Verfahren zur Herstellung von Oxyhalogenpregnanen Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von gesättigten und unge sättigten, in 11-Stellung durch eine freie oder funk tionell abgewandelte Oxy- oder Oxogruppe substituier ten 14-Oxy-9a-halogen-pregnanen. Die neuen 14- Oxy-pregnane und ihre Derivate, wie z.
B. das 14a- Oxy-9a-fluor-hydrocortison und -cortison, zeigen ge genüber den in 14-Stellung nicht hydroxylierten Ver bindungen eine gesteigerte Wirksamkeit.
Die neuen 14-Oxy-pregnane werden erfindungs gemäss erhalten, wenn man die entsprechenden in 14-Stellung unsubstituierten Verbindungen der Ein wirkung von Kulturen von Pilzen der Gattungen Mucor, Helicostylum, Pleospora oder Curvularia oder von entsprechenden Enzymen unterwirft.
Die als Ausgangsstoffe zu verwendenden 14-H-9a- Halogen-, insbesondere -9a-Fluor- und -9a-Chlor- pregnane weisen vorzugsweise ausser in 11-Stellung auch in 3- und 20-Stellung eine freie oder funktionell abgewandelte Oxy- oder Oxogruppe auf. Sie können gesättigt sein oder Doppelbindungen enthalten, z. B.
in 1- undloder 4-Stellung, ferner in 5-, 6-, 7- oder 16- Stellung, oder zusätzliche Substituenten besitzen, wie ausser den bereits erwähnten freien oder abgewandel ten Oxy- oder Oxogruppen, z. B. Epoxygruppen oder Halogenatome, beispielsweise in 2-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 15-, 16-, 17- oder 21-Stellung, oder Methylgruppen, z.
B. in 17a-Stellung. Die Ausgangsstoffe können, was die Substituenten anbelangt, von beliebiger sterischer Konfiguration sein und auch als Racemate vorliegen. Sie können auch den sogenannten Nor- undjoder Homo-Reihen, insbesondere der 19-Nor- und D-Homo-Reihe, angehören. Besonders wichtige Ausgangsstoffe sind z.
B. 9a-Fluor- und 9a-Chlor- derivate von Hydrocortison, Cortison, Corticosteron, 11-Dehydro-corticosteron, entsprechende 1-Dehydro- und 21-Oxo-verbindungen, wie die 9a-Fluor- und 9a- Chlorderivate von 1-Dehydro-hydrocortison, 1-De- hydro-cortison, 1-Dehydro-corticosteron, 1,
11-Bis- dehydro-corticosteron, 11-Oxy- und 11-Oxo-proge- steron, 11ss-Oxy- und 11-Oxo-17a-oxy-progesteron, 1-Dehydro-llf-oxy- und -11-oxo-progesteron, 1-De- hydro-11,17a-dioxy- und -11-oxo-17a-oxy-proge- steron. Als funktionell abgewandelte Oxygruppen kommen z.
B. mit einer aliphatischen, aromatischen oder heterocyclischen Carbonsäure, beispielsweise Essigsäure, Propionsäure, Benzoesäure oder Furan- carbonsäure, veresterte oder verätherte Oxygruppen, z.
B. die Tetrahydro-pyranyloxy-, Benzyloxy- oder Triphenylmethoxygruppe, in Betracht und als funk tionell abgewandelte Oxogruppen vorteilhaft ketali- sierte Oxogruppen, abgeleitet insbesondere von einem zweiwertigen Alkohol, wie die Äthylendioxygruppe.
Gute Resultate werden vor allem mit folgenden Pilzarten bzw. den entsprechenden Enzymen erzielt: Mucor griseocyanus, Mucor parasiticus, Helicostylum piriforme, Pleospora gaeumanni und Curvularia pal- lescens. Für die Kultivierung dieser Pilze eignen sich die an sich hiefür bekannten Medien, z.
