Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung einer 6-(D-2-Acylamido-2-phenylacetamido)penicillansäure der Formel I
EMI1.1
worin Rl Wasserstoff oder Hydroxy und R2 Hydroxy, Niederalkylamino, Diniederalkylamino, Niederalkoxy oder Hydroxy-niederalkylamino ist, oder R2 Amino auch bedeutet, falls Rl Hydroxy ist.
In den US-Patentschriften Nr. 3 268 513 und 3 340 252 wird offenbart, dass 6-[D-2-(DL-2-Aminoglutaramido)-2phenylacetamido]penicillansäure erzeugt wird durch Umsetzung von 6-(D-2-Amino-2-phenylacetamido)penicillansäure mit DL-Glutamin und, dass das genannte Glutaramido-Derivat eine antimikrobielle Wirksamkeit gegen sowohl Grampositiven als auch Gram-negativen Bakterien zeigt. Es ist andererseits aus dem deutschen Patent Nr. 1 934 783 ersichtlich, dass 6-[D-2-(L-2-Amino-3-carbamoylpropionamido)-2 phenylacetamidojpenicillansäure so präpariert werden kann, dass man 6-Aminobenzylpenicillin mit Biphenylisopropyloxycarbonyl-L-asparagin kondensiert und hernach die Schutzgruppe abspaltet.
Gemäss der vorliegenden Erfindung wird nun ein Verfahren zur Herstellung neuer Penicilline geliefert, welche Penicilline als antibakterielle Mittel, als Nahrungszusatz in tierischer Nahrung und als chemotherapeutische Mittel in Federvieh und Säugetieren, einschliesslich Menschen, bei der Behandlung von infektiösen Leiden, hervorgerufen durch Gram-positive und Gram-negative Bakterien, nützlich sind. Die erfindungsgemäss erzeugte Penicillansäure-Verbindung der Formel I zeigt nämlich eine kräftige antimikrobielle Wirksamkeit gegenüber einer Vielfalt von Mikroorganismen und gleichzeitig kann diese Verbindung nach entweder oraler oder parenteraler Verabreichung an Menschen und Tieren wirksam absorbiert werden.
Im Besonderen weist die genannte Penicillansäure-Verbindung der Formel I eine kräftige antimikrobielle Wirksamkeit gegen über Bakterien, die zu den Stämmen Pseudomonas und Staphylococcus gehören. Beispielsweise zeigt die 6-[D-2-(D-2 Amino-3 -N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxy phenylacetamidojpenicillansäure minimale Hemmkonzentrationen (M.I.C.) in Agarverdünnung der Heart-Infusionsager von etwa 12,5 ug/ml gegenüber Pseudomonas aeruginosa A3.
Andererseits sind die M.I.C. von Sulbenidllin, d. h. Dinatrium 6-(D-2-Sulfonyl-2-phenylacetamido)penicillanat, 6-[D-2-(DL2-Aminoglutaramido)-2-phenylacetamido]penicillansäure und 6-[D-2-(L-2-Amino-3-carbamoyl-propionamido)-2-phenylacetamido]penicillansäure gegenüber genannten Mikroorganismen 12,5, 50 und mehr als 100 llg/ml. Die antimikrobielle Wirksamkeit von erfindungsgemäss erzeugter 6-[D-2-(D-2 Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxy phenylacetamido]penicillansäure gegen Staphylococcus aureus ATCC 6538 P und St. epidermidis 10 131R gleichfalls etwa 2 bis 4 Mal stärker als jene von Sulbenicillin und von 6-[D-2-(L 2-Amino-3-carbamoyl-propionamido)-2-phenylacetamido]pe- nicillansäure.
Die erfindungsgemäss erzeugte PeniÅallansäure- Verbindung der Formel I kann im weiteren eine kräftige antimikrobielle Wirksamkeit gegenüber anderen Gram-positiven und Gram-negativen Bakterien zeigen, als jenen, die zu den Stämmen Streptococcus, Escherichin, Klebsiella, Salmonella und Bacillus gehören. Überdies ist die Toxizität der genannten Verbindung der Formel I bemerkenswert niedrig. Falls beispielsweise 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]penicillansäure intravenös Mäusen bei einer Dosis von 10 000 mg/kg verabreicht wird, verendet keine Maus während der Zeitspanne von 14 Tagen nach der Verabreichung.
Die erfindungsgemäss erzeugte Penicillansäure-Verbindung der Formel I kann als Heilmittel entweder als freie Säure oder als Salz derselben benützt werden. Pharmazeutisch annehmbare nichttoxische Salze dieser Verbindung der Formel I umfassen beispielsweise nicht-toxische metallische Salze, wie Natrium, Kalium, Kalzium und Aluminium, Ammonium und substituierte Ammoniumsalze, z. B. Salze von solch nichttoxischen Aminen wie Trialkylaminen, einschliesslich Triäthylamin, Procain, Dibenzylamin, N-Benzyl-ss-phenäthylamin, 1 Ephenamin, N,N'-Dibenzyläthylendiamin, Dehydroabiethylamin, N,N'-bis-Dehydroabiethyläthylendiamin und anderen Aminen, welche zur Bildung von Salzen mit Benzylpenicillin verwendet wurden. Die genannte Verbindung der Formel list in Wasser löslich und kann entweder oral oder parenteral, z. B.
intravenös, intramuskulär, subkutan, verabreicht werden. Eine tägliche Dosis dieser Verbindung der Formel I kann etwa 0,25 bis etwa 20 g, insbesondere 0,5 bis 10 g, und mehr, besonders etwa 1 bis 4 g, pro Körper eines erwachsenen Patienten, betragen. Überdies kann die Verbindung der Formel I in Form eines pharmazeutischen Präparates verwendet werden, das die genannte Verbindung im Verbund oder im Gemisch mit einem für enterale oder parenterale Verabreichung pharmazeutischen Excipienten enthält.
Das vorliegende erfindungsgemässe Verfahren zur Herstellung der Penicillansäure-Verbindung der Formel list dadurch gekennzeichnet, dass man eine D-2-Acylamidophenylessigsäure der Formel II
EMI1.2
worin Z eine Schutzgruppe ist und Rl und R2 die obige Bedeutung hat, oder ein reaktives Derivat derselben, mit einer 6-Aminopenicillansäure der Formel III
EMI1.3
worin Y Wasserstoff oder eine Schutzgruppe ist, kondensiert, und hernach eine gegebenenfalls anwesende Schutzgruppe Y und Z entfernt.
Geeignete Beispiele der Schutzgruppe Y umfassen Benzyl, Succinimidomethyl, Phthalimidomethyl, Phenacyl, Trimethylsilyl und 2,2,2-Trichloräthyl-Gruppen, und geeignete Beispiele der Schutzgruppe Z sind o-Nitrophenylsulfenyl, Benzyloxycarbonyl und 1-Methyl-2-niederalkoxycarbonylvinyl. Die 6 Aminopenicillansäure der Formel III, worin Y Wasserstoff ist, kann für die erfindungsgemässe Kondensation in Form entweder einer freien Säure oder eines Salzes derselben verwendet werden. Geeignete Beispiele genannter Salze sind Alkalimetallsalze, wie Natrium- und Kaliumsalze, und Niedertrialkylaminsalze wie Trimethylamin- und Triäthylaminsalze.
Die Kondensationsreaktion der Phenylessigsäure II mit der 6-Aminopenicillansäure III kann leicht bewerkstelligt werden.
Es kann beispielsweise genannte Kondensationsreaktion mit Vorteil in Gegenwart von Diphenylphosphorsäure-azid, d. h.
N3PO(C6Hs)2, in einem Lösungsmittel bewerkstelligt werden.
Die Umsetzung kann bei -20 bis 20"C, insbesondere bei -10 bis 5OC, durchgeführt werden. Die Reaktion kann insbesondere mit Vorteil in Gegenwart eines organischen tertiären Amins, wie Trimethylamin oder Triäthylamin, bewerkstelligt werden. Als Lösungsmittel eignen sich Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Chloroform und Dichloromethan. Vor der oben angeführten Kondensationsreaktion kann die Säure II in ein reaktives Derivat derselben überführt werden. Geeignete Beispiele des reaktiven Derivates der Säure II umfassen das entsprechende gemischte Anhydrid, z. B. Niederalkoxycarbonylester, wie Äthoxycarbonyl, Isobutoxycarbonyl, tert.-Butoxycarbonyl und tert.-Amyloxycarbonyl; Niederalkanoylester, wie Pivaloylester; aktive Ester, z. B. Ester mit p-Nitrophenol und N-Hydroxysuccinimid und Azid.
