BRPI0805754A2 - composição farmacêutica compreendendo isotretinoìna lipossomal e processo para a preparação da mesma - Google Patents

Abstract

COMPOSIçãO FARMACêUTICA COMPREENDENDO ISOTRETINOINA LIPOSSOMAL E PROCESSO PARA A PREPARAçãO DA MESMA. A presente invenção proporciona composição farmacêutica para uso dermatológico que compreende isotretinoina encapsulada em lipossomas destinada ao tratamento tópico de desordens da pele, como acne, psoríase e foto-envelhecimento. A composição farmacêutica lipossomal fornece diminuição do fluxo do fármaco pela pele e dos efeitos adversos como irritação cutânea, aumento da foto-estabilidade do fármaco e do efeito terapêutico. As composições possuem razões molares Isotretinoina/fase lipídica e constituintes lipofílicos da fase lipídica bem estabelecidos para alcançar as propriedades desejadas e para obter eficiência de encapsulação do fármaco maior que 98% nas vesículas, evitando a necessidade de posteriores etapas de separação do fármaco livre daquele que foi encapsulado.

Description

Relatório Descritivo de Patente de Invenção

Composição Farmacêutica compreendendo IsotretinoínaLipossomal ε Processo para a Preparação da mesma

Campo da Invenção

A presente invenção pertence ao campo das composições farmacêuticaspara uso dermatológico. Especificamente, a composição da presente invençãocompreende a Isotretinoína encapsulada em lipossomas, com eficiência de98% de encapsulação.

A composição farmacêutica da presente invenção reduz a degradaçãoquímica do fármaco, apresenta menor irritação cutânea e aumenta o efeitoterapêutico, sendo destinada ao uso tópico no tratamento de doenças como aacne, psoríase, câncer de pele, foto envelhecimento, dentre outras aplicaçõespossíveis.

Fundamentos da Invenção

A Isotretinoína (ácido 13-cis-retinóico) é um retinóide sintético derivadoda vitamina A. Retinóides atuam através da promoção ou supressão dedeterminadas proteínas, modificando a oncogênese, a produção de fatores decrescimento, matriz de colágeno, sebo e queratina, atuando em processosinflamatórios exercendo, desta forma, múltiplos efeitos no crescimento ediferenciação celulares. É um dos grupos mais promissores de fármacos paraaplicação terapêutica em dermatologia (Roos, et al., Pharmacol. Rev. 50:315-333 (1998); Sampaio e Rivitti, Dermatologia. 2a. ed., Artes Médicas, São Paulo(2000)).

Isotretinoína por administração tópica ou oral tem sido utilizada notratamento de acne (Thielitz et ai, Dermatol. Therapy 19:272-279 (2006); Scottet aí., US Pat. No. 4727088), psoríase (Hani AL-ShobaIiIi et al., Pediatr.Dermatol. 24:563-564 (2007); Walden et al., US Pat. No. 2006177392), câncerde pele (Campbell e DiGiovanna1 Dermatol. Therapy, 19:306-314 (2006)) efoto-envelhecimento (Griffith et al., J. Dermatol. Treatment 16:79-86 (2005);Singh e Griffith, Dermatol. Therapy 19:297-305 (2006)). Em aplicações tópicas,os fármacos são incorporados a veículos para que estes transportem eaumentem sua absorção na pele, proporcionando alcançar locais na epidermeviável e derme. Devido à baixa solubilidade em água, as composições tópicasde retinóides, comercialmente disponíveis, são cremes e preferencialmentegéis alcoólicos contendo retinóides em concentrações de 0,025; 0,05 e 0,10%(m/m). Como exemplo, temos o Isotrex®, dos Laboratórios Stiefel Ltda.,contendo 0,05% (m/m) de Isotretinoína em veículo gel constituído dehidroxipropilcelulose como espessante, butilhidroxitolueno (BHT) comoantioxidante e etanol como solvente.

Normalmente estes veículos são pouco eficientes na liberação dosativos no local da doença, podem causar absorção sistêmica indesejada e/ouaumentar a intensidade de efeitos adversos (Fang et ai, Curr. Nanosci. 2:55-70(2006)). Dependendo da gravidade de algumas doenças dermatológicas, aIsotretinoína é administrada na forma oral; contudo, causa significantes efeitosadversos e, por ser teratogênica, tem restrições em seu no uso em mulheresna idade fértil. Daí a importância de outras composições de Isotretinoína quesejam efetivas para uso tópico, causem pequena intensidade de efeitosadversos e tenham mínima absorção na circulação sangüínea.

Os efeitos colaterais mais comuns associados às doses múltiplas no usotópico destes retinóides utilizando composições convencionais são: eritema,ressecamento e ardência da pele, coceira, sensibilidade à luz e descamação,fazendo com que muitos pacientes desistam do tratamento antes de seutérmino. Estes efeitos parecem estar relacionados à desorganização dabarreira da pele, aumento da absorção percutânea e, normalmente, dependemda posologia e dos adjuvantes (como etanol e surfatantes) presentes nacomposição, os quais podem intensificar os efeitos adversos. Como a eficáciaestá freqüentemente relacionada à dose, muitos pacientes não conseguemutilizar a dosagem apropriada devido à intolerância ao produto (Leyden, J. Am.Acad. Dermatol. 38:S1-S4 (1998); Gollnick e Schramm, Dermatoogy 196:119-125 (1998)). Portanto, composições que diminuam a irritação cutânea podemfacilitar o uso do ativo (produto) pelos pacientes, aumentando a adesão aotratamento.

Outro fator que dificulta o uso da Isotretinoína é sua fácil degradaçãoquando exposta à luz, oxigênio e calor (Liu e Asato, Tetrahedron 40:1931-1969(1984)). Alguns dos isômeros de degradação formados apresentam açõesterapêuticas menos eficientes e/ou diferentes; desta forma a quantidade doretinóide disponível para proporcionar os efeitos terapêuticos do produto éreduzida em um curto período de tempo. Formulações comerciais disponíveisdeste fármaco têm estabilidade limitada. Por isso, as mesmas indicam que oproduto deve ser utilizado à noite para diminuir a fotodegradação do fármacoaplicado sobre a pele. Além disso, após abertura da embalagem, a validadedas composições comerciais se reduz para poucos meses (três meses).

Formulações que diminuam a degradação do fármaco podem aumentar aeficácia do tratamento e aumentar o tempo de estocagem do produto a sercomercializado.

Novas composições destes retinóides com objetivo de minimizar airritação causada por eles e, ao mesmo tempo, preservar ou aumentar suasações terapêuticas, como também aumentar a estabilidade química, estãosendo avaliadas e podem ser obtidas através de sua encapsulação emsistemas micro/nanoparticulados, de liberação controlada/sustentada, comoocorre com o sistema lipossomal.

Lipossomas, estruturas que mimetizam membranas celulares, sãoconstituídos principalmente por fosfolipídios de origem natural e sintética,podendo conter outros lipídios como colesterol e também surfatantes eantioxidantes. Estas moléculas são constituídas, em sua parte apoiar, por duascadeias hidrofóbicas de ácidos graxos que podem ter diferentes comprimentose insaturações. A parte polar consiste do grupo fosfato ligado a outros grupospolares contendo ou não cargas. Fosfolipídios, quando dispersos em soluçãoaquosa, organizam-se espontaneamente em bicamadas, apresentando regiõeshidrofóbicas e hidrofílicas, nas quais podem ser inseridas moléculas hidrofílicas(no compartimento aquoso), moléculas hidrofóbicas (no interior da bicamadalipídica) ou anfifílicas (parcialmente intercaladas nas diferentes regiões).Lipossomas por serem biocompatíveis e biodegradáveis, são excelentessistemas para entrega de fármacos no corpo humano (New, Liposomes- apractical approach, Oxford University Press, NewYork (1990)).

Produtos Iipossomais contendo fármacos encapsulados, aplicadostopicamente, em comparação aos convencionais, têm potencial de eliminar airritação local, melhorar o efeito local, reduzir e otimizar a dose terapêutica,fornecer liberação sustentada (pois Iipossomas atuam como microreservatórios do ativo na epiderme), dissolver substâncias lipofílicas. Alémdisso, cosmeticamente podem ser mais aceitáveis que cremes ou géisalcoólicos e aumentar a estabilidade química da substância encapsulada(Mezei, J. Pharm. Pharmacol. 34:473-474 (1982); El Maghraby et ai, J. Pharm.Pharmacol. 58-415-429 (2006)).

Estudos e patentes sobre retinóides encapsulados em Iipossomas paraaplicação na pele envolvem normalmente a Tretinoína ou ácido trans-retinóico.Masini et al. (J. Pharm. Sei. 82:17-21 (1993)), Naeff et ai (WO Pat. No.9830215) e Sinico et al. (J. ControL Rei. 103:123-136 (2005)) determinaramque as concentrações de Tretinoína na pele são maiores utilizando Iipossomasdo que composições convencionais. Valores pequenos de fluxo percutâneo e apresença de um reservatório do fármaco no estrato córneo (e também nosfolículos pilosos) podem melhorar a eficiência no tratamento da doença.Meybeck et al. (US Pat. No. 50342281991) e Patel et al. (Pharm. Dev. Tech.5:455-464 (2000)), além de verificarem o efeito de depósitos da Tretinoína napele pelo uso do fármaco encapsulado em lipossomas, também observaramque a composição Iipossomal contendo Tretinoína foi menos irritante.

Pacientes portadores de acne vulgaris, em estudos de Schafer-Korting etal. (Clin. Invest. 72:1086 (1994)), foram tratados com diferentes géis contendoTretinoína. Os resultados indicaram aumento na tolerabilidade e maior reduçãodos comedões utilizando o gel Iipossomal de Tretinoína 0,01% em relação aosgéis convencionais com 0,025% e 0,05%. Portanto, utilizou-se uma dose menorda Tretinoína, sem que houvesse redução da eficácia no tratamento.Em outros estudos, Tretinoína e Isotretinoína apresentaram maior foto-estabilidade quando encapsuladas em Iipossomas (Brisaert et ai, J. Pharm.Biomed. Anal. 26:909-917 (2001); Ioele et ai, Int. J. Pharm. 293:251-260(2005)).

