CH683238A5 - Hydroquinidine, comme agent thérapeutique et son utilisation dans une composition pharmaceutique. - Google Patents

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

CH 683 238 A5

Description

L'invention a pour objet un agent thérapeutique nouveau destiné au traitement thérapeutique de tumeurs cancéreuses, plus précisément un agent destiné a renforcer l'efficacité de substances cytotoxi-ques utilisées dans le traitement de tumeurs cancéreuses développant le phénomène de résistance multiple aux agents anti-cancéreux (résistance multidrogue - multiple drug résistance «MDR»).

Le phénomène de la résistance multidrogue est connu et ne se limite pas seulement aux agents anti-cancéreux. A ce jour, diverses explications sont avancées quant à la compréhension des mécanismes mis en jeu. Pour ce qui est du comportement des cellules tumorales cancéreuses, on a pu mettre en évidence plusieurs systèmes de résistance distincts: s'agissant par exemple de la perméabilité de la membrane cellulaire, l'intervention d'une glyco-protéine spécifique (P-gp) est reconnue, mais il est admis que d'autres facteurs protéiques peuvent intervenir.

L'approche de ce phénomène est donc multiple, sinon complexe, ce qui rend d'autant plus difficile la recherche de solutions appropriées.

L'application de substances ou drogues cytotoxiques dans le traitement des tumeurs cancéreuses se heurte à plusieurs obstacles. La plupart des drogues utilisées à cet effet présentent premièrement une toxicité intrinsèque, non distinctive, source d'effets secondaires néfastes; d'autre part, au vu de cette toxicité intrinsèque, leur administration au patient s'en trouve quantitativement limitée et, dans de nombreux cas, l'activité souhaitée au niveau des tumeurs n'est plus suffisante.

Divers moyens ont été déjà proposés en vue de surmonter de tels obstacles, comme ia vectorisation de la substance cytotoxique, par exemple sous forme de son incorporation dans un liposome. Dans un tel cas cependant, si la toxicité intrinsèque de la substance cytotoxique est temporairement occultée et donc avec des effets secondaires limités pour le patient, son activité sur le site tumoral n'est pas forcément rétablie au niveau d'efficacité souhaité.

En outre, pour peu que les cellules tumorales soumises à ce traitement développent le phénomène de résistance multidrogue, innée ou acquise, la substance cytotoxique perd quasiment toute efficacité.

On connaît à ce jour plusieurs substances montrant in vitro une activité inhibitrice de la MDR: ce sont pour l'essentiel des substances non cytotoxiques, généralement de caractère hydrophobe, tels des alcaloïdes par exemple. In vitro, leur utilisation conjointe à une drogue cytotoxique apparaît comme satisfaisante, le phénomène dit MDR étant significativement inhibé au niveau cellulaire pour que la dite drogue joue pleinement son rôle.

Il en est tout autrement, cependant, lorsque l'on tente une transposition de telles observations sur un organisme vivant. Les substances inhibitrices de la MDR, alcaloïdes ou autres, présentent également une toxicité intrinsèque qui limite leur administration en-deçà d'un seuil (taux sérique) où l'activité recherchée (inhibition de la MDR) est également perdue. En outre, bien que la substance cytotoxique soit administrée sous forme libre, ou sous forme de liposome par exemple, on a observé comme facteur limitatif important une augmentation concommittante de la toxicité intrinsèque de la drogue cytotoxique due à un changement significatif de sa distribution pharmacologique dans l'organisme. De fait, face à de tels inconvénients, l'homme du métier se trouve particulièrement démuni de moyens, s'agissant du traitement in vivo de tumeurs cancéreuses développant le phénomène de résistance multidrogue (MDR). La quinine, récemment proposée à titre de substance inhibitrice de la MDR, illustre exactement ce cas de figure.

L'invention a le mérite d'apporter une solution originale et particulièrement efficace au problème évoqué plus haut, ceci d'autant plus qu'elle vise l'utilisation de substances de structure voisine de celle de la quinine. De manière surprenante cependant, de telles substances se sont révélées, à dose comparable, plus efficaces et en même temps moins toxiques dans le contexte présent que la quinine. Comme on l'a vu ci-dessus, cette voie semblait cependant compromise, sinon exclue, quant à l'utilisation de tels alcaloïdes à titre de substances inhibitrices de la résistance multiple aux agents anti-cancéreux, sur le plan thérapeutique.