Die gemischten Anhydride der Säure II können auf bekannte Weise präpariert werden, beispielsweise durch Umsetzung genannter Säure mit einem Niederalkoxycarbonylhalogenid, z. B. Bromid, Chlorid, oder einem Niederalkanoylhalogenid, z. B. Bromid, Chlorid, bei -5 bis -400C, in Gegenwart eines Säureakzeptors in einem Lösungsmittel. Als Lösungsmittel eignen sich Chloroform, Dichlormethan, Dimethylsulfoxid, Tetrahydrofuran und Dimethylformamid und Beispiele eines Säureakzeptors umfassen N,N-Dimethylanilin, N-Methylmorpholin, Pyridin usw. Andererseits können die aktiven Ester der Säure II präpariert werden durch Umsetzung genannter Säure mit p-Hydroxyphenol oder N-Hydroxysuccinimid bei -10 bis 30"C in Gegenwart eines Dehydratisierungsmittels, z. B. Dicyclohexylcarbodiimid, in einem Lösungsmittel, wie Tetrahydrofuran, Dioxan, Diglym.
Das Azid kann präpariert werden durch Umsetzung des Hydrazids genannter Säure mit Natriumnitrit in einer verdünnten Mineralsäure, z. B. Schwefelsäure. Die Kondensationsreaktion der 6-Aminopenicillansäure III mit dem oben genannten reaktiven Derivat der Aminosäure II kann durchgeführt werden bei einer Temperatur von 40 bis -300C, insbesondere 5 bis -15 C, und in einem Lösungsmittel. Als Reaktionslösungsmittel eignen sich Dimethylformamid, Chloroform, Tetrahydrofuran und Methylenchlorid.
Die Abspaltung der Schutzgruppe oder der Gruppen aus dem Kondensationsprodukt kann mittels jeglicher Verfahren, in Abhängigkeit von der Art der verwendeten Schutzgruppe oder Gruppen, bewerkstelligt werden. Falls beispielsweise o- Nitrophenylsulfenyl als Schutzgruppe Z verwendet wird, kann genannte Gruppe durch Umsetzung des Kondensationsproduktes mit etwa 2 bis 3 Moläquivalenten eines Thioamids in einem Lösungsmittel abgespalten werden. Geeignete Beispiele des Thioamids umfassen Thioacetamid, Thiobenzamid, Thioharnstoff und 2-Mercapto-5-methyl-1,3,5-thiadiazol. Es wird bevorzugt, die Umsetzung bei einer Temperatur von 40 bis OoC, insbesondere bei 20 bis 10oC, durchzuführen. Als Reaktionslösungsmittel eignen sich Äthyläther, Tetrahydrofuran, Dioxan, ein Niederalkanol, z. B. Methanol, Äthanol, oder ein Gemisch dieser Lösungsmittel.
Falls die Schutzgruppe Z Benzyloxycarbonyl und/oder die Schutzgruppe Y Benzyl ist, kann die Abspaltung genannter Schutzgruppe oder -gruppen durch Schütteln des Kondensationsproduktes in Wasserstoffgas in Gegenwart eines Katalysators bewerkstelligt werden. Diese katalytische Hydrierung wird mit Vorteil bei einer Temperatur von 40 bis OoC, insbesondere 20 bis 10oC, unter atmosphärischem Druck, durchgeführt. Bevorzugte Beispiele des Katalysators umfassen Palladium-BaCO3, Palladium-Holzkohle und Palladium-schwarz. Niederalkanole, wie Methanol und Äthanol sind als Reaktionslösungsmittel geeignet.
Falls andererseits die Schutzgruppe Z 1 -Methyl-2-nieder-alkoxycarbonylvinyl und/oder die Schutzgruppe Y Trimethylsilyl ist, kann genannte Gruppe oder -gruppen durch Behandlung mit einer verdünnten Mineralsäure, z. B. 0,5 bis 1 %ige Chlorwasserstoffsäure, bei einer Temperatur von 5 bis 10 C in einem Lösungsmittel, z. B. Methyläthylketon, Methylisobutylketon, Dioxan, erreicht werden. Falls im weiteren Phenacyl, Phthalimidomethyl oder Succinimidomethyl als Schutzgruppe Y verwendet wird, kann die genannte Gruppe durch Umsetzung mit einem Alkalimetallsalz oder einer Thioverbindung oder Thiophenol abgespalten werden. Diese Reaktion wird mit Vorteil durchgeführt bei 10 bis -10 C in einem Lösungsmittel, wie Tetrahydrofuran, Isopropanol.
Als die Thiolverbindung wird mit Vorteil der 2 Äthylhexylester von 2-Mercaptoessigsäure verwendet. Falls die Schutzgruppe Y 2,2,2-Trichloräthyl ist, kann diese Gruppe durch Reduktion des Kondensationsproduktes mit 90 einer Ameisensäure-Zinkpulver auf übliche Weise abgespalten werden. Die Reaktion kann mit Vorteil bei einer Temperatur von 10 bis -5oC durchgeführt werden.
Die Ausgangsverbindung II kann leicht mittels an sich bekannter Methoden erhalten werden. Beispielsweise kann diese Verbindung so präpariert werden, dass man eine Phenylessigsäure der Formel
EMI2.1
worin Rl die obige Bedeutung hat, mit einem reaktiven Derivat, z. B. N-Hydroxysuccinimidester, einer N-geschützten Aminosäure der Formel R2COCH2-CH(NHZ)-COOH, worin R2 und Z die obige Bedeutung haben, kondensiert. Diese Kondensationsreaktion wird bei 40 bis -300C in einem Lösungsmittel, z. B. Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Methylenchlorid, durchgeführt.
Das oben beschriebene Verfahren wird in einigen praktischen und gegenwärtig bevorzugten Ausführungsformen beschrieben. Die Bezeichnung Niederalkyl und Niederalkoxy bezieht sich auf gerade oder verzweigte Alkyle und Alkoxygruppen mit einem bis sechs Kohlenstoffatomen.
Beispiel 1 (1) Eine Lösung von 5 g, 33 mMole, von D-2-Amino-3carbamoyl-propionsäure, d. h. D-Asparagin, in 20 ml Wasser wird mit Kaliumcarbonat neutralisiert und es werden 20 ml Tetrahydrofuran zugefügt. Diese Lösung wird dann mit 8,5 g o-Nitrophenylsulfenylchlorid bei 5 bis 10"C versetzt. Danach wird das Gemisch bei derselben Temperatur während zwei Stunden gerührt, wobei während der Reaktion-das Gemisch bei einem leicht alkalischen pH, pH etwa 8, mit Kaliumcarbonat aufrechterhalten wird. Zum Reaktionsgemisch werden dann 20 ml Wasser zugefügt und unlösliche Materialien werden abfiltriert. Das Filtrat wird zweimal mit Äthylacetat gewaschen, mit Zitronensäure angesäuert und dann dreimal mit je 300 ml Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetat-Extrakte werden dann mit Wasser gewaschen, getrocknet und zur Trockne abgedampft.
Man erhält 6,7 g D-2- (o-Nitrophenylsulfenyl- amino)-3-carbamoyl-propionsäure mit F von 163 C (Zers.).
(2) 2,85 g, das sind 10 mMole, der so erhaltenen 3-Carbamoylpropionsäure werden in 50 ml Tetrahydrofuran gelöst.
Diese Lösung wird dann mit 2,28 g von Dicyclohexylcarbodiimid und 1,27 g von N-Hydroxysuccinimid bei 0 bis 50C versetzt und das Gemisch wird dann bei derselben Temperatur während 16 Stunden gerührt. Unlösliche Materialien werden abfiltriert. Danach wird das Filtrat bei 20OC unter vermindertem Druck eingeengt, und der kristalline Niederschlag wird mit Benzol-Äther gewaschen. Man erhält 3 g N-[D-2-(o-Nitrophe nylsulfenylamino)-3-carbamoylpropionyloxy]succinimid mit F bei 135 bis 136"C.
(3) 3,82 g des so erhaltenen Succinimids werden in 60 ml Tetrahydrofuran gelöst. Diese Lösung wird dann mit 12,5 ml einer wässrigen 1N-Natriumhydroxidlösung, die 2,3 g von p Hydroxy-D-phenylglycin enthält, versetzt. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur während 24 Stunden gerührt. Es werden zum Reaktionsgemisch 20 ml Äthylacetat und 20 ml Wasser zugegeben und das Gemisch wird dann geschüttelt. Die sich gebildete wässrige Schicht wird abgetrennt, auf ein pH 3 mit Zitronensäure eingestellt und mit einem Gemisch von 20 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird dann mit Wasser gewaschen, getrocknet und abgedampft. Der so erhaltene Rückstand wird mit Äther gewaschen und man erhält schliesslich 3,47 g von D-2-(D-2 (o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-carbamyl-propionamido)-2-phydroxy-phenylessigsäure als gelbe Nadeln mit F von 133 bis 1350C (Zers.).
