CH650273A5 - PLASMINOGENIC PREPARATION AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF. - Google Patents
PLASMINOGENIC PREPARATION AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF. Download PDFInfo
- Publication number
- CH650273A5 CH650273A5 CH370/81A CH37081A CH650273A5 CH 650273 A5 CH650273 A5 CH 650273A5 CH 370/81 A CH370/81 A CH 370/81A CH 37081 A CH37081 A CH 37081A CH 650273 A5 CH650273 A5 CH 650273A5
- Authority
- CH
- Switzerland
- Prior art keywords
- salt
- plasminogen
- concentration
- lysine
- physiologically compatible
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 claims description 51
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 claims description 51
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 16
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 claims description 14
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 14
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 14
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 claims description 14
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 claims description 14
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 13
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 claims description 13
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 claims description 13
- -1 alkaline earth metal salt Chemical class 0.000 claims description 13
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 claims description 13
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 10
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 6
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 5
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 5
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 4
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000010338 boric acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 4
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000005619 boric acid group Chemical class 0.000 claims description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 claims description 3
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims 4
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 claims 2
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 claims 2
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 claims 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 2
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 claims 2
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 claims 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims 1
- 101710154808 Trypsin inhibitor A Proteins 0.000 claims 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 claims 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 3
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical group NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 2
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDVOLDOITVSJGL-UHFFFAOYSA-N 3,7-dihydroxy-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound O1B(O)OB2OB(O)OB1O2 XDVOLDOITVSJGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002645 boric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-N diphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(O)=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003709 kallidinogenase Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VGTPKLINSHNZRD-UHFFFAOYSA-N oxoborinic acid Chemical compound OB=O VGTPKLINSHNZRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229940005657 pyrophosphoric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229960005480 sodium caprylate Drugs 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
- A61L2/0023—Heat
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/02—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using physical phenomena
- A61L2/04—Heat
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6435—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21007—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Plasminogen-präparate zu entwickeln, die eine verbesserte Beständigkeit gegen Inaktivierung aufweisen. Diese Aufgabe wird durch die Erfindung gelöst. Die Lösung dieser Aufgabe beruht auf dem überraschenden Befund, dass bestimmte Verbindungen als Stabilisatoren für Plasminogen wirken, und dass derart stabilisierte Plasminogenpräparate auch einer Wärmebehandlung oder Gefriertrocknung widerstehen. The object of the invention is to develop plasminogen preparations which have an improved resistance to inactivation. This object is achieved by the invention. The solution to this problem is based on the surprising finding that certain compounds act as stabilizers for plasminogen, and that plasminogen preparations stabilized in this way also resist heat treatment or freeze-drying.
Die Erfindung betrifft somit den in den Patentansprüchen gekennzeichneten Gegenstand. The invention thus relates to the subject matter characterized in the claims.
Als Plasminogen enthaltende wässrige Lösungen können die verschiedensten Lösungen verwendet werden, beispielsweise Lösungen, die bei den verschiedenen bekannten Reinigungsverfahren aus plasminogenhaltigen Fraktionen anfallen, z.B. der Fraktion III, die bei der Alkoholfraktionierung bei niedriger Temperatur nach Cohn von Blutplasmaprotein anfällt, die allgemein zur Herstellung wichtiger biologischer Präparate, wie Serum, Plasma und Ascites menschlichen und tierischen Ursprungs anfallen, ferner z.B. Fibrinogen, Gammaglobulin und Albumin im Blutplasma. Das Plasminogen-Trockenpulver umfasst die Trockenpulver aus den vorstehend beschriebenen wässrigen Lösungen, insbesondere gefriergetrocknete Pulver. A wide variety of solutions can be used as plasminogen-containing aqueous solutions, for example solutions which are obtained from the plasminogen-containing fractions in the various known cleaning processes, e.g. Fraction III, which is obtained from Cohn's low temperature alcohol fractionation of blood plasma protein, which is generally used to produce important biological preparations such as serum, plasma and ascites of human and animal origin, and also e.g. Fibrinogen, gamma globulin and albumin in the blood plasma. The plasminogen dry powder comprises the dry powders from the aqueous solutions described above, in particular freeze-dried powders.
Typische Beispiele für Verfahren zur Reinigung von rohem Plasminogen sind Verfahren unter Verwendung eines fixierten Plasminogenstabilisators (JP-OS 153 592/1980) und die Verwendung von Lysin-Sepharose; vgl. Science, Bd. 170, (1970), S. 1095. Typical examples of processes for the purification of crude plasminogen are processes using a fixed plasminogen stabilizer (JP-OS 153 592/1980) and the use of lysine-Sepharose; see. Science, Vol. 170, (1970), p. 1095.
