BR112021013125A2

BR112021013125A2 - Vacina de mrna

Info

Publication number: BR112021013125A2
Application number: BR112021013125-6A
Authority: BR
Inventors: Stefaan De Koker; Lukasz Bialkowski
Original assignee: Etherna Immunotherapies Nv
Priority date: 2019-01-04
Filing date: 2020-01-03
Publication date: 2021-09-28
Also published as: CN113453706A; WO2020141212A1; MX2021008126A; EP3906046A1; SG11202107203UA; KR20210137437A; US20210386843A1; IL284573A; AU2020204781A1; JP2022516743A; CA3125532A1

Abstract

vacina de mrna. a presente invenção refere-se em geral a uma combinação de moléculas de mrna codificando proteínas imunoestimuladoras funcionais e um inibidor da via pd-1. em particular, ela refere-se a uma combinação de uma ou mais moléculas de mrna codificando pelo menos uma proteína imunoestimuladora funcional selecionada da lista compreendendo: cd40l, cd70 e catlr4; e um inibidor da via pd-1, opcionalmente também na forma de uma molécula de mrna. a presente invenção refere-se ainda a vacinas compreendendo tal combinação, bem como usos das combinações e vacina da presente invenção em medicina humana ou veterinária, em particular na prevenção e/ou tratamento de distúrbios proliferativos celulares.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "VACINA DE mRNA".

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se em geral a uma combinação de moléculas de mRNA codificando proteínas imunoestimuladoras funcionais e um inibidor da via PD-1. Em particular, ela refere-se a uma combinação de uma ou mais moléculas de mRNA codificando pelo menos uma proteína imunoestimuladora funcional selecionada da lista compreendendo: CD40L, CD70 e caTLR4 e um inibidor da via PD-1, opcionalmente também na forma de uma molécula de mRNA. A presente invenção refere-se ainda a vacinas compreendendo tal combinação, bem como usos das combinações e vacina da presente invenção em medicina humana ou veterinária, em particular na prevenção e/ou tratamento de distúrbios proliferativos celulares.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] A indução de respostas de células T CD8 citolíticas potentes capazes de reconhecer e matar células cancerosas, constitui o objetivo principal de qualquer vacina terapêutica contra o câncer. A capacidade de uma vacina em elicitar tais respostas de células T citolíticas é fortemente determinada pela interação precoce entre a vacina e as células dendríticas (DCs), as células apresentadoras de antígenos mais potentes e instigadoras de imunidade de células T. Em contraste com as vacinas baseadas em proteínas, as vacinas de mRNA permitem expressão do antígeno codificado por mRNA no citosol das DCs, a via natural de processamento de antígenos e apresentação de antígenos a células T CD8.

[0003] Ainda, mRNA transcrito in vitro - produzido por polimerases virais tal como T7 - se assemelha parcialmente a um RNA viral e, portanto, é reconhecido por sensores imunes inatos, dotando o mRNA com propriedades adjuvantes intrínsecas (Kariko e outros, 2005;

Yoneyama e outros, 2010). No entanto, ativação de DCs por mRNA IVT é subótima e pode ser melhorada mais pela coadministração de mRNA TriMix, uma mistura de três mRNAs codificando as proteínas imunoestimuladoras CD40L, CD70 e caTLR4 (Bonehill e outros, 2008; Van Lint e outros, 2012; Van Lint e outros, 2016). Adição de mRNA TriMix a mRNA codificando antígenos tumorais demonstrou aumentar fortemente a magnitude da resposta das células T e sua eficácia antitumoral em modelos pré-clínicos e é atualmente explorada em estudos clínicos. Deste modo, os inventores estabeleceram anterior- mente que a capacidade estimuladora de células T de APCs pode ser grandemente aumentada fornecendo a elas adjuvantes moleculares específicos na forma de uma mistura de moléculas de mRNA ou DNA codificando um ou mais dos fatores imunoestimuladores CD40L, CD70 e caTLR4, in vivo ou in vitro. A dita estimulação com fatores imunoesti- muladores pode ser feita in vivo (in situ) através de administração intravenosa, intratumoral, intradérmica, intraperitoneal, intramuscular ou intranodal de moléculas de mRNA ou DNA codificando os ditos um ou mais fatores imunoestimuladores e, opcionalmente, um mRNA, DNA ou proteína antígeno de tumor. O dito mRNA ou DNA pode estar nu ou pode ser protegido como descrito abaixo. O dito mRNA ou DNA pode ser protegido quando administrado, por exemplo, intravenosamente.