IR-Spektrum: XmaUxol 3380 (breit), 3270, 1705, 1670, 1635cm-' Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,39 (Silicagel-Platte).
Lösungsmittel: Aethylacetat-Methanol-Essigsäure (10:1:1).
(4) 435 mg der erhaltenen Essigsäure und 121 mg Dimethylanilin werden in einem Gemisch von 2 ml Dimethylformamid und 3 ml wasserfreies Tetrahydrofuran gelöst. Eine Lösung von 136 mg Isobutyl-chlorocarbonat in 2 ml Tetrahydrofuran wird zum Gemisch bei -25 bis -20 C unter Rühren zugesetzt. Nach Ablauf von 5 Minuten wird das Gemisch mit einer Lösung von 382 mg von 6-Amino-penicillansäure-tri äthylaminsalz in 2,5 ml Wasser bei -10 bis -80C versetzt und das Gemisch wird dann bei -10 bis -50C während 40 Minuten und dann bei -5 bis O"C während 30 Minuten gerührt. Nach Ablauf der Reaktion wird das Gemisch auf ein pH 3 mit einer wässrigen 5 %igen Zitronensäurelösung eingestellt und mit einem Gemisch von 10 ml Tetrahydrofuran und 5 ml Äthylacetat extrahiert.
Der Extrakt wird dann mit Wasser gewaschen, getrocknet und dann unterhalb von 40oC, zwecks Entfernung des Lösungsmittels, abgedampft. Zum Rückstand wird Äther zugefügt und der kristalline Niederschlag wird filtriert.
Man erhält 530 mg von 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenyl amino)-3-carbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylaceta mido]penicillansäure als gelbe Nadeln mit F von 130 bis 132 C (Zers.).
IR-Spektrum: mNuaJxoI: 3280, 1775, 1730, 1650 cm-t.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,30 (Silicagel-Platte), Lösungsmittel: Aethylacetat-Tetrahydrofuran-Essigsäure (10:10:1).
(5) 800 mg der so erhaltenen Penicillansäure und 410 mg Thiobenzamid werden in einem Gemisch von 2 ml Tetrahydrofuran und 8 ml Äthanol gelöst. Die Lösung wird bei Zimmertemperatur während 15 Minuten gerührt. Die so erhaltene Reaktionslösung wird dann zwecks Entfernung des Lösungsmittels, unterhalb 30OC abgedampft und es wird zum Rückstand Tetrahydrofuran zugefügt; es scheiden sich hellgelbe Kristalle aus und werden filtriert. Der Niederschlag wird dann in 30 ml Wasser gelöst, unlösliche Materialien werden abfiltriert und das Filtrat wird gefriergetrocknet. Das so erhaltene farblose Pulver wird in 3 ml Methanol suspendiert und zu dieser Suspension werden 100 mg Triäthylamin und 180 mg Kalium-2-äthylhexanoat zugesetzt. Dann wird die Suspension mit Äther versetzt und der sich gebildete kristalline Niederschlag wird filtriert.
Man erhält als farbloses kristallines Pulver 370 mg von Kalium-6-[D-2-amino-3-carbamoylpropion amido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]penicillanat mit F bei 213 bis 2150C (Zers.).
Freie Base: F bei 202 bis 205 "C (Zers.).
IR-Spektrum: XNUaixol: 3300, 1760, 1660, 1590 cm-1.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,30 (Silicagel-Platte), Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser (4:1:1).
Beispiel 2 (1) 3 g, das sind 23,6 mMole, von D-2-Amino-3-N-methylcarbamoylpropionsäure-hydrochlorid, d. h. D,N'C-Methylasparagin HC1), 4,5 g von Benzyloxycarbonylchlorid, 30 g Wasser, 30 ml Tetrahydrofuran und 12 g Kaliumcarbonat werden auf die in Beispiel 1-(1) beschriebene Weise behandelt. Man erhält 5,1 g von D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-Nmethylcarbamoyl-propionsäure mit F bei 142 bis 1430C.
(2) 2,8 g, das sind 10 mMole, der so erhaltenen Propionsäure, 2,27 g von Dicyclohexylcarbodiimid, 1,27 g von N Hydroxysuccinimid und 120 ml Tetrahydrofuran werden auf die in Beispiel 1-(2) beschriebene Weise behandelt. Man gelangt zu 2,6 g von N-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N- methyl-carbantoyl-propionyloxy)succinimid mit F bei 132 bis 1340C.
(3) 3,75 g des so erhaltenen Succinimids werden in 50 ml Tetrahydrofuran gelöst. Diese Lösung wird mit 12,5 ml einer wässrigewlN-Natriumhydroxidlösung, die 2,3 g von Hydroxy-D-phenylglycin enthält, versetzt und das Gemisch wird dann bei Zimmertemperatur während 24 Stunden gerührt. Danach wird das Reaktionsgemisch auf die in Beispiel 1(3) beschriebene Weise behandelt und man gelangt schliesslich zu 3,0 g von D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino- 3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenyles- sigsäure als farbloses kristallines Pulver mit F von 154 bis 156"C (Zers.).
IR-Spektrum: tJol: 3300,1790,1650,1640 cm-t.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,37 (Silicagel-Platte), Lösungsmittel: Aethylacetat-Aethanol-Essigsäure (10:1: ä).
(4) 429 mg der gemäss obigem Verfahren erhaltenen Essigsäure und 382 mg von Triäthylaminsalz der 6-Aminopenicillansäure werden in 10 ml Dimethylformamid gelöst. Danach wird die Lösung bei -5oC mit 303 mg von Diphenylphosphorsäure-azid [N3PO(C6H5)2] und 110 mg Triäthylamin versetzt und das Gemisch wird bei -5 bis 10 C während 5 Stunden gerührt. Nach Ablauf der Reaktion wird das Gemisch auf ein pH von 3 mit einer wässrigen 5 %igen Zitronensäurelösung eingestellt und mit einem Gemisch von 15 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird dann mit Wasser gewaschen, getrocknet und dann bei unterhalb 4OoC abgedampft. Es wird Äther zum erhaltenen Rückstand zugefügt und der sich gebildete Niederschlag wird filtriert.
Man erhält schliesslich 509 mg von 6-[D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoylpropionamido)-2-p-hydroxy phenylacetamido]penicillansäure als farbloses Pulver.
IR-Spektrum: XNUaJol 3280, 1770, 1720, 1640 cm-1.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,663 (Silicagel-Platte), Lösungsmittel: Tetrahydrofuran-Methanol-Essigsäure (50:3:3) (5) 627 mg der erhaltenen Penicillansäure und 400 mg von 30%igem Palladium-BaCO3 werden in 10 ml Methanol suspendiert. Die Suspension wird dann bei Zimmertemperatur während 30 Minuten geschüttelt, wobei dieses Schütteln in einer Wasserstoffgas-Atmosphäre unter atmosphärischem Druck bewerkstelligt wird. Nach Ablauf der Reaktion werden die Katalysatoren abfiltriert, das Filtrat wird unterhalb 400C abgedampft und zum erhaltenen Rückstand wird Äther zugesetzt. Das sich gebildete farblose kristalline Pulver wird filtriert und mit Tetrahydrofuran gewaschen.
Man erhält schliesslich 443 mg von 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-Methylcarbomoyl propionamido)-2-p-hydroxyphenyl-acetamido]penicillansäure mit F bei 198 bis 201 C (Zers.).
IR-Spektrum: XmaUJol 3280, 1760, 1660 cm-l.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,43 (Silicagel-Platte), Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser (4:1:1).
IR-Spektrum des Kaliumsalzes: kmaUJ l 3300, 1760, 1660, 1600 cm-1.
Beispiel 3 (1) 3 g, das sind 23,6 mMole, von D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionsäure-hydrochlorid, d. h. D-N'-Methylasparagin HC1, 5 g von o-Nitrophenylsulfenyl-chlorid, 30 g Wasser, 10 ml Tetrahydrofuran und 12 g Kaliumcarbonat werden auf die in Beispiel 1-(1) beschriebene Weise behandelt. Man erhält 5 g von D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionsäure mit F bei 134 bis 136 C.
(2) 1,57 g, das sind 5,2 mMole, der so erhaltenen Propionsäure, 1,3 g von Dicyclohexylcarbodiimid, 788 mg von N Hydroxysuccinimid und 15 ml von Tetrahydrofuran werden auf die in Beispiel 1-(2) beschriebene Weise behandelt. Man erhält schliesslich 1,8 g von N-[D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionyloxy]succinimid mit F bei 126 bis 1280C.