Als Plasminogenstabilisatoren werden erfindungsgemäss physiologisch verträgliche anorganische Salze, Lysin und dessen Salze, Phenylmethansulfonylfluorid, Aprotinin und Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor verwendet. Diese Stabilisatoren können allein oder in Kombination verwendet werden. According to the invention, physiologically compatible inorganic salts, lysine and its salts, phenylmethanesulfonyl fluoride, aprotinin and soybean trypsin inhibitor are used as plasminogen stabilizers. These stabilizers can be used alone or in combination.
Erfindungsgemäss kann jedes anorganische Salz verwendet werden, sofern es physiologisch verträglich ist. Spezielle Beispiele sind Alkalimetallsalze, wie Natrium- und Kaliumsalze, Erdalkalimetallsalze, wie Magnesium- und Calciums-alze und Ammoniumsalze von Mineralsäuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Borsäuren (Orthoborsäure, Metaborsäure und Tetraborsäure) und Phosphorsäuren (Pyrophosphorsäure, Orthophosphorsäure und Meta-phosphorsäure). Bevorzugte Beispiele für verwendbare Salze sind NaCl, KCl, MgCh, (NHO2SO4, Na2S04, Na2B407, KH2HPO4, K2HPO4, NaH2PC>4 und Na2HPC>4. According to the invention, any inorganic salt can be used if it is physiologically compatible. Specific examples are alkali metal salts such as sodium and potassium salts, alkaline earth metal salts such as magnesium and calcium salts and ammonium salts of mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, boric acids (orthoboric acid, metaboric acid and tetraboric acid) and phosphoric acids (pyrophosphoric acid, orthophosphoric acid) and meta-phosphoric acid. Preferred examples of salts which can be used are NaCl, KCl, MgCh, (NHO2SO4, Na2S04, Na2B407, KH2HPO4, K2HPO4, NaH2PC> 4 and Na2HPC> 4.
Erfindungsgemäss können auch Lysinsalze verwendet werden, sofern sie physiologisch verträglich sind, beispielsweise Alkalimetallsalze, wie Natrium- und Kaliumsalze, und Erdalkalimetallsalze, wie Magnesium- und Calciumsalze. According to the invention, lysine salts can also be used if they are physiologically compatible, for example alkali metal salts, such as sodium and potassium salts, and alkaline earth metal salts, such as magnesium and calcium salts.
Die wirksame Menge des zuzusetzenden Plasminogenstabilisators hängt von der Menge des Plasmins im Plasminogen- The effective amount of plasminogen stabilizer to be added depends on the amount of plasmin in the plasminogen
5 5
10 10th
15 15
20 20th
25 25th
30 30th
35 35
40 40
45 45
50 50
55 55
60 60
65 65
3 3rd
650 273 650 273
präparat und der Art des Stabilisators ab. Die stabilisierende Wirkung nimmt im Falle von Lysin mit ansteigenden Mengen zu. Die Menge des Stabilisators hängt jedoch vom beabsichtigten Verwendungszweck des Plasminogenpräparats ab. Zur Untersuchung der Fibrinolyse ist die Konzentration des Stabilisators vorzugsweise niedriger als der niedrigste Wert, bei dem Fibrinolyse bewirkt wird. Für medizinische Zwecke, d.h. zur Verwendung als Arzneistoff, bei dem das Plasminogenpräparat energischen Behandlungen ausgesetzt wird, beispielsweise einem lOstündigen Erhitzen auf 60 °C zur Inakti-vierung von Viren, wird eine grosse Menge des Stabilisators zugesetzt, und nach der Behandlung des Präparats wird der Stabilisator durch Dialyse oder andere geeignete Methoden abgetrennt. Bei Verwendung von PMSF (Phenylmethansulfonylfluorid), Aprotinin oder Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor wird deren Menge derart bemessen, dass als Verunreinigung vorliegendes Plasmin vollständig gehemmt wird. preparation and the type of stabilizer. In the case of lysine, the stabilizing effect increases with increasing amounts. However, the amount of stabilizer depends on the intended use of the plasminogen preparation. To examine fibrinolysis, the concentration of the stabilizer is preferably lower than the lowest value at which fibrinolysis is effected. For medical purposes, i.e. a large amount of the stabilizer is added for use as a drug in which the plasminogen preparation is subjected to vigorous treatments, such as heating at 60 ° C for 10 hours to inactivate viruses, and after treatment of the preparation, the stabilizer is dialyzed or otherwise appropriate methods separated. When using PMSF (phenylmethanesulfonyl fluoride), aprotinin or soybean trypsin inhibitor, the amount thereof is measured in such a way that plasmin present as an impurity is completely inhibited.
