Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von neuen Purinderivaten, wobei die Definition niedrig bzw. nieder , wie sie im Zusammenhang mit den Resten verwendet wird, die sich von Alkanen, wie z.B.
Alkylresten oder Alkylenresten ableiten, solche Reste darstellen, welche 1 bis 8 Kohlenstoffatome enthalten, sofern nichts anderes ausgesagt wird.
Die erfindungsgemäss erhältlichen Purinderivate entsprechen der folgenden Formel:
EMI1.1
worin Rl Wasserstoff, Halogen (z.B. Chlor, Brom, Jod, Fluor), Hydroxyl, Mercapto, nieder-Alkoxy (z.B. Methoxy, Äthoxy, Propoxy, Isopropoxy), Aryl-(nieder)-alkoxy, z.B. Phenyl (nieder)-alkoxy, (z.B. Benzyloxy, Phenäthyloxy), nieder Alkylthio (z.B. Methylthio, Äthylthio, Propylthio), Amino, nieder-Alkylamino (z.B. -Methylamino, Äthylamino, Propylamino), Di-(nieder)-alkylamino (z.B. Dimethylamino, Diäthylamino, Methyläthylamino), Aryl-(nieder)-alkylamino, z.B.
Phenyl-(nieder)-alkylamino (z.B. Benzylamino, Phenäthylamino) oder Hydroxyamino; R2 Wasserstoff, Halogen (z.B.
Chlor, Brom, Jod, Fluor), Hydroxyl, Mercapto, Amino, nieder-Alkyl (z.B. Methyl, Athyl, Propyl, Isopropyl), Aryl, zB.
Phenyl, nieder-Alkoxy (z.B. Methoxy, Äthoxy, Propoxy, Isopropoxy), Aryl-(nieder)-alkoxy, z. B. Phenyl-(nieder)-alkoxy (z.B. Benzyloxy, Phenäthyloxy) oder nieder-Alkylthio (z.B.
Methylthio, Äthyltnio, Propylthio); R3 ein Wasserstoffatom, eine Mercaptogruppe oder eine Aminogruppe; R4 einen Alkylenrest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen (z.B. Äthylen, Trimethylen, Propylen), welcher mit einem oder mehreren Hydroxylresten substituiert ist, wobei allerdings keine Hydroxylgruppen an dem dem Ringstickstoffatom benachbarten Kohlenstoffatom haftet, wobei diese Hydroxylgruppen einzeln durch Acylreste, wie z.B. niederes Alkanoyl (z.B. Acetyl, Propionyl) oder Benzoyl, niedere Alkylreste (z.B. Methyl, Athyl, Propyl, Isopropyl) oder Aryl-(nieder)-alkylreste, z.B. Phenyl-(nieder)alkyl (z.B. Benzyl, Phenäthyl), oder je zwei zusammen durch niedriges Alkyliden (z.B. Äthyliden, Propyliden, Isopropyliden) oder Aryl-(nieder)-alkyliden, z.B. Phenyl-(nieder)-alkyliden (z.B.
Benzyliden) geschützt sein können, und Rs Hydroxyl, niedere oder höhere Alkoxyreste (z.B. Methoxy, Äthoxy, Propoxy, Isopropoxy, Octyloxy, Decyloxy, Heptadecyloxy), Amino, (nieder)-Alkylamino (z.B. Methylamino, Äthylamino, Propylamino) oder Di-(nieder)-alkylamino (z.B. Dimethylamino, Diäthylamino, Methyläthylamino) bedeuten. Die Erfindung bezieht sich ebenfalls auf die Herstellung von Salzen dieser Verbindungen, z.B. von Metallsalzen, wie beispielsweise Natriumsalze, Kaliumsalze, Calciumsalze, Ammoniumsalze, Aminsalze, wie z.B. Dimethylaminosalzen, Trimethylaminosalzen und Säureadditionssalzen, wie z.B. organische oder anorganische Säureadditionssalzen, wie beispielsweise die Hydrochloride, Hydrobromide, Sulfate, Nitrate, Phosphate, Tartrate, Citrate.
Spezifische Beispiele von Purinverbindungen der Formel I sind die folgenden: 4-(Purin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(2-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(8-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, (nieder)-Alkyl-4-(6-aminopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronat (zB.
Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat, Äthyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat, Propyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat, Butyl-4-(6-aminopunn-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat), 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronamid, N-(nieder)-Alkyl-4-(6-aminopurin-9-yl) 4-desoxy-D-erythronamid (z.B.
N-Äthyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronamid), N,N-Di-(nieder)-alkyl-4-(6-aminopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronamid (z.B.
N,N-Diäthyl-4-(6-aminopurin-9-yl) 4-desoxy-D-.erythronamid), 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- (nieder)-alkyliden-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- äthyliden-D-erythrons äure, 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- isopropyliden-D-erythronsäure), 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- aryl-(nieder)-alkyliden-D-erythronsäure, (z.B.
4-(6-Aminopunn-9-yl)-4-desoxy-2,3-O- benzyliden-D -erythronsäure), (nieder)-Alkyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- (nieder)-alkyliden-D-erythronat (z.B.
Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O- isopropyliden-D-eryffironat, Äthyl-4- (6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2 ,3-0- isopropyliden-D-erythronat), N-(nieder)-Alkyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O- (nieder)-alkyliden-D-erythronamid (z.B.
N-Äthyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O- isopropyliden-D-erythronamid), 4-(6-Aminopurin-9-yi)-4-desoxy-2,3-O- di-(nieder)-alkanoyl-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0diacetyl-D-erythronsäure, 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2 ,3-0- dipropionyl-D-erythTonsäure), (nieder)-Alkyl-4-(6-aminopurin-9-yl3-4-desoxy-2,3-0- di-(nieder)-alkanoyl-D-erythronat (zB.
Methyl-4(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O- diacetyl-D-erythronat, Äthyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- diacetyl-D-erythronat), 4-(6-Amino-8-(nieder)-alkylpurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Amino-8-.methylpurin-9-yl)- 4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(6-Amino-8-äthylpurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure), 4-(6-Amino-8-(nieder)-alkylpurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- (nieder)-alkyliden-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Amino-8-methylpurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O- isopropyliden-D-erythronsäure, 4-(6-Amino--8-äthylpurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O- isopropyliden-D-erythronsäure), 4-(6-Amino-8-mercaptopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(6-Amino-8-mercaptopurin-9-yl)- 4-desoxy-2,3-0-(nieder)-alkyliden-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Amino-8-mercaptopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- isopropyliden-D-erythronsäure), 4-(6,8-Diaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(6-Amino-8-hydroxypurin-9-yl)- 4-desoxy-D-erythronsäure, 4-[2-(nieder)-Alkylthio-6-aminopurin-9-yl 4-desoxy-D-erythronsäure (z.B.
4-(Methylthio-6-aminopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(2-Äthylthio-6-aminopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure), 4-[2-(nieder)-Alkyl-6-aminopurin-9-yl]4-desoxy-D-erythronsäure (z.B.
4-[2-Methyl-6-aminopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure), 4-(2,6-Diaminopurin-9-yl)-4-desox-D-erythronsäure, 4-(2-Hydroxy-6-aminopurin-9-yl)
4-desoxy-D-erythronsäure,
4-[6-(nieder)-Alkylaminopurin-9-yl]
4-desoxy-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Methylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure,
4-(6-Äthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(6-Butylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure,
4-[6-(nieder)-Alkylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O (nieder)-alkyliden-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Äthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O isopropyliden-D-erythronsäure),
4-[6-Di-(nieder)-alkylaminopurin-9-yl]
4-desoxy-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Dimethylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(6-Diäthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure,
4-(6-Hydroxyaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure,
4-[6-Phenyl-(nieder)-alkylaminopurin-9-yl]
4-desoxy-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Benzylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure,
4-(6-Phenäthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure),
4-(6-Hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, (nieder)-Alkyl-4-(6-hydroxypurin-9-yl)
4-desoxy-D-erythronat (z.B.
Methyl-4-(6-hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat, Äthyl-4-(6-hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat),
4-(6-Hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronamid, (nieder)-Alkyl-4-(6-hydroxypurin-9-yl)
4-desoxy-2,3-O-di-(nieder)-alkanoyl-D-erythronat (z.B.
Methyl-4-(6-hydroxypurin-9-yl)
4-desoxy-2,3-O-diacetyl-D-erythronat, Äthyl-4-(6-hydroxypurin-9-yl)
4-desoxy-2,3-O-diacetyl-D-erythronat), 4-(6,8-Dihydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(2,6-Dihydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure,
4-(2-Amino-6-hydroxypurin-9-yl)
4-desoxy-D-erythronsäure,
4-(6-Halopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Chlorpurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure,
4-(6-Brompurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure,
4-(6-Halopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O-(nieder)alkyliden-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Chlorpurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- isopropyliden-D-erythronsäure, 4-(6-Brompurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- isopropyliden-D-erythronsäure),
4-(6-Mercaptopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure,
4-[6-(nieder)-Alkylthiopurin-9-yl]
4-desoxy-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Methylthiopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure.
4-[6-Äthylthiopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure), 4-[6-(nieder)-Alkoxypurin-9-yl)- 4-desoxy-D-erythronsäure (z.B.
4-(6-Methoxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure), 3-(6-Aminopurin-9-yl)-2-hydroxy
3-hydroxymethylpropionsäure,
6-Amino-9-(3-carboxy-2,3 .dihydroxypropyl) -purin- 1 -oxyd, 6-Amino-9-(3-carboxy-2,3isopropylidenoxypropyl)-purin-1-oxyd, 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-L-threonsäure, usw.
Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man eine Pyrimidinverbindung der Formel:
EMI2.1
in welcher Rl, R2, R4 und Rs obige Bedeutung haben, mit Ameisensäure oder-einem funktionellen Derivat davon oder mit einem entsprechenden Thiokohlensäurederivat umsetzt.
So kann man beispielsweise die Pyrimidinverbindung der Formel II mit Ameisensäure oder einem funktionellen Derivat davon, wie z.B. Formamid, einem niedrigen Alkylformiat, N,N-Di-(nieder)-alkylformamid, (nieder)-Alkylorthoformiat, nieder-Alkylformimidat, Natriumdithioformiat oder Formamidin, gegebenenfalls unter Erhitzen oder Behandeln mit einer Base, umsetzen. Die Reaktion erfolgt im allgemeinen bei einer Temperatur im Bereiche zwischen Zimmertemperatur und dem Siedepunkt des Reaktionsmediums, wobei man nötigenfalls ein Lösungsmittel, wie z.B. Wasser, Methanol oder Atha- nol, zusetzen kann. Gewünschtenfalls kann man auch ein Kondensationsmittel zugeben, wie z.B. Salzsäure, Essigsäureanhydrid, Natriumalkoholat oder Phosphoroxychlorid, je nach der Art des Reaktionsmittels.
Die allfällige Nachbehandlung mit einer Base, wie z.B. einem Alkalimetallhydroxyd, bei- spielsweise Natriumhydroxyd oder Kaliumhydroxyd, einem Erdalkalimetallhydroxyd, wie z.B. Calciumhydroxyd oder Magnesiumhydroxyd, einem Alkalimetallalkoxyd, wie z.B.
Natriummethoxyd, Kaliummethoxyd oder Natriumäthoxyd, oder mit einem tertiären Amin, wie z.B. Trimethylamin, Tri äthylamin, N-Methylpiperazin oder Pyridin, erfolgt gewöhnlich in einem Lösungsmittel, wie z.B. Wasser oder wässrigem Alkohol.
Ferner kann man beispielsweise eine Pyrimidinverbindung der Formel II mit einem Thiokohlensäurederivat, wie z.B.
Thiophosgen, Thioharnstoff, Natriumxanthogenat, Kaliumxanthogenat, Schwefelkohlenstoff, Dimethylthiocarbonat, Diäthylthiocarbonat oder 1,1'-(Thiokohlensäure)-diimidazol, umsetzen. Die Umsetzung erfolgt normalerweise in einem Lösungsmittel, wie z.B. Wasser, Methanol, Äthanol oder Propanol, bei einer Temperatur im Bereiche zwischen Zimmertemperatur und der Siedetemperatur des Reaktionsmediums, nötigenfalls in Gegenwart eines Kondensationsmittels, wie z.B. einem Alkalimetallalkoxyd, wie z.B. Natriummethoxyd, Natriumäthoxyd, Kaliumäthoxyd, oder einem tertiären Amin, wie z.B. Triäthylamin oder Pyridin.
