BRPI0713807A2 - medicamentos - Google Patents

Abstract

MEDICAMENTOS. A presente invenção refere-se ao uso de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz deste, que é fornecido na preparação de um medicamento para uso na prevenção, redução ou inibição de cicatrizes. Também, é fornecido o uso de WNT5A, ou fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz deste, na preparação de um medicamento para uso na prevenção e/ou tratamento de um distúrbio fibrótico. Outros aspectos refere-sem aos métodos pelos quais a cicatriz pode ser prevenida, redução ou inibida, e pelos quais os distúrbios fibróticos podem ser prevenidos e /ou tratados. Quantidades terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados, que podem ser usados nos medicamentos ou métodos da invenção também são fornecidos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MEDICA- MENTOS".

A presente invenção refere-se a medicamentos para a preven- ção, redução ou inibição de cicatrizes. A invenção também refere-se a medi- camentos para a prevenção e/ou tratamento de distúrbios fibróticos. Além disso, a invenção fornece métodos para a prevenção, redução ou inibição da cicatrizes, bem como métodos para a prevenção e/ou tratamento de distúr- bios fibróticos.

A resposta ao ferimento é comum em todos os mamíferos adul- tos. A resposta é conservada entre a maioria dos tipos de tecidos e, em cada caso, conduz ao mesmo resultado, formação de uma cicatriz. Muitos proces- sos diferentes estão em operação durante a resposta de cura, e muita pes- quisa foi conduzida em descobrir o que media estes processos, e como eles interagem uns com os outros para produzir o resultado final.

A resposta de cicatrização ocorre como a solução evolutiva para o imperativo biológico para prevenir a morte de um animal ferido. Assim, pa- ra superar o risco de mortalidade devido a infecção ou hemorragia, o corpo reage rapidamente para reparar a área danificada, ao invés da tentativa de regenerar o tecido danificado.

Uma cicatriz pode ser definida como a estrutura produzida como um resultado da resposta reparadora. Visto que a lesão não é regenerada para atingir a mesma arquitetura de tecido presente antes do ferimento, uma cicatriz pode ser identificada em virtude da sua morfologia anormal em com- paração com tecido não ferido. As cicatrizes são compostas de tecido con- juntivo depositado durante o processo de cura. Uma cicatriz pode compre- ender tecido conjuntivo que tem uma organização anormal (como visto nas cicatrizes da pele) e/ou de tecido conjuntivo que está presente em uma quantidade anormalmente aumentada (como visto em cicatrizes do sistema nervoso central). A maioria das cicatrizes consiste em tecido conjuntivo tanto anormalmente organizado quanto em excesso.

A estrutura anormal das cicatrizes pode ser observada com refe- rência tanto a sua estrutura interna (que pode ser determinada por meio da análise microscópica) quanto a sua aparência externa (que pode ser avalia- da macroscopicamente).

As moléculas da matriz extracelular (ECM) compreendem o componente estrutural principal da pela tanto não ferida quanto marcada com cicatriz. Na pele não ferida estas moléculas formam fibras que possuem uma disposição aleatória característica que é normalmente referida como uma "tecelagem de cesta". Em geral, as fibras observadas dentro da pele não ferida são de diâmetro maior do que aquelas observadas nas cicatrizes. As fibras nas cicatrizes também apresentam um grau marcante de alinha- mento umas com as outras, quando comparadas com a disposição aleatória de fibras na pele não ferida. Tanto o tamanho quanto a disposição da ECM podem contribuir com as propriedades mecânicas alteradas das cicatrizes, mais notavelmente a rigidez aumentada, quando comparadas com a pele não ferida normal.

Vistas macroscopicamente, as cicatrizes podem ser empurradas para baixo da superfície do tecido circundante, ou elevadas acima da super- fície da pele intacta. As cicatrizes podem ser relativamente de cor mais escu- ra do que o tecido não ferido (hiperpigmentação), ou podem ter uma cor mais clara (hipopigmentação) que os seus arredores. As cicatrizes hiperpig- mentada ou hipopigmentadas constituem um defeito cosmético facilmente perceptível. Igualmente, as cicatrizes podem ser mais vermelhas do que a pele circundante, levando-as a serem notadas e cosmeticamente inaceitá- veis. Foi demonstrado que a aparência cosmética de uma cicatriz é um dos principais fatores que contribuem para o impacto psicológico das feridas e cicatrizes sobre o sofredor, e que esses efeitos podem permanecer muito tempo depois que o ferimento em si tenha cicatrizado.

As cicatrizes físicas também podem ter efeitos deletérios sobre o sofredor. Estes efeitos tipicamente surgem como um resultado das diferen- ças mecânicas entre as cicatrizes e pele não ferida. A estrutura e a compo- sição anormais das cicatrizes significam que elas são tipicamente menos flexível do que a pele normal. Como um resultado as cicatrizes podem ser responsáveis pelo comprometimento da função normal (tal como no caso das cicatrizes que abrangem as ligações que podem restringir a possível faixa de movimentos) e podem retardar o crescimento normal se presentes a partir de uma idade precoce.

A cicatrização pode também ocorrer em muitos outros locais do corpo, e os efeitos da cicatrização nesses locais também podem ser nocivos para o sofredor. Por exemplo, a cicatriz no olho (quer como resultado de le- sões acidentais ou intervenção cirúrgica) pode prejudicar a visão e até mes- mo levar à cegueira. A cicatrização dos órgãos internos pode levar à forma- ção de estreitamentos e aderências que prejudicam significativa ou totalmen- te a função do órgão em questão. A cicatrização dos tendões e Iigamentos pode causar danos duradouros para estes órgãos, e desse modo reduzir a motilidade ou função das articulações associadas. A cicatrização associada com vasos sangüíneos e, particularmente as válvulas do coração, pode o- correr após lesão ou cirurgia. A cicatrização pode levar a restenose, o que provoca um estreitamento dos vasos sangüíneos e, assim, reduz o fluxo de sangue através da área cicatrizada. A cicatrização do sistema nervoso cen- tral ou periférico pode impedir a transmissão ao longo do nervo e pode im- pedir ou reduzir a reconexão do tecido nervoso danificado.

Os efeitos acima descritos podem totalmente surgir como um resultado da progressão normal da resposta de cura da ferida. Existem, no entanto, muitas maneiras em que esta resposta pode ser anormalmente alte- rada; e estas são freqüentemente associadas com resultados ainda mais prejudiciais.

Uma maneira em que a resposta de cura pode ser alterada é através da produção de cicatrizes excessivas anormais. As cicatrizes hiper- tróficas representam uma forma grave de cicatrização, e possuem efeitos adversos marcantes sobre o sofredor. As cicatrizes hipertróficas são eleva- das acima da superfície normal da pele e contêm colágeno excessivo dis- posto em um padrão anormal. Como resultado tais cicatrizes são muitas ve- zes associadas com uma perda acentuada da função mecânica normal. Isto pode ser exacerbado pela tendência de cicatrizes hipertróficas de submeter- se a contração após a sua formação, uma atividade normalmente atribuída à sua expressão anormal de proteínas relacionadas com o músculo (particu- larmente actina do músculo liso). As crianças sofrem de uma probabilidade aumentada de formação de cicatriz hipertrófica, particularmente como um resultado de lesões por queimadura.

Quelóides são uma outra forma comum de cicatrização patológi- ca. As cicatrizes quelóides não são apenas elevadas acima da superfície da pele, mas também se estendem para além das fronteiras da lesão inicial. Os quelóides contêm excesso de tecido conjuntivo que é organizado de uma forma anormal, normalmente manifestada como verticilos de tecido coláge- no. As causas da formação de quelóide estão abertas a conjectura, mas é geralmente reconhecido que alguns indivíduos possuem uma predisposição genética para a sua formação. Tanto as cicatrizes hipertróficas quanto os quelóides são particularmente comuns nas raças afro-caribenhos e mongo- lóides.

Uma outra forma comum de cicatrização patológica é o pterígio em que um desenvolvimento fibrótico em forma de cunha do tecido subcon- juntival pode crescer até à fronteira da córnea ou mais adiante. O pterígio é mais freqüente entre aqueles freqüentemente expostos às condições fortes de luz solar ou empoeiradas.

Embora a cicatrização possa ser definida como a produção da estrutura que permanece na cura de uma ferida, distúrbios similares da ma- triz extracelular também estão associados com várias condições médicas conhecidas como distúrbios fibróticos. Nestes distúrbios a fibrose excessiva leva ao desarranjo patológico e mau funcionamento do tecido. Os distúrbios fibróticos são caracterizados pelo acúmulo de tecido fibroso (predominante- mente colágenos, como encontrado em cicatrizes) em uma forma anormal dentro do tecido danificado. O acúmulo de tais tecidos fibrosos pode resultar de uma variedade de processos doentios, os quais levam a um mesmo re- sultado final.

Os distúrbios fibróticos são geralmente crônicos. Exemplos de distúrbios fibróticos incluem cirrose do fígado, fibrose hepática, glomerulone- frite, fibrose pulmonar, doença pulmonar obstrutiva crônica, esclerodermia, fibrose miocárdica, fibrose após infarto do miocárdio, fibrose do sistema ner- voso central seguinte a um acidente vascular cerebral, distúrbios neuro- degenerativos (por exemplo, a doença de Alzheimer, esclerose múltipla), vitreorretinopatia proliferativa (PVR), artrite, aderências, por exemplo, no tra- to digestivo, abdome, pelve, coluna vertebral.

Se não forem tratados, os efeitos patológicos dos distúrbios fi- bróticos podem levar à falência orgânica e, finalmente, à morte.

As pessoas versadas observarão que muitos dos mecanismos subjacentes à resposta fibrótica observados nos distúrbios fibróticos são par- tilhados com a resposta de cura de feridas que leva a formação de cicatri- zes. Pode ser esperado que os métodos e medicamentos que podem ser utilizados para evitar ou reduzir a fibrose em uma condição também podem ser de utilidade na outra.

Embora grande parte do presente relatório descritivo se concen- tra principalmente sobre os efeitos da cicatrização de feridas ou distúrbios fibróticos no homem, será observado que muitos aspectos da cicatrização de feridas e da resposta são conservados entre a maioria das espécies de ani- mais. Assim, os problemas delineados acima também são aplicáveis em a- nimais não humanos, e particularmente animais veterinários ou domésticos (por exemplo, cavalos, bovinos, cães, gatos, etc.). Por meio de exemplo, é bem conhecido que as aderências resultantes da cicatrização inadequada de feridas abdominais constituem um importante motivo para a destruição vete- rinária de cavalos (particularmente cavalos de corrida). Do mesmo modo, os tendões e Iigamentos de animais domésticos ou veterinários também são freqüentemente sujeitos a lesões, e a cura destas lesões também pode levar à cicatrização associada com o aumento da mortalidade dos animais.

Embora os efeitos nocivos da cicatrização de ferida normal e aberrante e de distúrbios fibróticos sejam bem-conhecidos, permanece uma falta de terapias eficazes capazes de reduzir os seus efeitos. À luz desta ausência, deve ser reconhecido que existe uma necessidade fortemente sentida em fornecer tratamentos e medicamentos que sejam capazes de prevenir, reduzir ou inibir a formação de cicatrizes, e de prevenir e/ou tratar distúrbios fibróticos.

A família de genes WNT (família do local de integração MMTV tipo alada) codifica várias proteínas que funcionam como moléculas de sina- lização da célula pleiotrópica. Estas proteínas, designadas WNTs, comparti- Iham uma série de resíduos conservados, incluindo um padrão característico de cisteína. Estes são os aspectos estruturais, em vez da função comparti- lhada, que definem as proteínas WNT, uma vez que os efeitos de vários membros da família WNT podem diferir significativamente dependendo da resposta das células.

Acredita-se de uma forma geral que as moléculas Frizzled (Fz) constituem o principal grupo de receptores para os membros da família WNT. Os receptores Frizzled compreendem sete partes de abrangência da membrana, assim como uma longa região amino terminal designada o do- mínio rico em cisteína (CRD). O CDR parece constituir a parte de ligação a WNT dos receptores Fz. A sinalização de WNT eficaz exige não apenas a presença de WNT e um receptor de Fz, mas também a presença de uma proteína da classe de LRP (proteína relacionada com o receptor de LDL).

A WNT5A é um membro da família WNT de moléculas de sinali- zação. A WNT5A Humana é um polipeptídeo de 381 aminoácidos, a se- quência dos quais é mostrada na Seqüência ID No. 1. As formas humanas e de murinos da WNT5A compartilham 97 % da identidade de aminoácido. A seqüência do gene que codifica a WNT5A humana (também designada WNT5A) é exposta na seqüência ID No. 2.

É um objetivo de certos aspectos da presente invenção fornecer medicamentos adequados para a prevenção e/ou a redução e/ou inibição de cicatrizes. É um objetivo de outros aspectos da presente invenção fornecer métodos de tratamento adequados para utilização na prevenção e/ou redu- ção, e/ou inibição de cicatrizes. É um objetivo de certas modalidades da in- venção fornecer medicamentos adequados para a prevenção e/ou tratamen- to de distúrbios fibróticos. É um objetivo de outras modalidades da invenção fornecer métodos de tratamento adequados para uso na prevenção e/ou tra- tamento de distúrbios fibróticos. Os medicamentos e/ou métodos da inven- ção podem constituir alternativas àquelas fornecidas pela técnica anterior, porém, é preferível que os medicamentos e/ou métodos de tratamento for- necidos pela invenção possam constituir melhorias sobre a técnica anterior.

De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção é for- necido o uso de WNT5A, ou um fragmento terapeuticamente eficaz ou deri- vado, na preparação de um medicamento para uso na prevenção, redução ou inibição de cicatrizes.

Em um segundo aspecto da invenção é fornecido um método de prevenção, redução ou inibição da cicatrizes, o método compreendendo ad- ministrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um frag- mento terapeuticamente eficaz ou seu derivado, a um paciente com neces- sidade de tal prevenção, a redução ou inibição.

A presente invenção se baseia na nova e surpreendente desco- berta dos inventores de que a WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes, podem ser utilizados na prevenção, redução ou inibição de cicatrizes. Esta prevenção, redução ou inibição de cicatrizes po- de ser efetuada em qualquer local do corpo e em qualquer tecido ou órgão.

As descobertas dos inventores são particularmente surpreen- dentes à luz dos relatórios da técnica anterior que sugerem que a indução da expressão de WNT5A pela infecção utilizando retrovírus geneticamente pla- nejado não tem qualquer efeito sobre a cicatrização, uma vez que não afeta a quantidade ou a orientação das moléculas matrizes extracelulares deposi- tadas na derme durante a cura de feridas. Em vez disso, os relatórios anteri- ores sugeriram que a expressão de WNT5A apenas influencia a epiderme e apêndices epidérmicos. A pesquisa anterior revelou que a estrutura da epi- derme significativamente não influencia o aparecimento de cicatrizes como avaliadas clinicamente (Beausang et al., 1998).

A WNT5A, ou seu fragmento ou derivado terapeuticamente efi- caz, pode ser preferivelmente administrada em uma ferida do paciente que de outra maneira seria provável de dar origem a uma cicatriz.

Exemplos de contextos específicos em que a prevenção, redu- ção ou inibição de cicatrizes que pode ser alcançada usando os medicamen- tos e métodos da invenção podem ser de benefício incluem, mas não são limitados a aqueles selecionados do grupo que consiste em: uso na pele; utilização no olho (incluindo a prevenção, redução ou inibição de cicatrizes resultantes da cirurgia ocular tal como a cirurgia LASIK ou PRK); utilização nos vasos sangüíneos, utilização no sistema nervoso periférico ou central (onde prevenção, redução ou inibição da cicatriz pode melhorar reconexão neuronal); utilização em tendões, Iigamentos ou músculos; uso na cavidade oral, incluindo os lábios e palato (tal como na prevenção, redução ou inibição de cicatrizes resultantes do tratamento de fenda Iabial ou palatina); utilização nos órgãos internos tais como o fígado, coração, cérebro, tecidos digestivos e tecidos reprodutivos; e utilização nas cavidades corporais, tais como a ca- vidade abdominal, cavidade pélvica e cavidade torácica (onde a prevenção, redução ou inibição de cicatrizes pode reduzir o número de casos de forma- ção de aderência e/ou do tamanho das aderências formadas). Os medica- mentos e métodos da invenção podem ser usados para prevenir, reduzir ou inibir as aderências, tais como aquelas que ocorrem no abdômen, pelve e coluna vertebral. É particularmente preferível que os medicamentos e méto- dos da invenção sejam usados para prevenir, reduzir ou inibir a cicatrização da pele (cicatrização dérmica).

A WNT5A, ou seus fragmentos ou seus derivados terapeutica- mente eficazes, também podem ser utilizados na prevenção e/ou tratamento de distúrbios fibróticas. Assim, de acordo com um terceiro aspecto da pre- sente invenção, é fornecido o uso de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz deste, na preparação de um medicamento para uso na prevenção e/ou tratamento de um distúrbio fibrótico.

Em um quarto aspecto da invenção é fornecido um método de prevenção e/ou tratamento de um distúrbio fibrótico, o método compreen- dendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta, a um paciente com necessidade de tal prevenção e/ou tratamento.

Os distúrbios fibróticos preferidos que podem ser prevenidos e/ou tratados com medicamentos ou métodos da invenção podem ser sele- cionados a partir do grupo constituído de: fibrose da pele; esclerodermia; fibrose sistêmica progressiva; fibrose pulmonar; fibrose muscular; fibrose renal; glomerulosclerose; glomerulonefrite; fibrose uterina; fibrose renal; cir- rose do fígado; fibrose hepática; doença pulmonar obstrutiva crônica; fibrose após infarto do miocárdio; fibrose do sistema nervoso central, tal como a fi- brose após acidente vascular cerebral; fibrose associada com os distúrbios neuro-degenerativos tais como a doença de Alzheimer ou a esclerose múlti- pla, fibrose associada com vitreorretinopatia proliferativa (PVR); restenose; endometriose, doença isquêmica e fibrose por radiação. Exceto onde o contexto exigir de outra forma, referências aos

"medicamentos da invenção" devem ser tomadas como referência aos medi- camentos preparados de acordo com o primeiro, terceiro, quinto, sexto e sétimo aspectos da invenção. Os medicamentos da invenção compreendem um excipiente, diluente ou portador farmaceuticamente aceitável além da WNT5A, fragmento ou derivado. Os medicamentos da invenção podem estar preferivelmente na forma de uma solução injetável compreendendo WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta. Soluções ade- quadas para injeção localizada (tal como a injeção intradérmica) constituem formas particularmente preferidas dos medicamentos da invenção. Para os propósitos da presente invenção, um "fragmento ou de-

rivado terapeuticamente eficaz" de WNT5A é considerado ser qualquer fragmento ou derivado do WNT5A que seja capaz de:

i) prevenir, reduzir ou inibir a formação de cicatrizes; e/ou

ii) prevenir e/ou tratar um distúrbio fibrótico.

