CH696724A5 - New azaphenylalanine derivatives are thrombine inhibitors useful to treat or inhibit thrombin, fibrin or thrombus formation in the blood - Google Patents

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CH696724A5
CH696724A5 CH01209/04A CH12092003A CH696724A5 CH 696724 A5 CH696724 A5 CH 696724A5 CH 01209/04 A CH01209/04 A CH 01209/04A CH 12092003 A CH12092003 A CH 12092003A CH 696724 A5 CH696724 A5 CH 696724A5
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Uros Urleb
Bakija Alenka Trampus
Ales Obreza
Mojca Stegner
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Lek Tovarna Farmacevtskih
Univ Ljubljana Faculty Of Pharmacy
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Abstract

Azaphenylalanine derivatives (I) and their salts are new. Azaphenylalanine derivatives of formula (I) and their salts are new. [Image] R1>, Z : H, -C(=NR4>)NH2 or CH2-NH3+>Cl->; R4>H, 1-3C alkyl, OH, O-(1-3C alkyl) or NH2; R2>heterocyclic derivative of formula (1-3), azepine o r N(R8>)R9>; R5>-R7>H, 1-3C alkyl or COOR1>0>; R1>0>H or 1-3C alkyl; R8>, R9>H, 1-3C alkyl or 3-6C cycloalkyl; R1>1>H, 1-3C alkyl or benzyl; X : CH, O or S; Y : NR1>2>, O or S; R1>2>H, COCH3 or 1-3C alkyl; and R3>group of formula (4-6) or napthylsufonyl, benzylderivative of formula (9) (where R1> = -CH2-NH3+>Cl->). Provided that: (1) one of R1> and Z is H; and (2) R3>can only be napthylsulfonyl when R1> is -CH2>-NH3+>Cl-> An independent claim is also included for preparation of (I). ACTIVITY : Anticoagulant. MECHANISM OF ACTION : Thrombine inhibitor; Factor Xa inhibitor. (I) were tested for their thrombin inhibitory activity using enzyme assay. The negative logarithm of inhibitory constant for (4-{[1-{[Cyclopentyl(methyl)amino]carbonyl}-2-(2-naphthylsulfonyl)hydrazino]methyl}phenyl)methanaminium chloride was 0.031.

Description

       

  [0001] Die Erfindung gehört zu dem Gebiet der pharmazeutischen Industrie und bezieht sich auf neue Azaphenylalaninderivate, Verfahren für ihre Herstellung und pharmazeutische Zusammensetzung, welche sie enthalten. Diese neuartigen Azaphenylalaninderivate sind als Koagulationshemmer verwendbar.

[0002] Thrombin ist eine Serinprotease, welches eines der Schlüsselenzyme in den Vorgängen der Blutkoagulation und in der Entwicklung von Thrombosen ist (Edit, J. F.; Allison, P.; Noble, S.; Ashton, J.; Golino, P.; McNard, J.; Buja, L. M.; Willerson, J. T., J. Clin. Invest. 1989, 84, 18.) 

[0003] Die Kristallstruktur der Serinprotease Thrombin ist bekannt (Bode, W.; Turk, D.; Karshikov, A.

   J., Protein Sci. 1992, 1, 426).
Derzeitig verwendete Koagulationshemmer haben viele nachteilige Wirkungen und begrenzte Wirksamkeit.

[0004] Niedermolekulare Thrombininhibitoren sollten eine selektive Wirksamkeit haben und oral verabreicht werden können. Es gibt reversible und irreversible Thrombinantagonisten (Kimball, S.D., Curr. Pharm. Design 1995, 1, 441, Das, J.; Kimball, S. D., Bioorg. Med. Chem. 1995, 3, 999, Kimball, S. D., Blood Coagulation and Fibrinolysis 1995, 6, 511, Breznik, M.; Pecar, S.; Farm. Vestn. 1997, 48, 545, Leung, D.; Abbenante, G.; Fairlie, D. P., J. Med. Chem. 2000, 43, 305).

[0005] Die Mehrheit der reversiblen Thrombinantagonisten leiten sich von der peptidomimetisch modifizierten Struktur D-Phe-Pro-Arg ab.

   Das Ziel der Modifikation ist es, chemische Stabilität, Selektivität und Wirksamkeit zur Verfügung zu stellen.

[0006] Der Wirkstoff Argatroban, beschrieben in EP-A-0 008 746 wird klinisch verwendet. Napsagatran ist ein selektiver reversibler Inhibitor von Thrombin, beschrieben in EP-A-0 559 046. In meta substituierte Phenylalaninderivate mit Amid oder Amidoximstruktur sind selektive Thrombininhibitoren, offenbart in WO 92/08 709. Amidinophenylalaninderivate und Aminopyridylalaninderivate, beschrieben in WO 95/13 274, haben selektive antithrombotische Wirkung.

[0007] Azapetide sind Peptidomimetika, in welchen das Calpha -Atom durch Stickstoff ersetzt ist.

   Der Vorteil dieser isoelektrischen Substitution ist die Erhaltung der chemischen Integrität der modifizierten Aminosäure und nur eine geringfügige Konformationsänderung, die für den Vorgang der molekularen Identifikation und Stabilisation des Ligand-Rezeptor-Komplexes und die metabolische Stabilisation wichtig ist (Gante, J, Synthesis 1989, 405, Gante J., Angew. Chem. 1994, 106, 1780), Die Herstellung von N-Naphtylsulfonylaminosäuren ist bekannt (Pendleton, R. G., et al. J. Pharm. Exp. Ther. 1979, 208, 24). Phenylderivate werden in WO 02/051 824 und in Zega, A.; Mlinsek, G. Sepic, P.; et al. Bioorg. Med. Chem., 2001; 9, 2745-2756, Zega, A.; Trampus-Bakija, A.; Fortuna, M.; Stegnar, M.; et al. Pharmazie, 2001, 56, 638-685) beschrieben.

   Eine Gruppe von Thrombininhibitoren mit dem Azaphenylalaninfragment, beschrieben in SI-20 025 zeigte in In-vitro-Untersuchungen submikromolare Konstanten.

[0008] Vor kurzem wurden ebenfalls die Inhibitoren des Faktors Xa Forschungsziele der pharmazeutischen Industrie. Die Struktur des aktiven Zentrums des Faktors Xa, erhalten durch Röntgenbeugung, hatte einen grossen Einfluss auf die Synthese von Xa-Inhibitoren. Hinsichtlich hoher Wirksamkeit und moderater Selektivität gibt es zurzeit keine Xa-Inhibitoren auf dem Markt, obwohl sich einige von ihnen in verschiedenen Stadien klinischer Untersuchungen befinden (Zega, A; Obreza, A.; Urleb, U. Farm. Vestn.; 1999, 50, 53-57, Rai, R.; Sprengler, K. C.; Elrod, K.C.; et al. Curr. Med. Chem. 2001, 8, 101-119).

   Ein niedermolekularer Inhibitor DX-9065a weist hohe Thrombinselektivität auf und ist ein Bis-Amidinoderivat (Hara, T.; Yokoyama, A.; Ishihara, H.; et al. Thromb. Haemost. 1994,71, 314-319). Vor kurzem wurden Verbindungen mit nur einer basischen Gruppe in ihrer Struktur veröffentlicht, mit verbesserter Bioverfügbarkeit (WO 9 857 951, Yee, Y. K.; Tebbe, A. L.; Linebarger, J. H.; J. Med. Chem. 2000, 43, 873-882).

[0009] Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist, verbesserte neue Verbindungen mit koagulationshemmender Wirkung zur Verfügung zu stellen, wobei diese Verbindungen nach oraler Verabreichung wirksam sind, hochselektiv sind und eine niedrige Toxizität haben, ein Verfahren zu ihrer Herstellung als auch die Verwendung dieser Verbindungen für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung.

   Diese Aufgaben werden z.B. durch den Gegenstand der unabhängigen Ansprüche 1, 3, 4 und 11 erzielt. Bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung sind in den abhängigen Ansprüchen definiert.

[0010] Die Erfindung bezieht sich auf neuartige Azaphenylalaninderivate und Analoga davon mit der allgemeinen Formel (I)
 <EMI ID=2.0> 
wobei
R<1> und Z H sind oder ein Rest mit der Formel
 <EMI ID=3.0> 
unter der Voraussetzung, dass eines von R<1> und Z H ist;
R<4>= H, Alkyl (C1-C3), OH, O-Alkyl (C1C3), NH2;
R<2> einen Rest der Formel darstellt
 <EMI ID=4.0> 
wobei
R<5> = H, Alkyl (C1-C3), COOR<10>,
R<6> = H, Alkyl (C1-C3), COOR<10>,
R<7> = H, Alkyl (C1-C3), COOR<10>,
R<10> = H, Alkyl (C1-C3),
R<8> = H, Alkyl (C1-C3), Cycloalkyl (C3-C6),
R<9> = H, Alkyl (C1-C3), Cycloalkyl (C3-C6),
R<11> = H, Alkyl (C1-C3), Benzyl,
X = CH, O, S,
Y = NR<12>, O, S,
R<12> = H, COCH3, Alkyl (C1-C3);

  
R<3> ist ein Rest der Formel
 <EMI ID=5.0> 

[0011] Die Erfindung bezieht sich ebenfalls auf ihre pharmazeutisch akzeptablen Salze mit koagulationshemmender Wirkung und auf pharmazeutische Zusammensetzung, welche sie enthalten.

[0012] Die pharmazeutisch akzeptablen Salze der Verbindungen der Formel 1 enthalten bevorzugt die herkömmlichen nichttoxischen Salze oder die quaternären Ammoniumsalze, welche gebildet werden z. B. aus anorganischen oder organischen Säuren oder Basen.

   Beispiele für derartige Säureadditionsalze enthalten Acetat, Adipat, Alginat, Aspartat, Benzoat, Benzensulfonat, Bisulfat, Butyrat, Citrat, Camphorat, Camphersulfonat, Cyclopentanpropionat, Digluconat, Dodecylsulfat, Ethansulfonat, Fumarat, Glycoheptanoat, Hydrobromid, Hydrochlorid, Hydroiodid, Lactat, Maleat, Methansulfonat, Nicitinat, Nitrat, Oxalat, Pamoat, 3-Phenylpropionat, Picrat, Pivalat, Propionat, Pectinat, Succinat, Sulfat, Tartrat, Thiocyanat, Tosylat und Audecanoat. Basische Salze enthalten Ammoniumsalze, Alkalimetallsalze, wie etwa Natrium- oder Kaliumsalze, Erdalkalimetallsalze, wie etwa Calcium- und Magnesiumsalze, N-Methyl-D-glucamin und Salze mit Aminosäure wie etwa Arginin, Lysin usw.

   Ebenfalls können die basischen stickstoffhaltigen Gruppen mit derartigen Mitteln als niedrige Alkylhalide, Dialkylsulfate und Diamylsulfate, langkettige Halide, Aralkylhalide und anderen quaterniert werden. Die Auswahl der anorganischen oder organischen Säuren oder Basen sollte nicht auf diese Beispiele beschränkt sein.

[0013] Die Erfindung bezieht sich ebenfalls auf ein Verfahren zur Herstellung von Azaphenylalaninderivaten und analoger der allgemeinen Formel (I).

[0014] Die Azaphenylalaninderivate und Analoga der allgemeinen Formel (I), falls
R1= 
 <EMI ID=6.0> 
werden bevorzugt wie folgt hergestellt:

  
4-Cyanobenzaldehyd der Formel (II)
 <EMI ID=7.0> 
wird mit BOC-carbazat der Formel (III) umgesetzt
 <EMI ID=8.0> 
zu der Verbindung der Formel (IV)
 <EMI ID=9.0> 
welche mittels Reduktion durch katalytische Hydrogenierung unter Verwendung von Pd als ein Katalysator zu der Verbindung (V) umgesetzt wird
 <EMI ID=10.0> 
welche mit Triphosgen und Amin der Formel (VI) reagiert
 <EMI ID=11.0> 
wobei R5, R6 und R7 die gleichen Bedeutungen haben wie in der Formel (I), oder mit Triphosgen und Amin der Formel (VII oder VIII),
 <EMI ID=12.0> 
wobei Y die gleiche Bedeutung wie in der Formel (I) hat, oder mit Triphosgen und Amin der Formel (IX)
 <EMI ID=13.0> 
wobei R<8> und R<9> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben, oder mit Triphosgen oder Amin der Formel (X),

 <EMI ID=14.0> 
wobei R<11> und X die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben, zu der Verbindung (XI)

  
 <EMI ID=15.0> 
wobei R<2> die gleiche Bedeutung wie in der Formel (I) hat.

[0015] Die BOC-Schutzgruppe der Verbindungen (XI) wird bei Raumtemperatur unter Verwendung des Einströmens von gasförmigen Chlorwasserstoff in Essigsäure entfernt, um die Verbindung (XII) zu erhalten
 <EMI ID=16.0> 
wobei R<2> die gleiche Bedeutung wie in der Formel (I) hat.

[0016] Dann reagiert die Verbindung (XII) mit der aktivierten Naphtylsulfonylaminosäure oder mit aktivierter Arylalkylcarboxylsäure zu der Verbindung (XIII)
 <EMI ID=17.0> 
wobei R<2> und R<3> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben.

[0017] Die Verbindung (XIII) wird mit Hydroxylamin in reinem Ethanol zu der Verbindung mit der Formel (XIV) transformiert
 <EMI ID=18.0> 
wobei R<1> = 
 <EMI ID=19.0> 
, und R<3> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I)

   haben und R<4> eine OH-Gruppe ist.

[0018] Die Verbindung (XIII) wird mit einströmendem gasförmigem Chlorwasserstoff in ethanolischer Lösung, Zugabe von Ammoniumacetat, gefolgt bei einem weiteren Einströmen von Chlorwasserstoff zu der Verbindung (XV) umgewandelt,

 <EMI ID=20.0> 
wobei R<1> = 
 <EMI ID=21.0> 
R<2> und R<3> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben und R<4> Wasserstoff ist.

[0019] Die Azaphenylalaninderivate der allgemeinen Formel (I), wobei R1 = 
 <EMI ID=22.0> 
 werden wie folgt hergestellt:

  
4-Cyanobenzaldehyd der Formel (II)
 <EMI ID=23.0> 
wird mit Ethylenglykol in Anwesenheit von 4-Toluolsulfonsäure in die Verbindung (XVI) umgewandelt
 <EMI ID=24.0> 
welche mit Lithium-Aluminiumhydrid in die Verbindung der Formel (XVII) reduziert wird
 <EMI ID=25.0> 
welche mit Acetanhydrid zu der Verbindung (XVIII) reagiert

 <EMI ID=26.0> 

[0020] Die Verbindung (XVIII) wird mit 90%iger Methansäure zu der Verbindung (XIX) umgewandelt
 <EMI ID=27.0> 
welche mit BOC-carbazat der Formel (III)

 <EMI ID=28.0> 
zu der Verbindung der Formel (XX) umgewandelt wird

 <EMI ID=29.0> 
welche mittels Reduktion durch katalytische Hydrogenierung in die Verbindung (XXI) umgewandelt wird

 <EMI ID=30.0> 
welche mit Triphosgen und Amin der Formel (VI) reagiert

 <EMI ID=31.0> 
wobei R<5>, R<6> und R<7> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben,

   oder mit Triphosgen und Amin der Formel (VII oder VIII),

 <EMI ID=32.0> 
wobei Y die gleiche Bedeutung wie in der Formel (I) hat, oder mit Triphosgen und Amin der Formel (IX)
 <EMI ID=33.0> 
wobei R<8> und R<9> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben, oder mit Triphosgen und Amin der Formel (X)

 <EMI ID=34.0> 
wobei R<11> und X die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben, zu der Verbindung (XXII)

 <EMI ID=35.0> 
wobei R<2> die gleiche Bedeutung wie in der Formel (I) hat.

[0021] Die BOC-Schutzgruppe in der Verbindung (XXII) wird durch HCl (g) in AcOH bei Raumtemperatur entfernt, um die Verbindung (XXIII) zu erhalten,

 <EMI ID=36.0> 
wobei R<2> die gleiche Bedeutung wie in der Formel (I) hat, welche mit aromatischem Sulfonylchlorid zu der Verbindung (XXIV) reagiert

 <EMI ID=37.0> 
wobei R<2> und R<3> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I)

   haben.

[0022] Die Verbindung (XXIV) wird durch Erwärmen bis zum Kochen mit 5M HCl zu der Verbindung (XXV) umgewandelt

 <EMI ID=38.0> 
wobei R<1> = 
 <EMI ID=39.0> 
R<2> und R<3> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben.

[0023] Die Verbindungen, bei denen R<1> H ist und Z ist

 <EMI ID=40.0> 
werden auf analoge Weise wie vorher beschrieben hergestellt, mit der einzigen Ausnahme, dass die Ausgangsverbindung 3-Cyanobenzaldehyd anstelle von 4-Cyanobenzaldehyd ist.

[0024] Die Ausgangsverbindungen können, falls nicht anders angegeben, gemäss den in der Literatur beschriebenen Verfahren hergestellt werden; z.B. die Verbindung der Formel (IV) wie beschrieben durch A. Fässler, et al., J. Med.

   Chem. 1996, 39, 3203-3215.

[0025] Die Erfindung bezieht sich ferner auf die Verwendung von Verbindungen der Formel (I) für die Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzung verwendet als orale und parenterale Koagulationshemmer, z.B. Inhibitoren, die hauptsächlich Thrombin hemmen, und duale Inhibitoren von Thrombin und Faktor Xa.

   Sie können bei der Behandlung und Prävention einer Vielzahl von Thromboseformen verwendbar sein: (i) venöse Thromboembolien aufgrund der Bildung eines Thrombus innerhalb einer Vene (Venenthrombose) verbunden mit erworbenen (längere Bettlägerigkeit, chirurgische Eingriffe, Verletzungen, Krebserkrankungen, Schwangerschaft und Zuständen nach der Geburt) oder vererbten Risikofaktoren (Mangel an natürlichen Koagulationhemmern) Einengung oder Verschluss einer Lungenarterie durch einen abgelösten Thrombus (pulmonäre Embolie), (ii) cardiogene Thromboembolie, aufgrund der Bildung eines Thrombus im Herzen verbunden mit Herzrhythmusstörungen, Herzklappendefekten, künstlichen Herzklappen oder Herzerkrankungen, Embolien der peripheren Arterien verursacht durch einen abgelösten Thrombus, am häufigsten in das Gehirn (ischämischer Schlaganfall), (iii)

   arterielle Thrombose aufgrund des Durchlaufens atherosklerotischer Prozesse in den Arterien, welche eine Arterie einengen oder verschliessen und eine myocardiale Ischämie verursachen (Angina pectoris, akutes Koronarsyndrom) oder Herzmuskelzelltod (myocardialer Infarkt), Einengen oder Verschluss einer peripheren Arterie (periphere arterielle Verschlusskrankheit) und Einengen oder Verschliessen der Arterie nach einem Eingriff an dem Blutgefäss (Reverschluss oder Restenose nach transluminaler Koronararterienangeoplastie, Wiederverschluss oder Restenose nach perkutaner transluminaler Angioplastie der peripheren Arterien) und (iv) in einer Anzahl von Zuständen (z.B.

   Schwangerschaftskomplikationen, metastasierende maligne Erkrankungen, schwere Verletzungen, bakterielle Sepsis), falls thrombogene Aktivierung eine vielfältige Bildung von Thrombi in dem Gefässsystem verursacht (disseminierte, intravasale Koagulation). Die Auswahl der möglichen Verwendungen für die hergestellten pharmazeutischen Zusammensetzungen sollte nicht durch diese Beispiele beschränkt werden.

[0026] Die Verbindungen der Formel (I) können ebenfalls als eine zusätzliche Therapie im Zusammenhang mit thrombolytischer Therapie bei kurz zurückliegenden myocardialen Infarkten, in Kombination mit Acetylsalicylsäure bei Patienten mit instabiler Angina pectoris, bestimmt für eine perkutane transluminale Angioplastie,

   und bei der Behandlung von Patienten mit Thrombose und mit Heparin-induzierter Thrombozytopenie verwendet werden.

[0027] Die Koagulationshemmer können ferner für die Verhinderung der Koagulation von Blut, welches in Kontakt mit nicht biologischen Oberflächen ist (Gefässprothesen, Gefässstents, künstliche Herzklappen, extrakorporale Kreislaufsysteme, Chemodialyse), und in vitro verwendet werden, um die Koagulation in biologischen Proben zur Untersuchung oder zur Lagerung zu verhindern.

[0028] Ferner ist es eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, pharmazeutische Zusammensetzungen zur Verfügung zu stellen, welche die Verbindungen der Formeln (I) umfassen. Sie können als injizierbare oder orale Formulierungen formuliert werden. Zusätzlich zu den Wirkstoffen können bevorzugt verschiedene Standardzusätze in Abhängigkeit von der Verwendung enthalten sein.

   Die pharmazeutischen Zusammensetzungen werden gemäss Standardverfahren hergestellt. Die Zusammensetzung kann in einer derartigen Art und Weise formuliert werden, um eine kontrollierte und zeitversetzte Abgabe des Wirkstoffs zu erlauben. Dosierung, Häufigkeit und Art der Verabreichung hängt von einer Vielzahl von Faktoren ab, sie hängt ebenfalls von dem einzelnen Wirkstoff und seinen pharmakokinetischen Parametern und von dem Zustand des Patienten ab.