Die speziellen Konzentrationen der erfindungsgemäss verwendeten Stabilisatoren sind nachstehend angegeben. Für wässrige Lösungen von Plasminogen wird ein physiologisch verträgliches anorganisches Salz in einer Endkonzentration von 0,002 bis 0,4 M, vorzugsweise 0,01 bis 0,3 M und insbesondere von 0,05 bis 0,2 M, Lysin in einer Konzentration von 0,001 bis 5 Gew.-%/Vol.-%, PMSF in einer Konzentration von 0,01 bis 100 mMol, Aprotinin in einer Konzentration von 0,1 bis 1000 KIU/ml und Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor in einer Konzentration von 1 bis 1000 BAEEU/ml verwendet. Für Plasminogen-Trockenpulverpräparate wird das physiologisch verträgliche anorganische Salz in einer Endkonzentration von 0,01 bis 10 Gew.-%, Lysin in einer Endkonzentration von 0,01 bis 10 Gew.-%, PMSF in einer Endkonzentration von 0,01 bis 10 Gew.-%, Aprotinin in einer Endkonzentration von 0,01 bis 1000 KIU/mg und Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor in einer Endkonzentration von 0,1 bis 1000 BAEEU/mg verwendet. The specific concentrations of the stabilizers used according to the invention are given below. For aqueous solutions of plasminogen, a physiologically acceptable inorganic salt in a final concentration of 0.002 to 0.4 M, preferably 0.01 to 0.3 M and in particular 0.05 to 0.2 M, lysine in a concentration of 0.001 to 5 wt .-% / Vol .-%, PMSF in a concentration of 0.01 to 100 mmol, aprotinin in a concentration of 0.1 to 1000 KIU / ml and soybean trypsin inhibitor in a concentration of 1 to 1000 BAEEU / ml used. For plasminogen dry powder preparations, the physiologically compatible inorganic salt is used in a final concentration of 0.01 to 10% by weight, lysine in a final concentration of 0.01 to 10% by weight, PMSF in a final concentration of 0.01 to 10% by weight .-%, aprotinin in a final concentration of 0.01 to 1000 KIU / mg and soybean trypsin inhibitor in a final concentration of 0.1 to 1000 BAEEU / mg used.
Plasminogen wird leicht bei seiner Herstellung inaktiviert, insbesondere beim Erhitzen oder Gefriertrocknen. Deshalb wird das erfindungsgemässe Verfahren zum Stabilisieren von Plasminogen vorzugsweise nicht nur bei der Wärmebehandlung einer Plasminogen enthaltenden wässrigen Lösung oder beim Gefriertrocknen dieser wässrigen Lösung angewendet, sondern bei allen Herstellungsstufen. Im Falle einer Wärmebehandlung einer plasminogenhaltigen wässrigen Lösung zur Inaktivierung von Viren, beispielsweise beim lOstündigen Erhitzen auf 60 °C, wird die Wärmebehandlung nach Zusatz des Stabilisators und einer Einwirkungs- bzw. Behandlungsdauer von 20 bis 60 Minuten bei 4 bis 37 °C und einem pH-Wert von 2 bis 4 durchgeführt. Plasminogen is easily inactivated during its manufacture, especially when heated or freeze-dried. Therefore, the method according to the invention for stabilizing plasminogen is preferably used not only in the heat treatment of an aqueous solution containing plasminogen or in the freeze-drying of this aqueous solution, but in all production stages. In the case of a heat treatment of a plasminogen-containing aqueous solution for inactivating viruses, for example when heating to 60 ° C. for 10 hours, the heat treatment is carried out after addition of the stabilizer and an exposure or treatment time of 20 to 60 minutes at 4 to 37 ° C. and a pH -Value from 2 to 4 carried out.
Die erfindungsgemäss verwendeten Stabilisatoren können nach der Behandlung in den Präparaten verbleiben. Dies trägt zur Erhöhung der Stabilität des Plasminogens beim Stehen bei. The stabilizers used according to the invention can remain in the preparations after the treatment. This contributes to increasing the stability of the plasminogen when standing.
Es liegt auf der Hand, dass das erfindungsgemässe Verfahren nicht nur bei der Herstellung von Plasminogenpräpa-raten, sondern auch in anderen Fällen brauchbar ist, bei denen es auf die Stabilisierung von Plasminogen ankommt. Durch das erfindungsgemässe Verfahren gelingt es, die Stabilität von Plasminogen auf seinen verschiedenen Produktionsstufen, einschliesslich der Wärmebehandlung, Gefriertrocknung und anderen Arbeitsgängen zu erhöhen und auf diese Weise den Verlust an Plasminogen auf ein Mindestmass zu beschränken. Die erfindungsgemäss erhaltenen Plasminogen-präparate zeichnen sich durch eine hohe Lagerstabilität aus. It is obvious that the method according to the invention can be used not only in the production of plasminogen preparations, but also in other cases in which the stabilization of plasminogen is important. The process according to the invention makes it possible to increase the stability of plasminogen at its various production stages, including heat treatment, freeze drying and other operations, and in this way to minimize the loss of plasminogen. The plasminogen preparations obtained according to the invention are distinguished by a high storage stability.