A Patente de Cabanas et al. (ES Pat. No. 2024381) descrevecomposições contendo Iipossomas com ácido retinóico ou palmitato de retinolencapsulados para tratamento de disfunções dermatológicas e foto-envelhecimento, as quais não causam irritação cutânea, são mais efetivas nadiminuição de comedões e menores concentrações dos ativos são necessáriaspara reparar efeitos de radiação na pele, comparadas com as formulaçõescontendo os fármacos dissolvidos em géis ou cremes convencionais.

Existem outras patentes como a de Patel (WO Pat. No. 03092621), naqual Tretinoína e outras substâncias como antibióticos são conjuntamenteencapsulados em lipossomas; porém, a Isotretinoína não é citada comosubstância a ser encapsulada. Em outras (Touitou, US Pat. No. 5716638 eNaeff et al., WO Pat. No. 9830215), existe a presença de álcool na composiçãoIipossomal contendo Tretinoína para uso, como exemplo, em aplicaçõestransdérmicas (lipossomas que permeiam através pele), o que não é nossoobjetivo (aplicação dérmica).

Poucas patentes citam Isotretinoína como agente a ser encapsulado. Apatente de Hu et ai, (WO Pat. No. 2005/070465) diz respeito às composições,para aplicação oral e parenteral, contendo lipossomas menores que 100 nm,compostos de fosfatidilcolina e fosfolipídio aniônico, opcionalmente colesterol eopcionalmente um agente terapêutico, o qual é escolhido dentre a grandemaioria de fármacos disponíveis na farmacopéia, citada nas reivindicações,inclusive a Isotretinoína.

Na patente de Meybeck et ai (EP Pat. No. 229561) a Isotretinoína é umdos retinóides indicados nas reivindicações, para ser encapsulada noslipossomas em uso dermatológico ou cosmético; porém, cita-se que aincorporação de retinóides nos lipossomas "não é crítica", podendo chegar até40% em relação à massa de lipídios. Os exemplos são mostrados apenas coma Tretinoína, e nas reivindicações, não é indicado o tipo de fosfolipídio que éutilizado para preparar os lipossomas, sendo colocado de uma forma genéricacomo "fases Iamelares lipídicas hidratadas ou lipossomas".

Isotretinoína é um fármaco com facilidade de cristalização (auto-agregação); portanto, este ficará encapsulado na bicamada lipídica doslipossomas, se a composição Iipossomal for extensivamente estudada,obtendo-se a (ou a faixa de) razão molar Isotretinoína/fase lipídica para a quala Isotretinoína permanece termodinamicamente estável na bicamadalipossomal, e que depende também dos constituintes bem definidos da faselipídica. Quando a razão molar é aumentada ou dependendo dos constituintesda fase lipídica usada, a Isotretinoína vaza dos lipossomas, auto-agrega,surgindo cristais que aparecem durante ou ao longo do tempo, após apreparação dos lipossomas. Desta forma, as patentes relacionadas àIsotretinoína, acima citadas, devido à falta de estudos mais específicosrelacionados a este fármaco, podem gerar produtos com instabilidade dofármaco na bicamada lipídica, refletindo na presença indesejada deIsotretinoína que não está encapsulada, na forma de cristais precipitados nomeio contendo os lipossomas dispersos, como também causar instabilidadesfísicas e químicas dos próprios lipossomas.

Não é conhecido nenhum produto tópico, disponível no mercado,contendo Isotretinoína encapsulada em lipossomas. Existem cremes eprincipalmente géis alcoólicos contendo o fármaco dissolvido no meio (comoIsotrex® - Stiefel; Cecnoin® - Ranbaxy), os quais causam irritação cutânéa.

Na presente invenção, o fármaco a ser encapsulado é bem específico: aIsotretinoína. Sua concentração, o tipo e concentração de constituinteslipofílicos utilizados na fase lipídica são fatores importantes para estabilidadedos lipossomas, como também a presença necessária de antioxidante lipofílicopara estabilização do fármaco. As composições Iipossomais desenvolvidas,objeto desta invenção, apresentam composição bem definida para ter omáximo de eficiência de encapsulação de Isotretinoína (maior que 98%), menorpermeação e irritação cutânea e para diminuir a degradação química dofármaco.

Objetos da Invenção

A presente invenção proporciona uma composição farmacêuticacompreendendo Isotretinoína Iipossomal, onde mais de 98% da Isotretinoínaestá encapsulada nos lipossomas.

É um objeto da presente invenção proporcionar uma composiçãoIipossomal para uso dermatológico compreendendo:

(a) Isotretinoína como ativo encapsulado;

(b) Lipossomas cuja fase lipídica (constituintes lipofílicosestruturais dos lipossomas) é composta de: (I) fosfatidilcolinainsaturada ou (II) mistura de fosfatidilcolina insaturada e colesterolou (III) mistura de fosfatidilcolina insaturada e fosfatidilserina ou(IV) mistura de fosfatidilcolina saturada e fosfatidilcolinainsaturada ou (V) mistura de fosfatidilcolina saturada e diácidograxo etoxilado; e cuja fase aquosa é composta de soluçãoaquosa ou gel aquoso;

(c) pelo menos um antioxidante lipofílico; e

(d) um veículo farmaceuticamente aceitável que não desestrutureos lipossomas como a própria fase aquosa.

Os lipossomas da presente invenção possuem constituintes lipofílicos dabicamada Iipossomal (fase lipídica) bem definidos, razões molaresIsotretinoína/fase lipídica bem estabelecidas (como 0,026:1) para evitarvazamento do fármaco, aumentar a estabilidade do fármaco nas composiçõesIipossomais e alcançar as propriedades desejadas.

Os lipossomas da presente invenção podem ser homogêneos ouheterogêneos em relação ao diâmetro e/ou número de bicamadas.

A composição farmacêutica pode apresentar outros aditivos comoantioxidantes hidrofílicos, crioprotetores, complexantes de metais epreservativos anti-microbianos.Especificamente, a composição farmacêutica da presente invenção édirecionada para o uso tópico em tratamento de desordens na pele como acne,psoríase, envelhecimento cutâneo dentre outras desordens possíveis, bemcomo a combinação das mesmas.

Especificamente, a composição farmacêutica da presente invençãoapresenta redução de efeitos adversos como irritação cutânea dentre outrosefeitos possíveis, diminui a degradação química do fármaco e aumenta suaeficácia terapêutica.

Uma forma de processo de obtenção da referida composiçãofarmacêutica contendo a Isotretinoína encapsulada em lipossomas, pode serdada pelas seguintes etapas:

a) dissolução dos constituintes lipofílicos como lipídios, surfatante,antioxidante lipofílico e Isotretinoína em solvente orgânico;

b) formação de uma mistura seca dos constituintes da etapa a)após evaporação do solvente;

c) adição de uma fase aquosa para hidratação na mistura secaformada na etapa b);

d) agitação do sistema formado na etapa c);

e) incorporação o sistema obtido na etapa d) a um veículofarmaceuticamente aceitável, que pode ser a própria fase aquosa mencionadana etapa c).

A composição farmacêutica proposta na presente invenção proporcionaas seguintes vantagens:

a) possui constituintes lipofílicos da fase lipídica bem definidos e razõesmolares Isotretinoína/fase lipídica bem estabelecidas paraproporcionar estabilidade ao sistema Iipossomal e para garantir aspropriedades desejadas;

b) apresenta elevada eficiência de encapsulação da Isotretinoína(mínimo de 98%) tornando desnecessárias etapas subseqüentesnum processo industrial (abaixando o custo da produção) paraseparar o fármaco que não foi encapsulado nos lipossomas;c) é adequada para conter maiores concentrações de Isotretinoína,mantendo-se sempre as proporções fármaco/fase lipídica (para ter omáximo de Isotretinoína encapsulada e evitar etapas posteriorespara separação do fármaco livre do encapsulado) para competir comformas farmacêuticas presentes no mercado. Além disso, acomposição da invenção pode ser industrialmente escalonada;

d) aumenta a estabilidade química do fármaco na forma de suspensãoou gel aquoso, em relação ao gel alcoólico, que é o gel convencionalpara uso e dissolução da Isotretinoína;

e) apresenta menor fluxo do fármaco através da pele (diminuem aabsorção sistêmica do ativo) e está dispersa em veículo aquoso,causando expressiva redução de efeitos adversos (irritações) emrelação ao gel alcoólico convencional, possibilitando tratamentomenos agressivo aos pacientes, fazendo com que estes consigamfinalizá-lo;

f) favorece o acúmulo de fármaco na pele (liberação sustentada),podendo acarretar aumento de sua eficácia terapêutica e possibilitarredução da dose ou do tempo de tratamento. A liberação pode sermodulada variando a composição da fase lipídica das composiçõeslipossomais.

Estes e outros objetos da invenção serão imediatamente valorizadospelos versados na arte e pelas empresas com interesses no segmento e serãodescritos em detalhes suficientes para sua reprodução na descrição a seguir.