Biologische Tests

I. Enzymassay

1. Bestimmung der Wirksamkeit von Thrombininhibitoren

a) Prinzip

[0029] Thrombin spaltet Amidbindungen in einem synthetischen, chromogenen Substrat, wobei gelb gefärbtes p-Nitroanilin (p-NA) freigesetzt wird. Die Menge von erzeugtem p-NA ist direkt proportional zu der bei einer Wellenlänge von 405 nm unter Verwendung eines Spektrophotometers gemessenen Extinktion.

   Falls ein Thrombininhibitor hinzugegeben wird, sinkt die amidolytische Aktivität des Enzyms. Die Wirkung des Inhibitors wird als die Inhibitionskonstante (Ki) ausgedrückt.

b) Reagenzien

[0030] Thrombin (humanes Thrombin, 303 NIH-Einheiten, Sigma): Der Inhalt des Glasgefässes wurde in destilliertem Wasser gelöst, um eine Stammlösung von 20 NIH-Einheiten/ml zu ergeben. Die Stammlösung wird in 0,5-ml-Aliquots pipettiert und bei -70 C deg. gelagert. Unmittelbar vor der Verwendung wurde eine Arbeitslösung von Thrombin mit 2 NIH-Einheiten/ml Aktivität mit HBSA-Puffer hergestellt. Die Endkonzentration von Thrombin in einer Mikrotiterplatte ist 0,5 NIH-Einheiten/ml.
Chromogenes Thrombinstubstrat (S-2238, Chromogenix, 25 mg). Eine 1 mM Substratlösung wird hergestellt, in 0,5-ml-Aliquot pipettiert und bei -20 C deg. gelagert.

   Vor der Verwendung wurden 160 und 80 MicroM Substratlösungen mit destilliertem Wasser hergestellt. Die Endkonzentration des Substrats in der Reaktionsmischung war 40 bzw. 20 MicroM (Km = 2,6 MicroM).
HBSA-Puffer, pH 7,5: 10 mM Hepes-Puffer (HEPES, Sigma), 150 mM NaCl und 0,1% (w/v) bovines Serumalbumin (98% bovines Serumalbumin, Sigma) werden in zweifach destilliertem Wasser gelöst. Der pH wird mit 0,1 M NaOH-Lösung eingestellt.
Inhibitoren: Die Inhibitoren wurden in DMSO gelöst, um eine 10 mM Stammlösung zu ergeben. Die Arbeitslösungen (Endkonzentrationen im Bereich von 10 bis 100 MicroM) werden mit destilliertem Wasser hergestellt.

   Die höchste Konzentration an DMSO in einer Mikrotiterplatte überstieg 3% nicht.

c) Verfahren

[0031] Die Messungen wurden in einer Mikrotiterplatte durchgeführt. 50 Microl HBSA-Puffer, 50 Microl der Inhibitorlösung mit verschiedenen Konzentrationen (zur Kontrolle 50 Microl HBSA-Puffer) und 50 Microl Thrombinlösung wurden in die Vertiefungen einer Mikrotiterplatte pipettiert. Die Platte wird bei einer Temperatur von 25 deg. C für 15 Minuten inkubiert. Nach der Inkubation wurde 50 Microl des chromogenen Substrats hinzugegeben, und die Mikrotiterplatte in dem Spektrophotometer platziert (Tecan, Sunrise). Der Extinktionsanstieg bei 405 nm wird in 10 Sekunden Abständen über eine Zeitspanne von 15 Minuten bei einer Temperatur von 25 deg. C gemessen.

[0032] Für die Bestimmung der Inhibitionskonstante (Ki) wurden 40 von 20 MicroM Substrat verwendet.

   Jede Messung wurde dreifach durchgeführt und das Ergebnis ist der Mittelwert von 3 Messungen.

2. Bestimmung der Inhibitionskonstante (Ki)

[0033] Die Ki wird gemäss dem durch Cheng und Prusoff (Biochem Pharmacol, 1973) beschriebenen Prinzip bestimmt. Die anfänglichen Reaktionsgeschwindigkeiten in der Anwesenheit und der Abwesenheit des Inhibitors werden gemessen. Die Änderung in der Extinktion pro Zeiteinheit (v) wird von dem anfänglichen, linearen Teil der Reaktion berechnet.

   Für kompetitive Inhibitoren gilt, dass

 <EMI ID=41.0> 
und es folgt, dass

 <EMI ID=42.0> 

[0034] I = Inhibitorkonzentration, S = Substratkonzentration, Km = Michaeliskonstante, v0 = anfängliche Reaktionsgeschwindigkeit in der Abwesenheit des Inhibitors, vi = anfängliche Reaktionsgeschwindigkeit in der Gegenwart des Inhibitors.

[0035] Die Messungen wurden mit zwei Konzentrationen des Inhibitors und zwei Konzentrationen des Substrats durchgeführt. Für jede Kombination der verwendeten Konzentration des Substrats und des Inhibitors wurde Ki berechnet und das Ergebnis ist ihr gemittelter Wert.

3.

   Bestimmung der Selektivität der Inhibitorwirkung gegen Thrombin mit Bezug auf die Trypsin-Inhibition

a) Prinzip

[0036] Da Thrombin und Trypsin in Bezug auf die Spezifität gegen ein Substrat aufgrund vergleichbarer Strukturen im aktiven Zentrum eng verwandt sind, wird die Selektivität der Inhibitorwirkung gegen Thrombin mit Bezug auf die Trypsininhibition bestimmt, welche eine nicht spezifische Serinprotease ist. Die Inhibitorwirkung gegen Thrombin wird wie vorher beschrieben bestimmt. Die Trypsininhibition wird in der gleichen Art und Weise wie bei der Bestimmung der Inhibitorwirkung für Thrombin gemessen, ausser dass ein unterschiedliches chromogenes Substrat verwendet wird. Für beide Enzyme wird Ki berechnet.

   Die Selektivität des Inhibitors wird als ein Verhältnis von Ki für Trypsin zu Ki für Thrombin ausgedrückt.

b) Reagenzien

[0037] Trypsin (bovin, 6000 BAEE Einheiten/mg Protein, Sigma): Eine Stammlösung von Trypsin mit einer Aktivität von 300 U/ml wird hergestellt, in 0,2 ml Aliquots pipettiert und bei -70 deg. C gelagert. Unmittelbar vor der Verwendung wird die Stammlösung aufgetaut und eine Arbeitslösung mit 4 mU/ml mit HBSA-Puffer hergestellt. Die Endaktivität von Trypsin in einer Mikrotiterplatte ist 1 mU/ml.
Chromogenes Substrat für Trypsin (S-2222, Chromogenix, 25 mg): eine 2 mM Substratlösung wird hergestellt, in 0,3 ml Aliquots pipettiert und bei -20 deg. C gelagert. Vor der Verwendung wird die Stammlösung aufgetaut und 400 und 200 MicroM Substratlösungen werden hergestellt.

   Die Endkonzentrationen des Substrats der Reaktionsmischung sind 100 bzw. 50 MicroM (Km = 25 MicroM).
HBSA-Puffer, pH 7,5: 10 mM Hepespuffer (HEPES, Sigma), 150 mM NaCl und 0,1% (w/v) bovines Serumalbumin (98%iges bovines Serumalbumin, Sigma) werden in zweifach destilliertem Wasser gelöst. Der pH wird mit einer 0,1 M NaOH-Lösung eingestellt.
Inhibitor. Die Inhibitoren werden in DMSO gelöst, um eine 10 mM Stammlösung zu ergeben. Die Arbeitslösungen (Endkonzentration im Bereich von 10 bis 600 MicroM) werden mit destilliertem Wasser hergestellt. Die höchste Konzentration an DMSO in einer Mikrotiterplatte übersteigt 10% nicht.

[0038] Zur Bestimmung des Ki wurden 100 und 50 MicroM Substrat verwendet.

   Jede Messung wurde dreifach durchgeführt und das Ergebnis ist der Mittelwert von drei Messungen.

c) Verfahren

[0039] Das gleiche Verfahren wie vorher zur Messung der Inhibitoraktivität gegen Thrombin dargestellt, wird verwendet. Die Konzentrationen der Reagenzien zur Bestimmung der Inhibitoraktivität werden mit Bezug auf Trypsin verwendet.

d) Bestimmung der Inhibitionskonstante (Ki)

[0040] Sie wird auf dieselbe Art und Weise wie bei der Bestimmung von Ki für Thrombin bestimmt.

e) Bestimmung der Selektivität

[0041] Ki für Thrombin und Ki für Trypsin wurden bestimmt. Die Selektivität wird als das Verhältnis definiert:

 <EMI ID=43.0> 

4.

   Bestimmung der Selektivität der Inhibitoraktivität gegen Thrombin mit Bezug auf die Inhibition von Faktor Xa.

a) Prinzip

[0042] Da beide Enzyme eng verwandt sind und von vergleichbarer Struktur des aktiven Zehtrums, wird die Selektivität der Inhibitoraktivität gegen Thrombin mit Bezug auf die Inhibition von Faktor Xa bestimmt. Die Inhibition von FXa wird in der gleichen Art und Weise wie die Messung der Inhibition für Thrombin mit dem chromogenen Substrat S 2238 gemessen. Für beide Enzyme wird Ki berechnet. Die Selektivität des Inhibitors wird als ein Verhältnis von Ki für FXa zu Ki von Thrombin berechnet.

b) Reagenzien

[0043] Faktor Xa (Chromogenix, 71 nkat): Die Inhalte der Glasröhrchen werden in destilliertem Wasser gelöst, um eine Stammlösung mit 10 nkat/ml zu ergeben. Die Stammlösung wird in 0,5 ml Aliquots pipettiert und bei -20 deg. C gelagert.

   Unmittelbar vor der Verwendung wurden FXa-Arbeitslösungen mit einer Aktivität von 2 nkat/ml mit HBSA-Puffer hergestellt. Die Endaktivität von FXa in einer Microtiterplatte ist 0,5 nkat/ml.

[0044] Chromogenes Substrat für FXa (S-2222, Chromogenix, 25 mg): 2 mM Substratlösung wird hergestellt, in 0,5 ml Aliquots pipettiert und bei -20 deg. C gelagert. Vor der Verwendung wurden 800 und 400 MicroM Substratlösungen mit destilliertem Wasser hergestellt. Die Endkonzentration des Substrats in der Reaktionsmischung waren 200 bzw. 50 MicroM (Km = 25 MicroM).
HBSA-Puffer, pH 7,5: Der gleiche wie in dem Verfahren für Thrombin.
Inhibitor. Die Inhibitoren wurden in DMSO gelöst, um eine 10 mM Stammlösung zu ergeben. Die Arbeitslösungen (Endkonzentrationen im Bereich von 5 bis 300 MicroM) werden mit destilliertem Wasser hergestellt.

   Die höchste Konzentration an DMSO in einer Mikrotiterplatte übersteigt 3% nicht.

c) Verfahren

[0045] Das gleiche Verfahren wir vorher für die Messung der Inhibitoraktivität gegen Thrombin erwähnt, wird verwendet. Die Konzentrationen der für die Bestimmung der Inhibitoraktivität mit Bezug auf FXa beschriebenen Reagenzien werden verwendet.

d) Bestimmung der Inhibitionskonstante (Ki)

[0046] Sie wird in der gleichen Art und Weise wie bei der Bestimmung von Ki für Thrombin bestimmt.

e) Bestimmung der Selektivität

[0047] Ki für Thrombin und Ki für FXa werden bestimmt. Die Selektivität wird als ein Verhältnis definiert:

 <EMI ID=44.0> 

II.

   Koagulationsassay

[0048] Die Gerinnungszeit für normales gepooltes Plasma wird durch die Koagulationsassays (Thrombinzeit, aktivierte partielle Thromboplastinzeit und Prothrombinzeit) in einem Koagulometer nach Zugabe von verschiedenen Konzentrationen des Inhibitors gemessen. Die Ergebnisse werden als die Inhibitorkonzentration dargestellt, welche die Gerinnungszeit verdoppelt.

1. Thrombinzeit (TT)

a) Prinzip

[0049] Die Bestimmung der Thrombinzeit wird zur labormässigen Überwachung der Behandlung mit nicht fraktioniertem Heparin, zur Überwachung der thrombolytischen Therapie, zum Nachweis von Störungen in der Fibrinbildung und zur Diagnose von schweren Formen von Fibrinogenmangel verwendet. Die Thrombinzeit wird aufgrund der reduzierten Fibrinogenkonzentration, der Anwesenheit von Fibrinogenabbauprodukten oder Thrombininhibitoren im Plasma verlängert.

   Für das Verfahren wird Thrombin zum Plasma hinzugegeben. Thrombin wandelt Fibrinogen in Fibrin um, und die Zeit für die Gerinnungsbildung wird gemessen.

b) Reagenzien

[0050] Thrombin (Thrombinuntersuchungsreagenz, 1,5 IU/ml): Lyophilisiertes bovines Thrombin wird in 5 ml HEPES-Puffer-Saline (25 nM, pH 7,4) zu einer Konzentration von 2 U/ml gelöst. Normales gepooltes Plasma: Venöses Blut von wenigstens 10 offensichtlich gesunden Freiwilligen wird in einer 0,11 M Natriumcitratlösung gesammelt (ein Teil Natriumcitrat und 9 Teile Blut). Unmittelbar nach Entnahme des Blutes wird das Blut bei 2000 X g für 30 Minuten bei 4 deg. C zentrifugiert. Das Plasma wird entfernt, in 2 ml Aliquots pipettiert und bei -70 deg.

   C gelagert.
Inhibitoren: Die Inhibitoren werden in DMSO (10 mM Stammlösung) gelöst und mit destilliertem Wasser verdünnt, um Arbeitslösungen zu ergeben (höchste Konzentration 100 MicroM).

c) Verfahren

[0051] Es wurden 90 Microl Plasma und 10 Microl des Inhibitors in eine Küvette des Koagulometers (Fibrintime, Dade/Behring) pipettiert und auf 37 deg. C vorgewärmt. Es wurde bei 37 deg. C für 5 Minuten inkubiert. Es wurden 200 Microl der auf 37 deg. C vorgewärmten Thrombinlösung hinzugegeben. Nach der Thrombinhinzugabe wurde der Zeitmesser gestartet und die Zeit für die Gerinnungsbildung gemessen.

2. Aktivierte partielle Thromboplastinzeit (aPTT)

a) Prinzip

[0052] Die aPTT wird als eine Screening-Untersuchung für Koagulationsstörungen des inneren Koagulationspfades verwendet.

   Das Verfahren ist empfindlich für Störungen in den Koagulationsfaktoren VIII und IX und der Kontaktfaktoren. Die aPTT wird aufgrund des Mangels an den Faktoren oder aufgrund der Anwesenheit der Inhibitoren (zum Beispiel Lupus-Koagulationshemmer, Heparin) verlängert. Die Inkubation mit Plasma mit der optimalen Menge an Phospholipiden und ein Kontaktaktivator führt zu einer Aktivierung der Faktoren des inneren Koagulationspfades. Die Zugabe von Calciumionen löst den Koagulationsvorgang aus. Die Zeit der Fibringerinnungsbildung wird gemessen.

b) Reagenzien

[0053] Phospholipide mit einem Aktivator (Pathrombin SL, Dade/Behring): Siliciumdioxidpartikel, pflanzliche Phospholipide, Natriumchlorid (2,4 g/l), HEPES (14,3 g/l), pH 7,6 und Natriumazid (< 1 g/l).

   Vor der Verwendung mussten die Reagenzien Raumtemperatur haben und gut geschüttelt sein.
Calciumchloridlösung: 0,025 mol/l
Normales gepooltes Plasma: Das gleiche wie für die Thrombinzeit.
Inhibitoren: Die gleichen wie für die Thrombinzeit.

c) Verfahren

[0054] Es wurden 90 Microl Plasma und 10 Microl des Inhibitors in eine auf 37 deg. C vorgewärmte Küvette des Koagulometers (Fibrintime, Dade/Behring) pipettiert. Es wurde für 37 deg. C für 5 Minuten inkubiert. Es wurde 100 Microl Phospholipide mit einem Aktivator hinzugegeben. Es wurde bei 37 deg. C für 2 Minuten inkubiert. Es wurden 100 Microl Calciumchlorid bei 37 deg. C zugegeben. Nach der Zugabe von Calciumchlorid wurde die Zeit für die Gerinnungsbildung gemessen.

3.

   Prothrombinzeit (PT)

a) Prinzip

[0055] Die Prothrombinzeit ist eine schnelle, empfindliche Screening-Untersuchung zur Bestimmung von Koagulationsstörungen des inneren Pfades (Faktoren n, V, VII und X). Aufgrund der hohen Sensitivität dieser Koagulationsfaktoren ist diese Untersuchung gut geeignet zur Überwachung einer oralen Koagulationshemmer-Therapie, zur Diagnose genetischer und erworbener Mängel von Koagulationsfaktoren und zur Überprüfung der Leber auf ihre Syntheseleistungen. Die Prothrombinzeit wird aufgrund des Koagulationsfaktorenmangels oder aufgrund der Anwesenheit von Inhibitoren verlängert.

   Für das Verfahren werden optimale Mengen von Thromboplastin und Calcium zu Plasma hinzugegeben und die Zeit für die Gerinnungsbildung gemessen.

b) Reagenzien

[0056] Thromboplastin (Thromborel S, Dade/Beehring): Humanes plazentales Thromboplastin mit Calciumchlorid und Stabilisationsmitteln; gelöst in 4 ml destilliertem Wasser. Vor der Verwendung wurde das Reagenz auf 37 deg. C für wenigstens 30 Minuten aufgewärmt. Normales gepooltes Plasma: Das gleiche wie für die Thrombinzeit. Inhibitoren: Die gleichen wie für die Thrombinzeit.

c) Verfahren

[0057] Es wird 90 Microl Plasma und 10 Microl des Inhibitors in eine auf 37 deg. C vorgewärmte Küvette des Koagulometers (Fibrintime, Dade/Behring) pipettiert. Es wird für 37 deg. C für 5 Minuten inkubiert. Es werden 200 Microl Thromboplastin, vorgewärmt auf 37 deg. C, hinzugegeben.

   Nach der Zugabe des Thromboplastins wird die Zeit für die Gerinnungsbildung gemessen.

[0058] Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele erläutert, jedoch keineswegs begrenzt.

Beispiel 1:

[0059] N-{2-[2-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(4-cyanobenzyl)hydrazino]-2-oxoethyl}-2-naphthalinsulfonamid

[0060] 1.00 g (3,77 mmol) 2-[(2-Naphthylsulfonyl)amino]essigsäure wurde in 20 ml Dichlormethan; gelöst, und während des Rührens wurden 420 mg (3,87 mmol) Ethylchlorformiat und 526 mg (4,00 mmol) N-Ethyl-N,N-diisopropylamin hinzugeben. Die Reaktion wurde bei Raumtemperatur für 1 Stunde gerührt, gefolgt durch die Zugabe von pulverisiertem 2-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(4-cyanobenzyl)hydrazinchlorid (1,00 g; 3,24 mmol). Nach der Zugabe wurde die Mischung bei Raumtemperatur für 3 Tage gerührt.

   Das Lösungsmittel wurde auf einem Rotationsverdampfer entfernt, der Rückstand in 50 ml Ethylacetat gelöst und dann mit 1M HCl, 1M NaOH und destillierten Wasser gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wurde im Vakuum verdampft. Das Rohprodukt wurde aus Ethanol umkristallisiert.

[0061] Ausbeute: 1,34 g (79%)
Schmelzpunkt: 149-151 deg.

   C
IR(KBr, cm<-1>): 3410, 3253, 2919, 2232, 1708,1613,1440,1343,1156, 659
<1>H-NMR (DMSO-d6): delta  (ppm) 1,46 (m, 8H, Ch2-Azepin 3 ¾, 4 ¾, 5 ¾, 6 ¾); 1,65 (m, 4H, CH2-Azepin2 ¾, 7 ¾); 3,33 (m, 2H, CO-CH2-NH); 4,09 (m, 1H, NHCO); 4,47 (s, 2H, Ar-CH2), 7,58 und 7,79 (2d, 2H jedes, J2, 6=8,27, Ar-H2, 3, 5, 6); 7,69-8,47 (m, 7H, Ar-H (Naphthalin)); 10,29 (s, 1H NHSO2)
Molekülmasse: berechnet: 519 (C27H29N5O4S); gefunden: 520 (MH<+>).

Beispiel 2:

[0062] 4-[(1-(1-Azepanylcarbonyl)-2-{2-[(1-naphtylsufonyl)amino]acetyl}hydrazino)methyl]-N ¾-hydroxybenzolcarboxamid

[0063] N-{2-[2-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(4-cyanobenzyl)hydrazino)-2-oxoethyl}-2-naphthalinsulfonamid (400 mg, 0,77 mmol) wurde in wasserfreiem Ethanol gelöst und Hydroxylamin (28,0 mg, 0,85 mmol) wurde hinzugegeben.

   Die Reaktionsmischung wurde zum Siedepunkt 12 Stunden erwärmt.

[0064] Das Lösungsmittel wurde auf einem Rotationsverdampfer entfernt und das Produkt mit Ether gewaschen.

[0065] Ausbeute: 386 mg (87%)
Schmelzpunkt: 104-108 deg. C
IR (KBr, cm<-1>): 3359, 2624, 1782, 1640, 1422, 1345, 1157, 1075, 750, 661
<1>H-NMR (CDCI3):delta  (ppm) 1,49-1,89 (m, 8H, CH2-Azepin3 ¾, 4 ¾, 5 ¾, 6 ¾); 2,07 (m, 4H, CH2-Azepin2 ¾, 7); 3,48 (m, 2H, CO-CH2-NH); 4,18 (s, 1H, NHCO); 4,68 (m, 2H, Ar- CH2), 4,90 (s, 1H, =N-OH); 7,42 und 7,61 (2d, 2H jedes, J 2,6 =8,17, J 3,5=8,15, Ar-H2, 3, 5, 6); 7,64-8,34 (m, 7H, Ar-H (Naphtalen)); 8,42 (s, 2H, NH2-Amidoxim); 10,35 (s, 1H NHSO2)
Molekülmasse:

   berechnet 552 (C27H32N6O5S), gefunden 553 (MH<+>).

