BRPI0810083B1 - METHODS FOR ESTABLISHING WHERE A SOY PLANT OR SOY SEED SHOULD BE CULTIVATED BY IMPROVING THE SOY PLANT TO SELECT A SOY SEED, DISTRIBUTION OF A SOY PLANT TO INSULATE PRECEDURE AND PREDERMINED SATURE SEED SEEDS Determine If a Soybean Plant Has a Maturity Group - Google Patents
METHODS FOR ESTABLISHING WHERE A SOY PLANT OR SOY SEED SHOULD BE CULTIVATED BY IMPROVING THE SOY PLANT TO SELECT A SOY SEED, DISTRIBUTION OF A SOY PLANT TO INSULATE PRECEDURE AND PREDERMINED SATURE SEED SEEDS Determine If a Soybean Plant Has a Maturity Group Download PDFInfo
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(54) Título: MÉTODOS PARA ESTABELECER ONDE UMA PLANTA DE SOJA OU SEMENTE DE SOJA DEVE SER CULTIVADA, DE MELHORAMENTO DA PLANTA DE SOJA, PARA SELECIONAR UMA SEMENTE DE SOJA, DE DISTRIBUIÇÃO DE UMA PLANTA DE SOJA, PARA ISOLAR SEMENTES DE SOJA DE MATURIDADE PRECOCE INDETERMINADA, E PARA DETERMINAR SE UMA PLANTA DE SOJA TEM UM GRUPO DE MATURIDADE (51) Int.CI.: C12Q 1/68; A01H 5/10 (30) Prioridade Unionista: 28/03/2007 US 60/920,531, 31/10/2007 US 61/001,049 (73) Titular(es): MONSANTO TECHNOLOGY LLC (72) Inventor(es): JONATHAN JENKINSON; JOHN TAMULONIS; JAMES NARVEL; KENNETH GRUYS; HENRY E. VALENTIN(54) Title: METHODS FOR ESTABLISHING WHERE A SOYBEAN OR SOYBEAN PLANT SHOULD BE CULTIVATED, TO IMPROVE SOYBEAN PLANT, TO SELECT A SOYBEAN SEED, TO DISTRIBUTE A SOYBEAN PLANT, TO ISOLATE MATURITY SOY SEEDS EARLY INDETERMINATE, AND TO DETERMINE IF A SOYBEAN PLANT HAS A MATURITY GROUP (51) Int.CI .: C12Q 1/68; A01H 5/10 (30) Unionist Priority: 3/28/2007 US 60 / 920,531, 10/31/2007 US 61 / 001,049 (73) Holder (s): MONSANTO TECHNOLOGY LLC (72) Inventor (s): JONATHAN JENKINSON ; JOHN TAMULONIS; JAMES NARVEL; KENNETH GRUYS; HENRY E. VALENTIN
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Relatório Descritivo da Patente de Invenção para MÉTODOS PARA ESTABELECER ONDE UMA PLANTA DE SOJA OU SEMENTE DE SOJA DEVE SER CULTIVADA, DE MELHORAMENTO DA PLANTA DE SOJA, PARA SELECIONAR UMA SEMENTE DE SOJA, DE DISTRIBUIÇÃO DE UMA PLANTA DE SOJA, PARA ISOLAR SEMENTES DE SOJA DE MATURIDADE PRECOCE INDETERMINADA, E PARA DETERMINAR SE UMA PLANTA DE SOJA TEM UM GRUPO DE MATURIDADE.Invention Patent Descriptive Report for METHODS FOR ESTABLISHING WHERE A SOYBEAN OR SOYBEAN PLANT SHOULD BE GROWN, TO IMPROVE SOYBEAN PLANT, TO SELECT A SOYBEAN, TO DISTRIBUTE A SOYBEAN PLANT, TO ISOLATE SOYBEAN SEEDS OF INDETERMINATED EARLY MATURITY, AND TO DETERMINE IF A SOYBEAN PLANT HAS A MATURITY GROUP.
Referência Cruzada a Pedidos de Patente Relacionados [001] Este pedido de patente reivindica o benefício sob 35 U.S.C. § 119(e) do Pedido de Patente Provisória U.S. Nos 60/920.531, depositado em 28 de março de 2007, e 61/001.049, depositado em 31 de outubro de 2007. A totalidade de cada uma destes pedidos de patentes está neste pedido incorporada por referência.Cross Reference to Order Related Patent [001] This application claims the benefit under 35 USC § 119 (e) of Patent Provisional US No 60 / 920,531, filed on March 28 , 2007 and 61 / 001,049, filed on October 31, 2007. The entirety of each of these patent applications is incorporated into this application by reference.
Incorporação da Listagem de Sequências [002] Duas cópias da Listagem de Sequências e uma forma legível em computador da listagem de sequência em CD-ROM, cada uma contendo o arquivo denominado ListagemdeSequências.txt, que tem 140.000 bytes de tamanho (medido no MS-Windows) estão depositadas por meio deste e neste pedido incorporadas por referência. Uma cópia de papel da Listagem de Sequência e uma forma legível em computador da listagem de sequência em disquete, contendo o arquivo denominado pa_seq_54590.txt que tem 143.360 bytes de tamanho (medido no MS-Windows) e que foi registrado no dia 14 de março de 2007 e depositado no Pedido de Patente U.S. No 60/920.531, estão neste pedido incorporados por referência.Incorporation of the Sequence List [002] Two copies of the Sequence List and a computer-readable form of the sequence listing on CD-ROM, each containing the file called SequenceList.txt.txt, which is 140,000 bytes in size (measured in MS- Windows) are hereby deposited and incorporated into this order by reference. A paper copy of the Sequence Listing and a computer-readable form of the sequence listing on floppy disk, containing the file named pa_seq_54590.txt which is 143,360 bytes in size (measured on MS-Windows) and which was registered on March 14 2007 and deposited in US Patent application No. 60 / 920,531, are incorporated in this application by reference.
Campo da Invenção [003] A invenção inclui métodos e composições de regiões genômicas para classificação e seleção de plantas e sementes do gênero Glycine associadas com maturidade e hábito de crescimento daField of Invention [003] The invention includes methods and compositions of genomic regions for classification and selection of plants and seeds of the genus Glycine associated with maturity and growth habit of
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 11/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 11/152
2/114 planta de soja. A invenção também inclui métodos e composições para classificação de plantas e sementes do gênero Glycine com marcadores associados com regiões genômicas que estão relacionadas à maturidade vegetal e hábito de crescimento vegetal de plantas Glycine. Antecedentes da Invenção [004] Soja, Soja (L). Merril, é uma cultura econômica importante no mundo inteiro e é uma fonte primária de óleo e proteína vegetal (Sinclair and Backman, Compendium of Soybean Diseases, 3rd Ed. APS Press, St. Paul, MN, p. 106. (1989)). A demanda crescente por baixo colesterol e dietas ricas em fibra tem também aumentado a importância da soja como um alimento saudável.2/114 soybean plant. The invention also includes methods and compositions for classifying plants and seeds of the genus Glycine with markers associated with genomic regions that are related to plant maturity and plant growth habit of Glycine plants. Background of the Invention [004] Soy, Soy (L). Merrill, is an important economic crop in the world and is a primary source of oil and vegetable protein (Sinclair and Backman, Compendium of Soybean Diseases, 3 rd Ed. APS Press, St. Paul, MN, p. 106. (1989) ). The growing demand for low cholesterol and high fiber diets has also increased the importance of soy as a healthy food.
[005] As variedades de soja cultivadas nos Estados Unidos têm uma base genética estreita. Seis introduções, ‘Mandarim’, ‘Manchu’, ‘Mandarim’ (Ottawa), ‘Richland’, ‘AK’ (Harrow) e ‘Mukden’ contribuíram com quase 70% do germoplasma representado em 136 liberações de cultivar. A base genética da soja cultivada pode ser ampliada através do uso de espécies exóticas. Além disso, as espécies exóticas podem possuir tais traços-chave como resistência à doença e estresse. Neste momento, os traços de muitas espécies exóticas são inacessíveis em parte devido as limitações com cruzamento das plantas de soja a partir de grupos de maturidade extremamente diferentes. A maioria dos cruzamentos de desenvolvimento de variedade de soja são feitas entre parentais em 10 dias de maturidade de cada um. Se os parentais se diferenciam muito na maturidade, as plantas da progênie segregam amplamente para maturidade. Para que melhoradores obtenham e selecionem plantas de soja do grupo de maturidade desejado, devem produzir e manter um grande número de plantas de progênie, prática a qual é de custo proibitivo.[005] Soy varieties grown in the United States have a narrow genetic base. Six introductions, ‘Mandarin’, ‘Manchu’, ‘Mandarin’ (Ottawa), ‘Richland’, ‘AK’ (Harrow) and ‘Mukden’ contributed almost 70% of the germplasm represented in 136 cultivar releases. The genetic basis of cultivated soybeans can be expanded through the use of exotic species. In addition, exotic species may have such key traits as resistance to disease and stress. At the moment, the traces of many exotic species are inaccessible in part due to the limitations of crossing soybean plants from extremely different maturity groups. Most soybean variety development crosses are made between parents at 10 days of maturity for each. If the parents are very different in maturity, the progeny plants segregate widely for maturity. In order for breeders to obtain and select soy plants from the desired maturity group, they must produce and maintain a large number of progeny plants, a practice which is prohibitive.
[006] Maturidade e rendimento vegetal estão intimamente associados na soja. Um aumento de um dia na maturidade pode ser equiPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 12/152[006] Maturity and plant yield are closely associated with soy. A one-day increase in maturity can be equiPetition 870170047791, from 07/07/2017, p. 12/152
3/114 valente a ~0,77 saca/ha de aumento no rendimento. De modo inverso, uma redução na maturidade muitas vezes penalizada com uma redução de ~0,77 saca/ha no rendimento. A correlação de maturidade e rendimento vegetal confunde a avaliação de loci de caracteres quantitativos potenciais (QTLs) e genes candidatos associados ao rendimento. A capacidade de estabelecer geneticamente a maturidade em uma planta de soja seria útil e auxiliaria na elucidação de traços associados com o rendimento.3/114 brave to ~ 0.77 bag / ha of increase in yield. Conversely, a reduction in maturity is often penalized with a reduction of ~ 0.77 bag / ha in yield. The correlation of maturity and plant yield confuses the assessment of loci of potential quantitative characters (QTLs) and candidate genes associated with yield. The ability to genetically establish maturity in a soybean plant would be useful and assist in elucidating traits associated with yield.
[007] Plantas de soja são plantas de dias curtos, por isso a florescência é iniciada em dias curtos devido a uma redução no fotoperíodo (Garner & Allard, J. Agric. Res. 18, 553-606 (1920)). Consequentemente, o fotoperíodo (comprimento do dia) e resposta da planta de soja à temperatura determina áreas de adaptação vegetal. Devido à sensibilidade ao fotoperíodo, os genotipos de soja muitas vezes são cultivados em zonas estreitas de latitude para otimizar o rendimento. Variedades de soja do norte, em contraste com variedades do sul, iniciam a florescência com dias mais longos. Variedades do norte plantadas ao sul de sua zona de adaptação exibe florescência acelerada, crescimento vegetal e rendimento reduzido. Variedades de soja do sul plantadas ao norte de sua zona de adaptação terão florescência retardada com um potencial de dano por geada que pode reduzir o rendimento.[007] Soy plants are short-day plants, so flowering starts in short days due to a reduction in the photoperiod (Garner & Allard, J. Agric. Res. 18, 553-606 (1920)). Consequently, the photoperiod (length of day) and response of the soybean plant to temperature determines areas of plant adaptation. Due to their sensitivity to the photoperiod, soybean genotypes are often grown in narrow latitude zones to optimize yield. Northern soybean varieties, in contrast to southern varieties, start flowering with longer days. Northern varieties planted south of their adaptation zone exhibit accelerated flowering, plant growth and reduced yield. Southern soybean varieties planted north of their adaptation zone will have delayed flowering with a potential for frost damage that can reduce yield.
[008] Variedades da planta de soja são classificadas com base em bandas de adaptação que são determinadas por comprimento do dia e latitude. Na América do Norte, sojas são categorizadas em 13 grupos de maturidade com as designações variando a partir de grupos de maturidade 000, 00, 0, e I a X. O grupo de maturidade mais precoce, sojas 000 são adaptadas ao norte (latitude 45°) , enquanto sojas do grupo de maturidade posterior X são adaptadas a regiões próximas ao equador. Plantas de soja em grupos de maturidade 000 a IV têm estruPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 13/152[008] Soybean plant varieties are classified based on adaptation bands that are determined by length of day and latitude. In North America, soybeans are categorized into 13 maturity groups with designations ranging from maturity groups 000, 00, 0, and I to X. The earliest maturity group, soybeans 000 are adapted to the north (latitude 45 °), while soybeans of the posterior maturity group X are adapted to regions close to the equator. Soy plants in groups of maturity 000 to IV have structure 870170047791, from 07/07/2017, p. 13/152
4/114 tura vegetal indeterminada, enquanto as plantas de soja em grupos de maturidade V a X têm estrutura vegetal determinada. Variedades determinadas cessam o crescimento vegetativo após o tronco principal terminar em um grupo de vagens maduras. Variedades indeterminadas desenvolvem folhas e flores simultaneamente em todas as partes de uma porção do seu período reprodutivo, com uma a três vagens no ápice terminal. Variedades de maturidade precoce (000 a III) são adaptadas a latitudes ao norte com a designação de maturidade aumentando em latitudes ao sul. O grupo de maturidade é determinado pela data de maturidade. Plantas são consideradas maduras quando 95% das vagens alcançaram sua cor madura. A data de maturidade é tipicamente descrita como uma mensuração de dias após 31 de agosto no hemisfério norte.4/114 undetermined plant texture, while soybean plants in groups of maturity V to X have a determined plant structure. Determined varieties stop vegetative growth after the main stem ends in a group of mature pods. Indeterminate varieties develop leaves and flowers simultaneously in all parts of a portion of their reproductive period, with one to three pods at the terminal apex. Early maturity varieties (000 to III) are adapted to northern latitudes with the designation of maturity increasing in southern latitudes. The maturity group is determined by the maturity date. Plants are considered mature when 95% of the pods have reached their mature color. The maturity date is typically described as a measurement of days after August 31 in the northern hemisphere.
[009] Há uma necessidade na técnica de melhoramento vegetal para identificar regiões genômicas associadas com o grupo de maturidade de uma planta de soja. Neste momento, melhoradores de soja estão limitados a cruzamentos de plantas dentro de grupos de maturidade similares. Além disso, diversos traços, como níveis de óleo, são influenciados pela latitude e região de crescimento de maturidade. Por isso, há uma necessidade de um método rápido, de custo eficiente para pré-selecionar o grupo de maturidade de plantas de soja. A presente invenção inclui um método para classificar e selecionar uma planta de soja para uma maturidade vegetal preferencial usando a tecnologia de polimorfismo de nucleotídeo único (SNP).[009] There is a need in the plant breeding technique to identify genomic regions associated with the maturity group of a soybean plant. At this time, soybean breeders are limited to crossbreeding plants within similar maturity groups. In addition, several traits, such as oil levels, are influenced by the latitude and region of maturity growth. Therefore, there is a need for a quick, cost-efficient method to pre-select the soybean plant maturity group. The present invention includes a method for classifying and selecting a soybean plant for preferred plant maturity using single nucleotide polymorphism (SNP) technology.
Breve Descrição de Figuras [0010] Figura 1: Influência do grupo de maturidade na porcentagem de óleo em sojas comerciais.Brief Description of Figures [0010] Figure 1: Influence of the maturity group on the percentage of oil in commercial soybeans.
[0011] Figura 2: Correlação de níveis de ácido estearidônico (SDA) e GLA (ácido gama-linolênico) e latitude para sementes de soja maduras. As plantas de soja são transgênicas e projetadas para proPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 14/152[0011] Figure 2: Correlation of levels of stearidonic acid (SDA) and GLA (gamma-linolenic acid) and latitude for mature soybean seeds. The soy plants are transgenic and designed for the purpose of PROPETITION 870170047791, of 07/07/2017, p. 14/152
5/114 duzir SDA e GLA.5/114 to produce SDA and GLA.
[0012] Figura 3: Correlação de níveis de ácido estearidônico (SDA) e latitude de sementes de soja madura em três testes. As plantas de soja são transgênicas e projetadas para produzir SDA.[0012] Figure 3: Correlation of levels of stearidonic acid (SDA) and latitude of mature soybean seeds in three tests. The soybean plants are transgenic and designed to produce SDA.
Sumário da Invenção [0013] A presente invenção inclui um método de estabelecimento onde uma planta de soja ou semente de soja deve ser cultivada por determinação da combinação alélica de uma planta de soja ou semente de soja pela obtenção de DNA de uma planta de soja ou semente de soja; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 1 são homozigotos ou heterozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 2 são homozigotos ou heterozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 3 são homozigotos ou heterozigotos; determinação da combinação alélica dos alelos nas regiões genômicas de maturidade 1, 2 e 3; e atribuição de um valor de grupo de maturidade à planta de soja ou semente de soja.Summary of the Invention [0013] The present invention includes a method of establishment where a soybean plant or soybean seed must be grown by determining the allelic combination of a soybean plant or soybean seed by obtaining DNA from a soybean plant or soybean seed; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 1 are homozygous or heterozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 2 are homozygous or heterozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 3 are homozygous or heterozygous; determination of the allele combination of the alleles in the genomic regions of maturity 1, 2 and 3; and assigning a maturity group value to the soybean plant or soybean seed.
[0014] Em outro aspecto, a presente invenção inclui um método de estabelecimento onde uma planta de soja ou semente de soja deve ser cultivada pela determinação da combinação alélica de uma planta de soja ou semente de soja pela obtenção de DNA de uma planta de soja ou semente de soja; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 1 são homozigotos ou heterozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 2 são homozigotos ou heterozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 3 são homozigotos ou heterozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 2 são homozigotos ou heterozigotos; determinação da combinação alélica dos alelos nas regiões genômicas de maturidade 1, 2, 3 e 4; e atribuição de um valor de grupo de maturidade à planta[0014] In another aspect, the present invention includes a method of establishment where a soybean plant or soybean seed must be grown by determining the allelic combination of a soybean plant or soybean seed by obtaining DNA from a soybean plant or soybean seed; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 1 are homozygous or heterozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 2 are homozygous or heterozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 3 are homozygous or heterozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 2 are homozygous or heterozygous; determination of the allele combination of the alleles in the genomic regions of maturity 1, 2, 3 and 4; and assigning a maturity group value to the plant
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 15/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 15/152
6/114 de soja ou semente de soja.6/114 soybean or soybean seed.
[0015] A presente invenção também inclui um método de fornecimento de informação sobre a maturidade de uma planta de soja ou semente de soja pela obtenção de DNA da semente de soja ou planta de soja e pela determinação do perfil alélico em um locus da região genômica 4.[0015] The present invention also includes a method of providing information on the maturity of a soybean plant or soybean seed by obtaining DNA from the soybean seed or soybean plant and by determining the allelic profile at a locus in the genomic region 4.
[0016] A presente invenção também inclui um método de estabelecimento onde uma planta de soja ou semente de soja deve ser cultivada por determinação da combinação alélica de uma planta de soja ou semente de soja pela obtenção de DNA de uma planta de soja ou semente de soja; determinação se um alelo em um locus na região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo em um locus na região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo em um locus na região genômica de maturidade 3 é homozigoto ou heterozigoto; e determinação da combinação alélica dos alelos nas regiões genômicas de maturidade 1,2 e 3.[0016] The present invention also includes a method of establishment where a soybean plant or soybean seed must be grown by determining the allelic combination of a soybean plant or soybean seed by obtaining DNA from a soybean plant or soybean seed. Soy; determining whether an allele at a locus in the genomic region of maturity 1 is homozygous or heterozygous; determining whether an allele at a locus in the genomic region of maturity 2 is homozygous or heterozygous; determining whether an allele at a locus in the maturity 3 genomic region is homozygous or heterozygous; and determination of the allele combination of the alleles in the genomic regions of maturity 1,2 and 3.
[0017] Um aspecto da presente invenção inclui um método de estabelecimento onde uma planta de soja ou semente de soja deve ser cultivada pela determinação da combinação alélica de uma planta de soja pela obtenção de DNA de uma planta de soja ou semente de soja; determinação se um alelo em um locus na região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo em um locus na região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; determinação da combinação alélica dos alelos nas regiões genômicas de maturidade 1 e 2; e atribuição de um valor de crescimento de maturidade à planta de soja ou semente de soja.[0017] One aspect of the present invention includes a method of establishment where a soybean plant or soybean seed must be cultivated by determining the allelic combination of a soybean plant by obtaining DNA from a soybean or soybean plant; determining whether an allele at a locus in the genomic region of maturity 1 is homozygous or heterozygous; determining whether an allele at a locus in the genomic region of maturity 2 is homozygous or heterozygous; determination of the allele combination of alleles in maturity 1 and 2 genomic regions; and assigning a maturity growth value to the soybean plant or soybean seed.
[0018] Em um aspecto da presente invenção, um método de melhoramento da planta de soja inclui o cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da[0018] In one aspect of the present invention, a method of improving the soybean plant includes crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 16/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 16/152
7/114 planta de soja a partir do cruzamento; genotipagem não destrutiva da progênie de uma planta de soja ou semente de soja do cruzamento com um marcador genético caracterizando uma região genômica de maturidade; e seleção de uma planta de soja possuindo um genótipo de um grupo de maturidade desejado.7/114 soybean plant from crossing; non-destructive genotyping of the progeny of a soybean plant or soybean seed of crossing with a genetic marker characterizing a genomic region of maturity; and selection of a soybean plant having a genotype of a desired maturity group.
[0019] Um aspecto da presente invenção inclui um método de seleção de uma planta de soja para melhoria do germoplasma pela determinação de um grupo de maturidade pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da planta de soja a partir do cruzamento; genotipagem não destrutiva de uma progênie da planta de soja ou semente de soja do cruzamento com um marcador genético caracterizando uma região genômica de maturidade; e seleção de uma planta de soja que possui um genótipo para um grupo de maturidade desejado; e incorporação da planta de soja selecionada em um uso selecionado para qualquer uso da planta de soja para melhoramento, reprodução da planta de soja por autofertilização, integração de traço, uso de planta de soja ou partes da mesma para transformação e uso das plantas de soja ou partes das mesmas para mutagênese.[0019] One aspect of the present invention includes a method of selecting a soybean plant for improving germplasm by determining a maturity group by crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of the soybean plant from crossing; non-destructive genotyping of a progeny of the soybean plant or soybean of the crossing with a genetic marker characterizing a genomic region of maturity; and selecting a soybean plant that has a genotype for a desired maturity group; and incorporation of the selected soybean plant in a selected use for any use of the soybean plant for breeding, reproduction of the soybean plant by self-fertilization, trait integration, use of soybean plant or parts of it for transformation and use of soybean plants or parts of them for mutagenesis.
[0020] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de cosseleção de uma planta de soja para expressão de um traço fenotípico de não maturidade e um traço de maturidade pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da planta de soja a partir do cruzamento; genotipagem não destrutiva de uma progênie da planta de soja ou semente de soja do cruzamento com um marcador genético caracterizando uma região genômica de maturidade; e seleção de uma planta de soja possuindo um genótipo para um grupo de maturidade desejado; e determinação da geografia desejada para o crescimento da progênie da planta de soja e um método para determinação do fenótipo de não maturidade.[0020] Another aspect of the present invention includes a method of co-selecting a soybean plant for expression of a phenotypic trait of non-maturity and a trait of maturity by crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of the soybean plant from crossing; non-destructive genotyping of a progeny of the soybean plant or soybean of the crossing with a genetic marker characterizing a genomic region of maturity; and selecting a soybean plant having a genotype for a desired maturity group; and determination of the desired geography for the growth of the soybean plant progeny and a method for determining the non-maturity phenotype.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 17/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 17/152
8/114 [0021] Em um aspecto, a presente invenção inclui um método de melhoramento da planta de soja pela análise de uma planta de soja para a presença de sequências marcadoras selecionadas do grupo consistindo na SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213; e associação da planta de soja com um grupo de maturidade.8/114 [0021] In one aspect, the present invention includes a method of improving the soybean plant by analyzing a soybean plant for the presence of marker sequences selected from the group consisting of SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213; and association of the soybean plant with a maturity group.
[0022] Em outro aspecto, a presente invenção inclui um método de melhoramento da planta de soja compreendendo cruzamento de uma planta de soja parental tendo um traço desejado com uma segunda planta de soja parental, em que as plantas de soja parentais se diferenciam na maturidade da planta de soja por mais de 5 dias, mais de 10 dias, 10 dias a 20 dias ou 10 dias a 30 dias, pelo cruzamento de uma planta de soja parental compreendendo um traço desejado com uma segunda planta de soja parental; obtenção da progênie da semente de soja a partir do cruzamento; classificação de uma progênie da semente de soja para o traço; classificação de uma progênie da semente de soja para um grupo de maturidade desejado usando um marcador selecionado a partir do grupo consistindo na SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213 para determinar a região de crescimento geográfica desejada; e seleção de uma progênie da semente de soja contendo o traço desejado e maturidade de planta de soja desejada.[0022] In another aspect, the present invention includes a soybean breeding method comprising crossing a parent soybean plant having a desired trait with a second parent soybean plant, in which the parent soybean plants differ in maturity the soy plant for more than 5 days, more than 10 days, 10 days to 20 days or 10 days to 30 days, by crossing a parental soy plant comprising a desired trait with a second parental soy plant; obtaining the progeny of the soybean seed from the crossing; classification of a soybean seed progeny for the trait; sorting a soybean seed progeny to a desired maturity group using a marker selected from the group consisting of SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 to determine the desired geographic growth region; and selecting a soybean seed progeny containing the desired trait and maturity of the desired soybean plant.
[0023] Um aspecto da presente invenção inclui um método de melhoramento da planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes, em que as plantas de soja parentais se diferenciam na maturidade da planta de soja por mais de 5 dias, mais de 10 dias, 10 dias a 20 dias, ou 10 dias a 30 dias; obtenção de uma progênie da semente de soja a partir do cruzamento; genotipagem de uma progênie da semente de soja do cruzamento com um marcador genético; e seleção de uma semente de soja possuindo um genótipo para maturidade preferencial.[0023] One aspect of the present invention includes a method of improving the soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants, wherein the parental soybean plants differ in maturity of the soybean plant for more than 5 days, more than 10 days, 10 days to 20 days, or 10 days to 30 days; obtaining a soybean seed progeny from crossing; genotyping of a soybean seed progeny from crossing with a genetic marker; and selection of a soybean seed having a genotype for preferential maturity.
[0024] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de[0024] Another aspect of the present invention includes a method of
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 18/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 18/152
9/114 seleção de sementes de soja com base no grupo de maturidade da planta de soja pela obtenção de DNA de uma semente de soja; determinação se um alelo na região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo na região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo na região genômica de maturidade 3 é homozigoto ou heterozigoto; e atribuição de um valor de crescimento de maturidade à semente de soja.9/114 selection of soybean seeds based on the maturity group of the soybean plant by obtaining DNA from a soybean seed; determining whether an allele in the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele in the maturity 2 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele in the maturity 3 genomic region is homozygous or heterozygous; and assigning a maturity growth value to the soybean seed.
[0025] Um aspecto da presente invenção inclui um método para selecionar uma semente de soja com base no hábito de crescimento indeterminado ou determinado compreendendo determinação se a região genômica de maturidade 3 é homozigota ou heterozigota.[0025] One aspect of the present invention includes a method of selecting a soybean seed based on the habit of indeterminate or determined growth comprising determining whether the maturity 3 genomic region is homozygous or heterozygous.
[0026] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de distribuição de uma planta de soja com base no grupo de maturidade pela obtenção de DNA de uma planta de soja; determinação se um alelo na região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo na região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo na região genômica de maturidade 3 é homozigoto ou heterozigoto; e atribuição de um valor de crescimento de maturidade à planta de soja; e transportar a planta de soja a uma região geográfica preferencial.[0026] Another aspect of the present invention includes a method of distributing a soybean plant based on the maturity group by obtaining DNA from a soybean plant; determining whether an allele in the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele in the maturity 2 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele in the maturity 3 genomic region is homozygous or heterozygous; and assigning a maturity growth value to the soybean plant; and transporting the soy plant to a preferred geographic region.
[0027] Outro aspecto da presente invenção inclui um método para isolar sementes de soja de maturidade indeterminada-precoce pela obtenção de DNA da semente de soja usando um método não destrutivo; determinação se um alelo na região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; e determinação se um alelo na região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto.[0027] Another aspect of the present invention includes a method for isolating soybean seeds of undetermined-early maturity by obtaining DNA from the soybean seed using a non-destructive method; determining whether an allele in the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; and determining whether an allele in the genomic region of maturity 2 is homozygous or heterozygous.
[0028] Um aspecto da presente invenção inclui um método de determinação se uma semente de soja se tornará uma planta de soja que tem um grupo de maturidade de III a VI pela determinação de um marPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 19/152[0028] One aspect of the present invention includes a method of determining whether a soybean seed will become a soybean plant that has a maturity group of III to VI by determining a marPetição 870170047791, 07/07/2017, pg. 19/152
10/114 cador homozigoto ou heterozigoto na semente de soja usando um marcador com a sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 151. [0029] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de determinação se uma semente de soja se tornará uma planta de soja tendo um grupo de maturidade entre 0.0 a III.0 compreendendo determinação se uma inserção de 11 pares de base na sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 149 existe na semente de soja.10/114 homozygous or heterozygous marker in the soybean seed using a marker with the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 151. [0029] Another aspect of the present invention includes a method of determining whether a soybean seed will become a soybeans having a maturity group between 0.0 to III.0 comprising determining whether an 11 base pair insert in the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 149 exists in the soybean seed.
[0030] Um aspecto da presente invenção inclui um método para determinar se uma planta de soja tem um grupo de maturidade de 0.0 a III.9 pela determinação se um alelo na região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo na região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; e atribuição de um valor de grupo de maturidade da planta de soja entre 0.0 e III.9.[0030] One aspect of the present invention includes a method for determining whether a soybean plant has a maturity group of 0.0 to III.9 by determining whether an allele in the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele in the maturity 2 genomic region is homozygous or heterozygous; and assigning a soybean plant maturity group value between 0.0 and III.9.
[0031] Um aspecto da presente invenção é um método de introgressão de um alelo em uma planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da planta de soja a partir do cruzamento; classificação da progênie da planta de soja a partir do cruzamento do alelo; obtenção de DNA de uma semente de soja da progênie da planta de soja usando um método não destrutivo; e seleção de uma semente de soja, em que a semente de soja compreende o alelo e uma sequência de ácidos nucleicos selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 143 a 213.[0031] One aspect of the present invention is a method of introgressing an allele in a soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of the soybean plant from crossing; classification of the progeny of the soybean plant from the crossing of the allele; obtaining DNA from a soybean seed from the progeny of the soybean plant using a non-destructive method; and selecting a soybean seed, wherein the soybean seed comprises the allele and a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 143 to 213.
[0032] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de introdução de um traço desejado em uma planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes, em que pelo menos uma planta de soja parental tem um traço desejado; obtenção de uma progênie da semente de soja a partir do cruzamento; obtenção de DNA de uma semente de soja da progênie da planta de[0032] Another aspect of the present invention includes a method of introducing a desired trait into a soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants, wherein at least one parental soybean plant has a desired trait; obtaining a soybean seed progeny from crossing; obtaining DNA from a soybean seed of the plant progeny
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 20/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 20/152
11/114 soja usando um método não destrutivo; análise da progênie da semente de soja do cruzamento para evidência do traço desejado; e seleção da semente de soja com o traço desejado e um grupo de maturidade desejado. Em um aspecto preferencial, o traço desejado é transgênico. [0033] Um aspecto adicional da presente invenção inclui um método de introgressão de um alelo em uma planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da planta de soja a partir do cruzamento; obtenção de DNA de uma semente de soja da progênie da planta de soja usando um método não destrutivo; e seleção de uma semente de soja com o alelo e uma sequência de ácidos nucleicos selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 143 a 174.11/114 soy using a non-destructive method; analysis of the progeny of the soybean seed of the crossing for evidence of the desired trait; and selection of the soybean seed with the desired trait and a desired maturity group. In a preferred aspect, the desired trait is transgenic. [0033] An additional aspect of the present invention includes a method of introgressing an allele in a soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of the soybean plant from crossing; obtaining DNA from a soybean seed from the progeny of the soybean plant using a non-destructive method; and selecting a soybean seed with the allele and a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 143 to 174.
[0034] Um método de melhoramento da planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes, em que as plantas de soja parentais se diferenciam na maturidade da planta de soja por mais de 10 dias; obtenção de progênie da semente de soja a partir do cruzamento; genotipagem da progênie da semente de soja do cruzamento com um marcador genético selecionado a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 143 a 213; e seleção de uma semente de soja com um grupo de maturidade desejado.[0034] A method of improving the soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants, in which the parental soybean plants differ in maturity of the soybean plant for more than 10 days; obtaining soybean seed progeny from crossing; genotyping of the progeny of the soybean seed of the crossing with a genetic marker selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 143 to 213; and selecting a soybean seed with a desired maturity group.
[0035] Um aspecto da presente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 4 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 175 a 180. Outro aspecto da presente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 5 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 181 a 189. Outro aspecto da presente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 6 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 190 a 196. Outro aspecto da prePetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 21/152[0035] One aspect of the present invention includes a method of detecting the genomic region of maturity 4 by detecting an allele using a marker selected from any of SEQ ID NO: 175 to 180. Another aspect of the present invention includes a method of detecting the genomic region of maturity 5 by detecting an allele using a marker selected from any of SEQ ID NO: 181 to 189. Another aspect of the present invention includes a method of detecting the genomic region of maturity 6 by detecting an allele using a marker selected from any of SEQ ID NO: 190 to 196. Another aspect of prePetition 870170047791, from 07/07/2017, p. 21/152
12/114 sente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 7 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 197 a 203. Outro aspecto da presente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 8 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 204 a 213.12/114 This invention includes a method of detecting the genomic region of maturity 7 by detecting an allele using a marker selected from any of SEQ ID NOs: 197 to 203. Another aspect of the present invention includes a method of detecting the genomic region of maturity 8 by detecting an allele using a marker selected from any of SEQ ID NO: 204 to 213.