(3) 3,96 g des gemäss obigem Verfahren erhaltenen Succinimids werden in 20 ml Dimethylformamid gelöst. Zu dieser Lösung werden dann 12,5 ml einer wässrigen 1N-Natriumhydroxidlösung, die 2,3 g p-Hydroxy-D-phenylglycin enthält, zugefügt. Das Gemisch wird dann bei Zimmertemperatur während 10 Stunden gerührt und zum Reaktionsgemisch werden 10 ml Äthylacetat unter Rühren zugesetzt. Danach wird die wässrige Schicht abgetrennt, auf ein pH 3 mit Zitronensäure eingestellt und auf die in Beispiel 1-(3) beschriebene Weise behandelt. Man erhält schliesslich 3,80 g von D-2-[D-2 (o-Nitrophenylsulfenylamino)-3 -N-methylcarbamoyl-propionamido]-2-p-hydroxyphenylessigsäure als gelbe Nadeln mit F von 111 bis 1130C (Zers.).
IR-Spektrum: XNmuaxol: 3370, 3250, 1705, 1650, 1625 cm-l.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,36 (Silicagel-Platte), Lösungsmittel: Aethylacetat:Methanol-Essigsäure (10:1:1).
(4) 897 mg der so erhaltenen 2-p-Hydroxyphenylessigsäure, 655 mg des Succinimidomethylesters der 6-Aminopenicillansäure und 230 mg N-Hydroxysuccinimid werden in 10 ml Dimethylformamid gelöst. Zu dieser Lösung werden dann bei -5"C unter Rühren 412 mg Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt und das Gemisch wird bei derselben Temperatur während 5 Stunden gerührt. Danach werden 10 ml Wasser zum Reaktionsgemisch zugefügt und das wässrige Gemisch wird mit einem Gemisch von 20 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Äthylacetat extrahiert. Der erhaltene Extrakt wird nacheinander mit einer wässrigen 5 %igen Zitronensäurelösung, einer wässrigen Natriumbicarbonatlösung und dann mit Wasser gewaschen.
Danach wird der Extrakt getrocknet und bei unterhalb 40C abgedampft. Zum erhaltenen Rückstand wird Äther zugefügt und der Niederschlag wird filtriert. Man erhält schliesslich
1200 mg von 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N- methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetami- do]penicillansäure-succinimidomethylester als gelbes kristallines Pulver mit F bei 143 bis 144 C (Zers.).
IR-Spektrum: h"': 3290, XmuaJol .329Q1780,1760,1730,1715,1650cm1.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,17 (Silicagel-Platte), Lösungsmittel: Aethylacetat-Tetrahydrofuran (2:1).
(5) 755 mg des gemäss obigem Verfahren erhaltenen Succinimidomethylesters werden in 5 ml Dimethylformamid gelöst.
Zu dieser Lösung werden 250 mg des Natriumsalzes von 2 Äthylhexyl-2-mercaptoacetat zugegeben und das Gemisch wird bei 0 bis 50C während 40 Minuten stehen gelassen. Es werden dann 10 ml Wasser und 10 ml Äthylacetat zum Reaktionsgemisch zugesetzt und das genannte Gemisch wird geschüttelt. Danach wird die wässrige Schicht abgetrennt, auf ein pH 3 mit einer wässrigen 5 %igen Zitronensäurelösung eingestellt und mit einem Gemisch von 20 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und dann bei unterhalb 300C abgedampft.
Man erhält schliesslich 590 mg von 6-[D-2-(D-2-(o Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propion- amido)-2-hydroxyphenylacetamido]penicillansäure als gelbes kristallines Pulver mit F bei 165 bis 167"C (Zers.).
IR-Spektrum: kNuaxol: 3400, 3250, 1780, 1730, 1640 cm-1.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,59 (Silicagel-Platte), Lösungsmittel: Tetrahydrofuran-Methanol-Essigsäure (5:0,3:0,3).
(6) 1,1 g der so erhaltenen Penicillansäure werden in einem Gemisch von 15 ml Methanol und 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und es werden 830 mg Thiobenzamid zugefügt. Das Gemisch wird dann bei Zimmertemperatur während 45 Minuten gerührt. Das erhaltene Reaktionsgemisch wird bei unterhalb 30OC abgedampft, zum Rückstand wird Tetrahydrofuran zugefügt und der Niederschlag wird abfiltriert. Zu diesem Niederschlag werden Wasser, Tetrahydrofuran und Äthylacetat zugesetzt und dann wird das Gemisch geschüttelt. Die entstandene wässrige Schicht wird abgetrennt, mit Tetrahydrofuran-äthylacetat gewaschen und dann gefriergetrocknet. Man erhält auf diese Weise 700 mg von 6-[D-2-(D-2-amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]penicillansäure als farbloses Pulver mit F von 198 bis 201C (Zers.).
Beispiel 4
632 mg von 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3 carbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]peni- cillansäure und 410 mg Thiobenzamid werden in einem Gemisch von 2 ml Tetrahydrofuran und 8 ml Methanol gelöst.
Die Lösung wird dann bei Zimmertemperatur während 30 Minuten gerührt. Die Reaktionslösung wird dann unterhalb 300C abgedampft, zum Rückstand werden 5 ml Tetrahydrofuran zugesetzt und der sich gebildete hellgelbe kristalline Nie derschlag wird abfiltriert. Nach Waschen mit Tetrahydrofuran wird der Niederschlag in 10 ml Wasser gelöst und die unlös lichen Materialien werden filtriert. Das Filtrat wird dann zwei mal mit je 4 ml Tetrahydrofuran-Äthylacetat 2:1 gewaschen und gefriergetrocknet. Man erhält auf diese Weise 410 mg von 6-[D-2-(D-2-Amino-3-carbamoyl-propionamido)-2-p-hydro- xyphenylacetamido]penicillansäure als hellgrünes kristallines
Pulver mit F von 202 bis 2050C (Zers.).
IR-Spektrum: XNuJ I 3250,1760,1665,1600 cm-t.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,30 (Silicagel-Platte),
Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser (4:1:1).
Beispiel 5 (1) 897 mg von D-2-[D-2-(o-Nitrophenylsufenylamino)-3
N-methylcarbamoyl-propionamido]-2-p-hydroxyphenylessig säure und 202 mg N-Methylmorpholin werden in 10 ml Dimethylformamid gelöst. Zu dieser Lösung wird eine Lösung von 217 mg von Äthylchlorcarbonat in 2 ml Tetrahydrofuran bei 25 bis -20 C unter Rühren zugefügt. Nach Ablauf von 5 Minuten wird das Gemisch mit einer Lösung von 764 mg von 6 Aminopenicillansäure-triäthylaminsalz in 4 ml Wasser bei -10 bis -80C versetzt und dann wird das Gemisch auf die in Beispiel 1-(4) beschriebene Weise behandelt. Man erhält 1,33 g von 6-[D -2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methyl- carbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamidojpeni- cillansäure als gelbe Nadeln mit F von 165 bis 1670C (Zers.).
IR-Spektrum: ANaJ l 3400, 3250, 1780, 1730, 1640 cm-t.
Dünnschicht-Chromatographie: Rf= 0,59 (Silicagel-Platte), Lösungsmittel: Tetrahydrofuran-Methanol-Essigsäure (5:0,3:0,3).
(2) 646 mg der gemäss obigem Verfahren erhaltenen Peni cillansäure und 274 mg Thiobenzamid werden in einem
Gemisch von 8 ml Methanol und 2 ml Tetrahydrofuran gelöst.
Die Lösung wird dann bei Zimmertemperatur während 40 Minuten gerührt und die Reaktionslösung wird dann auf die in Beispiel 4 beschriebene Weise behandelt. Man gelangt zu 437 mg von 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]peniQllansäure als farbloses kristallines Pulver mit F bei 198 bis 2010C (Zers.).
Beispiel 6
870 mg von D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3carbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylessigsäure und 202 mg Triäthylamin werden in 10 ml Dimethylformamid gelöst und es werden 550 mg Diphenylphosphorsäure-azid bei -15 bis -10oC zugesetzt. Die Lösung wird dann bei derselben Temperatur während 5 Minuten gerührt und es werden zu dieser 764 mg des Triäthylaminsalzes der 6-Aminopenicillansäure zugefügt und das Gemisch wird im weiteren bei -5 bis OoC während 1l/2 Stunden gerührt. Nach Ablauf der Reaktion wird das Gemisch auf die in Beispiel 2-(4) beschriebene Weise behandelt. Das so erhaltene rohe Produkt wird mit Chloroform und hernach mit Äthylacetat gewaschen.
Man erhält 925 mg von 6-[D-2--(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino-3 carbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamidojpeni- cillansäure als gelbes kristallines Pulver mit F von 130 bis 1320C (Zers.). Dieses Produkt wird auf die in Beispiel 1(5) beschriebene Weise behandelt, wobei 6-[D-2-(D-2-Amino-3 carbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]peni- cillansäure erhalten wird.