Beispiel 3:

[0066] Amino{4-[(1-(1-azepanylcarbonyl)-2-{2-[(1-naphthylsulfonyl)amino]acetyl}hydrazino)methyl]phenyl}-methanaminhydrochlorid

[0067] N-{2-[2-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(4-cyanobenzyl)hydrazino]-2-oxoethyl}-2-naphtalinsulfanamid (520 mg, 1,00 mmol) wurde in 25 ml wasserfreiem Ethanol gelöst, und gasförmiges HCl wurde für 20 Minuten eingesprudelt. Nach Abschluss des Einsprudelns, wurde die Lösung bei Raumtemperatur 4 Stunden gerührt, gefolgt durch die Zugabe von Ammoniumacetat (85,0 mg, 1,10 mmol). Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur für 2 Tage gelassen. Das gasförmige HCl wurde abermals für 20 Minuten eingesprudelt. Nach einer Stunde wurde das gebildete Ammoniumchlorid abfiltriert und das Ethanol auf einem Rotationsverdampfer verdampft.

   Das Produkt wurde in Ether gelöst und durch Saugen abfiltriert.

[0068] Ausbeute: 481 mg (84%)
IR (KBr, cm<-1>): 2969, 2758, 1783, 1669, 1344, 1158, 1076, 749, 660, <1>H-NMR (DMSO-d6):delta  (ppm) 1,57-1,76 (m, 8H, CH2-Azepin3 ¾, 4 ¾, 5 ¾, 6 ¾); 3,03 (m, 4H, CH2-Azepin2 ¾, 7 ¾); 3,37 (m, 2H, CO-CH2-NH); 4,31 (m, 1H, NHCO): 4,74 (s, 2H, Ar-CH2), 7,62 und 7,90 (2d, 2H jedes, J2, 6=8,14, J3, 5=8,19, Ar-H2, 3, 5, 6); 7,35-8,49 (m, 7H, Ar-H (Naphthalin)); 9,30 (s, 1H NHSO2); 9,42 (2s, 2H, Amidin)
Molekülmasse: berechnet: 537 (C27H33N6O4S); gefunden: 538 (MH<+>).

Beispiel 4:

[0069] Ethyl 2-[2-(1-azepanylcarbonyl)-2-(4-cyanobenzyl)hydrazino]-1-benzyl-2-oxoethylcarbamat 1,10 g (4,64 mmol) N-(Ethoxycarbonyl)phenylalanin wurde in Dichlormethan (25 ml) gelöst, und 0,50 ml (5,18 mmol) Ethylchlorformiat wurde tropfenweise hinzugegeben.

   Die Mischung wurde für 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, gefolgt durch die Zugabe von DIEA (2 ml) und 1,35 g (4,49 mmol) 2-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(4-cyanobenzyl)hydraziniumchlorid. Die Reaktionsmischung wurde über Nacht gerührt, dann wurde das Lösungsmittel im Vakuum verdampft und der Rückstand in Ethylacetat (50 ml) gelöst. Die Lösung wurde mit 2 X 25 ml 10%ige Citronensäure und 25 ml wässriger NaHCO3 extrahiert und mit Wasser und Saline gewaschen. Die organische Phase wurde über Na2SO4 getrocknet und das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt. Das Rohprodukt wurde ferner mit Säulenchromatographie (Dichlormethan/Methanol 20:1) gereinigt.

[0070] Ausbeute: 438 mg (22%), Schmelzpunkt: 133-137 deg.

   C
IR (KBr, cm<-1>): 3321, 2950, 2225, 1666, 1531, 1421, 1289, 1043, 757, 559 H-NMR (CDCI3):delta  (ppm) 1,21 (t, 3H, J=6,78 Hz, CH2CH3), 1,57 (m, 4H, CH2), 1,75 (m, 4H, CH2), 3,01 (m, 2H, Ar-CH2), 3,43 (t, 4H, J=5,80 Hz, CH2), 4,13 (t, 3H, J=6,73 Hz, CH2CH3), 4,41 (s, 2H, Ar-CH2), 4,53 (s, 1H, CH), 5,04 (s, 1H, NHCOOEt), 6,48 (s, 1H, N-NHCO), 7,29 (m, 5H, Ar-H), 7,51 (d, 2H, J=8,20 Hz, Ar-H<3, 5>), 7,66 (d, 2H, J=8,33 Hz, Ar-H<2, 6>)
Molekülmasse: berechnet: 491 (C27H33N5O4), gefunden: 492 (MH<+>).

Beispiel 5:

[0071] Ethyl 2-[2-{4-[Amino(imino)methyl]benzyl}-2-(1-azepanylcarbonyl)hydrazino)-1-benzyl-2-oxoethylcarbamat

[0072] Ethyl 2-(2-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(4-cyanobenzyl)hydrazino]-1-benzyl-2-oxoethylcarbamat wurde in reinem Alkohol (20 ml) suspendiert und der gasförmige Chlorwasserstoff wurde für eine halbe Stunde eingesprudelt.

   Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur für 4 Stunden gelassen, dann wurde das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether (2 X 20 ml) gewaschen und in reinem Ethanol gelöst. Die Lösung wurde mit gasförmigem Ammoniak für 10 Minuten behandelt und das Ethanol unter reduziertem Druck entfernt.

Beispiel 6:

[0073] [Amino(4-{[2-(2-ammonio-3-phenylpropanoyl)-1-(1-azepanylcarbonyl)hydrazino]methyl}phenyl)methylen]ammoniumdichlorid

[0074] Das Rohprodukt des vorherigen Stadiums wurde in 1M HCl (30 ml) gelöst und wurde für zwei Stunden refluxiert. Das Wasser wurde unter reduziertem Druck entfernt und der Rückstand mit Säulenchromatographie (Ethylacetat/Methanol 2:1) gereinigt.

[0075] Ausbeute: 222 mg (49%)
Schmelzpunkt: 221-223 deg.

   C
IR (KBr, cm<-1>): 3232, 2940, 2229, 1784, 1716, 1538, 1403, 1257, 1054, 959, 823, 752, 701
H-NMR (CDCl3):delta  (ppm) 1,24 (t, 3H, J=6,76 Hz, CH2CH3). 1,49 (m, 4H, CH2), 1,68 (m, 4H, CH2), 3,03 (m, 2H, Ar-CH2), 3,39 (t, 4H, J=5,97 Hz, CH2), 4,12 (t, 3H, J=6,72 Hz, CH2CH3), 4,43 (s, 2H, Ar-CH2), 4,62 (s, 1H, CH), 5,01 (s, 1H, NHCOOEt), 6,45 (s, 1H, N-NHCO), 7,26 (m, 5H, Ar-H), 7,53 (d, 2H, J=8,17 Hz, Ar-H<3, 5>), 7,68 (d, 2H, J=8,29 Hz, Ar-H<2, 6>), 9,29 (s, 4H, H2N-C=NH2<+>)
Molekülmasse: berechnet: 509 (C24H34N6O2CI2);

   gefunden 437 ((M-2HCl)H<+>).

Beispiel 7:

[0076] N ¾-(1-Azepanylcarbonyl)-N ¾-(4-cyanobenzyl)-1-(2-naphtylsulfonyl)-2-pyrrolidincarbohydrazid

[0077] 2,20 g (7,21 mmol) 1-(2-Naphtylsulfonyl)prolin wurde in 35 ml Dichlormethan gelöst, und während des Rührens wurden 815 mg (7,50 mmol) Ethylchlorformiat und 1,20 g (9,30 mmol) N-Ethyl-N,N-diisopropylamin hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur für eine Stunde gerührt, gefolgt durch die Zugabe von pulverisiertem 2-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(4-cyanobenzyl)hydrazinchlorid (2,00 g, 6,48 mmol). Nach der Zugabe wurde sie weiter für 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde auf einem Rotationsverdampfer entfernt und der Rückstand in 50 ml Ethylacetat gelöst, gefolgt durch Waschen mit 10%iger Citronensäure, 5%iger NaHCO3-Lösung und destilliertem Wasser.

   Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum verdampft. Das Rohprodukt wurde aus Acetone repräzipitiert.

[0078] Ausbeute: 0,82 g (23%)
Schmelzpunkt: 158-159 deg. C
IR (KBr, cm<-1>): 3461, 2234, 1708, 1614, 1527, 1428, 1342, 1156, 1082, 1015, 759, 662, 548
H-NMR (DMSO-d6):delta  (ppm) 1,47 (s, 4H, CH2,) 1,64 (s, 4H, CH2), 1,75 (m, 4H, CH2), 3,24 (m, 4H, CH2), 3,24 (m, 2H, CH2), 4,12 (m, 1H, CH), 4,47 (s, 2H, Ar-CH2), 7,57 (d, 2H, J=8,29 Hz, Ar-H<3, 5>), 7,71 (dqu, 2H, J1=7,16 Hz, J2=1,50 Hz, Ar-H), 7,80 (d, 2H, J=8,29 Hz, Ar-H<2, 6>), 7,84 (dd, 1H, J1=8,67 Hz, J2=1,89 Hz, Ar-H), 8,07 (d, 1H, J=7,91 Hz, Ar-H), 8,15 (m, 2H, Ar-H), 8,47 (s, 1H, Ar-H), 10,29 8s, 1H, NH)
Molekülmasse: berechnet: 559 (C30H33N5O4S); gefunden:

   560 (MH<+>).

Beispiel 8:

[0079] Amino{4[(1-(1-azepanylcarbonyl)-2-{[1-(2-naphthylsulfonyl)-2-pirrolidinyl]carbonyl{hydrazino)methyl]phenyl} methanaminhydrochlorid

[0080] N ¾-(1-Azepanylcarbonyl-N-(4-cyanobenzyl)-1-(2-naphtylsulfonyl)-2-pirrolidincarbohydrazid (754 mg, 1,35 mmol) wurde in 25 ml wasserfreiem Ethanol gelöst, und gasförmiges HCl wurde für 20 Minuten eingesprudelt. Nach Abschluss des Einsprudelns wurde die Lösung bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt, gefolgt durch die Zugabe von Ammoniumacetat (115,0 mg, 1,50 mmol). Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur für 2 Tage altern gelassen. Das gasförmige HCl wurde für 20 Minuten wieder eingesprudelt. Nach 1 Stunde wurde das gebildete Ammoniumchlorid filtriert und Ethanol auf einem Rotationsverdampfer verdampft.

   Das Produkt wurde in Äther gelöst und durch Saugen abfiltriert.

[0081] Ausbeute: 320 mg (40%)
Schmelzpunkt: 123-127 deg. C
IR (KBr, cm<-1>): 3034, 1781, 1681, 1602, 1402, 1347, 1158, 1076,1010, 823, 748, 660
<1>H-NMR (DMSO-d6): delta  (ppm) 1,57 (m, 4H, CH2-Azepin4 ¾,5 ¾); 1,76 (m, CH2-Azepin3 ¾,6 ¾); 2,03 (m, 4H, CH2-Prolin); 3,02 (m, 4H, CH2-Azepin2 ¾,7 ¾); 3,32 (m, 2H, CH2-Prolin); 3,63 (q, 1H, J=3,63 Hz, CH2-Prolin); 4,96 (s, 2H, Ar-CH2), 7,52 (d, 2H, J=8,18 Hz, Ar-H<2, 5>), 7,68 (dqu, 2H, J1=7,14 Hz, J2= 1,67 Hz, Ar-H), 7,81 (d, 2H, J=8,18 Hz, Ar-H<2, 6>), 7,93 (dd, 1H, J1=8,59 HZ, J2=2,11 Hz, Ar-H), 8,12 (m, 3H, Ar-H), 8,49 (s, 1H, Ar-H), 9,41 (s, 4H, NH2-C=NH2<+>) 9,59 (s, 1H, NH) Molekülmasse: berechnet: 599 (C30H37N5O4SCI); gefunden:

   577((M-HCl)H<+>).

Beispiel 9:

[0082] N ¾-(1-Azepanylcarbonyl)-N ¾-(4-cyanobenzyl)-2-(2-naphthyloxy)acetohydrazid
750 mg (3,71 mmol) von 2-(2-Naphthyloxyessigsäure und 1,00 g (3,24 mmol) von 2-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(4-cyanobenzyl)hydrazinchlorid wurden in 15 ml Dimethylformamid gelöst. Während des Rührens wurden 500 mg (3,70 mmol) von 1-Hydroxybenzotriazol und 748 mg (3,90 mmol) EDC hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur für eine Stunde gerührt.
Das Lösungsmittels wurde auf einem Rotationsverdampfer entfernt und der Rückstand in 50 ml Ethylacetat gelöst, gefolgt durch Waschen mit 10%iger Citronensäure, 5%iger NaHCO3-Lösung und destilliertem Wasser. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wurde im Vakuum verdampft.

   Das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie gereinigt (mobile Phase: Dichlormethan: Methanol 9:1).

[0083] Ausbeute: 963 mg (63%)
Schmelzpunkt: 142 bis 144 deg. C
IR (KBr, cm<-1>) 3228, 2925, 2854, 2227, 1630, 1509, 1426, 1216, 1120, 960, 838, 748, 547_H-NMR (CDCl3): delta  (ppm) 1,55 (m, 4H, CH2-Azepin4 ¾, 5 ¾; 1,75 (m, 4H, CH2-Azepin3 ¾, 6 ¾); 3,43 (t, 4H, J=5,86 Hz, CH2-Azepin2 ¾, 7 ¾); 4,54 (s, 2H, CH2); 4,68 (s, 2H, Ar-CH2); 7,06 (s, 1H, NH); 7,34 (d, 2H, J=8,40 Hz, Ar-H<3, 5>); 7,39-7,58 (m, 3H, Ar-H); 7,47 (d, 2H, J=8,40 Hz, Ar-H<2, 6>); 7,68-7,84 (m, 3H, Ar-H); 8,14 (s, 1H, Ar-H)
Molekülmasse: berechnet: 456 (C27H28N4O3); gefunden:

   457 (MH<+>).

Beispiel 10:

[0084] tert-Buty 2-{4-[(Acetylamino)methyl]benzyl}-2-[(4-methyl-1-piperidinyl)carbonyl]-1-hydrazinecarboxylat
1,26 g (4,39 mmol) Bis-trichlormethylcarbonat wurden in 20 ml Dichlormethan gelöst und die Lösung wurde mit Argon entgast. 2,50 g (8,53 mmol) tert-Butyl 2-{4-[(Acetylamino)methyl]benzyl}-1-hydrazinecarboxylat wurden in 30 ml Dichlormethan gelöst, 1,65 g (12,79 mmol) N-Diisopropyl-N-ethylamin wurde hinzugegeben und die Mischung wurde tropfenweise zu der Lösung von Bis-trichlormethylcarbonat hinzugegeben. Während der tropfenweisen Zugabe wurde die Reaktionsmischung in einem Eiswasserbad gekühlt. Die Mischung wurde für eine weitere halbe Stunde bei Raumtemperatur gerührt. 2,04 ml (25,60 mmol) 4-Methylpiperidin wurden hinzugegeben und für eine weitere Stunde bei Raumtemperatur gerührt.

   Die Reaktionsmischung wurde dann mit 4 X 25 ml einer 10%igen Citronensäurelösung und 30 ml gesättigter NaHCO3-Lösung extrahiert, gefolgt durch Waschen mit 30 ml gereinigtem Wasser und 20 ml gesättigter Saline. Die organische Phase wurde über Na2SO4 getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum verdampft und der Rückstand in 10 ml Diethylether gelöst. Es wurde ein weisses Präzipitat gebildet und durch Saugen abfiltriert.

[0085] Ausbeute: 2,10 g (59%)
Schmelzpunkt: 124-126 deg.

   C
IR (KBr, cm<-1>) 3282, 2923, 2858, 1727, 1638, 1443, 1253, 1158, 1020, 978, 757, 611
H-NMR (CDCI3): delta  (ppm) 0,95 (d, 2H, J=6,40 Hz, pip-CH3; 1,10-1,25 (m, 2H, pip-CH2); 1,44 (s, 9H, C(CH3)3); 1,60-1,73 (m, 3H, pip-CH2, pip-CH); 2,03 (s, 3H, CO-CH3), 2,82 (m, 2H, pip-CH2); 3,92 (d, 2H, J=13,19 Hz, pip-CH2); 4,42 (d, 4H, J=5,65 Hz, CH2-Ar-CH2); 5,89 (s, 1H, NH-CO); 6,27 (s, 1H, NH-COO); 7,27 (s, 4H, Ar-H)
Molekülmasse: berechnet: 418 (C22H34N4O4); gefunden: 419 (MH<+>)

Beispiel 11:

[0086] 2-{4-[(Acetylamino)methyl]benzyl}-2-[(4-methyl-1-piperidinyl)carbonyl]hydraziniumchlorid
2,65 g (6,33 mmol) tert-Butyl 2-{4-[(acetylamino)methyl]benzyl}-2-[(4-methyl-1-piperidinyl)carbonyl]-1-hydrazincarboxylat wurden in Essigsäure (20 ml) gelöst und gasförmiges HCl wurde für eine halbe Stunde eingesprudelt.

   Die Säure wurde im Vakuum verdampft und Diethylether zu dem Rückstand gegeben. Die Kolbenwand wurde mit einem Glasstab gerieben, bis ein weisses Pulver gebildet wurde; derweil wurde ein Waschen mit Diethylether zweimal wiederholt.

[0087] Ausbeute: 1,98g (88%)
Schmelzpunkt: 196-198 deg. C
IR (KBr, cm<-1>) 3419, 3256, 2926, 2685, 1689, 1552, 1434, 1235, 972, 728
H-NMR (CDC13): delta  (ppm) 0,97 (d, 2H, J=6,03 Hz, pip-CH3); 1,19 (m, 2H, pip-CH2); 1,52-1,70 (m, 3H, pip-CH2, pip-CH); 2,07 (s, 3H, CO-CH3); 2,91 (t, 2H, J=12,43 HZ, pip-CH2); 3,96 (d, 2H, J=12,43 Hz, pip-CH2; 4,31 (d, 2H, J=4,15 Hz, Ar-CH2); 4,61 (s, 2H, Ar-CH2); 7,26 (d, 2H, J=7,91 Hz, Ar-H); 7,32 (d, 2H, J=7,92 HZ, Ar-H); 7,99 (s, 1H, NH-CO)
Molekülmasse: berechnet: 354,5 (C17H27N4O2CI); gefunden:

   319 ((M-HCl)H<+>, 100).

Beispiel 12:

[0088] N-(4-{[1-[(4-Methyl-1-piperidinyl)carbonyl]-2-(1-naphthylsulfonyl)hydrazino]methyl}benzyl)acetamid

[0089] 1,98 g (5,59 mmol) 2-{4-[(Acetylamino)methyl]benzyl}-2-[(4-methyl-1-piperidinyl)carbonyl]hydrazinchlorid und 1,39 g (6,13 mmol) Naphthalin-2-sulfonylchlorid wurden in Dichlormethan (25 ml) gelöst, 2,16 g (16,7 mmol) N-Diisopropyl-N-ethylamin wurden hinzugegeben und bei Raumtemperatur für 3 Tage gerührt. Die Lösung wurde mit 4 X 25 ml 10%iger Citronensäure und 30 ml gesättigter NaHCO3-Lösung extrahiert. Die organische Phase wurde mit 30 ml gereinigtem Wasser und 30 ml Saline gewaschen und über Na2SO4 getrocknet. Das Dichlormethan wurde im Vakuum verdampft und ein leicht braun-gelber schaumiger Feststoff wurde gebildet.

[0090] Ausbeute: 1,89 g (67%) Schmelzpunkt: 80-83 deg.

   C
JR (KBr, cm<-1>) 3285, 2925, 1656, 1546, 1430, 1338, 1165, 970, 750, 554
H-NMR (CDCI3): delta  (ppm) 0,52 (d, 3H, J=6,03 Hz, pip-CH3); 1,28 (m, 2H, pip-CH2); 1,64 (m, 3H, pip-CH2, pip-CH); 2,05 (s, 3H, CO-CH3); 2,32-2,71 (m, 2H, pip-CH2): 3,72 (m, 2H, pip-CH2); 4,32 (m, 2H, Ar-CH2); 4,41 (d, 2H, J=5,66 Hz, Ar-CH2); 5,72 (s, 1H, NH-CO); 7,16 (d, 2H, J=8,29 HZ, Ar-H); 7,22 (d, 2H, J=7,91 HZ, Ar-H); 7,46 (s, 1H, naphth-H); 7,62 (m, 2H, 2xnaphth-H); 7,81 (dd, 1H, J1=8,67 HZ, J2=1,88 HZ, naphth-H); 7,94 (q, 3H, J=7,66 Hz, 3xnaphth-H); 8,45 (s, 1H, NH-SO2)
Molekülmasse: berechnet: 508 (C27H32N4O4S); gefunden:

   509 (MH<+>).