Breve Descrição das Figuras

A Figura 1 mostra micrografias eletrônicas obtidas da composiçãolipossomal do exemplo 11, com fase lipídica composta de mistura defosfatidilserina e fosfatidilcolina insaturada, com razão molar defosfatidilserina.fase lipídica de 0,1:1, contendo Isotretinoína encapsulada narazão molar fármaco:fase lipídica de 0,026:1, na presença de BHT, sendo (a)micrografia eletrônica de transmissão, barra = 40 nm; e (b) micrografiaeletrônica de varredura, barra = 1 μm.A Figura 2 mostra as avaliações de estabilidade de composiçõesIipossomais contendo Isotretinoína encapsulada, realizadas durante 3 meses a8 0C. Foram avaliados: (A) diâmetro médio, (B) polidispersidade e (C) eficiênciade encapsulação da Isotretinoína das composições Iipossomais contendo razãomolar lsotretinoína:fase lipídica de 0,026:1; fases lipídicas compostas de"fosfatidilcolina insaturada e fosfatidilcolina saturada" denominada PC-HPCcom razão molar de fosfatidilsolina insaturada:fase lipídica de 0,4:1 e"fosfatidilserina e fosfatidilcolina insaturada" den ominada PS-PC com razãomolar de fosfatidilserina:fase lipídica de 0,1:1, e antioxidante BHT com 0,4%em massa em relação à fase lipídica. Vide exemplo 12.

A Figura 3 mostra a fotodegradação da Isotretinoína (0,025%m/m) emgel etanólico; em gel Iipossomal (gel aquoso contendo Iipossomas constituídode fosfatidilcolina insaturada, denominado gel lipossomal-PC); em etanol e emsuspensão Iipossomal (lipossomas constituídos de fosfatidilcolina insaturadaem suspensão aquosa, denominada lipossomas-PC), sob lâmpadafluorescente, durante 4 h - Exemplo 13. A composição Iipossomal apresentarazão molar lsotretinoína:fase lipídica de 0,026:1).

A Figura 4 mostra os resultados obtidos de testes de permeação emepiderme de orelha de porco. Gráficos de (A) valores de fluxo de Isotretinoínapela pele durante 24h; (B) quantidade de Isotretinoína permeada pela pele nasolução receptora após 24 h de permeação e (C) quantidade de Isotretinoínaacumulada na pele após 24 h de permeação. Foram usados géis Iipossomais ealcoólicos contendo 0,025% de Isotretinoína em relação à massa do produto,espessante hidroxipropilcelulose e antioxidante BHT. Géis Iipossomaiscontendo as seguintes fases lipídicas "PC"=fosfatidilcolina; "Col-PC"=colesterole fosfatidlcolina insaturada (razão molar colesterol em relação à fase lipídica de0,2:1); "PS-PC"=fosfatidilserina e fosfatidilcolina insaturada (razão molarfosfatidilserina em relação à fase lipídica de 0,1:1); "PC-HPC"=fosfatidilcolinainsaturada e fosfatidilcolina saturada (razão molar fosfatidilcolina insaturada emrelação à fase lipídica de 0,4:1) e "AGE-HPC"=ácido graxo etoxilado efosfatidilcolina saturada (razão molar ácido graxo etoxilado em relação à faselipídica de 0,4:1); BHT= 0,4% em massa em relação à fase lipídica.

Descrição Detalhada da Invenção

Os exemplos aqui mostrados têm o intuito somente de exemplificar umadas inúmeras maneiras de se realizar a invenção, contudo sem limitar o escopoda mesma.

Ingrediente Ativo

O ingrediente ativo usado na presente invenção é a Isotretinoína ederivados da mesma. Suas composições são utilizadas em tratamentosdermatológicos como os da acne. A presente invenção pode ser empregada notratamento da acne além de outras desordens na pele como psoríase,hiperceratose, rosácea e envelhecimento cutâneo.

As composições da presente invenção têm finalidade de reduzir efeitosadversos como irritação cutânea, aumentar a eficácia terapêutica e reduzir adegradação química da Isotretinoína, através da encapsulação deste fármacoem bicamadas lipossomais.

A quantidade de Isotretinoína encapsulada nas bicamadas Iipossomas écrítica para a estabilidade do fármaco e dos Iipossomas formados. Estaquantidade foi muito bem avaliada nas composições desenvolvidas, objeto dapresente invenção, correspondendo a composições na qual a porcentagem deencapsulação da Isotretinoína nos Iipossomas é maior que 98%, utilizando napreparação dos Iipossomas constituintes lipofílicos da fase lipídica bemdefinidos, razões molares Isotretinoína/fase lipídica bem estabelecidas paraevitar vazamento do fármaco, aumentar a estabilidade do fármaco nascomposições lipossomais e alcançar as propriedades desejadas. Fase lipídicaé formada pelos constituintes estruturais da bicamada lipossomal, comofosfolipídios, colesterol e diácido graxo etoxilado.

A alta porcentagem de encapsulação de Isotretinoína (98%) evita anecessidade de etapas posteriores de separação do fármaco na forma livre daforma encapsulada, além de aumentar a estabilidade do fármaco nacomposição.Lipossomas

Os lipossomas na presente invenção são formados por uma fase lipídicacomposta de lipídios, podendo ou não conter surfatantes; antioxidanteslipofílicos e uma fase aquosa. Adicionalmente, componentes opcionais podemser utilizados.

a) Fase lipídica

a.1) Mistura de fosfatidilcolina saturada e diácido qraxo etoxilado

Na composição farmacêutica, objeto da presente invenção, aIsotretinoína está mais que 98% encapsulada em Iipossomas cuja fase lipídicaé constituída de mistura de fosfatidilcolina saturada e diácido graxo etoxilado. Arazão molar de diácido graxo etoxilado em relação à fase lipídica varia de 0,4:1a 0,6:1, preferencialmente a razão molar é 0,4:1 a 0,5:1. A razão molar deIsotretinoína em relação à fase lipídica é 0,026:1.

a.2) Mistura de fosfatidilcolina saturada e fosfatidilcolina insaturada

Na composição farmacêutica, objeto da presente invenção, aIsotretinoína está mais que 98% encapsulada em Iipossomas cuja fase lipídicaé constituída de mistura de fosfatidilcolina saturada e fosfatidilcolina insaturada.A razão molar fosfatidilcolina insaturada em relação à fase lipídica é 0,4:1 a0,8:1, preferencialmente a razão molar é 0,4:1 a 0,5:1. A razão molar deIsotretinoína em relação à fase lipídica é 0,026:1.

a.3) Fosfatidilcolina insaturada

Na composição farmacêutica, objeto da presente invenção, aIsotretinoína está mais que 98% encapsulada em Iipossomas cuja fase lipídicaé constituída apenas de fosfatidilcolina insaturada. A razão molar deIsotretinoína em relação à fase lipídica deve ser até 0,031:1, preferencialmentea razão molar é 0,026:1.

a.4) Mistura de fosfatidilcolina insaturada e colesterol

Na composição farmacêutica, objeto da presente invenção, aIsotretinoína está mais que 98% encapsulada em Iipossomas cuja fase lipídicaé constituída de mistura de fosfatidilcolina insaturada e colesterol. A razãomolar de colesterol em relação à fase lipídica é 0,05:1 a 0,2:1,preferencialmente a razão molar é 0,1:1 a 0,2:1. A razão molar de Isotretinoínaem relação à fase lipídica é 0,026:1.

a.5) Mistura de fosfatidilcolina insaturada e fosfatidilserina

Na composição farmacêutica, objeto da presente invenção, aIsotretinoína está mais que 98% encapsulada em Iipossomas cuja fase lipídicaé constituída de mistura de fosfatidilcolina insaturada e fosfatidilserina. A razãomolar de fosfatidilserina em relação à fase lipídica é 0,05:1 a 0,3:1,preferencialmente a razão é 0,1:1. A razão molar de Isotretinoína em relação àfase lipídica é 0,026:1.

Algumas especificações dos constituintes da fase lipídica dosIipossomas da composição farmacêutica, acima citados, são descritas:

Fosfatidilcolina

A fosfatidilcolina saturada utilizada na presente invenção pode serfosfatidilcolina saturada de ocorrência natural ou sintética, preferencialmentefosfatidilcolina saturada de soja e, mais preferencialmente, fosfatidilcolinasaturada de soja, com pureza maior que 90%. A boa qualidade dos fosfolipídiosutilizados para preparar os Iipossomas evita problemas de desestabilização dabicamada Iipossomal e da Isotretinoína e de reprodutibilidade dascomposições. 29. A fosfatidilcolina saturada pode ser compreendida pelafosfatidilcolina hidrogenada de ocorrência natural ou sintética.

A fosfatidilcolina insaturada utilizada na presente invenção podeser a fosfatidilcolina insaturada de ocorrência natural ou sintética,preferencialmente fosfatidilcolina insaturada de soja e, mais preferencialmente,fosfatidilcolina insaturada de soja, com pureza maior que 90%.

Fosfatidilserina

A fosfatidilserina, fosfolipídio com carga total negativa, é utilizadapara conferir maior estabilidade física aos Iipossomas por meio de repulsãoeletrostática entre as vesículas, diminuindo a tendência de aglomeração e/oufusão das mesmas. A fosfatidilserina utilizada na presente invenção pode serde ocorrência natural ou sintética, preferencialmente fosfatidilserina de soja oude origem animal (cérebro bovino), com pureza maior que 85%.Colesterol

O colesterol é empregado para estabilizar e enrijecer a bicamadaIipossomal de vesículas contendo principalmente fosfatidilcolina insaturada,podendo auxiliar, até determinada concentração molar, na manutenção deativos encapsulados nos lipossomas. O colesterol utilizado na presenteinvenção deve ter preferencialmente pureza maior que 90%. O colesterol podeser substituído totalmente ou parcialmente por outros derivados de colesterol:colesterol hemisuccinato e colesterol etoxilado (PEG-colesterol).