Die Beispiele erläutern die Erfindung. In den Beispielen wird die Aktivität von Plasminogen durch die Casein-Einheit (CU; Vox Sang., Bd. 5 (1960), S. 357 bis 376) die Aprotinin-Aktivität durch die KIU-Einheiten (vgl. E.K. Frey, H. Kraut und E. Werle, Kallikrein (Padutil), 1950, Enke Verlag, Stuttgart) und die Aktivität von Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor durch die BAEEU-Einheiten (vgl. M. Laskowski, Method in Enzymology, Bd. 2, S. 37, herausgegeben von S.P. Colowick und N.O. Kaplan, New York, Academic Press, Inc.) ausgedrückt. The examples illustrate the invention. In the examples, the activity of plasminogen by the casein unit (CU; Vox Sang., Vol. 5 (1960), pp. 357 to 376), the aprotinin activity by the KIU units (cf. EK Frey, H. Kraut and E. Werle, Kallikrein (Padutil), 1950, Enke Verlag, Stuttgart) and the activity of soybean trypsin inhibitor by the BAEEU units (see M. Laskowski, Method in Enzymology, Vol. 2, p. 37 , edited by SP Colowick and NO Kaplan, New York, Academic Press, Inc.).
Dabei bedeutet 1 KIU-Einheit die Menge Aprotinin, die nötig ist, um die Aktivität von zwei Einheiten Kallidinoge-nase (Kallikrein) bei einem pH-Wert von 8 und bei Raumtemperatur während zwei Stunden auf eine einhalb Mal so grosse Menge zu verringern. 1 KIU unit means the amount of aprotinin that is necessary to reduce the activity of two units of kallidinogenase (kallikrein) at a pH of 8 and at room temperature for two and a half times the amount for two hours.
I BAEEU-Einheit bedeutet die Menge von Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor, um eine BAE-Einheit Trypsin zu inhibitie-ren, während eine BAE-Einheit die Menge Trypsin angibt, die nötig ist, um 1 Mikromol Alpha-Benzoyl-L-Alginin-Äthyl-Ester bei 25 °C und bei einem pH-Wert von 7,6 während einer Minute zu zersetzen. I BAEEU unit means the amount of soybean trypsin inhibitor to inhibit a BAE trypsin unit, while a BAE unit indicates the amount of trypsin needed to make 1 micromole of alpha-benzoyl-L-alginine Ethyl esters decompose at 25 ° C and at pH 7.6 for one minute.
Beispiel 1 example 1
Stabilisierung einer Plasminogenlösung Stabilization of a plasminogen solution
Verschiedene Inhibitoren werden einer wässrigen Lösung von 100 CU/ml Plasminogen in Tris-HCl-Puffer (pH 7,8) zugesetzt. Die Lösungen werden in einem Thermostat bei 37 °C stehengelassen, um die Stabilität zu untersuchen. Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengefasst. Various inhibitors are added to an aqueous solution of 100 CU / ml plasminogen in Tris-HCl buffer (pH 7.8). The solutions are left in a thermostat at 37 ° C to examine the stability. The results are summarized in Table I.
Tabelle I Table I
Inhibitor Inhibitor
Endkonzen Final conc
Restliche Aktivität nach Remaining activity after
tration tration
24stündigem Stehen bei 37 °C, % Standing for 24 hours at 37 ° C,%
Lysin Lysine
0,1%' 0.1% '
95 95
Lysin Lysine
1,0% 1.0%
96 96
PMSF PMSF
0,1 mM 0.1 mM
98 98
PMSF PMSF
1 mM 1 mm
98 98
Aprotinin Aprotinin
1 KIU/ml 1 KIU / ml
89 89
Aprotinin Aprotinin
10 KIU/ml 10 KIU / ml
95 95
Sojabohnen- Soybean
Trypsin-Inhibitor Trypsin inhibitor
10 BAEEU/ml 10 BAEEU / ml
88 88
Sojabohnen- Soybean
Trypsin-Inhibitor Trypsin inhibitor
100 BAEEU/ml 100 BAEEU / ml
92 92
kein Zusatz no addition
- -
43 43
Beispiel 2 Example 2
Stabilisierung von gefriergetrocknetem Plasminogen Stabilization of freeze-dried plasminogen
Die gemäss Beispiel 1 hergestellten Lösungen mit den verschiedenen Inhibitoren werden gefriergetrocknet. Die erhaltenen gefriergetrockneten Präparate werden 1 Monat in einem Thermostat bei 50 °C oder 3 Monate bei Raumtemperatur aufbewahrt, um die Stabilität zu bestimmen. Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengefasst. The solutions prepared according to Example 1 with the various inhibitors are freeze-dried. The freeze-dried preparations obtained are kept in a thermostat at 50 ° C. for 1 month or at room temperature for 3 months in order to determine the stability. The results are summarized in Table II.