[0036] Um aspecto adicional da presente invenção inclui uma planta de soja compreendendo em seu genoma um haplótipo introgresso associado à maturidade, em que a introgressão é facilitada por pelo menos um dos marcadores das SEQ ID NO: 143 a 213.[0036] A further aspect of the present invention includes a soybean plant comprising in its genome an intrograde haplotype associated with maturity, in which introgression is facilitated by at least one of the markers of SEQ ID NO: 143 to 213.
Breve Descrição das Sequências de Ácidos Nucleicos [0037] SEQ ID NO: 1 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 143.Brief Description of Nucleic Acid Sequences [0037] SEQ ID NO: 1 is a PCR sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 143.
[0038] SEQ ID NO: 2 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 143.[0038] SEQ ID NO: 2 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 143.
[0039] SEQ ID NO: 3 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 144.[0039] SEQ ID NO: 3 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 144.
[0040] SEQ ID NO: 4 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 144.[0040] SEQ ID NO: 4 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 144.
[0041] SEQ ID NO: 5 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 145.[0041] SEQ ID NO: 5 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 145.
[0042] SEQ ID NO: 6 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 145.[0042] SEQ ID NO: 6 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 145.
[0043] SEQ ID NO: 7 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 146.[0043] SEQ ID NO: 7 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 146.
[0044] SEQ ID NO: 8 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 146.[0044] SEQ ID NO: 8 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 146.
[0045] SEQ ID NO: 9 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 147.[0045] SEQ ID NO: 9 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 147.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 22/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 22/152
13/114 [0046] SEQ ID NO: 10 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 147.13/114 [0046] SEQ ID NO: 10 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 147.
[0047] SEQ ID NO: 11 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 148.[0047] SEQ ID NO: 11 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 148.
[0048] SEQ ID NO: 12 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 148.[0048] SEQ ID NO: 12 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 148.
[0049] SEQ ID NO: 13 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 149.[0049] SEQ ID NO: 13 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 149.
[0050] SEQ ID NO: 14 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 149.[0050] SEQ ID NO: 14 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 149.
[0051] SEQ ID NO: 15 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 150.[0051] SEQ ID NO: 15 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 150.
[0052] SEQ ID NO: 16 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 150.[0052] SEQ ID NO: 16 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 150.
[0053] SEQ ID NO: 17 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 151.[0053] SEQ ID NO: 17 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 151.
[0054] SEQ ID NO: 18 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 151.[0054] SEQ ID NO: 18 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 151.
[0055] SEQ ID NO: 19 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 152.[0055] SEQ ID NO: 19 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 152.
[0056] SEQ ID NO: 20 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 152.[0056] SEQ ID NO: 20 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 152.
[0057] SEQ ID NO: 21 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 153.[0057] SEQ ID NO: 21 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 153.
[0058] SEQ ID NO: 22 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 153.[0058] SEQ ID NO: 22 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 153.
[0059] SEQ ID NO: 23 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 154.[0059] SEQ ID NO: 23 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 154.
[0060] SEQ ID NO: 24 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 154.[0060] SEQ ID NO: 24 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 154.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 23/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 23/152
14/114 [0061] SEQ ID NO: 25 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 155.14/114 [0061] SEQ ID NO: 25 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 155.
[0062] SEQ ID NO: 26 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 155.[0062] SEQ ID NO: 26 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 155.
[0063] SEQ ID NO: 27 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 156.[0063] SEQ ID NO: 27 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 156.
[0064] SEQ ID NO: 28 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 156.[0064] SEQ ID NO: 28 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 156.
[0065] SEQ ID NO: 29 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 157.[0065] SEQ ID NO: 29 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 157.
[0066] SEQ ID NO: 30 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 157.[0066] SEQ ID NO: 30 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 157.
[0067] SEQ ID NO: 31 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 158.[0067] SEQ ID NO: 31 is a PCR forward primer for amplification of SEQ ID NO: 158.
[0068] SEQ ID NO: 32 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 158.[0068] SEQ ID NO: 32 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 158.
[0069] SEQ ID NO: 33 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 159.[0069] SEQ ID NO: 33 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 159.
[0070] SEQ ID NO: 34 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 159.[0070] SEQ ID NO: 34 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 159.
[0071] SEQ ID NO: 35 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 160.[0071] SEQ ID NO: 35 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 160.
[0072] SEQ ID NO: 36 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 160.[0072] SEQ ID NO: 36 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 160.
[0073] SEQ ID NO: 37 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 161.[0073] SEQ ID NO: 37 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 161.
[0074] SEQ ID NO: 38 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 161.[0074] SEQ ID NO: 38 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 161.
[0075] SEQ ID NO: 39 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 162.[0075] SEQ ID NO: 39 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 162.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 24/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 24/152
15/114 [0076] SEQ ID NO: 40 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 162.15/114 [0076] SEQ ID NO: 40 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 162.
[0077] SEQ ID NO: 41 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 163.[0077] SEQ ID NO: 41 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 163.
[0078] SEQ ID NO: 42 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 163.[0078] SEQ ID NO: 42 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 163.
[0079] SEQ ID NO: 43 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 164.[0079] SEQ ID NO: 43 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 164.
[0080] SEQ ID NO: 44 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 164.[0080] SEQ ID NO: 44 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 164.
[0081] SEQ ID NO: 45 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 165.[0081] SEQ ID NO: 45 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 165.
[0082] SEQ ID NO: 46 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 165.[0082] SEQ ID NO: 46 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 165.
[0083] SEQ ID NO: 47 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 166.[0083] SEQ ID NO: 47 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 166.
[0084] SEQ ID NO: 48 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 166.[0084] SEQ ID NO: 48 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 166.
[0085] SEQ ID NO: 49 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 167.[0085] SEQ ID NO: 49 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 167.
[0086] SEQ ID NO: 50 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 167.[0086] SEQ ID NO: 50 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 167.
[0087] SEQ ID NO: 51 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 168.[0087] SEQ ID NO: 51 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 168.
[0088] SEQ ID NO: 52 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 168.[0088] SEQ ID NO: 52 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 168.
[0089] SEQ ID NO: 53 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 169.[0089] SEQ ID NO: 53 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 169.
[0090] SEQ ID NO: 54 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 169.[0090] SEQ ID NO: 54 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 169.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 25/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 25/152
16/114 [0091] SEQ ID NO: 55 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 170.16/114 [0091] SEQ ID NO: 55 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 170.
[0092] SEQ ID NO: 56 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 170.[0092] SEQ ID NO: 56 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 170.
[0093] SEQ ID NO: 57 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 171.[0093] SEQ ID NO: 57 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 171.
[0094] SEQ ID NO: 58 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 171.[0094] SEQ ID NO: 58 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 171.
[0095] SEQ ID NO: 59 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 172.[0095] SEQ ID NO: 59 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 172.
[0096] SEQ ID NO: 60 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 172.[0096] SEQ ID NO: 60 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 172.
[0097] SEQ ID NO: 61 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 173.[0097] SEQ ID NO: 61 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 173.
[0098] SEQ ID NO: 62 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 173.[0098] SEQ ID NO: 62 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 173.
[0099] SEQ ID NO: 63 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 174.[0099] SEQ ID NO: 63 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 174.
[00100] SEQ ID NO: 64 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 174.[00100] SEQ ID NO: 64 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 174.
[00101] SEQ ID NO: 65 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 175.[00101] SEQ ID NO: 65 is a PCR sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 175.
[00102] SEQ ID NO: 66 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 175.[00102] SEQ ID NO: 66 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 175.
[00103] SEQ ID NO: 67 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 176.[00103] SEQ ID NO: 67 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 176.
[00104] SEQ ID NO: 68 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 176.[00104] SEQ ID NO: 68 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 176.
[00105] SEQ ID NO: 69 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 177.[00105] SEQ ID NO: 69 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 177.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 26/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 26/152
17/114 [00106] SEQ ID NO: 70 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 177.17/114 [00106] SEQ ID NO: 70 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 177.
[00107] SEQ ID NO: 71 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 178.[00107] SEQ ID NO: 71 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 178.
[00108] SEQ ID NO: 72 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 178.[00108] SEQ ID NO: 72 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 178.
[00109] SEQ ID NO: 73 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 179.[00109] SEQ ID NO: 73 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 179.
[00110] SEQ ID NO: 74 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 179.[00110] SEQ ID NO: 74 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 179.
[00111] SEQ ID NO: 75 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 180.[00111] SEQ ID NO: 75 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 180.
[00112] SEQ ID NO: 76 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 180.[00112] SEQ ID NO: 76 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 180.
[00113] SEQ ID NO: 77 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 181.[00113] SEQ ID NO: 77 is a PCR sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 181.
[00114] SEQ ID NO: 78 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 181.[00114] SEQ ID NO: 78 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 181.
[00115] SEQ ID NO: 79 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 182.[00115] SEQ ID NO: 79 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 182.
[00116] SEQ ID NO: 80 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 182.[00116] SEQ ID NO: 80 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 182.
[00117] SEQ ID NO: 81 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 183.[00117] SEQ ID NO: 81 is a PCR sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 183.
[00118] SEQ ID NO: 82 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 183.[00118] SEQ ID NO: 82 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 183.
[00119] SEQ ID NO: 83 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 184.[00119] SEQ ID NO: 83 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 184.
[00120] SEQ ID NO: 84 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 184.[00120] SEQ ID NO: 84 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 184.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 27/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 27/152
18/114 [00121] SEQ ID NO: 85 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 185.18/114 [00121] SEQ ID NO: 85 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 185.
[00122] SEQ ID NO: 86 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 185.[00122] SEQ ID NO: 86 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 185.
[00123] SEQ ID NO: 87 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 186.[00123] SEQ ID NO: 87 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 186.
[00124] SEQ ID NO: 88 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 186.[00124] SEQ ID NO: 88 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 186.
[00125] SEQ ID NO: 89 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 187.[00125] SEQ ID NO: 89 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 187.
[00126] SEQ ID NO: 90 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 187.[00126] SEQ ID NO: 90 is a PCR antisense primer for the amplification of SEQ ID NO: 187.
[00127] SEQ ID NO: 91 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 188.[00127] SEQ ID NO: 91 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 188.
[00128] SEQ ID NO: 92 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 188.[00128] SEQ ID NO: 92 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 188.
[00129] SEQ ID NO: 93 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 189.[00129] SEQ ID NO: 93 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 189.
[00130] SEQ ID NO: 94 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 189.[00130] SEQ ID NO: 94 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 189.
[00131] SEQ ID NO: 95 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 190.[00131] SEQ ID NO: 95 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 190.
[00132] SEQ ID NO: 96 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 190.[00132] SEQ ID NO: 96 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 190.
[00133] SEQ ID NO: 97 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 191.[00133] SEQ ID NO: 97 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 191.
[00134] SEQ ID NO: 98 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 191.[00134] SEQ ID NO: 98 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 191.
[00135] SEQ ID NO: 99 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 192.[00135] SEQ ID NO: 99 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 192.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 28/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 28/152
19/114 [00136] SEQ ID NO: 100 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 192.19/114 [00136] SEQ ID NO: 100 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 192.
[00137] SEQ ID NO: 101 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 193.[00137] SEQ ID NO: 101 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 193.
[00138] SEQ ID NO: 102 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 193.[00138] SEQ ID NO: 102 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 193.
[00139] SEQ ID NO: 103 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 194.[00139] SEQ ID NO: 103 is a PCR sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 194.
[00140] SEQ ID NO: 104 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 194.[00140] SEQ ID NO: 104 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 194.
[00141] SEQ ID NO: 105 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 195.[00141] SEQ ID NO: 105 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 195.
[00142] SEQ ID NO: 106 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 195.[00142] SEQ ID NO: 106 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 195.
[00143] SEQ ID NO: 107 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO:196.[00143] SEQ ID NO: 107 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 196.
[00144] SEQ ID NO: 108 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 196.[00144] SEQ ID NO: 108 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 196.
[00145] SEQ ID NO: 109 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 197.[00145] SEQ ID NO: 109 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 197.
[00146] SEQ ID NO: 110 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 197.[00146] SEQ ID NO: 110 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 197.
[00147] SEQ ID NO: 111 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 198.[00147] SEQ ID NO: 111 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 198.
[00148] SEQ ID NO: 112 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 198.[00148] SEQ ID NO: 112 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 198.
[00149] SEQ ID NO: 113 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 199.[00149] SEQ ID NO: 113 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 199.
[00150] SEQ ID NO: 114 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 199.[00150] SEQ ID NO: 114 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 199.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 29/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 29/152
20/114 [00151] SEQ ID NO: 115 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 200.20/114 [00151] SEQ ID NO: 115 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 200.
[00152] SEQ ID NO: 116 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 200.[00152] SEQ ID NO: 116 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 200.
[00153] SEQ ID NO: 117 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 201.[00153] SEQ ID NO: 117 is a PCR forward sense primer for amplification of SEQ ID NO: 201.
[00154] SEQ ID NO: 118 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 201.[00154] SEQ ID NO: 118 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 201.
[00155] SEQ ID NO: 119 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 202.[00155] SEQ ID NO: 119 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 202.
[00156] SEQ ID NO: 120 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 202.[00156] SEQ ID NO: 120 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 202.
[00157] SEQ ID NO: 121 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 203.[00157] SEQ ID NO: 121 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 203.
[00158] SEQ ID NO: 122 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 203.[00158] SEQ ID NO: 122 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 203.
[00159] SEQ ID NO: 123 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 204.[00159] SEQ ID NO: 123 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 204.
[00160] SEQ ID NO: 124 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 204.[00160] SEQ ID NO: 124 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 204.
[00161] SEQ ID NO: 125 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 205.[00161] SEQ ID NO: 125 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 205.
[00162] SEQ ID NO: 126 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 205.[00162] SEQ ID NO: 126 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 205.
[00163] SEQ ID NO: 127 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 206.[00163] SEQ ID NO: 127 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 206.
[00164] SEQ ID NO: 128 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 206.[00164] SEQ ID NO: 128 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 206.
[00165] SEQ ID NO: 129 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 207.[00165] SEQ ID NO: 129 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 207.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 30/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 30/152
21/114 [00166] SEQ ID NO: 130 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 207.21/114 [00166] SEQ ID NO: 130 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 207.
[00167] SEQ ID NO: 131 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 208.[00167] SEQ ID NO: 131 is a PCR sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 208.
[00168] SEQ ID NO: 132 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 208.[00168] SEQ ID NO: 132 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 208.
[00169] SEQ ID NO: 133 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 209.[00169] SEQ ID NO: 133 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 209.
[00170] SEQ ID NO: 134 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 209.[00170] SEQ ID NO: 134 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 209.
[00171] SEQ ID NO: 135 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 210.[00171] SEQ ID NO: 135 is a PCR sense primer for amplification of SEQ ID NO: 210.
[00172] SEQ ID NO: 136 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 210.[00172] SEQ ID NO: 136 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 210.
[00173] SEQ ID NO: 137 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 211.[00173] SEQ ID NO: 137 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 211.
[00174] SEQ ID NO: 138 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 211.[00174] SEQ ID NO: 138 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 211.
[00175] SEQ ID NO: 139 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 212.[00175] SEQ ID NO: 139 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 212.
[00176] SEQ ID NO: 140 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 212.[00176] SEQ ID NO: 140 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 212.
[00177] SEQ ID NO: 141 é um iniciador de sentido direto da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 213.[00177] SEQ ID NO: 141 is a PCR forward sense primer for the amplification of SEQ ID NO: 213.
[00178] SEQ ID NO: 142 é um iniciador de sentido reverso da PCR para a amplificação da SEQ ID NO: 213.[00178] SEQ ID NO: 142 is a PCR antisense primer for amplification of SEQ ID NO: 213.
[00179] SEQ ID NO: 143 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00179] SEQ ID NO: 143 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 1.
[00180] SEQ ID NO: 144 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00180] SEQ ID NO: 144 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 1.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 31/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 31/152
22/114 [00181] SEQ ID NO: 145 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.22/114 [00181] SEQ ID NO: 145 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to maturity 1 locus.
[00182] SEQ ID NO: 146 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00182] SEQ ID NO: 146 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 1.
[00183] SEQ ID NO: 147 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00183] SEQ ID NO: 147 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 1.
[00184] SEQ ID NO: 148 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00184] SEQ ID NO: 148 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 1.
[00185] SEQ ID NO: 149 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00185] SEQ ID NO: 149 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 1.
[00186] SEQ ID NO: 150 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00186] SEQ ID NO: 150 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 1.
[00187] SEQ ID NO: 151 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00187] SEQ ID NO: 151 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 1.
[00188] SEQ ID NO: 152 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00188] SEQ ID NO: 152 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 1.
[00189] SEQ ID NO: 153 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00189] SEQ ID NO: 153 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 1.
[00190] SEQ ID NO: 154 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00190] SEQ ID NO: 154 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 1.
[00191] SEQ ID NO: 155 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 1.[00191] SEQ ID NO: 155 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 1.
[00192] SEQ ID NO: 156 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 2.[00192] SEQ ID NO: 156 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 2.
[00193] SEQ ID NO: 157 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 2.[00193] SEQ ID NO: 157 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity 2 locus.
[00194] SEQ ID NO: 158 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 2.[00194] SEQ ID NO: 158 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 2.
[00195] SEQ ID NO: 159 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 2.[00195] SEQ ID NO: 159 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity 2 locus.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 32/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 32/152
23/114 [00196] SEQ ID NO: 160 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 2.23/114 [00196] SEQ ID NO: 160 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity 2 locus.
[00197] SEQ ID NO: 161 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 2.[00197] SEQ ID NO: 161 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 2.
[00198] SEQ ID NO: 162 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00198] SEQ ID NO: 162 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 3.
[00199] SEQ ID NO: 163 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00199] SEQ ID NO: 163 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 3.
[00200] SEQ ID NO: 164 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00200] SEQ ID NO: 164 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 3.
[00201] SEQ ID NO: 165 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00201] SEQ ID NO: 165 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 3.
[00202] SEQ ID NO: 166 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00202] SEQ ID NO: 166 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 3.
[00203] SEQ ID NO: 167 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00203] SEQ ID NO: 167 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 3.
[00204] SEQ ID NO: 168 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00204] SEQ ID NO: 168 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 3.
[00205] SEQ ID NO: 169 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00205] SEQ ID NO: 169 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 3.
[00206] SEQ ID NO: 170 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00206] SEQ ID NO: 170 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 3.
[00207] SEQ ID NO: 171 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00207] SEQ ID NO: 171 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 3.
[00208] SEQ ID NO: 172 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00208] SEQ ID NO: 172 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 3.
[00209] SEQ ID NO: 173 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00209] SEQ ID NO: 173 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 3.
[00210] SEQ ID NO: 174 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 3.[00210] SEQ ID NO: 174 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 3.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 33/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 33/152
24/114 [00211] SEQ ID NO: 175 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 4.24/114 [00211] SEQ ID NO: 175 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 4.
[00212] SEQ ID NO: 176 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 4.[00212] SEQ ID NO: 176 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 4.
[00213] SEQ ID NO: 177 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 4.[00213] SEQ ID NO: 177 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 4.
[00214] SEQ ID NO: 178 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 4.[00214] SEQ ID NO: 178 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 4.
[00215] SEQ ID NO: 179 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 4.[00215] SEQ ID NO: 179 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 4.
[00216] SEQ ID NO: 180 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 4.[00216] SEQ ID NO: 180 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 4.
[00217] SEQ ID NO: 181 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 5.[00217] SEQ ID NO: 181 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 5.
[00218] SEQ ID NO: 182 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 5.[00218] SEQ ID NO: 182 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 5.
[00219] SEQ ID NO: 183 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 5.[00219] SEQ ID NO: 183 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 5.
[00220] SEQ ID NO: 184 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 5.[00220] SEQ ID NO: 184 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 5.
[00221] SEQ ID NO: 185 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 5.[00221] SEQ ID NO: 185 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 5.
[00222] SEQ ID NO: 186 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 5.[00222] SEQ ID NO: 186 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 5.
[00223] SEQ ID NO: 187 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 5.[00223] SEQ ID NO: 187 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 5.
[00224] SEQ ID NO: 188 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 5.[00224] SEQ ID NO: 188 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 5.
[00225] SEQ ID NO: 189 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 5.[00225] SEQ ID NO: 189 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 5.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 34/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 34/152
25/114 [00226] SEQ ID NO: 190 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 6.25/114 [00226] SEQ ID NO: 190 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 6.
[00227] SEQ ID NO: 191 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 6.[00227] SEQ ID NO: 191 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 6.
[00228] SEQ ID NO: 192 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 6.[00228] SEQ ID NO: 192 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 6.
[00229] SEQ ID NO: 193 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 6.[00229] SEQ ID NO: 193 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 6.
[00230] SEQ ID NO: 194 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 6.[00230] SEQ ID NO: 194 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 6.
[00231] SEQ ID NO: 195 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 6.[00231] SEQ ID NO: 195 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the locus of maturity 6.
[00232] SEQ ID NO: 196 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 6.[00232] SEQ ID NO: 196 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the locus of maturity 6.
[00233] SEQ ID NO: 197 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 7.[00233] SEQ ID NO: 197 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 7.
[00234] SEQ ID NO: 198 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 7.[00234] SEQ ID NO: 198 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 7.
[00235] SEQ ID NO: 199 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 7.[00235] SEQ ID NO: 199 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 7.
[00236] SEQ ID NO: 200 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 7.[00236] SEQ ID NO: 200 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 7.
[00237] SEQ ID NO: 201 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 7.[00237] SEQ ID NO: 201 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 7.
[00238] SEQ ID NO: 202 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 7.[00238] SEQ ID NO: 202 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 7.
[00239] SEQ ID NO: 203 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 7.[00239] SEQ ID NO: 203 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 7.
[00240] SEQ ID NO: 204 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.[00240] SEQ ID NO: 204 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 8.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 35/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 35/152
26/114 [00241] SEQ ID NO: 205 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.26/114 [00241] SEQ ID NO: 205 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 8.
[00242] SEQ ID NO: 206 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.[00242] SEQ ID NO: 206 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 8.
[00243] SEQ ID NO: 207 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.[00243] SEQ ID NO: 207 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 8.
[00244] SEQ ID NO: 208 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.[00244] SEQ ID NO: 208 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 8.
[00245] SEQ ID NO: 209 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.[00245] SEQ ID NO: 209 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 8.
[00246] SEQ ID NO: 210 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.[00246] SEQ ID NO: 210 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 8.
[00247] SEQ ID NO: 211 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.[00247] SEQ ID NO: 211 is a genomic sequence derived from Soy corresponding to the maturity locus 8.
[00248] SEQ ID NO: 212 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.[00248] SEQ ID NO: 212 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 8.
[00249] SEQ ID NO: 213 é uma sequência genômica derivada a partir de Soja correspondendo ao locus de maturidade 8.[00249] SEQ ID NO: 213 is a genomic sequence derived from soybean corresponding to the maturity locus 8.
[00250] SEQ ID NO: 214 é uma sonda para a detecção do SNP da SEQ ID NO: 143.[00250] SEQ ID NO: 214 is a probe for the detection of the SNP of SEQ ID NO: 143.
[00251] SEQ ID NO: 215 é uma sonda para a detecção do SNP da SEQ ID NO: 143.[00251] SEQ ID NO: 215 is a probe for the detection of the SNP of SEQ ID NO: 143.
[00252] SEQ ID NO: 216 é uma sonda para a detecção do SNP da SEQ ID NO: 144.[00252] SEQ ID NO: 216 is a probe for the detection of the SNP of SEQ ID NO: 144.
[00253] SEQ ID NO: 217 é uma sonda para a detecção do SNP da SEQ ID NO: 144.[00253] SEQ ID NO: 217 is a probe for the detection of the SNP of SEQ ID NO: 144.
[00254] SEQ ID NO: 218 é uma sonda para a detecção do SNP da[00254] SEQ ID NO: 218 is a probe for the detection of the SNP of
SEQ ID NO: 145.SEQ ID NO: 145.
[00255] SEQ ID NO: 219 é uma sonda para a detecção do SNP da[00255] SEQ ID NO: 219 is a probe for the detection of the SNP of
SEQ ID NO: 145.SEQ ID NO: 145.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 36/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 36/152
27/114 [00256] SEQ ID NO SEQ ID NO: 146. [00257] SEQ ID NO SEQ ID NO: 146. [00258] SEQ ID NO SEQ ID NO: 147. [00259] SEQ ID NO SEQ ID NO: 147. [00260] SEQ ID NO SEQ ID NO: 148. [00261] SEQ ID NO SEQ ID NO: 148. [00262] SEQ ID NO SEQ ID NO: 149. [00263] SEQ ID NO SEQ ID NO: 149. [00264] SEQ ID NO SEQ ID NO: 150. [00265] SEQ ID NO SEQ ID NO: 150. [00266] SEQ ID NO SEQ ID NO: 151. [00267] SEQ ID NO SEQ ID NO: 151. [00268] SEQ ID NO SEQ ID NO: 152. [00269] SEQ ID NO SEQ ID NO: 152. [00270] SEQ ID NO SEQ ID NO: 153.27/114 [00256] SEQ ID NO SEQ ID NO: 146. [00257] SEQ ID NO SEQ ID NO: 146. [00258] SEQ ID NO SEQ ID NO: 147. [00259] SEQ ID NO SEQ ID NO: 147 [00260] SEQ ID NO SEQ ID NO: 148. [00261] SEQ ID NO SEQ ID NO: 148. [00262] SEQ ID NO SEQ ID NO: 149. [00263] SEQ ID NO SEQ ID NO: 149. [ 00264] SEQ ID NO SEQ ID NO: 150. [00265] SEQ ID NO SEQ ID NO: 150. [00266] SEQ ID NO SEQ ID NO: 151. [00267] SEQ ID NO SEQ ID NO: 151. [00268] SEQ ID NO SEQ ID NO: 152. [00269] SEQ ID NO SEQ ID NO: 152. [00270] SEQ ID NO SEQ ID NO: 153.
220 é uma sonda para a220 is a probe for the
221 é uma sonda para a221 is a probe for the
222 é uma sonda para a222 is a probe for the
223 é uma sonda para a223 is a probe for the
224 é uma sonda para a224 is a probe for the
225 é uma sonda para a225 is a probe for the
226 é uma sonda para a226 is a probe for the
227 é uma sonda para a227 is a probe for the
228 é uma sonda para a228 is a probe for the
229 é uma sonda para a229 is a probe for the
230 é uma sonda para a230 is a probe for the
231 é uma sonda para a231 is a probe for the
232 é uma sonda para a232 is a probe for the
233 é uma sonda para a233 is a probe for the
234 é uma sonda para a detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da234 is a probe for SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 37/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 37/152
28/114 [00271] SEQ ID NO SEQ ID NO: 153. [00272] SEQ ID NO SEQ ID NO: 154. [00273] SEQ ID NO SEQ ID NO: 154. [00274] SEQ ID NO SEQ ID NO: 155. [00275] SEQ ID NO SEQ ID NO: 155. [00276] SEQ ID NO SEQ ID NO: 156. [00277] SEQ ID NO SEQ ID NO: 156. [00278] SEQ ID NO SEQ ID NO: 157. [00279] SEQ ID NO SEQ ID NO: 157. [00280] SEQ ID NO SEQ ID NO: 158. [00281] SEQ ID NO SEQ ID NO: 158. [00282] SEQ ID NO SEQ ID NO: 159. [00283] SEQ ID NO SEQ ID NO: 159. [00284] SEQ ID NO SEQ ID NO: 160. [00285] SEQ ID NO SEQ ID NO: 160.28/114 [00271] SEQ ID NO SEQ ID NO: 153. [00272] SEQ ID NO SEQ ID NO: 154. [00273] SEQ ID NO SEQ ID NO: 154. [00274] SEQ ID NO SEQ ID NO: 155 [00275] SEQ ID NO SEQ ID NO: 155. [00276] SEQ ID NO SEQ ID NO: 156. [00277] SEQ ID NO SEQ ID NO: 156. [00278] SEQ ID NO SEQ ID NO: 157. [ 00279] SEQ ID NO SEQ ID NO: 157. [00280] SEQ ID NO SEQ ID NO: 158. [00281] SEQ ID NO SEQ ID NO: 158. [00282] SEQ ID NO SEQ ID NO: 159. [00283] SEQ ID NO SEQ ID NO: 159. [00284] SEQ ID NO SEQ ID NO: 160. [00285] SEQ ID NO SEQ ID NO: 160.
235 é uma sonda para a235 is a probe for the
236 é uma sonda para a236 is a probe for
237 é uma sonda para a237 is a probe for the
238 é uma sonda para a238 is a probe for the
239 é uma sonda para a239 is a probe for the
240 é uma sonda para a240 is a probe for the
241 é uma sonda para a241 is a probe for the
242 é uma sonda para a242 is a probe for the
243 é uma sonda para a243 is a probe for the
244 é uma sonda para a244 is a probe for the
245 é uma sonda para a245 is a probe for the
246 é uma sonda para a246 is a probe for the
247 é uma sonda para a247 is a probe for the
248 é uma sonda para a248 is a probe for the
249 é uma sonda para a detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da249 is a probe for SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 38/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 38/152
29/114 [00286] SEQ ID NO SEQ ID NO: 161. [00287] SEQ ID NO SEQ ID NO: 161. [00288] SEQ ID NO SEQ ID NO: 162. [00289] SEQ ID NO SEQ ID NO: 162. [00290] SEQ ID NO SEQ ID NO: 163. [00291] SEQ ID NO SEQ ID NO: 163. [00292] SEQ ID NO SEQ ID NO: 164. [00293] SEQ ID NO SEQ ID NO: 164. [00294] SEQ ID NO SEQ ID NO: 165. [00295] SEQ ID NO SEQ ID NO: 165. [00296] SEQ ID NO SEQ ID NO: 166. [00297] SEQ ID NO SEQ ID NO: 166. [00298] SEQ ID NO SEQ ID NO: 167. [00299] SEQ ID NO SEQ ID NO: 167. [00300] SEQ ID NO SEQ ID NO: 168.29/114 [00286] SEQ ID NO SEQ ID NO: 161. [00287] SEQ ID NO SEQ ID NO: 161. [00288] SEQ ID NO SEQ ID NO: 162. [00289] SEQ ID NO SEQ ID NO: 162 [00290] SEQ ID NO SEQ ID NO: 163. [00291] SEQ ID NO SEQ ID NO: 163. [00292] SEQ ID NO SEQ ID NO: 164. [00293] SEQ ID NO SEQ ID NO: 164. [ 00294] SEQ ID NO SEQ ID NO: 165. [00295] SEQ ID NO SEQ ID NO: 165. [00296] SEQ ID NO SEQ ID NO: 166. [00297] SEQ ID NO SEQ ID NO: 166. [00298] SEQ ID NO SEQ ID NO: 167. [00299] SEQ ID NO SEQ ID NO: 167. [00300] SEQ ID NO SEQ ID NO: 168.
250 é uma sonda para a250 is a probe for the
251 é uma sonda para a251 is a probe for the
252 é uma sonda para a252 is a probe for the
253 é uma sonda para a253 is a probe for the
254 é uma sonda para a254 is a probe for the
255 é uma sonda para a255 is a probe for the
256 é uma sonda para a256 is a probe for the
257 é uma sonda para a257 is a probe for the
258 é uma sonda para a258 is a probe for the
259 é uma sonda para a259 is a probe for the
260 é uma sonda para a260 is a probe for the
261 é uma sonda para a261 is a probe for the
262 é uma sonda para a262 is a probe for the
263 é uma sonda para a263 is a probe for the
264 é uma sonda para a detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da264 is a probe for SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 39/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 39/152
30/114 [00301] SEQ ID NO SEQ ID NO: 168. [00302] SEQ ID NO SEQ ID NO: 169. [00303] SEQ ID NO SEQ ID NO: 169. [00304] SEQ ID NO SEQ ID NO: 170. [00305] SEQ ID NO SEQ ID NO: 170. [00306] SEQ ID NO SEQ ID NO: 171. [00307] SEQ ID NO SEQ ID NO: 171. [00308] SEQ ID NO SEQ ID NO: 172. [00309] SEQ ID NO SEQ ID NO: 172. [00310] SEQ ID NO SEQ ID NO: 173. [00311] SEQ ID NO SEQ ID NO: 173. [00312] SEQ ID NO SEQ ID NO: 174. [00313] SEQ ID NO SEQ ID NO: 174. [00314] SEQ ID NO SEQ ID NO: 175. [00315] SEQ ID NO SEQ ID NO: 175.30/114 [00301] SEQ ID NO SEQ ID NO: 168. [00302] SEQ ID NO SEQ ID NO: 169. [00303] SEQ ID NO SEQ ID NO: 169. [00304] SEQ ID NO SEQ ID NO: 170 [00305] SEQ ID NO SEQ ID NO: 170. [00306] SEQ ID NO SEQ ID NO: 171. [00307] SEQ ID NO SEQ ID NO: 171. [00308] SEQ ID NO SEQ ID NO: 172. [ 00309] SEQ ID NO SEQ ID NO: 172. [00310] SEQ ID NO SEQ ID NO: 173. [00311] SEQ ID NO SEQ ID NO: 173. [00312] SEQ ID NO SEQ ID NO: 174. [00313] SEQ ID NO SEQ ID NO: 174. [00314] SEQ ID NO SEQ ID NO: 175. [00315] SEQ ID NO SEQ ID NO: 175.
265 é uma sonda para a265 is a probe for the
266 é uma sonda para a266 is a probe for the
267 é uma sonda para a267 is a probe for the
268 é uma sonda para a268 is a probe for the
269 é uma sonda para a269 is a probe for the
270 é uma sonda para a270 is a probe for the
271 é uma sonda para a271 is a probe for the
272 é uma sonda para a272 is a probe for the
273 é uma sonda para a273 is a probe for the
274 é uma sonda para a274 is a probe for the
275 é uma sonda para a275 is a probe for the
276 é uma sonda para a276 is a probe for the
277 é uma sonda para a277 is a probe for the
278 é uma sonda para a278 is a probe for the
279 é uma sonda para a detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da279 is a probe for SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 40/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 40/152
31/114 [00316] SEQ ID NO SEQ ID NO: 176. [00317] SEQ ID NO SEQ ID NO: 176. [00318] SEQ ID NO SEQ ID NO: 177. [00319] SEQ ID NO SEQ ID NO: 177. [00320] SEQ ID NO SEQ ID NO: 178. [00321] SEQ ID NO SEQ ID NO: 178. [00322] SEQ ID NO SEQ ID NO: 179. [00323] SEQ ID NO SEQ ID NO: 179. [00324] SEQ ID NO SEQ ID NO: 180. [00325] SEQ ID NO SEQ ID NO: 180. [00326] SEQ ID NO SEQ ID NO: 181. [00327] SEQ ID NO SEQ ID NO: 181. [00328] SEQ ID NO SEQ ID NO: 182. [00329] SEQ ID NO SEQ ID NO: 182. [00330] SEQ ID NO SEQ ID NO: 183.31/114 [00316] SEQ ID NO SEQ ID NO: 176. [00317] SEQ ID NO SEQ ID NO: 176. [00318] SEQ ID NO SEQ ID NO: 177. [00319] SEQ ID NO SEQ ID NO: 177 [00320] SEQ ID NO SEQ ID NO: 178. [00321] SEQ ID NO SEQ ID NO: 178. [00322] SEQ ID NO SEQ ID NO: 179. [00323] SEQ ID NO SEQ ID NO: 179. [ 00324] SEQ ID NO SEQ ID NO: 180. [00325] SEQ ID NO SEQ ID NO: 180. [00326] SEQ ID NO SEQ ID NO: 181. [00327] SEQ ID NO SEQ ID NO: 181. [00328] SEQ ID NO SEQ ID NO: 182. [00329] SEQ ID NO SEQ ID NO: 182. [00330] SEQ ID NO SEQ ID NO: 183.
