BR112021011963A2 - Terapias de combinação tripla para alvejamento de mitocôndria e exterminação de células-tronco de câncer - Google Patents

Terapias de combinação tripla para alvejamento de mitocôndria e exterminação de células-tronco de câncer Download PDF

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Abstract

terapias de combinação tripla para alvejamento de mitocôndria e exterminação de células-tronco de câncer. as células-tronco de câncer (cscs) podem ser erradicadas através de uma estratégia terapêutica inovadora que envolve, em algumas modalidades, antibióticos aprovados pelo fda e suplementos alimentares. a presente abordagem resulta efetivamente na erradicação sinérgica de cscs através da inibição de biogênese mitocondrial em cscs durante estresse oxidativo mitocondrial induzido, sem inibição de células normais. as modalidades podem incluir um agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial grande, um agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno e um agente terapêutico que se comporta como um pró-oxidante ou induz estresse oxidativo mitocondrial. as composições de acordo com a presente abordagem inibiram propagação de csc em ~ 90 % em linhagens celulares mcf7 er(+) durante estudos preliminares, com redução confirmada em consumo de oxigênio mitocondrial e produção de atp. algumas modalidades incluem concentrações de antibiótico sub-antimicrobiano, minimizando, dessa maneira, preocupações relacionadas à resistência ao antibiótico. em algumas modalidades, um ou mais agentes terapêuticos são conjugados com um sinal de alvejamento.

Description

TERAPIAS DE COMBINAÇÃO TRIPLA PARA ALVEJAMENTO DE MITOCÔNDRIA E EXTERMINAÇÃO DE CÉLULAS-TRONCO DE CÂNCER CAMPO
[0001] A presente revelação refere-se a composições e métodos para tratar e/ou prevenir câncer, recorrência de tumor, metástase e resistência a fármacos em células cancerígenas, entre outros usos terapêuticos benéficos.
ANTECEDENTES
[0002] Os pesquisadores têm se esforçado para desenvolver novos tratamentos anticâncer. As terapias convencionais do câncer (por exemplo, irradiação, agentes alquilantes, como a ciclofosfamida e antimetabólitos, como o 5- fluorouracil) tentaram detectar e erradicar seletivamente as células cancerígenas de crescimento rápido, interferindo nos mecanismos celulares envolvidos no crescimento celular e na replicação do DNA. Outras terapias contra o câncer têm usado imunoterapias que se ligam seletivamente a antígenos tumorais mutantes em células cancerígenas de crescimento rápido (por exemplo, anticorpos monoclonais). Infelizmente, os tumores frequentemente reaparecem após essas terapias no mesmo local ou em local diferente (ou locais diferentes) indicando que nem todas as células cancerígenas foram erradicadas. As células-tronco de câncer, em particular, sobrevivem por várias razões e levam ao fracasso do tratamento. A recaída pode ser devido à dosagem quimioterápica insuficiente e/ou surgimento de clones de câncer resistentes à terapia. Consequentemente, novas estratégias de tratamento do câncer são necessárias para superar as deficiências das terapias convencionais.
[0003] Os avanços na análise de mutações permitiram um estudo aprofundado das mutações genéticas que ocorrem durante o desenvolvimento do câncer. Apesar de ter conhecimento da paisagem genômica, a oncologia moderna tem dificuldade em identificar mutações condutoras primárias em subtipos de câncer. A dura realidade parece ser que o tumor de cada paciente é único e um único tumor pode conter várias células clones divergentes. O que é necessário, então, é uma nova abordagem que enfatize as semelhanças entre os diferentes tipos de câncer. Ter como alvo as diferenças metabólicas entre as células tumorais e normais é uma promessa como uma nova estratégia de tratamento do câncer. Uma análise dos dados de perfil transcricional de amostras de câncer de mama humano revelou mais de 95 transcritos de mRNA elevados associados à biogênese mitocondrial e/ou tradução mitocondrial. Sotgia et al., Cell Cycle, 11 (23): 4390-4401 (2012). Adicionalmente, mais de 35 dos 95 mRNAs regulados positivamente codificam as proteínas ribossomais mitocondriais (MRPs). A análise proteômica de células-tronco de câncer de mama humano também revelou a superexpressão significativa de várias proteínas mitocondriais, bem como de outras proteínas associadas à biogênese mitocondrial. Lamb et al., Oncotarget, 5 (22): 11029-11037 (2014).
