BRPI0514826B1 - métodos de tratamento de materiais vegetais pré-ensilados, método para intensificar a digestão de fibras vegetais em um animal e composição para o uso como um inóculo de silagem - Google Patents

métodos de tratamento de materiais vegetais pré-ensilados, método para intensificar a digestão de fibras vegetais em um animal e composição para o uso como um inóculo de silagem Download PDF

Info

Publication number
BRPI0514826B1
BRPI0514826B1 BRPI0514826-0A BRPI0514826A BRPI0514826B1 BR PI0514826 B1 BRPI0514826 B1 BR PI0514826B1 BR PI0514826 A BRPI0514826 A BR PI0514826A BR PI0514826 B1 BRPI0514826 B1 BR PI0514826B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
lactobacillus
deposited
patent deposit
strain
nrrl
Prior art date
Application number
BRPI0514826-0A
Other languages
English (en)
Inventor
Victor Nsereko
William Rutherford
Brenda K. Smiley
Annette Spielbauer
Original Assignee
Pioneer Hi-Bred International, Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=35395418&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=BRPI0514826(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Pioneer Hi-Bred International, Inc filed Critical Pioneer Hi-Bred International, Inc
Publication of BRPI0514826A publication Critical patent/BRPI0514826A/pt
Publication of BRPI0514826B1 publication Critical patent/BRPI0514826B1/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
    • A23K30/10—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder
    • A23K30/15—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging
    • A23K30/18—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging using microorganisms or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
    • C12P5/02—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons acyclic
    • C12P5/023—Methane
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/24—Lactobacillus brevis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/30—Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
    • Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
    • Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production