Preferivelmente um fragmento ou derivado terapeuticamente

eficaz de WNT5A pode ser aquele que é capaz de prevenir, reduzir ou inibir a formação de cicatrizes que ocorrem em uma ferida na qual o fragmento ou derivado do WNT5A é adicionado; ou capaz de impedir o desenvolvimento de um distúrbio fibrótico em um local onde o fragmento ou derivado é adicio- nado; ou capazes de tratar um distúrbio fibrótico em um local ao qual o fragmento ou derivado é adicionado.

As proteínas WNT são geralmente submetidas a palmitoíla em um resíduo de cisteína. Estudos em que a palmitoilação das WNTs tem sido separada pela acil proteína tioesterase indicam que a presença de palmitato é essencial para que as WNTs exerçam sua atividade biológica.

Os inventores acreditam que a WNT5A é submetida a palmitoíla no resíduo de cisteína localizado na posição 105 na seqüência de aminoáci- dos mostrada na Seqüência ID No. 1. Consequentemente, a pessoa versada observará que é preferível que os fragmentos de WNT5A para utilização de acordo com a invenção devam ser fragmentos compreendendo o resíduo de cisteína localizado na posição 105 da Seqüência ID No. 1 (a pessoa versada facilmente observará que a posição numerada deste resíduo de cisteína dentro de um determinado fragmento pode mudar dependendo do compri- mento do fragmento em questão). Os fragmentos preferidos de WNT5A po- dem ser fragmentos submetidos a palmitoíla, e particularmente aquelas submetidos a palmitoíla na cisteína 105.

Os fragmentos terapeuticamente eficazes de WNT5A adequados para utilização em conformidade com a presente invenção podem compre- ender até 10 resíduos de aminoácido contíguos da Seqüência ID No. 1, pre- ferivelmente até 100 resíduos de aminoácido contíguos, mais preferivelmen- te até 200 resíduos de aminoácido contíguos, e ainda mais preferivelmente até 300 resíduos de aminoácido contíguos. Os fragmentos adequados para uso nos medicamentos e métodos da presente invenção incluem aqueles compreendendo até 380 resíduos de aminoácido da Seqüência ID No. 1. Os fragmentos preferidos compreenderão pelo menos 10 resíduos de aminoáci- do contíguos da Seqüência ID No. 1.

Os fragmentos preferidos podem incluir resíduos de aminoácido envolvidos na ligação da WNT5A aos seus receptores celulares. Relatos anteriores indicam que a WNT5A é capaz de sinalizar através vários recep- tores, ou complexos de receptor. Por exemplo, foi sugerido que a Fz5 atua como um receptor de WNT5A, e também que a WNT5A é capaz de induzir a sinalização através de um complexo Fz4/LRP5, ou um receptor da tirosina cinase órfão, Ror2 (He, et al. 1997; e Mikels and Nusse 2006).

Será observado que é a estrutura tridimensional da WNT5A que é importante em consideração à ligação do receptor, e que consequente- mente os fragmentos adequados podem ser selecionados com base em sua capacidade de assumir o requisito necessário de conformação tridimensional para a ligação do receptor.

Embora os peptídeos compreendendo toda ou parte da WNT5A

(como definido pela seqüência ID No. 1) representem os agentes preferidos para uso de acordo com a presente invenção, será reconhecido que existem contextos em que a sensibilidade dos peptídeos para degradação pode ser desvantajosa. Existem muitas técnicas conhecidas pelas quais os derivados de peptídeo podem ser produzidos os quais possuem maior resistência à degradação do que os peptídeos originais dos quais são derivados.

Os derivados peptóides podem ser esperados de terem maior resistência à degradação do que os agentes de peptídeo da invenção, en- quanto retêm a mesma capacidade de inibir a cicatrização e/ou impedir os distúrbios fibróticos. Os derivados de peptóide adequados podem ser facil- mente designados a partir do conhecimento da seqüência e estrutura de WNT5A. Software comercialmente disponível pode ser utilizado para desen- volver os derivados de peptóide adequados de acordo com protocolos bem estabelecidos. Será observado que a eficácia terapêutica de peptóide e ou- tros derivados pode ser investigada usando as mesmas técnicas que permi- tem a avaliação da eficácia terapêutica dos fragmentos de peptídeo.

Os retropeptóides baseados em WNT5A ou seus fragmentos terapeuticamente eficazes (mas em que todos os aminoácidos são substituí- dos por resíduos de peptóide em ordem invertida) também são capazes de inibir a cicatrização e/ou prevenir os distúrbios fibróticos. Um retropeptóide pode ser esperado de se ligar na direção oposta na estria de ligação ao li- gando, em comparação com um peptídeo ou peptóide-peptídeo híbrido que contém um resíduo de peptóide. Como um resultado, as cadeias laterais dos resíduos de peptóide são capazes de apontar na mesma direção como as cadeias laterais no peptídeo original.

As formas de D-aminoácido da WNT5A ou seus fragmentos te- rapeuticamente eficaz também conferem a capacidade necessária de inibir a cicatrização e/ou evitar distúrbios fibróticos. No caso de formas de D- aminoácido, a ordem dos resíduos de aminoácido compreendendo o deriva- tivo é invertida em comparação com aquela do peptídeo original. A prepara- ção de derivados usando D-aminoácidos, em vez de L-aminoácidos gran- demente diminui qualquer repartição indesejada de um tal agente por pro- cessos metabólicos normais, diminuindo as quantidades de agente que ne- cessitam ser administrados, juntamente com a freqüência da sua administra- ção.

Será observado que os derivados adequados para uso nos me- dicamentos e métodos da invenção claramente incluem tanto aqueles deri- vados do comprimento total da WNT5A quanto aqueles derivados de frag- mentos terapeuticamente eficazes de WNT5A.

Como mencionado acima, a WNT5A humana (tal como definida na Seqüência ID No. 1) representa uma WNT5A preferida que podem ser utilizada nos medicamentos ou métodos da invenção. Os fragmentos ou de- rivados terapeuticamente eficazes de WNT5A humana representam os fragmentos ou derivados preferidos para uso de acordo com a invenção. A WNT5A, ou um fragmento ou derivados terapeuticamente eficazes desta, para uso nos medicamentos ou métodos da invenção pode ser fabricada de qualquer maneira conhecida ao artífice versado. Em particular, pode ser pre- ferível que a WNT5A recombinante, ou seus fragmentos ou derivados tera- peuticamente eficazes, tais como WNT5A humana recombinante, ou um fragmento ou derivados terapeuticamente eficaz desta, possam ser utiliza- dos em medicamentos ou métodos da invenção. As proteínas humanas re- combinantes podem vantajosamente ser produzidas em células hospedeiras procarióticas. Tal produção possui a vantagem de que grandes quantidades da proteína podem ser produzidas, em que a proteína pode ser facilmente purificada, e que a proteína pode ser produzida em condições que reduzem o risco de contaminação com agentes potencialmente deletérios que podem proibir a utilização terapêutica da proteína (tal contaminação sendo um pro- blema notável com proteínas produzidas a partir de células eucarióticas ou culturas de células). Para os propósitos da presente invenção uma "quantidade tera- peuticamente eficaz" de WNT5A, ou um fragmento ou derivados desta, é considerada ser uma quantidade de WNT5A, ou um fragmento ou derivados desta, que é capaz de efetuar o solicitado:

i) prevenção, redução ou inibição de cicatrizes; ou

ii) prevenção e/ou tratamento de um distúrbio fibrótico.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A (ou um fragmento ou derivados desta) pode ser uma quantidade que é eficaz para reduzir a cicatriz de uma ferida tratada em pelo menos 10 % em comparação com cicatriz produzida na cicatrização de uma ferida não tratada compará- vel. Preferivelmente uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser ca- paz de atingir pelo menos uma redução de 20 % na cicatrização, mais prefe- rivelmente pelo menos 50 %, ainda mais preferivelmente pelo menos 75 % e o mais preferível pelo menos uma redução de 90 % na cicatriz comparado com a cicatriz produzida na cicatrização de uma ferida não tratada.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivados desta, pode preferivelmente ser uma quantidade capaz de terapeuticamente alterar a abundância e/ou orientação dos com- ponentes de ECM (tal como o colágeno) em uma cicatriz tratada.

Um medicamento da invenção deve fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta. Preferivelmente um medicamento da invenção pode ser fornecido na forma de uma unidade de dose, a unidade de dose compreendendo uma quantida- de terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta.

A pessoa versada observará que um fragmento ou derivado de WNT5A que possui pouca atividade terapêutica inerente ainda será terapeu- ticamente eficaz se administrado em uma quantidade que forneça uma quantidade terapeuticamente eficaz.

Os inventores têm surpreendentemente observado que quando administrado em uma quantidade muito grande de WNT5A, ou seus frag- mentos ou derivados terapeuticamente eficazes, serve para agravar a cica- triz. Será observado que uma quantidade de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta, que não melhora as cicatrizes, ou serve para piorar as cicatrizes, não constituirá uma quantidade terapeutica- mente eficaz para os propósitos da presente invenção.

Em geral, uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A (ou um fragmento ou derivado desta) a ser aplicada a uma ferida, cicatriz, ou um local de um distúrbio fibrótico de modo a prevenir, reduzir ou inibir as cicatrizes pode ser determinada por um médico com referência aos fatores incluindo o tamanho de uma ferida, quantidade de fibrose, e a presença ou ausência de fatores que contribuem com a cicatriz pronunciada ou patológi- ca. Tais fatores são considerados em mais detalhes no resto do relatório descritivo.

Os parágrafos seguintes fornecem orientações adicionais quanto à seleção de uma quantidade terapeuticamente eficaz adequada de WNT5A, ou um fragmento ou derivados desta, para uso nos medicamentos ou méto- dos da invenção.

Geralmente, pode ser preferível que um centímetro de ferida, ou cm2 de ferida ou distúrbio fibrótico, receberá uma quantidade de WNT5A (ou um fragmento ou derivados desta) menor do que 2000 ng (ou aproximada- mente 44 picomols) por 24 horas durante um "curso" de tratamento (um cur- so de tratamento compreendendo uma ou mais administrações da WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta, por um medicamento ou método da in- venção) para prevenir, reduzir ou inibir as cicatrizez.

Dentro de um curso de tratamento para prevenir, reduzir ou inibir as cicatrizes, a WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta, pode ser forne- cida em uma ou mais administrações per 24 horas. Assim, no caso em que uma única administração deve ser utilizada, uma quantidade terapeutica- mente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta, a ser adminis- trada em um centímetro da ferida (ou cm2 de ferimento ou fibrose) deve ser menor do que 2000 ng (ou aproximadamente 44 picomols) por administra- ção. No caso em que múltiplas administrações devem ser utilizadas, a quan- tidade total de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta, a ser adminis- trada em um centímetro da ferida (ou cm2 de ferimento ou fibrose) durante o período total de 24 horas deve ser menor do que 2000 ng (ou aproximada- mente 44 picomols).

Será observado que, em alguns casos, um curso de tratamento não pode durar mais do que 24 horas (por exemplo, no caso de um doente ter alta do hospital ou outra supervisão médica dentro um período de 24 ho- ras), e em tais casos, a quantidade terapêutica total de WNT5A (ou um fragmento ou derivado desta) administrada por centímetro de ferida, ou cm2 de ferida ou fibrose, pode ser inferior a 2000 ng (ou aproximadamente 44 picomols).

Em outros casos, por exemplo, no caso de ferimento ou cicatri- zes extensas, ou cicatrizes ou distúrbios fibróticos que demonstram uma re- sistência ao tratamento, pode ser preferível que um curso de tratamento se estenda por um período prolongado de tempo, e que a quantidade total de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta, administrada a um dado cen- tímetro de ferida (ou cm2 de ferimento ou fibrose), durante um ciclo de trata- mento pode ser consideravelmente maior do que 2000 ng (na verdade, a quantidade total administrada pode ser muitas vezes maior). No entanto, de modo a alcançar uma prevenção, redução ou inibição eficaz da cicatriz, pode ser preferível que a quantidade total de WNT5A, ou um fragmento ou deriva- do desta, a ser administrada em um centímetro da ferida, ou cm2 de ferida ou fibrose, por 24 horas deste tratamento prolongado deva ser inferior a 2000 ng (ou aproximadamente 44 picomols).

A título de exemplo adicional, os inventores têm estabelecido que uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta, deve ser inferior a 44 picomols (pmoles) por centímetro linear (ou cm2) de uma ferida cuja cicatriz se pretende inibir, ou por cm2 de um distúrbio fibrótico que se pretende tratar (se administrada em uma única incidência, ou em várias incidências durante um período de 24 horas). Em contrapartida, o fornecimento de uma quantidade de WNT5A até cerca de 33 pmoles por cm linear (ou cm2) de uma ferida ou distúrbio fibrótico constituirá uma quantidade terapeuticamente eficaz.

Por meio de outra ilustração, a provisão entre 1 ng e 1500 ng de WNT5A por centímetro linear de ferida, ou cm2 de uma ferida ou distúrbio fibrótico, durante um período de 24 horas, irá constituir uma quantidade te- rapeuticamente eficaz preferida. Uma tal quantidade terapeuticamente eficaz pode preferivelmente ser fornecida por dois ou mais casos de tratamento dentro do período de 24 horas.

Os inventores têm observado que, uma quantidade terapeutica- mente eficaz de WNT5A deve ser menor do que 2000 ng por cm linear de ferida, ou cm2 de uma ferida ou distúrbio fibrótico, durante um período de 24 horas, e pode preferivelmente ser inferior a 1600 ng.

Geralmente, uma quantidade terapêutica de WNT5A a ser admi- nistrada por cm linear da ferida, ou cm2 de uma ferida ou distúrbio fibrótico, durante um período de 24 horas deve compreender mais do que 0,2 ng.

As quantidades terapeuticamente eficazes preferidas de WNT5A, seus fragmentos ou derivados, podem ser investigadas usando modelos in vitro e in vivo, e avaliações adequadas da eficácia produzida com referência aos vários parâmetros para a medição da cicatriz, como descrito no resto do relatório descritivo.

A invenção provê a utilização de WNT5A, ou um fragmento ou derivados desta, na preparação de um medicamento para administração em uma quantidade para fornecer por cm2 da área administrada um nível de ati- vidade de WNT5A equivalente àquela oferecida em até 2000 ng de WNT5A, para prevenir, reduzir ou inibir cicatrizes.

A invenção também provê a utilização de WNT5A, um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta, na preparação de um medica- mento para administração entre 0,01 e 35 picomols de WNT5A, ou o seu fragmento ou derivado, por cm linear ou cm2 de uma ferida. Um tal medica- mento pode prevenir, reduzir ou inibir as cicatrizes. Um medicamento de a- cordo com este aspecto da invenção pode preferivelmente fornecer entre 0,02 picomols e 35 picomols, por exemplo, 0,04 picomols, 0,44 picomols, 4,4 picomols, 22 picomols ou 33 picomols da WNT5A, fragmento ou derivado.

Em um outro aspecto a invenção fornece a utilização de WNT5A, um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta, na prepa- ração de um medicamento para administração entre 0,01 e 35 picomols de WNT5A, ou o seu fragmento ou derivado, por cm2 de fibrose associada com um distúrbio fibrótico. Um tal medicamento pode prevenir e/ou tratar o dis- túrbio fibrótico. Um medicamento de acordo com este aspecto da invenção pode preferivelmente fornecer entre 0,02 picomols e 35 picomols, por exem- plo, 0,04 picomols, 0,44 picomols, 4,4 picomols, 22 picomols ou 33 picomols da WNT5A, fragmento ou derivado.

Em mais um outro aspecto, a invenção fornece o uso de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta, na preparação de um medicamento para a prevenção, redução ou inibição de cicatrizes, em que o padrão de administração para administrar o medica- mento compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta, antes da formação de uma ferida, e s administração de uma outra quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta, após a formação da ferida.

A administração da outra quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivados desta, pode preferencialmente ocor- rer aproximadamente 24 horas após a formação da ferida.

Será observado que as expressões "por 24 horas" ou "em um período de 24 horas", como utilizado no presente pedido são destinadas a fornecer orientações quanto à quantidade de WNT5A, ou um fragmento ou derivados desta, que possa ser administrada a um determinado local durante um período de tratamento, enquanto continua a proporcionar um efeito tera- pêutico. Os inventores acreditam que as quantidades especificadas nestas expressões podem geralmente ser fornecidas durante dois dias consecutivos de tratamento, enquanto continua a fornecer uma quantidade terapeutica- mente eficaz (embora administrada durante um período que pode ser um pouco mais do que 24 horas).

Em geral, os usos aqui descritos podem compreender ainda a repetição da administração de quantidades terapeuticamente eficazes de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta, durante o tempo necessário para atingir prevenção, redução ou inibição de cicatrizes.

Provê-se que a maioria dos fragmentos ou derivados de WNT5A, que compartilham a atividade biológica da WNT5A, também apre- sentarão atividade terapêutica que irá torná-los adequados para uso nos mé- todos e medicamentos da invenção.

"Atividade biológica" no contexto da presente invenção pode ser avaliada in vitro ou in vivo, mas é preferencialmente avaliada in vivo. Conse- quentemente, será reconhecido que com relação à WNT5A, ou seus frag- mentos ou derivados, a serem considerados biologicamente ativos de acor- do com a presente invenção, não é necessário para a WNT5A, fragmento ou derivado apresentar atividade biológica mensurável por meio tanto in vitro quanto in vivo, mas apenas que a WNT5A, fragmento ou derivativo seja ca- paz de apresentar atividade biológica que possa ser medida in vitro ou in vivo, e preferivelmente atividade que possa ser medida in vivo.

Adequadamente, a atividade biológica de WNT5A, seus frag- mentos ou derivados, pode ser medida com referência à capacidade da WNT5A, ou fragmento ou derivados desta, para prevenir, reduzir ou inibir as cicatrizes.

Em consideração a concisão, as referências no presente relató- rio descritivo à "inibição" da cicatriz devem ser tomadas, exceto onde o con- texto exija de outra forma, para englobar também a prevenção ou redução da cicatriz. Similarmente, referências ao "tratamento" de um distúrbio fibróti- co, ou distúrbios, devem, exceto quando o contexto exija de outra maneira, ser tomadas a fim de abranger também a prevenção de distúrbios fibróticos.