Tabelle II Table II
Inhibitor Restliche Aktivität bei Restliche Aktivität nach Inhibitor residual activity after residual activity after
1 monatigem Stehen bei 3monatigem Stehen bei 50 0 C, % Raumtemperatur, % 1 month standing with 3 months standing at 50 0 C,% room temperature,%
Lysin 97 96 Lysine 97 96
PMSF 94 93 PMSF 94 93
Aprotinin 91 90 Aprotinin 91 90
Sojabohnen- Soybean
Trypsin-Inhibitor 93 91 Trypsin inhibitor 93 91
kein Zusatz 32 25 no addition 32 25
Beispiel 3 Example 3
Die nach der Fraktionierungsmethode von Cohn mit kaltem Äthanol erhaltene Fraktion III wird in einer wässrigen Lösung suspendiert, die 1 Gew.-%/Vol.-% Natriumchlorid Fraction III obtained by the Cohn fractionation method with cold ethanol is suspended in an aqueous solution containing 1% by weight /% by volume sodium chloride
5 5
10 10th
15 15
20 20th
25 25th
30 30th
35 35
40 40
45 45
50 50
55 55
60 60
65 65
650 273 650 273
4 4th
enthält. Danach wird die Suspension einige Zeit gerührt. Hierauf wird der Überstand zentrifugiert. Nach der Methode von D.G. Deutsch u. Mitarb., Science, Bd. 170 (1970), S. 1095, wird der Überstand auf eine Lysin-Sepharose-Säule gegeben, um das Plasminogen zu adsorbieren. Sodann werden als Verunreinigungen vorliegende Proteine mit physiologischer Kochsalzlösung ausgewaschen. Hierauf wird das adsorbierte Plasminogen mit einer wässrigen Lösung vom pH-Wert 7,0 eluiert, die 0,002 M c-Aminocapronsäure und 1% Natriumchlorid enthält. contains. The suspension is then stirred for some time. The supernatant is then centrifuged. According to the D.G. German and Mitarb., Science, Vol. 170 (1970), p. 1095, the supernatant is placed on a lysine-Sepharose column in order to adsorb the plasminogen. Proteins present as impurities are then washed out with physiological saline. The adsorbed plasminogen is then eluted with an aqueous solution of pH 7.0, which contains 0.002 M c-aminocaproic acid and 1% sodium chloride.
Nach dem Dialysieren gegen destilliertes Wasser wird die gereinigte Plasminogenlösung in zahlreiche Proben unterteilt, die ihrerseits in vier Gruppen unterteilt wurden. Diese Gruppen wurden unter folgenden Bedingungen behandelt: After dialyzing against distilled water, the purified plasminogen solution is divided into numerous samples, which in turn were divided into four groups. These groups were treated under the following conditions:
Bedingung Den Proben dieser Gruppe werden verschiedene D Stabilisatoren einverleibt, und die erhaltenen Condition Various D stabilizers are added to the samples in this group, and the ones obtained
Lösungen werden 10 Stunden auf 60 °C erhitzt. Bedingung Den Proben dieser Gruppe werden verschiedene B Stabilisatoren einverleibt. Die erhaltenen Solutions are heated to 60 ° C for 10 hours. Condition Various B stabilizers are added to the samples in this group. The received
Lösungen werden 30 Minuten bei Raumtemperatur und einem pH-Wert von 3,0 stehengelassen. Hierauf werden die Proben 10 Stunden auf 60 °C erhitzt. Solutions are left for 30 minutes at room temperature and a pH of 3.0. The samples are then heated to 60 ° C for 10 hours.
Bedingung Die Proben dieser Gruppe werden 30 Minuten C bei einem pH-Wert von 3,0 stehengelassen. Condition The samples in this group are left to stand for 30 minutes at pH 3.0.
Sodann werden die Proben mit Stabilisatoren versetzt und die erhaltenen Lösungen werden 10 5 Stunden auf 60 ° C erhitzt. Stabilizers are then added to the samples and the solutions obtained are heated at 60 ° C. for 10 5 hours.
Bedingung Die Proben dieser Gruppe werden mit A verschiedenen Stabilisatoren versetzt, jedoch keiner weiteren Behandlung unterworfen. Condition The samples in this group are mixed with A different stabilizers, but are not subjected to any further treatment.
io Danach wird die restliche Aktivität der Proben bestimmt. io The remaining activity of the samples is then determined.
Die Überstände der unter den Bedingungen D, B, C und A erhaltenen Proben werden auf einen pH-Wert von 7,0 ± 0,2 eingestellt. Sodann wird die restliche Aktivität dieser Überstände bestimmt. The supernatants of the samples obtained under conditions D, B, C and A are adjusted to a pH of 7.0 ± 0.2. The remaining activity of these supernatants is then determined.
15 Die Proben der unter der Bedingung B erhaltenen Lösungen werden gefriergetrocknet (Bedingung E) und die restliche Aktivität wird bestimmt. 15 The samples of the solutions obtained under condition B are freeze-dried (condition E) and the remaining activity is determined.