[0004] O gene PD-1, que pertence à superfamília das imunoglobulinas, codifica uma proteína transmembrana do tipo I de 55 kDa. Ambos PD-1 de camundongo e PD-1 humano consistem em 288 aminoácidos e têm um peptídeo sinal no terminal N (20 aminoácidos) e região hidrofóbica na parte do meio, que é uma região de transmembrana.

[0005] No timo, PD-1 é expresso na fase de transição entre estágio CD4-/CD8- para CD4+/CD8+ em timócitos. Na periferia, PD-1 é expresso em células T e células B ativadas através do receptor de antígeno e em células de linhagem mieloide ativadas tais como macrófagos.

[0006] PD-1 tem um ITIM (motivo inibitório baseado em tirosina imunorreceptor) em sua região intracelular e, portanto, PD-1 é considerado um regulador negativo nas respostas imunes.

[0007] Inibidores de PD-1 foram aprovados, tais como Nivolumabe e Pembrolizumabe, que evitam os sinais inibidores entre PD-1 e PD-L1. Embora esses fármacos tenham potencializado respostas duráveis em alguns pacientes, as taxas de resposta desses fármacos como monoterapia têm sido baixas. Em particular, esses fármacos enfrentam uma falta de benefício clínico na maioria dos pacientes, uma vez que sucesso da terapia depende fortemente da presença de células T antitumorais preexistentes no leito do tumor. Além disso, exaustão ou paralisação de células T de ditas células T antitumorais frequentemente ocorre no contexto de vacinas terapêuticas contra o câncer. Especificamente, imunomoduladores intratumorais podem iniciar/amplificar as respostas de células T específicas de tumor, mas frequentemente essas células T são "paralisadas" pelo microambiente imunossupressor do tumor; que, entre outros, ocorre por meio da sinalização de PD1. Portanto, era um objetivo da presente invenção prover uma composição anticâncer mais potente com base em inibidores de PD-1. Foi agora surpreendentemente constatado que a combinação de inibidores de PD-1 e dos fatores imunoestimuladores da presente invenção (CD40L, CD70 e/ou caTLR4) resulta em um efeito imunoestimulador significante, tornando as ditas combinações altamente adequadas no contexto de vacinação e tratamento anticâncer.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0008] A presente invenção é definida pelas declarações numeradas que seguem:

1. Uma combinação compreendendo: - uma ou mais moléculas de mRNA codificando pelo menos uma proteína imunoestimuladora funcional selecionada da lista compreendendo: CD40L, CD70 e caTLR4; e - um inibidor da via PD-1, que em particular impede ou bloqueia a sinalização iniciada por PD-1.

2. A combinação como definido na declaração 1; em que as ditas uma ou mais moléculas de mRNA codificam todas as proteínas imunoestimuladoras funcionais selecionadas da lista compreendendo: CD40L, CD70 e caTLR4.

3. A combinação como definido na declaração 1; em que o dito inibidor da via PD-1 está na forma de mRNA codificando o dito inibidor da via PD-1.

4. A combinação como definido na declaração 1; em que o dito inibidor da via PD-1 é selecionado da lista compreendendo: um nanocorpo direcionado contra PD-1, um anticorpo antagonístico direcionado contra PD-1; um nanocorpo direcionado contra PDL1, um anticorpo antagonístico direcionado contra PDL1; ou um derivado do mesmo; mais em particular, um anticorpo antagonístico direcionado contra PD-1.

5. A combinação como definido na declaração 4; em que o dito anticorpo antagonístico direcionado contra PD-1 é selecionado da lista compreendendo: nivolumabe (BMS-936558/MDX1106), pidilizumabe (CT- 011), pembrolizumabe (MK-3475).

6. A combinação como definido em qualquer uma das declarações 1 a 5; compreendendo ainda uma ou mais moléculas de mRNA codificando um antígeno específico para o alvo; mais em particular, um antígeno associado a tumor.