[0004] A inibição funcional da biogênese mitocondrial usando os efeitos fora do alvo de certos antibióticos bacteriostáticos ou inibidores de OXPHOS fornece evidências adicionais de que as mitocôndrias funcionais são necessárias para a propagação de células-tronco de câncer. Os inventores mostraram recentemente que um corante fluorescente mitocondrial (MitoTracker) pode ser usado de modo efetivo para o enriquecimento e purificação de células-tronco de câncer de uma população heterogênea de células vivas. Farnie et al., Oncotarget, 6:30272-30486 (2015). As células cancerígenas com a maior massa mitocondrial tiveram a capacidade funcional mais forte para sofrer crescimento independente de ancoragem, uma característica normalmente associada ao potencial metastático. A subpopulação de células ‘Mito- high’ também teve a maior atividade de iniciação tumoral in vivo, conforme mostrado usando modelos pré-clínicos. Os inventores também demonstraram que várias classes de antibióticos não tóxicos podem ser usadas para interromper a propagação de células-tronco de câncer (CSC). Lamb et al., Oncotarget, 6:4569-4584 (2015). Por causa das semelhanças evolutivas conservadas entre bactérias aeróbias e mitocôndrias, certas classes de antibióticos ou compostos que têm atividade antibiótica podem inibir a tradução da proteína mitocondrial como um efeito colateral fora do alvo. A medicina contemporânea geralmente vê os efeitos colaterais antimitocondriais como indesejáveis e, muitas vezes, essas consequências fora do alvo resultam no uso de um medicamento diferente.
SUMÁRIO
[0005] Em vista dos antecedentes acima, é um objetivo da presente abordagem fornecer composições e métodos para erradicar CSCs por meio da inibição da biogênese mitocondrial durante o estresse oxidativo mitocondrial induzido. Modalidades da presente abordagem induzem uma catástrofe mitocondrial em CSCs, como será descrito abaixo. De acordo com algumas modalidades da presente abordagem, um primeiro antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande e um segundo antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno podem ser administrados com um pró-oxidante ou um agente indutor de estresse oxidativo mitocondrial. Em algumas modalidades, um ou mais antibióticos aprovados pela FDA podem ser usados em conexão com um ou mais suplementos dietéticos comuns. O pró-oxidante pode ser, em algumas modalidades, um agente terapêutico que tem um efeito pró-oxidante. Por exemplo, o pró-oxidante pode ser um agente terapêutico em uma concentração que faz com que o agente terapêutico atue como um agente de redução. Em algumas modalidades, um ou mais agentes terapêuticos podem ser conjugados com um sinal de alvejamento. As modalidades da presente abordagem podem ser usadas para um ou mais dentre o tratamento e/ou prevenção de câncer, recorrência de tumor, metástase, quimioterapia ou resistência a fármacos, resistência à radioterapia e caquexia, devido ao câncer ou outras causas, entre outras terapias benéficas.
[0006] Em uma modalidade demonstrativa, a combinação de doxiciclina, azitromicina e vitamina C tem como alvo eficaz a mitocôndria e inibe potentemente a propagação de CSC. As células-tronco de câncer são metabolicamente hiperativas em relação às células normais, pelo menos em parte devido à elevada quantidade de mitocôndrias nas células-tronco cancerígenas e, portanto, esta abordagem tem como alvo seletivo a população de CSC. A azitromicina inibe o ribossomo mitocondrial grande como um efeito colateral fora do alvo. Além disso, a doxiciclina inibe o ribossomo mitocondrial pequeno como um efeito colateral fora do alvo. A vitamina C atua como um pró-oxidante leve, que pode produzir radicais livres e, como consequência, induz a biogênese mitocondrial. Notavelmente, o tratamento com uma combinação de doxiciclina (1 M), azitromicina (1 M) mais vitamina C (250 M) de acordo com uma modalidade da presente abordagem inibiu de modo muito potente a propagação de CSC em ~ 90%, usando a linhagem celular de câncer de mama MCF7 ER (+) como um sistema modelo. Os fortes efeitos inibitórios desta terapia de combinação tripla sobre o consumo de oxigênio mitocondrial e a produção de ATP foram validados diretamente por meio de análise de fluxo metabólico. Portanto, a indução de estresse oxidativo mitocondrial leve, juntamente com a inibição da biogênese mitocondrial, representa uma estratégia terapêutica anticâncer eficaz. Consistente com essas afirmações, a vitamina C é conhecida por ser altamente concentrada nas mitocôndrias, por meio de um transportador específico, a saber, SCVCT2, de modo acoplado ao sódio.
[0007] As composições de acordo com uma modalidade da presente abordagem inibiram a propagação de CSC em ~ 90% em linhagens celulares MCF7 ER (+) durante estudos preliminares, com redução confirmada no consumo de oxigênio mitocondrial e produção de ATP. Adicionalmente, algumas modalidades podem usar concentrações de antibióticos sub-antimicrobiais, minimizando ou evitando as preocupações com a resistência aos antibióticos - um benefício significativo para a comunidade médica.