A medida de inibição de cicatrizes ou tratamento de um distúrbio fibrótico, que pode ser necessária para atingir um efeito terapêutico será evi- dente, e pode ser facilmente determinada, por um clínico responsável pelo cuidado do paciente. O clínico pode determinar uma avaliação adequada do grau de inibição da cicatriz, ou o tratamento de um distúrbio fibrótico, conse- guido através da WNT5A ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes. Uma tal avaliação, por exemplo, pode ser feita com referência aos métodos sugeridos de medição aqui descritos. A medida em que a inibição de cicatrizes ou o tratamento de dis- túrbios fibróticos é alcançado pode ser avaliado com referência aos efeitos que surgem em pacientes humanos tratados com os métodos ou medica- mentos da invenção. Alternativamente, a inibição da cicatriz, ou tratamento de distúrbios fibróticos, pode ser avaliada com referência às investigações experimentais utilizando modelos adequados in vitro ou in vivo. O uso de modelos experimentais para investigar a inibição de cicatrizes ou tratamento de distúrbios fibróticos pode ser particularmente preferível na avaliação da eficácia terapêutica de fragmentos ou derivados de WNT5A, ou no estabele- cimento de quantidades terapeuticamente eficazes de WNT5A, seus frag- mentos ou derivados.

Modelos animais de cicatrizes ou distúrbios fibróticos represen- tam modelos experimentais preferíveis para a avaliação in vivo da extensão da inibição de cicatrizes ou do tratamento de distúrbios fibróticos que pode ser atingido. Modelos adequados serão conhecidos por aqueles versados na técnica. Exemplos de tais modelos são descritos abaixo para fins ilustrativos.

Os fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes de WNT5A, e quantidades terapeuticamente eficazes da WNT5A, seus frag- mentos ou derivados, podem ser selecionados com referência a qualquer uma ou todas as considerações descritas no presente relatório descritivo.

O tratamento de feridas com WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes, pode resultar na inibição de cicatrizes que pode ser de outra maneira esperado de ocorrer na cicatrização de feri- das não tratadas. Os inventores acreditam que o tratamento desta forma pode ter um impacto na aparência tanto macroscópica quanto microscópica das cicatrizes formadas a partir das feridas tratadas; macroscopicamente as cicatrizes podem ser menos perceptíveis e se misturar com a pele circun- dante, microscopicamente as cicatrizes podem apresentar uma estrutura interna mais próximo da estrutura de pele normal. Em particular, microscopi- camente uma cicatriz tratada pode apresentar uma abundância e orientação de moléculas ECM tais como o colágeno que é mais similar àquela encon- trada na pele não ferida do que àquela encontrada em cicatrizes não trata- das.

Para os presentes propósitos uma "ferida não tratada" deve ser considerada ser qualquer ferida que não tenha sido exposta a uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado te- rapeuticamente eficaz desta. Uma "ferida tratada com controle" será uma ferida não tratada em que uma substância de controle foi administrada.

Em contraste, uma "ferida tratada" pode ser considerada como uma ferida exposta a uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta. Assim, uma ferida tratada pode ser uma ferida que tenha sido suprida de um medica- mento da invenção, ou que tenha recebido tratamento de acordo com os métodos da invenção.

A inibição de cicatrizes, utilizando os medicamentos e métodos da invenção, pode ser efetuada em qualquer local do corpo e em qualquer tecido ou órgão até agora investigado. Para fins ilustrativos a atividade anti- cicatrizes dos medicamentos e métodos da invenção serão principalmente descritas com referência à inibição de cicatrizes que podem ser realizadas na pele (o maior órgão do corpo). No entanto, a pessoa versada imediata- mente observará que muitos dos fatores que podem ser relevantes quando se considera a inibição da cicatriz na pele também será relevante para a ini- bição da cicatriz em outros órgãos ou tecidos.

Na pele, o tratamento pode melhorar a aparência macroscópica e microscópica das cicatrizes; macroscopicamente as cicatrizes podem ser menos visíveis e se misturar com a pele circundante, microscopicamente as fibras de colágeno dentro da cicatriz podem ter morfologia e organização que é mais semelhante àquelas na pele circundante. A prevenção, redução ou inibição de cicatrizes no contexto do presente invenção deve ser entendi- da de englobar qualquer grau de prevenção, redução ou inibição na cicatri- zação quando comparado com o nível da cicatriz que ocorre em uma ferida tratada com controle ou não tratada (conforme definido acima). Em todo o relatório descritivo referências a "prevenção", "redução" ou "inibição" de ci- catrizes devem ser de uma forma geral tomadas, exceto se o contexto exija de outra maneira, para serem mecanismos equivalentes que são totalmente manifestados na atividade anticicatriz.

A inibição de cicatrizes obtida utilizando métodos e medicamen- tos da invenção pode ser avaliada e/ou medida com referência a aparência microscópica ou macroscópica de uma cicatriz tratada quando comparada com a aparência de uma cicatriz não tratada. A inibição da cicatriz também pode ser adequadamente avaliada com referência a aparência tanto ma- croscópica quanto microscópica de uma cicatriz tratada. Pode geralmente ser preferível que a inibição da cicatriz seja avaliada com referência à estru- tura microscópica das cicatrizes.

Para os presentes propósitos uma "cicatriz tratada" pode ser de- finida como uma cicatriz formada na cicatrização de uma ferida tratada, en- quanto que uma "cicatriz não tratada" pode ser definida como a cicatriz for- mada na cicatrização de uma ferida não tratada, ou um ferimento tratado com placebo ou cuidados padrão (exemplos de feridas tratadas com contro- le). A comparação adequada de cicatrizes pode preferivelmente ser compa- rada com a cicatriz tratada com referência à idade, local, tamanho e paciente da cicatriz.

Em consideração ao aspecto macroscópico de uma cicatriz re- sultante de uma ferida tratada, o grau de cicatrização, e consequentemente a magnitude de qualquer inibição da cicatriz alcançada, pode ser avaliado com referência a qualquer um de vários parâmetros.

Os parâmetros adequados para a avaliação macroscópica das cicatrizes podem incluir: i) Cor da cicatriz. As cicatrizes podem ser tipicamente hipopigmen-

tadas ou hiperpigmentadas no que refere-se à pele circundante. A inibição da cicatriz pode ser demonstrada quando a pigmentação de uma cicatriz tratada mais estritamente se aproxima da pela sem cicatriz do que da pig- mentação de uma cicatriz não tratada. Similarmente, as cicatrizes podem ser mais avermelhadas do que a pele circundante. Neste caso, a inibição da ci- catriz pode ser demonstrada quando o rubor de uma cicatriz tratada desapa- rece mais cedo, ou mais completamente, ou se assemelha mais estritamente com a aparência da pele circundante, em comparação com uma cicatriz não tratada.

ii) Altura da cicatriz. As cicatrizes podem tipicamente ser elevadas ou empurradas para baixo quando comparadas com a pele circundante. A inibi- ção da cicatriz pode ser demonstrada quando a altura de uma cicatriz trata- da mais estritamente se aproxima da pele sem cicatriz (isto é, não é nem elevada nem empurrada para baixo) do que a altura de uma cicatriz não tra- tada.

iii) Textura superficial da cicatriz. As cicatrizes podem ter superfícies que são relativamente mais lisas do que a pele circundante (dando origem a uma cicatriz com uma aparência "brilhante") ou que são mais ásperas do que a pele circundante. A inibição da cicatriz pode ser demonstrada quando a textura superficial de uma cicatriz tratada mais estritamente se aproxima da pele sem cicatriz do que a textura superficial de uma cicatriz não tratada.

iv) Rigidez da cicatriz. A composição e estrutura anormais das cicatri- zes significam que são normalmente mais espessas do que a pele intacta em torno da cicatriz. Neste caso, a inibição da cicatriz pode ser demonstrada quando a rigidez de uma cicatriz tratada mais estritamente se aproxima da pele sem cicatriz do que a rigidez de uma cicatriz não tratada.

Uma cicatriz não tratada preferivelmente apresentará inibição da formação de cicatriz como avaliada com referência a pelo menos um dos parâmetros para a avaliação macroscópica acima demonstrada. Mais prefe- rivelmente uma cicatriz tratada pode demonstrar formação de cicatrizes ini- bida com referência a pelo menos dois dos parâmetros, ainda mais preferi- velmente pelo menos três dos parâmetros, e o mais preferível todos os qua- tro destes parâmetros. Uma avaliação global da formação de cicatrizes pode ser feita utilizando, por exemplo, uma Escala Analógica Visual ou uma esca- la de avaliação digital.

Os parâmetros apropriados para a avaliação microscópica das cicatrizes podem incluir:

i) Espessura das fibras da matriz extracelular (ECM). As cicatrizes tipicamente contêm fibras da ECM mais finas do que as encontradas na pele circundante. Esta propriedade é ainda mais pronunciada no caso de quelói- de e cicatrizes hipertróficas. A inibição da cicatriz pode ser demonstrada quando a espessura das fibras da ECM em uma cicatriz tratada mais se a- proxima da espessura das fibras da ECM encontradas na pele sem cicatriz do que a espessura das fibras encontradas em uma cicatriz não tratada.

ii) Orientação das fibras da ECM. As fibras da ECM observadas em cicatrizes tendem a apresentar um maior grau de alinhamento umas com as outras do que aquelas observadas na pele sem cicatriz (as quais possuem uma orientação aleatória e freqüentemente referidas como "tecelagem de

cesta"). A ECM das cicatrizes patológicas tais como quelóides e cicatrizes hipertróficas pode apresentar orientações ainda mais anômalas, muitas ve- zes formando grandes "redemoinhos" ou "cápsulas" de moléculas da ECM. Consequentemente, a inibição da cicatriz pode ser demonstrada quando a orientação das fibras da ECM em uma cicatriz tratada mais se aproxima da orientação das fibras da ECM observadas na pele sem cicatriz do que a ori- entação de tais fibras encontradas em uma cicatriz não tratada.

iii) Composição da ECM da cicatriz. A composição de moléculas da ECM presentes nas cicatrizes mostra as diferenças entre o que se encontra na pele normal, com uma redução na quantidade de elastina presente na

ECM das cicatrizes. Assim, a inibição de cicatrizes pode ser demonstrada quando a composição das fibras da ECM na derme de uma cicatriz tratada mais se aproxima da composição de tais fibras encontradas na pele sem cicatriz do que a composição encontrada em uma cicatriz não tratada.

iv) Celularidade da cicatriz. As cicatrizes tendem a conter relativa- mente menos células do que a pele se cicatriz. Será, portanto, observado

que a inibição da cicatriz pode ser demonstrada quando a celularidade de uma cicatriz tratada mais se aproxima da celularidade da pele sem cicatriz do que a celularidade de uma cicatriz não tratada.

É curioso observar que a aparência geral das cicatrizes é pouco influenciada pela cobertura epidérmica da cicatriz, mesmo embora esta seja a parte da cicatriz que é vista pelo observador. Em vez disso, os inventores acham que as propriedades da neoderme produzida na resolução da respos- ta de cicatrização de ferida têm muito maior impacto sobre a percepção do grau de cicatrização, bem como sobre a função do tecido cicatrizado. Con- sequentemente as avaliações de critérios associados com a derme, ao invés da epiderme, comprovam ser o mais útil para determinar a inibição da cica- triz.

A espessura das fibras da ECM e a orientação das fibras da ECM podem ser parâmetros favorecidos, para avaliar a inibição da cicatriz. Uma cicatriz tratada pode preferivelmente ter orientação da ECM melhorada (isto é, orientação que é mais semelhante à pele não ferida do que é a orien- tação em uma cicatriz não tratada).

Uma cicatriz tratada preferivelmente demonstrará a inibição da cicatriz como avaliada com referência a pelo menos um dos parâmetros para avaliação microscópica acima demonstrada. Mais preferivelmente uma cica- triz tratada pode demonstrar a inibição da cicatriz com referência a pelo me- nos dois dos parâmetros, ainda mais preferivelmente pelo menos três dos parâmetros, e o mais preferível todos os quatro destes parâmetros.

A inibição da cicatriz que ocorre em uma ferida tratada pode ain- da ser avaliada com referência aos parâmetros adequados utilizados na:

i) avaliação clínica macroscópica das cicatrizes, particularmente a avaliação de cicatrizes após um motivo;

ii) avaliação das imagens fotográficas de cicatrizes;

iii) avaliação dos moldes de silicona ou moldes de gesso positivos produzi- dos de moldes de silicona das cicatrizes, e

iv) avaliação microscópica das cicatrizes, por exemplo, por análise histológi- ca da estrutura microscópica das cicatrizes.

Será observado que a inibição da cicatriz de uma ferida tratada pode ser indicada mediante a melhora de um ou mais de tais parâmetros adequados, e que no caso de inibição como avaliada com referência a vários parâmetros estes parâmetros podem ser combinados a partir de diferentes esquemas de avaliação (por exemplo, inibição como avaliada com referência a pelo menos um parâmetro usado na avaliação macroscópica e pelo menos um parâmetro usado na avaliação microscópica). A inibição da cicatriz pode ser demonstrada através de uma me- lhora em um ou mais parâmetros que indicam que uma cicatriz tratada mais se aproxima da pele sem cicatriz com referência ao(s) parâmetro(s) selecio- nado^) do que faz uma cicatriz não tratada ou de controle.

Os parâmetros adequados para a medição crínica e avaliação

de cicatrizes podem ser selecionados com base em uma variedade de medi- ções ou avaliações incluindo aquelas descritas por Beausang et al (1998) e van Zuijlen et al (2002).

Tipicamente, os parâmetros adequados podem incluir:1. Avaliação no que refere-se à contagem de cicatriz da Escala Visual Ana- lógica (VAS).

A prevenção, redução ou inibição de cicatriz pode ser demons- trada por uma redução na pontuação da VAS de uma cicatriz tratada quando comparada a uma cicatriz de controle. Uma VAS adequada para utilização na avaliação de cicatrizes pode ser baseada no método descrito por Beau- sang et al. (1998).

.2. Avaliação no que refere-se a uma escala categórica.

A prevenção, redução ou inibição de cicatriz pode ser determi- nada pela atribuição das cicatrizes em diferentes categorias, por exemplo pouco perceptível, combina bem com a pele normal, distinto da pele normal, etc; ou através da comparação de uma cicatriz tratada ou não tratadas e a- tribuição de eventuais diferenças entre os mesmos com as categorias, por exemplo, leve, moderada, grave etc. Esta avaliação pode ser feita pelo paci- ente, pelo investigador, por um painel independente, quer sobre o paciente ou sobre fotografias/moldes.

.3. Altura da cicatriz, largura da cicatriz, perímetro da cicatriz, área da cicatriz ou volume da cicatriz.

A altura e a largura das cicatrizes podem ser medidas direta- mente sobre o paciente, por exemplo, através da utilização de dispositivos de medição manual tais como compassos de calibre. A largura, perímetro e a área da cicatriz pode ser medida diretamente sobre o paciente, mediante a análise de imagem de fotografias da cicatriz, ou em moldes de gesso de im- pressões da cicatriz. A pessoa versada também estará mais consciente de outros métodos não invasivos e dispositivos que podem ser usados para investigar os parâmetros adequados, incluindo moldagem de silicona, ultra- som, profilometria tridimensional ótica e Formação de Imagem por Resso- nância Magnética de alta resolução.

A inibição da cicatriz pode ser demonstrada por uma redução na altura, largura, área, perímetro e volume, ou qualquer combinação destas, de uma cicatriz tratada em comparação com uma cicatriz não tratada. .4. Aparência e/ou cor da cicatriz comparada com a pele sem cicatriz circun- dante.

A aparência ou cor de uma cicatriz tratada pode ser comparada com aquela da pele sem cicatriz circundante, e as diferenças (se houver) comparadas com a diferença entre a aparência e cor das cicatrizes não tra- tadas e pele sem cicatriz. Uma tal comparação pode ser feita com base em uma avaliação visual das respectivas cicatrizes e pele sem cicatriz. O apare- cimento de uma cicatriz pode ser comparado com a pele sem cicatriz com referência à questão de saber se a cicatriz é mais clara ou mais escura, ou mais avermelhada, do que a pele sem cicatrizes. As respectivas cores das cicatrizes e pele podem ser perfeitamente acompanhadas de uma outra, Ii- geiramente mal combinada, obviamente incompatível ou grosseiramente inadequada.

Alternativa ou adicionalmente à avaliação visual, existem vários dispositivos de análise colorimétrica não invasivos que são capazes de for- necer dados com relação à pigmentação de cicatrizes e pele sem cicatrizes, bem como vermelhidão da pele (que pode ser um indicador do grau de vas- cularidade presente na cicatriz ou pele). Exemplos de tais dispositivos inclu- em o espectrofotômetro X-rite SP-62, Minolta Chronometer CR-200/300; Labscan 600; Dr. Lange Micro Colour; Derma Spectrometer; medidor de flu- xo Iaser-Doppler e escopo da Análise Intracutânea Espectrofotométrica (Sl- A).

A inibição da cicatriz pode ser demonstrada por uma menor magnitude da diferença entre a aparência ou cor das cicatrizes tratadas e pele sem cicatriz do que entre as cicatrizes não tratadas e pele sem cicatriz.

5. Distorção e desempenho mecânico da cicatriz

A distorção de cicatriz pode ser avaliada pela comparação visual de uma cicatriz e pele sem cicatriz. Uma comparação adequada pode classi- ficar uma cicatriz selecionada como não causando nenhuma distorção, dis- torção leve, distorção moderada ou distorção grave.

O desempenho mecânico de cicatrizes pode ser avaliado utili- zando vários métodos não invasivos e dispositivos baseados em sucção, pressão, torção, tensão e acústica. Exemplos adequados de dispositivos conhecidos capazes de utilizar na avaliação do desempenho mecânico de cicatrizes incluem Indentometer, Cutometer, Reviscometer, análise da pele visco-elástica, Dermaflex, Durometer, Dermal Torque Meter, Elastometer.

A inibição da cicatriz poderá ser demonstrada através de uma redução na distorção provocada pelas cicatrizes tratadas em comparação com a que é causada pelas cicatrizes não tratadas. Também será observado que a inibição da cicatriz pode ser demonstrada pelo desempenho mecânico da pele sem cicatriz sendo mais semelhante a aquele de cicatrizes tratadas que das cicatrizes não tratadas.

6. Contorno da cicatriz e textura da cicatriz

O contorno da cicatriz pode ser investigado por meio de avalia- ção visual. Os parâmetros adequados a considerar em uma tal avaliação incluem, quer sim quer não, uma cicatriz que é igualada com a pele circun- dante, levemente suntuosa, ligeiramente denteada, hipertrófica ou quelóide. A textura de um cicatriz pode ser avaliada com referência ao aspecto da ci- catriz, e isto também pode ser realizada por uma avaliação visual para de- terminar se a cicatriz é, por exemplo, mate ou brilhante ou possui uma apa- rência áspera ou lisa quando comparada com a pele sem cicatriz.

A textura da cicatriz pode adicionalmente ser avaliada com refe- rência à questão de saber se a cicatriz tem a mesma textura como a pele sem cicatriz (textura normal), se é apenas palpável, firme ou dura em com- paração com pele sem cicatriz. A textura das cicatrizes também pode ser avaliada com referência à escala de Hamilton (descrita em Crowe et al, .1998).