Beispiel 7 (1) 1,29 g von D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N- methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylessigsäure und 1,01 g des Benzylesters der 6-Aminopenicillansäure werden in 200 ml Dimethylformamid gelöst. Zur Lösung werden dann 575 mg N-Hydroxysuccinimid und 680 mg Dicyclohexylcarbodiimid bei -150C zugegeben und das Gemisch wird bei OoC während 20 Stunden gerührt. Dann wird das Reaktionsgemisch auf die in Beispiel 3-(4) beschriebene Weise behandelt.
Man gelangt schliesslich zu 1,80 g von 6-[D-2-(D-2-Benzyl oxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p- hydroxyphenylacetamido]penicillansäure-benzylester als farblose Nadeln mit F bei 107 bis 110 C (Zers.).
(2)1,44 g des so erhaltenen Benzylesters der Penicillansäure, 1,5 g 30%ges Palladium-BaCO3 und 30 ml von 95 %igem wässrigem Methanol werden auf die in Beispiel 2 (5) beschriebene Weise behandelt. Man erhält 620 mg von 6 [D-2-(D-2-Amino-3 -N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p- hydroxyphenylacetamido]penicillansäure als farbloses kristallines Pulver mit F bei 198 bis 201"C (Zers.).
Beispiele 8 bis 26
Auf die in vorangegangenen Beispielen beschriebene Weise werden die folgenden Verbindungen präpariert:
8. 6-[D-2-(DL-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propion amido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]penicillansäure, F = 195 bis 198 C (Zers.); 9. 6-[D-2-(L-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propion- amido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]penicillansäure, F = 197 bis 2000C (Zers.); 10. 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-isopropylcarbamoyl-propion- amido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]penicillansäure, F = 198 bis 200"C (Zers.); 11. 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-n-butylcarbamoyl-propion- amido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]penicillansäure; F = 188 bis 191"C(Zers.);
; 12. 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-n-hexylcarbomoyl-propion- amido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]penicillansäure, F = 186 bis 189 C (Zers.); 13. 6-[D-2-(DL-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propion- amido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 193 bis 195"C (Zers.); 14. 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propion- amido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 193 bis 195"C (Zers.);
15.6- [D-2-(L-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propion- amido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 191 bis 193 C (Zers.);
16. 6-[D-2-(DL-2-Amino-3-N-äthylcarbamoyl-propionamido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 190 bis 193"C (Zers.);
;
17. 6-[D-2-(DL-2-Amino-3-N-n-propylcarbamoyl-pro pionamido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 175 bis 178"C (Zers.);
18. 6-[D-2-(DL-2-Amino-3-N-n-butylcarbamoyl-propionamido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 190 bis 193"C (Zers.); 19.6-[D-2-(DL-2-Amino-3-N-,8-hydroxyäthylcarbamoyl- propionamido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 177 bis 1800C (Zers.); 20. 6-[D-2-[DL-2-Amino-3-N-dimethylcarbamoyl-pro- pionamido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 192 bis 194"C (Zers.);
; 21. 6-[D-2-(DL-2-Amino-3-hydroxycarbonyl-propion- amido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 189 bis 191"C (Zers.); 22. 6-[D-2-(DL-2-Amino-3-methoxycarbonyl-propion- amido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 185 bis 188"C (Zers.); 23. 6-[D-2-(D-2-Amino-3-methoxycarbonyl-propion- amido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]penicillansäure,F= 170 bis 173"C (Zers.);
24. 6-[D-2-(D-2-Amino-3-methoxycarbamoyl-propion amido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 185 bis 188"C (Zers.);
;
25. 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-dimethylcarbamoyl-propion- amido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 197 bis 200"C (Zers.);
26. 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-äthylcarbamoyl-propion amido)-2-phenylacetamido]penicillansäure, F = 204 bis 207"C (Zers.);
The present invention relates to a process for the preparation of a 6- (D-2-acylamido-2-phenylacetamido) penicillanic acid of the formula I.
EMI1.1
where R1 is hydrogen or hydroxy and R2 is hydroxy, lower alkylamino, di-lower alkylamino, lower alkoxy or hydroxy-lower alkylamino, or R2 is also amino if R1 is hydroxy.
In US Pat. Nos. 3,268,513 and 3,340,252 it is disclosed that 6- [D-2- (DL-2-aminoglutaramido) -2phenylacetamido] penicillanic acid is produced by the reaction of 6- (D-2-amino- 2-phenylacetamido) penicillanic acid with DL-glutamine and that said glutaramido derivative shows an antimicrobial activity against both gram-positive and gram-negative bacteria. On the other hand, it can be seen from German Patent No. 1,934,783 that 6- [D-2- (L-2-amino-3-carbamoylpropionamido) -2 phenylacetamidojpenicillanic acid can be prepared in such a way that 6-aminobenzylpenicillin can be mixed with biphenylisopropyloxycarbonyl-L -asparagine condenses and then splits off the protective group.
According to the present invention, a method is now provided for the production of new penicillins which penicillins as antibacterial agents, as nutritional additives in animal feed and as chemotherapeutic agents in poultry and mammals, including humans, in the treatment of infectious diseases caused by grief-positive and Gram negative bacteria, are useful. Namely, the penicillanic acid compound of the formula I produced according to the invention shows a strong antimicrobial activity against a variety of microorganisms and at the same time this compound can be effectively absorbed by humans and animals after either oral or parenteral administration.
In particular, said penicillanic acid compound of the formula I has a strong antimicrobial activity against bacteria belonging to the strains Pseudomonas and Staphylococcus. For example, 6- [D-2- (D-2 amino-3 -N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxy phenylacetamidojpenicillanic acid shows minimal inhibitory concentrations (MIC) in agar dilution of the Heart infusion agent of about 12.5 µg / ml against Pseudomonas aeruginosa A3.
On the other hand, the M.I.C. from Sulbenidllin, d. H. Disodium 6- (D-2-sulfonyl-2-phenylacetamido) penicillanate, 6- [D-2- (DL2-aminoglutaramido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, and 6- [D-2- (L-2-amino-3 -carbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid against said microorganisms 12.5, 50 and more than 100 μg / ml. The antimicrobial effectiveness of 6- [D-2- (D-2 amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxy phenylacetamido] penicillanic acid against Staphylococcus aureus ATCC 6538 P and St. epidermidis 10 131R is also about 2 to 4 times more potent than those of sulbenicillin and 6- [D-2- (L 2-amino-3-carbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid.
The penisallanic acid compound of the formula I produced according to the invention can furthermore show a strong antimicrobial activity against other Gram-positive and Gram-negative bacteria than those belonging to the Streptococcus, Escherichin, Klebsiella, Salmonella and Bacillus strains. In addition, the toxicity of the compound of formula I mentioned is remarkably low. For example, if 6- [D-2- (D-2-amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid is administered intravenously to mice at a dose of 10,000 mg / kg, no mouse will die during the period of 14 days after the administration.
The penicillanic acid compound of the formula I produced according to the invention can be used as a medicament either as a free acid or as a salt thereof. Pharmaceutically acceptable non-toxic salts of these compounds of formula I include, for example, non-toxic metallic salts such as sodium, potassium, calcium and aluminum, ammonium and substituted ammonium salts, e.g. B. Salts of such non-toxic amines as trialkylamines, including triethylamine, procaine, dibenzylamine, N-benzyl-ss-phenethylamine, 1-ephenamine, N, N'-dibenzylethylenediamine, dehydroabiethylamine, N, N'-bis-dehydroabiethylethylenediamine and other amines used to form salts with benzylpenicillin. Said compound of the formula is soluble in water and can be administered either orally or parenterally, e.g. B.
intravenously, intramuscularly, subcutaneously. A daily dose of this compound of the formula I can be about 0.25 to about 20 g, in particular 0.5 to 10 g, and more, especially about 1 to 4 g, per body of an adult patient. In addition, the compound of the formula I can be used in the form of a pharmaceutical preparation which contains the said compound in combination or in a mixture with a pharmaceutical excipient for enteral or parenteral administration.
The present inventive method for the preparation of the penicillanic acid compound of the formula I, characterized in that a D-2-acylamidophenylacetic acid of the formula II
EMI1.2
wherein Z is a protecting group and Rl and R2 have the above meaning, or a reactive derivative thereof, with a 6-aminopenicillanic acid of the formula III
EMI1.3
in which Y is hydrogen or a protective group, condenses, and then any protective group Y and Z which may be present is removed.
Suitable examples of the protecting group Y include benzyl, succinimidomethyl, phthalimidomethyl, phenacyl, trimethylsilyl and 2,2,2-trichloroethyl groups, and suitable examples of the protecting group Z are o-nitrophenylsulfenyl, benzyloxycarbonyl and 1-methyl-2-lower alkoxycarbonylvinyl. The 6 aminopenicillanic acid of the formula III, in which Y is hydrogen, can be used for the condensation according to the invention in the form of either a free acid or a salt thereof. Suitable examples of the salts mentioned are alkali metal salts, such as sodium and potassium salts, and lower trialkylamine salts, such as trimethylamine and triethylamine salts.
