CN101001843B

CN101001843B - 用于治疗炎性疾病的烟碱受体激动剂

Info

Publication number: CN101001843B
Application number: CN200580026163.6A
Authority: CN
Inventors: Y·科尔米耶; E·伊斯雷尔-阿萨亚格; M-R·布朗谢; R·C·焦德鲁特; P·拉布里埃
Original assignee: Universite Laval
Current assignee: Universite Laval
Priority date: 2004-07-15
Filing date: 2005-07-15
Publication date: 2014-08-27
Anticipated expiration: 2025-07-15
Also published as: JP4783787B2; CA2573977A1; KR100860903B1; AU2005262174B2; MX2007000576A; HK1098155A1; JP2008505938A; CN102872022A; PL1773779T3; EP1773779B1; AU2005262174A1; WO2006005195A1; CA2573977C; KR20070085207A; RU2414461C2; RU2007105582A; IL180721A; DK1773779T3; CN101001843A; AU2005262174C1

Abstract

本发明涉及烟碱受体激动剂或其类似物或衍生物在治疗炎性肺部疾病中的应用。本发明进一步涉及包括烟碱受体激动剂或其类似物或衍生物的药物组合物。还提供了如下通式的新的化合物，其中R1、R2、Xa和Ya如本文所定义。

Description

用于治疗炎性疾病的烟碱受体激动剂

相关申请的交叉参考

2004年7月15日提交的顺序号US 10/890,987的部分继续申请，其为2004年2月24日提交的顺序号US 10/469,999的部分继续申请，而US 10/469,999为2002年3月25日提交的PCT/CA 02/00412的国家阶段申请，将这些文献的全部内容引入本文作为参考。

发明背景

a)发明领域

本发明涉及通过使用或给予烟碱受体激动剂或其类似物和衍生物来治疗炎性疾病，包括各种肺部疾病的方法。

b)现有技术的描述

尽管正常男性或女性每小时呼吸一立方米以上的空气，但是我们的肺防御机制通常可处理大量存在于吸入空气中的颗粒、抗原、病原体、毒气和烟雾。这些颗粒与免疫系统的相互作用以及其它肺防御机制导致通常为保护性和有益性的受控炎症反应产生。一般来说，这种反应调节自身以便保护发生气体交换的气道和肺泡上皮表面的完整性。然而，在某些情况中，这种炎症反应不能受到调节并且组织损伤的可能性增加。随环境接触类型、遗传倾向和各种不确定因素，异常多的炎症细胞可以被募集在呼吸系统的不同部位上，导致不适或疾病。

对吸入或内在刺激物的炎症反应的特征在于血管渗透性非特异性增加，炎性和趋化性介质，包括组胺、类花生酸类物质、前列腺素、细胞因子和趋化因子释放。这些介质调节白细胞-内皮细胞粘附分子的表达和衔接，由此能够募集存在于血液中的炎性细胞。

更具特异性的炎性反应包括识别和固定对吸入抗原的加剧的特异性免疫反应。这种反应涉及哮喘，过敏性肺炎(HP)和可能的结节病的发生。肺损伤后修复机制的失调可以导致哮喘、肺纤维化、慢性阻塞性肺病(COPD)和慢性HP中的纤维化和功能缺失。

预先有报导HP的发生率在目前吸烟者中远低于不吸烟者(1-4)。结节病在吸烟者中也通常低于不吸烟者(5，6)。仍然不了解基于吸烟对发生HP和其它炎性疾病的有益作用的机制，但可能与烟碱的免疫调节作用相关。存在戒烟后哮喘重新发生或恶化的临床观察结果。这方面的证据难以获得且烟碱在预防或治疗哮喘中的任何保护作用都可能被烟草烟雾数以千计成分的负面作用所淹没。

还在其它疾病中报导了吸烟的保护作用，研究最多的是溃疡性结肠炎，即一种炎性肠病(7，8)。烟碱已经成功地应用于治疗这种疾病(9，10)。其它研究关注于烟碱在治疗阿尔茨海默病和帕金森氏病中的治疗价值(11，12)。

烟碱受体为5个起着配体门控离子通道作用的多肽亚单位构成的五聚体。当配体结合受体时，发生多肽的构象变化，从而开放使钠离子从胞外液流入细胞质的中心通道。已经鉴定了4种类型的亚单位：α、β、γ和δ。受体可以由这4种类型的亚单位的任意组合组成(13)。近来的工作已经证实肺泡巨噬细胞(AM)可以表达α-7亚单位(14)，而支气管上皮细胞表达α-3、α-5和α-7亚单位(15)，并且淋巴细胞表达α-2、α-5、α-7、α-2和β-4亚单位(14)。成纤维细胞(16)和气道平滑肌细胞(17)也表达这些受体。因此，居留的肺细胞(AM，树突细胞、上皮细胞、成纤维细胞等)和那些在炎性疾病中募集的细胞(淋巴细胞、多形核细胞)表达烟碱受体。

淋巴细胞中的烟碱受体活化影响胞内信号作用，导致细胞活化不完全。实际上，烟碱治疗增量调节蛋白激酶活性，由此增量调节磷脂酶A2(PLA2)活性。PLA2使得磷酸肌醇-2-磷酸酯(PIP2)裂解成肌醇-3-磷酸酯(IP3)和二酰基甘油(DAG)(18，19)。IP3在细胞中连续出现看起来可以使得钙储存脱敏，从而导致其耗尽(19)。这一观察结果可以解释烟碱-处理的淋巴细胞不会将足量的钙释放入细胞质来活化转录因子，诸如NFk-B(20)。

烟碱，烟草烟雾中的主要药物成分，为了解最多的烟碱受体激动剂之一(21)。这种天然物质具有充分确定的抗炎和免疫抑制特性(22)，并且可能具有抗纤维变性特性(23)。使动物接触来自具有高水平烟碱的香烟的烟雾比接触低-烟碱香烟的烟雾更具有免疫抑制性(24)。此外，用烟碱治疗大鼠抑制了对抗原的特异性抗体反应并且诱导了T细胞无反应性(25)。尽管它们在数量上增加，但是来自吸烟者的AM表现出分泌作为对内毒素反应的炎性细胞因子的能力下降((20，25，26))且烟碱看起来为这种抑制作用的主要成分(26)。一种研究还证实来自吸烟者的外周血淋巴细胞表达较高水平的FAS配体(FASL)且来自不吸烟者的淋巴细胞上烟碱增加FASL表达，从而表明烟碱可以影响细胞的编程性细胞死亡(27)。还证实烟碱在体外对人牙龈成纤维细胞的增殖和胞外基质产生具有抑制作用(23)。令人感兴趣的是，烟碱治疗看起来增量调节烟碱受体的表达(28)。烟碱自身看起来为不具有任何长期副作用的安全物质(48-49)。与吸烟相关的肺、心脏和动脉疾病并非由烟碱引起，而是由存在于吸入烟雾中的数以千计的其它化学物质导致。主要问题在于烟碱通过血脑屏障而诱导成瘾。吸烟的有害作用是显而易见的。尽管烟碱并非是导致吸烟的毒性作用的主要原因，但是仍然存在相关性。

烟碱激动剂可以减量调节T细胞活性，实际上，已经证实烟碱影响共刺激分子CD28和CTLA4的T细胞表达(29)。

B7/CD28/CTLA4共刺激途径在T-细胞活化和内环境稳定中起关键调节作用(30，31)。涉及两种信号传导途径。正信号包括使B7(CD80/CD86)分子与导致T细胞反应(增殖、活化、细胞因子表达和存活)增强的T细胞CD28受体结合(32)。负信号包括B7与活化T细胞上的CTLA4的相互作用，导致T细胞反应的减量调节(33，34)。CD28与CTLA4衍生信号之间的平衡可以改变T-细胞活化的结果。

在HP中，预先有报导在患有活动性HP(35)和鼠HP(36)的患者中的AM上B7分子表达的增量调节。还证实阻断小鼠B7-CD28共刺激途径抑制了肺部炎症(36)。这些结果还证实AM上B7分子的表达在吸烟者中低于不吸烟者，并且流感病毒感染能够在体外增量调节正常人AM中的B7表达，但在来自吸烟者的AM中却不能；这种情况是因烟碱还是因存在于吸烟烟雾中的其它物质所致尚不了解(35)。还在哮喘(37，38)和结节病(39)中报导了B7分子的增量调节。

地棘蛙素为迄今为止已知的最具功效的烟碱激动剂(40)。它具有抗炎和止痛特性。实际上，其止痛潜能为吗啡的200倍(40)。还已知该分子可在体外抑制淋巴细胞增殖(41)。地棘蛙素与受体结合为非特异性的(42)。令人遗憾的是，地棘蛙素主要对心血管和中枢神经系统具有显著性的毒副作用，这使得它不适用于作为治疗肺部疾病的抗炎药(40)。

二甲基苯基哌嗪(DMPP)为合成的非特异性的烟碱激动剂(13)。其对受体的功效基本上与烟碱相同，这取决于刺激中涉及的细胞种类(43)。其优点超过了烟碱和其它烟碱激动剂，即其化学构型可以防止它通过血脑屏障，由此不会导致成瘾或其它中枢神经作用(13)。DMPP的抗炎特性尚未得到充分描述。然而，已经证实长期体内治疗可以减少白细胞数量，减少脾细胞的细胞因子产生并且降低天然杀伤细胞的活性(44)。还测试了DMPP对气道平滑肌细胞的作用。DMPP具有初始的短期收缩作用，随后在细胞接触该激动剂较长时间期限时具有松弛作用(45)。这种支气管扩张作用自身不一定使DMPP在治疗哮喘中最为有用，这是因为其它有效的支气管扩张药目前市售可得(B2激动剂)。然而，这种烟碱受体激动剂的特性是重要的，因为该药因其抗炎特性而可以对哮喘患者和COPD患者安全给药。此外，没有显而易见的证据表明DMPP对主要器官，诸如心脏、脑、肝或肺具有任何毒性作用。

