CH627078A5

CH627078A5 - Process for the preparation of a sterile collagen product with felt-like or web-like fibre structure

Info

Publication number: CH627078A5
Application number: CH737275A
Authority: CH
Inventors: Peter Dr Ries
Original assignee: Pentapharm Ag
Priority date: 1975-06-05
Filing date: 1975-06-05
Publication date: 1981-12-31
Also published as: DE2625289A1

Description

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung eines sterilen Kollagenproduktes mit filz- bzw. vliesartiger Faserstruktur. Dieses Kollagenprodukt ist in der Medizin als Wundabdeckungs- bzw. Wundverklebungsmaterial und zum Ausfüllen von pathologischen Knochenhohlräumen verwendbar. The invention relates to a method for producing a sterile collagen product with a felt or fleece-like fiber structure. This collagen product can be used in medicine as a wound covering or wound adhesive material and for filling pathological bone cavities.

Es ist an sich bekannt, aus tierischen Geweben hergestellte Kollagenprodukte zur Wundabdeckung und Wundverklebung zu verwenden. Im brit. Patent Nr. 1 147 072 ist ein Wundab-deckungsmaterial beschrieben, das aus einem durch Schäumen eines Kollagensols erzeugten Kollagenschwamm und einer mit letzterem verklebten Kollagenfolie zusammengesetzt ist. Im südafrikanischen Patent Nr. 6705.871 ist ein Kollagenprodukt beschrieben, das aus mikrokristallinem kolloidalem Kollagen besteht und dazu bestimmt ist, als Mischkomponente mit anderen Wirksubstanzen in kosmetischen und pharmazeutischen Präparaten verwendet zu werden. Auf dem Markt ist ferner ein Kollagenpräparat in Form eines leichten flockigen Pulvers erhältlich, das zwar eine hämostatische Wirkung ausübt, aber schwer in die Tiefe einer Wunde einzuführen ist und bei stärkeren diffusen Blutungen weggespült wird. It is known per se to use collagen products made from animal tissues for wound covering and wound adhesion. British Patent No. 1 147 072 describes a wound covering material which is composed of a collagen sponge produced by foaming a collagen sol and a collagen film glued to the latter. South African Patent No. 6705,871 describes a collagen product which consists of microcrystalline colloidal collagen and is intended to be used as a mixed component with other active substances in cosmetic and pharmaceutical preparations. A collagen preparation is also available on the market in the form of a light, flaky powder, which has a hemostatic effect but is difficult to insert into the depth of a wound and is washed away in the event of heavy diffuse bleeding.

Um bei der Wundheilung mittels Kollagen optimale Resultate zu erzielen, müsste man über ein Kollagenprodukt verfügen, das gleichzeitig die folgenden Eigenschaften in sich vereinigen sollte: In order to achieve optimal results in wound healing using collagen, one would need to have a collagen product that should also combine the following properties:

1. eine hämostatische Wirkung ausüben; 1. have a hemostatic effect;

2. gegenüber Körperflüssigkeiten ein gutes Absorptionsvermögen aufweisen; 2. have good absorbency to body fluids;

3. eine die Neubildung von Geweben, insbesondere Knochengewebe, fördernde Wirkung ausüben; 3. exert a promoting effect on the formation of new tissues, in particular bone tissue;

4. eine gute Resorbierbarkeit aufweisen; 4. have good resorbability;

5. eine möglichst geringe Antigenwirkung ausüben, und 5. exert the least possible antigenic effect, and

6. für das Aufbringen auf bzw. Einführen in Wunden oder pathologische Knochenhöhlen optimale mechanische Eigenschaften besitzen. 6. have optimal mechanical properties for application to or insertion into wounds or pathological bone cavities.

Die in der Literatur beschriebenen oder im Handel erhältlichen Kollagenprodukte besitzen die eine oder andere dieser Eigenschaften, jedoch nicht alle zusammen. The collagen products described in the literature or commercially available have one or the other of these properties, but not all of them.