Die als Ausgangsmaterialien verwendeten Pyrimidinverbindungen der Formel II können nach verschiedenen Methoden erhalten werden. So erhält man beispielsweise 4 (5-Amino-6-chlor-4-pyrimidinylamino)-4-desoxy-2,3-0-iso- propyliden-D-erythronsäure durch Umsetzung von 5-Amino4,6-dichlorpyrimidin mit 4-Amino-4-desoxy-2,3-O-isopropyliden-D-erythronsäure und durch Reduktion der erhaltenen 4-(6-Chlor-5-nitro-4-pyrimidinylamino)-4-desoxy 2,3-0-isopropyliden-D-erythronsäure. 4-(5,6-Diamino-4pyrimidinylamino)-4-desoxy-2,3-O-isopropyliden-D-erythron säure wird durch Umsetzung von 6-Amino-5-nitro-4chlorpyrimidin mit 4-Amino-4-desoxy-2,3-0-isopropyliden
D-erythronsäure und durch Reduktion der erhaltenen 4-(6-Amino-5-nitro-4 pyrimidinylamino)-4-desoxy-2,3 -0-isopropyliden-D-erythron- säure
erhalten. 4-(6-Amino-5-nitro-4-pyrimidinylamino)
4-desoxy-2,3-0-isopropyliden-D-erythronsäure wird durch
Reduktion von 4-Chlor-5-nitro-6-aminopyrimidin mit 4 Amino-4-desoxy-2,3-0-isopropyliden-D-erythronsäure erhalten.
Äthyl-4-(6-amino-5-nitro-4-pyrimidinylamino)-4-desoxy- 2,3-0-dibenzoyl-L-threonat wird durch Umsetzung von 4 Chlor-5-nitro-6-aminopyrimidin mit Äthyl-4-amino-4 desoxy-2,3-0-dibenzoyl-L-threonat erhalten. 4-(5-Formlamido 6-amino-4-pyrimidinylamino)-4-desoxy-D-erythronsäure erhält man durch Umsetzung von 6-Amino-5-nitro-4 chiorpyrimidin mit 4-Amino-4-desoxy-2,3-O-isopropyliden- erythronsäure und Reduktion der erhaltenen 4-(6-Amino-5-nitro-4-pyrimidinylamino)-4- desoxy-2,3-0-isopropyliden-D-erythronsäure in Gegenwart von Ameisensäure. Andere Ausgangsmaterialien können in ähnlicher Weise erhalten werden.
Man kann die erhaltenen Purinverbindungen, in denen die
Alkylengruppe R4 eine oder mehrere acylierte Hydroxylgrup pen oder verätherte Hydroxylgruppen trägt, durch Hydrolyse mit einer sauren oder basischen Substanz in einem wässrigen
Medium in die entsprechenden Purinverbindungen überführen, in welchen mindestens eine freie Hydroxylgruppe vorliegt.
Als saure Substanzen kann man Salzsäure, Schwefelsäure,
Ameisensäure, Essigsäure, Benzoesäure und dergleichen ver wenden. Beispiele von basischen Substanzen sind Natriumhy droxyd, Kaliumhydroxyd, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat,
Natriumhydroxyd, Natriumäthoxyd, Kaliumäthoxyd usw. Man kann auch ein saures oder basisches Ionenaustauschharz ver wenden. Die Reaktion erfolgt gewöhnlich bei einer Tempera tur zwischen Zimmertemperatur und dem Siedepunkt des
Reaktionsmediums. Im allgemeinen erfolgt die Hydrolyse in gleicher Weise durch Verwendung einer sauren oder basischen
Substanz.
Man kann auch die erhaltene Purinverbindung, in welcher
R1 eine Aminogruppe bedeutet oder die Alkylengruppe R4 eine oder mehrere freie Hydroxylgruppen aufweist, durch
Behandlung mit einem Acylierungsmittel in eine entspre chende Verbindung überführen, in welcher R1 eine Acylami nogruppe bedeutet oder die Hydroxylgruppen der Alkylen gruppe R4 durch Acylreste geschützt sind.
Als Acylierungsmittel kommen in Frage: aliphatische Carbonsäuren, wie z.B. Essigsäure, Propionsäure, Butansäure, Pentansäure, Isopentansäure, Pivalinsäure, 2-Äthylbutansäure, aromatische Carbonsäuren, wie z.B. Benzoesäure, p Brombenzoesäure, p-Nitrobenzoesäure, Phenylessigsäure, Zimtsäure, sowie heterocyclische Carbonsäuren, wie z.B.
Nikotinsäure oder Isonikotinsäure, sowie deren funktionelle Derivate an der Carboxylgruppe, wie z.B. deren Säurehalogenide, wie beispielsweise Säurechloride, Säureanhydride, Amide, Azide und Ester (z.B. Methylester, Äthylester, Cyanomethylester, p-Nitrophenylester, Pentachlorphenylester, 2,4,5 Trichlorphenylester, Propargylester, Phenylthioester, N Hydroxysuccinimid), üblicherweise in einem Lösungsmittel, wie z.B. Äther, Aceton, Dioxan, Acetonitril, Chloroform, Äthylenchlorid, Tetrahydrofuran, Äthylacetat, Pyridin). Die Umsetzung erfolgt unter Kühlen, bei Zimmertemperatur oder unter Erwärmen. Nötigenfalls kann man auch ein Kondensationsmittel verwenden, wie z.B.
N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N-Cyclohexyl-N'-morpholinoäthylcarbodiimid, N-Cyclohexyl-N'-(4-diäthylaminocyclohexyl)-carbodiimid, N,N'-Diäthylcarbodiimid, N,N'-Diisopropylcarbodiimid, N-Äthyl-N'-(4-dimethylaminopropyl) -carbodiimid.
N,N'-Carbonyldiimidazol, N,N'-Carbonyldipyrazol, N,N'-Carbonyldi-(2-methylimidazol), Pentamethylenketen-N-cyclohexylimin, Diphenylketen-N-cyclohexylimin, Alkoxyacetylen, 1-Alkoxy- 1-chloräthylen, 2-Äthyl-7-hydroxybenzisoxazoliumsalz, 2-Äthyl-5- (m-sulfophenyl)-isoxazolium-hydroxyd etc.
Man kann auch eine Base, wie z.B. ein Alkalimetallcarbonat, Trialkylamin oder Pyridin zusetzen.
Wählt man die Reaktionsbedingungen in geeigneter Weise aus, so ist es möglich, die eine oder aber auch beide Acylierungsvorgänge der Hydroxylgruppe und der Aminogruppe zu bewerkstelligen.
Die in den 2-, 6- und/oder 8-Stellungen vorhandenen Mercaptogruppen können durch Reaktion mit einem niedrigen Alkylhalogenid, wie z.B. Methylchlorid, Methyljodid oder Äthylchlorid, in Gegenwart einer Base in niedrige Alkylthioreste übergeführt werden.
Die oben erwähnten Purinverbindungen der Formel I können in deren Salze, z.B. in Metallsalze, Ammoniumsalze, Aminsalze und Säureadditionssalze in an sich bekannter Weise übergeführt werden.
Die Purinverbindungen der Formel (I) und deren Salze besitzen im allgemeinen eine ausgesprochene hypocholesterin ämische Wirkung. Die Testresultate mit der Standardverbindung, d.h. mit 4-(6-Aminopurin-9-yl)-desoxy-D-erythronsäure, finden sich nachfolgend.
1. Testmethode
Gruppen von Ratten vom Wistarstamm (Körpergewicht 74 g im Durchschnitt), welche 5 Wochen alt sind, wobei jede Gruppe aus 10 Tieren bestand, wurden während 3 Tagen mit fettem Futter gefüttert, welches 2% Cholesterin, 1 Nc Cholsäure, 12% gehärtetes Ö1, 8% Fischextrakt und einige andere Materialien enthielt, unter gleichzeitiger Verabreichung der Testverbindung und zwar einmal pro Tag, dann über Nacht sich selbst überlassen und am nächsten Morgen getötet. Die Serumcholesterinkonzentration wurde nach der Methode von Zak-Henly gemessen. Die Testverbindung wurde in wässriger Lösung, welche mit Salzsäure angesäuert war, oder in Form einer wässrigen Suspension mit Carboxymethylcellulose verabreicht. Zu Kontrollzwecken wurde Thyroxin oral in einer Dosis von 0,05 mg pro Tier verabreicht.
2. Testresultate
Art der Verabreichung Dosis Serumcholesterin Inhibition (mg/Ratte) mg/dl + S.E.
Intraperitoneal 0,5 337 + 48,8 37,4
Intraperitoneal 0,2 338 + 24,9 37,2
Oral 0,5 249 + 26,6 53,7
Oral 0,2 271 1 28,0 49,6
Thyroxin 0,05 284 1 28,4 47,2
Kontrollversuch 538 1 48,1
Andere Verbindungen, wie z.B.
Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat, Äthyl-4-(6-aminopurin-9 -yl)4-desoxy-D -erythronat, 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronamid, 4-(6-Benzoylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D -erythronsäure, 4-(6-Amino-8-methylpurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(2-Amino-6-hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(6-Äthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 4-(6-Hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure, 6-Amino-9-(3-carboxy-2,3-dihydroxypropyl)-purin- 1 -oxyd) und deren Salze zeigen eine ähnliche Wirkung.
Ferner ist die Toxizität der Purinverbindungen der Formel (I) und deren Salze ausserordentlich niedrig. Die akute Toxizität von 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure bei Ratten und Mäusen ist beispielsweise die folgende:
Tier Art der Verabreichung LDso (mg/kg)
Maus subkutan 2700
Ratte intraperitoneal 1000-2000
Ratte oral 4000
Somit sind die Purinverbindungen der Formel (I) und der nicht toxischen Salze als therapeutische Mittel für die Behandlung von Arteriosklerose besonders wertvoll.
Die Purinverbindungen der Formel (I) und deren nicht toxischen Salze sind gegenüber Hitze und Licht beständig und lassen sich in konventioneller Weise verabreichen, wobei man die üblichen Arten von Einheitsdosierungen verwenden oder die üblichen pharmazeutischen Trägerstoffe zusetzen kann, um eine hypocholesterinämische Wirkung beim Menschen zu bewirken. So können sie in Form von pharmazeutischen Präparaten verwendet werden, welchen ein pharmazeutisches, organisches oder anorganisches Trägermaterial zugegeben wird, das für die enterale oder parenterale Applikation geeignet ist. Die orale Verabreichung durch Verwendung von Tabletten, Kapseln oder in flüssiger Form, wie z.B. Suspensionen, Lösungen oder Emulsionen oder aber die Injektionsapplikation sind besonders vorteilhaft.
Wünscht man Tabletten herzustellen, so kann man die üblichen Bindemittel und desintegrierende Mittel, wie sie bei den therapeutischen Einheitsdosierungen verwendet werden können, zusetzen. Solche Bindemittel sind beispielsweise Glucose, Lactose, Gummi arabicum, Gelatine, Mannitol, Stärkepaste, Magnesiumtrisilikat und Talk. Beispiele von desintegrierenden Mitteln sind Kornstärke, Keratin, kolloidales Siliciumdioxyd und Kartoffelstärke. Sollen sie als Flüssigkeiten verabreicht werden, so kann man die üblichen Flüssigkeitsträger zusetzen.
Die Dosierung bzw. die therapeutisch wirksame Menge an Purinverbindungen der Formel I und deren Salzen für den Menschen kann innerhalb grosser Grenzen schwanken und kann somit zwischen ca. 10 bis 1000 mg pro Tag für Erwachsene liegen. Der obere Grenzwert ist lediglich für das Ausmass der erwünschten Wirkung und durch die wirtschaftlichen Überlegungen begrenzt. Für die orale Verabreichung wird man ca. 5 bis 30 mg Wirksubstanz pro Einheitsdosierung verwenden. Bei Injektionen kann die Wirksubstanz in einer Menge von 1 bis 10 mg pro Einheitsdosierung Verwendung finden.
Selbstverständlich kann die Dosierung des zu verwendenden besonderen therapeutischen Mittels sehr stark schwanken, was vor allem durch das Alter des Patienten und das Ausmass der gewünschten therapeutischen Wirkung abhängen wird. Unter der Bezeichnung pharmazeutisches Trägermittel sollen nicht therapeutische Materialien verstanden sein, welche üblicherweise mit Einheitsdosierungen Verwendung finden und aus Füllstoffen, Verdünnungsmitteln, Bindemitteln, Schmiermitteln, desintegrierenden Mitteln und Lösungsmitteln bestehen.
Selbstverständlich ist es möglich, die neuen therapeutischen Materialien, d.h. die reinen Verbindungen, ohne irgendwelches pharmazeutisches Trägermaterial zu verabreichen.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele erläutert.
