BR122021002683B1 - Tratamento combinado com um agonista de tlr7 e um inibidor de montagem de capsídeo de hbv - Google Patents

Abstract

TRATAMENTO COMBINADO COM UM AGONISTA DE TLR7 E UM INIBIDOR DE MONTAGEM DE CAPSÍDEO DE HBV. A presente invenção relaciona-se com composições e métodos para o tratamento da infecção pelo vírus da hepatite B. Em particular, a presente invenção refere-se a uma terapia de combinação que compreende a administração de um agonista de TRL7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV para o uso no tratamento do paciente portador da hepatite B crônica.

Description

“Pedido dividido do BR 11 2017 019758-8 de 15/03/2016”

[0001] Refere-se a presente invenção a composições e métodos para tratar a infecção pelo vírus da hepatite B. Em particular, a presente invenção refere-se a uma terapia de combinação que compreende a administração de um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV para o uso no tratamento do paciente com hepatite B crônico.

Campo da Invenção

[0002] A infecção crônica do vírus da Hepatite B (HBV) é um grave problema de saúde pública em todo o mundo, com mais de 240 milhões de pessoas cronicamente infectadas no mundo todo. O HBV pertence à família de vírus Hepadnaviridae. Em seguida à entrada no hepatócito, o seu genoma viral é distribuído para o núcleo onde é formado um DNA circular fechado covalentemente (cccDNA) através do reparo do DNA de cccDNA de genoma viral de dupla cadeia parcial, serve como modelo para a transcrição de RNAs virais. O RNA pré-genômico viral interage com outros dois componentes virais, a proteína e polimerase de capsídeo para formar partículas de capsídeo onde ocorre a replicação de DNA viral. O HBV é dotado de um núcleo icosaédrico composto de 240 cópias da proteína de capsídeo (ou núcleo). A função biológica predominante da proteína de capsídeo é a de atuar como uma proteína estrutural para encapsidar o RNA pré-genômico e formar partículas de capsídeo imaturo no citoplasma. Esta etapa é um pré-requisito para a replicação do DNA viral. Quando um DNA circular relaxado de comprimento quase completo é formado por transcrição reversa de RNA pré-genômico viral, um capsídeo imaturo torna-se um capsídeo maduro. A maioria das cópias do genoma encapsidado associa-se eficientemente com lipídios celulares e proteínas de envoltório viral (S, M, e L) para a montagem de virions e secreção. No entanto, partículas não infecciosas também são produzidas, que superam em grande parte os virions infecciosos. Essas partículas vazias envolvidas são referidas como partículas subvirais (SVPs). As proteínas do envoltório S, M e E são expressas a partir de um único ORF (quadro de leitura aberto) que contém três códons de início diferentes. Todas as três proteínas compartilham uma seqüência 226aa, o domínio S, em seus terminais C. O domínio S contém o epítope HBsAg (Lambert, C. & R. Prange. Virol J, 2007, 4, 45).

[0003] Muitas observações mostraram que várias proteínas virais de HBV poderiam neutralizar a resposta celular do hospedeiro inicial ao interferir com o sistema de sinalização de reconhecimento viral e subsequentemente a atividade antiviral de interferon (IFN). Entre estes, a secreção excessiva de partículas subvirais vazias de HBV pode participar da manutenção do estado de tolerância imunológica observado em pacientes cronicamente infectados (CHB). A exposição persistente ao HBsAg e outros antígenos virais pode levar à exclusão de células T específicas de HBV ou a comprometimento funcional progressivo (Kondo et al. Journal of Immunology 1993, 150, 4659-4671; Kondo et al. Journal of Medical Virology 2004, 74, 425-433; Fisicaro et al. Gastroenterology, 2010, 138, 682-93;). Além disso foi relatado que HBsAg suprime a função de células imunes tais como monócitos, células dendríticas (DCs) e células assassinas naturais (NK) por interação direta (Op den Brouw et al. Immunology, 2009b, 126, 280-9; Woltman et al. PLoS One, 2011, 6, e15324; Shi et al. J Viral Hepat. 2012, 19, e26-33; Kondo et al. ISRN Gasteroenterology, 2013, Article ID 935295).

[0004] A quantificação de HBsAg é um biomarcador para prognóstico e resposta ao tratamento na hepatite B. A perda de HBsAg e a soro conversão é o objetivo da cura clínica, mas raramente é observada em pacientes cronicamente infectados. A terapia atual, tais como os análogos Núcleos (t) ídeos que inibem a síntese de DNA do VHB, não afeta diretamente o nível de HBsAg. Os análogos de Nucleos (t) ídeos, mesmo com terapia prolongada, demonstraram taxas muito baixas de depuração de HBsAg comparáveis àquelas observadas naturalmente (Janssen et al. Lancet, 2005, 365, 123-9; Marcellin et al. N. Engl. J. Med., 2004, 351, 1206-17; Buster et al. Hepatology, 2007, 46, 388-94).

[0005] Os receptores tipo Toll (TLRs) detectam uma ampla gama de emplastros moleculares associados aos patógenos conservados (PAMPs). Eles desempenham um papel importante na detecção de patógenos invasores e no início subseqüente de respostas imunes inatas. Existem 10 membros conhecidos da família TLR em humanos, que são proteínas transmembranares de tipo I com um domínio extracelular rico em leucina e uma cauda citoplasmática que contém um domínio TIR / interleucina (IL) -1 conservado (TIR). Dentro desta família, TLR3, TLR7, TLR8, e TLR9 estão localizados dentro dos endossomas. O TLR7 pode ser ativado por meio de ligação a um ligando de molécula pequena específico (isto é, Agonista de TLR7) ou ao seu ligando nativo (isto é, ARN de cadeia simples, ssrNA). Após a ligação do ssrNA ao TLR7, acredita-se que o receptor na sua forma dimerizada sofra uma alteração estrutural que conduz ao subsequente recrutamento de proteínas adaptadoras no seu domínio citoplasmático, incluindo o gene de resposta primária de diferenciação mielóide 88 (MyD88). Após o início da cascata de sinalização do receptor através da via MyD88, são ativados fatores de transcrição citoplasmáticos tais como o fator nuclear de interferon 7 (IRF-7) e o fator nuclear kappa B (NF-kB). Esses fatores de transcrição então são transladados ao núcleo e iniciam a transcrição de vários genes, por exemplo, IFN-α e outros genes de citocinas antivirais. O TLR7 é predominantemente expresso em células plasmocitóides, e também em células B. A capacidade de resposta alterada das células imunes pode contribuir para a redução das respostas imunes inatas durante infecções virais crônicas. A ativação induzida pelo agonista de TLR7 pode, portanto, representar uma nova abordagem para o tratamento de infecções virais crônicas. (D. J Connolly e L. AJ O’Neill, Current Opinion in Pharmacology 2012, 12:510-518, P. A. Roethle et al, J. Med. Chem. 2013, 56, 7324-7333).

[0006] O tratamento com um agonista de TLR7 oral representa uma solução promissora para proporcionar maior eficácia com melhor tolerabilidade. O IFN-α de pegilado (PEG-IFN-α) é atualmente usado para tratar o HBV e a eletrocardiografia crônica é uma alternativa para o tratamento potencialmente ao longo da vida com análogos dos núcleos (t) ídeos antivirais. Em um subconjunto de pacientes crônicos com VHB, a terapia com PEG-IFN-α pode induzir o controle imunológico sustentado do vírus após uma duração finita da terapia. No entanto, a percentagem de pacientes com VHB que alcançam soro conversão com terapia com interferon é baixa (até 27% para pacientes com HBeAg positivos) e o tratamento normalmente é mal tolerado. Além disso, a cura funcional (definida como perda de HBsAg e soro conversão) também é muito pouco freqüente com o tratamento de nucleosídeos (t) ideais de PEG-IFN-α e. Dadas essas limitações, existe uma necessidade urgente de se melhorarem as opções terapêuticas para tratar e induzir uma cura funcional para o VHB crônico. O tratamento com um agonista de pequena molécula, TLR7, é uma abordagem promissora que tem potencial para proporcionar maior eficácia e tolerabilidade (T. Asselah et al, Clin Liver Dis 2007, 11, 839-849).

[0007] A proteína do capsídeo de HBV desempenha papéis essenciais na replicação do HBV. Heteroaril diidropirimidinas ou HAP, incluindo compostos denominados Bay 41-4109, Bay 38-7690 e Bay 39-5493, foram descobertos em uma triagem baseada em cultura de tecidos (Deres K. et al. Science 2003, 893). Estes análogos HAP atuam como ativadores alostéricos sintéticos e são capazes de induzir a formação de capsídeo aberrante que conduz à degradação da proteína do núcleo. Os análogos HAP também reorganizaram a proteína central de capsídeos pré-montados em polímeros não capsidáveis, presumivelmente por interação de HAP com dímeros liberados durante a "respiração" do capsídeo, a quebra transitória de ligações intersubunitárias individuais. A baía 41-4109 foi administrada a camundongos transgênicos infectados com HBV ou modelos de camundongos humanizados e demonstraram eficácia in vivo com a redução do DNA de HBV (Deres K. et al., Science 2003, 893; Brezillon N. et al. PLoS ONE 2011, e25096). Também foi demonstrado que a bis-ANS, uma pequena molécula que atua como uma "cunha" molecular, interfere com a geometria formação de proteína de capsídeo normal e formação de capsídeo (Zlotnick A. et al., J. Virol, 2002, 4848-4854).

[0008] Agora, o padrão de cura clínica da infecção por VHB é a perda e / ou soro conversão de HBsAg. Embora o PEG-IFN-α e núcleos (t) ideos estejam disponíveis para pacientes com VHB, a maioria (em torno ou mais de 90%) dos pacientes tratados não consegue atingir esse objetivo, principalmente devido ao fato de que as terapias atuais não podem provocar a aparência de anticorpos neutralizantes contra HBsAg (anti-HBs), um sinal de resolução da infecção por VHB, na maioria dos pacientes cronicamente infectados. Portanto, há certamente uma necessidade médica para tratamentos com taxa de sucesso aperfeiçoada no sentido de induzir perda de HBsAg e / ou soro conversão e de promover a produção de anti-HBs.

Sumário da Invenção

[0009] A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV, em um carreador farmaceuticamente aceitável. O “Agonista de TLR7” neste contexto é compreendido por um composto de fórmula (I), (II) ou qualquer um dos compostos expostos na patente WO2006/066080, com particularidade o “Agonista de TLR7” neste contexto é compreendido por [(1S)-1- [(2S,4R,5R)-5- (5-amino-2-oxo-tiazolo [4,5-d] pirimidin-3-il)-4-hidroxi- tetra hidrofuran-2-il] propil] acetato; [(S)- [(2S,5R)-5- (5-amino-2-oxo-tiazolo [4,5-d] pirimidin-3-il)-1,3- oxatiolan-2-il] -ciclopropil-metil] acetato; 5-amino-3-(3’- deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazolo [4,5-d] pirimidin-2- ona; 5-amino-3-(2’-O-acetil-3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H- tiazolo [4,5-d] pirimidin-2-ona ou 5-amino-3-(3’-deoxi-β-D- ribofuranosil)-3H,6H-tiazolo [4,5-d] pirimidin-2,7-diona, ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável. O inibidor de montagem de capsídeo de HBV neste contexto é compreendido por um composto de fórmula (III) ou qualquer um dos compostos expostos nas patentes WO2014/037480, WO 2014/184328 e WO2015/132276, com particularidade o inibidor de montagem de capsídeo de HBV neste contexto é compreendido por ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 - oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 - oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil - 2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 - azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; ou ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin-4-ilmetil] - morfolina-3-carboxílico; ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável.

Descrição Breve das Figuras

[0010] Figura 1: níveis de HBV DNA e HBsAg a partir de soros de camundongos em modelo de camundongo AAV- HBV. Os resultados foram ilustrados na Figura. 1 para camundongos com nível sustentado de HBV DNA e HBsAg tratado com veículo (representado como losango), Composto 1 isoladamente em 100 mg / kg (representado na forma de círculo), Composto 2 isoladamente em 12 mg / kg (representado na forma de triângulo), ou combinação de Composto 1 e Composto 2 (representado na forma de quadrado). A redução relativa do HBV DNA e HBsAg após o tratamento foi calculada normalizando-se para os seus níveis no grupo do veículo como uma linha de base. O efeito antiviral sinérgico na redução do HBsAg foi observado em camundongos tratados com a terapia combinada e, mais importante, a redução do DNA e HBsAg do VHB foi sustentada durante um período de 2 semanas fora do tratamento após a terapia combinada. LLQ: limite inferior de quantificação.

[0011] Figura 2: estrutura de cristal pelos raios-X do Composto 2A-2a.

[0012] Figura 3: estrutura de cristal pelos raios-X do Composto 3J.

[0013] Figura 4: DNA e HBsAg de HBV em camundongos infectados com AAV-HBV tratados com veículo, Composto 1 (100 mg/kg), Composto 4 (20 mg/kg), ou a combinação do Composto 1 mais o Composto 4, O tratamento foi iniciado depois de os camundongos serem infectados com AAV-HBV durante 4 semanas. Eles foram submetidos ao tratamento durante 6 semanas e foram monitorados durante outro período de 6-semanas. O DNA e HBsAg de HBV no soro de camundongo foram medidos nos pontos do tempo indicados por meio de RT-qPCR e HBsAg CLIA, respectivamente. Os resultados foram apresentados como a média ± SEM. LLQ: limite de quantificação mais baixo.

[0014] _Figura 5: HBV DNA e HBsAg em camundongos infectados com AAV-HBV tratados com veículo, Composto 3 (30 mg / kg), Composto 4 (20 mg / kg) ou a combinação de Composto 3 mais Composto 4, O tratamento foi iniciado após a infecção dos camundongos com AAV-HBV por 4 semanas. Eles receberam o tratamento por 6 semanas, e foram monitorados por mais 6 semanas de tratamento fora do período de tratamento. HBV DNA e HBsAg em soro de rato foram medidos nos pontos de tempo indicados por RT-qPCR e HBsAg CLIA, respectivamente. Os resultados foram apresentados como média ± SEM. LLQ: limite inferior de quantificação.

