Verfahren zur Durchführung von Diinnschicht-Chromatographie und Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens
Eine sehr moderne Form der Chromatographie ist t die sogenannte Dünnschicht-Chromatographie. Der Name beruht auf der Verwendung des Adsorptionsmittels in Form einer dünnen, auf einer inerten Unter- lage aufliegenden Schicht, der sogenannten Dünnschicht. Diese Anordnung besitzt gegenüber der klassischen Adsorptionssäule eine Reihe bekannter Vorteile. Die gebräuchlichen Ausführungsformen sind aber dadurch charakterisiert, dass die Laufstrecke des f r die chromatographische Trennung als mobile Phase benützten Lösungsmittels durch die Apparate dimens, ionen begrenzt wird' (Standard-Methode).
Für die Trennung von Substanzgemischen, deren Kompo nenten deutlich verschiedene Wanderungsgeschwin- digkeiten besitzen, ist dies ohne Bedeutung.
Bei sehr ähnlichen Wanderungsgeschwindigkeiten hingegen wird eine Trennung erst möglich, wenn eine entsprechend grosse Wanderungsstrecke zur Ver fügung steht. Da die Wanderungsstrecke immer kleiner ist als die Laufstrecke des Lösungsmittels, erfor- dert also die Trennung von Substanzen mit sehr Ïhnlichen Wanderungsgeschwindigkeiten eine grosse Laufstrecke der mobilen Phase, und diese Forderung ist wiederum identisch mit der Forderung nach grossen, eventuell sehr grossen Apparatedtmensionsn. In der Papierchromatographie, einer bekannten, der D nn schicht-Chromatographie verwandten Arbeitstechnik, kann man den eben erwähnten Nachteil vermeiden, indem man einerseits die mobile Phase z.
B. so wÏhlt, da¯ sie wenigstens doppelt so schnell lÏuft als die schnellste Komponente des Substanzgemisches, und indem man anderseits ihre Laufstrecke virtuell, vem- grössert, das heisst die mobile Phase ber den Bereich des Adsorptionsmitttels hinausströmen lässt. Man erzielt diesen letzteren Effekt in einfachster Weise durch eine vertikale Anordnung des Papiers, absteigende Hiessrichtung der mobilen Phase und Abtropfen vom unteren Rand des Papiers. Man lässt also das Lösungs- mittel(=mobilePhase)durchdasAdsorptionsmittel hindurch und darüber hinaus laufen und spricht bei Verwendung dieser Anordnung von durchlaufender Chromatographie¯;¸Durchlaufmethode¯ und ¸Durch laufprinzipn sind synonyme Ausdrücke.
Das Durchlaufprinzip erweitert dien Anwendungs- bereich der Papiercbromatogmphiebeträchtlich.Eine der durchlaufenden Papierchromatographie analoge Anordnung für die Dünnschicht-Chromatographie ist zwar denkbar, aber umständlich und deshalb bisher auch nicht beschrieben worden. Es ist aber evident, dass eine nochmalige Verbesserung der an sich hervorragenden Trennchanoen der Dünnschicht-Chro- matographie durch eine geeignete Anordnung zur Anwendung des Durchlaufprinzips den grossen prak- tischen Nutzen der D nnschicht-Chromatographie nochmals erheblich vergrössern mulss.
Gegenstand dieses Patentes ist ein Verfahren zur Durchf hrung von D nnschicht-Chromatographie und eine Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens.
Das Verfahnen zur Dünnschicht-Chromatographie ist dadurch gekennzeichnet, dass man die zu trennenden Gemische längs einer Startlinie (S) auf die D nnschicht aufträgt, das Lösungsmittel aus einem Lö- sungsmittelbehäliter (B) durch eine Flüssigkeitsbrücke (F) auf die Dünnschicht fliessen und diese durchstr¯men lϯt. Gegebenenfalls lϯt man das L¯sungsmittel während der zur weiteren Substanztrennung erforderlichen Zeit aus der bedeckten D nnschicht ausströmen, so dass es verdampfen oder abtropfen kann.