Além das técnicas demonstradas acima, há muitos dispositivos de profilometria não invasivos que utilizam métodos óticos ou mecânicos para a avaliação do contorno e/ou textura da cicatriz. Tais avaliações podem ser realizadas sobre o corpo do paciente, ou, por exemplo, sobre as impres- sões de molde de silicona das cicatrizes, ou em moldes positivos produzidos a partir de tais impressões.

A inibição da cicatriz pode ser demonstrada, no caso das cicatri- zes tratadas terem perfis e texturas de cicatriz mais comparáveis à pele sem cicatriz do que as cicatrizes não tratadas. Avaliações Fotográficas Painel Leigo Independente

A avaliação fotográfica das cicatrizes tratadas e não tratadas pode ser executada por um painel leito independente de avaliadores usando fotografias padronizadas e calibradas das cicatrizes. As cicatrizes podem ser avaliadas por um painel leigo independente para fornecer dados categóricos de classificação (por exemplo, para que uma determinada cicatriz tratada seja "melhor", "pior" ou "indiferente" quando comparado com uma cicatriz não tratada) e dados quantitativos utilizando uma Escala Analógica Visual (VAS) com base no método descrito por Beausang et al. (1998). A captura destes dados pode fazer uso de softwares adequados e/ou sistemas eletrô- nicos como descrito no pedido de patente copendente do requerente. Painel de Peritos

A avaliação fotográfica das cicatrizes tratadas e não tratadas pode alternativa ou adicionalmente ser executada por um painel de avaliado- res peritos utilizando fotografias padronizadas e calibradas das cicatrizes a serem avaliadas. O painel de peritos pode preferivelmente consistir de indi- víduos versados na técnica, exemplos adequados dos quais incluem cirurgi- ões plásticos e cientistas tendo formações técnicas pertinentes.

Tal avaliação pode fornecer dados categóricos, como descrito acima, ou no que refere-se à comparação de um tempo longo de imagens de cicatrizes selecionadas tratadas e não tratadas. As avaliações adequadas que podem ser úteis na avaliação da inibição da cicatriz incluem:

Identificação da melhor cicatriz dentro de uma série de cicatri- zes. Par os propósitos da presente invenção a melhor cicatriz pode ser con- siderada ser aquela que mais se assemelhe à pele circundante. Uma vez que a melhor cicatriz foi identificada a magnitude da diferença entre as cica- trizes pode ser considerada, por exemplo, se a diferença entre as cicatrizes for discreta ou evidente. Outros parâmetros que podem ser considerados incluem o tempo mais inicial após a formação da cicatriz em que uma dife- rença entre as cicatrizes pode ser detectada, o tempo pós-formação no qual a diferença entre as cicatrizes é mais evidente (ou alternativamente a con- clusão de que a diferença continua após o último ponto do tempo avaliado), assim como a consideração se ou não a melhor cicatriz permanece consis- tentemente melhor.

Consideração também pode ser dada se ou não uma cicatriz é

consistentemente mais vermelha do que a outra, e se a vermelhidão desapa- rece ao longo dos pontos de tempo considerados (ou continua após o último ponto de tempo) e sendo assim em que momento após a formação da cica- triz. Um painel de peritos também pode considerar em que momento após a formação em qualquer diferença na vermelhidão torna-se detectável, assim como o tempo pós-formação no qual a diferença na vermelhidão é mais ób- via.

Um painel de peritos também pode considerar se ou não parte de uma cicatriz tratada ou não tratada é consistentemente mais clara do que a outra, ou mais clara do que a pele sem cicatriz. No caso em que uma dife- rença na palidez é detectável, consideração pode ser dada ao período após a formação de cicatriz em que a diferença pode ser detectada, o momento em que a diferença é mais evidente, e o momento em que a diferença desa- parece.

Um outro parâmetro que pode ser avaliado por um painel de pe-

ritos é a textura das cicatrizes tratadas e não tratadas. Na comparação de cicatrizes tratadas e não tratadas o painel de peritos pode considerar que as cicatrizes possuem a textura mais semelhante àquela da pele sem cicatriz, o tempo mais no início após a formação de cicatriz em que qualquer diferença de textura pode ser detectada, o tempo pós-formação em que qualquer dife- rença é mais evidente, e o tempo em que qualquer diferença desaparece.

A comparação das cicatrizes tratadas e não tratadas pode ainda avaliar qual das cicatrizes é mais estreita, e qual das cicatrizes é mais curta. Consideração também pode ser dada para a forma da cicatriz e para a pro- porção da margem da cicatriz que é distinguível da pele circundante. Tal como com as avaliações visuais e avaliações de cor descritas anteriormente, a presença, grau e localização da hiperpigmentação também pode ser con- siderada. Avaliação clínica

Um clínico, investigador ou não, ou um painel independente de clínicos, pode avaliar a(s) cicatriz(es) em um paciente usando qualquer um dos parâmetros anteriores, por exemplo, VAS, cor, escalas categóricas etc. Avaliação do Paciente

O paciente pode avaliar as suas próprias cicatrizes e/ou compa- rar as cicatrizes por meio de um questionário estruturado. Este questionário pode medir a sua satisfação com a cicatriz, bem como a combinação da ci- catriz com a pele circundante, assim como o efeito da cicatriz na sua vida quotidiana, por exemplo, se ele a esconde com roupas, evita expô-la; assim como os sintomas da cicatriz, por exemplo, coceira, dor, parestesia. A inibi- ção da cicatriz pode ser determinada pela cicatriz tratada sendo avaliada melhor, causando menos problemas ao paciente, causando menos e meno- res sintomas de cicatriz, e com um aumento na satisfação do paciente em comparação com uma cicatriz não tratada. Análise Macroscópica

Como observado acima, uma das maneiras em que a qualidade das cicatrizes tratadas e não tratadas pode ser comparada é pela avaliação microscópica. A avaliação microscópica da qualidade de cicatriz pode tipi- camente ser realizada utilizando cortes histológicos das cicatrizes. O pro- cesso de microscopicamente avaliar e medir as cicatrizes pode levar em consideração os dados categóricos baseados nos seguintes parâmetros a- dequados:

1. Organização do colágeno. Na avaliação de organização do colágeno refe- rência pode ser feita à orientação das fibras de colágeno presentes na cica- triz, à densidade de tais fibras e espessura da fibra de colágeno na derme papilar e reticular. Uma inibição da cicatriz pode ser indicada quando uma cicatriz tratada contiver organização de colágeno que mais se aproxima da- quela observada na pele não ferida do que a organização nas cicatrizes não tratadas ou tratadas com controle.

2. Abundância de componentes da ECM. As cicatrizes tipicamente contêm uma quantidade aumentada de componentes da ECM tal como colágeno, quando comparadas com a pele não ferida. Uma inibição de cicatriz pode ser indicada quando uma cicatriz tratada contiver abundância reduzida de componentes da ECM1 quando comparada com as cicatrizes não tratadas ou tratadas com controle.

3. Avaliação de escala analógica visual (VAS) da organização e abundância de colágeno na derme papilar e na derme reticular também pode fornecer um índice útil de qualidade de cicatriz.

4. Angiogênese e Inflamação. Consideração pode ser dada ao número de vasos sangüíneos presentes, ao tamanho dos vasos sangüíneos presentes a evidência de inflamação, incluindo uma avaliação de qualquer nível de in- flamação presente. Uma inibição de cicatrizes pode ser indicada quando uma cicatriz tratada contiver vasos sangüíneos e células inflamatórias em quantidades e disposições que se aproximam daquelas observadas na pele não ferida do que daquelas observadas nas cicatrizes não tratadas ou trata- das com controle.

Outros aspectos que podem ser levados em conta na avaliação da qualidade microscópica das cicatrizes incluem elevação ou depressão da cicatriz em relação à pele sem cicatriz circundante, e a proeminência ou visi- bilidade da cicatriz na interface dérmica normal.

Será visto que as avaliações acima descritas permitem a gera- ção de dados de classificação da cicatriz que é capaz de fornecer uma indi- cação quanto ao fato de uma cicatriz tratada é melhor, pior ou indiferente em comparação com uma cicatriz de controle, não tratada ou outro comparador adequado.

Além dos dados categóricos, dados quantitativos (de preferência em relação aos parâmetros acima) podem ser gerados usando análise de imagem em combinação com técnicas adequadas de visualização. Exem- plos de técnicas de visualização adequadas que podem ser empregados na avaliação da qualidade da cicatriz são manchas histológicas específicas ou imuno-rotulagem, onde o grau de coloração ou rotulagem presente pode ser quantitativamente determinado pela análise de imagem.

Os dados quantitativos podem ser úteis e facilmente produzidos em relação aos seguintes parâmetros:

1. Largura, altura, elevação, volume e área da cicatriz.

2. Quantidade, tamanho, área (isto é, seção transversal) e localização de vasos sangüíneos.

3. Grau de inflamação, quantidade, localização e populações/tipos de células inflamatórias presentes.

4. Organização de colágeno, espessura da fibra de colágeno, densidade da fibra de colágeno.

5. Número e orientação dos fibroblastos.

6. Quantidade e orientação de outras moléculas da ECM, por exemplo, elastina, fibronectina.

A prevenção, redução ou inibição de cicatrizes pode ser de- monstrada por uma alteração em qualquer um dos parâmetros considerados acima, tal que uma cicatriz tratada mais estritamente se pareça com a pele sem cicatriz mais do que uma cicatriz de controle ou não tratada (ou outro comparador adequado).

As avaliações e parâmetros debatidos acima são adequados para avaliação dos efeitos de WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados, quando comparados com o tratamento médico de controle, placebo ou pa- drão em animais ou seres humanos. Testes estatísticos apropriados podem ser usados para analisar os conjuntos de dados gerados a partir de diferen- tes tratamentos a fim de investigar o significado dos resultados.

Preferivelmente a inibição da cicatrizes pode ser demonstrada com referência a mais do que um parâmetro. Mais preferivelmente a inibição da cicatriz pode ser demonstrada com referência tanto a um parâmetro clíni- co (isto é, observada sobre o paciente) quanto a um parâmetro fotográfico. Ainda mais preferivelmente a inibição de cicatrizes pode ser demonstrada com referência a um parâmetro clínico, um parâmetro fotográfico, e também a um parâmetro de avaliação microscópica (por exemplo, um parâmetro his- tológico). O mais preferível a inibição de cicatrizes pode ser demonstrada com referência a uma pontuação de VAS clínica, pontuação e classificação de VAS de painel leigo externo (a partir de imagens fotográficas) e pontua- ção de VAS microscópica da derme reticular.

A inibição de cicatrizes que pode ser alcançada utilizando quan- tidades terapeuticamente eficazes de WNT5A, ou seus fragmentos ou deri- vados terapeuticamente eficazes, pode ser de benefício em quase todas as circunstâncias onde a cicatriz não ferida ocorre de outra maneira.

Os parágrafos que seguem não são de modo algum destinados a limitar o uso ao qual os métodos e medicamentos da invenção podem ser colocados, mas podem fornecer orientações úteis quanto aos contextos nos quais eles podem ser desejados para inibir a formação de cicatriz através da utilização de quantidades terapeuticamente eficazes de WNT5A ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente ativos.

A utilização de métodos e de medicamentos da invenção para inibir cicatrizes pode efetuar uma notável melhora na aparência cosmético de uma área lesada assim tratada. As considerações cosméticas são impor- tantes em vários contextos clínicos, particularmente quando as feridas são formadas nos locais proeminentes do corpo tal como o rosto, pescoço e mãos. Consequentemente, é uma outra modalidade preferida que os medi- camentos e métodos da invenção sejam usados para inibir cicatrizes em Io- cais onde é desejável melhorar a aparência cosmética de uma cicatriz for- mada. De fato, é uma modalidade preferida que os medicamentos e méto- dos da invenção sejam usados para inibir as cicatrizes associadas com a cirurgia estética. Visto que a grande maioria das cirurgias estéticas consis- tem em procedimentos cirúrgicos eletivos, é facilmente possível administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes, antes da cirurgia, e/ou imediatamente após ao fechamento da ferida, por exemplo, com suturas, e este uso repre- senta uma modalidade particularmente preferida da invenção. No caso de procedimentos cirúrgicos eletivos uma via preferida pela qual a WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes, pode ser adminis- trada é através da injeção intradérmica. Tais injeções podem formar bolhas levantada, que depois podem ser cortadas como parte do procedimento ci- rúrgico, ou alternativamente a bolha pode ser levantada mediante a injeção das margens da ferida após o ferimento ter sido fechado, por exemplo, por suturas.

O resultado estético dos procedimentos cirúrgicos também é uma consideração importante na cirurgia plástica, bem como a utilização de métodos ou medicamentos da invenção para inibir as cicatrizes associadas com a cirurgia plástica constitui uma outra modalidade preferida da inven- ção.

Além do seu impacto cosmético, a cicatriz da pele é responsável por vários efeitos deletérios que atinge aqueles que sofrem de tais cicatrizes. Por exemplo, a cicatriz da pele pode estar associada com a redução da fun- ção física e mecânica, particularmente no caso de cicatrizes contráteis (tais como cicatrizes hipertróficas) e/ou situações em que as cicatrizes são for- madas em todas as articulações. Nestes casos, as propriedades mecânicas alteradas da pele com cicatrizes, em oposição a pele sem cicatrizes, e os efeitos da contração da cicatriz podem levar a um movimento dramaticamen- te restrito de uma junta (articulação) assim afetada. Consequentemente, é uma modalidade preferida que os medicamentos e métodos adequados da invenção sejam usados para inibir cicatrizes de feridas que abrangem as articulações do corpo. Em uma outra modalidade preferida, os medicamen- tos e métodos adequados da invenção podem ser usados para inibir cicatri- zes de feridas com risco aumentado de formar uma cicatriz contrátil. É reconhecido que as feridas resultantes de lesões de queima- duras (que para os propósitos da presente invenção podem ser tomadas a fim de abranger lesões de queimadura envolvendo líquidos ou gases quen- tes) podem se prolongar sobre grandes áreas de um indivíduo assim afligido.

Consequentemente, as queimaduras podem dar origem a formação de cica- trizes abrangendo uma grande proporção de um corpo do paciente. Esta grande extensão de cobertura aumenta o risco de que a cicatriz formada cobrirá áreas de importância estética elevada (tal como a face, pescoço, braços ou mãos) ou de importância mecânica (particularmente as regiões que abrangem ou circundam as articulações). As lesões de queimaduras causadas por líquidos quentes são freqüentemente sofridas por crianças (por exemplo, como um resultado de tombar panelas, chaleiras ou seme- lhantes) e, devido ao tamanho corporal relativamente menor das crianças,

são particularmente susceptíveis de causar extensos danos sobre uma pro- porção elevada da área corporal. Além disso, as lesões por queimaduras, e particularmente àquelas sofridas pelas crianças, possuem um risco elevado de produção de cicatrizes hipertróficas patológicos do tipo descrito abaixo. Tais cicatrizes hipertróficas podem aumentar os efeitos maléficos tanto cos- méticos quanto mecânicos associados com as cicatrizes após queimaduras.

É uma modalidade preferível que os medicamentos e métodos da invenção sejam usados para inibir as cicatrizes resultantes de lesões por queimaduras.

A medida de formação da cicatriz, e consequentemente a exten- são do comprometimento cosmético ou outro que pode ser causada pela cicatriz, também pode ser influenciada por fatores tais como a tensão do lo- cal em que a ferida é formada. Por exemplo, sabe-se que a pele sob tensão relativamente elevada (tal como aquela que se prolonga sobre o tórax, ou associada com as linhas de tensão) pode ser propensa à formação de cica- trizes mais graves do que em outros locais do corpo. Assim, em uma moda- Iidade preferida, os medicamentos e métodos adequados da invenção po- dem ser usados para inibir as cicatrizes de feridas localizadas em locais de alta tensão da pele. Existem muitos procedimentos cirúrgicos que podem ser utilizados na revisão da cicatriz para permitir o realinhamento das feridas e cicatrizes de tal que elas são sujeitas à tensão reduzida. Provavelmente, o mais conhecido destes é "plastia Z" em que dois retalhos em forma de V da pele são transpostas para permitir a rotação de uma linha de tensão. Em uma modalidade mais preferida tais medicamentos e métodos da invenção são usados para inibir as cicatrizes de feridas durante a revisão cirúrgica das cicatrizes desfigurantes.

As cicatrizes patológicas podem ter efeitos deletérios mais pro- nunciados do que as que surgem mesmo como um resultado de cicatrizes normais relativamente graves. Exemplos comuns de cicatrizes patológicas incluem quelóides, cicatrizes hipertróficas e pterígio.

As cicatrizes quelóides (ou quelóides) constituem um exemplo notável de cicatrizes patológicas, e são cicatrizes levantadas que se espa- lham para além das margens da ferida original e invadem a pele normal cir- cundante. Os quelóides continuam a crescer ao longo do tempo, não regri- dem espontaneamente, e muitas vezes ocorrem seguinte a excisão cirúrgi- ca. As cicatrizes quelóide ocorrem com igual freqüência em homens e mu- lheres, principalmente a partir de idades de 10 a 30, e podem resultar de piercing, cirurgia, vacinação, tatuagens, mordidas, trauma de contusão e queimaduras. Vários estudos têm sugerido que existe uma predisposição genética subjacente para a formação de quelóide visto que as cicatrizes que- lóides são mais prevalentes nas raças de pele escura.

Os quelóides aparecem como cicatrizes elevadas que podem ser tipicamente hiperpigmentadas ou hipopigmentadas em relação ao tecido circundante. Os quelóides podem ser caracterizados na base de sua ten- dência de crescer para além dos limites iniciais de uma ferida. Em um nível microscópico, os quelóides podem ser caracterizados pela presença de grandes verticilos de colágeno, e pela natureza predominantemente acelula- res do interior da lesão.

As cicatrizes hipertróficas são cicatrizes levantadas que podem ter uma aparência muito semelhante às lesões quelóides. Ao contrário dos quelóides, as cicatrizes hipertróficas não se expandem para além dos limites da lesão original e não são propícias à recorrência após excisão. As cicatri- zes hipertróficas podem freqüentemente sofrer contração, e acredita-se que a natureza contrátil das cicatrizes hipertróficas pode estar associada com os números elevados de miofibroblastos que são freqüentemente relatados no âmbito destes tipos de cicatrizes. As cicatrizes hipertróficas podem comu- mente surgir como um resultado de queimaduras ou ferimentos de escalda- dura, e são particularmente comuns entre as crianças.

Pterígio é um crescimento hipertrofiado do tecido subconjuntivo na borda da córnea ou fora dela. O crescimento é tipicamente triangular na forma, com o vértice apontando para a pupila. O pterígio pode interferir com a visão, e pode requerer cirurgia para remover o tecido hipertrofiado. Além disso, o tecido pode, muitas vezes voltar a crescer após a excisão, da mes- ma forma como as cicatrizes quelóides, exigindo assim múltiplas rodadas de cirurgia.