Die Proben der Bedingung E werden nach 6monatiger Lagerung bei 4 °C (Bedingung F) untersucht. 20 Die Aktivitätsbestimmung erfolgt nach der Casein-Spal-tungsmethode gemäss Sgouris u. Mitarb., Vox Sang., Bd. 5 (1960), S. 357. In Tabelle III ist die restliche Aktivität der verschiedenen Proben zusammengefasst, die bei der Behandlung unter den sechs Bedingungen erhalten werden. Die restliche 25 Aktivität wird in % bezogen auf die Aktivität eines nicht erhitzten, keine Zusatzstoffe enthaltenden Plasminogenpräpa-rats ausgedrückt. The samples of condition E are examined after storage for 6 months at 4 ° C. (condition F). 20 The activity is determined using the casein cleavage method according to Sgouris u. Mitarb., Vox Sang., Vol. 5 (1960), p. 357. Table III summarizes the residual activity of the various samples obtained in the treatment under the six conditions. The remaining 25 activity is expressed in% based on the activity of a non-heated plasminogen preparation containing no additives.
Tabelle III Table III
Restliche Aktivität in % nach Behandlung unter verschiedenen Bedingungen % Remaining activity after treatment under different conditions
Zusatzstoff Konzentration Bedingung A Bedingung B Bedingung C Bedingung D Bedingung E Bedingung F Additive Concentration Condition A Condition B Condition C Condition D Condition E Condition F
kein Zusatz no addition
100 100
27 27th
27 27th
20 20th
- -
NaCl NaCl
(0,05 M) (0.05 M)
100 100
72 72
25 25th
23 23
- -
NaCl NaCl
(0,10 M) (0.10 M)
100 100
90 90
30 30th
35 35
9! 9!
90 90
NaCl NaCl
(0,15 M) (0.15 M)
100 100
95 95
24 24th
25 25th
94 94
93 93
KCl KCl
(0,10 M) (0.10 M)
97 97
88 88
32 32
25 25th
88 88
87 87
(NH4>SC>4 (NH4> SC> 4
(0,02 M) (0.02 M)
97 97
80 80
33 33
35 35
81 81
80 80
(NH4>S04 (NH4> S04
(0,05 M) (0.05 M)
95 95
95 95
25 25th
27 27th
93 93
94 94
(NH4)2S04 (NH4) 2S04
(0,10 M) (0.10 M)
100 100
95 95
25 25th
20 20th
94 94
93 93
Na2SC>4 Na2SC> 4
(0,02 M) (0.02 M)
98 98
77 77
17 17th
23 23
76 76
77 77
Na2SC>4 Na2SC> 4
(0,05 M) (0.05 M)
100 100
85 85
17 17th
26 26
84 84
83 83
Na2SC>4 Na2SC> 4
(0,20 M) (0.20 M)
100 100
90 90
20 20th
' 30 '30
91 91
90 90
Na2B4C>7 Na2B4C> 7
(0,10 M) (0.10 M)
99 99
92 92
20 20th
27 27th
90 90
89 89
KH2PO4 KH2PO4
(0,02 M) (0.02 M)
95 95
85 85
25 25th
24 24th
83 83
84 84
KH2PO4 KH2PO4
(0,05 M) (0.05 M)
97 97
96 96
25 25th
31 31
94 94
93 93
KH2PO4 KH2PO4
(0,15 M) (0.15 M)
95 95
96 96
27 27th
35 35
94 94
94 94
Lysin Lysine
(0,003 M) (0.003 M)
95 95
89 89
28 28
25 25th
87 87
86 86
CHaCOONa CHaCOONa
(0,10 M) (0.10 M)
97 97
40 40
12 12
30 30th
- -
- -
Glucose glucose
(0,10 M) (0.10 M)
98 98
15 15
11 11
27 27th
- -
- -
Glycin Glycine
(0,10 M) (0.10 M)
95 95
17 17th
10 10th
25 25th
- -
- -
Mannit Mannitol
(0,10 M) (0.10 M)
98 98
15 15
25 25th
25 25th
- -
- -
Na-citrat Na citrate
60,50 M) 60.50 M)
- -
22 22
10 10th
15 15
- -
- -
Na-caprylat Na caprylate
(0,10%) (0.10%)
- -
17 17th
10 10th
20 20th
- -
- -
Polyäthylen- Polyethylene
glykol-400 glycol-400
(2,0%) (2.0%)
35 35
30 30th
25 25th
- -
- -
Aus Tabelle III lässt sich folgendes entnehmen: Plasminogenlösungen kurz nach Zusatz des Stabilisators zeigen eine Aktivität von 95 bis 100%, d.h. praktisch weder eine Aktivitätszunahme noch eine Aktivitätsabnahme (Bedingung A). The following can be seen from Table III: Plasminogen solutions shortly after addition of the stabilizer show an activity of 95 to 100%, i.e. practically neither an increase in activity nor an decrease in activity (condition A).