Surfatante

O diácido graxo etoxilado corresponde a uma classe desurfatantes compostos de duas cadeias de ácidos graxos ligadas por umacadeia de oxido de etileno (OE). Devido à presença de duas cadeias de ácidosgraxos na mesma molécula, esta apresenta tendência de formar estruturasauto-organizáveis em bicamadas, como as moléculas de fosfolipídios. Osdiácidos graxos etoxilados utilizados na preparação das composiçõespropostas nesta invenção são compostos de dois ácidos graxos contendoinsaturação, com distribuição média do tamanho das cadeias hidrofóbicascentrada em 12 a 20 carbonos, preferencialmente 18 carbonos. As cadeias deácidos graxos são ligadas entre si por cadeias de 4 a 20 unidades de OE1preferencialmente ligados entre si por uma cadeia de oxido de etileno comdistribuição de OE centrada em 4 a 12 unidades. Diácidos graxos etoxiladosreferidos correspondem aos produtos como PEG-8-Dioleate ou Lipopeg 4DOda Lipo Chemicals.

b) Antioxidante lipofílico

A estabilidade química das composições da presente invenção éalcançada pela presença de antioxidante lipofílico como butilhidroxitolueno narazão de 0,3 a 2% em massa em relação à massa da fase lipídica,preferencialmente de 0,4 a 1% em massa. Outros antioxidantes lipofílicospodem ser utilizados como α-tocoferol e palmitato de ascorbila.

c) Fase aquosaAs composições da presente invenção são baseadas na estruturalipossomal. Os Iipossomas só são formados quando o filme ou pó da faselipídica contendo o fármaco misturado é hidratado na fase aquosa. A faseaquosa pode ser constituída de água destilada ou deionizada, maspreferencialmente deve estar tamponada, mais preferencialmente tamponadaem pH fisiológico da pele, por exemplo, utilizando tampão citrato pH 5,6. Ácidocítrico/citrato tem vantagem de também complexar metais os quais,dependendo da concentração presente, podem desestruturar os lipossomas. Afase aquosa também pode ser constituída de gel aquoso. Dependendo daquantidade e do local aplicado, o uso do produto em uma forma mais viscosa édesejável, como o gel aquoso. Vários agentes de geleificação ou espessantescomo derivados de celulose (hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose),polímeros de ácido poliacrílico (carbopol) e biopolímeros como escleroglucanaspodem ser utilizados para obter a fase aquosa na forma de gel aquoso.

d) Diâmetro e Iamelaridade

Os lipossomas da composição farmacêutica podem ser homogêneos ouheterogêneos em relação ao diâmetro e/ou ao número de bicamadas. Oslipossomas das composições desenvolvidas, em relação ao diâmetro, podemser heterogêneos, preferencialmente com diâmetros médios menores que 1000nm, mais preferencialmente menores que 400 nm, na faixa de 50 a 400 nm.

Veículo farmaceuticamente aceitável

O veículo onde os lipossomas estão dispersos não deve desestruturaras bicamadas lipossomais, preferencialmente deve ser uma solução aquosa ougel aquoso. O veículo pode ser a própria fase aquosa utilizada na hidrataçãodos lipossomas.

Componentes opcionais

Para aumentar a estabilidade física e química das composiçõeslipossomais, estas também podem apresentar outros aditivos, comoantioxidantes hidrofílicos (exemplo: ácido ascórbico), crioprotetores (exemplo:sacarose ou trealose), complexantes de metais (exemplo: ácidoetilenodiaminotetra-acético - EDTA) e preservativos anti-microbianos (exemplo:misturas de isotiazolinonas, parabenos). Estes componentes podem seradicionados na fase aquosa durante hidratação dos Iipossomas e/ou no veículofarmaceuticamente aceitável.

Processo de obtenção da referida composição farmacêutica contendo aIsotretinoína encapsulada em Iipossomas

O processo de produção da composição farmacêutica da presenteinvenção compreende as etapas de:

a) dissolução dos constituintes lipofílicos como Iipidios1 surfatante,antioxidante lipofílico e Isotretinoína em solvente orgânico;

b) formação de uma mistura seca dos constituintes da etapa a) apósevaporação do solvente;

c) adição de uma fase aquosa para hidratação na mistura seca formadana etapa b);

d) agitação do sistema formado na etapa c);

e) incorporação o sistema obtido na etapa d) a um veículofarmaceuticamente aceitável, que pode ser a própria fase aquosa mencionadana etapa c).

Se a mistura dos constituintes lipofílicos com a Isotretinoína estiver naforma de filme ou pó na etapa b), a fase aquosa adicionada na etapa c) deveser uma solução aquosa ou gel aquoso. Alternativamente, após dispersão damistura dos constituintes lipofílicos com a Isotretinoína em solução aquosa naetapa d), esta suspensão Iipossomal pode ser diluída em gel aquoso na etapa e).

A agitação do sistema em d) é realizada por qualquer meio de agitaçãodescrito no estado da técnica como agitação por ultrassom, em equipamentode rota-evaporação ou semelhante, por agitadores magnéticos, por agitadoresmecânicos, por homogeneizadores tipo turrrax, por agitadores tipo vórtex, emequipamentos que utilizam força de cisalhamento, em equipamentos queutilizam homogeneização com alta pressão, bem como a combinação dos mesmos.O processo de obtenção de Iipossomas de Isotretinoína da presenteinvenção possibilita a obtenção de Iipossomas homogêneos ou heterogêneosem relação ao diâmetro e/ou número de bicamadas. Os Iipossomas obtidosapós hidratação na fase aquosa podem ser processados por extrusão,homogeneização de alta pressão, microfluidização, ultrassom dentre outrosmétodos possíveis, bem como a combinação dos mesmos para seleção oudiminuição do diâmetro, redução da polidispersidade e/ou do número debicamadas Iipossomais (maior homogeneidade dos lipossomas).

A incorporação dos lipossomas a um veículo farmaceuticamenteaceitável na etapa e) pode ser feita utilizando um sistema de agitaçãomecânica ou similar.

Adicionalmente, o processo da presente invenção pode incluir umaetapa de liofilização dos lipossomas dispersos em solução aquosa (suspensãolipossomal) para posteriormente serem re-hidratados com adição de uma faseaquosa.

As composições compreendidas de lipossomas, objeto da presenteinvenção, denominadas composições Iipossomais podem ser utilizadas naforma de suspensão lipossomal (lipossomas dispersos em uma soluçãoaquosa) ou na forma de gel lipossomal (lipossomas dispersos em um gelaquoso).

Exemplo 1 Preparação de suspensões Iipossomais contendo Isotretinoínaencapsulada através da hidratação do filme lipídico seco

O processo a seguir descreve a preparação de composições Iipossomaiscom Isotretinoína encapsulada. O processo pode ser utilizado para prepararcomposições contendo lipossomas constituídos de diferentes fases lipídicas,como exemplificado na Tabela 1.

Tabela 1: Razão molar e quantidade em massa e mol de diferentes faseslipídicas (constituintes lipofílicos dos lipossomas) para encapsulação de 1,25mg ou 4,16 μηιοΙ de Isotretinoína. A concentração da Isotretinoína em relação àmassa da suspensão é em torno de 0,025% em massa. Nesta Tabela a razãomolar Isotretinoína/fase lipídica é de 0,026:1.<table>table see original document page 19</column></row><table>

(*) O número entre colchetes corresponde aos valores, em massa ou mol, doprimeiro componente lipofílico estrutural da fase lipídica dos Iipossomas (ex:colesterol). As abreviaturas dos constituintes lipofílicos: fosfatidilcolinainsaturada = PC; colesterol = Col; fosfatidilserina = PS; fosfatidilcolina saturada= HPC e surfatante diácido graxo etoxilado = AGE.

Em um balão de fundo redondo, foram colocados os constituinteslipofílicos que formarão a bicamada Iipossomal (fase lipídica), exemplificadosna Tabela 1, antioxidante BHT (por exemplo, 0,4% em massa em relação àmassa da fase lipídica) e Isotretinoína (1,25 mg ou 4,16 μηιοΙ, para obtençãode 0,025% em massa de Isotretinoína em relação à massa total da suspensão;razão molar Isotretinoína/fase lipídica é 0,026:1). As substâncias foramdissolvidas em 8 ml_ de clorofórmio e metanol na razão 1:1 (v/v). O balão foicolocado em rota-evaporador, mergulhado até o nível do solvente no banhotermostatizado a 35 ou 65±1 0C (dependendo do fosfolipídio) durante 30 min,seguido por 1,5 h em sistema de vácuo (por exemplo, 1 mmHg) para retiradade resíduos de solventes orgânicos.

O balão contendo o filme foi purgado com N2 durante 10 min paradiminuir a concentração de oxigênio. Adicionou-se, em seguida, 5 ml_ de faseaquosa constituída de solução de tampão citrato 10 mmol/L pH 5,6 (contendoou não conservantes e antioxidantes hidrofílicos), previamente purgada com N2ou Ar (15 min) e termostatizada na temperatura do banho (35 ou 65 0C). Foramusadas pérolas de vidro para facilitar a remoção do filme lipídico. O balão foicolocado no rota-evaporador e a hidratação foi feita em banho termostatizado a35 ou 65±1 0C (dependendo do fosfolipídio), durante 30 min/140 rpm. Durantea hidratação, o sistema foi mantido sob purga de N2 para minimizar a oxidaçãodo fármaco. A suspensão foi deixada em repouso, no escuro, em temperaturaambiente durante, pelo menos, 30 min.

Exemplo 2 Composição para uso dermatológico na forma de suspensãoIipossomal contendo Isotretinoína encapsulada em Iipossomas demistura de fosfatidilserina e fosfatidilcolina insaturada

Lipossomas preparados de acordo com o processo do Exemplo 1.Composição Iipossomal contendo fase lipídica composta de mistura defosfatidilserina e fosfatidilcolina insaturada, com razão molar defosfatidilserina:fase lipídica de 0,1:1, contendo Isotretinoína encapsulada narazão molar fármaco:fase lipídica de 0,026:1. Composição correspondente a0,025% em massa de Isotretinoína em relação à massa do produto.