280 é uma sonda para a280 is a probe for the
281 é uma sonda para a281 is a probe for the
282 é uma sonda para a282 is a probe for the
283 é uma sonda para a283 is a probe for the
284 é uma sonda para a284 is a probe for the
285 é uma sonda para a285 is a probe for the
286 é uma sonda para a286 is a probe for the
287 é uma sonda para a287 is a probe for the
288 é uma sonda para a288 is a probe for the
289 é uma sonda para a289 is a probe for the
290 é uma sonda para a290 is a probe for the
291 é uma sonda para a291 is a probe for the
292 é uma sonda para a292 is a probe for the
293 é uma sonda para a293 is a probe for the
294 é uma sonda para a detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da294 is a probe for SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 41/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 41/152
32/114 [00331] SEQ ID NO SEQ ID NO: 183. [00332] SEQ ID NO SEQ ID NO: 184. [00333] SEQ ID NO SEQ ID NO: 184. [00334] SEQ ID NO SEQ ID NO: 185. [00335] SEQ ID NO SEQ ID NO: 185. [00336] SEQ ID NO SEQ ID NO: 186. [00337] SEQ ID NO SEQ ID NO: 186. [00338] SEQ ID NO SEQ ID NO: 187. [00339] SEQ ID NO SEQ ID NO: 187. [00340] SEQ ID NO SEQ ID NO: 188. [00341] SEQ ID NO SEQ ID NO: 188. [00342] SEQ ID NO SEQ ID NO: 189. [00343] SEQ ID NO SEQ ID NO: 189. [00344] SEQ ID NO SEQ ID NO: 190. [00345] SEQ ID NO SEQ ID NO: 190.32/114 [00331] SEQ ID NO SEQ ID NO: 183. [00332] SEQ ID NO SEQ ID NO: 184. [00333] SEQ ID NO SEQ ID NO: 184. [00334] SEQ ID NO SEQ ID NO: 185 [00335] SEQ ID NO SEQ ID NO: 185. [00336] SEQ ID NO SEQ ID NO: 186. [00337] SEQ ID NO SEQ ID NO: 186. [00338] SEQ ID NO SEQ ID NO: 187. [ 00339] SEQ ID NO SEQ ID NO: 187. [00340] SEQ ID NO SEQ ID NO: 188. [00341] SEQ ID NO SEQ ID NO: 188. [00342] SEQ ID NO SEQ ID NO: 189. [00343] SEQ ID NO SEQ ID NO: 189. [00344] SEQ ID NO SEQ ID NO: 190. [00345] SEQ ID NO SEQ ID NO: 190.
295 é uma sonda para a295 is a probe for the
296 é uma sonda para a296 is a probe for the
297 é uma sonda para a297 is a probe for the
298 é uma sonda para a298 is a probe for the
299 é uma sonda para a299 is a probe for the
300 é uma sonda para a300 is a probe for the
301 é uma sonda para a301 is a probe for the
302 é uma sonda para a302 is a probe for the
303 é uma sonda para a303 is a probe for the
304 é uma sonda para a304 is a probe for the
305 é uma sonda para a305 is a probe for the
306 é uma sonda para a306 is a probe for
307 é uma sonda para a307 is a probe for the
308 é uma sonda para a308 is a probe for the
309 é uma sonda para a detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da309 is a probe for SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 42/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 42/152
33/114 [00346] SEQ ID NO SEQ ID NO: 191. [00347] SEQ ID NO SEQ ID NO: 191. [00348] SEQ ID NO SEQ ID NO: 192. [00349] SEQ ID NO SEQ ID NO: 192. [00350] SEQ ID NO SEQ ID NO: 193. [00351] SEQ ID NO SEQ ID NO: 193. [00352] SEQ ID NO SEQ ID NO: 194. [00353] SEQ ID NO SEQ ID NO: 194. [00354] SEQ ID NO SEQ ID NO: 195. [00355] SEQ ID NO SEQ ID NO: 195. [00356] SEQ ID NO SEQ ID NO: 196. [00357] SEQ ID NO SEQ ID NO: 196. [00358] SEQ ID NO SEQ ID NO: 197. [00359] SEQ ID NO SEQ ID NO: 197. [00360] SEQ ID NO SEQ ID NO: 198.33/114 [00346] SEQ ID NO SEQ ID NO: 191. [00347] SEQ ID NO SEQ ID NO: 191. [00348] SEQ ID NO SEQ ID NO: 192. [00349] SEQ ID NO SEQ ID NO: 192 [00350] SEQ ID NO SEQ ID NO: 193. [00351] SEQ ID NO SEQ ID NO: 193. [00352] SEQ ID NO SEQ ID NO: 194. [00353] SEQ ID NO SEQ ID NO: 194. [ 00354] SEQ ID NO SEQ ID NO: 195. [00355] SEQ ID NO SEQ ID NO: 195. [00356] SEQ ID NO SEQ ID NO: 196. [00357] SEQ ID NO SEQ ID NO: 196. [00358] SEQ ID NO SEQ ID NO: 197. [00359] SEQ ID NO SEQ ID NO: 197. [00360] SEQ ID NO SEQ ID NO: 198.
310 é uma sonda para a310 is a probe for the
311 é uma sonda para a311 is a probe for the
312 é uma sonda para a312 is a probe for the
313 é uma sonda para a313 is a probe for the
314 é uma sonda para a314 is a probe for the
315 é uma sonda para a315 is a probe for the
316 é uma sonda para a316 is a probe for the
317 é uma sonda para a317 is a probe for the
318 é uma sonda para a318 is a probe for the
319 é uma sonda para a319 is a probe for the
320 é uma sonda para a320 is a probe for the
321 é uma sonda para a321 is a probe for the
322 é uma sonda para a322 is a probe for the
323 é uma sonda para a323 is a probe for the
324 é uma sonda para a detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da324 is a probe for SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 43/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 43/152
34/114 [00361] SEQ ID NO SEQ ID NO: 198. [00362] SEQ ID NO SEQ ID NO: 199. [00363] SEQ ID NO SEQ ID NO: 199. [00364] SEQ ID NO SEQ ID NO: 200. [00365] SEQ ID NO SEQ ID NO: 200. [00366] SEQ ID NO SEQ ID NO: 201. [00367] SEQ ID NO SEQ ID NO: 201. [00368] SEQ ID NO SEQ ID NO: 202. [00369] SEQ ID NO SEQ ID NO: 202. [00370] SEQ ID NO SEQ ID NO: 203. [00371] SEQ ID NO SEQ ID NO: 203. [00372] SEQ ID NO SEQ ID NO: 204. [00373] SEQ ID NO SEQ ID NO: 204. [00374] SEQ ID NO SEQ ID NO: 205. [00375] SEQ ID NO SEQ ID NO: 205.34/114 [00361] SEQ ID NO SEQ ID NO: 198. [00362] SEQ ID NO SEQ ID NO: 199. [00363] SEQ ID NO SEQ ID NO: 199. [00364] SEQ ID NO SEQ ID NO: 200 [00365] SEQ ID NO SEQ ID NO: 200. [00366] SEQ ID NO SEQ ID NO: 201. [00367] SEQ ID NO SEQ ID NO: 201. [00368] SEQ ID NO SEQ ID NO: 202. [ 00369] SEQ ID NO SEQ ID NO: 202. [00370] SEQ ID NO SEQ ID NO: 203. [00371] SEQ ID NO SEQ ID NO: 203. [00372] SEQ ID NO SEQ ID NO: 204. [00373] SEQ ID NO SEQ ID NO: 204. [00374] SEQ ID NO SEQ ID NO: 205. [00375] SEQ ID NO SEQ ID NO: 205.
325 é uma sonda para a325 is a probe for the
326 é uma sonda para a326 is a probe for the
327 é uma sonda para a327 is a probe for the
328 é uma sonda para a328 is a probe for the
329 é uma sonda para a329 is a probe for the
330 é uma sonda para a330 is a probe for the
331 é uma sonda para a331 is a probe for the
332 é uma sonda para a332 is a probe for the
333 é uma sonda para a333 is a probe for the
334 é uma sonda para a334 is a probe for the
335 é uma sonda para a335 is a probe for the
336 é uma sonda para a336 is a probe for the
337 é uma sonda para a337 is a probe for the
338 é uma sonda para a338 is a probe for the
339 é uma sonda para a detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da339 is a probe for SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 44/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 44/152
35/114 [00376] SEQ ID NO SEQ ID NO: 206. [00377] SEQ ID NO SEQ ID NO: 206. [00378] SEQ ID NO SEQ ID NO: 207. [00379] SEQ ID NO SEQ ID NO: 207. [00380] SEQ ID NO SEQ ID NO: 208. [00381] SEQ ID NO SEQ ID NO: 208. [00382] SEQ ID NO SEQ ID NO: 209. [00383] SEQ ID NO SEQ ID NO: 209. [00384] SEQ ID NO SEQ ID NO: 210. [00385] SEQ ID NO SEQ ID NO: 210. [00386] SEQ ID NO SEQ ID NO: 211. [00387] SEQ ID NO SEQ ID NO: 211. [00388] SEQ ID NO SEQ ID NO: 212. [00389] SEQ ID NO SEQ ID NO: 212. [00390] SEQ ID NO SEQ ID NO: 213.35/114 [00376] SEQ ID NO SEQ ID NO: 206. [00377] SEQ ID NO SEQ ID NO: 206. [00378] SEQ ID NO SEQ ID NO: 207. [00379] SEQ ID NO SEQ ID NO: 207 . [00380] SEQ ID NO SEQ ID NO: 208. [00381] SEQ ID NO SEQ ID NO: 208. [00382] SEQ ID NO SEQ ID NO: 209. [00383] SEQ ID NO SEQ ID NO: 209. [ 00384] SEQ ID NO SEQ ID NO: 210. [00385] SEQ ID NO SEQ ID NO: 210. [00386] SEQ ID NO SEQ ID NO: 211. [00387] SEQ ID NO SEQ ID NO: 211. [00388] SEQ ID NO SEQ ID NO: 212. [00389] SEQ ID NO SEQ ID NO: 212. [00390] SEQ ID NO SEQ ID NO: 213.
340 é uma sonda para a340 is a probe for the
341 é uma sonda para a341 is a probe for the
342 é uma sonda para a342 is a probe for the
343 é uma sonda para a343 is a probe for the
344 é uma sonda para a344 is a probe for the
345 é uma sonda para a345 is a probe for the
346 é uma sonda para a346 is a probe for the
347 é uma sonda para a347 is a probe for the
348 é uma sonda para a348 is a probe for the
349 é uma sonda para a349 is a probe for the
350 é uma sonda para a350 is a probe for the
351 é uma sonda para a351 is a probe for the
352 é uma sonda para a352 is a probe for
353 é uma sonda para a353 is a probe for the
354 é uma sonda para a detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da detecção do SNP da354 is a probe for SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection SNP detection
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 45/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 45/152
36/114 [00391] SEQ ID NO: 355 é uma sonda para a detecção do SNP da SEQ ID NO: 213.36/114 [00391] SEQ ID NO: 355 is a probe for the detection of the SNP of SEQ ID NO: 213.
Definições [00392] Um valor de grupo de maturidade pode ser qualquer número indicativo, símbolo, ou combinação de ambos que forneçam uma indicação de quando uma planta amadurecerá. Um alelo de maturidade dominante é um alelo que, quando presente em cópia única (heterozigoto) ou em duas cópias (homozigoto), afeta a maturidade da planta.Definitions [00392] A maturity group value can be any indicative number, symbol, or combination of both that provide an indication of when a plant will mature. A dominant maturity allele is an allele that, when present in a single copy (heterozygous) or in two copies (homozygous), affects the plant's maturity.
[00393] Um alelo de maturidade recessivo é um alelo que, quando presente em uma cópia (heterozigoto), não afeta a maturidade de uma planta.[00393] A recessive maturity allele is an allele that, when present in a copy (heterozygous), does not affect the maturity of a plant.
[00394] Como usado neste pedido, o hábito de crescimento determinado refere-se à cessação do crescimento vegetativo após o tronco principal terminar em um grupo de vagens maduras.[00394] As used in this application, the determined growth habit refers to the cessation of vegetative growth after the main trunk ends in a group of mature pods.
[00395] Como usado neste pedido, o hábito de crescimento indeterminado refere-se ao desenvolvimento de folhas e flores simultaneamente em todas as partes de uma porção de seu período reprodutivo, com uma a três vagens no ápice terminal.[00395] As used in this application, the habit of indeterminate growth refers to the development of leaves and flowers simultaneously in all parts of a portion of their reproductive period, with one to three pods at the terminal apex.
[00396] Como usado neste pedido, uma combinação alélica é a combinação dos alelos presentes em mais de uma posição caracterizada ou loci. Um exemplo de uma combinação alélica é a combinação alélica 10, que é homozigota dominante na região genômica de maturidade 1; homozigota recessiva na região genômica de maturidade 2; e homozigota dominante na região genômica de maturidade 3.[00396] As used in this application, an allelic combination is the combination of alleles present in more than one characterized position or loci. An example of an allelic combination is the allelic combination 10, which is homozygous dominant in the genomic region of maturity 1; recessive homozygote in the genomic region of maturity 2; and dominant homozygote in the mature genomic region 3.
[00397] Como usado neste pedido, linhagem refere-se a um grupo de plantas individuais de ascendência similar com traços similares. Uma linhagem de elite é qualquer linhagem que tenha resultado do melhoramento e seleção para desempenho agronômico superior. Adicionalmente, uma linhagem de elite é suficientemente homogênea e[00397] As used in this application, lineage refers to a group of individual plants of similar ancestry with similar traits. An elite strain is any strain that has resulted from breeding and selection for superior agronomic performance. In addition, an elite line is sufficiently homogeneous and
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 46/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 46/152
37/114 homozigota para ser usada para produção comercial. Linhagens de elite podem ser usadas em esforços adicionais de melhoramento para desenvolver novas linhagens de elite. Uma planta de elite é qualquer planta de uma linhagem de elite.37/114 homozygous to be used for commercial production. Elite lines can be used in further breeding efforts to develop new elite lines. An elite plant is any plant of an elite lineage.
[00398] Como usado neste pedido, um traço refere-se a uma característica observável e/ou mensurável de um organismo, tal como um traço de uma planta, por exemplo, tolerância a um herbicida, inseto e micróbio. Um traço pode ser convencional e transgênico. Exemplos não-limitantes de traços incluem a tolerância à herbicida, rendimento aumentado, controle de insetos, resistência à doença fúngica, resistência a vírus, resistência a nematoide, resistência à doença bacteriana, resistência à doença de micoplasma, produção de óleos alterada, alta produção de óleo, alta produção de proteína, controle de crescimento de germinação e mudas, nutrição animal e humana potencializada, baixa rafinose, resistente a estresse ambiental, digestibilidade aumentada, enzimas industriais, proteínas, peptídeos e pequenas moléculas farmacêuticas, traços de processamento melhorados, sabor melhorado, fixação de nitrogênio, produção de semente híbrida, alergenicidade reduzida, biopolímeros, e biocombustíveis.[00398] As used in this application, a trait refers to an observable and / or measurable characteristic of an organism, such as a trait of a plant, for example, tolerance to a herbicide, insect and microbe. A trait can be conventional and transgenic. Non-limiting examples of traits include herbicide tolerance, increased yield, insect control, resistance to fungal disease, resistance to virus, resistance to nematode, resistance to bacterial disease, resistance to mycoplasma disease, altered oil production, high production oil, high protein production, germination and seedling growth control, potentiated animal and human nutrition, low raffinose, resistant to environmental stress, increased digestibility, industrial enzymes, proteins, peptides and small pharmaceutical molecules, improved processing traits, flavor improved, nitrogen fixation, hybrid seed production, reduced allergenicity, biopolymers, and biofuels.
[00399] Como usado neste pedido, um transgene refere-se a um gene estranho que é colocado em um organismo pelo processo da transformação vegetal. Em certos aspectos, uma planta de soja fornecida pela invenção pode compreender um ou mais transgene(s). [00400] Como usado neste pedido, alterada significa maturidade aumentada ou diminuída. Neste aspecto, uma semente madura como definida por uma semente que é colhida no campo de práticas agrícolas comerciais, tal como venda para ração. Em um aspecto, plantas de soja são selecionadas para geografia preferencial para expressão de pelo menos um traço fenotípico. O traço fenotípico inclui níveis alterados de uma substância ou uma molécula, tais como proteínas, óleos[00399] As used in this application, a transgene refers to a foreign gene that is placed in an organism by the process of plant transformation. In certain aspects, a soybean plant provided by the invention may comprise one or more transgene (s). [00400] As used in this application, altered means increased or decreased maturity. In this respect, a mature seed as defined by a seed that is harvested in the field of commercial agricultural practices, such as sale for feed. In one aspect, soybean plants are selected for preferred geography to express at least one phenotypic trait. The phenotypic trait includes altered levels of a substance or molecule, such as proteins, oils
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 47/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 47/152
38/114 ou ácido gama-linolênico. Alterado pode incluir qualquer aumento ou redução relativos à função ou produção de um produto gênico de interesse, em um aspecto e incluindo eliminação completa da função ou produção daquele produto gênico. Quando os níveis de um produto gênico são comparados, tal comparação é preferencialmente realizada entre organismos com um contexto genético similar. Preferencialmente, um contexto genético similar é um contexto onde os organismos que são comparados compartilham 50% ou mais, mais preferencialmente 75% ou mais, e ainda mais preferencialmente 90% ou ainda maior identidade de sequência do material genético nuclear. Em outro aspecto, um contexto genético similar é um contexto onde as plantas são isogênicas exceto por um ou mais marcadores da presente invenção.38/114 or gamma-linolenic acid. Changed may include any increase or decrease relating to the function or production of a gene product of interest, in one aspect and including complete elimination of the function or production of that gene product. When the levels of a gene product are compared, such a comparison is preferably made between organisms with a similar genetic background. Preferably, a similar genetic context is a context where the organisms being compared share 50% or more, more preferably 75% or more, and even more preferably 90% or even greater sequence identity of the nuclear genetic material. In another aspect, a similar genetic context is a context where the plants are isogenic except for one or more markers of the present invention.
[00401] Como usado neste pedido, um cultivar é uma raça ou variedade de uma planta que foi criada ou selecionada intencionalmente e mantida através de cultivo.[00401] As used in this application, a cultivar is a breed or variety of a plant that was intentionally created or selected and maintained through cultivation.
[00402] Como usado neste pedido, o termo cultura de tecido indica uma composição compreendendo células isoladas do mesmo ou um tipo diferente ou uma coleção de tais células organizadas em partes de uma planta.[00402] As used in this application, the term tissue culture indicates a composition comprising cells isolated from the same or a different type or a collection of such cells organized in parts of a plant.
Descrição Detalhada da Invenção [00403] Determinação do valor de grupo de maturidade de uma planta ou semente de soja é importante na seleção onde uma planta de soja deve ser cultivada. Um aspecto da presente invenção fornece um método de estabelecimento onde uma planta ou semente deve ser cultivada. Uma região adequada de uma planta ou semente de soja pode ser estabelecida. O estabelecimento de uma região pode incluir a seleção de uma região de cinturão de maturidade adequada. Cinturões de maturidade variam nos Estados Unidos de 000 no extremo norte dos Estados Unidos a VIII nos estados do sul da Costa do Golfo. ADetailed Description of the Invention [00403] Determination of the maturity group value of a soybean plant or seed is important in the selection where a soybean plant is to be grown. One aspect of the present invention provides a method of establishment where a plant or seed is to be grown. A suitable region of a soybean plant or seed can be established. Establishing a region may include selecting a belt region of adequate maturity. Maturity belts vary in the United States from 000 in the far north of the United States to VIII in the southern states of the Gulf Coast. THE
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 48/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 48/152
39/114 presente invenção também pode ser usada para determinar outros cinturões de maturidade incluindo IX e X. A presente invenção pode ainda ser utilizada para determinar se uma planta é adequada para um, dois ou mais cinturões ou regiões de maturidade.The present invention can also be used to determine other belts of maturity including IX and X. The present invention can also be used to determine whether a plant is suitable for one, two or more belts or regions of maturity.
[00404] Uma região geográfica adequada pode ser selecionada usando um método da presente invenção. Além de cinturões de maturidade, outras regiões geográficas que podem ser selecionadas incluem o regiões de grupo de maturidade 0, tais como e sem restrição, Maine Ocidental, Dacota do Norte, Montana Central, Noroeste de Oregon; regiões de grupo de maturidade 1, tais como e sem restrição, norte de Wisconsin, Dacota do Sul; regiões de grupo de maturidade 2, tais como e sem restrição, Vermont, sul de Massachusetts, norte de Connecticut, Nova Iorque, Flórida Central, Michigan, norte de Illinois, sul de Wisconsin, Iowa, Nebraska, Colorado, Califórnia Central; regiões de grupo de maturidade 3, tais como e sem restrição, New Hampshire Ocidental, Pensilvânia, Ohio, Indiana, sul de Illinois, norte do Missouri, Kansas, sudeste de Wyoming, Colorado; regiões de grupo de maturidade 4, tais como e sem restrição, Maryland, norte da Virginia, Kentucky, Virginia Oeste e Ocidental, Missouri Central, Texas, Oklahoma Ocidental; regiões de grupo de maturidade 5, tais como e sem restrição, Virginia Central, Carolina do Norte, Carolina do Norte Central e Ocidental, Mississipi, Luisiana, Tennessee; regiões de grupo de maturidade 6, tais como e sem restrição, Carolina do Norte, Carolina do Sul Oriental; e regiões de grupo de maturidade 7, tais como e sem restrição, Geórgia e Alabama. Em outro aspecto, uma semente da presente invenção pode ser enviada a uma região geográfica que é desejável para otimizar um traço, tal como rendimento.[00404] A suitable geographical region can be selected using a method of the present invention. In addition to maturity belts, other geographic regions that can be selected include maturity group 0 regions, such as and without restriction, West Maine, North Dakota, Central Montana, Northwest Oregon; maturity group 1 regions, such as and without restriction, northern Wisconsin, South Dakota; maturity group 2 regions, such as and without restriction, Vermont, southern Massachusetts, northern Connecticut, New York, Central Florida, Michigan, northern Illinois, southern Wisconsin, Iowa, Nebraska, Colorado, Central California; maturity group 3 regions, such as and without restriction, Western New Hampshire, Pennsylvania, Ohio, Indiana, southern Illinois, northern Missouri, Kansas, southeast Wyoming, Colorado; maturity group 4 regions, such as and without restriction, Maryland, Northern Virginia, Kentucky, West and West Virginia, Central Missouri, Texas, Western Oklahoma; maturity group 5 regions, such as and without restriction, Central Virginia, North Carolina, Central and Western North Carolina, Mississippi, Louisiana, Tennessee; maturity group 6 regions, such as and without restriction, North Carolina, East South Carolina; and maturity group 7 regions, such as and without restriction, Georgia and Alabama. In another aspect, a seed of the present invention can be sent to a geographical region that is desirable to optimize a trait, such as yield.
[00405] A presente invenção também fornece métodos de seleção de uma região geográfica adequada e métodos para determinação do grupo de maturidade de uma planta ou semente de soja pela análise[00405] The present invention also provides methods for selecting a suitable geographical region and methods for determining the maturity group of a soybean plant or seed by analyzing
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 49/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 49/152
40/114 genotípica. Um aspecto da presente invenção inclui um método de estabelecimento onde uma planta de soja deve ser cultivada pela obtenção de DNA da planta de soja; e determinação se um alelo na região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto usando o marcador da SEQ ID NO: 151.40/114 genotypic. One aspect of the present invention includes a method of establishment where a soy plant must be grown by obtaining DNA from the soy plant; and determining whether an allele in the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous using the SEQ ID NO: 151 marker.
[00406] A presente invenção permite a determinação de combinações alélicas. Combinações alélicas podem ser quaisquer combinações de alelos. Em um aspecto, pode ser uma combinação de 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 pares de alelos que ocupam um locus genético. Em outro aspecto, os alelos podem ser localizados em 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 ou mais regiões genômicas de maturidade. Tais regiões de maturidade podem ser selecionadas a partir da região genômica de maturidade 1, região genômica de maturidade 2, região genômica de maturidade 3, região genômica de maturidade 4, região genômica de maturidade 5, região genômica de maturidade 6, região genômica de maturidade 7 ou região genômica de maturidade 8, etc.[00406] The present invention allows the determination of allelic combinations. Allele combinations can be any combination of alleles. In one aspect, it may be a combination of 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 pairs of alleles that occupy a genetic locus. In another aspect, the alleles can be located in 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 or more genomic regions of maturity. Such regions of maturity can be selected from the genomic region of maturity 1, the genomic region of maturity 2, the genomic region of maturity 3, the genomic region of maturity 4, the genomic region of maturity 5, the genomic region of maturity 6, the genomic region of maturity 7 or genomic region of maturity 8, etc.
[00407] Alelos em qualquer combinação de regiões de maturidade podem ser determinados individualmente ou em combinação. Uma combinação ilustrativa é uma combinação de mais de um par de alelos em regiões de maturidade 1, 2 e 3. Outra combinação ilustrativa é uma combinação de mais de um par de alelos em regiões de maturidade 1 e 2. Combinações alélicas cujo objetivo é incluir, sem restrição, qualquer homozigoto dominante, homozigoto recessivo e heterozigotos alternativos em um locus particular.[00407] Alleles in any combination of regions of maturity can be determined individually or in combination. An illustrative combination is a combination of more than one pair of alleles in regions of maturity 1, 2, and 3. Another illustrative combination is a combination of more than one pair of alleles in regions of maturity 1 and 2. Allele combinations whose purpose is to include , without restriction, any dominant homozygote, recessive homozygote and alternative heterozygotes at a particular locus.
[00408] Determinação de um alelo ou combinação de alelos em um locus ou loci pode ser realizada por qualquer metodologia apropriada. Em um aspecto, vários ensaios podem ser usados, tais como um ensaio de Taq-Man®, PCR em Tempo real e sequenciamento de ácido nucleico e mapeamento de repetição de sequência simples, para detectar o genótipo. Em um aspecto da presente invenção, o ensaio inPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 50/152[00408] Determination of an allele or combination of alleles at a locus or loci can be performed by any appropriate methodology. In one aspect, several assays can be used, such as a Taq-Man® assay, Real-Time PCR and nucleic acid sequencing and single sequence repeat mapping, to detect the genotype. In one aspect of the present invention, inPetição assay 870170047791, of 07/07/2017, p. 50/152
41/114 clui uma molécula de ácido nucleico da presente invenção. Ácidos nucleicos incluem ácidos desoxirribonucleicos (DNA) e ácidos ribonucleicos (RNA) e análogos funcionalmente equivalentes dos mesmos. [00409] Ácidos nucleicos para uso na presente invenção podem ser obtidos de uma planta, tal como de uma parte da planta que inclui uma folha, tecido vascular, flor, vagem, semente, raiz, tronco ou uma porção qualquer.41/114 includes a nucleic acid molecule of the present invention. Nucleic acids include deoxyribonucleic acids (DNA) and ribonucleic acids (RNA) and functionally equivalent analogs thereof. [00409] Nucleic acids for use in the present invention can be obtained from a plant, such as from a part of the plant that includes a leaf, vascular tissue, flower, pod, seed, root, trunk or any portion.
[00410] Em um aspecto, ácidos nucleicos são obtidos de uma parte da planta ou planta usando um método não destrutivo. Em um aspecto, a parte da planta é uma semente. Em um aspecto, os ácidos nucleicos são obtidos de uma semente de uma maneira não destrutiva, que fornece uma semente que é viável. Por exemplo, DNA pode ser obtido de uma semente quebrando a semente com uma faca afiada em uma parte o mais distante do ‘olho’ ou furando cuidadosamente com uma agulha para perfurar a semente. Qualquer método obterá DNA para análise ou permitirá a análise in situ do DNA pode ser usado para fornecer aquela planta ou parte da planta que conserva a capacidade de crescer. Se DNA for tomado de uma semente e a semente é ainda viável, o método pode ser considerado não destrutivo. Métodos exemplares para amostragem de sementes sem afetar a viabilidade de germinação das sementes são detalhados na Publicação do Pedido de Patente U.S. 20060042527A1, por meio desta incorporada por referência. Em um aspecto, sementes são escolhidas pela alimentação das sementes individualmente a uma estação de amostragem, remoção de uma amostra da semente na estação de amostragem, transporte da amostra a um compartimento em uma bandeja de amostragem e transporte da semente a um compartimento correspondente em uma bandeja de semente.[00410] In one aspect, nucleic acids are obtained from a part of the plant or plant using a non-destructive method. In one respect, the plant part is a seed. In one aspect, nucleic acids are obtained from a seed in a non-destructive manner, which provides a seed that is viable. For example, DNA can be obtained from a seed by breaking the seed with a sharp knife in the most distant part of the 'eye' or by carefully piercing with a needle to pierce the seed. Either method will obtain DNA for analysis or allow in situ analysis of DNA that can be used to provide that plant or part of the plant that retains the ability to grow. If DNA is taken from a seed and the seed is still viable, the method can be considered non-destructive. Exemplary methods for sampling seeds without affecting the germination viability of seeds are detailed in U.S. Patent Application Publication 20060042527A1, hereby incorporated by reference. In one aspect, seeds are chosen by feeding the seeds individually to a sampling station, removing a seed sample from the sampling station, transporting the sample to a compartment in a sampling tray and transporting the seed to a corresponding compartment in a seed tray.
[00411] Em um aspecto, a região genômica de maturidade associada com a maturidade vegetal e hábito de crescimento vegetal da prePetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 51/152[00411] In one aspect, the genomic region of maturity associated with plant maturity and plant growth habit of prePetition 870170047791, of 07/07/2017, p. 51/152
42/114 sente invenção é introduzida ou selecionada do gênero Glycine. O gênero Glycine inclui as sojas perenes selvagens e tem uma matriz ampla de diversidade genética. Por exemplo, a soja cultivada (Soja (L.) Merr.) e o seu progenitor anual selvagem (Glycine soja (Sieb. and Zucc.)) pertencem ao subgênero Soja, contêm 2n = 40 cromossomos, são cruzamento-compatíveis, normalmente produzem híbridos F1 férteis vigorosos, e carregam genomas similares. Híbridos das espécies Glycine cultivadas e espécies Glycine perenes selvagens têm êxito variável entre acessões.42/114 feels invention is introduced or selected from the genus Glycine. The genus Glycine includes wild perennial soybeans and has a wide array of genetic diversity. For example, cultivated soy (Soy (L.) Merr.) And its annual wild parent (Glycine soy (Sieb. And Zucc.)) Belong to the subgenus Soy, contain 2n = 40 chromosomes, are cross-compatible, normally produce vigorous fertile F 1 hybrids, and carry similar genomes. Hybrids of cultivated Glycine species and wild perennial Glycine species have variable success between accessions.
[00412] A presente invenção fornece ainda que a planta selecionada é do grupo consistindo em membros do gênero Glycine, mais especificamente do grupo composto da Glycine arenaria, Glycine argyrea, Glycine canescens, Glycine clandestine, Glycine curvata, Glycine cyrtoloba, Glycine falcate, Glycine latifolia, Glycine latrobeana, Soja, Glycine microphylla, Glycine pescadrensis, Glycine pindanica, Glycine rubiginosa, Glycine soja, Glycine sp., Glycine stenophita, Glycine tabacina e Glycine tomentella. Em um aspecto, a planta da presente invenção é selecionada a partir de uma linhagem de elite Soja.[00412] The present invention further provides that the selected plant belongs to the group consisting of members of the genus Glycine, more specifically the group composed of Glycine arenaria, Glycine argyrea, Glycine canescens, Glycine clandestine, Glycine curvata, Glycine cyrtoloba, Glycine falcate, Glycine falcate latifolia, Glycine latrobeana, Soy, Glycine microphylla, Glycine pescadrensis, Glycine pindanica, Glycine rubiginosa, Glycine soy, Glycine sp., Glycine stenophita, Glycine tabacina and Glycine tomentella. In one aspect, the plant of the present invention is selected from an elite Soy strain.
[00413] A presente invenção também fornece uma planta de soja selecionada a partir de uma maturidade de planta desejada pela classificação para um marcador de maturidade na planta ou semente de soja, a seleção compreendendo análise de ácidos nucleicos genômicos para presença de uma molécula marcadora que é geneticamente ligada a uma região genômica associada a uma maturidade vegetal na planta de soja, onde a região genômica também é localizada em um grupo de ligação associado com uma planta de soja de uma maturidade vegetal preferencial.[00413] The present invention also provides a soybean plant selected from a plant maturity desired by classification for a maturity marker on the soybean plant or seed, the selection comprising analysis of genomic nucleic acids for the presence of a marker molecule that it is genetically linked to a genomic region associated with a plant maturity in the soybean plant, where the genomic region is also located in a linkage group associated with a soybean plant of preferred plant maturity.
[00414] Métodos da presente invenção incluem determinação se um locus contém um polimorfismo, ou for homozigoto ou heterozigoto em uma região de maturidade selecionada a partir da região genômica[00414] Methods of the present invention include determining whether a locus contains a polymorphism, or is homozygous or heterozygous in a region of maturity selected from the genomic region
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 52/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 52/152
43/114 de maturidade 1, região genômica de maturidade 2, região genômica de maturidade 3, região genômica de maturidade 4, região genômica de maturidade 5, região genômica de maturidade 6, região genômica de maturidade 7 e/ou região genômica de maturidade 8 pela detecção de um polimorfismo em uma molécula de ácido nucleico compreendendo uma sequência ou fragmento da mesma selecionado a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 143 a 174, ou complementos da mesma. A presente invenção inclui identificação de alelos em oito regiões do grupo de maturidade. Estas regiões são denominadas regiões genômicas de maturidade 1 a 8.43/114 maturity 1, genomic region of maturity 2, genomic region of maturity 3, genomic region of maturity 4, genomic region of maturity 5, genomic region of maturity 6, genomic region of maturity 7 and / or genomic region of maturity 8 by detecting a polymorphism in a nucleic acid molecule comprising a sequence or fragment thereof selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 143 to 174, or complements thereof. The present invention includes identification of alleles in eight regions of the maturity group. These regions are called genomic regions from maturity 1 to 8.