B. solche mit Zuckern, wie Glucose oder Lactose, mit Peptonen, Maisquellwasser, Sojaprodukten und dergleichen so wie mit Mineralsalzen, oder aber synthetische Nähr lösungen. Man arbeitet insbesondere unter aeroben Bedingungen, beispielsweise in Schüttelkultur, oder submers unter Rühren und Luftzufuhr. Die genann ten Pilze unterscheiden sich von andern Mikroorganis men, z. B. den Bakterien, durch gutes Wachstum unter verhältnismässig einfachen Zuchtbedingungen. Die Reaktion kann wie gesagt in den genannten Pilz kulturen selbst oder aber mit Hilfe der angereicher ten oder abgetrennten Enzyme stattfinden, also z. B.
in einer Aufschwemmung des abgetrennten Pilz- mycels, des homogenisierten Pilzmycels oder in Fil traten bzw. wasserhaltigen Extrakten davon. Die Isolierung der Verfahrensprodukte kann z. B. durch Extraktion des Reaktionsgemisches mit einem organischen Lösungsmittel, z. B. Methylenchlorid oder Essigester, erfolgen. Für die weitere Reinigung des so erhaltenen Extraktes eignen sich besonders Chromato- graphie, z. B. an Aluminiumoxyd oder Silicagel, An wendung von Verteilungsmethoden, z.
B. nach dem Gegenstromverfahren, oder die Trennung mittels Girard-Reagentien, wie Trimethylanunonium- oder Pyridinium-essigsäurehydrazid. Anschliessend an diese Reinigungsmethoden oder an ihrer Stelle kann schliess lich aus organischen oder wässrig-organischen Lö sungsmitteln umkristallisiert werden.
Die erfindungsgemäss erhaltenen 14-Oxy-steroide und ihre Derivate zeichnen sich, verglichen mit den in 14-Stellung nicht hydroxylierten therapeutisch wirk samen Verbindungen durch eine gesteigerte Wirksam keit aus. Die Verbindungen weisen wie gesagt in 11- Stellung eine freie oder funktionell abgewandelte Oxy- oder Oxogruppe auf; es kann sich also z.
B. um Ester, Äther, Thioester, Thioäther, Thiol- und Thionester, Acetale, Mercaptale, Ketale, Enolderivate, wie Enol- ester, Enoläther oder Enamine, Hydrazone, Semicarb- azone und dergleichen handeln.
Von den Verfahrens produkten sind von besonderem Interesse die 9a- Fluor- und 9a-Chlor-derivate von 14a-Oxy-hydro- cortison, 14a-Oxy-cortison, 14a-Oxy-corticosteron, 14a-Oxy-11-dehydro-corticosteron, 14a-Oxy-1- dehydro-hydrocortison, 14a-Oxy-1-dehydro-cor- tison, 14a-Oxy-1-dehydro-corticosteron, 14a-Oxy- 1,11-bisdehydro-corticosteron,
14a,11ss-Dioxy- und 14a - Oxy-11- oxo - progesteron, 14a,11 ss,17a - Tri- oxy- und 14a,17a - Dioxy - 11 - oxo - progesteron, 14a,11ss-Dioxy- und 14a-Oxy-11-oxo-1-dehydro- progesteron, 14a,llss,17a-Trioxo- und 14a,
17a- Dioxy -11- oxo -1- dehydro - progesteron, ferner ent sprechende funktionelle Derivate, wie Ester und Äther. Sofern die Verfahrensprodukte nicht die Kon figuration und die Substituenten von therapeutisch verwendbaren Steroiden aufweisen, können sie als Zwischenprodukte zu deren Herstellung, z. B. der obgenannten Verbindungen dienen.
Die erfindungsgemäss erhältlichen Umsetzungspro dukte lassen sich in an sich bekannter Weise in ihre funktionellen Derivate, wie Sauerstoff-, Schwefel- oder Stickstoffderivate, beispielsweise Ester, Äther, Enol- ester, Enoläther, Ketale, Trioäther und Thioketale, ferner Hydrazone, Oxime und Enamine überführen; Oxygruppen lassen sich zu Oxogruppen dehydrieren.