<table>table see original document page 20</column></row><table>Exemplo 3 Composição para uso dermatológico na forma de suspensãoIipossomal contendo Isotretinoína encapsulada em Iipossomas demistura de diácido graxo etoxilado e fosfatidilcolina saturada

Lipossomas preparados de acordo com o processo do Exemplo 1.

Composição Iipossomal contendo fase lipídica composta de mistura de diácidograxo etoxilado e fosfatidilcolina saturada, com razão molar de diácidograxo etoxilado:fase lipídica de 0,4:1, contendo Isotretinoína encapsulada narazão molar fármaco:fase lipídica de 0,026:1. Composição correspondente a0,05% em massa de Isotretinoína em relação à massa do produto.

<table>table see original document page 21</column></row><table>

Suspensões Iipossomais com fase lipídica composta de diácidosgraxos etoxilados, por apresentarem uma viscosidade maior que as outrascomposições com fases lipídicas diferentes, como no Exemplo 2, podem serutilizadas diretamente na pele, sem a presença de agentes de espessamento.

Exemplo 4. Composição para uso dermatológico na forma de suspensãoIipossomal contendo Isotretinoína encapsulada em Iipossomasprocessados em extrusora.

Lipossomas preparados de acordo com o processo do Exemplo 1.

Composição Iipossomal contendo fase lipídica composta de mistura defosfatidilcolina insaturada e fosfatidilcolina saturada, com razão molar defosfatidilcolina insaturada:fase lipídica de 0,4:1, contendo Isotretinoínaencapsulada na razão molar fármaco.fase lipídica de 0,026:1. Composiçãocorrespondente a 0,025% em massa de Isotretinoína em relação à massa doproduto.

A suspensão Iipossomal após hidratação é processada parahomogeneização, diminuição do diâmetro e das Iamelas dos Iipossomas emextrusora termostatizada contendo membranas de policarbonato comporosidade de 400 nm, sob pressão de gás inerte (por exemplo, pressão menorque 10 Kgf/cm2).

<table>table see original document page 22</column></row><table>

Exemplo 5 Isotretinoína encapsulada em Iipossomas processados emextrusora e Iiofilizados

A suspensão Iipossomal obtida de acordo com o Exemplo 4 pode serliofilizada para obter um pó. Na suspensão Iipossomal deve-se adicionarcrioprotetor, como sacarose. A razão em massa de sacarose em relação àmassa total de lipídios deve ser de pelo menos 2:1, para manter o diâmetroinicial das vesículas durante a liofilização. O pó pode ser re-hidratado comsolução aquosa e adicionado posteriormente em gel aquoso ou re-hidratadocom gel aquoso. A re-hidratação pode ser realizada em água deionizada ousolução tampão para aplicação tópica na hora do uso.

Exemplo 6 Composição para uso dermatológico na forma de gelIipossomal contendo Isotretinoína encapsulada em Iipossomas defosfatidilcolina insaturada

A suspensão Iipossomal a ser adicionada no gel aquoso foi preparadaconforme processo do Exemplo 1, porém cinco vezes mais concentrada,conforme Exemplo 6a:Exemplo 6a

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O gel aquoso foi preparado em recipiente contendo tampão citrato 10mmol/L, pH 5,6, adicionando lentamente hidroxipropilcelulose em pó (2,5%(m/m)), sob constante agitação mecânica até desaparecerem todos os grumosdo espessante. Adicionaram-se, então, a solução de EDTA 0,125% (m/m) e0,063% (m/m) de solução de conservante Conserve C (misturas deisotiazolinonas). Manteve-se a agitação até completa homogeneização.

Essa suspensão Iipossomal foi misturada com gel aquoso dehidroxipropilcelulose, na proporção em massa de 1:4 (suspensão em relaçãoao gel), obtendo concentrações finais dos ingredientes conforme Exemplo 6b.

A mistura foi homogeneizada com agitador mecânico, sob baixa rotação, emrecipiente adequado, com baixa luminosidade e sob fluxo de N2, ficando com acomposição final indicada a seguir:

Exemplo 6b

<table>table see original document page 23</column></row><table>Exemplo 7 Composição para uso dermatológico na forma de gellipossomal contendo Isotretinoína encapsulada em Iipossomashomogeneizados sob alta pressão

Suspensão Iipossomal conforme a composição do Exemplo 6a pode serprocessada em homogeneizador de alta pressão (exemplo 1000 bar) parahomogeneização e redução do diâmetro e Iamelas das partículas. A suspensãopode ser adicionada no gel aquoso, conforme descrito no Exemplo 6.Exemplo 8 Composição para uso dermatológico na forma de gellipossomal contendo Isotretinoína encapsulada em Iipossomas utilizandosprav dryer seguido de homogeneização com alta pressão

Uma alternativa para obter a mistura da Isotretinoína com osconstituintes da fase lipídica na forma de pó, em relação ao Exemplo 1 (misturana forma de filme), é o processo de spray dryer. Neste processo, osconstituintes lipofílicos e o fármaco são dissolvidos, por exemplo, em etanol,aquecidos para dissolução dos componentes e atomizados sob fluxo de gásinerte como nitrogênio.

Lipossomas preparados neste exemplo apresentam composiçãolipossomal contendo fase lipídica composta de mistura de mistura decolesterol e fosfatidilcolina insaturada, com razão molar de colesterohfaselipídica de 0,2:1, contendo Isotretinoína encapsulada na razão molarfármaco:fase lipídica de 0,026:1.

<table>table see original document page 24</column></row><table>

O pó obtido pelo spray dryer pode ser hidratado em solução tampãocitrato pH 5,6, 10 mmol/L, sob agitação mecânica, contendo ácido asèórbicocomo antioxidante dissolvido no tampão citrato momentos antes da hidrataçãodos lipossomas. A suspensão final é processada em homogeneizador de altapressão e adicionada em gel aquoso de carbopol Ultrez 10NF ® a 1,25% (m/m)contendo conservantes para obter 0,05% em massa do fármaco em relação àmassa do produto final.

Exemplo 9 Composição para uso dermatológico na forma de gelIipossomal contendo Isotretinoína encapsulada em lipossomas utilizandosprav drier seguido de hidratação e homogeneização em eguipamentotipo turrax

A mistura em pó dos constituintes lipídicos da fase lipídica e daIsotretinoína obtidos segundo Exemplo 8 pode ser hidratada sob agitação comalto cisalhamento para homogeneizar e reduzir o diâmetro das vesículas.

A suspensão final é adicionada em gel aquoso, conforme Exemplo 6para obter a concentração desejada de Isotretinoína, por exemplo, 0,05% emmassa do fármaco em relação à massa do produto final.

Exemplo 10 Determinação da porcentagem de Isotretinoína encapsuladanos lipossomas

A encapsulação da Isotretinoína nos lipossomas propostos nestainvenção foi determinada por ultracentrifugação da suspensão Iipossomalseguida da quantificação do fármaco e constituintes lipídicos. A encapsulaçãodo fármaco foi acompanhada, a longo prazo, por microscopia óptica.

As suspensões Iipossomais obtidas pelo processo do Exemplo 1 e comquantidades de Isotretinoína e constituintes lipofílicos conforme Tabela 1 destemesmo exemplo, foram processadas por extrusão em membranas depolicarbonato com porosidade de 400 nm. Esta suspensões foramultracentrifugadas a 145600 g durante 2 h a 4 0C. O sobrenadante de cadaamostra foi retirado e o precipitado amarelado (lipossomas) foi ressuspenso emsolução tampão citrato pH 5,6 e quantificado por Cromatografia Líquida de AltaEficiência (HPLC).

A concentração de fosfolipídios da fase lipídica nestas suspensõesIipossomais foi determinada por ensaio de fosfato, utilizando o procedimentodescrito por Rouse et al. (Lipids 1:85-86 (1966)), o qual se baseia na formaçãode um complexo azul de fósforo com molibdato de amônio.

Devido às perdas conjuntas de fármaco e fase lipídica durante aobtenção dos lipossomas, a porcentagem de encapsulação foi determinadaconsiderando tanto os números de moles de Isotretinoína quanto os da faselipídica presentes. Para cada suspensão Iipossomal foi determinada aporcentagem (eficiência) de encapsulação do fármaco em função da razãomolar de Isotretinoína em relação à fase lipídica, após separação do fármacolivre, e comparada como valor teórico (moles de Isotretinoína e constituinteslipídicos adicionados ao balão para preparar os lipossomas), conforme descritona Tabela 2.

Tabela 2: Eficiência de encapsulação da Isotretinoína nas suspensõesIipossomais do Exemplo 1, considerando as quantidades dos constituintesespecificadas na Tabela 1

<table>table see original document page 26</column></row><table>

Pela Tabela 2, observa-se que a eficiência de encapsulação daIsotretinoína foi maior que 98% em todas as suspensões lipossomais, de modoque a razão molar lsotretinoína:fase lipídica e os constituintes lipofílicos da faselipídica utilizados na preparação dos lipossomas foram adequados paraencapsular praticamente todo o fármaco. Estes resultados indicaram que ascomposições lipossomais, propostas nesta invenção, não necessitam de préviaseparação da Isotretinoína livre daquela encapsulada nos lipossomas, paraserem utilizadas posteriormente dentro de processo industrial de obtenção doproduto farmacêutico a ser comercializado.

Como Isotretinoína é praticamente insolúvel em água, se ela não fortotalmente encapsulada em lipossomas ou mesmo se vazar das bicamadaslipossomais com o tempo, ela poderá ser visualizada como cristais amareladosdispersos na suspensão em microscópio óptico provido de polarizador. Ascomposições lipossomais da presente invenção não apresentaram cristais deIsotretinoína após suas preparações.