[00415] O estado de homozigosidade ou heterozigosidade e dominância ou recessividade da região genômica de maturidade 1 pode ser monitorado pela análise de um alelo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou 13 ou mais marcadores genéticos selecionados a partir do grupo consistindo em NS0093385, NS0093976, NS0096829, NS0097798, NS0098982, NS00995929, NS0099746, NS0103749, NS0123747, NS0124601, NS0125408, NS0128378, e NS0135390. Sequências de DNA marcadoras de SNP da região 1 incluem aquelas apresentadas como SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 155 e pode ser amplificado usando os iniciadores indicados como SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 26 com sondas indicadas como SEQ ID NO: 214 a SEQ ID NO: 239. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 1 é uma região associada com as SEQ ID NOS: 143 a 149, 154 a 155. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 1 é uma região associada à SEQ ID NO: 149 ou SEQ ID NO: 151 ou ambas. Em um aspecto, região genômica de maturidade 1 pode transpor 1 centiMorgan (cM), 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM ou 30 cM de qualquer lado da SEQ ID NO: 149 ou SEQ ID NO: 151.[00415] The state of homozygosity or heterozygosity and dominance or recessivity of the maturity 1 genomic region can be monitored by analyzing an allele of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 or 13 or more genetic markers selected from the group consisting of NS0093385, NS0093976, NS0096829, NS0097798, NS0098982, NS00995929, NS0099746, NS0103749, NS0123747, NS0124601, NS0125408, NS0128378, and NS0135337. Region 1 SNP marker DNA sequences include those presented as SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 155 and can be amplified using the primers indicated as SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 26 with probes indicated as SEQ ID NO: 214 to SEQ ID NO: 239. In another aspect, a genomic region of maturity 1 is a region associated with SEQ ID NOS: 143 to 149, 154 to 155. In another aspect, a genomic region of maturity 1 is a region associated with SEQ ID NO: 149 or SEQ ID NO: 151 or both. In one aspect, maturity 1 genomic region can span 1 centiMorgan (cM), 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM or 30 cM from either side of SEQ ID NO: 149 or SEQ ID NO: 151.
[00416] Um aspecto da presente invenção inclui um método de determinação se uma semente de soja se tornará uma planta de soja que[00416] One aspect of the present invention includes a method of determining whether a soybean seed will become a soybean plant that
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 53/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 53/152
44/114 tem um grupo de maturidade de III a VI pela determinação de um marcador homozigoto ou heterozigoto na semente de soja usando um marcador com a sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 151. Em um aspecto preferencial, o marcador homozigoto pode ser recessivo ou dominante. Em outro aspecto preferencial, a maturidade da planta é retardada onde o marcador é homozigoto dominante.44/114 has a maturity group of III to VI by determining a homozygous or heterozygous marker in the soybean seed using a marker with the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 151. In a preferred aspect, the homozygous marker can be recessive or dominant. In another preferred aspect, the plant's maturity is delayed where the marker is homozygous dominant.
[00417] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de determinação se uma semente de soja se tornará uma planta de soja que tem um grupo de maturidade entre 0.0 a III.0 compreendendo determinação se uma inserção de 11 pares de bases na sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 149 existe na semente de soja. [00418] O estado de homozigosidade ou heterozigosidade e dominância ou recessividade da região genômica de maturidade 2 pode ser monitorado pela análise de um alelo de 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 ou mais marcadores genéticos incluindo aqueles selecionados a partir do grupo consistindo em NS0118907, NS0122182, NS0126989, NS097952, NS0123506 e NS0095677. Sequências de DNA marcadoras de SNP para a região 2 incluem aquelas apresentadas como SEQ ID NO: 156 a SEQ ID NO: 161 e podem ser amplificadas usando os iniciadores indicados como SEQ ID NO: 27 a SEQ ID NO: 38 com sondas indicadas como SEQ ID NO: 240 a SEQ ID NO: 251. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 2 é uma região associada à SEQ ID NO: 158. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 2 é uma região associada às SEQ ID NOS: 156 a 161. Em um aspecto, região genômica de maturidade 2 pode transpor 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM ou 30 cM de qualquer lado da SEQ ID NO: 158.[00417] Another aspect of the present invention includes a method of determining whether a soybean seed will become a soybean plant that has a maturity group between 0.0 to III.0 comprising determining whether an 11 base pair insertion in the acid sequence nucleic acids of SEQ ID NO: 149 exists in soybean seed. [00418] The state of homozygosity or heterozygosity and dominance or recessivity of the genomic region of maturity 2 can be monitored by analyzing an allele of 1, 2, 3, 4, 5, or 6 or more genetic markers including those selected from the group consisting of NS0118907, NS0122182, NS0126989, NS097952, NS0123506 and NS0095677. SNP marker DNA sequences for region 2 include those presented as SEQ ID NO: 156 to SEQ ID NO: 161 and can be amplified using the primers indicated as SEQ ID NO: 27 to SEQ ID NO: 38 with probes indicated as SEQ ID NO: 240 to SEQ ID NO: 251. In another aspect, a genomic region of maturity 2 is a region associated with SEQ ID NO: 158. In another aspect, a genomic region of maturity 2 is a region associated with SEQ ID NOS : 156 to 161. In one aspect, genomic region of maturity 2 can span 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM or 30 cM from either side of SEQ ID NO: 158.
[00419] O estado de homozigosidade ou heterozigosidade e dominância ou recessividade da região genômica de maturidade 3 pode ser monitorado pela análise de um alelo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, ou 13 ou mais marcadores genéticos incluindo aqueles selecionaPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 54/152[00419] The state of homozygosity or heterozygosity and dominance or recessivity of the genomic region of maturity 3 can be monitored by analyzing an allele of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, or 13 or more genetic markers including those selected Petition 870170047791, 07/07/2017, p. 54/152
45/114 dos a partir do grupo consistindo em NS0098853, NS0092561, NS0093197, NS0094891, NS0096225, NS0103853, NSO113929, NS0115535, NS0121511, NS0136544, NS0119569, NS0123708 e NS0114317. Sequências de DNA marcadoras de SNP para região 3 incluindo aquelas apresentadas como SEQ ID NO: 162 a SEQ ID NO: 174 e podem ser amplificadas usando os iniciadores indicados como SEQ ID NO: 39 a SEQ ID NO: 64 com sondas indicadas como SEQ ID NO: 252 a SEQ ID NO: 277. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 3 é uma região associada às SEQ ID NOS: 164, 167, 171 a 174. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 3 é uma região associada à SEQ ID NO: 169. Em um aspecto, região genômica de maturidade 3 pode transpor 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM ou 30 cM de qualquer lado da SEQ ID NO: 169.45/114 from the group consisting of NS0098853, NS0092561, NS0093197, NS0094891, NS0096225, NS0103853, NSO113929, NS0115535, NS0121511, NS0136544, NS0119569, NS0123708 and NS0114317. SNP marker DNA sequences for region 3 including those presented as SEQ ID NO: 162 to SEQ ID NO: 174 and can be amplified using the primers indicated as SEQ ID NO: 39 to SEQ ID NO: 64 with probes indicated as SEQ ID NO: 252 to SEQ ID NO: 277. In another aspect, a genomic region of maturity 3 is a region associated with SEQ ID NOS: 164, 167, 171 to 174. In another aspect, a genomic region of maturity 3 is a region associated with SEQ ID NO: 169. In one aspect, maturity 3 genomic region can span 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM or 30 cM from either side of SEQ ID NO: 169.
[00420] O estado de homozigosidade ou heterozigosidade e dominância ou recessividade da região genômica de maturidade 4 pode ser monitorado pela análise de um alelo de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 ou mais marcadores genéticos incluindo aqueles selecionados a partir do grupo consistindo em NS0092743, NS0098176, NS0100078, NS0137415, NS0095530 e NS0129004. Sequências de DNA marcadoras de SNP para região 4 são apresentadas como SEQ ID NO: 175 a SEQ ID NO: 180 e podem ser amplificadas usando os iniciadores indicados como SEQ ID NO: 65 a SEQ ID NO: 76 com sondas indicadas como SEQ ID NO: 278 a 289. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 4 é uma região associada à SEQ ID NO: 178. Em um aspecto, região genômica de maturidade 4 pode transpor 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM ou 30 cM de qualquer lado da SEQ ID NO: 178. Um aspecto da presente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 4 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 175 a 180. [00421] O estado de homozigosidade ou heterozigosidade e domiPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 55/152[00420] The state of homozygosity or heterozygosity and dominance or recessivity of the genomic region of maturity 4 can be monitored by analyzing an allele of 1, 2, 3, 4, 5 or 6 or more genetic markers including those selected from the group consisting of NS0092743, NS0098176, NS0100078, NS0137415, NS0095530 and NS0129004. SNP marker DNA sequences for region 4 are presented as SEQ ID NO: 175 to SEQ ID NO: 180 and can be amplified using the primers indicated as SEQ ID NO: 65 to SEQ ID NO: 76 with probes indicated as SEQ ID NO : 278 to 289. In another aspect, a genomic region of maturity 4 is a region associated with SEQ ID NO: 178. In one aspect, a genomic region of maturity 4 can span 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM or 30 cM from either side of SEQ ID NO: 178. One aspect of the present invention includes a method of detecting the genomic region of maturity 4 by detecting an allele using a marker selected from any of SEQ ID NO: 175 to 180. [00421] The state of homozygosity or heterozygosity and domiPetition 870170047791, of 07/07/2017, p. 55/152
46/114 nância ou recessividade da região genômica de maturidade 5 pode ser monitorado pela análise de um alelo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou 9 ou mais marcadores genéticos incluindo aqueles selecionados a partir do grupo consistindo em NS0120015, NS0113878, NS0101863,46/114 nance or recessivity of the genomic region of maturity 5 can be monitored by analyzing an allele of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 or 9 or more genetic markers including those selected from the group consisting of in NS0120015, NS0113878, NS0101863,
NS0115066, NS0123168, NS0119165, NS0123724, NS0103446 e NS0099024. Sequências de DNA marcadoras de SNP para região 5 incluindo aquelas apresentadas como SEQ ID NO: 181 a SEQ ID NO: 189 e podem ser amplificadas usando os iniciadores indicados como SEQ ID NO: 77 a SEQ ID NO: 94 com sondas indicadas como SEQ ID NO: 290 a SEQ ID NO: 307. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 5 é uma região associada à SEQ ID NO: 187. Em um aspecto, região genômica de maturidade 5 pode transpor 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM ou 30 cM de qualquer lado da SEQ ID NO: 187. Um aspecto da presente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 5 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 181 a 189.NS0115066, NS0123168, NS0119165, NS0123724, NS0103446 and NS0099024. SNP marker DNA sequences for region 5 including those presented as SEQ ID NO: 181 to SEQ ID NO: 189 and can be amplified using the primers indicated as SEQ ID NO: 77 to SEQ ID NO: 94 with probes indicated as SEQ ID NO: 290 to SEQ ID NO: 307. In another aspect, a genomic region of maturity 5 is a region associated with SEQ ID NO: 187. In one aspect, a genomic region of maturity 5 can span 1 cM, 5 cM, 10 cM , 15 cM, 20 cM or 30 cM from either side of SEQ ID NO: 187. One aspect of the present invention includes a method of detecting the genomic region of maturity 5 by detecting an allele using a marker selected from any of the SEQ ID NO: 181 to 189.
[00422] O estado de homozigosidade ou heterozigosidade e dominância ou recessividade da região genômica de maturidade 6 pode ser monitorado pela análise de um alelo de 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 ou mais marcadores genéticos incluindo aqueles selecionados a partir do grupo consistindo em NS0116125, NS0125770, NS0103755, NS0125713, NS0124590, NS0119281 e NS0102717. Sequências de DNA marcadoras de SNP para região 6 incluindo aquelas apresentadas como SEQ ID NO: 190 a SEQ ID NO: 196 e podem ser amplificadas usando os iniciadores indicados como SEQ ID NO: 95 a SEQ ID NO: 108 com sondas indicadas como SEQ ID NO: 308 a SEQ ID NO: 321. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 6 é uma região associada à SEQ ID NO: 192. Em um aspecto, região genômica de maturidade 6 pode transpor 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM ou 30 cM de[00422] The state of homozygosity or heterozygosity and dominance or recessivity of the genomic region of maturity 6 can be monitored by analyzing an allele of 1, 2, 3, 4, 5, 6 or 7 or more genetic markers including those selected from of the group consisting of NS0116125, NS0125770, NS0103755, NS0125713, NS0124590, NS0119281 and NS0102717. SNP marker DNA sequences for region 6 including those presented as SEQ ID NO: 190 to SEQ ID NO: 196 and can be amplified using the primers indicated as SEQ ID NO: 95 to SEQ ID NO: 108 with probes indicated as SEQ ID NO: 308 to SEQ ID NO: 321. In another aspect, a genomic region of maturity 6 is a region associated with SEQ ID NO: 192. In one aspect, a genomic region of maturity 6 can span 1 cM, 5 cM, 10 cM , 15 cM, 20 cM or 30 cM of
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 56/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 56/152
47/114 qualquer lado da SEQ ID NO: 192. Um aspecto da presente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 6 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 190 a 196.47/114 either side of SEQ ID NO: 192. One aspect of the present invention includes a method of detecting the genomic region of maturity 6 by detecting an allele using a marker selected from any of SEQ ID NO: 190 to 196 .
[00423] O estado de homozigosidade ou heterozigosidade e dominância ou recessividade da região genômica de maturidade 7 pode ser monitorado pela análise de um alelo de 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 ou mais marcadores genéticos incluindo aqueles selecionados a partir do grupo consistindo em NS0095211, NS0099531, NS0099417, NS0097307, NS0103004, NS0102630 e NS0102915. Sequências de DNA de SNP para região 7 incluindo aquelas apresentadas como SEQ ID NO: 197 a SEQ ID NO: 203 e podem ser amplificadas usando os iniciadores indicados como SEQ ID NO: 109 a SEQ ID NO: 122 com sondas indicadas como SEQ ID NO: 322 a SEQ ID NO: 335. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 7 é uma região associada à SEQ ID NO: 202. Em um aspecto, região genômica de maturidade 7 pode transpor 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM ou 30 cM de qualquer lado da SEQ ID NO: 202. Um aspecto da presente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 7 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 197 a 203.[00423] The state of homozygosity or heterozygosity and dominance or recessivity of the maturity 7 genomic region can be monitored by analyzing an allele of 1, 2, 3, 4, 5, 6 or 7 or more genetic markers including those selected from of the group consisting of NS0095211, NS0099531, NS0099417, NS0097307, NS0103004, NS0102630 and NS0102915. SNP DNA sequences for region 7 including those presented as SEQ ID NO: 197 to SEQ ID NO: 203 and can be amplified using the primers indicated as SEQ ID NO: 109 to SEQ ID NO: 122 with probes indicated as SEQ ID NO : 322 to SEQ ID NO: 335. In another aspect, a maturity 7 genomic region is a region associated with SEQ ID NO: 202. In one aspect, a maturity 7 genomic region can span 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM or 30 cM from either side of SEQ ID NO: 202. One aspect of the present invention includes a method of detecting the maturity 7 genomic region by detecting an allele using a marker selected from any of the SEQs ID NO: 197 to 203.
[00424] O estado de homozigosidade ou heterozigosidade e dominância ou recessividade da região genômica de maturidade 8 pode ser monitorado pela análise de um alelo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 ou mais marcadores genéticos incluindo aqueles selecionados a partir do grupo consistindo em N0102362, NS0100652, NS0117716,[00424] The state of homozygosity or heterozygosity and dominance or recessivity of the mature genomic region 8 can be monitored by analyzing an allele of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 or more markers genetic factors including those selected from the group consisting of N0102362, NS0100652, NS0117716,
NS0119574, NS0127728, NS0099639, NS0103255, NS0119106,NS0119574, NS0127728, NS0099639, NS0103255, NS0119106,
NS0101020 e NS0101779. Sequências de DNA de SNP da região 8 incluindo aquelas apresentadas como SEQ ID NO: 204 a SEQ ID NO:NS0101020 and NS0101779. SNP DNA sequences from region 8 including those presented as SEQ ID NO: 204 to SEQ ID NO:
213 e podem ser amplificadas usando os iniciadores indicados como213 and can be amplified using the primers indicated as
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 57/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 57/152
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SEQ ID NO: 123 a SEQ ID NO: 142 com sondas indicadas como SEQ ID NO: 336 a SEQ ID NO: 355. Em outro aspecto, uma região genômica de maturidade 8 é uma região associada à SEQ ID NO: 204. Em um aspecto, região genômica de maturidade 8 pode transpor 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM ou 30 cM de qualquer lado da SEQ ID NO: 204. Um aspecto da presente invenção inclui um método de detecção da região genômica de maturidade 8 pela detecção de um alelo usando um marcador selecionado a partir de qualquer uma das SEQ ID NO: 204 a 213.SEQ ID NO: 123 to SEQ ID NO: 142 with probes indicated as SEQ ID NO: 336 to SEQ ID NO: 355. In another aspect, a genomic region of maturity 8 is a region associated with SEQ ID NO: 204. In a aspect, maturity 8 genomic region can span 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM, 20 cM or 30 cM from either side of SEQ ID NO: 204. One aspect of the present invention includes a method of detecting the genomic region of maturity 8 by detecting an allele using a marker selected from any of SEQ ID NO: 204 to 213.
[00425] Moléculas de ácidos nucleicos da presente invenção ou fragmentos das mesmas são capazes de hibridizar especificamente a outras moléculas de ácidos nucleicos, também incluídas na presente invenção, em certas circunstâncias. Em um aspecto, as moléculas de ácidos nucleicos da presente invenção contêm qualquer uma das SEQ ID NO: 143 a 213, complementos das mesmas e fragmentos quaisquer. Em outro aspecto, as moléculas de ácidos nucleicos da presente invenção incluem moléculas de ácidos nucleicos que hibridizam, por exemplo, sob alta ou baixa estringência, sequências substancialmente homólogas, ou que têm ambas estas moléculas. Como usado neste pedido, duas moléculas de ácidos nucleicos são capazes de hibridizar especificamente uma à outra se as duas moléculas forem capazes de formar uma estrutura de ácido nucleico dupla fita antiparalela. Uma molécula de ácido nucleico é o complemento de outra molécula de ácido nucleico se exibe complementaridade completa. Como usado neste pedido, as moléculas exibem complementaridade completa quando cada nucleotídeo de uma das moléculas é complementar a um nucleotídeo da outra. Duas moléculas são minimamente complementares se puderem hibridizar uma à outra com estabilidade suficiente para permitir-lhes permanecer aneladas uma à outra sob condições de baixa estringência pelo menos convencionais. Similarmente, as moPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 58/152[00425] Nucleic acid molecules of the present invention or fragments thereof are capable of hybridizing specifically to other nucleic acid molecules, also included in the present invention, in certain circumstances. In one aspect, the nucleic acid molecules of the present invention contain any of SEQ ID NO: 143 to 213, complements thereof and any fragments thereof. In another aspect, the nucleic acid molecules of the present invention include nucleic acid molecules that hybridize, for example, under high or low stringency, substantially homologous sequences, or that have both of these molecules. As used in this application, two nucleic acid molecules are able to specifically hybridize to each other if the two molecules are able to form a double stranded antiparallel nucleic acid structure. One nucleic acid molecule is the complement of another nucleic acid molecule if it exhibits complete complementarity. As used in this application, molecules exhibit complete complementarity when each nucleotide of one of the molecules is complementary to a nucleotide of the other. Two molecules are minimally complementary if they can hybridize to each other with sufficient stability to allow them to remain ringed together under at least conventional stringent conditions. Similarly, moPetition 870170047791, of 07/07/2017, p. 58/152
49/114 léculas são complementares se puderem hibridizar uma à outra com estabilidade suficiente para permitir-lhes permanecer aneladas uma à outra sob condições de alta estringência convencionais. Condições de estringência convencionais são descritas por Sambrook et al., em: Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (1989)), e por Haymes et al., em: Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach, IRL Press, Washington, DC (1985). Partidas de complementaridade completa são então permissíveis, enquanto tais partidas não impedem completamente a capacidade das moléculas de formar uma estrutura de fita dupla. A fim de uma molécula de ácido nucleico servir como um iniciador ou sonda é necessário somente ser suficientemente complementar na sequência para ser capaz de formar uma estrutura de fita dupla estável sob determinadas concentrações de solvente e sal empregadas. [00426] Como usado neste pedido, uma sequência substancialmente homóloga é uma sequência de ácidos nucleicos que hibridizará especificamente ao complemento da sequência de ácidos nucleicos com a qual está sendo comparada sob condições de alta estringência. As sondas de ácido nucleico e iniciadores da presente invenção podem hibridizar sob condições estringentes a uma sequência-alvo de DNA. O termo condições de hibridização estringentes é definido como condições sob as quais uma sonda ou iniciador hibridizam especificamente com uma sequência(s) alvo e não com sequências não-alvo, como pode ser determinado empiricamente. O termo condições estringentes é funcionalmente definido quanto à hibridização de uma sonda de ácido nucleico a um ácido nucleico-alvo (isto é, a uma determinada sequência de ácido nucleico de interesse) pelo procedimento de hibridização específica discutido em Sambrook et al., 1989, em 9.52-9.55. Ver também, Sambrook et al., 1989 em 9.47-9.52, 9.569.58; Kanehisa, Nucl. Acids Res. 12:203-213, 1984; e Wetmur and DaPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 59/15249/114 molecules are complementary if they can hybridize to each other with sufficient stability to allow them to remain ringed together under conventional high stringency conditions. Conventional stringency conditions are described by Sambrook et al., In: Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (1989)), and by Haymes et al., In: Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach, IRL Press, Washington, DC (1985). Completely complementary matches are then permissible, while such matches do not completely impede the ability of molecules to form a double-stranded structure. In order for a nucleic acid molecule to serve as a primer or probe it is only necessary to be sufficiently complementary in the sequence to be able to form a stable double-stranded structure under certain concentrations of solvent and salt employed. [00426] As used in this application, a substantially homologous sequence is a nucleic acid sequence that will specifically hybridize to the complement of the nucleic acid sequence with which it is being compared under conditions of high stringency. The nucleic acid probes and primers of the present invention can hybridize under stringent conditions to a target DNA sequence. The term stringent hybridization conditions is defined as conditions under which a probe or primer hybridizes specifically to a target sequence (s) and not to non-target sequences, as can be determined empirically. The term stringent conditions is functionally defined as to the hybridization of a nucleic acid probe to a target nucleic acid (that is, to a particular nucleic acid sequence of interest) by the specific hybridization procedure discussed in Sambrook et al., 1989, on 9.52-9.55. See also, Sambrook et al., 1989 at 9.47-9.52, 9,569.58; Kanehisa, Nucl. Acids Res. 12: 203-213, 1984; and Wetmur and DaPetição 870170047791, of 07/07/2017, p. 59/152
50/114 vidson, J. Mol. Biol. 31:349-370, 1968. Condições de estringência apropriadas que promovem a hibridização de DNA são, por exemplo, 6,0 x cloreto de sódio/citrato de sódio (SSC) em aproximadamente 45°C, seguidos por lavagem com 2,0 x SSC a 50°C, sã o conhecidos àqueles versados na técnica ou podem ser encontrados em Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y., 1989, 6.3.16.3.6. Por exemplo, a concentração de sal na etapa de lavagem pode ser selecionada a partir de uma estringência baixa de aproximadamente 2,0 x SSC a 50°C a uma alta estringência de aproximadamente 0,2 x SSC a 50°C. Além disso, à temperatura na etapa de lavagem pode ser aumentada de condições de baixa estringência a temperatura ambiente, aproximadamente 22°C, a condições de alta e stringência a aproximadamente 65°C. Ambos temperatura e sal podem ser variados, ou a temperatura ou concentração de sal podem ser consideradas constantes enquanto outra variável é modificada.50/114 vidson, J. Mol. Biol. 31: 349-370, 1968. Appropriate stringency conditions that promote DNA hybridization are, for example, 6.0 x sodium chloride / sodium citrate (SSC) at approximately 45 ° C, followed by washing with 2.0 x SSC at 50 ° C, are known to those skilled in the art or can be found in Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY, 1989, 6.3.16.3.6. For example, the salt concentration in the washing step can be selected from a low stringency of approximately 2.0 x SSC at 50 ° C to a high stringency of approximately 0.2 x SSC at 50 ° C. In addition, the temperature in the washing step can be increased from low stringency conditions to room temperature, approximately 22 ° C, to high stringency conditions at approximately 65 ° C. Both temperature and salt can be varied, or the temperature or salt concentration can be considered constant while another variable is modified.
[00427] Por exemplo, a hibridização usando sondas ou iniciadores de DNA ou RNA pode ser realizada a 65°C em 6 x SSC, SDS 0,5%, Denhardt 5x, DNA não específico 100 pg/mL (por exemplo, DNA de esperma de salmão sonicado) com lavagem em 0,5 x SSC, SDS 0,5% a 65°C, para alta estringência.[00427] For example, hybridization using DNA or RNA probes or primers can be performed at 65 ° C in 6 x SSC, 0.5% SDS, 5x Denhardt, non-specific 100 pg / mL DNA (for example, DNA from sonicated salmon sperm) with washing in 0.5 x SSC, 0.5% SDS at 65 ° C, for high stringency.
[00428] É contemplado que condições de hibridização de estringência mais baixa, tais como hibridização mais baixa e/ou temperaturas de lavagem podem ser usadas para identificar sequências relacionadas tendo um grau de similaridade menor de sequência se a especificidade de ligação da sonda ou iniciador à sequência(s)-alvo for conservada. Consequentemente, as sequências nucleotídicas da presente invenção podem ser usadas para sua capacidade de formar seletivamente moléculas duplexes com intervalos complementares de fragmentos de DNA, RNA ou cDNA. A detecção de segmentos de DNA através de hibridização é bem conhecida para aqueles versados na[00428] It is contemplated that lower stringency hybridization conditions, such as lower hybridization and / or wash temperatures can be used to identify related sequences having a lower degree of sequence similarity if the specificity of probe or primer binding to target sequence (s) is retained. Consequently, the nucleotide sequences of the present invention can be used for their ability to selectively form duplex molecules with complementary intervals of DNA, RNA or cDNA fragments. The detection of DNA segments through hybridization is well known to those skilled in
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 60/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 60/152
51/114 técnica, e dessa maneira dependendo da aplicação visada, cada um desejará empregar condições de hibridização variadas para alcançar graus variados de seletividade de sonda em direção à sequência-alvo e o método de escolha dependerá dos resultados desejados.51/114 technique, and thus depending on the intended application, each will wish to employ varying hybridization conditions to achieve varying degrees of probe selectivity towards the target sequence and the method of choice will depend on the desired results.
[00429] Como usado neste pedido, um agente, sendo uma molécula que ocorre naturalmente ou de outra maneira pode ser substancialmente purificado, se desejado, referindo-se a uma molécula separada substancialmente de todas outras moléculas normalmente associadas a ele em seu estado nativo. Mais preferencialmente, uma molécula substancialmente purificada é a espécie predominante presente em uma preparação. Uma molécula substancialmente purificada pode ser mais que 60% livre, preferencialmente 75% livre, mais preferencialmente 90% livre, e ainda mais preferencialmente 95% livre de outras moléculas (exclusivas de solvente) presentes na mistura natural. O termo substancialmente purificado não é destinado a englobar as moléculas presentes em seu estado nativo.[00429] As used in this application, an agent, being a naturally occurring molecule or otherwise, can be substantially purified, if desired, by referring to a molecule separated substantially from all other molecules normally associated with it in its native state. More preferably, a substantially purified molecule is the predominant species present in a preparation. A substantially purified molecule can be more than 60% free, preferably 75% free, more preferably 90% free, and even more preferably 95% free of other molecules (exclusive of solvent) present in the natural mixture. The term substantially purified is not intended to encompass molecules present in their native state.
[00430] Os agentes da presente invenção preferencialmente serão biologicamente ativos em relação a um atributo estrutural, tais como a capacidade de um ácido nucleico de hibridizar a outra molécula de ácido nucleico, ou em relação à capacidade de uma proteína de ser ligada por um anticorpo (ou competir com outra molécula por tal ligação). Alternativamente, tal atributo pode ser catalítico, e dessa maneira implicar a capacidade do agente de mediar uma reação química ou resposta.[00430] The agents of the present invention will preferably be biologically active in relation to a structural attribute, such as the ability of a nucleic acid to hybridize to another nucleic acid molecule, or in relation to the ability of a protein to be bound by an antibody (or compete with another molecule for such a bond). Alternatively, such an attribute can be catalytic, and thus imply the agent's ability to mediate a chemical reaction or response.
[00431] Os agentes da presente invenção também podem ser recombinantes. Como usado neste pedido, o termo recombinante significa qualquer agente (por exemplo, DNA, peptídeo etc.), isto é, ou resultados, entretanto indiretos, da manipulação humana de uma molécula de ácido nucleico.[00431] The agents of the present invention can also be recombinant. As used in this application, the term recombinant means any agent (e.g., DNA, peptide, etc.), that is, or results, however indirect, from human manipulation of a nucleic acid molecule.
[00432] Os agentes da presente invenção podem ser marcados[00432] The agents of the present invention can be labeled
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 61/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 61/152
52/114 com reagentes que facilitam a detecção do agente (marcadores, por exemplo, fluorescentes (Prober et al., Science 238:336-340 (1987); Patente Europeia No 144914), marcadores químicos (Patente NorteAmericana No 4.582.789; Patente Norte-Americana No 4.563.417), bases modificadas (Patente Europeia No 119448), todas as quais são neste pedido incorporadas por referência em sua totalidade).52/114 with reagents that facilitate detection of the agent (labels, e.g., fluorescent (Prober et al, Science 238:. 336-340 (1987); European Patent No. 144914), chemical labels (U.S. Patent No. 4,582. 789; U.S. Patent No. 4,563,417), modified bases (European Patent No. 119448), all of which are incorporated in this application by reference in its entirety).
[00433] Em um aspecto, um agente da presente invenção hibridizará especificamente a uma ou mais das moléculas de ácidos nucleicos apresentadas nas SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213 ou complementos das mesmas ou fragmentos quaisquer sob condições moderadamente estritas, por exemplo, em aproximadamente 2,0 x SSC e aproximadamente 65°C. Em um aspecto, um ácido nucle ico da presente invenção hibridizará especificamente a uma ou mais das moléculas de ácidos nucleicos apresentadas nas SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213 ou complementos ou fragmentos quaisquer sob condições de alta estringência.[00433] In one aspect, an agent of the present invention will specifically hybridize to one or more of the nucleic acid molecules shown in SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 or complements thereof or fragments thereof under moderately strict conditions, for example , at approximately 2.0 x SSC and approximately 65 ° C. In one aspect, a nucleic acid of the present invention will specifically hybridize to one or more of the nucleic acid molecules shown in SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 or complements or fragments thereof under conditions of high stringency.
[00434] Agentes da presente invenção incluem marcadores genéticos. Exemplos de tais marcadores incluem moléculas de ácidos nucleicos compreendendo sequências de ácidos nucleicos selecionadas a partir do grupo composto das SEQ ID NOS: 143 a 213. Exemplos de bancos de dados públicos de marcadores incluem, por exemplo: Soybase, um Serviço de Pesquisa Agrícola, e Departamento de Agricultura dos Estados Unidos. Outros marcadores genéticos são revelados neles.[00434] Agents of the present invention include genetic markers. Examples of such markers include nucleic acid molecules comprising nucleic acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 143 to 213. Examples of public marker databases include, for example: Soybase, an Agricultural Research Service, and the United States Department of Agriculture. Other genetic markers are revealed in them.
[00435] Agentes da presente invenção incluem fragmentos de moléculas de ácidos nucleicos da presente invenção. Os fragmentos podem conter porções significantes das, ou de fato, a maior parte das, SEQ ID NOS: 143 a 213. Em um aspecto, os fragmentos estão entre 100 e 200 resíduos consecutivos, 150 e 300 resíduos consecutivos, 50 e 150 resíduos consecutivos, ou 20 e 50 resíduos consecutivos ao[00435] Agents of the present invention include fragments of nucleic acid molecules of the present invention. The fragments may contain significant portions of, or indeed, most of, SEQ ID NOS: 143 to 213. In one aspect, the fragments are between 100 and 200 consecutive residues, 150 and 300 consecutive residues, 50 and 150 consecutive residues , or 20 and 50 residues consecutive to
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 62/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 62/152
53/114 longo de uma molécula nucleica da presente invenção. Em outro aspecto, o fragmento compreende pelo menos 50, 100, 200, 300, 400, ou 500 resíduos consecutivos das SEQ ID NOS: 143 a 213. Em um aspecto, um fragmento da molécula de ácido nucleico é capaz de seletivamente hibridizar às SEQ ID NOS: 143 a 213.53/114 over a nucleic molecule of the present invention. In another aspect, the fragment comprises at least 50, 100, 200, 300, 400, or 500 consecutive residues of SEQ ID NOS: 143 to 213. In one aspect, a fragment of the nucleic acid molecule is capable of selectively hybridizing to SEQ ID NOS: 143 to 213.
[00436] Em um aspecto da presente invenção, um marcador preferencial da molécula de ácido nucleico da presente invenção tem a sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213 ou complementos das mesmas ou fragmentos também. Em outro aspecto da presente invenção, um marcador preferencial da molécula de ácido nucleico da presente invenção compartilha identidade de sequência entre 80% e 100% ou 90% e 100% com a sequência de ácidos nucleicos apresentada na SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213 ou complemento das mesmas ou fragmentos também. Em um aspecto adicional da presente invenção, um marcador preferencial da molécula de ácido nucleico da presente invenção compartilha identidade de sequência entre 95% e 100% com a sequência apresentada nas SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213 ou complemento das mesmas ou fragmentos também. Em um aspecto da presente invenção, um marcador preferencial da molécula de ácido nucleico da presente invenção compartilha identidade de sequência entre 98% e 100% com a sequência de ácidos nucleicos apresentada nas SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213 ou complemento das mesmas ou fragmentos também.[00436] In one aspect of the present invention, a preferred marker of the nucleic acid molecule of the present invention has the nucleic acid sequence shown in SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 or complements thereof or fragments as well. In another aspect of the present invention, a preferred marker of the nucleic acid molecule of the present invention shares sequence identity between 80% and 100% or 90% and 100% with the nucleic acid sequence shown in SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 or complement of the same or fragments as well. In a further aspect of the present invention, a preferred marker of the nucleic acid molecule of the present invention shares sequence identity between 95% and 100% with the sequence shown in SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 or complement of the same or fragments too. In one aspect of the present invention, a preferred marker of the nucleic acid molecule of the present invention shares sequence identity between 98% and 100% with the nucleic acid sequence shown in SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 or complement of same or fragments as well.