Abstract

COMPOSIÇÕES PAPA O USO COMO INÓCULOS DE SILAGEM, MÉTODOS DE TRATAMENTO DE MATERIAIS VEGETAIS PRÉ-ENSILADOS E LINHAGEM BACTERIANA SUBSTANCIALMENTE PURIFICADA. São descritas, na invenção, linhagens bacterianas produtoras de ferulato esterase ou linhagens mutantes funcionais destas. A invenção provê, ainda, métodos para uso das mesmas como aditivo de forragem.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[0001] São descritos organismos que produzem ferulato esterase e métodos de uso dos mesmos para intensificar digestão de fibra vegetal em animais, assim como, intensificar a preservação de forragem ensilada.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[0002] A parede celular vegetal é uma complexa estrutura consistindo de diferentes polissacarideos, sendo os principais componentes celulose, hemiceluloses e pectinas. Esses polissacarideos podem ser ligados cruzadamente, ou ligados a lignina por grupos de ácidos fenólicos, tais como ácido ferúlico. Ácido ferúlico pode desempenhar um papel no controle de crescimento de parede celular na planta e acredita-se que a ligação cruzada de ácido ferúlico na parede celular restrinja a digestão de parede celular por microorganismos (Fry et al. , (1983) Planta 157: 111-123; e Borneman et al., (1990) Appl. Microbial. Biotechnol. 33: 345-351) . A resistência da parede celular vegetal à digestão apresenta desafios significantes na indústria de produção animal. Alguns microorganismos são conhecidos por exibir atividade de ácido ferúlico esterase (ferulato esterase) e, dessa forma, facilitar a quebra de paredes celulares vegetais e digestão de fibras (US 6.143.543).
[0003] No presente, na agricultura de criação, enquanto uma dieta de alta grau de forragem é desejável, isso não satisfaz a demanda da produção animal moderna. A digestão de fibras é um fator limitante a produção e composição de leite do rebanho leiteiro, a para a produção de carne em operações de alimentação com dieta de alto grau de forragem de rebanhos de corte e, assim, restringe a lucratividade de fazendeiros. Intensificar a digestão de fibras possui um impacto duplo: 1) o animal come mais devido a um reduzido preenchimento do trato digestivo e, portanto, produz mais, e 2) o animal obtém mais daquilo que come, já que a fibra é mais digerível. Finalmente, essas mudanças deveriam aumentar a produção de leite, em vacas leiteiras, e produção de carne em animais alimentados com forragem. Fazendeiros devem agüentar um nivel menor de digestibilidade de alimentação e, assim, produtividade, ou podem usar inóculos, aditivos de forragem ou outros aperfeiçoamentos que melhorem a digestibilidade da alimentação.
[0004] Conseqüentemente, fazendeiros podem tratar alimentos ensilados ou outro alimento de animais com enzimas que degradem fibras, originando-se, principalmente, de fungos, para melhorar a digestibilidade da alimentação. Além disso, existem diversas linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae comercialmente disponíveis que, quando fornecidas como alimento a gado melhoraram, reportadamente, a digestão de fibras (Erasmus et al., (1992) J. Dairy Sei. 75: 3056-3065; e Wohlt et al., (1998) J. Dairy Sci. 81: 1345-1352) . Uma abordagem alternativa para melhorar a digestão de fibras é a provisão de uma dieta possuindo boas características de digestibilidade inerentes. Para silagem de milho, isso pode incluir silagem de veio foliar principal de milho marrom (Oba &Allen, (1999) J. Dairy Sci. 82: 135-142), ou alternativamente, milho hibrido reconhecido como sendo altamente digerível. Ainda, novas tecnologias incorporam gene(s) de fungos responsáveis pela produção de ferulato esterase em tecido vegetal para subseqüente expressão, resultando em melhoramentos na digestibilidade de fibras (WO 02/68666).
[0005] Geralmente, para um animal fazer uso eficiente do alimento que consome, as demandas de energia dos microorganismos no trato digestivos devem ser encontradas e sincronizadas com a disponibilidade de proteínas vegetais. Uma falta de sincronia levará a a) proteínas e outros nutrientes sendo pobremente utilizados no trato digestivo, b) uma perda de nitrogênio, na urina e fezes e c) uma necessidade de dar excessivas quantidades de alimento de concentrados de proteína como suplementos à dieta. O uso de organismos e enzimas pode melhoras ou intensificar o valora da alimentação que os animais recebem e a performance dos animais. Por exemplo, WO 92/10945 descreve tal combinação para uso em intensificar o valor de silagem preparada. WO 93/13786 e WO 96/17525 relatam o melhoramento da performance animal usando microorganismos, enquanto que WO 93/3786 refere-se a uma espécie de Lactobacillus. Ainda, foi mostrado que Lactobacillus buchneri é adequado como um alimento microbiano direto para melhorar a performance de um animal (US 6.699.514).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0006] Foi descoberto, agora, que linhagens celulares bacterianas produtoras de ferulato esterase ou mutantes funcionais destas são adequadas para uso como um inóculo de silagem para melhorar a digestibilidade de fibras.
[0007] Foi descoberto, ainda, que a digestão de fibras vegetais em um animal é intensificada fornecendo ao animal uma quantidade efetiva de uma composição contendo ferulato esterase, caracterizado pelo fato de que o ferulato esterase é derivado de uma linhagem bacteriana ferulato esterase ou mutante funcional desta.
[0008] Incorporações da presente invenção provêm métodos de tratar a alimentação animal ou silagem como as linhagens bacterianas produtoras de ferulato esterase aqui descritas, assim como o animal tratado alimentado ou a própria silagem. São também providos métodos de melhorar a performance animal fornecendo a alimentação animal inoculada ou silagem.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0009] Antes de descrever em detalhe as incorporações da presente invenção, deve ser entendido que as incorporações dessa invenção não estão limitadas a composições ou métodos particular de melhorar a digestibilidade de forragem ensilada, o que pode, obviamente, variar. Também deve ser entendido que a terminologia aqui usada é para o propósito de descrever apenas incorporações em particular, e não pretende ser limitante.
[0010] Como usado nessa especificação e nas reivindicações em seguida, as formas no singular "um,""uma" e "o (a)" podem incluir referentes no plural, a menos que o conteúdo indique claramente ao contrário. Assim, por exemplo, referência a "um componente" pode incluir uma combinação de dois ou mais componentes; referência a "alimentação" pode incluir misturas de alimentos, e similares.
[0011] A menos que definido ao contrário, todos termos técnicos e científicos aqui usados possuem o mesmo significado como normalmente entendido por um de habilidade ordinária na arte, à qual as incorporações da invenção pertencem. Vários métodos e materiais similares, modificados, ou equivalentes àqueles aqui descritos podem ser usados na prática das incorporações da presente invenção sem desfazer uma experimentação, os materiais e métodos preferidos estão descritos aqui. Quando descrevendo e reivindicando as incorporações da presente invenção, a seguinte terminologia será usada em concordância às definições expostas abaixo.
[0012] O termo "digestibilidade," como aqui usado, refere- se à habilidade de derivar nutrientes solúveis de um alimento vegetal. A digestibilidade pode ser determinada, e.g., por análises que provêm dados de testes indicando a quantidade de residues de alimento restando em uma digestão e/ou por análises que provêm dados de testes indicando a quantidade de nutrientes liberados de um alimento em uma digestão.
[0013] O termo "disponibilidade de nutriente(s)", como aqui usado, refere-se à quantidade de nutrientes solúveis disponibilizados em uma digestão. A disponibilidade de nutrientes pode ser uma medida da digestibilidade do alimento. A disponibilidade de nutrientes em material vegetal para alimentação pode ser determinada testando-se: materiais vegetais para alimentação, materiais vegetais para alimentação tratados com composições da invenção, materiais vegetais para alimentação ensilados, materiais vegetais para alimentação digeridos in vitro,materiais vegetais para alimentação digeridos in situ,e/ou similares. Testes para medição de disponibilidade de nutrientes podem incluir, e.g., cromatografia de gás, testes de açúcar, testes de aminoácidos, testes de ácidos graxos livres, testes de ácidos graxos voláteis, testes de carboidratos, e/ou similares.
[0014] O termo "inoculação", como aqui usado, refere-se à introdução de micróbios viáveis a um meio ou material vegetal para alimentação.
[0015] O termo "material vegetal", como aqui usado, refere- se a material de origem vegetal. Material vegetal para alimentação pode ser material vegetal que pretende ser fornecido como alimento a um animal.
[0016] O termo "meio condicionado", como aqui usado, refere-se a um meio das incorporações da invenção, no qual espécies de bactérias produtoras de ferulato esterase foram cultivadas. Tais meios são ditos de serem condicionados, e.g., pela liberação de metabólitos, inibidores, e/ou enzimas no meio das bactérias produtoras de ferulato esterase.
[0017] Unidades, prefixos, e simbolos podem ser denotados em suas formas SI. Variações numéricas citadas na especificação são inclusivas dos números definindo a variação e incluem cada número inteiro na variação definida.
[0018] Como aqui usado, "mutante funcional" significa uma linhagem bacteriana diretamente ou indiretamente obtida por modificação genética de, ou usando, a(s) linhagem(s) referência(s) e retendo ao menos 50% da atividade de uma silagem controle usando a linhagem referenciada. A modificação genética pode ser alcançada através de várias maneiras, tais como, mas não limitando-se a, mutagênicos químicos, radiação ionizante, mutagênese baseada em transposon,ou via conjugação, transdução, ou transformação usando as linhagens referenciadas tanto como o recipiente ou doados de material genético.
[0019] Como aqui usado, "isolado" significa removido de uma fonte natural, tal como de uma silagem não inoculada ou outro material vegetal.
[0020] Como aqui usado, "purificada" significa que uma espécie de bactéria ou linhagem é substancialmente separada de, e enriquecida relativamente a: leveduras, fungos, e/ou outras espécies de bactérias ou linhagens encontradas na fonte da qual foi isolada.
[0021] Como aqui usado, "performance animal" significa a produção de carne, leite, ovos, prole, ou trabalho.
[0022] O termo "silagem" como aqui usado pretende incluir todos tipos de produtos agrícolas fermentados, tais como silagem de gramineas, silagem de alfafa, silagem de trigo, silagem de leguminosa, silagem de girassol, silagem de cevada, silagem de pé-de-milho (WPCS), silagem de sorgo, misturas de grãos e grama fermentados, etc.
[0023] Como aqui usado, "material vegetal pré-ensilado" significa gramineas, milho, alfafa e outros legumes, trigo, sorgo, girassol, cevada e misturas destas. Todas as quais podem ser tratadas com sucesso como os inóculos com os inóculos das incorporações da presente invenção. Os inóculos das incorporações da presente invenção são também úteis para tratar milho de alta mistura (HMC).
[0024] Uma incorporação da invenção é uma composição para uso como inóculo de silagem compreendendo uma linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou uma mutante funcional desta e um carregador adequado. Linhagens celulares bacterianas produtoras de ferulato esterase adequadas ou mutantes funcionais destas incluem linhagens de Lactobacillus. Linhagens de Lactobacillusprodutoras de ferulato esterase ou mutantes funcionais desta incluem Lactobaci11us buchneri OU mutante funcional desta, Lactobacillus plantarum OU mutante funcional desta, Lactobacillus brevis OU mutante funcional desta, Lactobacillus reuteri OU mutante funcional desta, Lactobacillus alimentariusou mutante funcional desta, Lactobacillus crispatus OU mutante funcional desta, e Lactobacillus paraliment arius ou mutante funcional desta. Linhagens adequadas produtoras de ferulato esterase de Lactobaci11us buchneri OU mutante funcional desta, Lactobacillus plantarum OU mutante funcional desta, Lactobacillus brevis OU mutante funcional desta, Lactobacillus reuteri OU mutante funcional desta, Lactobacillus alimentarius < eu mutante funcional desta, Lactobacillus crispatus OU mutante funcional de sta, e Lactobacillus paralimentarius ou mutante funcional desta incluem Lactobacillus buchneri, linhagem LN4017, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6138, Lactobacillus plantarum, linhagem LP678, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6134, Lactobacillus plantarum, linhagem LP3710, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA—6136, Lactobacillus plantarum, linhagem LP3779, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6137, Lactobacillus plantarum, linhagem LP7109, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6139, Lactobacillus brevis,linhagem LB1154, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30865, Lactobaci11us buchneri, linhagem LN4888, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional B- 30866, Lactobacillus reuteri, linhagem LR4933, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30867, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2127, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30868, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2350, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30869, Lactobacillus crispatus linhagem LI2366, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30870, Lactobacillusde espécie desconhecida, linhagem UL3050, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B- 30871, e misturas destas.
[0025] Em uma incorporação da invenção, a composição contém entre cerca de 101 a cerca de 1010 de organismos viáveis de linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou mutante funcional desta por grama de material vegetal pré- ensilado. Em uma incorporação da invenção adicional, a composição contém entre cerca de 102 a cerca de 107 de organismos viáveis da linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou mutante funcional desta por grama de material vegetal pré-ensilado. Ainda, em uma incorporação adicional, a composição contém entre cerca de 103 a cerca de 106 de organismos viáveis da linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou mutante funcional desta por grama de material vegetal pré-ensilado.
[0026] Carregadores adequados são tanto líquidos como sólidos e são bem conhecidos por aqueles especialistas na arte. Por exemplo, carregadores sólidos podem ser feitos de carbonato de cálcio, amido, celulose e combinações destes.