Reconhece-se que certos tipos de feridas, ou certos indivíduos podem ser predispostos à formação de cicatriz patológica. Por exemplo, in- divíduos afro-caribenhos, japonês ou herança mongolóide, ou aqueles tendo uma história familiar de cicatrizes patológicas, podem ser considerados de estar com risco aumentado de cicatriz hipertrófica ou formação de quelóide. Feridas de crianças, e particularmente ferimentos por queimadura de crian- ças, também estão associadas com a formação aumentada de cicatrizes hipertróficas. Incidências de pterígio podem ser aumentadas entre aqueles nos quais o olho é freqüentemente exposto à luz solar intensa ou poeira. Consequentemente é uma modalidade preferida da invenção que os medi- camentos e métodos adequados sejam utilizados para inibir as cicatrizes de feridas em que há um risco aumentado de formação de cicatrizes patológi- cas.

Embora os indivíduos já sujeitos a cicatrizes patológicas sofram de uma predisposição para uma maior formação excessiva de cicatrizes, é muitas vezes clinicamente necessário rever cirurgicamente as cicatrizes hi- pertróficas ou quelóides, com um risco concomitante de formação de cicatri- zes patológicas conseqüentes. Assim, é uma outra modalidade preferida da invenção que os medicamentos ou métodos aqui descritos sejam utilizados para inibir a cicatrização de feridas produzidas pela revisão cirúrgica das cicatrizes patológicas.

A capacidade de WNT5A, e seus fragmentos e derivados tera- peuticamente eficazes, de inibir a cicatriz é de grande utilidade no tratamen- to de feridas associadas com procedimentos de enxertia. O tratamento utili- zando tais métodos e medicamentos da invenção é de benefício tanto em um sítio doador de enxerto quanto sítios recebedores de enxerto. Os efeitos anticicatrizes do tratamento são capazes de inibir a cicatriz que pode de ou- tro modo ocorrer em locais onde o tecido para enxertia é removido, ou que pode estar associado com a cicatrização e a integração do tecidos enxerta- do. Os inventores acreditam que os métodos e medicamentos da invenção conferem vantagens nos contextos de enxertos utilizando pele, pele artificial ou substitutos de pele.

A maioria das utilizações consideradas acima refere-se à pre- venção da cicatriz que ocorre como um resultado de ferimentos penetrantes. No entanto, o dano da fibrose também pode ocorrer em muitos tecidos como um resultado de outras lesões. Em particular, a resposta de cicatrização das lesões por esmagamento infligidas nos tendões ou Iigamentos pode dar ori- gem à fibrose semelhante a cicatriz, e a invenção deve ser tomada a fim de abranger a prevenção, redução ou inibição de tal fibrose usando os métodos ou medicamentos da invenção.

A cicatrização das feridas que envolvem o peritônio (o epitélio que cobre os órgãos internos, e/ou o interior da cavidade do corpo) pode, muitas vezes, dar origem a aderências. Tais aderências são um sequitur comum de cirurgia que envolve os tecidos ginecológicos ou intestinais, e as incidências de formação de aderência podem ser aumentadas nas feridas que são sujeitas à infecção (tais como infecções bacterianas) ou exposição a radiação. Os inventores acreditam que a capacidade dos métodos e medi- camentos da invenção para inibir as cicatrizes associadas com a cura de tais feridas pode reduzir a ocorrência de aderências. Consequentemente, a utili- zação de métodos e medicamentos da invenção para impedir a formação de aderências intestinais ou ginecológicas representa uma modalidade preferi- da da invenção. Os métodos e medicamentos da invenção também podem ser úteis na inibição da cicatriz, incluindo a formação de aderências, que po- dem ocorrer na cicatrização de feridas infectadas ou feridas expostas à radi- ação. De fato, a pessoa versada observará que a utilização dos métodos ou medicamentos da invenção na cicatrização de quaisquer feridas envolvendo o peritônio é uma modalidade preferida. Os medicamentos para este propó- sito podem ser administrados por lavagem interna, ou em um gel/instilado parenteral ou localmente, por exemplo, a partir de películas ou portadores inseridos no momento da cirurgia.

Cicatriz no olho pode ser inibida por medicamentos da invenção. No caso de cicatrizes na córnea, por exemplo, lesões completamente pene- trantes, LASIK ou PRK1 a aplicação do medicamento pode ser local, por e- xemplo, colírios locais, esponja etc. As cicatrizes podem adicionalmente ser avaliadas através da medição da opacidade, ou das propriedades de trans- missão/refração, da córnea, por exemplo, utilizando microscopia confocal in vivo. As cicatrizes mais profundas no olho, por exemplo, na retina (tal como nos locais de bolhas de alívio da pressão formadas na cirurgia de glauco- ma), também podem ser inibidas pelos medicamentos da presente invenção liberados localmente ou em dispositivos ou por injeção.

As cicatrizes no tecido nervoso (periférico ou central) podem ser inibidas pelos medicamentos da invenção. Tais cicatrizes podem surgir como um resultado de cirurgia ou trauma e podem adicionalmente ser avaliadas pelos futuros ensaios de função nervosa, por exemplo, testes sensoriais ou motores. Os inibidores da cicatriz devem melhorar tais resultados futuros.

As cicatrizes nos vasos sangüíneos, por exemplo, seguinte a cirurgia anastomótica, podem levar à hiperplasia mioíntima e redução do volume do lúmen dos vasos sangüíneos. Isto pode ser medido diretamente, por exemplo, utilizando ultra-som, ou indiretamente através do fluxo sanguí- neo. A inibição da cicatriz provocada por medicamentos da invenção levaria a uma redução no estreitamento do lúmen dos vasos sangüíneos (resteno- se) e um fluxo sangüíneo mais normal. Agentes da invenção podem ser Iibe- rados nos vasos sangüíneos mediante a injeção direta nas paredes do vaso sangüíneo antes da sutura, mediante banho do sítio anastomótico no agente ou por dispositivos locais, por exemplo, sondas.

A cicatriz nos tendões e ligamentos, por exemplo, após a cirurgia ou trauma, pode ser inibida por medicamentos da invenção. A inibição da cicatriz pode ser medida nestes termos pelo restabelecimento da função, por exemplo, capacidade de suportar peso, alongamento, flexibilidade etc.

As vias de administração preferidas pelas quais quantidades te- rapeuticamente eficazes de WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados, são administradas, são debatidas mais detalhadamente em outro lugar no relató- rio descritivo, mas pode ser de uma forma geral preferível que estas molécu- las terapêuticas sejam fornecidas pela administração local na ferida cuja ci- catriz deve ser inibida. Métodos adequados pelos quais tal administração local pode ser alcançada dependerão da identidade do tecido em questão. As vias de administração preferidas podem incluir injeção local (por exemplo, injeção intradérmica no caso em que se pretende inibir a cicatriz dérmica). Outros meios adequados de administração incluem o uso de medicamentos tópicos, tais como pulverizações; pós; gotas (por exemplo, para o ouvido ou olho); pomadas ou cremes, ou liberação de dispositivos locais, por exemplo, sondas, implantes, polímeros.

Os medicamentos da invenção para a prevenção e/ou tratamen- to de distúrbios fibróticos podem ser formulados e fabricados em qualquer forma que leve em conta a composição a ser administrada a um paciente. Os distúrbios fibróticos freqüentemente ocorrerão nos tecidos e órgãos rela- tivamente inacessíveis, e pode ser preferível que a WNT5A, ou seus frag- mentos ou derivados terapeuticamente eficazes, sejam administrados siste- micamente. As vias de administração adequadas incluem, sem limitação, oral, transdérmica, inalação, parenteral, sublingual, retal, vaginal e intrana- sal. Por meio de exemplo, as formulações orais sólidas (tais como comprimi- dos ou cápsulas) podem ser utilizadas para a prevenção e/ou tratamento de fibrose renal ou cirrose do fígado. As formulações aerossóis para inalação podem ser preferidas para a prevenção e/ou tratamento da doença pulmonar obstrutiva crônica ou outros distúrbios fibróticos dos pulmões e das vias aé- reas.

Será observado que muitas das vias de administração descritas acima também podem ser adequadas para a administração tópica a um teci- do em que se pretendia prevenir e/ou tratar um distúrbio fibrótico (por exem- plo, inalação ou intranasal para a prevenção e/ou tratamento de fibrose as- sociada com o sistema respiratório).

As composições que serão administradas ao paciente podem preferencialmente assumir a forma de uma ou mais unidades de dosagem fornecendo uma quantidade terapeuticamente eficaz, ou uma fração conhe- cida desta. Métodos de preparação de tais formas de dosagem serão bem- conhecidos da pessoa versada; por exemplo, ver Remington1S Pharmaceuti- cal Sciences 18th ed. (1990).

Uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados, adequada para uso nos métodos ou medicamen- tos da invenção para prevenir e/ou tratar um distúrbio fibrótico é uma quanti- dade que é capaz de reduzir a fibrose (conforme avaliada em relação a pelo menos um dos parâmetros debatidos abaixo) associada com o distúrbio fi- brótico.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A (ou um

fragmento ou derivado desta) pode ser uma quantidade que é eficaz para alcançar uma redução de pelo menos 10 % em comparação com o nível de fibrose que ocorre em um tecido não tratado sujeito ao distúrbio fibrótico. Preferivelmente uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser capaz de atingir pelo menos uma redução de 20 % na fibrose, mais preferivelmente pelo menos 50 %, ainda mais preferivelmente pelo menos 75 % e o mais preferível pelo menos uma redução de 90 % na fibrose em comparação com um tecido fibrótico não tratado.

Os parâmetros adequados que podem ser avaliados na quantifi- cação da fibrose associada com os distúrbios fibróticos serão evidentes para a pessoa versada. Os exemplos que seguem são fornecidas apenas a título de ilustração. A fibrose associada com os distúrbios fibróticos pode classica- mente ser avaliada com referência a o manchamento de tricromo (por exem- plo, tricromo de Masson ou tricromo de Mallory) das amostras de biópsia colhidas de um tecido sujeito ao distúrbio fibrótico. Estas amostras podem ser comparadas com os tecidos não fibróticos e com os tecidos de referência representativos das manchas em uma variedade de tecidos sujeitos a fibro- se. Os protocolos para o manchamento de tricromo são bem-conhecidos da pessoa versada, e os kits que podem ser utilizados para conduzir o man- chamento de tricromo são disponíveis comercialmente. Será observado que em muitos casos pode ser preferível evitar

os procedimentos invasivos tais como a coleta de biópsias. Em reconheci- mento deste fato vários procedimentos não invasivos foram definidos os quais permitem avaliação da fibrose sem a necessidade de amostras de bi- ópsia. Exemplos de tais procedimentos incluem Fibrotest (FT) e Actitest (AT).

Estes ensaios disponíveis comercialmente utilizam cinco ou seis marcadores bioquímicos de fibrose para uso como uma alternativa não inva- siva à biópsia hepática em pacientes com hepatite crônica C ou B, doença hepática alcoólica e esteatose metabólica (por exemplo, o sobrepeso, paci- entes com diabetes ou dislipidemia). Através da utilização de tais marcado- res bioquímicos, e análise utilizando algoritmos selecionados, estes proce- dimentos são capazes de determinar os níveis de fibrose no fígado e ativi- dade necroinflamatória. O uso de tais testes é cada vez mais clinicamente aceito como uma alternativa para a biópsia, e os testes são disponíveis co- mercialmente de fornecedores tais como BioPredictive.

Os métodos ou medicamentos da invenção podem ser usados profilaticamente, isto é, antes do ferimento que, de outra forma, levaria à formação de cicatrizes, ou antes do início de um distúrbio fibrótico.

No caso da inibição da cicatriz, isto pode implicar a administra- ção de uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmen- to ou derivado terapeuticamente eficaz desta, em locais onde nenhuma feri- da no momento exista, mas onde uma ferida que, de outra forma, dá origem a uma cicatriz deve ser formada. Por meio de exemplo, os medicamentos de acordo com a invenção podem ser administrados em locais que devem so- frer feridas como um resultado de procedimentos eletivos (tais como cirurgi- a), ou em locais que são considerados serem de alto risco de ferimento.

Pode ser preferível que os medicamentos da invenção sejam administrados no local por volta da hora do ferimento, ou imediatamente an- tes da formação de uma ferida (por exemplo, no período de até seis horas antes do ferimento) ou que os medicamentos possam ser administrados em pouco tempo antes do ferimento (por exemplo, até 48 horas antes que uma ferida seja formada). A pessoa versada observará que os momentos mais preferidos de administração antes da formação de uma ferida serão determi- nados com referência a vários fatores, incluindo a formulação e via de admi- nistração do medicamento selecionado, a dosagem do medicamento a ser administrado, a dimensão e a natureza da ferida a ser formada, e a condição biológica do paciente (que pode ser determinada com referência aos fatores tais como a idade do paciente, saúde e predisposição às complicações com cicatriz ou cicatrizes adversas). O uso profilático de métodos e medicamen- tos de acordo com a invenção é uma modalidade preferida da invenção, e é particularmente preferido na prevenção, redução ou inibição de cicatrizes no contexto de feridas cirúrgicas.

No caso do tratamento de distúrbios fibróticos, os medicamentos da invenção podem ser administrados em um local de risco elevado de de- senvolver um distúrbio fibrótico antes da formação de dito distúrbio. Os lo- cais adequados podem ser aqueles que são observados de serem de risco elevado para o desenvolvimento de distúrbios fibróticos. Um risco elevado de desenvolvimento de distúrbios fibróticos pode surgir como um resultado de doença, ou como um resultado de fatores ambientais (incluindo a exposi- ção aos agentes fibróticos), ou como um resultado de predisposição genéti- ca.

Da mesma forma como para a inibição de cicatrizes debatida acima, os medicamentos da invenção podem ser administrados imediata- mente antes do início de um distúrbio fibrótico, ou em um momento mais cedo. A pessoa versada será capaz de estabelecer o momento ideal para a administração de medicamentos da invenção usados para tratar distúrbios fibróticos utilizando técnicas padrão, da mesma forma que para a inibição da cicatriz.

Os métodos e medicamentos da invenção também são capazes de inibir cicatrizes se administrados após uma ferida já ter sido formada. É preferível que tal administração deva ocorrer o mais cedo possível após a formação da ferida, mas os agentes da invenção são capazes de inibir as cicatrizes em qualquer momento, até que o processo de cicatrização tenha sido concluído (isto é, mesmo no caso em que uma ferida já tenha parcial- mente se cicatrizado, os métodos e medicamentos da invenção podem ser usados para inibir as cicatrizes em relação à parte não cicatrizada remanes- cente). Será observado que a "janela" em que os métodos e medicamentos da invenção podem ser usados para inibir a cicatriz é dependente da nature- za da ferida em questão (incluindo o grau de dano que tenha ocorrido, e o tamanho da área ferida). Assim, no caso de uma grande ferida, os métodos e medicamentos da invenção podem ser administrados relativamente fora da resposta de cicatrização e ainda assim ser capaz de inibir as cicatrizes, co- mo uma conseqüência do tempo relativamente prolongado em que grandes feridas requerem a cura.

Os métodos e medicamentos da invenção podem, por exemplo, preferivelmente ser administrados dentro das primeiras 24 horas após uma ferida ser formada, mas ainda podem inibir a cicatriz se administrados até dez, ou mais, dias após a lesão.

Semelhantemente, os métodos e medicamentos da invenção podem ser administrados a um local em que um distúrbio fibrótico já está em desenvolvimento, a fim de evitar que outra fibrose ocorra. Este uso será ob- viamente vantajoso em situações em que o grau de fibrose que ocorreu an- tes da administração de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeutica- mente eficaz desta, é suficientemente baixo em que o tecido fibrótico ainda é capaz de funcionar.

Os medicamentos da invenção preferivelmente podem ser admi- nistrados dentro de 24 horas após o aparecimento de fibrose, mas ainda po- dem ser eficazes quando administrados consideravelmente mais tarde no processo fibrótico. Por exemplo, os medicamentos podem ser administrados dentro de um mês a partir do início da fibrose (ou do diagnóstico de que a fibrose está ocorrendo), ou dentro do sexto mês, ou mesmo um ou mais a- nos, dependendo do grau de fibrose que já tenha ocorrido, a proporção do tecido efetuado pelo distúrbio fibrótico, bem como a taxa em que o distúrbio fibrótica está progredindo.

Os métodos e medicamentos da invenção podem ser adminis- trados em uma ou mais vezes (quando necessário) de modo a inibir as cica- trizes, e/ou prevenir e/ou tratar um distúrbio fibrótico.

Por exemplo, no caso de inibição de cicatriz, quantidades tera- peuticamente eficazes dos medicamentos podem ser administrados a uma ferida tantas vezes quantas forem necessárias até que o processo de cicatri- zação fosse concluído. Por meio de exemplo, os medicamentos da invenção podem ser administrados diariamente ou duas vezes por dia em uma ferida durante pelo menos os primeiros três dias após a formação da ferida. Os inventores descobriram que regimes envolvendo duas administrações de medicamentos da invenção, a primeira antes da formação de uma ferida e a segunda após a lesão, são particularmente benéficos na inibição da forma- ção de cicatriz. Preferencialmente, tais regimes podem envolver uma primei- ra administração imediatamente antes da formação de uma ferida e uma segunda administração 24 horas após o ferimento.

Mais preferivelmente os métodos ou medicamentos da invenção podem ser administrados antes e depois da formação de uma ferida. Os in- ventores descobriram que a administração dos medicamentos da invenção imediatamente antes da formação de uma ferida, seguida pela administração diária de tais agentes durante um ou mais dias após o ferimento, é particu- larmente eficaz na inibição da cicatriz e/ou tratamento de distúrbios fibróti- cos.

No caso onde a WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados tera- peuticamente eficaz, são usados para prevenir e/ou tratar distúrbios fibróti- cos, uma quantidade terapeuticamente eficaz suficiente para prevenir o apa- recimento ou progressão de um distúrbio fibrótico pode ser fornecida por meio de várias administrações. Os regimes adequados podem envolver a administração mensal, semanal, diária ou duas vezes por dia.

Os inventores acreditam que a WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes, também podem ser utilizados para re- duzir as cicatrizes existentes. Consequentemente, o uso de métodos e me- dicamentos da invenção na redução de cicatrizes existentes constitui uma utilização preferida de acordo com a invenção. Uma quantidade terapeuti- camente eficaz de WNT5A, seus fragmentos ou derivados, pode ser forneci- da por meio de qualquer número de administrações adequadas. Os regimes adequados para estas administrações podem ser facilmente elaborados pela pessoa versada usando técnicas (incluindo estudos in vitro, estudos animais e humanos) bem conhecidas e estabelecida dentro da indústria farmacêuti- ca.

A WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes, também podem ser utilizados no tratamento dos distúrbios fibróti- cos existentes de modo a provocar uma redução no grau de fibrose associa- do com o transtorno. Quantidades terapeuticamente eficazes e regimes de administração preferidos, para uso desta forma, podem ser determinados conforme descrito no resto do relatório descritivo.

Para os propósitos do presente relatório descritivo, por "agente" ou "agente da invenção" significa WNT5A, ou um fragmento terapeuticamen- te eficaz de WNT5A, ou um derivado terapeuticamente eficaz de WNT5A. Será observado que todos tais agentes podem ser incluídos nos medica- mentos de acordo com a invenção, e todos podem ser utilizados nos méto- dos ou utilizações da invenção. Os medicamentos da invenção representam as composições preferidas pelas quais a WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes, podem ser administrados de modo a colocar os métodos da invenção em prática.

Será observado que a quantidade de um medicamento da in- venção que deve ser fornecido a uma ferida ou distúrbio fibrótico, de modo que uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, seus fragmentos ou derivados possa ser administrada, depende de vários fatores. Estes in- cluem a atividade biológica e biodisponibilidade do agente presente no me- dicamento, que por sua vez depende, entre outros fatores, da natureza do agente e do modo de administração do medicamento. Outros fatores na de- terminação de uma quantidade terapêutica adequada de um medicamento podem incluir:

A) A meia-vida do agente no indivíduo sendo tratado.

Β) A condição específica a ser tratada (por exemplo, ferimento agudo ou distúrbios fibróticos crônicos).

C) A idade do indivíduo.

D) O tamanho do local a ser tratado.

A freqüência de administração será igualmente influenciada pe- los fatores acima mencionados e particularmente a sua meia-vida do agente escolhido dentro do indivíduo sendo tratado.

Geralmente, quando os medicamentos de acordo com a inven- ção forem usados para tratar feridas existentes ou distúrbios fibróticos, o medicamento deve ser administrado assim que a ferida ocorre ou o distúrbio fibrótico começe. Em caso de ferimentos ou distúrbios fibróticos que não são imediatamente aparentes, tais como aqueles nos locais internos do organis- mo, os medicamentos podem ser administrados logo que a ferida ou o dis- túrbio seja diagnosticado. A terapia com os métodos ou medicamentos de acordo com a invenção deve continuar até que a cicatriz tenha sido inibida, ou o distúrbio fibrótico prevenido ou tratado, com uma satisfação do médico.

A freqüência de administração dependerá da meia-vida biológica do agente utilizado. Tipicamente, um creme ou pomada contendo um agente da invenção deve ser administrada a um tecido alvo tal que a concentração do agente em um ferimento ou local da fibrose seja mantida em um nível adequado para ter um efeito terapêutico. Isso pode exigir administração diá- ria ou mesmo várias vezes ao dia. Os inventores observaram que a adminis- tração de um agente da invenção imediatamente antes do ferimento, com uma outra administração um dia após a lesão, é particularmente eficaz para a inibição da cicatriz.

Os medicamentos da invenção podem ser administrados por qualquer via apropriada capaz de alcançar o efeito desejado de inibir a cica- triz ou tratar a fibrose, mas é preferível que os medicamentos sejam adminis- trados localmente em uma local da ferida ou um local de um distúrbio fibróti- co.

Os inventores observaram que a inibição de cicatrizes pode ser efetuada pela administração de um agente da invenção por injeção em um local da ferida ou local de um distúrbio fibrótico. Por exemplo, no caso de ferimentos dérmicos ou fibrose dérmica, os agentes da invenção podem ser administrados por meio de injeção intradérmica. Assim, um medicamento preferido de acordo com a invenção compreende uma solução injetável de um agente da invenção (por exemplo, para injeção em torno das margens de uma ferida, ou um local provável de ser ferido). As formulações adequadas para uso nesta modalidade da invenção são consideradas abaixo.

Alternativamente, ou adicionalmente, os medicamentos da in- venção também podem ser administrados em uma forma tópica para inibir as cicatrizes ou tratar um distúrbio fibrótico. No caso de inibição da cicatriz, tal administração pode ser efetuada como parte do cuidado inicial e/ou fre- quente da área ferida.

Os inventores observaram que a inibição da cicatriz ou tratamen- to da fibrose pode ser muito beneficamente efetuada pela aplicação tópica de um agente da invenção a uma ferida ou distúrbio fibrótico (ou, no caso de aplicação profilática, a um tecido ou um sítio onde uma ferida ou distúrbio fibrótico ocorrerá).

As composições ou medicamentos contendo agentes da inven- ção podem tomar várias formas diferentes dependendo, em particular, sobre a maneira em que elas devem ser utilizadas. Assim, por exemplo, elas po- dem estar na forma de um líquido, pomada, creme, gel, hidrogel, pó ou em aerossol. Todas tais composições são adequadas para aplicação tópica em uma ferida ou distúrbio fibrótico, que é um meio preferido de administração de agentes da invenção a um indivíduo (pessoa ou animal) com necessidade de tratamento.

Os agentes da invenção podem ser fornecido em um curativo ou emplastro estéril, que pode ser utilizado para cobrir uma ferida ou sítio fibró- tico a ser tratado.

Os agentes da invenção podem ser liberados a partir de um dis- positivo ou implante, ou podem ser utilizados para revestir um tal dispositivo, por exemplo, sonda.

Será observado que o veículo de uma composição compreen- dendo agentes da invenção deve ser aquele que é bem tolerado pelo paci- ente e permite a liberação do agente na ferida ou sítio fibrótico. Um tal veícu- lo é preferivelmente biodegradável, biodesintegrável, biorreabsorvível e/ou não-inflamatório.

Os medicamentos e as composições compreendendo agentes da invenção podem ser utilizados de várias maneiras. Assim, por exemplo, uma composição pode ser aplicada em uma ferida e/ou ao redor dela ou um distúrbio fibrótico de modo a inibir a cicatriz ou tratar a fibrose. Se a compo- sição for aplicada em uma ferida existente ou sítio fibrótico, então o veículo farmaceuticamente aceitável será aquele que é relativamente "suave", isto é, um veículo que é biocompatível, biodegradável, biodesintegrável e não- inflamatório.

Um agente da invenção, ou um ácido nucléico que codifica um tal agente (como considerado mais abaixo), pode ser incorporado dentro de um dispositivo de liberação lenta ou retardada. Tais dispositivos, por exem- plo, podem ser colocados sobre ou inseridos sob a pele e o agente ou ácido nucléico pode ser liberado durante dias, semanas ou mesmo meses.

Os dispositivos de liberação retardada podem ser particularmen- te úteis para os pacientes, tais como aqueles que sofrem de cicatrizes ex- tensas ou patológicas ou de distúrbios fibróticos de longa duração, que re- querem administração a longo prazo de quantidades terapeuticamente efica- zes de WNT5A, seus fragmentos ou derivados. Tais dispositivos podem ser particularmente vantajosos quando utilizados para a administração de um agente ou ácido nucléico que, de outra forma, normalmente requereria fre- quente administração (por exemplo, pelo menos administração diária por outras vias).

As doses diárias de um agente da invenção podem ser forneci- das como uma única administração (por exemplo, uma aplicação diária de uma formulação tópica ou uma injeção diária). Alternativamente, o agente da invenção podem requerer administração duas ou mais vezes durante um dia. Em uma outra alternativa, um dispositivo de liberação lenta pode ser utiliza- do para fornecer doses ideais de um agente da invenção a um paciente sem a necessidade de administrar doses repetidas.

Uma dose de uma composição compreendendo agentes da in- venção pode preferivelmente ser suficiente para fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, seus fragmentos ou derivados, em uma administração única. No entanto, será observado que cada dose em si mesma não necessita fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente da invenção, mas que uma quantidade terapeuticamente eficaz pode, em vez disso, ser criada através da administração repetida de doses adequadas.

Diversas formas adequadas são conhecidas para as composi- ções compreendendo agentes da invenção. Em uma modalidade, um veículo farmacêutico para administração de um agente da invenção pode ser um líquido e uma composição farmacêutica adequada estaria na forma de uma solução. Em outra modalidade, o veículo farmaceuticamente aceitável é um sólido e uma composição adequada está na forma de um pó ou comprimido. Em uma outra modalidade, o agente da invenção podem ser formulado co- mo uma parte de um emplastro transdérmico farmaceuticamente aceitável.

Um veículo sólido pode incluir uma ou mais substâncias que também podem atuar como agentes flavorizantes, lubrificantes, solubilizan- tes, agentes de suspensão, cargas, deslizantes, auxiliares de compressão, aglutinantes ou agentes desintegrantes de comprimidos; também pode ser um material encapsulante. Em pós, o veículo é um sólido finamente dividido que está em mistura com o agente finamente dividido da invenção. Em com- primidos, o agente da invenção é misturado com um veículo tendo as neces- sárias propriedades de compressão em proporções adequadas e compacta- do nas forma e dimensão desejadas. Os pós e comprimidos preferivelmente contêm até 99 % do agente da invenção. Os veículos sólidos adequados incluem, por exemplo, fosfato de cálcio, estearato de magnésio, talco, açú- car, lactose, dextrina, amido, gelatina, celulose, polivinilpirrolidina, ceras de baixa fusão e resinas de troca iônica.

Os veículos líquidos podem ser usados na preparação de solu- ções, suspensões, emulsões, xaropes, elixires e composições pressuriza- das. O agente da invenção pode ser dissolvido ou colocado em suspensão em um veículo líquido farmaceuticamente aceitável tal como água, um sol- vente orgânico, uma mistura de ambos ou óleos ou gorduras farmaceutica- mente aceitáveis. O veículo líquido pode conter outros aditivos farmacêuti- cos adequados tais como solubilizantes, emulsificantes, tampões, conser- vantes, adoçantes, agentes flavorizantes, agentes de suspensão, agentes espessantes, corantes, reguladores da viscosidade, estabilizantes ou osmo- reguladores. Exemplos adequados de veículos líquidos para administração oral e parenteral incluem água (parcialmente contendo aditivos como acima, por exemplo, derivados de celulose, preferivelmente solução de carboximetil celulose de sódio), álcoois (incluindo álcoois monoídricos e álcoois poliídri- cos, por exemplo, glicóis) e seus derivados, e óleos (por exemplo, óleo de coco e óleo de amendoim fracionados). Para a administração parenteral, o veículo pode ser também um éster oleoso tal como oleato de etila e miristato de isopropila. Os veículos líquidos estéreis são úteis nas composições de forma líquida estéril para a administração parenteral. O veículo líquido para composições pressurizadas pode ser hidrocarboneto halogenado ou outros propulsores farmaceuticamente aceitáveis.

As composições farmacêuticas líquidas que são soluções esté- reis ou suspensões podem ser utilizadas, por exemplo, por injeção via intra- muscular, intratecal, epidural, intraperitoneal, intradérmica, intraestromal (córnea), intraadventicial (vasos sangüíneos) ou subcutânea. As soluções estéreis também podem ser administradas por via intravenosa. O agente da invenção pode ser preparado como uma composição sólida estéril que pode ser dissolvida ou colocada em suspensão no momento da administração utilizando água estéril, soro fisiológico, ou outro meio injetável estéril apro- priado. Os veículos destinam-se a incluir aglutinantes necessários e inertes, agentes de suspensão, lubrificantes e conservantes.

Na situação em que é desejável administrar um agente da in- venção por meio de ingestão oral, será observado que o agente selecionado preferivelmente será um agente tendo um grau elevado de resistência à de- gradação. Por exemplo, o agente da invenção pode ser protegido (por e- xemplo, usando as técnicas descritas acima), de modo que a sua taxa de degradação no trato digestivo seja reduzido.

As composições de agentes da invenção são adequadas para serem utilizadas para inibir cicatrizes ou tratar a fibrose na córnea. As feridas da córnea podem resultar de trauma no olho que surge como um resultado de lesões acidentais ou como um resultado de operações cirúrgicas (por e- xemplo, cirurgia com laser sobre a córnea). No caso da administração de agentes da invenção nas superfícies externas do olho, tais como a córnea, um medicamento preferido da invenção pode estar na forma de um colírio.

A fibrose no olho pode estar associada com as condições tais como vitreorretinopatia proliferativa. No caso em que se pretende prevenir a fibrose associada com aa vitreorretinopatia, tal como a vitreorretinopatia pro- liferativa, pode ser preferível administrar a WNT5A, ou um fragmento ou de- rivado terapeuticamente eficaz desta, por meio de injeção intravitreal ou dis- positivo de liberação localizada (por exemplo, intraocular). Tais injeções po- dem preferivelmente seguir a cirurgia ou procedimentos de implantação in- travitreal.

Os agentes da invenção podem ser usados em uma faixa de feridas "internas" ou distúrbios fibróticos (isto é, feridas ou distúrbios fibrótico que ocorrem dentro do corpo, em vez de uma superfície externa). Exemplos de feridas internas incluem feridas penetrativas que passam através da pele para dentro dos tecidos subjacentes, e feridas associadas com procedimen- tos cirúrgicos conduzidos no interior do corpo. A faixa de distúrbios fibróticos que afetam os sítios internos é extensa, e inclui fibrose pulmonar, fibrose hepática, fibrose renal e fibrose muscular.

Em um exemplo preferido, os medicamentos de acordo com a invenção para uso no tratamento de feridas ou distúrbios fibróticos decorren- tes nos pulmões ou outros tecidos respiratórios podem ser formulados para inalação.

Em um exemplo preferido, os medicamentos de acordo com a invenção para uso no tratamento de feridas ou distúrbios fibróticos decorren- tes nas cavidades corporais, por exemplo, abdome e pelve, podem ser for- mulados como uma lavagem, gel ou instilado.

Os procedimentos conhecidos, tais como aqueles convencio- nalmente empregados pela indústria farmacêutica (por exemplo, experimen- tação in vivo, ensaios clínicos, etc), podem ser utilizados para estabelecer formulações específicas de composições compreendendo agentes da inven- ção e regimes terapêuticos precisos para a administração de tais composi- ções (tais como as doses diárias do agente ativo e a freqüência de adminis- tração).

Uma dose adequada de um agente de acordo com a invenção capaz de inibir as cicatrizes ou tratar um distúrbio fibrótico, pode depender de uma série de fatores incluindo (mas não limitado a eles) a natureza do tecido a ser tratado, a área e/ou profundidade da ferida ou fibrose a ser tra- tada, a gravidade do ferimento ou fibrose, e a presença ou ausência de fato- res predisponentes para a formação de cicatriz patológica.

Os inventores acreditam que a quantidade de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente ativo desta, que pode ser adminis- trada a uma ferida ou local da fibrose em uma incidência única de tratamento (por exemplo, mediante a administração tópica tal como a injeção intradér- mica) pode estar preferivelmente acima de cerca de 2 fmol/cm de ferida ou cm2 de fibrose, e abaixo de cerca de 22 pmol/cm de ferida ou cm2 de fibrose.

Por meio de outro exemplo, a quantidade preferida de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente ativo desta, a ser adminis- trada a uma ferida ou local da fibrose durante um período de aproximada- mente 24 horas (por exemplo, pela administração tópica tal como a injeção intradérmica), pode preferivelmente estar acima de 4 fmol/cm de ferida ou cm2 de fibrose, e abaixo de cerca de 44 pmol/cm de ferida ou cm2 de fibrose.

A pessoa versada observará que as sugestões acima são forne- cidas para orientação. Em particular, será observado que a quantidade de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta, a ser administrada via administração tópica pode ser alterada dependendo da permeabilidade do tecido ou órgão ao qual a composição tópica é adminis- trada. Assim, no caso de tecidos ou órgãos relativamente impermeáveis po- de ser preferível aumentar a quantidade de WNT5A, ou fragmento ou deri- vado terapeuticamente eficaz deste, administrada. Uma tal quantidade au- mentada de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta, pode ainda representar uma quantidade terapeuticamente eficaz, se a quantidade do agente absorvido dentro do tecido ou órgão a ser tratado for terapeuticamente eficaz (isto é, se uma quantidade terapeuticamente eficaz permeia o tecido ou órgão a ser tratado, independente do fato de que uma maior, não terapêutica, quantidade do agente possa permanecer na superfí- cie do tecido ou órgão a ser tratado e ser incapaz de penetrá-lo).

Os inventores acreditam que a quantidade de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente ativo desta, a ser administrada a uma ferida ou sítio de fibrose em uma ocorrência única de tratamento, prefe- rivelmente não excederá a 21 pmol/cm de ferida, ou cm2 de fibrose. Mais preferivelmente a quantidade administrada em uma única incidência de tra- tamento será menor do que 21 pmol/cm de ferida, ou cm2 de fibrose.

Preferivelmente, a quantidade de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente ativo desta, a ser administrado em uma ferida ou local da fibrose durante um período de aproximadamente 24 horas não ex- cederá a 44 pmol/cm de ferida, ou cm2 de fibrose. Mais preferivelmente a quantidade a ser administrada durante um período de aproximadamente 24 horas, será menor do que 44 pmol/cm de ferida.

Preferivelmente a quantidade total de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente ativo desta, administrada a um ferimento ou local da fibrose, não poderá exceder a 44 pmol/cm de ferida, ou cm2 de fi- brose.

A quantidade total de WNT5A, ou um fragmento ou derivado te- rapeuticamente ativo desta, que pode ser administrada por injeção local a um ferimento ou local de fibrose pode estar preferencialmente na região de 0,01 a 44 pmoles/centímetro de ferida ou cm2 de fibrose.

Preferivelmente a quantidade total de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente ativo desta, que pode ser administrada por injeção local a um ferimento ou local de fibrose pode estar preferivelmente na região de 0,022 a 0,44 pmoles/centímetro de ferida ou cm2 de fibrose.

No caso de aplicação tópica de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente ativo desta, nos ferimentos ou locais de fibrose, uma quantidade adequada a ser administrada pode estar na região de 0,01 a 44 pmol/cm de ferida ou cm2 de fibrose.

Preferivelmente, para a aplicação tópica de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente ativo desta, nos ferimentos ou sítios de fibrose, uma quantidade adequada para ser administrada pode estar na região de 0,022 a 0,44 pmol/cm de ferida ou cm2 de fibrose.

A WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente ativo desta, pode preferivelmente ser fornecida sob a forma de uma solução inje- tável em uma concentração entre 0,22 nM e 50 nM. De preferência, aproxi- madamente 100 μΙ de uma tal solução administrada per centímetro de ferida ou cm2 de fibrose durante um período de 24 horas.

A WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente ativos, pode mais preferivelmente ser administrada como uma solução de 0,11 nM a 165 nM. 100 μΙ_ de uma tal solução podem ser administrados por centímetro de ferida ou cm2 de fibrose durante um período de 24 horas.