[0008] A presente abordagem pode, em algumas modalidades, assumir a forma de uma composição com (i) um membro da família da eritromicina, (ii) um membro da família da tetraciclina e (iii) um pró-oxidante. Em algumas das modalidades discutidas abaixo, a composição incluiu azitromicina, doxiciclina e vitamina C, como os agentes terapêuticos. A azitromicina é um antibiótico amplamente usado e tem um efeito colateral frequentemente indesejado de inibir o ribossomo mitocondrial grande. A doxiciclina inibe o ribossomo mitocondrial pequeno, também um efeito colateral indesejado. Esses efeitos fora do alvo frequentemente fazem com que os médicos selecionem outros medicamentos para várias indicações. A presente abordagem, no entanto, faz uso vantajoso de tais efeitos de inibição mitocondrial fora do alvo, para direcionar e erradicar as CSCs seletivamente. A vitamina C atua como um pró-oxidante moderado em certas situações e, como pró- oxidante, induz estresse oxidativo mitocondrial nas CSCs por meio da produção de radicais livres e espécies reativas de oxigênio. (Deve-se notar que outros derivados do ascorbato podem ter efeitos pró-oxidantes semelhantes, particularmente em baixas concentrações.) As CSCs respondem ao estresse oxidativo mitocondrial por meio da biogênese mitocondrial. No entanto, na presença de inibidores da biogênese mitocondrial, como azitromicina e doxiciclina, as CSCs são incapazes de se adaptar e sobreviver ao estresse oxidativo mitocondrial induzido. A presente abordagem é seletiva, tendo como alvo as CSCs, enquanto tem pouco ou nenhum impacto nas células normais e saudáveis.
[0009] Em uma modalidade exemplificativa, o tratamento com uma combinação de doxiciclina (a 1 M), azitromicina (a 1 M) e Vitamina C (a 250 M) inibiu a propagação de CSC em células de câncer de mama MCF7 ER (+) em ~ 90%. Os fortes efeitos inibitórios desta terapia de combinação tripla no consumo de oxigênio mitocondrial e na produção de ATP foram diretamente validados usando a análise do fluxo metabólico. A indução de estresse oxidativo mitocondrial leve, juntamente com uma inibição da biogênese mitocondrial, como aqui descrito, representa uma potente terapia anticâncer. Além disso, as concentrações de antibióticos sub-antimicrobiais usadas nos exemplos aqui discutidos podem levantar poucas, se é que existam, preocupações relacionadas com o desenvolvimento de resistência a antibióticos. Portanto, em algumas modalidades, um primeiro antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande e/ou um segundo antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno pode ser administrado em concentrações sub- antimicrobiais. Por exemplo, uma dose sub-antimicrobial comum de doxiciclina é de 20 mg, o que pode ser adequado em algumas modalidades da presente abordagem. Como outro exemplo, uma quantidade de doxiciclina suficiente para gerar um pico de concentração de doxiciclina de cerca de 1 µM em pelo menos um dentre sangue, soro e plasma pode ser suficiente em algumas modalidades. Como outro exemplo, uma dose sub-antimicrobial oral comum de azitromicina é 250 mg, o que pode ser adequado em algumas modalidades da presente abordagem. Ainda como outro exemplo, uma quantidade de azitromicina suficiente para gerar um pico de concentração de azitromicina de cerca de 1 µM em pelo menos um dentre sangue, soro e plasma pode ser suficiente em algumas modalidades. Deve ser observado que a otimização pode exigir mais refinamento para uma modalidade particular, mas que tal refinamento está dentro do nível de habilidade comum na técnica.
[0010] Os antibióticos aprovados pela FDA e, em particular, os membros da família das tetraciclinas, como a doxiciclina, e os membros da família da eritromicina, como a azitromicina, têm efeitos fora do alvo de inibição da biogênese mitocondrial. Frequentemente consideradas efeitos colaterais, tais propriedades antimitocondriais são vistas como indesejáveis na técnica e podem ser a base para evitar o uso de um determinado medicamento na medicina contemporânea. No entanto, esses compostos têm eficácia para erradicar CSCs. Quando usados isoladamente, no entanto, os antibióticos com propriedades antimitocondriais não garantem a erradicação de todas as CSCs. As combinações de um ou mais agentes terapêuticos que têm como alvo o ribossomo mitocondrial grande com um ou mais agentes terapêuticos que têm como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno são mais eficazes, como demonstrado aqui. Pode haver, no entanto, uma mudança metabólica nas subpopulações de CSC após a exposição a inibidores da biogênese mitocondrial, a partir do metabolismo oxidativo para o metabolismo glicolítico, resultando em inflexibilidade metabólica. Os compostos pró-oxidantes, por outro lado, induzem o estresse oxidativo mitocondrial que desloca as CSCs em direção à biogênese mitocondrial. A abordagem dupla de induzir o estresse oxidativo mitocondrial enquanto inibe a biogênese mitocondrial deixa as CSCs sem mecanismos alternativos de sobrevivência. Como resultado, a combinação tripla de um agente terapêutico que tem como alvo o ribossomo mitocondrial grande, com um agente terapêutico que tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno e um pró-oxidante, permite uma estratégia anticâncer altamente potente. Em algumas modalidades preferenciais, a combinação tripla inclui um primeiro antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande e um segundo antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno e um pró-oxidante. Em algumas modalidades preferenciais, a combinação tripla inclui pelo menos um dentre antibiótico da família das tetraciclinas, pelo menos um antibiótico da família da eritromicina e Vitamina C. Vantajosamente, algumas modalidades da presente abordagem exigem concentrações de antibióticos em doses sub-antimicrobiais. Por exemplo, a doxiciclina e a azitromicina podem ser administradas em doses sub-antimicrobiais, conforme conhecido na técnica para uma dada forma de dosagem, tal como de modo oral em 20 mg para doxiciclina, e de modo oral em 250 mg para azitromicina. Como outro exemplo, doxiciclina e azitromicina podem ser administradas o suficiente para causar um pico de concentração de doxiciclina de cerca de 0,05 µM até cerca de 5 µM em algumas modalidades e 0,5 µM até cerca de 2,5 µM em algumas modalidades e cerca de 1 µM em algumas modalidades, em pelo menos um de sangue, soro e plasma. Avaliações adicionais de dosagem adequada para várias modalidades estão em andamento e deve ser observado que outras quantidades e concentrações podem ser usadas sem se afastar da presente abordagem.
