after: Senauer Faye Basudeb biopharmaceutical

Address before: Massachusetts, USA

Applicant before: Acambis Inc.

COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: ACAMBIS INC. TO: SANOFI PASTEUR BIOLOGY PARMACEUTICAL COMPANY

Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: SANOFI PASTEUR BIOLOGY PARMACEUTICAL COMPANY TO: SANOFI PASTEUR BIOLOGY PARMACEUTICAL LLC

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1106723

Country of ref document: HK