The condensation reaction of phenylacetic acid II with 6-aminopenicillanic acid III can easily be accomplished.
For example, the condensation reaction mentioned can advantageously be carried out in the presence of diphenylphosphoric acid azide, d. H.
N3PO (C6Hs) 2, in a solvent.
The reaction can be carried out at -20 to 20 ° C., in particular at -10 to 50 ° C. The reaction can be carried out particularly advantageously in the presence of an organic tertiary amine such as trimethylamine or triethylamine. Suitable solvents are dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, Chloroform and dichloromethane. Before the above condensation reaction, the acid II can be converted into a reactive derivative thereof. Suitable examples of the reactive derivative of the acid II include the corresponding mixed anhydride, e.g., lower alkoxycarbonyl ester such as ethoxycarbonyl, isobutoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl and tert-amyloxycarbonyl; lower alkanoyl esters such as pivaloyl esters; active esters, e.g., esters with p-nitrophenol and N-hydroxysuccinimide and azide.
The mixed anhydrides of acid II can be prepared in a known manner, for example by reacting said acid with a lower alkoxycarbonyl halide, e.g. B. bromide, chloride, or a lower alkanoyl halide, e.g. B. bromide, chloride, at -5 to -400C, in the presence of an acid acceptor in a solvent. Suitable solvents are chloroform, dichloromethane, dimethyl sulfoxide, tetrahydrofuran and dimethylformamide, and examples of an acid acceptor include N, N-dimethylaniline, N-methylmorpholine, pyridine, etc. On the other hand, the active esters of acid II can be prepared by reacting said acid with p-hydroxyphenol or N-hydroxysuccinimide at -10 to 30 "C in the presence of a dehydrating agent, e.g. dicyclohexylcarbodiimide, in a solvent such as tetrahydrofuran, dioxane, diglyme.
The azide can be prepared by reacting the acid called hydrazide with sodium nitrite in a dilute mineral acid, e.g. B. sulfuric acid. The condensation reaction of 6-aminopenicillanic acid III with the above-mentioned reactive derivative of amino acid II can be carried out at a temperature of 40 to -30 ° C., in particular 5 to -15 ° C., and in a solvent. Suitable reaction solvents are dimethylformamide, chloroform, tetrahydrofuran and methylene chloride.
The cleavage of the protective group or groups from the condensation product can be accomplished by any method, depending on the type of protective group or groups used. If, for example, o-nitrophenylsulfenyl is used as the protective group Z, said group can be split off by reacting the condensation product with about 2 to 3 molar equivalents of a thioamide in a solvent. Suitable examples of the thioamide include thioacetamide, thiobenzamide, thiourea and 2-mercapto-5-methyl-1,3,5-thiadiazole. It is preferred to carry out the reaction at a temperature of 40 to 0 ° C, in particular at 20 to 10 ° C. Suitable reaction solvents are ethyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, a lower alkanol, e.g. B. methanol, ethanol, or a mixture of these solvents.
If the protective group Z is benzyloxycarbonyl and / or the protective group Y is benzyl, the said protective group or groups can be eliminated by shaking the condensation product in hydrogen gas in the presence of a catalyst. This catalytic hydrogenation is advantageously carried out at a temperature of 40 to 0 ° C., in particular 20 to 10 ° C., under atmospheric pressure. Preferred examples of the catalyst include palladium-BaCO3, palladium-charcoal and palladium black. Lower alkanols such as methanol and ethanol are suitable as reaction solvents.
On the other hand, if the protective group Z 1 is -methyl-2-lower-alkoxycarbonylvinyl and / or the protective group Y is trimethylsilyl, said group or groups can be treated with a dilute mineral acid, e.g. B. 0.5 to 1% hydrochloric acid, at a temperature of 5 to 10 C in a solvent, e.g. B. methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, dioxane, can be achieved. If phenacyl, phthalimidomethyl or succinimidomethyl is used as protective group Y in the following, said group can be split off by reaction with an alkali metal salt or a thio compound or thiophenol. This reaction is advantageously carried out at 10 to -10 C in a solvent such as tetrahydrofuran or isopropanol.
The 2 ethylhexyl esters of 2-mercaptoacetic acid are advantageously used as the thiol compound. If the protective group Y is 2,2,2-trichloroethyl, this group can be split off in the usual way by reducing the condensation product with 90% formic acid-zinc powder. The reaction can advantageously be carried out at a temperature of 10 to -5 ° C.
The starting compound II can easily be obtained by methods known per se. For example, this compound can be prepared so that a phenylacetic acid of the formula
EMI2.1
wherein Rl has the above meaning with a reactive derivative, e.g. B. N-hydroxysuccinimide ester, an N-protected amino acid of the formula R2COCH2-CH (NHZ) -COOH, where R2 and Z have the above meaning, condensed. This condensation reaction is carried out at 40 to -300C in a solvent, e.g. B. dimethylformamide, tetrahydrofuran, methylene chloride performed.
The method described above is described in some practical and presently preferred embodiments. The term lower alkyl and lower alkoxy refers to straight or branched alkyls and alkoxy groups having one to six carbon atoms.
Example 1 (1) A solution of 5 g, 33 mmoles, of D-2-amino-3carbamoyl-propionic acid, i.e. H. D-asparagine in 20 ml of water is neutralized with potassium carbonate and 20 ml of tetrahydrofuran are added. This solution is then mixed with 8.5 g of o-nitrophenylsulfenyl chloride at 5 to 10 ° C. The mixture is then stirred at the same temperature for two hours, during the reaction the mixture is at a slightly alkaline pH, pH about 8 20 ml of water are then added to the reaction mixture and insoluble materials are filtered off. The filtrate is washed twice with ethyl acetate, acidified with citric acid and then extracted three times with 300 ml of ethyl acetate each time. The ethyl acetate extracts are then washed with water, dried and evaporated to dryness.
6.7 g of D-2- (o-nitrophenylsulfenylamino) -3-carbamoylpropionic acid with an F of 163 C (decomp.) Are obtained.
(2) 2.85 g, that is 10 mmoles, of the 3-carbamoylpropionic acid thus obtained are dissolved in 50 ml of tetrahydrofuran.
2.28 g of dicyclohexylcarbodiimide and 1.27 g of N-hydroxysuccinimide are then added to this solution at 0 ° to 50 ° C. and the mixture is then stirred at the same temperature for 16 hours. Insoluble materials are filtered off. The filtrate is then concentrated at 20 ° C. under reduced pressure, and the crystalline precipitate is washed with benzene-ether. 3 g of N- [D-2- (o-Nitrophenylsulfenylamino) -3-carbamoylpropionyloxy] succinimide with F at 135 to 136 "C are obtained.
(3) 3.82 g of the succinimide thus obtained are dissolved in 60 ml of tetrahydrofuran. This solution is then mixed with 12.5 ml of an aqueous 1N sodium hydroxide solution containing 2.3 g of p-hydroxy-D-phenylglycine. The mixture is stirred at room temperature for 24 hours. 20 ml of ethyl acetate and 20 ml of water are added to the reaction mixture and the mixture is then shaken. The resulting aqueous layer is separated, adjusted to pH 3 with citric acid and extracted with a mixture of 20 ml of tetrahydrofuran and 10 ml of ethyl acetate. The extract is then washed with water, dried and evaporated. The residue obtained in this way is washed with ether and 3.47 g of D-2- (D-2 (o-nitrophenylsulfenylamino) -3-carbamyl-propionamido) -2-hydroxy-phenylacetic acid are finally obtained as yellow needles with an F of 133 up to 1350C (dec.).
IR spectrum: XmaUxol 3380 (broad), 3270, 1705, 1670, 1635 cm- 'thin layer chromatography: Rf = 0.39 (silica gel plate).
Solvent: ethyl acetate-methanol-acetic acid (10: 1: 1).
(4) 435 mg of the acetic acid obtained and 121 mg of dimethylaniline are dissolved in a mixture of 2 ml of dimethylformamide and 3 ml of anhydrous tetrahydrofuran. A solution of 136 mg of isobutyl chlorocarbonate in 2 ml of tetrahydrofuran is added to the mixture at -25 to -20 ° C. with stirring. After 5 minutes, the mixture is treated with a solution of 382 mg of 6-amino-penicillanic acid tri äthylaminalz in 2.5 ml of water at -10 to -80C and the mixture is then at -10 to -50C for 40 minutes and then stirred at -5 to 0 "C for 30 minutes. After the reaction has ended, the mixture is adjusted to pH 3 with an aqueous 5% citric acid solution and extracted with a mixture of 10 ml of tetrahydrofuran and 5 ml of ethyl acetate.