Beispiel 13:

[0091] (4-{[1-[4-Methyl-1-piperidinyl)carbonyl]-2-(1-naphthylsufonyl)hydrazino]methyl}phenyl)methanaminehydrochlorid

[0092] 1,89 g (3,72 mmol) N-(4-{ [1-[(4-Methyl-1-piperidinyl)carbonyl]-2-(1-naphthylsulfonyl) hydrazino] methyl} benzyl)acetamid wurde in 30 ml vorgewärmtem Isopropylalkohol (60 deg. C) gelöst. 30 ml 4M HCl wurde hinzugegeben und die Mischung für 5 Stunden refluxiert. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum verdampft. Das Produkt wurde durch Säulenchromatographie gereinigt; stationäre Phase: Silicagel, mobile Phase: Dichlormethan:Methanol (9:1).

[0093] Ausbeute: 550 mg (29%)
Schmelzpunkt: 156-160 deg.

   C
IR (KBr, cm<-1>) 3285, 2925, 1656,1546, 1430, 1338, 1165, 970, 750, 554
H-NMR (CDCI3): delta  (ppm) 0,17 (m, 2H, pip-CH2), 0,44 (d, 3H, J=6,03 Hz, pip-C3), 1,22 (d, 2H, J=10,54 HZ, pip-CH2, pip-CH2), 2,27-2,74 (m, 2H, pip-CH2), 3,53 (s, 2H, pip-CH2 3,97 (s, 2H, Ar-CH2), 4,32 (m, 2H, Ar-CH2), 7,22 (d, 2H, J=8,29 HZ, Ar-H), 7,42 (d, 2H, J=8,29 HZ, Ar-H), 7,64-7,75 (m, 3H, 3xnaphth-H), 7,77 (dd, 1H, J1=8,67 Hz, J2=l,88 HZ, naphth-H), 7,81-8,00 (m, 1H, naphth-H), 8,02-8,18 (m, 2H, 2xnaphth-H), 8,46 (d, 1H, J=1,88 HZ, NH-SO2)
Molekülmasse: berechnet: 502,5 (C25H31N4O3SCI); gefunden:

   467 ((M-HCl)H<+>).

Beispiel 14:

[0094] tert-Butyl 2-{4-[(acetylamino)methyl]benzyl}-2-(4-morpholinylcarbonyl)-1-hydrazincarboxylat

[0095] 1,26 g (4,39 mmol) Bis-trichlormethylcarbonat wurden in 20 ml Dichlormethan gelöst und die Lösung mit Argon entgast. 2,50 g (8,53 mmol) terr-Butyl 2-{4-[(acetylamino)methyl]benzyl}-1-hydrazincarboxylat wurde in 30 ml Dichlormethan gelöst, 1,65 g (12,79 mmol) N-Diisopropyl-N-ethylamin wurde hinzugegeben und die Mischung wurde tropfenweise zu der Bis-trichlormethylcarbonat-Lösung hinzugegeben. Während des tropfenweisen Zugebens wurde die Mischung in einem Eiswasserbad gekühlt. Die Mischung wurde für eine zusätzliche halbe Stunde bei Raumtemperatur gerührt. 2,23 ml (25,60 mmol) Morpholin wurde hinzugegeben und für eine weitere Stunde bei Raumtemperatur gerührt.

   Die Reaktionsmischung wurde dann mit 4 X 25 ml 10%iger Citronensäurelösung, 30 ml gesättigter NaHCO3-Lösung extrahiert, gefolgt durch Waschen mit 30 ml gereinigtem Wasser und 20 ml gesättigter Saline. Die organische Phase wurde über Na2SO4 getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum verdampft und der Rückstand in 10 ml Diethylether gelöst. Ein weisses Präzipitat wurde gebildet, welches durch Saugen abfiltriert wurde.

[0096] Ausbeute: 1,81g (52%)
Schmelzpunkt: 125-128 deg.

   C
IR (KBr, cm<-1>) 3308, 2980, 2857, 1728, 1641, 1430, 1289, 1114, 1025, 873, 746, 604
H-NMR (CDC13): delta  (ppm) 1,46 (s, 9H, C(CH)3)3, 2,03 (s, 3H, CO-CH3), 3,44 (t, 4H, J=4,71 Hz, 2xMorph-CH2), 3,68(t, 4H, J=4,71 Hz, 2xMorph-CH2), 4,43 (d, 2H, J=5,65 Hz, Ar-CH2), 4,49 (s, 2H, Ar-CH2 5,84 (d, 1H, NH-CO), 6,27 (s, 1H, NH-COO), 7,27 (s, 4H, Ar-H)
Molekülmasse: berechnet: 406 (C20H30N4O5); gefunden: 407 (MH<+>).

Beispiel 15:

[0097] 2-{[Acetylamino)methyl]benzyl}-2-(4-morpholinylcarbonyl)hydraziniumchlorid

[0098] 1,81 g (4,46 mmol) tert-Butyl 2-{4-[(acetylamino)methyl]benzyl}-2-(4-morpholinylcarbonyl)-1-hydrazincarbonxylat wurde in Essigsäure (20 ml) gelöst und gasförmiges HCl würde für eine halbe Stunde eingesprudelt. Die Säure wurde im Vakuum verdampft und der Rückstand in Diethylether gelöst.

   Die Kolbenwand wurde mit einem Glasstab gerieben, bis ein weisses Pulver gebildet wurde; derweil wurde das Waschen mit Diethylether zweimal wiederholt.

[0099] Ausbeute: 0,92 g (60%)
Schmelzpunkt: 209-211 deg. C
IR(KBr, cm<-1>) 3427, 1685,1560,1432, 1274, 1112, 1022, 892, 571
H-NMR (CDCI3): delta  (ppm) 1,88 (s, 3H, CO-CH3), 3,46 (d, 4H, J=4,90 Hz, 2xMorph-CH2), 3,61 (d, 4H, J=4,90 Hz, 2xMorph-CH2), 4,25(d, 2H, J=6,03 Hz, Ar-CH2), 4,50(s, 2H, Ar-CH2), 7,28 (s, 4H, Ar-H), 8,43 (s, NH-CO)
Molekülmasse: berechnet: 342,5 (C15H23N4O3Cl); gefunden:

   307 ((M-HCl)H<+>, 100).

Beispiel 16:

[0100] N-(4-{[1-(4-Morpholinylcarbonyl)-2-(1-naphthylsulfonyl)hydrazino]methyl}benzyl)acetamid

[0101] 0,92 g (2,69 mmol) 2-{4-[(Acetylamino)methyl]benzyl}-2-(4-morpholinylcarbonyl)hydrazinchlorid und 0,67 g (2,95 mmol) Naphthalin-2-sulfonylchlorid wurden in Dichlormethan (25 ml) gelöst, 1,04 g (8,06 mmol) Diisopropylethylamin wurden hinzugegeben und bei Raumtemperatur für 3 Tage gerührt. Die Mischung wurde mit 4 X 25 ml 10%iger Citronensäure und 30 ml gesättigter NaHC3-Lösung extrahiert. Die organische Phase wurde mit 30 ml gereinigtem Wasser und 30 ml gesättigter Saline gewaschen und über Na2SO4 getrocknet. Das Dichlormethan wurde im Vakuum verdampft und ein blasser braun-gelber, schaumiger Feststoff wurde gebildet.

[0102] Ausbeute: 0,66 g (50%)
Schmelzpunkt: 84-88 deg.

   C
IR(KBr, cm<-1>) 3426, 2856,1655, 1420, 1340, 1274, 1166, 1114,1024, 752, 547
H-NMR (CDCl3): delta  (ppm) 2,05 (s, 3H, CH3), 3,14 (s, 4H, 2xMorph-CHz), 3,33-3,40 (m, 2H, Morph-CH2 3,58-3,81 (m, 2H, Morph-CH2 4,30 (m, 2H, Ar-CH2 4,41 (d, 2H, J=5,65 Hz, Ar-CH<2) 5,77 (s, 1H, NH-CO), 7,19 (m, 4H, Ar-H), 7,38 (s, 1H, naphth-H), 7,68 (m, 2H, 2xnaphth-H), 7,81 (dd, J1=8,67 Hz, J2=1,86 Hz, naphth-H), 7,95 (m, 3H, 3xnaphth-H), 8,44 (s, NH-SO2)
Molekülmasse: berechnet: 496 (C25H28N4O5S); gefunden: 497 (MH<+>).

Beispiel 17:

[0103] (4-{[1-(4-Morpholinylcarbonyl)-2-(1-Naphthylsulfonyl)hydrazino]methyl}phenyl)methanaminhydrochlorid
0,66 g (1,33 mmol) N-(4-{[1-(4-Morpholinylcarbonyl)-2-(1-Naphthylsulfonyl)hydrazino]methyl}benzyl)acetamid wurden in 30 ml vorgewärmtem Isopropylalkohol (60 deg. C) gelöst. 30 ml 4M HCl wurde hinzugegeben und die Mischung für 5 Stunden refluxiert.

   Das Lösungsmittel wurde im Vakuum verdampft. Das Produkt wurde durch Säulenchromatographie gereinigt; stationäre Phase: Silicagel, mobile Phase: Dichlormethan: Methanol (9:1).

[0104] Ausbeute: 340 mg (52%)
Schmelzpunkt: 124-126 deg. C
IR(KBr, cm<-1>) 3411, 16 662, 1504, 1459, 1419, 1335, 12 272, 1211, 1166, 1113, 1067, 1023, 830, 754, 688, 544
H-NMR (CDCI3): delta  (ppm) 2,96 (m, 2H, Morph-C2 3,11 (m, 6H, 3xMorph-CH2 3,97 (d, 2H, J=5,66 Hz, Ar-CH2 4,17-4,52 (m, 2H, Ar-C2 7,22 (d, 2H, J=7,53 Hz, Ar-H), 7,41 (d, 2H, J=7,92 Hz, Ar-H), 7,82-7,66 (m, 3H, 3xnaphth-H), 7,99-7,84 (m, 1H, naphth-H), 8,03-8,21 (m, 3H, 3xnaphth-H), 8,47 (s, 1H, NH-SO2)
Molekülmasse: berechnet: 490,5 (C25H31N4O3SCI); gefunden:

   455 ((M-HCl)H<+>).

Beispiel 18:

[0105] tert-Butyl 2-{4-[acetylamino)methyl]benzyl}-2-{[cyclopentyl(methyl)amino]carbonyl}-1-hydrazincarboxylat

[0106] 1,26 g (4,39 mmol) Bis-trichlormethylcarbonat wurden in 20 ml Dichlormethan gelöst und auf 0 deg. C gekühlt. Die Lösung aus 2,00 g (6,83 mmol) tert-Butyl 2-{4-[(acetylamino)methyl]benzyl}-1-hydrazincarboxylat und 1,65 g (12,79 mmol) N-Diisopropyl-N-ethylamin in 30 ml Dichlormethan wurde tropfenweise hinzugegeben und die Temperatur langsam gesteigert. Die resultierende Mischung wurde bei Raumtemperatur für eine halbe Stunde gerührt, gefolgt durch die Zugabe von 2,14 g (21,60 mmol) N-Cyclopentyl-N-methylamin. Nach einer weiteren Stunde Rühren wurde das Lösungsmittel im Vakuum verdampft und der Rückstand in 50 ml Ethylacetat gelöst.

   Die Lösung wurde mit 4 X 25 ml 10%-iger, wässriger Lösung von Citronensäure und 30 ml wässrigem Natriumhydrogencarbonat extrahiert. Die organische Phase wurde mit Wasser und Saline gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand in 10 ml Diethylether gelöst. Nach 2 Tagen wurde das Präzipitat gesammelt und ferner durch Säulenchromatographie (Dichlormethan/Methanol 20:1) gereinigt.

[0107] Ausbeute: 1,31 g (46%)
Schmelzpunkt: 124-127 deg.

   C
IR(KBr, cm<-1>)3274, 2974, 1726, 1640, 1550, 1369, 1285, 1160, 1067, 794
H-NMR (CDCl3): delta  (ppm) 1,44 (s, 9H, (CH3)3), 1,46-1,85 (m, 8H, CH2), 2,03 (s, 3H, CO-CH3), 2,32 (m, 1H, CH), 2,80 (s, 3H, N-CH3), 4,38 (m, 2H, Ar-CH2), 4,42 (d, 2H, J=5,64 Hz, Ar-CH2), 5,93 (s, 1H, NH-COO), 6,54 (s, 1H, NH-CO), 7,28 (m, Ar-H)
Molekülmasse: berechnet: 418 (C22H34N4O4); gefunden: 419 ((MH<+>).

Beispiel 19:

[0108] 2-{4-[(Acetylamino)methyl]benzyl} -2-{[cyclopentyl(methyl) amino]carbonyl} hydraziniumchlorid

[0109] 1,20 g (2,87 mmol) tert-Butyl 2-{4-[(acetylamino)methyl]benzyl}-2-{[cyclopentyl(methyl)ammo] carbonyl}hydrazincarboxylat wurden in 20 ml Essigsäure gelöst, und gasförmiger Chlorwasserstoff wurde für 30 Minuten eingesprudelt Die Säure wurde im Vakuum verdampft, und Diethylether wurde zu dem Rückstand hinzugegeben.

   Nach kräftigem Rühren und zahlreichen Waschungen mit Diethylether wurde ein weisser Feststoff erhalten.

[0110] Ausbeute: 765 mg (77%)
Schmelzpunkt: 165-169 deg. C
IR (KBr, cm<-1>) 3254, 2987, 1782, 1653, 1548,1425, 1234, 1022, 798, 744, 602, H-NMR (CDCI3): delta  (ppm) 1,51-1,89 (m, 8H, CH3), 2,02 (s, 3H, CO-CH3), 2,49 (m, 1H, CH), 2,87 (s, 3H, N-CH3), 4,24 (m, 2H, Ar-CH2), 4,52 (s, 2H, Ar-CH2), 7,22 (m, Ar-H), 10,12 (s, 1H, NH-CO)
Molekülmasse: berechnet: 445 (C17H27N4O2CI); gefunden:

   319 ((M-HCl)H<+>.

Beispiel 20:

[0111] 1-{4-[(Acetylamino)methyl]benzyI}-N-cyclopentyl-N-methyl-2-(2-naphthylsulfonyl)-1-hydrazincarboxamid

[0112] 733 mg (2,07 mmol) 2-{4-[(Acetylamino)methyl]benzyl}-2-{[cyclopentyl(methyl)amino]carbonyl}hydrazinchlorid, 481 mg (2,12 mmol) Naphthalin-2-sulfonylchlorid und 843 mg (6,54 mmol) N-Diisopropyl-N-ethylamine wurden in Dichlormethan (25 ml) gelöst und bei Raumtemperatur für 3 Tage gerührt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand wurde in 30 ml Ethylacetat gelöst und mit 4 X 25 ml 10%iger Citronensäure und 30 ml wässrigem NaHCO3 extrahiert.

   Die organische Phase wurde ferner mit Wasser (30 ml) und Saline (30 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und das Lösungsmittel entfernt, um einen blassgelben Feststoff zu ergeben, welcher ferner durch Umkristallisation aus Ethanol gereinigt wurde.

[0113] Ausbeute: 211 mg (20%)
Schmelzpunkt: 91-93 deg.

   C
IR (KBr, cm<-1>) 3448, 2962, 1772, 1651, 1558, 1395, 1262, 1166, 1025, 859, 803, 669, 549
H-NMR (CDCI3): delta  (ppm) 1,27-1,73 (m, 8H, CH2), 2,06 (s, 3H, CO-CH3), 2,29 (m, 1H, CH), 2,60 (s, 3H, N-CH3), 4,32 (m, 2H, Ar-CH2), 4,44 (d, 2H, J=6,13 Hz, Ar-CH2) 7,15 (d, 2H, J=8,13 Hz, Ar-H<3, 5>), 7,21 (d, 2H, J=8,11 Hz, Ar-H<2, 6>), 7,42 (s, NHSO2), 7,67 (dqu, 2H, J1=7,51 Hz, J2=1,79 Hz, Ar-H), 7,79 (dd, 1H, J1=8,70 Hz, J2=1,76 Hz, Ar-H), 7,90 (s, 1H, NH-CO), 7,97 (m, 3H, Ar-H), 8,43 (s, 1H, Ar-H)
Molekülmasse: berechnet: 508 (C27H32N4O4S); gefunden: 509 (MH<+>).

Beispiel 21:

[0114] (4-{[1-{[Cyclopentyl(methyl)amino]carbonyl}-2-(2-naphthylsulfonyl)hydrazino]methyl}phenyl)methanaminium-chlorid

[0115] Die Lösung von 183 mg (0,36 mmol) 1-{4-[(Acetylamino)methyl]benzyl}-N-cyclopentyl-N-methyl-2-(2-naphthylsulfonyl)-1-hydrazincarboxamid in 30 ml Isopropanol bei 60 deg.

   C (30 ml) wurde mit 4M HCl (30 ml) behandelt und für 5 Stunden refluxiert. Die Lösungsmittel wurden im Vakuum entfernt und das Produkt durch Säulenchromatographie (Dichlormethan/Methanol 9:1) gereinigt.

[0116] Ausbeute: 81 mg (45%)
Schmelzpunkt: 170-173 deg. C
IR (KBr, cm<-1>) 3425, 3137, 2968, 1744, 1591, 1275, 1122, 973, 815, 637
H-NMR (CDCl3): delta  (ppm) 1,18-1,75 (m, 8H, CH2), 2,34 (m, 1H, CH), 2,57 (s, 3H, N-CH3), 4,22 (m, 2H, Ar-CH2), 4,43 (m, 2H, Ar-CH2), 7,18 (d, 2H, J=8,35 Hz, Ar-H<3, 5>), 7,24 (d, 2H, J=8,27 Hz, Ar-H<2, 6>), 7,37 (s, NHSO2), 7,64 (dqu, 2H, J1=8,29 Hz, J2=1,84 Hz, Ar-H), 7,82 (dd, 1H, J1=8,56 Hz, J2=1,72 Hz, Ar-H), 8,04 (m, 3H, Ar-H), 8,41 (s, 1H, Ar-H)
Molekülmasse: berechnet: 503 (C25H31N4O3SCl); gefunden:

   467 ((M-HCl)H<+>)

Beispiel 22:

[0117] N-(3-Cyanobenzyl)-N ¾-(2-naphthoyl)-1 -azepancarbohydrazid

[0118] 2-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(3-cyanobenzyl)hydraziniumchlorid (312 mg, 1,03 mmol), N-Diisopropyl-N-ethylamine (2 ml) und Benzoylchlorid (210 mg, 1,11 mmol) wurden in Dichlormethan (30 ml) gelöst. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur für 2 Tage gerührt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand wurde in 30 ml Ethylacetat gelöst und mit 4 X 25 ml 10%iger Citronensäure und 30 ml wässrigem NaHCO3 extrahiert. Die organische Phase wurde ferner mit Wasser (30 ml) und Saline (30 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und das Lösungsmittel wurde entfernt. Das Produkt wurde mit Diethylether gewaschen und ferner durch Umkristallisation aus Ethanol gereinigt.

[0119] Ausbeute: 378 mg (86%)
Schmelzpunkt: 139-141 deg.

   C
IR (KBr, cm<-1>) 3281, 2922, 2236, 1637,1524, 1289, 1210,1010, 912, 822, 759, 698, 595
H-NMR (CDCI3): delta  (ppm) 1,55 (m, 4H, Azep-CH2), 1,73 (m, 4H, Azep-CH2), 3,49 (t, 4H, J=5,84 Hz, Azep-CH2), 4,69 (s, 2H, Ar-CH2), 7,42 (t, 1H, J=7,89 Hz, Ar-H), 7,59 (m, 3H, Ar-H), 7,69 (d, 1H, J=7,91 Hz, Ar-H), 7,77 (dd. 1H, J1=8,29 Hz, J2=1,88 Hz, Ar-H), 7,81 (s, 1H, Ar-H), 7,89 (m, 3H, Ar-H), 8,24 (s, 1H, Ar-H), 8,47 (s, 1H, NH-CO)
Molekülmasse: berechnet 426 (C26H26N4O2); gefunden: 427 (MH<+>)

Beispiel 23:

[0120] Amino(3-{[1-(1-azepanylcarbonyl)-2-(2-naphthoyl)hydrazino]methyl}phenyl)methaniminiumchlorid

[0121] N-(3-Cyanobenzyl)-N ¾-(2-naphthoyl)-1-azepanecarbohydrazid (212 mg, 0,50 mmol) wurden in reinem Ethanol (20 ml) suspendiert und gasförmiger Chlorwasserstoff wurde für eine halbe Stunde eingesprudelt.

   Die Reaktionsmischung wurde für 4 Stunden bei Raumtemperatur gelassen, dann wurde das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether (2 X 20 ml) gewaschen und in reinem Ethanol gelöst. Die Lösung wurde mit gasförmigem Ammoniak für 10 Minuten behandelt, und das Ethanol wurde unter reduziertem Druck entfernt.

[0122] Ausbeute: 193 mg (81%)
Schmelzpunkt: 247-251 deg.

   C
TR (KBr, cm-1) 3410, 1773, 1652, 1559, 1394, 955, 753
H-NMR (CDCl3): delta  (ppm) 1,58 (m, 4H, Azep-CH2) 1,76 (m, 4H, Azep-CH2), 3,02 (t, 4H, J=5,15 Hz, Azep-CH2), 3,82 (s, 2H, Ar-CH2) 7,61-7,67 (m, 5H, Ar-H), 7,84 (m, 2H, Ar-H), 7,98-8,12 (m, 3H, Ar-H), 8,42 (s, 1H, Ar-H), 9,39 (s, 1H, NH-CO), 9,43 in 9,58 (2s, 4H, H2N-C=NH2<+>)
Molekülmasse: berechnet: 479 (C26H30N5O2CI); gefunden: 444 ((M-HCI)H<+>)

Beispiel 24:

[0123] 3-{[1-(1-Azepanylcarbonyl)-2-(2-naphthoyl)hydrazino]methyl}-N ¾-hydroxybenzolcarboximidamid

[0124] N-(3-Cyanobenzyl)-N ¾-(2-naphthoyl)-1-azepanecarbohydrazid (133 mg, 0,31 mmol) und Hydroxylamin (12 mg, 0,36 mmol) wurden in reinem Ethanol (10 ml) gelöst und über Nacht refluxiert. Das Lösungsmittel wurde verdampft und das Produkt durch Säulenchromatographie (Dichlormethan/Methanol 9:1) gereinigt.