皮质类固醇为有效的抗炎药。其全身应用可产生较多的副作用，这限止了任何时候长期使用的可能性。吸入难吸收的类固醇用于治疗气道炎症。这些药物在低剂量下几乎没有或没有副作用。然而，较高的剂量增加了口腔念珠菌病、声带麻痹、白内障和骨质疏松症的风险。吸入的类固醇对肺间质没有影响并且没有抗纤维变性特性(57)。

更近来的药物，诸如抗白细胞三烯类药用于某些哮喘患者(58)，但对COPD和其它肺病没有作用。这些药物具有限于白细胞三烯类产生的炎症的成分的抗炎特性(59)。治疗间质性肺病，诸如IPF、结节病、HP和BOOP主要依赖于全身应用皮质类固醇。这种治疗可有效控制某些炎症，但令人遗憾的是，可诱导严重的副作用并且无法逆转潜在的纤维化改变。有时尝试将免疫抑制剂，诸如环磷酰胺和硫唑嘌呤用于严重的IPF，但其治疗价值未经证实，且至多极为有限(60)。实际上，肺纤维化通常是进行性的和不可治疗的，使得大部分IPF患者死于该病(61)。

尽管在治疗炎性疾病，包括肺部炎性疾病中取得了进展，但是使用现有药物或活性剂治疗通常产生不希望的副作用。例如，COPD的炎症显然对皮质类固醇产生耐药性，且由此认识到需要研发治疗这种疾病的新抗炎药(46)。

类似地，尽管皮质类固醇和其它免疫抑制剂药物被常规用于治疗肺纤维化，但是已经证实它们仅具有最低限度的功效(47)。

由此对治疗炎性疾病，包括肺部炎性疾病的新的和可靠的方法存在需求，这种治疗方式为缓解所述疾病的症状，但不会产生副作用。

发明概述

本发明提供了用于治疗炎性疾病的新方法。特别地，描述了用于治疗肺部炎性疾病的新方法，通过使用或给予结合或调节烟碱受体功能的活性剂，诸如烟碱受体激动剂或其类似物或衍生物来进行。

因此，在一个方面中提供了用于治疗或预防肺部炎性疾病的方法，包括给予有效量的调节烟碱受体功能的化合物。

还在另一个方面中提供了如下通式的化合物：

其中R₁和R₂独立为1-10个碳原子的低级烷基；

Xa为CH或N；

Ya为一个或多个选自氢、卤素、氨基、脒基、酰氨基、叠氮基、氰基、胍基、羟基、硝基、亚硝基、脲、硫酸酯、亚硫酸酯、磺酸酯、磺酰胺、磷酸酯、膦酸酯、酰基、酰氧基、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、1-6个碳原子的烷硫基、1-6个碳原子的烷氨基、1-6个碳原子的链烷醇、芳烷基、6-10个碳原子的芳基和3-10元杂环的取代基；

n为0-2的整数；

J为抗衡离子。

在另一个方面中提供了用于治疗肺部炎性疾病的药物组合物，包括烟碱受体激动剂和药物上可接受的赋形剂。

在另一个方面中提供了用于诱导气道平滑肌松弛的方法，包括给予有效量的具有如下通式的化合物：

其中R₁、R₂、Xa、Ya和J如本文中所述。

本发明在另一个方面中提供了用于诱导肺细胞烟碱受体中的兴奋反应的方法，包括给予有效量的烟碱受体激动剂。

附图简述

通过附图解释本发明，但本发明并不限于它们，其中：

附图1表示BAL细胞中的总体和分类细胞计数；

附图2表示分离的肺单核细胞中IFN-γmRNA的表达；

附图3解释了24小时LPS刺激诱导的TNF-αmRNA表达；

附图4解释了24小时SR刺激诱导的TNF-αmRNA表达；

附图5解释了24小时LPS刺激诱导的IL-10mRNA表达；

附图6解释了24小时SR刺激诱导的IL-10mRNA表达，在160μM下(60％的表达下降)和在80μM下(90％的表达下降)用烟碱进行DMPP治疗；

附图7解释了24小时LPS刺激在RAW 264.7中诱导的IFN-γmRNA表达；

附图8(a)和(b)表示使用LPS(38％)或SR抗原(35％)诱导的CD 80表达；

附图9解释了分离自在HP患者中进行的BAL的T淋巴细胞中的IFN-γmRNA表达；

附图10解释了来自在正常患者中进行的BAL的总体细胞中的CD86表达；

附图11解释了来自DMPP、烟碱和地棘蛙素治疗的小鼠的BAL细胞；

附图12解释了在动物数量增加时发现的DMPP对肺部炎症的显著抑制作用；

附图13解释了来自DMPP-治疗的小鼠的BAL流体中的TNF水平；

附图14解释了使用增加剂量的DMPP的腹膜内治疗对哮喘小鼠BAL中总体细胞蓄积的作用；

附图15解释了对剂量响应的分类计数；

附图16解释了对哮喘小鼠BAL中总体细胞蓄积的DMPP IP治疗作用的二次剂量响应；

附图17解释了来自二次剂量响应的分类计数；

附图18解释了来自对照组、哮喘和治疗小鼠的BAL IL-5水平；

附图19解释了对来自正常、哮喘和使用0.5mg/kg鼻内DMPP治疗的哮喘动物的乙酰甲胆碱攻击后的肺阻力；

附图20解释了200％肺阻力增加(PC 200)的刺激攻击剂量的计算；

附图21解释了24小时LPS刺激诱导的IL-4mRNA表达；

附图22解释了DMPP对血液嗜酸性粒细胞移行的作用；

附图23解释了烟碱拮抗剂美加明对DMPP对血液嗜酸性粒细胞移行抑制作用的影响；

附图24解释了额外的烟碱激动剂(烟碱、地棘蛙素和野靛碱)对血液嗜酸性粒细胞移行的作用；

附图25解释了DMPP对正常人肺成纤维细胞的胶原蛋白1A mRNA表达的作用；

附图26解释了烟碱对人肺成纤维细胞的胶原蛋白1A mRNA表达的作用；

附图27解释了另一种烟碱激动剂地棘蛙素对人肺成纤维细胞的胶原蛋白1A mRNA表达的作用；

附图28解释了DMPP、ASM-002、ASM-003、ASM-004和ASM-005对TNF释放的作用；

附图29解释了DMPP、ASM-002、ASM-003、ASM-004和ASM-005对小鼠气管气道平滑肌反应性的作用；

附图30解释了ASM-002对肺部炎症的作用；

附图31解释了ASM-002对哮喘小鼠模型的肺阻力的作用；

附图32解释了ASM-002和泼尼松对肺部炎症的对比作用；

附图33解释了ASM-002在肺高反应性的狗模型中的作用；

附图34解释了ASM-002对小鼠气管的肌肉-松弛特性；

附图35解释了ASM-002对狗支气管环的肌肉-松弛特性；

附图36解释了ASM-002对人支气管环的肌肉-松弛特性；

附图37解释了ASM-002对分离自哮喘患者的人血细胞的有效炎症介质释放的抑制作用；

附图38解释了ASM-002与DMPP和地塞米松对LPS-刺激的血单核细胞的TNF产生的对比作用；

附图39解释了ASM-002对LTC4产生的抑制作用；

附图40解释了烟碱、ASM-N1、ASM-N2、ASM-N3、ASM-N4和ASM-002对TNF产生的作用。

优选实施方案的描述

本发明的其它目的、优点和特征在阅读下文中作为实例给出的其优选实施方案的非限制性描述并且仅参照附图时更为显而易见。

使用烟碱或其它烟碱受体激动剂或其类似物或衍生物治疗炎性肺部疾病的构思是新的。尽管烟碱和其它烟碱受体激动剂或类似物或衍生物具有令人印象深刻的抗炎和免疫抑制特性，但是它们在治疗过敏性和其它炎性肺病中的有用性尚未披露。与吸烟相关的缺点是导致现有技术中缺乏对烟碱激动剂或其类似物或衍生物在治疗肺病的兴趣的主要原因。

本发明由此提出了烟碱受体激动剂，诸如DMPP及其类似物和衍生物在治疗炎性肺病，诸如哮喘、COPD、间质性肺纤维化(IPF)、结节病、HP和具有组织化肺炎的梗阻性细支气管炎(BOOP)中的应用。可以通过口服，或根据具体疾病或病情的不同，通过使用不同和优选的载体直接靶向递送至肺进行给药以便将全身作用减少到最低限度。

烟碱受体激动剂及其类似物和衍生物的抗炎、免疫抑制和/或支气管扩张特性以及最低的副作用使得这些药物理想地适合于治疗各种肺病的医疗应用，所述肺病的特征在于支气管或间质性炎症。这些疾病包括诸如哮喘、COPD、IPF、结节病、HP和BOOP这类疾病。

本发明在一个实施方案中提供了用于治疗或预防肺部炎性疾病的方法，包括给予有效量的调节烟碱受体功能的化合物。

在一个实施方案中，该方法用于治疗肺部炎性疾病。

在一个实施方案中，用于本发明方法的化合物为烟碱受体激动剂。

在一个实施方案中，所述的烟碱受体激动剂选自二甲基苯基哌嗪(DMPP)、烟碱、地棘蛙素、野靛碱、乙酰胆碱及其类似物组成的组。

在另一个实施方案中，用于本发明方法的化合物为：

i)具有如下通式的化合物：

其中R₁和R₂独立为1-10个碳原子的低级烷基；

Xa为CH或N；

n为0-2的整数；

J为抗衡离子；

或ii)具有如下通式的化合物：

其中R₃选自：

Xb为N或N⁺R₁₀；

R₄为一个或多个选自氢、卤素、氨基、脒基、酰氨基、叠氮基、氰基、胍基、羟基、硝基、亚硝基、脲、硫酸酯、亚硫酸酯、磺酸酯、磺酰胺、磷酸酯、膦酸酯、酰基、酰氧基、1-10个碳原子的烷基、1-10个碳原子的烷氧基、1-10个碳原子的烷硫基、1-10个碳原子的烷氨基、1-10个碳原子的链烷醇、芳烷基、6-10个碳原子的芳基的取代基；