In den Estern und Enolestern können die Säure reste solche beliebiger organischer oder anorgani scher Säuren sein, wie aliphatischer, alicyclischer, araliphatischer, aromatischer oder heterocyclischer Carbon-, Thioncarbon-, Thiolcarbon- oder Sulfon- säuren, vorzugsweise der Ameisensäure, Essigsäure, Chloressigsäuren, Trifluoressigsäure, Propionsäure, Buttersäuren,
Valeriansäuren, Trimethylessigsäure, Di- äthylessigsäure, Capronsäuren, Önanthsäuren, Capryl- säuren, Pahnitinsäuren, Crotonsäure, Undecansäure, Undecylensäure, Oxalsäure, Bernsteinstäure, Pimelin- säure, Maleinsäure, Milchsäure, Carbaminsäuren, Alkoxycarbonsäuren,
f-Cyclopentyl-propionsäure, Hexahydrobenzoesäure, Benzoesäure, Phenylessig- säure, Cyclohexylessigsäure, Phenylpropionsäuren, Trimethylgallussäure, Phthalsäure, Furan-2-carbon- säure, Isonicotinsäure, Methansulfonsäure, Toluolsul- fonsäure, Schwefelsäuren,
Halogenwasserstoffsäuren oder Phosphorsäuren.
In den erhaltenen Verbindungen lassen sich funk tionell abgewandelte Oxy- oder Oxogruppen in freie Gruppen überführen. In polysubstituierten Derivaten können funktionell abgewandelte Gruppen auch nur teilweise in Freiheit gesetzt werden, z. B. durch chemi sche oder enzymatische Hydrolyse, beispielsweise unter Verwendung saurer oder basischer Mittel, durch Um- esterung oder Umacetalisierung. Aus den auf diese Weise oder auch direkt erhaltenen, nur partiell abge wandelten, wie veresterten bzw. verätherten Derivaten lassen sich durch anschliessende funktionelle Abwand lung, z.
B. Veresterung oder Verätherung, polysub stituierte Derivate, insbesondere auch gemischte Ester oder Äther bzw. Ester-Äther, herstellen. Sind wäh rend der Hydrolyse, insbesondere derjenigen mit alka lischen Mitteln, die 9,11-Halogenhydrine in die ent sprechenden 9,11-Oxidoverbindungen umgewandelt worden, so lassen sich letztere durch Einwirkung von Halogenwasserstoffsäuren, insbesondere Fluor- und Chlorwasserstoffsäure, wieder in 9,11-Halogenhydrine verwandeln.
<I>Beispiel 1</I> Zu einer bei 28 gut entwickelten, 4 Tage alten Schüttelkultur von Pleospora gaeumanni in 500 cm3 70proz. wässriger Bierwürze mit 0,5 cm3 Spermöl gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 125 mg 44-3,20-Dioxo-9a-fluor-l 1ss,17a-21-trioxy- pregnen in 10 cm3 Aceton. Die Suspension schüttelt man weitere 4 Tage bei der gleichen Temperatur. Nun wird das Mycel abgetrennt und gut mit Wasser und Essigester gewaschen.
Die vereinigten klaren Lösun gen werden mit Essigester ausgeschüttelt. Die Essig ester-Lösungen wäscht man mit Wasser, trocknet sie und dampft sie im Vakuum ein. Der Rückstand wird in 80proz. Methanol gelöst und mehrmals mit Petrol- äther ausgeschüttelt. Die Methanol-Lösungen dampft man hierauf im Vakuum vollständig ein.
Das Papier- chromatogramm (Propylenglykol-Toluol) des Rück standes zeigt neben wenig d 4-3,20-Dioxo-9a-fluor- 11ss,17a,11-trioxy-pregnen das etwas langsamer lau fende 44-3,20-Dioxo-9a-fluor-llss,14a,17a,21-tetra- oxy-pregnen. Der ganze Rückstand wird mittels eines präparatives Papierchromatogrammes (Propylengly- kol-Toluol) aufgetrennt.