Exemplo 11. Análises de lipossomas por microscopia eletrônica detransmissão e de varredura

As composições lipossomais propostas nesta invenção foram avaliadaspor microscopia eletrônica. Como exemplos, serão mostradas as micrografiasmistura de fosfatidilserina e fosfatidilcolina insaturada (PS-PC), com razãomolar de fosfatidilserina:fase lipídica de 0,1:1, contendo Isotretinoínaencapsulada na razão molar fármaco:fase lipídica de 0,026:1). Esta suspensãolipossomal, após processamento por extrusão em membranas com poros de400 nm de diâmetro, foi visualizada ao microscópio eletrônico de transmissão -MET (a 80 kV) por meio de coloração com ácido fosfotungstico 1% (m/v) emágua, de acordo com a metodologia de New (Liposomes- a practical approach,Oxford University Press, New York (1990)). Estes mesmos lipossomas foramanalisados por microscópio eletrônico de varredura - MEV, utilizando oprocedimento de Ishii et al. (Langmuir 11:483-486 (1996)), no qual inicialmenteuma fita de papel de filtro é imersa na suspensão lipossomal, seguido defixação com verde de malaquita, glutaraldeído e tetróxido de ósmio.

Apesar de certa deformação e aglomeração dos lipossomas com asecagem das amostras após coloração da suspensão com ácido fosfotungstico(Figura 1), foi possível comprovar por microscopia eletrônica de transmissão aformação de Iipossomas na suspensão através da presença de Iamelas(bicamadas lipídicas) nas vesículas.

A micrografia obtida por microscopia eletrônica de varredura (Figura 1)indicou que os Iipossomas desta suspensão apresentam estruturas na maiorparte, esféricas, com diâmetros que variam de 120 a 350 nm.

Exemplo 12. Avaliação da estabilidade de composições Iipossomaiscontendo Isotretinoína encapsulada.

Suspensões Iipossomais contendo Isotretinoína encapsulada, obtidas noExemplo 10, foram transferidas para ampolas âmbar, purgadas com N2 efechadas ao fogo. Estas amostras, em triplicata, foram mantidas em geladeira a8°C durante 3 meses e analisadas após 0; 30 e 90 dias, por HPLC emicroscopia óptica. A distribuição de tamanhos dos Iipossomas foi determinadapela técnica de espectroscopia de correlação de fótons.

Como Isotretinoína é praticamente insolúvel em água, se ela não fortotalmente encapsulada em Iipossomas ou mesmo se vazar das bicamadasIipossomais com o tempo, ela poderá ser visualizada como cristais amareladosdispersos na suspensão, em microscópio óptico provido de polarizador.

Durante este tempo de estudo de estabilidade, o diâmetro médio e apolidispersidade dos Iipossomas e a porcentagem do fármaco encapsulado nosIipossomas não foram alterados significativamente. Para exemplificar, a Figura2 mostra os resultados obtidos para as composições contendo Isotretinoínaencapsulada em Iipossomas compostos de fase lipídica "mistura defosfatidilcolina insaturada e fosfatidilcolina saturada" ou PC-HPC e "mistura defosfatidilserina e fosfatidilcolina insaturada" ou PS-PC.

Não foram observados significativamente cristais de Isotretinoína nassuspensões Iipossomais no início e após os 3 meses deste estudo deestabilidade, demonstrado que a razão molar lsotretinoína:fase lipídica e ascomposições da fase lipídica desenvolvidas nesta invenção fornecem umambiente termodinamicamente mais estável para a Isotretinoína, evitando suaauto-agregação na forma de cristais na suspensão. O antioxidante adicionadofoi eficiente, contribuindo com a estabilização química do fármaco.Exemplo 13. Avaliação da fotodeqradação das composições Iipossomaise da solução alcoólica de Isotretinoína sob luz de lâmpada fluorescente eluz UVA

Foram comparadas as fotodegradações da Isotretinoína Iipossomal ealcoólica sob lâmpada fluorescente (simulando luz interna de ambientes, comolaboratórios e residências) e sob lâmpada de UVA (simulando radiação UVA daluz solar).

Suspensões Iipossomais S2 a S6 (Tabela 3) foram preparadas deacordo com o processo do Exemplo 1 e com quantidades de Isotretinoína econstituintes lipofílicos conforme Tabela 1 deste mesmo exemplo. Elas foramprocessadas por extrusão em membranas de policarbonato com porosidade de400 nm. Todas as composições Iipossomais apresentam 0,025% de fármacoem relação à massa da suspensão; razão lsotretinoína:fase lipídica em0,026:1. A solução S1 correspondeu a Isotretinoína dissolvida em etanol commesma concentração de Isotretinoína e BHT que as suspensões lipossomais.

Cubetas de quartzo com as suspensões lipossomais ou com a soluçãoetanólica de Isotretinoína foram posicionadas a 6 cm de uma lâmpada de UVA(densidade de potência local igual a 185 mW/cm2, faixa de 320 a 400 nm) oude uma lâmpada fluorescente (potência total igual a 20 W) instaladas dentro decaixas pretas e as suspensões/soluções foram mantidas durante todo o temposob agitação magnética. As amostras foram irradiadas por 24 h. Emdeterminados períodos, foram coletadas alíquotas da suspensão, em duplicata,as quais foram diluídas em metanol e analisadas por HPLC.

A constante de velocidade de fotodegradação (kf0t) da Isotretinoína foiobtida dos gráficos de In ([lsotretinoína]/[lsotretinoína]iniCiai) versus tempo, paracada suspensão Iipossomal e solução etanólica, através de ajuste linearconsiderando cinética de primeira ordem até 90 min de irradiação. Asconstantes estão na Tabela 3.

Os dados dessa Tabela indicam que a solução etanólica S1 apresentoumaior constante de fotodegradação da Isotretinoína (kf0t= 0,0072 min'1) emenor concentração de fármaco residual (27%) após irradiação sob luz delâmpada fluorescente por 24 h do que as suspensões Iipossomais S2 a S6. Osvalores de kfot obtidos para as suspensões S2 a S6 foram semelhantes entre si(kfot médio = 0,0048 min"1 e concentração de Isotretinoína residual em torno de40%), considerando 24 h. Portanto, a encapsulação do fármaco em Iipossomasaumentou sua estabilidade fotoquímica, pois a Isotretinoína dissolvida emsolução alcoólica foi mais facilmente isomerizada (fotodegradação foi maisrápida) que a Isotretinoína encapsulada na bicamada lipossomal.

Tabela 3: Constante de velocidade da fotodegradação e porcentagem deIsotretinoína restante após exposição à luz de lâmpada fluorescente e UVA por24 h para suspensões Iipossomais e solução etanólica contendo o fármaco

<table>table see original document page 30</column></row><table>Em relação à luz UVA, após 24 h de irradiação, a Isotretinoínaencapsulada em Iipossomas (S2) sofreu menor fotodegradação (kf0t = 0,014min"1) do que aquela dissolvida em solução etanólica (kf0t = 0,038 min"1),resultado semelhante ao encontrado utilizando lâmpada fluorescente. Aradiação UVA (de maior energia) foi mais prejudicial ao fármaco que a dalâmpada fluorescente.

A suspensão Iipossomal contendo Isotretinoína deve preferencialmenteser aplicada sobre a pele, na forma de gel aquoso, o qual ficará exposto à luzambiente. Para comparar a fotodegradação da Isotretinoína em solução e naforma de gel, a suspensão Iipossomal com Isotretinoína encapsulada, doExemplo 6a, foi adicionada ao gel aquoso de hidroxipropilcelulose e soluçãoetanólica concentrada de Isotretinoína ao gel alcoólico de hidroxipropilcelulosepara obter concentração final de Isotretinoína nos géis de 0,025% em massade fármaco em relação à massa do produto final. Os géis alcoólico e aquosoapresentam a mesma quantidade e tipo de espessante e antioxidante. Estesgéis foram irradiados durante 4 h sob luz de lâmpada fluorescente; em seguida,o fármaco foi extraído dos géis e analisados por HPLC. Os resultados estão naFigura 3.

Em geral, a Isotretinoína presente nos géis alcoólico e Iipossomalapresentou menor degradação após 4 h de exposição à luz da lâmpadafluorescente que nas respectivas soluções alcoólica e lipossomal, sendo que amenor fotoproteção da Isotretinoína ocorreu no gel lipossomal (restou 60% daIsotretinoína inicial), conforme Figura 3. Portanto, a utilização de gel auxiliou aproteção do fármaco, resultado importante para possível comercialização doproduto, pois a composição lipossomal estabilizou mais a Isotretinoína que acomposição convencional.

Exemplo 14. Ensaios sobre permeação cutânea

O objetivo da terapia local (tópica), ao lado do conforto ao paciente (poisnão se trata de uma rota invasiva, como a intravenosa, intramuscular esubcutânea, e nem causa desconforto gastrointestinal, por exemplo) é produzirníveis adequados de fármaco no tecido, simultaneamente produzindopequenas concentrações sangüíneas, isto é, que o fármaco não sejadistribuído pelo menos em fração significativa sistemicamente no organismo. Otransporte de fármacos, aplicados topicamente pela corrente sangüínea não édesejável pela possibilidade de aparecimento de efeitos adversos e porque suaremoção rápida do local em que foi aplicado limita sua concentração em níveisnão terapêuticos, no tecido (Zatz, em: Skin Permeation, Fundamentais andApplications. Allured Publishing, Wheaton (1993) 11).

Para avaliar a liberação da Isotretinoína Iipossomal na pele foramrealizados estudos sobre permeação utilizando células de difusão de Franz eos resultados comparados com aqueles obtidos da permeação de Isotretinoínaem composição alcoólica convencional. As suspensões Iipossomais obtidasconforme Exemplo 6 e solução etanólica concentrada de Isotretinoína foramincorporadas em géis de hidroxipropilcelulose para depois serem aplicadas napele, sendo denominadas, respectivamente, de gel Iipossomal (Códigosabaixo) e gel alcoólico. Foram obtidas concentrações finais de 0,025% emmassa de Isotretinoína em relação à massa dos géis.

