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REVENDICATIONS
1. Composition pharmaceutique, caractérisée par le fait qu'elle contient comme ingrédient actif la forme L ou DL (racémique) d'un composé de formule:
EMI1.1
dans laquelle R est un atome d'hydrogéne ou un groupe méthyle et
R' est un groupe amino ou hydroxyle ou un reste complétant un ester, ou un sel acceptable du point de vue pharmaceutique de ce composé.
2. Composition pharmaceutique suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le composé est la L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycine, la DL-2-(4-hydroxyphényl)glycine racémique, la L( + )-2.(4-méthoxyphényl)glycine, le L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycinamide, le L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycinate de méthyle, le Lof + )-2-(4-hydroxyphényl)glycinate d'isopropyle, ou le L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycinate de 3-méthylbutyle.
3. Composition pharmaceutique suivant l'une des revendications I ou 2, caractérisée en ce qu'elle contient 25 à 500 mg d'ingrédient actif par forme posologique unitaire.
4. Composition pharmaceutique suivant la revendication 3, caractérisée en ce qu'elle est sous forme de comprimés ou de capsules pour l'administration par voie orale.
5. Composition pharmaceutique suivant l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle est sous forme de solution pour l'administration parentérale, contenant 5 à 35 mg d'ingrédient actif par forme posologique unitaire.
6. Composition pharmaceutique suivant la revendication 5,
caractérisée en ce qu'elle est contenue dans une ampoule.
On a découvert que certaines phénylglycines L ou DL (racémi
ques) sont utiles dans le traitement de maladies et d'états qui se
caractérisent par une réduction du débit sanguin, de la quantité
d'oxygéne disponible ou du métabolisme des glucides dans le système cardio-vasculaire, par exemple une maladie cardiaque isché
mique (notamment l'angine de poitrine et l'infarctus du myocarde), l'insuffisance cardiaque et l'insuffisance cérébrale, ou d'autres
maladies impliquant des défauts du métabolisme des glucides, par
exemple l'obésité et le diabète.
L'invention concerne une composition pharmaceutique renfer
mant la forme L ou DL (racémique) d'un composé de formule:
EMI1.2
(dans laquelle R est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle et
R' est un groupe amino ou hydroxy ou contribue à la formation d'un groupe ester carboxylique) ou un sel acceptable du point de vue pharmaceutique de ce composé, en association avec un diluant ou support acceptable du point de vue pharmaceutique. cette composition étant sous une forme posologique unitaire (comme défini ci-après).
Lorsque R' participe à la formation d'un groupe ester carboxylique, il s'agit de préférence d'un groupe de formule OR2, dans laquelle R2 est un radical alkyle en C, à C5, un radical phényle éventuellement substitué par un radical alkyle en C, à C4, un radical alcoxy en C, à C4 ou un halogène, ou un groupe alkyle en C, à C4 à substituant aryle, ce substituant aryle étant un groupe phényle éventuellement substitué par un radical alkyle en C, à C4, un radical alcoxy en C, à C4 ou un halogène. Dans le présent brevet, le terme halogène désigne le chlore, le brome ou l'iode.
Des sels acceptables du point de vue pharmaceutique des composés de formule (I) peuvent être des sels d'addition avec des acides contenant des anions acceptables du point de vue pharmaceutique, par exemple les chlorhydrates, bromhydrates, sulfates ou bisulfates, phosphates ou phosphates acides, acétates, maléates, fumarates, lactates, tartrates, citrates, gluconates, succinates, paratoluènesulfonates et carbonates. Des sels acceptables du point de vue pharmaceutique des composés de formule (I) dans laquelle R' est un groupe hydroxy peuvent aussi être des sels contenant des cations acceptables du point de vue pharmaceutique tels que les sels de sodium, potassium, calcium et ammonium, et des sels formés avec des amines ou des aminoacides, par exemple les sels formés avec l'arginine, la méglumine, I'éthanolamine ou la choline.
La phénylglycine de formule (I) qui se montre la plus avantageuse est la L(+)-2-(4-hydroxyphényl)glycine. La D(-)-2-(4-hydroxyphényl)glycine est sensiblement inefficace et la forme L( +) du composé est donc notablement plus efficace que ne l'est la forme DL (racémique) à la même dose.
L'expression forme posologique unitaire utilisée dans le présent brevet désigne une unité physiquement distincte renfermant une quantité individuelle du composant actif en association avec un diluant ou véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique, la quantité de composant actif étant choisie de manière qu'au moins une unité ou une fraction d'une unité (sous forme sécable) soit requise pour une administration thérapeutique individuelle. Dans le cas d'unités sécables, par exemple de comprimés, au moins une fraction telle que la moitié ou le quart de l'unité peut suffire pour une administration thérapeutique individuelle.
Il y a lieu de remarquer que l'expression forme posologique unitaire ne s'adresse pas à de simples solutions, sauf si les solutions sont renfermées dans des enveloppes qui peuvent être ingérées, par exemple des capsules molles, ou si elles ont été préparées de manière qu'on puisse les administrer par voie parentérale, par exemple en ampoules qui conviennent pour une injection parentérale.
Les composés de formule (I) sont des composés connus. Des procédés de préparation des composés DL et de dédoublement subséquent de ces composés en leurs formes D et L sont bien connus (voir, par exemple, le brevet britannique No 1423822). Toutefois, aucune application médicale ou autre n'a été proposée antérieurement pour les formes L des composés, ni aucune application médicale suggérée pour les formes DL (formes racémiques).
Les composés de formule (I) peuvent être administrés à des patients en mélange avec un véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique ou en solution dans ce véhicule, ce dernier étant choisi compte tenu de la voie désirée d'administration et de la pratique pharmaceutique normale.
Par exemple, on peut les administrer par voie orale sous forme de comprimés ou de capsules contenant une dose unitaire du composé de formule (I), en association avec des excipients tels que
l'amidon de mais, le carbonate de calcium, le phosphate dicalcique,
I'acide alginique, le lactose, le stéarate de magnésium, le produit Primojel (marque déposée) ou le talc. Les comprimés sont ordinairement préparés par granulation des ingrédients ensemble et
compression du mélange résultant en comprimés de la taille désirée.
Les capsules sont habituellement préparées par granulation des
ingrédients ensemble et introduction du mélange dans des capsules
de gélatine dure dont les dimensions sont choisies en fonction de la quantité d'ingrédients.
Les composés peuvent aussi être administrés par voie parentérale, par exemple par injection intramusculaire, intraveineuse ou sous-cutanée. Pour l'administration parentérale, on les utilise de la meilleure façon sous la forme d'une solution aqueuse stérile qui peut contenir d'autres corps-dissous, par exemple une quantité suffisante de sels (tels que l'acétate de sodium, le lactate de sodium, le succinate de sodium ou le chlorure de sodium), ou de dextrose (par exemple 5% de dextrose anhydre BP pour compositions injectables),
de manière à rendre la solution isotonique. Un solvant organique
acceptable du point de vue pharmaceutique tel que le polyéthylèneglycol ou l'éthanol peut aussi remplacer une partie de l'eau. Un antioxydant tel que le métabisulfite de sodium peut aussi être présent, par exemple en quantité atteignant 0,1% en poids.