Plasminogenlösungen mit den Stabilisatoren der Erfindung, die 30 Minuten bei einem pH-Wert von 3,0 behandelt und 10 Stunden auf 60 °C erhitzt worden waren, behalten die Aktivität praktisch bei, auch wenn der pH-Wert auf den Neutralbereich wieder eingestellt wird. Demgegenüber werden bei 65 Plasminogenlösungen, die in gleicher Weise behandelt worden waren, jedoch keinen Zusatzstoff oder nur Essigsäure Glucose, Glycin, Natriumeitrat, Natriumcaprylat oder Poly-äthylenglykol-4000 enthielten, nach der pH-Werteinstellung Plasminogen solutions with the stabilizers of the invention, which had been treated at pH 3.0 for 30 minutes and heated at 60 ° C for 10 hours, practically maintain activity even when the pH is returned to the neutral range. In contrast, 65 plasminogen solutions which had been treated in the same way, but did not contain any additive or only acetic acid, glucose, glycine, sodium citrate, sodium caprylate or poly-ethylene glycol-4000, after the pH adjustment
5 5
650 273 650 273
auf Neutralbereich grosse Mengen an unlöslichen Substanzen und die Aktivität der Überstände ist sehr niedrig (Bedingung B). large amounts of insoluble substances in the neutral range and the activity of the supernatants is very low (condition B).
Plasminogenlösungen, die vor dem Zusatz des Stabilisators 30 Minuten bei einem pH-Wert von 3,0 behandelt worden waren, liefern grosse Mengen an unlöslichen Substanzen nach dem Erhitzen oder nach der pH-Wert-Einstellung auf den Neutralbereich, selbst wenn sie mit der gleichen Menge an Stabilisator versetzt worden sind, wie bei der Bedingung B und die restliche Aktivität der Überstände ist niedrig (Bedingung C). Plasminogen solutions that had been treated at pH 3.0 for 30 minutes prior to the addition of the stabilizer provide large amounts of insoluble substances after heating or after pH adjustment to the neutral range, even if they are the same Amount of stabilizer added as in Condition B and the remaining activity of the supernatants is low (Condition C).
Beim lOstündigen Erhitzen auf 60 °C unmittelbar nach Zusatz des Stabilisators bilden sich grosse Mengen an unlöslichen Substanzen, wenn der pH-Wert der Lösung auf den Neutralbereich zurückgestellt wird, und die restliche Aktivität des Überstands ist niedrig (Bedingung D). When heated to 60 ° C for 10 hours immediately after adding the stabilizer, large amounts of insoluble substances are formed when the pH of the solution is reset to the neutral range, and the remaining activity of the supernatant is low (condition D).
Aus den vorstehend mitgeteilten Ergebnissen ist ersichtlich, dass vor dem lOstündigen Erhitzen auf 60 °C die Plasmi- From the results communicated above, it can be seen that before heating for 10 hours at 60 ° C., the plasma
nogen-Stabilisatorlösung einer 20- bis 60minütigen Behandlung bei 4 bis 37 °C und einem pH-Wert von 2 bis 4 unterworfen werden soll. nogen stabilizer solution should be subjected to a 20- to 60-minute treatment at 4 to 37 ° C and a pH of 2 to 4.
Die restliche Aktivität der erhaltenen Präparate, die durch 5 Gefriertrocknen der unter der Bedingung B behandelten Plasminogenlösungen erhalten worden sind, ist nahezu unverändert, d.h. es wird keine Inaktivierung bei der Gefriertrocknung beobachtet (Bedingung E). The remaining activity of the preparations obtained, which were obtained by freeze-drying the plasminogen solutions treated under condition B, is almost unchanged, i.e. no inactivation during freeze-drying is observed (condition E).
Die gefriergetrockneten Präparate sind auch nach 6mona-lo tiger Lagerung bei 4 °C stabil und zeigen keine Änderung der Aktivität (Bedingung F). The freeze-dried preparations are stable even after 6 months storage at 4 ° C and show no change in activity (condition F).
Die gefriergetrockneten Präparate zeigen keinen Aktivitätsverlust nach dem Auflösen in destilliertem Wasser für Injektionszwecke. Jeweils 1 ml der Lösung wird Mäusen mit 15 einem Körpergewicht von 20 + 2 g injiziert, und die Mäuse werden 7 Tage beobachtet. Während dieser Zeit sind keine anormalen Symptome festzustellen. The freeze-dried preparations show no loss of activity after being dissolved in distilled water for injections. 1 ml of the solution is injected into mice with a body weight of 20 + 2 g, and the mice are observed for 7 days. There are no abnormal symptoms during this time.