R₁₀、R₁₁和R₁₂各自独立为1-10个碳原子的烷基；

条件是当Xb为N⁺-R₁₀时，存在抗衡离子；

或iii)具有如下通式的化合物：

其中Xc为NR₁₃或N⁺-R₁₃R₁₄ ,其中R₁₃和R₁₄独立为1-10个碳原子的烷基；

R₅为3-10元杂环；

条件是当Xc为N⁺-R₁₃R₁₄时，存在抗衡离子；

或iv)具有如下通式的化合物：

其中W为O或S；

Yc和Yd各自独立地选自氢、卤素、氨基、脒基、酰氨基、叠氮基、氰基、胍基、羟基、硝基、亚硝基、脲、硫酸酯、亚硫酸酯、磺酸酯、磺酰胺、磷酸酯、膦酸酯、酰基、酰氧基、1-10个碳原子的烷基、1-10个碳原子的烷氧基、1-10个碳原子的烷硫基、1-10个碳原子的烷氨基、1-10个碳原子的链烷醇、芳烷基、6-10个碳原子的芳基；

其中Xd为NR₁₅或N⁺-R₁₅R₁₆，其中R₁₅和R₁₆独立为1-10个碳原子的烷基；

条件是当Xd为N⁺-R₁₅R₁₆时，存在抗衡离子。

在另一个实施方案中，用于本发明方法的化合物具有如下通式：

其中R₁和R₂独立为1-10个碳原子的低级烷基；

Xa为CH或N；

Ya为一个或多个选自氢、卤素、氨基、脒基、酰氨基、叠氮基、氰基、胍基、羟基、硝基、亚硝基、脲、硫酸酯、亚硫酸酯、磺酸酯、磺酰胺、磷酸酯、膦酸酯、酰基、酰氧基、1-10个碳原子的烷基、1-10个碳原子的烷氧基、1-10个碳原子的烷硫基、1-10个碳原子的烷氨基、1-10个碳原子的链烷醇、芳烷基、6-10个碳原子的芳基和3-10元杂环的取代基；

n为0-2的整数；

J为抗衡离子。

在另一个实施方案中，R₁和R₂任选独立地被1-10个碳原子的低级烷基取代；

Xa为CH；

Ya为一个或多个选自氢、卤素、氨基、酰氨基、羟基、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基和1-6个碳原子的链烷醇的取代基；

n为1或2；

J为卤素。

其中R₁和R₂任选独立地被1-6个碳原子的低级烷基取代；

Xa为CH；

Ya为一个或多个选自氢、卤素、氨基、酰氨基、羟基、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、1-6个碳原子的链烷醇的取代基；

n为1或2；

J为卤素。

在另一个实施方案中，R₁和R₂独立地选自甲基、乙基、正-丙基或异-丙基；

Xa为CH；

Ya为氢；

n为1或2；

J为卤素。

在另一个实施方案中，所述的化合物具有如下通式：

其中R₁和R₂独立地选自甲基、乙基、正-丙基或异-丙基；

Ya为氢；

J为卤素。

在另一个实施方案中，用于本发明方法的化合物具有选自如下的通式：

在一个实施方案中，本发明的方法利用了具有如下通式的化合物：

其中R₃选自：

Xb为N或N⁺R₁₀；

R₁₁和R₁₂各自独立为1-10个碳原子的烷基；

条件是当Xb为N⁺-R₁₀时，存在抗衡离子。

在一个实施方案中，R₄为一个或多个选自氢、卤素、氨基、酰氨基、羟基、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基和1-6个碳原子的链烷醇的取代基；且R₁₁和R₁₂独立为1-6个碳原子的烷基。

在另一个实施方案中，R₄为一个或多个选自氢和卤素的取代基；且R₁₁和R₁₂独立为1-6个碳原子的烷基。

其中Xc为NR₁₃或N⁺-R₁₃R₁₄，其中R₁₃和R₁₄独立为1-10个碳原子的低级烷基；

R₅为3-10元杂环；

条件是当Xc为N⁺-R₁₃R₁₄时，存在抗衡离子。

在一个实施方案中，R₁₃和R₁₄独立为1-6个碳原子的烷基。

在另一个实施方案中，R₁₃和R₁₄独立为1-6个碳原子的烷基；且R₅为3-6元杂环。

在另一个实施方案中，R₁₃和R₁₄独立为1-6个碳原子的烷基；且R₅为任选取代的吡啶基。

其中W为O或S；

Yc和Yd各自独立为选自氢、卤素、氨基、脒基、酰氨基、叠氮基、氰基、胍基、羟基、硝基、亚硝基、脲、硫酸酯、亚硫酸酯、磺酸酯、磺酰胺、磷酸酯、膦酸酯、酰基、酰氧基、1-10个碳原子的烷基、1-10个碳原子的烷氧基、1-10个碳原子的烷硫基、1-10个碳原子的烷氨基、1-10个碳原子的链烷醇、芳烷基、6-10个碳原子的芳基的取代基；

条件是当Xd为N⁺-R₁₅R₁₆时，存在抗衡离子。

在一个实施方案中，Yc和Yd独立为一个或多个选自氢、卤素、氨基、酰氨基、羟基、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基和1-6个碳原子的链烷醇的取代基。

在一个实施方案中，W为O；Yc和Yd独立为一个或多个选自氢、卤素、氨基、酰氨基、羟基、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基和1-6个碳原子的链烷醇的取代基；且Xd为NR₁₅或N⁺-R₁₅R₁₆，其中R₁₅和R₁₆独立为1-6个碳原子的烷基。

在另一个实施方案中，W为O；每个Yc和Yd独立为一个或多个选自氢和卤素的取代基；且Xd为NR₁₅或N⁺-R₁₅R₁₆，其中R₁₅和R₁₆独立为1-6个碳原子的烷基。

在一个实施方案中，所述的肺部炎性疾病选自哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、间质性肺纤维化(IPF)、结节病、过敏性肺炎(HP)、慢性HP和具有组织化肺炎的梗阻性细支气管炎(BOOP)组成的组。

在一个实施方案中，所述的肺部炎性疾病选自哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、间质性肺纤维化(IPF)、结节病、过敏性肺炎(HP)和慢性HP组成的组。

在另一个实施方案中，所述的肺部炎性疾病为：慢性阻塞性肺病(COPD)；结节病；过敏性肺炎(HP)。

在另一个实施方案中，所述的肺部炎性疾病为哮喘。

在本发明的一个实施方案中，通过口服、非肠道、局部或通过吸入给予用于本发明方法的化合物。

或者，通过口服、局部或通过吸入给予所述化合物。

在本发明的一个实施方案中，通过口服给予用于本发明方法的化合物。

在一个实施方案中，本文所述的化合物用于制备治疗肺部炎性疾病的药物。

在一个实施方案中，提供了具有如下通式的新化合物：

其中R₁和R₂独立为1-10个碳原子的低级烷基；

Xa为CH或N；

n为0-2的整数；

J为抗衡离子。

在另一个实施方案中，R₁和R₂任选独立地被1-6个碳原子的烷基取代；

Xa为CH；

n为1或2；

J为卤素。

在一个实施方案中，化合物具有如下通式：

其中R₁和R₂任选独立地被1-6个碳原子的烷基取代；

X为CH；

Y为一个或多个选自氢、卤素、氨基、酰氨基、羟基、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、1-6个碳原子的链烷醇的取代基；

n为1或2；

J为卤素。

X为CH；

Y为氢；

n为1或2；

J为卤素。

在备选实施方案中，化合物具有如下通式；

其中R₁和R₂独立地选自甲基、乙基、正-丙基或异-丙基；

Y为氢；

J为卤素。

在另一个实施方案中，化合物具有如下通式：

第一种烟碱受体激动剂包括二甲基苯基哌嗪(DMPP)、烟碱、地棘蛙素、野靛碱、乙酰胆碱及其类似物。

或者，可以用于本发明治疗和应用的烟碱受体激动剂包括下列烟碱受体激动剂及其类似物：

1-DMPP及其类似物

2-烟碱和类似物

吡啶基醚的3-类似物

4-地棘蛙素和类似物

5-曲美芬和类似物

6-野靛碱和类似物

7-乙酰胆碱和类似物

8-N-甲基氨基甲酰基胆碱和类似物

9-ABT-418和类似物

10-GTS-21和类似物

11-槟榔碱和类似物

12-洛贝林和类似物

philanthotoxin-433的13-类似物

14-氮杂双环类似物

SIB-1553的15-类似物

imidacloprit的16-类似物

在治疗炎性肺部疾病中特别关注的是下列DMPP的类似物并且具有如下通式：

其中R₁为甲基或乙基，R₂为甲基、乙基或丙基，X为CH，Y为氢，n为1或2。

术语″低级烷基″表示含有1-10个碳原子并且优选1-6个碳原子的直链、支链或环状烃部分，它可以在链上有一个或多个不饱和并且被任选取代。实例包括，但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基、异己基、新己基、烯丙基、乙烯基、乙炔基、乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、己烯基、丁二烯基、戊烯基、戊二烯基、己烯基、己二烯基、己三烯基、庚烯基、庚二烯基、庚三烯基、辛烯基、辛二烯基、辛三烯基、辛四烯基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、环丙基、环丁基、环己烯基、环己二烯基和环己基。术语″低级烷基″的含义还包括一个或多个氢原子被卤素取代的烷基，即烷基卤。实例包括，但不限于三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、二氯甲基、氯甲基、三氟乙基、二氟乙基、氟乙基、三氯乙基、二氯乙基、氯乙基、氯氟甲基、氯二氟甲基、二氯氟乙基。

术语″低级烷氧基″表示通过氧原子与相邻原子共价结合的烷基。实例包括，但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、叔戊氧基、己氧基、异己氧基和新己氧基。

术语″低级烷硫基″表示通过硫原子与相邻原子共价结合的烷基。实例包括，但不限于甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、异丁硫基、仲丁硫基和叔丁硫基。