Ces formulations parentérales peuvent être préparées par des opérations classiques. Par exemple, dans un mode opératoire usuel impliquant la préparation d'une formulation intraveineuse contenant un succinate, une solution 0,2M d'acide succinique peut être mélangée avec une solution d'hydroxyde de sodium 0,2M pour former une solution de pH égal à 5. Le composé de formule (I) est ensuite dissous habituellement dans la solution de succinate en quantité de I à 2 % sur une base poids/volume. La solution résultante peut ensuite être stérilisée conformément à la méthode décrite dans l'édition de 1973 de la pharmacopée britannique, par filtration sur un filtre retenant les bactéries dans des conditions aseptiques, en faisant arriver la solution dans des récipients stériles pour satisfaire au test de stérilité défini dans l'annexe 121 de la pharmacopée britannique de 1973.
A titre de variante, on peut préparer des formulations parentérales stables basées sur une solution saline isotonique en dissolvant successivement un antioxydant tel que le métabisulfite de sodium et du chlorure de sodium dans de l'eau purgée à l'azote pour former une solution de chlorure de sodium à peu près décimolaire, en dissolvant le composé de formule (I) dans cette solution en quantité de 1 à 2% sur base poids/volume et en ajustant le pH à environ 4 par addition d'acide chlorhydrique décinormal. La solution est ensuite stérilisée et versée dans des récipients, comme on l'a déjà indiqué. Des récipients convenables sont par exemple des fioles stériles en verre de capacité choisie de manière qu'elles contiennent le volume désiré de solution, ce volume renfermant habituellement une ou plusieurs doses unitaires du composé de formule (I).
Les composés de formule (I) peuvent aussi être administrés par infusion dans une veine d'une formulation parentérale du type défini cidessus.
Pour l'administration orale ou parentérale à des patients humains, la posologie de la forme L d'un composé de formule (I) peut aller de 0,5 à 10 et, plus vraisemblablement, de 2 à 5 mg/kg pour un patient adulte moyen (50 à 70 kg), cette quantité étant administrée jusqu'à 5 fois par jour. Ainsi, des comprimés ou capsules doivent en général pouvoir contenir 25 à 500 mg de composé actif, un ou plusieurs de ces comprimés ou capsules devant être absorbés par voie orale jusqu'à 5 fois parjour. Des unités posologiques pour l'administration parentérale doivent pouvoir contenir 25 à 700 mg de composé actifdans 5 à 20 ml de solution. Par conséquent, on pourrait ordinairement choisir une fiole de 50 ml contenant 5 à 35 mg du composé actif par millilitre dans 30 à 50 ml de solution.
La posologie envisagée de la forme DL (forme racémique) des composés est naturellement plus grande que celle de la forme L.
II y a évidemment lieu de remarquer que le médecin est dans chaque cas à même de déterminer la posologie réelle qui convient le mieux pour l'individu et qui varie avec l'âge, le poids et la réaction du patient. Les posologies définies ci-dessus sont des exemples correspondant à un individu moyen.
Il peut naturellement exister des cas individuels qui nécessitent des gammes posologiques plus hautes ou plus basses.
L'intérêt potentiel des composés de formule (I) pour le traitement de maladies ou d'états caractérisés par une réduction du débit sanguin, de la quantité d'oxygène disponible ou du métabolisme des glucides dans le système cardio-vasculaire, ou pour le traitement d'une maladie ou d'un état impliquant un défaut du métabolisme des glucides, s'estime d'après leur aptitude:
:
I ) à favoriser l'oxydation du glucose et/ou d'un pyruvate par des préparations isolées de muscles de rat in vitro;
2) à accroître la proportion de la forme active de l'enzyme appelé pyruvatedéshydrogénase (PDH)-dans des organes d'animaux in vivo;
3) à réduire la demande d'oxygène et à affecter l'assimilation relative de métabolites glucidiques et lipidiques par le cceur rythmé électriquement de chiens anesthésiés, en présence ou en l'absence d'une excitation par l'isoprènaline, et
4) à réduire les taux de glycémie chez des animaux rendus diabétiques par une lésion chimique du pancréas.
Une activité dans des tests relatifs au paragraphe 1 est l'indice de l'intérêt potentiel des composés dans le traitement d'un trouble cardiaque ischémique, de l'insuffisance cardiaque, de l'insuffisance cérébrale, du diabète débutant à la maturité ou de l'obésité. Une activité dans des tests relatifs au paragraphe 2 est en outre l'indice de l'intérêt potentiel des composés dans le traitement de ces maladies ou de ces états et, en particulier, une activité exercée sur le coeur d'un animal in vivo est l'indice d'un intérêt pour le traitement d'une maladie cardiaque ischémique et d'une insuffisance cardiaque. Une activité dans des tests relatifs au paragraphe 3 est en outre l'indice de l'utilité potentielle des composés dans le traitement d'un trouble cardiaque ischémique et d'une insuffisance cardiaque.
Une activité dans des tests relatifs au paragraphe 4 est en outre l'indice de l'utilité potentielle des composés dans le traitement du diabète.
La préparation de formes posologiques unitaires conformément à l'invention est illustrée par les exemples suivants:
Exemple 1:
On dissout 12,0 g d'acide acétique cristallisable et 16,4 g d'acétate de sodium anhydre, chacun dans 1000 ml d'eau fraîchement distillée pour produire des solutions 0,2M. On agite ensuite 148,0 ml de la solution d'acide acétique avec 352,0 ml de la solution d'acétate de sodium et on ajuste le volume du mélange à 1000 ml par addition d'eau fraîchement distillée. On ajoute ensuite 10,0 g (0,056 mol) de L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycine et la solution résultante à 1% en poids/volume de L(+)-2-(4-hydroxyphényl)glycine a un pH égal à 5.
On stérilise ensuite cette solution conformément au procédé décrit dans la pharmacopée britannique (1973) par filtration sur un filtre convenable retenant les bactéries dans des conditions aseptiques, en la faisant arriver dans des récipients stériles de manière à satisfaire aux normes du test de stérilité décrit dans l'annexe 121 de la pharmacopée britannique de 1973. Des récipients convenables consistent en fioles de verre stériles de 50 ml qui, lorsqu'elles contiennent 30 ml de la solution finale, renferment 300 mg de l'ingrédient actif.
Exemple 2:
On dissout 23,62 g d'acide succinique et 8 g d'hydroxyde de sodium, chacun dans 1000 ml d'eau fraîchement distillée pour produire des solutions 0,2M. On mélange ensuite 250 ml de la solution d'acide succinique avec 267,0 ml de la solution d'hydroxyde de sodium et on ajuste le volume du mélange à 1000 ml par addition d'eau fraîchement distillée. On ajoute ensuite 10,0 g (0,056 mol) de L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycine et la solution résultante à 1% en poids/volume de L( + )2-(4-hydroxyphényl)glycine a un pH égal à 5. On la stérilise ensuite comme indiqué dans l'exemple 1. Lorsqu'on charge 40 ml de la solution finale dans des fioles en verre stériles de 50 ml, elles contiennent 400 mg de l'ingrédient actif.