[0015] Figura 6: ADN de HBV e HBsAg de HBV nos camundongos infectados com AAV-HBV tratados com veículo, Composto 1 (100 mg / kg), Composto 5 (12 mg / kg) ou a combinação de Composto 1 mais Composto 5. O tratamento começou após os camundongos serem infectados com AAV-HBV por 4 semanas. Eles receberam o tratamento por 6 semanas, e foram monitorados por mais 6 semanas de tratamento fora do período de tratamento. O HBV DNA e HBsAg em soro de camundongo foram medidos nos pontos de tempo indicados por RT-qPCR e HBsAg CLIA, respectivamente. Os resultados foram apresentados como média ± SEM. LLQ: limite inferior de quantificação.

[0016] Figura 7: O nível de anticorpo anti-HBs (anticorpo contra HBsAg) no soro de cada camundongo tomando o tratamento único ou combinado como descrito nas Figuras 4, 5, e 5, As amostras de soro foram coletadas no dia 24 após a remoção do tratamento e anti -HBs foi medido por anti-HBs CLIA. LLQ: limite inferior de quantificação.

[0017] Figura 8: HBV DNA e HBsAg nos camundongos infectados com AAV-HBV tratados com veículo, Composto 8 (300mg / kg), Composto 4 (20mg / kg), ou a combinação de Composto 8 mais Composto 4, O tratamento começou após a infecção dos camundongos com AAV-HBV durante pelo menos 38 dias. Eles receberam o tratamento por 6 semanas, e foram monitorados por mais 6 semanas de tratamento fora do período de tratamento. HBV DNA e HBsAg no soro de camundongo foram medidos nos pontos de tempo indicados por RT-qPCR e HBsAg CLIA, respectivamente. Os resultados foram apresentados como média ± SEM. LLQ: limite inferior de quantificação.

[0018] Figura 9: HBV DNA e HBsAg nos camundongos infectados com AAV-HBV tratados com veículo, Composto 8 (300mg / kg), Composto 10 (20mg / kg), ou a combinação de Composto 8 mais Composto 10, O tratamento começou depois de os camundongos serem infectados com AAV-HBV durante pelo menos 38 dias. Eles receberam o tratamento durante 6 semanas, e foram monitorados durante mais 6 semanas de tratamento fora do período de tratamento. HBV DNA e HBsAg no soro de camundongo foram medidos nos pontos de tempo indicados por RT-qPCR e HBsAg CLIA, respectivamente. Os resultados foram apresentados como a média ± SEM. LLQ: limite inferior de quantificação.

[0019] Figura 10: HBV DNA e HBsAg nos camundongos infectados com AAV-HBV tratados com veículo, Composto 1 (100 mg / kg), Composto 10 (20 mg / kg) ou a combinação de Composto 1 mais Composto 10. O tratamento foi iniciado depois de os camundongos serem infectados com AAV- HBV durante pelo menos 38 dias. Eles receberam o tratamento por 6 semanas, e foram monitorados por mais 6 semanas de tratamento fora do período de tratamento. HBV DNA e HBsAg no soro de camundongo foram medidos nos pontos de tempo indicados por RT-qPCR e HBsAg CLIA, respectivamente. Os resultados foram apresentados como média ± SEM. LLQ: limite inferior de quantificação.

[0020] Figura 11: O nível de anticorpo anti-HBs (anticorpo contra HBsAg) no soro de cada camundongo tomando o tratamento único ou combinado como descrito nas Figuras 8, 9 e 10, As amostras de soro foram coletadas no dia 31 após a remoção do tratamento e o anti-HBs foi medido por anti-HBs CLIA. LLQ: limite inferior de quantificação. Descrição Detalhada da Invenção

[0021] A não ser que seja definido o contrário, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado que é comumente entendido por uma pessoa versada na técnica à qual pertence a presente invenção.

[0022] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo “C1-6 alquila” refere-se a um grupo de hidrocarbonetos saturados monovalentes, lineares ou ramificados de 1 a 6 átomos de carbono. De acordo com concretizações particulares, C1-6 alquila é dotado de 1 a 6 átomos de carbono, e em concretizações mais particulares 1 a 4 átomos de carbono. Exemplos de C1-6 alquila incluem metil, etil, propil, isopropil, n-butil, iso-butil, sec- butil ou terc-butil.

[0023] Da forma que são utilizados neste contexto, os termos “halo” ou “halogênio” são usados Indiferentemente e referem-se a flúor, cloro, bromo, ou iodo.

[0024] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo “C1-6 alcoxi” refere-se a um grupo de C1-6 alquila-O, em que o “C1-6 alquila” é tal como definido anteriormente; por exemplo, metoxi, etoxi, propoxi, iso-propoxi, n-butoxi, iso-butoxi, 2-butoxi, terc-butoxi e outros assemelhados. Groups “C1-6alcoxi” particulares são compreendidos por metoxi e etoxi e com maior particularidade metoxi.

[0025] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo “C3-7 ciclo alquila” refere-se a um anel de carbono saturado que contém de 3 a 7 átomos de carbono, com particularidade de 3 a 6 átomos de carbono, por exemplo, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil e outros assemelhados. Os grupos “C3-7 ciclo alquila” particulares são compreendidos por ciclopropil, ciclopentil e ciclohexil.

[0026] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo “C2-6 alquenila” refere-se a um grupo alquenila de cadeia linear ou ramificada, insaturado, que contém de 2 a 6, com particularidade de 2 a 4 átomos de carbono, por exemplo, vinil, propenil, allil, butenil e outros assemelhados. Com particularidade, o grupo “C2-6 alquenila” é compreendido por alila.

[0027] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo “C2-6 alquinila” refere-se a um grupo alquinila de cadeia linear ou ramificada, insaturado, que contém de 2 a 6, com particularidade de 2 a 4 átomos de carbono, por exemplo, etinil, 1-propinil, propargil, butinil e outros assemelhados. Grupos “C2-6 alquinila” particulares são compreendidos por etinil, 1-propinil e propargil.

[0028] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo anel “heterocíclico” ou “heterociclil” refere-se a um anel monocíclico ou bicíclico, saturado ou parcialmente insaturado, que contém de 3 a 10 átomos de anel que podem compreender um, dois ou três átomos selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio e / ou enxofre. Exemplos de anéis de heterociclil monocíclicos que contêm em particular de 3 a 7 átomos de anel incluem, sendo que não se fica limitado aos mesmos, aziridinil, azetidinil, oxetanil, piperidinil, piperazinil, azepinil, diazepanil, pirrolidinil, morfolinil, diidrofuril, tetra hidrofuril, tetra hidropiranil, tetra hidrotiopiranil e tiomorfolinil. O heterociclil bicíclico pode ser anel fundido bicíclico ou anel ligado em ponte bicíclico. Exemplos para heterociclil bicíclico são compreendidos por 8-aza-biciclo [3,2,1] octil, quinuclidinil, 8-oxa-3-aza-biciclo [3,2,1] octil, 9- aza-biciclo [3,3,1] nonil, 3-oxa-9-aza-biciclo [3,3,1] nonil, 3-tia-9-aza-biciclo [3,3,1] nonil, ou difluoroazabiciclo [3,2,1] octil. O heterociclil monocíclico e bicíclico pode ser ainda substituído por halogênio, C1-6 alquila, ciano, carboxi, carboxi C1-6 alquila.

[0029] O termo “amino heterocíclico” refere-se a um grupo amino com o átomo de nitrogênio no anel heterocíclico, em que o anel “heterocíclico” é tal como definido anteriormente.

[0030] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo “diastereômero” refere-se a um estereoisômero com dois ou mais centros de quiralidade e cujas moléculas não são imagens reflexas umas das outras. Os diastereômeros são dotados de diferentes propriedades físicas, por exemplo, pontos de fusão, pontos de ebulição, propriedades espectrais, atividades e reatividades.

[0031] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo “enantiômeros” refere-se a dois estereoisômeros de um composto que são imagens reflexas não superponíveis um do outro.

[0032] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo “sais farmaceuticamente aceitáveis” refere-se aos sais que não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais de adição de ácido e de base.

[0033] Da forma que é utilizado neste contexto, o termo “pró-fármaco” refere-se a uma forma ou derivado de um composto que é metabolizado in vivo, por exemplo, por meio de fluidos biológicos ou enzimas por um sujeito depois da administração, em uma forma farmacologicamente ativa do composto a fim de produzir o efeito farmacológico desejado. Os pró-fármacos encontram-se descritos, por exemplo, nos documentos Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action by Richard B. Silverman, Academic Press, San Diego, 2004, Chapter 8 Prodrugs and Drug Delivery Systems, pp. 497-558,

[0034] O termo “sal de adição ácida farmacologicamente aceitável” refere-se àqueles sais farmaceuticamente aceitáveis formados com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido carbônico, ácido fosfórico, e ácidos orgânicos selecionados a partir de classes de ácidos orgânicos alifáticos, cicloalifáticos, aromáticos, aralifáticos, , heterocíclicos, carboxílicos, e sulfônicos tais como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido glicônico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido maleico, ácido maloneico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido aspártico, ácido ascórbico, ácido glutâmico, ácido antranílico, ácido benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido embônico, ácido fenil acético, ácido metano sulfônico, ácido etano sulfônico, ácido p-tolueno sulfônico, e ácido salicílico.

[0035] O termo “sal de adição de base farmaceuticamente aceitável” refere-se àqueles sais farmaceuticamente aceitáveis formados com uma base orgânica ou inorgânica. Exemplos de bases inorgânicas aceitáveis incluem os sais de sódio, potássio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, e alumínio. Os sais derivados de bases não tóxicas orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas que incluem as aminas substituídas que se apresentam naturalmente, as aminas cíclicas e as resinas básicas de permuta iônica, tais como as resinas de isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dietilaminoetanol, trimetamina, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeina, procaina, hidrabamina, colina, betaina, etilenodiamina, glicosamina, metilglicamina, teobromina, purinas, piperizina, piperidina, N-etilpiperidina, e poliamina.

[0036] Os compostos da fórmula geral (I) que contêm um ou vários centros quirais podem estar presentes seja como racematos, misturas diastereoméricas, ou isômeros simples opticamente ativos. Os racematos podem ser separados de acordo com métodos conhecidos nos enantiômeros. Com particularidade, os sais diastereoméricos que podem ser separados por meio de cristalização são formados a partir das misturas racêmicas por meio de reação com um ácido opticamente ativo tais como, por exemplo, ácido D-ou L-tartárico, ácido mandélico, ácido málico, ácido láctico ou ácido canforsulfônico.

[0037] Da forma que é utilizado neste contexto, “combo” refere-se a combinação.

[0038] Da forma que é utilizado neste contexto, “RT-PCR” refere-se uma reação em cadeia de polimerase de transcrição reversa.

[0039] Da forma que é utilizado neste contexto, “CLIA” refere-se a imunoensaio de químio luminescência.

[0040] Da forma que é utilizado neste contexto, “AAV” refere-se a vírus adeno associado.

[0041] Da forma que é utilizado neste contexto, “AAV-HBV” refere-se a um vírus recombinante que carrega 1,3 cópias do genoma HBV acondicionado em capsídeos AAV. Um modelo de camundongo com infecção por HBV crônica por injeção de camundongos com AAV-HBV através de injeção na veia caudal. Neste modelo de camundongo, a replicação ativa de HBV resulta em marcadores virais de HBV persistentes (por exemplo, HBV DNA, HBsAg, HBeAg, e outros assemelhados).

[0042] Da forma que é utilizado neste contexto, “HBsAg” refere-se ao antígeno de superfície de hepatite B.

[0043] Da forma que é utilizado neste contexto, “HBeAg” refere-se a hepatite B e antígeno.

[0044] Da forma que é utilizado neste contexto, “anti-HBs” refere-se a anticorpos contra HBsAg.

[0045] Da forma que é utilizado neste contexto, “preparadores específicos de HBV” refere-se a um par de ácidos nucléicos de cadeia simples que servem como pontos de início e término para a amplificação específica de regiões de DNA de HBV.

[0046] Da forma que é utilizado neste contexto, “TLR7” refere-se ao receptor de tipo Toll 7 de qualquer espécie de origem (por exemplo, humana, de murídeo, marmota e outros assemelhados).

[0047] Da forma que é utilizado neste contexto, “Agonista de TLR7” refere-se a um composto que funciona como um agonista de TLR7, A não ser que de outro modo especificado, um agonista de TLR7 pode incluir o composto em qualquer forma farmaceuticamente aceitável, que inclui qualquer isômero (por exemplo, diastereômero ou enantiômero), sal, solvato, polimorfo, e outros assemelhados. O agonismo de TLR para um composto particular pode ser determinado de qualquer maneira adequada. Por exemplo, ensaios para a detecção de agonismo de TLR de compostos de teste encontram-se descritos, por exemplo, no pedido de patente provisório U.S. N°. 60/432,650, depositado em 11 de dezembro de 2002, e linhas de células recombinantes adequadas para o uso nesses ensaios encontram-se descritos, por exemplo, no pedido de patente provisório U.S. N°. 60/432,651, depositado em 11 de dezembro de 2002,

[0048] A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV, em um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0049] De acordo com uma concretização da presente invenção, um “Agonista de TLR7” é compreendido por um composto de fórmula (I): em que R1 é compreendido por hidroxi, C1-6 alquila, halo C1-6 alquila, C1-6 alquila carbonil-O-, C1-6 alquila-S-, azido, ciano, C2-6 alquenila, C1-6 alquila sulfonil-NH-, (C1-6 alquila)2N-, C1-6 alquila carbonil-NH- ou amino heterocíclico; R2 é compreendido por hidrogênio, C1-6 alquila, C1-6 alcoxi C1-6 alquila, C3-7 ciclo alquila, C2-6 alquinila, C2-6 alquenila, benzil e tiofenil; R3 é compreendido por hidrogênio ou C1-6 alquila carbonil; ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável;

[0050] De acordo com outra concretização da presente invenção, um “agonista de TLR7” é compreendido por um composto da fórmula (II): em que R4 e R5 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio, C2-6 alquenila e C1-6 alquila; R6 e R7 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio, C1-6 alquila, C3-7 ciclo alquila, C3-7 ciclo alquila C2-6 alquinila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila e 2- tiofenil; R8 é compreendido por hidrogênio ou C1-6 alquila carbonil; ou o seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável.