Beispiele
1) 400 mg Triäthylamin und 250 mg Formamidinacetat werden einer Suspension von 500 mg 4-(5,6-Diamino-4-pyri midinylamino)-4-desoxy-2,3-O-isopropyliden-D-erythron säure in 10 cm3 Methylcellosolve zugesetzt. Das Gemisch wird während 20 Minuten unter Rückfluss erhitzt. Dann wird das Lösungsmittel vom Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck abgetrennt. Der Rückstand wird in Wasser gelöst und die wässrige Lösung mittels verdünnter Salzsäure beim pH Wert von 3 eingestellt Die ausgefällten Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und mit Wasser gewaschen, wobei man 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-Oisopropyliden-D-erythronsäure (250 mg) erhält. Schmelzpunkt 2140C (umkristallisiert aus Wasser).
2) Eine Lösung von 4-(5,6-Diamino-4-pyrimidinylamino)4-desoxy-2,3-O-isopropyliden-D-erythronsäure (200 mg) in einer Mischung von 1 cm3 98 %Der Ameisensäure und 1 cm3 Formamid wird während 30 Minuten unter Rückfluss erhitzt.
Zu diesem Reaktionsgemisch gibt man Äthanol hinzu und sammelt die ausgefällten Kristalle durch Filtrieren. Diese Kristalle werden in Wasser gelöst, worauf die wässrige Lösung mit Kohlepulver behandelt und filtriert wird. Das Filtrat wird kondensiert und Methanol dem Rückstand zugegeben. Die ausgefällten Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und mit Methanol gewaschen, wobei man 40 mg 4-(6-Aminopurin9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (40 mg-) erhält. Schmelzpunkt 279OC (unter Zersetzung).
[a]D5 = +30 (C = 0,93, Dimethylsulfoxyd); UV-Spektrum: XHZO 261 mF (e = 14.700).
Die erhaltene 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure wird mit der neuerdings aus Lentinus edodes isolierten Substanz in folgender Weise identifiziert:
Lentinus edodes (10 kg) werden verrieben und mit 20 Liter 80 %igem wässrigem Methanol versetzt. Das Gemisch wird während 3 Stunden unter Rückfluss extrahiert, um die Wirksubstanz zu gewinnen. Diese Arbeitsweise wird zweimal wiederholt. Die so erhaltenen Extrakte werden miteinander vereinigt, unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 6 Liter eingeengt und dann mit Äther versetzt. Nach hinreichendem Schütteln der ätherischen Lösung wird die wässrige Schicht abgetrennt. Die wässrige Schicht wird mit Wasser und zwar mit 20 Liter verdünnt und hierauf durch ein stark saures Ionen aus tauschharz H-Typus Amerlite IR-120 (Handelsmarke) geführt.
Das Harz wird mit Wasser gewaschen und hierauf mit 2%igem Ammoniakwasser eluiert. Das Eluat wird unter vermindertem Druck eingeengt und lyophylisiert, wobei man 60 g eines braunen Pulvers erhält. Das Pulver wird in 400 cm3 Wasser gelöst und die Lösung durch ein stark saures Ionenaustauschharz [H-Typus, Dowex 50X2 (Handelsmarke)] geleitet.
Das Harz wird mit Wasser gewaschen und hierauf stufenweise mit ln-Salzsäure- bis 4n-Salzsäurelösung eluiert. Die Fraktionen, welche ein Maximum bei 260 mF im UV-Spektrum erweisen, werden miteinander vereinigt und lyophylisiert, wobei man ein weisses Pulver erhält. Das Pulver wird in Wasser gelöst und die Lösung erneut durch ein stark saures Ionenaustauschharz [H-Typus, Dowex 50X2 (Handelsmarke)] geführt. Das Harz wird mit Wasser gewaschen und dann stufenweise mit ln-Salzsäure bis 4n-Salzsäure eluiert. Die Fraktionen, welche ein Maximum bei 260 my im UV-Spektrum ergeben, werden vereinigt und lyophylisiert, wobei man ein weisses Pulver erhält. Das Pulver wird in Wasser gelöst und die Lösung erneut durch ein stark saures Ionenaustauschharz [H Typus, Dowex 50X2 (Handelsmarke)] geleitet.
Das Harz wird mit 2 %igem Ammoniakwasser eluiert und das Eluat lyophyli siert, wobei man ein gelblich-weisses Pulver erhält. Dieses Pulver wird in 0,1 Mol Pyridinacetatpufferlösung gelöst. Diese Lösung wird durch ein mit einer 0,1 Mol Pyridinacetatpufferlösung vorbehandeltes, stark saures Ionenaustauschharz geleitet. Das Harz wird hierauf mit 0,1 Mol Pyridinacetatpufferlösung eluiert. Das Eluat wird in Fraktionen von jeweils 25 cm3 geteilt. Die Fraktionen, welche ein Maximum bei 260 mit im UV-Absorptionsspektrum aufweisen, werden miteinander vereinigt und lyophylisiert, wobei man rohe Kristalle erhält, welche nach dem Umkristallisieren aus Wasser ungefähr
250 mg reine Kristalle vom Schmelzpunkt 279 C (unter Zer setzung) liefern.
3) Die erhaltene 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (3,80 g) wird in ln-Natriumhydroxydlösung (17 cm3) gelöst, auf 40eC erwärmt und filtriert. Dann gibt man dem Filtrat tropfenweise 30 cm3 Äthanol hinzu. Die ausgefällten Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und mit Äthanol gewaschen, wobei man Natrium-4-(6-aminopurin-9-yl)-4- desoxy-D-erythronat (3,40 g), Schmelzpunkt 272 C (unter Zersetzung) erhält.
W-Spektrum: #maxH2O 261 mp (E = 14.700).
4) 500 mg der erhaltenen 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy D-erythronsäure werden in 10 cm3 ln-Salzsäure gelöst. Die Lösung wird unter vermindertem Druck kondensiert. Dann gibt man dem öligen Rückstand Äthanol hinzu und lässt das Gemisch stehen. Die ausgeschiedenen Kristalle werden gesammelt und mit Äthanol gewaschen, wobei man 380 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-Derythronsäure-chlorhydrat vom Smp. 198-2010C erhält.
5) 500 mg der erhaltenen 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy- D-erythronsäure werden in 50 cm3 30%igem Ammoniakwasser gelöst. Dann wird die Lösung unter vermindertem Druck eingeengt und das Konzentrat in Äthanol gelöst. Die Lösung wird stehengelassen, wobei sich Kristalle ausscheiden, welche man mit Äthanol wäscht. Auf diese Weise erhält man 340 mg Ammonium-4-(6-aminopurin-9-yl)-4- desoxy-D-erythronat vom Smp. 2652670C (unter Zersetzung).
6) Zu einer Suspension von 4-(5-Amino-6-chlor-4-pyrimidinylamino)-4-desoxy-2,3-O-isopropyliden-D-erythronsäure (810 mg) in 25 cm3 Triäthylorthoformiat gibt man tropfenweise 0,36 cm3 konz. Salzsäure. Das Gemisch wird während 3 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck kondensiert und der Rückstand in Dichlormethan gelöst. Die unlösliche Substanz wird abfiltriert, das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand in Isopropyläther gelöst.
Durch Reiben des inneren Reaktionsgefässes werden Kristalle ausgefällt, die man durch Filtrieren sammelt. Auf diese Weise erhält man 4-(6-Chlorpurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- isopropyliden-D-erythronsäure (640 mg. Ausbeute: 76%. Schmelzpunkt 1500C [unter Zersetzung], umkristallisiert aus Isopropyläther).
[a]25 = +51,60 (C = 0,835, Methanol).
7) Zu einer Suspension von 6,76 g 4-(5-Amino-6-chlor4-pyrimidinylamino)-4-desoxy-D-erythronsäure in 200 cm3 Triäthylorthoformiat, gibt man 3 cm3 konz. Salzsäure hinzu.
Das Gemisch wird während 24 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Dann wird das Reaktionsgemisch, aus welchem eine unlösliche Substanz entfernt worden ist, unter vermindertem Druck kondensiert. Der Rückstand wird mit Äthylacetat versetzt und die unlöslichen Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, wobei man 4-(6-Chlorpurin-9-yl)-4-desoxy-D- erythronsäure erhält. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck kondensiert und der Rückstand mit Äthylacetat versetzt. Eine unlösliche Substanz wird durch Filtrieren gesammelt und liefert das gleiche, erwünschte Produkt. Die Gesamtausbeute beträgt 6,71 g. Diese Substanz wird aus Isopropanol umkristallisiert, wobei das Isopropanol-Addukt gebildet wird.
Schmelzpurikt llO"C (Zersetzung). [a]D5 = + 34" (C = 0,541, Dimethylsulfoxyd). UVSpektrum: #max0.1NHCl 265 nill (e-= 9.000);
4, 266 mll (e = 800); uNNaOH 265 m|l (E (e = 9.200).
8) Zu einer Lösung von 4-(5,6-Diamino-4-pyrimidinyl- amino)-4-desoxy-2,3-O-isopropyliden-D-erythronsäure (960 mg) in einer Äthanollösung (20 cm3) vom metallischen Natrium (180 mg) gibt man 1 cm3 Schwefelkohlenstoff hinzu.
Das Gemisch wird dann während 4 Stunden unter Rückfluss erhitzt. Aus dem Reaktionsgemisch entfernt man das Äthanol -unter vermindertem Druck. Eine kleine Menge Wasser wird dem Rückstand zugegeben. Die wässrige Lösung wird mittels verdünnter Salzsäure auf einen pH-Wert von 3 eingestellt. Die ausgefällten Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und mit Methanol gewaschen, wobei man 4-(6-Amino-8-mercapto-9H-purin-9-yl)-desoxy-2,3 -O- isopropyliden-D-erythronsäure (650 mg) erhält. Schmelzpunkt 203C (Zersetzung).
9) Eine Lösung von 1,0 g 4-(5-Amino-6-chlor-4-pyrimi-- dinylamino)-4-desoxy-D-erythronsäure in 10 cm3 90%iger Ameisensäure wird unter Rückfluss zum Sieden erhitzt. Das Lösungsmittel wird aus dem Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird aus Isopropanol und hierauf aus Äthanol umkristallisiert, wobei man 760 mg 4-(6-Hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure erhält. Diese Substanz besitzt einen Schmelzpunkt von ungefähr 1850C.
10) Eine Mischung von Q,27 g 4-(5,6-Diamino-4-pyrimi dinylamino)-4-desoxy--D -erythronsäuremethylester in 2 cm3 Formamid wird während 20 Minuten auf dem Ölbad auf
1600C erhitzt. Das Formamid wird aus dem Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird in 20 cm Methanol unter Erhitzen gelöst und die Lösung mit Kohlepulver behandelt und filtriert. Das Methanol wird durch Filtrieren unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit einer kleinen Menge Methanol gewaschen. Auf diese Weise erhält man 0,10 g des 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D- erythronsäuremethyl-esters vom Smp. 2310C (unter Zersetzung).
11) Zu einer Lösung von 400 mg 5-(5,6--Diamino-4-pyrimi- dinylamino)-4-desoxy-D-erythronsäureäthylester in 5 cm3 Methylcellosolve gibt man 160 mg Formamidinacetat hinzu und erhitzt das Gemisch während 20 Minuten auf 1400C. Das Lösungsmittel wird durch Filtrieren entfernt und der Rückstand in 20 cm einer 50%igen Äthanollösung gelöst.
Die Lösung wird mit 2,0 g eines schwach basischen Ionenaus tauschharzes, nämlich Amberlite IR-45 (Warenzeichen), versetzt und das Gemisch während ungefähr einer Stunde gerührt und hierauf filtriert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingeengt und der Rückstand mit ein wenig Äthanol versetzt und dann stehengelassen. Die ausgeschiedenen Kristalle werden gesammelt und mit Äthanol gewaschen, wobei man 110 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D- erythronsäureäthylester vom Smp. 1600C erhält.
12) Durch Erhitzen von 4-(5,6-Diamino-4-pyrimidinylamino)-2-hydroxybuttersäure-methylester in Gegenwart von Formamid erhält man 4-(6-Aminopurin-9-yl)-2-hydroxybut- -tersäure-methylester vom Smp. 16Q,5-161,50C.