[0011] São descritos no presente documento exemplos de compostos e métodos para o tratamento do câncer, entre vários outros usos terapêuticos benéficos. A presente abordagem pode ser usada como uma terapia anticâncer e pode ser usada em conexão com outras terapias anticâncer, como quimioterapia e/ou radioterapia. Por exemplo, a presente abordagem pode ser usada antes, durante e/ou após a remoção cirúrgica do tumor, para prevenir ou reduzir a probabilidade de metástase. Como outro exemplo, a presente abordagem pode ser usada antes, durante ou após a quimioterapia, para aumentar a probabilidade de sucesso. Como outro exemplo, a presente abordagem pode ser usada em uma base recorrente (por exemplo, anualmente), para prevenir e/ou reduzir a probabilidade de recorrência e/ou metástase. Ao contrário de muitas modalidades modernas da presente abordagem, elas podem ser usadas para alvejar as células-tronco de câncer, abordando assim diretamente o potencial de recorrência tumoral, metástase, resistência a fármacos e/ou resistência à radioterapia. Por exemplo, o fenótipo da célula cancerígena alvo pode ser pelo menos um dentre um CSC, uma célula-tronco de câncer energética (eCSC), uma célula tumoral circulante (CTC) e uma célula cancerígena resistente à terapia (TRCC).
[0012] Adicionalmente, as propriedades antimitocondriais de um antibiótico podem ser intensificadas pela modificação química do antibiótico com um ou mais sinais de alvejamento de membrana e/ou sinais de alvejamento de mitocôndria. Por exemplo, os sinais de alvejamento de ácido graxo podem ser conjugados com um antibiótico e resultar em um composto com eficácia melhorada sob a presente abordagem. Um agente terapêutico pode ser conjugado com um cátion lipofílico, tal como uma fração TPP, e ter uma captação mitocondrial melhorada e atividade de inibição de CSC. As modalidades de conjugados de doxiciclina- miristato, por exemplo, mostram melhores propriedades inibidoras de CSC e menos toxicidade do que a doxiciclina. Resultados semelhantes foram obtidos com outros membros da família da tetraciclina e eritromicina conjugados com um ácido graxo e também conjugados com TPP. Exemplos demonstrativos são discutidos abaixo. Consultar, para exemplos adicionais, as abordagens divulgadas no Pedido de Patente Internacional PCT/US2018/033466, depositado em 18 de maio de 2018, no Pedido de Patente Internacional PCT/US2018/062174, depositado em 21 de novembro de 2018, e no Pedido de Patente Internacional PCT/US2018/062956, depositado em 29 de novembro de 2019, cada um dos quais é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. A adição de um ou mais sinais de alvejamento a um agente terapêutico pode aumentar significativamente a eficácia desse agente, em alguns casos em mais de 100 vezes no organelo alvo. Portanto, algumas modalidades da presente abordagem podem ter um ou mais agentes terapêuticos quimicamente modificados com um sinal de alvejamento. Tal modificação pode permitir concentrações ou doses menores, outro benefício vantajoso da presente abordagem.
[0013] Exemplos de sinais de alvejamento de membrana incluem ácidos graxos, como ácido palmítico, ácido esteárico, ácido mirístico, ácido oleico, ácidos graxos de cadeia curta (ou seja, que têm 5 ou menos átomos de carbono na estrutura química), ácidos graxos de cadeia média (que têm 6 -12 átomos de carbono na estrutura química) e outros ácidos graxos de cadeia longa (ou seja, que têm 13-21 átomos de carbono na estrutura química). Esta revelação pode se referir indistintamente a esses sinais de alvejamento como suas formas de sal ou éster (por exemplo, ácido mirístico, miristato, tetradecanoato) e deve ser observado que o carboacil do ácido graxo pode ser ligado por uma ligação amida ao agente terapêutico. Por exemplo, o processo de miristoilação conhecido na técnica para formar proteínas miristoiladas pode ser usado para formar um agente terapêutico de acordo com a presente abordagem. Exemplos de sinais de alvejamento de mitocôndrias incluem cátions lipofílicos, tais como trifenil-fosfônio (TPP), derivados de TPP, guanidínio, derivados de guanidínio e laranja 10-N-nonil acridina. Um braço espaçador de carbono e/ou grupo de ligação pode ser usado para amarrar o sinal de alvejamento de mitocôndria ao agente terapêutico. Deve ser observado que estes exemplos não têm a intenção de serem exaustivos.