[00437] A porcentagem de identidade é preferencialmente determinada usando Best Fit ou programa Gap do Pacote de Software de Análise de Sequência™ (Versão 10; Genetics Computer Group, Inc, Universidade do Centro de Biotecnologia de Wisconsin, Madison, WI). Gap utiliza o algoritmo de Needleman e Wunsch para encontrar o alinhamento de duas sequências que maximiza o número de compatiPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 63/152[00437] The percent identity is preferably determined using Best Fit or Sequence Analysis Software Package Gap ™ program (Version 10; Genetics Computer Group, Inc, University of Wisconsin Biotechnology Center, Madison, WI). Gap uses the Needleman and Wunsch algorithm to find the alignment of two strings that maximizes the number of compatiPetition 870170047791, from 07/07/2017, p. 63/152
54/114 bilidades de posição e minimiza o número de lacunas. BestFit realiza um alinhamento ótimo do melhor segmento de similaridade entre duas sequências e insere lacunas para maximizar o número de compatibilidades de posição usando o algoritmo de homologia local de Smith e Waterman. Os cálculos de porcentagem de identidade também podem ser realizados usando o programa Megalign da suíte computacional de bioinformática LASERGENE (parâmetros pré-definidos, DNASTAR Inc., Madison, Wisconsin). A porcentagem de identidade é ainda mais preferencialmente determinada usando o programa BestFit usando parâmetros pré-definidos.54/114 positions and minimizes the number of gaps. BestFit performs an optimal alignment of the best similarity segment between two sequences and inserts gaps to maximize the number of position compatibilities using Smith and Waterman's local homology algorithm. The percent identity calculations can also be performed using the Megalign program from the LASERGENE bioinformatics computer suite (predefined parameters, DNASTAR Inc., Madison, Wisconsin). The identity percentage is even more preferably determined using the BestFit program using predefined parameters.
[00438] A presente invenção fornece ainda um ou mais marcadores de polimorfismos de nucleotídeo único (SNP). A detecção de sítios polimórficos em uma amostra de DNA, RNA, ou cDNA pode ser facilitada através do uso de métodos de amplificação de ácidos nucleicos. Tais métodos incluem aqueles que especificamente aumentam a concentração de polinucleotídeos que atravessam o sítio polimórfico, ou incluem aquele sítio e sequências localizadas distal ou proximal a ele. Tais moléculas amplificadas podem ser prontamente detectadas pela eletroforese em gel ou outros meios.[00438] The present invention further provides one or more single nucleotide polymorphism (SNP) markers. The detection of polymorphic sites in a sample of DNA, RNA, or cDNA can be facilitated through the use of nucleic acid amplification methods. Such methods include those that specifically increase the concentration of polynucleotides that cross the polymorphic site, or include that site and sequences located distal or proximal to it. Such amplified molecules can be readily detected by gel electrophoresis or other means.
[00439] Um método de realização de tal amplificação emprega a reação da polimerase em cadeia (PCR) (Mullis et al. 1986 Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 51:263-273; Patente Europeia No 50.424; Patente Europeia No 84.796; Patente Europeia No 258.017; Patente Europeia No 237.362; Patente Europeia No 201.184; Patente NorteAmericana No 4.683.202; Patente Norte-Americana No 4.582.788; e Patente Norte-Americana No 4.683.194), usando pares de iniciadores que são capazes de hibridizar às sequências proximais que definem um polimorfismo em sua forma de fita dupla.[00439] One embodiment of this amplification method employs the polymerase chain reaction (PCR) (Mullis et al 1986 Cold Spring Harbor Symp Quant Biol 51: 263-273; European Patent No. 50,424; European Pat.... the 84,796; European Patent No. 258 017; European Patent No. 237 362; European Patent No. 201 184, U.S. Patent No. 4,683,202; U.S. Patent No. 4,582,788; and U.S. Patent No. 4,683,194) , using pairs of primers that are able to hybridize to the proximal sequences that define a polymorphism in its double-stranded form.
[00440] Alelos que estão associados com maturidade vegetal podem ser determinados com base em análise de ligação das plantas e[00440] Alleles that are associated with plant maturity can be determined based on plant linkage analysis and
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 64/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 64/152
55/114 moléculas de ácidos nucléicos da presente invenção. Diversos mapas genéticos moleculares de Glycine foram relatados (Mansur et al., Crop Sci. 36: 1327 - 1336 (1996); Shoemaker et al., Genetics 144: 329-338 (1996); Shoemaker et al., Crop Science 32: 1091-1098 (1992), Shoemaker et al., Crop Science 35: 436-446 (1995); Tinley and Rafalski, J. Cell Biochem. Suppl. 14E: 291 (1990); Cregan et al., Crop Science 39: 1464-1490 (1999)). Soja, Glycine soja e Soja x. Glycine soja compartilha grupos de ligação (Shoemaker et al., Genetics 144: 329-338 (1996)). Um grupo de ligação (LG) é um conjunto de genes que tendem a ser herdados juntos de geração à geração. Como usado neste pedido, referência para os grupos de ligação (LG), D1b; C2; O; L; e I e de Soja refere-se ao grupo de ligação que corresponde a grupos de ligação, D1b, C2, O, L; e I do mapa genético de Soja (Mansur et al., Crop Science. 36: 1327-1336 (1996)); Cregan et al., Crop Science 39: 1464-1490 (1999), e Soybase, Serviço de Pesquisa Agrícola, Departamento de Agricultura dos Estados Unidos.55/114 nucleic acid molecules of the present invention. Several molecular genetic maps of Glycine have been reported (Mansur et al., Crop Sci. 36: 1327 - 1336 (1996); Shoemaker et al., Genetics 144: 329-338 (1996); Shoemaker et al., Crop Science 32: 1091-1098 (1992), Shoemaker et al., Crop Science 35: 436-446 (1995); Tinley and Rafalski, J. Cell Biochem. Suppl. 14E: 291 (1990); Cregan et al., Crop Science 39: 1464-1490 (1999)). Soy, Glycine soy and Soy x. Glycine soy shares linkage groups (Shoemaker et al., Genetics 144: 329-338 (1996)). A linking group (LG) is a set of genes that tend to be inherited together from generation to generation. As used in this application, reference to link groups (LG), D1b; C2; O; L; and I and Soybeans refer to the linking group corresponding to linking groups, D1b, C2, O, L; and I of the genetic map of Soy (Mansur et al., Crop Science. 36: 1327-1336 (1996)); Cregan et al., Crop Science 39: 1464-1490 (1999), and Soybase, Agricultural Research Service, United States Department of Agriculture.
[00441] Pesquisas por todo o genoma revelaram marcadores SNP associados com a região genômica de maturidade 1 são localizados no grupo de ligação (LG) C2, região genômica de maturidade 2 é localizada em LG O, região genômica de maturidade 3 é localizada em LG L, região genômica de maturidade 4 é localizada em LG I, região genômica de maturidade 5 é localizada em LG L, região genômica de maturidade 6 é localizada em LG Dlb+W, região genômica de maturidade 7 é localizada em LG G e região genômica de maturidade 8 é localizada em LG M.[00441] Research across the genome has revealed SNP markers associated with the genomic region of maturity 1 are located in the link group (LG) C2, genomic region of maturity 2 is located in LG O, genomic region of maturity 3 is located in LG L, genomic region of maturity 4 is located in LG I, genomic region of maturity 5 is located in LG L, genomic region of maturity 6 is located in LG Dlb + W, genomic region of maturity 7 is located in LG G and genomic region maturity 8 is located at LG M.
[00442] Em um aspecto, a presente invenção pode ser usada para identificar marcadores adicionais associados com regiões genômicas de maturidade 1 a 8. A presente invenção inclui um marcador de maturidade em 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM ou 30 cM das SEQ ID NO: 143 a 213. Similarmente um ou mais marcadores mapeados dentro de 1, 5,[00442] In one aspect, the present invention can be used to identify additional markers associated with genomic regions of maturity 1 to 8. The present invention includes a maturity marker at 1 cM, 5 cM, 10 cM, 15 cM or 30 cM of SEQ ID NO: 143 to 213. Similarly, one or more markers mapped within 1, 5,
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 65/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 65/152
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10, 20 e 30 cM ou menos das moléculas marcadoras da presente invenção podem ser usados para a seleção ou introgressão da região associada com maturidade e/ou hábito de crescimento vegetal. A presente invenção inclui um marcador de maturidade que é ligado com as SEQ ID NO: 143 a 213 e maturidade retardada. A presente invenção inclui uma molécula de ácido nucleico substancialmente purificada compreendendo um marcador de maturidade em 5 quilobases, 10 quilobases, 20 quilobases, 30 quilobases, 100 quilobases, 500 quilobases, 1.000 quilobases, 10.000 quilobases, 25.000 quilobases ou 50.000 quilobases de um marcador selecionado a partir do grupo composto das SEQ ID NO: 143 a 213. A presente invenção inclui um marcador de maturidade em 5 quilobases, 10 quilobases, 20 quilobases, 30 quilobases, 100 quilobases, 500 quilobases, 1.000 quilobases, 10.000 quilobases, 25.000 quilobases ou 50.000 quilobases de qualquer uma das SEQ ID NO: 143 a 213 que cossegrega com qualquer uma das SEQ ID NO: 143 a 213. Similarmente um ou mais marcadores mapeados em 5 quilobases, 10 quilobases, 20 quilobases, 30 quilobases, 100 quilobases, 500 quilobases, 1.000 quilobases, 10.000 quilobases, 25.000 quilobases ou 50.000 quilobases ou menos de moléculas marcadoras da presente invenção podem ser usadas para a seleção ou introgressão da região associada com maturidade e/ou hábito de crescimento vegetal.10, 20 and 30 cM or less of the marker molecules of the present invention can be used for the selection or introgression of the region associated with maturity and / or plant growth habit. The present invention includes a maturity marker that is linked with SEQ ID NO: 143 to 213 and delayed maturity. The present invention includes a substantially purified nucleic acid molecule comprising a maturity marker at 5 kilobases, 10 kilobases, 20 kilobases, 30 kilobases, 100 kilobases, 500 kilobases, 1,000 kilobases, 10,000 kilobases, 25,000 kilobases or 50,000 kilobases from a selected marker from the compound group of SEQ ID NO: 143 to 213. The present invention includes a maturity marker at 5 kilobases, 10 kilobases, 20 kilobases, 30 kilobases, 100 kilobases, 500 kilobases, 1,000 kilobases, 10,000 kilobases, 25,000 kilobases or 50,000 kilobases of any of SEQ ID NO: 143 to 213 that co-segregates with any of SEQ ID NO: 143 to 213. Similarly, one or more markers mapped in 5 kilobases, 10 kilobases, 20 kilobases, 30 kilobases, 100 kilobases, 500 kilobases, 1,000 kilobases, 10,000 kilobases, 25,000 kilobases or 50,000 kilobases or less of marker molecules of the present invention may be used for the selection or introgression of the region associated with maturity and / or plant growth habit.
[00443] Uma região genômica de maturidade é uma região física de um cromossomo vegetal que foi associado com a determinação da data de maturidade de uma planta. Uma planta é considerada madura quando 95% de suas vagens tenham alcançado sua cor madura. Em um aspecto da presente invenção, a data de maturidade de uma planta é o número de dias após 31 de agosto no hemisfério norte. Alelos das regiões genômicas de maturidade 1 a 8 podem influir na data de maturidade de uma planta.[00443] A maturity genomic region is a physical region of a plant chromosome that has been associated with determining a plant's maturity date. A plant is considered mature when 95% of its pods have reached their mature color. In one aspect of the present invention, a plant's maturity date is the number of days after August 31 in the northern hemisphere. Alleles of the genomic regions from maturity 1 to 8 can influence the maturity date of a plant.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 66/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 66/152
57/114 [00444] Em um aspecto, a data de maturidade de uma planta pode determinar o grupo de maturidade de uma planta. Neste pedido, a maturidade relativa refere-se a um grupo de maturidade de planta de soja subdividindo um grupo de maturidade em décimos, por exemplo, III.5. Maturidade relativa fornece uma descrição mais exata da maturidade vegetal. O número após o ponto decimal refere-se ao parental mais precoce ou mais retardado com um grupo de maturidade, por exemplo, IV.2 é uma variedade precoce do grupo IV e IV.9 é um grupo tardio IV. [00445] Em outro aspecto, grupo de maturidade pode ser determinado por referência em relação a uma linhagem comercializada para um grupo de maturidade. Por exemplo, uma linhagem comercializada com um grupo de maturidade conhecido é cultivada em um experimento com uma nova linhagem de soja e a maturidade relativa da nova linhagem de soja é apurada pela contagem do número de dias após 31 de agosto e comparando com a linhagem comercializada. Grupo de maturidade refere-se a uma divisão da indústria de grupos de variedades baseadas em uma faixa em latitudes que a planta é melhor adaptada e ainda mais produtiva. Variedades de soja são classificadas em 13 grupos de maturidade reconhecidos com as designações variando de grupos de maturidade 000, 00, 0, e I a X, onde 000 representa a variedade de maturidade mais precoce e X representa a variedade de maturidade mais tardia. Os grupos de maturidade têm cinturões de maturidade correspondentes.57/114 [00444] In one aspect, a plant's maturity date can determine a plant's maturity group. In this order, relative maturity refers to a soybean plant maturity group subdividing a maturity group in tenths, for example, III.5. Relative maturity provides a more accurate description of plant maturity. The number after the decimal point refers to the earliest or most retarded parent with a maturity group, for example, IV.2 is an early variety from group IV and IV.9 is a late group IV. [00445] In another aspect, maturity group can be determined by reference in relation to a pedigree marketed for a maturity group. For example, a strain sold with a known maturity group is grown in an experiment with a new soybean strain and the relative maturity of the new soybean strain is determined by counting the number of days after August 31 and comparing it with the marketed strain . Maturity group refers to a division of the industry into groups of varieties based on a range in latitudes that the plant is best adapted to and even more productive. Soy varieties are classified into 13 recognized maturity groups with designations ranging from maturity groups 000, 00, 0, and I to X, where 000 represents the earliest maturity variety and X represents the most late maturity variety. Maturity groups have corresponding maturity belts.
[00446] Plantas de soja em grupos de maturidade 000 a IV têm um hábito vegetal indeterminado, enquanto as plantas de soja em grupos de maturidade V a X têm um hábito vegetal determinado. Variedades precoces de maturidade (000 a III) são adaptadas a latitudes norte com comprimentos de dia mais longos com a designação de maturidade aumentando em latitudes ao sul com comprimentos de dia mais curtos.[00446] Soybean plants in groups of maturity 000 to IV have an indeterminate plant habit, while soybean plants in groups of maturity V to X have a determined plant habit. Early varieties of maturity (000 to III) are adapted to northern latitudes with longer day lengths with the designation of maturity increasing in southern latitudes with shorter day lengths.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 67/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 67/152
58/114 [00447] Um aumento na maturidade pode se correlacionar com um aumento no rendimento ou outros traços, tais como concentração de óleo. A correlação da maturidade vegetal e outros traços confunde a avaliação de marcadores e genes candidatos potenciais associados com outros traços, tais como rendimento. Identificação de regiões genômicas associadas com maturidade vegetal, mas não a outro traço, pode permitir a melhoradores estabelecer geneticamente a maturidade vegetal em uma planta de soja e separadamente elucidar outros traços, tais como aqueles associados com rendimento.58/114 [00447] An increase in maturity can correlate with an increase in yield or other traits, such as oil concentration. The correlation of plant maturity and other traits confuses the assessment of potential candidate markers and genes associated with other traits, such as yield. Identification of genomic regions associated with plant maturity, but not with another trait, can allow breeders to genetically establish plant maturity in a soybean plant and separately elucidate other traits, such as those associated with yield.
[00448] A presente invenção inclui um método de estabelecimento onde uma planta de soja ou semente de soja devem ser cultivadas pela determinação da combinação alélica de uma planta de soja ou semente de soja pela obtenção de DNA de uma planta de soja ou semente de soja; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 1 são homozigotos ou heterozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 2 são homozigotos ou heterozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 3 são homozigotos ou heterozigotos; determinação da combinação alélica dos alelos nas regiões genômicas de maturidade 1, 2 e 3; e atribuição de um valor de grupo de maturidade à planta de soja ou semente de soja. Em um aspecto preferencial, determinação se os alelos em um locus são homozigotos ou heterozigotos inclui a detecção de um polimorfismo com uma molécula de ácido nucleico tendo uma sequência de qualquer uma das SEQ ID NOS: 143 a 174, ou complementos das mesmas.[00448] The present invention includes a method of establishment where a soybean plant or soybean seed must be grown by determining the allelic combination of a soybean plant or soybean seed by obtaining DNA from a soybean plant or soybean seed ; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 1 are homozygous or heterozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 2 are homozygous or heterozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 3 are homozygous or heterozygous; determination of the allele combination of the alleles in the genomic regions of maturity 1, 2 and 3; and assigning a maturity group value to the soybean plant or soybean seed. In a preferred aspect, determining whether the alleles at a locus are homozygous or heterozygous includes detecting a polymorphism with a nucleic acid molecule having a sequence from any of SEQ ID NOS: 143 to 174, or complements thereof.
[00449] Em outro aspecto, a presente invenção inclui um método de estabelecimento onde uma planta de soja ou semente de soja deveria ser cultivada pela determinação da combinação alélica de uma planta de soja ou semente de soja pela obtenção de DNA de uma planta de soja ou semente de soja; determinação se alelos em um loPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 68/152[00449] In another aspect, the present invention includes a method of establishment where a soy plant or soy seed should be grown by determining the allelic combination of a soy plant or soy seed by obtaining DNA from a soy plant or soybean seed; determination of alleles in a loPetition 870170047791, of 07/07/2017, p. 68/152
59/114 cus na região genômica de maturidade 1 são heterozigotos ou homozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 2 são heterozigotos ou homozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 3 são heterozigotos ou homozigotos; determinação se alelos em um locus na região genômica de maturidade 2 são heterozigotos ou homozigotos; determinação da combinação alélica dos alelos nas regiões genômicas de maturidade 1, 2, 3 e 4; e atribuição de um valor de grupo de maturidade à planta de soja ou semente de soja.59/114 cus in the genomic region of maturity 1 are heterozygous or homozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 2 are heterozygous or homozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 3 are heterozygous or homozygous; determining whether alleles at a locus in the genomic region of maturity 2 are heterozygous or homozygous; determination of the allele combination of the alleles in the genomic regions of maturity 1, 2, 3 and 4; and assigning a maturity group value to the soybean plant or soybean seed.
[00450] A presente invenção também inclui um método de fornecimento de informação sobre a maturidade de uma planta de soja ou semente de soja pela obtenção de DNA da semente de soja ou planta de soja e pela determinação do perfil alélico em um locus da região genômica 4.[00450] The present invention also includes a method of providing information on the maturity of a soybean plant or soybean seed by obtaining DNA from the soybean seed or soybean plant and by determining the allelic profile at a locus in the genomic region 4.
[00451] A presente invenção também inclui um método de estabelecimento onde uma planta de soja ou semente de soja deveria ser cultivada pela determinação da combinação alélica de uma planta de soja ou semente de soja pela obtenção de DNA de uma planta de soja ou semente de soja; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 3 determinação; e determinação da combinação alélica dos alelos nas regiões genômicas de maturidade 1, 2, e 3.[00451] The present invention also includes a method of establishment where a soybean plant or soybean seed should be grown by determining the allelic combination of a soybean plant or soybean seed by obtaining DNA from a soybean plant or soybean seed. Soy; determining whether an allele of the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele of the maturity 2 genomic region is homozygous or heterozygous; determination if an allele of the genomic region of maturity 3 determination; and determination of the allele combination of the alleles in the genomic regions of maturity 1, 2, and 3.
[00452] Em um aspecto preferencial, a planta de soja ou semente de soja é homozigota para os alelos nas regiões genômicas de maturidade 1, 2 e 3. Em um aspecto preferencial, os alelos homozigotos são dominantes ou recessivos. Em outro aspecto, a planta de soja ou semente de soja é homozigota para os alelos nas regiões genômicas de maturidade 1 e 2. Em um aspecto preferencial, os alelos homozigotos[00452] In a preferred aspect, the soybean plant or soybean seed is homozygous for the alleles in the genomic regions of maturity 1, 2 and 3. In a preferred aspect, the homozygous alleles are dominant or recessive. In another aspect, the soybean plant or soybean seed is homozygous for alleles in maturity 1 and 2 genomic regions. In a preferred aspect, homozygous alleles
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 69/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 69/152
60/114 são dominantes ou recessivos. Em outro aspecto, a planta de soja ou semente de soja é homozigota para os alelos nas regiões genômicas de maturidade 2 e 3. Em um aspecto preferencial, os alelos homozigotos são dominantes ou recessivos. Em outro aspecto, a planta de soja ou semente de soja é heterozigota para os alelos nas regiões genômicas de maturidade 1, 2 e 3. Em outro aspecto, a planta de soja ou semente de soja é heterozigota para os alelos nas regiões genômicas de maturidade 1 e 2. Em outro aspecto, a planta de soja ou semente de soja é heterozigota para os alelos nas regiões genômicas de maturidade 2 e 3. Em um aspecto preferencial, a combinação alélica é a combinação alélica 10, combinação alélica 11, combinação alélica 12, combinação alélica 13, combinação alélica 14, combinação alélica 15, combinação alélica 16, combinação alélica 17, combinação alélica 18 e combinação alélica 19.60/114 are dominant or recessive. In another aspect, the soybean plant or soybean seed is homozygous for alleles in maturity 2 and 3 genomic regions. In a preferred aspect, homozygous alleles are dominant or recessive. In another aspect, the soybean plant or soybean seed is heterozygous for the alleles in the genomic regions of maturity 1, 2 and 3. In another aspect, the soybean plant or soybean seed is heterozygous for the alleles in the genomic regions of maturity. 1 and 2. In another aspect, the soybean plant or soybean seed is heterozygous for alleles in maturity 2 and 3 genomic regions. In a preferred aspect, the allelic combination is the allelic combination 10, allelic combination 11, allelic combination 12, allele combination 13, allele combination 14, allele combination 15, allele combination 16, allele combination 17, allele combination 18 and allele combination 19.
[00453] Um aspecto da presente invenção inclui um método de estabelecimento onde uma planta de soja ou semente de soja deveria ser cultivada pela determinação da combinação alélica de uma planta de soja pela obtenção de DNA de uma planta de soja ou semente de soja; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; determinação da combinação alélica dos alelos nas regiões genômicas de maturidade 1 e 2; e atribuição de um valor de crescimento de maturidade à planta de soja ou semente de soja. Em um aspecto preferencial, determinação se um alelo é homozigoto ou heterozigoto inclui a detecção de um polimorfismo de qualquer uma das SEQ ID NOS: 143 a 161. Em um aspecto preferencial, a combinação alélica é a combinação alélica 1, combinação alélica 2, combinação alélica 3, combinação alélica 4, combinação alélica 5, combinação alélica 6, combinação alélica 7, combinação alélica 8 e combinação alélica 9. Em um aspecto prefePetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 70/152[00453] One aspect of the present invention includes a method of establishment where a soybean plant or soybean seed should be grown by determining the allelic combination of a soybean plant by obtaining DNA from a soybean or soybean plant; determining whether an allele of the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele of the maturity 2 genomic region is homozygous or heterozygous; determination of the allele combination of alleles in maturity 1 and 2 genomic regions; and assigning a maturity growth value to the soybean plant or soybean seed. In a preferred aspect, determining whether an allele is homozygous or heterozygous includes detecting a polymorphism of any of SEQ ID NOS: 143 to 161. In a preferred aspect, the allele combination is the allele combination 1, allele combination 2, combination allelic 3, allelic combination 4, allelic combination 5, allelic combination 6, allelic combination 7, allelic combination 8 and allelic combination 9. In a prefect aspect 870170047791, from 07/07/2017, p. 70/152
61/114 rencial, a planta de soja ou semente de soja é obtida de um cruzamento de uma planta precoce de soja parental do grupo de maturidade e uma planta de soja parental de maturidade média. Em um aspecto preferencial, a planta de soja parental do grupo de maturidade precoce está entre 00,0 e 1.0 e a planta de soja parental de maturidade média está entre III.0 e IV.9.61/114 rential, the soybean plant or soybean seed is obtained from a cross between an early plant of parental soybean of the maturity group and a plant of parental soybean of medium maturity. In a preferential aspect, the parental soybean plant of the early maturity group is between 00.0 and 1.0 and the parental soybean plant of medium maturity is between III.0 and IV.9.
[00454] Um aspecto da presente invenção inclui um método para determinar se uma planta de soja tem um grupo de maturidade de 0,0 a III.9 pela determinação se um alelo na região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; e atribuição de um valor de grupo de maturidade para a planta de soja entre 0,0 e III.9. Em um aspecto preferencial, a maturidade na planta de soja é alcançada pelo menos 5 dias antes de uma planta de soja que é homozigota dominante na região genômica de maturidade 1, homozigota dominante na região genômica de maturidade 2 e é cultivada sob as mesmas condições ambientais.[00454] One aspect of the present invention includes a method of determining whether a soybean plant has a maturity group of 0.0 to III.9 by determining whether an allele in the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele of the maturity 2 genomic region is homozygous or heterozygous; and assigning a maturity group value for the soybean plant between 0.0 and III.9. In a preferred aspect, maturity in the soybean plant is reached at least 5 days before a soybean plant that is homozygous dominant in the genomic region of maturity 1, homozygous dominant in the genomic region of maturity 2 and is grown under the same environmental conditions .
[00455] Outro aspecto da presente invenção inclui um método para determinar se a maturidade de uma planta de soja está em um grupo de maturidade 00,0 a III.0 pela determinação se um alelo na região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; e atribuição de um valor de grupo de maturidade pela planta de soja entre 00.0 e III.0. Em um aspecto preferencial, uma semente de soja selecionada é homozigota recessiva na região genômica de maturidade 1 e homozigota recessiva na região genômica de maturidade 2 e tem um grupo de maturidade entre 0.5 e II.0. Em um aspecto preferencial, uma semente de soja é selecionada sendo homozigota recessiva na região genômica de maturidade 1 e heterozigota dominante na região genômica de maturidade 2 e tem um grupo de[00455] Another aspect of the present invention includes a method for determining whether the maturity of a soybean plant is in a maturity group 00.0 to III.0 by determining whether an allele in the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele of the maturity 2 genomic region is homozygous or heterozygous; and attribution of a maturity group value by the soy plant between 00.0 and III.0. In a preferred aspect, a selected soybean seed is homozygous recessive in the genomic region of maturity 1 and homozygous recessive in the genomic region of maturity 2 and has a maturity group between 0.5 and II.0. In a preferential aspect, a soybean seed is selected as a homozygous recessive in the genomic region of maturity 1 and a heterozygous dominant in the genomic region of maturity 2 and has a group of
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 71/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 71/152
62/114 maturidade entre 1.5 e II.9.62/114 maturity between 1.5 and II.9.
[00456] A presente invenção inclui um método onde o grupo de maturidade de uma planta de progênie é predito se um alelo na região genômica de maturidade 1 é homozigoto dominante, homozigoto recessivo ou heterozigoto e se um alelo na região genômica de maturidade 2 é homozigoto dominante, homozigoto recessivo ou heterozigoto. Em um aspecto, se o grupo de maturidade de uma planta estiver entre 0 e II, o grupo de maturidade pode ser identificado pela determinação da combinação alélica das regiões genômicas de maturidade 1 e 2 em uma planta ou semente. Ver, por exemplo, A tabela 9.[00456] The present invention includes a method where the maturity group of a progeny plant is predicted if an allele in the genomic region of maturity 1 is a dominant homozygote, recessive homozygote or heterozygous and if an allele in the genomic region of maturity 2 is homozygous dominant, homozygous recessive or heterozygous. In one aspect, if a plant's maturity group is between 0 and II, the maturity group can be identified by determining the allelic combination of maturity 1 and 2 genomic regions in a plant or seed. See, for example, Table 9.
[00457] Em um aspecto alternativo, se o grupo de maturidade de uma planta estiver entre III e V, o grupo de maturidade pode ser identificado pela determinação da combinação alélica das regiões genômicas de maturidade 1, 2 e 3 em uma planta ou semente. Ver, por exemplo, A tabela 9. Em um aspecto, se o grupo de maturidade de uma planta está entre IV e V, o grupo de maturidade pode ser identificado pela determinação da combinação alélica das regiões genômicas de maturidade 1, 2 e 3 em uma planta ou semente. Ver, por exemplo, A tabela 9.[00457] In an alternative aspect, if the maturity group of a plant is between III and V, the maturity group can be identified by determining the allelic combination of the genomic regions of maturity 1, 2 and 3 in a plant or seed. See, for example, Table 9. In one aspect, if a plant's maturity group is between IV and V, the maturity group can be identified by determining the allelic combination of maturity 1, 2 and 3 genomic regions in a plant or seed. See, for example, Table 9.
[00458] Em outro aspecto, o grupo de maturidade das plantas parentais é conhecido. Em um aspecto, os grupos de maturidade das plantas parentais são diferentes por mais de 10 dias, entre 10 dias e 20 dias, entre 10 dias e 30 dias, mais de 2 grupos de maturidade, menos de 2 grupos de maturidade, entre grupos de maturidade 000 e VI. Em um aspecto, o grupo de maturidade de uma planta de progênie resultante de um cruzamento com pelo menos um parental tendo um grupo de maturidade de 0 a II é identificado pela determinação da combinação alélica das regiões genômicas de maturidade 1 e 2. Em outro aspecto, o grupo de maturidade de uma planta de progênie resultante de um cruzamento com plantas parentais tendo um grupo de[00458] In another aspect, the parental maturity group is known. In one aspect, the maturity groups of the parental plants are different for more than 10 days, between 10 days and 20 days, between 10 days and 30 days, more than 2 maturity groups, less than 2 maturity groups, between groups of maturity 000 and VI. In one aspect, the maturity group of a progeny plant resulting from a cross with at least one parent having a maturity group of 0 to II is identified by determining the allelic combination of the maturity 1 and 2 genomic regions. In another aspect , the maturity group of a progeny plant resulting from a cross with parental plants having a group of
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 72/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 72/152
63/114 maturidade de III, IV, V, ou III a V é identificado pela determinação da combinação alélica das regiões genômicas de maturidade 1, 2 e 3. [00459] Em um aspecto, os alelos mais dominantes em um locus em uma região de grupo de maturidade estão em correlação com um retardo na maturidade. Em outro aspecto, um aumento no número de alelos dominantes está em correlação com um retardo na maturidade. [00460] Em um aspecto, as plantas parentais com uma diferença no grupo de maturidade maior do que 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5 são cruzadas e seu grupo de maturidade identificado pela determinação da combinação alélica. Em um aspecto, plantas parentais com uma diferença no grupo de maturidade entre 1 e 3, entre 1 e 4, entre 2 e 3, entre 2 e 5, entre 2 e 6, entre 2 e 7 são cruzadas e seu grupo de maturidade identificado pela determinação da combinação alélica da progênie. Em um aspecto, as plantas parentais com uma diferença no grupo de maturidade maior do que 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5 são cruzadas e seu grupo de maturidade identificado pela determinação da combinação alélica.63/114 maturity of III, IV, V, or III to V is identified by determining the allelic combination of the genomic regions of maturity 1, 2 and 3. [00459] In one aspect, the most dominant alleles in a locus in a region maturity group correlates with a delay in maturity. In another aspect, an increase in the number of dominant alleles correlates with a delay in maturity. [00460] In one aspect, parental plants with a difference in the maturity group greater than 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5 are crossed and their maturity group identified by determining the allelic combination. In one aspect, parental plants with a difference in the maturity group between 1 and 3, between 1 and 4, between 2 and 3, between 2 and 5, between 2 and 6, between 2 and 7 are crossed and their maturity group identified by determining the allelic combination of the progeny. In one aspect, parental plants with a difference in the maturity group greater than 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5 are crossed and their maturity group identified by determining the allelic combination.
[00461] Em um aspecto, uma planta de progênie tem um grupo de maturidade anterior a um parental em 5, 10 ou 15 dias. Em outro aspecto, uma planta de progênie tem um grupo de maturidade posterior uma planta parental em 5, 10 ou 15 dias. Em um aspecto, uma planta de progênie tem um grupo de maturidade anterior a ambos os parentais em 5, 10 ou 15 dias. Em outro aspecto, uma planta de progênie tem um grupo de maturidade posterior a ambas as plantas parentais em 5, 10 ou 15 dias.[00461] In one aspect, a progeny plant has a group of maturity previous to a parent in 5, 10 or 15 days. In another aspect, a progeny plant has a group of maturity after a parent plant in 5, 10 or 15 days. In one aspect, a progeny plant has a group of maturity previous to both parents in 5, 10 or 15 days. In another aspect, a progeny plant has a maturity group after both parental plants in 5, 10 or 15 days.
[00462] Em um aspecto, um parental precoce do grupo de maturidade 0,1 é cruzado com uma planta parental de maturidade posterior que é uma 1,9, e as plantas de progênie com a combinação alélica 1 são de maturidade 0,1 a 0,5. Em outro aspecto, um parental precoce com a maturidade de 0,9 é cruzado com uma planta tendo maturidade de 3,5, e as plantas tendo combinação alélica 1 é o grupo de maturiPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 73/152[00462] In one aspect, an early parent of the 0.1 maturity group is crossed with a later maturity parent plant that is a 1.9, and the progeny plants with the allelic combination 1 are of 0.1 to maturity 0.5. In another aspect, an early parent with a maturity of 0.9 is crossed with a plant having a maturity of 3.5, and plants having an allelic combination 1 is the group of maturiPetição 870170047791, of 07/07/2017, p. 73/152
64/114 dade 1,0 a 1,5.64/114 1.0 to 1.5.