[0027] Uma incorporação da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus buchneri, linhagem LN4017, tendo o número de acesso ATCC Accession No. PTA- 6138. Uma incorporação adicional da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus plantarum, linhagem LP678, tendo o número de acesso ATCC Accession No. PTA- 6134. Outra incorporação da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus plantarum, linhagem LP3710, tendo o número de acesso ATCC Accession No. PTA- 6136. Uma incorporação adicional da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus plantarum, linhagem LP3779 tendo o número de acesso ATCC Accession No. PTA- 6137. Uma incorporação adicional da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus plantarum, linhagem LP7109 tendo o número de acesso ATCC Accession No. PTA- 6139. Outra incorporação da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 tendo o número de acesso ATCC Accession No. PTA-6135. Uma incorporação adicional da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus brevis, linhagem LB1154, número de acesso ARS Accession No. NRRL B- 30865. Outra incorporação da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus buchneri, linhagem LN4888, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30866. Uma incorporação adicional da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus reuteri, linhagem LR4933, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30867. Uma incorporação adicional da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus crispatus, linhagem LI2127, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30868. Outra incorporação da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus crispatus, linhagem LI2350, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30869. Uma incorporação adicional da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus crispatus, linhagem LI2366, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30870. Outra incorporação da invenção é uma cultura biologicamente pura de Lactobacillus de espécie desconhecida, linhagem UL3050, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30871.
[0028] Um depósito dos seguinte microorganismos foi feito na American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209: Lactobacillus buchneriLN4017 (número de acesso ATCC Accession No. PTA- 6138), Lactobacillus plantarum LP678 (número de acesso ATCC Accession No. PTA-6134), Lactobacillus plantarum LP3710 (número de acesso ATCC Accession No. PTA-6136), Lactobacillus plantarum LP3779 (número de acesso ATCC Accession No. PTA-6137), Lactobacillus plantarum LP7109 (número de acesso ATCC Accession No. PTA-6139) e Lactobacillus paracasei tolerans LC3200 (número de acesso ATTC Accession No. PTA-6135). Esses organismos foram depositados em 3 de agosto de 2004. Os microorganismos depositados na ATCC foram retirados do mesmo depósito mantido na Pioneer Hi-Bred International, Inc (Des Moines, IA) . Solicitante(s) encontrarão todos os requerimentos de 37 C.F.R. § 1.801 - 1.809, incluindo provir uma indicação da viabilidade da amostra quando o depósito é feito. Cada depósito será mantido sem restrição no depositório da ATCC, o qual é um depositório público, por um periodo de 30 anos, ou 5 anos após o pedido mais recente, ou pela vida útil da patente, o que quer que seja mais duradouro, e será substituído caso se torne inviável durante aquele periodo. Contudo, deveria ser entendido que a disponibilidade de um depósito não constitui uma licença para a prática da presente invenção em depreciação dos direitos de patente concedidos por ação governamental.
[0029] As linhagens indicadas abaixo foram depositadas em 6 de agosto de 2005 na Agricultural Research Service (ARS) Culture Collection, hospedado na Microbial Genomics and Bioprocessing Research Unit do National Center for Agricultural Utilization Research (NCAUR), sob as provisões do tratado de Budapeste. Às linhagens foram dadas os seguintes números de acesso. O endereço de NCAUR é 1815 N. University Street, Peoria, IL, 61604. Os depósitos estarão disponíveis ao público, irrevogavelmente e sem restrição ou condição, com a emissão de uma patente. Contudo, deveria ser entendido que a disponibilidade de um depósito não constitui uma licença para praticar a presente invenção em depreciação de direitos de patente governo: Lactobacillus brevisLB1154, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30865; Lactobacillus buchneri LN4888, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30866; Lactobacillus reuteriLR4933, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30867; Lactobacillus crispatus LI2127, ARS Accession No. NRRL B-30868; Lactobacillus crispatus LI2350, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30869; Lactobacillus crispatus LI2366, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30870.
[0030] A linhagem indicada abaixo foi depositada em 16 de agosto de 2005 na Agricultural Research Service (ARS) Culture Collection, hospedada na Microbial Genomics and Bioprocessing Research Unit do National Center for Agricultural Utilization Research (NCAUR), sob as provisões do tratado de Budapeste. A linhagem recebeu o número de acesso indicado. O endereço de NCAUR é 1815 N. University Street, Peoria, IL, 61604. O depósito estará disponível ao público, irrevogavelmente e sem restrição ou condição, com a emissão de uma patente.
[0031] Contudo, deveria ser entendido que a deveria ser entendido que a disponibilidade de um depósito não constitui uma licença para praticar a presente invenção em depreciação de direitos de patente concedidos por ação do governo: Lactobacillusde espécie desconhecida UL3050, número de acesso ARS Accession No. NRRL B-30871.
[0032] É também descrito um método para tratar material vegetal pré-ensilado para intensificar a digestibilidade da silagem resultante através de adição, ao material vegetal pré-ensilado, de uma quantidade intensificadora de digestibilidade de silagem da composição contendo a linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase, ou uma mutante funcional desta. Materiais vegetais pré-ensilados incluem gramineas, milho, alfafa e outras leguminosas, trigo, sorgo, girassol, cevada e misturas destas.
[0033] Uma incorporação da invenção é um método para intensificar a digestão de fibras vegetais em um animal, fornecendo, ao animal, uma quantidade efetiva de uma composição contendo ferulato esterase, caracterizado pelo fato de que a ferulato esterase é derivada de uma linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou uma mutante funcional desta. Linhagens celulares bacterianas produtoras de ferulato esterase ou mutantes funcionais destas adequadas incluem linhagens de Lactobacillus. Linhagens adequadas de Lactobacillusincluem Lactobacillus buchneriou mutante funcional desta, Lactobacillus plantarum ou mutante funcional desta, Lactobacillus brevis ou mutante funcional desta, Lactobacillus reuteri ou mutante funcional desta, Lactobacillus alimentarius ou mutante funcional desta, Lactobacillus crispatus ou mutante funcional desta, e Lactobacillus paralimentarlus ou mutante funcional desta. Suitable Lactobacillus buchneri ou mutante funcional desta, Lactobacillus plantarum ou mutante funcional desta, Lactobacillus brevisou mutante funcional desta, Lactobacillus reuteri ou mutante funcional desta, Lactobacillus alimentarius ou mutante funcional desta, Lactobacillus crispatus ou mutante funcional desta, e Lactobacillus paralimentarlus ou mutante funcional desta incluem Lactobacillus buchneri, linhagem LN4017, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6138, Lactobacillus plantarum, linhagem LP678, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6134, Lactobacillus plantarum, linhagem LP3710, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6136, Lactobaci11us plantarum, linhagem LP3779, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6137, Lactobaci11us plantarum, linhagem LP7109, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6139, Lactobacillus brevis,linhagem LB1154, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30865, Lactobacillus buchneri, linhagem LN4888, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL B-30866, Lactobacillus reuteri, linhagem LR4933, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30867, Lactobacillus crispatus,linhagem LI2127, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30868, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2350, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30869, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2366, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30870, Lactobacillusde espécie desconhecida, linhagem UL3050, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B- 30871, e misturas destas.
[0034] A composição que é fornecida ao animal foi tratada com uma quantidade catalítica efetiva da linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou mutante funcional desta, como é prontamente determinável por aqueles especialistas na arte em criação animal. Animais que são beneficiados por incorporações da presente invenção são mamíferos e aves, incluindo, mas não limitando-se a, ruminantes, eqüinos, bovinos, suinos, caprinos, ovinos e espécies de aves, e.g., aves domésticas.
[0035] Uma incorporação adicional da invenção é uma composição para uso como inoculo de silagem compreendendo uma quantidade intensificadora de digestibilidade de silagem de Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6135 ou uma mutante funcional desta, a linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou uma mutante funcional desta, e um carregador adequado. Linhagens celulares bacterianas produtoras de ferulato esterase adequadas ou mutantes funcionais destas incluem linhagens de Lactobacillus.Linhagens produtoras de ferulato esterase adequadas de Lactobacillus strains ou mutantes funcionais desta incluem Lactobacillus buchneri ou mutante funcional desta, Lactobacillus plantarumou mutante funcional desta, Lactobacillus brevisou mutante funcional desta, Lactobacillus reuteri ou mutante funcional desta, Lactobacillus alimentarius ou mutante funcional desta, Lactobacillus crispatus ou mutante funcional desta, e Lactobacillus paralimentarius ou mutante funcional desta. Linhagens de Lactobacillus buchneri adequadas produtoras de ferulato esterase ou mutante funcional desta, Lactobacillus plantarum ou mutante funcional desta, Lactobacillus brevis ou mutante funcional desta, Lactobacillus reuteri ou mutante funcional desta, Lactobacillus alimentarius ou mutante funcional desta, Lactobacillus crispatus ou mutante funcional desta, e Lactobacillus paralimentarius ou mutante funcional desta, incluem Lactobacillus buchneri, linhagem LN4017, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6138, Lactobacillus plantarum, linhagem LP678, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6134, Lactobacillus plantarum, linhagem LP3710, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6136, Lactobacillus plantarum, linhagem LP3779, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6137, Lactobacillus plantarum, linhagem LP7109, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6139, Lactobacillus brevis,linhagem LB1154, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30865, Lactobacillus buchneri, linhagem LN4888, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30866, Lactobacillus reuteri, linhagem LR4933, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B- 30867, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2127, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30868, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2350, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30869, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2366, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30870, Lactobacillus de espécie desconhecida, linhagem UL3050, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30871, e misturas destas.
[0036] Em uma incorporação da invenção a composição contém entre cerca de 101 a cerca de 1010 de organismos viáveis de Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 ou mutante funcional desta por grama de material vegetal pré- ensilado e entre cerca de 101 a cerca de 1010 de organismos viáveis da linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou mutante funcional desta por grama de material vegetal pré-ensilado. Em uma incorporação adicional da invenção, a composição contém entre cerca de 102 a cerca de 107 de organismos viáveis de Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 ou mutante funcional desta por grama de material vegetal pré-ensilado e entre cerca de 102 a cerca de 107 de organismos viáveis da linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou mutante funcional desta por grama de material vegetal pré-ensilado. Ainda, em uma incorporação adicional da invenção a composição contém entre cerca de 103 a cerca de 10° de organismos viáveis de Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 ou mutante funcional desta por grama de material vegetal pré- ensilado e entre cerca de 103 a cerca de 10° de organismos viáveis da linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase ou mutante funcional desta por grama de material vegetal pré-ensilado.
[0037] Uma incorporação da invenção é uma linhagem substancialmente purificada de uma bactéria selecionada do grupo consistindo de Lactobacillus buchneri, linhagem LN4017, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6138, Lactobacillus plantarum, linhagem LP678, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6134, Lactobacillus plantarum, linhagem LP3710, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6136, Lactobacillus plantarum, linhagem LP3779, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6137, Lactobacillus plantarum, linhagem LP7109, depositada como Depósito para fins de patente No. PTA-6139, Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 tendo o número de acesso ATCC Accession No. PTA-6135, Lactobaci11 us brevis,linhagem LB1154, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30865, Lactobacillus buchneri, linhagem LN4888, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL B-30866, Lactobacillus reuteri, linhagem LR4933, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30867, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2127, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30868, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2350, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30869, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2366, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B-30870, Lactobacillusde espécie desconhecida, linhagem UL3050, depositada como Depósito para fins de patente na Autoridade Depositária Internacional NRRL No. B- 30871, e misturas destas.