[0051] Com maior particularidade, o agonista de TLR7 de acordo com a presente invenção refere-se a [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil -metil] acetato; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona; 5 -amino -3 -(3’ - deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H,6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2,7 -diona; ou [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 - acetoxipropil] -2 -(5 -amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) tetra hidrofuran -3 -il] acetato ;ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável. De acordo com outra concretização, um “agonista de TLR7” também se refere a qualquer um dos compostos expostos na patente WO2006/066080, Depois da administração, os compostos de fórmula (I) ou fórmula (II) ou os compostos na patente WO2006/066080 são metabolizados nas suas formas ativas que são de utilidade como agonista de TLR7s.

[0052] Da forma que é utilizado neste contexto, “vírus da hepatite B” ou “HBV” refere-se a um membro da família Hepadnaviridae que é dotada de um pequeno genoma de DNA de cadeia dupla de aproximadamente 3,200 pares de bases e um tropismo para células do fígado. O “HBV” inclui o vírus da hepatite B que infecciona qualquer um de uma variedade de mamíferos (por exemplo, seres humanos, primata não humano, e outros assemelhados.) e hospedeiros aviários (pato, e outros assemelhados). O “HBV” inclui qualquer genótipo de HBV conhecido, por exemplo, sorotipo A, B, C, D, E, F, e G; qualquer sorotipo HBV ou subtipo de HBV; qualquer isolado de HBV; variantes de HBV, por exemplo, variantes negativas de HBeAg, variantes de HBV resistentes a fármacos (por exemplo, variantes resistentes a lamivudina; mutantes resistentes a adefovir; mutantes resistentes a tenofovir; mutantes resistentes a entecavir; e assim por diante); e outros assemelhados.

[0053] Da forma que é utilizado neste contexto, “inibidor de reunião de capsídeo de HBV” refere-se a um composto que inibe e / ou interrompe e / ou acelera e / ou dificulta e / ou retarda e ou reduz e / ou modifica a montagem de capsídeo normal de HBV (por exemplo, durante a maturação) e / ou desmontagem de capsídeo normal (por exemplo, durante a infecciosidade) e / ou perturba a estabilidade do capsídeo, induzindo desse modo a morfologia e função aberrante de capsídeo.

[0054] De acordo com uma concretização da presente invenção, o inibidor de montagem de capsídeo de HBV é compreendido por um composto de fórmula (III): farmaceuticamente aceitável.

[0055] Com maior particularidade o inibidor de montagem de capsídeo de HBV de acordo com a presente invenção refere-se a ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 - cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 - il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a - tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 - dimetil -propanóico; ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil - 2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 - azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético (exposto na patente WO 2014/184328); ou ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 - cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 - il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 - carboxílico; ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável. De acordo com outra concretização, um “inibidor de montagem de capsídeo de HBV” com maior particularidade é compreendido por qualquer um dos compostos expostos na patente WO2015/132276, WO 2014/184328 e WO2014/037480,

[0056] De acordo com uma concretização da presente invenção, a composição farmacêutica compreende um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV, em que o agonista de TLR7 e inibidor de montagem de capsídeo de HBV são selecionados independentemente a partir da Tabela 1: (Composto 2 e 4 foram expostos na patente WO2015/132276; o Composto 5 e 6 foram expostos na patente WO2014/184328; o Composto 7, 8 e 9 foram expostos na patente WO2006/066080; o Composto 10 foi exposto na patente WO2014/037480). Tabela 1, Lista de Agonista de TLR7 e capsídeo de HBV

[0057] Com maior particularidade, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV que é selecionado a partir de qualquer uma das seguintes combinações: Composto 1 e Composto 2; Composto 1 e Composto 4; Composto 1 e Composto 5; Composto 1 e Composto 6; Composto 1 e Composto 10; Composto 3 e Composto 2; Composto 3 e Composto 4; Composto 3 e Composto 5; Composto 3 e Composto 6; Composto 3 e Composto 10; Composto 7 e Composto 2; Composto 7 e Composto 4; Composto 7 e Composto 5; Composto 7 e Composto 6; Composto 7 e Composto 10; Composto 8 e Composto 2; Composto 8 e Composto 4; Composto 8 e Composto 5; Composto 8 e Composto 6; Composto 8 e Composto 10; Composto 9 e Composto 2; Composto 9 e Composto 4; Composto 9 e Composto 5; Composto 9 e Composto 6; Composto 9 e Composto 10; Composto 11 e Composto 2; Composto 11 e Composto 4; Composto 11 e Composto 5; Composto 11 e Composto 6; e Composto 11 e Composto 10,

[0058] O Composto 1 a 11 da referida combinação supracitada pode ser substituído pelo seu correspondente sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável, que constitui outro aspecto desta invenção.

[0059] O Composto 1 da referida combinação supracitada pode ser substituídos por seus correspondentes pró-fármacos mono, duplos ou triplos, tais como: e seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável.

[0060] De acordo com uma concretização da presente invenção, a composição farmacêutica consiste de um agonista de TLR7 e um inibidor de conjunto da capsídeo de HBV, em um carreador farmaceuticamente aceitável. Com maior particularidade, a composição consiste de: [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 - il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a - tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 - dimetil -propanóico; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico;[(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) - 4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 - tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 - difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) - 4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 - tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 - difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 - d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil - metil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 - cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 - il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a - tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 - dimetil -propanóico; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 - d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil - metil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 - d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil - metil] acetato e ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 - d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil - metil] acetato e ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 - diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 - d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil - metil] acetato e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -Cloro -4 - fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 - diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -Cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 - carboxílico; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -Cloro -4 -fluoro -fenil) -5 - metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H,6H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2,7 -diona e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -Cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] - morfolina -3 -carboxílico; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 - il] -2,2 -dimetil -propanóico; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 - oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 - metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 - il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 - il] acético; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 - metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 - il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 - il] acético; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro - fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil - propanóico; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 - fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil - propanóico; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 - azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 - azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H,6H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2,7 -diona e ácido 3 - [(8aS) - 7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 - etoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 - il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H,6H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2,7 -diona e ácido 3 - [(8aS) - 7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil - fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H,6H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2,7 -diona e ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) - 5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin - 6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan - 3 -il] acético; ou 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H,6H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2,7 -diona e ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) - 5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin - 6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan - 3 -il] acético; em um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0061] De acordo com outra concretização da presente invenção, a composição farmacêutica consiste de um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV, em um carreador farmaceuticamente aceitável, com maior particularidade, a composição consiste de: [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 - il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a - tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 - dimetil -propanóico; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 - d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil - metil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) - 4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 - tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 - difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 - diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 - fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil - propanóico ; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 - metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico; [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] -2 -(5 - amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 - il)tetra hidrofuran -3 -il] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 - oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] -2 -(5 - amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) tetra hidrofuran -3 -il] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 - il] -2,2 -dimetil -propanóico; [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] -2 -(5 - amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) tetra hidrofuran -3 -il] acetato e ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 - metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 - il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 - il] acético; [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] -2 -(5 - amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 - il)tetra hidrofuran -3 -il] acetato e ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 - metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 - il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 - il] acético; ou [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] -2 -(5 - amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) tetra hidrofuran -3 -il] acetato e ácido (S) -4 - [(R) -6 - (2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 - carboxílico; em um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0062] De acordo com outra concretização da presente invenção, outros agonistas TLR7s ou inibidores de montagem de capsídeo de HBV pode também podem ser usados em uma composição farmacêutica que inclui pequenas moléculas ou grandes moléculas. Exemplos de outros agonistas TLR7s incluem, sendo que não se fica limitado aos mesmos, Imiquimod, Resiquimod, PF -4878691, SM -276001, ANA975, ANA773 e GS9620, Exemplos de outros inibidores de montagem de capsídeo de HBV incluem, sendo que não se fica limitado aos mesmos, Bay 41 -4109, Bay 38 -7690, Bay 39 -5493, GLS4, AT -61 e AT -130,

[0063] De acordo com outra concretização da presente invenção, a composição farmacêutica pode compreender adicionalmente um ou mais outros agentes antivirais, que incluem, sendo que não se fica limitado aos mesmos, lamivudina, adefovir, tenofovir, telbivudine e entecavir.

[0064] Dosagens típicas de um agonista de TLR7 e / ou um inibidor de montagem de capsídeo de HBV podem estar nas faixas recomendada pelo fabricante, e onde indicadas pelas respostas in vitro em modelos de animais, podem ser reduzidas até cerca de uma ordem de magnitude de concentração ou quantidade. Deste modo, a dosagem apropriada dependerá da avaliação do médico, da condição do paciente, e da eficácia do método terapêutico com base na capacidade de resposta in vitro dos modelos de animais apropriados.

[0065] Outra concretização da presente invenção refere-se a um método para manufaturar um medicamento para o tratamento ou profilaxia de infecção pelo vírus da hepatite B, caracterizado por um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV serem usados no medicamento.

[0066] Outra concretização mais da presente invenção refere-se ao método para manufaturar um medicamento para o tratamento ou profilaxia de infecção pelo vírus da hepatite B, caracterizado por o agonista de TLR7 e o inibidor de montagem de capsídeo de HBV serem co- administrados na mesma formulação ou em formulações diferentes.

[0067] Para os propósitos da presente invenção, “co-administrar” refere-se a qualquer administração do agonista de TLR7 e do inibidor de montagem de capsídeo de HBV como os dois agentes ativos, seja separadamente ou em conjunto, onde os dois agentes ativos são administrados como parte de um regime de dose apropriado projetado para a obtenção do benefício da terapia de combinação. Deste modo, os dois agentes ativos podem ser administrados seja como parte da mesma composição farmacêutica ou em composições farmacêuticas separadas. Da mesma forma, os dois agentes ativos podem ser administrados seja simultaneamente, ou sucessivamente.

[0068] O agonista de TLR7 e o inibidor de montagem de capsídeo de HBV podem ser administrados com vários carreadores inertes farmaceuticamente aceitáveis na forma de comprimidos, cápsulas, pastilhas, balas, pirulitos, pós, sprays, cremes, pomadas, supositórios, geléias, géis, pastas, loções, ungüentos, elixires, xaropes, e outros assemelhados. A administração de tais formas de dosagem pode ser realizada na forma de doses únicas ou múltiplas. Os carreadores incluem diluentes sólidos de enchimentos, meios aquosos estéreis e vários solventes orgânicos não tóxicos. A administração dessas formas de dosagem pode ser realizada por meio de, sendo que não se fica limitado às mesmas, administração oral, administração parenteral, administração veterinária.

[0069] Outra concretização mais da presente invenção refere-se ao método para manufaturar um medicamento para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B, caracterizado por o agonista de TLR7 e o inibidor de montagem de capsídeo de HBV se destinarem à administração a um paciente pela mesma via ou por vias diferentes.

[0070] Outra concretização mais da presente invenção refere-se ao método para manufaturar um medicamento para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B, caracterizado por o agonista de TLR7 e o inibidor de montagem de capsídeo de HBV se destinarem à administração a um paciente por meio de administração parenteral ou oral.

[0071] Outra concretização mais da presente invenção refere-se ao método para manufaturar um medicamento para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B, caracterizado por a administração do agonista de TLR7 e do inibidor de montagem de capsídeo de HBV a um paciente ser simultânea ou sequencial. Em qualquer um dos métodos da presente invenção, a administração dos agentes simultaneamente pode ser realizada pela administração separadamente ou sequencialmente de agentes ao mesmo tempo, ou em conjunto na forma de uma combinação fixa. Da mesma forma, em qualquer um dos métodos da presente invenção, a administração de agentes separadamente ou sequencialmente pode ser em qualquer ordem.

[0072] Outra concretização da presente invenção refere-se ao método para manufaturar um medicamento para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B, caracterizado por o seu agonista de TLR7 ser compreendido por um composto da fórmula (I) ou fórmula (II), ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável. Com particularidade, o agonista de TLR7 é compreendido por [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) - 4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil - metil] acetato; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona; 5 - amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) - 3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona; 5 -amino -3 -(3’ - deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H,6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2,7 -diona; ou [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 - acetoxipropil] -2 -(5 -amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il)tetra hidrofuran -3 -il] acetato; ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável.

[0073] Outra concretização da presente invenção refere-se ao método para manufaturar um medicamento para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B, caracterizado por o inibidor do seu montagem de capsídeo de HBV é compreendido por um composto da fórmula (III), ou sal,enantiômero ou diastereômero do mesmo farmaceuticamente aceitável. Com particularidade, o inibidor de montagem de capsídeo de HBV é compreendido por:Ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil - propanóico; Ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil - propanóico; Ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 - fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 - azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; Ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 - fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 - azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; ou ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro - fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro - pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico; ou o seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável.

[0074] Out ra concretização da presente invenção refere-se ao método para manufaturar um medicamento para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B, caracterizado por o medicamento compreender, além disso, um ou mais outros agentes antivirais, que incluem, sendo que não se fica limitado aos mesmos, lamivudine, adefovir, tenofovir, telbivudine e entecavir.

[0075] Outra concretização da presente invenção refere-se ao método para manufaturar um medicamento para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B, em que o agonista de TLR7 e o inibidor de montagem de capsídeo de HBV usados no medicamento são compreendidos por: [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 - il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a - tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 - dimetil -propanóico; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 - d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil - metil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) - 4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 - tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 - difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 - diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 - fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil - propanóico; ou 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 - metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico;em um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0076] Outra concretização da presente invenção refere-se a um kit que compreende um recipiente que compreende um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV, sendo que o dito kit pode compreender ainda um diluente estéril.

[0077] Outra concretização mais da presente invenção refere-se ao referido kit, em que o kit pode compreender ainda um inserto de embalagem (bula) que compreende instruções impressas direcionadas ao uso de um tratam entro combinado de um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV na forma de um método para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B.

[0078] Outra concretização da presente invenção refere-se ao referido kit, em que o agonista de TLR7 é compreendido por [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 - oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 - oxatiolan -2 -il] -ciclopropil -metil] acetato; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi - β -D -ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 - ona; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H,6H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2,7 -diona; ou [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] -2 -(5 -amino -2,7 -dioxo -6H - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) tetra hidrofuran -3 -il] acetato; ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável; e / ou o inibidor de montagem de capsídeo de HBV é compreendido por ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 - oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 - il] -2,2 -dimetil -propanóico; ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil - 2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 - azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; ou ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] - morfolina -3 -carboxílico; ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável.