[00463] Em um aspecto, o grupo de maturidade de uma semente de progênie é determinado a partir de um cruzamento entre uma planta parental de maturidade muito precoce com uma planta parental de maturidade posterior. Em um aspecto, a planta parental de maturidade mais precoce é um grupo de maturidade 00,0 a 0,9 e a planta parental de maturidade posterior é um grupo de maturidade III.5 a IV.5. Em um aspecto, a planta parental de maturidade mais precoce é um grupo de maturidade 00 e a planta parental de maturidade posterior é um grupo de maturidade III ou IV. Em um aspecto, DNA pode ser obtido de plantas ou partes da planta, tais como sementes nas populações F1, F2, F3, F4 ou posteriores. Em um aspecto, uma ou mais plantas ou partes da planta são genotipadas para alelos em regiões genômicas 1 e 2. Em um aspecto, os alelos são determinados usando os marcadores de SNP NS0128378 (região de maturidade genômica 1) e NS0118907 (região de maturidade genômica 2).[00463] In one aspect, the maturity group of a progeny seed is determined from a cross between a parent plant of very early maturity with a parent plant of later maturity. In one aspect, the parent plant of earlier maturity is a group of maturity 00.0 to 0.9 and the parent plant of later maturity is a group of maturity III.5 to IV.5. In one aspect, the parent plant of early maturity is a group of maturity 00 and the parent plant of later maturity is a group of maturity III or IV. In one aspect, DNA can be obtained from plants or parts of the plant, such as seeds in populations F 1 , F 2 , F 3 , F4 or later. In one aspect, one or more plants or parts of the plant are genotyped for alleles in genomic regions 1 and 2. In one aspect, alleles are determined using the SNP markers NS0128378 (region of genomic maturity 1) and NS0118907 (region of maturity genomics 2).
[00464] Em um aspecto, as plantas são fenotipadas para maturidade pela contagem do número de dias após 31 de agosto até que uma planta amadureça. Em um aspecto, uma planta é considerada madura quando 95% das vagens estão marrons. Em um aspecto, quando alelos de marcadores associados com a maturidade das regiões genômicas 1 e 2 são homozigotos recessivos, a planta de progênie alcançará a maturidade 15, 14, 12, 11, 10, 9 ou 8 dias mais cedo do que o grupo de maturidade se os alelos de marcadores associados com as regiões genômicas de maturidade 1 e 2 forem homozigotos dominantes. Em um aspecto, se um alelo de um marcador associado com a região genômica de maturidade 1 for homozigoto dominante e um alelo de um marcador associado com a região genômica de maturidade 2 é heterozigoto, então a planta de progênie alcançará a maturidade entre 1 dia, 1 e 2 dias, 2 e 3 dias, 2 e 4 dias, ou 3 e 5 dias antes[00464] In one aspect, plants are phenotyped for maturity by counting the number of days after August 31 until a plant matures. In one respect, a plant is considered mature when 95% of the pods are brown. In one aspect, when marker alleles associated with the maturity of genomic regions 1 and 2 are homozygous recessive, the progeny plant will reach maturity 15, 14, 12, 11, 10, 9 or 8 days earlier than the group of maturity if the marker alleles associated with maturity 1 and 2 genomic regions are dominant homozygotes. In one aspect, if an allele of a marker associated with the genomic region of maturity 1 is homozygous dominant and an allele of a marker associated with the genomic region of maturity 2 is heterozygous, then the progeny plant will reach maturity within 1 day, 1 and 2 days, 2 and 3 days, 2 and 4 days, or 3 and 5 days before
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 74/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 74/152
65/114 se os alelos de marcadores associados com as regiões genômicas de maturidade 1 e 2 forem homozigotos dominantes.65/114 if the marker alleles associated with maturity 1 and 2 genomic regions are dominant homozygotes.
[00465] Em outro aspecto da presente invenção, múltiplas sementes podem ser selecionadas ou crescidas. Múltiplas sementes podem incluir mais que ou igual a 2, 3, 4, 5, 6, 10, 50, 100, 500, 1000, 5.000, 10.000 ou mais sementes. Uma ou múltiplas sementes podem ser distribuídas a uma região geográfica adequada para o crescimento de uma ou múltiplas plantas. Neste aspecto, as sementes selecionadas podem ser distribuídas ou transportadas a uma região apropriada. [00466] A presente invenção também fornece múltiplas sementes de soja nas quais mais que 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99% das sementes se tornarão plantas onde a variação no grupo de maturidade está dentro de um grupo de maturidade, não mais de 2 grupos ou 20 dias após 31 de agosto, não mais de 1 grupo ou 10 dias após 31 de agosto, não mais de grupo 0,9 ou nove dias após 31 de agosto, não mais de 5 dias após 31 de agosto ou grupo 0,5, ou com um grupo de maturidade entre 0,0 a II,0, 000,0 a III,9. Múltiplas sementes de soja podem tornar-se plantas de soja tendo hábito de planta de soja indeterminado ou tendo hábito de planta de soja determinado. Um aspecto da presente invenção inclui um método para selecionar uma semente de soja com base no hábito de crescimento indeterminado ou determinado compreendendo a determinação se a região genômica de maturidade 3 for homozigota ou heterozigota. Em um aspecto, 85% de múltiplas sementes de soja podem alcançar a maturidade em 10 dias, 5 dias, 3 dias cada uma. Em outro aspecto, 95% de múltiplas sementes de soja podem alcançar a maturidade em 10 dias, 5 dias, 3 dias cada uma.[00465] In another aspect of the present invention, multiple seeds can be selected or grown. Multiple seeds can include more than or equal to 2, 3, 4, 5, 6, 10, 50, 100, 500, 1000, 5,000, 10,000 or more seeds. One or multiple seeds can be distributed to a geographic region suitable for the growth of one or multiple plants. In this regard, the selected seeds can be distributed or transported to an appropriate region. [00466] The present invention also provides multiple soybean seeds in which more than 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% or 99% of the seeds will become plants where the variation in the maturity group is within of a maturity group, not more than 2 groups or 20 days after August 31, not more than 1 group or 10 days after August 31, not more than 0.9 or nine days after August 31, not more than 5 days after August 31 or group 0.5, or with a group of maturity between 0.0 to II, 0, 000.0 to III, 9. Multiple soybean seeds can become soybean plants having an indeterminate soybean plant habit or having a determined soybean plant habit. One aspect of the present invention includes a method for selecting a soybean seed based on the habit of indeterminate or determined growth comprising determining whether the maturity 3 genomic region is homozygous or heterozygous. In one respect, 85% of multiple soybean seeds can reach maturity in 10 days, 5 days, 3 days each. In another aspect, 95% of multiple soybean seeds can reach maturity in 10 days, 5 days, 3 days each.
[00467] Outro aspecto da presente invenção inclui um método para isolar sementes de soja precoces de maturidade indeterminada pela obtenção de DNA da semente de soja usando um método não destruPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 75/152[00467] Another aspect of the present invention includes a method for isolating early soybean seeds of undetermined maturity by obtaining DNA from the soybean seed using a non-destructive method 870170047791, of 07/07/2017, p. 75/152
66/114 tivo; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; e determinação se um alelo na região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto.66/114 active; determining whether an allele of the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; and determining whether an allele in the genomic region of maturity 2 is homozygous or heterozygous.
[00468] Tais múltiplas sementes podem estar em um recipiente. O recipiente de sementes de soja pode conter qualquer número, peso, ou volume de sementes. Por exemplo, um recipiente pode conter pelo menos, ou mais do que, aproximadamente 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 80, 90, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 5000, 7500, ou 10.000 ou mais sementes. Em outro aspecto, um recipiente pode conter aproximadamente, ou mais que aproximadamente, 1 grama, 5 gramas, 10 gramas, 15 gramas, 20 gramas, 25 gramas, 50 gramas, 100 gramas, 250 gramas, 500 gramas, ou 1000 gramas de sementes. Alternativamente, o recipiente pode conter pelo menos, ou mais que, aproximadamente 0 gramas(0 onça), 28,349 gramas (1 onça), 141,745 gramas (5 onça), 283,49 gramas (10 onça), 453,592 gramas (1 libra), 907,184 gramas (2 libras), 1360,776 gramas (3 libras), 1814,368 gramas (4 libras), 2267,96 gramas (5 libras), 4535,92 gramas (10 libras), 6803,88 gramas (15 libras), 9071,84 gramas (20 libras), 11339,8 gramas (25 libras), 13606,76 gramas (30 libras), 18143,68 gramas (40 libras), 22679,6 gramas (50 libras), 27215,52 gramas (60 libras), 31751,44 gramas (70 libras), 36287,36 gramas (80 libras), 45359,2 gramas (100 libras), 90718,4 gramas (200 libras), 136077,6 gramas (300 libras), 226796 gramas (400 libras) ou 453592 gramas (1000 libras) ou mais sementes.[00468] Such multiple seeds can be in a container. The soybean seed container can contain any number, weight, or volume of seeds. For example, a container can contain at least, or more than, approximately 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 80, 90, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 5000, 7500, or 10,000 or more seeds. In another aspect, a container can contain approximately, or more than approximately, 1 gram, 5 grams, 10 grams, 15 grams, 20 grams, 25 grams, 50 grams, 100 grams, 250 grams, 500 grams, or 1000 grams of seeds . Alternatively, the container can contain at least, or more than, approximately 0 grams (0 ounces), 28.349 grams (1 ounce), 141.745 grams (5 ounces), 283.49 grams (10 ounces), 453.592 grams (1 pound) , 907,184 grams (2 pounds), 1360,776 grams (3 pounds), 1814,368 grams (4 pounds), 2267,96 grams (5 pounds), 4535,92 grams (10 pounds), 6803,88 grams (15 pounds), 9071.84 grams (20 pounds), 11339.8 grams (25 pounds), 13606.76 grams (30 pounds), 18143.68 grams (40 pounds), 22679.6 grams (50 pounds), 27215, 52 grams (60 pounds), 31751.44 grams (70 pounds), 36287.36 grams (80 pounds), 45359.2 grams (100 pounds), 90718.4 grams (200 pounds), 136077.6 grams (300 pounds) ), 226796 grams (400 pounds) or 453592 grams (1000 pounds) or more seeds.
[00469] Recipientes de sementes de soja podem ser quaisquer recipientes disponíveis na técnica. Por exemplo, um recipiente pode ser uma caixa, uma saca, uma lata, um pacote, uma bolsa, um rolo de fita, um balde ou um tubo.[00469] Soybean seed containers can be any containers available in the art. For example, a container can be a box, a bag, a can, a package, a bag, a roll of tape, a bucket or a tube.
[00470] Em outro aspecto, as sementes contidas nos recipientes de sementes de soja podem ser tratadas ou sementes de soja não traPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 76/152[00470] In another aspect, the seeds contained in the soybean seed containers can be treated or non-traPetition soybean seeds 870170047791, from 07/07/2017, p. 76/152
67/114 tadas. Em um aspecto, as sementes podem ser tratadas para melhorar a germinação, por exemplo, pelo condicionamento osmótico, ou pela desinfecção para proteger contra agentes patogênicos associados à semente. Em outro aspecto, as sementes podem ser recobertas com qualquer revestimento disponível para melhorar, por exemplo, plantabilidade, emergência de semente e proteção contra agentes patogênicos associados à semente. O revestimento de semente pode ser qualquer forma de revestimento de semente incluindo, mas não limitado a, peletização, revestimento de filme e incrustamentos.67/114 tadas. In one aspect, seeds can be treated to improve germination, for example, by osmotic conditioning, or by disinfection to protect against pathogens associated with the seed. In another aspect, the seeds can be covered with any available coating to improve, for example, plantability, seed emergence and protection against pathogens associated with the seed. The seed coating can be any form of seed coating including, but not limited to, pelletizing, film coating and inlays.
[00471] Um aspecto da presente invenção inclui um método de distribuição de uma planta de soja com base no grupo de maturidade pela obtenção de DNA de uma planta de soja; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 3 é homozigoto ou heterozigoto; e atribuição de um valor de crescimento de maturidade à planta de soja; e transporte da planta de soja a uma região geográfica preferencial.[00471] One aspect of the present invention includes a method of distributing a soybean plant based on the maturity group by obtaining DNA from a soybean plant; determining whether an allele of the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele of the maturity 2 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele of the maturity 3 genomic region is homozygous or heterozygous; and assigning a maturity growth value to the soybean plant; and transportation of the soy plant to a preferred geographical region.
[00472] Uma planta da invenção também pode compreender um gene que confere a resistência a inseto, peste, ataque viral ou bacteria No Tal gene pode ser um transgene. Por exemplo, um gene conferindo resistência a uma peste, tal como nematoide do cisto da soja foi descrita na Patente Norte-Americana No 7.154.021, neste pedido incorporada por referência.[00472] A plant of the invention may also comprise a gene that confers resistance to insect, pest, viral or bacteria attack the N This gene can be a transgene. For example, a gene conferring resistance to a pest, such as soybean cyst nematode was described in the U.S. Patent No. 7,154,021, incorporated by reference in this application.
[00473] Transgenes também podem ser usados para alterar o metabolismo proteico. Por exemplo, Patente Norte-Americana No 5.545.545, neste pedido incorporado por referência, descreve milho insensível à lisina sintase ácida dihidrodipicolínica (DHPS), que é substancialmente resistente a concentrações da L-lisina que de outra maneira inibem a atividade de DHPS nativo. Similarmente, EP[00473] Transgenes can also be used to alter protein metabolism. For example, U.S. Patent No. 5,545,545, incorporated in this application by reference, describes corn insensitive to acid lysine dihidrodipicolínica synthase (DHPS), which is substantially resistant to concentrations of L-lysine which otherwise inhibit the activity of DHPS native. Similarly, EP
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 77/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 77/152
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0640141, neste pedido incorporada por referência, descreve sequências que codificam aspartoquinase insensível à lisina (AK) capaz de causar uma produção maior do que a normal de treonina, bem como um subfragmento que codifica lisina cetoglutarato redutase antissenso para aumentar a lisina.0640141, in this application incorporated by reference, describes sequences encoding lysine-insensitive aspartokinase (AK) capable of causing greater than normal threonine production, as well as a subfragment encoding antisense lysine ketoglutarate reductase to increase lysine.
[00474] Em outro aspecto, um transgene pode ser empregado alterando o metabolismo de carboidrato na planta. Por exemplo, genes frutoquinases são conhecidos pelo uso na engenharia metabólica da expressão genética de frutoquinase em plantas transgênicas e suas frutas (ver Patente Norte-Americana No 6.031.154, neste pedido incorporada por referência). Um exemplo adicional de transgenes que podem ser usados são genes que alteram o rendimento de grão. Por exemplo, Patente Norte-Americana No 6.486.383, neste pedido incorporada por referência, descreve a modificação do conteúdo de amido em plantas com subunidades proteicas de adenosina difosfoglicose pirofosforilase (ADPG PPase). Em EP0797673, neste pedido incorporada por referência, plantas transgênicas são discutidas nas quais a introdução e expressão de determinadas moléculas de DNA resultam na formação de pools de fosfato facilmente mobilizados fora do vacúolo e uma produção de biomassa aumentada e/ou comportamento de florescência alterado. Ainda mais conhecidos são genes para alterar a maturidade vegetal. Patente Norte-Americana No 6.774.284, neste pedido incorporada por referência, descreve DNA que codifica uma lipase vegetal e métodos de uso do mesmo para controlar a senescência em plantas. Patente Norte-Americana No 6.140.085, neste pedido incorporada por referência, discute genes FCA para alterar características de florescência, particularmente o momento da florescência. Patente Norte-Americana No 5.637.785, neste pedido incorporada por referência, discute plantas geneticamente modificadas tendo desenvolvimento modulado de flores, tais como tendo desenvolvimento prePetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 78/152[00474] In another aspect, a transgene can be used by altering the carbohydrate metabolism in the plant. For example, frutoquinases genes are known for use in metabolic engineering of fructokinase gene expression in transgenic plants and their fruit (see U.S. Patent No. 6,031,154, incorporated by reference in this application). An additional example of transgenes that can be used are genes that alter grain yield. For example, U.S. Patent No. 6,486,383, incorporated in this application by reference, describes modification of starch content in plants with subunit proteins of adenosine difosfoglicose pyrophosphorylase (ADPG PPase). In EP0797673, in this application incorporated by reference, transgenic plants are discussed in which the introduction and expression of certain DNA molecules result in the formation of easily mobilized phosphate pools outside the vacuole and an increased biomass production and / or altered flowering behavior. Even better known are genes for changing plant maturity. U.S. Patent No. 6,774,284, incorporated in this application by reference, describes DNA encoding a plant lipase and methods of use of same for controlling senescence in plants. U.S. Patent No. 6,140,085, incorporated by reference in this application discusses FCA genes for altering flowering characteristics, particularly the timing of flowering. U.S. Patent No. 5,637,785, incorporated by reference in this application discusses genetically modified plants having modulated flower development such as having prePetição 870 170 047 791 development, 07/07/2017, p. 78/152
69/114 coce de meristema floral e compreendendo um gene estrutural que codifica a proteína LEAFY em seu genoma.69/114 a patch of floral meristem and comprising a structural gene encoding the LEAFY protein in its genome.
[00475] Em outro aspecto, a presente invenção fornece métodos e composições para a implantação preferencial de traços convencionais e transgênicos relacionados a síntese de ácido graxo e conteúdo de óleo. Usando a presente invenção, melhoradores podem adaptar a integração do traço à região geográfica para expressão de traço preferencial, se o traço é convencional (por exemplo, uma mutação) ou transgênico. Por exemplo, um transgene pode ser empregado alterando a biossíntese de óleo vegetal e composição de óleo. Especialmente, o ácido linoleico (LA) (18:2, Δ9, 12) é produzido a partir do ácido oleico (18:1, Δ9) por uma D12-desaturase (codificado por FAD2) enquanto ácido alfa-linolênico (ALA) (18:3, Δ9, 12, 15) é produzido a partir de LA por uma Á15-desaturase (codificado por FAD3). Além disso, ácido estearidônico (SDA) (18:4, Δ6, 9, 12, 15) e ácido gama-linolênico (GLA) (18:3, Δ6, 9, 12) são ácidos graxos polinsaturados (PUFAs) produzidos a partir de LA e ALA por uma Á6-desaturase. Vários genes que codificam desaturases foram descritos. Por exemplo, Patente Norte-Americana No 5.952.544, neste pedido incorporada por referência, descreve fragmentos de ácidos nucleicos isolados e clonados de Brassica napus que codificam enzimas ácido graxo desaturase. A expressão da B. napus Δl5-desaturase da patente ‘544 resultou na acumulação de ALA. Patente Publicada PCT 20060156435, neste pedido incorporada por referência, descreve a expressão de Δ15-desaturases fúngicas para aumentar perfis de ácido graxo ômega 3 em plantas. Patente Publicada PCT WO05/021761, neste pedido incorporada por referência, discute plantas geneticamente projetadas que produzem ambas SDA e GLA como um resultado da expressão de uma Δ6desaturase e uma Δ15-desaturase. PUFAs de cadeia longa, tais como EPA e DHA podem ser produzidos em plantas como revelado na PaPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 79/152[00475] In another aspect, the present invention provides methods and compositions for preferential implantation of conventional and transgenic traits related to fatty acid synthesis and oil content. Using the present invention, breeders can adapt the integration of the trait to the geographic region for expression of preferred trait, whether the trait is conventional (for example, a mutation) or transgenic. For example, a transgene can be employed by changing the biosynthesis of vegetable oil and oil composition. In particular, linoleic acid (LA) (18: 2, Δ9, 12) is produced from oleic acid (18: 1, Δ9) by a D12-desaturase (encoded by FAD2) as alpha-linolenic acid (ALA) ( 18: 3, Δ9, 12, 15) is produced from LA by an Á15-desaturase (encoded by FAD3). In addition, stearidonic acid (SDA) (18: 4, Δ6, 9, 12, 15) and gamma-linolenic acid (GLA) (18: 3, Δ6, 9, 12) are polyunsaturated fatty acids (PUFAs) produced from of LA and ALA by an Á6-desaturase. Several genes encoding desaturases have been described. For example, U.S. Patent No. 5,952,544, incorporated by reference in this application describes nucleic acid fragments isolated and cloned from Brassica napus that encode enzymes fatty acid desaturase. The expression of B. napus Δl5-desaturase from the '544 patent resulted in the accumulation of ALA. PCT Published Patent 20060156435, in this application incorporated by reference, describes the expression of fungal Δ15-desaturases to increase omega 3 fatty acid profiles in plants. PCT Published Patent WO05 / 021761, in this application incorporated by reference, discusses genetically engineered plants that produce both SDA and GLA as a result of the expression of a Δ6 desaturase and a Δ15-desaturase. Long-chain PUFAs such as EPA and DHA can be produced in plants as disclosed in PaPetição 870170047791, of 07/07/2017, p. 79/152
70/114 tente Norte-Americana Publicada 20040172682, neste pedido incorporada por referência.70/114 try North American Published 20040172682, in this order incorporated by reference.
[00476] Inibição do gene FAD2 de soja endógena foi mostrada através do uso de transgenes que inibem a expressão de FAD2 mostrou conferir um desejável fenótipo de ácido mid-oleico (18:1) (isto é, semente de soja compreendendo ácido oleico de aproximadamente 50% e de 75% por peso). Transgenes e plantas transgênicas fornecidos para inibição da expressão gênica de FAD2 endógena e fenótipo mid-oleico são revelados na Patente Norte-Americana 7.067.722, neste pedido incorporada por referência. Ao contrário, plantas de soja de tipo selvagem que são desprovidos de transgenes de inibição de FAD2 tipicamente produzem semente com composições de ácido oleico de menos de 20%. Inibição do gene FAD3 endógeno através do uso de transgenes que inibem a expressão de FAD3 têm sido mostrados conferir um fenótipo de ácido linolênico desejável (18:3). Um gene FATB ou palmitoil-ACP tioesterase codifica uma enzima (FATB) capaz de catalisar a clivagem hidrolítica da ligação tioéster do carbono-enxofre no grupo prostético pantoteno de palmitoil-ACP como sua reação preferencial. Hidrólise de outros tioésteres ACP de ácido graxo também pode ser catalisada por esta enzima. Sequências FATB-1 representativas incluem, sem restrição, aquelas apresentadas na Patente NorteAmericana Publicada 20040006792 e Patentes Americanas Nos 5.955.329; 5.723.761; 5.955.650; e 6.331.664, neste pedido incorporadas por referência. Quando a quantidade de FATB é reduzida em uma célula vegetal, uma quantidade reduzida de ácidos graxos saturados, tais como palmitato e estearato pode ser fornecida. Dessa forma, uma redução na expressão de FATB pode resultar em uma proporção aumentada de ácidos graxos insaturados, tais como ácido oleico (18:1). A supressão simultânea de expressão de FAD2, FAD3 e FATB por meio disso resulta na condução da via de FAS em direção a um auPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 80/152[00476] Inhibition of the endogenous soybean FAD2 gene has been shown through the use of transgenes that inhibit the expression of FAD2 has been shown to confer a desirable mid-oleic acid phenotype (18: 1) (ie, soybean seed comprising oleic acid of approximately 50% and 75% by weight). Transgenes and transgenic plants provided for inhibiting endogenous FAD2 gene expression and mid-oleic phenotype are disclosed in US Patent 7,067,722, in this application incorporated by reference. In contrast, wild-type soy plants that are devoid of FAD2 inhibition transgenes typically produce seed with less than 20% oleic acid compositions. Inhibition of the endogenous FAD3 gene through the use of transgenes that inhibit FAD3 expression has been shown to confer a desirable linolenic acid phenotype (18: 3). A FATB or palmitoyl-ACP thioesterase gene encodes an enzyme (FATB) capable of catalyzing the hydrolytic cleavage of the carbon-sulfur thioester bond in the palmitoyl-ACP pantothene prosthetic group as its preferred reaction. Hydrolysis of other ACP fatty acid thioesters can also be catalyzed by this enzyme. Representative sequences FatB-1 include, without limitation, those set forth in U.S. Published Patent Application 20040006792 and U.S. Patent Nos 5,955,329; 5,723,761; 5,955,650; and 6,331,664, incorporated in this order by reference. When the amount of FATB is reduced in a plant cell, a reduced amount of saturated fatty acids, such as palmitate and stearate, can be provided. Thus, a reduction in FATB expression can result in an increased proportion of unsaturated fatty acids, such as oleic acid (18: 1). The simultaneous suppression of expression of FAD2, FAD3 and FATB hereby results in the conduction of the FAS pathway towards an auPetição 870170047791, of 07/07/2017, p. 80/152
71/114 mento total em ácidos graxos monoinsaturados de comprimento de 18 carbonos, tais como ácido oleico (C18:1). Ver Patente NorteAmericana No 5.955.650, neste pedido incorporada por referência. [00477] Em um aspecto, a presente invenção fornece métodos e composições para a implantação preferencial de traços convencionais e transgênicos relacionados a síntese de ácido graxo e conteúdo de óleo. Níveis de óleo da semente de soja são altamente impactados pelo ambiente. Aumentos de concentração de óleo com a diminuição de latitude, por isso, sojas em grupos de maturidade 00-1 geralmente têm níveis de óleo mais baixos do que sojas de maturidade posterior (Yaklich et al. 2002. Crop Sci 42:1504-1515). A redução em concentrações de óleo é atribuída a temperaturas baixas e estação de crescimento mais curta (Piper and Boote 1999 J. Am. Oil Chem. Soc. 76:1233-124). Além disso, sojas cultivadas sob estresse da seca tendem a produzir sementes com proteína reduzida e óleo aumentado (Specht et al. 2001 Crop Sci 41:493-509). Usando a presente invenção, melhoradores podem adaptar a integração do traço a geografias para expressão de traço preferencial, se o traço é convencional (por exemplo, uma mutação) ou transgênico.71/114 total 18-carbon monounsaturated fatty acids, such as oleic acid (C18: 1). See U.S. Patent No. 5,955,650, incorporated by reference in this application. [00477] In one aspect, the present invention provides methods and compositions for preferential implantation of conventional and transgenic traits related to fatty acid synthesis and oil content. Soybean oil levels are highly impacted by the environment. Increases in oil concentration with decreasing latitude, therefore, soybeans in 00-1 maturity groups generally have lower oil levels than later maturity soybeans (Yaklich et al. 2002. Crop Sci 42: 1504-1515) . The reduction in oil concentrations is attributed to low temperatures and a shorter growing season (Piper and Boote 1999 J. Am. Oil Chem. Soc. 76: 1233-124). In addition, soybeans grown under drought stress tend to produce seeds with reduced protein and increased oil (Specht et al. 2001 Crop Sci 41: 493-509). Using the present invention, breeders can adapt the integration of the trait to geographies for preferred trait expression, whether the trait is conventional (for example, a mutation) or transgenic.
[00478] Genes para alteração das características morfológicas vegetais também são conhecidos e podem ser usados conforme a invenção. Patente Norte-Americana No 6.184.440, neste pedido incorporada por referência, discute plantas geneticamente projetadas que mostram estrutura ou morfologia alterada como um resultado da expressão de um transgene de modulação de parede celular. Exemplos de transgenes de modulação de parede celular incluem um domínio de ligação à celulose, uma proteína de ligação à celulose, ou uma proteína ou enzima de modificação da parede celular, tal como endoxiloglican transferase, xiloglican endo-transglicosilase, uma expansina, celulose sintase, ou uma nova isolada endo-l,4-p-glicanase.[00478] Genes for altering plant morphological characteristics are also known and can be used according to the invention. U.S. Patent No. 6,184,440, incorporated by reference in this application discusses genetically engineered plants that show altered structure or morphology as a result of expression of a cell wall modulation transgene. Examples of cell wall modulation transgenes include a cellulose binding domain, a cellulose binding protein, or a cell wall modifying protein or enzyme, such as endoxyloglycan transferase, xyloglycan endo-transglycosylase, an expansin, cellulose synthase, or a new endo-1,4-p-glycanase isolate.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 81/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 81/152
72/114 [00479] Métodos para introdução de um transgene, por exemplo, na soja, são bem conhecidos na técnica e incluem protocolos de transformação biológicas e físicas vegetais. Ver, por exemplo, Miki et al. (1990), Clemente et al. (Clemente e al, Crop Sci., 40:797-803, 2000), e Patente Norte-Americana 7.002.058, todos neste pedido incorporados por referência. Um aspecto adicional da invenção relaciona-se a culturas de tecido de uma variedade de soja da invenção. Tipos exemplares de culturas de tecido são protoplastos, calos e células vegetais que estão intactos em plantas ou partes das plantas. Partes das planta incluem, mas não limitadas a embriões, pólen, flores, folhas, raízes, extremidades de raiz, anteras, tecido vascular, vagem, tronco, semente ou uma porção dos mesmos, ou uma célula isolada a partir da planta. Em um aspecto, a cultura de tecido compreende partes da planta, tais como embriões, protoplastos, células meristemáticas, pólen, folhas ou anteras. Nestes modos, plantas da presente invenção ou partes das mesmas são cultivadas em cultura e regeneradas. Procedimentos exemplares para preparar culturas de tecido celulares de soja regeneráveis e regenerar plantas de soja a partir disto, são revelados na Patente Norte-Americana No 4.992.375; Patente Norte-Americana No 5.015.580; Patente Norte-Americana No 5.024.944 e Patente NorteAmericana No 5.416.011, cada uma das revelações das quais é especificamente incorporada neste pedido por referência em sua totalidade. Uma capacidade importante de uma cultura de tecido é a capacidade de regenerar plantas férteis. Para a transformação ser eficiente e bem sucedida, DNA deve ser introduzido em células que dão a origem a plantas ou tecido de linhagem germinativa.72/114 [00479] Methods for introducing a transgene, for example, in soy, are well known in the art and include biological and physical plant transformation protocols. See, for example, Miki et al. (1990), Clemente et al. (Clemente et al, Crop Sci., 40: 797-803, 2000), and United States Patent 7,002,058, all of which are incorporated herein by reference. A further aspect of the invention relates to tissue cultures of a variety of soybeans of the invention. Exemplary types of tissue cultures are protoplasts, calluses and plant cells that are intact in plants or parts of plants. Plant parts include, but are not limited to, embryos, pollen, flowers, leaves, roots, root tips, anthers, vascular tissue, pods, stem, seed or a portion thereof, or an isolated cell from the plant. In one aspect, tissue culture comprises parts of the plant, such as embryos, protoplasts, meristematic cells, pollen, leaves or anthers. In these ways, plants of the present invention or parts of them are grown in culture and regenerated. Exemplary procedures for preparing cell tissue cultures of regenerable soybean and soybean plants regenerated from this, are disclosed in U.S. Patent No. 4,992,375; U.S. Patent No. 5,015,580; U.S. Patent No. 5,024,944 and U.S. Patent No. 5,416,011, the disclosures of each of which is specifically incorporated in this application by reference in its entirety. An important capability of a tissue culture is the ability to regenerate fertile plants. For the transformation to be efficient and successful, DNA must be introduced into cells that give rise to plants or germline tissue.
[00480] Em particular, métodos para a regeneração de plantas Soja a partir de vários tipos de tecido e métodos de cultura de tecido de[00480] In particular, methods for the regeneration of Soy plants from various types of tissue and tissue culture methods of
Soja são conhecidos na técnica (Ver, por exemplo, Widholm et al., InSoybeans are known in the art (See, for example, Widholm et al., In
Vitro Selection and Culture-induced Variation in Soybean, EmVitro Selection and Culture-induced Variation in Soybean, Em
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 82/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 82/152
73/11473/114
Soybean: Genetics, Molecular Biology and Biotechnology, Eds. Verma and Shoemaker, CAB International, Wallingford, Oxon, Inglaterra (1996). Técnicas de regeneração de plantas, tais como Soja podem usar como material inicial vários tecidos ou tipos celulares. Com Soja em particular, foram desenvolvidos processos de regeneração que começam com certos tipos de tecido diferenciados, tais como meristemas, Cartha et al., Can. J. Bot. 59:1671-1679 (1981), seções de hipocotil, Cameya et al., Plant Science Letters 21: 289 - 294 (1981), e segmentos de nó de tronco, Saka et al., Plant Science Letters, 19:193201(1980); Cheng et al., Plant Science Letters, 19:91-99(1980). Regeneração de plantas Soja totalmente maduras sexualmente de embriões somáticos gerados a partir de explantes de embriões de Soja imaturas foi relatada (Ranch et al., In Vitro Cellular & Developmental Biology 21:653-658(1985)). A regeneração de plantas Soja maduras a partir de cultura de tecido por organogênese e embriogênese também foi relatada (Barwale et al., Plant 167:473-481 (1986); Wright et al., Plant Cell Reports 5:150-154(1986)).Soybean: Genetics, Molecular Biology and Biotechnology, Eds. Verma and Shoemaker, CAB International, Wallingford, Oxon, England (1996). Plant regeneration techniques such as soybeans can use various tissues or cell types as starting material. With Soy in particular, regeneration processes have been developed that begin with certain different types of tissue, such as meristems, Cartha et al., Can. J. Bot. 59: 1671-1679 (1981), hypocotyl sections, Cameya et al., Plant Science Letters 21: 289 - 294 (1981), and trunk node segments, Saka et al., Plant Science Letters, 19: 193201 ( 1980); Cheng et al., Plant Science Letters, 19: 91-99 (1980). Regeneration of fully sexually mature Soy plants from somatic embryos generated from explants of immature Soy embryos has been reported (Ranch et al., In Vitro Cellular & Developmental Biology 21: 653-658 (1985)). The regeneration of mature Soy plants from tissue culture by organogenesis and embryogenesis has also been reported (Barwale et al., Plant 167: 473-481 (1986); Wright et al., Plant Cell Reports 5: 150-154 (1986 )).
[00481] Uma vez que um transgene é introduzido em uma variedade pode ser prontamente transferido por cruzamento. Pelo uso de retrocruzamento, essencialmente todas as características morfológicas e fisiológicas desejadas de uma variedade são recuperadas além do locus transferido na variedade através de técnica de retrocruzamento. Métodos de retrocruzamento podem ser usados com a presente invenção para melhorar ou introduzir uma característica em uma planta (Poehlman e Sleper, Em: Breeding Field Crops, Iowa State University Press, Ames, 1995; Fehr, Principles of Cultivar Development Vol. 1, pp. 2-3 (1987), neste pedido incorporado por referência).[00481] Once a transgene is introduced in a variety it can be readily transferred by crossing. Through the use of backcrossing, essentially all the desired morphological and physiological characteristics of a variety are recovered in addition to the locus transferred in the variety using the backcrossing technique. Backcrossing methods can be used with the present invention to improve or introduce a trait into a plant (Poehlman and Sleper, In: Breeding Field Crops, Iowa State University Press, Ames, 1995; Fehr, Principles of Cultivar Development Vol. 1, pp. 2-3 (1987), in this application incorporated by reference).
