CH627078A5 - Process for the preparation of a sterile collagen product with felt-like or web-like fibre structure - Google Patents

Process for the preparation of a sterile collagen product with felt-like or web-like fibre structure Download PDF

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Description

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung eines sterilen Kollagenproduktes mit filz- bzw. vliesartiger Faserstruktur. The invention relates to a process for the preparation of a sterile collagen product with felt or fleece-like fiber structure. Dieses Kollagenprodukt ist in der Medizin als Wundabdeckungs- bzw. Wundverklebungsmaterial und zum Ausfüllen von pathologischen Knochenhohlräumen verwendbar. This collagen product is used in medicine as Wundabdeckungs- or Wundverklebungsmaterial and to fill in pathological bone cavities.

Es ist an sich bekannt, aus tierischen Geweben hergestellte Kollagenprodukte zur Wundabdeckung und Wundverklebung zu verwenden. It is known per se to use made of animal tissue collagen products for wound dressing and wound adhesion. Im brit. Patent Nr. 1 147 072 ist ein Wundab-deckungsmaterial beschrieben, das aus einem durch Schäumen eines Kollagensols erzeugten Kollagenschwamm und einer mit letzterem verklebten Kollagenfolie zusammengesetzt ist. In Brit. Pat. No. 1,147,072 a Wundab-covering material is described, the collagen sponge of a generated by foaming a Kollagensols and assembled with the latter bonded collagen foil. Im südafrikanischen Patent Nr. 6705.871 ist ein Kollagenprodukt beschrieben, das aus mikrokristallinem kolloidalem Kollagen besteht und dazu bestimmt ist, als Mischkomponente mit anderen Wirksubstanzen in kosmetischen und pharmazeutischen Präparaten verwendet zu werden. In South African patent no. 6705.871 a collagen product is described that consists of colloidal microcrystalline collagen and is intended to be used as a blending component with other active substances in cosmetic and pharmaceutical preparations. Auf dem Markt ist ferner ein Kollagenpräparat in Form eines leichten flockigen Pulvers erhältlich, das zwar eine hämostatische Wirkung ausübt, aber schwer in die Tiefe einer Wunde einzuführen ist und bei stärkeren diffusen Blutungen weggespült wird. On the market a collagen preparation is also available in the form of a light fluffy powder which, while exerting a hemostatic effect, but it is difficult to introduce in the depth of a wound and is washed away with stronger diffuse bleeding.

Um bei der Wundheilung mittels Kollagen optimale Resultate zu erzielen, müsste man über ein Kollagenprodukt verfügen, das gleichzeitig die folgenden Eigenschaften in sich vereinigen sollte: For best results in wound healing using collagen, you would have to have a collagen product that should unite the following properties in the same time:

1. eine hämostatische Wirkung ausüben; 1. exert a hemostatic effect;

2. gegenüber Körperflüssigkeiten ein gutes Absorptionsvermögen aufweisen; 2. to bodily fluids having a good absorption capacity;

3. eine die Neubildung von Geweben, insbesondere Knochengewebe, fördernde Wirkung ausüben; 3. An exercise the regeneration of tissues, particularly bone tissue, promoting effect;

4. eine gute Resorbierbarkeit aufweisen; 4. exhibit good absorbability;

5. eine möglichst geringe Antigenwirkung ausüben, und 5. exert the least possible antigenicity, and

6. für das Aufbringen auf bzw. Einführen in Wunden oder pathologische Knochenhöhlen optimale mechanische Eigenschaften besitzen. 6 for application to or insertion into bone cavities or pathological wounds have optimum mechanical properties.

Die in der Literatur beschriebenen oder im Handel erhältlichen Kollagenprodukte besitzen die eine oder andere dieser Eigenschaften, jedoch nicht alle zusammen. The collagen products described in the literature or commercially available do not have the one or other of these properties, but all together.