In ähnlicher Weise gelangt man zu den folgenden Verbindungen: Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat (Schmelzpunkt 2310C [Zersetzung]); thyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat (Schmelzpunkt 159-1600C [Zersetzung]);
4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronamid (Schmelzpunkt 264-268aC [Zersetzung]);
4-(6-Amino-8-methylpurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 281 C [Zersetzung]);
4-(6-Amino-8-mercaptopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 265-268 C [Zersetzung]);
Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O isopropyliden-D-erythronat (Schmelzpunkt 180-18 1oC); 4-(6-Aminopurin-9 -yl)-4-desoxy-2 ,3-0- benzyliden-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 198-199 [Zersetzung]);
;
4-(2-Amino-6-hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 233 C [Zersetzung]);
4-(6-Hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronamid (Schmelzpunkt 247 C [Zersetzung]);
4-(6-Äthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 242-243 C [Zersetzung]);
4-(6-Diäthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-eryhtronsäure (Hydrochlorid;
Schmelzpunkt 187 C [Zersetzung]);
4-(6-Hydroxyaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-eryhtronsäure (Schmelzpukt 206,5 C [Zersetzung]); 4-(6-Benzylaminopurin-9-yl)-$desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 206-206,5 C [Zersetzung]);
4-(6-Aminoputrin-9-yl-4-desoxy-L-erythronsäure (Schmelzpunkt 291-2930C [Zersetzung]); Älkyl-4-(6-hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat (Schmelzpunkt 2 12 [Zersetzung]); 4-(6-Methylthiopurin-9 -yl)-4-desoxy-D -erythronsäure (Schmelzpunkt 850C, geht bei 90 C in ein Öl über und zersetzt sich bei 2600C);
4-(Purin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 230 C [Zersetzung]);
N-Äthyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O isopropyliden-D-erythronamid (Schmelzpunkt 178-179 C [Zersetzung]);
;
N-Äthyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronamid (Schmelzpunkt 166-168 C [Zersetzung]);
N,N-Diäthyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronamid (Schmelzpunkt 192-1 930C [Zersetzung]); 4-(6-Äthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy 2,3-O-isopropyliden-D-erythronsäure ; -4-(6-Methoxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure [Natriumsalz;
dehnt sich bei 168-1700C und färbt sich bei
220-230 C ohne Vesikation);
4-(2,6-Dihydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 2042060C [Zersetzung]);
4-(2-Methyl-6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure;
4-(6-Butyrylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure;
4-(6,8-Dihydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure; 4-(2,6-Diaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure;
4-(6,8-Diaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure;
4-(2-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure;
4-(8-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure;
4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O isopropylidon-D-threonsäure (Schmelzpunkt 2230C [Zersetzung]); 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D- threonsäuremethylester (Schmelzpunkt 211-2120C Zersetzun etc.
13) Eine Lösung von 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy2,3-O-isopropyliden-D-erythronsäure (150 mg) wird in 3 cm 10%iger Ameisensäure auf einem Wasserbad während 30 Minuten erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck eingeengt und dann mit Wasser versetzt. Die aus- geschiedenen Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und hierauf getrocknet, wobei man Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (130 mg) erhält.
Schmelzpunkt 279 C (Zersetzung).
14) 4-(6-Amino-8-methylpurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-Oisopropyliden-D-erythronsäure (400 mg) wird in 10 cm 20%iger Essigsäure unter Erhitzen gelöst. Die Lösung wird während 30 Minuten unter Rückfluss erhitzt, hierauf mit Kohle behandelt und dann filtriert. Das Filtrat wird abkühlen gelassen, worauf man die ausgeschiedenen Kristalle durch Filtrieren sammelt und sie mit Wasser wäscht. Auf diese Weise erhält man Kristalle und zwar (232 mg) von 4-(6-Amino-8methylpurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure. Schmelzpunkt 281 C (Zersetzung) (umkristallisiert aus Wasser).
UV-Spektrum: man 263 m # (E = 14.300).
15) 6-Amino-9-(3-carboxy-2,3-O-isopropylidendihydroxypropyl)-purin-1-oxyd (300 mg) wird in 10 cm 10%iger Essigsäure suspendiert. Die Suspension wird während 30 Minuten unter Rückfluss erhitzt. Dann wird eine kleine Menge Kohle in Pulverform dem Reaktionsgemisch zugegeben und das Ganze filtriert. Das Filtrat wirt unter vermindertem Druck eigeengt.
Die ausgeschiedenen Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und aus Wasser umkristallisiert, wobei man 6-Amino-9-(3-carboxy-2,3dihydroxypropyl)-purin-1-oxyd (165 mg) erhält. Schmelzpunkt 275 C (Zersetzung).
16) Eine Suspension von 4-(6-Amino-8-mercaptopurin- 9-yl)-4-desoxy-2,3 -O-isopropyliden -D-erythronsäure (300 mg) in 20 cm 10%iger Essigsäure wird während 2 Stunden unter Rückfluss erhitz. Das Reaktionsgemisch wird mit Kohlenpulver behandelt und in noch heissem Zustande filtriert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingeengt und der Rückstand mit Wasser versetzt. Die ausgeschiedenen Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und mit Methanol gewaschen, wobei man 4-(6-Amino-8-mercaptopurin-9-yl)-4-desoxy-D- erythronsäure (220 mg) erhält. Schmelzpunkt 265-2680C (Zersetzung).
UV-Spektrum: #maxH2O 240 m (# = 19.000), Xm2= 288 mit (e = 25.500).
h, 306 mit (± = 27.300).
17) Ein Gemisch von 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy2,3-O-benzyliden-D-erythronsäure (1,00 g) und 30 cm3
10%ige Essigsäure wird unter Rückfluss während 1 Stunde erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird mit Kohlepulver behandelt und filtriert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand mit Methanol gewaschen, wobei man rohe Kristalle in einer Menge von 285 mg erhält. Es handelt sich um 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure vom Schmelzpunkt 2790C (Zersetzung) (umkristallisiert aus Wasser in noch heissem Zustande bei Behandlung mit Kohlepulver).
UV-Spektrum: kH20 263 .
18) 180 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-Odiacetyl-D-erythronsäure in 5 cm3 ln-Natriumhydroxydlösung werden bei Zimmertemperatur während einer Stunde gerührt.
Das Reaktionsgemisch wird hierauf mittels 5 cm3 ln-Salzsäure neutralisiert und auf ungefähr die Hälfte des Volumens unter vermindertem Druck eingeengt. Die ausgeschiedenen Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und mit Methanol gewaschen, wobei man 95 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-Derythronsäure vom Schmelzpunkt 2790C (unter Zersetzung) erhält.
19) 0,70 g 4-(6-Äthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- isopropyliden-D-erythronsäure in 50 cm3 10Nsiger Essigsäure werden während 30 Minuten unter Rückfluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck eingeengt und auf einem Ionenaustauschharz, nämlich ( Amberlite IRA400 [Warenzeichen]), adsorbiert. Das Harz wird mit einer 0,05 n-Essigsäurelösung gewaschen und mit 0,5n-Essigsäure eluiert. Das Eluat wird unter vermindertem Druck eingeengt, wobei man 0,56 g 4-(6-Äthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D- erythronsäure vom Schmelzpunkt 242-2430C (unter Zersetzung) (umkristallisiert aus Äthanol) erhält.
20) 200 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0- isopropyliden-D-erythronsäuremethylester in 5 cm3 Ameisensäure werden wie in Beispiel 13 behandelt, wobei man 110 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure vom Schmelzpunkt 2790C (unter Zersetzung) erhält.
21) Zu einer Suspension von 200 mg 4-(6-Aminopurin 9-yl)-4-desoxy-2,3-0-isopropyliden-D-erythronsäuremethyl - ester in 20 cm3 Methanol gibt man 0,5 cm3 konz. Salzsäure hinzu und lässt das Gemisch bei Zimmertemperatur während 65 Stunden stehen. Das Reaktionsgemisch wird hierauf zu einer Suspension eines schwach basischen Ionenaustauschharzes, nämlich 4,0 g Amberlite IR-45 (Warenzeichen), in 20 cm3 50%igem Methanol hinzugegeben und das Gemisch während 30 Minuten gerührt und filtriert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingeengt und die ausgefällten Kristalle werden gesammelt und mit Methanol gewaschen, wobei man 160 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy- D-erythronsäuremethylester vom Schmelzpunkt 2310C (unter Zersetzung) erhält.
22) 450 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O- isopropyliden-D-threonsäure in 30 cm3 20 %iger Essigsäure werden während 2 Stunden unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Kühlen werden die ausgeschiedenen Kristalle gesammelt und mit Wasser und Aceton gewaschen, wobei man 350 mg 4-(6 Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-threonsäure vom Schmelzpunkt 297cm (unter Zersetzung) erhält.
In ähnlicher Weise erhält man die folgenden Verbindungen: 4-(2-Methylthio-6-aminopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 2490C [Zersetzung]); 4-(6-Amino-8-mercaptopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 265-2680C [Zersetzung]; 4-(2-Hydroxy-6-aminopurin-9-yl)- 4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt oberhalb von 3000C [Zersetzung]); 4-(6-Hydroxypurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure (sintert bei ca. 85C, dehnt sich bei 100-105oC aus und schmilzt bei ca. 185cm); 4-(2-Amino-6-hydroxypurin-9-yl)- 4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 2330C [Zersetzung]);
4-(6-Chlorpurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (schmilzt bei 85 C, erstarrt bei 90 C und zersetzt sich hierauf bei 2600C, Isopropanol-Addukt; Schmelzpunkt 110oC [Zersetzung]); 4-(6-Äthylaminopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 242-2430C [Zersetzung]); 4-(6-Diäthylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (Hydrochlorid;
Schmelzpunkt 1870C [Zersetzung]); 4-(6-Hydroxyaminopurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 206,50C [Zersetzung]); 4-(6-Benzylaminopurin-9-yl) 4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 206-206,5 C [Zersetzung]); 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-L-threonsäure (Schmelzpunkt 291-2930C [Zersetzung]); 4-(6-Mercaptopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 2400C [Zersetzung]);
4-(6-Methylthiopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (sintert bei 1140C, verfärbt sich bei ca. 2200C und zersetzt sich hierauf allmählich); 4-(Purin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 2300C [Zersetzung]); N-Äthyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronamid (Schmelzpunkt 166-1680C [Zersetzung]); 4-(6-Amino-8-hydroxypurin-9-yl)4-desoxy-D-erythronsäure (Schmelzpunkt 215-217C [Zersetzung]); etc.
23) 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (45 mg) wird in 1 cm3 Pyridin suspendiert. Dann versetzt man die Suspension mit 0,5 cm3 wasserfreier Essigsäure und lässt das Gemisch während 4 Stunden stehen. Das Reaktionsgemisch wird in Eiswasser gegossen und unter vermindertem Druck eingeengt. Die ausgefällten Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und aus einer Mischung von Methanol und Wasser umkristallisiert, wobei man 32 mg Nadeln, bestehend aus 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-0 diacetyl-D-erythronsäure, erhält. Schmelzpunkt 250ob (Zersetzung).
24) Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat (300 mg) wird in 6 cm3 Pyridin suspendiert. Dann versetzt man die Suspension mit 3 cm3 wasserfreier Essigsäure und rührt das Gemisch während 6 Stunden bei Zimmertemperatur.
Das Reaktionsgemisch wird in Eiswasser gegossen und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Chloroform wird unter vermindertem Druck verdampft, wobei man rohe Kristalle erhält, die man mit Methanol wäscht und aus Methanol umkristallisiert. Auf diese Weise erhält man Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)- 4-desoxy-2,3-di-O-acetyl-D-erythronat (290 mg) vom Schmelzpunkt 2280C (Zersetzung).
25) 5 cm3 wasserfreie Essigsäure wird einer Lösung von Athyl-4-(6-hydroxypurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat (500 mg) in Pyridin (10 cm3) zugegeben. Das Gemisch wird während 8 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt, dann in 50 cm3 Eiswasser gegossen und mit Chloroform extrahiert. Die Chloroformschicht wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingeengt. Der Äther wird dem Rückstand zugegeben und die Wände des Reaktionsgefässes werden angerieben, wobei Kristalle anfallen. Diese Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit Äther gewaschen und aus Äthanol umkristallisiert, wobei man Äthyl-4-(6-hydroxypurin-9-yl) 4-desoxy-2,3-0-diacetyl-D-erythronat (530 mg) erhält. Schmelzpunkt 188,5-189 C (Zersetzung).
UV-Spektrum: kH20 250 mit
26) Benzoylchlorid (2,80 g) wird einer Suspension von Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronat (1,06 g) in Pyridin (60 cm3) unter Kühlen mit Eis zugegeben.