[0125] Ausbeute: 107 mg (75%)
Schmelzpunkt: 129-131 deg.

   C
IR (KBr, cm-1) 3334, 2924, 1772, 1652, 1506, 1374, 1301, 1129, 954, 749 H-NMR (CDCl3): delta  (ppm) 1,43 (m, 4H, Azep-CH2), 1,57 (m, 4H, Azep-CH2), 3,36 (t,-4H, J=5,61 Hz, Azep-CH2), 4,53 (s, 2H, Ar-CH2), 5,69 (s, 1H, NOH), 7,31 (t, 1H, J=7,76 Hz, Ar-H), 7,49 (m, 3H, Ar-H), 7,57 (m, 2H, Ar-H), 7,78 (dd, 1H, J1=8,69 Hz, J2=1,83 Hz, Ar-H), 7,89 (m, 3H, Ar-H), 8,38 (s, 1H, Ar-H), 9,57 (s, 2H,NH2), 10,64 (s, 1H, NH-CO).
Molekülmasse: berechnet: 459 (C26H29N5O3); gefunden: 460 ((MH<+>).

Beispiel 25:

[0126] Ergebnisse der biologischen Assays:
In der folgenden Tabelle sind die Ergebnisse der biologischen Assay für Verbindungen gemäss der vorherigen Beispiele angegeben. Die anderen Verbindungen stellen weitere, nicht besonders durch ein Beispiel dargestellte Ausführungsbeispiele dar.

[0127] 
 <EMI ID=45.0> 




  The invention belongs to the field of the pharmaceutical industry and relates to novel azaphenylalanine derivatives, processes for their preparation and pharmaceutical compositions containing them. These novel azaphenylalanine derivatives are useful as coagulation inhibitors.

Thrombin is a serine protease which is one of the key enzymes in the processes of blood coagulation and in the development of thrombosis (Edit, JF; Allison, P., Noble, S., Ashton, J .; Golino, P. McNard , J, Buja, LM, Willerson, JT, J. Clin Invest, 1989, 84, 18.)

The crystal structure of the serine protease thrombin is known (Bode, W .; Turk, D .; Karshikov, A.

   J., Protein Sci. 1992, 1, 426).
Currently used coagulation inhibitors have many adverse effects and limited efficacy.

Low molecular weight thrombin inhibitors should have selective activity and be able to be administered orally. There are reversible and irreversible thrombin antagonists (Kimball, SD, Curr Pharm Design 1995, 1, 441, J, Kimball, SD, Bioorg Med Med Chem., 1995, 3, 999, Kimball, SD, Blood Coagulation and Fibrinolysis 1995, 6, 511, Breznik, M., Pecar, S., Farm, Vestn 1997, 48, 545, Leung, D. Abbenante, G., Fairlie, DP, J. Med., Chem., 2000, 43 , 305).

The majority of reversible thrombin antagonists are derived from the peptidomimetic modified structure D-Phe-Pro-Arg.

   The aim of the modification is to provide chemical stability, selectivity and efficacy.

The active ingredient argatroban described in EP-A-0 008 746 is used clinically. Napsagatran is a selective reversible inhibitor of thrombin described in EP-A-0 559 046. Meta-substituted phenylalanine derivatives having amide or amidoxime structure are selective thrombin inhibitors disclosed in WO 92/08709. Amidinophenylalanine derivatives and aminopyridylalanine derivatives described in WO 95/13274 , have selective antithrombotic effect.

Azapetides are Peptidomimetika in which the Calpha atom is replaced by nitrogen.

   The advantage of this isoelectric substitution is the maintenance of the chemical integrity of the modified amino acid and only a minor conformational change important to the process of molecular identification and stabilization of the ligand-receptor complex and metabolic stabilization (Gante, J, Synthesis 1989, 405 Chem., 1994, 106, 1780), The preparation of N-naphthylsulfonylamino acids is known (Pendleton, RG, et al., J. Pharm. Exp. Ther., 1979, 208, 24). Phenyl derivatives are described in WO 02/051 824 and in Zega, A .; Mlinsek, G. Sepic, P .; et al. Bioorg. Med. Chem., 2001; 9, 2745-2756, Zega, A .; Trampus Bakija, A .; Fortuna, M .; Stegnar, M .; et al. Pharmacy, 2001, 56, 638-685).

   A group of thrombin inhibitors with the azaphenylalanine fragment described in SI 20 025 showed submicromolar constants in in vitro studies.

Recently, the inhibitors of factor Xa have also been research targets of the pharmaceutical industry. The structure of the active site of factor Xa, obtained by X-ray diffraction, had a major impact on the synthesis of Xa inhibitors. There are currently no Xa inhibitors on the market for high potency and moderate selectivity, although some of them are at various stages of clinical investigation (Zega, A., Obreza, A. Urleb, U. Farm, Vestn, 1999, 50 , 53-57, Rai, R .; Sprengler, KC; Elrod, KC; et al., Curr. Med. Chem. 2001, 8, 101-119).

   A low molecular weight inhibitor DX-9065a has high thrombin selectivity and is a bis-amidino derivative (Hara, T., Yokoyama, A., Ishihara, H, et al, Thromb, Haemost, 1994, 71, 314-319). More recently, compounds with only one basic group have been published in their structure, with improved bioavailability (WO 9 857 951, Yee, Y. K .; Tebbe, A.L., Linebarger, J.H., J. Med. Chem. 2000, 43, 873-882).

The object of the present invention is to provide improved new compounds with coagulation-inhibiting effect, said compounds are effective after oral administration, are highly selective and have low toxicity, a process for their preparation and the use of these compounds for the preparation of a pharmaceutical composition.

   These tasks are e.g. achieved by the subject matter of independent claims 1, 3, 4 and 11. Preferred embodiments of the invention are defined in the dependent claims.

The invention relates to novel azaphenylalanine derivatives and analogs thereof having the general formula (I)
  <EMI ID = 2.0>
in which
R <1> and Z are H or a radical with the formula
  <EMI ID = 3.0>
provided that one of R <1> and Z is H;
R <4> = H, alkyl (C1-C3), OH, O-alkyl (C1C3), NH2;
R <2> represents a radical of the formula
  <EMI ID = 4.0>
in which
R <5> = H, alkyl (C1-C3), COOR <10>
R <6> = H, alkyl (C1-C3), COOR <10>
R <7> = H, alkyl (C1-C3), COOR <10>
R <10> = H, alkyl (C1-C3),
R <8> = H, alkyl (C1-C3), cycloalkyl (C3-C6),
R <9> = H, alkyl (C1-C3), cycloalkyl (C3-C6),
R <11> = H, alkyl (C1-C3), benzyl,
X = CH, O, S,
Y = NR <12>, O, S,
R <12> = H, COCH3, alkyl (C1-C3);

  
R <3> is a remainder of the formula
  <EMI ID = 5.0>

The invention also relates to their pharmaceutically acceptable anticoagulant salts and to pharmaceutical compositions containing them.

The pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formula 1 preferably contain the conventional non-toxic salts or the quaternary ammonium salts which are formed, for. Example of inorganic or organic acids or bases.

   Examples of such acid addition salts include acetate, adipate, alginate, aspartate, benzoate, benzenesulfonate, bisulfate, butyrate, citrate, camphorate, camphorsulfonate, cyclopentanopropionate, digluconate, dodecylsulfate, ethanesulfonate, fumarate, glycoheptanoate, hydrobromide, hydrochloride, hydroiodide, lactate, maleate, methanesulfonate , Nicitinate, nitrate, oxalate, pamoate, 3-phenylpropionate, picrate, pivalate, propionate, pectinate, succinate, sulfate, tartrate, thiocyanate, tosylate and audecanoate. Basic salts include ammonium salts, alkali metal salts such as sodium or potassium salts, alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium salts, N-methyl-D-glucamine and salts with amino acid such as arginine, lysine, etc.

   Also, the basic nitrogen-containing groups may be quaternized with such agents as lower alkyl halides, dialkyl sulfates and diamyl sulfates, long chain halides, aralkyl halides, and others. The choice of inorganic or organic acids or bases should not be limited to these examples.

The invention also relates to a process for the preparation of Azaphenylalaninderivaten and analogous to the general formula (I).

The Azaphenylalaninderivate and analogs of the general formula (I), if
R1 =
  <EMI ID = 6.0>
are preferably prepared as follows:

  
4-cyanobenzaldehyde of the formula (II)
  <EMI ID = 7.0>
is reacted with BOC-carbazate of formula (III)
  <EMI ID = 8.0>
to the compound of formula (IV)
  <EMI ID = 9.0>
which is converted to the compound (V) by reduction by catalytic hydrogenation using Pd as a catalyst
  <EMI ID = 10.0>
which reacts with triphosgene and amine of the formula (VI)
  <EMI ID = 11.0>
wherein R5, R6 and R7 have the same meanings as in the formula (I), or with triphosgene and amine of the formula (VII or VIII),
  <EMI ID = 12.0>
where Y has the same meaning as in the formula (I), or with triphosgene and amine of the formula (IX)
  <EMI ID = 13.0>
where R <8> and R <9> have the same meanings as in the formula (I), or with triphosgene or amine of the formula (X),

  <EMI ID = 14.0>
where R <11> and X have the same meanings as in the formula (I), to the compound (XI)

  
  <EMI ID = 15.0>
where R <2> has the same meaning as in the formula (I).

The BOC protecting group of the compounds (XI) is removed at room temperature using the gaseous hydrogen chloride in acetic acid to obtain the compound (XII)
  <EMI ID = 16.0>
where R <2> has the same meaning as in the formula (I).

Then, the compound (XII) reacts with the activated naphthylsulfonylamino acid or with activated arylalkylcarboxylic acid to give the compound (XIII)
  <EMI ID = 17.0>
where R <2> and R <3> have the same meanings as in the formula (I).

The compound (XIII) is transformed with hydroxylamine in pure ethanol to the compound of the formula (XIV)
  <EMI ID = 18.0>
where R <1> =
  <EMI ID = 19.0>
, and R <3> have the same meanings as in the formula (I)

   have and R <4> is an OH group.

The compound (XIII) is converted with inflowing gaseous hydrogen chloride in ethanolic solution, addition of ammonium acetate, followed by a further inflow of hydrogen chloride to the compound (XV),

  <EMI ID = 20.0>
where R <1> =
  <EMI ID = 21.0>
R <2> and R <3> have the same meanings as in the formula (I) and R <4> is hydrogen.

The Azaphenylalaninderivate the general formula (I), wherein R1 =
  <EMI ID = 22.0>
 are made as follows:

  
4-cyanobenzaldehyde of the formula (II)
  <EMI ID = 23.0>
is converted into the compound (XVI) with ethylene glycol in the presence of 4-toluenesulfonic acid
  <EMI ID = 24.0>
which is reduced with lithium aluminum hydride in the compound of formula (XVII)
  <EMI ID = 25.0>
which reacts with acetic anhydride to give the compound (XVIII)

  <EMI ID = 26.0>

The compound (XVIII) is converted with 90% of methanoic acid to the compound (XIX)
  <EMI ID = 27.0>
which with BOC-carbazate of the formula (III)

  <EMI ID = 28.0>
is converted to the compound of the formula (XX)

  <EMI ID = 29.0>
which is converted by reduction by catalytic hydrogenation into the compound (XXI)

  <EMI ID = 30.0>
which reacts with triphosgene and amine of the formula (VI)

  <EMI ID = 31.0>
where R <5>, R <6> and R <7> have the same meanings as in the formula (I),

   or with triphosgene and amine of the formula (VII or VIII),

  <EMI ID = 32.0>
where Y has the same meaning as in the formula (I), or with triphosgene and amine of the formula (IX)
  <EMI ID = 33.0>
where R <8> and R <9> have the same meanings as in the formula (I), or with triphosgene and amine of the formula (X)

  <EMI ID = 34.0>
where R <11> and X have the same meanings as in the formula (I), to the compound (XXII)

  <EMI ID = 35.0>
where R <2> has the same meaning as in the formula (I).

The BOC protecting group in the compound (XXII) is removed by HCl (g) in AcOH at room temperature to obtain the compound (XXIII)

  <EMI ID = 36.0>
where R <2> has the same meaning as in the formula (I), which reacts with aromatic sulfonyl chloride to the compound (XXIV)

  <EMI ID = 37.0>
where R <2> and R <3> have the same meanings as in the formula (I)

   to have.

The compound (XXIV) is converted to the compound (XXV) by heating until boiling with 5M HCl

  <EMI ID = 38.0>
where R <1> =
  <EMI ID = 39.0>
R <2> and R <3> have the same meanings as in the formula (I).

The compounds in which R <1> H is and Z is

  <EMI ID = 40.0>
are prepared in an analogous manner as previously described, with the sole exception that the starting compound is 3-cyanobenzaldehyde instead of 4-cyanobenzaldehyde.

Unless indicated otherwise, the starting compounds can be prepared according to the methods described in the literature; e.g. the compound of formula (IV) as described by A. Fässler, et al., J. Med.

   Chem. 1996, 39, 3203-3215.

The invention further relates to the use of compounds of formula (I) for the preparation of pharmaceutical compositions used as oral and parenteral coagulation inhibitors, e.g. Inhibitors that mainly inhibit thrombin, and dual inhibitors of thrombin and factor Xa.

   They may be useful in the treatment and prevention of a variety of thrombotic forms: (i) venous thromboembolism due to the formation of a thrombus within a vein (venous thrombosis) associated with acquired (prolonged bedtime, surgery, injury, cancer, pregnancy and postpartum conditions ) or inherited risk factors (lack of natural coagulation inhibitors) constriction or occlusion of a pulmonary artery by a detached thrombus (pulmonary embolism), (ii) cardiogenic thromboembolism, due to the formation of a thrombus in the heart associated with cardiac arrhythmias, valvular defects, artificial heart valves or heart disease, embolisms of the heart peripheral arteries caused by a detached thrombus, most commonly in the brain (ischemic stroke), (iii)

   Arterial thrombosis due to the passage of atherosclerotic processes in the arteries that constrict or occlude an artery and cause myocardial ischemia (angina pectoris, acute coronary syndrome) or myocardial infarction, narrowing or occlusion of a peripheral artery (peripheral arterial occlusive disease) and constriction or Occluding the artery following an intervention on the blood vessel (re-closure or restenosis following transluminal coronary artery angioplasty, resealing or restenosis following percutaneous transluminal angioplasty of the peripheral arteries); and (iv) in a number of conditions (eg

   Pregnancy complications, metastatic malignancies, severe injuries, bacterial sepsis) if thrombogenic activation causes multiple formation of thrombi in the vasculature (disseminated, intravascular coagulation). The choice of possible uses for the manufactured pharmaceutical compositions should not be limited by these examples.

The compounds of formula (I) may also be used as an adjunct therapy in the context of thrombolytic therapy in recent myocardial infarcts, in combination with acetylsalicylic acid in patients with unstable angina pectoris intended for percutaneous transluminal angioplasty,

   and in the treatment of patients with thrombosis and with heparin-induced thrombocytopenia.

The coagulation inhibitors may also be used for preventing coagulation of blood in contact with non-biological surfaces (vascular grafts, vascular stents, artificial heart valves, extracorporeal circulatory systems, chemodialysis) and in vitro for coagulation in biological samples To prevent examination or storage.

Further, it is an object of the present invention to provide pharmaceutical compositions comprising the compounds of formulas (I). They can be formulated as injectable or oral formulations. In addition to the active ingredients, various standard additives may be preferably included depending on the use.

   The pharmaceutical compositions are prepared according to standard procedures. The composition may be formulated in such a manner as to permit controlled and timed delivery of the active ingredient. The dosage, frequency and route of administration will depend on a variety of factors, and will also depend on the particular drug and its pharmacokinetic parameters and the condition of the patient.

Biological tests

I. enzyme assay

1. Determination of the efficacy of thrombin inhibitors

a) Principle

Thrombin cleaves amide bonds in a synthetic, chromogenic substrate, releasing yellow colored p-nitroaniline (p-NA). The amount of p-NA generated is directly proportional to the absorbance measured at a wavelength of 405 nm using a spectrophotometer.

   If a thrombin inhibitor is added, the amidolytic activity of the enzyme decreases. The effect of the inhibitor is expressed as the inhibition constant (Ki).

b) Reagents

Thrombin (human thrombin, 303 NIH units, Sigma): The contents of the glass jar were dissolved in distilled water to give a stock solution of 20 NIH units / ml. The stock solution is pipetted into 0.5 ml aliquots and incubated at -70 ° C. stored. Immediately prior to use, a working solution of thrombin was prepared with 2 NIH units / ml of activity with HBSA buffer. The final concentration of thrombin in a microtiter plate is 0.5 NIH units / ml.
Chromogenic thrombin substrate (S-2238, Chromogenix, 25 mg). A 1 mM substrate solution is prepared, pipetted into 0.5 ml aliquot and incubated at -20 ° C. stored.

   Prior to use, 160 and 80 MicroM substrate solutions were prepared with distilled water. The final concentration of the substrate in the reaction mixture was 40 and 20 microM, respectively (Km = 2.6 microM).
HBSA buffer, pH 7.5: 10 mM Hepes buffer (HEPES, Sigma), 150 mM NaCl and 0.1% (w / v) bovine serum albumin (98% bovine serum albumin, Sigma) are dissolved in double distilled water. The pH is adjusted with 0.1 M NaOH solution.
Inhibitors: The inhibitors were dissolved in DMSO to give a 10 mM stock solution. The working solutions (final concentrations ranging from 10 to 100 microM) are prepared with distilled water.

   The highest concentration of DMSO in a microtiter plate did not exceed 3%.

c) Procedure

The measurements were carried out in a microtiter plate. 50 microl HBSA buffer, 50 microl of inhibitor solution of various concentrations (to control 50 microl HBSA buffer) and 50 microl thrombin solution were pipetted into the wells of a microtiter plate. The plate is heated at a temperature of 25 deg. C incubated for 15 minutes. After incubation, 50 microl of the chromogenic substrate was added and the microtiter plate placed in the spectrophotometer (Tecan, Sunrise). The increase in extinction at 405 nm is repeated at 10 second intervals over a period of 15 minutes at a temperature of 25 deg. C measured.

For the determination of the inhibition constant (Ki) 40 of 20 MicroM substrate were used.

   Each measurement was performed in triplicate and the result is the mean of 3 measurements.

2. Determination of the inhibition constant (Ki)

The Ki is determined according to the principle described by Cheng and Prusoff (Biochem Pharmacol, 1973). The initial reaction rates in the presence and absence of the inhibitor are measured. The change in absorbance per unit time (v) is calculated from the initial, linear portion of the reaction.

   For competitive inhibitors, that applies

  <EMI ID = 41.0>
and it follows that

  <EMI ID = 42.0>

I = inhibitor concentration, S = substrate concentration, Km = Michael's constant, v0 = initial reaction rate in the absence of the inhibitor, vi = initial reaction rate in the presence of the inhibitor.

The measurements were carried out with two concentrations of the inhibitor and two concentrations of the substrate. For each combination of concentration of substrate and inhibitor used, Ki was calculated and the result is its average value.

Third

   Determination of the selectivity of the inhibitory action against thrombin with respect to trypsin inhibition

a) Principle

Since thrombin and trypsin are closely related in specificity to a substrate due to comparable structures in the active site, the selectivity of inhibitory activity against thrombin is determined with respect to trypsin inhibition, which is a nonspecific serine protease. The inhibitory activity against thrombin is determined as previously described. Trypsin inhibition is measured in the same manner as in determining the inhibitory effect on thrombin except that a different chromogenic substrate is used. Ki is calculated for both enzymes.

   The selectivity of the inhibitor is expressed as a ratio of Ki for trypsin to Ki for thrombin.

b) Reagents

Trypsin (bovine, 6000 BAEE units / mg protein, Sigma): A stock solution of trypsin with an activity of 300 U / ml is prepared, pipetted into 0.2 ml aliquots and digested at -70 ° C. C stored. Immediately prior to use, the stock solution is thawed and a working solution of 4 mU / ml made with HBSA buffer. The final activity of trypsin in a microtiter plate is 1 mU / ml.
Chromogenic substrate for trypsin (S-2222, Chromogenix, 25 mg): a 2 mM substrate solution is prepared, pipetted into 0.3 ml aliquots and incubated at -20 ° C. C stored. Before use, the stock solution is thawed and 400 and 200 MicroM substrate solutions are prepared.

   The final concentrations of the substrate of the reaction mixture are 100 and 50 microM (Km = 25 microM), respectively.
HBSA buffer, pH 7.5: 10 mM Hepes buffer (HEPES, Sigma), 150 mM NaCl and 0.1% (w / v) bovine serum albumin (98% bovine serum albumin, Sigma) are dissolved in double-distilled water. The pH is adjusted with a 0.1 M NaOH solution.
Inhibitor. The inhibitors are dissolved in DMSO to give a 10 mM stock solution. The working solutions (final concentration ranging from 10 to 600 microM) are prepared with distilled water. The highest concentration of DMSO in a microtiter plate does not exceed 10%.