Es wurde nun gefunden, dass man durch eine neuartige Kombination von chemischen und physikalischen Behandlungen von kollagenhaltigen Geweben von Schlachttieren ein Kollagenprodukt erhalten kann, das eine filz- bzw. vliesartige Struktur aufweist und die oben definierten Forderungen voll erfüllt. It has now been found that can be obtained by a novel combination of chemical and physical treatments of collagen-containing tissues of animals for slaughter a collagen product having a felt-or fleece-like structure and fully fulfills the requirements defined above.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung eines sterilen Kollagenproduktes mit filz- bzw. vliesartiger Faserstruktur durch Entfettung von kollagenhaltigem Gewebe von Schlachttieren, Extraktion des entfetteten Gewebes mit Elektrolytlösungen zur Entfernung von nichtkollagenen löslichen Ballaststoffen, Behandlung des erhaltenen Gewebes mit einem proteolytischen Enzym, Reinigung des erhaltenen Rohrkollagens durch Umfällung, Entsalzung des gereinigten Kollagens, Lösen des gereinigten und entsalzten Kollagens in Wasser, Gefriertrocknen des Kollagens und Sterilisation des getrockneten Kollagens. The invention relates to a process for the preparation of a sterile collagen product with felt or fleece-like fiber structure by degreasing of collagen-containing tissue from slaughtered animals, extraction of the defatted tissue with electrolyte solutions to remove non-collagenous soluble fiber, treating the resulting tissue with a proteolytic enzyme, purifying the tube collagen obtained by reprecipitation, desalting the purified collagen, dissolving the purified and desalted collagen in water, freeze-drying the collagen and sterilization of the dried collagen.

Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man das kollagenhaltige Gewebe bei 40 °C nicht übersteigenden Temperaturen fein zerkleinert und die Entfettung und die Entfernung der unerwünschten wasserlöslichen Ballaststoffe gleichzeitig durchführt, indem man den Gewebebrei mit dem 5fachen Volumen 5-15 %iger wässriger NaCl-Lösung, die 0,1—l%o Natriumazid als Konservierungsmittel und ein fettdispergierendes Netzmittel enthält, mehrmals extrahiert und das erhaltene Gewebe mit einem proteolytischen, die Grundstruktur des Kollagens nicht angreifenden, nichtkollagene proteinartige Begleitsubstanzen und Telopeptide abbauenden Enzym behandelt. The inventive method is characterized in that one minced the collagen-containing tissues not exceeding 40 ° C temperatures and the degreasing and the removal of the undesirable water-soluble dietary fiber is carried out simultaneously by the Gewebebrei with the 5-fold volume of 5-15% aqueous NaCl solution containing 0.1-l% contains o sodium azide as a preservative and a fettdispergierendes wetting agents, extracted several times and the resultant fabric, treated with a proteolytic not attacking the basic structure of collagen, non-collagenous proteinaceous accompanying substances and telopeptides degrading enzyme.

Als Ausgangsmaterial zur Durchführung des erfindungs-gemässen Verfahrens kann man zB Häute, Sehnen oder Knochen von Schlachttieren, zB Schweinen oder Kälbern, verwenden. As starting material for carrying out the method according fiction,-one can use eg skins, tendons and bones of slaughtered animals such as pigs or calves.

Das erfindungsgemässe Verfahren kann im einzelnen wie folgt durchgeführt werden: The novel process can be carried out in detail as follows:

Das kollagenhaltige Gewebematerial, zB Schweinehaut, wird bei 40 °C nicht übersteigenden Temperaturen fein zerkleinert. The collagen-containing tissue material, such as pig skin, minced no temperatures exceeding 40 ° C. Vorzugsweise wird das Gewebematerial vor dem Zerkleinern auf -10 bis —20 °C abgekühlt. Preferably, the fabric material is cooled to -10 to -20 ° C prior to crushing. Der Gewebebrei wird dann mit etwa der 5fachen Volumenmenge 5-15 %iger, vorzugsweise 10%iger wässriger NaCl-Lösung, die 0,1—l%o Natriumazid als Konservierungsmittel und 0,5—2 Gew.-% eines nichtionischen fettdispergierenden Netzmittels enthält, extrahiert. The Gewebebrei is then contains about 5 times the volume amount of 5-15% strength, preferably 10% aqueous NaCl solution containing 0.1% o-l sodium azide as a preservative and 0.5-2 wt .-% of a nonionic wetting agent fettdispergierenden extracted. Durch diese Extraktion werden dem Gewebe unerwünschte wasserlösliche Ballaststoffe und das Fett entzogen. Through this extraction the tissue unwanted water-soluble dietary fiber and fat are removed. Als Netzmittel können zB die für Haushaltzwecke bestimmten Wasch- und Reinigungsmittel verwendet werden. Wetting agents, for example, can be used intended for household use detergents and cleaners. Das als Konservierungsmittel verwendete Natriumazid hat gegenüber den bisher verwendeten organischen Konservierungsmitteln den Vorteil, dass es in Wasser leicht löslich und deshalb leicht auswaschbar ist. The sodium azide used as a preservative has the advantage over the previously used organic preservatives the advantage that it is readily soluble and therefore easily washed in water. Diese Extraktion wird mehrmals, zB zweimal, wiederholt. This extraction is repeated several times, for example twice repeated.