As peles foram obtidas de orelhas de porcos brancos, com poucos pêlose sem manchas e não machucadas. As orelhas foram dissecadas e tratadaspara obter a epiderme. Os testes realizados em células de difusão de Franzcontendo 1,77 cm2 de área de membrana para difusão e capacidade de 7 mL.

Para cada composição foram utilizadas 6 células de difusão e pelo menos duaspeles de orelhas de porcos diferentes. As células foram preenchidas com asolução receptora contendo surfactante Renex 1000 3% (m/v) (que nãodesestrutura os lipossomas) e termostatizadas à 37±1 0C. De cada célula foramcoletadas, alíquotas do líquido receptor em 0, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10 e 24 h após oinício do experimento e, ao mesmo tempo, igual volume do líquido receptor pré-termostatizado foi reposto. Cada alíquota foi filtrada em unidades Millex einjetada no cromatógrafo líquido HPLC. Após 24 h de permeação, o excesso degel foi retirado com algodão e a superfície da pele foi lavada 8 vezes com águadesionizada. O fármaco contido na pele foi extraído com metanol e banho deultrassom, a solução filtrada e analisada mediante HPLC.O fluxo (Figura 4A) foi calculado através da inclinação da reta da curvade quantidade de Isotretinoína permeada através da pele de porco em funçãodo tempo, durante 24 h. Após 24 h de permeação, foi determinada aquantidade de Isotretinoína que permaneceu na pele (Figura 4C), a qual foicomparada com o total de Isotretinoína permeada através da pele após esteperíodo (Figura 4B).

Foi observado maior fluxo de fármaco para o gel alcoólico deIsotretinoína que os géis Iipossomais (Figura 4A). Este fato se deve ao efeitodo etanol promover a penetração do ativo na barreira lipídica da pele à custade rompimento e extração dos lipídios do estrato córneo, causando irritação da pele.

Os géis contendo Iipossomas de PC, PS-PC e AGE-HPC (Códigosabaixo) tiveram concentrações semelhantes ou maiores de Isotretinoína napele (Figura 4C) que no líquido receptor (Figura 4B), indicando que acomposição Iipossomal ajudou a liberação da Isotretinoína preferencialmentedentro da pele e não através da pele. Para Cevc et al. (Adv. Drug Deliv. Rev.18:349-378 (1996)) Iipossomas contendo lipídios negativos (comofosfatidilserina) contribuem positivamente para o depósito do ativo na pele.

Segundo Naeff et. al. (WO No. 9830215A (1998)), a liberação sustentada eefeito de reservatório do ativo na pele ocorrem quando a concentração defármaco que nela permanece é maior que a permeada. Os géis contendoIipossomas de PC-HPC1 CoI-PC e o gel alcoólico produziram mais Isotretinoínana solução receptora após 24h que na pele, indicando que estes Iipossomaspodem estar atuando como agentes de penetração cutânea.

Os resultados obtidos com os estudos sobre liberação in vitro daIsotretinoína (através dos testes de permeação cutânea realizado em célula deFranz) mostraram que esta liberação pode ser modulada variando acomposição lipídica das composições lipossomais. Concluindo, pode-se afirmarque os géis lipossomais apresentaram menores fluxos percutâneos que o gelalcoólico convencional e, consequentemente, isto irá se refletir na absorçãosistêmica do fármaco e principalmente em menores efeitos adversos.- Códigos dos géis lipossomais:

Géis contendo Iipossomas na razão molar Isotretinoína/fase lipídica de 0,026:1,

com BHT, constituídos de fases lipídicas:

"PC"=fosfatidilcolina;

"Col-PC"=colesterol e fosfatidilcolina insaturada, razão molar colesterol emrelação à fase lipídica de 0,2:1;

"PS-PC"=fosfatidilserina e fosfatidilcolina insaturada, razão molarfosfatidilserina em relação à fase lipídica de 0,1:1;

"PC-HPC"=fosfatidilcolina insaturada e fosfatidilcolina saturada, razão molarfosfatidilcolina insaturada em relação à fase lipídica de 0,4:1;

"AGE-HPC"=ácido graxo etoxilado e fosfatidilcolina saturada, razão molarácido graxo etoxilado em relação à fase lipídica de 0,4:1.

Exemplo 15. Teste sobre irritação cutânea primária e acumulativa emcoelhos

Foram avaliadas a irritação dérmica primária e cumulativa dos géisaquosos lipossomais e géis alcoólicos, ambos contendo Isotretinoína 0,025%em massa em relação à massa do produto. Foram testados os géis lipossomaise alcoólico utilizados no teste de permeação cutânea, Exemplo 14. Também,foram testados o gel aquoso e o gel alcoólico sem a presença de Iipossomas eIsotretinoína.

Os animais para o estudo foram coelhos (Oryctolagus cuniculus),fêmeas nulíparas, adultas jovens, saudáveis, raça Nova Zelândia, pesandoentre 1,5 e 3,0 kg de peso corporal. Para cada composição foram utilizados 6coelhos. Aproximadamente 24 h antes do início do teste, a região dorsal dotronco dos animais foi depilada com máquina de tosa e lâmina de barbear.

Administrou-se 0,5 g/animal da amostra, em uma pequena área de sua pele(aproximadamente 6 cm2) que foi coberta com gaze e fita Micropore®. Após 4hda aplicação do produto, foram removidos todos os resíduos com águadesionizada. As áreas adjacentes, que não receberam o produto, serviramcomo controle. No caso dos testes feitos para avaliar a irritação primária, todosos animais foram examinados 24 e 72 h após a aplicação, em relação aoaparecimento de eritema e edema. No caso do ensaio sobre irritaçãocumulativa, as aplicações foram feitas durante 10 dias consecutivos (umaaplicação diária) e as análises nos animais foram realizadas 24 e 72 h após aúltima aplicação. A irritabilidade dérmica foi classificada de acordo com osistema de graduação de irritação cutânea. Os resultados estão na Tabela 4.

Tabela 4: Testes de irritação dérmica primária e acumulativa em pele decoelhos dos géis alcoólicos contendo ou não Isotretinoína, dos géis aquososcontendo ou não Iipossomas com Isotretinoína encapsulada. A concentraçãoda Isotretinoína é de 0,025% em massa em relação à massa do produto.

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Os géis aquoso e alcoólico, de hidroxipropilcelulose, sem a presença deIipossomas e Isotretinoína, não causaram irritação dérmica nos coelhosdurante o período de avaliação.

Considerando a metodologia adotada, os géis contendo Iipossomasforam não irritantes para a pele de coelho, tanto nos testes de irritação primáriaquanto nos testes de irritação acumulativa, com exceção do gel contendoIipossomas "AGE-HPC", que contém surfatante, que foi ligeiramente irritante noteste acumulativo; porém, é comum seu uso em composição de óleos de banhoe de corpo, hidratantes e loções pós-barba.

Gel alcoólico de Isotretinoína foi não irritante no teste de irritaçãoprimária; porém, foi severamente irritante no teste acumulativo,provavelmente pelo maior fluxo da Isotretinoína e a presença de álcool no gelalcoólico, em relação aos géis Iipossomais aquosos. Apesar do gel Iipossomalcontendo Iipossomas de "PC-HPC" apresentar fluxo e quantidade acumuladade Isotretinoína mais próximos aos do alcoólico, ele não causou irritaçãocutânea.

A grande vantagem de utilizar composições Iipossomais em meioaquoso é evitar a presença de álcool, pois géis alcoólicos normalmentepotencializam irritação da pele quando em presença de substâncias irritantes.

Etanol altera a organização dos lipídios do estrato córneo, fazendo com que oativo entre em contato mais rápido com a circulação sangüínea, além deaumentar a perda transepidérmica de água.

Lipossomas além de biocompatíveis são carreadores de moléculas deágua (encapsuladas) e ajudam a oclusão da pele, reduzindo a perdatransepidérmica de água. O aumento da hidratação da pele ajuda a evitar oressecamento causado pela Isotretinoína devido à sua afinidade pelos lipídiosdo estrato córneo e conseqüente desorganização desta barreira. Os resultadossobre permeação indicaram que os géis aquosos Iipossomais contendoIsotretinoína encapsulada tiveram fluxo menor que os géis alcoólicos contendoeste fármaco, podendo diminuir efeitos adversos, como irritação dérmica, porcausa da liberação mais lenta. Como evidenciado no teste de potencialirritativo, géis aquosos Iipossomais contendo Isotretinoína são menos irritantesque os alcoólicos, ambos contendo a mesma concentração de fármaco.

A ausência de irritação dérmica causada pelas composições Iipossomaisé resultado importante, pois muitos pacientes desistem do tratamento comIsotretinoína devido ao poder irritativo intrínseco do fármaco aliado àscomposições convencionais que contém álcool.

Os versados na arte valorizarão os conhecimentos aqui apresentados epoderão reproduzir a invenção nas modalidades apresentadas e em outrosvariantes, abrangidos no escopo das reivindicações anexas.

Claims (69)

1. Composição farmacêutica compreendendo Isotretinoína Iipossomalcaracterizada por mais de 98% da Isotretinoína ou seus derivadosestarem encapsulados nos lipossomas.

2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1,compreendida por:(a) Isotretinoína como ativo encapsulado nos lipossomas;(b) Lipossomas cuja fase lipídica (constituintes lipofílicos estruturaisdos lipossomas) é composta de: (I) fosfatidilcolina insaturada ou(II) mistura de fosfatidilcolina insaturada e colesterol ou (III)mistura de fosfatidilcolina insaturada e fosfatidilserina ou (IV)mistura de fosfatidilcolina saturada e fosfatidilcolina insaturada ou(V) mistura de fosfatidilcolina saturada e diácido graxo etoxilado ecuja fase aquosa é solução aquosa ou gel aquoso;(c) pelo menos um antioxidante lipofílico; e(d) um veículo farmaceuticamente aceitável.