L'invention décrit l'utilisation d'hydroquinidine à titre de substance inhibitrice de la résistance multidrogue (MDR) dans le traitement de tumeurs cancéreuses.

L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique, en particulier une composition pharmaceutique développant une activité inhibitrice de la MDR, contenant de l'hydroquinidine à titre de principe actif.

L'hydroquinidine est une substance connue, de la classe des alcaloïdes, proposée comme agent thérapeutique antiarythmisant. Sa pharmacologie est connue, en particulier sa toxicité.

Selon l'invention, l'hydroquinidine peut être avantageusement utilisée, sous forme de composition pharmaceutique, de préférence solubilisée dans un milieu approprié à une administration parentérale, voie sous-cutanée intra-musculaire ou intra-péritonéale. Au sein de telles compositions, l'hydroquinidine peut être également associée à un véhicule particulaire telle une microcapsule ou microparticule, une nanocapsule ou nanoparticule. A titre de véhicule, on peut avantageusement utiliser un liposome.

Selon l'invention, l'effet inhibiteur souhaité peut être obtenu à des doses auxquelles on n'observe pas chez les sujets traités les effets secondaires néfastes dus à la toxicité intrinsèque de l'hydroquinidine. Bien entendu, les doses thérapeutiques optimales dépendront du type de tumeur traité, de la nature de l'agent cytotoxique utilisé conjointement, du sujet traité ou encore d'autres facteurs que l'homme du métier sera en mesure d'appréhender.

2

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

CH 683 238 A5

Des substances cytotoxiques sensibles au phénomène de la MDR, dont l'activité peut être avantageusement potentiée par l'action concommitante d'hydroquinidine, sont mentionnées ci-après; cette énu-mération n'est pas exhaustive pour autant.

Ce sont pour l'essentiel des substances hydrophobes, ayant en commun un résidu azoté chargé positivement, tels les alcaloïdes de la vinca, les anthracyclines ou produits analogues, les épipodophyllo-toxines ou les antibiotiques antitumoraux par exemple. On peut citer en particulier la vincristine, la vin-blastine, la vindésine, la vinorelbine, la doxorubicine, la déoxydoxorubicine, la tétrahydropyranyladriamy-cine, l'épidoxorubicine, l'aclacinomycine, le déméthoxydaunorubisanthrène, la mithramycine, Pactinomy-cine D, la puromycine, l'étoposide, le ténoposide, l'émétine, l'éthidium bromide, la cytochalasine, la col-chicine et le taxol.

Grâce à l'invention, on est en mesure de proposer un traitement thérapeutique approprié concernant de nombreuses tumeurs cancéreuses présentant à des degrés divers une résistance multiple aux agents anti-cancéreux (MDR). A ce propos, on peut citer entre autres la leucémie aiguë myeloblastique, la leucémie aiguë lymphoblastique, le neuroblastome, le cancer du poumon à petites cellules, le cancer de l'ovaire, le lymphome malin non hodgkinien et le plasmocytome diffus. Ce sont des cancers qui présentent une MDR induite, en réponse au traitement avec un agent cytotoxique.

On peut également traiter des cancers présentant une MDR innée ou, pour le moins, des cellules cancéreuses caractérisées par la présence, avant tout traitement, du gène correspondant de la P-gp (mdr 1) à un taux relativement élevé. Ce sont, par exemple, l'adénocarcinome du colon, l'adénocarcino-me du rein, le carcinome corticosurrénalien, le phéochromocytome, les sarcomes de l'enfant et la leucémie secondaire. Cette liste n'est cependant pas exhaustive.