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Der so entfettete fasrige Gewebebrei wird zur pH-Umstellung mit 3 %iger Essigsäure gewaschen und anschliessend im 5fachen Volumen 3%iger Essigsäure, der 1 Gew.-%o, bezogen auf das Gewicht des eingesetzten Gewebematerials, eines proteolytischen Enzyms, vorzugsweise Pepsid, und l%o Chloroform als Konservierungsmittel zugesetzt worden sind, bei pH 2,5-3,5 verdaut. The thus degreased fibrous Gewebebrei is washed to pH-conversion with 3% acetic acid and then in 5 volumes of 3% acetic acid to which 1 wt .-% o, based on the weight of the web material employed, of a proteolytic enzyme, preferably Pepsid, and l% o of chloroform were added as a preservative, digested at pH 2.5-3.5. Dabei werden nichtkollagene proteinartige Begleitsubstanzen und die sogenannten Telopeptide, die weitgehend für die Antigenität des Kollagens verantwortlich sind, abgebaut, ohne dass die eigentlichen Kollagenfadenmoleküle in kleine Peptide aufgespalten werden. About to be dismantled non-collagenous proteinaceous accompanying substances and the so-called telopeptides which are largely responsible for antigenicity of collagen without the actual collagen thread molecules are broken down into small peptides. Nach 48 Stunden Reaktionszeit wird die homogene stark viskose Kollagensuspension durch eine Gl-Glassinternutsche oder durch ein entsprechend feines rostfreies Drahtsieb filtriert. After 48 hours reaction time the homogeneous highly viscous collagen suspension is filtered through a Gl-sintered glass funnel or by a correspondingly fine stainless wire mesh. Aus dem viskosen Filtrat wird das Kollagen durch Zugabe von gesättigter NaCl-Lösung bis zur Erzielung einer Konzentration von etwa 3-5 % NaCl ausgefällt. the collagen is precipitated by the addition of saturated NaCl solution to give a concentration of about 3-5% NaCl from the viscous filtrate. Zur Inaktivierung des im Reaktionsgemisch verbleibenden Pepsins wird der pH-Wert des erhaltenen Kollagenbreies durch Zugabe von Alkalihydroxidlösungen, vorzugsweise Natronlauge, auf pH 8,6-8,8 eingestellt. To inactivate the remaining pepsin in the reaction mixture, the pH of the Kollagenbreies obtained by adding alkali metal hydroxide solutions, preferably sodium hydroxide solution is adjusted to pH 8.6-8.8.

Nach 1/2 bis 1 Stunde wird das erhaltene Rohkollagen zen-trifugiert. After 1/2 to 1 hour, the Rohkollagen obtained is zen trifugiert. Das Rohkollagen wird durch Lösen in 3 %iger Essigsäure und Fällung mittels NaCl gereinigt. The Rohkollagen is purified by dissolving in 3% acetic acid and precipitation with NaCl. Das ausgefällte Kollagen wird durch Zentrifugation abgetrennt. The precipitated collagen is separated by centrifugation. Diese Reinigung wird zweckmässigerweise wiederholt. This cleaning is repeated expediently. Das so erhaltene gereinigte Kollagen wird zur Entfernung des von der Fällung herrührenden NaCl so lange mit 60—75, vorzugsweise 70volu-menprozentigem wässrigem Äthylalkohol gewaschen, bis der NaCl-Gehalt des Kollagens zwischen 0 und 0,9% liegt, bezogen auf das Gewicht des Trockenrückstandes des Kollagenbreies. The purified collagen so obtained is washed to remove the NaCl originating from the precipitation so long with 60-75, preferably 70volu-menprozentigem aqueous ethyl alcohol, until the NaCl content of collagen from 0 to 0.9%, based on the weight of dry residue of Kollagenbreies. Das entsalzte Reinkollagen wird durch Zentrifugieren oder Abnutschen von überschüssigem Alkohol befreit. The desalinated pure collagen is removed by centrifugation or suction of excess alcohol. Kleine Restmengen von Alkohol beeinträchtigen die weitere Verarbeitung nicht. Small residual amounts of alcohol does not impair the further processing. Die Entsalzung des Kollagens kann auch durch Ultrafiltration oder Dialyse durchgeführt werden. The desalination of collagen can also be carried out by ultrafiltration or dialysis.