7. A combinação como definido na declaração 6; em que o dito (moléculas de mRNA codificando um) antígeno específico para o alvo é selecionado da lista compreendendo: mRNA total isolado de uma(s) célula(s)-alvo, uma ou mais moléculas de mRNA específicas para o alvo, lisados de proteína de uma(s) célula(s)-alvo, proteínas específicas de uma(s) célula(s)-alvo, um peptídeo ou proteína sintético específico para o alvo e mRNA ou DNA sintético codificando um antígeno específico para o alvo ou seu(s) peptídeo(s) derivado(s).

8. A combinação como definido na declaração 7; em que o dito antígeno específico para o alvo é um antígeno de tumor.

9. A combinação como definido em qualquer uma das declarações 1 a 3; em que as ditas uma ou mais moléculas de mRNA são formuladas para administração parenteral; mais em particular para administração intravenosa, intratumoral, intradérmica, subcutânea, intraperitoneal, intramuscular ou intranodal.

10. A combinação como definido em qualquer uma das declarações 1 a 3; em que as ditas moléculas de mRNA são formuladas para administração intravenosa e compreendidas em nanopartículas, tais como nanopartículas poliméricas ou lipídicas.

11. A combinação como definido em qualquer uma das declarações 1 a 3; em que as ditas moléculas de mRNA são formuladas para administração intratumoral ou intranodal e estão na forma de moléculas de mRNA nu em um tampão de injeção adequado, tal como um tampão de Ringer com Lactato.

12. A combinação como definido em qualquer uma das declarações 1 a 3; em que o dito inibidor da via PD-1 é formulado para administração parenteral; mais em particular para administração intravenosa, intratumoral, intradérmica, subcutânea, intraperitoneal, intramuscular ou intranodal.

13. Uma vacina compreendendo a combinação como definido em qualquer uma das declarações 1 a 12.

14. A vacina como definido na declaração 12, em que a dita vacina é formulada para administração parenteral; mais em particular para administração intravenosa, intratumoral, intradérmica, subcutânea, intraperitoneal, intramuscular ou intranodal.

15. A combinação como definido em qualquer uma das declarações 1 a 12 ou a vacina como definido em qualquer uma das declarações 13 a 14 para uso em medicina humana ou veterinária.

16. A combinação como definido em qualquer uma das declarações 1 a 12 ou a vacina como definido em qualquer uma das declarações 13 a 14 para uso no tratamento de distúrbios proliferativos celulares.

17. A combinação como definido em qualquer uma das declarações 1 a 12 ou a vacina como definido em qualquer uma das declarações 13 a 14 para uso na indução de uma resposta imune em relação a um tumor em um sujeito.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0009] Com referência específica agora às Figuras, é enfatizado que os detalhes mostrados são a título de exemplo e apenas para propósitos de discussão ilustrativa das diferentes modalidades da presente invenção. Eles são apresentados com o objetivo de prover o que é acreditado ser a descrição mais útil e rápida dos princípios e aspectos conceituais da invenção. Com relação a isso, nenhuma tentativa é feita de mostrar detalhes estruturais da invenção em mais detalhes do que é necessário para uma compreensão fundamental da invenção. A descrição feita com os desenhos torna aparente àqueles versados na técnica como as várias formas da invenção podem ser concretizadas na prática.

[0010] Figura 1: Ilustração de possíveis vias de administração no contexto da invenção.

[0011] Figura. 2: efeito de combinação de Trimix e antígeno administrados IN com anti-PD-1 administrado IP sobre crescimento de tumor.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0012] Como já detalhado aqui acima, a presente invenção se refere a uma combinação compreendendo: - uma ou mais moléculas de mRNA codificando pelo menos uma proteína imunoestimuladora funcional selecionada da lista compreendendo: CD40L, CD70 e caTLR4; e - um inibidor da via PD-1; em particular, um inibidor da via PD-1 que impede ou bloqueia a sinalização iniciada por PD-1.

[0013] Ao longo da invenção, o termo "TriMix" significa uma mistura de moléculas de mRNA codificando as proteínas imunoestimuladoras CD40L, CD70 e caTLR4.