[00482] A presente invenção inclui um método de melhoramento da planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes, onde as plantas de soja parentais se diferenciam[00482] The present invention includes a method of improving the soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants, where the parental soybean plants differ
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 83/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 83/152
74/114 na maturidade vegetal em mais de 10 dias, 10 dias a 20 dias, 10 dias a 30 dias; obtenção de uma semente a partir da progênie cruzada; genotipagem de uma semente de progênie cruzada com um marcador genético; e seleção de uma semente de soja que possui um genótipo de maturidade preferencial. A presente invenção também inclui um método de melhoramento da planta de soja pela análise de uma planta de soja para a presença de sequências de marcador selecionadas a partir das SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213; e associação da planta de soja com um grupo de maturidade. A presente invenção também inclui um método de melhoramento da planta de soja compreendendo cruzamento da uma planta de soja parental que tem um traço desejado com uma segunda planta de soja parental, onde as plantas de soja parentais se diferenciam na maturidade de planta de soja em mais de 10 dias, 10 dias a 20 dias, 10 dias a 30 dias, pelo cruzamento de uma planta de soja parental compreendendo um traço desejado com uma segunda planta de soja parental; obtenção da progênie da semente de soja a partir do cruzamento; classificação de uma progênie da semente de soja para o traço; classificação de uma progênie da semente de soja em um grupo de maturidade desejado que usa um marcador selecionado a partir do grupo composto das SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213 para determinar a região de crescimento geográfica desejada; e seleção de uma progênie da semente de soja contendo o traço desejado e maturidade da planta de soja desejada.74/114 at plant maturity in more than 10 days, 10 days to 20 days, 10 days to 30 days; obtaining a seed from the crossed progeny; genotyping of a progeny seed crossed with a genetic marker; and selection of a soybean seed that has a preferential maturity genotype. The present invention also includes a method of improving the soybean plant by analyzing a soybean plant for the presence of marker sequences selected from SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213; and association of the soybean plant with a maturity group. The present invention also includes a soybean breeding method comprising crossing a parent soybean plant that has a desired trait with a second parent soybean plant, where the parent soybean plants differ in the maturity of the soybean plant in more 10 days, 10 days to 20 days, 10 days to 30 days, by crossing a parent soy plant comprising a desired trait with a second parent soy plant; obtaining the progeny of the soybean seed from the crossing; classification of a soybean seed progeny for the trait; classifying a soybean seed progeny into a desired maturity group using a marker selected from the group composed of SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 to determine the desired geographic growth region; and selecting a soybean seed progeny containing the desired trait and maturity of the desired soybean plant.
[00483] Em um aspecto da presente invenção, um método de melhoramento da planta de soja inclui o cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da planta de soja a partir do cruzamento; genotipagem não destrutiva de uma progênie da planta de soja ou semente de soja do cruzamento com um marcador genético caracterizando uma região genômica de maturidade; e seleção de uma planta de soja possuindo um genótipo[00483] In one aspect of the present invention, a method of improving the soybean plant includes crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of the soybean plant from crossing; non-destructive genotyping of a progeny of the soybean plant or soybean of the crossing with a genetic marker characterizing a genomic region of maturity; and selection of a soybean plant having a genotype
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 84/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 84/152
75/114 para um grupo de maturidade desejado. Em um aspecto preferencial, o fenótipo de maturidade da progênie da planta de soja ou semente de soja é desconhecido. Em outro aspecto preferencial, a progênie é cultivada sob condições que são impróprias para determinar a maturidade da planta de soja. Em outro aspecto preferencial, as plantas de soja parentais diferenciam-se na maturidade de planta de soja em mais de 5 dias, mais de 10 dias, 10 dias a 20 dias, 10 dias a 30 dias, neste pedido um fenótipo de maturidade de pelo menos uma das duas plantas de soja parentais diferentes é desconhecido. Em um aspecto preferencial, o fenótipo de maturidade das duas plantas de soja parentais diferentes é desconhecido. Em um aspecto preferencial, a progênie da planta de soja não é sensível a fotoperíodo. Em outro aspecto preferencial, pelo menos uma planta de soja parental não é sensível a fotoperíodo. Em um aspecto preferencial, ambas as plantas de soja parentais não são sensíveis a fotoperíodo. Em um aspecto preferencial, a região genômica de maturidade é caracterizada por um alelo dominante identificado na tabela 6. Em um aspecto preferencial, a região genômica de maturidade é caracterizada por um alelo recessivo identificado na tabela 6.75/114 for a desired maturity group. In a preferred aspect, the maturity phenotype of the progeny of the soybean plant or soybean seed is unknown. In another preferred aspect, the progeny are grown under conditions that are inappropriate to determine the maturity of the soybean plant. In another preferred aspect, the parental soybean plants differ in the maturity of the soybean plant in more than 5 days, more than 10 days, 10 days to 20 days, 10 days to 30 days, in this order a maturity phenotype of at least least one of the two different parental soy plants is unknown. In a preferred aspect, the maturity phenotype of the two different parental soybean plants is unknown. In a preferred aspect, the progeny of the soybean plant is not sensitive to photoperiod. In another preferred aspect, at least one parent soy plant is not sensitive to photoperiod. In a preferred aspect, both parental soybean plants are not sensitive to photoperiod. In a preferential aspect, the maturity genomic region is characterized by a dominant allele identified in table 6. In a preferential aspect, the maturity genomic region is characterized by a recessive allele identified in table 6.
[00484] Em um aspecto da presente invenção, pelo menos uma ou ambas as plantas de soja parentais são uma variedade de elite. Em um aspecto da presente invenção, uma progênie da planta de soja é uma planta de soja exótica ou uma ou ambas as plantas de soja parentais são plantas de soja exóticas.[00484] In one aspect of the present invention, at least one or both parental soy plants are an elite variety. In one aspect of the present invention, a progeny of the soybean plant is an exotic soybean plant or one or both of the parent soybean plants are exotic soybean plants.
[00485] Um aspecto da presente invenção inclui um método de seleção de uma planta de soja para melhora do germoplasma pela determinação de um grupo de maturidade pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da planta de soja a partir do cruzamento; genotipagem não destrutiva de uma progênie da planta de soja ou semente de soja do cruPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 85/152[00485] One aspect of the present invention includes a method of selecting a soybean plant to improve germplasm by determining a maturity group by crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of the soybean plant from crossing; non-destructive genotyping of a progeny of the soybean plant or raw soybean seed Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 85/152
76/114 zamento com marcador genético caracterizando uma região genômica de maturidade; e seleção de uma planta de soja possuindo um genótipo para um grupo de maturidade desejado; e incorporação da planta de soja selecionada em um uso selecionado a partir do grupo consistindo do uso da planta de soja para melhoramento, desenvolvimento da planta de soja através de autofertilização, integração de traço, uso da planta de soja ou partes da mesma para transformação e uso das plantas de soja ou partes das mesmas para a mutagênese.76/114 genetic marker characterizing a mature genomic region; and selecting a soybean plant having a genotype for a desired maturity group; and incorporation of the selected soybean plant into a use selected from the group consisting of the use of the soybean plant for breeding, development of the soybean plant through self-fertilization, trait integration, use of the soybean plant or parts of it for processing and use of soybean plants or parts of them for mutagenesis.
[00486] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de cosseleção de uma planta de soja para expressão de um traço fenotípico de não maturidade e um traço de maturidade pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da planta de soja a partir do cruzamento; genotipagem não destrutiva de uma progênie da planta de soja ou semente de soja do cruzamento com um marcador genético caracterizando uma região genômica de maturidade; e seleção de uma planta de soja possuindo um genótipo para um grupo de maturidade desejado; e para determinar a geografia desejada para o crescimento da progênie da planta de soja, e um método para determinação do fenótipo de não maturidade. [00487] Em um aspecto preferencial, o método para detecção do fenótipo de não maturidade é um método genotípico ou fenotípico. Em um aspecto preferencial, o traço fenotípico de não maturidade é qualquer um de tolerância à herbicida, rendimento aumentado, controle de inseto, resistência à doença fúngica, resistência à vírus, resistência a nematoide, resistência à doença bacteriana, resistência à doença de micoplasma, produção de óleos alterada, alta produção de óleo, alta produção de proteína, controle de crescimento de germinação e mudas, nutrição animal e humana potencializada, baixa rafinose, resistência ao estresse ambiental, digestibilidade aumentada, enzimas industriais, proteínas, peptídeos e pequenas moléculas farmacêuticas,[00486] Another aspect of the present invention includes a method of coselecting a soybean plant to express a phenotypic trait of non-maturity and a trait of maturity by crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of the soybean plant from crossing; non-destructive genotyping of a progeny of the soybean plant or soybean of the crossing with a genetic marker characterizing a genomic region of maturity; and selecting a soybean plant having a genotype for a desired maturity group; and to determine the desired geography for the growth of the soybean plant progeny, and a method for determining the non-maturity phenotype. [00487] In a preferential aspect, the method for detecting the non-maturity phenotype is a genotypic or phenotypic method. In a preferred aspect, the phenotypic trait of non-maturity is any one of herbicide tolerance, increased yield, insect control, resistance to fungal disease, resistance to virus, resistance to nematodes, resistance to bacterial disease, resistance to mycoplasma disease, altered oil production, high oil production, high protein production, germination and seedling growth control, potentiated animal and human nutrition, low raffinose, resistance to environmental stress, increased digestibility, industrial enzymes, proteins, peptides and small pharmaceutical molecules ,
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 86/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 86/152
77/114 traços de processamento melhorados, aroma melhorado, fixação de nitrogênio, produção de semente de soja híbrida, alergenicidade reduzida, biopolímeros e biocombustíveis.77/114 improved processing traits, improved aroma, nitrogen fixation, hybrid soybean seed production, reduced allergenicity, biopolymers and biofuels.
[00488] Em outro aspecto preferencial, um traço fenotípico é qualquer um de proteína alterada e composição de óleo, níveis alterados de uma molécula selecionada a partir do grupo consistindo em proteína, óleo, ácido linolênico, ácido esteárico, ácido palmítico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido estearidônico, ácido alfa-linolênico, ácido gamalinolênico, ácido docosa-hexaenoico, ácido eicosapentaenoico, ácido docosapentaenoico e combinações dos mesmos.[00488] In another preferred aspect, a phenotypic trait is any one of altered protein and oil composition, altered levels of a molecule selected from the group consisting of protein, oil, linolenic acid, stearic acid, palmitic acid, oleic acid, linoleic acid, stearidonic acid, alpha-linolenic acid, gammalinolenic acid, docosahexaenoic acid, eicosapentaenoic acid, docosapentaenoic acid and combinations thereof.
[00489] Em um aspecto, as plantas da presente invenção podem ser usadas em atividades relacionadas à melhoria de germoplasma, exemplos não-limitantes dos quais incluem uso da planta para melhoramento, desenvolvimento da planta através de autofertilização, integração de traço, uso da planta ou partes da mesma para transformação e uso de plantas ou partes da mesma para mutagênese. Exemplos não-limitantes de decisões de reprodução incluem seleção de progênie, seleção parental e seleção recorrente para pelo menos um haplótipo. Em outro aspecto, decisões de reprodução relacionando-se com o desenvolvimento de plantas para liberação comercial compreendem desenvolvimento de plantas para teste, desenvolvimento de plantas para pureza, purificação de sublinhagens durante o desenvolvimento, desenvolvimento de variedades e desenvolvimento de híbridos. Ainda em outros aspectos, decisões de melhoramento e atividades de melhoria de germoplasma compreendem a seleção de evento transgênico, fazendo cruzamento de melhoramento, teste e desenvolvimento de uma planta através de autofertilização, usando plantas ou partes das mesmas para transformação, usando plantas ou partes das mesmas para candidatos para construtos de expressão, e usando plantas ou partes das mesmas para mutagênese. A escolha do métoPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 87/152[00489] In one aspect, the plants of the present invention can be used in activities related to germplasm improvement, non-limiting examples of which include plant use for breeding, plant development through self-fertilization, trait integration, plant use or parts of it for transformation and use of plants or parts of it for mutagenesis. Non-limiting examples of breeding decisions include progeny selection, parental selection and recurrent selection for at least one haplotype. In another aspect, breeding decisions relating to the development of plants for commercial release comprise development of plants for testing, development of plants for purity, purification of underlines during development, development of varieties and development of hybrids. In other aspects, breeding decisions and germplasm improvement activities include the selection of a transgenic event, crossing breeding, testing and developing a plant through self-fertilization, using plants or parts of them for transformation, using plants or parts of same for candidates for expression constructs, and using plants or parts of them for mutagenesis. The choice of method Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 87/152
78/114 do de melhoramento depende do modo de reprodução vegetal, herdabilidade do traço(s) sendo melhorado, e o tipo de cultivar usado comercialmente (por exemplo, cultivar de híbrido F1, cultivar de linhagem pura, etc.).78/114 of breeding depends on the plant breeding mode, heritability of the trait (s) being improved, and the type of cultivar used commercially (for example, F 1 hybrid cultivar, pure line cultivar, etc.).
[00490] Descrições de métodos de melhoramento que são comumente usados para sojas podem ser encontradas em um dos vários livros de referência (por exemplo, Fehr, Principies of Cultivar Development Vol. 1, pp 2-3 (1987)).[00490] Descriptions of breeding methods that are commonly used for soybeans can be found in one of several reference books (for example, Fehr, Principies of Cultivar Development Vol. 1, pp 2-3 (1987)).
[00491] Em um aspecto, a presente invenção inclui um método de melhoramento da planta de soja pela análise de uma planta de soja para a presença de sequências marcadoras selecionadas a partir do grupo consistindo em SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213; e associação da planta de soja com um grupo de maturidade.[00491] In one aspect, the present invention includes a method of improving the soybean plant by analyzing a soybean plant for the presence of marker sequences selected from the group consisting of SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 ; and association of the soybean plant with a maturity group.
[00492] Em outro aspecto, a presente invenção inclui um método de melhoramento da planta de soja compreendendo cruzamento de uma planta de soja parental tendo um traço desejado com uma segunda planta de soja parental, em que as plantas de soja parentais diferenciam-se na maturidade da planta de soja em mais de 5 dias, mais de 10 dias, 10 dias a 20 dias, ou 10 dias a 30 dias, pelo cruzamento de uma planta de soja parental compreendendo um traço desejado com uma segunda planta de soja parental; obtenção da progênie da semente de soja a partir do cruzamento; classificação de uma progênie da semente de soja para o traço; classificação de uma progênie da semente de soja para um grupo de maturidade desejado usando um marcador selecionado a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 213 para determinar a região de crescimento geográfica desejada; e seleção de uma progênie da semente de soja contendo o traço desejado e maturidade da planta de soja desejada. Em um aspecto preferencial, o traço desejado é transgênico.[00492] In another aspect, the present invention includes a soybean breeding method comprising crossing a parental soybean plant having a desired trait with a second parental soybean plant, wherein the parental soybean plants differ in maturity of the soy plant in more than 5 days, more than 10 days, 10 days to 20 days, or 10 days to 30 days, by crossing a parental soy plant comprising a desired trait with a second parental soy plant; obtaining the progeny of the soybean seed from the crossing; classification of a soybean seed progeny for the trait; sorting a soybean seed progeny to a desired maturity group using a marker selected from the group consisting of SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 213 to determine the desired geographic growth region; and selecting a soybean seed progeny containing the desired trait and maturity of the desired soybean plant. In a preferred aspect, the desired trait is transgenic.
[00493] Um aspecto da presente invenção inclui um método de[00493] One aspect of the present invention includes a method of
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 88/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 88/152
79/114 melhoramento da planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes, em que as plantas de soja parentais diferenciam-se na maturidade da planta de soja em mais de 5 dias, mais de 10 dias, 10 dias a 20 dias, ou 10 dias a 30 dias; obtenção de uma semente de soja de progênie a partir do cruzamento; genotipagem de uma progênie da semente de soja do cruzamento com um marcador genético; e seleção de uma semente de soja possuindo um genótipo de maturidade preferencial.79/114 improvement of the soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants, in which the parental soybean plants differ in the maturity of the soybean plant in more than 5 days, more than 10 days, 10 days a 20 days, or 10 days to 30 days; obtaining a progeny soybean seed from the crossing; genotyping of a soybean seed progeny from crossing with a genetic marker; and selection of a soybean seed having a preferential maturity genotype.
[00494] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de classificação de sementes de soja com base no grupo de maturidade da planta de soja pela obtenção de DNA de uma semente de soja; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 1 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 2 é homozigoto ou heterozigoto; determinação se um alelo da região genômica de maturidade 3 é homozigoto ou heterozigoto; e atribuição de um valor de crescimento de maturidade à semente de soja.[00494] Another aspect of the present invention includes a method of classifying soybean seeds based on the maturity group of the soybean plant by obtaining DNA from a soybean seed; determining whether an allele of the maturity 1 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele of the maturity 2 genomic region is homozygous or heterozygous; determining whether an allele of the maturity 3 genomic region is homozygous or heterozygous; and assigning a maturity growth value to the soybean seed.
[00495] Um aspecto da presente invenção é um método de introgressão de um alelo em uma planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da planta de soja a partir do cruzamento; classificação da progênie da planta de soja do cruzamento para o alelo; obtenção de DNA a partir de uma semente de soja da progênie da planta de soja usando um método não destrutivo; e seleção de uma semente de soja, em que a semente de soja compreende o alelo e uma sequência de ácidos nucleicos selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 143 a 213. Em um aspecto preferencial, a semente de soja selecionada ainda tem uma segunda sequência selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 143 a 213. Em outro aspecto preferencial, o alelo é selecionado a partir de qualquer uma ou ambas as[00495] One aspect of the present invention is a method of introgressing an allele in a soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of the soybean plant from crossing; classification of the crossbreeding soybean plant progeny for the allele; obtaining DNA from a soybean seed of the soybean plant progeny using a non-destructive method; and selection of a soybean seed, where the soybean seed comprises the allele and a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 143 to 213. In a preferred aspect, the selected soybean seed still has a second sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 143 to 213. In another preferred aspect, the allele is selected from either or both
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 89/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 89/152
80/114 resistência à SCN e resistência ao apodrecimento da raiz.80/114 resistance to SCN and resistance to root rot.
[00496] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de introdução de um traço desejado em uma planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes, em que pelo menos uma planta de soja parental tem um traço desejado; obtenção de uma progênie da semente de soja a partir do cruzamento; obtenção de DNA de uma semente de soja da progênie da planta de soja usando um método não destrutivo; análise da progênie da semente de soja do cruzamento para evidência do traço desejado; e seleção da semente de soja com o traço desejado e um grupo de maturidade desejado. Em um aspecto preferencial, o traço desejado é transgênico. [00497] Um aspecto adicional da presente invenção inclui um método de introgressão de um alelo em uma planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes; obtenção de uma progênie da planta de soja a partir do cruzamento; obtenção de DNA de uma progênie da semente de soja da planta de soja usando um método não destrutivo; e seleção de uma semente de soja com o alelo e uma sequência de ácidos nucleicos selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 143 a 174.[00496] Another aspect of the present invention includes a method of introducing a desired trait into a soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants, wherein at least one parental soybean plant has a desired trait; obtaining a soybean seed progeny from crossing; obtaining DNA from a soybean seed from the progeny of the soybean plant using a non-destructive method; analysis of the progeny of the soybean seed of the crossing for evidence of the desired trait; and selection of the soybean seed with the desired trait and a desired maturity group. In a preferred aspect, the desired trait is transgenic. [00497] An additional aspect of the present invention includes an introgression method of an allele in a soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants; obtaining a progeny of the soybean plant from crossing; obtaining DNA from a soybean plant progeny using a non-destructive method; and selecting a soybean seed with the allele and a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 143 to 174.
[00498] Outro aspecto da presente invenção inclui um método de melhoramento da planta de soja pelo cruzamento de pelo menos duas plantas de soja parentais diferentes, em que as plantas de soja parentais se diferenciam na maturidade da planta de soja em mais de 10 dias; obtenção da progênie da semente de soja a partir do cruzamento; genotipagem da progênie da semente de soja do cruzamento com um marcador genético selecionado a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 143 a 213; e seleção de uma semente de soja com um grupo de maturidade desejado. Um aspecto adicional da presente invenção inclui uma planta de soja compreendendo em seu genoma um haplótipo introgresso associado à maturidade, em que a introgressão é[00498] Another aspect of the present invention includes a method of improving the soybean plant by crossing at least two different parental soybean plants, wherein the parental soybean plants differ in maturity of the soybean plant in more than 10 days; obtaining the progeny of the soybean seed from the crossing; genotyping of the progeny of the soybean seed of the crossing with a genetic marker selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 143 to 213; and selecting a soybean seed with a desired maturity group. An additional aspect of the present invention includes a soybean plant comprising in its genome an intrograde haplotype associated with maturity, in which the introgression is
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 90/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 90/152
81/114 facilitada por pelo menos um dos marcadores das SEQ ID NO: 143 a 213 ou dos marcadores 143 a 162.81/114 facilitated by at least one of the markers of SEQ ID NO: 143 to 213 or of markers 143 to 162.
[00499] Tendo descrito agora geralmente a invenção, o mesmo será mais prontamente entendido através de referência aos seguintes exemplos que são fornecidos por meio de ilustração, e não são destinados a limitar a presente invenção, a menos que expressamente especificado.[00499] Having now generally described the invention, it will be more readily understood by reference to the following examples which are provided by way of illustration, and are not intended to limit the present invention, unless expressly specified.
ExemplosExamples
Exemplo 1: Descoberta de marcadores moleculares associados com regiões genômicas afetando a maturidade vegetal [00500] Soja é uma planta de dia curto, por isso a florescência é iniciada em dias curtos devido a uma redução no fotoperíodo (Garner & Allard, J. Agric. Res. 18, 553 - 606 (1920)).Example 1: Discovery of molecular markers associated with genomic regions affecting plant maturity [00500] Soy is a short-day plant, so flowering starts in short days due to a reduction in the photoperiod (Garner & Allard, J. Agric. Res. 18, 553 - 606 (1920)).
[00501] Consequentemente, o fotoperíodo (comprimento de dia) e a resposta à temperatura da planta de soja determina áreas de adaptação vegetal. Devido à sensibilidade ao fotoperíodo, os genótipos de soja são cultivados em zonas estreitas de latitude para otimizar o rendimento. Variedades de soja do norte, em contraste com variedades do sul, iniciam a florescência com dias mais longos. Variedades do norte plantadas ao sul de sua zona de adaptação exibem florescência acelerada, crescimento de planta limitado e reduzido rendimento. Variedades de soja do sul plantadas ao norte da sua zona de adaptação terão florescência retardada com um potencial de dano por geada que pode reduzir o rendimento. A maioria dos cruzamentos para desenvolvimento das variedades de soja é feita entre parentais em 10 dias de maturidade cada um. Se os parentais se diferenciam muito na maturidade, plantas de progênie segregam amplamente para a maturidade. A fim de melhoradores obterem e selecionarem plantas de soja de um grupo de maturidade desejado, devem produzir e manter um grande número de plantas de progênie, prática a qual é de custo proibitivo.[00501] Consequently, the photoperiod (length of day) and the temperature response of the soy plant determines areas of plant adaptation. Due to their sensitivity to the photoperiod, soybean genotypes are grown in narrow latitude zones to optimize yield. Northern soybean varieties, in contrast to southern varieties, start flowering with longer days. Northern varieties planted south of their adaptation zone exhibit accelerated flowering, limited plant growth and reduced yield. Southern soybean varieties planted north of their adaptation zone will have delayed flowering with a potential for frost damage that can reduce yield. Most crosses for the development of soybean varieties are made between parents at 10 days of maturity each. If the parents differ greatly in maturity, progeny plants segregate widely for maturity. In order for breeders to obtain and select soy plants from a group of desired maturity, they must produce and maintain a large number of progeny plants, a practice which is prohibitive.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 91/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 91/152
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Identificação de regiões genômicas associadas com a maturidade vegetal facilitou cruzamentos entre parentais além de 10 dias de maturidade cada um sem manter um grande número de plantas de progênie. [00502] Para identificar regiões genômicas associadas com a maturidade vegetal, 258 linhagens de soja (129 pares de grupos de maturidade diferentes) são genotipadas com mil e quatrocentos marcadores de polimorfismos de nucleotídeo único (SNP), distribuídos através dos 20 grupos de ligação do mapa de ligação genética da soja. Além disso, 258 linhagens de soja são fenotipadas para rendimento e maturidade vegetal. Associações entre genótipo marcador de SNP e fenótipo de maturidade vegetal são então avaliadas. Isto foi feito em múltiplos ambientes (Tabelas 2 e 3).Identification of genomic regions associated with plant maturity facilitated crossbreeding between parents beyond 10 days of maturity each without maintaining a large number of progeny plants. [00502] To identify genomic regions associated with plant maturity, 258 soybean strains (129 pairs of different maturity groups) are genotyped with fourteen hundred single nucleotide polymorphism (SNP) markers, distributed across the 20 binding groups of the genetic link map of soy. In addition, 258 soybean strains are phenotyped for yield and plant maturity. Associations between SNP marker genotype and plant maturity phenotype are then evaluated. This was done in multiple environments (Tables 2 and 3).
Tabela 1: Identificação inicial das regiões genômicas de maturidade através do melhoramento assistido por marcadorTable 1: Initial identification of maturity genomic regions through marker assisted breeding
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 92/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 92/152
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Tabela 2: Efeito estimado em dias das regiões genômicas de maturidadeTable 2: Estimated effect in days of maturity genomic regions
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 93/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 93/152
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Efeito estimadoEstimated effect
[00503] As posições aproximadas de marcadores informativos que indicam um estado de dominância ou recessividade das regiões genômicas 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 e 8 são determinadas com base em uma pesquisa de polimorfismos entre uma lista de 258 linhagens de soja (tabela 3 e 4). Um fator na escolha destes marcadores informativos é baseado em qual marcador tem o maior efeito ou é associado com o[00503] The approximate positions of informative markers that indicate a state of dominance or recessivity of the genomic regions 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 and 8 are determined based on a search for polymorphisms among a list of 258 strains soybean (tables 3 and 4). A factor in choosing these informational markers is based on which marker has the greatest effect or is associated with the
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 94/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 94/152
85/114 maior retardo na maturidade tal que seja indicativo do fenótipo de maturidade. Outro fator na escolha destes marcadores informativos é baseado no valor de P mais baixo, tal que o marcador não se torna perdido no evento de recombinação. Os marcadores com valor de P mais baixo com maior probabilidade de ser consistentemente associado com fenótipo de maturidade através de populações de soja diferentes (parentais diferentes, pedigrees diferentes). Marcadores com associação forte e preditiva de introgressão da região genômica são listados na tabela 5. Para NS0128378, o SNP é de fato uma indel de 11 bp, em que D representa a deleção (***********) e I representa a inserção (TTCGAAGATTT).85/114 greater delay in maturity such that it is indicative of the maturity phenotype. Another factor in choosing these informational markers is based on the lowest P value, such that the marker does not become lost in the recombination event. Markers with a lower P-value are more likely to be consistently associated with maturity phenotype across different soybean populations (different parents, different pedigrees). Markers with strong and predictive association of introgression of the genomic region are listed in table 5. For NS0128378, the SNP is in fact an indel of 11 bp, where D represents the deletion (***********) and I represents the insertion (TTCGAAGATTT).
Tabela 3: Posição de marcadores de SNP associados com as regiõesTable 3: Position of SNP markers associated with regions
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 95/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 95/152
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Região LG Posição Marcador Posição de polimor- SEQ IDLG Region Position Marker Polymorph Position- SEQ ID
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 96/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 96/152
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[00504] Sondas de transferência de energia de ressonância de fluorescência específica para o alelo (FRET) são usadas em ensaios de[00504] Allele-specific fluorescence resonance energy transfer (FRET) probes are used in
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 97/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 97/152
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PCR em Tempo Real. Duas sondas FRET carregando corantes repórter fluorescentes diferentes são usadas, onde um corante único é incorporado em um oligonucleotídeo que pode anelar com alta especificidade a somente um dos dois alelos. Os corantes repórter são 2’cloro-7’-fenil-l,4-dicloro-6-carboxifluoresceína (VIC) e fosforamidita 6carboxifluoresceína (FAM).Real-time PCR. Two FRET probes carrying different fluorescent reporter dyes are used, where a single dye is incorporated into an oligonucleotide that can ring with high specificity to only one of the two alleles. The reporter dyes are 2'chloro-7'-phenyl-1,4-dichloro-6-carboxyfluorescein (VIC) and 6-carboxyfluorescein phosphoramidite (FAM).
Tabela 4: Lista de marcadores de SNP associados às regiões 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 e 8.Table 4: List of SNP markers associated with regions 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 and 8.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 98/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 98/152
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Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 99/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 99/152
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Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 100/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 100/152
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Tabela 5: marcadores mais preditivos de regiões genômicas associadas com maturidade vegetal e/ou hábito de crescimento de plantas de sojaTable 5: most predictive markers of genomic regions associated with plant maturity and / or soybean plant growth habit
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 101/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 101/152
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SEQ ID NO: 143 a SEQ ID NO: 155. Todos estes marcadores de SNP no mapa da região 1 de uma região no grupo de ligação C2. A tabela 4 lista sequências de iniciadores de amplificação de PCR, indicados como SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 26 e sondas indicadas como SEQ ID NO: 214 a SEQ ID NO: 239.SEQ ID NO: 143 to SEQ ID NO: 155. All of these SNP markers on the map of region 1 of a region in the C2 linker group. Table 4 lists sequences of PCR amplification primers, indicated as SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 26 and probes indicated as SEQ ID NO: 214 to SEQ ID NO: 239.
[00506] Marcadores de SNP associados com a região 2 incluem SEQ ID NO: 156 a SEQ ID NO: 161. Todos estes marcadores de SNP no mapa da região 2 de uma região no grupo de ligação 0. A tabela 4 lista sequências de iniciadores de amplificação de PCR, indicados como SEQ ID NO: 27 a SEQ ID NO: 38 e sondas indicadas como SEQ ID NO: 240 a SEQ ID NO: 251.[00506] SNP markers associated with region 2 include SEQ ID NO: 156 to SEQ ID NO: 161. All of these SNP markers on the map of region 2 of a region in link group 0. Table 4 lists primer sequences of PCR amplification, indicated as SEQ ID NO: 27 to SEQ ID NO: 38 and probes indicated as SEQ ID NO: 240 to SEQ ID NO: 251.
[00507] Marcadores de SNP associados com a região 3 incluem SEQ ID NO: 162 a SEQ ID NO: 174. Todos estes marcadores de SNP no mapa da região 3 de uma região no grupo de ligação L. A tabela 4 lista sequências de iniciadores de amplificação de PCR, indicados como SEQ ID NO: 39 a SEQ ID NO: 64 e sondas indicadas como SEQ ID NO: 252 a SEQ ID NO: 277.[00507] SNP markers associated with region 3 include SEQ ID NO: 162 to SEQ ID NO: 174. All of these SNP markers on the map of region 3 of a region in link group L. Table 4 lists primer sequences of PCR amplification, indicated as SEQ ID NO: 39 to SEQ ID NO: 64 and probes indicated as SEQ ID NO: 252 to SEQ ID NO: 277.
[00508] Marcadores de SNP associados com a região 4 incluem SEQ ID NO: 175 a SEQ ID NO: 180. Todos estes marcadores de SNP no mapa da região 4 de uma região no grupo de ligação I. A tabela 4 lista sequências de iniciadores de amplificação de PCR, indicados como SEQ ID NO: 65 a SEQ ID NO: 76 e sondas indicadas como SEQ ID NO: 278 a SEQ ID NO: 289.[00508] SNP markers associated with region 4 include SEQ ID NO: 175 to SEQ ID NO: 180. All of these SNP markers on the map of region 4 of a region in link group I. Table 4 lists primer sequences of PCR amplification, indicated as SEQ ID NO: 65 to SEQ ID NO: 76 and probes indicated as SEQ ID NO: 278 to SEQ ID NO: 289.
[00509] Marcadores de SNP associados com a região 5 incluem SEQ ID NO: 181 a SEQ ID NO: 189. Todos estes marcadores de SNP no mapa da região 5 de uma região no grupo de ligação L. A tabela 4 lista sequências de iniciadores de amplificação de PCR, indicados como SEQ ID NO: 77 a SEQ ID NO: 94 e sondas indicadas como SEQ ID NO: 290 a SEQ ID NO: 307.[00509] SNP markers associated with region 5 include SEQ ID NO: 181 to SEQ ID NO: 189. All of these SNP markers on the map of region 5 of a region in link group L. Table 4 lists primer sequences of PCR amplification, indicated as SEQ ID NO: 77 to SEQ ID NO: 94 and probes indicated as SEQ ID NO: 290 to SEQ ID NO: 307.
[00510] Marcadores de SNP associados com a região 6 incluem[00510] SNP markers associated with region 6 include
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 102/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 102/152
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SEQ ID NO: 190 a SEQ ID NO: 196 destes marcadores de SNP no mapa da região 6 de uma região no grupo de ligação DIb. A tabela 4 lista sequências de iniciadores de amplificação de PCR, indicados como SEQ ID NO: 95 a SEQ ID NO: 108 e sondas indicadas como SEQ ID NO: 308 a SEQ ID NO: 321.SEQ ID NO: 190 to SEQ ID NO: 196 of these SNP markers on the map of region 6 of a region in the DIb linker. Table 4 lists sequences of PCR amplification primers, indicated as SEQ ID NO: 95 to SEQ ID NO: 108 and probes indicated as SEQ ID NO: 308 to SEQ ID NO: 321.
[00511] Marcadores de SNP associados com a região 7 incluem SEQ ID NO: 197 a SEQ ID NO: 203. A tabela 4 lista sequências de iniciadores de amplificação de PCR, indicados como SEQ ID NO: 109 a SEQ ID NO: 122 e sondas indicadas como SEQ ID NO: 322 a SEQ ID NO: 333.[00511] SNP markers associated with region 7 include SEQ ID NO: 197 to SEQ ID NO: 203. Table 4 lists sequences of PCR amplification primers, indicated as SEQ ID NO: 109 to SEQ ID NO: 122 and probes indicated as SEQ ID NO: 322 to SEQ ID NO: 333.