[0014] A presente revelação pode assumir a forma de uma ou mais composições farmacêuticas. A composição pode ser para o tratamento e/ou prevenção de um ou mais dentre câncer, resistência a fármacos em células cancerígenas, resistência à quimioterapia em células cancerígenas, recorrência de tumor, metástase e resistência à radioterapia. As modalidades da presente abordagem podem ser utilizadas para a fabricação de composições farmacêuticas para um ou mais dentre o tratamento do câncer, prevenção do câncer, superação da resistência a fármacos ou tratamento no câncer e prevenção e/ou redução da probabilidade de recorrência e/ou metástase do tumor. Algumas modalidades podem ter uma ou mais dentre atividade antiviral, atividade antibacteriana, atividade antimicrobial, atividade fotossensibilizante e atividade radiossensibilizante. Algumas modalidades podem sensibilizar células cancerígenas para agentes quimioterápicos, sensibilizar células cancerígenas para substâncias naturais e/ou sensibilizar células cancerígenas para restrição calórica.
[0015] A presente abordagem também pode ser usada para tratar e/ou reduzir os efeitos do envelhecimento. As modalidades podem ser usadas para, como exemplo, melhorar a longevidade e a longevidade da saúde. A azitromicina é um fármaco antienvelhecimento que se comporta como um senolítico, que extermina e remove seletivamente os fibroblastos senescentes. Algumas modalidades podem ser usadas para alvejar vantajosamente e exterminar células senescentes em vez de células normais e saudáveis. Em algumas modalidades, a composição evita a aquisição de um fenótipo secretor associado a senescência. Em algumas modalidades, a composição facilita a reparação e regeneração de tecidos. Em algumas modalidades, a composição aumenta pelo menos um dentre o tempo de vida do organismo e o tempo de saúde.
[0016] Em algumas modalidades, a presente revelação refere-se a métodos de tratamento que compreendem a administração a um paciente em necessidade de uma quantidade farmaceuticamente eficaz de uma ou mais composições farmacêuticas e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o terceiro agente pode ser substituído por um agente quimioterápico ou radioterapia que conduz a produção de espécies reativas de oxigênio e/ou estresse oxidativo mitocondrial. Em tais modalidades, por exemplo, os inibidores mitocondriais podem ser usados em combinação com quimioterapia ou tratamento de radiação, para reduzir a incidência de recorrência do tumor, metástase e falha do tratamento, através de sua capacidade de inibir a biogênese mitocondrial e prevenir a propagação de CSC. Em algumas modalidades, por exemplo, a combinação de um primeiro antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande e um segundo antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno pode ser administrada em conjunto com a quimioterapia tradicional para reduzir ou prevenir a recorrência e/ou metástase. Como outro exemplo, a presente abordagem pode ser usada para erradicar toda a população de CSCs, eliminando assim a possibilidade de metástase e recorrência da população de CSC original.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0017] As Figuras 1A-1C resumem dados de formação de mamoesferas para concentrações e combinações variáveis de doxiciclina e azitromicina.
[0018] As Figuras 2A-2D resumem dados de perfil metabólico para células MCF7 pré-tratadas com doxiciclina, azitromicina, e a combinação de doxiciclina e azitromicina, em concentrações de 1 M.
[0019] As Figuras 3A-3D resumem a taxa de acidificação extracelular (ECAR), glicólise, reserva glicolítica e dados de capacidade de reserva glicolítica, respectivamente, para células MCF7 pré-tratadas com doxiciclina, azitromicina e a combinação de doxiciclina e azitromicina, em concentrações de 1 M.
[0020] A Figura 4A compara os dados de ECAR para a combinação de doxiciclina 1 M e azitromicina 1 M contra o controle, e a Figura 4B compara as razões de OCR e ECAR da combinação para o controle.
[0021] A Figura 5 resume os dados de toxicidade para células normais tratadas com doxiciclina, azitromicina e a combinação de doxiciclina e azitromicina.
[0022] As Figuras 6A e 6B resumem a formação de mamoesfera após tratamento simultâneo de acordo com várias modalidades da presente abordagem.
[0023] As Figuras 7A e 7B são perfis de Seahorse que mostram a inibição do metabolismo mitocondrial oxidativo (Figura 7A) e da função glicolítica (Figura 7B) por meio de uma modalidade da presente abordagem.
[0024] As Figuras 8A-8F mostram dados de perfil metabólico para células MCF7 pré-tratadas de acordo com uma modalidade da presente abordagem.
[0025] As Figuras 9A e 9B resumem perfis de Seahorse (dados de OCR e ECAR, respectivamente) para células MCF7 tratadas com 250 M de vitamina C, sozinha, em comparação com um controle.