Das gereinigte und entsalzte Kollagen wird in entminerali-siertem oder destilliertem Wasser, gegebenenfalls unter Zusatz von bis zu 3 % Essig- oder Ameisensäure, in einer Konzentration gelöst, welche einem Trockenrückstand von 0,5 bis 2 Gew.- % entspricht. The purified and desalted collagen is dissolved in entminerali-siertem or distilled water, optionally with the addition of up to 3% of acetic or formic acid, in a concentration corresponding to a dry residue of 0.5 to 2% by weight. Das wässrige Kollagen wird dann der Gefriertrocknung unterworfen. The aqueous collagen is then subjected to freeze-drying. Das entwässerte Kollagen kann in Beutel aus Kunststoff-Folien, zB Polyäthylen, verpackt werden, die durch Verschweissen verschlossen werden können. The dehydrated collagen may be packaged into bags made from plastic film, for example polyethylene, which can be closed by welding. Das Kollagenprodukt wird in der Verpackung durch Bestrahlung mit einer Dosis von 2—2,5 Mrad y-Strahlen sterilisiert. The collagen product is sterilized in the package by irradiation with a dose of 2-2.5 Mrad y-radiation.

Je nach der Form des Gefässes, in welchem die Gefriertrocknung des Kollagens durchgeführt wird, kann das Kollagenprodukt zB in Form von Scheiben oder quadratischen bzw. rechteckigen Platten erhalten werden. Depending on the form in which the freeze-drying of collagen is carried out of the vessel, the collagen product eg in the form of discs or square or rectangular plates can be obtained.

Das nach dem erfindungsgemässen Verfahren hergestellte Kollagenprodukt weist eine filz- bzw. vliesartige Faserstruktur auf, in welcher die Zwischenräume oder Hohlräume zwischen den Fasern kommunizierend sind, was zur Folge hat, dass das Kollagenmaterial eine grosse Saugfähigkeit für Körperflüssigkeiten besitzt. The collagen product produced according to the inventive method has a felt or fleece-like fiber structure in which the interstices or voids between the fibers are in communication, with the result that the collagenous material has a large absorption capacity for body fluids. Das erfindungsgemäss hergestellte Kollagenprodukt ist biegsam und lässt sich leicht in Stücke der gewünschten Grösse und Form schneiden und somit bequem auf Wunden aufbringen oder in Wunden einsetzen. The collagen product according to the invention produced is flexible and can easily be cut into pieces of desired size and shape and therefore easily applied to wounds or use in wounds. Das Kollagenprodukt weist ausserdem eine hohe hämostatische Aktivität auf und ist sehr leicht resorbierbar. The collagen product also has a high hemostatic activity and is very easily absorbable. Es besitzt ferner die Eigenschaft, die Neubildung der Gewebe, insbesondere der Knochengewebe, stark zu fördern, was in der chirurgischen Orthopädie von besonderer Wichtigkeit ist. It also has the property of the regeneration of the tissues, particularly the bone tissue to greatly promote what is in the surgical orthopedics of particular importance. Nach den bisherigen Erfahrungen übt das erfindungsgemäss hergestellte Kollagenprodukt praktisch keine antigene Wirkung aus. Based on previous experience, the collagen product according to the invention produced exerts practically no antigenic effect.