Die Vorrichtung ist berraschend einfach und dadurch gekennzeichnet, dass die f r die Trennung benützbe Dünnschicht auf einer Trägerplatte (T) ruht, parallel zur Trägerplatte durch eine Deckplatte (D) und auf zwei Seiten durch Stützorgane gegen den umgebenden Raum abgedichtet ist, mit einer Seite ber eine von der Trägerplatte bedeckte Fl ssigkeitsbr cke (F) mit einem BehÏlter (B) f r das Lösungsmittel in Verbindung steht und-an der entgogenge- setzten Seite gegen die Umgebung offen bzw. mit der Umgebung ber eine Flüssigkeitsbrücke verbunden ist.
Bei der Anwendung der beschriebenen Vorrichtung zur durchlaufenden Dünnschicht-Chromatogra- phie hÏlt man sich bez glich Wahl des Adsorptionsund Lösungsmittels und bezüglich Chromatogramm- beladung zweckmässig an dlie in der Dünnschicht-und Papierchromatographie bewährten, dem Fachmann bekannten Regeht. Es ist also selbstverständlich, dass zur Trennung von Substanzen, die sich chromatographisch sehr ähnlich verhalten, Lösungsmittel- systeme verwendet werden, in denen die zu trennen- den Substanzen im Verhältnis zum Lösungsmittel (mobile Phase) langsam wandern.
Als Flüssigkeitsbrücke dient beispielsweise Filter- papier. Es ist aber auch möglich, ein anderes saug fäbiges Material oder einen ! engen Spalt zu verwenden. Der Fl ssigkeitstransport kann durch Kapillar kräfte, Schwerkraft, eme Zentrifugalkraft oder Druck erfolgen. Das Lösungsmittel wM also beispielsweise durch die Kapillarität der Flüssigkeitsbrücke auf die e Dünnschicht übertragen und kann nach Durchlaufen der Wanderungsstrecke, das beisst des durch die Deckplatte abgedeckten Teils der Dünnschicht, ver dampfen oder abtropfen, wobei dies direkt oder ber eine Flüssigkeitsbrücke, z. B. ein der Schicht anliegendes Filterpapier, das in den umgebenden Raum hinausragt, erfolgen kann.
Besonders einfach ist die Vorrichtung bei horizontaler Lage der Dünnschicht und Verdampfen von ihrem unbedeckten, offenen Ende nach Fig. 5.
Die lÏngsseits zwischen TrÏger- und Deckplatte angebrachten St tzorgane dienen als Dichtung und müssen, namentlich beim Ubergang der Flüssigkeits- br cke auf die Schicht, genügend Abstand von Schicht zu Deckplatte gewährleisten, um zu verhindern, dass Lösungsmittel auf Grund der Kapillarität in den Zwischenraum einflie¯t. Konstruktiv besonders einfach wird die Deckplatte auf Kufen abgestützt, welche den oberen Rand der Schicht um 0, 01 bis 10 mm berragen. Eine ebenfalls zweckmässige L¯sung besteht darin, den gew nschten Abstand zwischen Deckplatte und Trägerplatte bzw. Dünnschicht durch eine Füh rungsschiene zu fixieren.
Flüssigkeitsbehälter, Trägerplatte, Deckplatte und St tz- bzw. F hrungsorgane bestehen zweckmϯig aus einem chemisch inerten Mate, rial wie Glas, Metall, Kunststoff oder metallisiertem Kunststoff ; gegebenen- falls kann auch eine Kombination dieser Stoffe Verwendung finden.