[0026] As Figuras 10A-10F mostram dados de perfil metabólico para células MCF7 pré-tratadas com 250 M de vitamina C por três dias.
[0027] As Figuras 11A e 11B mostram perfis de Seahorse (dados OCR e ECAR, respectivamente) para vitamina C em baixa dose e uma combinação tripla de agentes terapêuticos de acordo com uma modalidade da presente abordagem.
[0028] As Figuras 12A-12F mostram dados de perfil metabólico lado a lado, comparando vitamina C em baixa dose com uma modalidade da combinação tripla de acordo com a presente abordagem.
[0029] A Figura 13 ilustra um mecanismo terapêutico de acordo com uma modalidade da presente abordagem.
[0030] A Figura 14 é um gráfico de barras que compara os resultados do ensaio da mamoesfera em células MCF7, para doxiciclina e um conjugado doxiciclina- ácido graxo.
[0031] A Figura 15 é um gráfico de linha que mostra os resultados do ensaio da mamoesfera ao longo de uma faixa de concentrações para doxiciclina e um conjugado de ácido graxo doxiciclina.
[0032] As Figuras 16A-16C são imagens que comparam a retenção celular de um agente terapêutico e um conjugado de sinal de alvejamento para um agente terapêutico não conjugado.
[0033] As Figuras 17A e 17B comparam dados de viabilidade celular para um agente terapêutico e conjugado de sinal de alvejamento para um agente terapêutico não conjugado, em células MCF7 e BJ, respectivamente.
[0034] A Figura 18 ilustra um kit antienvelhecimento de acordo com uma modalidade da presente abordagem.
DESCRIÇÃO
[0035] A descrição a seguir ilustra as modalidades da presente abordagem com detalhes suficientes para permitir a prática da presente abordagem. Embora a presente abordagem seja descrita com referência a essas modalidades específicas, deve ser observado que a presente abordagem pode ser realizada em diferentes formas, e esta descrição não deve ser interpretada como limitadora de quaisquer reivindicações anexas às modalidades específicas aqui estabelecidas. Em vez disso, essas modalidades são fornecidas de modo que esta divulgação seja minuciosa e completa e transmita totalmente o escopo da presente abordagem para aqueles versados na técnica.
[0036] Esta descrição usa vários termos que devem ser compreendidos por aqueles de habilidade comum de habilidade na técnica. Os esclarecimentos a seguir são feitos para evitar dúvidas. Conforme usado no presente documento, o termo derivado é uma porção química derivada ou sintetizada a partir de uma porção química referenciada. Conforme usado no presente documento, um conjugado é um composto formado pela união de dois ou mais compostos químicos. Por exemplo, um conjugado de doxiciclina e um ácido graxo resulta em um composto que tem uma fração doxiciclina e uma fração derivada do ácido graxo. Conforme usado no presente documento, um ácido graxo é um ácido carboxílico com uma cadeia alifática, que é saturada ou insaturada. Exemplos de ácidos graxos incluem ácidos graxos de cadeia curta (ou seja, que têm 5 ou menos átomos de carbono na estrutura química), ácidos graxos de cadeia média (que têm 6-12 átomos de carbono na estrutura química) e outros ácidos graxos de cadeia longa (ou seja, que têm 13-21 átomos de carbono na estrutura química). Exemplos de ácidos graxos saturados incluem ácido láurico (CH3(CH2)10COOH), ácido palmítico (CH3(CH2)14COOH), ácido esteárico (CH3(CH2)16COOH), e ácido mirístico (CH3(CH2)12COOH). O ácido oleico (CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH) é um exemplo de um ácido graxo insaturado de ocorrência natural. Também podem ser feitas referências ao sal ou éster de um ácido graxo, bem como à sua porção amida graxa. Por exemplo, o ácido mirístico pode ser referido como miristato e o ácido oleico pode ser referido como oleato. Uma porção química de ácido graxo também pode ser um carboacil do ácido graxo, por exemplo, um grupo formado pela perda de um grupo hidróxido de um ácido carboxílico. Em algumas modalidades, uma porção química de ácido graxo pode ser ligada a um agente terapêutico por meio de uma ligação amida. Por exemplo, um conjugado de ácido mirístico pode ter uma porção química de ácido graxo CH3(CH2)12CO-NH-, em que o nitrogênio terciário está ligado ao agente terapêutico: e n é um número inteiro de 1 até 20 e é preferencialmente de 10 até 20. Isso pode resultar quando a porção química de miristato é conjugada por meio de miristoilação, resultando em um grupo tetradecanamida (ou miristamida).