[0079] Outra concretização da presente invenção refere-se ao referido kit, em que o agonista de TLR7 e o inibidor de montagem de capsídeo de HBV usados no recipiente são compreendidos por: [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 - il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a - tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 - dimetil -propanóico; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 - d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil - metil] acetato e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) - 4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 - tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 - difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 - diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 -etoxicarbonil -4 -(3 - fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil - propanóico; ou 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D - ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona e ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 - metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] -morfolina -3 -carboxílico;em um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0080] Out ra concretização da presente invenção refere-se a um método para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B, que compreende administrar a um paciente uma primeira quantidade efetiva de um agonista de TLR7, ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável; e uma segunda quantidade do inibidor de montagem de capsídeo de HBV, ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável; em que o agonista de TLR7 é compreendido por [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato; [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil -metil] acetato; 5 -amino -3 -(3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona; 5 -amino -3 -(2’ -O -acetil -3’ -deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona; 5 -amino -3 -(3’ - deoxi -β -D -ribofuranosil) -3H,6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2,7 -diona; ou [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 - acetoxipropil] -2 -(5 -amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il)tetra hidrofuran -3 -il] acetato; ou seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável; e / ou o inibidor de montagem de capsídeo de HBV é compreendido por ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4R) -4 -(2 - cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 - il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a - tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 - dimetil -propanóico; ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico; ácido 2 - [(1R,3S,5S) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil - 2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 -azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; ácido 2 - [(1S,3R,5R) -8 - [ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -6,6 -difluoro -8 - azabiciclo [3,2,1] octan -3 -il] acético; ou ácido (S) -4 - [(R) -6 -(2 -cloro -4 -fluoro -fenil) -5 -metoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -3,6 -diidro -pirimidin -4 -ilmetil] - morfolina -3 -carboxílico; ou o seu sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável.

[0081] Out ra concretização da presente invenção refere-se ao uso da composição farmacêutica mencionada anteriormente neste contexto na forma de um medicamento antiviral, em particular na forma do medicamento para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B.

[0082] Out ra concretização da presente invenção refere-se ao uso de um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV para a manufatura da composição farmacêutica mencionada anteriormente neste contexto na forma de um medicamento antiviral, em particular o medicamento para o tratamento ou profilaxia da infecção pelo vírus da hepatite B.

EXEMPLOS

[0083] A invenção será mais amplamente compreendida pela referência aos exemplos que se seguem. Não obstante, os mesmos não deverão ser considerados como limitativos do escopo da invenção. Exemplo 1

[0084] [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 - oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato (Composto 1)

[0085] O Composto 1 foi preparado através do seguinte esquema:

[0086] Preparação de [(2R) -2 -[(3aR,5S,6aR) -2,2 hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol

[0087] A uma solução de (1R) -1 -[(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] etano -1,2 -diol (composto 1A, 100 g, 490 mmol) em piridina anidra (1000 mL) foi adicionado cloreto de p-toluenossulfonil (139 g, 735 mmol) sob 0oC. Depois de ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 12 horas, a solução resultante foi finalizada por meio de água (100 mL) e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:10 a 1:3 EtOAc em éter de petróleo) para proporcionar 130 g de sulfonato de [(2R)-2- [(3aR,5S,6aR)- 2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetra hidrofuro [2,3-d] [1,3] dioxol- 5-il] -2-hidroxi-etil] 4-metilbenzeno (composto 1B) na forma de a óleo de cor amarelo claro.

[0088] Composto 1B: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,82 (d, J = 8,00 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 8,00 Hz, 2H),5.78 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,75 (t, J = 4,00 Hz, 1H), 4,204,12 (m, 2H), 4,03- 3,97 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,39 (d, J = 3,51 Hz, 1H), 2,08-2,15 (m, 1 H), 1,75-1,80 (m, 1 H),1,51 (s, 3 H), 1,33 (s, 3 H).

[0089] Preparação de (3aR,5S,6aR) -2,2 –dimetil -5 - [(2R) -oxiran -2 -il] -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol

[0090] A uma solução de sulfonato de [(2R) -2 - [(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] -2 -hidroxi -etil] 4 - metilbenzeno (composto 1B, 100 g, 280 mmol) em THF anidro (1500 mL) resfriado para -70oC foi adicionado bis(trimetilsil) amida de potássio (340 mL, 340 mmol, 1 M em THF) sob atmosfera de N2. Depois de ser submetida a agitação sob -70oC durante 1 hora, a mistura de reação foi vazada em solução saturada de NH4Cl. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram submetidas a secagem sobre Na2SO4 e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:3 EtOAc em éter de petróleo) para proporcionar 40,5 g de (3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-5- [(2R)-oxiran-2-il] -3a,5,6,6a- tetra hidrofuro [2,3-d] [1,3] dioxol (composto 1C) na forma de um óleo de cor amarelo claro.

[0091] Composto 1C: 1H NMR: (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5.87 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,77 (t, J = 4,00, 1H), 4,20-4,28 (m, 1H), 3,14-3,20 (m, 1H), 2,83-2,88 (m, 1H), 2,63 (dd, J = 5.00, 2,80 Hz, 1H), 2,09 (dd, J = 12,00, 4,00 Hz, 1H), 1,69-1,79 (m, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).

[0092] Preparação de (1R) -1 -[(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propan -1 –ol

[0093] A uma suspensão de CuI (19,3 g, 107 mmol) em THF anidro (2000 mL) sob atmosfera de N2 foi adicionado brometo de metil-magnésio (3 M em éter dietílico, 537 mL, 1,61 mol) sob -70oC. Depois de ser submetida a agitação sob a mesma temperatura durante 1 hora, uma solução de (3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-5- [(2R)-oxiran-2-il] -3a,5,6,6a-tetra hidrofuro [2,3-d] [1,3] dioxol (composto 1C, 100 g,537 mmol, dissolvido em THF anidro 200 mL) foi adicionado à mistura de reação gota a gota. Depois de ser submetida a agitação sob -70oC durante 2 horas adicionais, a mistura de reação foi vazada em solução saturada de NH4Cl. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram submetidas a secagem sobre Na2SO4 e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:3 EtOAc em éter de petróleo) para proporcionar 82 g de (1R) -1 -[(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol - 5 -il] propan -1 -ol (composto 1D) na forma de um sólido de cor amarelo claro.

[0094] Composto 1D: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5.83 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,81 - 4,73 (m, 1H), 4,264,19 (m, 1H), 3,91-3,82 (m, 1H), 2,08-2,02 (m, 1H), 1,93 - 1,89 (m, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,49-1,39 (m, 2H), 1,34 (s,3H), 1,02 (t, J = 7,53 Hz, 3H).

[0095] Preparação de [(1S) -1 - [(3aR,5S,6aR) - 2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propil] 4 –nitrobenzoato

[0095] A uma solução submetida a agitação de (1R) -1 - [(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a –tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propan -1 –ol (composto 1D, 50 g, 245 mmol), trifenilfosfina (195 g, 743 mmol), ácido 4-nitrobenzoico (124 g, 743 mmol) em THF (1200 mL) foi adicionado dietil azodicarboxilato (130 g, 743 mmol) gota a gota sob 0oC sob N2, Depois de ser submetida a agitação sob 18oC durante 10 horas, a mistura foi finalizada por meio de adição de solução saturada de NaHCO3 e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, submetidas a secagem sobre Na2SO4 e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:3 EtOAc em éter de petróleo) para proporcionar 61 g de [(1S) -1 - [(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propil] 4 -nitrobenzoato (composto 1E) na forma de um sólido de cor amarelo claro.

[0096] Composto 1E: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 8,34- 8,22 (m, 4 H), 5.85 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 5.235.17 (m, 1H), 4,76 (t, J = 4,27 Hz, 1H), 4,48- 4,39 (m, 1H), 2,12 (dd, J = 13,30, 4,52 Hz, 1H), 1,88- 1,78 (m, 2H), 1,71- 1,62 (m, 1H), 1,55 (s, 3 H), 1,34 (s, 3 H), 1,01 (t, J = 7,40 Hz, 3 H).

[0097] Preparação de (1S) -1 -[(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propan -1 –ol

[0098] A uma solução de [(1S) -1 - [(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propil] 4 -nitrobenzoato (composto 1E, 100 g, 285 mmol) em metanol (1200 mL) foi adicionado K2CO3 (78,7 g, 570 mmol). Depois de ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 10 minutos, a mistura resultante foi filtrada. O filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:8 EtOAc em éter de petróleo) para proporcionar 54,7 g de (1S) -1 - [(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propan -1 -ol (composto 1F) na forma de um sólido de cor amarelo claro.

[0099] Composto 1F: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5.81 (d, J = 3,64 Hz, 1H), 4,75 (t, J = 4,20 Hz, 1H), 4,184,11 (m, 1H), 3,49-3,40 (m, 1H), 2,07-2,00 (m, 2H), 1,841,75 (m, 1H), 1,59- 1,47 (m, 5H), 1,32 (s, 3H), 1,01 (t, J = 7,40 Hz, 3H).

[00100] Preparação de [(1S) -1 -[(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propil] acetate

[00101] A uma solução submetida a agitação de (1S) -1 - [(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a –tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propan -1 –ol (composto 1F,13,5 g, 67 mmol), TEA (81 g, 804 mmol), DMAP (1,6 g, 13 mmol) em DCM anidro (150 mL) foi adicionado anidrido acético (62 g, 603 mmol). Depois de ser submetida a agitação sob 22oC durante 10 horas, a reação foi finalizada por meio da solução saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram submetidas a secagem sobre Na2SO4, e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:8 EtOAc em éter de petróleo) para proporcionar 13 g de [(1S) -1 -[(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propil] acetato (composto 1G) na forma de um óleo incolor.

[00102] Composto 1G: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5.83 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,92 (dt, J = 7,97, 5.18Hz, 1H), 4,74 (t, J = 4,00 Hz, 1H), 4,35- 4,27 (m, 1H),2,12 (s, 3H), 2,08 - 1,99 (m, 1H), 1,74- 1,56 (m, 3H), 1,53(s, 3H), 1,34 (s, 3H), 0,95 (t, J = 7,40 Hz, 3H).

[00103] Preparação de [(3R,5S) -2 -acetoxi -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] tetra hidrofuran -3 -il] acetate

[00104] A uma solução de [(1S) -1 -[(3aR,5S,6aR) -2,2 -dimetil -3a,5,6,6a -tetra hidrofuro [2,3 -d] [1,3] dioxol -5 -il] propil] acetato (composto 1G, 4,8 g, 20 mmol), ácido acético (12,2 g, 200 mmol) e anidrido acético (10,2 g, 100 mmol) em DCM anidro (100 mL) foi adicionado H2SO4 concentrado (0,5 mL) sob 0 oC. Depois de ser submetida a agitação sob 22oC durante 3 horas, a reação foi finalizada por meio de adição de solução saturada de NaHCO3 solution. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram submetidas a secagem sobre Na2SO4, filtradas, e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:8 EtOAc em éter de petróleo) para proporcionar 2,3 g de [(3R,5S) -2 -acetoxi -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] tetra hidrofuran -3 -il] acetato (composto 1H) na forma de um óleo incolor.

[00105] Composto 1H: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,12 (s, 1H), 5.19 (d, J = 4,52 Hz, 1H), 4,83- 4,91 (m, 1H), 4,34- 4,44 (m, 1H), 2,09- 2,19 (m, 9H), 1,51- 1,74 (m, 4H), 0,94 (t, J = 7,40 Hz, 3H).

[00106] Preparação de [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] -2 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il)tetra hidrofuran -3 -il] acetate

[00107] A uma suspensão de 5-amino-3H-tiazolo [4,5-d] pirimidin-2-ona (3,5 g, 20,8 mmol) em xileno (160 mL) foi adicionado BSA (21,2 g, 104 mmol). A mistura de reação foi submetida a agitação sob 70oC durante 1 horas sob argônio para formar uma solução límpida. Depois de algum do xileno e BSA excedente serem evaporados, [(3R,5S) -2 -acetoxi -5 -[(1S) -1 -acetoxipropil] tetra hidrofuran - 3 -il] acetato (composto 1H, 3,0 g, 10,4 mmol) e TMSOTf (2,6 g, 11,6 mmol) foram adicionados em sequência sob 0oC. Depois de ser aquecida com agitação sob 65oC durante 2 horas, a reação foi finalizada com água (30 mL), extraída com EA (30 mL) três vezes. As camadas orgânicas combinadas foram submetidas a secagem sobre Na2SO4 e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:10 a 1:1 EtOAc em éter de petróleo) para se proporcionar 2,0 g de [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] -2 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il)tetra hidrofuran -3 -il] acetato (composto 1I) na forma de um sólido de cor branca.

[00108] Composto 1I: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 8,15 (s, 1 H), 5,04 (d, J = 1,51 Hz, 1 H), 5.80 (d, J = 7,03 Hz, 1 H), 5.27 (br. s., 2 H), 4,98- 5.04 (m, 1 H),4,32- 4,39 (m, 1 H), 2,63 - 2,77 (m, 1 H), 2,13 (s, 3 H),2,09 (s, 3 H), 2,00 - 2,07 (m, 1 H), 1,61- 1,75 (m, 2 H), 0,94 (t, J = 7,40 Hz, 3 H).

[00109] Preparação de [(1S) -1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 - hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetate

[0110] [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil]-2 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 - il)tetra hidrofuran -3 -il] acetato (composto 1I, 3,2 g,8,0 mmol) e K2CO3 (2,2 g, 15,0 mmol) foram colocados em suspensão em etanol anidro (85 mL) sob a temperatura ambiente. Metanol (85 mL) foi adicionado gota a gota sob atmosfera de N2. Depois da adição, a mistura foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 10 minutos (monitorada por meio de TLC). Depois da reação, a mistura foi vazada em NH4Cl saturado, extraída com EA (150 mL) quatro vezes. As camadas orgânicas combinadas foram submetidas a secagem sobre Na2SO4 concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:100 a 1:70 MeOH em DCM) para se proporcionar o produto bruto, que foi ainda purificado por meio de cromatografia de coluna flash (eluição com acetonitrila e água) para se proporcionar 1,64 g de [(1S) - 1 - [(2S,4R,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -4 -hidroxi -tetra hidrofuran -2 -il] propil] acetato (Composto 1) na forma de um pó de cor branca.