Die Verwendung der beschriebenem Vorrichtung ist aber nicht nur auf FÏlle beschrÏnkt, wo man zur Erzielung einer Trennung das Durchlaufprinzip anwenden muss. Es ist im Gegenteil charakteristisch f r diese Anordnung, da¯ man sie generell auch dort einsetzen kann, wo man mit der üblichen, von STAHL, Archiv der Pharmazie, 292/64, 411 (1959), beschriebenen dünnschichtchromatographischen Stan dardeinrichtung auskommt. Man geht dann einfach so vor, dass die Chromatographie abgebrochen wird, wenn die Lösungsmittelfront ungefähr die Strecke von der Startlinie bis zum Ende der Deckplatte durchlaufen hat (Standardmethode).
Es ist also ein besonderes Kennzeichen der beschriebenen Vorrichtung f r Dünnschicht-Chromatographie, dass man sie zur Anwendung sowohl der Durchlaufmethode als auch der Standardmethode einsetzen kann. Dabei ist die bei üblicher, standardisierter Ausführung nach STAHL, so wichtige Kammersättigung hier ohne Be deutung. Die vorliegende Erfindung verbindet also in n hervorragender Weise Einfachheit in der Vorrichtung mit Vielseitigkeit in der Anwendung.
Im folgenden werden die e Einzelteile, die Montage, das Verfahren und an Beispielen die Anwendung einer der Erfindung entsprechenden Vorrichtung genauer beschrieben.
Zeichnungen Fig. 1: BehÏlter B .aus V4A-Stahl f r die mobile
Phase ; Aufsicht und Querschnitt, Fig. 2 : Schnittbogen für das Filterpapier F, Fig. 3 : Trägerplatte T aus Glas mit Dünnschicht und blanken RÏndern, Fig. 4 : Deckplatte D aus Glas mit Kufen und mon tiertem Filterpapier F ; Aufsicht und Quer schnitt, Fig.5 : Vorrichtung f r D nnschicht-Chromatogra phie unter wahlweis, er Verwendung derDurch- lauf-oder Stlandardmethode ; Querschnitt und
Aufsicht.
In den Zeichnungen angegebene Abk rzungen a, b, c, d, e, f, g, h = Orientierungshilfen, siehe Text, B = Behälter für die mobile Phase, D = Deckplatte, F = Filterpapier (= Fl ssigkeitsbr cke), G = Glasbänder (= Kufen = St tzorgan), K = Klammem, schematisch gezeichnet, L = L¯che@ zum Einstecken von Polyäthylen- röhnchen, R = Röhrchen aus Polyäthylen zum Einfüllen der mobilen Phase und zum Druckausgleich, S = Startlinie, längs welcher die Substanzgemische auf Punkten aufgetragen sind, T = Trägerplatte mit der D nnschicht, U = Unterlage : ein Korkring.
A. Einzelteile der Vorrichtung
1. Ein Behälter B aus rostfreiem Stahl (Fig. 1).
Er besitzteineplangeschliffeneOberseiteund dient als Gefäss f r die mobile Phase. Durch zwei
Löcher L in der Seitenwand werden zwei kurze
PolyÏthylenr¯hrchen R gesteckt und nach Fig. 1 (Querschnitt) aufwärts gebogen. Durch eines wird später die mobile Phase eingefüllt, das andere ermöglicht den Druckausgleich (s. u.).
2. Ein Filterpapier F (Fig. 2).
Es überträgt die mobile Phase auf die Schicht.
Der Teil ¸efgh¯ ist dem Innenprofil des Behälters angepasst.
3. Eine TrÏgerplatte T aus Glas mit der Dünnschicht (Fig. 3).
An zwei gegenüberliegenden Rändern ist so viel von der Schicht abgestreift, dass die Kufen (s. u.) gerade auf den blanken Streifen Platz finden.
15 mm vom vorderen Plattenrand'entfernt befin- det sich die Startlinie S, wo die Substanzen auf zutragen sind (Fig. 3).
4. Eine Deckplatte G aus Glas mit ¸Kufen¯ G (Fig. 4).
Als Kufen dienen zwei längsseits auf die Deck platte geschweisste und plangeschliffene Glasbän- der. Die Kufenhöhe erlaubt eine wahlweise Ein stellung des Abstandes zwischen Schicht und
Deckplatte ; gleichzeitig wirken die Kufen als
Dichtung.
5. Sechs kräftige Papierklammern K.
Sie dienen dsazu, den Behälter B und die TrÏger platte r gegen die Deckplatte D zu pressen (Fig. 5).
6. Eine Unterlage U, z. B. ein Korkring (Fig. 4 und 5).
B. Montage und Verfahren
Man legt die Deckplatte mit den Kufen nach oben auf den Korkring U, faltet das Filterpapier lÏngs der Linie ¸cd¯ (Fig. 2) und legt es mit dem St ck ¸abcd¯ nach unten auf die Vorderseite der DeckpDatte (Fig. 4).
Das Papier soll die Kufen nicht berühren und'die Kante abp soll zum Vorderrand der Deckplatte einen kleinen Abstand (1-3 mm) halten. Diese Lage wird provisorisch mit einer Papierklammer fixiert.
Man legt jetzt die Trägerplatte mit der Schicht und den zu chromatographierenden Substanzen, die man schon vor der Montage auf Punkten lÏngs der Startlinie S aufgetragen hat (Fig. 3), so auf die Deckplatte, da¯ die blanken Streifen auf die Kufen zu liegen kommen und der Vorderrand der r TrÏgerplatte genau mit den vorderen Kufenkanten zusammenfällt.
Träger-und Deckplatte werden nun durch vier Papierklammern zusammengeprel3t und die berfl ssig gewordene Klammer am Filterpapier wird wieder ent- fernt. Man biegt den oberen Teil des Filterpapiers lames der Verbindungslinie ¸ef¯ (Fig. 4) in vertikale Lage und st lpt die zusammengeklemmten Platten um, so dass sich das Filterpapier nunmehr auf der Unterseite befimdat. Nach Fig. 5 wird der Behälter B mit zwei Klammern K in solcher Weise unter die Deckplatte geklemmt, dass der vertikal stehende Teil des Filterpapiers auf den Grund von B reicht und der horizontal liegende Teil als Dichtung zwischen Deck- platte und Oberseite von. B wirkt.
Der Behälter soll dicht gegen die Trägerplatte stossen. Man f llt durch ein Polyäthylenröhrchen mobile Phase ein, erreicht durch leichtes Schwenken eine momentan gleiche mϯige Benetzung des Filterpapiers und kann jetzt die Anordnung sich selbst berlassen. Die mobile Phase (Lösungsmittel) verdampft nach Durchlaufen dieir von der Deckplatte. geschützten Schicht auf dem noch verbleibenden Streifen (Fig. 5) genügend rasch, um die Chromatographie beliebig lang in Gang zu halten. Gegebenenfalls ist in den Behälter B mobile Phase nachzufüllen.
Storungen : Schwankungen der Raumtemperatur können gelegentlich (besonders bei starker Luftbewe- gung) dazu führen, dass mobile Phase an der Deck- platte kondensiert. In solchen FÏllen gen gt es, die Deckplatte durch kurzes Auflegen der Hand etwas zu erwÏrmen. - Sogenannte Randeffekte sind bei sorgfältigeir Montage vermeidbar.
C. Anwendung
Die beschriebene Anordnung kann zur Trennung schwer und leicht trennbarer Substanzgemische verwendet werden. Nachstehende Tabelle gibt einige Beispiele und die bei der Trennung eingehaltene, n Bedingungen an. Das Adsorptionsmittel ist d'abei in allen FÏllen Kieselgel f r D nnschicht-Chromatogramme nach STAHL (MERCK) ; der Abstamd von der Startlinie bis zum Ende der Deckplatte beträgt 16, 5 cm, die Kufenhöhe 1 mm.
Tabelle
Beispiel Substanzgemisch L¯sungsmittelsystem Ben¯tigte Zeit @@ @@
Nr. in Stunden
1 Isoleucin + Leucin Methyläthylketon/Pyridin/Wasser 5 (70 : 15 : 15 : 2 v/v)
2 N- (2, 4-Dinitro-phenyl)-Derivate von : BenzoI/Pyrid'm/Eisessig 2-3 Durchlauf- Isoleucin + Leucin + Norleucin (80:20:3 v/v) methode 3 N-(2,4-Dinitro-phenyl)-Derivate von:
Benzol/Pyridin/Eisessig 2-3
Norvalin + Valin (80 : 20 : 3 v/v)
4 N, N'-Di-(2, 4-dinitro-phenyl)-lysin Chloroform/Methanol/Eisessig 2-3 + O,N-Di-(2,4-dinitro-phenyl)- (95 : 5 : 1 v/v) tyrosin
5 Argminhydrochlorid + Glycin n-Propanot/Wasser l-2 + Histidinhydrochlorid (70 : 30 v/v) + Phenylalanin + Val, in Standard- 6 N-(2,4-Dinitro-phenyl)-Derivate von: Chloroform/Benzylalkohol/Eisessig 1 methode Alanin + α-Amino-buttersÏure (70:30:3 v/v) + o-caprylsäure + Glycin + Serin
7 Buttergelb + Indophenol Benzol 0, 25 + Sudanrot G
Process for performing thin-layer chromatography and apparatus for performing the process
A very modern form of chromatography is so-called thin-layer chromatography. The name is based on the use of the adsorbent in the form of a thin layer on an inert surface, the so-called thin layer. This arrangement has a number of known advantages over the classic adsorption column. The usual embodiments are, however, characterized by the fact that the path of the solvent used as the mobile phase for the chromatographic separation is limited by the apparatus dimensions (standard method).
This is irrelevant for the separation of substance mixtures, the components of which have clearly different migration speeds.
In the case of very similar migration speeds, however, a separation is only possible when a correspondingly large migration distance is available. Since the migration distance is always shorter than the distance traveled by the solvent, the separation of substances with very similar migration speeds requires a long distance for the mobile phase, and this requirement is in turn identical to the requirement for large, possibly very large apparatus dimensions. In paper chromatography, a known working technique related to thin-layer chromatography, the disadvantage just mentioned can be avoided by using the mobile phase z.
For example, it should be chosen so that it runs at least twice as fast as the fastest component of the substance mixture, and on the other hand, by virtually enlarging its travel distance, i.e. allowing the mobile phase to flow over the area of the adsorbent. This latter effect is achieved in the simplest way by arranging the paper vertically, with the mobile phase in a descending direction and dripping from the lower edge of the paper. The solvent (= mobile phase) is thus allowed to run through the adsorbent and beyond it and when this arrangement is used, the term continuous chromatography is used; “continuous flow method” and ¸ continuous flow principle are synonymous terms.
The continuous flow principle expands the application range of paper chromatography considerably. An arrangement for thin layer chromatography analogous to continuous paper chromatography is conceivable, but cumbersome and has therefore not been described so far. It is evident, however, that a further improvement in the inherently excellent separation chanoes of thin-layer chromatography by means of a suitable arrangement for the application of the through-flow principle must again considerably increase the great practical benefit of thin-layer chromatography.
This patent relates to a method for performing thin-layer chromatography and a device for performing the method.
The approach to thin-layer chromatography is characterized in that the mixture to be separated is applied to the thin layer along a starting line (S), the solvent flows from a solvent container (B) through a liquid bridge (F) onto the thin layer and this flow through. If necessary, the solvent is allowed to flow out of the covered thin layer during the time required for further substance separation, so that it can evaporate or drip off.
The device is surprisingly simple and is characterized in that the thin layer used for the separation rests on a carrier plate (T), is sealed parallel to the carrier plate by a cover plate (D) and on two sides by supporting elements from the surrounding space, with one side over a liquid bridge (F) covered by the carrier plate is connected to a container (B) for the solvent and is open to the environment on the degassed side or is connected to the environment via a liquid bridge.
When using the device described for continuous thin-layer chromatography, with regard to the choice of adsorbent and solvent and with regard to the chromatogram loading, it is expedient to follow the procedure known to those skilled in the art which has proven itself in thin-layer and paper chromatography. It goes without saying that to separate substances that behave very similarly in chromatography, solvent systems are used in which the substances to be separated migrate slowly in relation to the solvent (mobile phase).
Filter paper, for example, serves as a liquid bridge. But it is also possible to use another absorbent colored material or one! to use narrow gap. The liquid can be transported by capillary forces, gravity, centrifugal force or pressure. The solvent wM, for example, transferred to the thin layer through the capillarity of the liquid bridge and can after passing through the migration path, which is the part of the thin layer covered by the cover plate, evaporate or drip off, this being done directly or via a liquid bridge, e.g. B. a filter paper adjacent to the layer that protrudes into the surrounding space can be done.
The device is particularly simple when the thin layer is in a horizontal position and evaporates from its uncovered, open end according to FIG. 5.
The supporting elements attached along the length between the carrier and cover plate serve as a seal and must ensure sufficient distance from layer to cover plate, especially when the liquid bridge passes over the layer, in order to prevent solvent from flowing into the gap due to the capillarity ¯t. In terms of construction, the cover plate is particularly easily supported on runners, which protrude from the upper edge of the layer by 0.01 to 10 mm. Another useful solution is to fix the desired distance between cover plate and carrier plate or thin layer by means of a guide rail.
The liquid container, carrier plate, cover plate and support or guide elements are expediently made of a chemically inert material such as glass, metal, plastic or metallized plastic; if necessary, a combination of these substances can also be used.
However, the use of the device described is not limited to cases where the continuous flow principle has to be applied to achieve separation. On the contrary, it is characteristic of this arrangement that it can generally also be used where the usual standard thin-layer chromatographic device described by STAHL, Archiv der Pharmazie, 292/64, 411 (1959), can be used. One then simply proceeds in such a way that the chromatography is stopped when the solvent front has traversed approximately the distance from the start line to the end of the cover plate (standard method).
It is therefore a special feature of the described device for thin-layer chromatography that it can be used for applying both the continuous method and the standard method. The chamber saturation, which is so important with the usual, standardized STAHL design, is irrelevant here. The present invention thus combines simplicity in the device with versatility in application in an excellent manner.
In the following, the individual parts, the assembly, the method and, using examples, the use of a device corresponding to the invention are described in more detail.
Drawings Fig. 1: Container B. Made of V4A steel for the mobile
Phase; Top view and cross-section, FIG. 2: cut sheet for the filter paper F, FIG. 3: carrier plate T made of glass with a thin layer and bare edges, FIG. 4: cover plate D made of glass with runners and fitted filter paper F; Top view and cross-section, FIG. 5: device for thin-layer chromatography with the option of using the continuous or standard method; Cross section and
At sight.
Abbreviations a, b, c, d, e, f, g, h given in the drawings = orientation aids, see text, B = container for the mobile phase, D = cover plate, F = filter paper (= liquid bridge), G = Glass ribbons (= runners = supporting element), K = brackets, schematically drawn, L = tube @ for inserting polyethylene tubes, R = tubes made of polyethylene for filling in the mobile phase and for pressure equalization, S = starting line, along which the substance mixtures are applied on dots, T = carrier plate with the thin layer, U = base: a cork ring.
A. Components of the device
1. A stainless steel container B (Fig. 1).
It has a flat top and serves as a vessel for the mobile phase. Divided by two
Holes L in the side wall become two short ones
PolyÏthylenr¯hrchen R inserted and bent upwards as shown in Fig. 1 (cross section). The mobile phase is later filled in through one of them, the other enables pressure equalization (see below).
2. A filter paper F (Fig. 2).
It transfers the mobile phase to the shift.
The part ¸efgh¯ is adapted to the inner profile of the container.
3. A carrier plate T made of glass with the thin layer (Fig. 3).
So much of the layer has been stripped off on two opposite edges that the runners (see below) just find space on the bare strips.
The starting line S, where the substances are to be applied, is located 15 mm from the front edge of the plate (FIG. 3).
4. A cover plate G made of glass with “runners” G (Fig. 4).
Two glass strips welded and ground flat on the cover plate serve as runners. The height of the runners allows the distance between layer and to be optionally adjusted
Cover plate; at the same time the runners act as
Poetry.
5. Six sturdy paper clips K.
They serve to press the container B and the carrier plate r against the cover plate D (Fig. 5).
6. A pad U, e.g. B. a cork ring (Fig. 4 and 5).
B. Assembly and procedures
Place the cover plate with the runners up on the cork ring U, fold the filter paper along the line ¸cd¯ (Fig. 2) and place it with the piece ¸abcd¯ facing down on the front of the cover plate (Fig. 4) .
The paper should not touch the runners and the edge abp should keep a small distance (1-3 mm) from the front edge of the cover plate. This position is temporarily fixed with a paper clip.
You now place the carrier plate with the layer and the substances to be chromatographed, which you applied to points along the starting line S before assembly (Fig. 3), on the cover plate so that the bare strips come to rest on the runners and the front edge of the carrier plate coincides exactly with the front edge of the runner.
The carrier and cover plate are now pressed together by four paper clips and the clip on the filter paper that has become superfluous is removed again. Bend the upper part of the filter paper lame of the connecting line ¸ef¯ (Fig. 4) into a vertical position and fold the clamped plates over so that the filter paper is now on the underside. According to FIG. 5, the container B is clamped under the cover plate with two clamps K in such a way that the vertical part of the filter paper extends to the bottom of B and the horizontal part acts as a seal between the cover plate and the top of. B works.
The container should abut tightly against the carrier plate. The mobile phase is poured in through a polyethylene tube, and the filter paper is momentarily evenly moistened by gentle swiveling, and the arrangement can now be left to itself. The mobile phase (solvent) evaporates from the cover plate after passing through it. protected layer on the remaining strip (Fig. 5) fast enough to keep the chromatography going for any length of time. If necessary, the mobile phase must be topped up in container B.
Faults: Fluctuations in the room temperature can occasionally (especially with strong air movement) lead to the mobile phase condensing on the cover plate. In such cases, it is sufficient to warm up the cover plate a little by placing your hand on it. - So-called edge effects can be avoided with careful installation.
C. Application
The arrangement described can be used to separate mixtures of substances that are difficult and easy to separate. The following table gives some examples and the n conditions met during the separation. The adsorbent is in all cases silica gel for thin-layer chromatograms according to STAHL (MERCK); the distance from the starting line to the end of the cover plate is 16.5 cm, the height of the runner 1 mm.
table
Example mixture of substances Solvent system Time required @@ @@
No. in hours
1 isoleucine + leucine methyl ethyl ketone / pyridine / water 5 (70: 15: 15: 2 v / v)
2 N- (2, 4-dinitro-phenyl) derivatives of: BenzoI / Pyrid'm / glacial acetic acid 2-3 pass isoleucine + leucine + norleucine (80: 20: 3 v / v) method 3 N- (2, 4-Dinitro-phenyl) derivatives of:
Benzene / pyridine / glacial acetic acid 2-3
Norvaline + Valine (80: 20: 3 v / v)
4 N, N'-Di- (2,4-dinitro-phenyl) -lysine chloroform / methanol / glacial acetic acid 2-3 + O, N-di- (2,4-dinitro-phenyl) - (95: 5: 1 v / v) tyrosine
5 argmin hydrochloride + glycine n-propanot / water l-2 + histidine hydrochloride (70:30 v / v) + phenylalanine + val, in standard 6 N- (2,4-dinitro-phenyl) -derivatives of: chloroform / benzyl alcohol / Glacial acetic acid 1 method alanine + α-amino-butyric acid (70: 30: 3 v / v) + o-caprylic acid + glycine + serine
7 butter yellow + indophenol benzene 0.25 + Sudan red G