To determine the Ki, 100 and 50 microM substrate were used.

   Each measurement was performed in triplicate and the result is the mean of three measurements.

c) Procedure

The same procedure as previously shown for measuring the inhibitory activity against thrombin is used. The concentrations of the reagents to determine inhibitor activity are used with respect to trypsin.

d) Determination of the inhibition constant (Ki)

It is determined in the same manner as in the determination of Ki for thrombin.

e) Determination of selectivity

Ki for thrombin and Ki for trypsin were determined. The selectivity is defined as the ratio:

  <EMI ID = 43.0>

4th

   Determination of the selectivity of inhibitory activity against thrombin with respect to the inhibition of factor Xa.

a) Principle

Since both enzymes are closely related and of comparable structure of the active tophtrum, the selectivity of inhibitory activity against thrombin is determined with respect to the inhibition of factor Xa. The inhibition of FXa is measured in the same manner as the measurement of inhibition of thrombin with the chromogenic substrate S 2238. Ki is calculated for both enzymes. The selectivity of the inhibitor is calculated as a ratio of Ki for FXa to Ki of thrombin.

b) Reagents

Factor Xa (Chromogenix, 71 nkat): The contents of the glass tubes are dissolved in distilled water to give a stock solution of 10 nkat / ml. The stock solution is pipetted into 0.5 ml aliquots and incubated at -20 ° C. C stored.

   Immediately prior to use, FXa working solutions with an activity of 2 nkat / ml were prepared with HBSA buffer. The final activity of FXa in a microtiter plate is 0.5 nkat / ml.

Chromogenic substrate for FXa (S-2222, Chromogenix, 25 mg): 2 mM substrate solution is prepared, pipetted into 0.5 ml aliquots and incubated at -20 ° C. C stored. Prior to use, 800 and 400 MicroM substrate solutions were prepared with distilled water. The final concentration of the substrate in the reaction mixture was 200 and 50 microM, respectively (Km = 25 microM).
HBSA buffer, pH 7.5: The same as in the method for thrombin.
Inhibitor. The inhibitors were dissolved in DMSO to give a 10 mM stock solution. The working solutions (final concentrations ranging from 5 to 300 microM) are prepared with distilled water.

   The highest concentration of DMSO in a microtiter plate does not exceed 3%.

c) Procedure

The same procedure previously mentioned for the measurement of inhibitory activity against thrombin is used. The concentrations of the reagents described for determining inhibitory activity with respect to FXa are used.

d) Determination of the inhibition constant (Ki)

It is determined in the same manner as in the determination of Ki for thrombin.

e) Determination of selectivity

Ki for thrombin and Ki for FXa are determined. The selectivity is defined as a ratio:

  <EMI ID = 44.0>

II.

   coagulation assay

The clotting time for normal pooled plasma is measured by the coagulation assays (thrombin time, activated partial thromboplastin time and prothrombin time) in a coagulometer after addition of various concentrations of the inhibitor. The results are presented as the inhibitor concentration, which doubles the clotting time.

1st thrombin time (TT)

a) Principle

Determination of thrombin time is used for laboratory monitoring of non-fractionated heparin treatment, monitoring of thrombolytic therapy, detection of disorders in fibrin formation, and diagnosis of severe forms of fibrinogen deficiency. The thrombin time is prolonged due to the reduced fibrinogen concentration, the presence of fibrinogen degradation products or thrombin inhibitors in the plasma.

   Thrombin is added to the plasma for the procedure. Thrombin converts fibrinogen to fibrin and the time for coagulation is measured.

b) Reagents

Thrombin (thrombin assay reagent, 1.5 IU / ml): Lyophilized bovine thrombin is dissolved in 5 ml of HEPES buffer saline (25 nM, pH 7.4) to a concentration of 2 U / ml. Normal pooled plasma: Venous blood from at least 10 apparently healthy volunteers is collected in a 0.11 M sodium citrate solution (one part sodium citrate and 9 parts blood). Immediately after removal of the blood, the blood at 2000 X g for 30 minutes at 4 deg. C centrifuged. The plasma is removed, pipetted into 2 ml aliquots and incubated at -70 ° C.

   C stored.
Inhibitors: The inhibitors are dissolved in DMSO (10 mM stock solution) and diluted with distilled water to give working solutions (highest concentration 100 microM).

c) Procedure

There were 90 microl plasma and 10 microl of the inhibitor in a cuvette of the coagulometer (Fibrintime, Dade / Behring) pipetted and 37 °. C preheated. It was at 37 deg. C incubated for 5 minutes. There were 200 microl of the 37 °. C preheated thrombin solution added. After adding the thrombin, the timer was started and the time for coagulation was measured.

2. Activated partial thromboplastin time (aPTT)

a) Principle

The aPTT is used as a screening assay for coagulation disorders of the internal coagulation pathway.

   The method is sensitive to disturbances in the coagulation factors VIII and IX and the contact factors. The aPTT is prolonged due to the lack of factors or due to the presence of the inhibitors (for example, lupus coagulation inhibitors, heparin). Incubation with plasma with the optimal amount of phospholipids and a contact activator leads to an activation of the factors of the inner coagulation pathway. The addition of calcium ions triggers the coagulation process. The time of fibrin clot formation is measured.

b) Reagents

Phospholipids with an Activator (Pathrombin SL, Dade / Behring): Silica particles, vegetable phospholipids, sodium chloride (2.4 g / l), HEPES (14.3 g / l), pH 7.6 and sodium azide ( <1 g / l).

   Before use, the reagents should be at room temperature and well shaken.
Calcium chloride solution: 0.025 mol / l
Normal pooled plasma: The same as for the thrombin time.
Inhibitors: The same as for the thrombin time.

c) Procedure

There were 90 microl plasma and 10 microl of the inhibitor in a 37 °. C pre-warmed cuvette of the coagulometer (Fibrintime, Dade / Behring) pipetted. It was for 37 deg. C incubated for 5 minutes. 100 microl phospholipids with an activator were added. It was at 37 deg. C incubated for 2 minutes. There were 100 microl calcium chloride at 37 °. C added. After the addition of calcium chloride, the time for coagulation was measured.

Third

   Prothrombin time (PT)

a) Principle

The prothrombin time is a rapid, sensitive screening test for the determination of coagulation disorders of the internal pathway (factors n, V, VII and X). Due to the high sensitivity of these coagulation factors, this study is well suited for monitoring oral anticoagulant therapy, for diagnosing genetic and acquired deficiencies of coagulation factors and for screening the liver for synthesis performance. Prothrombin time is prolonged due to coagulation factor deficiency or due to the presence of inhibitors.

   For the procedure, optimal amounts of thromboplastin and calcium are added to plasma and the time for coagulation is measured.

b) Reagents

Thromboplastin (Thromborel S, Dade / Beehring): human placental thromboplastin with calcium chloride and stabilizing agents; dissolved in 4 ml of distilled water. Before use, the reagent was lowered to 37 ° C. C warmed up for at least 30 minutes. Normal pooled plasma: The same as for the thrombin time. Inhibitors: The same as for the thrombin time.

c) Procedure

It is 90 microl plasma and 10 microl of the inhibitor in a 37 °. C pre-warmed cuvette of the coagulometer (Fibrintime, Dade / Behring) pipetted. It will be for 37 deg. C incubated for 5 minutes. There are 200 microl thromboplastin, prewarmed to 37 deg. C, added.

   After the addition of the thromboplastin, the time for coagulation is measured.

The invention is illustrated by the following examples, but by no means limited.

Example 1:

N- {2- [2- (1-Azepanylcarbonyl) -2- (4-cyanobenzyl) hydrazino] -2-oxoethyl} -2-naphthalenesulfonamide

1.00 g (3.77 mmol) of 2 - [(2-naphthylsulfonyl) amino] acetic acid was dissolved in 20 ml of dichloromethane; While stirring, 420 mg (3.87 mmol) of ethyl chloroformate and 526 mg (4.00 mmol) of N-ethyl-N, N-diisopropylamine were added while stirring. The reaction was stirred at room temperature for 1 hour, followed by the addition of powdered 2- (1-azepanylcarbonyl) -2- (4-cyanobenzyl) hydrazine chloride (1.00 g, 3.24 mmol). After the addition, the mixture was stirred at room temperature for 3 days.

   The solvent was removed on a rotary evaporator, the residue dissolved in 50 ml of ethyl acetate and then washed with 1M HCl, 1M NaOH and distilled water. The organic phase was dried over sodium sulfate and the solvent was evaporated in vacuo. The crude product was recrystallized from ethanol.

Yield: 1.34 g (79%)
Melting point: 149-151 deg.

   C
IR (KBr, cm <-1>): 3410, 3253, 2919, 2232, 1708, 1613, 1440, 1343, 1156, 659
 <1> H-NMR (DMSO-d6): delta (ppm) 1.46 (m, 8H, Ch2 azepine 3 ¾, 4 ¾, 5 ¾, 6 ¾); 1.65 (m, 4H, CH2 azepine2 ¾, 7 ¾); 3.33 (m, 2H, CO-CH 2 -NH); 4.09 (m, 1H, NHCO); 4.47 (s, 2H, Ar-CH2), 7.58 and 7.79 (2d, 2H each, J2, 6 = 8.27, Ar-H2, 3, 5, 6); 7.69-8.47 (m, 7H, Ar-H (naphthalene)); 10.29 (s, 1H NHSO2)
Molecular weight: calculated: 519 (C27H29N5O4S); found: 520 (MH <+>).

Example 2:

4 - [(1- (1-Azepanylcarbonyl) -2- {2 - [(1-naphthylsufonyl) amino] acetyl} hydrazino) methyl] -N ¾-hydroxybenzenecarboxamide

N- {2- [2- (1-Azepanylcarbonyl) -2- (4-cyanobenzyl) hydrazino) -2-oxoethyl} -2-naphthalenesulfonamide (400 mg, 0.77 mmol) was dissolved in anhydrous ethanol and Hydroxylamine (28.0 mg, 0.85 mmol) was added.

   The reaction mixture was heated at the boiling point for 12 hours.

The solvent was removed on a rotary evaporator and the product washed with ether.

Yield: 386 mg (87%)
Melting point: 104-108 deg. C
IR (KBr, cm <-1>): 3359, 2624, 1782, 1640, 1422, 1345, 1157, 1075, 750, 661
 <1> H-NMR (CDCl3): delta (ppm) 1.49-1.89 (m, 8H, CH2 azepine 3 ¾, 4 ¾, 5 ¾, 6 ¾); 2.07 (m, 4H, CH2 azepine 2 ¾, 7); 3.48 (m, 2H, CO-CH 2 -NH); 4.18 (s, 1H, NHCO); 4.68 (m, 2H, Ar-CH2), 4.90 (s, 1H, = N-OH); 7.42 and 7.61 (2d, 2H each, J 2.6 = 8.17, J 3.5 = 8.15, Ar-H2, 3, 5, 6); 7.64-8.34 (m, 7H, Ar-H (naphthalene)); 8.42 (s, 2H, NH2-amidoxime); 10.35 (s, 1H NHSO2)
Molecular mass:

   calculated 552 (C27H32N6O5S), found 553 (MH <+>).

Example 3:

Amino {4 - [(1- (1-azepanylcarbonyl) -2- {2 - [(1-naphthylsulfonyl) amino] acetyl} hydrazino) methyl] phenyl} methanamine hydrochloride

N- {2- [2- (1-Azepanylcarbonyl) -2- (4-cyanobenzyl) hydrazino] -2-oxoethyl} -2-naphthalenesulfanamide (520 mg, 1.00 mmol) was dissolved in 25 ml of anhydrous ethanol dissolved, and gaseous HCl was bubbled for 20 minutes. After completion of the bubbling, the solution was stirred at room temperature for 4 hours, followed by the addition of ammonium acetate (85.0 mg, 1.10 mmol). The reaction mixture was left at room temperature for 2 days. The gaseous HCl was bubbled again for 20 minutes. After 1 hour, the ammonium chloride formed was filtered off and the ethanol was evaporated on a rotary evaporator.

   The product was dissolved in ether and filtered off by suction.

Yield: 481 mg (84%)
IR (KBr, cm <-1>): 2969, 2758, 1783, 1669, 1344, 1158, 1076, 749, 660, <1> H-NMR (DMSO-d6): delta (ppm) 1.57-1.76 (m, 8H, CH2 azepine 3 ¾, 4 ¾, 5 ¾, 6 ¾); 3.03 (m, 4H, CH2 azepine 2 ¾, 7 ¾); 3.37 (m, 2H, CO-CH 2 -NH); 4.31 (m, 1H, NHCO): 4.74 (s, 2H, Ar-CH2), 7.62 and 7.90 (2d, 2H each, J2, 6 = 8.14, J3, 5 = 8 , 19, Ar-H2, 3, 5, 6); 7.35-8.49 (m, 7H, Ar-H (naphthalene)); 9.30 (s, 1H NHSO2); 9.42 (2s, 2H, amidine)
Molecular weight: calculated: 537 (C27H33N6O4S); found: 538 (MH <+>).

Example 4:

Ethyl 2- [2- (1-azepanylcarbonyl) -2- (4-cyanobenzyl) hydrazino] -1-benzyl-2-oxoethylcarbamate 1.10 g (4.64 mmol) of N- (ethoxycarbonyl) phenylalanine was added in Dichloromethane (25ml) and 0.50ml (5.18mmol) of ethyl chloroformate was added dropwise.

   The mixture was stirred for 30 minutes at room temperature, followed by the addition of DIEA (2 mL) and 1.35 g (4.49 mmol) of 2- (1-azepanylcarbonyl) -2- (4-cyanobenzyl) hydrazinium chloride. The reaction mixture was stirred overnight, then the solvent was evaporated in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (50 ml). The solution was extracted with 2 X 25 ml 10% citric acid and 25 ml aqueous NaHCO3 and washed with water and saline. The organic phase was dried over Na 2 SO 4 and the solvent removed under reduced pressure. The crude product was further purified by column chromatography (dichloromethane / methanol 20: 1).

Yield: 438 mg (22%), m.p .: 133-137 ° C.

   C
IR (KBr, cm <-1>): 3321, 2950, 2225, 1666, 1531, 1421, 1289, 1043, 757, 559 H NMR (CDCl 3): delta (ppm) 1.21 (t, 3H, J = 6.78 Hz , CH 2 CH 3), 1.57 (m, 4H, CH 2), 1.75 (m, 4H, CH 2), 3.01 (m, 2H, Ar-CH 2), 3.43 (t, 4H, J = 5 , 80 Hz, CH2), 4.13 (t, 3H, J = 6.73 Hz, CH2CH3), 4.41 (s, 2H, Ar-CH2), 4.53 (s, 1H, CH), 5 , 04 (s, 1H, NHCOOEt), 6.48 (s, 1H, N-NHCO), 7.29 (m, 5H, Ar-H), 7.51 (d, 2H, J = 8.20 Hz , Ar-H <3, 5>), 7.66 (d, 2H, J = 8.33 Hz, Ar-H <2, 6>)
Molecular mass: calculated: 491 (C27H33N5O4), found: 492 (MH <+>).

Example 5:

Ethyl 2- [2- {4- [amino (imino) methyl] benzyl} -2- (1-azepanylcarbonyl) hydrazino) -1-benzyl-2-oxoethyl carbamate

Ethyl 2- (2- (1-Azepanylcarbonyl) -2- (4-cyanobenzyl) hydrazino] -1-benzyl-2-oxoethylcarbamate was suspended in pure alcohol (20 ml) and the gaseous hydrogen chloride was allowed to stand for half an hour bubbled.

   The reaction mixture was left at room temperature for 4 hours, then the solvent was removed in vacuo. The residue was washed with diethyl ether (2 × 20 ml) and dissolved in pure ethanol. The solution was treated with gaseous ammonia for 10 minutes and the ethanol removed under reduced pressure.

Example 6:

[Amino (4 - {[2- (2-ammonio-3-phenylpropanoyl) -1- (1-azepanylcarbonyl) hydrazino] methyl} phenyl) methylene] ammonium dichloride

The crude product of the previous stage was dissolved in 1M HCl (30 ml) and was refluxed for two hours. The water was removed under reduced pressure and the residue was purified by column chromatography (ethyl acetate / methanol 2: 1).

Yield: 222 mg (49%)
Melting point: 221-223 deg.

   C
IR (KBr, cm <-1>): 3232, 2940, 2229, 1784, 1716, 1538, 1403, 1257, 1054, 959, 823, 752, 701
H NMR (CDCl3): delta (ppm) 1.24 (t, 3H, J = 6.76 Hz, CH2CH3). 1.49 (m, 4H, CH 2), 1.68 (m, 4H, CH 2), 3.03 (m, 2H, Ar-CH 2), 3.39 (t, 4H, J = 5.97 Hz, CH2), 4.12 (t, 3H, J = 6.72 Hz, CH2CH3), 4.43 (s, 2H, Ar-CH2), 4.62 (s, 1H, CH), 5.01 (s , 1H, NHCOOEt), 6.45 (s, 1H, N-NHCO), 7.26 (m, 5H, Ar-H), 7.53 (d, 2H, J = 8.17 Hz, Ar-H <3, 5>), 7.68 (d, 2H, J = 8.29 Hz, Ar-H <2, 6>), 9,29 (s, 4H, H2N-C = NH2 <+>)
Molecular weight: calculated: 509 (C24H34N6O2Cl2);

   found 437 ((M-2HCl) H <+>).

Example 7:

N ¾- (1-Azepanylcarbonyl) -N ¾- (4-cyanobenzyl) -1- (2-naphthylsulfonyl) -2-pyrrolidinecarbohydrazide

2.20 g (7.21 mmol) of 1- (2-naphthylsulfonyl) proline was dissolved in 35 ml of dichloromethane, and while stirring, 815 mg (7.50 mmol) of ethyl chloroformate and 1.20 g (9, 30 mmol) of N-ethyl-N, N-diisopropylamine added. The reaction mixture was stirred at room temperature for one hour, followed by the addition of powdered 2- (1-azepanylcarbonyl) -2- (4-cyanobenzyl) hydrazine chloride (2.00 g, 6.48 mmol). After the addition, it was further stirred for 3 days at room temperature. The solvent was removed on a rotary evaporator and the residue was dissolved in 50 ml of ethyl acetate, followed by washing with 10% citric acid, 5% NaHCO 3 solution and distilled water.

   The organic phase was dried over sodium sulfate and the solvent evaporated in vacuo. The crude product was reprecipitated from acetone.

Yield: 0.82 g (23%)
Melting point: 158-159 deg. C
IR (KBr, cm <-1>): 3461, 2234, 1708, 1614, 1527, 1428, 1342, 1156, 1082, 1015, 759, 662, 548
H-NMR (DMSO-d6): delta (ppm) 1.47 (s, 4H, CH 2,) 1.64 (s, 4H, CH 2), 1.75 (m, 4H, CH 2), 3.24 ( m, 4H, CH2), 3.24 (m, 2H, CH2), 4.12 (m, 1H, CH), 4.47 (s, 2H, Ar-CH2), 7.57 (d, 2H, J = 8.29 Hz, Ar-H <3, 5>), 7.71 (dqu, 2H, J1 = 7.16 Hz, J2 = 1.50 Hz, Ar-H), 7.80 (d, 2H, J = 8.29 Hz, Ar -H <2, 6>), 7.84 (dd, 1H, J1 = 8.67 Hz, J2 = 1.89 Hz, Ar-H), 8.07 (d, 1H, J = 7.91 Hz, Ar -H), 8.15 (m, 2H, Ar-H), 8.47 (s, 1H, Ar-H), 10.29 8s, 1H, NH)
Molecular weight: calculated: 559 (C30H33N5O4S); found:

   560 (MH <+>).

Example 8:

Amino {4 [(1- (1-azepanylcarbonyl) -2 - {[1- (2-naphthylsulfonyl) -2-pirrolidinyl] carbonyl {hydrazino) methyl] phenyl} methanamine hydrochloride

N ¾- (1-Azepanylcarbonyl-N- (4-cyanobenzyl) -1- (2-naphthylsulfonyl) -2-pirrolidine carbohydrazide (754 mg, 1.35 mmol) was dissolved in 25 mL of anhydrous ethanol and gaseous HCl After bubbling, the solution was stirred at room temperature for 4 hours followed by the addition of ammonium acetate (115.0 mg, 1.50 mmol). The reaction mixture was allowed to age at room temperature for 2 days Gaseous HCl was re-bubbled for 20 minutes After 1 hour, the ammonium chloride formed was filtered and ethanol was evaporated on a rotary evaporator.

   The product was dissolved in ether and filtered off by suction.

Yield: 320 mg (40%)
Melting point: 123-127 deg. C
IR (KBr, cm <-1>): 3034, 1781, 1681, 1602, 1402, 1347, 1158, 1076, 1010, 823, 748, 660
 <1> H-NMR (DMSO-d6): delta (ppm) 1.57 (m, 4H, CH2-azepine4 ¾, 5 ¾); 1.76 (m, CH2 azepine 3 ¾, 6 ¾); 2.03 (m, 4H, CH2-proline); 3.02 (m, 4H, CH2 azepine 2 ¾, 7 ¾); 3.32 (m, 2H, CH2-proline); 3.63 (q, 1H, J = 3.63 Hz, CH2-proline); 4.96 (s, 2H, Ar-CH2), 7.52 (d, 2H, J = 8.18 Hz, Ar-H <2. 5>), 7.68 (dqu, 2H, J1 = 7.14 Hz, J2 = 1.67 Hz, Ar-H), 7.81 (d, 2H, J = 8.18 Hz, Ar -H <2, 6>), 7.93 (dd, 1H, J1 = 8.59 Hz, J2 = 2.11 Hz, Ar-H), 8.12 (m, 3H, Ar-H), 8.49 (s, 1H, Ar-H), 9.41 (s, 4H, NH2-C = NH2 <+>) 9.59 (s, 1H, NH) Molecular weight: calculated: 599 (C30H37N5O4SCI); found:

   577 ((M-HCl) H <+>).