[0038] Em uma incorporação adicional da invenção Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 em combinação com Lactobacillus buchneri linhagem LN4017, não apenas intensifica a digestão de fibras vegetais em animais, mas a combinação também intensifica a preservação da forragem ensilada melhorando ambas fermentação e estabilidade aeróbica da silagem. Em uma incorporação adicional da invenção Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 em combinação com Lactobacillus plantarum linhagem LP3779 não apenas intensifica a digestão de fibras vegetais em animais, mas a combinação também intensifica a preservação da forragem ensilada melhorando a fermentação da silagem. Em uma incorporação adicional da invenção Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 em combinação com Lactobacillus plantarum linhagem LP7109 não apenas intensifica a digestão de fibras vegetais em animais, mas a combinação também intensifica a preservação da forragem ensilada melhorando a fermentação da silagem. Em outra incorporação da invenção Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 em combinação com Lactobaci11us buchneri linhagem LN4017 e Lactobacillus plantarumlinhagem LP7109 não apenas intensifica a digestão de fibras vegetais em animais, mas a combinação também intensifica a preservação da forragem ensilada melhorando ambas fermentação e estabilidade aeróbica da silagem. Métodos de usar culturas misturadas para melhorar tanto a fermentação ou estabilidade aeróbica de silagem são descritos em US 6.403.804.
[0039] Incorporações da presente invenção são ainda definidas nos seguintes exemplos. Deveria ser entendido que esses exemplos, enquanto indicando certas incorporações da invenção, são fornecidos para fins de ilustração apenas. A partir da discussão acima e desses exemplos, um especialista na arte pode averiguar as características essenciais dessa invenção, e sem deixar o espirito e escopo desta, pode fazer várias mudanças e modificações das incorporações da invenção para adaptá-la a vários usos e condições. Assim, várias modificações das incorporações da invenção, além daquelas aqui mostradas e descritas, serão aparentes àqueles especialistas na arte, a partir da precedente descrição. É pretendido que tais modificações também caiam no escopo das reivindicações em seguida.
[0040] A descrição de cada referência aqui relatada é aqui incorporada por referência em sua integridade. Exemplo 1 - Efeito de Aditivos de Silagem na Digestibilidade Nutrientes em Carneiros
[0041] Plantas de milho para forragem (WPCF) foram colhidas inteiras com um cutelo marca John Deere 3950 para forragem, o tamanho teórico do cutelo de forragem foi de 3/8 a 1/2 polegada (0,95 a 1,27 cm) . Os tratamentos com inóculos de Lactobacillus paracasei tolerans 3200 (LC3200) ou Lactobacillus buchneri 4017 (LN4017), (LC3200 ou LN4017) foram cultivados e colhidos por métodos aceitos na indústria conhecidos na arte. Os tratamentos com inóculos foram aplicados e misturados na forragem a medida que uma esteira transportadora derramava a forragem nos silos. Os tratamentos foram aplicados na forma solúvel para suprir 105 unidades de colônias se formando/grama (cfu/g) de forragem para ambos tratamentos com inóculos. Uma pessoa caminhando pelo topo de cada silo a medida que os silos eram completamente preenchidos a uma densidade similar. Os silos foram selados com uma camada plástica e foi aplicada, a cada silo, uma tampa de compensado pesado com um peso de concreto de 500 libras (226 kg).
[0042] A dieta teste fornecida a carneiros consistiu de 90% de plantas de milho para forragem inteiras (WPCS) e 10% suplemento (42% farinha de proteína de soja) em uma base de matéria seca (DM), e foi fornecida duas vezes ao dia.
[0043] O estudo de digestão foi conduzido com carneiros alimentados pesando, em média, aproximadamente 50-70 libras (26,6 a 31,64 kg). Doze carneiros foram assinalados por peso para cada tratamento; a ingestão da dieta foi estabelecida a 1,5X de manutenção. Um periodo de ajuste à dieta foi permitido por 7 dias seguido de um periodo de coleta de 5 dias. Isso foi repetido para aumentar o número de repetições do tratamento. Amostras de silagem foram compostas em uma base diária por tratamento. Fezes e urina foram coletados diariamente e compostas por carneiro.
[0044] Amostras de silagem retiradas periodicamente durante o estudo de alimentação foram avaliadas para DM, pH, nitrogênio total, fibras neutras de detergente (NDF), fibras ácidas de detergente (ADF), concentrações de ácido lático e de ácidos graxos voláteis (VFA).
[0045] As silagens foram todas bem fermentadas como ilustrado pelo baixo pH e altas concentrações de ácido lático, como apresentado na Tabela 1. O valor de pH de forragem inoculada como homofermentativo de linhagem LC3200 na ensilagem foi menor que aquele dos tratamentos controle e LN4017. Conseqüentemente, o tratamento LC3200 teve uma maior concentração de ácido lático e uma maior recuperação de matéria seca do que as silagens não tratadas ou LN4017, e essas observações foram consistentes com os efeitos conhecidos de inóculos de silagem homofermentativos eficazes. Tabela 1. DM, composição química da silagem(% DM) e pH
Figure img0001
1 Valores expressos como médias least squares. nd = não detectado
[0046] Como apresentado na Tabela 2, inóculos aumentaram a digestibilidade de DM e N quando comparado à forragem controle (não-inoculada). Coeficientes de digestibilidade para NDF e ADF foram maiores em forragens inoculadas quando comparados ao controle. Em particular, LN4017 aumentou a digestibilidade de NDF por 4,3 pontos percentuais (ou 8.7%) e digestibilidade de ADF por 6.3% pontos percentuais (ou 13%) . Tabela 2. Resultados do teste de digestão em carneiros
Figure img0002
1 Valores expressos como médias least squares. Exemplo 2 - Efeito de Aditivos de Silagem na Digestibilidade de Nutrientes em Carneiros
[0047] Plantas de milho para forragem (WPCF) foram colhidas inteiras com um cutelo marca John Deere 3950 para forragem, o tamanho teórico do cutelo de forragem foi de 3/8 a 1/2 polegada (0,95 a 1,27 cm). O milho foi colhido a aproximadamente % da linha de leite. Os tratamentos foram silagem não-tratada (Controle), e silagem tratada com Lactobacillus paracasei tolerans 3200 (LC3200) ou Lactobacillus buchneri 4017 (LN4017), ambos aplicados a uma taxa de IxlO5 cfu/g de forragem. A forragem de milho foi golpeada em um vagão de forragem marca John Deere. Os tratamentos foram aplicados na forma solúvel para a forragem a medida que a forragem foi derramada no silo por uma esteira. Os silos foram preenchidos tendo uma pessoa caminhado pelo topo na forragem a medida que era derramada no silo. Os silos foram selados com uma camada de plástico e uma tampa de compensado pesado com um peso de concreto de 500 libras (226 kg).
[0048] Amostras para análise de nutrientes foram retiradas de cada silo à medida que era fornecida para o estudo de digestão em carneiros. Esses resultados são apresentados na Tabela 3. Tabela3.Quimicafinaldasilagem.
Figure img0003
Figure img0004
[0049] Um estudo de digestão foi conduzido com doze carneiros com um peso médio de aproximadamente 70 libras (31,64 kg) . Doze carneiros foram assinalado por peso para cada tratamento. A ingestão foi estabelecida a 1.2X do requerimento de manutenção para cada carneiro. A ração foi fornecida duas vezes ao dia e consistiu de 90% de silagem de milho e 10% suplemento (42% farinha de proteina de soja) em uma base de matéria seca como mostrado na Tabela 4. Tabela 4. Quimicas da rações.
Figure img0005
1 Valores expressos como médias least squares.
[0050] Os carneiros foram colocados em caixotes de metabolismo, e um periodo de adaptação de sete dias foi seguido de um periodo de coleta de cinco dias. As quantidade fornecidas foram gravadas. Recusas foram coletadas, pesadas e compostas. Um bloco de sal/mineral foi provido para cada carneiro e carneiros tinham acesso ilimitado a água. Amostras de silagem foram compostas diariamente por tratamento. Amostras de fezes foram compostas diariamente por carneiro. Uma porcentagem do total diário de urina foi coletada diariamente e composta por carneiro.
[0051] Coeficientes de digestão são mostrados na Tabela 5. A digestibilidade de nitrogênio foi maior para silagem tratada com LN4017 quando comparada com a silagem não- tratada (Controle) . A digestibilidade de ADF e NDF foi maior para silagem tratada com LN4017 quando comparada com a silagem não-tratada (Controle). Tabela 5. Resultados do teste de digestão em carneiros.
Figure img0006
Figure img0007
1Valores expressos como médias least squares. Efeito de Aditivos de Silagem na Digestibilidade de Nutrientes em Novilhos de Corte
[0052] Plantas de milho para forragem (WPCF) foram colhidas inteiras com um cutelo marca John Deere 3950 para forragem, o tamanho teórico do cutelo de forragem foi de 3/8 a 1/2 polegada (0,95 a 1,27 cm) . O milho foi colhido a um conteúdo de mistura de 66.66% e a aproximadamente da linha de leite. Dezoito silos de 2 toneladas foram designados para cada tratamento. Os tratamentos foram como se segue: silagem não-inoculada (Controle) e uma combinação de LC3200 aplicada a 2xl04 cfu/g de forragem e LN4017 aplicada a IxlO5 cfu/g de forragem (LC3200 + LN4017) . A forragem de milho foi golpeada em um vagão de forragem marca John Deere.
[0053] Os tratamentos foram aplicados na forma solúvel para a forragem, à medida que a forragem foi derramada no silo por uma esteira. Os silos foram preenchidos tendo uma pessoa caminhado pelo topo na forragem à medida que era derramada no silo. Um silo de cada tratamento foi preenchido de forragem uma carga de vagão; a ordem de preenchimento foi alternada para cada grupo de silos preenchidos. Os silos foram selados com uma camada de plástico e uma tampa de compensado pesado com um peso de concreto de 500 libras (226 kg) . Amostras foram retiradas de casa silo para análise de nutrientes à medida que foram fornecidas para o estudo de performance em novilhos.
[0054] Quarenta (40) cabeças de novilhos do tipo para corte, tendo em média aproximadamente 702 libras (317 kg), fora repartidos por peso em dois (2) tratamentos para um estudo de alimentação de 56 dias. Quatro (4) novilhos foram designados a um estábulo, com cinco estábulos aleatoriamente designados para cada tratamento. O gado foi pesado no inicio (dias -1 e 0), meio (dia 28) e final do estudo (dia 56). Os novilhos foram pesados seguindo um emagrecimento de 2 dias; o gado foi emagrecido cortando-se a alimentação para 50% e removendo água por 16 horas cada dia. O ganho total e ganho médio diário foram calculados para todo o periodo de alimentação.
[0055] Os novilhos foram alimentados duas vezes ao dia via portões Calan™. O sistema Calan™ Gate System permitiu a alimentação de animais em base individual, permitindo, ao animal, acesso a apenas a sua própria cocheira de alimentação. Foi permitido, aos animais, o acesso a água fresca e blocos de sal/mineral em todos os momentos. As quantidades fornecidas foram anotadas e recusas foram coletadas, pesadas e compostas, se necessário. Amostras da ração foram compostas para determinação de matéria seca para calcular a ingestão de matéria seca.
[0056] As quimicas nutricionais da silagem são apresentadas abaixo na Tabela 6. A recuperação de matéria seca foi numericamente maior para silagens tratadas com LN4017+LC3200 e esse efeito é consistente com a presença e atividade de LC3200. Da mesma maneira, as concentrações de ácido acético foram maiores em silagens tratadas com LN4017 + LC3200 do que no controle e essa diferença pode ser atribuída à atividade de LN4017 heterofermentativa. Tabela 6. Quimicas finais de silagem.
Figure img0008
Figure img0009
1 Valores expressos como médias least squares.
[0057] As químicas das rações são mostradas na Tabela 7. Tabela 7. Composição de nutrientes analisadas das dietas fornecidas aos novilhos
Figure img0010
[0058] Os dados de performance dos novilhos são apresentados na Tabela 8. o ganho de peso/tonelada de forragem ensilada foi aproximadamente 12 libras maior para os novilhos alimentados com silagem inoculada com LC3200 +LN4017, quando comparados aos novilhos alimentados com dieta não-inoculada (Controle). Tabela 8. Performance de novilhos alimentados com dietas Teste
Figure img0011
Figure img0012
1Suplemento 42/17 R200 continha: proteina crua, minimo de 42% com não mais que 17% de proteina equivalente a partir de nitrogênio não-protéico; gordura crua, 1,25%; fibras cruas, 5%; cálcio, 5%; fósforo, 1,5%; sais, 2,5%; potássio, 1,2%; vitamina A, 48.000 IU/lb; vitamina D, 4800 IU/lb; vitamina E, 48 IU/lb; Monensina, 200 g/ton. Exemplo 4 - Efeitos de um Aditivo de Silagem na Fermentação e Estabilidade Aeróbica de Silagem de Milho
[0059] Quatro (4) híbridos de milho marca Pioneer®: 33P67, 34G13, 37B35 e 34G13 (Pioneer Hi-Bred International, Inc., Des Moines, IA) foram colhidos com valores respectivos de matéria seca de 38,4, 32,1, 39,5, 31,8 e 36,0%, e ensilados com ou sem inoculação como nos experimentos 1, 2, 3 e 4, respectivamente.
[0060] Lactobacillus buchneri linhagem LN4017 e Lactobacillus paracasei tolerans linhagem LC3200 foram cultivados, estabilizados e liofilizados como conhecido na arte. Os tratamentos foram controle (não-tratado) , LN4017 e LN4017 + LC3200. LN4017 foi aplicada a forragem como uma solução aquosa para entregar IxlO5 CFU/g de forragem quando aplicada a uma taxa de 2,2 mL/kg sozinha ou em combinação com LC3200. Lactobacillus paracasei toleranslinhagem LC3200 foi usado apenas em combinação com LN4017 e aplicado para entregar 2 x 104 cfu/g quando aplicada a uma taxa de 2,2 mL/kg. Todos tratamentos foram aplicados por dispersão com seringa via uma agulha de indicador 16, e cuidadosamente misturadas na forragem enrolando em filme plástico limpo.
[0061] Para cada tratamento, 4 4"xl4" silos de tubo de cloreto de polivinil (PVC) experimentais foram preenchidos e empacotados a densidade máxima de preenchimento de 70% (aproximadamente 160 kg DM M3) , usando uma prensa hidráulica. Os silos experimentais foram ajustados com tampas de borracha em cada extremidade, e a tampa do topo foi equipada com uma válvula Bunsen para permitir o escape de gases.
[0062] Os silos foram abertos após 50-57 dias, esvaziados e a forragem cuidadosamente misturada. Amostras de silagem foram repartidas para as várias análises, isto é: pH, matéria seca e estabilidade aeróbica. DM da silagem foi determinada secando-se a um peso constante em um forno de ar forçado a 62 °C. Avaliações de estabilidade aeróbica foram conduzidas em réplicas individuais dos tratamentos usando o procedimento de Honig (Proc. Of the Eurobac. Conf., P. Lingvall & S. Lindgren (ed.) (12-16 de agosto de 1986) Swed. Univ, of Agric. Sci. Grass and Forage Report No. 3-1990. Pp. 76-81. Uppsala, Sweden.).