术语″低级烷氨基″表示通过氮原子与相邻原子共价结合的烷基并且可以为一烷氨基或二烷氨基，其中烷基可以相同或不同。实例包括，但不限于甲氨基、二甲基氨基、乙氨基、二乙氨基、甲基乙氨基、丙氨基、异丙氨基、丁氨基、异丁氨基、仲丁氨基、叔丁氨基、戊氨基、异戊氨基、新戊氨基、叔戊氨基、己氨基、异己氨基和新己氨基。

术语″低级链烷醇″表示一个氢被羟基取代的″烷基″部分。术语链烷醇的含义还包括一个或多个氢原子被卤素取代的链烷醇。实例包括，但不限于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、乙二醇、丙二醇、环丙醇或三氟乙醇或氟甲醇。

术语″芳烷基″表示通过C_1-6烷基与相邻原子连接的芳基。实例包括，但不限于苄基、二苯甲基、三苯甲基、苯乙基、3-苯基丙基、2-苯基丙基、4-苯基丁基和萘基甲基。

术语″芳基″表示含有至少一个带有6-10个碳原子的苯型环(即可以为单环或多环)并且可以任选被一个或多个取代基取代的碳环部分。或者，该环可以含有6个碳原子。实例包括，但不限于苯基、甲苯基、二甲基苯基、氨基苯基、苯胺基、萘基、蒽基、菲基或联苯基。

将术语″酰基″定义为来源于羧酸的通过取代-OH获得的基团。如与之相关的酸一样，酰基可以为直链、支链或环状的脂族或芳族酰基。实例包括，但不限于甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、新戊酰基、己酰基、异己酰基、丙烯酰基、丙炔酰基、甲基丙烯酰基、巴豆酰基、异巴豆酰基、苯甲酰基、萘甲酰基、甲苯酰基、肉桂酰基、糠酰基、甘油酰基、水杨酰基。

术语″酰氧基″表示通过氧原子与相邻原子共价结合的酰基。实例包括，但不限于甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、异丁酰氧基、戊酰氧基、异戊酰氧基、新戊酰氧基、己酰氧基、异己酰氧基、丙烯酰氧基、丙炔酰氧基、甲基丙烯酰氧基、巴豆酰氧基、异巴豆酰氧基、苯甲酰氧基、萘甲酰氧基、甲苯酰氧基、羟基阿托酰氧基、阿托酰氧基、肉桂酰氧基、糠酰氧基、甘油酰氧基、托品酰氧基、苯甲酰氧基、水杨酰氧基、茴香酰氧基、香草酰氧基、藜芦酰氧基、胡椒基酰氧基、原儿茶酰氧基和没食子酰氧基，其中优选甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、异丁酰氧基、戊酰氧基、异戊酰氧基、新戊酰氧基、苯甲酰氧基和萘甲酰氧基。

术语″卤原子″特别指的是氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。

术语″抗衡离子″的含义是包括带有离子种类以便维持电中性的离子。本文所用的抗衡离子的实例包括，但不限于氟化物、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸酯、磺酸酯。

术语″独立地″指的是对每种情况可以为相同或不同定义的取代基。

术语″杂环″表示3-10元任选取代的饱和、不饱和或芳族环状部分，其中所述的环状部分被至少一个选自氧(O)、硫(S)或氮(N)的杂原子打断。或者，杂环可以为3-6元环或5-6元环。杂环可以为单环或多环。实例包括，但不限于吖庚因基、氮丙啶基、氮杂环丁二烯基、氮杂环丁烷基、二吖庚因基、二噻二嗪基、二噁吖庚因基、二氧戊环基、二噻唑基、呋喃基、异噁唑基、异噻唑基、咪唑基、吗啉基、吗啉基、吗啉代、环氧丙烷基、噁二唑基、环氧乙烷基、噁嗪基、噁唑基、哌嗪基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、哌啶基、哌啶子基、吡啶基、吡喃基、吡唑基、吡咯基、吡咯烷基、噻三唑基、四唑基、噻二唑基、三唑基、噻唑基、噻吩基、四嗪基。噻二嗪基、三嗪基、噻嗪基和硫代吡喃基、呋喃异噁唑基、咪唑并噻唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并异噻唑基、咪唑并吡唑基、环戊并吡唑基、吡咯并吡咯基、噻吩并噻吩基、噻二唑并嘧啶基、噻唑并噻嗪基、噻唑并嘧啶基、噻唑并吡啶基、噁唑并嘧啶基、噁唑并吡啶基、苯并噁唑基、苯并异噻唑基、苯并噻唑基、咪唑并吡嗪基、嘌呤基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶基、苯并咪唑基、吲唑基、benzoxathiolyl、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并二硫酚基(benzodithidyl)、吲嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、呋喃并嘧啶基、呋喃并吡啶基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、噻吩并嘧啶基、噻吩并吡啶基、苯并噻吩基、环戊并噁嗪基、环戊并呋喃基、苯并噁嗪基、苯并噻嗪基、喹唑啉基、1，5-二氧杂萘基、喹啉基、异喹啉基、苯并吡喃基、吡啶并哒嗪基和吡啶并嘧啶基。

就本申请的目的而言，术语″动物”的含义是表示人、灵长类、家畜(诸如马、牛、猪、山羊、绵羊、猫、狗、豚鼠、小鼠等)和其它哺乳动物。一般来说，该术语用于表示具有高度发育的血管系统的活生物。

就本申请的目的而言，激动剂或活性剂或配体为结合和调节烟碱受体功能的分子或化合物。优选的活性剂为受体特异性的并且不会通过血脑屏障，诸如DMPP。有用的活性剂可以在大量化学种类中找到，不过，它们一般为有机化合物且优选小有机化合物。小有机化合物具有大于150，但小于约4,500，优选小于约1500，更优选小于约500的分子量。典型类型包括肽类、糖类、类固醇、杂环化合物、多环化合物、取代的芳族化合物等。

烟碱激动剂不一定取代目前特别用于治疗炎性肺病和通常与这些疾病相关的气流阻塞的所有药物。支气管扩张药仍然用于支气管痉挛的即刻缓解。然而，支气管扩张药对炎症的主要原因不起作用。

烟碱激动剂可以用作类固醇备用或替代药物。通过靶向递送至肺吞噬细胞，这些药物可以有助于控制气道和间质性炎症。除预计几乎没有副作用外，烟碱激动剂超过皮质类固醇的一个主要优点在于这些激动剂可以对成纤维细胞具有直接作用且由此可以预防或逆转气道和肺中的纤维化，而这是皮质类固醇不能的。间质性纤维化为是否HP和结节病的主要后遗症IPF的一个标志，并且气道纤维化为慢性哮喘中的主要发现(57)。

对其它物质作为炎性肺病的潜在新治疗手段进行了积极研究。特异性靶定了许多细胞因子(例如IL-5、IL-13、IL-16等)(62)。认为由于炎症中涉及的途径复杂性，任意一种特定细胞因子或其它炎症介质不能对这些肺病的治疗产生显著影响。并非不同于皮质类固醇，烟碱受体激动剂及其类似物和衍生物具有靶向广谱炎症反应的优点。本文涉及它们在治疗炎性肺病中的潜能。

可以修饰选择的活性剂以便增强功效、稳定性。药物相容性等。活性剂的结构鉴定可以用于鉴定、产生或筛选额外的活性剂。例如，如果鉴定肽活性剂，那么可以如上所述修饰它们，例如，以便强化其蛋白水解稳定性。稳定化的其它方法可以包括包囊，例如包囊在脂质体中等。按照本领域技术人员公知的任意便利方式制备本发明主题的结合剂。

为了治疗应用，可以通过任意便利方式给予影响烟碱受体功能的活性剂。小有机物优选通过口服给予；优选通过非肠道，便利的是在药物或生理上可接受的载体，例如磷酸缓冲盐水等中给予其它组合物和活性剂。一般来说，可以将这些组合物加入到保留的生理流体，诸如血液或滑膜液中。

本发明提供了用于治疗肺部炎性疾病的药物组合物的另一个实施方案，该药物组合物包括烟碱受体激动剂和药物上可接受的赋形剂。

载体或赋形剂必须是″可接受的″，其含义是与制剂中的其它组分相容并且对其接受者而言无害。

在备选实施方案中提供了用于治疗肺部炎性疾病的药物组合物，包括：

i)如下通式的化合物：

其中R₁和R₂独立为1-10个碳原子的低级烷基；

Xa为CH或N；

Ya为一个或多个选自卤素、氨基、脒基、酰氨基、叠氮基、氰基、胍基、羟基、硝基、亚硝基、脲、硫酸酯、亚硫酸酯、磺酸酯、磺酰胺、磷酸酯、膦酸酯、酰基、酰氧基、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、1-6个碳原子的烷硫基、1-6个碳原子的烷氨基、1-6个碳原子的链烷醇、芳烷基、6-10个碳原子的芳基和3-10元杂环的任选取代基；

n为0-2的整数；

J为抗衡离子；

或ii)具有如下通式的化合物：

其中R₃选自：

Xb为N或N⁺R₁₀；

R₁₀、R₁₁和R₁₂各自独立为1-10个碳原子的烷基；

条件是当Xb为N⁺-R₁₀时，存在抗衡离子；

或iii)具有如下通式的化合物：

其中Xc为NR₁₃或N⁺-R₁₃R₁₄，其中R₁₃和R₁₄独立为1-10个碳原子的烷基；

R₅为3-10元杂环；

条件是当Xc为N⁺-R₁₃R₁₄时，存在抗衡离子；

或iv)具有如下通式的化合物：

其中W为O或S；

每个Yc和Yd各自独立地选自氢、卤素、氨基、脒基、酰氨基、叠氮基、氰基、胍基、羟基、硝基、亚硝基、脲、硫酸酯、亚硫酸酯、磺酸酯、磺酰胺、磷酸酯、膦酸酯、酰基、酰氧基、1-10个碳原子的烷基、1-10个碳原子的烷氧基、1-10个碳原子的烷硫基、1-10个碳原子的烷氨基、1-10个碳原子的链烷醇、芳烷基、6-10个碳原子的芳基；