The extract is then washed with water, dried and then evaporated below 40 ° C to remove the solvent. Ether is added to the residue and the crystalline precipitate is filtered off.
530 mg of 6- [D-2- (D-2- (o-nitrophenylsulfenyl amino) -3-carbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylaceta mido] penicillanic acid are obtained as yellow needles with F from 130 to 132 C ( Dec.).
IR spectrum: mNuaJxoI: 3280, 1775, 1730, 1650 cm-t.
Thin-layer chromatography: Rf = 0.30 (silica gel plate), solvent: ethyl acetate-tetrahydrofuran-acetic acid (10: 10: 1).
(5) 800 mg of the penicillanic acid thus obtained and 410 mg of thiobenzamide are dissolved in a mixture of 2 ml of tetrahydrofuran and 8 ml of ethanol. The solution is stirred at room temperature for 15 minutes. The reaction solution thus obtained is then evaporated to remove the solvent, below 30 ° C and tetrahydrofuran is added to the residue; light yellow crystals separate out and are filtered. The precipitate is then dissolved in 30 ml of water, insoluble materials are filtered off and the filtrate is freeze-dried. The colorless powder thus obtained is suspended in 3 ml of methanol, and 100 mg of triethylamine and 180 mg of potassium 2-ethylhexanoate are added to this suspension. Then ether is added to the suspension and the crystalline precipitate that forms is filtered.
370 mg of potassium 6- [D-2-amino-3-carbamoylpropionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanate with F at 213 to 2150 ° C. (decomp.) Are obtained as a colorless crystalline powder.
Free base: F at 202 to 205 "C (dec.).
IR spectrum: XNUaixol: 3300, 1760, 1660, 1590 cm-1.
Thin-layer chromatography: Rf = 0.30 (silica gel plate), solvent: n-butanol-acetic acid-water (4: 1: 1).
Example 2 (1) 3 g, that is 23.6 mmoles, of D-2-Amino-3-N-methylcarbamoylpropionic acid hydrochloride; H. D, N'C-methylasparagine HC1), 4.5 g of benzyloxycarbonyl chloride, 30 g of water, 30 ml of tetrahydrofuran and 12 g of potassium carbonate are treated in the manner described in Example 1- (1). 5.1 g of D-2-benzyloxycarbonylamino-3-Nmethylcarbamoylpropionic acid with F at 142 to 1430 ° C. are obtained.
(2) 2.8 g, that is 10 mmoles, of the propionic acid thus obtained, 2.27 g of dicyclohexylcarbodiimide, 1.27 g of N-hydroxysuccinimide and 120 ml of tetrahydrofuran are treated in the manner described in Example 1- (2). 2.6 g of N- (D-2-benzyloxycarbonylamino-3-N-methyl-carbantoyl-propionyloxy) succinimide with F at 132 to 140 ° C. are obtained.
(3) 3.75 g of the succinimide thus obtained are dissolved in 50 ml of tetrahydrofuran. This solution is mixed with 12.5 ml of an aqueous IN sodium hydroxide solution containing 2.3 g of hydroxy-D-phenylglycine, and the mixture is then stirred at room temperature for 24 hours. Thereafter, the reaction mixture is treated in the manner described in Example 1 (3) and finally 3.0 g of D-2- (D-2-benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenyl are obtained - Acetic acid as a colorless crystalline powder with F from 154 to 156 "C (dec.).
IR spectrum: tJol: 3300, 1790, 1650, 1640 cm-t.
Thin-layer chromatography: Rf = 0.37 (silica gel plate), solvent: ethyl acetate-ethanol-acetic acid (10: 1: ä).
(4) 429 mg of the acetic acid obtained according to the above process and 382 mg of the triethylamine salt of 6-aminopenicillanic acid are dissolved in 10 ml of dimethylformamide. 303 mg of diphenylphosphoric acid azide [N3PO (C6H5) 2] and 110 mg of triethylamine are then added to the solution at -5 ° C. and the mixture is stirred at -5 to 10 ° C. for 5 hours. After the reaction has ended, the mixture is adjusted to pH 3 with an aqueous 5% citric acid solution and extracted with a mixture of 15 ml of tetrahydrofuran and 10 ml of ethyl acetate. The extract is then washed with water, dried and then evaporated at below 40 ° C. Ether is added to the residue obtained and the precipitate formed is filtered.
Finally, 509 mg of 6- [D-2- (D-2-benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoylpropionamido) -2-p-hydroxy phenylacetamido] penicillanic acid are obtained as a colorless powder.
IR spectrum: XNUaJol 3280, 1770, 1720, 1640 cm-1.
Thin-layer chromatography: Rf = 0.663 (silica gel plate), solvent: tetrahydrofuran-methanol-acetic acid (50: 3: 3) (5) 627 mg of the penicillanic acid obtained and 400 mg of 30% palladium-BaCO3 are dissolved in 10 ml of methanol suspended. The suspension is then shaken at room temperature for 30 minutes, this shaking being accomplished in a hydrogen gas atmosphere under atmospheric pressure. After the reaction has ended, the catalysts are filtered off, the filtrate is evaporated below 40 ° C. and ether is added to the residue obtained. The colorless crystalline powder that forms is filtered and washed with tetrahydrofuran.
Finally 443 mg of 6- [D-2- (D-2-amino-3-N-methylcarbomoyl propionamido) -2-p-hydroxyphenyl-acetamido] penicillanic acid are obtained with F at 198 ° to 201 ° C. (decomp.).
IR spectrum: XmaUJol 3280, 1760, 1660 cm-l.
Thin-layer chromatography: Rf = 0.43 (silica gel plate), solvent: n-butanol-acetic acid-water (4: 1: 1).
IR spectrum of the potassium salt: kmaUJ l 3300, 1760, 1660, 1600 cm-1.
Example 3 (1) 3 g, that is 23.6 mmoles, of D-2-amino-3-N-methylcarbamoyl-propionic acid hydrochloride; H. D-N'-methylasparagine HC1, 5 g of o-nitrophenylsulfenyl chloride, 30 g of water, 10 ml of tetrahydrofuran and 12 g of potassium carbonate are treated in the manner described in Example 1- (1). 5 g of D-2- (o-nitrophenylsulfenylamino) -3-N-methylcarbamoyl-propionic acid with F at 134 to 136 ° C. are obtained.
(2) 1.57 g, that is 5.2 mmoles, of the propionic acid thus obtained, 1.3 g of dicyclohexylcarbodiimide, 788 mg of N-hydroxysuccinimide and 15 ml of tetrahydrofuran are treated in the manner described in Example 1- (2) . Finally, 1.8 g of N- [D-2- (o-nitrophenylsulfenylamino) -3-N-methylcarbamoyl-propionyloxy] succinimide with F at 126 to 1280 ° C. are obtained.
(3) 3.96 g of the succinimide obtained in accordance with the above procedure are dissolved in 20 ml of dimethylformamide. 12.5 ml of an aqueous 1N sodium hydroxide solution containing 2.3 g of p-hydroxy-D-phenylglycine are then added to this solution. The mixture is then stirred at room temperature for 10 hours, and 10 ml of ethyl acetate are added to the reaction mixture with stirring. The aqueous layer is then separated off, adjusted to pH 3 with citric acid and treated in the manner described in Example 1- (3). Finally, 3.80 g of D-2- [D-2 (o-nitrophenylsulfenylamino) -3 -N-methylcarbamoyl-propionamido] -2-p-hydroxyphenylacetic acid are obtained as yellow needles with an F of 111 to 1130 ° C. (decomp.).
IR spectrum: XNmuaxol: 3370, 3250, 1705, 1650, 1625 cm-1.
Thin-layer chromatography: Rf = 0.36 (silica gel plate), solvent: ethyl acetate: methanol-acetic acid (10: 1: 1).
(4) 897 mg of the 2-p-hydroxyphenylacetic acid thus obtained, 655 mg of the succinimidomethyl ester of 6-aminopenicillanic acid and 230 mg of N-hydroxysuccinimide are dissolved in 10 ml of dimethylformamide. 412 mg of dicyclohexylcarbodiimide are then added to this solution at -5 "C with stirring and the mixture is stirred at the same temperature for 5 hours. Then 10 ml of water are added to the reaction mixture and the aqueous mixture is mixed with a mixture of 20 ml of tetrahydrofuran and 10 ml of ethyl acetate, and the extract obtained is washed successively with an aqueous 5% citric acid solution, an aqueous sodium bicarbonate solution and then with water.
The extract is then dried and evaporated below 40C. Ether is added to the residue obtained and the precipitate is filtered off. You finally get
1200 mg of 6- [D-2- (D-2- (o-nitrophenylsulfenylamino) -3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid succinimidomethyl ester as a yellow crystalline powder with F at 143 to 144 C (dec.).