Exemple 3:
On dissout 21,0 g d'acide citrique monohydraté dans 200;0 ml d'une solution 0,1M d'hydroxyde de sodium dans de l'eau fraîchement distillée et on ajuste le volume de la solution résultante à 1000 ml par addition d'eau fraîchement distillée et refroidie. On ajuste ensuite à 1000 ml un volume de 963,0 ml de cette solution par addition d'une solution 0,1M d'acide chlorhydrique dans l'eau.
On ajoute ensuite 10,0 g (0,056 mol) de L(+)-2-(4-hydroxyphényl)- glycine pour obtenir une solution à 1% en poids/volume dont le pH final à 23 C est égal à 5 et qu'on stérilise ensuite comme dans l'exemple 1. Lorsqu'on charge 50 ml de la solution finale dans des fioles en verre de 50 ml qui ont été stérilisées, elles contiennent 500 mg de l'ingrédient actif.
Exemple 4:
On purge à l'azote 750 ml d'eau fraîchement distillée puis on ajoute successivement 6,0 g de chlorure de sodium, 300 mg de mètabisulfite de sodium (pharmacopée britannique) et 15 g de L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycine, et on agite pour dissoudre les ingrédients. On ajuste ensuite le pH à environ 4,0 par addition d'acide chlorhydrique décinormal, on ajuste le volume de la solution à il par addition d'eau fraîchement distillée et on réajuste le pH de la solution à 4,0 + 0,35 par addition d'acide chlorhydrique décinormal pour obtenir une solution saline isotonique stable à 1,5% en poids/volume du composé actif.
On stérilise cette solution comme dans l'exemple 1 et on l'introduit dans des fioles en verre stérilisées de 50 ml, qui renferment chacune 750 ml de l'ingrédient actif lorsque leur charge est de 50 ml de solution. On maintient en permanence une atmosphère d'azote sur la solution et on purge les fioles à l'azote avant et après leur remplissage.
Exemple 5:
On répète le mode opératoire de chacun des exemples I à 4 cidessus en utilisant le double de la quantité de DL-2-(4-hydroxyphényl)glycine racémique par rapport à la quantité de l'isomère
L(+) pour obtenir des solutions contenant le double de la concentration en ingrédient actif.
Exemple 6:
On donne ci-après des exemples représentatifs de formulations de comprimés ou de capsules contenant comme ingrédient actif la L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycine.
EMI3.1
<tb>
r
<tb> <SEP> mg <SEP> / <SEP> comprimé <SEP> ou <SEP> capsule
<tb> <SEP> A <SEP> B <SEP> C <SEP> D <SEP> E
<tb> <SEP> Ingrédient <SEP> actif <SEP> 500 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 25 <SEP> 25
<tb> <SEP> Lactose <SEP> 30 <SEP> 170 <SEP> - <SEP> <SEP> 220 <SEP>
<tb> <SEP> Amidon <SEP> de <SEP> maïs <SEP> 60 <SEP> 80 <SEP> - <SEP> <SEP> 105 <SEP>
<tb> <SEP> Cellulose <SEP> microcristalline
<tb> <SEP> (Avicel) <SEP> - <SEP> <SEP> - <SEP> <SEP> 170 <SEP> - <SEP> <SEP> 220
<tb> <SEP> Glycine <SEP> - <SEP> - <SEP> <SEP> 80 <SEP> - <SEP> 105
<tb> <SEP> Silice <SEP> en <SEP> fines <SEP> particules
<tb> <SEP> (Aerosil) <SEP> - <SEP> <SEP> 0,35 <SEP> 0,35 <SEP> 0,35 <SEP> 0,35
<tb> <SEP>
Stéarate <SEP> de <SEP> magnésium* <SEP> 5 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> <SEP> 595 <SEP> .... <SEP> 353,35 <SEP> ....
<tb>
*Mélange à 9:1 avec du laurylsulfate de sodium.
Avicel et Aerosil sont des marques déposées.
Pour les formulations A, B et D, les ingrédients sont mélangés intimement, puis les mélanges sont introduits directement dans des capsules en gélatine dure de diamètre convenable, ou bien ils sont granulés et transformés en comprimés de diamètre désiré. Pour les formulations C et E, les ingrédients sont mélangés intimement et agglomérés. Les corps agglomérés sont subdivisés en granules puis les granules sont introduits dans des capsules de diamètre convenable ou transformés directement en comprimés de diamétre désiré.
Dans les formulations A, B et D, le lactose peut être remplacé par des quantités égales de carbonate de calcium ou de phosphate dicalcique.
Exemple 7:
On répète le mode opératoire de l'exemple 6, en utilisant la
même quantité de DL-2-(4-hydroxyphényl)glycine (racémique) que
d'isomère L(+). Naturellement, il peut être nécessaire de faire
absorber deux fois autant de capsules ou de comprimés de cet
exemple, pour une seule administration thérapeutique, qu'il n'en faut dans le cas des comprimés ou capsules de l'exemple 6.
Exemple 8:
On répète le mode opératoire des exemples I à 4 et 6 en utilisant des quantités équimolaires des composés suivants à la place de la L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycine:
L( + )-2-(4-méthoxyphényl)glycine,
L( +)-2-(4-hydroxyphényl)glycinate de méthyle,
L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycinate d'isopropyle,
L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycinate de 2-méthylbutyle,
L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycinamide.
Exemple 9:
On répète le mode opératoire des exemples 5 et 7 en utilisant des quantités équimolaires des composés DL (racémiques) de l'exemple 8, à la place de la DL-2-(4-hydroxyphényl)glycine (racémique).
II peut être avantageux de kératiniser des comprimés conformes à l'invention, c'est-à-dire de les enrober d'une matière telle que l'acétophtalate de cellulose ou le phtalate d'hydroxypropylméthylcellulose qui ne se dissout pas dans l'estomac, mais dans l'intestin, et d'inclure dans la composition du comprimé une matière effervescente telle que le bicarbonate de sodium et un acide alimentaire tel que l'acide tartrique, afin d'éviter une désactivation de l'ingrédient actif dans l'estomac et/ou dans l'intestin et de renforcer la concentration de l'ingrédient actif dans le sang.
Il peut aussi être désirable d'enrober les comprimés d'une composition sucrée pour les rendre plus agréables au goût.