[0063] O tempo (h) para a temperatura da silagem se elevar 1,7 °C acima da ambiente foi anotado (ROT). A integração da área entre a curva real de temperatura de silagem e a linha desenhada pela temperatura ambiente (Cumm-DD) foi calculada.
[0064] A tabela 9 mostra os efeitos dos inóculos no pH e estabilidade aeróbica de silagem na abertura dos silos. As silagens foram bem fermentadas, como ilustrado pelos valores de pH, os quais variaram entre 3,77-4,22 (Exp. 1), 3,81-3,90 (Exp. 2), 3,85-3,92 (Exp. 3) e 3,74-3, 93 (Exp. 4). A inoculação com LN4017+LC3200 aumentou o pH de silagem no Exp. 1, mas teve pouco ou nenhum efeito nesse parâmetro em qualquer dos outros experimentos.
[0065] As silagens controle foram relativamente aerobicamente estáveis no Exp. 1 e Exp. 4 (valores de 90 e 72, respectivamente) mas instáveis para os outros 2 experimentos (valores de ROT <33 h). LC3200+LN4017 melhorou a estabilidade aeróbica (ROT) por entre 42 e 128 horas em todos os quatro (4) experimentos. A combinação de L. buchneri linhagem LN4017 e L. paracasei tolerans linhagem LC3200 foi, em média, numericamente mais efetiva em melhorar a estabilidade aeróbica do que a inoculação com LN4017 sozinha. Os valores de Cumm-DD refletiram ROT e, portanto, suportaram conclusões feitas usando ROT em relação à estabilidade de silagens na abertura.
[0066] A inoculação de WPC com inóculos contendo Lactobacillus buchneri linhagem LN4017 produtora de ferulato esterase resultou em silagens bem fermentadas, com uma estabilidade aeróbica melhorada em todos os quatro (4) experimentos. Quando comparado ao controle, a combinação de LN4017 e LC3200 foi numericamente mais efetiva para a melhora da estabilidade aeróbica (de 42 a 128 h) do que LN4017 sozinha (de 3 a 90 h) demonstrando a presença de uma interação positiva entre LC3200 e LN4017. Tabela 9. Efeitos de LN4017+LC3200 no pH e estabilidade aeróbica de WPCS
Figure img0013
1os valores são medias de 4 repetições experimentais. 2Tempo em horas para a silagem se elevar 1,7 °C acima da temperatura ambiente. 3Integração da área entre a curva de temperatura real e uma linha desenhada pela temperatura ambiente. Exemplo 5 - Determinação de atividade de ferulato esterase
[0067] Culturas bacterianas de ácido lático, retiradas da coleção microbiana da Pioneer Hi-Bred, foram cultivadas em caldo De Man Rogosa Sharpe (caldo MRS; Difco™ Lactobacilli MRS; Becton Dickinson and Company, Sparks, MD 21152 USA), preparado como descrito pelo fabricante, por 24 a 48 horas. As células bacterianas foram colhidas do caldo MRS (10 mL) por centrifugação (3200 x g; 20 minutos) e re-suspendidas em 1 mL de tampão de lise consistindo de 100 mM HEPES (pH 7.0), azida de sódio (10 pg /mL) e 5 pL de DNase (Roche Diagnostics corporation, Indianapolis, IN). As células foram lisadas usando uma prensa French Press (French Press Cell, Pressure, SIM-AMINCO Spectronic Instruments, Inc., Rochester, NY) como é conhecido na arte. Esses lisados de células microbianas foram, então, testados para atividade de ferulato esterase como descrito abaixo.
[0068] O substrato para atividade de ácido ferúlico esterase (4-nitrofenil ácido ferúlico) for adquirido do Institute of Chemistry, Slovak Academy of Sciences Dubravska, Cesta 9, 845 38, Slovakia. Atividades de ferulato esterase de lisados de células microbianas foram determinadas usando o teste descrito por Mastihuba et al. (2002, Analytical Biochemistry309, 96-101) com modificações como detalhado abaixo.
[0069] O substrato foi primeiro dissolvido em dimetillsulfóxiod como descrito por Mastihuba et al. (2002, supra) e, então, diluido para a solução de substrato de trabalho final de 2,5 mM em 0,5M KPO4; pH 7,0. Oitenta microlitros (80 pL) da solução de substrato foi dispensado em uma placa poço 96 de microtitulação contendo vinte microlitros (20 pL) de lisados de células preparados acima e as soluções foram cuidadosamente misturadas e incubadas a 37 °C por 30 minutos. Poços controle consistindo de solução de substrato em tampão (2,5 mM em 0,5M KPO4; pH 7,0) e lisados de células em tampão foram incluídos e, de outra forma, tratados da mesma maneira como as misturas de reação. Seguindo o periodo de incubação, 20 pL da mistura de reação ou poços controle foram retirados usando uma micropipeta de 8 canais e adicionados a um poço de placa de microtitulo contendo 180 pL de KPO4 (pH 8) . O volume final em cada poço de placa de microtitulo foi de 200 pL. As soluções foram misturadas cuidadosamente e suas densidades óticas determinadas a 405 nm usando um leitor de placa de microtitulo (Vmax Kinetic Microplate Reader, Molecular Devices, Menlo Park CA) . As leituras de absorbância da mistura de reação foram corrigidas para leituras de absorbância dos controles preparados como descrito acima. P-nitrofenol (0, 0, 025, 0, 05, 0,1, 0, 15, 0,2 e 0,25 mM em 0,5 M KPO4 (pH 8); 200 pL (Sigma Chemical Company, St Louis, MO; Cat #104-8) foram usados como um padrão para o teste de ferulato esterase. As concentrações de proteína das células foram determinadas usando reagente Bradford como é conhecido na arte (Sigma Chemical Company., St Louis MO; Cat #B 6916; Bradford, M, (1976) Analytical Biochemistry 72 248-254). Atividades de ferulato esterase dos lisados de células foram expressas como nanomoles de P- nitrofenil (pNP) liberados por minuto por mg de proteína. Tabela 10. Atividade de ferulato esterase de bactérias de ácidolático.
Figure img0014
1FEA, Atividade de ferulato esterase; os dados são médias de 3 experimentos independentes. 2pNP, P-nitrofenol
[0070] Atividades de ferulato esterase de bactérias de ácido lático (Tabela 10) variaram de 1,69 a 23,0 nanomoles p-nitrofenol liberados por mg de proteína por minuto. Exemplo 6 - Efeitos da inoculação com bactérias de ácido lático produtoras de ferulato esterase no pH e digestibilidade de matéria seca de silagem de plantas de centeio e fibras
[0071] O centeio foi do primeiro corte da primavera, colhido no Pioneer Livestock Nutrition Center (PLNC), Sheldahl, IA em junho de 2005. As linhagens teste foram tanto cultivadas e congeladas por um fabricante de contrato da Pioneer Hi-Bred International, Inc. ou usada como culturas frescas de 24-48 horas cultivadas em caldo MRS como é conhecido na arte. As linhagens teste foram todas bactérias produtoras de ferulato esterase como determinado por método de pNP-ácido ferúlico (ver Exemplo 5, Tabela 10) .
[0072] Foram determinados os efeitos da inoculação com linhagens produtoras de ferulato esterase de Lactobacillus crispatus linhagem LI2127, Lactobacillus crispatus linhagem LI2350, Lactobacillusdesconhecido linhagem UL3050, Lactobacillus crispatus linhagem LI2366; Lactobacillus brevislinhagem LB1154; Lactobacillus buchneri linhagens LN4017 e LN4888; e Lactobacillus reuteri linhagem LR4933 na matéria seca de silagem de centeio e digestão de fibras com detergente neutro (DMD e NDFD, respectivamente).
[0073] O centeio foi tanto deixado sem ser inoculado (controle) ou inoculado com as linhagens teste como aqui descrito previamente. Todas linhagens teste foram aplicadas para forrage a uma taxa estimada de IxlO5 cfu/g de peso fresco. Adicionalmente, todas linhagens teste foram aplicadas à forragem como soluções aquosas (10 mL/4,54 Kg peso de forragem fresca) e cuidadosamente misturadas com a forragem em uma sacola plástica de 30 galões (114 litros).
[0074] A forragem, 1,36 Kg foi ensilada, em triplicata para cada tratamento, em silos pacotes de polietileno que foram empacotados a vácuo e selados por calor como descrito por Dennis et al. (1999) (Page 87 In Proc XII Int. Silage Conf. Swedish Univ, of Agric. Sci. Uppsala, Sweden). Os silos pacotes foram incubados em temperatura ambiente, e após 30 dias, os silos foram aberto, esvaziados e a forragem cuidadosamente misturadas para resultar em uma massa uniforme. Extratos aquosos da silagem de cada silo foram preparados diluindo-se dez (10) gramas em noventa (90) mL de água destilada estéril e agitando-se a mistura em um stomacher (Stomacher 400, Seward Limited, London, England) por 1 minuto na configuração média. 0 pH da silagem foi determinado nesses extratos imediatamente seguindo a preparação dos extratos. As concentrações de matéria seca foram determinadas secando-se um peso constante em um forno de ar forçado a 62 °C. Uma porção da silagem foi secada para peso constante a 62 °C e prensada para passar através de uma tela de 6 mm para determinação in situ de DMD e NDFD.
[0075] A silagem prensada (1,5 g), preparada como descrito acima foi pesada em bolsas micro taradas in situ(5,5 cm por 5,5 cm; 40 ±15microns; Ankom Technology Corp., Fairport, N.Y.), as quais foram, então, seladas e repesadas como é conhecido na arte. Análise de DMD in situ foi conduzida incubando-se o micro em bolsas contendo a silagem nos rumens de três (3) novilhos fistulados através do rúmen os quais haviam sido alimentados e adaptados a uma dieta com silagem de grama por 2 semanas antes da experimentação. Para cada silo, três (3) repetições foram incubadas em cada dos três novilhos fistulados através do rúmen por 48 horas; em conseqüência um total de 27 bolsas foi incubado para cada tratamento. A análise in situfoi conduzida pendurando-se sacolas pesadas no rúmen dos novilhos por 48 horas como é conhecido na arte.
[0076] As concentrações de fibras detergentes neutras (NDF) da silagem foram determinadas antes de depois da incubação ruminal de 48 horas usando o Ankom Fiber Analyzer (Ankom Technology Corp., Fairport, NY). Os coeficientes de digestão de NDF (%) foram calculados como a diferença no peso NDF antes versusapós a incubação ruminal dividido pelo peso de NDF antes da a incubação ruminal multiplicado por 100. Tabela 11. Efeitos da inoculação com bactérias de ácido lático produtoras de ferulato esterase no pH e coeficientes de digestibilidade para DM e NDF1 (DMD e NDFD, respectivamente)em silagem de plantas de centeio e fibras.
Figure img0015
Figure img0016
Tratamento 1 Os valores expressos são a media de 3 silos por tratamento. 2 A digestibilidade de matéria seca (DMD), % matéria seca inicial (DM). 3 Digestibilidade de fibras detergentes neutras (NDFD), % de fibras detergentes neutras iniciais.
[0077] Na colheita, a forragem tinha um pH de 6., 7 e DM (% peso fresco) de 32,9%. Comparado à silagem não-tratada (controle), L. brevislinhagem LB1154 e Lactobacillus desconhecido linhagem UL3050 resultaram em silagem como um pH menor. Em contraste, L. buchneri de linhagens LN4017 e LN4888; L. reuteri linhagem LR4933, e L.crispatus linhagens LI2350 e LI2127 resultaram em silagem que tinha um pH aumentado.
[0078] L. buchneri produtoras de ferulato esterase de linhagens LN4017 e LN4888; L. reuteri linhagem LR4933 e L. brevislinhagem LB1154 resultaram em silagem como valores de NDFD substancialmente aumentados (Tabela 11), com aumentos entre 5 e 7 unidades (ou 9,5 a 13,3%) . A inoculação com L.crispatus produtoras de ferulato esterase de linhagens LI2127 e LI2366 aumentou a NDFD (Tabela 11) em aproximadamente 5 unidades (ou 9,5%); L.crispatus linhagem LI2350 e Lactobacillusdesconhecido linhagem UL3050 aumentaram a NDFD por 4,1 a 4,5 unidades (ou 7,8 a 8,6%). Exemplo 7 - Efeito da Inoculação com uma Combinação de Bactérias de Ácido lático contendo uma Bactéria de Ácido lático Produtora de Ferulato esterase na Digestibilidade de Nutrientes em carneiros
[0079] Plantas de centeio foram ceifadas com um ceifador/condicionador John Deere e deixadas para murchar até aproximadamente 35% de matéria seca. A forragem foi colhida no dia seguinte usando um cutelo de forragem de duas fileiras John Deere 3950 do tipo de puxar. O comprimento teórico de corte foi de % a t polegadas (0,95 a 1,27 cm). Os tratamentos foram silagem não-tratada (Controle) e a mesma forragem inoculada com uma inoculo de linhagens em combinação consistindo de L. plantarum7109, L. paracasei tolerans LC 3200 e L. buchneri LN4017 (2xl04/2xl04/lxl05 cfu/g de forragem, respectivamente) . O tratamento com inoculo foi aplicado como uma solução aquosa e misturado na forragem à medida que a forragem era despejada de uma esteira nos silos. Uma pessoa caminhou no topo de cada silo durante o preenchimento, de forma que os silos foram preenchidos a uma densidade similar. Os silos foram selados com uma camada de plástico; um peso de concreto de 500 libras (226 kg) foi aplicado no topo de cada silo.
[0080] A dieta teste fornecida aos carneiros, 100% silagem de grama, foi fornecida duas vezes ao dia. O estudo de digestão foi conduzido com carneiros com peso médio inicial de aproximadamente 85 libras (38,42 kg). Carneiros divididos por peso foram designados para cada tratamento; a ingestão de dieta foi limitada a 1.2X de manutenção. Seguindo um periodo de adaptação à dieta de 7 dias, todas as fezes foram coletadas por 5 dias. Amostras de silagem foram obtidas a cada dia. Fezes e urina foram coletadas diariamente e compostas por carneiro para o periodo de 5 dias.
[0081] Amostras de silagem retiradas periodicamente durante o estudo de alimentação foram testadas para DM, pH, nitrogênio total, fibras detergentes neutras (NDF), e fibras detergentes ácidas (ADF).
[0082] A digestão de NDF (NDFD) (Tabela 13) pelos carneiros foi maior para silagem inoculada com LP7109/LC3200/LN4017 do que para a silagem não-inoculada controle. A inoculação com LP7109/LC3200/LN4017 aumentou as fibras detergentes ácidas (ADF) digestão (ADFD) por 10% de unidades (ou 24%) quando comparado com as silagens controle. Tabela 13. Efeitos da inoculação com uma combinação de linhagens contendo bactérias de ácido lático produtoras de ferulato esterase na Digestão de silagem de grama em carneiros
Figure img0017
 1Valores usados para calcular a digestibilidade. Os valores são expressos como a media de cinco amostras replicadas. 2Valores são expressos como médias least squares.
[0083] Tendo ilustrado e descrito os princípios das incorporações da presente invenção, deveria estar aparente a pessoas especialistas na arte que as incorporações da invenção podem ser modificadas em arranjo e detalhe sem abandonar tais princípios. Nós reivindicamos todas as modificações que estão dentro do espirito e escopo das reivindicações em seguida.
[0084] Todas publicações e documentos de patente publicados citados nessa especificação são aqui incorporados por referência à mesma extensão como se cada publicação ou documentos de patente publicados individuais estivessem especificamente e individualmente indicados para serem aqui incorporados como referência.