Das Gemisch wird während 15 Stunden gerührt, in Eiswasser gegossen und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und das Chloroform unter vermindertem Druck verdampft. Der Rückstand wird der Kolonnenchromatographie unterworfen, wobei man neutrales Aluminiumoxyd (20 g) verwendet. Dabei erhält man aus der mit Benzol und Chloroform eluierten Fraktion eine gummiartige Substanz, die man in 30 cm3 Pyridin löst. Diese Lösung wird mit 30 cm3 2n-Natriumhydroxyd versetzt. Das Gemisch wird während 1*l/2 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und durch eine Kolonne geleitet, welche mit einem Ionenaustauschhart [H-Typus, Dowex 50 (Warenzeichen)] (30 cm3) beschickt ist. Das Ionenaustauschharz wird mit 50%igem Pyridin (50 cm3) gewaschen. Die anfallenden Flüssigkeiten werden miteinander vereinigt und eingeengt.
Der Rückstand wird in Methanol gelöst, mit Kohlepulver behandelt und stehengelassen, wobei man 530 mg Kristalle erhält, welche aus 4-(6-Benzoylaminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure vom Schmelzpunkt 232-2350C
27) 500 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure-äthylester werden in 10 ml Pyridin suspendiert und der Suspension 5 ml wasserfreie Propionsäure zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird während 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, darauf in Eiswasser gegossen und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit einer verdünnten wässrigen Natriumhydrogencarbonatlösung und dann mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Chloroform wird unter vermindertem Druck abdestilliert.
Der Rückstand wird mit Äther auf dem Filter gewaschen und ergibt 400 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-di-0propionyl-D-erythronsäure-äthylester; Schmelzpunkt 122-123 C.
28) 500 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure-äthylester werden in 5 ml Pyridin suspendiert und der Suspension 1 ml wasserfreie Buttersäure zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird während 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und auf dieselbe Weise wie in Beispiel 10-(E) behandelt. Man erhält 520 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-di-O- butyryl-D-erythronsäure-äthylester vom Schmelzpunkt 104-1050C.
29) 5 ml wasserfreie Essigsäure werden einer Suspension von 2,0 g 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure äthylester in 20 ml Pyridin zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird während 5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, darauf in Eiswasser gegossen und mit Chloroform extrahiert. Die Chloroformschicht wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Man erhält 1,40 g 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-di-0- acetyl-D-erythronsäureäthylester vom Schmelzpunkt 200ob.
30) Man gibt 0,25 g 4-(6-Aminopurin-9-yl)-2(R)-2hydroxybuttersäure-methylester, 0,13 g Essigsäureanhydrid und 5 ml Pyridin zusammen und rührt das Gemisch während 3 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird eingeengt und die verbleibenden Kristalle aus Methanol umkristallisiert; man erhält 0,20 g 4-(6-Aminopurin-9-yl)-2(R)-2acetoxybuttersäure-methylester vom Schmelzpunkt 177-1780C.
31) 4-(6-Chlorpurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (1,89 g) wird mit 530 mg Thioharnstoff in 70 cm3 Äthanol während 3 Stunden unter Rückfluss umgesetzt. Dann versetzt man das Reaktionsgemisch mit 1n-Natriumhydroxydlösung (15 cm3) und 10 cm3 Wasser und erhitzt während 1 Stunde.
Das Äthanol wird hierauf abdestilliert und der Rückstand mittels Salzsäure auf einen pH-Wert von 1 eingestellt. Die ausgeschiedenen Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und das Wasser umkristallisiert, wobei man 4-(6-Mercaptopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (860 mg) erhält. Schmelzpunkt 240 C (Zersetzung).
W-Spektrum: ANt0X226,5 mitte = 9.400), 322 m,u'(X=25.900);
Xmax 225 mit (± = 10100), 324 mit (E =22.200); ONNaOH 232,5 mit (E = 14.300), 310,5 mit (E =22.400).
4-(6-Mercaptopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (1,39 g) wird in 0,1n-Natriumhydroxydlösung (100 cm3) gelöst und die Lösung hierauf mit 0,4 cm3 Methyljodid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird während 4 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und eingeengt. Das Konzentrat wird mittels Salzsäure auf einen pH-Wert von 1 eingestellt und hierauf zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit heissem Methanol extrahiert und die so erhaltenen rohen Kristalle werden aus Methanol umkristallisiert, wobei man Methylthiopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (1,22 g) erhält. Schmelzpunkt 210ob (Zersetzung).
UV-Spektrum: kN2a 221 mit (E = 11.300), 287 mit (E = 17.500), 293 mit (E = 17.400); 222,5 mit (E = 10.500), 295,5 mit (± = 15.700); ),0lNNaOH 223 mit (E = 10.600), 287 mit (E = 17.100), 293 mit (E =17.000).
32) Eine Suspension von Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)4-desoxy-2,3-O-diacetyl-D-erythronat (100 mg) in 2 cm3 einer ln-Natriumhydroxydlösung wird während 3 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mittels Salzsäure auf einen pH-Wert von 3 bis 4 eingestellt. Die ausgeschiedenen Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und hierauf getrocknet, wobei man 4-(6 Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure (44 mg) erhält.
Schmelzpunkt 279OC (Zersetzung).
33) 300 mg Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-Derythronat werden in 5 cm3 Methanol und 5 cm3 ln-Natrium- hydroxydlösung gelöst. Die Lösung wird während einer Stunde bei Zimmertemperatur gerührt und unter vermindertem Druck eingeengt. Dann wird der Rückstand mit 5 cm3 ln-Salzsäure versetzt. Die ausgefällten Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt und mit Methanol gewaschen, wobei man 220 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-D-erythronsäure vom Schmelzpunkt 279OC (unter Zersetzung) erhält.
34) 500 mg Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2, isopropyliden-D-erythronat in einer Mischung von 10 cm3 Methanol und 5 cm3 ln-Natriumhydroxyd werden wie in Beispiel 33 behandelt, wobei man 470 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3-O- isopropyliden-D-erythronsäure vom Schmelzpunkt 2290C (unter Zersetzung) erhält.
35) 200 mg Methyl-4-(6-aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2, isopropyliden-D-threonat in einer Mischung von 4 cm3 Methanol und 2 cm3 ln-Natriumhydroxydlösung werden wie in Beispiel 33 behandelt, wobei man 105 mg 4-(6-Aminopurin-9-yl)-4-desoxy-2,3 -O- isopropyliden-D-threonsäure vom Schmelzpunkt 223OC (unter Zersetzung) erhält.
The present invention relates to a process for the preparation of new purine derivatives, the definition low or low as used in connection with the radicals which differ from alkanes, e.g.
Derive alkyl radicals or alkylene radicals, represent those radicals which contain 1 to 8 carbon atoms, unless otherwise stated.
The purine derivatives obtainable according to the invention correspond to the following formula:
EMI1.1
wherein Rl is hydrogen, halogen (e.g. chlorine, bromine, iodine, fluorine), hydroxyl, mercapto, lower alkoxy (e.g. methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy), aryl (lower) alkoxy, e.g. Phenyl (lower) alkoxy (e.g. benzyloxy, phenethyloxy), lower alkylthio (e.g. methylthio, ethylthio, propylthio), amino, lower alkylamino (e.g. methylamino, ethylamino, propylamino), di (lower) alkylamino (e.g. dimethylamino , Diethylamino, methylethylamino), aryl (lower) alkylamino, e.g.
Phenyl (lower) alkylamino (e.g. benzylamino, phenethylamino) or hydroxyamino; R2 hydrogen, halogen (e.g.
Chlorine, bromine, iodine, fluorine), hydroxyl, mercapto, amino, lower-alkyl (e.g. methyl, ethyl, propyl, isopropyl), aryl, e.g.
Phenyl, lower alkoxy (e.g. methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy), aryl (lower) alkoxy, e.g. B. phenyl- (lower) -alkoxy (e.g. benzyloxy, phenethyloxy) or lower-alkylthio (e.g.
Methylthio, ethyltnio, propylthio); R3 represents a hydrogen atom, a mercapto group or an amino group; R4 is an alkylene radical having 2 to 6 carbon atoms (e.g. ethylene, trimethylene, propylene) which is substituted by one or more hydroxyl radicals, but with no hydroxyl groups attached to the carbon atom adjacent to the ring nitrogen atom, these hydroxyl groups being individually replaced by acyl radicals, e.g. lower alkanoyl (e.g. acetyl, propionyl) or benzoyl, lower alkyl radicals (e.g. methyl, ethyl, propyl, isopropyl) or aryl (lower) alkyl radicals, e.g. Phenyl (lower) alkyl (e.g. benzyl, phenethyl), or two each together by lower alkylidene (e.g. ethylidene, propylidene, isopropylidene) or aryl (lower) alkylidene, e.g. Phenyl (lower) alkylidene (e.g.
Benzylidene), and Rs hydroxyl, lower or higher alkoxy radicals (e.g. methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, octyloxy, decyloxy, heptadecyloxy), amino, (lower) -alkylamino (e.g. methylamino, ethylamino, propylamino) or di- ( lower) -alkylamino (e.g. dimethylamino, diethylamino, methylethylamino) mean. The invention also relates to the preparation of salts of these compounds, e.g. of metal salts such as sodium salts, potassium salts, calcium salts, ammonium salts, amine salts such as e.g. Dimethylamino salts, trimethylamino salts and acid addition salts, e.g. organic or inorganic acid addition salts, such as, for example, the hydrochlorides, hydrobromides, sulfates, nitrates, phosphates, tartrates, citrates.
Specific examples of purine compounds of formula I are as follows: 4- (purin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 4- (2-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 4 - (8-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, (lower) -alkyl-4- (6- aminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronate (e.g.
Methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate, ethyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate, propyl 4- (6 -aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate, butyl 4- (6-aminopunn-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate), 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronamide, N- (lower) -alkyl-4- (6-aminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronamide (e.g.
N-ethyl-4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronamide), N, N-di- (lower) -alkyl-4- (6-aminopurin-9-yl) 4- deoxy-D-erythronamide (e.g.
N, N-diethyl-4- (6-aminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronamide), 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0- ( lower) -alkylidene-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0-ethylidene-D-erythronic acid, 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0 - isopropylidene-D-erythronic acid), 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0-aryl- (lower) -alkylidene-D-erythronic acid, (e.g.
4- (6-Aminopunn-9-yl) -4-deoxy-2,3-O-benzylidene-D -erythronic acid), (lower) -alkyl-4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy -2,3-0- (lower) -alkylidene-D-erythronate (e.g.
Methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-eryffironate, ethyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2, 3-0-isopropylidene-D-erythronate), N- (lower) -alkyl-4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O- (lower) -alkylidene-D-erythronamide (e.g.
N -ethyl-4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronamide), 4- (6-aminopurin-9-yi) -4-deoxy-2 , 3-O-di- (lower) -alkanoyl-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0diacetyl-D-erythronic acid, 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2, 3-0-dipropionyl- D-erythtonic acid), (lower) -alkyl-4- (6-aminopurin-9-yl3-4-deoxy-2,3-0-di- (lower) -alkanoyl-D-erythronate (e.g.
Methyl 4 (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O-diacetyl-D-erythronate, ethyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3 -0- diacetyl-D-erythronate), 4- (6-amino-8- (lower) -alkylpurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-Amino-8-methylpurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 4- (6-amino-8-ethylpurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid), 4- (6-Amino-8- (lower) -alkylpurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0- (lower) -alkylidene-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-Amino-8-methylpurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid, 4- (6-amino-8-ethylpurin-9-yl) -4 -deoxy-2,3-O- isopropylidene-D-erythronic acid), 4- (6-amino-8-mercaptopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid, 4- (6-amino-8-mercaptopurine- 9-yl) -4-deoxy-2,3-0- (lower) -alkylidene-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-Amino-8-mercaptopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid), 4- (6,8-diaminopurin-9-yl) -4-deoxy -D-erythronic acid, 4- (6-amino-8-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 4- [2- (lower) -alkylthio-6-aminopurin-9-yl 4-deoxy -D-erythronic acid (e.g.
4- (methylthio-6-aminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid, 4- (2-ethylthio-6-aminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid), 4- [2- (lower) -alkyl-6-aminopurin-9-yl] 4-deoxy-D-erythronic acid (e.g.
4- [2-methyl-6-aminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid), 4- (2,6-diaminopurin-9-yl) -4-deox-D-erythronic acid, 4- (2 -Hydroxy-6-aminopurin-9-yl)
4-deoxy-D-erythronic acid,
4- [6- (lower) -alkylaminopurin-9-yl]
4-deoxy-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-methylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid,
4- (6-ethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 4- (6-butylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid,
4- [6- (lower) -Alkylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O (lower) -alkylidene-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-ethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O isopropylidene-D-erythronic acid),
4- [6-di- (lower) -alkylaminopurin-9-yl]
4-deoxy-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-dimethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 4- (6-diethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid,
4- (6-Hydroxyaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid,
4- [6-phenyl- (lower) -alkylaminopurin-9-yl]
4-deoxy-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-Benzylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid,
4- (6-phenethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid),
4- (6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, (lower) -alkyl-4- (6-hydroxypurin-9-yl)
4-deoxy-D-erythronate (e.g.