Example 9:

N ¾- (1-Azepanylcarbonyl) -N ¾- (4-cyanobenzyl) -2- (2-naphthyloxy) acetohydrazide
750 mg (3.71 mmol) of 2- (2-naphthyloxyacetic acid and 1.00 g (3.24 mmol) of 2- (1-azepanylcarbonyl) -2- (4-cyanobenzyl) hydrazine chloride were dissolved in 15 ml of dimethylformamide. While stirring, 500 mg (3.70 mmol) of 1-hydroxybenzotriazole and 748 mg (3.90 mmol) of EDC were added and the reaction mixture was stirred at room temperature for one hour.
The solvent was removed on a rotary evaporator and the residue was dissolved in 50 ml of ethyl acetate, followed by washing with 10% citric acid, 5% NaHCO 3 solution and distilled water. The organic phase was dried over sodium sulfate and the solvent was evaporated in vacuo.

   The crude product was purified by column chromatography (mobile phase: dichloromethane: methanol 9: 1).

Yield: 963 mg (63%)
Melting point: 142 to 144 deg. C
IR (KBr, cm <-1>) 3228, 2925, 2854, 2227, 1630, 1509, 1426, 1216, 1120, 960, 838, 748, 547_H NMR (CDCl3): delta (ppm) 1.55 (m, 4H, CH2-) Azepine4 ¾, 5 ¾, 1,75 (m, 4H, CH2 azepine3 ¾, 6 ¾), 3,43 (t, 4H, J = 5,86 Hz, CH2 azepine2 ¾, 7 ¾), 4,54 (s, 2H, CH 2); 4.68 (s, 2H, Ar-CH 2); 7.06 (s, 1H, NH); 7.34 (d, 2H, J = 8.40 Hz, Ar-H <3, 5>); 7.39-7.58 (m, 3H, Ar-H); 7.47 (d, 2H, J = 8.40 Hz, Ar-H <2, 6>); 7.68-7.84 (m, 3H, Ar-H); 8.14 (s, 1H, Ar-H)
Molecular weight: calculated: 456 (C27H28N4O3); found:

   457 (MH <+>).

Example 10:

Tert -Butyl 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2 - [(4-methyl-1-piperidinyl) carbonyl] -1-hydrazinecarboxylate
1.26 g (4.39 mmol) of bis-trichloromethyl carbonate were dissolved in 20 ml of dichloromethane and the solution was degassed with argon. 2.50 g (8.53 mmol) of tert-butyl 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -1-hydrazinecarboxylate were dissolved in 30 ml of dichloromethane, 1.65 g (12.79 mmol) of N-diisopropyl N-ethylamine was added and the mixture was added dropwise to the solution of bis-trichloromethyl carbonate. During the dropwise addition, the reaction mixture was cooled in an ice water bath. The mixture was stirred for a further half hour at room temperature. 2.04 ml (25.60 mmol) of 4-methylpiperidine was added and stirred for an additional hour at room temperature.

   The reaction mixture was then extracted with 4 X 25 ml of a 10% citric acid solution and 30 ml of saturated NaHCO3 solution, followed by washing with 30 ml of purified water and 20 ml of saturated saline. The organic phase was dried over Na 2 SO 4. The solvent was evaporated in vacuo and the residue was dissolved in 10 ml of diethyl ether. A white precipitate was formed and filtered off by suction.

Yield: 2.10 g (59%)
Melting point: 124-126 deg.

   C
IR (KBr, cm <-1>) 3282, 2923, 2858, 1727, 1638, 1443, 1253, 1158, 1020, 978, 757, 611
H-NMR (CDCl3): delta (ppm) 0.95 (d, 2H, J = 6.40 Hz, pip-CH3; 1.10-1.25 (m, 2H, pip-CH2); 1.44 (s, 9H, C (CH 3) 3); 1.60-1.73 (m, 3H, pip-CH 2, pip-CH); 2.03 (s, 3H, CO-CH 3), 2.82 ( m, 2H, pip-CH2); 3.92 (d, 2H, J = 13.19Hz, pip-CH2); 4.42 (d, 4H, J = 5.65Hz, CH2-Ar-CH2) 5.89 (s, 1H, NH-CO), 6.27 (s, 1H, NH-COO), 7.27 (s, 4H, Ar-H)
Molecular weight: calculated: 418 (C22H34N4O4); found: 419 (MH <+>)

Example 11:

2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2 - [(4-methyl-1-piperidinyl) carbonyl] hydrazinium chloride
2.65 g (6.33 mmol) of tert-butyl 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2 - [(4-methyl-1-piperidinyl) carbonyl] -1-hydrazinecarboxylate were dissolved in acetic acid (20 ml) and gaseous HCl was bubbled for half an hour.

   The acid was evaporated in vacuo and diethyl ether added to the residue. The flask wall was rubbed with a glass rod until a white powder was formed; Meanwhile, washing with diethyl ether was repeated twice.

Yield: 1.98 g (88%)
Melting point: 196-198 deg. C
IR (KBr, cm <-1>) 3419, 3256, 2926, 2685, 1689, 1552, 1434, 1235, 972, 728
H-NMR (CDC13): delta (ppm) 0.97 (d, 2H, J = 6.03 Hz, pip-CH3); 1.19 (m, 2H, pip-CH2); 1.52-1.70 (m, 3H, pip-CH2, pip-CH); 2.07 (s, 3H, CO-CH3); 2.91 (t, 2H, J = 12.43 HZ, pip-CH2); 3.96 (d, 2H, J = 12.43Hz, pip-CH2; 4.31 (d, 2H, J = 4.15Hz, Ar-CH2); 4.61 (s, 2H, Ar-CH2 7.26 (d, 2H, J = 7.91 Hz, Ar-H), 7.32 (d, 2H, J = 7.92 HZ, Ar-H), 7.99 (s, 1H, NH-CO)
Molecular weight: calculated: 354.5 (C17H27N4O2Cl); found:

   319 ((M-HCl) H <+>, 100).

Example 12:

N- (4 - {[1 - [(4-Methyl-1-piperidinyl) carbonyl] -2- (1-naphthylsulfonyl) hydrazino] methyl} benzyl) acetamide

1.98 g (5.59 mmol) of 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2 - [(4-methyl-1-piperidinyl) carbonyl] hydrazine chloride and 1.39 g (6, 13 mmol) of naphthalene-2-sulfonyl chloride were dissolved in dichloromethane (25 ml), 2.16 g (16.7 mmol) of N-diisopropyl-N-ethylamine were added and stirred at room temperature for 3 days. The solution was extracted with 4 X 25 ml of 10% citric acid and 30 ml of saturated NaHCO3 solution. The organic phase was washed with 30 ml of purified water and 30 ml of saline and dried over Na 2 SO 4. The dichloromethane was evaporated in vacuo and a light brown-yellow foamy solid was formed.

Yield: 1.89 g (67%) Melting point: 80-83 ° C.

   C
JR (KBr, cm <-1>) 3285, 2925, 1656, 1546, 1430, 1338, 1165, 970, 750, 554
H-NMR (CDCl3): delta (ppm) 0.52 (d, 3H, J = 6.03 Hz, pip-CH3); 1.28 (m, 2H, pip-CH2); 1.64 (m, 3H, pip-CH2, pip-CH); 2.05 (s, 3H, CO-CH3); 2.32-2.71 (m, 2H, pip-CH2): 3.72 (m, 2H, pip-CH2); 4.32 (m, 2H, Ar-CH2); 4.41 (d, 2H, J = 5.66 Hz, Ar-CH2); 5.72 (s, 1H, NH-CO); 7.16 (d, 2H, J = 8.29 HZ, Ar-H); 7.22 (d, 2H, J = 7.91 HZ, Ar-H); 7.46 (s, 1H, naphth-H); 7.62 (m, 2H, 2xnaphth-H); 7.81 (dd, 1H, J1 = 8.67 HZ, J2 = 1.88 HZ, naphth-H); 7.94 (q, 3H, J = 7.66 Hz, 3xnaphth-H); 8.45 (s, 1H, NH-SO2)
Molecular weight: calculated: 508 (C27H32N4O4S); found:

   509 (MH <+>).

Example 13:

(4 - {[1- [4-Methyl-1-piperidinyl) carbonyl] -2- (1-naphthylsufonyl) hydrazino] methyl} phenyl) methanamine hydrochloride

1.89 g (3.72 mmol) of N- (4- {[1 - [(4-methyl-1-piperidinyl) carbonyl] -2- (1-naphthylsulfonyl) hydrazino] methyl} benzyl) acetamide dissolved in 30 ml preheated isopropyl alcohol (60 ° C.). 30 ml of 4M HCl was added and the mixture was refluxed for 5 hours. The solvent was evaporated in vacuo. The product was purified by column chromatography; stationary phase: silica gel, mobile phase: dichloromethane: methanol (9: 1).

Yield: 550 mg (29%)
Melting point: 156-160 deg.

   C
IR (KBr, cm <-1>) 3285, 2925, 1656, 1546, 1430, 1338, 1165, 970, 750, 554
H-NMR (CDCl3): delta (ppm) 0.17 (m, 2H, pip-CH2), 0.44 (d, 3H, J = 6.03 Hz, pip-C3), 1.22 (d, 2H, J = 10.54 HZ, pip-CH2, pip-CH2), 2.27-2.74 (m, 2H, pip-CH2), 3.53 (s, 2H, pip-CH2 3.97 ( s, 2H, Ar-CH2), 4.32 (m, 2H, Ar-CH2), 7.22 (d, 2H, J = 8.29 HZ, Ar-H), 7.42 (d, 2H, J = 8.29 HZ, Ar-H), 7.64-7.75 (m, 3H, 3xnaphth-H), 7.77 (dd, 1H, J1 = 8.67 Hz, J2 = 1.88 HZ , naphth-H), 7.81-8.00 (m, 1H, naphth-H), 8.02-8.18 (m, 2H, 2xnaphth-H), 8.46 (d, 1H, J = 1.88HZ, NH-SO2)
Molecular weight: calculated: 502.5 (C25H31N4O3SCI); found:

   467 ((M-HCl) H <+>).

Example 14:

Tert -Butyl 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2- (4-morpholinylcarbonyl) -1-hydrazinecarboxylate

1.26 g (4.39 mmol) of bis-trichloromethyl carbonate were dissolved in 20 ml of dichloromethane and the solution was degassed with argon. 2.70 g (8.53 mmol) of terr-butyl 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -1-hydrazinecarboxylate was dissolved in 30 ml of dichloromethane, 1.65 g (12.79 mmol) of N-diisopropyl N-ethylamine was added and the mixture was added dropwise to the bis-trichloromethyl carbonate solution. During the dropwise addition, the mixture was cooled in an ice water bath. The mixture was stirred for an additional half hour at room temperature. 2.23 ml (25.60 mmol) of morpholine was added and stirred for a further hour at room temperature.

   The reaction mixture was then extracted with 4 X 25 ml of 10% citric acid solution, 30 ml of saturated NaHCO3 solution, followed by washing with 30 ml of purified water and 20 ml of saturated saline. The organic phase was dried over Na 2 SO 4. The solvent was evaporated in vacuo and the residue was dissolved in 10 ml of diethyl ether. A white precipitate was formed, which was filtered off by suction.

Yield: 1.81 g (52%)
Melting point: 125-128 deg.

   C
IR (KBr, cm <-1>) 3308, 2980, 2857, 1728, 1641, 1430, 1289, 1114, 1025, 873, 746, 604
H-NMR (CDC13): delta (ppm) 1.46 (s, 9H, C (CH) 3) 3, 2.03 (s, 3H, CO-CH3), 3.44 (t, 4H, J = 4.71 Hz, 2xMorph-CH2), 3.68 (t, 4H, J = 4.71 Hz, 2xMorph-CH2), 4.43 (d, 2H, J = 5.65 Hz, Ar-CH2), 4.49 (s, 2H, Ar-CH2 5.84 (d, 1H, NH-CO), 6.27 (s, 1H, NH-COO), 7.27 (s, 4H, Ar-H)
Molecular weight: calculated: 406 (C20H30N4O5); found: 407 (MH <+>).

Example 15:

2 - {[acetylamino) methyl] benzyl} -2- (4-morpholinylcarbonyl) hydrazinium chloride

Tert-Butyl 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2- (4-morpholinylcarbonyl) -1-hydrazinecarbonylate was dissolved in acetic acid (20 ml) and 1.81 g (4.46 mmol) gaseous HCl bubbled for half an hour. The acid was evaporated in vacuo and the residue was dissolved in diethyl ether.

   The flask wall was rubbed with a glass rod until a white powder was formed; Meanwhile, washing with diethyl ether was repeated twice.

Yield: 0.92 g (60%)
Melting point: 209-211 deg. C
IR (KBr, cm <-1>) 3427, 1685, 1560, 1432, 1274, 1112, 1022, 892, 571
H-NMR (CDCl3): delta (ppm) 1.88 (s, 3H, CO-CH3), 3.46 (d, 4H, J = 4.90 Hz, 2xMorph-CH2), 3.61 (d, 4H, J = 4.90Hz, 2xMorph-CH2), 4.25 (d, 2H, J = 6.03Hz, Ar-CH2), 4.50 (s, 2H, Ar-CH2), 7.28 (s, 4H, Ar-H), 8.43 (s, NH-CO)
Molecular weight: calculated: 342.5 (C15H23N4O3Cl); found:

   307 ((M-HCl) H <+>, 100).

Example 16:

N- (4 - {[1- (4-Morpholinylcarbonyl) -2- (1-naphthylsulfonyl) hydrazino] methyl} benzyl) acetamide

0.92 g (2.69 mmol) of 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2- (4-morpholinylcarbonyl) hydrazine chloride and 0.67 g (2.95 mmol) of naphthalene-2 Sulfonyl chloride was dissolved in dichloromethane (25 ml), 1.04 g (8.06 mmol) of diisopropylethylamine was added and stirred at room temperature for 3 days. The mixture was extracted with 4 X 25 ml of 10% citric acid and 30 ml of saturated NaHC3 solution. The organic phase was washed with 30 ml of purified water and 30 ml of saturated saline and dried over Na 2 SO 4. The dichloromethane was evaporated in vacuo and a pale brown-yellow, foamy solid was formed.

Yield: 0.66 g (50%)
Melting point: 84-88 deg.

   C
IR (KBr, cm <-1>) 3426, 2856, 1655, 1420, 1340, 1274, 1166, 1114, 1024, 752, 547
H-NMR (CDCl3): delta (ppm) 2.05 (s, 3H, CH3), 3.14 (s, 4H, 2xMorph-CHz), 3.33-3.40 (m, 2H, morphine-CH2 3.58-3.81 (m, 2H, morphine-CH2 4.30 (m, 2H, Ar-CH2 4.41 (d, 2H, J = 5.65 Hz, Ar-CH <2) 5.77 (s, 1H, NH-CO), 7.19 (m, 4H, Ar-H), 7.38 (s, 1H, naphth-H), 7.68 (m, 2H, 2xnaphth-H), 7.81 (dd, J1 = 8.67 Hz, J2 = 1.86 Hz, naphth-H), 7.95 (m, 3H, 3xnaphth-H), 8.44 (s, NH --SO.sub.2)
Molecular weight: calculated: 496 (C25H28N4O5S); found: 497 (MH <+>).

Example 17:

(4 - {[1- (4-Morpholinylcarbonyl) -2- (1-naphthylsulfonyl) hydrazino] methyl} phenyl) methanamine hydrochloride
0.66 g (1.33 mmol) of N- (4 - {[1- (4-morpholinylcarbonyl) -2- (1-naphthylsulfonyl) hydrazino] methyl} benzyl) acetamide was dissolved in 30 ml of preheated isopropyl alcohol (60 ° C) ) solved. 30 ml of 4M HCl was added and the mixture was refluxed for 5 hours.

   The solvent was evaporated in vacuo. The product was purified by column chromatography; stationary phase: silica gel, mobile phase: dichloromethane: methanol (9: 1).

Yield: 340 mg (52%)
Melting point: 124-126 deg. C
IR (KBr, cm <-1>) 3411, 16 662, 1504, 1459, 1419, 1335, 12 272, 1211, 1166, 1113, 1067, 1023, 830, 754, 688, 544
H-NMR (CDCl3): delta (ppm) 2.96 (m, 2H, Morph-C2 3.11 (m, 6H, 3xMorph-CH2 3.97 (d, 2H, J = 5.66 Hz, Ar) CH2 4.17-4.52 (m, 2H, Ar-C2 7.22 (d, 2H, J = 7.53 Hz, Ar-H), 7.41 (d, 2H, J = 7.92 Hz , Ar-H), 7.82-7.66 (m, 3H, 3xnaphth-H), 7.99-7.84 (m, 1H, naphth-H), 8.03-8.21 (m, 3H, 3xnaphth-H), 8.47 (s, 1H, NH-SO2)
Molecular weight: calculated: 490.5 (C25H31N4O3SCI); found:

   455 ((M-HCl) H <+>).

Example 18:

Tert -Butyl 2- {4- [acetylamino) methyl] benzyl} -2 - {[cyclopentyl (methyl) amino] carbonyl} -1-hydrazinecarboxylate

1.26 g (4.39 mmol) of bis-trichloromethyl carbonate were dissolved in 20 ml of dichloromethane and brought to 0 °. C cooled. The solution of 2.00 g (6.83 mmol) of tert-butyl 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -1-hydrazinecarboxylate and 1.65 g (12.79 mmol) of N-diisopropyl-N- Ethylamine in 30 ml of dichloromethane was added dropwise and the temperature was slowly increased. The resulting mixture was stirred at room temperature for half an hour, followed by the addition of 2.14 g (21.60 mmol) of N-cyclopentyl-N-methylamine. After stirring for an additional hour, the solvent was evaporated in vacuo and the residue was dissolved in 50 ml of ethyl acetate.

   The solution was extracted with 4 X 25 ml of 10% aqueous citric acid solution and 30 ml of aqueous sodium bicarbonate. The organic phase was washed with water and saline and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in 10 ml of diethyl ether. After 2 days, the precipitate was collected and further purified by column chromatography (dichloromethane / methanol 20: 1).

Yield: 1.31 g (46%)
Melting point: 124-127 deg.

   C
IR (KBr, cm <-1>) 3274, 2974, 1726, 1640, 1550, 1369, 1285, 1160, 1067, 794
H NMR (CDCl3): delta (ppm) 1.44 (s, 9H, (CH3) 3), 1.46-1.85 (m, 8H, CH2), 2.03 (s, 3H, CO-) CH3), 2.32 (m, 1H, CH), 2.80 (s, 3H, N-CH3), 4.38 (m, 2H, Ar-CH2), 4.42 (d, 2H, J = 5.64Hz, Ar-CH2), 5.93 (s, 1H, NH-COO), 6.54 (s, 1H, NH-CO), 7.28 (m, Ar-H)
Molecular weight: calculated: 418 (C22H34N4O4); Found: 419 ((MH <+>).

Example 19:

2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2 - {[cyclopentyl (methyl) amino] carbonyl} hydrazinium chloride

1.20 g (2.87 mmol) of tert-butyl 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2 - {[cyclopentyl (methyl) ammo] carbonyl} hydrazinecarboxylate were dissolved in 20 ml of acetic acid, and gaseous hydrogen chloride was bubbled for 30 minutes. The acid was evaporated in vacuo and diethyl ether was added to the residue.

   After vigorous stirring and numerous washes with diethyl ether, a white solid was obtained.

Yield: 765 mg (77%)
Melting point: 165-169 deg. C
IR (KBr, cm <-1>) 3254, 2987, 1782, 1653, 1548, 1425, 1234, 1022, 798, 744, 602, H-NMR (CDCl3): delta (ppm) 1.51-1.89 (m, 8H, CH3), 2.02 (s, 3H, CO-CH3), 2.49 (m, 1H, CH), 2.87 (s, 3H, N-CH3), 4.24 (m, 2H, Ar). CH2), 4.52 (s, 2H, Ar-CH2), 7.22 (m, Ar-H), 10.12 (s, 1H, NH-CO)
Molecular weight: calculated: 445 (C17H27N4O2Cl); found:

   319 ((M-HCl) H <+>.

Example 20:

1- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -N-cyclopentyl-N-methyl-2- (2-naphthylsulfonyl) -1-hydrazinecarboxamide

733 mg (2.07 mmol) of 2- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -2 - {[cyclopentyl (methyl) amino] carbonyl} hydrazine chloride, 481 mg (2.12 mmol) of naphthalene-2 sulfonyl chloride and 843 mg (6.54 mmol) of N-diisopropyl-N-ethylamine were dissolved in dichloromethane (25 ml) and stirred at room temperature for 3 days. The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in 30 mL of ethyl acetate and extracted with 4 X 25 mL of 10% citric acid and 30 mL of aqueous NaHCO3.

   The organic phase was further washed with water (30 ml) and saline (30 ml), dried over Na 2 SO 4 and the solvent removed to give a pale yellow solid, which was further purified by recrystallization from ethanol.

Yield: 211 mg (20%)
Melting point: 91-93 deg.