IR spectrum: h "': 3290, XmuaJol .329Q1780,1760,1730,1715,1650cm-1.
Thin-layer chromatography: Rf = 0.17 (silica gel plate), solvent: ethyl acetate-tetrahydrofuran (2: 1).
(5) 755 mg of the succinimidomethyl ester obtained in accordance with the above process are dissolved in 5 ml of dimethylformamide.
250 mg of the sodium salt of 2-ethylhexyl-2-mercaptoacetate are added to this solution and the mixture is left to stand at 0 ° to 50 ° C. for 40 minutes. 10 ml of water and 10 ml of ethyl acetate are then added to the reaction mixture and the mixture mentioned is shaken. Thereafter, the aqueous layer is separated, adjusted to pH 3 with an aqueous 5% citric acid solution and extracted with a mixture of 20 ml of tetrahydrofuran and 10 ml of ethyl acetate. The extract is washed with water, dried and then evaporated at below 300C.
Finally, 590 mg of 6- [D-2- (D-2- (o Nitrophenylsulfenylamino) -3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid are obtained as a yellow crystalline powder with F at 165 to 167 " C (dec.).
IR spectrum: kNuaxol: 3400, 3250, 1780, 1730, 1640 cm-1.
Thin layer chromatography: Rf = 0.59 (silica gel plate), solvent: tetrahydrofuran-methanol-acetic acid (5: 0.3: 0.3).
(6) 1.1 g of the penicillanic acid thus obtained are dissolved in a mixture of 15 ml of methanol and 5 ml of tetrahydrofuran, and 830 mg of thiobenzamide are added. The mixture is then stirred at room temperature for 45 minutes. The reaction mixture obtained is evaporated at below 30 ° C, tetrahydrofuran is added to the residue and the precipitate is filtered off. To this precipitate, water, tetrahydrofuran and ethyl acetate are added and then the mixture is shaken. The resulting aqueous layer is separated, washed with tetrahydrofuran-ethyl acetate and then freeze-dried. In this way 700 mg of 6- [D-2- (D-2-amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid are obtained as a colorless powder with an F from 198 to 201C (dec. ).
Example 4
632 mg of 6- [D-2- (D-2- (o-nitrophenylsulfenylamino) -3 carbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid and 410 mg of thiobenzamide are in a mixture of 2 ml of tetrahydrofuran and 8 ml of methanol dissolved.
The solution is then stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction solution is then evaporated below 30 ° C., 5 ml of tetrahydrofuran are added to the residue and the light yellow crystalline precipitate that has formed is filtered off. After washing with tetrahydrofuran, the precipitate is dissolved in 10 ml of water and the insoluble materials are filtered. The filtrate is then washed twice with 4 ml of tetrahydrofuran-ethyl acetate 2: 1 each time and freeze-dried. In this way 410 mg of 6- [D-2- (D-2-amino-3-carbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid are obtained as a light green crystalline
Powder with F from 202 to 2050C (dec.).
IR spectrum: XNuJ I 3250,1760,1665,1600 cm-t.
Thin layer chromatography: Rf = 0.30 (silica gel plate),
Solvent: n-butanol-acetic acid-water (4: 1: 1).
Example 5 (1) 897 mg of D-2- [D-2- (o-nitrophenylsufenylamino) -3
N-methylcarbamoyl-propionamido] -2-p-hydroxyphenyl acetic acid and 202 mg of N-methylmorpholine are dissolved in 10 ml of dimethylformamide. A solution of 217 mg of ethyl chlorocarbonate in 2 ml of tetrahydrofuran is added to this solution at 25 ° to -20 ° C. with stirring. After 5 minutes, the mixture is treated with a solution of 764 mg of 6 aminopenicillanic acid triethylamine salt in 4 ml of water at -10 to -80C and then the mixture is treated in the manner described in Example 1- (4). 1.33 g of 6- [D -2- (D-2- (o-nitrophenylsulfenylamino) -3-N-methylcarbamoylpropionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamidojpenicillanic acid are obtained as yellow needles with an F of 165 up to 1670C (decomp.).
IR spectrum: ANaJ l 3400, 3250, 1780, 1730, 1640 cm-t.
Thin layer chromatography: Rf = 0.59 (silica gel plate), solvent: tetrahydrofuran-methanol-acetic acid (5: 0.3: 0.3).
(2) 646 mg of the penicillanic acid obtained according to the above process and 274 mg of thiobenzamide are in one
Dissolved mixture of 8 ml of methanol and 2 ml of tetrahydrofuran.
The solution is then stirred at room temperature for 40 minutes and the reaction solution is then treated in the manner described in Example 4. 437 mg of 6- [D-2- (D-2-amino-3-N-methylcarbamoyl propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penic acid are obtained as a colorless crystalline powder with an F at 198 to 2010C (decomp.).
Example 6
870 mg of D-2- (D-2- (o-nitrophenylsulfenylamino) -3carbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetic acid and 202 mg of triethylamine are dissolved in 10 ml of dimethylformamide and 550 mg of diphenylphosphoric acid azide at -15 to -10oC added. The solution is then stirred at the same temperature for 5 minutes and 764 mg of the triethylamine salt of 6-aminopenicillanic acid are added to this and the mixture is further stirred at -5 to OoC for 1 1/2 hours. After the completion of the reaction, the mixture is treated in the manner described in Example 2- (4). The crude product thus obtained is washed with chloroform and then with ethyl acetate.
925 mg of 6- [D-2 - (D-2- (o-nitrophenylsulfenylamino-3 carbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamidojpenicillanic acid are obtained as a yellow crystalline powder with an F of 130 to 1320C (decomp.) This product is treated in the manner described in Example 1 (5) to give 6- [D-2- (D-2-amino-3 carbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid.
Example 7 (1) 1.29 g of D-2- (D-2-benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetic acid and 1.01 g of the benzyl ester of 6-aminopenicillanic acid are in 200 ml Dissolved dimethylformamide. 575 mg of N-hydroxysuccinimide and 680 mg of dicyclohexylcarbodiimide are then added to the solution at -150 ° C. and the mixture is stirred at 0 ° C. for 20 hours. The reaction mixture is then treated in the manner described in Example 3- (4).
Finally, 1.80 g of 6- [D-2- (D-2-benzyl oxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid benzyl ester are obtained as colorless needles with F at 107 to 110 C (dec.).
(2) 1.44 g of the benzyl ester of penicillanic acid thus obtained, 1.5 g of 30% total palladium-BaCO3 and 30 ml of 95% aqueous methanol are treated in the manner described in Example 2 (5). 620 mg of 6 [D-2- (D-2-amino-3 -N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid are obtained as a colorless crystalline powder with F at 198 to 201 "C (dec.) .
Examples 8 to 26
The following compounds are prepared in the manner described in the previous examples:
8. 6- [D-2- (DL-2-amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 195-198 C (dec.); 9. 6- [D-2- (L-2-amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 197 to 2000C (dec.); 10. 6- [D-2- (D-2-amino-3-N-isopropylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 198 to 200 "C (dec.); 11.6 - [D-2- (D-2-amino-3-Nn-butylcarbamoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid; F = 188 to 191 "C (dec.);
; 12. 6- [D-2- (D-2-amino-3-N-n-hexylcarbomoyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 186 to 189 C (dec.); 13. 6- [D-2- (DL-2-amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 193 to 195 "C (dec.); 14. 6- [ D-2- (D-2-amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 193-195 "C (dec.);
15.6- [D-2- (L-2-amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 191 to 193 C (dec.);
16. 6- [D-2- (DL-2-amino-3-N-ethylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 190 to 193 "C (dec.);
;
17. 6- [D-2- (DL-2-amino-3-N-n-propylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 175 to 178 "C (dec.);
18. 6- [D-2- (DL-2-amino-3-Nn-butylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 190 to 193 "C (dec.); 19.6- [D-2- (DL-2-Amino-3-N-, 8-hydroxyethylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 177 to 1800C (dec.); 20. 6- [D-2- [DL-2-amino -3-N-dimethylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 192 to 194 "C (dec.);
; 21. 6- [D-2- (DL-2-amino-3-hydroxycarbonyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, F = 189 to 191 "C (dec.); 22. 6- [D- 2- (DL-2-amino-3-methoxycarbonyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 185 to 188 "C (dec.); 23. 6- [D-2- (D-2-amino-3-methoxycarbonyl-propionamido) -2-p-hydroxyphenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 170 to 173 "C (dec.);
24. 6- [D-2- (D-2-amino-3-methoxycarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 185 to 188 "C (dec.);
;
25. 6- [D-2- (D-2-amino-3-N-dimethylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 197 to 200 "C (dec.);
26. 6- [D-2- (D-2-amino-3-N-ethylcarbamoyl-propionamido) -2-phenylacetamido] penicillanic acid, m.p. 204-207 "C (dec.);