Methyl 4- (6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate, ethyl 4- (6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate),
4- (6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronamide, (lower) -alkyl-4- (6-hydroxypurin-9-yl)
4-deoxy-2,3-O-di (lower) alkanoyl-D-erythronate (e.g.
Methyl 4- (6-hydroxypurin-9-yl)
4-deoxy-2,3-O-diacetyl-D-erythronate, ethyl-4- (6-hydroxypurin-9-yl)
4-deoxy-2,3-O-diacetyl-D-erythronate), 4- (6,8-dihydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 4- (2,6-dihydroxypurin-9- yl) -4-deoxy-D-erythronic acid,
4- (2-amino-6-hydroxypurin-9-yl)
4-deoxy-D-erythronic acid,
4- (6-halopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-chloropurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid,
4- (6-bromopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid,
4- (6-halopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O- (lower) alkylidene-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-chloropurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0- isopropylidene-D-erythronic acid, 4- (6-bromopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0- isopropylidene-D-erythronic acid),
4- (6-mercaptopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid,
4- [6- (lower) -alkylthiopurin-9-yl]
4-deoxy-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-methylthiopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid.
4- [6-ethylthiopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid), 4- [6- (lower) -alkoxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (e.g.
4- (6-methoxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid), 3- (6-aminopurin-9-yl) -2-hydroxy
3-hydroxymethylpropionic acid,
6-Amino-9- (3-carboxy-2,3-dihydroxypropyl) -purine-1-oxide, 6-Amino-9- (3-carboxy-2,3isopropylideneoxypropyl) -purine-1-oxide, 4- (6 -Aminopurin-9-yl) -4-deoxy-L-threonic acid, etc.
The process according to the invention is characterized in that a pyrimidine compound of the formula:
EMI2.1
in which R1, R2, R4 and Rs have the above meanings, with formic acid or a functional derivative thereof or with a corresponding thiocarbonic acid derivative.
For example, the pyrimidine compound of formula II can be mixed with formic acid or a functional derivative thereof, e.g. Formamide, a lower alkyl formate, N, N-di- (lower) -alkylformamide, (lower) -alkyl orthoformate, lower-alkyl formimidate, sodium dithioformate or formamidine, optionally with heating or treatment with a base. The reaction is generally carried out at a temperature ranging between room temperature and the boiling point of the reaction medium, using a solvent, e.g. Water, methanol or ethanol can be added. If desired, a condensing agent can also be added, e.g. Hydrochloric acid, acetic anhydride, sodium alcoholate or phosphorus oxychloride, depending on the type of reagent.
Any subsequent treatment with a base, such as an alkali metal hydroxide, for example sodium hydroxide or potassium hydroxide, an alkaline earth metal hydroxide, e.g. Calcium hydroxide or magnesium hydroxide, an alkali metal alkoxide, e.g.
Sodium methoxide, potassium methoxide or sodium ethoxide, or with a tertiary amine, e.g. Trimethylamine, triethylamine, N-methylpiperazine or pyridine, is usually carried out in a solvent such as e.g. Water or aqueous alcohol.
Furthermore, for example, a pyrimidine compound of formula II can be mixed with a thiocarbonic acid derivative, e.g.
Thiophosgene, thiourea, sodium xanthate, potassium xanthate, carbon disulfide, dimethylthiocarbonate, diethylthiocarbonate or 1,1 '- (thiocarbonic acid) diimidazole. The reaction is usually carried out in a solvent such as e.g. Water, methanol, ethanol or propanol, at a temperature in the range between room temperature and the boiling point of the reaction medium, if necessary in the presence of a condensing agent, e.g. an alkali metal alkoxide, e.g. Sodium methoxide, sodium ethoxide, potassium ethoxide, or a tertiary amine, e.g. Triethylamine or pyridine.
The pyrimidine compounds of the formula II used as starting materials can be obtained by various methods. For example, 4 (5-amino-6-chloro-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid is obtained by reacting 5-amino-4,6-dichloropyrimidine with 4-amino -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid and by reducing the 4- (6-chloro-5-nitro-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy 2,3-0-isopropylidene-D- erythronic acid. 4- (5,6-Diamino-4pyrimidinylamino) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid is obtained by reacting 6-amino-5-nitro-4chlorpyrimidine with 4-amino-4-deoxy- 2,3-0-isopropylidene
D-erythronic acid and by reducing the 4- (6-amino-5-nitro-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid obtained
receive. 4- (6-Amino-5-nitro-4-pyrimidinylamino)
4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid is made by
Reduction of 4-chloro-5-nitro-6-aminopyrimidine with 4-amino-4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid was obtained.
Ethyl 4- (6-amino-5-nitro-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-2,3-0-dibenzoyl-L-threonate is obtained by reacting 4 chloro-5-nitro-6-aminopyrimidine with ethyl 4-amino-4 deoxy-2,3-0-dibenzoyl-L-threonate was obtained. 4- (5-Formlamido 6-amino-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-D-erythronic acid is obtained by reacting 6-amino-5-nitro-4-chloropyrimidine with 4-amino-4-deoxy-2,3- O-isopropylidene-erythronic acid and reduction of the 4- (6-amino-5-nitro-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid obtained in the presence of formic acid. Other starting materials can be obtained in a similar manner.
One can obtain the purine compounds in which the
Alkylene group R4 carries one or more acylated hydroxyl groups or etherified hydroxyl groups by hydrolysis with an acidic or basic substance in an aqueous one
Convert medium into the corresponding purine compounds in which there is at least one free hydroxyl group.
The acidic substances can be hydrochloric acid, sulfuric acid,
Use formic acid, acetic acid, benzoic acid and the like. Examples of basic substances are sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, potassium carbonate,
Sodium hydroxide, sodium ethoxide, potassium ethoxide, etc. You can also use an acidic or basic ion exchange resin. The reaction usually takes place at a tempera ture between room temperature and the boiling point of the
Reaction medium. In general, the hydrolysis is carried out in the same way by using an acidic or basic one
Substance.
One can also use the purine compound obtained in which
R1 denotes an amino group or the alkylene group R4 has one or more free hydroxyl groups
Conversion of treatment with an acylating agent into a corresponding compound in which R1 is an acylamino group or the hydroxyl groups of the alkylene group R4 are protected by acyl radicals.
Possible acylating agents are: aliphatic carboxylic acids, e.g. Acetic acid, propionic acid, butanoic acid, pentanoic acid, isopentanoic acid, pivalic acid, 2-ethylbutanoic acid, aromatic carboxylic acids, e.g. Benzoic acid, p-bromobenzoic acid, p-nitrobenzoic acid, phenylacetic acid, cinnamic acid, and heterocyclic carboxylic acids, e.g.
Nicotinic acid or isonicotinic acid, as well as their functional derivatives on the carboxyl group, e.g. their acid halides, such as acid chlorides, acid anhydrides, amides, azides and esters (e.g. methyl esters, ethyl esters, cyanomethyl esters, p-nitrophenyl esters, pentachlorophenyl esters, 2,4,5 trichlorophenyl esters, propargyl esters, phenyl thioesters, N-hydroxysuccinimide), usually in a solvent, e.g. Ether, acetone, dioxane, acetonitrile, chloroform, ethylene chloride, tetrahydrofuran, ethyl acetate, pyridine). The reaction takes place with cooling, at room temperature or with heating. If necessary, one can also use a condensing agent such as e.g.
N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, N-cyclohexyl-N'-morpholinoethylcarbodiimide, N-cyclohexyl-N '- (4-diethylaminocyclohexyl) -carbodiimide, N, N'-diethylcarbodiimide, N, N'-diisopropyl-N-ethylcarbodiimide, '- (4-dimethylaminopropyl) carbodiimide.
N, N'-carbonyldiimidazole, N, N'-carbonyldipyrazole, N, N'-carbonyldi- (2-methylimidazole), pentamethylene ketene-N-cyclohexylimine, diphenylketene-N-cyclohexylimine, alkoxyacetylene, 1-alkoxy-1-chloroethylene, 2 -Ethyl-7-hydroxybenzisoxazolium salt, 2-ethyl-5- (m-sulfophenyl) -isoxazolium hydroxide etc.
One can also use a base, e.g. add an alkali metal carbonate, trialkylamine or pyridine.
If the reaction conditions are selected in a suitable manner, it is possible to carry out one or both acylation processes of the hydroxyl group and the amino group.
The mercapto groups present in the 2-, 6- and / or 8-positions can be obtained by reaction with a lower alkyl halide, e.g. Methyl chloride, methyl iodide or ethyl chloride, can be converted into lower alkylthio radicals in the presence of a base.
The above-mentioned purine compounds of formula I can be used in their salts, e.g. be converted into metal salts, ammonium salts, amine salts and acid addition salts in a manner known per se.
The purine compounds of the formula (I) and their salts generally have a pronounced hypocholesterolemic effect. The test results with the standard compound, i.e. with 4- (6-aminopurin-9-yl) -deoxy-D-erythronic acid, are found below.
1. Test method
Groups of rats from the Wistar strain (body weight 74 g on average), which are 5 weeks old, each group consisted of 10 animals, were fed for 3 days with a fatty feed containing 2% cholesterol, 1 Nc cholic acid, 12% hydrogenated oil, 8% fish extract and some other materials, with concomitant administration of the test compound once a day, then left overnight and killed the next morning. The serum cholesterol concentration was measured by the Zak-Henly method. The test compound was administered in an aqueous solution acidified with hydrochloric acid or in the form of an aqueous suspension with carboxymethyl cellulose. For control purposes, thyroxine was administered orally at a dose of 0.05 mg per animal.
2. Test results
Route of Administration Dose Serum Cholesterol Inhibition (mg / rat) mg / dl + S.E.
Intraperitoneally 0.5 337 + 48.8 37.4
Intraperitoneal 0.2 338 + 24.9 37.2
Oral 0.5 249 + 26.6 53.7
Oral 0.2 271 1 28.0 49.6
Thyroxine 0.05 284 1 28.4 47.2
Control 538.1 48.1
Other compounds, e.g.
Methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate, ethyl 4- (6-aminopurin-9 -yl) 4-deoxy-D -erythronate, 4- (6-aminopurine- 9-yl) -4-deoxy-D-erythronamide, 4- (6-benzoylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D -erythronic acid, 4- (6-amino-8-methylpurin-9-yl) -4 -deoxy-D-erythronic acid, 4- (2-amino-6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 4- (6-ethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid , 4- (6-Hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, 6-amino-9- (3-carboxy-2,3-dihydroxypropyl) -purine-1-oxide) and their salts show a similar effect.
Furthermore, the toxicity of the purine compounds of the formula (I) and their salts is extremely low. The acute toxicity of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid in rats and mice is, for example, the following:
Animal Route of Administration LDso (mg / kg)
Mouse subcutaneous 2700
Rat intraperitoneally 1000-2000
Rat oral 4000
Thus, the purine compounds of formula (I) and the non-toxic salts are particularly valuable as therapeutic agents for the treatment of arteriosclerosis.
The purine compounds of formula (I) and their nontoxic salts are resistant to heat and light and can be administered in a conventional manner, using the usual types of unit doses or adding the usual pharmaceutical carriers to produce a hypocholesterolemic effect in humans . They can be used in the form of pharmaceutical preparations to which a pharmaceutical, organic or inorganic carrier material is added which is suitable for enteral or parenteral administration. Oral administration through the use of tablets, capsules or in liquid form, e.g. Suspensions, solutions or emulsions or the injection application are particularly advantageous.
If it is desired to produce tablets, the usual binders and disintegrating agents such as can be used in the therapeutic unit doses can be added. Such binders are, for example, glucose, lactose, gum arabic, gelatin, mannitol, starch paste, magnesium trisilicate and talc. Examples of disintegrating agents are corn starch, keratin, colloidal silicon dioxide, and potato starch. If they are to be administered as liquids, the usual liquid carriers can be added.
The dosage or the therapeutically effective amount of purine compounds of the formula I and their salts for humans can vary within wide limits and can thus be between approx. 10 to 1000 mg per day for adults. The upper limit is only limited to the extent of the desired effect and economic considerations. For oral administration, about 5 to 30 mg of active substance will be used per unit dose. In the case of injections, the active substance can be used in an amount of 1 to 10 mg per unit dose.