[0111] Composto 1: 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ ppm: 8,19 (s, 1 H), 5,02- 5,05 (m, 1 H), 4,94- 5.00 (m, 2 H), 4,33- 4,40 (m, 1 H), 2,58- 2,68 (m, 1 H), 2,03 (s, 3 H), 1,86- 1,96 (m, 1 H), 1,56 - 1,77 (m, 2 H), 0,93 (t, J = 7,40 Hz, 3 H). MS observado (ESI-) [(M+H)+] : 355,0.Exemplo 2

[0112] Ácido 3 -[(8aS) -7 -[ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil –propanóico

[0113] O Composto 2 foi preparado por meio do seguinte esquema:

[0114] A uma solução submetida a agitação de etil (4R) -6 -(bromometil) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidina -5 -carboxilato (composto 2A, 0,073 g, 0,16 mmol) e ácido 3 - [(8aS) -3 - oxo -1,5,6,7,8,8a -hexa hidroimidazo [1,5 -a] pirazin -2 - il] -2,2 -dimetil -propanóico (composto 2B, em bruto, 0,25 mmol) em 1,2 -dicloro etano (5 mL) foi adicionado gota a gota DIPEA (0,078 mL, 0,45 mmol). A mistura de reação foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente até o desaparecimento do composto 2A. A mistura foi então diluída com EtOAc (50 mL) e lavada sucessivamente com solução aquosa saturada de NH4Cl e solução salina. A camada orgânica foi separada e submetida a secagem sobre Na2SO4, O solvente foi removido in vacuo e o produto em bruto foi purificado por meio de -HPLC de preparação para se proporcionar ácido 3 -[(8aS) -7 -[ [(4R) -4 -(2 -cloro -3 - fluoro -fenil) -5 -etoxicarbonil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico (Composto 2) na forma de um sólido de cor amarelo claro (12 mg). 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ ppm 7,92 - 8,02 (m, 1H), 7,70 - 7,80 (m, 1H), 7,21 - 7,36 (m, 2H), 7,10 - 7,21 (m, 1H), 5,19 - 5,28 (m, 1H), 3,99 - 4,14 (m, 3H), 3,81 - 3,96 (m, 3H), 3,47 - 3,56 (m, 1H), 3,38 - 3,44 (m, 1H), 3,27 - 3,32 (m, 1H), 3,15 - 3,25 (m, 1H),3,07 - 3,14 (m, 1H), 2,79 - 2,96 (m, 2H), 2,30 - 2,41 (m, 1H), 2,13 - 2,23 (m, 1H), 1,20 (d, J = 2,76 Hz, 6H), 1,13 (m, 3H). MS: calculado 619 (M+H)+, medido 619 (M+H)+.

[0115] Preparação de etil (4R) -6 -(bromometil) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidina -5 -carboxilato (composto 2A):

[0116] Preparação de cloridrato de tiazol-2- carboxamidina (composto 2A-1):

[0117] A uma solução submetida a agitação de tiazol-2-carbonitrila (1,5 g, 14 mmol) em 5 mL de MeOH anidro foi adicionada gota a gota uma solução de metóxido de sódio (0,74 g, 14 mmol) em 10 mL de metanol anidro. A mistura de reação foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente até o desaparecimento do material de partida. Então cloreto de amônio (1,5 g, 28 mmol) foi adicionado em uma parte e a mistura de reação foi submetida a agitação durante a noite. O material não dissolvido foi removido por meio de filtração e o filtrado foi concentrado para proporcionar cloridrato de tiazol -2 -carboxamidina (composto 2A-1, 2,1 g) na forma de um sólido de cor cinza, o qual foi usado diretamente na etapa seguinte sem qualquer outra purificação. MS: calculado 128 (M+H)+, medido 128 (M+H)+.

[0118] Preparação de etil 4 -(2 -cloro -3 - fluoro -fenil) -6 -metil -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidina -5 -carboxilato (composto 2A-2):

[0119] A uma solução submetida a agitação de cloridrato de tiazol-2-carboxamidina (1,3 g, 10 mmol), acetoacetato de etil (1,3 g, 10 mmol) e 2-cloro-3- fluorobenzaldeído (1,6 g, 10 mmol) em trifluoroetanol (30 mL) foi adicionado acetato de potássio (2,0 g, 20 mmol). A mistura de reação foi submetida a refluxo durante 16 horas. Depois ela foi resfriada para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em acetato de etil e então lavada com solução salina. A camada orgânica foi submetida a secagem sobre Na2SO4, O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna de sílica gel (acetato de etil / éter de petróleo: a partir de 1/4 a 1/2) para proporcionar etil 4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -6 -metil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidine -5 - carboxilato (composto 2A-2, 2,8 g) na forma de um sólido de cor amarela. MS: calculado (M+H)+ 380, medido (M+H)+ 380.

[0120] Preparação de etil (4R)-4-(2-cloro-3- fluoro-fenil)-6-metil-2-tiazol-2-il-1,4-diidropirimidine-5- carboxilato (composto 2A-2a):

[0121] Uma separação quiral do composto 2A-2 racêmico em eluição com um solvente misto de 85% de CO2 supercrítico / 15% EtOH sob taxa de 100 mL/min. em SFC (SFC-Multigram; IC: 5 x 250 mm, 5μ) proporcionou dois enantiômeros de etil (4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -6 -metil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidina -5 - carboxilato (composto 2A-2a, Eluição mais rápida) e etil (4S) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -6 -metil -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidina -5 -carboxilato (composto 2A- 2b, eluição mais lenta). A configuração absoluta do (-)- enantiômero composto 2A-2a desejado ( [α] D20 -45,6 (c 0,28, MeOH)) foi determinada por meio de estudo de difração por raios-X (Figura 2).

[0122] Preparação de etil (4R) -6 -(bromometil) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidine -5 -carboxilato (composto 2A):

[0123] A uma solução submetida a agitação de etil (4R) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -6 -metil -2 - tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidina -5 –carboxilato (composto 2A-2a, 0,37 g, 1,0 mmol) em CCl4 (5 mL) foi adicionado NBS (0,20 g, 1,1 mmol) por partes. Depois de a mistura de reação ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 1 hora, o solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna de sílica gel para se proporcionar etil (4R) -6 -(bromometil) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidina -5 -carboxilato (composto 2A, 0,35 g) na forma de um sólido de cor amarela. MS: calculado 459 (M+H)+, medido 459 (M+H)+.

[0124] Preparação de ácido 3- [(8aS)-3-oxo- 1,5,6,7,8,8a-hexa hidroimidazo [1,5-a] pirazin-2-il] -2,2- dimetil-propanóico (composto 2B):

[0125] Preparação de O1 -benzil O4 -terc –butil (2S) -2 -(hidroximetil) piperazina -1,4 –dicarboxilato (composto 2B-1):

[0126] A uma solução submetida a agitação de terc -butil (3S) -3 -(hidroximetil) piperazina -1 -carboxilato (número CAS: 314741-40-7, Bepharm; para a sua síntese, favor referir-se a: Gao H., Renslo A. R. J. Org. Chem. 2007, 72, 8591-8592) (6 g, 27,8 mmol) em NaHCO3 saturado (45 mL) e EtOAc (45 mL) foi adicionado cloroformato de benzil (7,1 g, 41,7 mmol) gota a gota sob 0oC. Então a mistura de reação foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 15 horas. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (60 mL). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (35 mL). As camadas orgânicas combinadas foram submetidas a secagem sobre Na2SO4, O solvente foi removido in vacuo para se proporcionar o produto em bruto, que foi purificado por meio de cromatografia de coluna sílica gel (Éter de petróleo : EtOAc = 10:1 a 1:1) para se proporcionar O1 - benzil O4 -terc -butil (2S) -2 -(hidroximetil) piperazina - 1,4 -dicarboxilato (composto 2B-1, 5,7 g). MS: calculado 351 (M+H)+, medido 351 (M+H)+.

[0127] Preparação de O1 -benzil O4 -terc -butil (2S) -2 -formilpiperazina -1,4 -dicarboxilato (composto 2B- 2):

[0128] A uma solução submetida a agitação de cloreto de oxalil (3,64 g, 28,6 mmol) em diclorometano anidro (80 mL) sob -78oC foi adicionado gota a gota dimetil sulfóxido (4,47 g, 57,3 mmol). Depois de 10 minutos, uma solução de O1-benzil O4-terc-butil (2S)-2-(hidroximetil) piperazina-1,4-dicarboxilato (composto 2B-1, 5,7 g, 19,1 mmol) em diclorometano (20 mL) foi adicionada gota a gota. Depois de a mistura ser submetida a agitação durante 30 minutos sob -78oC, adicionou-se N,N-diisopropiletilamina (14,78 g, 114,6 mmol) e a mistura de reação foi submetida a agitação durante 30 minutos. Depois de a mistura de reação ser aquecida lentamente para 0oC durante 30 minutos, ela foi diluída com diclorometano (80 mL), lavada com ácido cítrico aquoso a 5% (10 mL), solução salina e então submetida a secagem sobre Na2SO4, Depois de filtração, a mistura foi concentrada in vacuo para proporcionar o produto em bruto O1 -benzil O4 -terc -butil (2S) -2 -formil piperazina -1,4 -dicarboxilato (composto 2B-2, 7,0 g). MS: calculado 349 (M+H)+, medido 349 (M+H)+.

[0129] Preparação de O1 -benzil O4 -terc -butil (2R) -2 - [ [(3 -etoxi -2,2 -dimetil -3 -oxo -propil)amino] metil] piperazina -1,4 -dicarboxilato (composto 2B-3):

[0130] A uma solução submetida a agitação de sal de cloridrato de etil 3-amino-2,2-dimetil-propanoato (3,4 g, 18,6 mmol) em DCM anidro (100 mL) foi adicionado DIPEA (2,6 g, 27,3 mmol) sob a temperatura ambiente. Então O1- benzil O4-terc-butil (2S)-2-formil piperazina-1,4- dicarboxilato (composto 2B-2, em bruto, 7,0 g, 20 mmol) foi adicionado, seguido por NaBH(OAc)3 (5,3 g, 29,8 mmol) e AcOH (1,5 mL) sob 0oC. A mistura de reação foi submetida a agitação durante 16 horas sob a temperatura ambiente. Água (100 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM (100 mL). A camada orgânica foi submetida a secagem e concentrada in vacuo para se proporcionar o produto em bruto de O1 -benzil O4 -terc -butil (2R) -2 -[[(3 -etoxi - 2,2 -dimetil -3 -oxo -propil)amino] metil] piperazina -1,4 -dicarboxilato (composto 2B-3, 7,3 g). MS: calculado 478 (M+H)+, medido 478 (M+H)+.

[0131] Preparação de terc -butil (3R) -3 - [ [(3 -etoxi -2,2 -dimetil -3 -oxo -propil) amino] metil] piperazina -1 -carboxilato (composto 2B-4):

[0132] A uma solução de O1 -benzil O4 -terc - butil (2R) -2 - [ [(3 -etoxi -2,2 -dimetil -3 -oxo - propil)amino] metil] piperazina -1,4 -dicarboxilato (composto 2B-3, em bruto, 3,3 g, 5,9 mmol) em EtOH (100 mL) foi adicionado paládio em carbono a 10% (1 g). Então, a mistura foi submetida a agitação sob 50oC durante 3 horas sob atmosfera de hidrogênio [4,46 bar (50 Psi)]. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo para proporcionar o terc -butil (3R) -3 - [ [(3 - etoxi -2,2 -dimetil -3 -oxo -propil)amino] metil] piperazina -1 -carboxilato (composto 2B-4, 1,8 g). MS: calculado 344 (M+H)+, medido 344 (M+H)+.

[0133] Preparação de terc -butil (8aR) -2 -(3 - etoxi -2,2 -dimetil -3 -oxo -propil) -3 -oxo -5,6,8,8a - tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazina -7 -carboxilato (composto 2B-5):

[0134] A uma solução de terc - butil (3R) -3 - [ [(3 -etoxi -2,2 -dimetil -3 -oxo -propil) amino] metil] piperazina -1 -carboxilato (composto 2B -4, 1,8 g, 5.2 mmol) em diclorometano anidro (60 mL) foi adicionado N,N - diisopropiletilamina (3,4 g, 25,2 mmol) sob 0oC. Então, trifosgênio (783 mg, 2,6 mmol) foi adicionado sob 0oC e a mistura foi submetida a agitação sob 10 - 15oC durante 16 horas. Água (50 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com diclorometano (60 mL). A camada orgânica foi submetida a secagem sobre Na2SO4 e o solvente foi removido in vacuo para se proporcionar o produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (Éter de petróleo: EtOAc = 5:1 a 1:1) para se proporcionar terc -butil (8aR) -2 -(3 -etoxi -2,2 -dimetil -3 -oxo -propil) -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H - imidazo [1,5 -a] pirazina -7 -carboxilato (composto 2B -5, 1,3 g). MS: calculado 370 (M+H)+, medido 370 (M+H)+.