[00512] Marcadores de SNP associados com a região 8 incluem SEQ ID NO: 204 a SEQ ID NO: 213 deste mapa de marcadores de SNP. A tabela 4 lista sequências de iniciadores de amplificação de PCR, indicados como SEQ ID NO: 123 a SEQ ID NO: 142 e sondas indicadas como SEQ ID NO: 336 a SEQ ID NO: 355.[00512] SNP markers associated with region 8 include SEQ ID NO: 204 to SEQ ID NO: 213 of this map of SNP markers. Table 4 lists sequences of PCR amplification primers, indicated as SEQ ID NO: 123 to SEQ ID NO: 142 and probes indicated as SEQ ID NO: 336 to SEQ ID NO: 355.
Exemplo 2: Identificação das combinações alélicas de regiões genômicas associadas com a maturidade da planta em sojas do grupo de maturidade precoce [00513] Regiões genômicas 1 e 2 são usadas para predizer a maturidade vegetal da progênie da planta resultando em um cruzamento entre parentais de maturidade precoce e maturidade média (III a V). Em particular, as combinações alélicas de regiões genômicas 1 e 2 estão correlacionadas com um retardo na maturidade vegetal. Para determinar a correlação entre combinações alélicas da região 1 e 2 e retardo na maturidade vegetal, três populações são desenvolvidas a partir do cruzamento de um parental de maturidade precoce (grupo de maturidade 00) com um parental de maturidade média (grupo de maturidade III ou IV) (Tabela 6). As populações 1 a 3 são usadas para determinar a associação da composição de regiões genômicas 1 e 2 com o retardo na maturidade vegetal.Example 2: Identification of allelic combinations of genomic regions associated with plant maturity in soybeans of the early maturity group [00513] Genomic regions 1 and 2 are used to predict the plant maturity of the plant's progeny resulting in a cross between maturity parents early and medium maturity (III to V). In particular, the allelic combinations of genomic regions 1 and 2 are correlated with a delay in plant maturity. To determine the correlation between allelic combinations in region 1 and 2 and delay in plant maturity, three populations are developed by crossing an early maturity parent (maturity group 00) with a middle maturity parent (maturity group III or IV) (Table 6). Populations 1 to 3 are used to determine the association of the composition of genomic regions 1 and 2 with the delay in plant maturity.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 103/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 103/152
94/11494/114
Tabela 6: fenótipo do grupo de maturidade de parentais em populações de sojaTable 6: phenotype of the parental maturity group in soybean populations
População Grupo de Maturidade do Grupo de Maturidade do Parental Feminino Parental FemininoPopulation Maturity Group of Maturity Group of Female Parental Female Parental
[00514] As três populações segregam amplamente para a maturidade e são polimórficas nas regiões genômicas 1 e 2. Sementes F3 são obtidas pela seleção de uma vagem por planta F2 (descendente modificado de semente única). As populações F3 são plantadas em Guelph, ON e 1.214 indivíduos F3 das três populações são fenotipados para regiões genômicas 1 e 2 com marcadores de SNP NS0128378 (região genômica 1) e NS0118907 (região genômica 2). Plantas individuais nas populações F3 são também genotipadas para maturidade pela contagem do número de dias após 31 de agosto até que a planta amadureça; plantas são consideradas maduras quando 95% das vagens estiverem marrons. O procedimento é repetido com 1055 das plantas individuais onde cada linhagem da planta é cultivada no Chile e fenotipada para maturidade pela contagem do número de dias após 1° de março até que a planta amadureça; plantas são consideradas maduras quando 95% das vagens estiverem marrons. O procedimento é repetido com linhagens de melhoramento experimentais desenvolvidas de 88 das 1055 plantas individuais. A tabela 8 compara os dias[00514] The three populations segregate widely for maturity and are polymorphic in genomic regions 1 and 2. F 3 seeds are obtained by selecting one pod per plant F2 (modified single seed descendant). F3 populations are planted in Guelph, ON and 1,214 F 3 individuals from the three populations are phenotyped for genomic regions 1 and 2 with SNP markers NS0128378 (genomic region 1) and NS0118907 (genomic region 2). Individual plants in the F3 populations are also genotyped for maturity by counting the number of days after August 31 until the plant matures; plants are considered mature when 95% of the pods are brown. The procedure is repeated with 1055 of the individual plants where each strain of the plant is grown in Chile and phenotyped to maturity by counting the number of days after March 1 until the plant matures; plants are considered mature when 95% of the pods are brown. The procedure is repeated with experimental breeding lines developed from 88 of the 1055 individual plants. Table 8 compares the days
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 104/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 104/152
95/114 com a maturidade de plantas individuais através das três populações e o genótipo dos indivíduos nas regiões genômicas 1 e 2. Os marcadores associados com 1 e 2 ilustram 64% da variação na maturidade vegetal no ano 1 e 94% da variação na maturidade vegetal no ano 2. Tabela 7: a associação de dias à maturidade com composição das regiões 1 e 2. Presença (1) ou ausência (0) do alelo dominante indicado. Estados de alelo homozigoto são 0,0 e 1,1. Estado de alelo heterozigoto é 0,1.95/114 with the maturity of individual plants across the three populations and the genotype of individuals in genomic regions 1 and 2. The markers associated with 1 and 2 illustrate 64% of the variation in plant maturity in year 1 and 94% of the variation in maturity vegetable in year 2. Table 7: the association of days with maturity with the composition of regions 1 and 2. Presence (1) or absence (0) of the indicated dominant allele. Homozygous allele states are 0.0 and 1.1. Heterozygous allele state is 0.1.
Exemplo 3: identificação das combinações alélicas de regiões genômicas associadas com a maturidade vegetal em sojas do grupo de maturidade tardia.Example 3: identification of allelic combinations of genomic regions associated with plant maturity in soybeans of the late maturity group.
[00515] Regiões genômicas 1, 2 e 3 são usadas para predizer a maturidade vegetal da planta de progênie que resulta de um híbrido de maturidade tardia e parentais de maturidade média. Em particular, algumas das combinações alélicas das regiões genômicas 1, 2 e 3 são correlacionadas com um retardo na maturidade vegetal (tabelas 8 e 9). Para determinar a correlação entre combinações alélicas da região 1, 2 e 3 e retardo na maturidade vegetal, três populações F3 são desenPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 105/152[00515] Genomic regions 1, 2 and 3 are used to predict the plant maturity of the progeny plant that results from a hybrid of late maturity and parental of medium maturity. In particular, some of the allelic combinations of genomic regions 1, 2 and 3 are correlated with a delay in plant maturity (tables 8 and 9). To determine the correlation between allelic combinations in region 1, 2 and 3 and delayed plant maturity, three F 3 populations are disPetition 870170047791, from 07/07/2017, p. 105/152
96/114 volvidas a partir de cruzamento de um grupo de maturidade tardia V com um grupo de maturidade tardia IV. As populações 4 a 6 após cruzamentos são usadas para determinar associação da composição das regiões genômicas 1,2 e 3 com o retardo na maturidade vegetal. [00516] As três segregam amplamente para maturidade e são polimórficas nas regiões genômicas 1, 2 e 3. Sementes F3 são obtidas pela seleção de uma semente por planta F2 (descendente de semente única). 5.984 indivíduos F3 a partir das três populações são genotipados com os marcadores de SNP NS0099529 (região genômica 1), NS0118907 (região genômica 2), e NS0115535 (região genômica 3) e sementes com o mesmo marcador haplotípico são reunidas. Sementes F3 são plantadas.96/114 developed by crossing a late maturity group V with a late maturity group IV. Populations 4 to 6 after crosses are used to determine the association of the composition of genomic regions 1,2 and 3 with the delay in plant maturity. [00516] The three segregate widely for maturity and are polymorphic in genomic regions 1, 2 and 3. F3 seeds are obtained by selecting one seed per plant F2 (single-seed descendant). 5,984 F 3 individuals from the three populations are genotyped with the SNP markers NS0099529 (genomic region 1), NS0118907 (genomic region 2), and NS0115535 (genomic region 3) and seeds with the same haplotypic marker are combined. F3 seeds are planted.
Tabela 8: sumário de dias para florescência de linhagens de soja contendo várias composições de regiões genômicas 1, 2 e 3 para maturidade vegetal. Presença (1) ou ausência (0) do alelo dominante indicado. Estados de alelo homozigoto são 0,0 e 1,1. Estado de alelo heterozigoto é 0,1. ND = nenhum dado.Table 8: summary of days for flowering of soybean lines containing various compositions of genomic regions 1, 2 and 3 for plant maturity. Presence (1) or absence (0) of the indicated dominant allele. Homozygous allele states are 0.0 and 1.1. Heterozygous allele state is 0.1. ND = no data.
Combinação Região Região Região Dias para a florescênciaCombination Region Region Region Days to flowering
[00517] Os indivíduos são também fenotipados para a maturidade pela contagem do número de dias após 31 de agosto até que a planta[00517] Individuals are also phenotyped for maturity by counting the number of days after August 31 until the plant
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 106/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 106/152
97/114 amadureça; plantas são consideradas maduras quando 95% das vagens estiverem marrons. Região genômica 3 influencia o tempo de maturidade (tTabelas 8 e 9).97/114 mature; plants are considered mature when 95% of the pods are brown. Genomic region 3 influences the time to maturity (tTables 8 and 9).
Tabela 9: sumário de dias para maturidade vegetal de linhagens de soja contendo várias composições de regiões genômicas 1, 2 e 3 para maturidade vegetal. ND = nenhum dado.Table 9: summary of days for plant maturity of soybean lines containing various compositions of genomic regions 1, 2 and 3 for plant maturity. ND = no data.
Combinação Dias para a Maturidade (D após agosto)Days to Maturity Combination (D after August)
Alélica Pop. 4 Pop 5 Pop 6Alélica Pop. 4 Pop 5 Pop 6
Exemplo 4: descoberta de marcadores moleculares associados com regiões genômicas afetando hábito de crescimento vegetal.Example 4: discovery of molecular markers associated with genomic regions affecting plant growth habit.
[00518] Hábito de crescimento vegetal é uma característica importante de regiões de crescimento do grupo de maturidade tardia. Para identificar regiões genômicas associadas com o hábito de crescimento vegetal, três populações F3 são desenvolvidas a partir do cruzamento de um grupo de maturidade tardia V (hábito de crescimento determinado) com um grupo de maturidade tardia IV (hábito de crescimento indeterminado). As populações de 4 a 6 são usadas para determinar a associação da região genômica 3 com o hábito vegetal (tabela 6). Setecentas e setenta e quatro linhagens de soja são classificadas com os marcadores associados com a região genômica 3. As três populações segregaram amplamente para maturidade e são polimórficas na região genômica 3. Sementes F3 são obtidas pela seleção de uma semente[00518] Plant growth habit is an important feature of growth regions of the late maturity group. To identify genomic regions associated with the plant growth habit, three F3 populations are developed from the crossing of a late maturity group V (determined growth habit) with a late maturity group IV (indeterminate growth habit). Populations 4 to 6 are used to determine the association of genomic region 3 with the plant habit (table 6). Seven hundred and seventy-four soybean strains are classified with the markers associated with the genomic region 3. The three populations have largely segregated for maturity and are polymorphic in the genomic region 3. F3 seeds are obtained by selecting a seed
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 107/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 107/152
98/114 por planta F2 (descendente de semente única). 5.984 indivíduos F3 das três populações foram fenotipados com o SNP NS0115535 (região genômica 3) e sementes com o mesmo marcador haplotípico são reunidas. Sementes F3 são plantadas. Um marcador único, NS00115535, é determinado para ser o mais preditivo e capaz de separar variedades do grupo determinante V do grupo indeterminante IV e variedades mais precoces.98/114 per F 2 plant (single-seed descendant). 5,984 F 3 individuals from the three populations were phenotyped with the SNP NS0115535 (genomic region 3) and seeds with the same haplotypic marker are collected. F3 seeds are planted. A single marker, NS00115535, is determined to be the most predictive and able to separate varieties from determinant group V from indeterminate group IV and earlier varieties.
Exemplo 5: regiões genômicas associadas com hábito de crescimento e maturidade independente do rendimento [00519] Maturidade e rendimento vegetal estão intimamente associados na soja. Um aumento de um dia na maturidade pode ser equivalente a um aumento de ~0,77 saca/ha no rendimento. A correlação de maturidade e rendimento vegetal confunde a avaliação de QTLs potenciais e genes candidatos associados com o rendimento. A identificação de regiões genômicas associadas com a maturidade vegetal permite a melhoradores estabelecer geneticamente a maturidade vegetal em uma planta de soja e elucidar traços associados com o rendimento.Example 5: genomic regions associated with growth habit and maturity regardless of yield [00519] Maturity and plant yield are closely associated in soy. A one-day increase in maturity can be equivalent to an increase of ~ 0.77 bag / ha in yield. The correlation of maturity and plant yield confuses the assessment of potential QTLs and candidate genes associated with yield. The identification of genomic regions associated with plant maturity allows breeders to genetically establish plant maturity in a soybean plant and elucidate traits associated with yield.
[00520] Três populações de soja são geradas a partir do cruzamento de um grupo de maturidade 0 com um grupo de maturidade III ou IV. As populações de 7 a 9 são usadas (tabela 5). A semente da progênie plantada no Chile e as sementes então colhidas a partir daquelas plantas de progênie são selecionadas no Chile e as plantas são cultivadas em Ontário em 2006. Oitenta e quatro progênies são classificadas com marcadores associados a regiões de maturidade 1 e 2 e avaliadas para dias de maturidade e rendimento (tabelas de 10 a 12). Marcadores associados com regiões 1 e 2 selecionados para maturidade e são independentes de rendimento. Por exemplo, a Progênie 0430 tem o rendimento significativamente mais alto do que a Progênie 0083 (tabela 11). O rendimento mais alto da Progênie 0430 não é atriPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 108/152[00520] Three soybean populations are generated by crossing a maturity group 0 with a maturity group III or IV. Populations 7 to 9 are used (table 5). The progeny seed planted in Chile and the seeds then harvested from those progeny plants are selected in Chile and the plants are grown in Ontario in 2006. Eighty-four progenies are classified with markers associated with regions of maturity 1 and 2 and evaluated for days of maturity and yield (tables 10 to 12). Markers associated with regions 1 and 2 selected for maturity and are independent of yield. For example, Progeny 0430 has a significantly higher yield than Progeny 0083 (table 11). The highest yield of Progenie 0430 is not attributable to 870170047791, from 07/07/2017, p. 108/152
99/114 buído a diferenças na maturidade vegetal devido a dias similares para maturidade e estados alélicos das regiões genômicas de maturidade 1 e 2.99/114 due to differences in plant maturity due to similar days to maturity and allelic states of the genomic regions of maturity 1 and 2.
Tabela 10: sumário de rendimento, maturidade e combinação alélica das regiões de maturidade 1 e 2.Table 10: summary of yield, maturity and allelic combination of regions of maturity 1 and 2.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 109/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 109/152
100/114100/114
Tabela 11: sumário de rendimento, maturidade e a combinação alélica de regiões de maturidade 1 e 2.Table 11: summary of yield, maturity and the allelic combination of regions of maturity 1 and 2.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 110/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 110/152
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Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 111/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 111/152
102/114102/114
Tabela 12: sumário de rendimento, maturidade e da combinação alélica das regiões de maturidade 1 e 2.Table 12: summary of yield, maturity and allelic combination of regions of maturity 1 and 2.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 112/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 112/152
103/114103/114
Exemplo 6: utilização de marcadores moleculares associados com a maturidade vegetal para selecionar a região geográfica para plantar a semente.Example 6: use of molecular markers associated with plant maturity to select the geographic region to plant the seed.
[00521] Os genótipos de soja são cultivados em zonas estreitas de latitude para otimizar o rendimento devido à sensibilidade ao fotoperíodo. As variedades de soja do norte, em contraste com variedades do sul, iniciam a florescência com dias mais longos. As variedades do norte plantadas ao sul de sua zona de adaptação exibem florescência acelerada, crescimento vegetal limitado e reduzido rendimento. As vaPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 113/152[00521] Soy genotypes are grown in narrow latitude zones to optimize yield due to sensitivity to the photoperiod. Northern soybean varieties, in contrast to southern varieties, start flowering with longer days. Northern varieties planted south of their adaptation zone exhibit accelerated flowering, limited plant growth and reduced yield. VaPetition 870170047791, of 07/07/2017, p. 113/152
104/114 riedades de soja do sul plantadas ao norte de sua zona de adaptação têm florescência retardada com um potencial de dano por geada que pode reduzir o rendimento. Quando os parentais se diferenciam na maturidade vegetal maior do que 10 dias, a progênie do cruzamento segrega amplamente para a maturidade vegetal. Marcadores moleculares associados com as regiões genômicas de maturidade vegetal permitem a melhoradores cruzar parentais que se diferenciam na maturidade em mais 10 dias, selecionar semente do cruzamento para cultivo na zona de maturidade apropriada.104/114 southern soybean crops planted north of their adaptation zone have delayed flowering with a potential for frost damage that can reduce yield. When the parents differ in plant maturity for more than 10 days, the progeny of the crossing secretes widely to plant maturity. Molecular markers associated with genomic regions of plant maturity allow breeders to breed parents who differ in maturity in another 10 days, select seed from the cross for cultivation in the appropriate maturity zone.
[00522] Uma população de soja BC2F1 é gerada por cruzamento de MG III.5 com MG 000 e a semente é selecionada para a região de cultivo da zona de maturidade apropriada usando os marcadores moleculares associados com a maturidade vegetal. Noventa e três plantas BC2F1 são classificadas com 106 marcadores de SNP para avaliar a similaridade genética com o MG parental recorrente III.5 (Tabela 13). Adicionalmente, os marcadores de SNP incluíram marcadores associados com as regiões genômicas de maturidade 1, 2, 3, 4 e 5. Cada indivíduo é heterozigoto em pelo menos uma região genômica de maturidade. O indivíduo Progeny:0107 é heterozigoto para 1, 2, 3, 4 e 5 e pode ser usado para selecionar indivíduos de variedades adaptadas a cada zona do grupo de maturidade. Os indivíduos selecionados para avançar em direção à geração seguinte com base na adaptação a regiões do grupo de maturidade específicas usando a combinação alélica para as regiões de maturidade genômicas.[00522] A BC 2 F 1 soybean population is generated by crossing MG III.5 with MG 000 and the seed is selected for the cultivation region of the appropriate maturity zone using the molecular markers associated with plant maturity. Ninety-three BC 2 F 1 plants are classified with 106 SNP markers to assess genetic similarity to recurrent parental MG III.5 (Table 13). In addition, the SNP markers included markers associated with genomic regions of maturity 1, 2, 3, 4 and 5. Each individual is heterozygous in at least one genomic region of maturity. Progeny: 0107 is heterozygous for 1, 2, 3, 4 and 5 and can be used to select individuals of varieties adapted to each zone of the maturity group. Individuals selected to advance towards the next generation based on adaptation to specific regions of the maturity group using the allelic combination for regions of genomic maturity.
Tabela 13: sumário de heterozigosidade de regiões genômicas de maturidade com a geração F2 de MG parental III.5/(MG III.5 parental*2/MG 000 parental). Os indivíduos na população são selecionados para uma região geográfica do grupo de maturidade com marcadores de SNP associados com regiões genômicas de maturidade.Table 13: summary of heterozygosity of genomic regions of maturity with the F2 generation of parental MG III.5 / (MG III.5 parental * 2 / MG 000 parental). Individuals in the population are selected for a geographic region of the maturity group with SNP markers associated with genomic regions of maturity.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 114/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 114/152
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Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 115/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 115/152
106/114106/114
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 116/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 116/152
107/114107/114
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 117/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 117/152
108/114108/114
Planta Similaridade Heterozigoto para a região de maturia MGIII,5 dade genômica parental (%)Plant Similarity Heterozygous for the region of maturity MGIII, 5 parental genomic activity (%)
Exemplo 7: estimativa do efeito das regiões genômicas associadas com a maturidade.Example 7: estimate of the effect of genomic regions associated with maturity.
[00523] Cada alelo de cada região genômica de maturidade individual está associado com um valor que pode aumentar ou diminuir a maturidade relativa de uma dada linhagem. A maturidade relativa de uma dada linhagem é predita pelo uso um modelo aditivo ou epistático. O exemplo na tabela 14 demonstra a predição de maturidade relativa com base na combinação alélica das regiões genômicas de maturidade. O grupo de maturidade de uma semente de soja é predito pela composição dos alelos da região genômica de maturidade.[00523] Each allele of each genomic region of individual maturity is associated with a value that can increase or decrease the relative maturity of a given strain. The relative maturity of a given lineage is predicted by using an additive or epistatic model. The example in Table 14 demonstrates the prediction of relative maturity based on the allelic combination of the maturity genomic regions. The maturity group of a soybean seed is predicted by the composition of the alleles of the genomic region of maturity.
Tabela 14: um exemplo de predição de maturidade relativa com base no modelo aditivo.Table 14: an example of prediction of relative maturity based on the additive model.
Maturidade genômica ( Dias DireçãoGenomic maturity (Direction Days
10 1010 10
5-55-5
3-33-3
2 22 2
6 66 6
4 44 4
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 118/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 118/152
109/11411/114
Exemplo 8: utilização de marcadores moleculares associados com maturidade vegetal para facilitar cruzamentos com germoplasma exótico. [00524] A base genética da soja cultivada é estreita comparada com outros campos de cultura. De oitenta a noventa por cento da combinação gênica da soja cultivada são seguidos por 12 introduções vegetais no norte dos Estados Unidos e sete introduções vegetais no sul dos Estados Unidos. Devido à base genética estreita, a soja é com mais probabilidade impactada por doenças e ataques de insetos. O germoplasma exótico ajuda a estender a base genética da soja. Além disso, o germoplasma exótico possui traços-chave tais como resistência à doença, resistência a inseto, resistência a nematoide, e tolerância a estresse ambiental. No momento, muitas espécies exóticas são inacessíveis em parte devido a limitações com cruzamento de plantas de soja de grupos de maturidade extremamente diferentes. Tradicionalmente, os melhoradores devem produzir e manter grande número de plantas de progênie para cruzamentos entre germoplasmas exóticos e cultivados, a fim de melhoradores selecionarem um pequeno número de plantas de soja do grupo de maturidade desejado. Muitas vezes é de custo proibitivo manter o grande número de plantas necessárias.Example 8: use of molecular markers associated with plant maturity to facilitate crosses with exotic germplasm. [00524] The genetic basis of cultivated soybeans is narrow compared to other fields of culture. Eighty to ninety percent of the cultivated soybean gene combination is followed by 12 vegetable introductions in the northern United States and seven vegetable introductions in the southern United States. Due to its narrow genetic base, soybeans are more likely to be impacted by disease and insect attacks. Exotic germplasm helps to extend the genetic basis of soy. In addition, exotic germplasm has key traits such as disease resistance, insect resistance, nematode resistance, and tolerance to environmental stress. At the moment, many exotic species are inaccessible in part due to limitations with crossing soybean plants of extremely different maturity groups. Traditionally, breeders must produce and maintain a large number of progeny plants for crosses between exotic and cultivated germplasms, in order for breeders to select a small number of soybean plants from the desired maturity group. It is often prohibitive to maintain the large number of plants needed.
[00525] Marcadores moleculares associados com a maturidade vegetal facilitam o uso do germoplasma exótico. Melhoradores criam cruzamentos entre germoplasmas exóticos e cultivados. A semente de progênie é analisada para a maturidade vegetal sem despender os recursos necessários para plantar e cultivar grande número de progênies.[00525] Molecular markers associated with plant maturity facilitate the use of exotic germplasm. Breeders create crosses between exotic and cultivated germplasms. The progeny seed is analyzed for plant maturity without spending the necessary resources to plant and cultivate a large number of progenies.
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Exemplo 9: utilização de marcadores moleculares associados com a maturidade vegetal para facilitar introgressão de um transgene.Example 9: use of molecular markers associated with plant maturity to facilitate introgression of a transgene.
[00526] Após um transgene ser introduzido em uma variedade, pode ser prontamente transferido para outras variedades por cruzamento. A maioria do desenvolvimento de cruzamentos de variedades de soja é feita entre parentais em 10 dias de maturidade cada um. Quando os parentais se diferenciam na maturidade vegetal mais que 10 dias, a progênie do cruzamento segrega amplamente para a maturidade vegetal. A fim de melhoradores obterem e selecionarem plantas de soja do grupo de maturidade desejado, devem produzir e manter um grande número de plantas de progênie, prática a qual é de custo proibitivo. Se um transgene estiver presente em uma variedade do grupo de maturidade III necessita ser transferida para o grupo de maturidade 0, um cruzamento direto entre uma variedade do grupo de maturidade III e uma variedade do grupo de maturidade 0 não é tipicamente realizado. Em vez disso, o transgene é transferido através de uma série de cruzamentos intermediários entre variedades próximas em maturidade vegetal. Marcadores moleculares associados com regiões genômicas de maturidade vegetal permitem a melhoradores cruzar parentais que se diferenciam na maturidade mais que 10 dias, então selecionar sementes do cruzamento com base na presença do transgene e o fenótipo de maturidade vegetal.[00526] After a transgene is introduced in one variety, it can be readily transferred to other varieties by crossing. Most of the development of crosses of soybean varieties is done between parents at 10 days of maturity each. When the parents differ in plant maturity for more than 10 days, the progeny of the crossing secretes largely to plant maturity. In order for breeders to obtain and select soybean plants from the desired maturity group, they must produce and maintain a large number of progeny plants, a practice that is prohibitive. If a transgene is present in a variety from the maturity group III needs to be transferred to the maturity group 0, a direct cross between a variety from the maturity group III and a variety from the maturity group 0 is not typically performed. Instead, the transgene is transferred through a series of intermediate crosses between nearby varieties at plant maturity. Molecular markers associated with genomic regions of plant maturity allow breeders to breed parents who differ at maturity more than 10 days, then select crossbreed seeds based on the presence of the transgene and the plant maturity phenotype.
Exemplo 10: utilização de marcadores moleculares associados com a maturidade vegetal para facilitar introgressão de um traço.Example 10: use of molecular markers associated with plant maturity to facilitate introgression of a trait.
[00527] Se uma variedade possui um traço desejável, pode ser prontamente transferido a outras variedades por cruzamento. A maioria dos cruzamentos de desenvolvimento de variedade de soja é feita entre parentais em 10 dias de maturidade cada um. Quando os parentais se diferenciam na maturidade vegetal mais que 10 dias, a progênie do cruzamento segrega amplamente para a maturidade vegetal. A[00527] If a variety has a desirable trait, it can be readily transferred to other varieties by crossing. Most crosses of soybean variety development are carried out between parents at 10 days of maturity each. When the parents differ in plant maturity for more than 10 days, the progeny of the crossing secretes largely to plant maturity. THE
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 120/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 120/152
111/114 fim de melhoradores obterem e selecionarem plantas de soja do grupo de maturidade desejado, devem produzir e manter um grande número de plantas de progênie, prática a qual é de custo proibitivo. Se um traço estiver presente em uma variedade do grupo de maturidade III necessita ser transferido para o grupo de maturidade 0, um cruzamento direto entre uma variedade do grupo de maturidade III e uma variedade do grupo de maturidade 0 não é tipicamente realizado. Em vez disso, o traço é transferido através de uma série de cruzamentos intermediários entre variedades próximas em maturidade vegetal. Marcadores moleculares associados com regiões genômicas de maturidade vegetal permitem a melhoradores cruzar parentais que se diferenciam na maturidade mais que 10 dias, então selecionar sementes do cruzamento com base na presença do traço e o fenótipo de maturidade vegetal.In order for breeders to obtain and select soybean plants from the desired maturity group, they must produce and maintain a large number of progeny plants, a practice which is prohibitive. If a trait is present in a variety from the maturity group III needs to be transferred to the maturity group 0, a direct cross between a variety from the maturity group III and a variety from the maturity group 0 is not typically performed. Instead, the trait is transferred through a series of intermediate crosses between nearby varieties at plant maturity. Molecular markers associated with genomic regions of plant maturity allow breeders to breed parents who differ at maturity more than 10 days, then select crossbreed seeds based on the presence of the trait and the plant maturity phenotype.
Exemplo 11: utilização de marcadores moleculares associados com a maturidade vegetal para selecionar ambientes para otimizar a expressão de traços.Example 11: use of molecular markers associated with plant maturity to select environments to optimize the expression of traits.
[00528] Sojas cultivadas em ambientes diferentes muitas vezes atuam diferentemente. Por exemplo, uma variedade de soja pode produzir sementes com um determinado perfil de ácido graxo em um ambiente e um perfil de ácido graxo diferente em outro ambiente. Diversos fatores ambientais podem influenciar na expressão de traços, incluindo tipo de solo, condições de solo, temperatura, fotoperíodo, geografia e práticas de cultivo. Variação no desempenho de genótipos através de ambientes diferentes é muitas vezes referida como interações genótipo x ambiente.[00528] Soybeans grown in different environments often act differently. For example, a variety of soybeans can produce seeds with a certain fatty acid profile in one environment and a different fatty acid profile in another environment. Several environmental factors can influence the expression of traits, including soil type, soil conditions, temperature, photoperiod, geography and cultivation practices. Variation in genotype performance across different environments is often referred to as genotype x environment interactions.
[00529] Os níveis de óleo na semente de soja são altamente impactados pelo ambiente. A concentração de óleo aumenta com a redução da latitude, por isso, sojas em grupos de maturidade 00-I geralmente têm níveis de óleo mais baixos do que sojas de maturidade tarPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 121/152[00529] The oil levels in the soybean seed are highly impacted by the environment. The oil concentration increases with the reduction of latitude, therefore, soybeans in 00-I maturity groups generally have lower oil levels than tar maturity soybeans 870170047791, from 07/07/2017, p. 121/152
112/114 dia (figura 1). Marcadores moleculares associados com a maturidade vegetal auxiliam melhoradores na seleção de genótipos de soja e produzem plantas que são melhor adaptadas a uma região do grupo de maturidade para produzir mais óleo.112/114 days (figure 1). Molecular markers associated with plant maturity assist breeders in the selection of soybean genotypes and produce plants that are better adapted to a region of the maturity group to produce more oil.
[00530] A composição de ácido graxo de semente de soja é altamente impactada pela latitude do cultivo. A presente invenção fornece marcadores moleculares associados com a maturidade vegetal que são úteis para auxiliar melhoradores de planta a selecionar genótipos de maturidade de soja favoráveis para otimizar a expressão de determinados traços em geografias específicas, tais como síntese de ácido graxo, em que o traço é convencional ou transgênico. Como usado neste pedido, traços convencionais incluem aqueles obtidos por mutagênese. Por exemplo, o perfil graxo das plantas de soja transgênicas projetadas para produzir ácido estearidônico (SDA) tem uma correlação positiva com a latitude para produção de SDA e tem uma correlação negativa com a latitude para produção de ácido oleico, ácido esteárico, ácido palmítico e ácido α-linolênico (tabela 15). A porcentagem de SDA aumenta com o aumento da latitude (figuras 2 e 3).[00530] The soybean fatty acid composition is highly impacted by the cultivation latitude. The present invention provides molecular markers associated with plant maturity that are useful to assist plant breeders in selecting favorable soybean maturity genotypes to optimize the expression of certain traits in specific geographies, such as fatty acid synthesis, where the trait is conventional or transgenic. As used in this application, conventional traits include those obtained by mutagenesis. For example, the fat profile of transgenic soybean plants designed to produce stearidonic acid (SDA) has a positive correlation with latitude for SDA production and has a negative correlation with latitude for the production of oleic acid, stearic acid, palmitic acid and α-linolenic acid (table 15). The percentage of SDA increases with increasing latitude (figures 2 and 3).
Tabela 15: correlação de longitude e latitude em ácidos graxos de semente de soja madura.Table 15: correlation of longitude and latitude in fatty acids from mature soybean seed.
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maturidade e regiões de cultivo. Sojas são classificadas em 13 grupos de maturidade (000, 00, 0, I a X) de acordo com a faixa na latitude na qual as plantas são adaptadas e mais produtivas. O grupo 000 é de maturidade mais precoce e cultivado nas latitudes mais altas e o Grupo X é maturidade mais tardia e cultivado em latitudes mais baixas. Marcadores moleculares associados com a maturidade vegetal auxiliarão os melhoradores na seleção de genótipos de soja que são adaptados a latitudes conhecidas para serem associados com a produção de SDA preferencial nas plantas. Por conseguinte, os melhoradores de soja produzem mais eficientemente plantas que são mais bemadaptadas ao ambiente e produzem níveis mais altos de SDA ou outros traços similares.maturity and growing regions. Soybeans are classified in 13 groups of maturity (000, 00, 0, I to X) according to the range in the latitude in which the plants are adapted and more productive. Group 000 is of earlier maturity and cultivated at higher latitudes and Group X is later matured and cultivated at lower latitudes. Molecular markers associated with plant maturity will assist breeders in the selection of soybean genotypes that are adapted to known latitudes to be associated with the production of preferential SDA in plants. Therefore, soybean breeders more efficiently produce plants that are better adapted to the environment and produce higher levels of SDA or other similar traits.
[00532] Está no escopo desta invenção utilizar os métodos e composições de integração do traço preferencial para qualquer traço, convencional ou transgênico, afetado ou influenciado pela latitude. É contemplado pelos inventores que a presente invenção seja útil para integração de traço de um ou mais traços fenotípicos que são influenciados pela latitude tal que os métodos e composições fornecidos neste pedido facilitarão a implementação de um ou mais traços no germoplasma preferencial com base na maturidade, em que os traços podem ser convencionais ou transgênicos.[00532] It is within the scope of this invention to use the methods and compositions of integration of the preferred feature for any feature, conventional or transgenic, affected or influenced by latitude. It is contemplated by the inventors that the present invention is useful for integrating the trace of one or more phenotypic traits that are influenced by latitude such that the methods and compositions provided in this application will facilitate the implementation of one or more traits in the preferred germplasm based on maturity, in which the traits can be conventional or transgenic.
[00533] Tendo ilustrado e descrito os princípios da presente invenção, deve ser evidente para os versados na técnica que a invenção pode ser modificada no arranjo e detalhe sem se afastar de tais princíPetição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 123/152[00533] Having illustrated and described the principles of the present invention, it should be evident to those skilled in the art that the invention can be modified in the arrangement and detail without departing from such principles 870170047791, of 07/07/2017, p. 123/152
114/114 pios. Reivindica-se todas as modificações que estão dentro do espírito, escopo e conceito das reivindicações adicionadas.114/114 pios. All modifications that are within the spirit, scope and concept of the added claims are claimed.
Petição 870170047791, de 07/07/2017, pág. 124/152Petition 870170047791, of 07/07/2017, p. 124/152
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