Of course, the dosage of the particular therapeutic agent to be used can fluctuate very widely, which will depend primarily on the age of the patient and the extent of the desired therapeutic effect. The term pharmaceutical carrier should not be understood to mean therapeutic materials which are usually used in unit doses and which consist of fillers, diluents, binders, lubricants, disintegrating agents and solvents.
Of course it is possible to use the new therapeutic materials, i. the neat compounds without administering any pharmaceutical carrier material.
The invention is illustrated by the following examples.
Examples
1) 400 mg of triethylamine and 250 mg of formamidine acetate are added to a suspension of 500 mg of 4- (5,6-diamino-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid in 10 cm3 of methyl cellosolve added. The mixture is refluxed for 20 minutes. The solvent is then separated off from the reaction mixture under reduced pressure. The residue is dissolved in water and the aqueous solution is adjusted to pH 3 using dilute hydrochloric acid. The precipitated crystals are collected by filtration and washed with water, whereby 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2 , 3-Oisopropylidene-D-erythronic acid (250 mg) is obtained. Melting point 2140C (recrystallized from water).
2) A solution of 4- (5,6-diamino-4-pyrimidinylamino) 4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid (200 mg) in a mixture of 1 cm3, 98% of the formic acid and 1 cm3 Formamide is refluxed for 30 minutes.
Ethanol is added to this reaction mixture and the precipitated crystals are collected by filtration. These crystals are dissolved in water, and the aqueous solution is treated with carbon powder and filtered. The filtrate is condensed and methanol is added to the residue. The crystals precipitated are collected by filtration and washed with methanol, whereby 40 mg of 4- (6-aminopurin9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (40 mg-) are obtained. Melting point 279OC (with decomposition).
[a] D5 = +30 (C = 0.93, dimethyl sulfoxide); UV spectrum: XHZO 261 mF (e = 14,700).
The 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid obtained is identified with the substance recently isolated from Lentinus edodes in the following way:
Lentinus edodes (10 kg) are ground and mixed with 20 liters of 80% aqueous methanol. The mixture is extracted under reflux for 3 hours in order to obtain the active substance. This procedure is repeated twice. The extracts obtained in this way are combined with one another, concentrated under reduced pressure to a volume of 6 liters and then treated with ether. After sufficient shaking of the ethereal solution, the aqueous layer is separated. The aqueous layer is diluted with water, specifically with 20 liters, and then passed through a strongly acidic ion from exchange resin H-type Amerlite IR-120 (trade mark).
The resin is washed with water and then eluted with 2% ammonia water. The eluate is concentrated under reduced pressure and lyophilized, 60 g of a brown powder being obtained. The powder is dissolved in 400 cm3 of water and the solution is passed through a strongly acidic ion exchange resin [H-type, Dowex 50X2 (trade mark)].
The resin is washed with water and then gradually eluted with 1N hydrochloric acid to 4N hydrochloric acid solution. The fractions which have a maximum at 260 mF in the UV spectrum are combined with one another and lyophilized, a white powder being obtained. The powder is dissolved in water and the solution is again passed through a strongly acidic ion exchange resin [H-type, Dowex 50X2 (trade mark)]. The resin is washed with water and then gradually eluted with 1N hydrochloric acid to 4N hydrochloric acid. The fractions which give a maximum at 260 my in the UV spectrum are combined and lyophilized, a white powder being obtained. The powder is dissolved in water and the solution is again passed through a strongly acidic ion exchange resin [H type, Dowex 50X2 (trade mark)].
The resin is eluted with 2% ammonia water and the eluate is lyophilized, a yellowish-white powder being obtained. This powder is dissolved in 0.1 mol of pyridine acetate buffer solution. This solution is passed through a strongly acidic ion exchange resin that has been pretreated with a 0.1 mol of pyridine acetate buffer solution. The resin is then eluted with 0.1 mol of pyridine acetate buffer solution. The eluate is divided into fractions of 25 cm3 each. The fractions which have a maximum at 260 with in the UV absorption spectrum are combined with one another and lyophilized, whereby crude crystals are obtained, which after recrystallization from water approximately
250 mg of pure crystals with a melting point of 279 C (with decomposition).
3) The 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (3.80 g) obtained is dissolved in 1N sodium hydroxide solution (17 cm3), warmed to 40 ° C. and filtered. Then 30 cm3 of ethanol are added dropwise to the filtrate. The precipitated crystals are collected by filtration and washed with ethanol to give sodium 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate (3.40 g), melting point 272 ° C. (with decomposition) .
W spectrum: # maxH2O 261 mp (E = 14,700).
4) 500 mg of the 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy D-erythronic acid obtained are dissolved in 10 cm3 of 1N hydrochloric acid. The solution is condensed under reduced pressure. Ethanol is then added to the oily residue and the mixture is left to stand. The precipitated crystals are collected and washed with ethanol, giving 380 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-derythronic acid chlorohydrate with a melting point of 198-2010C.
5) 500 mg of the 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid obtained are dissolved in 50 cm3 of 30% strength ammonia water. The solution is then concentrated under reduced pressure and the concentrate is dissolved in ethanol. The solution is left to stand, whereupon crystals separate out, which are washed with ethanol. In this way, 340 mg of ammonium 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate with a melting point of 2652670C (with decomposition) are obtained.
6) To a suspension of 4- (5-amino-6-chloro-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid (810 mg) in 25 cm3 of triethyl orthoformate is added dropwise 0, 36 cm3 conc. Hydrochloric acid. The mixture is stirred for 3 hours at room temperature. The reaction mixture is condensed under reduced pressure and the residue is dissolved in dichloromethane. The insoluble substance is filtered off, the filtrate is evaporated under reduced pressure and the residue is dissolved in isopropyl ether.
Crystals are precipitated by rubbing the inner reaction vessel and are collected by filtration. In this way, 4- (6-chloropurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid (640 mg. Yield: 76%, melting point 150 ° C. [with decomposition], recrystallized Isopropyl ether).
[a] 25 = +51.60 (C = 0.835, methanol).
7) To a suspension of 6.76 g of 4- (5-amino-6-chlor4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-D-erythronic acid in 200 cm3 of triethyl orthoformate, 3 cm3 of conc. Hydrochloric acid added.
The mixture is stirred for 24 hours at room temperature. Then, the reaction mixture from which an insoluble substance has been removed is condensed under reduced pressure. Ethyl acetate is added to the residue and the insoluble crystals are collected by filtration to give 4- (6-chloropurin-9-yl) -4-deoxy-derythronic acid. The filtrate is condensed under reduced pressure, and ethyl acetate is added to the residue. An insoluble substance is collected by filtration to give the same desired product. The total yield is 6.71 g. This substance is recrystallized from isopropanol, the isopropanol adduct being formed.
Melting purict 110 "C (decomposition). [A] D5 = + 34" (C = 0.541, dimethyl sulfoxide). UV spectrum: # max 0.1NHCl 265 nill (e- = 9,000);
4.266 ml (e = 800); uNNaOH 265 m | l (E (e = 9,200).
8) To a solution of 4- (5,6-diamino-4-pyrimidinyl-amino) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid (960 mg) in an ethanol solution (20 cm3) of the metallic Sodium (180 mg) is added to 1 cm3 of carbon disulfide.
The mixture is then refluxed for 4 hours. The ethanol is removed from the reaction mixture under reduced pressure. A small amount of water is added to the residue. The aqueous solution is adjusted to a pH of 3 using dilute hydrochloric acid. The precipitated crystals are collected by filtration and washed with methanol, giving 4- (6-amino-8-mercapto-9H-purin-9-yl) -deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid (650 mg ) receives. Melting point 203C (decomposition).
9) A solution of 1.0 g of 4- (5-amino-6-chloro-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-D-erythronic acid in 10 cm3 of 90% formic acid is heated to boiling under reflux. The solvent is distilled off from the reaction mixture under reduced pressure. The residue is recrystallized from isopropanol and then from ethanol, 760 mg of 4- (6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid being obtained. This substance has a melting point of around 1850C.
10) A mixture of Q, 27 g of 4- (5,6-diamino-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-D -erythronic acid methyl ester in 2 cm3 of formamide is on the oil bath for 20 minutes
1600C heated. The formamide is distilled off from the reaction mixture under reduced pressure. The residue is dissolved in 20 cm of methanol with heating, and the solution is treated with carbon powder and filtered. The methanol is removed by filtration under reduced pressure and the residue is washed with a small amount of methanol. In this way, 0.10 g of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-derythronic acid methyl ester of melting point 2310C (with decomposition) is obtained.
11) 160 mg of formamidine acetate are added to a solution of 400 mg of 5- (5,6-diamino-4-pyrimidinylamino) -4-deoxy-D-erythronic acid ethyl ester in 5 cm3 of methyl cellosolve and the mixture is heated for 20 minutes 1400C. The solvent is removed by filtration and the residue is dissolved in 20 cm of a 50% ethanol solution.
The solution is mixed with 2.0 g of a weakly basic ion exchange resin, namely Amberlite IR-45 (trademark), and the mixture is stirred for about an hour and then filtered. The filtrate is concentrated under reduced pressure, a little ethanol is added to the residue and the mixture is then left to stand. The precipitated crystals are collected and washed with ethanol, 110 mg of ethyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-derythronate having a melting point of 1600 ° C. being obtained.
12) By heating methyl 4- (5,6-diamino-4-pyrimidinylamino) -2-hydroxybutyrate in the presence of formamide, methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -2-hydroxybutyrate is obtained of m.p. 16Q, 5-161.50C.
The following compounds are obtained in a similar manner: methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate (melting point 2310C [decomposition]); ethyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate (melting point 159-1600C [decomposition]);
4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronamide (melting point 264-268aC [decomposition]);
4- (6-Amino-8-methylpurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 281 C [decomposition]);
4- (6-Amino-8-mercaptopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 265-268 C [decomposition]);
Methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O isopropylidene-D-erythronate (melting point 180-18 10 ° C); 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0-benzylidene-D-erythronic acid (melting point 198-199 [decomposition]);
;
4- (2-Amino-6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 233 C [decomposition]);
4- (6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronamide (melting point 247 C [decomposition]);
4- (6-ethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 242-243 C [decomposition]);
4- (6-diethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (hydrochloride;
Melting point 187 C [decomposition]);
4- (6-Hydroxyaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 206.5 C [decomposition]); 4- (6-Benzylaminopurin-9-yl) - $ deoxy-D-erythronic acid (melting point 206-206.5 C [decomposition]);
4- (6-aminoputrin-9-yl-4-deoxy-L-erythronic acid (melting point 291-2930C [decomposition]); alkyl 4- (6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate ( Melting point 2 12 [decomposition]); 4- (6-methylthiopurine-9-yl) -4-deoxy-D -erythronic acid (melting point 850 ° C., changes to an oil at 90 ° C. and decomposes at 2600 ° C.);
4- (Purin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 230 C [decomposition]);
N-Ethyl-4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O isopropylidene-D-erythronamide (melting point 178-179 C [decomposition]);
;
N -ethyl-4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronamide (melting point 166-168 C [decomposition]);
N, N-diethyl-4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronamide (melting point 192-1,930C [decomposition]); 4- (6-ethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy 2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid; -4- (6-methoxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid [sodium salt;
expands at 168-1700C and colors at
220-230 C without vesication);
4- (2,6-dihydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 2042060C [decomposition]);
4- (2-methyl-6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid;
4- (6-butyrylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid;
4- (6,8-dihydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid; 4- (2,6-diaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid;
4- (6,8-diaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid;
4- (2-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid;
4- (8-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid;
4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O isopropylidone-D-threonic acid (melting point 2230C [decomposition]); 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-threonic acid methyl ester (melting point 211-2120C decomposition etc.
13) A solution of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid (150 mg) is heated in 3 cm 10% formic acid on a water bath for 30 minutes. The reaction mixture is concentrated under reduced pressure and then treated with water. The precipitated crystals are collected by filtration, washed with water and then dried to give aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (130 mg).
Melting point 279 C (decomposition).
14) 4- (6-Amino-8-methylpurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-Oisopropylidene-D-erythronic acid (400 mg) is dissolved in 10 cm of 20% acetic acid with heating. The solution is refluxed for 30 minutes, then treated with charcoal and then filtered. The filtrate is allowed to cool and the precipitated crystals are collected by filtration and washed with water. In this way, crystals (232 mg) of 4- (6-amino-8methylpurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid are obtained. Melting point 281 C (decomposition) (recrystallized from water).
UV spectrum: man 263 m # (E = 14,300).