[0014] O mRNA ou DNA usado ou mencionado aqui pode ser mRNA ou DNA nu ou mRNA ou DNA protegido. A proteção de DNA ou mRNA aumenta sua estabilidade, mas preservando a capacidade de usar o mRNA ou DNA para propósitos de vacinação. Exemplos não limitantes de proteção de ambos mRNA e DNA podem ser: encapsulação em lipossoma, proteção por protamina, lipoplexação lipídica (catiônica), composições lipídicas, catiônicas ou policatiônicas, lipoplexação manosilada, lipossomação de bolha, proteção de polietilenimina (PEI), proteção de microbolhas carregadas com lipossoma, etc.

[0015] O termo "alvo" usado ao longo da descrição não é limitado aos exemplos específicos que podem ser descritos aqui. Qualquer agente infeccioso tal como um vírus, uma bactéria ou um fungo pode ser o alvo. Além disso, qualquer célula de tumor ou cancerosa pode ser direcionada.

[0016] O termo "antígeno específico do alvo" usado ao longo da descrição não é limitado aos exemplos específicos que podem ser descritos aqui. Será claro para o versado que a invenção está relacionada à indução de imunoestimulação em APCs, independentemente do antígeno específico do alvo que é apresentado. O antígeno que deve ser apresentado dependerá do tipo de alvo para o qual se pretende elicitar uma resposta imune em um sujeito. Exemplos típicos de antígenos específicos para o alvo são marcadores expressos ou segregados que são específicos para células de tumor, bacterianas e fúngicas ou para proteínas virais ou estruturas virais específicas. Sem querer limitar o escopo de proteção da invenção, alguns exemplos de possíveis marcadores são listados abaixo.

[0017] O termo "célula de apresentação de antígeno" usado ao longo da descrição inclui todas as APCs. Exemplos específicos não limitantes são DCs, linhagens de células dendríticas, células B ou linhagens de células B. As DCs ou células B podem ser isoladas ou geradas a partir do sangue de um paciente ou sujeito saudável. O paciente ou sujeito pode ter sido submetido à vacinação anterior ou não.

[0018] Os termos "neoplasmas", "câncer" e/ou "tumor" usados ao longo da descrição não pretendem ser limitados aos tipos de câncer ou tumores que podem ter sido exemplificados. O termo, portanto, compreende todos os distúrbios proliferativos tais como neoplasma, displasia, lesões pré-malignas ou pré-cancerosas, crescimento de células anormais, tumores benignos, tumores malignos, câncer ou metástase, em que o câncer é selecionado do grupo de: leucemia, câncer de pulmão de não pequenas células, câncer de pulmão de pequenas células, câncer do SNC, melanoma, câncer de ovário, câncer de rim, câncer de próstata, câncer de mama, glioma, câncer de cólon, câncer de bexiga, sarcoma, câncer de pâncreas, câncer colorretal, câncer de cabeça e pescoço, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de medula óssea, câncer de estômago, câncer de duodeno, câncer de esôfago, câncer de tireoide, câncer hematológico e linfoma. Antígenos específicos para câncer podem ser, por exemplo, MelanA/MART1, antígenos da linhagem germinativa de câncer, gp100, Tirosinase, CEA, PSA, Her-2/neu, survivina, telomerase.

[0019] O uso da combinação de CD40L e caTLR4 gera DCs de secreção de citocina/quimiocina, como foi mostrado para ligação de CD40 e TLR4 através da adição de CD40L e LPS solúveis.

[0020] A introdução de CD70 nas DCs provê um sinal coestimulador para células T virgens CD27+ através de inibição de apoptose de células T ativadas e ao apoiar a proliferação de células T.

[0021] Como uma alternativa a caTLR4, outros receptores do tipo Toll (TLR) poderiam ser usados. Para cada TLR, uma forma ativa constitutiva é conhecida e poderia ser introduzida nas DCs a fim de elicitar uma resposta imune do hospedeiro. Na visão da requerente, entretanto, caTLR4 é a molécula de ativação mais potente e, portanto, é preferida.

[0022] Em uma modalidade preferida da vacina da invenção, a(s) molécula(s) de mRNA ou DNA codifica(m) as proteínas imunoestimuladoras CD40L e CD70. Em uma modalidade particularmente preferida da vacina da invenção, a(s) molécula(s) mRNA ou de DNA codifica(m) as proteínas imunoestimuladoras CD40L, CD70 e caTLR4.