On a testé l'aptitude de composés de formule (I) à accroître l'oxydation du glucose et/ou d'un pyruvate par les méthodes suivantes:
I) (a) On prélève le tissu du diaphragme de rats auxquels on a fait absorber un régime à forte teneur en matières grasses, semblable au régime B décrit par Zaragoza et Felber ( Horm. Metab. Res. ,
1970, 2, 323). On évalue l'oxydation d'un pyruvate par ce tissu en mesurant la vitesse d'incorporation de carbone-l4 provenant de pyruvate marqué au carbone-14 à de l'anhydride carbonique in vitro, comme décrit par Bringolf( Eur. J. Biochem. , 1972,26, 360).
La vitesse d'oxydation du pyruvate est abaissée de 50 à 75% comparativement à la vitesse d'oxydation obtenue avec le tissu du diaphragme de rats absorbant un régime normal. Lorsqu'on ajoute de la L(-t)-2-(4-hydroxyphényl)glycine au milieu, on constate que ce composé stimule l'oxydation des pyruvates par le tissu du diaphragme de rats absorbant des matières grasses, d'une manière proportionnelle à la dose. La concentration limite constituant le seuil de cette stimulation est d'environ 0,25 mmol et une stimulation maximale de 170% est obtenue à des concentrations de 4 mmol et au-dessus.
La D(-)-2-(4-hydroxyphényl)glycine n'exerce pas d'effet notable sur l'oxydation des pyruvates par le tissu du diaphragme de rats absorbant des matières grasses, à des concentrations allant jusqu'à 4 mmol, tandis que le composé DL (racémique) exerce un effet qui est à peu près la moitié de celui de l'isomère L(+).
Le degré de stimulation par d'autres composés de formule (I) à une concentration de 0,5 mmol est illustré par le tableau suivant:
Composé Stimulation, % L( + )-2-(4-métoxyphényl)glycîne 79 L(+)-2-(4-hydroxyphényl)glycinate de méthyle 89
L(+ )-2-(4-hydroxyphényl)glycinate
d'isopropyle 34 L( +)-2-(4-hydroxyphenyl)glycinate de
3-méthylbutyle 32
L( +)-2-(4-hydroxyphényl)glycinamide 51
I) (b) On étudie la vitesse d'oxydation du glucose par des coeurs isolés de rats à la diète totale dans un circuit de perfusion oxygénée avec recyclage, en mesurant la vitesse d'incorporation de carbone
14 provenant de glucose marqué avec cet isotope à de l'anhydride carbonique par une méthode identique à celle qui a été décrite par
Morgan et coll. ( J. Biol.
Chem. , 1961, 236, 253) et par Randle et coll. ( Biochem. J. , 1964, 93, 652). Le liquide de perfusion contient du glucose, un palmitate, de l'insuline el de la sérumalbumine de boeuf. On constate que la vitesse normale d'oxydation du glucose est de 1,27 f 0,32 ±mol/h (moyenne de 9 observations).
Lorsqu'on inclut de la L(+)'2-(4-bydroxyphényl)glycine dans le liquide de perfusion à une concentration de 2 mmol, la vitesse d'oxydation est portée à 4,77 + 1,53 tamol/h (moyenne de 9 observations). La D(-)-2-(4-hydroxyphényl)glycine n'exerce aucun effet notable sur la vitesse d'oxydation lorsqu'elle est incluse dans le liquide de perfusion à la même concentration.
L'aptitude de composés de formule (I) Åa augmenter la proportion de la forme active de l'enzyme appelé pyruvatedéshydrogénase a été mesurée par la méthode suivante:
2) Des rats auxquels on fait absorber le même régime à forte teneur en matières grasses que dans le test I (a) sont traités soit avec un placebo, soit avec le composé de formule (1), par injection souscutanée ou intraveineuse ou par administration orale, et les coeurs de ces rats sont prélevés à divers moments après le traitement et homogénéisés dans des conditions qui minimisent les variations de la proportion de pyruvatedéshydrogénase existant sous la forme active, comme décrit par Whitehouse et Randle ( Biochem. J. ,
1973, 134, 651).
La quantité totale d'enzymes qui est présente (PDHt) et la quantité qui est présente sous la forme active (PDHa) sont déterminées par une méthode identique à celle qui a été décrite par Taylor et coll. dans J. Biol. Chem. , 1973, 248, 73. On constate que le test d'absorption d'un régime à base de matières grasses abaisse le rapport PDHa/PDHt d'une valeur normale d'environ 0,7 à une valeur comprise entre 0,05 et 0,2. Le traitement de rats absorbant de la matière grasse avec la L(+)- 2-(4-hydroxyphényl)glycine, par voie parentérale ou par voie orale, élève ce rapport d'une façon proportionnelle à la dose, les seuils d'obtention de cet effet étant de 0,05 mmol/kg par injection intraveineuse et 0,1 à 0,2 mmol/kg par injection sous-cutanée ou par administration orale.
Le rapport est élevé à une valeur comprise entre 0,8 et 1,0 (c'est-à-dire au-dessus des valeurs correspondant à des rats absorbant un régime normal) par des doses égales et supérieures à 0,6mmol/kg. La D(-)-2-(4-hydroxyphényl)glycine exerce très peu d'effet à des doses atteignant 1,2 mmol/kg, tandis que le composé DL (racémique), bien que déployant une certaine activité, n'exerce que la moitié ou moins de la moitié de l'effet de l'isomère L(+) aux mêmes doses.
L'élévation du rapport PDHa/PDHt sous l'effet d'autres composés de formule (I) à la dose de 0,6 mmol/kg est indiquée sur le tableau suivant: Voie Rapport PDHa/PDHt
Composé d'administration Placebo Composé
de la dose'
L(+)-2-(4-hydroxy
phényl)glycinate s.c. 0,13 0,69
de méthyle p.o 0,13 0,42 L(+)-2-(4-hydroxyc
phényl)glycinate
de 3-méthylbutyle s.c. 0,05 0,51 L( + )-2-(4-hydroxy-
phenyl)glycin- s.c. 0,16 0,93
amide p.o. 0,16 0,91 L S.C. = voie sous-cutanée; p.o. = voie orale.
L'aptitude de composés de formule (I) à réduire la demande d'oxygène et à affecter l'assimilation relative des métabolites glycidiques et lipidiques dans le coeur a été déterminée en mesurant l'effet exercé par les composés sur le débit sanguin du myocarde et le métabolisme cardiaque de chiens de race beagle anesthésiés, à jeun, en caisse fermée, avec une sonde cardiaque en position pour permettre le prélèvement simultané d'échantillons de sang du sinus coronaire d'une artère. On mesure le débit sanguin du sinus coronaire d'après la technique de clairance de l'hydrogène gazeux décrite par Aukland et coll. dans Circulation Res. , 1964, 14, 164.
Le coeur est rythmé électriquement à 155 battements/mn et des enregistrements des paramètres hémodynamiques (pression sanguine, pression ventriculaire gauche et sa dérivée première) sont effectués en continu. On effectue des mesures témoins du débit sanguin coronaire et on prélève des échantillons de sang à des intervalles de 40 mn, tant sur un animal non traité que sur le même animal traité par infusion d'isoprénaline (60 ng/kg/mn), qui a pour effet à la fois de stimuler la contraction cardiaque et d'accroître les taux plasmatiques d'acides gras libres. Le composé de formule (I) est ensuite administré par voie intraveineuse, et des mesures sont effectuées et des échantillons prélevés de nouveau 40 et 90 mn plus tard.