Claims (10)

1. Método de tratamento de material vegetal pré-ensilado, para intensificar a digestibilidade da silagem resultante, caracterizado pelo fato de que compreende: adicionar ao dito material vegetal pré-ensilado uma quantidade intensificadora de digestibilidade da composição compreendendo uma linhagem de Lactobacillusprodutora de ferulato esterase e um veiculo adequado, em que a linhagem de Lactobacillusé selecionada a partir de Lactobacillus buchneri, linhagem LN4017, depositada como Patent Deposit No. PTA-6138, Lactobacillus buchneri, linhagem LN4888, depositada como Patent Deposit No. NRRL B- 30866 e misturas destas.
2. Método de tratamento de material vegetal pré-ensilado, caracterizado pelo fato de que compreende adicionar a este uma linhagem bacteriana selecionada a partir de Lactobacillus buchneri, linhagem LN4017, depositada como Patent Deposit No. PTA-6138, Lactobacillus buchneri, linhagem LN4888, depositada como Patent Deposit No. NRRL B-30866 e misturas destas.
3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o material vegetal pré-ensilado é selecionado do grupo consistindo em gramineas, milho, alfafa, trigo, legumes, sorgo, girassol, cevada e misturas destes.
4. Método para intensificar a digestão de fibras vegetais em um animal, caracterizado pelo fato de que compreende alimentar um dito animal com uma quantidade eficaz de uma composição contendo ferulato esterase, em que a dita ferulato esterase é derivada de uma linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase selecionada do grupo consistindo em Lactobacillus buchneri, linhagem LN4017, depositada como Patent Deposit No. PTA-6138, Lactobacillus buchneri, linhagem LN4888, depositada como Patent Deposit No. NRRL B-30866 e misturas destas.
5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a composição fornecida como alimento foi tratada com uma quantidade catalítica efetiva da linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase.
6. Composição para o uso como um inoculo de silagem, caracterizada pelo fato de que compreende: uma quantidade intensificadora de digestibilidade de silagem de Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200, depositada como Patent Deposit No. PTA-6135, uma linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase selecionada a partir de Lactobacillus buchneri, linhagem LN4017, depositada como Patent Deposit No. PTA-6138, Lactobacillus buchneri, linhagem LN4888, depositada como Patent Deposit No. NRRL B-30866 e misturas destas, e um veiculo adequado.
7. Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que compreende ainda Lactobacillus plantarum, linhagem LP678, depositada como Patent Deposit No. PTA-6134, Lactobacillus plantarum, linhagem LP3710, depositada como Patent Deposit No. PTA-6136, Lactobacillus plantarum, linhagem LP3779, depositada como Patent Deposit No. PTA-6137, Lactobacillus plantarum,linhagem LP7109, depositada como Patent Deposit No. PTA-6139, Lactobacillus brevis, linhagem LB1154, depositada como Patent Deposit No. NRRL B-30865, Lactobacillus reuteri,linhagem LR4933, depositada como Patent Deposit No. NRRL B-30867, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2127, depositada como Patent Deposit No. NRRL B-30868, Lactobacillus crispatus,linhagem LI2350, depositada como Patent Deposit No. NRRL B-30869, Lactobacillus crispatus, linhagem LI2366, depositada como Patent Deposit No. NRRL B- 30870, Lactobacillus de espécie desconhecida, linhagem UL3050, depositada como Patent Deposit No. NRRL B-30871, ou misturas destas.
8. Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que contém entre cerca de 101 a cerca de 1010 de organismos viáveis de ditos Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 por grama de material vegetal pré-ensilado e entre cerca de 101 a cerca de 1010 de organismos viáveis de dita linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase por grama de material vegetal pré-ensilado.
9. Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que contém entre cerca de 102 a cerca de 107 de organismos viáveis de ditos Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 por grama de material vegetal pré-ensilado e entre cerca de 102 a cerca de 107 de organismos viáveis de dita linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase por grama de material vegetal pré-ensilado.
10. Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que contém entre cerca de 103 a cerca de 106 de organismos viáveis de ditos Lactobacillus paracasei tolerans, linhagem LC3200 por grama de material vegetal pré-ensilado e entre cerca de 103 a cerca de 106 de organismos viáveis de dita linhagem bacteriana produtora de ferulato esterase por grama de material vegetal pré-ensilado.
BRPI0514826-0A 2004-09-01 2005-09-01 métodos de tratamento de materiais vegetais pré-ensilados, método para intensificar a digestão de fibras vegetais em um animal e composição para o uso como um inóculo de silagem BRPI0514826B1 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US60638904P 2004-09-01 2004-09-01
US60/606,389 2004-09-01
PCT/US2005/031489 WO2006026763A1 (en) 2004-09-01 2005-09-01 Ferulate esterase producing strains and methods of using same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BRPI0514826A BRPI0514826A (pt) 2008-06-24
BRPI0514826B1 true BRPI0514826B1 (pt) 2020-11-03