[0023] As ditas moléculas de mRNA ou DNA codificando as proteínas imunoestimuladoras podem ser parte de uma molécula de mRNA ou DNA única. De preferência, a dita molécula de mRNA ou DNA única é capaz de expressar as duas ou mais proteínas simultaneamente. Em uma modalidade, as moléculas de mRNA ou DNA codificando as proteínas imunoestimuladoras são separadas na molécula de mRNA ou DNA única por um sítio de entrada ribossomal interno (IRES) ou uma sequência de codificação de peptídeo 2a autoclivável.

[0024] Em uma modalidade específica, uma ou mais das ditas moléculas de mRNA da presente invenção podem conter ainda um potencializador de tradução e/ou um elemento de retenção nuclear. Potencializadores de tradução e elementos de retenção nuclear adequados são aqueles descritos no WO2015071295.

[0025] Tal como aqui usado, o termo "inibidor de PD-1" inclui qualquer composto capaz de afetar direta ou indiretamente a regulagem de PD-1 através da redução, por exemplo, da expressão de PD-1 (isto é, transcrição e/ou a tradução) ou seu ligantes naturais PD-L1/PD-L2, ou uma atividade de PD-1. Ele inclui inibidor de PD-1 intracelular (por exemplo, agentes que bloqueiam uma molécula ou via de sinalização associada a PD-1, tais como SHP-1 e SHP-2), bem como inibidor de PD-1 extracelular. Sem ser tão limitados, tais inibidores incluem siRNA, moléculas antissentido, proteínas, peptídeos, moléculas pequenas, anticorpos, etc.

[0026] Assim, em uma modalidade específica, o dito inibidor da via PD-1 é selecionado da lista compreendendo: um nanocorpo direcionado contra PD-1, um anticorpo antagonístico direcionado contra PD-1; um nanocorpo direcionado contra PDL1, um anticorpo antagonístico dire- cionado contra PDL1; ou um derivado do mesmo. Derivados de anti- corpos podem incluir, por exemplo, scFV, anticorpos biespecíficos, etc.

[0027] Em uma modalidade, o inibidor de PD-1 mencionado acima bloqueia/inibe a interação entre PD-1 e um ligante de PD-1 (por exemplo, PD-L1, PD-L2). Tal inibidor pode ter como alvo, por exemplo, o domínio IgV de PD-1 e/ou PD-L1 e/ou PD-L2, tal como um ou mais dos resíduos envolvidos na interação, como discutido acima.

[0028] Em uma modalidade, o inibidor de PD-1 mencionado acima é um anticorpo de bloqueio, tal como um anticorpo anti-PD-1 ou anti- PD-L1/PD-L2. Os anticorpos anti-PD-1 e/ou anti-PD-L1/PD-L2 de bloqueio são bem conhecidos na técnica. Outros anticorpos de bloqueio podem ser prontamente identificados e preparados pelo versado na técnica com base no domínio de interação conhecido entre PD-1 e PD-L1/PD-L2, como discutido acima. Por exemplo, um peptídeo correspondente à região IgV de PD-1 ou PD-L1/PD-L2 (ou a uma porção desta região) pode ser usado como um antígeno para desenvolver anticorpos de bloqueio usando métodos bem conhecidos na técnica.

[0029] Por "anticorpo anti-PD-1" ou "anti-PD-L1" ou "anti-PD-L2", no presente contexto, quer dizer um anticorpo capaz de detectar/reconhecer (isto é, se ligar a) uma proteína PD-1, PD-L1 ou PD-L2 ou um fragmento de proteína PD-1, PD-L1 ou PD-L2. Em uma modalidade, o anticorpo mencionado acima inibe a atividade biológica de PD-1, tal como a interação PD-1-PD-L1/PD-L2 ou inibição de células T mediada por PD-1. Em uma outra modalidade, o fragmento de proteína PD-1 ou PD-L1/PD-L2 é um domínio extracelular de PD-1 ou PD-L1/PD-L2 (por exemplo, o domínio IgV).

[0030] O termo "níveis de PD-1", tal como aqui utilizado, significa o nível de expressão de PD-1 em células T ou a porcentagem de células T positivas para PD-1 que são também CD4+ ou CD8+ expressas como uma porcentagem do número total de CD4+ ou Células CD8+. O nível de expressão de PD-1 em células T pode ser determinado através de qualquer método padrão. Por exemplo, pode ser determinado através de citometria de fluxo e medido como intensidade média de fluorescência (MFI).