Les échantillons de sang prélevés dans l'artère et dans le sinus coronaire sont analysés pour déterminer les teneurs en oxyhémoglobine, en pyruvate et en acides gras libres (AGL), le produit des différences entre les valeurs obtenues pour le sang artériel et pour le sang du sinus coronaire par le débit sanguin coronarien étant une mesure de la consommation d'oxygène, de l'absorption de pyruvate et, respectivement, de l'absorption d'acides gras libres par le myocarde.
On constate que la L( + )-2-(4-hydroxyphényl)glycine, à des doses de 0,02 à 0,1 mmol/kg, double au moins l'absorption de pyruvate par le myocarde, tant en présence qu'en l'absence d'isoprénaline, pendant une période d'au moins 90 mn après l'administration, ce qui est en accord avec son action prouvée comme stimulateur de pyruvatedéshydrogénase. Le débit sanguin du myocarde est en même temps élevé jusqu'à 150% et la consommation d'oxygène dans le myocarde est réduite d'environ 20% en présence d'isoprénaline.
L'absorption d'acides gras libres par le myocarde est affectée à un degré variable, mais elle est généralement réduite. Aucun effet n'est exercé sur l'un quelconque des paramètres hémodynamiques mesurés.
L'aptitude de composés de formule (I) à réduire la glycémie a été évaluée en mesurant l'effet de ces composés sur les taux de glucose sanguin chez des rats atteints de diabète provoqué par un traitement à la streptozotocine (85 mg/kg). Quatre jours après ce traitement, on fait absorber à plusieurs rats I mmol de composé par kilo par injection intrapéritonéale, tandis qu'on fait absorber un placebo à un nombre similaire de rats. L'administration des doses est répétée après 24 h et 48 h. Des échantillons de sang sont prélevés à la veine caudale immédiatement avant chaque administration (la dose étant administrée 2 h après que les animaux ont été placés à l'écart de la nourriture) et I, 2 et 3 h après l'administration de la troisième dose.
Après 2j de traitement à la L(+)-2-(4-hydroxyphényl)glycine (c'est-à-dire immédiatement avant l'administration de la troisième dose de 1 mmol/kg), on a constaté que les taux de glycémie avaient baissé de 378 + 8 mg/100 ml à 356 + 4 mg/100 ml, comparativement à une légère augmentation avec passage de 373 + 8 mg/100 ml à 383 + 10 mg/100 ml dans le cas d'animaux traités avec le placebo, tandis que 2 h après l'administration de la troisième dose,
les taux sanguins avaient baissé encore davantage jusqu'à une valeur minimale de 313 + 7 mg/100 ml comparativement à une valeur de 385 + 7 mg/100 ml pour des animaux traités avec le placebo (tous les chiffres sont des valeurs moyennes pour 8 animaux).
Aucun des composés de formule (I) n'a manifesté d'effets secondaires toxiques aigus lorsqu'on l'a expérimenté in vivo chez des rats ou des chiens aux doses spécifiées dans les tests décrits cidessus.
** ATTENTION ** start of the DESC field may contain end of CLMS **.
CLAIMS
1. Pharmaceutical composition, characterized in that it contains, as active ingredient, the L or DL (racemic) form of a compound of formula:
EMI1.1
in which R is a hydrogen atom or a methyl group and
R 'is an amino or hydroxyl group or a residue supplementing an ester, or a pharmaceutically acceptable salt of this compound.
2. Pharmaceutical composition according to claim 1, characterized in that the compound is L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycine, DL-2- (4-hydroxyphenyl) racemic glycine, L (+) - 2. (4-methoxyphenyl) glycine, methyl L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycinamide, methyl L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycinate, Lof +) -2- (4 -isopropyl-hydroxyphenyl) glycinate, or 3-methylbutyl L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycinate.
3. Pharmaceutical composition according to one of claims I or 2, characterized in that it contains 25 to 500 mg of active ingredient per unit dosage form.
4. Pharmaceutical composition according to claim 3, characterized in that it is in the form of tablets or capsules for oral administration.
5. Pharmaceutical composition according to one of claims 1 or 2, characterized in that it is in the form of a solution for parenteral administration, containing 5 to 35 mg of active ingredient per unit dosage form.
6. Pharmaceutical composition according to claim 5,
characterized in that it is contained in an ampoule.
It has been discovered that certain phenylglycines L or DL (racem
are useful in the treatment of diseases and conditions that occur
characterized by a reduction in blood flow, the amount
available oxygen or carbohydrate metabolism in the cardiovascular system, for example ischial heart disease
mites (including angina and myocardial infarction), heart failure and brain failure, or others
diseases involving defects in carbohydrate metabolism, for example
example obesity and diabetes.
The invention relates to a pharmaceutical composition comprising
mant the L or DL (racemic) form of a compound of formula:
EMI1.2
(in which R is a hydrogen atom or a methyl group and
R 'is an amino or hydroxy group or contributes to the formation of a carboxylic ester group) or a pharmaceutically acceptable salt of this compound, in combination with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier. this composition being in a unit dosage form (as defined below).
When R ′ participates in the formation of a carboxylic ester group, it is preferably a group of formula OR2, in which R2 is a C 1 to C 5 alkyl radical, a phenyl radical optionally substituted by an alkyl radical in C, in C4, an alkoxy radical in C, in C4 or a halogen, or an alkyl group in C, in C4 with aryl substituent, this aryl substituent being a phenyl group optionally substituted by an alkyl radical in C, in C4, a C 1 -C 4 alkoxy radical or a halogen. In the present patent, the term halogen designates chlorine, bromine or iodine.
Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formula (I) can be addition salts with acids containing pharmaceutically acceptable anions, for example hydrochlorides, hydrobromides, sulfates or bisulfates, acid phosphates or phosphates , acetates, maleates, fumarates, lactates, tartrates, citrates, gluconates, succinates, paratoluenesulfonates and carbonates. Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formula (I) wherein R 'is a hydroxy group may also be salts containing pharmaceutically acceptable cations such as the sodium, potassium, calcium and ammonium salts, and salts formed with amines or amino acids, for example salts formed with arginine, meglumine, ethanolamine or choline.
The most advantageous phenylglycine of formula (I) is L (+) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycine. D (-) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycine is substantially ineffective and the L (+) form of the compound is therefore significantly more effective than the DL (racemic) form at the same dose.
The term unit dosage form used in this patent denotes a physically separate unit containing an individual amount of the active ingredient in association with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier, the amount of active ingredient being chosen so that at least a unit or fraction of a unit (in breakable form) is required for individual therapeutic administration. In the case of breakable units, for example tablets, at least a fraction such as half or a quarter of the unit may be sufficient for individual therapeutic administration.