Das vorliegende Kollagenprodukt eignet sich ganz allgemein zur oberflächlichen Wundabdeckung zwecks Beschleunigung der Wundheilung und gewährt Schutz gegen Infektionen und Dehydratation. This collagen product is generally suitable for superficial wound covering in order to accelerate wound healing and provides protection against infection and dehydration. Es eignet sich ferner als Hämostypticum bei parenchymatösen Blutungen und als Füllmaterial für pathologische Knochenhohlräume und ersetzt dadurch die Spon-giosaplastik inder chirurgischen Orthopädie. It is also suitable as Haemostypticum in parenchymal bleeding and as filling material for pathological bone cavities and thereby replaces the Spon-giosaplastik inthe surgical orthopedics. Vergleichsweise sind die in der Literatur beschriebenen und im Handel erhältlichen Kollagenprodukte für diesen Zweck völlig unbrauchbar. By comparison, the collagen products described in the literature and commercially available for this purpose are completely useless. Die Verwendung des erfindungsgemäss hergestellten Kollagenmaterials ist in folgenden Fällen angezeigt: Behandlung von Ulcera, Behandlung von Verbrennungswunden, Hämo-stase in der Thoraxchirurgie, Hämostase bei Leber- und Milzverletzungen, Hämostase bei Prostatektomien, Verklebung von Gefässnähten oder von Rupturen parenchymer Gewebe, die sich nur schwer vernähen lassen. The use of the collagen material according to the invention is indicated in the following cases: the treatment of ulcers, the treatment of burn wounds, haemostasis in thoracic surgery, hemostasis in liver and Splenic, haemostasis in prostatectomies, bonding of vascular sutures or parenchymer ruptures tissue, only to are difficult to sew.

Das erfindungsgemäss hergestellte Kollagenprodukt kann vor der Applikation mit physiologisch wirksamen Stoffen, zB Antibiotika, Desinfektionsmitteln, Blutplasma, physiologischer Kochsalzlösung, Lokalanästhetika usw., getränkt bzw. beladen werden. The collagen product according to the invention can be prepared prior to application with physiologically active substances, such as antibiotics, disinfectants, blood plasma, physiological saline, local anesthetics, etc. can be impregnated or loaded.

Beispiel 1 example 1

1 kg Schweinehaut wurde bei -10 bis -20 °C eingefroren und während 10-20 Minuten mit einem Messerhomogenisator hoher Tourenzahl sehr fein zerkleinert. 1 kg pig skin was frozen at -10 to -20 ° C and during 10-20 minutes very finely crushed with a Messerhomogenisator high revs. Die Temperatur des Mahlgutes wurde durch Zugabe von Eisstückchen unter +40 °C gehalten. The temperature of the ground material was maintained by the addition of ice chips at +40 ° C. Der erhaltene zähe fasrige Gewebebrei wurde in 5 Liter 10%iger NaCl-Lösung, die 2,5 g Natriumazid und 50 ml einer 10%igen wässrigen Lösung des nichtionischen Netzmittels NP 55/52 (Polyoxyäthylennonylphenyläther) enthielt, unter kräftigem Rühren suspendiert. The tough fibrous Gewebebrei obtained was suspended in 5 liters of 10% NaCl solution containing 2.5 g of sodium azide and 50 ml of a 10% aqueous solution of nonionic surfactant NP 55/52 (Polyoxyäthylennonylphenyläther) with vigorous stirring. Die Suspension wurde 2 Stunden bie Raumtemperatur weitergerührt und anschliessend zentrifugiert. The suspension was further stirred for 2 hours bie room temperature and then centrifuged. Der grau bis bräunlich gefärbte trübe Überstand, der Fett und unerwünschte wasserlösliche Ballaststoffe enthielt, wurde verworfen. The gray to brownish cloudy supernatant containing fat and unwanted water-soluble fiber, was discarded. Der zurückbleibende weisse Hautfaserbrei wurde noch zweimal in der gleichen Weise extrahiert, wobei der Extraktionsflüssigkeit pro Liter 0,1 Mol Dinatriumhydrogenphosphat zugesetzt wurde. The residual white Hautfaserbrei was extracted twice more in the same manner, wherein the extraction liquid per liter of 0.1 mol of disodium hydrogen phosphate was added.