   C
IR (KBr, cm <-1>) 3448, 2962, 1772, 1651, 1558, 1395, 1262, 1166, 1025, 859, 803, 669, 549
H-NMR (CDCl 3): delta (ppm) 1.27-1.73 (m, 8H, CH 2), 2.06 (s, 3H, CO-CH 3), 2.29 (m, 1H, CH), 2.60 (s, 3H, N-CH3), 4.32 (m, 2H, Ar-CH2), 4.44 (d, 2H, J = 6.13Hz, Ar-CH2) 7.15 (i.e. , 2H, J = 8.13 Hz, Ar-H <3, 5>), 7.21 (d, 2H, J = 8.11 Hz, Ar-H <2, 6>), 7.42 (s, NHSO2), 7.67 (dqu, 2H, J1 = 7.51 Hz, J2 = 1.79 Hz, Ar-H), 7.79 (dd, 1H , J1 = 8.70 Hz, J2 = 1.76 Hz, Ar-H), 7.90 (s, 1H, NH-CO), 7.97 (m, 3H, Ar-H), 8.43 ( s, 1H, ArH)
Molecular weight: calculated: 508 (C27H32N4O4S); found: 509 (MH <+>).

Example 21:

(4 - {[1 - {[Cyclopentyl (methyl) amino] carbonyl} -2- (2-naphthylsulfonyl) hydrazino] methyl} phenyl) methanaminium chloride

The solution of 183 mg (0.36 mmol) of 1- {4 - [(acetylamino) methyl] benzyl} -N-cyclopentyl-N-methyl-2- (2-naphthylsulfonyl) -1-hydrazinecarboxamide in 30 ml Isopropanol at 60 ° C.

   C (30 ml) was treated with 4M HCl (30 ml) and refluxed for 5 hours. The solvents were removed in vacuo and the product purified by column chromatography (dichloromethane / methanol 9: 1).

Yield: 81 mg (45%)
Melting point: 170-173 deg. C
IR (KBr, cm <-1>) 3425, 3137, 2968, 1744, 1591, 1275, 1122, 973, 815, 637
H NMR (CDCl3): delta (ppm) 1.18-1.75 (m, 8H, CH2), 2.34 (m, 1H, CH), 2.57 (s, 3H, N-CH3), 4.22 (m, 2H, Ar-CH2), 4.43 (m, 2H, Ar-CH2), 7.18 (d, 2H, J = 8.35 Hz, Ar-H <3, 5>), 7.24 (d, 2H, J = 8.27 Hz, Ar-H <2, 6>), 7.37 (s, NHSO2), 7.64 (dqu, 2H, J1 = 8.29 Hz, J2 = 1.84 Hz, Ar-H), 7.82 (dd, 1H , J1 = 8.56 Hz, J2 = 1.72 Hz, Ar-H), 8.04 (m, 3H, Ar-H), 8.41 (s, 1H, Ar-H)
Molecular weight: calculated: 503 (C25H31N4O3SCl); found:

   467 ((M-HCl) H <+>)

Example 22:

N- (3-cyanobenzyl) -N ¾- (2-naphthoyl) -1 -azepancarbohydrazide

2- (1-Azepanylcarbonyl) -2- (3-cyanobenzyl) hydrazinium chloride (312 mg, 1.03 mmol), N-diisopropyl-N-ethylamine (2 mL) and benzoyl chloride (210 mg, 1.11 mmol ) were dissolved in dichloromethane (30 ml). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 days. The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in 30 mL of ethyl acetate and extracted with 4 X 25 mL of 10% citric acid and 30 mL of aqueous NaHCO3. The organic phase was further washed with water (30 ml) and saline (30 ml), dried over Na 2 SO 4 and the solvent was removed. The product was washed with diethyl ether and further purified by recrystallization from ethanol.

Yield: 378 mg (86%)
Melting point: 139-141 deg.

   C
IR (KBr, cm <-1>) 3281, 2922, 2236, 1637, 1524, 1289, 1210, 1010, 912, 822, 759, 698, 595
H-NMR (CDCl 3): delta (ppm) 1.55 (m, 4H, Azep-CH 2), 1.73 (m, 4H, Azep-CH 2), 3.49 (t, 4H, J = 5.84 Hz, Azep-CH2), 4.69 (s, 2H, Ar-CH2), 7.42 (t, 1H, J = 7.89 Hz, Ar-H), 7.59 (m, 3H, Ar). H), 7.69 (d, 1H, J = 7.91 Hz, Ar-H), 7.77 (dd 1H, J1 = 8.29 Hz, J2 = 1.88 Hz, Ar-H), 7.81 (s, 1H, Ar-H), 7.89 (m, 3H, Ar-H), 8.24 (s, 1H, Ar-H), 8.47 (s, 1H, NH-CO )
Molecular weight: calculated 426 (C26H26N4O2); found: 427 (MH <+>)

Example 23:

Amino (3 - {[1- (1-azepanylcarbonyl) -2- (2-naphthoyl) hydrazino] methyl} phenyl) methaniminium chloride

N- (3-Cyanobenzyl) -N ¾- (2-naphthoyl) -1-azepanecarbohydrazide (212 mg, 0.50 mmol) was suspended in pure ethanol (20 mL) and gaseous hydrogen chloride bubbled for half an hour ,

   The reaction mixture was left at room temperature for 4 hours, then the solvent was removed in vacuo. The residue was washed with diethyl ether (2 × 20 ml) and dissolved in pure ethanol. The solution was treated with gaseous ammonia for 10 minutes and the ethanol was removed under reduced pressure.

Yield: 193 mg (81%)
Melting point: 247-251 deg.

   C
TR (KBr, cm-1) 3410, 1773, 1652, 1559, 1394, 955, 753
H NMR (CDCl3): delta (ppm) 1.58 (m, 4H, Azep CH2) 1.76 (m, 4H, Azep CH2), 3.02 (t, 4H, J = 5.15 Hz , Azep-CH2), 3.82 (s, 2H, Ar-CH2) 7.61-7.67 (m, 5H, Ar-H), 7.84 (m, 2H, Ar-H), 7, 98-8.12 (m, 3H, Ar-H), 8.42 (s, 1H, Ar-H), 9.39 (s, 1H, NH-CO), 9.43 in 9.58 (2s , 4H, H2N-C = NH2 <+>)
Molecular weight: calculated: 479 (C26H30N5O2CI); Found: 444 ((M-HCl) H <+>)

Example 24:

3 - {[1- (1-Azepanylcarbonyl) -2- (2-naphthoyl) hydrazino] methyl} -N ¾-hydroxybenzenecarboximidamide

N- (3-Cyanobenzyl) -N ¾- (2-naphthoyl) -1-azepanecarbohydrazide (133 mg, 0.31 mmol) and hydroxylamine (12 mg, 0.36 mmol) were dissolved in pure ethanol (10 mL ) and refluxed overnight. The solvent was evaporated and the product purified by column chromatography (dichloromethane / methanol 9: 1).

Yield: 107 mg (75%)
Melting point: 129-131 deg.

   C
IR (KBr, cm-1) 3334, 2924, 1772, 1652, 1506, 1374, 1301, 1129, 954, 749 H-NMR (CDCl3): delta (ppm) 1.43 (m, 4H, Azep-CH2) , 1.57 (m, 4H, Azep-CH2), 3.36 (t, -4H, J = 5.61 Hz, Azep-CH2), 4.53 (s, 2H, Ar-CH2), 5, 69 (s, 1H, NOH), 7.31 (t, 1H, J = 7.76 Hz, Ar-H), 7.49 (m, 3H, Ar-H), 7.57 (m, 2H, Ar-H), 7.78 (dd, 1H, J1 = 8.69 Hz, J2 = 1.83 Hz, Ar-H), 7.89 (m, 3H, Ar-H), 8.38 (s , 1H, Ar-H), 9.57 (s, 2H, NH2), 10.64 (s, 1H, NH-CO).
Molecular weight: calculated: 459 (C26H29N5O3); Found: 460 ((MH <+>).

Example 25:

[0126] Results of the biological assays:
The following table gives the results of the biological assay for compounds according to the previous examples. The other compounds represent further, not particularly illustrated by an exemplary embodiments.

[0127]
  <EMI ID = 45.0>



    

Claims (11)

1. Verbindung der Formel (I) <EMI ID=46.0> wobei R<1> und Z H sind oder ein Rest mit der Formel <EMI ID=47.0> unter der Voraussetzung, dass eines von R<1> und Z H ist; R<4> = H, Alkyl (C1-C3), OH, O-Alkyl (C1-C3), NH2; R<2> einen Rest der Formel darstellt <EMI ID=48.0> wobei R<5> = H, Alkyl (C1-C3), COOR<10>, R<6> = H, Alkyl (C1-C3), COOR<10>, R<7> = H, Alkyl (C1-C3), COOR<10>, R<10> = H, Alkyl (C1-C3) R<8> = H, Alkyl (C1-C3), Cycloalkyl (C3-C6) R<9> = H, Alkyl (C1-C3), Cycloalkyl (C3-C6) R<11> = H, Alkyl (C1-C3), Benzyl, X = CH2, O, S, Y = NR<12>, O, S, R<12> = H, COCH3, Alkyl (C1-C3); R<3> ist ein Rest der Formel <EMI ID=49.0> und pharmazeutisch akzeptable Salze davon. 1. Compound of formula (I)  <EMI ID = 46.0> wherein R <1> and Z are H or a radical of the formula  <EMI ID = 47.0> with the proviso that one of R <1> and Z is H; R 4 = H, alkyl (C 1 -C 3), OH, O-alkyl (C 1 -C 3), NH 2; R <2> represents a radical of the formula  <EMI ID = 48.0> where R 5 = H, alkyl (C 1 -C 3), COOR <10>, R <6> = H, alkyl (C1-C3), COOR <10>, R 7 = H, alkyl (C 1 -C 3), COOR <10>, R <10> = H, alkyl (C1-C3) R <8> = H, alkyl (C1-C3), cycloalkyl (C3-C6) R <9> = H, alkyl (C1-C3), cycloalkyl (C3-C6) R <11> = H, alkyl (C1-C3), benzyl, X = CH 2, O, S, Y = NR <12>, O, S, R <12> = H, COCH3, alkyl (C1-C3); R <3> is a radical of the formula  <EMI ID = 49.0> and pharmaceutically acceptable salts thereof. 2. Verbindung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung (4-{[1-{[Cyclopentyl(methyl)amino]carbonyl}-2-(2-naphthylsulfonyl)hydrazino]methyl}phenyl)methanaminium-chlorid ist. A compound according to claim 1, wherein the compound is (4 - {[1 - {[cyclopentyl (methyl) amino] carbonyl} -2- (2-naphthylsulfonyl) hydrazino] methyl} phenyl) methanaminium chloride. 3. Verfahren zur Herstellung der Verbindung nach Anspruch 1, wobei Z H ist, mit den folgenden Schritten: a) in dem Fall R<1>= <EMI ID=50.0> wird 4-Cyanobenzaldehyd der Formel (II) <EMI ID=51.0> mit BOC-carbazat der Formel (III) umgesetzt <EMI ID=52.0> zu der Verbindung der Formel (IV) <EMI ID=53.0> welche mittels Reduktion durch katalytische Hydrogenierung unter Verwendung von Pd als ein Katalysator zu der Verbindung (V) umgesetzt wird <EMI ID=54.0> welche mit Triphosgen und Amin der Formel (VI) reagiert <EMI ID=55.0> wobei R<5>, R<6> und R<7> die gleichen Bedeutungen haben wie in Anspruch 1, oder mit Triphosgen und Amin der Formel (VII oder VIII), <EMI ID=56.0> wobei Y die gleich Bedeutung wie in Anspruch 1 hat, oder mit Triphosgen und Amin der Formel (IX) <EMI ID=57.0> wobei R<8> und R<9> die gleichen Bedeutungen wie in Anspruch 1 haben, 3. A process for the preparation of the compound according to claim 1, wherein Z is H, comprising the following steps: a) in the case R <1> =  <EMI ID = 50.0> becomes 4-cyanobenzaldehyde of the formula (II)  <EMI ID = 51.0> reacted with BOC-carbazate of the formula (III)  <EMI ID = 52.0> to the compound of formula (IV)  <EMI ID = 53.0> which is converted to the compound (V) by reduction by catalytic hydrogenation using Pd as a catalyst  <EMI ID = 54.0> which reacts with triphosgene and amine of the formula (VI)  <EMI ID = 55.0> where R 5, R 6 and R 7 have the same meanings as in claim 1, or with triphosgene and amine of the formula (VII or VIII),  <EMI ID = 56.0> where Y has the same meaning as in claim 1, or with triphosgene and amine of the formula (IX)  <EMI ID = 57.0> wherein R <8> and R <9> have the same meanings as in claim 1, oder mit Triphosgen oder Amin der Formel (X), <EMI ID=58.0> wobei R<11> und X die gleichen Bedeutungen wie in Anspruch 1 haben, zu der Verbindung (XI) <EMI ID=59.0> wobei R<2> die gleiche Bedeutung wie in Anspruch 1 hat, und von der die BOC-Schutzgruppe bei Raumtemperatur unter Verwendung des Einströmens von gasförmigem Chlorwasserstoff in Essigsäure entfernt wird, um die Verbindung (XII) zu erhalten, <EMI ID=60.0> wobei R<2> die gleiche Bedeutung wie in Anspruch 1 hat; welche dann mit der aktivierten Naphtylsulfonylaminosäure oder mit aktivierter Arylalkylcarboxylsäure zu der Verbindung (XIII) reagiert <EMI ID=61.0> wobei R<2> und R<3> die gleichen Bedeutungen wie in Anspruch 1 haben;  or with triphosgene or amine of the formula (X),  <EMI ID = 58.0> wherein R <11> and X have the same meanings as in claim 1, to the compound (XI)  <EMI ID = 59.0> wherein R <2> has the same meaning as in claim 1 and from which the BOC protecting group is removed at room temperature by using gaseous hydrogen chloride in acetic acid to obtain the compound (XII)  <EMI ID = 60.0> wherein R <2> has the same meaning as in claim 1; which then reacts with the activated naphthylsulfonylamino acid or with activated arylalkylcarboxylic acid to give the compound (XIII)  <EMI ID = 61.0> wherein R <2> and R <3> have the same meanings as in claim 1; welche dann mit Hydroxylamin in reinem Ethanol zu der Verbindung mit der Formel (XIV) transformiert wird <EMI ID=62.0> wobei R<1> = <EMI ID=63.0> R<2> und R<3> die gleichen Bedeutungen wie in Anspruch 1 haben und R<4> eine OH-Gruppe ist; und welche dann mit einströmendem gasförmigem Chlorwasserstoff in ethanolischer Lösung, Zugabe von Ammoniumacetat, gefolgt bei einem weiteren Einströmen von Chlorwasserstoff zu der Verbindung (XV) umgewandelt wird, <EMI ID=64.0> wobei R<1 = > <EMI ID=65.0> R<2> und R<3> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben und R<4> Wasserstoff ist; which is then transformed with hydroxylamine in pure ethanol to the compound of formula (XIV)  <EMI ID = 62.0> where R <1> =  <EMI ID = 63.0> R <2> and R <3> have the same meanings as in claim 1 and R <4> is an OH group; and which is then converted with incoming gaseous hydrogen chloride in ethanolic solution, addition of ammonium acetate, followed by a further inflow of hydrogen chloride to the compound (XV),  <EMI ID = 64.0> where R <1 =>  <EMI ID = 65.0> R <2> and R <3> have the same meanings as in the formula (I) and R <4> is hydrogen; b)in dem Fall R1 = <EMI ID=66.0> wird 4-Cyanobenzaldehyd der Formel (II) <EMI ID=67.0> mit Ethylenglykol in Anwesenheit von 4-Toluolsulfonsäure in die Verbindung (XVI) umgewandelt <EMI ID=68.0> welche mit Lithium-Aluminiumhydrid in die Verbindung der Formel (XVII) reduziert wird <EMI ID=69.0> welche mit Acetanhydrid zu der Verbindung (XVIII) reagiert <EMI ID=70.0> welche dann mit 90%iger Methansäure zu der Verbindung (XIX) umgewandelt wird <EMI ID=71.0> welche mit BOC-carbazat der Formel (III) <EMI ID=72.0> zu der Verbindung der Formel (XX) umgewandelt wird <EMI ID=73.0> welche mittels Reduktion durch katalytische Hydrogenierung in die Verbindung (XXI) umgewandelt wird <EMI ID=74.0> welche mit Triphosgen und Amin der Formel (VI) reagiert <EMI ID=75.0> wobei R<5>, R<6> und R<7> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben, b) in the case R1 =  <EMI ID = 66.0>  becomes 4-cyanobenzaldehyde of the formula (II)  <EMI ID = 67.0> converted into the compound (XVI) with ethylene glycol in the presence of 4-toluenesulfonic acid  <EMI ID = 68.0> which is reduced with lithium aluminum hydride in the compound of formula (XVII)  <EMI ID = 69.0> which reacts with acetic anhydride to give the compound (XVIII)  <EMI ID = 70.0> which is then converted to the compound (XIX) with 90% methanoic acid  <EMI ID = 71.0> which with BOC-carbazate of the formula (III)  <EMI ID = 72.0> is converted to the compound of the formula (XX)  <EMI ID = 73.0> which is converted by reduction by catalytic hydrogenation into the compound (XXI)  <EMI ID = 74.0> which reacts with triphosgene and amine of the formula (VI)  <EMI ID = 75.0> wherein R <5>, R <6> and R <7> have the same meanings as in the formula (I), oder mit Triphosgen und Amin der Formel (VII oder VIII), <EMI ID=76.0> wobei Y die gleiche Bedeutung wie in der Formel (I) hat, oder mit Triphosgen und Amin der Formel (IX) <EMI ID=77.0> wobei R<8> und R<9> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben, oder mit Triphosgen und Amin der Formel (X) <EMI ID=78.0> wobei R<11> und X die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben, zu der Verbindung (XXII) <EMI ID=79.0> wobei R<2> die gleiche Bedeutung wie in der Formel (I) hat, von der die BOC-Schutzgruppe durch HCl (g) in AcOH bei Raumtemperatur entfernt wird, um die Verbindung (XXIII) zu erhalten, <EMI ID=80.0> wobei R<2> die gleiche Bedeutung wie in der Formel (I) hat, welche mit aromatischem Sulfonylchlorid zu der Verbindung (XXIV) reagiert <EMI ID=81.0> wobei R<2> und R<3> die gleichen Bedeutungen wie in Anspruch 1 haben,  or with triphosgene and amine of the formula (VII or VIII),  <EMI ID = 76.0> where Y has the same meaning as in the formula (I), or with triphosgene and amine of the formula (IX)  <EMI ID = 77.0> where R <8> and R <9> have the same meanings as in the formula (I), or with triphosgene and amine of the formula (X)  <EMI ID = 78.0> wherein R <11> and X have the same meanings as in the formula (I), to the compound (XXII)  <EMI ID = 79.0> wherein R 2 has the same meaning as in the formula (I) from which the BOC protecting group is removed by HCl (g) in AcOH at room temperature to obtain the compound (XXIII)  <EMI ID = 80.0> wherein R <2> has the same meaning as in the formula (I) which reacts with aromatic sulfonyl chloride to the compound (XXIV)  <EMI ID = 81.0> wherein R <2> and R <3> have the same meanings as in claim 1, welche dann durch Erwärmen bis zum Kochen mit 5M HCl zu der Verbindung (XXV) umgewandelt wird <EMI ID=82.0> wobei R1 = <EMI ID=83.0> R<2> und R <3> die gleichen Bedeutungen wie in der Formel (I) haben.  which is then converted to compound (XXV) by heating to boiling with 5M HCl  <EMI ID = 82.0> where R1 =  <EMI ID = 83.0> R <2> and R <3> have the same meanings as in the formula (I). 4. Verwendung der Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung. 4. Use of the compound according to claim 1 for the preparation of a pharmaceutical composition. 5. Verfahren nach Anspruch 3, wobei Z <EMI ID=84.0> ist, dadurch gekennzeichnet, dass die Ausgangsverbindung 3-Cyanobenzaldehyd ist. 5. The method of claim 3, wherein Z  <EMI ID = 84.0>  is characterized in that the starting compound is 3-cyanobenzaldehyde. 6. Verwendung nach Anspruch 4, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung ein Arzneimittel mit koagulationshemmender Wirkung ist. 6. Use according to claim 4, wherein the pharmaceutical composition is an anticoagulant drug. 7. Verwendung nach Anspruch 4, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung ein Inhibitor von Thrombin ist. Use according to claim 4, wherein the pharmaceutical composition is an inhibitor of thrombin. 8. Verwendung nach Anspruch 4, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung ein dualer Inhibitor von Thrombin und Faktor Xa ist. Use according to claim 4, wherein the pharmaceutical composition is a dual inhibitor of thrombin and factor Xa. 9. Verwendung nach Anspruch 4, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung Thrombin im Blut von Menschen und anderen Säugetieren hemmt. Use according to claim 4, wherein the pharmaceutical composition inhibits thrombin in the blood of humans and other mammals. 10. Verwendung nach Anspruch 4, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung Fibrin- und Thrombusbildung im Blut von Menschen und anderen Säugetieren hemmt. Use according to claim 4 wherein the pharmaceutical composition inhibits fibrin and thrombus formation in the blood of humans and other mammals. 11. Pharmazeutische Zusammensetzung mit einer therapeutisch wirksamen Menge der Verbindung nach Anspruch 1 und pharmazeutisch akzeptablen Zusatzstoffen. 11. A pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of the compound of claim 1 and pharmaceutically acceptable additives.
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