[0037] Diversos braços espaçadores químicos e grupos de ligação são conhecidos e estão disponíveis nas técnicas químicas. Conforme usado no presente documento, "braço espaçador" refere-se a uma porção química linear, ramificada e/ou cíclica que conecta um agente terapêutico em um dentro um grupo de ligação e uma porção química de sinal de alvejamento. Existem diversos braços espaçadores conhecidos na técnica e o uso do termo nesta divulgação é de preferência flexível, a menos que especificado de outra forma. Os braços espaçadores podem incluir C 1- C20 alquilas e alquenilas substituídas ou não substituídas. Os braços espaçadores demonstrativos incluem porções químicas selecionadas do grupo que consiste em - (CH2)m-, -(CH2)m-O-(CH2)m-, -(CH2)m-(NRaRb)-(CH2)m-, e combinações das mesmas. Ra e Rb em um dado braço espaçador pode ser independentemente hidrogênio, alquila, cicloalquila, arila, heterociclo, heteroarila ou uma combinação dos mesmos; ou um grupo protetor de nitrogênio. Em algumas modalidades, pelo menos um dentre Ra e Rb pode estar ausente. Em algumas versões, o braço espaçador pode incluir porções químicas como (-(CH2)2-O)m-(CH2)2-. O subscrito 'm' em qualquer braço espaçador é um número inteiro positivo de 1 até 20.
[0038] Conforme usado no presente documento, o termo "grupo de ligação" refere-se a uma porção química que compreende um grupo funcional capaz de reagir de modo covalente com (ou reagir com) um grupo funcional em outra porção química, incluindo um agente terapêutico, um braço espaçador e uma porção química de sinal de alvejamento. Grupos de ligação de exemplo incluem C1-C4 alcenos, -O-, - NRc-, -OC(O)-, -S-, -S(O)2-, -S(O)-, -C(O)NRc-, e -S(0)2NRc- substituídos ou não substituídos, em que c é um número inteiro de 1 até 3.
[0039] A mitocôndria é uma porta inexplorada para o tratamento de uma série de doenças, que vão desde câncer a infecções bacterianas e fúngicas e envelhecimento. Mitocôndrias funcionais são necessárias para a propagação de células-tronco de câncer. A inibição da biogênese mitocondrial e do metabolismo em células cancerígenas impede a propagação dessas células. Os inibidores mitocondriais, portanto, representam uma nova classe de terapêutica anticâncer.
[0040] Os inventores analisaram as propriedades fenotípicas das CSCs que poderiam ser alvejadas sobre uma ampla gama de tipos de câncer e identificaram uma dependência estrita das CSCs na biogênese mitocondrial para a expansão clonal e sobrevivência de uma CSC. Trabalhos anteriores dos inventores demonstraram que diferentes classes de antibióticos aprovados pela FDA, e em particular tetraciclinas, como doxiciclina e eritromicina, têm um efeito fora do alvo de inibição da biogênese mitocondrial. Como resultado, tais compostos têm eficácia para erradicar CSCs. Contudo, esses antibióticos comuns não foram projetados para atingir as mitocôndrias, deixando um espaço considerável para melhorar sua eficácia anticâncer. Similarmente, a medicina moderna considera esses efeitos indesejáveis. Sob a presente abordagem, os antibióticos existentes que têm propriedades antimitocondriais intrínsecas podem ser usados em conexão com um ou mais pró- oxidantes, para inibir a biogênese mitocondrial e o metabolismo em CSCs sob estresse oxidativo mitocondrial. Em algumas modalidades, um ou mais agentes terapêuticos podem ser quimicamente modificados com um sinal de alvejamento de membrana ou um sinal de alvejamento de mitocôndria para aumentar ainda mais a captação do agente terapêutico nas mitocôndrias de CSC. Sinais de alvejamento de mitocôndrias podem aumentar significativamente essa captação direcionada, muitas vezes por 100s das vezes, se não mais.
[0041] A doxiciclina impacta o crescimento do câncer por meio da inibição da propagação de CSC com um IC-50 entre 2 até 10 M. O teste do Antibiótico para Câncer de Mama (ABC) foi conduzido no Hospital da Universidade de Pisa. O teste ABC teve como objetivo avaliar as ações mecanísticas antiproliferativas e anti-CSC da doxiciclina em pacientes com câncer de mama em estágio inicial. O desfecho primário do teste ABC foi determinar se o tratamento pré- operatório de curto prazo (por exemplo, 2 semanas) com doxiciclina oral de pacientes com câncer de mama em estágio inicial de I até III resultou na inibição dos marcadores de proliferação tumoral, como determinado por uma redução no tumor Ki67 a partir da linha de base (pré-tratamento) até o pós-tratamento, no momento da excisão cirúrgica. Os desfechos secundários foram usados para determinar se o tratamento pré-operatório com doxiciclina nas mesmas pacientes com câncer de mama resultou na inibição da propagação de CSC e uma redução dos marcadores mitocondriais.