Mais preferivelmente a WNT5A, ou seus fragmentos ou deriva- dos terapeuticamente ativos, pode ser administrada como uma solução de 0,11 nM, 2,2 nM ou 165 nM com 100 μΐ_ de uma tal solução administrada por centímetro de ferimento ou cm2 de fibrose durante um período de 24 horas.

A pessoa versada observará que quantidades terapêuticas efi- cazes de WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados, podem ser determina- das com referência à concentração do agente que é atingido no órgão ou tecido para o qual elas são administradas. A informação com respeito às dosagens terapeuticamente eficazes aqui estabelecidas fornecerá orienta- ção suficiente para permitir a pessoa qualificada calcular as concentrações locais de WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente efica- zes, estabelecido pela injeção intradérmica, e, com base nestes valores, pa- ra determinar as quantidades adequadas de tais agentes que podem ser administrados por outras vias de modo a obter concentrações locais equiva- lentes.

Os inventores observaram que a WNT5A pode ser administrada por meio de uma solução injetável contendo entre 0,5 ng/100 μL e 750 ng/100 μL de um agente da invenção a fim de inibir cicatrizes ou tratar fibro- ses quando administrada como uma injeção intradérmica fornecendo 100 μL de solução por cm de margem de ferida ou cm2 de fibrose.

Será observado que a orientação quanto a doses e as quantida- des da WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente efica- zes, fornecidas acima, é aplicável tanto nos medicamentos da invenção quanto da mesma forma nos métodos da invenção.

No caso onde os parágrafos acima consideram a administração de uma quantidade específica de um medicamento por cm de uma ferida, será observado que esta pode ser administrada a qualquer uma ou ambas as margens de uma ferida a ser tratada.

A pessoa versada reconhecerá que a informação fornecida nos parágrafos anteriores quanto às quantidades ou volumes de WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes, que podem ser administradas nas feridas ou sítios de distúrbios fibróticos, pode ser variada pelo médico qualificado em resposta aos requisitos clínicos específicos de um paciente individual. Por exemplo, será observado que no caso de feridas particularmente profundas ou largas as quantidades fornecidas por meio da orientação acima podem ser variadas para cima, enquanto ainda fornece uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou fragmento ou deri- vados desta. As variações adequadas baseadas na orientação fornecida acima serão facilmente evidentes para aqueles de habilidade na técnica.

Os agentes da invenção podem ser usados para inibir cicatrizes ou tratar fibroses como uma monoterapia (por exemplo, através da utilização de medicamentos da invenção isoladamente). Alternativamente os métodos ou medicamentos da invenção podem ser utilizados em combinação com outros compostos ou tratamentos para a inibição de cicatriz ou tratamento de fibrose. Os compostos adequados que podem ser usados como partes de tais terapias de combinação serão bem-conhecidos daqueles versados na técnica.

A pessoa versada observará que quantidades terapeuticamente eficazes de agentes tais como a WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados, podem ser administradas nos locais das feridas ou distúrbios fibróticos onde se pretende inibir as cicatrizes ou tratar a fibrose em virtude da expressão celular (comumente referido como terapia genética). Tal expressão celular deve ser controlada de modo a evitar o acúmulo de quantidades não tera- pêuticas de tais agentes, ou mesmo quantidades que são capazes de exa- cerbar a cicatriz ou a fibrose. Consequentemente, a invenção fornece um método de inibição da formação de cicatriz, o método compreendendo indu- zir a expressão celular de uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivados desta, em um local onde cicatriz de- ve ser inibida. A invenção ainda fornece um método de tratamento de um distúrbio fibrótico, o método compreendendo induzir a expressão celular de uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado desta. Em ambos destes aspectos o conceito inventivo chave resi- de na regulação da expressão celular tal que uma quantidade terapeutica- mente eficaz de WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados, seja obtida.

Com base nos ensinos contidos no presente relatório descritivo, que definem pela primeira vez o fato chave de que apenas certas quantida- des ou concentrações de WNT5A (ou seus fragmentos ou derivados) são terapeuticamente eficazes, será uma questão de experimentação rotineira para uma pessoa versada na técnica conceber protocolos pelos quais as células podem ser induzidas a expressar quantidades terapeuticamente efi- cazes de WNT5A (ou seus fragmentos ou derivados).

Por exemplo, a pessoa versada observará que tal expressão celular de quantidades terapeuticamente eficazes de WNT5A pode ser al- cançada através da manipulação da expressão de ocorrência natural desta molécula por células na região da ferida ou do local de fibrose a ser tratada.

Alternativamente, e de preferência, as células na região da ferida ou local de fibrose que deve ser tratada podem ser induzidas a expressar WNT5A, ou seus fragmentos ou derivados terapeuticamente eficazes, por meio da introdução de materiais que codificam tais agentes. Os materiais adequados podem tipicamente compreender ácidos nucléicos tais como DNA ou RNA, e estes podem ser concebidos com base nas seqüências es- tabelecidas na Seqüência ID Nos. 1 e 2.

Os ácidos nucléicos para uso nesta modalidade da invenção po- dem ser administrados "como estão", por exemplo, por meio de transfecção balística, ou como partes de um grande constructo, que pode ser capaz de incorporar de forma estável em células deste modo transfectadas. Os cons- tructos adequados também podem conter elementos reguladores, pelos quais a expressão de uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivados desta, pode ser alcançada.

A invenção agora será ainda descrita por meio de exemplo com referência aos seguintes protocolos e estudos experimentais, e a seção de Informação de Seqüência acompanhante e Figuras em que: A seção de Informação de Seqüência mostra a seqüência de aminoácido da WNT5A humana (mostrada como Seqüência ID NO. 1), e a seqüência de cDNA que codifica a WNT5A humana (mostrada como Seqüência ID No. 2).

A Figura 1 compara as pontuações de VAS macroscópica de cicatrizes tratadas, cicatrizes não tratadas e cicatrizes tratadas com controle. Os resultados são apresentados na forma de um diagrama de barras mos- trando as pontuações de VAS macroscópica das cicatrizes formadas 70 dias após a lesão. "**" Indica ρ < 0,01 versus controles na'ive e diluente. "*" Indica ρ < 0,05 versus controle naíve e diluente. "X" indica ρ < 0,05 versus controle diluente apenas (sem controle naíve). A Figura 2 compara pontuações de VAS microscópica de cicatri- zes tratadas, cicatrizes não tratadas e cicatrizes tratadas com controle. Os resultados são apresentados sob a forma de um diagrama de barras mos- trando as pontuações de VAS microscópica para as cicatrizes formadas por 70 dias após a lesão. "**" Indica ρ < 0,01 versus controles naíve e diluente. Indica ρ < 0,01 versus controle naíve apenas (sem controle diluente).

A Figura 3 mostra imagens macroscópicas ilustrativas de uma cicatriz tratada (Painel A) e uma cicatriz não tratada (Painel B). As fotografi- as mostram a aparência macroscópica das cicatrizes 70 dias após a incisão. A cicatriz no painel A foi tratada com WNT5A em uma concentração de 10 ng/100 μΙ, enquanto a ferida que produz a cicatriz mostrada no painel B foi tratada (ferida naíve).

A Figura 4 mostra imagens macroscópicas ilustrativas das cica- trizes tratadas (Painéis A, B e C) e uma cicatriz tratada com controle (Painel D). As fotografias mostram aparência macroscópica das cicatrizes 70 dias após a incisão. As feridas foram tratadas com 1 ng/100 μΙ de WNT5A, 10 ng/100 μΙ de WNT5A ou 1000 ng/100 μΙ de WNT5A, ou com diluente isola- damente, como mostrado nas legendas.

A Figura 5 mostra imagens microscópicas ilustrativas comparan- do as cicatrizes produzidas na cicatrização de feridas tratadas com controle e ferimentos tratados com diferentes quantidades de WNT5A (incluindo tanto quantidades terapeuticamente eficazes quanto e quantidades não terapeuti- camente eficazes). As imagens foram tiradas de cicatrizes cutâneas de ratos 70 dias pós-lesão e tratamento. As imagens foram tiradas, em ampliação x5, das seções histológicas de cicatrizes manchadas com Tricromo de Masson. As setas indicam as bordas das cicatrizes resultantes seguinte ao ferimento de incisão de espessura total e tratamento. O 'S1 indica a cicatriz, 1ND1 indica a derme circundante normal.

Figura 6 compara as pontuações de VAS macroscópica de cica- trizes tratadas e cicatrizes tratadas com controle. Os resultados são apre- sentados sob a forma de um diagrama de barras mostrando as pontuações de VAS macroscópica das cicatrizes formadas 70 dias após a lesão. "**" In- dica ρ < 0,01 versus controles diluentes. "*" Indica ρ < 0,05 versus controle diluente.

A Figura 7 mostra imagens macroscópicas representativas que ilustram as cicatrizes produzidas na cicatrização de feridas tratadas com controle e feridas tratadas com WNT5A (como mostrado nas legendas). As cicatrizes foram fotografadas 70 dias após as incisões experimentais terem sido formadas.

Resultados Experimentais 1

Os inventores investigaram os efeitos da WNT5A sobre as cica- trizes utilizando em um modelo in vivo de formação de cicatriz e cicatrização. 1.1 Modelo de cicatrização da ferida com incisão e tratamento com WNT5A

WNT5A de camundongo recombinante (Número de catálogo #645-WN/CF; Lote MCR074091) foi adquirida da R&D Systems.

A WNT5A foi diluída em solução salina tamponada de fosfato

(PBS) para produzir três soluções tendo concentrações como se segue:

1. 1 η g/100 μl (uma solução de 0,22 nM);

2. 10 ng/100 μl (uma solução de 2,2 nM); e

3. 1000 ng/100 μl (uma solução de 220 nM).

PBS isoladamente foi utilizada como um controle de diluente.

Ratos Sprague Dawley machos adultos pesando 225 a 250 g foram anestesiados com halotano, oxigênio e óxido nitroso. No dia 0, os lo- cais da ferida foram marcados na pele dorsal e os locais da ferida foram inje- tados intradermicamente com 100 μΙ da WNT5A ou soluções de PBS antes do ferimento. As injeções intradérmicas causaram a formação de uma bolha levantada, que foi depois incisada para formar feridas experimentais longas de 1 cm. Feridas neíve (também 1 centímetro de comprimento) não recebe- ram nenhum tratamento.

As feridas tratadas e tratadas com controle foram re-tratados dia 1 pós-ferimento com o tratamento adequado através de injeção de 50 μl em cada uma das duas margens da ferida.

Consequentemente, cada injeção da solução de 1 ng/100 μl for- neceu 0,022 pmol de WNT5A, enquanto cada injeção da solução de 10 ng/100 μl forneceu 0,22 pmoles de WNT5A, e cada injeção da solução de 1000 η g/100 μΙ forneceu 22 pmoles de WNT5A.

As feridas tratadas com controle de diluente receberam PBS iso- ladamente (administrada no mesmo volume e pela mesma via como as solu- ções de WNT5A nas feridas tratadas), e as feridas de controle neíve não receberam nenhum tratamento.

1.2 Avaliação das cicatrizes

70 dias após o ferimento os ratos experimentais foram sacrifica- dos, e as cicatrizes resultantes das feridas tratadas e feridas de controle avaliadas tanto macroscópica quanto microscopicamente.

As cicatrizes dos ratos experimentais foram fotografadas e avali- adas utilizando lâminas de avaliação macroscópica da cicatriz. A avaliação macroscópica da cicatriz foi realizada utilizando uma escala análoga visual (VAS) consistindo em uma linha de 0 a 10 cm que representa uma escala, da esquerda para a direita, de 0 (correspondendo a pele normal) a 10 (indi- cativo de uma má cicatrização). Uma marca foi feita por um avaliador sobre a linha de 10 cm baseada em uma avaliação global da cicatriz, levando em conta os parâmetros tais como a altura, largura, contorno e cor da cicatriz. As melhores cicatrizes (tipicamente de pequena largura com cor, altura e contorno como a pele normal) foram pontuadas com respeito a pele normal final da escala (no lado esquerdo da linha VAS) e cicatrizes imperfeitas (tipi- camente de grande largura, levantadas com contornos irregulares e cor branca) foram pontuadas com respeito a cicatriz imperfeita final da escala (o lado direito da linha VAS). As marcas foram medidas a partir do lado es- querdo para fornecer o valor final para a avaliação da cicatriz em centíme- tros (em 1 casa decimal).

Para a avaliação microscópica as cicatrizes foram extirpadas dos ratos experimentais (incorporando uma pequena quantidade de tecido normal circundante) e a fixação das cicatrizes em 10 % (v/v) de solução sali- na tamponada formal. O tecido fixado foi depois processado com relação a histologia de cera. As lâminas histológicas foram manchadas usando tricro- mo de Masson, e as cicatrizes avaliadas utilizando uma escala análoga vi- suai microscópica (VAS). Isto consistiu de uma linha de 0 a 10 cm que re- presenta uma escala, da esquerda para a direita, de 0 (correspondendo a pele normal) a 10 (indicativo de uma má cicatrização). A marca foi feita na linha de 10 cm com base em uma avaliação global da cicatriz, levando em conta os parâmetros tais como o espaçamento, orientação e espessura da fibra de colágeno. As melhores cicatrizes (cicatrizes tipicamente estreitas com espessura e fibras de colágeno aleatoriamente organizadas que têm espaçamentos normais entre as fibras, semelhante à derme normal circun- dante) foram pontuadas com respeito a pele normal final da escala (o lado esquerdo da linha VAS) e cicatrizes imperfeitas (tipicamente cicatrizes gran- des com fibras de colágeno paralelas, finas, densamente acondicionadas) foram pontuadas com respeito a cicatriz imperfeita final da escala (o lado direito da linha VAS). As marcas foram medidas a partir do lado esquerdo para fornecer o valor final para a avaliação de cicatriz em centímetros (em 1 casa decimal).

Uma comparação das pontuações de VAS macroscópica de ci- catrizes formadas na cicatrização de feridas tratadas com WNT5A e feridas tratadas de controle é apresentada na Figura 2.

Uma comparação das pontuações de VAS microscópica de cica- trizes formadas na cicatrização de feridas tratadas com WNT5A e feridas tratadas de controle é apresentado na Figura 3.

Imagens representativas mostrando a aparência macroscópica das cicatrizes formadas na cicatrização de feridas tratadas com WNT5A e feridas tratadas de controle são mostradas nas Figuras 4 e 5. Imagens representativas mostrando a aparência macroscópica de cicatrizes formadas na cicatrização de feridas tratadas com WNT5A e feridas tratadas de controle são mostradas na Figura 6. .1.3 Resultados

A análise tanto macroscópica quanto microscópica das cicatrizes formadas a partir de feridas de incisão (avaliadas em 70 dias pós-lesão) mostrou que a adição de WNT5A nas feridas foi capaz de inibir significati- vamente a cicatriz. Surpreendentemente, os resultados mostram que quando a WNT5A é administrada em uma quantidade excessiva, o efeito de tal ad- ministração é para exacerbar as cicatrizes, em vez de inibir as cicatrizes.

A administração de WNT5A em concentrações de 1 ng/100 μΙ e 10 ng/100 μl significativamente inibiu a cicatriz, quando comparado com os controles (p < 0,05), quando avaliados usando uma VAS macroscópica ou microscópica. Estes resultados, que são mostradas nas figuras 2 e 3, sur- gem como um resultado das melhorias realizadas na abundância e orienta- ção de componentes ECM na derme. Estas melhorias microscópicas signifi- cativamente melhoram a aparência macroscópica das cicatrizes formadas.

Esta cicatriz que é efetivamente inibida por estas concentrações de WNT5A, é claramente ilustrada nas figuras 4, 5 e 6. As Figuras 4 e 5 mostram as imagens macroscópicas representativas de cicatrizes tratadas e tratadas de controle. As cicatrizes resultantes de feridas tratadas com quan- tidades terapeuticamente eficazes de WNT5A são consideravelmente mais difíceis de se detectar do que as cicatrizes produzidas na cicatrização de feridas não tratadas e tratadas de controle. A figura 6 mostra imagens mi- croscópicas representativas de lâminas histológicas de cicatrizes produzidas na cicatrização de feridas tratadas com WNT5A e não tratadas. Estas mos- tram que a deposição de moléculas da matriz extracelular, tal como o colá- geno, observada em cicatrizes tratadas com WNT5A mais se aproxima da disposição na pele não ferida do que a matriz extracelular em cicatrizes não tratadas. Esta diferença (isto é, esta semelhança aumentada com a pele não ferida) fica evidente no que refere-se tanto da quantidade de colágeno pre- sente quanto da orientação de dito colágeno.

Ao contrário, a administração de WNT5A em 1000 ng/100 μΙ sig- nificativamente aumentou a cicatriz quando comparado com os controles (p < 0,01). Este efeito foi observado com referência à avaliação tanto macros- cópica quanto microscópica, como mostrado nas figuras 2 e 3. A cicatriz aumentada produzida na administração de WNT5A em 1000 ng/100 μΙ pode ser vista tanto macroscópica quanto microscopicamente na Figura 5 e na Figura 6.

Resultados Experimentais 2 2.1 Molécula Alvo e Detalhes de Dose

WNT5A de camundongo recombinante foi adquirida da R&D Systems (Número de catálogo #645-WN/CF; Lote No: MCR136031. Massa molecular: 45kDa por SDS-PAGE (MW previsto é 38kDa)

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2.2 Resultados experimentais:

A WNT5A foi diluída em solução salina tamponada de fosfato

(PBS) para produzir nove soluções tendo concentrações como se segue:

1. 0,01 ng/100 μl (a 2.2 pM solution);

2. 0,1 ng/100 μl (uma solução de 22 pM);

3. 0,5 ng/100 μl (uma solução de 0,11 nM);

4. 1 ng/100 μl (uma solução de 0,22 nM);

5. 10 ng/100 μl (uma solução de 2,2 nM);

6. 100 ng/100 μl (uma solução de 22 nM);

7. 500 ng/100 μl (uma solução de 110 nM);

8. 750 ng/100 μl (uma solução de 165 nM); e

9. 1000 ng/100 μl (uma solução de 222 nM).

PBS isoladamente foi utilizado como um controle de diluente.

No dia 0, ratos Sprague Dawley machos adultos pesando de 225 a 250 g foram anestesiados usando halotano, oxigênio e oxido nitroso. Anal- gesia profilática foi administrada como 10 μg/kg de Buprenorfina por via sub- cutânea. O dorso dos ratos foi raspado e os locais feridos marcados de a- cordo com o modelo de ferimento com incisão de rato da Renovo (feridas de 2x1 cm em 5 cm a partir da base do crânio e 1 cm a partir da linha mediana em cada rato; posições de ferida A e B). Os locais feridos foram marcados na pele dorsal e os locais feridos foram injetados intradermicamente com 100 μl das soluções de WNT5A (ativa) ou PBS (controle de diluente) antes do ferimento. As injeções intradérmicas causaram a formação de uma bolha levantada, que foi depois incisada para formar feridas experimentais longas de 1 cm. Ambas as feridas foram dosados novamente 1 dia após a cirurgia, com WNT5a ou PBS (50 μΙ de tratamento/margem de ferida; total de 100 10 μl/local de ferida). Os animais foram alojados individualmente durante 7 dias pós-operatório e, posteriormente, alojados em pares e dado comida e água ad libitum até a colheita em 70 dias pós-ferimento.