Es wurde nun gefunden, dass man durch eine neuartige Kombination von chemischen und physikalischen Behandlungen von kollagenhaltigen Geweben von Schlachttieren ein Kollagenprodukt erhalten kann, das eine filz- bzw. vliesartige Struktur aufweist und die oben definierten Forderungen voll erfüllt. It has now been found that a novel combination of chemical and physical treatments of collagen-containing tissues from slaughtered animals can give a collagen product which has a felt-like or fleece-like structure and fully meets the requirements defined above.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung eines sterilen Kollagenproduktes mit filz- bzw. vliesartiger Faserstruktur durch Entfettung von kollagenhaltigem Gewebe von Schlachttieren, Extraktion des entfetteten Gewebes mit Elektrolytlösungen zur Entfernung von nichtkollagenen löslichen Ballaststoffen, Behandlung des erhaltenen Gewebes mit einem proteolytischen Enzym, Reinigung des erhaltenen Rohrkollagens durch Umfällung, Entsalzung des gereinigten Kollagens, Lösen des gereinigten und entsalzten Kollagens in Wasser, Gefriertrocknen des Kollagens und Sterilisation des getrockneten Kollagens. The invention relates to a process for the production of a sterile collagen product with a felt-like or fleece-like fiber structure by degreasing collagen-containing tissue from slaughter animals, extraction of the degreased tissue with electrolyte solutions to remove non-collagen-soluble fiber, treatment of the tissue obtained with a proteolytic enzyme, cleaning of the tube collagen obtained by reprecipitation, desalting of the purified collagen, dissolving the purified and desalted collagen in water, freeze-drying the collagen and sterilizing the dried collagen.

Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man das kollagenhaltige Gewebe bei 40 °C nicht übersteigenden Temperaturen fein zerkleinert und die Entfettung und die Entfernung der unerwünschten wasserlöslichen Ballaststoffe gleichzeitig durchführt, indem man den Gewebebrei mit dem 5fachen Volumen 5-15 %iger wässriger NaCl-Lösung, die 0,1—l%o Natriumazid als Konservierungsmittel und ein fettdispergierendes Netzmittel enthält, mehrmals extrahiert und das erhaltene Gewebe mit einem proteolytischen, die Grundstruktur des Kollagens nicht angreifenden, nichtkollagene proteinartige Begleitsubstanzen und Telopeptide abbauenden Enzym behandelt. The process according to the invention is characterized in that the collagen-containing tissue is finely comminuted at temperatures not exceeding 40 ° C. and the degreasing and removal of the undesired water-soluble fiber is carried out at the same time by the tissue pulp having a 5-fold volume of 5-15% aqueous NaCl- The solution, containing 0.1-1% of sodium azide as a preservative and a fat-dispersing wetting agent, is extracted several times and the resulting tissue is treated with a proteolytic, non-collagenous accompanying protein-like substance and telopeptide-degrading enzyme which does not attack the basic structure of the collagen.

Als Ausgangsmaterial zur Durchführung des erfindungs-gemässen Verfahrens kann man z.B. Häute, Sehnen oder Knochen von Schlachttieren, z.B. Schweinen oder Kälbern, verwenden. As the starting material for carrying out the method according to the invention, one can e.g. Animal skins, tendons or bones, e.g. Pigs or calves.

Das erfindungsgemässe Verfahren kann im einzelnen wie folgt durchgeführt werden: The method according to the invention can be carried out in detail as follows:

Das kollagenhaltige Gewebematerial, z.B. Schweinehaut, wird bei 40 °C nicht übersteigenden Temperaturen fein zerkleinert. Vorzugsweise wird das Gewebematerial vor dem Zerkleinern auf -10 bis —20 °C abgekühlt. Der Gewebebrei wird dann mit etwa der 5fachen Volumenmenge 5-15 %iger, vorzugsweise 10%iger wässriger NaCl-Lösung, die 0,1—l%o Natriumazid als Konservierungsmittel und 0,5—2 Gew.-% eines nichtionischen fettdispergierenden Netzmittels enthält, extrahiert. Durch diese Extraktion werden dem Gewebe unerwünschte wasserlösliche Ballaststoffe und das Fett entzogen. Als Netzmittel können z.B. die für Haushaltzwecke bestimmten Wasch- und Reinigungsmittel verwendet werden. Das als Konservierungsmittel verwendete Natriumazid hat gegenüber den bisher verwendeten organischen Konservierungsmitteln den Vorteil, dass es in Wasser leicht löslich und deshalb leicht auswaschbar ist. Diese Extraktion wird mehrmals, z.B. zweimal, wiederholt. The collagenous tissue material, e.g. Pig skin, is minced at temperatures not exceeding 40 ° C. The tissue material is preferably cooled to -10 to -20 ° C. before comminution. The tissue pulp is then treated with about 5 times the volume of 5-15%, preferably 10%, aqueous NaCl solution which contains 0.1-1% sodium azide as a preservative and 0.5-2% by weight of a nonionic fat-dispersing surfactant , extracted. This extraction removes unwanted water-soluble fiber and fat from the tissue. As wetting agents e.g. the detergents and cleaning agents intended for household purposes are used. The sodium azide used as a preservative has the advantage over the organic preservatives used hitherto that it is easily soluble in water and is therefore easy to wash out. This extraction is carried out several times, e.g. twice, repeated.

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

3 3rd

627 078 627 078

Der so entfettete fasrige Gewebebrei wird zur pH-Umstellung mit 3 %iger Essigsäure gewaschen und anschliessend im 5fachen Volumen 3%iger Essigsäure, der 1 Gew.-%o, bezogen auf das Gewicht des eingesetzten Gewebematerials, eines proteolytischen Enzyms, vorzugsweise Pepsid, und l%o Chloroform als Konservierungsmittel zugesetzt worden sind, bei pH 2,5-3,5 verdaut. Dabei werden nichtkollagene proteinartige Begleitsubstanzen und die sogenannten Telopeptide, die weitgehend für die Antigenität des Kollagens verantwortlich sind, abgebaut, ohne dass die eigentlichen Kollagenfadenmoleküle in kleine Peptide aufgespalten werden. Nach 48 Stunden Reaktionszeit wird die homogene stark viskose Kollagensuspension durch eine Gl-Glassinternutsche oder durch ein entsprechend feines rostfreies Drahtsieb filtriert. Aus dem viskosen Filtrat wird das Kollagen durch Zugabe von gesättigter NaCl-Lösung bis zur Erzielung einer Konzentration von etwa 3-5 % NaCl ausgefällt. Zur Inaktivierung des im Reaktionsgemisch verbleibenden Pepsins wird der pH-Wert des erhaltenen Kollagenbreies durch Zugabe von Alkalihydroxidlösungen, vorzugsweise Natronlauge, auf pH 8,6-8,8 eingestellt. The fibrous tissue pulp degreased in this way is washed with 3% acetic acid to change the pH and then in 5 times the volume of 3% acetic acid, which is 1% by weight, based on the weight of the tissue material used, of a proteolytic enzyme, preferably pepsid, and 1% o chloroform have been added as a preservative, digested at pH 2.5-3.5. In this process, non-collagenous protein-like accompanying substances and the so-called telopeptides, which are largely responsible for the antigenicity of the collagen, are broken down without the actual collagen thread molecules being broken down into small peptides. After a reaction time of 48 hours, the homogeneous, highly viscous collagen suspension is filtered through a Gl glass suction filter or through a suitably fine stainless steel wire sieve. The collagen is precipitated from the viscous filtrate by adding saturated NaCl solution until a concentration of about 3-5% NaCl is achieved. To inactivate the pepsin remaining in the reaction mixture, the pH of the collagen slurry obtained is adjusted to pH 8.6-8.8 by adding alkali hydroxide solutions, preferably sodium hydroxide solution.

Nach 1/2 bis 1 Stunde wird das erhaltene Rohkollagen zen-trifugiert. Das Rohkollagen wird durch Lösen in 3 %iger Essigsäure und Fällung mittels NaCl gereinigt. Das ausgefällte Kollagen wird durch Zentrifugation abgetrennt. Diese Reinigung wird zweckmässigerweise wiederholt. Das so erhaltene gereinigte Kollagen wird zur Entfernung des von der Fällung herrührenden NaCl so lange mit 60—75, vorzugsweise 70volu-menprozentigem wässrigem Äthylalkohol gewaschen, bis der NaCl-Gehalt des Kollagens zwischen 0 und 0,9% liegt, bezogen auf das Gewicht des Trockenrückstandes des Kollagenbreies. Das entsalzte Reinkollagen wird durch Zentrifugieren oder Abnutschen von überschüssigem Alkohol befreit. Kleine Restmengen von Alkohol beeinträchtigen die weitere Verarbeitung nicht. Die Entsalzung des Kollagens kann auch durch Ultrafiltration oder Dialyse durchgeführt werden. After 1/2 to 1 hour, the raw collagen obtained is centrifuged. The raw collagen is cleaned by dissolving in 3% acetic acid and precipitating with NaCl. The precipitated collagen is separated by centrifugation. This cleaning is expediently repeated. The purified collagen thus obtained is washed with 60-75, preferably 70% by volume aqueous ethyl alcohol until the NaCl content of the precipitation is removed until the NaCl content of the collagen is between 0 and 0.9%, based on the weight of the Dry residue of the collagen paste. The desalted pure collagen is freed of excess alcohol by centrifugation or suction filtering. Small amounts of alcohol do not affect further processing. The desalting of the collagen can also be carried out by ultrafiltration or dialysis.

Das gereinigte und entsalzte Kollagen wird in entminerali-siertem oder destilliertem Wasser, gegebenenfalls unter Zusatz von bis zu 3 % Essig- oder Ameisensäure, in einer Konzentration gelöst, welche einem Trockenrückstand von 0,5 bis 2 Gew.- % entspricht. Das wässrige Kollagen wird dann der Gefriertrocknung unterworfen. Das entwässerte Kollagen kann in Beutel aus Kunststoff-Folien, z.B. Polyäthylen, verpackt werden, die durch Verschweissen verschlossen werden können. Das Kollagenprodukt wird in der Verpackung durch Bestrahlung mit einer Dosis von 2—2,5 Mrad y-Strahlen sterilisiert. The purified and desalted collagen is dissolved in demineralized or distilled water, optionally with the addition of up to 3% acetic or formic acid, in a concentration which corresponds to a dry residue of 0.5 to 2% by weight. The aqueous collagen is then freeze-dried. The dewatered collagen can be packed in bags made of plastic films, e.g. Polyethylene, which can be sealed by welding. The collagen product is sterilized in the package by irradiation with a dose of 2-2.5 Mrad y rays.

Je nach der Form des Gefässes, in welchem die Gefriertrocknung des Kollagens durchgeführt wird, kann das Kollagenprodukt z.B. in Form von Scheiben oder quadratischen bzw. rechteckigen Platten erhalten werden. Depending on the shape of the vessel in which the freeze-drying of the collagen is carried out, the collagen product can e.g. can be obtained in the form of disks or square or rectangular plates.

Das nach dem erfindungsgemässen Verfahren hergestellte Kollagenprodukt weist eine filz- bzw. vliesartige Faserstruktur auf, in welcher die Zwischenräume oder Hohlräume zwischen den Fasern kommunizierend sind, was zur Folge hat, dass das Kollagenmaterial eine grosse Saugfähigkeit für Körperflüssigkeiten besitzt. Das erfindungsgemäss hergestellte Kollagenprodukt ist biegsam und lässt sich leicht in Stücke der gewünschten Grösse und Form schneiden und somit bequem auf Wunden aufbringen oder in Wunden einsetzen. Das Kollagenprodukt weist ausserdem eine hohe hämostatische Aktivität auf und ist sehr leicht resorbierbar. Es besitzt ferner die Eigenschaft, die Neubildung der Gewebe, insbesondere der Knochengewebe, stark zu fördern, was in der chirurgischen Orthopädie von besonderer Wichtigkeit ist. Nach den bisherigen Erfahrungen übt das erfindungsgemäss hergestellte Kollagenprodukt praktisch keine antigene Wirkung aus. The collagen product produced by the method according to the invention has a felt or fleece-like fiber structure in which the spaces or cavities between the fibers are communicating, which means that the collagen material has a high absorbency for body fluids. The collagen product produced according to the invention is flexible and can easily be cut into pieces of the desired size and shape and thus conveniently applied to wounds or used in wounds. The collagen product also has a high hemostatic activity and is very easily absorbable. It also has the property of strongly promoting the regeneration of the tissues, particularly the bone tissue, which is of particular importance in surgical orthopedics. According to previous experience, the collagen product produced according to the invention has practically no antigenic effect.

Das vorliegende Kollagenprodukt eignet sich ganz allgemein zur oberflächlichen Wundabdeckung zwecks Beschleunigung der Wundheilung und gewährt Schutz gegen Infektionen und Dehydratation. Es eignet sich ferner als Hämostypticum bei parenchymatösen Blutungen und als Füllmaterial für pathologische Knochenhohlräume und ersetzt dadurch die Spon-giosaplastik inder chirurgischen Orthopädie. Vergleichsweise sind die in der Literatur beschriebenen und im Handel erhältlichen Kollagenprodukte für diesen Zweck völlig unbrauchbar. Die Verwendung des erfindungsgemäss hergestellten Kollagenmaterials ist in folgenden Fällen angezeigt: Behandlung von Ulcera, Behandlung von Verbrennungswunden, Hämo-stase in der Thoraxchirurgie, Hämostase bei Leber- und Milzverletzungen, Hämostase bei Prostatektomien, Verklebung von Gefässnähten oder von Rupturen parenchymer Gewebe, die sich nur schwer vernähen lassen. The present collagen product is generally suitable for superficial wound covering in order to accelerate wound healing and provides protection against infections and dehydration. It is also suitable as a hemostyptic for parenchymal bleeding and as a filling material for pathological bone cavities and thereby replaces the spon giosaplasty in surgical orthopedics. In comparison, the collagen products described in the literature and commercially available are completely unusable for this purpose. The use of the collagen material produced according to the invention is indicated in the following cases: treatment of ulcers, treatment of burn wounds, hemostasis in thoracic surgery, hemostasis in the case of liver and spleen injuries, hemostasis in the case of prostatectomies, gluing of vascular sutures or of ruptures of parenchymal tissue which are only difficult to sew up.

Das erfindungsgemäss hergestellte Kollagenprodukt kann vor der Applikation mit physiologisch wirksamen Stoffen, z.B. Antibiotika, Desinfektionsmitteln, Blutplasma, physiologischer Kochsalzlösung, Lokalanästhetika usw., getränkt bzw. beladen werden. The collagen product produced according to the invention can be mixed with physiologically active substances, e.g. Antibiotics, disinfectants, blood plasma, physiological saline, local anesthetics, etc., are soaked or loaded.

Beispiel 1 example 1

1 kg Schweinehaut wurde bei -10 bis -20 °C eingefroren und während 10-20 Minuten mit einem Messerhomogenisator hoher Tourenzahl sehr fein zerkleinert. Die Temperatur des Mahlgutes wurde durch Zugabe von Eisstückchen unter +40 °C gehalten. Der erhaltene zähe fasrige Gewebebrei wurde in 5 Liter 10%iger NaCl-Lösung, die 2,5 g Natriumazid und 50 ml einer 10%igen wässrigen Lösung des nichtionischen Netzmittels NP 55/52 (Polyoxyäthylennonylphenyläther) enthielt, unter kräftigem Rühren suspendiert. Die Suspension wurde 2 Stunden bie Raumtemperatur weitergerührt und anschliessend zentrifugiert. Der grau bis bräunlich gefärbte trübe Überstand, der Fett und unerwünschte wasserlösliche Ballaststoffe enthielt, wurde verworfen. Der zurückbleibende weisse Hautfaserbrei wurde noch zweimal in der gleichen Weise extrahiert, wobei der Extraktionsflüssigkeit pro Liter 0,1 Mol Dinatriumhydrogenphosphat zugesetzt wurde. 1 kg of pig skin was frozen at -10 to -20 ° C and minced very finely for 10-20 minutes with a knife homogenizer with a high number of revolutions. The temperature of the material to be ground was kept below + 40 ° C. by adding pieces of ice. The viscous fibrous pulp obtained was suspended in 5 liters of 10% NaCl solution, which contained 2.5 g of sodium azide and 50 ml of a 10% aqueous solution of the nonionic surfactant NP 55/52 (polyoxyethylene nonylphenyl ether), with vigorous stirring. The suspension was further stirred at room temperature for 2 hours and then centrifuged. The gray to brownish cloudy supernatant, which contained fat and unwanted water-soluble fiber, was discarded. The remaining white skin pulp was extracted twice in the same way, 0.1 mol of disodium hydrogen phosphate being added to the extraction liquid per liter.

Der zurückbleibende Hautfaserbrei wurde in 3 Liter 3 %iger Essigsäure aufgerührt und zentrifugiert. Das feste Zen-trifugat wurde in 5 Liter 3 %iger Essigsäure, die 1 g Pepsin und 5 ml Chloroform enthielt, suspendiert. Man liess die Suspension über Nacht bei Raumtemperatur stehen. Die proteoly-sierte viskose farblose bis schwach milchige Kollagensuspension wurde durch ein feines rostfreies Drahtnetz am Vakuum abgenutscht. The remaining skin fiber pulp was stirred in 3 liters of 3% acetic acid and centrifuged. The solid centrifugate was suspended in 5 liters of 3% acetic acid containing 1 g pepsin and 5 ml chloroform. The suspension was left overnight at room temperature. The proteolyzed, viscous, colorless to slightly milky collagen suspension was sucked off under vacuum through a fine stainless wire mesh.

Dem viskosen Filtrat wurde unter Rühren langsam gesättigte NaCl-Lösung (etwa 36%ig) zugegeben, bis der NaCl-Ge-halt des Gemisches etwa 5 % betrug. Dabei fiel das Kollagen als fasrig-flockiger weisser Niederschlag aus. Die restlichen Spuren von Pepsin wurden durch Behandlung des Niederschlages mit 500 ml 30%igem wässrigem NaOH während 2 Stunden inaktiviert. Saturated NaCl solution (about 36% strength) was slowly added to the viscous filtrate with stirring until the NaCl content of the mixture was about 5%. The collagen precipitated out as a fibrous, flaky white precipitate. The remaining traces of pepsin were inactivated by treating the precipitate with 500 ml of 30% aqueous NaOH for 2 hours.

Das Kollagen wurde durch Zentrifugieren abgetrennt, in 5 Liter 3 %iger Essigsäure bei pH 3-4 gelöst, durch Zugabe von gesättigter wässriger NaCl-Lösung gefällt und zentrifugiert. Diese Operation wurde noch zweimal wiederholt. The collagen was separated by centrifugation, dissolved in 5 liters of 3% acetic acid at pH 3-4, precipitated by adding saturated aqueous NaCl solution and centrifuged. This operation was repeated two more times.