15) 6-Amino-9- (3-carboxy-2,3-O-isopropylidene dihydroxypropyl) -purine-1-oxide (300 mg) is suspended in 10 cm of 10% acetic acid. The suspension is refluxed for 30 minutes. A small amount of powdered charcoal is then added to the reaction mixture and the whole is filtered. The filtrate is concentrated under reduced pressure.
The precipitated crystals are collected by filtration and recrystallized from water to give 6-amino-9- (3-carboxy-2,3dihydroxypropyl) -purine-1-oxide (165 mg). Melting point 275 C (decomposition).
16) A suspension of 4- (6-amino-8-mercaptopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene -D-erythronic acid (300 mg) in 20 cm of 10% acetic acid is added during 2 Reflux for hours. The reaction mixture is treated with coal powder and filtered while it is still hot. The filtrate is concentrated under reduced pressure and water is added to the residue. The precipitated crystals are collected by filtration and washed with methanol to give 4- (6-amino-8-mercaptopurin-9-yl) -4-deoxy-derythronic acid (220 mg). Melting point 265-2680C (decomposition).
UV spectrum: # maxH2O 240 m (# = 19,000), Xm2 = 288 with (e = 25,500).
h, 306 with (± = 27,300).
17) A mixture of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy2,3-O-benzylidene-D-erythronic acid (1.00 g) and 30 cm3
10% acetic acid is heated under reflux for 1 hour. The reaction mixture is treated with carbon powder and filtered. The filtrate is evaporated under reduced pressure and the residue is washed with methanol to obtain crude crystals in an amount of 285 mg. It is 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid with a melting point of 2790C (decomposition) (recrystallized from water while it is still hot when treated with carbon powder).
UV spectrum: kH20 263.
18) 180 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-odiacetyl-D-erythronic acid in 5 cm3 of 1N sodium hydroxide solution are stirred at room temperature for one hour.
The reaction mixture is then neutralized using 5 cm3 of 1N hydrochloric acid and concentrated to approximately half the volume under reduced pressure. The precipitated crystals are collected by filtration and washed with methanol, giving 95 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-derythronic acid, melting point 2790 ° C. (with decomposition).
19) 0.70 g of 4- (6-ethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid in 50 cm3 of 10N acetic acid are refluxed for 30 minutes. The reaction mixture is concentrated under reduced pressure and adsorbed on an ion exchange resin, namely (Amberlite IRA400 [trademark]). The resin is washed with a 0.05N acetic acid solution and eluted with 0.5N acetic acid. The eluate is concentrated under reduced pressure, 0.56 g of 4- (6-ethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-derythronic acid having a melting point of 242-2430C (with decomposition) (recrystallized from ethanol).
20) 200 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid methyl ester in 5 cm3 of formic acid are treated as in Example 13, 110 mg of 4- (6 -Aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid with a melting point of 2790C (with decomposition).
21) To a suspension of 200 mg of 4- (6-aminopurin 9-yl) -4-deoxy-2,3-0-isopropylidene-D-erythronic acid methyl ester in 20 cm3 of methanol is added 0.5 cm3 of conc. Hydrochloric acid is added and the mixture is left to stand at room temperature for 65 hours. The reaction mixture is then added to a suspension of a weakly basic ion exchange resin, namely 4.0 g of Amberlite IR-45 (trade mark), in 20 cm3 of 50% methanol, and the mixture is stirred for 30 minutes and filtered. The filtrate is concentrated under reduced pressure and the precipitated crystals are collected and washed with methanol, whereby 160 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid methyl ester of melting point 2310 ° C. (with decomposition) are obtained.
22) 450 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-threonic acid in 30 cm3 of 20% acetic acid are refluxed for 2 hours. After cooling, the precipitated crystals are collected and washed with water and acetone, 350 mg of 4- (6 aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-threonic acid having a melting point of 297 cm (with decomposition) being obtained.
The following compounds are obtained in a similar manner: 4- (2-methylthio-6-aminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 2490C [decomposition]); 4- (6-Amino-8-mercaptopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid (mp 265-2680C [decomposition]; 4- (2-hydroxy-6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy -D-erythronic acid (melting point above 3000C [decomposition]); 4- (6-hydroxypurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid (sinters at approx. 85C, expands at 100-105oC and melts at approx 185cm); 4- (2-Amino-6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 2330C [decomposition]);
4- (6-chloropurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melts at 85 ° C., solidifies at 90 ° C. and then decomposes at 260 ° C., isopropanol adduct; melting point 110 ° C. [decomposition]); 4- (6-ethylaminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 242-2430C [decomposition]); 4- (6-diethylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (hydrochloride;
Melting point 1870C [decomposition]); 4- (6-Hydroxyaminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 206.50C [decomposition]); 4- (6-Benzylaminopurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 206-206.5 C [decomposition]); 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-L-threonic acid (melting point 291-2930C [decomposition]); 4- (6-mercaptopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 2400C [decomposition]);
4- (6-methylthiopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (sinters at 1140C, discolored at about 2200C and then gradually decomposes); 4- (Purin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 2300C [decomposition]); N -ethyl-4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronamide (melting point 166-1680C [decomposition]); 4- (6-Amino-8-hydroxypurin-9-yl) 4-deoxy-D-erythronic acid (melting point 215-217C [decomposition]); Etc.
23) 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (45 mg) is suspended in 1 cm3 of pyridine. The suspension is then treated with 0.5 cm3 of anhydrous acetic acid and the mixture is left to stand for 4 hours. The reaction mixture is poured into ice water and concentrated under reduced pressure. The precipitated crystals are collected by filtration and recrystallized from a mixture of methanol and water, 32 mg of needles consisting of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-0 diacetyl-D- erythronic acid. Melting point 250ob (decomposition).
24) Methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate (300 mg) is suspended in 6 cm3 of pyridine. Then 3 cm 3 of anhydrous acetic acid are added to the suspension and the mixture is stirred for 6 hours at room temperature.
The reaction mixture is poured into ice water and extracted with chloroform. The extract is washed with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. The chloroform is evaporated under reduced pressure to give crude crystals, which are washed with methanol and recrystallized from methanol. This gives methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-di-O-acetyl-D-erythronate (290 mg) with a melting point of 2280 ° C. (decomposition).
25) 5 cm3 of anhydrous acetic acid is added to a solution of ethyl 4- (6-hydroxypurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate (500 mg) in pyridine (10 cm3). The mixture is stirred for 8 hours at room temperature, then poured into 50 cm3 of ice water and extracted with chloroform. The chloroform layer is washed with water, dried and concentrated. The ether is added to the residue and the walls of the reaction vessel are rubbed, which produces crystals. These crystals are collected by filtration, washed with ether and recrystallized from ethanol to give ethyl 4- (6-hydroxypurin-9-yl) 4-deoxy-2,3-0-diacetyl-D-erythronate (530 mg) . Melting point 188.5-189 C (decomposition).
UV spectrum: kH20 250 with
26) Benzoyl chloride (2.80 g) is added to a suspension of methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronate (1.06 g) in pyridine (60 cm3) while cooling with ice admitted.
The mixture is stirred for 15 hours, poured into ice water and extracted with chloroform. The extract is dried over anhydrous magnesium sulfate and the chloroform is evaporated off under reduced pressure. The residue is subjected to column chromatography using neutral aluminum oxide (20 g). A gummy substance is obtained from the fraction eluted with benzene and chloroform, which is dissolved in 30 cm3 of pyridine. This solution is mixed with 30 cm3 of 2N sodium hydroxide. The mixture is stirred for 1 1/2 hours at room temperature and passed through a column which is charged with an ion exchange hard [H type, Dowex 50 (trademark)] (30 cm 3). The ion exchange resin is washed with 50% pyridine (50 cm3). The resulting liquids are combined and concentrated.
The residue is dissolved in methanol, treated with carbon powder and left to stand, giving 530 mg of crystals, which are obtained from 4- (6-benzoylaminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid with a melting point of 232-2350C
27) 500 mg of ethyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid are suspended in 10 ml of pyridine and 5 ml of anhydrous propionic acid are added to the suspension. The reaction mixture is stirred for 2 hours at room temperature, then poured into ice water and extracted with chloroform. The extract is washed with a dilute aqueous solution of sodium hydrogen carbonate and then with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. The chloroform is distilled off under reduced pressure.
The residue is washed with ether on the filter and gives 400 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-di-0propionyl-D-erythronic acid ethyl ester; Melting point 122-123 C.
28) 500 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid ethyl ester are suspended in 5 ml of pyridine and 1 ml of anhydrous butyric acid is added to the suspension. The reaction mixture is stirred for 4 hours at room temperature and treated in the same manner as in Example 10- (E). 520 mg of ethyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-di-O-butyryl-D-erythronic acid with a melting point of 104-1050 ° C. are obtained.
29) 5 ml of anhydrous acetic acid are added to a suspension of 2.0 g of ethyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid in 20 ml of pyridine. The reaction mixture is stirred for 5 hours at room temperature, then poured into ice water and extracted with chloroform. The chloroform layer is washed with water, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. 1.40 g of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-di-O-acetyl-D-erythronic acid ethyl ester with a melting point of 200ob are obtained.
30) 0.25 g of 4- (6-aminopurin-9-yl) -2 (R) -2-hydroxybutyric acid methyl ester, 0.13 g of acetic anhydride and 5 ml of pyridine are combined and the mixture is stirred for 3 hours at room temperature. The reaction mixture is concentrated and the remaining crystals are recrystallized from methanol; 0.20 g of 4- (6-aminopurin-9-yl) -2 (R) -2-acetoxybutyric acid methyl ester with a melting point of 177-1780 ° C. is obtained.
31) 4- (6-Chlorpurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (1.89 g) is reacted with 530 mg of thiourea in 70 cm3 of ethanol for 3 hours under reflux. The reaction mixture is then mixed with 1N sodium hydroxide solution (15 cm3) and 10 cm3 of water and heated for 1 hour.
The ethanol is then distilled off and the residue is adjusted to a pH of 1 using hydrochloric acid. The precipitated crystals are collected by filtration and the water is recrystallized to give 4- (6-mercaptopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (860 mg). Melting point 240 C (decomposition).
W spectrum: ANt0X226.5 middle = 9,400), 322 m, u '(X = 25,900);
Xmax 225 with (± = 10100), 324 with (E = 22,200); ONNaOH 232.5 with (E = 14,300), 310.5 with (E = 22,400).
4- (6-Mercaptopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (1.39 g) is dissolved in 0.1N sodium hydroxide solution (100 cm3) and the solution is then treated with 0.4 cm3 of methyl iodide. The reaction mixture is stirred for 4 hours at room temperature and concentrated. The concentrate is adjusted to a pH of 1 using hydrochloric acid and then evaporated to dryness. The residue is extracted with hot methanol and the crude crystals thus obtained are recrystallized from methanol to give methylthiopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (1.22 g). Melting point 210ob (decomposition).
UV spectrum: kN2a 221 with (E = 11,300), 287 with (E = 17,500), 293 with (E = 17,400); 222.5 with (E = 10,500), 295.5 with (± = 15,700); ), 0lNNaOH 223 with (E = 10,600), 287 with (E = 17,100), 293 with (E = 17,000).
32) A suspension of methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) 4-deoxy-2,3-O-diacetyl-D-erythronate (100 mg) in 2 cm3 of an in-sodium hydroxide solution is added for 3 hours at room temperature touched. The reaction mixture is adjusted to a pH of 3 to 4 using hydrochloric acid. The precipitated crystals are collected by filtration, washed with water and then dried to give 4- (6 aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid (44 mg).
Melting point 279OC (decomposition).
33) 300 mg of methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-derythronate are dissolved in 5 cm3 of methanol and 5 cm3 of ln sodium hydroxide solution. The solution is stirred for one hour at room temperature and concentrated under reduced pressure. Then 5 cm3 of 1N hydrochloric acid are added to the residue. The precipitated crystals are collected by filtration and washed with methanol to give 220 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-D-erythronic acid, melting point 279OC (with decomposition).
34) 500 mg of methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2, isopropylidene-D-erythronate in a mixture of 10 cm3 of methanol and 5 cm3 of ln sodium hydroxide are treated as in Example 33, whereby 470 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-erythronic acid with a melting point of 2290 ° C. (with decomposition) are obtained.
35) 200 mg of methyl 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2, isopropylidene-D-threonate in a mixture of 4 cm3 of methanol and 2 cm3 of ln sodium hydroxide solution are treated as in Example 33, whereby 105 mg of 4- (6-aminopurin-9-yl) -4-deoxy-2,3-O-isopropylidene-D-threonic acid with a melting point of 223OC (with decomposition) are obtained.