[0135] Preparação de ácido 3 - [(8aS) -3 -oxo - 1,5,6,7,8,8a -hexahidroimidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] - 2,2 -dimetil -propanóico (composto 2B):

[0136] A uma solução submetida a agitação de terc -butil (8aR) -2 -(3 -etoxi -2,2 -dimetil -3 -oxo - propil) -3 -oxo -5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 - a] pirazina -7 -carboxilato (composto 2B -5, 94 mg, 0,25 mmol) em THF (3 mL) foi adicionada uma solução de LiOH^H2O (84 mg, 2,0 mmol) em H2O (1 mL) sob a temperatura ambiente. Depois de a mistura de reação ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante a noite, ela foi acidulada para PH 3~4 com 1N HCl sob 0oC. A mistura foi então concentrada in vacuo e submetida a secagem azeotropicamente com tolueno para se proporcionar o ácido em bruto que foi dissolvido em diclorometano (2 mL) e tratado com ácido trifluoro acético (2 mL) sob a temperatura ambiente. Depois de a mistura de reação ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 1 hora, o solvente foi removido in vacuo para se proporcionar ácido 3 - [(8aS) -3 -oxo -1,5,6,7,8,8a -hexahidroimidazo [1,5 -a] pirazin -2 - il] -2,2 -dimetil -propanóico (composto 2B) que foi usado diretamente. MS: calculado 242 (M+H)+, medido 242 (M+H)+.Exemplo 3

[0137] [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil -metil] acetato (Composto 3)

[0138] O Composto 3 foi preparado por meio do seguinte esquema:

[0139] Preparação de ácido 5 -hidroxi -1,3 - oxatiolano -2 –carboxílico

[0140] A uma solução submetida a agitação de 1,4 -ditiano -2,5 -diol (composto 3A, 150 g, 0,98 mol) em metil éter terc -butílico (500 mL) e ciclohexano (150 mL) foi adicionado ácido glioxílico (180 g, 1,96 mol). A mistura de reação resultante foi submetida a agitação sob 80oC sob condições de Dean -Stark durante 16 horas. A solução resultante foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:7 etil acetato em éter de petróleo a etil acetato a 100%) para proporcionar 220 g do ácido 5 - hidroxi -1,3 -oxatiolano -2 -carboxílico em bruto (composto 3B), o qual foi usado diretamente na etapa seguinte sem qualquer outra purificação.

[0141] Preparação de ácido trans -5 -acetoxi - 1,3 -oxatiolana -2 –carboxílico

[0142] A uma solução de ácido 5 -hidroxi -1,3 - oxatiolano -2 -carboxílico (composto 3B, 220 g, 1,5 mol) em HOAc (1,5 L) foi adicionado ácido sulfúrico concentrado (1 mL) e anidrido acético (50 g, 0,5 mol). Depois de ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 16 horas, a mistura de reação resultante foi diluída com água e extraída com EtOAc. A fase orgânica foi combinada e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:10 a 1:7 etil acetato em éter de petróleo) para proporcionar o produto em bruto, que foi recristalizado a partir de tolueno para se proporcionarem 10 g de ácido trans -5 - acetoxi -1,3 -oxatiolano -2 -carboxílico (composto 3C trans). (Para a síntese, favor referir-se também a: J. Org. Chem. 1995, 60, 2621 -2623).

[0143] Composto 3C trans: 1H NMR (400 MHz, DMSO - d6) δ ppm: 13,26 (br, 1 H), 5,66 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 5.66 (s, 1 H), 3,30 - 3,37 (m, 1 H), 3,19 - 3,25 (m, 1 H), 2,04 (s, 3 H).

[0144] Preparação de [(1R,2S,5R) -2 -isopropil - 5 -metil -ciclohexil] (2S,5S) -5 -acetoxi -1,3 -oxatiolano -2 -carboxilato.

[0145] Uma solução de diciclo hexilcarbodiimida (12 g, 57 mmol) em DCM (50 mL) foi adicionada a um balão de fundo redondo que continha uma solução de ácido trans - 5 -acetoxi -1,3 -oxatiolano -2 -carboxílico (composto 3C trans, 10 g, 52 mmol), L -( -) -mentol (8,9 g, 57 mmol) e DMAP (0,6 g, 5.2 mmol) em DCM (100 mL) sob 0oC. Depois de a mistura de reação ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 16 horas, metanol (2 mL) e ácido acético glacial (2 mL) foram adicionados. A mistura de reação foi submetida a agitação durante outros 10 minutos e então diluída com hexano (250 mL), filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado para proporcionar o produto em bruto. (J. Org. Chem. 1995, 60, 2621 -2623). O produto em bruto foi re-dissolvido em hexano (250 mL), filtrado e o filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de fluidos supercríticos (SFC) para se proporcionar 3,2 g de [(1R,2S,5R) -2 -isopropil -5 -metil -ciclohexil] (2S,(55) -5 -acetoxi -1,3 -oxatiolano -2 –carboxilato (composto 3D) com um excesso diastereoisomérico de 85% na forma de um óleo incolor. O valor do excesso diastereoisomérico do composto 3D foi obtido por meio de análise de HPLC (Agilent 1260 HPLC) utilizando-se uma coluna quiral (CHIRALPAK IA -3 ODH (4,6 mm x 250 mm, 5 μm)). A fase móvel da análise quiral foi de 20:80 acetonitrila em MeOH.

[0146] Composto 3D: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,81 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 5.63 (s, 1 H), 4,76 (dt, J = 10,9, 4,5 Hz, 1 H), 3,44 (dd, J = 11,7, 4,1 Hz, 1 H), 3,17 (d, J = 11,8 Hz, 1 H), 2,11 (s, 3 H), 2,00 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 1,85 (dt, J = 5,9, 2,5 Hz, 1 H), 1,69 (d, J = 11,0 Hz, 2 H), 1,55 - 1,26 (m, 3 H), 1,11 - 1,00 (m, 2 H), 0,91 (dd, J = 5,8, 9,8 Hz, 6 H), 0,76 (d, J = 7,0 Hz, 3 H).

[0147] Preparação de [(1R,2S,5R) -2 -isopropil - 5 -metil -ciclohexil] (2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolano -2 – carboxilato

[0148] Uma suspensão de 5 -amino -3H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona (5,0 g, 36 mmol) e BSA (24,0 g, 118 mmol) em DCE (250 mL) foi aquecida sob 85oC durante 1 hora. A mistura de reação foi resfriada para 0oC, à mistura supra foi adicionada uma solução de [(1R,2S,5R) -2 -isopropil -5 -metil -ciclohexil] (2S,5S) -5 -acetoxi -1,3 -oxatiolano -2 -carboxilato (composto 3D, 9,0 g, 27 mmol) em DCE (10 mL), seguida por TMSI (14 g, 70 mmol) gota a gota. A mistura de reação foi submetida a agitação sob 60oC durante 5 horas, finalizada por meio de solução aquosa de NaHCO3, e então extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com solução salina, submetida a secagem sobre Na2SO4 anidro e concentrada para se proporcionar o produto em bruto na forma de um óleo, que foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel (eluição com 1:100 a 1:50 metanol em diclorometano) para se proporcionarem 7,7 g de uma mistura dos dois isômeros, que foi ainda purificada e separada por meio de HPLC de preparação para se proporcionarem 2,8 g do beta isômero [(1R,2S,5R) -2 -isopropil -5 -metil -ciclohexil] (2S,5R) -5 -(5 -amino -2 - oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolano -2 -carboxilato desejado (composto 3E) na forma de um sólido de cor branca. A configuração do composto 3E foi determinada por meio de NOESY.

[0149] Composto 3E: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 8,17 (s, 1 H), 5,44 (m, 1 H), 5.51 (s, 1 H), 5.12 (bs, 2 H), 4,78 (m, 1 H), 4,47 (m, 1 H), 3,16 (m, 1 H), 2,00 (m, 1 H), 1,79 (m, 1 H), 1,62 (m, 2 H), 1,38 (m, 2 H), 0,98 (m, 2 H), 0,9 - 0,72 (m, 10 H). MS observado (ESI+) [(M+H)+] :439.

[0150] Preparação de (2S,5R) -5 -(5 -amino -2 - oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -N -metoxi -N - metil -1,3 -oxatiolano -2 -carboxamida

[0151] Uma solução de [(1R,2S,5R) -2 -isopropil -5 -metil -ciclohexil] (2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolano -2 - carboxilato (composto 3E, 3,0 g, 7,5 mmol) em TFA aquoso a 80% (20 mL) foi submetida a agitação sob 50oC durante 16 horas, e então concentrada para se proporcionar o ácido em bruto na forma de um sólido de cor branca, que foi re- dissolvido em THF (40 mL). À mistura supra foi adicionado cloridrato de N -metoxi metilamina (2,1 g, 22 mmol), DIPEA (14,5 g, 112 mmol) e HATU (8,36 g, 22 mol) sob a temperatura ambiente. Depois de ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 16 horas, a mistura de reação foi diluída com DCM, lavada por meio de água e solução salina, submetida a secagem sobre Na2SO4 anidro, e concentrada para se proporcionar o produto em bruto que foi purificado por meio de Cromatografia flash em sílica gel (eluição com 1:100 a 1:50 de metanol em diclorometano) para se proporcionarem 2,1 g de (2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -N -metoxi -N -metil - 1,3 -oxatiolano -2 -carboxamida (composto 3F) na forma de um sólido de cor branca.

[0152] Composto 3F: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 8,16 (s, 1 H), 5,42 (m, 1 H), 5.83 (s, 1 H), 5.14 (bs, 2 H), 4,46 (t, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,72 (s, 3 H), 3,23 (s, 3 H), 3,15 (m ,1 H). MS observado (ESI+) [(M+H)+] : 344.

[0153] Preparação de (2S,5R) -N -metoxi -5 - [5 - [ [(4 -metoxifenil) -difenil -metil] amino] -2 -oxo - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il] -N -metil -1,3 - oxatiolano -2 –carboxamida

[00154] A uma solução de (2S,5R) -5 -(5 -amino - 2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -N -metoxi -N - metil -1,3 -oxatiolano -2 -carboxamida (composto 3F, 2,1 g, 5,1 mmol) em DCM (30 mL) foi adicionado colidina (1,45 g, 12 mmol), AgNO3 (2,04 g, 12 mmol) e MMTrCl (3,8 g, 12 mmol) sob a temperatura ambiente. Depois de ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 16 horas, a mistura de reação foi diluída com DCM, filtrada para remover o sólido. O filtrado foi lavado com água e solução salina, submetido a secagem sobre Na2SO4 anidro e concentrado para se proporcionar o produto em bruto, que foi purificado por meio de Cromatografia flash em sílica gel (eluição com 1:100 a 2:1 etil acetato em éter de petróleo) para se proporcionarem 3,6 g de (2S,5R) -N -metoxi -5 - [5 - [ [(4 -metoxifenil) -difenil -metil] amino] -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il] -N - metil -1,3 -oxatiolano -2 -carboxamida (composto 3G) na forma de um sólido de cor amarela. (ESI+) [(M+H)+] : 615.

[00155] Preparação de 3 - [(2S,5R) -2 -[ciclopropil (hidroxi)metil] -1,3 -oxatiolan -5 -il] -5 - [ [(4 -metoxifenil) -difenil -metil] amino] tiazolo [4,5 - d] pirimidin -2 –ona

[0156] A uma solução de (2S,5R) -N -metoxi -5 - [5 - [ [(4 -metoxifenil) -difenil -metil] amino] -2 -oxo - tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il] -N -metil -1,3 -oxatiolano -2 -carboxamida (composto 3G, 3 g, 5 mmol) em THF (40 mL) foi adicionado reagente de Grignard, brometo de ciclopropil magnésio (0,5 M, 25 mL) sob 0oC. A mistura de reação foi submetida a agitação sob 0oC durante 30 min. A reação foi finalizada com solução saturada de NH4Cl e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi submetida a secagem e concentrada para se proporcionar o produto em bruto, que foi re -dissolvido em MeOH (50 mL) . À mistura exposta anteriormente foi adicionado NaBH4 (2,0 g, 540 mmol) sob 0oC. A mistura de reação foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 30 min. A reação foi finalizada com solução saturada de NH4Cl e extraída com DCM. A camada orgânica foi submetida a secagem sobre Na2SO4 anidro e concentrada para se proporcionar o produto em bruto, que foi purificado por meio de Cromatografia flash em sílica gel (eluição com 1:100 a 1:1 acetato de etil em éter de petróleo) para se proporcionar 1,8 g de 3 - [(2S,5R) -2 - [ciclopropil (hidroxi) metil] -1,3 - oxatiolan -5 -il] -5 - [ [(4 -metoxifenil) -difenil - metil] amino] tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona (composto 3H) na forma de um sólido de cor amarela. (ESI+) [(M+H)+] :599.

[0157] Preparação de [ciclopropil - [(2S,5R) -5 - [5 - [ [(4 -metoxifenil) -difenil -metil] amino] -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il] -1,3 -oxatiolan -2 - il] metil] acetate

[0158] A uma solução de 3 - [(2S,5R) -2 -[ciclopropil (hidroxi) metil] -1,3 -oxatiolan -5 -il] -5 - [ [(4 -metoxi fenil) -difenil -metil] amino] tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona (composto 3H, 1,2 g, 2 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado TEA (800 mg, 8 mmol), DMAP (30 mg, 0,2 mmol) e Ac2O (400 mg, 4 mmol) sob 0oC. A mistura de reação foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 48 horas. Depois de a reação ser completada, a reação foi finalizada por meio de água, extraída com DCM. A camada orgânica foi submetida a secagem e concentrada para se proporcionar 1,3 g do produto em bruto [ciclopropil - [(2S,5R) -5 - [5 - [ [(4 -metoxifenil) -difenil -metil] amino] -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il] -1,3 - oxatiolan -2 -il] metil] acetato (composto 3I) na forma de um sólido de cor branca, o qual foi usado diretamente na etapa seguinte sem qualquer outra purificação. (ESI+) [(M+H)+] : 641.

[0159] Preparação de [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 - amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 - oxatiolan -2 -il] -ciclopropil -metil] acetate

[0160] Uma solução de [ciclopropil - [(2S,5R) -5 - [5 - [ [(4 -metoxifenil) -difenil -metil] amino] -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il] -1,3 -oxatiolan -2 - il] metil] acetato (composto 3I, 1,3 g, 2 mmol) em solução aquosa de HCOOH a 90% (25 mL) foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi ainda purificado e separado por meio de HPLC de preparação para se proporcionarem 114 mg de [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 -amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 - d] pirimidin -3 -il) -1,3 -oxatiolan -2 -il] -ciclopropil -metil] acetato (composto 3) na forma de um sólido de cor branca.

[0161] Composto 3: 1H NMR (400 MHz, Metanol -d4) δ ppm: 8,20 (s, 1 H), 5,34 (m, 1 H), 5.34 (d, J = 5,4 Hz, 1 H), 4,54 (t, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,18 (t, J = 8,4 Hz, 1 H), 3,31 (t, J = 5,0 Hz, 1 H), 2,02 (s, 3 H), 1,13 (m ,1 H), 0,65 - 0,42 (m, 4 H). MS observado (ESI+) [(M+Na)+] : 391.