Der NaCl-haltige Kollagenrückstand wurde mit etwa 70 %igem Äthylalkohol V2 Stunde lang aufgerührt. Das alkoholhaltige Gemisch wurde zentrifugiert. Diese Operationen wurden wiederholt, bis das abgeschiedene Kollagen einen NaCl-Gehalt von 0,006%, bezogen auf das Gewicht des Trok-kenrückstands, aufwies. The NaCl-containing collagen residue was stirred with about 70% ethyl alcohol for V2 hours. The alcohol-containing mixture was centrifuged. These operations were repeated until the deposited collagen had a NaCl content of 0.006% based on the weight of the dry residue.

Das gereinigte und entsalzte Kollagen wurde in 3 Volumen 10%iger Essigsäure gelöst und mit destilliertem Wasser (etwa 2,5- bis 5fache Volummenge) so weit verdünnt, dass die Kollagenkonzentration einen Trockenrückstand von 1 % entsprach. Die viskose Kollagenlösung wurde durch eine Gl-Glassinternutsche filtriert, in kreisrunde Glasschalen abgefüllt und lyophilisiert. Die auf diese Weise erhaltenen scheibenförmigen, The cleaned and desalted collagen was dissolved in 3 volumes of 10% acetic acid and diluted with distilled water (about 2.5 to 5 times the volume) to such an extent that the collagen concentration corresponded to a dry residue of 1%. The viscous collagen solution was filtered through a GL glass suction filter, filled into circular glass dishes and lyophilized. The disc-shaped,

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

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627 078 627 078

4 4th

etwa 0,5 cm dicken Kollagenplatten wiesen eine filz- bzw. vliesartige Struktur auf. Die Kollagenplatten wurden in Beutel aus Polyäthylenfolie verpackt, welche durch Verschweissen verschlossen wurden. Die verpackten Kollagenplatten wurden durch Bestrahlen mit einer Dosis von 2,5 Mrad /-Strahlen sterilisiert. about 0.5 cm thick collagen plates had a felt or fleece-like structure. The collagen plates were packed in bags made of polyethylene film, which were sealed by welding. The packaged collagen plates were sterilized by irradiation with a dose of 2.5 Mrad / rays.

Claims

627 078

1. Process for the production of a sterile collagen product with a felt or fleece-like fiber structure and open, communicating cavities between the fibers by degreasing collagen-containing tissue from slaughter animals, extraction of the degreased tissue with electrolyte solutions to remove non-collagen water-soluble fibers, treatment of the tissue obtained with a proteolytic enzyme, purification of the raw collagen obtained by reprecipitation, desalination of the purified collagen, dissolving of the purified and desalted collagen in water, freeze-drying of the collagen and sterilization of the dried collagen, characterized in that the tissue containing collagen is comminuted at temperatures not exceeding 40 ° C. and performing the degreasing and removal of the unwanted water-soluble dietary fibers simultaneously by preparing the tissue pulp with 5 times the volume of 5-15% aqueous NaCl solution containing 0.1-1% sodium azide as a preservative contains and a fat-dispersing wetting agent, extracted several times and the tissue obtained is treated with a proteolytic enzyme which does not attack the basic structure of the collagen, non-collagenous protein-like accompanying substances and telopeptide-degrading enzyme.

2. The method according to claim 1, characterized in that pig skin is used as the collagen-containing tissue of slaughter animals.

2nd

PATENT CLAIMS

3. The method according to claim 1, characterized in that to remove the non-collagenous proteinaceous substances and telopeptides, the degreased and freed of water-soluble fiber with about 3% aqueous acetic acid, the pepsin in an amount of about 1%, based on the weight of the tissue used as the starting material, treated at a pH of 2.5-3.5.

4. The method according to claim 1, characterized in that the collagen purified by reprecipitation with NaCl is washed with 60-70% ethyl alcohol until the NaCl content of the collagen is 0-0.9%, based on the weight of the dry residue of the collagen pulp , is.