Family

ID=35395418

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0514826-0A BRPI0514826B1 (pt) 2004-09-01 2005-09-01 métodos de tratamento de materiais vegetais pré-ensilados, método para intensificar a digestão de fibras vegetais em um animal e composição para o uso como um inóculo de silagem

Country Status (12)

Country Link
US (6) US7799551B2 (pt)
EP (2) EP1784085B1 (pt)
AT (2) ATE457651T1 (pt)
AU (1) AU2005279724B2 (pt)
BR (1) BRPI0514826B1 (pt)
CA (10) CA2881820C (pt)
DE (1) DE602005019419D1 (pt)
IL (1) IL181601A0 (pt)
MX (1) MX2007002508A (pt)
NZ (2) NZ586384A (pt)
PL (2) PL2186422T3 (pt)
WO (1) WO2006026763A1 (pt)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0514826B1 (pt) * 2004-09-01 2020-11-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc métodos de tratamento de materiais vegetais pré-ensilados, método para intensificar a digestão de fibras vegetais em um animal e composição para o uso como um inóculo de silagem
WO2008064025A2 (en) * 2006-11-13 2008-05-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Cloning and sequencing of the ferulate esterase gene from lactobacillus buchneri ln4017
US20090028993A1 (en) 2006-12-11 2009-01-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN1326 and its use to improve aerobic stability of silage
US20080138461A1 (en) * 2006-12-11 2008-06-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN1297 and its use to improve aerobic stability of silage
US20080138463A1 (en) * 2006-12-11 2008-06-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN5689 and its use to improve aerobic stability of silage
US20090028992A1 (en) * 2006-12-11 2009-01-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN1286 and its use to improve aerobic stability of silage
US20090028991A1 (en) * 2006-12-11 2009-01-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN1284 and its use to improve aerobic stability of silage
US20080138462A1 (en) * 2006-12-11 2008-06-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN5665 and its use to improve aerobic stability of silage
CN101215553B (zh) * 2008-01-18 2010-07-28 中国农业大学 一种阿魏酸酯酶的提取方法
US20110189747A1 (en) * 2008-08-05 2011-08-04 Chr-Hansen A/S Process for producing silage for biogas production
EP2210504A1 (en) * 2009-01-27 2010-07-28 Nestec S.A. Composition comprising chicoric acid and/or derivatives thereof
PL2858515T3 (pl) * 2012-06-12 2020-06-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Inokulanty do kiszonki zawierające drożdże w celu poprawy trawienia i fermentacji kiszonki w żwaczu
US20140186929A1 (en) 2012-12-28 2014-07-03 E.I. Du Pont De Nemours And Company Compositions and methods comprising a combination silage inoculant
CN103330050A (zh) * 2013-05-10 2013-10-02 张永根 玉米浆与水稻秸混合发酵饲料生产技术
AU2014339904B2 (en) * 2013-10-25 2020-06-18 Kemin Industries, Inc. Use of ferulic acid esterase to improve performance in monogastric animals
US9822334B2 (en) 2014-03-07 2017-11-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Rapid acting lactobacillus strains and their use to improve aerobic stability of silage
WO2016135655A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 Trovo’ Stefano Biological composition to control bee microbiological pathologies and infections
US10180689B2 (en) * 2016-08-19 2019-01-15 Omega Patents, L.L.C. Vehicle system including security unit providing degradation commands via a vehicle data bus and related methods
US11590182B2 (en) * 2018-09-10 2023-02-28 Ohio State Innovation Foundation Methods and compositions to modulate antibiotic resistance and gastrointestinal microbiota
CN109337836B (zh) * 2018-10-26 2021-11-26 贵州茅台酒股份有限公司 一种乳酸菌分离培养基及其制备方法及乳酸菌筛选方法
CN110643544B (zh) * 2019-11-01 2021-05-14 四川农业大学 副干酪乳杆菌761及其应用、青贮饲料添加剂、青贮饲料
CN112063565B (zh) * 2020-09-23 2022-04-12 山东环亿生物科技有限公司 一种灭活乳酸菌菌剂及其制备方法和应用