It should be noted that the expression unit dosage form does not refer to simple solutions, unless the solutions are contained in envelopes which can be ingested, for example soft capsules, or if they have been prepared from so that they can be administered parenterally, for example in ampoules suitable for parenteral injection.
The compounds of formula (I) are known compounds. Methods of preparing DL compounds and subsequently splitting these compounds into their D and L forms are well known (see, for example, British Patent No. 1423822). However, no medical or other application has previously been proposed for the L forms of the compounds, nor any medical application suggested for the DL forms (racemic forms).
The compounds of formula (I) can be administered to patients in admixture with a pharmaceutically acceptable vehicle or in solution in this vehicle, the latter being chosen taking into account the desired route of administration and normal pharmaceutical practice. .
For example, they can be administered orally in the form of tablets or capsules containing a unit dose of the compound of formula (I), in combination with excipients such as
corn starch, calcium carbonate, dicalcium phosphate,
Alginic acid, lactose, magnesium stearate, Primojel (registered trademark) or talc. The tablets are usually prepared by granulating the ingredients together and
compression of the resulting mixture into tablets of the desired size.
The capsules are usually prepared by granulation of
ingredients together and introduction of the mixture into capsules
hard gelatin, the dimensions of which are chosen according to the quantity of ingredients.
The compounds can also be administered parenterally, for example by intramuscular, intravenous or subcutaneous injection. For parenteral administration, they are best used in the form of a sterile aqueous solution which may contain other dissolved bodies, for example a sufficient amount of salts (such as sodium acetate, lactate sodium, sodium succinate or sodium chloride), or dextrose (for example 5% anhydrous BP dextrose for injectable compositions),
so as to make the solution isotonic. An organic solvent
pharmaceutically acceptable such as polyethylene glycol or ethanol can also replace some of the water. An antioxidant such as sodium metabisulfite can also be present, for example in an amount reaching 0.1% by weight.
These parenteral formulations can be prepared by conventional procedures. For example, in a usual procedure involving the preparation of an intravenous formulation containing a succinate, a 0.2M solution of succinic acid can be mixed with a 0.2M sodium hydroxide solution to form a solution of equal pH to 5. The compound of formula (I) is then usually dissolved in the succinate solution in an amount of I to 2% on a weight / volume basis. The resulting solution can then be sterilized according to the method described in the 1973 edition of the British Pharmacopoeia, by filtration on a filter retaining the bacteria under aseptic conditions, by delivering the solution in sterile containers to satisfy the test of sterility defined in annex 121 of the British pharmacopoeia of 1973.
Alternatively, stable parenteral formulations based on isotonic saline can be prepared by successively dissolving an antioxidant such as sodium metabisulfite and sodium chloride in nitrogen-purged water to form a chloride solution of approximately decimolar sodium, by dissolving the compound of formula (I) in this solution in an amount of 1 to 2% on a weight / volume basis and adjusting the pH to approximately 4 by addition of decinormal hydrochloric acid. The solution is then sterilized and poured into containers, as already indicated. Suitable containers are for example sterile glass vials of capacity chosen so that they contain the desired volume of solution, this volume usually containing one or more unit doses of the compound of formula (I).
The compounds of formula (I) can also be administered by infusion into a vein of a parenteral formulation of the type defined above.
For oral or parenteral administration to human patients, the dosage of form L of a compound of formula (I) can range from 0.5 to 10 and, more probably, from 2 to 5 mg / kg for a patient average adult (50 to 70 kg), this amount being administered up to 5 times a day. Thus, tablets or capsules must generally be able to contain 25 to 500 mg of active compound, one or more of these tablets or capsules having to be absorbed orally up to 5 times per day. Dosage units for parenteral administration should be capable of containing 25 to 700 mg of active compound in 5 to 20 ml of solution. Therefore, one could ordinarily choose a 50 ml vial containing 5 to 35 mg of the active compound per milliliter in 30 to 50 ml of solution.
The envisaged dosage of the DL form (racemic form) of the compounds is naturally greater than that of the L form.
It should obviously be noted that the doctor is in each case able to determine the actual dosage which is best suited for the individual and which varies with the age, weight and reaction of the patient. The dosages defined above are examples corresponding to an average individual.
There may, of course, be individual cases which require higher or lower dosage ranges.
The potential benefit of the compounds of formula (I) for the treatment of diseases or conditions characterized by a reduction in blood flow, the amount of oxygen available or the metabolism of carbohydrates in the cardiovascular system, or for the treatment of a disease or condition involving a defect in the metabolism of carbohydrates, estimated according to their ability:
:
I) to favor the oxidation of glucose and / or of a pyruvate by preparations isolated from rat muscles in vitro;
2) to increase the proportion of the active form of the enzyme called pyruvated dehydrogenase (PDH) - in animal organs in vivo;
3) to reduce the demand for oxygen and to affect the relative assimilation of carbohydrate and lipid metabolites by the electrically rhythmic heart of anesthetized dogs, in the presence or in the absence of an excitation by isoprenaline, and
4) reduce blood sugar levels in animals made diabetic by chemical damage to the pancreas.
An activity in tests relating to paragraph 1 is indicative of the potential interest of the compounds in the treatment of ischemic heart disorder, heart failure, brain failure, diabetes beginning at maturity or obesity. An activity in tests relating to paragraph 2 is further indicative of the potential interest of the compounds in the treatment of these diseases or conditions and, in particular, an activity exerted on the heart of an animal in vivo is an indication of interest in the treatment of ischemic heart disease and heart failure. Activity in tests relating to paragraph 3 is further indicative of the potential usefulness of the compounds in the treatment of ischemic heart disorder and heart failure.
Activity in tests relating to paragraph 4 is further indicative of the potential usefulness of the compounds in the treatment of diabetes.
The preparation of unit dosage forms in accordance with the invention is illustrated by the following examples:
Example 1:
12.0 g of glacial acetic acid and 16.4 g of anhydrous sodium acetate are each dissolved in 1000 ml of freshly distilled water to produce 0.2M solutions. Then 148.0 ml of the acetic acid solution is stirred with 352.0 ml of the sodium acetate solution and the volume of the mixture is adjusted to 1000 ml by addition of freshly distilled water. Then added 10.0 g (0.056 mol) of L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycine and the resulting solution at 1% w / v of L (+) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycine has a pH of 5.
This solution is then sterilized according to the method described in the British Pharmacopoeia (1973) by filtration on a suitable filter retaining the bacteria under aseptic conditions, by making it arrive in sterile containers so as to meet the standards of the sterility test described in Annex 121 to the British Pharmacopoeia of 1973. Suitable containers consist of 50 ml sterile glass vials which, when containing 30 ml of the final solution, contain 300 mg of the active ingredient.
Example 2:
23.62 g of succinic acid and 8 g of sodium hydroxide are each dissolved in 1000 ml of freshly distilled water to produce 0.2M solutions. 250 ml of the succinic acid solution are then mixed with 267.0 ml of the sodium hydroxide solution and the volume of the mixture is adjusted to 1000 ml by addition of freshly distilled water. Then added 10.0 g (0.056 mol) of L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycine and the resulting solution at 1% w / v of L (+) 2- (4-hydroxyphenyl) glycine a a pH equal to 5. It is then sterilized as indicated in Example 1. When 40 ml of the final solution are loaded into sterile 50 ml glass vials, they contain 400 mg of the active ingredient.
Example 3:
21.0 g of citric acid monohydrate are dissolved in 200; 0 ml of a 0.1M solution of sodium hydroxide in freshly distilled water and the volume of the resulting solution is adjusted to 1000 ml by addition of freshly distilled and cooled water. A volume of 963.0 ml of this solution is then adjusted to 1000 ml by adding a 0.1M solution of hydrochloric acid in water.
Then added 10.0 g (0.056 mol) of L (+) - 2- (4-hydroxyphenyl) - glycine to obtain a 1% solution by weight / volume whose final pH at 23 C is equal to 5 and qu then sterilized as in Example 1. When 50 ml of the final solution is loaded into 50 ml glass vials which have been sterilized, they contain 500 mg of the active ingredient.
Example 4:
750 ml of freshly distilled water are purged with nitrogen and then 6.0 g of sodium chloride, 300 mg of sodium metabisulfite (British pharmacopoeia) and 15 g of L (+) -2- (4- hydroxyphenyl) glycine, and stirred to dissolve the ingredients. The pH is then adjusted to approximately 4.0 by addition of decinormal hydrochloric acid, the volume of the solution is adjusted to it by addition of freshly distilled water and the pH of the solution is readjusted to 4.0 + 0.35 by addition of decinormal hydrochloric acid to obtain an isotonic saline solution stable at 1.5% w / v of the active compound.
This solution is sterilized as in Example 1 and introduced into 50 ml sterilized glass vials, which each contain 750 ml of the active ingredient when their charge is 50 ml of solution. A nitrogen atmosphere is constantly maintained on the solution and the flasks are purged with nitrogen before and after filling.
Example 5:
The procedure of each of Examples I to 4 is repeated above, using twice the amount of racemic DL-2- (4-hydroxyphenyl) glycine relative to the amount of the isomer.
L (+) to obtain solutions containing twice the concentration of active ingredient.
Example 6:
Representative examples of tablet or capsule formulations containing the active ingredient L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycine are given below.
EMI3.1
<tb>
r
<tb> <SEP> mg <SEP> / <SEP> tablet <SEP> or <SEP> capsule
<tb> <SEP> A <SEP> B <SEP> C <SEP> D <SEP> E
<tb> <SEP> Active ingredient <SEP> <SEP> 500 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 25 <SEP> 25
<tb> <SEP> Lactose <SEP> 30 <SEP> 170 <SEP> - <SEP> <SEP> 220 <SEP>
<tb> <SEP> Starch <SEP> from <SEP> corn <SEP> 60 <SEP> 80 <SEP> - <SEP> <SEP> 105 <SEP>
<tb> <SEP> Cellulose <SEP> microcrystalline
<tb> <SEP> (Avicel) <SEP> - <SEP> <SEP> - <SEP> <SEP> 170 <SEP> - <SEP> <SEP> 220
<tb> <SEP> Wisteria <SEP> - <SEP> - <SEP> <SEP> 80 <SEP> - <SEP> 105
<tb> <SEP> Silica <SEP> in <SEP> fine <SEP> particles
<tb> <SEP> (Aerosil) <SEP> - <SEP> <SEP> 0.35 <SEP> 0.35 <SEP> 0.35 <SEP> 0.35
<tb> <SEP>
<SEP> <SEP> magnesium stearate * <SEP> 5 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> <SEP> 595 <SEP> .... <SEP> 353.35 <SEP> ....
<tb>
* 9: 1 mixture with sodium lauryl sulfate.
Avicel and Aerosil are registered trademarks.
For formulations A, B and D, the ingredients are mixed thoroughly, then the mixtures are introduced directly into hard gelatin capsules of suitable diameter, or they are granulated and transformed into tablets of desired diameter. For formulations C and E, the ingredients are intimately mixed and agglomerated. The agglomerated bodies are subdivided into granules then the granules are introduced into capsules of suitable diameter or transformed directly into tablets of desired diameter.
In formulations A, B and D, lactose can be replaced by equal amounts of calcium carbonate or dicalcium phosphate.
Example 7:
The procedure of Example 6 is repeated, using the
same amount of DL-2- (4-hydroxyphenyl) glycine (racemic) as
L (+) isomer. Naturally, it may be necessary to do
take twice as many capsules or tablets of this
example, for a single therapeutic administration, which is not necessary in the case of the tablets or capsules of Example 6.
Example 8:
The procedure of Examples I to 4 and 6 is repeated using equimolar amounts of the following compounds in place of L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycine:
L (+) -2- (4-methoxyphenyl) glycine,
Methyl L (+) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycinate,
Isopropyl L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycinate,
2-methylbutyl L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycinate,
L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycinamide.
Example 9:
The procedure of Examples 5 and 7 is repeated using equimolar amounts of the DL (racemic) compounds of Example 8, in place of the DL-2- (4-hydroxyphenyl) glycine (racemic).
It may be advantageous to keratinize tablets in accordance with the invention, that is to say to coat them with a material such as cellulose acetophthalate or hydroxypropylmethylcellulose phthalate which does not dissolve in the stomach , but in the intestine, and to include in the composition of the tablet an effervescent material such as sodium bicarbonate and a food acid such as tartaric acid, in order to avoid deactivation of the active ingredient in the stomach and / or intestine and enhance the concentration of the active ingredient in the blood.
It may also be desirable to coat the tablets with a sweet composition to make them more palatable.
The ability of compounds of formula (I) to increase the oxidation of glucose and / or a pyruvate was tested by the following methods:
I) (a) The diaphragm tissue from rats is taken from a high fat diet similar to diet B described by Zaragoza and Felber (Horm. Metab. Res.,
1970, 2, 323). The oxidation of a pyruvate by this tissue is evaluated by measuring the rate of incorporation of carbon-14 originating from carbon-14 labeled pyruvate with carbon dioxide in vitro, as described by Bringolf (Eur. J. Biochem ., 1972, 26, 360).
The oxidation rate of pyruvate is lowered by 50 to 75% compared to the oxidation rate obtained with the diaphragm tissue of rats absorbing a normal diet. When L (-t) -2- (4-hydroxyphenyl) glycine is added to the medium, it is found that this compound stimulates the oxidation of pyruvates by the tissue of the diaphragm of rats absorbing fat, in a way proportional to the dose. The limit concentration constituting the threshold of this stimulation is approximately 0.25 mmol and a maximum stimulation of 170% is obtained at concentrations of 4 mmol and above.
D (-) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycine does not have a significant effect on the oxidation of pyruvates by the tissue of the diaphragm of rats absorbing fat, at concentrations up to 4 mmol, while the DL (racemic) compound exerts an effect which is roughly half that of the L (+) isomer.
The degree of stimulation with other compounds of formula (I) at a concentration of 0.5 mmol is illustrated by the following table:
Stimulation Compound,% L (+) -2- (4-metoxyphenyl) glycine 79 L (+) - 2- (4-hydroxyphenyl) methyl glycinate 89
L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycinate
isopropyl 34 L (+) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycinate
3-methylbutyl 32
L (+) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycinamide 51
I) (b) The rate of glucose oxidation is studied by hearts isolated from rats on a total diet in an oxygenated perfusion circuit with recycling, by measuring the rate of carbon incorporation.
14 from glucose labeled with this isotope to carbon dioxide by a method identical to that which has been described by
Morgan et al. (J. Biol.
Chem. , 1961, 236, 253) and by Randle et al. (Biochem. J., 1964, 93, 652). The infusion fluid contains glucose, palmitate, insulin and beef serum albumin. It is found that the normal rate of glucose oxidation is 1.27 f 0.32 ± mol / h (average of 9 observations).
When L (+) '2- (4-bydroxyphenyl) glycine is included in the infusion liquid at a concentration of 2 mmol, the oxidation rate is increased to 4.77 + 1.53 tamol / h ( average of 9 observations). D (-) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycine has no significant effect on the rate of oxidation when included in the infusion fluid at the same concentration.
The ability of compounds of formula (I) to increase the proportion of the active form of the enzyme called pyruvated dehydrogenase was measured by the following method:
2) Rats given the same diet with a high fat content as in test I (a) are treated either with a placebo or with the compound of formula (1), by subcutaneous or intravenous injection or by administration oral, and the hearts of these rats are removed at various times after treatment and homogenized under conditions which minimize variations in the proportion of pyruvated dehydrogenase existing in the active form, as described by Whitehouse and Randle (Biochem. J.,
1973, 134, 651).
The total amount of enzymes that is present (PDHt) and the amount that is present in the active form (PDHa) are determined by a method identical to that which has been described by Taylor et al. in J. Biol. Chem. , 1973, 248, 73. It is found that the absorption test of a fat-based diet lowers the PDHa / PDHt ratio from a normal value of about 0.7 to a value between 0.05 and 0.2. The treatment of fat-absorbing rats with L (+) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycine, parenterally or orally, raises this ratio in proportion to the dose, the thresholds for obtaining of this effect being 0.05 mmol / kg by intravenous injection and 0.1 to 0.2 mmol / kg by subcutaneous injection or by oral administration.
The ratio is raised to a value between 0.8 and 1.0 (that is to say above the values corresponding to rats absorbing a normal diet) by doses equal to and greater than 0.6 mmol / kg . D (-) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycine has very little effect at doses up to 1.2 mmol / kg, while the DL (racemic) compound, although exhibiting a certain activity, does not exert than half or less than half the effect of the L (+) isomer at the same doses.
The increase in the PDHa / PDHt ratio under the effect of other compounds of formula (I) at a dose of 0.6 mmol / kg is indicated in the following table: Route PDHa / PDHt ratio
Placebo Administration Compound
of the dose '
L (+) - 2- (4-hydroxy
phenyl) glycinate s.c. 0.13 0.69
methyl p.o 0.13 0.42 L (+) - 2- (4-hydroxyc
phenyl) glycinate
of 3-methylbutyl s.c. 0.05 0.51 L (+) -2- (4-hydroxy-
phenyl) glycin- s.c. 0.16 0.93
amide p.o. 0.16 0.91 L S.C. = subcutaneous route; p.o. = oral.
The ability of compounds of formula (I) to reduce the demand for oxygen and affect the relative assimilation of glycidic and lipid metabolites in the heart was determined by measuring the effect exerted by the compounds on the blood flow of the myocardium and the cardiac metabolism of anesthetized, beagle breed dogs, fasting, in a closed box, with a cardiac probe in position to allow simultaneous collection of blood samples from the coronary sinus of an artery. Blood flow from the coronary sinus is measured using the hydrogen gas clearance technique described by Aukland et al. in Circulation Res. , 1964, 14, 164.
The heart is rhythmically electrically at 155 beats / min and hemodynamic parameters (blood pressure, left ventricular pressure and its first derivative) are recorded continuously. Control measurements of the coronary blood flow are carried out and blood samples are taken at 40 min intervals, both from an untreated animal and from the same animal treated with isoprenaline infusion (60 ng / kg / min), which has the effect of both stimulating heart contraction and increasing plasma levels of free fatty acids. The compound of formula (I) is then administered intravenously, and measurements are carried out and samples taken again 40 and 90 minutes later.
Blood samples from the artery and coronary sinus are analyzed to determine the levels of oxyhemoglobin, pyruvate, and free fatty acids (GLA), the product of the differences between the values obtained for arterial blood and for blood. of the coronary sinus by coronary blood flow being a measure of oxygen consumption, absorption of pyruvate and, respectively, absorption of free fatty acids by the myocardium.
It is found that L (+) -2- (4-hydroxyphenyl) glycine, at doses of 0.02 to 0.1 mmol / kg, at least doubles the absorption of pyruvate by the myocardium, both in the presence and in the absence of isoprenaline, for a period of at least 90 minutes after administration, which is in agreement with its proven action as a stimulator of pyruvated dehydrogenase. At the same time, the myocardial blood flow is increased up to 150% and the oxygen consumption in the myocardium is reduced by approximately 20% in the presence of isoprenaline.
The absorption of free fatty acids by the myocardium is affected to a varying degree, but is generally reduced. No effect is exerted on any of the hemodynamic parameters measured.
The ability of compounds of formula (I) to reduce blood sugar was assessed by measuring the effect of these compounds on blood glucose levels in rats with diabetes caused by treatment with streptozotocin (85 mg / kg) . Four days after this treatment, several rats are given I mmol of compound per kilogram by intraperitoneal injection, while a similar number of rats are given a placebo. The administration of the doses is repeated after 24 h and 48 h. Blood samples are taken from the tail vein immediately before each administration (the dose being administered 2 h after the animals have been kept away from food) and 1, 2 and 3 h after administration of the third dose.
After 2 days of treatment with L (+) - 2- (4-hydroxyphenyl) glycine (that is to say immediately before the administration of the third dose of 1 mmol / kg), it was found that the levels of blood sugar decreased from 378 + 8 mg / 100 ml to 356 + 4 mg / 100 ml, compared to a slight increase from 373 + 8 mg / 100 ml to 383 + 10 mg / 100 ml in the case of treated animals with placebo, while 2 h after administration of the third dose,
blood levels had dropped even further to a minimum value of 313 + 7 mg / 100 ml compared to a value of 385 + 7 mg / 100 ml for animals treated with placebo (all figures are average values for 8 animals).
None of the compounds of formula (I) exhibited acute toxic side effects when tested in vivo in rats or dogs at the doses specified in the tests described above.