3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelo seu uso na forma tópica, em tratamento dedesordens na pele como acne, psoríase, envelhecimento cutâneodentre outras desordens possíveis, bem como a combinação dasmesmas.

4. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 2,caracterizada por reduzir efeitos adversos como irritação cutânea eaumentar a eficácia terapêutica.

5. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 2,caracterizada por diminuir a degradação química da Isotretinoína.

6. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelo ativo encapsulado nos Iipossomas compreenderum derivado de Isotretinoína.

7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelos Iipossomas compreenderem fosfolipídios,colesterol, diácidos graxos etoxilados e combinações adequadas dosmesmos.

8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pela fase lipídica compreender uma mistura defosfatidilcolina saturada e diácido graxo etoxilado.

9. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8,caracterizada pela razão molar de diácido graxo etoxilado em relaçãoà fase lipídica ser de 0,4:1 a 0,6:1.

10. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9,caracterizada pela razão molar de diácido graxo etoxilado em relaçãoà fase lipídica ser preferencialmente de 0,4:1 a 0,5:1.

11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8,caracterizada pela razão molar de Isotretinoína em relação à faselipídica ser de 0,026:1.

12. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pela fase lipídica compreender uma mistura defosfatidilcolina saturada e fosfatidilcolina insaturada.

13. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 12,caracterizada pela razão molar de fosfatidilcolina insaturada emrelação à fase lipídica ser de 0,4:1 a 0,8:1.

14. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 13,caracterizada pela razão molar de fosfatidilcolina insaturada emrelação à fase lipídica ser preferencialmente de 0,4:1 a 0,5:1.

15. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 12,caracterizada pela razão molar de Isotretinoína em relação à faselipídica ser de 0,026:1.

16. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pela fase lipídica compreender apenas fosfatidilcolinainsaturada.

17. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 16,caracterizada pela razão molar de Isotretinoína em relação à faselipídica ser de até 0,031:1.

18. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 17,caracterizada pela razão molar de Isotretinoína em relação à faselipídica ser preferencialmente de 0,026:1.

19. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pela fase lipídica compreender uma mistura defosfatidilcolina insaturada e colesterol.

20. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 19,caracterizada pela razão molar de colesterol em relação à faselipídica ser de 0,05:1 a 0,2:1.

21. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 20,caracterizada pela razão molar de colesterol em relação à faselipídica ser preferencialmente de 0,1:1 a 0,2:1.

22. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 19,caracterizada pela razão molar de Isotretinoína em relação à faselipídica ser de 0,026:1.

23. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pela fase lipídica compreender uma mistura defosfatidilcolina insaturada e fosfatidilserina.

24. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 23,caracterizada pela razão molar de fosfatidilserina em relação à faselipídica ser de 0,05:1 a 0,3:1.

25. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 24,caracterizada pela razão molar de fosfatidilserina em relação à faselipídica ser preferencialmente de 0,1:1.

26. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 23,caracterizada pela razão molar de Isotretinoína em relação à faselipídica ser de 0,026:1.

27. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 7,caracterizada pelos fosfolipídios serem escolhidos do grupo quecompreende fosfatidilcolina saturada, fosfatidilcolina insaturada,fosfatidilserina.

28. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pela fosfatidilcolina saturada ser de ocorrência naturalou sintética.

29. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 28,caracterizada pela fosfatidilcolina saturada compreender tambémfosfatidilcolina hidrogenada de ocorrência natural ou sintética.

30. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 28,caracterizada pela fosfatidilcolina saturada ser preferencialmentefosfatidilcolina saturada de soja.

31. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 30,caracterizada pela fosfatidilcolina saturada de soja apresentar purezamaior que 90%.

32. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pela fosfatidilcolina insaturada ser de ocorrêncianatural ou sintética.

33. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 32,caracterizada pela fosfatidilcolina insaturada ser preferencialmentefosfatidilcolina insaturada de soja.

34. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 33,caracterizada pela fosfatidilcolina insaturada de soja apresentarpureza maior que 90%.

35. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pela fosfatidilserina ser de ocorrência natural ousintética.

36. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 35,caracterizada pela fosfatidilserina ser preferencialmente de soja oude origem animal com pureza maior que 85%.

37. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelo colesterol apresentar pureza maior que 90%.

38. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 37,caracterizada pelo colesterol poder ser substituído totalmente ouparcialmente por derivados de colesterol selecionados de um grupoconstituído por colesterol hemisuccinato e colesterol etoxilado (PEG-colesterol).

39. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelo diácido graxo etoxilado apresentar dois ácidosgraxos, contendo insaturação, com distribuição média do tamanhodas cadeias hidrofóbicas centrada em 12 a 20 carbonos.

40. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 39,caracterizada pelo diácido graxo etoxilado apresentar distribuiçãomédia do tamanho das cadeias hidrofóbicas centradapreferencialmente em 18 carbonos.

41. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelo diácido graxo etoxilado apresentar os dois ácidosgraxos ligados entre si por uma cadeia de óxido de etileno comdistribuição centrada em 4 a 20 unidades de óxido de etileno.

42. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 41,caracterizada pelo diácido graxo etoxilado apresentar os dois ácidosgraxos ligados entre si preferencialmente por uma cadeia de óxido deetileno com distribuição centrada em 4 a 12 unidades de óxido deetileno.

43. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelo antioxidante ser escolhido do grupo quecompreende BHT, α-tocoferol, palmitato de ascorbila e mistura dosmesmos.

44. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 43,caracterizada pelo antioxidante ser o BHT na razão de 0,3 a 2% emmassa em relação à massa da fase lipídica.

45. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 44,caracterizada pelo antioxidante ser o BHT preferencialmente narazão de 0,4 a 1% em massa em relação à massa da fase lipídica.

46. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada por compreender adicionalmente pelo menos umingrediente selecionado do grupo que compreende antioxidanteshidrofílicos, crioprotetores, complexantes de metais, conservantes emistura dos mesmos.

47. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pela fase aquosa de hidratação da fase lipídica serselecionada do grupo que compreende solução aquosa, gel aquoso.

48. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 47,caracterizada pela solução aquosa ser selecionada do grupo quecompreende água destilada, água deionizada, solução aquosapreferencialmente tamponada em pH fisiológico da pele.

49. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 47,caracterizada pelo gel aquoso ser constituído por um agente degeleificação ou espessante selecionado do grupo que compreendederivados de celulose, polímeros de ácido poliacrílico, biopolímeros ecombinação dos mesmos.

50. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelo veículo farmaceuticamente não desestruturar oslipossomas.

51. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 50,caracterizada pelo veículo farmaceuticamente aceitável ser umasolução aquosa.

52. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 50,caracterizada pelo veículo farmaceuticamente aceitável ser um gelaquoso.

53. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 50,caracterizada pelo veículo farmaceuticamente aceitável ser a própriafase aquosa utilizada na hidratação da fase lipídica lipossomal.

54. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada pelos lipossomas serem homogêneos ou heterogêneosem relação ao diâmetro e/ou número de bicamadas e mistura dosmesmos.

55. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 54,caracterizada pelos lipossomas apresentarem preferencialmentediâmetros médios menores que 1000 nm.

56. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 55,caracterizada pelo diâmetro médio estar compreendido na faixa quevai de 50 nm a 400 nm.

57. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2,caracterizada por não necessitar de prévia separação daIsotretinoína livre daquela encapsulada nos Iipossomas paraincorporação em veículo farmaceuticamente aceitável.

58. Processo para produção de composição farmacêutica descrita nasreivindicações de 01 a 57, caracterizado por compreender as etapas de:a) dissolução dos constituintes lipofílicos como lipídios, surfatante,antioxidante lipofílico e Isotretinoína em solvente orgânico;b) formação de uma mistura seca dos constituintes da etapa a) apósevaporação do solvente;c) adição de uma fase aquosa para hidratação na mistura secaformada na etapa b);d) agitação do sistema formado na etapa c);e) incorporação o sistema obtido na etapa d) a um veículofarmaceuticamente aceitável.

59. Processo, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelamistura seca corresponder a um filme.

60. Processo, de acordo com a reivindicação 59, caracterizado pelo filmeser obtido utilizando qualquer meio de evaporação de solventedescrito no estado da técnica como a evaporação rotativa,evaporação através circulação de gás.

61. Processo, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelamistura seca corresponder a um pó.

62. Processo, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo póser obtido utilizando um equipamento selecionado de um grupoconstituído de spray dryer, liofilizador.

63. Processo, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelaadição da mistura seca na fase aquosa, na etapa c).

64. Processo, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelosistema de agitação da etapa d) compreender qualquer meio deagitação descrito no estado da técnica como a agitação porultrassom, em equipamento de rota-evaporação ou semelhante, poragitadores magnéticos, por agitadores mecânicos, porhomogeneizadores tipo turrrax, por agitadores tipo vórtex, emequipamentos que utilizam força de cisalhamento, em equipamentosque utilizam homogeneização com alta pressão, bem como acombinação dos mesmos.

65. Processo, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado porcompreender adicionalmente uma etapa de processamento dosIipossomas após etapa d), para seleção ou diminuição do diâmetro eredução da polidispersidade e/ou do número de bicamadaslipossomais, através de equipamentos selecionados de um grupoconstituído por extrusoras, homogeneizadores de alta pressão,microfluidizadores, ultrassom bem como a combinação dos mesmos.

66. Processo, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado porcompreender adicionalmente uma etapa de liofilização dosIipossomas dispersos em solução aquosa após etapa d).

67. Processo, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelosIipossomas Iiofilizados serem re-hidratados com adição de uma faseaquosa.

68. Processo, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelaincorporação dos Iipossomas a um veículo farmaceuticamenteaceitável da etapa e) utilizando um sistema de agitação mecânica ousimilar.

69. Processo, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado peladispersão dos Iipossomas em solução aquosa poder ser diluída emgel aquoso.