[0162] Preparação de 5 -amino -3 - [(2S,5R) -2 - [(S) -ciclopropil (hidroxi) metil] -1,3 -oxatiolan -5 -il] tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona

[0163] A uma solução de [(S) - [(2S,5R) -5 -(5 - amino -2 -oxo -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il) -1,3 - oxatiolan -2 -il] -ciclopropil -metil] acetato (composto 3, 500 mg, 1,36 mmol) em metanol (5 mL) foi adicionado K2CO3 (94 mg, 0,68 mmol). Depois de ser submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 4 horas, a reação foi finalizada com HOAc para pH 7 e então concentrada in vacuo. O resíduo foi diluído com EtOAc e filtrado. O filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado e separado por meio de HPLC de preparação para se proporcionarem 45 mg de 5 -amino -3 - [(2S,5R) -2 - [(S) -ciclopropil(hidroxi)metil] -1,3 -oxatiolan -5 -il] tiazolo [4,5 -d] pirimidin -2 -ona (composto 3J) na forma de um pó de cor branca.

[0164] Composto 3J: A estrutura absoluta foi determinada por meio de 1H NMR e análise estrutural de raios-X de cristal único tal como ilustrado na Figura 3, 1H NMR (400 MHz, Metanol -d4) δ ppm: 8,25 (s, 1 H), 5,39 (dd, J = 9,16, 5.65 Hz, 1 H), 5.24 (d, J = 5.27 Hz, 1 H), 4,06 (dd, J = 10,29, 9,29 Hz, 1 H), 3,13 - 3,30 (m, 2 H), 0,37 - 1,04 (m, 5 H). MS observado (ESI+) [(M+H)+] : 327,0.Exemplo 4

[0165] Ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico (Composto 4)

[0166] Ácido 3 - [(8aS) -7 - [ [(4S) -5 - etoxicarbonil -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol - 2 -il -1,4 -diidropirimidin -6 -il] metil] -3 -oxo - 5,6,8,8a -tetra hidro -1H -imidazo [1,5 -a] pirazin -2 -il] -2,2 -dimetil -propanóico (Composto 4)

[0167] O Composto 4 foi preparado por meio do seguinte esquema:

[0168] O composto do título foi preparado em analogia ao Composto 2 pela utilização de etil (4S) -6 - (bromometil) -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidine -5 -carboxilato (composto 4A) em vez de etil (4R) -6 -(bromometil) -4 -(2 -cloro -3 -fluoro -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 -diidropirimidina -5 -carboxilato (composto 2A). O Composto 4 foi obtido na forma de um sólido de cor amarelo claro (132 mg). 1H NMR (400 MHz, Metanol -d4) δ ppm 7,95 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,08 -7,23 (m, 2H), 5,95 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 4,02 -4,17 (m, 3H), 3,79 -4,00 (m, 3H), 3,36 -3,57 (m, 2H), 3,26 -3,33 (m, 1H), 3,17 -3,25 (m, 1H), 3,11 (dd, J = 9,3, 4,0 Hz, 1H), 2,78 -2,99 (m, 2H), 2,53 (d, J = 2,0 Hz, 3H), 2,39 (dd, J = 11,2, 8,2 Hz, 1H), 2,14 -2,26 (m, 1H), 1,21 (d, J = 2,8 Hz, 6H), 1,15 ppm (t, J = 7,2 Hz, 3H). MS: calculado 599 (M+H)+, medido 599 (M+H)+.

[0169] Preparação de etil (4S) -6 -(bromometil) -4 -(3 -fluoro -2 -metil -fenil) -2 -tiazol -2 -il -1,4 - diidropirimidina -5 -carboxilato (composto 4A):

[0170] O Composto 4A foi preparado em analogia ao composto 2A peça utilização de 2 -metil -3 - fluorobenzaldeído em vez de 2 -cloro -3 -fluorobenzaldeído. A rotação óptica do composto 4A: [α] D20 -21,0 (c 0,10, MeOH). Exemplo 5

[0171] 5 -amino -3 - [(2R,3R,5S) -3 –hidroxi -5 - [(1S) -1 -hidroxipropil] tetra hidrofuran -2 -il] -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidina -2,7 -diona (composto 11)

[0172] O Composto 11 foi preparado de acordo com o seguinte Esquema.

[0173] Preparação de [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 - acetoxipropil] -2 -(5 -amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il)tetra hidrofuran -3 -il] acetate

[0174] A uma suspensão de 5 -amino -3,6 -diidrotiazolo [4,5 -d] pirimidina -2,7 -diona (5.37 g, 29,1 mmol) e [(3R,5S) -2 -acetoxi -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] tetra hidrofuran -3 -il] acetato (composto 1H, 2,8 g, 9,7 mmol) em acetonitrila (140 mL) foi adicionado BSA (21,4 mL, 87,3 mmol). A mistura de reação foi submetida a agitação sob 65oC durante 1,5 horas sob argônio para formar uma solução límpida. Então à solução foi adicionado TMSOTf (9,8 g, 43,7 mmol) e a mistura foi submetida a agitação sob 65oC durante outras 3 horas. A reação foi concentrada in vacuum. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (200 mL) e extraído com solução saturada de NaHCO3 (50 mL). Um precipitado formouse a partir de uma camada orgânica. A mistura resultante foi filtrada e o filtrado foi lavado com solução salina (50 mL), submetido a secagem sobre Na2SO4 e concentrado in vacuum para se proporcionarem 2,3 g do produto em bruto [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) -1 -acetoxipropil] -2 -(5 -amino - 2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il)tetra hidrofuran -3 -il] acetato (composto 11A) na forma de um sólido de cor amarela. MS observado. (ESI -) [(M+H)+] : 413,1.

[0175] Preparação de 5 -amino -3 - [(2R,3R,5S) - 3 -hidroxi -5 - [(1S) -1 -hidroxipropil] tetra hidrofuran - 2 -il] -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidina -2,7 –diona

[0176] A uma solução de [(2R,3R,5S) -5 - [(1S) - 1 -acetoxipropil] -2 -(5 -amino -2,7 -dioxo -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidin -3 -il)tetra hidrofuran -3 -il] acetato (composto 11A, 2,3 g, 5.58 mmol) em metanol (100 mL) foi adicionado metóxido de sódio (1,5 g, 27,9 mmol). Depois da adição, a mistura foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 1,5 horas (monitorada por meio de TLC). Depois de a reação ser completada, a reação foi finalizada com NH4Cl aquoso saturado (50 mL). A mistura resultante foi concentrada in vacuum para remover a maior parte de MeOH. O resíduo foi extraído com EtOAc (100 mL) dez vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com solução salina (100 ml), submetida a secagem sobre Na2SO4 e concentrada in vacuum. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em sílica gel, eluída com DCM/MeOH=20/1 a 10/1 para se proporcionarem 360 mg de 5 - amino -3 - [(2R,3R,5S) -3 -hidroxi -5 - [(1S) -1 -hidroxipropil] tetra hidrofuran -2 -il] -6H -tiazolo [4,5 -d] pirimidina -2,7 -diona (Composto 11) na forma de um sólido de cor branca e 550 mg de produto em bruto.

[0177] Composto 11: 1H NMR (400 MHz, DMSO - d6) δ 11,22 (br s, 1H), 5,95 (br s, 2H), 5.72 (d, J=2,26 Hz, 1H), 5.42 (d, J=4,52 Hz, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,53 (d, J=5,02 Hz, 1H), 3,96 (m, 1H), 3,25 -3,32 (m, 1H), 2,25 - 2,48 (m, 1H), 1,66 -1,74 (m, 1H), 1,35 -1,46 (m, 1H), 1,19 -1,31 (m, 1H), 0,88 (t, J=7,28 Hz, 3H) Exemplo 6 Ensaio de células HEK293 -Blue -hTLR -7:

[0178] Uma linha de células HEK293 -Blue -hTLR - 7 estáveis foi adquirida a partir da InvivoGen (Cat.#: hkb -htlr7, San Diego, California, USA). Estas células foram concebidas para estudar a estimulação de TLR7 humana monitorizando a ativação de NF-kB. Um gene repórter de SEAP (fosfatase alcalina embrionária secretada) foi colocado sob o controle do promotor de IFN-β-minimo fundido em cinco locais de ligação de NF-kB e AP-1. O SEAP foi induzido por ativação de NF-kB e AP-1 através de células estimulantes HEK-Blue hTLR7 com ligandos TLR7. Por essa razão, a expressão repórter foi regulada pelo promotor NF-kB após estimulação de TLR7 humana durante 20 horas. A atividade do repórter SEAP do sobrenadante da cultura de células foi determinada utilizando-se o kit QUANTI -Blue ™ (Cat. #: Rep -qb1, Invivogen, San Diego, Ca, EUA) sob um comprimento de onda de 640 nm, um meio de detecção que se torna púrpura ou azul na presença de fosfatase alcalina.

[0179] As células HEK293 -Blue-hTLR7 foram incubadas sob uma densidade de 250.000 ~ 450.000 células / mL em um volume de 180 μL em uma placa de 96 poços no meio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) contendo 4,5 g / L de glicose, 50 U / ML de penicilina, 50 mg / mL de estreptomicina, 100 mg / mL de Normocin, 2 mM de L - glutamina, 10% (v / v) de soro de bovino fetal inativado por calor durante 24 h. Então as células HEK293 -Blue-hTLR- 7 foram incubadas com adição de 20 μL de composto de teste em uma diluição em série na presença de DMSO final a 1% e realizando incubação sob 37 °C em uma incubadora de CO2 durante 20 horas. Então, 20 μL do sobrenadante de cada poço foram incubados com 180 μL de solução de substrato de quantificação básica sob 37°C durante 2 horas e a absorvência foi lida sob 620 ~ 655 nm usando-se um espectrofotômetro. A via de sinalização que a ativação de TLR7 provoca a ativação de NF-kB a jusante foi amplamente aceita, e, portanto, o ensaio de repórter semelhante também foi amplamente utilizado para avaliar o Agonista de TLR7 (Tsuneyasu Kaisho and Takashi Tanaka, Tendências em Imunologia, Volume 29, Edição 7, julho de 2008). Páginas 329, Sci, Hiroaki Hemmi et al, Nature Immunology 3, 196 - 200 (2002).

[0180] A atividade do agonismo de TLR7 no ensaio de HEK293 - hTLR -7 do composto 11 foi de 72μM. Exemplo 6

[0181] Uma combinação de Agonista de TLR7 (Composto 1) e inibidor de montagem de capsídeo de (Composto 2) reduziu de forma potente o HBV DNA e HBsAg em modelo de camundongo AAV -HBV

Modelo de animal

[0182] Camundongos C57BL/6 machos com 4 semanas de idade, isentos de patógenos específicos, foram adquiridos no Shanghai Laboratory Animal Center of Chinese Academy of Sciences (SLAC) e alojados em instalações de cuidado com animais em gaiolas ventiladas individualmente sob condições controladas de temperatura e luz de acordo com as diretrizes do Institutional Animal Care. O vírus AAV / HBV foi adquirido a partir do Beijing FivePlus Molecular Medicine Institute (Beijing, China).. Este vírus recombinante transporta 1,3 cópias do genoma do VHB, que foi acondicionado em capsídeos de AAV sorotipo 8 (AAV8). Os camundongos C57BL/6 foram injectados com 200 μL de vírus recombinante, diluídos em tampão salino, através da injeção da veia da cauda. Os camundongos foram sangrados nos dias 7 e 14 pós-injeção para monitorar o antígeno de superfície HBV (HBsAg), HBV e o antígeno (HBeAg), HBs anticorpo (HBsAb) e HBV DNA genômico no soro, e então foram agrupados aleatoriamente de acordo com esses biomarcadores de HBV.

Medição dos biomarcadores de HBV

[0183] O HBsAg e HBeAg de soro foi medido utilizando-se kits CLIA (Autobio Diagnostics Co., Ltd , Zhengzhou, China) de acordo com as instruções dos fabricantes. O limite mais baixo para a detecção de HBsAg e HBeAg foi de 0,1ng/mL e 0,25NCU/mL (unidade clínica nacional / mL) respectivamente. A diluição do soro de 100 vezes (para HBsAg) ou 500 vezes (para HBeAg) foi utilizada para se obterem valores dentro da faixa linear da curva padrão. O DNA de VHB do soro foi extraído utilizando-se um Kit de Pequeno Volume de MagNA Pure 96 DNA e Viral NA (Roche) seguindo-se as instruções do fabricante. As amostras de DNA foram analisadas por PCR quantitativa em tempo real (qPCR) usando-se um conjunto de sonda de preparador e específico de HBV para a detecção de amplificação específica e de uma região de genoma de HBV de 128 pb a partir do nucleotídeo 2969 a 3095. As sequências dos preparadores e sonda são expostas do seguinte modo: Preparador preliminar: AAGAAAAACCCCGCCTGTAA; Preparador inverso: CCTGTTCTGACTACTGCCTCTCC; HBV -Sonda: 5'TARMA -CCTGATGTGATGTTCTCCATGTTCAGC -BHQ2 -3'.

[0184] O anti -HBs no soro foi medido no 24° dia depois que o tratamento terminou utilizando-se kits Anti - HBs CLIA (Autobio Diagnostics Co., Ltd , Zhengzhou, China) seguindo-se as instruções do fabricante. As amostras de soro foram diluídas 3 vezes e 50 μL das amostras diluídas foram utilizados para o ensaio. Plano experimental e resultados

[0185] 10mg/mL do Composto 1 e 1,2mg/mL do Composto 2 foram formulados como um complexo de inclusão com 2% Klucel LF, 0,1% Polysorbate 80, e 0,1% de parabenos em água. Todos os camundongos foram dosados oralmente durante um total de 6 semanas seguidas por um período de 2 semanas sem tratamento. Em um único estudo de controle de tratamento, os cinco camundongos do grupo do Composto 1 foram tratados com Composto 1 em 100 mg / kg todos os dias (QOD). O grupo do veículo foi tratado com um volume equivalente de placebo de veículo QD oral (2% de Klucel LF, 0,1% de polissorbato 80 e 0,1% de parabenos em água). No estudo de terapia combinada, os cinco camundongos do grupo Composto 2 foram administrados com 12 mg / kg por via oral, uma vez ao dia (QD). O grupo Combo recebeu 100 mg / kg de Composto 1 QOD mais 12 mg / kg de Composto 2 QD. O grupo do veículo foi tratado com um volume equivalente de placebo de veículo QD oral (2% de Klucel LF, 0,1% de polissorbato 80 e 0,1% de parabenos em água).