Die dem 14a-Oxy-derivat entsprechenden Zonen werden ausgeschnitten und mit 50 proz. Methanol mehrmals extrahiert. Das Metha nol entfernt man dann im Vakuum, schüttelt mehr mals die zurückbleibende wässrige Lösung mit Essig ester aus, wäscht die vereinigten Essigester-Lösungen mit Wasser, trocknet sie und dampft sie ein, wobei als Rückstand reines d4-3,20-Dioxo-9a-fluor-llss, 14a,17a,21-tetraoxy-pregnen zurückbleibt.
Die Inkubation des 44-3,20-Dioxo-9a-fluor-11ss, 17a,21-trioxy-pregnens kann man auch in 500 cm3 einer wässrigen, gut entwickelten Kultur von Curvularia pallescens ausführen, die folgende Zusätze enthält:
5 g Rohrzucker, 5 g Difco-Trypton, 1 g Natriumnitrat, 0,5 g sek. Kaliumorthophosphat, 0,25 g Natriumsul fat, 0,25 g Kaliumchlorid, 5 mg Eisensulfathepta- hydrat, 1,25 g Kaliumcarbonat und 0,5 cm3 Spermöl. Die Aufarbeitung geschieht wie oben angegeben.
Das 44-3,20-Dioxo-11ss,14a,17a,21-tetraoxy- pregnen lässt sich wie folgt acetylieren: 100 mg wer den mit 0,3 cm3 Acetanhydrid und 3 Tropfen Pyridin versetzt. Die Lösung lässt man 15 Stunden bei 20 stehen, dampft sie hierauf auf Wasserzusatz im ge wöhnlichen, dann im Hochvakuum vollständig ein und erhält als Rückstand das 44-3,20-Dioxo-9a- fluor-11 ss,14a,17a,21-tetraoxy-pregnen-21-acetat.
<I>Beispiel 2</I> Zu einer bei 28 gut entwickelten, 4 Tage alten Schüttelkultur von Pleospora gaeumanni in 500 cm3 70proz. wässriger Bierwürze mit 0,5 cm3 Spermöl gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 125 mg 41,4-3,20-Dioxo-9a-fluor-l l,ss,17a,21-trioxy- pregnadien in 10 cm3 Aceton. Die Suspension schüt telt man weitere 4 Tage bei der gleichen Temperatur.
Die Aufarbeitung der Reaktionsmischung sowie die Isolierung und Reinigung des entstandenen di.4-3,20- Dioxo-9a-fluor-11 ss,14a,17a,21-tetraoxy-pregnadiens wird wie in Beispiel 1 angegeben ausgeführt. Das erhaltene 11 P,14a,17a,21-Tetraoxy-derivat läuft im Papierchromatogramm (Propylenglykol-Toluol) etwas langsamer als das d1,4_3,20-Dioxo-9a-fluor-11f,17a, 21-trioxy-pregnadien.
Das 41.4-3,20-Dioxo-9a-fluor-llss,14a,17a,21- tetraoxy-pregnadien lässt sich wie in Beispiel 1 an gegeben zum di,4-3,20-Dioxo-9a-fluor-11f,14a,17a, 21-tetraoxy-pregnadien-21-acetat acetylieren.
<I>Beispiel 3</I> Durch Inkubation von 4 4 - 3,11,20-Trioxo-9a- fluor-pregnen, unter den oben angegebenen Bedingun gen und nach analoger Aufarbeitung und Reinigung erhält man das 44-3,11,20-Trioxo-9a-fluor-14a-oxy- pregnen, das im Papierchromatogramm (Formamid- Cyclohexan-Benzol [1:1]) etwas langsamer läuft als das d4-3,11,20-Trioxo-9a-fluor-pregnen.
Process for the preparation of Oxyhalogenpregnanen The present invention is a process for the preparation of saturated and unsaturated 14-oxy-9a-halo-pregnanes substituted in the 11-position by a free or functionally modified oxy or oxo group. The new 14-oxy-pregnane and their derivatives, such as.