Les expérimentations décrites ci-après illustreront la présente invention de manière plus détaillée, sans pour autant la limiter.

a) Mise en évidence in vitro de l'activité inhibitrice a.1. Des portions de 100 000 cellules provenant de la lignée DHD/K12/TRb («drug résistant cell line»/MDR+) ont été réparties en séries et implantées sur lamelle, 24 heures avant traitement comme indiqué ci-après, l'agent cytotoxique étant de la doxorubicine (DXR) contenant 3% de DXR 14C.

témoins

-

série zéro doxorubicine (DXR) à 10 ng/ml série 1

DXR (10 ng/ml) + Hydroquinidine (15 ng/ml)

série 2

DXR (10 ng/ml) + quinine (15 p.g/ml)

série 3

DXR (10 ng/ml) + vérapamil (15 ng/ml)

Les séries 2 et 3 sont utilisées à titre comparatif, s'agissant de substances inhibitrices de la MDR connues. Après une incubation de deux heures, suivie de trois lavages successifs au moyen de PBS-BSA, trypsinisation et comptage de cellules, on a procédé à la mesure de la radioactivité intracellulaire à l'aide d'un compteur bèta.

De ces mesures, on en déduit un taux de doxorubicine intracytoplasmique directement lié à l'effet inhibiteur de la substance testée. Ces résultats sont rassemblés ci-après:

Série no.

Agent

Radioactivité

0

DXR seule

200 cpm

1

DXR + hydroquinidine

875 cpm

2

DXR + quinine

850 cpm

3

DXR + vérapamil

1050 cpm

On constate ainsi que l'hydroquinidine exerce un effet inhibiteur significatif de la MDR. Cet effet est pour le moins comparable à celui constaté pour la quinine.

b) Mise en évidence ex vivo de l'activité inhibitrice b.1. A divers groupes de 3 rats chacun on a injecté par voie intra-péritonéale l'une des deux substances inhibitrices ci-après, aux doses suivantes:

Hydroquinidine : 75 mg/kg (1)

Quinine : 75 mg/kg (2)

3

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

CH 683 238 A5

Une heure après l'injection i.p., on a prélevé des échantillons sanguins de chaque sujet, par ponction cardiaque. On a procédé de même concernant des rats témoins, non traités préalablement.

b.2. Des portions de 100 000 cellules DHD/K12/TRb (voir a.1) ont été implantées 24 heures avant le traitement proprement dit, comme indiqué ci-après, l'agent cytotoxique étant de la doxorubicine (DXR) contenant 3% de DXR 14C.

témoins

:

série zéro

: DXR (15 ng/ml) + sérum rats témoins série 1

: DXR (15 ng/ml) + sérum rats (1)

série 2

: DXR (15 ng/ml) + sérum rats (2)

Après une incubation de deux heures, suivie de trois lavages successifs au moyen de PBS-BSA, trypsinisation et comptage de cellules, on a procédé à la mesure de la radioactivité intracellulaire à l'aide d'un compteur bèta.

De ces mesures, on en déduit un taux de doxorubicine intracytoplasmique directement lié à l'effet inhibiteur de la substance testée. Ces résultats sont rassemblés ci-après:

Série no.

Agent

Radioactivité

0

DXR seule

250 cpm

1

DXR + hydroquinidine

750 cpm

2

DXR + quinine

500 cpm

On constate ainsi, pour une même concentration sérique de substance inhibitrice, que le taux de DXR intracytoplasmique de la série 1 (DXR + hydroquinidine) est de trois fois supérieur à celui de la série zéro (DXR seule); de même, ce taux est environ une fois et demie supérieur à celui de la série 2 (DXR + quinine).

Claims (5)

Revendications

1. Hydroquinidine à titre de substance inhibitrice de la résistance multidrogue dans le traitement de tumeurs cancéreuses.

2. Hydroquinidine comme agent pour renforcer l'activité de substances cytotoxiques dans le traitement de tumeurs cancéreuses développant le phénomène de résistance multidrogue.

3. Composition pharmaceutique développant une activité inhibitrice de la résistance multidrogue comprenant, à titre d'agent actif, de l'hydroquinidine.

4. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que l'agent actif est dans un véhicule particulaire telle une microcapsule ou microparticule, une nanocapsule ou une nanoparticule.

5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que le véhicule particulaire est un liposome.

4