[0031] Em uma modalidade, a invenção provê um método para uma terapia de combinação para indivíduos compreendendo administrar ao indivíduo um ou mais fatores imunoestimuladores e um inibidor de PD-

1. O um ou mais fatores imunoestimuladores e o inibidor de PD-1 podem ser administrados simultaneamente ou contemporaneamente, como uma única composição ou composições separadas, ou o um ou mais fatores imunoestimuladores e inibidor de PD-1 podem ser administrados em momentos diferentes.

[0032] As composições da presente invenção incluem geralmente um inibidor de PD-1 em combinação com um ou mais fatores imunoestimuladores. PD-1 é um receptor de superfície celular que pertence à superfamília das imunoglobulinas e é expresso em células T e células pró-B. PD-1 se liga a dois ligantes, PD-L1 e PD-L2. PD-1 desempenha um papel importante na subregulagem do sistema imune ao impedir a ativação das células T, que por sua vez reduz a autoimunidade e promove a autotolerância. O efeito inibidor de PD-1 é realizado por meio de um mecanismo duplo de promoção de apoptose (morte de células programada) em células T específicas de antígeno em nós linfáticos enquanto simultaneamente reduzindo apoptose em Tregs. Inibidores PD-1 adequado para uso nas composições da presente invenção incluem nivolumabe (BMS-936558/MDX1106), pidilizumabe (CT-011), pembrolizumabe (MK-3475) e combinações dos mesmos; alternativamente, o inibidor de PD-L1 atezolizumabe também pode ser usado adequadamente no contexto da invenção.

[0033] Dosagens adequadas do inibidor de PD-1 dependerão de uma série de fatores incluindo, por exemplo, idade e peso de um indivíduo, pelo menos uma condição precisa necessitando tratamento, gravidade de uma condição, natureza de uma composição, via de administração e combinações dos mesmos. Em última análise, uma dosagem adequada pode ser prontamente determinada por um versado na técnica tal como, por exemplo, um médico, um veterinário, um cientista e outros profissionais médicos e de pesquisa. Por exemplo, um versado na técnica pode começar com uma dosagem baixa que pode ser aumentada até atingir o êxito ou resultado de tratamento desejado. Alternativamente, um versado na técnica pode começar com uma dosagem alta que pode ser diminuída até atingir uma dosagem mínima necessária para atingir o êxito ou resultado de tratamento desejado.

[0034] A presente invenção também provê uma combinação como aqui definido; em que as ditas moléculas de mRNA são formuladas para administração intravenosa e compreendidas em nanopartículas (lipídicas). Uma nanopartícula lipídica (LNP) é geralmente conhecida como uma partícula nanodimensionada composta por uma combinação de 25 lipídeos diferentes. Embora muitos tipos diferentes de lipídios possam ser incluídos em tal LNP, as LNPs da presente invenção podem, por exemplo, ser compostas de uma combinação de um lipídio ionizável, um fosfolipídio, um esterol e um lipídio PEG.

[0035] Tal como aqui usado, o termo "nanopartícula" se refere a qualquer partícula tendo um diâmetro que torna a partícula 30 adequada para administração sistêmica, em particular intravenosa de, em particular, ácidos nucléicos, tipicamente com um diâmetro de menos de 1000 nanometros (nm).

[0036] Em uma modalidade alternativa, a presente invenção provê uma combinação como aqui definido; em que as ditas moléculas de mRNA são formuladas para administração intratumoral ou intranodal e estão na forma de moléculas de mRNA nu em um tampão de injeção adequado, tal como um tampão de Ringer com Lactato. A presente invenção também provê as combinações e vacinas como definido aqui para uso em medicina humana ou veterinária, em particular para uso no tratamento de distúrbios proliferativos celulares, mais em particular para uso em elicitação de uma resposta imune em relação a um tumor em um sujeito.

[0037] Finalmente, a presente invenção provê um método para o tratamento de um distúrbio proliferativo celular compreendendo as etapas de administração a um sujeito com necessidade de uma combinação ou vacina da presente invenção.