G G
Claims (13)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP807280A JPS56106594A (en) | 1980-01-25 | 1980-01-25 | Stabilizing method of plasminogen |
JP9134180A JPS5716824A (en) | 1980-07-03 | 1980-07-03 | Plasminogen pharmaceutical and stabilizing method thereof |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CH650273A5 true CH650273A5 (en) | 1985-07-15 |
Family
ID=26342511
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CH370/81A CH650273A5 (en) | 1980-01-25 | 1981-01-21 | PLASMINOGENIC PREPARATION AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF. |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
CH (1) | CH650273A5 (en) |
DE (1) | DE3102217C2 (en) |
FR (1) | FR2474313A1 (en) |
GB (1) | GB2068002B (en) |
SE (2) | SE459783B (en) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3119157A1 (en) * | 1981-05-14 | 1982-12-09 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | METHOD FOR PRODUCING PLASMINOGEN AND THEREFORE PRODUCED |
DE69011136T3 (en) * | 1989-01-13 | 2003-10-23 | Mitsubishi Pharma Corp | Process for the preparation of a protein-containing composition. |
AT402367B (en) * | 1990-10-11 | 1997-04-25 | Immuno Ag | PHARMACEUTICAL PREPARATION BASED ON LYS PLASMINOGEN |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3066079A (en) * | 1959-09-18 | 1962-11-27 | American Cyanamid Co | Methods for purifying plasminogen |
US3865692A (en) * | 1974-01-11 | 1975-02-11 | Abbott Lab | Method for making highly potent plasminogen |
FR2347048A2 (en) * | 1976-04-07 | 1977-11-04 | Choay Sa | COMPOSITIONS CONSTITUTED BY PLASMINOGEN-TYPE COMPOUNDS, ESPECIALLY OF PLACENTARY ORIGIN, PROCESS FOR OBTAINING THESE COMPOSITIONS, AND MEDICINAL PRODUCTS CONTAINING THESE COMPOSITIONS |
-
1981
- 1981-01-07 GB GB8100338A patent/GB2068002B/en not_active Expired
- 1981-01-20 FR FR8100964A patent/FR2474313A1/en active Granted
- 1981-01-21 CH CH370/81A patent/CH650273A5/en not_active IP Right Cessation
- 1981-01-23 DE DE3102217A patent/DE3102217C2/en not_active Expired
- 1981-01-23 SE SE8100393A patent/SE459783B/en not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-10-24 SE SE8803798A patent/SE8803798L/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GB2068002A (en) | 1981-08-05 |
GB2068002B (en) | 1983-06-29 |
FR2474313A1 (en) | 1981-07-31 |
DE3102217A1 (en) | 1981-11-26 |
DE3102217C2 (en) | 1987-02-12 |
SE8100393L (en) | 1981-07-26 |
SE8803798D0 (en) | 1988-10-24 |
FR2474313B1 (en) | 1984-02-10 |
SE459783B (en) | 1989-08-07 |
SE8803798L (en) | 1988-10-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0124506B1 (en) | Method of inactivating pathogens | |
DE3240174C2 (en) | ||
EP0159311B1 (en) | Method for inactivating pathogens in blood products | |
DE3877529T2 (en) | Production of highly purified human factor IX and other plasma protein concentrate and its therapeutic use. | |
DE69213421T2 (en) | Process for the preparation of an activated factor VII concentrate with a high purity | |
DE3686475T2 (en) | METHOD FOR PRODUCING THE ALPHA-1-PROTEINASE INHIBITOR. | |
DE3400413C2 (en) | ||
CH645537A5 (en) | Antithrombin product and process for its production | |
EP0331152A1 (en) | Two-component syringe with a filling of sensitive human protein as the active ingredient | |
DD201646A5 (en) | PROCESS FOR THE COLD TREATMENT OF BLOOD CREATION FACTORY VIII CONTAINING PREPARATIONS | |
DE2459291A1 (en) | PROCESS FOR THE SIMULTANEOUS MANUFACTURING OF THREE THERAPEUTICALLY USABLE PRODUCTS FROM ONE BASE MATERIAL | |
US4361652A (en) | Method for stabilizing plasminogen | |
CH639854A5 (en) | FREEZER DRIED NATURAL GAMMAGLOBULIN PREPARATION FOR INTRAVENOUS ADMINISTRATION AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF. | |
DE2742529C2 (en) | Light (B) chain fraction of plasmin and process for their production | |
DE2715832C3 (en) | Method for Obtaining Purified Antihemophilic Globulin A (Factor VIII) | |
DE3043409T1 (en) | PROTHROMBIN COMPLEX CONCENTRATES, PREPARATION AND APPLICATION THEREOF | |
DE2440529B2 (en) | Hyaluronidase preparation from human placenta | |
DE3888571T2 (en) | Stabilization of biological and pharmaceutical products during the inactivation of viral and bacterial germs. | |
DE3643182A1 (en) | MEDICINAL PRODUCTS CONTAINING THE TISSUE PROTEIN PP4, METHOD FOR THE PRODUCTION OF PP4 AND ITS PASTEURIZATION AND THE USE OF PP4 | |
DE69231401T2 (en) | PRODUCTION OF FACTOR-IX | |
CH657376A5 (en) | Process for the preparation of gamma-globulin for intravenous injection | |
EP0853944B1 (en) | Preparation containing proteins having thiol groups | |
DE2500810A1 (en) | CLEANING PLASMINOGEN | |
CH650273A5 (en) | PLASMINOGENIC PREPARATION AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF. | |
DE3877277T2 (en) | INJECTION COMPOSITION CONTAINING MODIFIED TPA. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PL | Patent ceased |