B. the 14a-oxy-9a-fluoro-hydrocortisone and -cortisone, show ge compared to the compounds not hydroxylated in the 14-position Ver an increased effectiveness.
The new 14-oxy-pregnanes are obtained according to the invention when the corresponding compounds unsubstituted in the 14-position are subjected to the action of cultures of fungi of the genera Mucor, Helicostylum, Pleospora or Curvularia or of corresponding enzymes.
The 14-H-9a halogen-, in particular -9a-fluoro- and -9a-chloro-pregnanes to be used as starting materials preferably have a free or functionally modified oxy- or oxy- or oxy- or functionally modified in the 11-position also in the 3- and 20-positions Oxo group. They can be saturated or contain double bonds, e.g. B.
in 1- and / or 4-position, also in 5-, 6-, 7- or 16-position, or have additional substituents, as in addition to the already mentioned free or modified oxy or oxo groups, eg. B. epoxy groups or halogen atoms, for example in the 2-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 15-, 16-, 17- or 21-position, or methyl groups, e.g.
B. in 17a position. As far as the substituents are concerned, the starting materials can be of any steric configuration and can also be present as racemates. They can also belong to the so-called Nor- undjoder Homo series, in particular the 19-Nor and D-Homo series. Particularly important starting materials are z.
B. 9a-fluorine and 9a-chlorine derivatives of hydrocortisone, cortisone, corticosterone, 11-dehydro-corticosterone, corresponding 1-dehydro and 21-oxo compounds, such as the 9a-fluorine and 9a-chlorine derivatives of 1- Dehydro-hydrocortisone, 1-dehydro-cortisone, 1-dehydro-corticosteron, 1,
11-bis-dehydro-corticosterone, 11-oxy- and 11-oxo-progesterone, 11ss-oxy- and 11-oxo-17a-oxy-progesterone, 1-dehydro-llf-oxy- and -11-oxo- progesterone, 1-dehydro-11,17a-dioxy- and -11-oxo-17a-oxy-progesterone. As functionally modified oxy groups come z.
B. with an aliphatic, aromatic or heterocyclic carboxylic acid, for example acetic acid, propionic acid, benzoic acid or furan carboxylic acid, esterified or etherified oxy groups, e.g.
B. the tetrahydro-pyranyloxy, benzyloxy or triphenylmethoxy group, into consideration and as functionally modified oxo groups advantageously ketalized oxo groups, derived in particular from a dihydric alcohol, such as the ethylenedioxy group.
Good results are achieved above all with the following types of fungus or the corresponding enzymes: Mucor griseocyanus, Mucor parasiticus, Helicostylum piriforme, Pleospora gaeumanni and Curvularia pallescens. The media known per se are suitable for the cultivation of these fungi, e.g.
B. those with sugars, such as glucose or lactose, with peptones, corn steep liquor, soy products and the like as with mineral salts, or synthetic nutritional solutions. One works in particular under aerobic conditions, for example in shaking culture, or submerged with stirring and supply of air. The named fungi differ from other microorganisms such. B. the bacteria, through good growth under relatively simple cultivation conditions. The reaction can, as I said, in the said fungal cultures themselves or with the help of the enriched th or separated enzymes take place, so z. B.
in a suspension of the separated fungal mycelium, the homogenized fungal mycelium or in fils or water-containing extracts thereof. The isolation of the process products can, for. B. by extracting the reaction mixture with an organic solvent, e.g. B. methylene chloride or ethyl acetate. Chromatography is particularly suitable for the further purification of the extract obtained in this way, e.g. B. on alumina or silica gel, on application of distribution methods, z.
B. by the countercurrent process, or the separation using Girard reagents, such as trimethylanunonium or pyridinium acetic acid hydrazide. Subsequent to these cleaning methods or instead of them, recrystallization can be carried out from organic or aqueous-organic solvents.
The 14-oxy-steroids obtained according to the invention and their derivatives are distinguished by an increased effectiveness compared to the therapeutically active compounds which are not hydroxylated in the 14-position. As stated, the compounds have a free or functionally modified oxy or oxo group in the 11-position; it can be z.
B. to esters, ethers, thioesters, thioethers, thiol and thionesters, acetals, mercaptals, ketals, enol derivatives, such as enol esters, enol ethers or enamines, hydrazones, semicarb azone and the like.
Of the process products of particular interest are the 9a-fluorine and 9a-chlorine derivatives of 14a-oxy-hydrocortisone, 14a-oxy-cortisone, 14a-oxy-corticosterone, 14a-oxy-11-dehydro-corticosterone, 14a-oxy-1-dehydro-hydrocortisone, 14a-oxy-1-dehydro-cortisone, 14a-oxy-1-dehydro-corticosterone, 14a-oxy-1,11-bisdehydro-corticosterone,
14a, 11ss-Dioxy- and 14a - Oxy-11- oxo - progesterone, 14a, 11 ss, 17a - Tri- oxy- and 14a, 17a - Dioxy - 11 - oxo - progesterone, 14a, 11ss-Dioxy- and 14a- Oxy-11-oxo-1-dehydro- progesterone, 14a, llss, 17a-trioxo- and 14a,
17a- Dioxy -11- oxo -1- dehydro - progesterone, also corresponding functional derivatives such as esters and ethers. If the process products do not have the configuration and the substituents of therapeutically useful steroids, they can be used as intermediates for their preparation, eg. B. serve the above compounds.
The reaction products obtainable according to the invention can be converted in a manner known per se into their functional derivatives, such as oxygen, sulfur or nitrogen derivatives, for example esters, ethers, enol esters, enol ethers, ketals, trioethers and thioketals, and also hydrazones, oximes and enamines ; Oxy groups can be dehydrated to oxo groups.
In the esters and enol esters, the acid residues can be any organic or inorganic acids, such as aliphatic, alicyclic, araliphatic, aromatic or heterocyclic carboxylic, thionic carboxylic, thiol carboxylic or sulphonic acids, preferably of formic acid, acetic acid, chloroacetic acids, trifluoroacetic acid , Propionic acid, butyric acids,
Valeric acids, trimethyl acetic acid, diethyl acetic acid, caproic acids, enanthic acids, caprylic acids, phenitic acids, crotonic acid, undecanoic acid, undecylenic acid, oxalic acid, succinic acid, pimelic acid, maleic acid, lactic acid, carbamic acids, alkoxycarboxylic acids,
f-Cyclopentyl propionic acid, hexahydrobenzoic acid, benzoic acid, phenyl acetic acid, cyclohexyl acetic acid, phenylpropionic acids, trimethyl gallic acid, phthalic acid, furan-2-carboxylic acid, isonicotinic acid, methanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, sulfuric acids,
Hydrohalic acids or phosphoric acids.
In the compounds obtained, functionally modified oxy or oxo groups can be converted into free groups. In polysubstituted derivatives, functionally modified groups can only be partially set free, e.g. B. by chemical or enzymatic hydrolysis, for example using acidic or basic agents, by transesterification or transacetalization. From the in this way or directly obtained, only partially changed abge, such as esterified or etherified derivatives can be developed by subsequent functional Abwand development, z.
B. esterification or etherification, polysubstituted derivatives, especially mixed esters or ethers or ester-ethers, produce. If the 9,11-halohydrins have been converted into the corresponding 9,11-oxido compounds during the hydrolysis, especially those with alkaline agents, the latter can be converted back into 9, by the action of hydrohalic acids, especially fluoric and hydrochloric acid. Transforming 11-halohydrins.
<I> Example 1 </I> For a shaking culture of Pleospora gaeumanni well developed at 28 and 4 days old in 500 cm3 70 percent. Aqueous beer wort with 0.5 cm3 of sperm oil is given a solution of 125 mg of 44-3,20-dioxo-9a-fluoro-l 1ss, 17a-21-trioxy-pregnen in 10 cm3 of acetone under sterile conditions. The suspension is shaken for a further 4 days at the same temperature. The mycelium is then separated off and washed well with water and ethyl acetate.