EXEMPLOS Exemplo 1: combinação de Trimix, antígeno e anti-PD-1

[0038] O escopo deste exemplo é eliciar as respostas imunes de células T contra TAAs predefinidos quando usando Trimix como uma monoterapia ou em combinação com anti-PD-1. As vantagens dessa configuração incluem: - A capacidade de incorporar TAAs - mRNA de Trimix age como um adjuvante para aumentar as respostas de células T contra TAA - Duas vias de administração são exploradas (intranodal (IN) e intravenosa (IV)), como ilustrado na Figura 1 - Administração IV demonstrou ser mais imunogênica, entretanto, também requer formulação adicional, tal como uso de LNPs.

[0039] Camundongos fêmeas Balb/C foram injetados com 1x106 células de tumor CT26 no dia 0. Nos dias 5, 10 e 15, mRNA de GP70- Trimix (10 µg por componente) foi administrado intranodalmente. Anticorpos monoclonais anti-PD-1 (10 mg/kg) foram administrados intraperitonealmente no dia 5 e repetidos no total 5 vezes com intervalos de 3 dias. Respondentes completos (CR) foram considerados se estando livres do tumor no dia 40.

[0040] Os resultados desse exemplo são mostrados na Figura 2; que demonstra claramente um efeito benéfico de ambos anti-PD-1 (respondedores completos 2 de 6) e GP70-Trimix (respondedores completos 4 de 8) sobre o crescimento do tumor, quando usado sozinho. Além disso, o uso combinado de GP70-Trimix e anti-PD-1 mostra um efeito ainda maior sobre crescimento de tumor resultando em 7 de 8 camundongos completamente livres do tumor no dia 40.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Combinação, caracterizada pelo fato de que compreende: - uma ou mais moléculas de mRNA codificando todas as proteínas imunoestimuladoras funcionais CD40L, CD70 e caTLR4 (TLR4 ativo constitutivo); e - uma ou mais moléculas de mRNA codificando um antígeno específico para o alvo; e - um inibidor da via PD-1 selecionado da lista compreendendo: um nanocorpo direcionado contra PD-1, um anticorpo antagonístico direcionado contra PD-1; um nanocorpo direcionado contra PDL1, um anticorpo antagonístico direcionado contra PDL1; ou um derivado dos mesmos; e em que as ditas uma ou mais moléculas de mRNA são formuladas para administração intravenosa.

2. Combinação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o dito inibidor da via PD-1 está na forma de mRNA codificando o dito inibidor da via PD-1.

3. Combinação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o dito anticorpo antagonístico direcionado contra PD-1 é selecionado da lista compreendendo: nivolumabe (BMS- 936558/MDX1106), pidilizumabe (CT-011), pembrolizumabe (MK- 3475).

4. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o dito antígeno específico para o alvo é um marcador específico para células de tumor, bacterianas e fúngicas ou proteínas virais ou estruturas virais.

5. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o dito antígeno específico para o alvo é um antígeno associado a tumor.

6. Combinação, de acordo com a qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que as ditas moléculas de mRNA são formuladas para administração intravenosa e compreendidas em nanopartículas.

7. Combinação, de acordo com a reivindicação 6, caracteri- zada pelo fato de que as ditas nanopartículas são nanopartículas de lipídeo.

8. Combinação, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que as ditas nanopartículas de lipídeo compreendem uma combinação de um lipídeo ionizável, um fosfolipídeo, um esterol e um lipídeo PEG.

9. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o dito inibidor da via PD-1 é formulado para administração parenteral; mais em particular para administração intravenosa, intratumoral, intradérmica, subcutânea, intraperitoneal, intramuscular ou intranodal.

10. Vacina, caracterizada pelo fato de que compreende a combinação, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.

11. Vacina, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que a dita vacina é formulada para administração parente- ral; mais em particular para administração intravenosa, intratumoral, intradérmica, subcutânea, intraperitoneal, intramuscular ou intranodal.

12. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou a vacina, como definida na reivindicação 10 ou 11, caracterizada pelo fato de ser para uso em medicina humana ou veterinária.

13. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou a vacina, como definida na reivindicação 10 ou 11, caracterizada pelo fato de ser para uso na prevenção e/ou tratamento de distúrbios proliferativos celulares.

14. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou vacina, como definida na reivindicação 10 ou 11, caracterizada pelo fato de ser para uso na elicitação de uma resposta imune em relação a um tumor em um sujeito.

Volume do Tumor (mm3) 1/1

Não tratado – CR 0/4

Dias pós-inoculação