条件是当Xd为N⁺-R₁₅R₁₆时，存在抗衡离子；

和药物上可接受的赋形剂。

在一个实施方案中，如本文所述的药物组合物可以进一步包括一种或多种选自支气管扩张药，抗炎药，白细胞三烯受体拮抗剂和磷酸二酯酶抑制剂(PDE)，诸如PDE IV的治疗剂。

在另一个实施方案中，所述的支气管扩张药为β2激动剂或抗胆碱能药。

在另一个实施方案中，所述的抗炎药为皮质类固醇。

在另一个实施方案中，所述的PDE抑制剂为PDE IV。

本发明在另一个实施方案中提供了一种联合用药，它包括治疗有效量的用于本发明方法的化合物和治疗有效量的至少一种或多种治疗剂。

如果需要或理想的有另一种额外的治疗剂，那么对于本领域技术人员显而易见的是这种比例很容易调整。可以理解本文所述的联合用药的范围不限于本文列举的治疗剂，但主要包括用于预防和治疗肺部炎性疾病的任意治疗剂。

就肽活性剂而言，浓度一般在约50-500ug/ml的范围。或者，可以将其在每Kg(基于体重)1mg至几个10mg或以上的可接受范围的给药剂量中进行给药。可以包括其它添加剂，诸如稳定剂、杀菌剂等。这些添加剂以常用量存在。

可以理解用于治疗所需的本发明化合物的量不仅根据所选择的具体化合物的不同而改变，而且根据给药途径，需要治疗的疾病的性质以及患者的年龄和病情的不同而改变，并且最终由参与的临床医师或兽医决定。一般来说，根据经验确定给药量，例如，一般在约10μg-1000mg/kg接受者或10μg-100mg/kg或10μg-1mg/kg的范围。

所需剂量可以便利地存在于单剂量中或作为分次剂量在适当间隔给药，例如每天2次、3次、4次或4次以上剂量。

尽管在疗法中能够将本发明的化合物或联合用药作为原料给予，但是优选将活性组分制成药物组合物给予。

作为实例，许多这类治疗剂适合于直接注射或输注、局部、气管内/鼻内给药，例如通过气溶胶，通过眼内或在植入物内/其上(诸如具有治疗肽类的胶原蛋白、渗透泵、包括适当变异细胞的移植物等。

药物组合物还包括那些适合于口服、鼻、局部(包括口含和舌下)、透皮或非肠道(包括肌内、皮下和静脉内)给药或适合于通过吸入给药的形式的组合物。如果合适，可以将制剂便利地制成分散剂量单位并且可以通过制药领域众所周知的方法制备。所有方法均包括如下步骤：将活性化合物与液体载体或细分的固体载体或它们两者混合，且然后，如果必要，使产物形成所需制剂。

可以将适合于口服给药的药物组合物便利地制成：分散单位，诸如各自含有预定量活性组分的胶囊、小药囊或片剂；粉末或颗粒；溶液、混悬液或乳剂。还可以将活性组分制成大丸剂、药糖剂或糊剂。用于口服给药的片剂和胶囊可以含有常用赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂或湿润剂。可以按照本领域众所周知的方法给片剂包衣。口服液体制剂可以为，例如水或油混悬液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂的形式，或可以将它们制成在使用前用水或其它合适的媒介物再溶解的干品。这类液体制剂可以含有常用添加剂，诸如悬浮剂、乳化剂、非水媒介物(可以包括食用油)或防腐剂。

还可以配制用于非肠道给药(例如，通过注射，例如快速浓注或连续输注)的本发明化合物和联合用药并且可以将它们制成在安瓿、预装注射器、小体积输注液或含有添加的防腐剂的多剂量容器中的单位剂。这些组合物可以采用诸如在油或水媒介物中的混悬液、溶液或乳剂这类形式，并且可以含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂这类配制剂。或者，活性组分可以为通过无菌分离无菌固体或从溶液冻干而获得的粉末形式，以便在使用前用合适的媒介物，例如灭菌无热原水再溶解。

适合于在口腔中局部给药的组合物包括：锭剂，包括在矫味基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶中的活性组分；软锭剂，包括在惰性基质，诸如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中的活性组分；和漱口剂类，包括在合适的液体载体中的活性组分。

为了通过吸入给药，便利的是从吹入器、喷雾器或加压药包或递送喷雾剂的其它便利装置中递送本发明的化合物和联合用药物。加压药包可以包括合适的抛射剂，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。就加压气溶胶而言，可以通过安装递送计量量的阀门确定剂量单位。

或者，为了通过吸入给药，本发明的化合物和联合用药可以采用干粉组合物的形式，例如化合物与合适的粉末基质，诸如乳糖或淀粉的粉末混合物。可以将粉末组合物制成例如胶囊或药筒或例如明胶或泡罩包这类单位剂型，可以借助于吸入器或吹入器从其中递送所述的粉末。

两种动物模型用于研究烟碱拮抗剂在炎性肺部疾病：HP模型和哮喘模型中的作用。使用这两种模型，研究了烟碱受体激动剂(选择性和非选择性)对肺部生理学情况和炎症的作用。使用从动物研究或从患者中分离的炎症细胞和商购细胞系进行体外研究以便尝试理解烟碱激动剂减量调节炎症的机制。

最初，使用非特异性激动剂，即结合所有烟碱受体亚单位的激动剂(烟碱、二甲基苯基哌嗪(DMPP)和地棘蛙素)进行实验(13，42)。还测试了β4亚单位特异性激动剂野靛碱(42)以便观察特异性刺激是否也具有抗炎作用。

具体实施方式

实施例I

体内HP研究-I-超敏反应-类炎症

烟碱激动剂对长期诱导的小鼠过敏性肺炎(HP)的作用。

经证实使用烟碱刺激烟碱受体通过炎症细胞因子抑制和特异性抗原介导的细胞活化的抑制而减量调节对HP抗原的免疫反应。

如上所述，选择该模型是因为HP的发生率在吸烟者中低于不吸烟者(50)，并且因为该模型已经得到充分描述。通过给予一种HP形式农民肺的病原体直逗号糖多孢菌(SR)抗原诱发HP(51)。同时使用腹膜内(IP)烟碱治疗小鼠，剂量在0.5-2.0mg/kg的范围，每天2次。烟碱给药显著减少了在这些小鼠支气管肺泡灌洗液(BAL)中发现的总体细胞数量。最受烟碱治疗影响的群体为淋巴细胞，如附图1所示。可以看出在烟碱治疗的小鼠中主要因淋巴细胞群减少而导致总体细胞计数得到显著抑制。分离肺巨噬细胞和淋巴细胞并且使用抗-CD3+重组IL-2刺激。测定由这些细胞产生的IFN-γmRNA，即已知在HP和其它肺部炎性疾病发生中涉及的细胞因子(52)。来自烟碱治疗的动物的细胞在IFN-γmRNA表达方面表现出显著低于来自未治疗的动物的细胞。附图2解释了观察到IFN-γmRNA的显著抑制。

实施例II

表现出烟碱激动剂对细胞因子表达的作用的体外研究。

为了进一步澄清烟碱在体内模型上的抑制作用中涉及的机理，使用肺泡巨噬细胞细胞系。

通过RT-PCR测试烟碱或DMPP治疗对AMJ2-C11细胞上TNF-α，IL-10mRNA表达的作用。这些细胞因子涉及肺部炎性疾病，诸如HP、哮喘和结节病的发生(52-55)。烟碱和DMPP治疗表现出TNF mRNA表达显著下降(在用40μM烟碱处理的LPS刺激的细胞中表达下降达98％)，但并非以剂量依赖性方式。参照附图3，其中将结果表示为表达％，将100％定为单独的LPS组。通过将TNF-α带强度除以β-肌动蛋白带强度获得带强度。使用不同剂量(40-160μM，烟碱和DMPP)处理刺激的细胞诱导TNF-αmRNA表达下降。使用40μM浓度烟碱获得了最大的作用(表达减少98％)，而所有剂量的DMPP均产生了60-50％的表达下降。使用SR-刺激的细胞观察到了类似的结果。参照附图4，其中如附图5中所述表示结果。使用不同剂量(80和160μM，烟碱；和40-160μM，DMPP)处理刺激的细胞诱导TNF-αmRNA表达的减量调节。仅160μM剂量的烟碱对mRNA表达具有作用，而40和80μM剂量的DMPP诱导的TNF-αmRNA表达下降达60％。这种非剂量依赖性反应可以根据因介质中大量的激动剂而导致的烟碱受体脱敏来解释。烟碱和DMPP治疗还减少了IL-10mRNA表达。在40μM烟碱剂量下发生最大的减量调节(LPS刺激的；mRNA表达下降88％；参照表示结果的附图5。使用不同剂量(40-160μM，烟碱和DMPP)处理刺激的细胞诱导IL-10mRNA表达的减量调节。使用40μM烟碱表达发生最大的下降(下降87％)。对所有三种剂量而言，DMPP使表达下降了55-40％。在80μM DMPP剂量下，在SR-刺激的细胞中观察到了87％IL-10mRNA表达下降，结果如附图6中所示。使用不同剂量(80和160μM，烟碱；和40-80μM，DMPP)处理SR-刺激的细胞诱导IL-10mRNA表达的减量调节。使用烟碱在160μM(表达下降60％)处理，和使用DMPP在80μM(表达下降90％)处理发生了mRNA表达的最大下降。

将另一种巨噬细胞细胞系(RAW 264.7，ATCC)用于通过RT-PCR测试DMPP对IFN-γ表达的作用，因为AMJ2-C11细胞未显示出表达IFN-γmRNA(数据未显示出)。用50μg/ml SR抗原刺激细胞并且与40-160μM剂量的DMPP一起温育。使用40μM剂量的DMPP处理将这些细胞中INF-γ的表达减少达75％。参照附图7，其中如附图5中所述表示结果。使用不同剂量的DMPP处理刺激的细胞诱导INF-γmRNA表达下降。使用40μMDMPP发生最大的表达下降(下降80％)。