[0186] Um modelo de camundongo com expressão de alto nível de DNA e HBsAg de HBV foi gerado pela injeção de camundongos C57BL / 6 com um vírus recombinante associado a adeno (AAV) portador de um genoma HBV replicável (AAV-HBV). Depois de 3 semanas após a infecção, os marcadores virais persistentes do VHB, como o DNA genômico do HBV, HBsAg, e HBeAg foram detectados no soro dos camundongos infectados. Com a “viremia” de HBV de longa duração e um sistema imunitário plenamente competente, o modelo AAV -HBV foi utilizado para investigar o efeito combinado e individual do Composto 1, um pró-fármaco de um agonista de TLR7, cuja forma ativa, depois de conversão, induz potentes respostas imunes inatas, e o Composto 2, uma molécula pequena que inibe a montagem do capsídeo de HBV. Conforme mostrado na Figura 1, depois de um tratamento de 6 semanas, o Composto 1 induziu mais de 2 log de redução no DNA de HBV e mais de 1 redução de log em HBsAg. O Composto 2 reduziu o DNA de HBV reduzido em mais de 3 log para o nível abaixo do LLQ (limite inferior de quantificação) e reduziu moderadamente o nível de HBsAg. A combinação do Composto 1 e Composto 2 resultou em uma redução sustentável tanto no DNA de HBV quanto no HBsAg para o nível abaixo do LLQ, mesmo no final de um período de 2 semanas sem tratamento. Os resultados proporcionam evidências do efeito antiviral sinérgico da nova terapia com o tratamento combinado de um agonista de TLR7 e um inibidor de montagem de capsídeo de HBV. Exemplo 7

[0187] Uma combinação de Agonista de TLR7 (Composto 1 e 3) e inibidor de montagem de capsídeo de HBV (Composto 4 e 5) reduziu de forma potente o DNA de HBV e o HBsAg em modelo de camundongo AAV -HBV

[0188] Em outro estudo independente, foram testadas mais combinações de um agonista de TLR7 mais um inibidor de Capsid e tratamentos de composto único correspondente (resumidos na Tabela 2) usando-se o mesmo modelo de camundongo AAV - HBV e método de medição de biomarcadores de VHB descritos no Exemplo 5.

[0189] Tabela 2. Projeto de estudo combinado em modelo de camundongo AAV -HBV para Composto 1, 3, 4 e 5

[0190] Neste estudo, oito camundongos foram recrutados em cada grupo, e os animais receberam a primeira dose no dia 28 após a infecção por AAV-HBV. As combinações testadas incluíam Composto 1 mais Composto 4, Composto 3 mais Composto 4, e Composto 1 mais Composto 5. Todos os compostos foram formados como um complexo de inclusão com 2% de Klucel LF, 0,1% de Polissorbato 80 e 0,1% de Parabenos em água, e foi utilizado um volume equivalente de placebo contendo 2% de Klucel LF, 0,1% de Polissorbato 80 e 0,1% de Parabenos no grupo do veículo. Especificamente, para a combinação de Composto 1 mais Composto 4, foram formados 10 mg / mL de Composto 1 e 2 mg / mL de Composto 4. O grupo Composto 1 foi administrado oralmente sob 100 mg / kg QOD, enquanto o grupo Composto 4 foi administrado oralmente sob 20 mg / kg QD. O grupo Combo correspondente recebeu 100 mg / kg de Composto 1 QOD mais 20 mg / kg Composto 4. Para a combinação do Composto 3 mais Composto 4, foram formados 3 mg / mL de Composto 3 e 2 mg / mL de Composto 4. O grupo Composto 3 foi administrado oralmente sob 30 mg / kg QOD, enquanto que o grupo do Composto 4 foi administrado oralmente sob 20 mg / kg QD. O grupo Combo correspondente recebeu 30 mg / kg de Composto 3 QOD mais 20 mg / kg de Composto 4 QD. Para a combinação de Composto 1 mais Composto 5, foram formados 10 mg / mL de Composto 1 e 1,2 mg / mL de Composto 5. O grupo do Composto 1 foi administrado por via oral sob 100 mg / kg QOD, enquanto que o grupo Composto 5 foi administrado oralmente sob 12 mg / kg QD. O grupo Combo correspondente recebeu 100mg / kg de Composto 1 QOD mais 12 mg / kg de Composto 5 QD. Após a primeira dose, os camundongos foram sangrados de forma submandibular (75 μL de sangue / camundongo) duas vezes por semana para a coleta do soro até o final dos estudos. O sangue coletado foi deixado a 37 °C durante pelo menos 30 minutos para coagular e então centrifugado sob 13.200 x g, 4°C durante 3 minutos para se obter soro de camundongo. Essas amostras de soro foram submetidas à análise de biomarcadores de VHB.

[0191] Como ilustrado na Figura 4, o tratamento único de Composto 4 sob 20 mg / kg inibiu o ADN de HBV e diminuiu o HBsAg em 2 log no final do tratamento de 6 semanas. A combinação de Composto 1 (Agonista de TLR7) mais Composto 4 (Inibidor de capsídeo de HBV) demonstrou claramente um efeito antiviral superior, especialmente no controle do HBsAg. Em todos os animais que tomaram a terapia de combinação, o HBsAg caiu para o nível próximo ou abaixo do LLQ dentro de 4 semanas após o tratamento, e uma redução de mais de 3,5 log HBsAg no final do tratamento pode durar pelo menos 6 semanas durante o período fora de tratamento. Durante o período de tratamento sem tratamento, descobriu-se que 6 dos 8 camundongos desenvolveram níveis detectáveis de anti-HBs, tal como se encontra exposto na Figura 7.

[0192] Conforme ilustrado na Figura 5, outro Composto 3 Agonista de TLR7 também reduziu DNA e HBsAg de HBV. A combinação do Composto 3 mais o inibidor da cápside Composto 4 apresentou redução adicional no DNA do VHB (> 4 log) e no HBsAg (2,7-log). Conforme mostrado na Figura 7, 3 de 8 camundongos que tomam Composto 3 mais Composto 4 desenvolveram níveis detectáveis de anti-HBs durante o período de 6 semanas sem tratamento.

[0193] Conforme ilustrado na Figura 6, o Composto 5 é outro inibidor de capsídeo que reduziu o DNA de HBV e HBsAg. A combinação do Composto 5 mais o Composto 1 agonista de TLR7 suprimiu ainda o HBsAg abaixo do LLQ dentro de 4 semanas após o tratamento, e a redução viral foi sustentada ao longo do estudo, mesmo depois de o tratamento ser removido durante 6 semanas. Conforme ilustrado na Figura 7, 4 de 8 camundongos que tomaram o Composto 1 mais o Composto 5 desenvolveram níveis detectáveis de anti-HBs durante o período de 6 semanas sem tratamento.Exemplo 8

[0194] Uma combinação de Agonista de TLR7 (Composto 1 e 8) e inibidor de montagem de capsídeo de HBV (Composto 4 e 10) reduziu de forma potente o DNA de HBV e HBsAg em modelo de camundongo AAV -HBV

[0195] Em outro estudo independente, foram testadas mais combinações de um agonista de TLR7 mais um inibidor de Capsid e tratamentos de composto único correspondentes (como resumido na Tabela 3) usando-se o mesmo modelo de camundongo AAV-HBV e métodos de medição de biomarcadores de VHB descritos no Exemplo 5.

[0196] Tabela 3. Projeto de estudo combinado em modelo de camundongo AAV -HBV para Composto 1, 4, 8 e 10

[0197] Neste estudo específico, sete camundongos foram recrutados em cada grupo e os animais receberam a primeira dose pelo menos 38 dias após a infecção por AAV- HBV. As combinações testadas incluíram Composto 8 mais Composto 4, Composto 8 mais Composto 10, e Composto 1 mais Composto 10, Todos os compostos foram formados como um complexo de inclusão com 2% de Klucel LF, 0,1% de Polissorbato 80 e 0,1% de Parabenos em água, e foi utilizado um volume equivalente de placebo contendo 2% de Klucel LF, 0,1% de Polissorbato 80 e 0,1% de Parabenos no grupo do veículo. Especificamente, para a combinação de Composto 8 mais Composto 4, foram formados 30 mg / mL de Composto 8 e 2 mg / mL de Composto 4. O grupo do Composto 8 foi administrado oralmente sob 300 mg / kg QOD, enquanto o grupo do Composto 4 foi administrado oralmente sob 20 mg / kg QD. E então o grupo Combo correspondente recebeu 30mg / kg de Composto 8 QOD mais 20 mg / kg de Composto 4 QD. Para a combinação de Composto 8 mais Composto 10, foram formados 30 mg / mL de Composto 8 e 2 mg / mL de Composto 10. O grupo do Composto 8 foi administrado oralmente sob 300 mg / kg QOD, enquanto o grupo Composto 10 foi administrado oralmente sob 20 mg / kg QD. E então o grupo Combo correspondente recebeu 300mg / kg de Composto 8 QOD mais 20 mg / kg Composto 10 QD. Para a combinação de Composto 1 mais Composto 10, foram formados 10mg / mL de Composto 1 e 2mg / mL de Composto 10. O grupo Composto 1 foi administrado oralmente sob 100 mg / kg QOD, enquanto o grupo Composto 10 foi administrado oralmente sob 20 mg / kg QD. E então o grupo Combo correspondente recebeu 100mg / kg de Composto 1 QOD mais 20mg / kg Composto 10 QD. Após a primeira dose, os camundongos foram sangrados de modo submandibular (75 μL de sangue / camundongo) duas vezes por semana para a coleta do soro até o final dos estudos. O sangue coletado foi deixado sob 37°C durante pelo menos 30 minutos para coagular e então centrifugado sob 13.200 x g, 4 °C durante 3 minutos para se obter soro de camundongo. Essas amostras de soro foram submetidas à análise de biomarcadores de VHB.

[0198] Os resultados na Figura 8 mostraram que o Composto 8 do Agonista de TLR7 isoladamente reduziu o DNA de HBV e HBsAg em cerca de 2 -log e 1,5 -log respectivamente no final do tratamento, enquanto a combinação do Composto 8 mais o Composto 4 do inibidor de capsídeo reduziu mais o HBsAg para o nível abaixo do LLQ. Durante o período de 6 semanas sem tratamento, o grupo de combinação demonstrou redução sustentável de HBsAg, recuperação mínima de DNA de HBV e níveis elevados de anti- HBs que não foram observados em grupos de tratamento único de veículo, como ilustrado na Figura 11. Esses benefícios do tratamento combinado também foram consistentemente observados nos grupos combinados de Composto 8 mais Composto 10, e Composto 1 mais Composto 10, tal como ilustrado nas Figuras 9, 10 e 11.

[0199] Em resumo, os resultados expostos supra provaram pela primeira vez que a combinação de um agonista de TLR7 mais um Inibidor de capsídeo de HBV é uma terapia eficaz para reduzir ou mesmo eliminar o DNA de HBV e HBsAg. Depois da terapia de combinação, a supressão viral mostrou que perdura até 6 semanas sem tratamento. Na maioria dos pacientes cronicamente infectados com HBV, as terapias atuais disponíveis raramente conseguem a soro conversão de HBsAg devido ao fato de que a maioria dessas terapias não conseguem provocar (anticorpo de anti-HBs contra HBsAg). Nos estudos de combinação realizados pelos inventores, é impressionante constatar que os anti-HBs se tornaram detectáveis durante o período de 6 semanas sem tratamento, e isso foi mais evidente nos camundongos submetidos às terapias de combinação, tal como ilustrado nas Figuras 7 e 11. Consequentemente, a terapia combinada de um agonista de TLR7 mais um Inibidor de capsídeo de HBV proporciona outro benefício fundamental para promover o desenvolvimento de anti-HBs. Como a perda prolongada de HBsAg e / ou a soro conversão anti-HBs é um parâmetro de tratamento ideal para a hepatite B crônica, o presente tratamento combinado representa uma nova maneira de se obter a cura clínica da infecção crônica pelo VHB.

Claims (6)

1. Uso de uma composição farmacêutica caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para o tratamento ou profilaxia de infecção pelo vírus da hepatite B, em que a composição compreende: acetato de [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-oxo- tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroxi-tetraidrofuran-2- il]propila] e ácido 3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-etoxicarbonil-4-(3- fluoro-2-metil-fenil)-2-tiazol-2-il-1,4-dihidropirimidin-6- il]metil]-3-oxo-5,6,8,8a-tetrahidro-1H-imidazo[1,5- a]pirazin-2-il]-2,2-dimetil-propanóico ou um sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável destes, em que ambos os compostos são co-adminsitrados na mesma formulação ou formulação diferente.

2. Uso de uma composição farmacêutica caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para o tratamento ou profilaxia de infecção pelo vírus da hepatite B, em que a composição compreende: 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroxi-5-[(1S)-1- hidroxipropil]tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5- d]pirimidina-2,7-diona e ácido 3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-etoxicarbonil-4-(3- fluoro-2-metil-fenil)-2-tiazol-2-il-1,4-dihidropirimidin-6- il]metil]-3-oxo-5,6,8,8a-tetrahidro-1H-imidazo[1,5- a]pirazin-2-il]-2,2-dimetil-propanóico ou um sal, enantiômero ou diastereômero farmaceuticamente aceitável destes, em que ambos os compostos são co-adminsitrados na mesma formulação ou formulação diferente.

3. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado pelo fato de ambos os compostos se destinam à administração em um indivíduo pela mesma via ou por vias diferentes.

4. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que ambos os compostos se destinam à administração parenteral ou oral.

5. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a administração é simultânea ou sequêncial.

6. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a composição compreende adicionalmente um ou mais outros agentes antivirais selecionados de lamivudina, adefovir, tenofovir, telbivudina e entecavir.