Consequentemente, cada injeção da solução de 0,01 ng/100 μΙ forneceu 0,2 fmol de WNT5A; cada injeção da solução de 0,1 ng/100 μΙ for- neceu 2 fmoles de WNT5A; cada injeção da solução de 0,5 ng/100 μΙ forne- ceu 0,01 pmol de WNT5A; cada injeção da solução de 1 ng/100 μΙ forneceu 0,02 ρ mol de WNT5A; cada injeção da solução de 10 ng/100 μΙ forneceu 0,22 pmol de WNT5A; cada injeção da solução de 100 ng/100 μΙ forneceu 2.2 pmoles de WNT5A; cada injeção da solução de 500 ng/100 μΙ forneceu 11 pmoles de WNT5A; cada injeção da solução de 750 ng/100 μΙ forneceu 16,5 pmoles de WNT5A; e cada injeção da solução de 1000 ng/100 μΙ forne- ceu 22 pmoles de WNT5A.

2.3 Avaliação das cicatrizes

70 dias após o ferimento, os ratos experimentais foram sacrifica- dos, e as cicatrizes resultantes das feridas tratadas e feridas de controle avaliadas macroscopicamente.

As cicatrizes dos ratos experimentais foram fotografadas e avali- adas usando lâminas de avaliação macroscópica da cicatriz. A avaliação macroscópica da cicatriz foi realizada utilizando uma escala análoga visual (VAS) consistindo em uma linha de 0 a 10 cm que representa uma escala, da esquerda para a direita, de 0 (correspondendo a pele normal) a 10 (indi- cativo de uma má cicatrização). Uma marca foi feita por um avaliador sobre a linha de 10 cm baseada em uma avaliação global da cicatriz, levando em conta os parâmetros tais como a altura, largura, contorno e cor da cicatriz. As melhores cicatrizes (tipicamente de pequena largura com cor, altura e contorno semelhante a pele normal) foram pontuadas com respeito a pele normal final da escala (o lado esquerdo da linha VAS) e cicatrizes imperfei- tas (tipicamente de grande largura, levantadas com contornos irregulares e cor branca) foram pontuadas com respeito a cicatriz imperfeita final da esca- la (o lado direito da linha VAS). As marcas foram medidas a partir do lado esquerdo para fornecer o valor final para a avaliação da cicatriz em centíme- tros (em 1 casa decimal).

Uma comparação das pontuações de VAS macroscópica de ci- catrizes formadas na cicatrização de feridas tratadas com WNT5A e feridas tratadas com controle diluente é apresentada na Figura 1.

Imagens representativas mostrando a aparência macroscópica das cicatrizes formadas na cicatrização de feridas tratadas com WNT5A e feridas tratadas com controle diluente são mostradas na Figura 2.2.4 Resultados

A análise macroscópica das cicatrizes formadas a partir de feri- das de incisão (avaliadas em 70 dias pós-lesão) mostrou que a adição de WNT5A nas feridas foi capaz de inibir significativamente a cicatriz. Surpre- endentemente, os resultados mostram que quando a WNT5A é administrada em uma quantidade excessiva, o efeito de tal administração é aumentar as cicatrizes, acima daquela das feridas de controle diluente, em vez de inibir as cicatrizes.

A administração de WNT5A em concentrações de 0,5 ng/100 μl, 1 ng/100 μl, 10 ng/100 μl, 100 ng/100 μl e 750 ng/100 μl significativamente inibiu a cicatriz, quando comparado com os controles diluentes (p < 0,05), quando avaliados usando uma VAS macroscópica. Estes resultados, que são mostradas na figura 6, surgem como um resultado das melhorias reali- zadas na abundância e/ou orientação de componentes ECM na derme. Es- tas melhorias microscópicas significativamente melhoram a aparência ma- croscópica das cicatrizes formadas, tal que as feridas tratadas se parecem com a derme não ferida circundante.

Esta cicatriz que é efetivamente inibida por estas concentrações de WNT5A, é claramente ilustrada na figura 7 que mostra as imagens ma- croscópicas representativas de cicatrizes tratadas e tratadas de controle. As cicatrizes resultantes de feridas tratadas com quantidades terapeuticamente eficazes de WNT5A são consideravelmente mais difíceis de se detectar do que as cicatrizes produzidas na cicatrização de feridas tratadas de controle.

Ao contrário, a administração de WNT5A em 1000 ng/100 μΙ sig- nificativamente aumentou a cicatriz quando comparado com os controles (p < 0,01). Esta inibição da cicatriz, como observada com referência à avalia- ção macroscópica, é claramente mostrada nas Figuras 6 e 7. Estas Figuras respectivamente mostram as pontuações geradas na avaliação de VAS ma- croscópica das cicatrizes produzidas de feridas tratadas e de controle, e nas imagens macroscópicas representativas que ilustram as cicatrizes tratadas e cicatrizes de controle.

Os resultados mostram que uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A é capaz de inibir a cicatriz. Estes resultados também for- necem orientação de como as quantidades terapeuticamente eficazes e não terapeuticamente eficazes de WNT5A podem ser determinadas.

3. Sumário dos Resultados

Os resultados relatados nos pontos 1.3 e 2.4 acima claramente ilustram que uma quantidade terapeuticamente eficaz de WNT5A é capaz de inibir as cicatrizes. Estes resultados também fornecem orientações de como quantidades terapeuticamente eficazes e não terapeuticamente eficazes de WNT5A podem ser determinadas, assim como fornecem informações sobre a quantidade de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz desta, que pode constituir uma quantidade terapeuticamente eficaz capaz de inibir as cicatrizes se fornecida a um centímetro de ferida ou cicatriz.

Dadas as semelhanças entre os mecanismos biológicos envolvidos nas cicatrizes e distúrbios fibróticos, os resultados relatados acima também cla- ramente indicam que quantidades terapeuticamente eficazes de WNT5A são adequadas para a prevenção e/ou tratamento de distúrbios fibróticos. Listagem de Seqüência

Seqüência de aminoácido de WNT5A humana (Seqüência ID No. 1)

1 plqksigils pgvalgmags amsskfflva laiffsfaqv vieanswwsl gmnnpvqmse 61 vyiigaqplc sqlaglsqgq kklchlyqdh mqyigegakt gikecqyqfr hrrwncstvd 121 ntsvfgrvmq igsretafty avsaagwna msracregel stcgcsraar pkdlprdwlw 181 ggcgdnidyg yrfakefvda rererihakg syesarilmn lhnneagrrt vynladvack 241 chgvsgscsl ktcwlqladf rkvgdalkek ydsaaamrln srgklvqvns rfnspttqdl 301 vyidpspdyc vrnestgslg tqgrlcnkts egmdgcelmc cgrgydqfkt vqterchckf 361 hwccyvkckk cteivdqfvc k

Derivado de cDNA da seqüência de mRNA de WNT5A humana (Seqüência ID No. 1 agttgcctgc gcgccctcgc cggaccggcg gctccctagt tgcgccccga ccaggccctg 61 cccttgctgc cggctcgcgc gcgtccgcgc cccctccatt cctgggcgca tcccagctct 121 gccccaactc gggagtccag gcccgggcgc cagtgcccgc ttcagctccg gttcactgcg 181 cccgccggac gcgcgccgga ggactccgca gccctgctcc tgaccgtccc cccaggctta 241 acccggtcgc tccgctcgga ttcctcggct gcgctcgctc gggtggcgac ttcctccccg 301 cgccccctcc ccctcgccat gaagaagtcc attggaatat taagcccagg agttgctttg 361 gggatggctg gaagtgcaat gtcttccaag ttcttcctag tggctttggc catatttttc 421 tccttcgccc aggttgtaat tgaagccaat tcttggtggt cgctaggtat gaataaccct 481 gttcagatgt cagaagtata tattatagga gcacagcctc tctgcagcca actggcagga 541 ctttctcaag gacagaagaa actgtgccac ttgtatcagg accacatgca gtacatcgga 601 gaaggcgcga agacaggcat caaagaatgc cagtatcaat tccgacatcg aaggtggaac 661 tgcagcactg tggataacac ctctgttttt ggcagggtga tgcagatagg cagccgcgag 721 acggccttca catacgcggt gagcgcagca ggggtggtga acgccatgag ccgggcgtgc 781 cgcgagggcg agctgtccac ctgcggctgc agccgcgccg cgcgccccaa ggacctgccg 841 cgggactggc tctggggcgg ctgcggcgac aacatcgact atggctaccg ctttgccaag 901 gagttcgtgg acgcccgcga gcgggagcgc atccacgcca agggctccta cgagagtgct 961 cgcatcctca tgaacctgca caacaacgag gccggccgca ggacggtgta caacctggct 1021 gatgtggcct gcaagtgcca tggggtgtcc ggctcatgta gcctgaagac atgctggctg 1081 cagctggcag acttccgcaa ggtgggtgat gccctgaagg agaagtacga cagcgcggcg 1141 gccatgcggc tcaacagccg gggcaagttg gtacaggtca acagccgctt caactcgccc 1201 accacacaag acctggtcta catcgacccc agccctgact actgcgtgcg caatgagagc 1261 accggctcgc tgggcacgca gggccgcctg tgcaacaaga cgtcggaggg catggatggc 1321 tgcgagctca tgtgctgcgg ccgtggctac gaccagttca agaccgtgca gacggagcgc 13 81 tgccactgca agttccactg gtgctgctac gtcaagtgca agaagtgcac ggagatcgtg 1441 gaccagtttg tgtgcaagta gtgggtgcca cccagcactc agccccgctc ccaggacccg 1501 cttatttata gaaagtacag tgattctggt ttttggtttt tagaaatatt ttttattttt 1561 ccccaagaat tgcaaccgga accatttttt ttcctgttac catctaagaa ctctgtggtt 1621 tattattaat attataatta ttatttggca ataatggggg tgggaaccaa gaaaaatatt 1681 tattttgtgg atctttgaaa aggtaataca agacttcttt tgatagtata gaatgaaggg 1741 gaaataacac ataccctaac ttagctgtgt ggacatggta cacatccaga aggtaaagaa 1801 atacattttc tttttctcaa atatgccatc atatgggatg ggtaggttcc agttgaaaga 1861 gggtggtaga aatctattca caattcagct tctatgacca aaatgagttg taaattctct 1921 ggtgcaagat aaaaggtctt gggaaaacaa aacaaaacaa aacaaacctc ccttccccag 1981 cagggctgct agcttgcttt ctgcattttc aaaatgataa tttacaatgg aaggacaaga 2041 atgtcatatt ctcaaggaaa aaaggtatat cacatgtctc attctcctca aatattccat 2101 ttgcagacag accgtcatat tctaatagct catgaaattt gggcagcagg gaggaaagtc 2161 cccagaaatt aaaaaattta aaactcttat gtcaagatgt tgatttgaag ctgttataag 2221 aattaggatt ccagattgta aaaagatccc caaatgattc tggacactag atttttttgt 22 81 ttggggaggt tggcttgaac ataaatgaaa atatcctgtt attttcttag ggatacttgg 2341 ttagtaaatt ataatagtaa aaataataca tgaatcccat tcacaggttc tcagcccaag 2401 caacaaggta attgcgtgcc attcagcact gcaccagagc agacaaccta tttgaggaaa 2461 aacagtgaaa tccaccttcc tcttcacact gagccctctc tgattcctcc gtgttgtgat 2521 gtgatgctgg ccacgtttcc aaacggcagc tccactgggt cccctttggt tgtaggacag 2581 gaaatgaaac attaggagct ctgcttggaa aacagttcac tacttaggga tttttgtttc 2641 ctaaaacttt tattttgagg agcagtagtt ttctatgttt taatgacaga acttggctaa 2701 tggaattcac agaggtgttg cagcgtatca ctgttatgat cctgtgttta gattatccac 2761 tcatgcttct cctattgtac tgcaggtgta ccttaaaact gttcccagtg tacttgaaca 2821 gttgcattta taagggggga aatgtggttt aatggtgcct gatatctcaa agtcttttgt 2881 acataacata tatatatata tacatatata taaatataaa tataaatata tctcattgca 2941 gccagtgatt tagatttaca gtttactctg gggttatttc tctgtctaga gcattgttgt 3001 ccttcactgc agtccagttg ggattattcc aaaagttttt tgagtcttga gcttgggctg 3061 tggccctgct gtgatcatac cttgagcacg acgaagcaac cttgtttctg aggaagcttg 3121 agttctgact cactgaaatg cgtgttgggt tgaagatatc ttttttcttt tctgcctcac 3181 ccctttgtct ccaacctcca tttctgttca ctttgtggag agggcattac ttgttcgtta 70

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Claims (27)

1. Uso de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeutica- mente eficaz deste, na preparação de um medicamento para uso na preven- ção, redução ou inibição de cicatrizes.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, em que o medicamento é para uso na prevenção, redução ou inibição de cicatrizes em um tecido selecionado do grupo consistindo na: pele; olhos; vasos sangüíneos; sistema nervoso periférico ou central; tendões, Iigamentos ou músculo; cavidade o- ral, lábios e palato; fígado; coração; cérebro; tecidos digestivos; tecidos re- produtivos; cavidade abdominal; cavidade pélvica e cavidade torácica.

3. Uso de acordo com a reivindicação 2, em que o medicamento é para uso na prevenção, redução ou inibição de cicatrizes dérmicas.

4. Uso de acordo com a reivindicação 2, em que o medicamento é para uso na prevenção, redução ou inibição de cicatrizes nos olhos.

5. Uso de acordo com a reivindicação 1, para a prevenção, re- dução ou inibição de aderências, tais como aquelas que ocorrem no abdô- men, pélvis ou espinha dorsal; ou tendões.

6. Uso de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeutica- mente eficaz deste, na preparação de um medicamento para uso na preven- ção e/ou tratamento de um distúrbio fibrótico.

7. Uso de acordo com a reivindicação 6, em que o medicamento é para uso na prevenção e/ou tratamento de um distúrbio fibrótico selecio- nado do grupo consistindo em: fibrose da pele; escleroderma; fibrose sistê- mica progressiva; fibrose pulmonar; fibrose muscular; fibrose renal; glomeru- loesclerose; glomerulonefrite; fibrose uterina; fibrose renal; cirrose do fígado; fibrose hepática; aderências, tais como aquelas que ocorrem no abdômen, pélvis ou espinha dorsal; doença pulmonar obstrutiva crônica; fibrose seguin- te ao infarto do miocárdio; fibrose do sistema nervoso central, tal como fibro- se seguinte ao acidente vascular cerebral; fibrose associada com distúrbios neurodegenerativos tais como doença de Alzheimer ou esclerose múltipla; fibrose associada com vitreorretinopatia proliferativa (PVR); restenose; en- dometriose; doença isquêmica e fibrose de radiação.

8. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações prece- dentes, em que o medicamento é uma solução injetável compreendendo WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz deste.

9. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações prece- dentes, em que o medicamento é um medicamento tópico que compreende WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz deste.

10. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações prece- dentes, em que o medicamento compreende WNT5A de Seqüência ID no. 1.

11. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações prece- dentes, em que o medicamento compreende WNT5A recombinante.

12. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações prece- dentes, em que o fragmento terapeuticamente ativo de WNT5A compreende um fragmento submetido a palmitoíla de WNT5A.

13. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações, em que o derivado terapeuticamente ativo de WNT5A, ou um fragmento deste, é um derivado de peptóide.

14. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações prece- dentes, em que o WNT5A, ou fragmento ou derivado terapeuticamente ativo deste, é fornecido em uma quantidade terapeuticamente eficaz.

15. Uso de acordo com a reivindicação 10, em que o medica- mento fornece menos do que 2000 ng de WNT5A per cm linear de ferimento, ou cm2 de um ferimento ou distúrbio fibrótico, durante um período de 24 ho- ras.

16. Uso de acordo com a reivindicação 10, em que o medica- mento fornece menos do que 1600 ng de WNT5A per cm linear de ferimento, ou cm2 de um ferimento ou distúrbio fibrótico, durante um período de 24 ho- ras.

17. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações prece- dentes, em que o medicamento fornece menos do que 0,2 ng de WNT5A per cm linear de ferimento, ou cm2 de um ferimento ou distúrbio fibrótico, durante um período de 24 horas.

18. Uso de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeutica- mente eficaz deste, na preparação de um medicamento para a administra- ção entre 0,01 e 33 picomols de WNT5A, ou o fragmento ou derivado, per cm linear de um ferimento.

19. Uso de acordo com a reivindicação 18, em que o medica- mento é para a administração entre 0,02 e 16,5 picomols de WNT5A, ou o fragmento ou derivado, per cm linear de um ferimento.

20. Uso de acordo com a reivindicação 18 ou reivindicação 19, em que e o medicamento é para uso na prevenção, redução ou inibição de cicatrizes.

21. Uso de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeutica- mente eficaz deste, na preparação de um medicamento para a administra- ção entre 0,01 e 33 picomols de WNT5A, ou o fragmento ou derivado, per cm2 de fibrose associada com um distúrbio fibrótico.

22. Uso de acordo com a reivindicação 21, em que o medica- mento é para a administração entre 0,02 e 16,5 picomols de WNT5A, ou o fragmento ou derivado, per cm linear de um ferimento.

23. Uso de acordo com a reivindicação 21 ou reivindicação 22, em que o medicamento é para uso na prevenção e/ou tratamento do distúr- bio fibrótico.

24. Uso de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeutica- mente eficaz deste, na preparação de um medicamento para a prevenção, redução ou inibição de cicatrizes, em que o padrão de administração para o medicamento compreende a administração de uma quantidade terapeutica- mente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado deste, antes da for- mação de um ferimento, e a administração de uma outra quantidade tera- peuticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado deste, após a formação do ferimento.

25. Método de prevenção, redução ou inibição de cicatrizes, o método compreendendo a administração de uma quantidade terapeutica- mente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz deste, em um paciente com necessidade de tal prevenção, redução ou inibição.

26. Método de prevenção e/ou tratamento de um distúrbio fibró- tico, o método compreendendo a administração de uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de WNT5A, ou um fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz deste, a um paciente com necessidade de tal prevenção e/ou trata- mento.

27. Método de acordo com a reivindicação 25 ou reivindicação 26, em que o WNT5A, ou fragmento ou derivado terapeuticamente eficaz deste, é administrado por meio de um medicamento fabricado como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 24.