实施例III

烟碱激动剂对共刺激分子表达的体外作用。

在体外测试烟碱和DMPP对B7(CD80)分子表达的作用。将AMJ2-C11细胞(来自ATCC的小鼠肺泡巨噬细胞)与40μM烟碱或DMPP一起温育并且使用LPS(0.1μg/ml)或SR(50μg/ml)刺激48小时。处理细胞中CD80表达的百分比约为在LPS和SR刺激的未处理细胞中测定的表达的一半。参照附图8(a)，显示烟碱处理(40μM，48小时)使LPS刺激的细胞中表达降至20％。再参照附图8(b)，显示DMPP处理(40μM，48小时)使LPS刺激的细胞中的表达降至17％并且使SR刺激的细胞中的表达降至20％。

实施例IV

对人BAL细胞(AM和淋巴细胞)的研究

由于一个目的在于使用DMPP或类似药物治疗患者，所以验证该药物对来自患有HP的患者的淋巴细胞的作用。对患有HP的患者进行BAL。淋巴细胞分离自其它BAL细胞，使用PHA刺激并且与DMPP一起温育。对IFN-γ的细胞因子mRNA产生测试DMPP的剂量反应(通过RT-PCR)。参照附图9，显示DMPP处理减少了这些细胞中的IFN-γ的表达。对正常患者进行支气管-肺泡灌洗并且分离肺泡巨噬细胞。SR-刺激的和烟碱或DMPP处理的细胞再次表现出CD86表达约为未处理细胞的一半。参照附图10，显示使用DMPP处理的细胞表达CD86低于未处理细胞50％。

实施例V

其它烟碱激动剂对短期SR-诱导的急性炎症的作用的研究。

给小鼠鼻内滴注农民肺病原体直逗号糖多孢菌(SR)抗原在肺中诱发了显性的炎症反应。中性白细胞为募集在炎症部位上的第一种炎症细胞。使用DMPP(0.5mg/kg)、烟碱(0.5mg/kg)和地棘蛙素(2μg/kg)治疗小鼠对SR-诱导的炎症具有显著抑制作用。参照附图11，显示使用烟碱和地棘蛙素治疗在24小时后对SR-诱导的炎症具有显著性抑制作用。每隔6小时通过鼻内给予50μl烟碱激动剂并且在SR滴注后24小时处死小鼠。

使用烟碱和地棘蛙素观察到了显著抑制作用，但使用DMPP不会。然而，在将使用或不使用DMPP治疗的小鼠数量增加至15只后，我们确实观察到与未治疗的组相比显著的抑制作用(附图12)。

TNF(促炎细胞因子)水平在DMPP-治疗小鼠的支气管-肺泡灌洗液中较低(附图13表示DMPP显著性降低了BALF TNF水平)，表明炎症的减量调节可能因较低TNF浓度所致。

实施例VI

体内哮喘模型

在卵清蛋白致敏的小鼠中进行类似实验。据报导DMPP减少了对吸入变应原和乙酰甲胆碱的炎症反应和高反应性。

通过腹膜内注射在2mg于PBS的氢氧化铝中乳化的20μg OVA蛋白质(鸡卵清蛋白；Sigma-Aldrich)使Balb/c小鼠组致敏。4周后，通过鼻内给予攻击剂量的1.5％/50μl OVA。每天进行攻击，持续进行3天，且然后在最后接触气溶胶后24小时评价小鼠肺的过敏性炎症。在攻击期过程中用不同浓度的DMPP治疗小鼠组。进行支气管-肺泡灌洗(BAL)并且以400g离心流体以便从液体中分离细胞。附图14表示在OVA攻击和未治疗的小鼠中细胞数量显著升高。DMPP治疗在0.5和2.0mg/kg剂量下显著减少了细胞计数。附图15表示OVA攻击的小鼠(OVA OVA)在其BAL中具有比对照组(sal sal)更多的嗜酸性粒细胞和淋巴细胞。DMPP治疗在所有组中均显著减少了BAL中存在的嗜酸性粒细胞和淋巴细胞(n＝8；p＜0.05)。附图16表示OVA攻击的小鼠(OVAOVA)在其BAL中具有比对照组(sal sal)更多的嗜酸性粒细胞和淋巴细胞。DMPP治疗在所有组中均显著减少了BAL中存在的嗜酸性粒细胞和淋巴细胞(n＝8；p＜0.05)。附图17表示DMPP治疗在0.1和0.5mg/kg剂量下显著减少了嗜酸性粒细胞和淋巴细胞，其中就DMPP的抗炎作用而言，0.5mg/kg为最有效的剂量。

上清液用于测定肺IL-5水平。评估了BAL细胞的总数和分类细胞计数。附图18表示OVA攻击增加了BAL中的IL-5水平，而DMPP治疗在0.5mg/kg治疗组小鼠中对IL-5水平具有显著抑制作用。

使用最佳剂量的DMPP重复本实验以便评价气道反应性。

AHR的测定

使用计算机控制的通风机(Flexi VENT^TM)在麻醉的气管切开的处于通风环境中的小鼠中测定对乙酰甲胆碱的气道高反应性(AHR)。

通过颈静脉给予增加剂量的乙酰甲胆碱(0mg/kg-32.5mg/kg)。附图19表示与哮喘型小鼠相比DMPP-降低的肺阻力增加％。附图20表示与哮喘型小鼠相比，DMPP在治疗的小鼠中显著减少了PC200(p＝0.04；n＝6)。

实施例VII

激动剂治疗对IL-4的mRNA表达的作用

还测试了激动剂治疗对众所周知在哮喘发生中涉及的细胞因子IL-4的mRNA表达的作用(53)。使用40μM的烟碱将IL-4mRNA表达减少达92％(附图9)。DMPP完全阻断了IL-4mRNA表达。参照显示附图5中所示结果的附图21。用不同剂量(40-160μM，烟碱和DMPP)处理细胞。烟碱处理诱导IL-4mRNA表达下降(在40μM组中使表达下降达90％)。如上所述，当使用SR抗原刺激细胞时，不存在IL-4mRNA表达。

实施例VIII

不同激动剂对嗜酸性粒细胞移行的作用。

为了进一步研究烟碱激动剂对哮喘中炎症的减量调节作用，我们测试了不同激动剂对嗜酸性粒细胞移行的作用。

嗜酸性粒细胞和其它炎症细胞浸润入肺组织是哮喘的重要特征和气道炎症和高反应性的原因。炎症细胞从循环中进入肺包括经血管内皮、基底膜和胞外基质成分迁移。炎症细胞通过产生蛋白酶而穿过基底膜。在这些前期体外实验中，研究了不同烟碱激动剂对纯化的血液嗜酸性粒细胞穿过人工基底膜(Matrigel涂敷的趋化室)迁移的作用。DMPP诱导嗜酸性粒细胞移行的剂量相关抑制(附图22表示DMPP诱导嗜酸性粒细胞通过人工基底膜移行的剂量相关抑制)，而这种作用被拮抗剂美加明(MEC)逆转(附图23表示美加明逆转DMPP的作用，从而提示烟碱受体活化对DMPP抑制作用是必不可少的)。使用均可减少血液嗜酸性粒细胞移行的其它烟碱激动剂，包括烟碱、地棘蛙素和野靛碱进一步证实了这种抑制作用(附图24)。将结果表示为(激动剂处理的细胞)与不使用激动剂的对照条件相比的抑制百分比。

这些结果提示烟碱激动剂减量调节降解基底膜成分的蛋白酶合成或活化，由此抑制嗜酸性粒细胞迁移入肺粘膜。

实施例IX

烟碱激动剂对胶原蛋白产生的作用。

哮喘的特征在于气道结构改变，包括上皮下胶原蛋白沉积，它可能是该病成为慢性的原因。胶原蛋白合成与其被成纤维细胞降解之间失衡可能涉及该过程(56)。在前期实验中，我们研究了烟碱激动剂对初级正常成纤维细胞产生的胶原蛋白A1合成的作用。通过RT-PCR评价胶原蛋白A1的基因表达。

将结果表示为激动剂处理的细胞与未处理细胞相比的基因表达的百分比。

DMPP以剂量依赖性方式抑制胶原蛋白A1的基因表达(附图25)。烟碱在1和10μM下具有轻度抑制作用，而较高浓度没有作用(附图26)，这可能是因受体脱敏所致。较低剂量可能是获得抑制作用必不可少的并且将进行测试。

使用地棘蛙素也观察到了抑制作用(附图27)。

使用下列DMPP类似物进行类似试验并且获得了等同的结果。

实施例X

DMPP类似物的作用

基于我们的DMPP结果，研发了四(4)种新的DMPP类似物并且测试了它们的抗炎作用、改善的高反应性和平滑肌松弛作用。与DMPP类似，ASM-002、ASM-003、ASM-004和ASM-005为合成的烟碱乙酰胆碱受体激动剂。它们因其季铵盐结构而具有高度亲水性且由此不易于通过血脑屏障。因此，它们较少诱发成瘾。

实施例XI

抗炎作用：

DMPP类似物对肿瘤坏死因子(TNF)释放的作用

通过菲科帕克密度梯度从哮喘患者血液中分离人单核细胞，使其与组织培养平板粘着并且在37℃下用LPS(100ng/ml)与或不与增加浓度的烟碱一起刺激18小时。通过ELISA法测定细胞培养物上清液中的有效促炎介质TNF的释放。将结果表示为从LPS-刺激的未处理细胞中的释放百分比(附图28)。除ASM-005外，所有测试的类似物均对TNF释放具有抑制作用(n＝8-10；p为0.01-0.007)。

实施例XII

DMPP类似物对白细胞三烯C4(LTC4)产生的作用。

通过使用珠-缀合的抗-CD16单克隆抗体的负选择和磁活化细胞分选分离哮喘中增加最多的炎症细胞-血嗜酸性粒细胞。将细胞与不同DMPP类似物一起预温育18小时且然后使用1DM血小板活化因子(PAF)刺激而产生LTC4，将其通过酶免疫测定法进行测定。