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4842871A (en) * 1985-08-01 1989-06-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Method and inoculant for preserving agricultural products for animal feed
US4820531A (en) * 1987-10-22 1989-04-11 Pioneer Hi-Bred International Bacterial treatment to preserve hay quality by addition of microorganisms of the genus bacillus
US4863747A (en) * 1987-10-22 1989-09-05 Pioneer Hi-Bred International Bacterial treatment to preserve hay quality by addition of microorganisms of the genus Bacillus
US4981705A (en) * 1989-11-06 1991-01-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacterial treatment to preserve silage
US5026647A (en) * 1990-05-03 1991-06-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Selective medium for propionibacterium growth
GB9027303D0 (en) 1990-12-17 1991-02-06 Enzymatix Ltd Enzyme formulation
US5292657A (en) * 1990-12-31 1994-03-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Process for preparing rotary disc fatty acid microspheres of microorganisms
GB9200891D0 (en) 1992-01-16 1992-03-11 Mann Stephen P Formulation of microorganisms
US5725853A (en) * 1994-10-18 1998-03-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. 4 strain direct-fed microbial
GB9424661D0 (en) 1994-12-07 1995-02-01 Biotal Ltd Enzymes, microorganisms and their use
US5747020A (en) * 1995-05-15 1998-05-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacterial treatment for silage
GB2301103B (en) * 1995-05-23 1999-12-22 Danisco An enzyme system comprising ferulic acid esterase
US6699514B2 (en) * 1996-02-15 2004-03-02 Biotal Ltd. Microorganisms and their use in animal feed
AU718951B2 (en) * 1996-02-15 2000-05-04 Biotal Ltd. Microorganisms and their use in treating animal feed and silage
US6054148A (en) * 1997-12-19 2000-04-25 Board Of Trustees Operating Michigan State University Method and compositions for ensiling silage
US6337068B1 (en) 1998-06-26 2002-01-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactorbacillus buchneri compositions for improving aerobic stability of silage
US6602700B1 (en) 1998-09-04 2003-08-05 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Phenolic acid esterases, coding sequences and methods
US6489158B1 (en) * 1999-07-09 2002-12-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Non-lactate-assimilating yeast for improving aerobic stability of silage
US6403084B1 (en) 2000-11-03 2002-06-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Mixed cultures for improved fermentation and aerobic stability of silage
ATE540120T1 (de) * 2000-11-17 2012-01-15 Danisco Us Inc Manipulation des phenolsäuregehalts und der verdaubarkeit von pflanzenzellwänden durch gezielte expression von genen, die zellwandabbauende enzyme kodieren
US6750051B2 (en) * 2001-04-10 2004-06-15 University Of Kentucky Research Foundation Compositions and methods for enhancing fiber digestion
WO2003043411A2 (en) 2001-11-16 2003-05-30 Genencor International, Inc. Manipulation of the phenolic acid content and digestibility of plant cell walls
EP1619959A1 (en) 2003-04-28 2006-02-01 Alpharma, Inc. Method for formulation of microbial feed additives with feed
US20050281917A1 (en) 2004-06-16 2005-12-22 Charley Robert C Treatment of silage with lactobacillus diolivorans
BRPI0514826B1 (pt) 2004-09-01 2020-11-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc métodos de tratamento de materiais vegetais pré-ensilados, método para intensificar a digestão de fibras vegetais em um animal e composição para o uso como um inóculo de silagem
WO2008064025A2 (en) 2006-11-13 2008-05-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Cloning and sequencing of the ferulate esterase gene from lactobacillus buchneri ln4017
US20080138462A1 (en) 2006-12-11 2008-06-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN5665 and its use to improve aerobic stability of silage
US20080138463A1 (en) 2006-12-11 2008-06-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN5689 and its use to improve aerobic stability of silage
US20090028991A1 (en) 2006-12-11 2009-01-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN1284 and its use to improve aerobic stability of silage
US20090028993A1 (en) 2006-12-11 2009-01-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN1326 and its use to improve aerobic stability of silage
US20090028992A1 (en) 2006-12-11 2009-01-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN1286 and its use to improve aerobic stability of silage
US20080138461A1 (en) 2006-12-11 2008-06-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lactobacillus buchneri strain LN1297 and its use to improve aerobic stability of silage

Also Published As

Publication number Publication date
NZ586384A (en) 2012-03-30
US8211672B2 (en) 2012-07-03
US8236537B2 (en) 2012-08-07
CA2882532A1 (en) 2006-03-09
AU2005279724A1 (en) 2006-03-09
CA2889147A1 (en) 2006-03-09
CA2787801A1 (en) 2006-03-09
DE602005019419D1 (de) 2010-04-01
ATE547008T1 (de) 2012-03-15
CA2889142A1 (en) 2006-03-09
CA2787766A1 (en) 2006-03-09
EP2186422B1 (en) 2012-02-29
PL2186422T3 (pl) 2012-07-31
CA2882532C (en) 2016-06-07
IL181601A0 (en) 2007-07-04
MX2007002508A (es) 2007-05-11
CA2882512C (en) 2016-06-07
US8409642B2 (en) 2013-04-02
US20140220180A1 (en) 2014-08-07
CA2881263C (en) 2016-06-07
CA2578238A1 (en) 2006-03-09
WO2006026763A1 (en) 2006-03-09
CA2881820A1 (en) 2006-03-09
PL1784085T3 (pl) 2010-07-30
CA2889147C (en) 2017-01-03
NZ553503A (en) 2010-08-27
US7799551B2 (en) 2010-09-21
US20130177540A1 (en) 2013-07-11
AU2005279724B2 (en) 2010-03-25
BRPI0514826A (pt) 2008-06-24
US20090010903A1 (en) 2009-01-08
EP1784085A1 (en) 2007-05-16
CA2882512A1 (en) 2006-03-09
EP1784085B1 (en) 2010-02-17
CA2889142C (en) 2017-04-11
CA2787801C (en) 2015-04-14
ATE457651T1 (de) 2010-03-15
CA2787766C (en) 2015-04-28
CA2889129C (en) 2016-12-06
US20090162913A1 (en) 2009-06-25
CA2889129A1 (en) 2006-03-09
CA2881820C (en) 2017-01-03
CA2578238C (en) 2015-08-04
EP2186422A1 (en) 2010-05-19
CA2881263A1 (en) 2006-03-09
US20060046292A1 (en) 2006-03-02
US20090011085A1 (en) 2009-01-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BRPI0514826B1 (pt) métodos de tratamento de materiais vegetais pré-ensilados, método para intensificar a digestão de fibras vegetais em um animal e composição para o uso como um inóculo de silagem
Aksu et al. Effects of a bacterial silage inoculant on corn silage fermentation and nutrient digestibility
Nkosi et al. Effects of bacterial silage inoculants on whole-crop maize silage fermentation and silage digestibility in rams
US10945451B2 (en) Yeast containing silage inoculants for the enhancement of silage digestion and fermentation in the rumen
US7718415B1 (en) Acetyl esterase producing strains and methods of using same
Nkosi et al. Effects of bacterial inoculants and an enzyme on the fermentation quality and aerobic stability of ensiled whole-crop sweet sorghum
Rabelo et al. Performance of finishing beef cattle fed diets containing maize silages inoculated with lactic-acid bacteria and Bacillus subtilis
Abubakr et al. Effect of fermented juice of epiphytic lactic acid bacteria and molasses on Brachiaria obtusiflora silage fermentation quality and milk production in Nubian goats
Amuda UTILISATION OF ENSILED MAIZE STOVER AND CONCENTRATE SUPPLEMENTS BY WEST AFRICAN DWARF SHEEP
Szasz et al. Influence of endosperm vitreousness and kernel moisture at harvest on site and extent of digestion of high moisture corn by steers.
Szasz et al. Influence of endosperm vitreousness, moisture at harvest, and microbial inoculant on chemical composition, available starch and ruminal dry matter disappearance of ensiled high moisture corn.
Eun Characterizing microbial dynamics in continuous cultures and lactation performance of cows fed gamagrass

Legal Events

Date Code Title Description
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B07A Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette]
B09B Patent application refused [chapter 9.2 patent gazette]

Free format text: INDEFIRO O PEDIDO DE ACORDO COM O(S) ARTIGO(S) 10 DA LPI.

B12B Appeal against refusal [chapter 12.2 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 10 (DEZ) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 03/11/2020, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS.