BR112021014774A2

BR112021014774A2 - Composição antioxidante compreendendo quercetagetina e ácido gálico

Info

Publication number: BR112021014774A2
Application number: BR112021014774-8A
Authority: BR
Inventors: Javier Estévez Medina; Miquel Paraira Beser; Sergi Carné Fructuoso
Original assignee: Industrial Técnica Pecuaria, S.A.
Priority date: 2019-02-08
Filing date: 2020-02-07
Publication date: 2021-09-28
Also published as: WO2020161312A1; MX2021009392A; CN113613508A; EP3920721A1

Abstract

composição antioxidante compreendendo quercetagetina e ácido gálico. apresenta uma combinação compreendendo quercetagetina e ácido gálico a uma razão em peso de 65:1 a 1,2:1, em que o ácido gálico está na forma ácida, ou na forma de um sal ou um éster do mesmo. a invenção também provê uma composição de alimento, ração animal, farmacêutica ou cosmética que compreende a combinação da invenção. também é aqui provido o uso da combinação da invenção como um antioxidante em uma composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética. a combinação da invenção é altamente útil para prevenir a oxidação de composições que compreendem lipídeos.

Description

“COMPOSIÇÃO ANTIOXIDANTE COMPREENDENDO QUERCETAGETINA E ÁCIDO GÁLICO”

[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Europeu EP19382089.1 depositado em 8 de fevereiro de 2019, e o benefício do Pedido de Patente Europeu EP19382114.7 depositado em 19 de fevereiro de 2019.

Campo Técnico

[002] A presente invenção pertence ao campo dos antioxidantes. Em particular, antioxidantes para conservar alimentos, rações, composições farmacêuticas ou cosméticas. Os antioxidantes da invenção são particularmente úteis para conservar composições contendo lipídios.

Descrição do Estado da Técnica

[003] Alimentos, produtos farmacêuticos ou cosméticos processados industrialmente devem ser armazenados por um período de tempo significativo para chegar ao consumidor em um estado intacto. Além disso, quando o consumidor adquire um produto, há uma expectativa de que o produto seja preservado por pelo menos algumas semanas e às vezes até meses. Se não tratados, a maioria dos produtos, especialmente alimentos, pereceria em poucos dias como resultado de alterações físico-químicas, e crescimento de fungos ou bactérias.

[004] Dentre as alterações físico-químicas que afetam esses tipos de produtos, a oxidação é altamente relevante. Ela afeta particularmente as gorduras, levando à oxidação dos lipídios. De fato, a oxidação lipídica é uma das principais causas da deterioração dos produtos armazenados, causando deterioração do sabor, alteração da cor e maus odores. Os ácidos graxos poli-insaturados (PUFA) com ligações duplas lábeis são oxidados e a decomposição dos PUFAs produz compostos oxidativos secundários, como hexanal, pentanal, heptanal e octanal. Esses aldeídos voláteis contribuem principalmente para o desenvolvimento de ranço oxidativo conhecido como sabor de requentado (WOF). Os compostos oxidativos secundários não são apenas responsáveis pela deterioração da qualidade dos alimentos, mas os produtos oxidantes ingeridos também podem ser um risco para a saúde humana e animal.

[005] Dessa forma, a estabilidade oxidativa melhorada é necessária para manter a segurança e a qualidade dos produtos que contêm lipídios, como alimentos para consumo humano, ração animal, produtos farmacêuticos ou mesmo produtos cosméticos.

[006] Nos últimos anos, compostos antioxidantes de ocorrência natural têm sido preferencialmente empregados por causa de seus benefícios potenciais para a saúde e segurança. Alguns exemplos são tocoferóis e fosfolipídios, como a lecitina. Similarmente, muitos extratos naturais de plantas estão sob forte investigação por causa de seu alto teor de antioxidantes, incluindo flavonoides e outros polifenóis.

[007] Entretanto, os antioxidantes usados até agora apresentam várias desvantagens, por exemplo, os antioxidantes à base de tocoferol são caros e sua eficácia varia como conservante.

[008] Portanto, existe ainda uma necessidade de compostos naturais seguros, econômicos e eficazes para prevenir a oxidação de produtos industriais como alimento, ração, produto farmacêutico e composições cosméticas.

Objetivos da Invenção

[009] Os inventores desenvolveram uma nova combinação de compostos para melhorar a estabilidade oxidativa de vários tipos de composições. A combinação da invenção compreende uma mistura de quercetagetina e ácido gálico em razões específicas. Embora seja conhecido que os compostos supramencionados têm um certo efeito antioxidante, seu uso combinado nas razões específicas providas no presente documento não foi até então descrito.

[010] Por meio de extensa experimentação buscando combinações antioxidantes de compostos naturais, os presentes inventores verificaram surpreendentemente que a combinação de quercetagetina e ácido gálico em razões de concentração particulares apresenta um efeito antioxidante sinergístico extraordinário (ver Figura 1). Notavelmente, o dito efeito não foi observado quando a quercetagetina foi combinada com outros compostos antioxidantes, como tocoferóis, BHA ou BHT (Tabela 1), ou quando a combinação de quercetagetina e ácido gálico foi realizada em diferentes razões (Figura 1).

[011] Conforme mostrado a seguir, os inventores verificaram que a combinação de quercetagetina e ácido gálico pode melhorar sua atividade antioxidante em até 48%.

[012] Por outro lado, é amplamente conhecido que alguns antioxidantes não têm um bom desempenho em composições contendo lipídios. Isso dificulta fortemente seu uso na maioria dos alimentos ou composições cosméticas. Inesperadamente, como mostrado nos exemplos abaixo, os inventores verificaram que a combinação de quercetagetina e ácido gálico tem um efeito antioxidante sinergístico em composições que compreendem lipídios, como banha de porco.

[013] Em vista do exposto, a combinação antioxidante provida no presente documento constitui um grande avanço no campo de conservação de produtos, em particular na conservação de alimentos contendo gordura.

[014] Dessa forma, em um primeiro aspecto, a invenção provê uma combinação compreendendo quercetagetina e ácido gálico a uma razão em peso de 65:1 a 1,2:1, em que o ácido gálico está na forma ácida, ou na forma de um sal ou um éster do mesmo.

[015] Em um segundo aspecto, a invenção provê uma composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética que compreende a combinação aqui definida.

[016] Em um terceiro aspecto, a invenção provê o uso da combinação conforme aqui definida como um antioxidante em uma composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética.

[017] Em um quarto aspecto, a invenção provê um método para preparar a combinação conforme definido acima, compreendendo as etapas de prover quercetagetina; adicionar ácido gálico; opcionalmente, adicionar um carreador líquido adequado; e misturar e homogeneizar.

Breve Descrição dos Desenhos

[018] A Figura 1 mostra a eficácia antioxidante de um extrato de Tagetes erecta (quercetagetina), ácido gálico e suas combinações nas concentrações indicadas. O eixo y representa o fator de proteção (FP) (calculado conforme explicado nos exemplos a seguir), e o eixo x representa a concentração de substâncias ativas (antioxidantes) testadas. Os valores obtidos com o ácido gálico são representados por quadrados vazios, extrato de TE por círculos vazios, uma mistura de extrato de TE e ácido gálico em uma razão em peso de 15:1 por triângulos pretos, em uma razão em peso de 5:1 por círculos pretos, em um razão em peso 1,67:1 por triângulos vazios e em uma razão em peso 1:1,8 por triângulos pretos. N = 4-8 replicatas por concentração de antioxidantes testados. Anova a dois fatores (Teste de Tukey), * P <0,05 vs. TE, # P <0,01 vs. ácido gálico.

[019] A Figura 2 mostra a eficácia antioxidante da quercetagetina, extrato de Tagetes erecta, ácido gálico e combinações dos mesmos nas concentrações indicadas. O eixo y representa o fator de proteção (FP) (calculado conforme explicado nos exemplos a seguir), e o eixo x representa a concentração de substâncias ativas (antioxidantes) testadas. Os valores obtidos com ácido gálico são representados por círculos vazios, quercetagetina por quadrados vazios, extrato de TE por triângulos vazios, uma mistura de extrato de TE e ácido gálico em uma razão em peso de 15:1 por triângulos pretos apontando para baixo, uma mistura de extrato de TE e ácido gálico em uma razão em peso de 5:1 por triângulos pretos apontando para cima, e uma mistura de quercetagetina e ácido gálico a uma razão em peso de 9:1 por círculos pretos. N = 4-14 replicatas por concentração de antioxidantes testados. Anova a duas variáveis (Teste de Tukey), letras diferentes em cada concentração avaliada representam diferenças significativas (P <0,05).

Descrição Detalhada da Invenção

[020] Todos os termos usados aqui neste pedido, a menos que declarado de outra forma, devem ser entendidos em seu significado comum conhecido na técnica. Outras definições mais específicas para certos termos usados no presente pedido são como apresentadas a seguir e devem ser aplicadas uniformemente em todo o relatório descritivo e reivindicações, a menos que uma definição expressamente apresentada de outra forma forneça uma definição mais ampla.

[021] Da maneira usada neste documento, os artigos indefinidos “um” e “uma” são sinônimos de “pelo menos um” ou “um ou mais”. A menos que indicado de outra forma, os artigos definidos usados neste documento, como “o” e “a”, também incluem o plural do substantivo.

[022] Como aqui mencionado, a presente invenção provê uma combinação de quercetagetina e ácido gálico a uma razão em peso de 65:1 a 1,2:1, em que, quando o ácido gálico está na forma ácida ou na forma de um sal ou um éster do mesmo. Quando o ácido gálico está na forma de um sal ou éster do mesmo, a razão em peso se refere à quantidade correspondente de ácido gálico.

[023] O termo “razão em peso” se refere à relação de pesos das moléculas ou compostos indicados. Por exemplo, uma razão em peso (peso/peso) de 65:1 entre quercetagetina e ácido gálico se refere a 65 unidades de quercetagetina e 1 unidade de ácido gálico. Na forma usada no presente documento, “% em peso” ou “p/p” de um componente se refere à quantidade do único componente em relação ao peso total da composição ou, se especificamente mencionado, de outro componente. Na presente invenção, o peso de um extrato se refere ao peso ou massa do extrato seco.

[024] A quercetagetina também é conhecida como 2- (3,4- di-hidroxifenil) -3,5,6,7-tetra-hidroxicromen-4-ona e tem um número CAS 90-18-

6. A quercetagetina tem a fórmula (I):

[025] O ácido gálico é também conhecido como ácido 3,4,5-tri-hidroxibenzoico e tem um número CAS 149-91-7. O ácido gálico tem a fórmula (II):

[026] Diversos sais e ésteres de ácido gálico, que são denominados de galatos, são conhecidos por terem também atividade antioxidante e, portanto, podem ser usados nas combinações da invenção. Por exemplo, ésteres alquílicos de ácido gálico, como galato de metila, galato de propila, galato de octila e galato dodecila (lauril), ou sais de ácido gálico, como galato de sódio, podem ser combinados com quercetagetina para obter uma combinação antioxidante sinergística.

[027] A quercetagetina e o ácido gálico estão disponíveis comercialmente e podem ser obtidos de vários fornecedores de produtos químicos.

[028] Dessa forma, em uma modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, o éster de ácido gálico é um alquil éster, como um C1-C12 alquil éster. Em uma modalidade mais particular, o éster de ácido gálico é selecionado a partir do grupo que consiste em galato de metila, galato de etila, galato de propila, galato de octila, galato de dodecila e misturas dos mesmos.

[029] A preparação dos sais de ácido gálico pode ser realizada por métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, eles podem ser preparados a partir do composto precursor, que contém uma porção ácida, por métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais são, por exemplo, preparados pela reação da forma de ácido livre do ácido gálico com uma quantidade estequiométrica da base apropriada em água ou em um solvente orgânico ou em uma mistura deles. Similarmente, a preparação dos ésteres de ácido gálico pode ser realizada por métodos conhecidos na técnica. Em geral, os ésteres de ácido gálico são preparados, por exemplo, reagindo a forma de ácido livre do ácido gálico com uma quantidade estequiométrica do álcool apropriado a altas temperaturas.

[030] Em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, o ácido gálico está na forma ácida.

[031] Em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a razão em peso entre quercetagetina e ácido gálico ou o sal ou éster do mesmo é de 65:1 a 1,2:1, de 64:1 a 1,2:1, de 63:1 a 1,2:1, de 62:1 a 1,2:1, de 61,2:1 a 1,2:1, de 60:1 a 1,2:1, de 59:1 a 1,2:1, de 58:1 a 1,2:1, de 57:1 a 1,2:1, de 56:1 a 1,2:1, de 55:1 a 1,2:1, de 54:1 a 1,2:1, de 53:1 a 1,2:1, de 52:1 a 1,2:1, de 51,2:1 a 1,2:1, de 50:1 a 1,2:1, de 49:1 a 1,2:1, de 48:1 a 1,2:1, de 47:1 a 1,2:1, de 46:1 a 1,2:1, de 45:1 a 1,2:1, de 44:1 a 1,2:1, de 43:1 a 1,2:1, de 42:1 a 1,2:1, de 41,2:1 a 1,2:1, de 40:1 a 1,2:1, de 39:1 a 1,2:1, de 38:1 a 1,2:1, de 37:1 a 1,2:1, de 36:1 a 1,2:1, de 35:1 a 1,2:1, de 34:1 a 1,2:1, de 33:1 a 1,2:1,

de 32:1 a 1,2:1, de 31,2:1 a 1,2:1, de 30:1 a 1,2:1, de 29:1 a 1,2:1, de 28:1 a 1,2:1, de 27 :1 a 1,2:1, de 26:1 a 1,2:1, de 25:1 a 1,2:1, de 24:1 a 1,2:1, de 23:1 a 1,2:1, de 22:1 a 1,2:1, de 21,2:1 a 1,2:1, de 20:1 a 1,2:1, de 19:1 a 1,2:1, de 18:1 a 1,2:1, de 17:1 a 1,2:1, de 16:1 a 1,2:1, de 15:1 a 1,2:1, de 14:1 a 1,2:1, de 13:1 a 1,2:1, de 12:1 a 1,2:1, de 11,2:1 a 1,2:1, de 10:1 a 1,2:1, de 9:1 a 1,2:1, de 8:1 a 1,2:1, de 7:1 a 1,2:1, de 6:1 a 1,2:1, de 5:1 a 1,2:1, de 4:1 a 1,2:1, de 3:1 a 1,2:1, de 2,9:1 a 1,2:1, de 2,8:1 a 1,2:1, de 2,7:1 a 1,2:1, de 2:1 a 1,2:1, de 1,9:1 a 1,2:1, de 1,8:1 a 1,2:1, de 1,7:1 a 1,2:1, de 1,6:1 a 1,2:1, de 1,5:1 a 1,2:1, de 1,4:1 a 1,2:1 ou de 1,3:1 a 1,2:1.

[032] Em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a razão em peso entre quercetagetina e ácido gálico ou o sal ou éster do mesmo é de 10:1 a 1,2:1, de 10:1 a 1,3:1, de 10:1 a 1,4:1, de 10:1 a 1,5:1, de 10:1 a 1,6:1, de 10:1 a 1,7:1, de 10:1 a 1,8:1, de 10:1 a 1,9:1, de 10:1 a 2:1, de 10:1 a 2,1:1, de 10:1 a 2,2:1, de 10:1 a 2,3:1, de 10:1 a 2,4:1, de 10:1 a 2,5:1, de 10:1 a 2,6:1, de 10:1 a 2,7:1, de 10:1 a 2,8:1, ou de 10:1 a 2,9:1.

[033] Em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a combinação consiste em quercetagetina e ácido gálico a uma razão em peso de 65:1 a 1,2:1.

[034] Em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a combinação compreende quercetagetina e ácido gálico a uma razão em peso de 65:1 a 1,2:1, mais particularmente de 20:1 a 1,5:1, mais particularmente, de 10:1 a 1,5:1, mais particularmente, de 10:1 a 2:1, mais particularmente, de 4:1 a 2:1, ou ainda mais particularmente, de 8,6:1 a 2,85:1. Mais particularmente, a combinação compreende quercetagetina e ácido gálico a uma razão em peso de 49:1 a 1,5:1. Mais particularmente, a combinação compreende quercetagetina e ácido gálico a uma razão em peso de 9:1 a 1,5:1.

[035] Em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a quercetagetina é provida na forma de um extrato vegetal.

[036] Tal como aqui utilizado, “extrato vegetal” ou “extrato” se refere a preparações concentradas de várias partes de plantas obtidas isolando os constituintes ativos, tais como antioxidantes, da planta por meios adequados. Dependendo das características físico-químicas destes princípios ativos, podem ser utilizados meios adequados para o seu isolamento, por exemplo, soluções aquosas, soluções alcoólicas, solventes orgânicos, micro- ondas ou extração de fluidos supercríticos. Os referidos extratos contêm um ou mais ingredientes ativos e podem ser incorporados em composições em uma variedade de formas, incluindo um componente puro ou semipuro, um extrato sólido ou líquido ou uma matéria vegetal sólida.

[037] Em uma modalidade particular da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, o extrato vegetal compreende quercetagetina em uma quantidade igual ou superior a 30% p/p da massa do extrato seco, mais em particular, igual ou superior a 40% p/p de massa de extrato seco, ainda mais em particular, igual ou superior a 50% p/p de massa de extrato seco, e ainda mais em particular, de 35 a 60% p/p de massa de extrato seco.

[038] Em uma modalidade particular da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, o extrato da planta é um extrato de Tagetes erecta. Em uma modalidade mais particular, o extrato de Tagetes erecta é um extrato de bagaço de flor. Em uma modalidade ainda mais particular, o extrato de bagaço de flor Tagetes erecta compreende quercetagetina em uma quantidade de 35 a 60% p/p da massa do extrato seco.

[039] Entende-se por “extrato de Tagetes erecta” uma preparação concentrada de compostos obtidos da planta Tagetes erecta. Na presente invenção, é preferível usar o bagaço de flor de Tagetes erecta para preparar o extrato. O bagaço da flor é o resíduo remanescente após a extração da oleorresina das flores. O principal composto antioxidante do extrato do bagaço da flor Tagetes erecta é a quercetagetina, que responde por mais de 94% de seu antioxidante (veja os exemplos abaixo).

[040] Tagetes erecta (também conhecida como calêndula mexicana, calêndula asteca, calêndula africana ou simplesmente calêndula) é uma planta herbácea pertencente à família Asteraceae. Esta planta tem sido normalmente usada na medicina tradicional e é uma planta ornamental comum em todo o mundo. A maioria dos estudos sobre a flor do calêndula concentrou- se na extração de oleorresinas de luteína. As oleorresinas de calêndula são usadas pela indústria como fonte de carotenoides naturais para produzir, por exemplo, pigmentos a serem adicionados em rações para frangos de corte ou galinhas poedeiras. A oleorresina rica em carotenoides é obtida a partir de flores secas de calêndula com hexano, gerando grandes quantidades de resíduos de flores desengordurados ou bagaço. Esses resíduos são usados atualmente como fonte de fibra para animais, como fertilizante ou simplesmente descartados.

[041] Dessa forma, uma vantagem adicional das combinações da invenção é que a quercetagetina pode ser obtida a partir de compostos abundantes e baratos que são comumente descartados na indústria, como o extrato de bagaço de Tagetes erecta, que é altamente enriquecido em quercetagetina.

[042] Em uma modalidade particular da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, o extrato vegetal é selecionado a partir do grupo que consiste em um extrato aquoso, um extrato alcoólico e um extrato orgânico. Em uma modalidade mais particular, o extrato vegetal é um extrato alcoólico.

[043] Da maneira usada no presente documento, a expressão “extrato aquoso” se refere a um extrato de planta em que a extração foi realizada usando água como o único solvente. A expressão “extrato orgânico” se refere a um extrato de planta em que a extração foi realizada usando um solvente orgânico que não é um álcool. A expressão “extrato alcoólico” se refere a um extrato vegetal em que a extração foi realizada usando uma mistura de água e um álcool, tal como metanol ou etanol.

[044] Em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, o extrato é um extrato seco.

[045] Seria evidente para os versados na técnica que, se a quercetagetina for provida na forma de um extrato vegetal, a razão em peso do extrato e ácido gálico deve ser ajustada dependendo da quantidade de quercetagetina contida no extrato para obter as razões da presente invenção. Por exemplo, como mostrado nos exemplos a seguir, onde um extrato de Tagetes erecta contendo quercetagetina a 57% p/p é usado, uma combinação do extrato e ácido gálico a uma razão em peso de 5:1 deve ser feita a fim de obter uma razão em peso de 2,85:1 de quercetagetina e ácido gálico.

[046] Dessa forma, em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a combinação compreende um extrato de Tagetes erecta e ácido gálico em uma razão em peso de 65:1 a 1,8:1, mais em particular de 18:1 a 3:1, ainda mais em particular de 16:1 a 4:1, e ainda mais em particular, de 15:1 a 5:1.

[047] Dessa forma, em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a combinação compreende um extrato de Tagetes erecta e ácido gálico adicionado em uma razão em peso de 90:1 a 1,8:1, mais em particular de 40:1 a 3:1, ainda mais em particular de 20:1 a 4:1, e ainda mais em particular, de 15:1 a 5:1.

[048] Em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a combinação compreende um extrato alcoólico de Tagetes erecta e ácido gálico adicionado em uma razão em peso de 90:1 a 1,8:1, mais em particular de 40:1 a 3:1, ainda mais em particular de 20:1 a 4:1, e ainda mais em particular, de 15:1 a 5:1.

[049] Dessa forma, em outra modalidade da combinação da invenção, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a combinação compreende um extrato alcoólico de bagaço de flor Tagetes erecta e ácido gálico adicionado em uma razão em peso de 90:1 a 1,8:1, mais em particular de 40:1 a 3:1, ainda mais em particular de 20:1 a 4:1, e ainda mais em particular, de 15:1 a 5:1.

[050] Como aqui mencionado, a invenção provê em uma segunda modalidade uma composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética que compreende a combinação como aqui definida. As composições da invenção podem adicionalmente incorporar outros ingredientes ativos que reforçam os efeitos benéficos da combinação da invenção.

[051] Uma “composição de alimento”, tal como aqui usada, se refere a qualquer composição sólida, semissólida ou líquida, também um líquido bebível, que é adequado para consumo humano. O termo “composição de ração animal” se refere a qualquer composição sólida, semissólida ou líquida, também um líquido bebível, que é adequado para consumo de animais não humanos; portanto, também engloba alimentos para animais de estimação. Ambas as composições de alimentos e rações também devem abranger as matérias-primas e cargas de alimentação usadas para sua elaboração, bem como suplementos dietéticos. O termo “suplemento dietético” se refere a uma preparação destinada a suplementar a dieta e prover nutrientes, tais como vitaminas, minerais, fibras, ácidos graxos ou aminoácidos, que podem estar ausentes ou não podem ser consumidos em quantidade suficiente na dieta de um indivíduo.

[052] “Composição cosmética”, na forma aqui usada, se refere a composições para melhorar a aparência ou higiene dos indivíduos, compreendendo excipientes ou carreadores cosmeticamente aceitáveis. A expressão “cosmeticamente aceitável” se refere àqueles excipientes ou carreadores adequados para uso em contato com a pele humana sem excessiva toxicidade, incompatibilidade, instabilidade, resposta alérgica, dentre outros.

[053] A expressão “composição farmacêutica” ou “composição veterinária” se refere a composições usadas para melhorar ou manter a saúde de indivíduos ou animais, respectivamente, e compreende excipientes ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis.

[054] As composições que compreendem a combinação da invenção podem ser apresentadas em qualquer forma, por exemplo, sólida ou líquida.

[055] A combinação da invenção é particularmente útil para prevenir a oxidação da composição que compreende lipídeos. Dessa forma, em outra modalidade, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética compreende lipídios. Mais particularmente, a composição compreende uma quantidade de lipídios igual ou superior a 1% p/p, ainda mais particularmente igual ou superior a 10% p/p.

[056] Na forma aqui usada, “lipídios” se referem a moléculas orgânicas que são insolúveis em água e solúveis em solventes não polares, por exemplo, ácidos graxos, esteroides ou triacilglicerídeos (gorduras). A combinação da invenção é especialmente útil para prevenir a oxidação de gorduras.

[057] Em outra modalidade, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética compreende vitaminas ou carotenoides.

[058] Em outra modalidade, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética compreende a combinação da invenção em uma quantidade de 0,001% p/p a 1% p/p, mais em particular de 0,005% p/p a 0,5% p/p, e ainda mais em particular, de 0,01% p/p a 0,1% p/p.

[059] Em outra modalidade, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética compreende quercetagetina em uma quantidade de 20 ppm a 5000 ppm. Mais particularmente, de 25 ppm a 500 ppm, e ainda mais particularmente, de 50 ppm a 200 ppm.

[060] Em outra modalidade, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, a composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética compreende ácido gálico em uma quantidade de 20 ppm a 5.000 ppm. Mais particularmente, de 25 ppm a 500 ppm, e ainda mais particularmente, de 50 ppm a 200 ppm.

[061] Como mencionado anteriormente, a invenção provê em um terceiro aspecto o uso da combinação como aqui definido como um antioxidante em uma composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética. A combinação da invenção é útil para aumentar a estabilidade oxidativa de qualquer composição que compreende moléculas sensíveis à oxidação, por exemplo, lipídeos. Dessa forma, em uma modalidade particular, a combinação como aqui definida é usada como um antioxidante em uma composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética, em que as composições compreendem lipídios, mais particularmente, compreende uma quantidade de lipídios igual a ou superior a 1% p/p, ainda mais particularmente igual ou superior a 10% p/p.

[062] Como aqui mencionado, a invenção provê em um quarto aspecto um método para preparar a combinação como aqui definido, compreendendo as etapas de: - prover quercetagetina; - adicionar ácido gálico ou um sal ou éster do mesmo; - opcionalmente, adicionar um carreador líquido adequado; e - misturar e homogeneizar.

[063] Em uma modalidade particular do método, opcionalmente em combinação com qualquer uma das modalidades providas acima ou a seguir, o carreador líquido adequado é selecionado a partir do grupo que consiste em um carreador comestível e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade mais particular, o carreador líquido adequado é selecionado a partir do grupo que consiste em álcool (tal como etanol ou isopropanol), ácido orgânico, éster (tais como citratos, monoglicerídeos e diglicerídeos), lecitina, lipídeo (tal como gordura ou óleo), outros extratos líquidos e água.

[064] Um “carreador farmaceuticamente aceitável”, na forma usada no presente documento, se refere a um carreador adequado para uso em contato com o tecido ou órgão de humanos e animais não humanos sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica, imunogenicidade ou outros problemas ou complicações proporcionais a uma razão benefício/risco razoável. Um “carreador comestível” se refere a um carreador que pode ser ingerido por animais, incluindo humanos, sem consequências deletérias significativas à saúde.

[065] Em toda a descrição e reivindicações, a palavra “compreende” e variações da palavra não se destinam a excluir outras características técnicas, aditivos, componentes ou etapas. Além disso, a palavra “compreender” abrange o caso de “consistir em”. Objetos, vantagens e características adicionais da invenção ficarão aparentes aos especialistas na técnica após o exame da descrição ou podem ser aprendidos pela prática da invenção. Os exemplos e desenhos seguintes são providos a título de ilustração e não se destinam a limitar a presente invenção. Os sinais de referência relacionados aos desenhos e colocados entre parênteses em uma reivindicação são apenas para tentar aumentar a inteligibilidade da reivindicação e não devem ser interpretados como limitantes do escopo da reivindicação. Além disso, a presente invenção cobre todas as combinações possíveis de modalidades particulares e preferidas descritas no presente documento.

Exemplos Preparação de extrato

[066] O bagaço de Tagetes erecta foi obtido submetendo as flores à extração de oleorresina (H. B. Sowbhagya et al., “Natural Colorant from Marigold-Chemistry and Technology”, Food Reviews International, 2004, vol. 20, pp. 33-50).

[067] Em seguida, o bagaço foi submetido à extração com solvente alcoólico de acordo com os procedimentos padrão. Resumidamente, a extração pode ser realizada usando como solvente metanol e/ou etanol em água em razões em volume que variam de 1:3 a 3:1, uma faixa de temperaturas de 30 a 50 ºC durante períodos de tempo de 0,5 a 2 horas, e com uma razão sólido- líquido de 1:30 a 1:50 (p/v), dependendo das características das matérias- primas.

[068] O produto intermediário sólido-líquido foi posteriormente filtrado e o extrato foi seco por pulverização para obter um pó amarelo a marrom concentrado. O conjunto de condições operacionais para concentração-filtração e secagem por pulverização do extrato são dependentes das características específicas de cada lote de extrato, que são influenciadas pela qualidade da safra original quando obtida. Os ingredientes adicionados à preparação a ser seca por pulverização também determinam igualmente as condições de operação. O resíduo sólido e a viscosidade são padronizados entre os lotes de extrato. Foi utilizado um bico de dois fluidos com diâmetro do orifício- tampa de 0,5 mm. A dispersão aquosa é misturada por aproximadamente 30 min antes da secagem por pulverização dentro desta faixa de referência de condições operacionais: temperatura de entrada do ar de secagem, 100-170 ºC; vazão volumétrica do ar de atomização: 300-800 l/h; vazão volumétrica de alimentação: 3-15 ml/min; concentração de ração, 3-10% (p/p); vazão volumétrica do ar de secagem: 25-50 m3/h.

[069] Cromatografia líquida com arranjo de fotodiodo e detectores de espectrometria de massa com detector triplo quadrupolo com MRM (UPLC-PDA-XevoTQS) e quantificação por padrão externo foi realizada no extrato resultante (Antoni Delpino-Rius et al., “Characterisation of Phenolic Compounds in Processed Fibres from the Juice Industry”, Food Chem., 2015, vol. 172, pp. 575-584) e mostrou que era rico em flavonoides (50-70%), com um teor de quercetagetina variando de 30% a 65%.

[070] O perfil das substâncias antioxidantes mais abundantes de duas amostras do extrato foi o seguinte: - Quercetagetina: Amostra-A: 573,68 mg/g, Amostra-B: 567,29 mg/g; - Quercetina: Amostra-A: 26,12 mg/g, Amostra-B 2: 27,15 mg mg/g; - Galato de metila: Amostra-A: 7,02 mg/g, Amostra-B: 7,17 mg/g; - Ácido gálico: Amostra-A: 1,18 mg/g, Amostra-B: 1,20 mg/g.

[071] Portanto, a quercetagetina representa praticamente todas as substâncias antioxidantes do extrato (94,24% das substâncias ativas avaliadas nessas amostras). A quercetina representa 4,39% dos fenólicos e flavonoides avaliados e os galatos, incluindo metil-galato e ácido gálico, representam 1,37% (1,17% e 0,20%, respectivamente).

Método Rancimat

[072] Os ensaios de Rancimat foram realizados com 892 Professional Rancimat de acordo com as instruções do fabricante (Metrohm, Suíça), a fim de avaliar a eficácia antioxidante da quercetagetina (provida na forma de um extrato de bagaço de Tagetes erecta descrito acima) em combinação com vários antioxidantes.

[073] A temperatura do bloco de aquecimento foi fixada em 120 ºC. Quando o dispositivo atingiu a temperatura desejada, 60 mL de água deionizada foram adicionados a cada célula e sua condutividade foi determinada até ficar estável (1,5 - 2 h).

[074] A banha comercial sem antioxidantes foi derretida em estufa a 50 ºC. Foi preparada uma solução estoque homogênea de banha com 1% de antioxidante e obtidas diluições com banha para atingir as concentrações desejadas a serem testadas. As concentrações avaliadas de antioxidantes foram 25, 75 e 150 ppm. A concentração de antioxidantes no extrato de Tagetes utilizado foi de 60%.

[075] A fim de identificar o relacionamento sinergístico entre os antioxidantes, foram testadas diferentes proporções do extrato de Tagetes erecta combinado com ácido gálico, BHT, BHA e tocoferóis. As razões em peso usadas foram 15:1 (90% das substâncias ativas do extrato - 10% das substâncias ativas de outro antioxidante); 5:1 (75% das substâncias ativas do extrato - 25% das substâncias ativas de outro antioxidante); 1,67:1 (50% das substâncias ativas do extrato de TE - 50% das substâncias ativas de outro antioxidante); e 1:1,8 (25% da substância ativa do extrato de TE - 75% da substância ativa de outro antioxidante).

[076] Uma vez que as amostras de banha com antioxidantes foram preparadas, 3g da amostra foram adicionados por vaso de reação. As amostras foram expostas a uma corrente de ar a 120 ºC. Os produtos de oxidação voláteis (principalmente ácido fórmico) são transferidos para o vaso de medição pela corrente de ar e aí absorvidos em água destilada, onde a condutividade da água foi determinada. A condutividade da água, originada basicamente pelo aumento do ácido fórmico, foi registrada por um software instalado em um computador, continuamente em função do tempo, obtendo-se dessa forma uma curva de oxidação cujo ponto de inflexão é o período de indução. Esse período de indução é o tempo necessário para o processo de oxidação mudar o caráter de um estado de oxidação muito lenta para um consumo muito mais rápido de oxigênio, causando um rápido aumento no valor de peróxido. Todos os ensaios clínicos incluíram sempre controles negativos sem nenhum antioxidante.

[077] Os fatores de proteção antioxidante foram determinados pela relação entre o período de indução com antioxidante e o período de indução do respectivo controle negativo (sem antioxidante). Quanto maior o fator de proteção antioxidante, tanto melhor a eficácia do antioxidante avaliado. O software SAS na versão 9.1.3 (SAS institute) foi usado para realizar todas as análises estatísticas.

Resultados com extrato de TE combinado com ácido gálico

[078] Os resultados do ensaio Rancimat mostraram que o extrato de TE sozinho forneceu um fator de proteção maior do que o ácido gálico, BHA ou BHB, mas inferior ao tocoferol (Tabela 1 e Figura 1).

Tabela 1 Antioxidante Razão de Antioxidantes Tempo de Fator de antioxidantes (ppm) indução (h) proteção extrato de Tagetes erecta (TE) - 0 10,14 1 25 11,75 1,17 75 17,85 1,75 150 28,40 2,83

Tocoferóis - 0 9,81 1 25 20,12 1,56 75 25,62 2,60 150 33,01 3,36 TE + Tocoferóis 75-25 0 10,60 1 25 12,71 1,20 75 19,98 1,89 150 32,87 3,10 50-50 0 10,89 1 25 14,17 1,30 75 21,43 1,97 150 33,24 3,05 25-75 0 10,72 1 25 14,64 1,37 75 24,15 2,25 150 33,39 3,12 BHA - 0 10,96 1 25 12,72 1,16 75 16,71 1,53 150 19,85 1,81 TE +BHA 75-25 0 9,79 1 25 11,93 1,22 75 16,39 1,67 150 22,73 2,32 50-50 0 10,01 1 25 12,05 1,20 75 15,65 1,56 150 20,48 2,05 25-75 0 10,40 1 25 13,12 1,26 75 17,26 1,66 150 20,65 1,99 BHT - 0 9,72 1 25 10,28 1,06 75 12,19 1,25 150 13,90 1,43 TE +BHT 75-25 0 10,64 1

25 11,27 1,06 75 14,13 1,33 150 22,29 2,09 50-50 0 11,18 1 25 12,24 1,09 75 14,18 1,27 150 17,29 1,55 25-75 0 11,03 1 25 11,73 1,06 75 13,94 1,26 150 15,12 1,37 n = 2 (replicatas por cada concentração)

[079] As combinações do extrato de TE com os outros antioxidantes não mostraram melhora na proteção oxidativa quando o extrato foi misturado com tocoferol, BHA ou BHB. Entretanto, quando o extrato de TE foi combinado com ácido gálico, um efeito antioxidante sinergístico surpreendente foi observado (Figura 1, triângulos pretos e círculos pretos), que aumentou sua capacidade antioxidante em 48% (N = 4-8 replicatas por concentração de antioxidantes testados, Anova a duas variáveis (Teste de Tukey), * P<0,05 vs. TE, # P<0,01 vs. ácido gálico). Essa sinergia foi perdida quando a quantidade de ácido gálico foi aumentada acima de uma razão em peso de 1,67:1 (extrato/ácido gálico) (Figura 1, triângulos e quadrados cheios).

[080] Portanto, esses resultados demonstram que uma combinação de quercetagetina e ácido gálico provê um forte efeito antioxidante sinergístico.

Resultados com quercetagetina isolada combinada com ácido gálico

[081] A eficácia antioxidante da quercetagetina pura (> 95% de pureza) em combinação com ácido gálico (> 99% de pureza) foi também avaliada pelo método Rancimat como aqui descrito.

[082] Conforme mostrado na Figura 2, a adição de ácido gálico à quercetagetina a uma razão em peso de 9:1 forneceu um efeito sinergístico (círculos pretos) que supera a capacidade antioxidante da quercetagetina sozinha (quadrados vazios), ácido gálico sozinho (círculos vazios) e Extrato de TE sozinho (triângulos vazios).

[083] Portanto, esses resultados demonstram que uma combinação contendo apenas quercetagetina e ácido gálico provê um potente efeito antioxidante sinergístico.

[084] Além disso, a capacidade antioxidante de uma combinação de quercetagetina e gálico foi equivalente à provida por uma combinação de extrato de TE e ácido gálico (triângulos pretos), o que demonstrou que o efeito antioxidante sinergístico observado pela combinação de extrato de TE e ácido gálico é certamente provido pela combinação da quercetagetina presente no extrato de TE e o ácido gálico adicionado.

Lista de Citações - H. B. Sowbhagya et at., “Natural Colorant from Marigold- Chemistry and Technology”, Food Reviews International, 2004, vol. 20, pp. 33-50.

- Antoni Delpino-Rius et al., “Characterisation of Phenolic Compounds in Processed Fibres From The Juice Industry”, Food Chem., 2015, vol. 172, pp. 575-584.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. COMBINAÇÃO COMPREENDENDO QUERCETAGETINA E ÁCIDO GÁLICO a uma razão em peso de 65:1 a 1,2:1, caracterizada pelo fato de o ácido gálico estar na forma ácida, ou na forma de um sal ou um éster do mesmo.

2. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de a razão em peso entre quercetagetina e ácido gálico ser de 20:1 a 1,5:1.

3. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de a razão em peso entre quercetagetina e ácido gálico ser de 10:1 a 2:1.

4. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizada pelo fato de a razão em peso entre quercetagetina e ácido gálico ser de 8,6:1 a 2,85:1.

5. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizada pelo fato de o ácido gálico estar na forma ácida.

6. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, caracterizada pelo fato de a quercetagetina ser provida na forma de um extrato vegetal.

7. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de o extrato vegetal ser um extrato de Tagetes erecta.

8. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de o extrato de Tagetes erecta ser um extrato de bagaço de flor.

9. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 6 a 8, caracterizada pelo fato de o extrato ser um extrato alcoólico.

10. COMPOSIÇÃO DE ALIMENTO, RAÇÃO ANIMAL, FARMACÊUTICA, VETERINÁRIA OU COSMÉTICA, caracterizada pelo fato de compreender a combinação conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9.

11. COMPOSIÇÃO DE ALIMENTO, RAÇÃO ANIMAL, FARMACÊUTICA, VETERINÁRIA OU COSMÉTICA, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de a composição compreender lipídios.

12. COMPOSIÇÃO DE ALIMENTO, RAÇÃO ANIMAL, FARMACÊUTICA, VETERINÁRIA OU COSMÉTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 ou 11, caracterizada pelo fato de a combinação estar em uma quantidade de 0,001% p/p a 1% p/p.

13. USO DA COMBINAÇÃO, conforme definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser como um antioxidante em uma composição de alimento, ração animal, farmacêutica, veterinária ou cosmética.

14. MÉTODO PARA PREPARAR A COMBINAÇÃO conforme definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizado pelo fato de compreender as etapas de: - prover quercetagetina; - adicionar ácido gálico; - opcionalmente, adicionar um carreador líquido adequado; e - misturar e homogeneizar.