Der zurückbleibende Hautfaserbrei wurde in 3 Liter 3 %iger Essigsäure aufgerührt und zentrifugiert. The residual Hautfaserbrei was stirred in 3 liters of 3% acetic acid and centrifuged. Das feste Zen-trifugat wurde in 5 Liter 3 %iger Essigsäure, die 1 g Pepsin und 5 ml Chloroform enthielt, suspendiert. The solid Zen trifugat was suspended in 5 liters of 3% acetic acid containing 1 g of pepsin and 5 ml of chloroform. Man liess die Suspension über Nacht bei Raumtemperatur stehen. It was allowed the suspension overnight at room temperature. Die proteoly-sierte viskose farblose bis schwach milchige Kollagensuspension wurde durch ein feines rostfreies Drahtnetz am Vakuum abgenutscht. Proteolytic-catalyzed viscous colorless to slightly milky collagen suspension was filtered by suction through a fine stainless wire netting in vacuo.

Dem viskosen Filtrat wurde unter Rühren langsam gesättigte NaCl-Lösung (etwa 36%ig) zugegeben, bis der NaCl-Ge-halt des Gemisches etwa 5 % betrug. The viscous filtrate was stirred and slowly saturated NaCl solution (about 36%) is added until the NaCl-Ge-content of the mixture was about 5%. Dabei fiel das Kollagen als fasrig-flockiger weisser Niederschlag aus. Here, the collagen precipitated as fibrous-flaky white precipitate. Die restlichen Spuren von Pepsin wurden durch Behandlung des Niederschlages mit 500 ml 30%igem wässrigem NaOH während 2 Stunden inaktiviert. The remaining traces of pepsin were inactivated purified by treating the precipitate with 500 ml of 30% aqueous NaOH for 2 hours.

Das Kollagen wurde durch Zentrifugieren abgetrennt, in 5 Liter 3 %iger Essigsäure bei pH 3-4 gelöst, durch Zugabe von gesättigter wässriger NaCl-Lösung gefällt und zentrifugiert. The collagen was separated by centrifugation, resuspended in 5 liters of 3% acetic acid at pH 3-4 dissolved, precipitated by addition of saturated aqueous NaCl solution and centrifuged. Diese Operation wurde noch zweimal wiederholt. This operation was repeated twice more.

Der NaCl-haltige Kollagenrückstand wurde mit etwa 70 %igem Äthylalkohol V2 Stunde lang aufgerührt. The NaCl-containing collagen residue was stirred with about 70% ethyl alcohol long V2 hour. Das alkoholhaltige Gemisch wurde zentrifugiert. The alcoholic mixture was centrifuged. Diese Operationen wurden wiederholt, bis das abgeschiedene Kollagen einen NaCl-Gehalt von 0,006%, bezogen auf das Gewicht des Trok-kenrückstands, aufwies. These operations were repeated until the deposited collagen an NaCl content of 0.006%, based on the weight of the Trok-kenrückstands exhibited.

Das gereinigte und entsalzte Kollagen wurde in 3 Volumen 10%iger Essigsäure gelöst und mit destilliertem Wasser (etwa 2,5- bis 5fache Volummenge) so weit verdünnt, dass die Kollagenkonzentration einen Trockenrückstand von 1 % entsprach. The purified and desalted collagen was dissolved in 3 volumes of 10% acetic acid and diluted with distilled water so far (about 2.5 to 5 times Volummenge) that the collagen concentration corresponded to a dry residue of 1%. Die viskose Kollagenlösung wurde durch eine Gl-Glassinternutsche filtriert, in kreisrunde Glasschalen abgefüllt und lyophilisiert. The viscous collagen solution was filtered through a Gl-sintered glass funnel, bottled in circular glass dishes and lyophilized. Die auf diese Weise erhaltenen scheibenförmigen, The thus obtained disc-shaped,

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etwa 0,5 cm dicken Kollagenplatten wiesen eine filz- bzw. vliesartige Struktur auf. about 0.5 cm thick collagen plates had a felt or fleece-like structure. Die Kollagenplatten wurden in Beutel aus Polyäthylenfolie verpackt, welche durch Verschweissen verschlossen wurden. The collagen plates were packed in bags of polyethylene film, which were sealed by welding. Die verpackten Kollagenplatten wurden durch Bestrahlen mit einer Dosis von 2,5 Mrad /-Strahlen sterilisiert. The packed collagen plates were sterilized by exposure to a dose of 2.5 Mrad / rays.