结果表明测试的4种类似物中有3种能够减量调节LTC4释放(表1)。

表1DMPP和类似物对LTC4释放的作用

	LTC4pg/ml
		-	1725.80
DMPP	545.00
		ASM-002	246.40

ASM-003	613.90
		ASM-004	601.60

实施例XIII

平滑肌的松弛作用：

DMPP类似物对小鼠气管气道平滑肌反应性的作用。

为了证实DMPP类似物对气道平滑肌细胞的松弛作用，对分离的小鼠气管进行等长收缩研究。在37℃下将气管环以等张地安放在含有Krebs碳酸氢盐的器官浴槽内的力传感器上并且使用95％ O₂-5％ CO₂发泡，使用次最大浓度的乙酰甲胆碱(10^-5)使其预先收缩并且将累积剂量的类似物加入到浴槽中。记录张力变化。将结果表示为最大收缩百分比(附图29)。

与DMPP具有相似性，其类似物诱导使用乙酰甲胆碱预先收缩的气管平滑肌的剂量依赖性松弛。

总之，这些结果表明新合成的类似物ASM-002、ASM-003、ASM-004和ASM-005提供了与DMPP类似的抗炎和平滑肌松弛作用。

实施例XIV

小鼠模型

ASM-002对肺部炎症的作用

使用变应原攻击卵清蛋白-致敏的小鼠(n＝8)并且同时经鼻内使用增加浓度的ASM-002(0.5-4mg/kg/d)治疗3天。将通过支气管-肺泡灌洗回收的细胞数量作为肺部炎症的测量标准。

正如附图30中所示，ASM-002以剂量依赖性方式显著抑制了哮喘小鼠肺中的细胞炎症(ED₅₀＝0.71mg/kg，n＝8)。

实施例XV

小鼠模型

ASM-002对哮喘小鼠模型中肺阻力的作用

用Flexi-vent仪测定肺对支气管收缩药乙酰甲胆碱的反应。在3天过程中和乙酰甲胆碱攻击前10分钟用ASM-002(4mg/kg)通过鼻内治疗卵清蛋白-致敏的动物并且与未治疗的OVA-致敏动物比较。还包括未致敏动物的阴性对照组和在乙酰甲胆碱攻击前10分钟接受沙丁胺醇(万托林)的阳性对照组。

结果表明(附图31)与阴性对照组相比，在OVA-致敏的小鼠中乙酰甲胆碱诱导的肺阻力增加。与未治疗的小鼠相比，ASM-002-治疗的小鼠中观察到肺阻力显著下降(恢复到基线水平)(n＝8，p＜0.02)。这种作用与使用沙丁胺醇(Ventolin^TM)获得的结果相似，沙丁胺醇为目前用于哮喘以缓解支气管收缩症状的最常用的支气管扩张药(n＝4，p＜0.02)。

实施例XVI

狗喘哮喘模型

在该模型中，将12只对猪蛔虫的蛔虫天然致敏的狗用于交叉研究设计。随机形成3只狗的4个组，使其接触变应原并且对每只动物保持不治疗或接受ASM-002(在食物中4mg/kg 2x天)或最常用于治疗哮喘中的炎症的皮质类固醇药泼尼松(在食物中1mg/kg 1x天)之一。

ASM-002和泼尼松对肺部炎症的对比作用

评价支气管肺泡灌洗液中的细胞炎症。

正如附图32中所示，ASM-002(8mg/kg)显著抑制了哮喘狗肺中的细胞炎症，其功效与最常用的抗炎药Prednisone^TM相似(n＝12，p＜0.05)。

实施例XVII

ASM-002在狗模型中对肺高反应性的作用

将高反应性描述为肺对非特异性外源刺激物，如乙酰甲胆碱或变应原反应的能力(增加肺阻力)。与非变应原狗相比，高反应性变应原致敏的狗(哮喘型)将与低浓度的乙酰甲胆碱反应。类似地，根据诱导相同水平肺阻力必不可少的乙酰甲胆碱浓度增加证实了肺高反应性的改善。

给予增加浓度的乙酰甲胆碱对用或未用ASM-002或Prednisone^TM治疗的动物并且记录肺阻力。

正如附图33中所示，ASM-002在12只高反应性狗中的7只中降低了肺阻力。使用泼尼松的12只狗中没有1只表现出高反应性改善(p＝0.005)。

实施例XVIII

ASM-002的肌肉松弛特性

为了进一步证实ASM-002对气道平滑肌细胞的松弛作用，对分离的小鼠气管、来自狗肺的支气管环和来自切除的人肺的支气管环进行等长收缩研究。如上所述，在37℃下将气管或支气管环等张安装在含有Krebs碳酸氢盐溶液的器官浴槽内的力传感器上并且使用95％O₂-5％CO₂发泡，使用次最大浓度的乙酰甲胆碱使其预先收缩。加入累积剂量的ASM-002。记录张力变化。将结果表示为小鼠(附图34，p＝0.002)、狗(附图35，p＝0.004)和人(附图36)的最大收缩百分比。

实施例XIV-XVIII的这些结果表示ASM-002对预先收缩的小鼠气管、狗和人的支气管提供松弛作用。

实施例XX

体外研究

在小鼠和上述实施例的狗中对ASM-002的抗炎活性进行体内观察。为了进一步表征这种作用，对该药物测试其抑制分离自哮喘患者的人血细胞释放2种有效炎症介质的能力。

肿瘤坏死因子(TNF)为炎症状态中释放的介质。在体外使用脂多糖(LPS)刺激人血单核细胞以便产生大量TNF，加入增加剂量的ASM-002并且测定TNF水平(附图37，EC₅₀＝3μM，n＝6，在5μm时为p＝0.0045，在10μm时为0.0014，且在50μm时为0.0003)。使用ASM-002观察到了TNF释放的剂量依赖性抑制。

实施例XXI

ASM-002与DMPP和地塞米松对LPS-刺激的血单核细胞的TNF产生的对比作用。

正如附图38中所示，将结果表示为来自未处理对照细胞的百分比，以40μM浓度加入所有药物并且为5次不同实验的平均值(5个受试者)。ASM-002以及地塞米松和DMPP抑制从人血单核细胞中的TNF释放(p＝0.02-0.001)。

白细胞三烯C4(LTC4)为哮喘中大量产生的炎性脂质介质，它由血液嗜酸性粒细胞大量释放。

从哮喘患者血液中分离人血嗜酸性粒细胞，使用血小板活化因子(PAF)进体外刺激以产生大量LTC4，并且使用或不使用80μM ASM-002治疗。

观察到ASM-治疗的嗜酸性粒细胞的LTC4产生的显著性抑制(附图39，p＝0.0007)。结果代表6次不同实验的平均值(6位患者)。

结果表明ASM-002提供了抗炎和支气管扩张特性以及改善的高反应性的组合作用，它对缓解和治疗哮喘以及其它阻塞性呼吸系统疾病高度有效。

实施例XXII

其它烟碱乙酰胆碱受体类似物

如本文所述的其它类似物，诸如烟碱、野靛碱和地棘蛙素可以用作治疗肺部炎症中的烟碱受体抑制剂

抗炎作用：

通过菲科帕克密度梯度分离人血单核细胞，使其与组织培养平板粘着并且在37℃下用LPS(100ng/ml)与或不与增加浓度的烟碱类似物一起刺激18小时。将获得的结果披露在附图40中，显著性水平如表2中所示。

表2

烟碱类似物对LPS刺激的作用的显著性水平

P＝

浓度烟碱 ASM-N1 ASM-N2 ASM-N3 ASM-N4

(M) p＝ p＝ p＝ p＝ p＝

10^-4 0.034 0.011 0.006 0.037 0.035

10^-5 0.032 0.015 0.001 0.008 0.039

使用增加浓度的4种烟碱类似物观察到了TNF释放的显著减少。

实施例XXIII

在叔丁醇中混合1-苯基哌嗪(1eq)、碘乙烷(1eq)和碳酸钠(2eq)。将该混合物回流20小时。然后将该混合物溶于氯仿并且使用水萃取3次。使用1N HCl水溶液将有机层洗涤3次。然后使用NaOH颗粒将水层碱化至碱性pH。然后用氯仿将碱性水层萃取3次并且用Na₂SO₄干燥合并的有机萃取物且蒸发至干。使用硅胶快速色谱法，应用0-5％在氯仿中的MeOH梯度纯化粗产物。得到所需产物，为黄色油状物(产率52％)。

在室温下将N-乙基苯基哌嗪(1eq，0.6mmol)和碘甲烷(过量＞10eq，1ml)在乙醚中搅拌4天。通过真空过滤分离所得的ASM-003的白色沉淀(产率75％)。

实施例XXIV

在叔丁醇中混合1-苯基哌嗪(1eq)、碘丙烷(1eq)和碳酸钠(2eq)。将该混合物回流20小时。然后将该混合物溶于氯仿并且使用水萃取3次。使用1N HCl水溶液将有机层洗涤3次。然后使用NaOH颗粒将水层碱化至碱性pH。然后用氯仿将碱性水层萃取3次并且干燥合并的有机萃取物且蒸发至干。使用硅胶快速色谱法，应用0-5％在氯仿中的MeOH梯度纯化粗产物。得到所需产物，为黄色油状物(产率83％)。

混合N-丙基苯基哌嗪(1eq，0.6mmol)和碘甲烷(过量＞10eq，1ml)并且在室温下在乙醚中搅拌2天。然后将该混合物与额外量的碘甲烷(＞10eq)和THF和乙醚的混合物(1∶1)一起回流48小时。蒸发该混合物并且在乙醚中稀释而得到ASM-004的白色沉淀，将其通过真空过滤分离(产率86％)。

实施例XXV

将实施例XXIII中制备的N-乙基苯基哌嗪(1eq，0.5mmol)和碘甲烷(过量＞10eq，1ml)在室温下在乙醚中搅拌2天。然后将该混合物与额外量的碘乙烷(＞10eq)和THF和乙醚的混合物(1∶1)一起回流48小时。蒸发该混合物并且在乙醚中稀释而得到ASM-005的白色沉淀，将其通过真空过滤分离(产率62％)。

或

在室温下和乙腈中搅拌N-乙基苯基哌嗪(1eq，3.94mmol)和碘乙烷(过量＞10eq，3ml)。蒸发该混合物并且在乙醚中稀释而得到ASM-005的白色沉淀，将其通过真空过滤分离(产率27％)。