The combined clear solutions are extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate solutions are washed with water, dried and evaporated in a vacuum. The residue is in 80 per cent. Dissolved methanol and extracted several times with petroleum ether. The methanol solutions are then completely evaporated in vacuo.
The paper chromatogram (propylene glycol-toluene) of the residue shows a little d 4-3,20-dioxo-9a-fluoro-11ss, 17a, 11-trioxy-pregnen the somewhat slower running 44-3,20-dioxo 9a-fluoro-llss, 14a, 17a, 21-tetra-oxy-pregnen. The entire residue is separated by means of a preparative paper chromatogram (propylene glycol-toluene).
The zones corresponding to the 14a-oxy derivative are cut out and treated with 50 percent. Methanol extracted several times. The methanol is then removed in vacuo, the remaining aqueous solution is shaken out several times with ethyl acetate, the combined ethyl acetate solutions are washed with water, dried and evaporated, the residue being pure d4-3,20-dioxo-9a -fluor-llss, 14a, 17a, 21-tetraoxy-pregnen remains.
The incubation of 44-3,20-Dioxo-9a-fluoro-11ss, 17a, 21-trioxy-pregnens can also be carried out in 500 cm3 of an aqueous, well-developed culture of Curvularia pallescens, which contains the following additives:
5 g cane sugar, 5 g Difco tryptone, 1 g sodium nitrate, 0.5 g sec. Potassium orthophosphate, 0.25 g sodium sulfate, 0.25 g potassium chloride, 5 mg iron sulfate heptahydrate, 1.25 g potassium carbonate and 0.5 cm3 sperm oil. The work-up is carried out as indicated above.
The 44-3,20-dioxo-11ss, 14a, 17a, 21-tetraoxypregnen can be acetylated as follows: 100 mg are mixed with 0.3 cm3 of acetic anhydride and 3 drops of pyridine. The solution is left to stand for 15 hours at 20, it is then evaporated to the addition of water in the usual, then completely under high vacuum and the residue is 44-3,20-Dioxo-9a-fluoro-11 ss, 14a, 17a, 21- tetraoxy-pregnen-21-acetate.
<I> Example 2 </I> For a shaking culture of Pleospora gaeumanni well developed at 28 and 4 days old in 500 cm3 70 percent. Aqueous beer wort with 0.5 cm3 of sperm oil is given a solution of 125 mg of 41.4-3.20-dioxo-9a-fluoro-l, ss, 17a, 21-trioxy-pregnadiene in 10 cm3 of acetone under sterile conditions. The suspension is shaken for a further 4 days at the same temperature.
The work-up of the reaction mixture and the isolation and purification of the resulting di.4-3,20-dioxo-9a-fluoro-11ss, 14a, 17a, 21-tetraoxy-pregnadiene is carried out as indicated in Example 1. The 11 P, 14a, 17a, 21-tetraoxy derivative obtained runs somewhat slower in the paper chromatogram (propylene glycol-toluene) than the d1,4-3,20-dioxo-9a-fluoro-11f, 17a, 21-trioxy-pregnadiene.
The 41.4-3,20-dioxo-9a-fluoro-llss, 14a, 17a, 21-tetraoxy-pregnadiene can be given as in Example 1 to give di, 4-3,20-dioxo-9a-fluoro-11f, 14a , 17a, 21-tetraoxy-pregnadiene-21-acetate acetylate.
<I> Example 3 </I> By incubating 4 4 - 3,11,20-trioxo-9a-fluoro-pregnen, under the conditions given above and after analogous work-up and purification, the 44-3,11, 20-Trioxo-9a-fluoro-14a-oxypregnen, which in the paper chromatogram (formamide-cyclohexane-benzene [1: 1]) runs somewhat more slowly than d4-3,11,20-trioxo-9a-fluoro-pregnen.