Claims (4)

627 078 627078
1. Verfahren zur Herstellung eines sterilen Kollagenproduktes mit filz- bzw. vliesartiger Faserstruktur und offenen, kommunizierenden Hohlräumen zwischen den Fasern durch Entfettung von kollagenhaltigem Gewebe von Schlachttieren, Extraktion des entfetteten Gewebes mit Elektrolytlösungen zur Entfernung von nichtkollagenen wasserlöslichen Ballaststoffen, Behandlung des erhaltenen Gewebes mit einem proteolytischen Enzym, Reinigung des erhaltenen Rohkollagens durch Umfällung, Entsalzung des gereinigten Kollagens, Lösen des gereinigten und entsalzten Kollagens in Wasser, Gefriertrocknen des Kollagens und Sterilisation des getrockneten Kollagens, dadurch gekennzeichnet, dass man das kollagenhaltige Gewebe bei 40 °C nicht übersteigenden Temperaturen fein zerkleinert und die Entfettung und die Entfernung der unerwünschten wasserlöslichen Ballaststoffe gleichzeitig durchführt, indem man den Gewebebrei mit dem 5fachen Volumen 5-15 %iger wässriger NaCl-Lösung, die 0,1—l%o Natriumazi 1. A process for the preparation of a sterile collagen product with felt or fleece-like fiber structure and open, communicating voids between the fibers by degreasing of collagen-containing tissue from slaughtered animals, extraction of the defatted tissue with electrolyte solutions to remove non-collagenous water-soluble dietary fiber, the resultant fabric with a treatment proteolytic enzyme, purifying the Rohkollagens obtained by reprecipitation, desalting the purified collagen, dissolving the purified and desalted collagen in water, freeze-drying the collagen and sterilization of the dried collagen, characterized in that finely comminuting the collagen-containing tissues not exceeding 40 ° C temperatures and the degreasing and the removal of the undesirable water-soluble dietary fiber is carried out simultaneously by the Gewebebrei with the 5-fold volume of 5-15% aqueous NaCl solution containing 0.1% o-l Natriumazi d als Konservierungsmittel und ein fettdispergierendes Netzmittel enthält, mehrmals extrahiert und das erhaltene Gewebe mit einem proteolytischen, die Grundstruktur des Kollagens nicht angreifenden, nichtkollagene proteinartige Begleitsubstanzen und Telopeptide abbauenden Enzym behandelt. d contains as a preservative and a fettdispergierendes wetting agents, extracted several times and the resultant fabric, treated with a proteolytic not attacking the basic structure of collagen, non-collagenous proteinaceous accompanying substances and telopeptides degrading enzyme.
2. Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man als kollagenhaltiges Gewebe von Schlachttieren Schweinehaut verwendet. 2. The method according to claim 1, characterized in that is used as the collagen-containing tissues of animals for slaughter pig skin.
2 2
PATENTANSPRÜCHE
3. Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man zur Entfernung der nichtkollagenen proteinartigen Begleitsubstanzen und Telopeptide das entfettete und von wasserlöslichen Ballaststoffen befreite Gewebe mit ca. 3 %iger wässriger Essigsäure, die Pepsin in einer Menge von ca. 1%, bezogen auf das Gewicht des als Ausgangsmaterial verwendeten Gewebes, enthält, bei einem pH von 2,5-3,5 behandelt. 3. Method according to claim 1, characterized in that respect the degreased and freed of water-soluble dietary fiber fabric with about 3% aqueous acetic acid containing pepsin in an amount of about 1%, to remove the non-collagenous proteinaceous accompanying substances and telopeptides on contains the weight of the fabric used as the starting material, at a pH of 2.5-3.5.
4. Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man das durch Umfällung mit NaCl gereinigte Kollagen mit 60-70 %igem Äthylalkohol wäscht, bis der NaCl-Gehalt des Kollagens 0-0,9%, bezogen auf das Gewicht des Trockenrückstandes des Kollagenbreies, beträgt. 4. The method according to claim 1, characterized in that one washes the purified by reprecipitation with NaCl collagen with 60-70% strength ethyl alcohol until the NaCl content of collagen from 0 to 0.9%, based on the weight of the dry residue of the Kollagenbreies , is.
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