实施例XXVI

将N-丙基苯基哌嗪(1eq，0.51mmol)和碘乙烷(过量＞10eq，1ml)在室温下在乙醚中搅拌2天。然后将该混合物与额外量的碘乙烷(＞10eq)和THF和乙醚的混合物(1∶1)一起回流48小时。蒸发该混合物并且在乙醚中稀释而得到白色沉淀，将其通过真空过滤分离(产率11％)。

或

将N-丙基苯基哌嗪(1eq，0.1mmol)和碘乙烷(过量＞10eq，1ml)在回流的丙酮中搅拌24小时。蒸发该混合物并且在乙醚中稀释而得到白色沉淀，将其通过真空过滤分离(产率75％)。

实施例XXVII

将N-丙基苯基哌嗪(1eq，0.53mmol)和碘丙烷(过量＞10eq，1ml)在室温下在乙醚中搅拌2天。然后将该混合物与额外量的碘丙烷(＞10eq，1ml)和THF和乙醚的混合物(1∶1)一起回流48小时。蒸发该混合物并且在乙醚中稀释而得到白色沉淀，将其通过真空过滤分离(产率10％)。

实施例XXVIII

在氮气环境中的火焰干燥的圆底烧瓶中，将碘苯(1eq，1.47mmol)、N-甲基高哌嗪(1.2eq，1.76mmol)、乙二醇(2eq，2.94mmol)、CuI(5％mol)和K₃PO₄(2eq，2.94mmol)悬浮于异丙醇(3ml)中。将该混合物在搅拌的同时回流17小时。将所得混合物冷却至室温并且加入水(5ml)。用乙醚(4×10ml)萃取该混合物并且用盐水洗涤合并的有机提取物，用Na₂SO₄干燥并且在真空中蒸发至干。使用硅胶快速色谱法，应用0％-7.5％(2M NH₃)在氯仿中的MeOH梯度纯化粗产物。得到所需产物，为黄色油状物(产率64％)。

将N-甲基苯基高哌嗪(1eq，0.36mmol)和碘甲烷(过量＞10eq，1ml)在室温下在乙醚中搅拌25小时。将该混合物在真空中蒸发，用乙醚稀释并且在真空中过滤所得白色固体1，1-二甲基-4-苯基高哌嗪碘化物(产率：66％)。熔点：158-160。

¹H NMR DMSO-d6(ppm)：(q，2H)7.18，(q，2H)6.74，(t，1H)6.64，(br s，2H，3.74)，(m，2H)3.52，(m，2H)3.44，(t，2H)3.40，(s，6H)3.17，(bs s，2H)2.21。

¹³C NMR DMSO-d6：149，129，117，112，66，65，53，47，43，22。

实施例XXIX

将烟碱(160mg，0.987mmol)溶于乙醚(5ml)，加入过量的碘甲烷(33eq，2ml)并且在室温下和暗处搅拌15小时过夜。

在真空中过滤该混合物并且用乙醚洗涤固体。获得ASM-N1的白色沉淀(产率91％)。

¹H NMR丙酮-d6(ppm)：(m，1H)1.75，(m，1H)1.85，(m，1H)2.0，(s，3H)2.26，(m，2H)2.42，(m，1H)3.25(t，1H)3.59，(s，3H)4.67(t，1H)8.21，(d，1H)8.66，(d，1H)9.13，(s，1H)9.22。

实施例XXX

向在无水二氯甲烷(15ml)无水物中的上述获得的烟碱盐化合物(ASM-N1)(100mg，0.32mmol)中加入过量的碘甲烷(33eq，0.64ml)并且在室温下和暗处搅拌18小时过夜。

在真空中过滤该混合物并且用乙醚洗涤固体。得到白色沉淀(产率26％)。

¹H NMR丙酮-d6(ppm)：(m，3H)2.26，(m，1H)2.71，(s，3H)2.82，(s，3H)3.14(m，1H)3.76，(m，1H)3.86，(s，3H)4.40，(t，1H)5.04，(t，1H)8.31，(d，1H)，8.85(d，1H)，9.17，(s，1H)9.31。

实施例XXXI

将烟碱(390mg，2.4mmol)溶于乙醚(10ml)，加入过量的碘乙烷(33eq，6.3ml)并且在室温下和暗处搅拌7天。

蒸发溶剂并且加入二氯甲烷(100ml)以使ASM-N4的淡黄色物质沉淀。

蒸发有机层并且用乙醚洗涤所得油状物而得到ASM-N3。

ASM-N3的¹H NMR丙酮-d6(ppm)：(t，3H)1.70，(m，1H)1.82，(m，1H)1.95，(s，3H)，2.26(m，3H)2.43，(m，1H)3.30(m，1H)3.70，(q，2H)4.95，(m，1H)8.20，(d，1H)8.69，(d，1H)9.29，(s，1H)9.39。

ASM-N4的¹H NMR丙酮-d6(ppm)：(2t，3H)1.2和1.5，(t，3H)1.75，(m，1H)1.85，(m，2H)2.05(s，3H)2.41，(m，1H)2.71，(m，2H)3.45，(2q，2H)3.78和3.95，(m，1H)4.12，(q，2H)4.98，(m，1H)8.27，(d，1H)8.86，(d，1H)9.40，(s，1H)9.56

实施例XXXII

按照与实施例XXIX中所述类似的方式在暗处使用在二氯甲烷中的碘甲烷(10eq)1小时制备ASM-C1。表征(caracterisation)与结构一致。

实施例XXXIII

按照与J.Med.Chem.(2001)，44，3946-3955中所述类似的方式使用甲醛和甲酸制备ASM-C2。表征与结构一致。

实施例XXXIV

按照与实施例XXIX中所述类似的方式在暗处使用在二氯甲烷中的碘甲烷(40eq)20小时制备ASM-C3。表征与结构一致。

实施例XXXV

按照与II Farmaco 54(1999)438-451中所述类似的方式使用环氧乙烷制备ASM-C4。表征与结构一致。

实施例XXXVI

按照与实施例XXIX中所述类似的方式在暗处使用在二氯甲烷中的碘甲烷(40eq)18小时制备ASM-C5。表征与结构一致。

实施例XXXVII

在室温下使用在二氯甲烷中的三乙胺(10eq)将(+)-地棘蛙素二盐酸盐处理1小时且然后按照标准分离方案分离地棘蛙素。

按照与J.Med.Chem.2001，44，3946-3955中所述类似的方式使用地棘蛙素、甲醛和甲酸制备ASM-E1。表征与结构一致。

实施例XXXVIII

按照与实施例XXIX中所述类似的方式在室温下使用在二氯甲烷中的碘甲烷(40eq)17小时制备ASM-E1。表征与结构一致。

尽管上文通过优选实施方案描述了本发明，但是可以在不脱离本发明实质和性质的情况下对其进行变型，本发明的实质和性质如待批权利要求定义。

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Claims

1.用于治疗或预防肺部炎性疾病的药物组合物，包括有效量的具有如下通式的化合物：

其中R₁和R₂独立为1-6个碳原子的烷基；

Xa为CH或N；

Ya为氢或卤素；

n为2；和

J为选自氟、氯、溴、碘、硫酸根和磺酸根的抗衡离子；

其中所述肺部炎性疾病选自哮喘、慢性阻塞性肺病、间质性肺纤维化、结节病、过敏性肺炎、慢性过敏性肺炎和具有组织化肺炎的梗阻性细支气管炎。

2.权利要求1所述的药物组合物，其中R₁和R₂独立地选自甲基、乙基、正-丙基或异-丙基；

Xa为CH；

Ya为氢；

n为2；

J为选自氟、氯、溴和碘的抗衡离子。

3.权利要求1所述的药物组合物，其中所述的化合物具有如下通式：

4.如权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其中所述的肺部炎性疾病为哮喘。

5.如权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其中通过直接注射或输注、气管内/鼻内给药、眼内、透皮、口服、非肠道、局部或通过吸入给予所述的化合物。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其中通过口服、局部或通过吸入给予所述的化合物。

7.如下通式的化合物：

其中R₁和R₂独立为1-6个碳原子的烷基；

Xa为CH或N；

Ya为氢或卤素；

n为2；和

J为选自氟、氯、溴、碘、硫酸根和磺酸根的抗衡离子。

8.如权利要求7所述的化合物，其中R₁和R₂独立地选自甲基、乙基、正-丙基或异-丙基；

Xa为CH；

Ya为氢；

n为2；和

J为选自氟、氯、溴和碘的抗衡离子。

9.如权利要求7所述的化合物，具有如下通式：

10.如权利要求1-3任一项所述的药物组合物，用于与一种或多种选自支气管扩张药、抗炎疗法、白细胞三烯受体拮抗剂和磷酸二酯酶抑制剂的治疗剂联合。

11.权利要求7的化合物，具有通式(1)：

其中R₁和R₂独立地选自甲基、乙基、正-丙基或异-丙基；

Xa为CH或N；

Ya为氢或卤素；

n为2；和

J为选自氟、氯、溴、碘、硫酸根和磺酸根的抗衡离子。

12.如权利要求11限定的化合物，其中Xa为CH。

13.如权利要求7所限定的化合物，具有下式：

其中R₁和R₂独立地选自甲基、乙基、正-丙基或异-丙基；

Xa是CH；

Ya为氢；

n为2；和

J是磺酸根。

14.如权利要求1所限定的药物组合物，其中该化合物具有通式(1)：

其中R₁和R₂独立地选自甲基、乙基、正-丙基或异-丙基；

Xa为CH或N；

Ya为氢或卤素；

n为2；和

J为选自氟、氯、溴、碘、硫酸根和磺酸根的抗衡离子。

15.如权利要求14所限定的药物组合物，其中所述Xa是CH。

16.如权利要求1所限定的药物组合物，其中所述化合物具有下式：

其中R₁和R₂独立地选自甲基、乙基、正-丙基或异-丙基；

Xa是CH；

Ya为氢；

n为2；和

J是磺酸根。