[0042] Um estudo piloto do teste ABC confirmou que o tratamento com doxiciclina diminui com sucesso a expressão dos marcadores de CSC em amostras de tumor de câncer de mama. As amostras tumorais pós-doxiciclina demonstraram uma redução estatisticamente significativa de 40% no marcador de potencial tronco
CD44, quando comparadas às amostras tumorais pré-doxiciclina. Os níveis de CD44 foram reduzidos entre 17,65% e 66,67%, em 8 de 9 pacientes tratados com doxiciclina. Em contraste, apenas um paciente apresentou aumento do CD44, de 15%. Isso representa uma taxa de resposta positiva de 90%. Resultados semelhantes também foram obtidos com ALDH1, outro marcador de potencial tronco, especialmente em pacientes HER2 (+). Em contraste, os marcadores de mitocôndria, proliferação, apoptose e neoangiogênese, foram todos semelhantes entre os dois grupos. Estes resultados sugerem que a doxiciclina pode erradicar seletivamente CSCs em pacientes com câncer de mama in vivo.
[0043] A presente abordagem expande o estudo ABC, através da amplificação do impacto da doxiciclina, com um segundo agente terapêutico de biogênese antimitocondrial que tem como alvo o ribossomo mitocondrial grande e um pró-oxidante que induz estresse oxidativo mitocondrial em CSCs. Modalidades da presente abordagem aumentam significativamente os efeitos inibitórios da propagação de CSC de antibióticos que inibem a biogênese mitocondrial, como a doxiciclina, por meio de uma terapia de combinação tripla com pelo menos um antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande, pelo menos um antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno, e pelo menos um pró-oxidante. Em modalidades demonstrativas discutidas abaixo, os agentes terapêuticos incluem azitromicina, doxiciclina e vitamina C. Deve ser observado que outros inibidores da biogênese mitocondrial e fontes de estresse oxidativo mitocondrial podem ser usados.
[0044] Os parágrafos a seguir discutem dados de laboratório e análises para modalidades selecionadas da presente abordagem. A doxiciclina e a azitromicina foram testadas sozinhas e em combinação em baixas concentrações para avaliar o efeito inibitório resultante na formação da mamoesfera. As Figuras 1A- 1C resumem os dados de formação da mamoesfera para concentrações e combinações variáveis. A Figura 1A mostra os resultados do ensaio de formação de mamoesfera para azitromicina, em concentrações de 0,1 M até 100 M. A Figura 1B compara os resultados do ensaio de formação de mamoesfera para concentrações comparáveis de azitromicina (“azi”) e doxiciclina (“dox”). A Figura 1C mostra os efeitos combinados de azitromicina e doxiciclina no ensaio de formação da mamoesfera. Como pode ser visto, a doxiciclina e a azitromicina sozinhas em baixas concentrações (0,1 M e 1 M) tiveram pouco ou nenhum efeito na inibição da formação da mamoesfera. Contudo, a Figura 1C mostra que a combinação de 1 M de doxiciclina e 1 M de azitromicina exerceu um efeito inibitório muito significativo na formação da mamoesfera.
[0045] A combinação de doxiciclina e azitromicina tem um aumento acentuado da eficácia na inibição da formação de mamoesfera, em relação a quando os medicamentos são usados isoladamente. Por exemplo, o IC-50 para a combinação é cerca de 50 vezes menor do que para a azitromicina sozinha e 2 até 5 vezes menor do que para doxiciclina sozinha. Estes resultados demonstram que uma combinação de doxiciclina e azitromicina tem mais eficácia terapêutica do que qualquer agente terapêutico usado sozinho.
[0046] Os efeitos inibitórios da combinação na formação da mamoesfera estão relacionados à função mitocondrial. O perfil metabólico de monocamadas de células MCF7 pré-tratadas com a combinação de 1 M de doxiciclina e 1 M de azitromicina, ou com as mesmos fármacos sozinhos, foi examinado por 3 dias para confirmar essa relação. As Figuras 2A-2D resumem os dados do perfil metabólico para células MCF7 pré-tratadas com doxiciclina, azitromicina e a combinação de doxiciclina e azitromicina, em concentrações de 1 M. A Figura 2A mostra a taxa de consumo de oxigênio ao longo do tempo e as Figuras 2B-2D mostram respiração basal, respiração máxima e produção de ATP, respectivamente. Curiosamente, as taxas do metabolismo mitocondrial oxidativo e da glicólise foram significativamente reduzidas pelo pré-tratamento de combinação, conforme avaliado usando o analisador Seahorse XFe96. Isso resultou em reduções significativas na respiração (basal e máxima), bem como na redução dos níveis de ATP. As Figuras 3A-3D resumem a taxa de acidificação extracelular (ECAR), glicólise, reserva glicolítica e dados de capacidade de reserva glicolítica, respectivamente, para células MCF7 pré- tratadas com doxiciclina, azitromicina e a combinação de doxiciclina e azitromicina, em concentrações de 1 M. Tanto a glicólise quanto a reserva glicolítica foram diminuídas por meio da combinação de doxiciclina e azitromicina. Esta redução é entendida como um efeito agudo do tratamento com inibidores da biogênese mitocondrial. Com o tempo, seria esperado que a população sobrevivente de CSC tivesse um perfil metabólico glicolítico. A Figura 4A compara o ECAR da combinação contra o controle, e a Figura 4B compara as razões de OCR e ECAR da combinação para o controle. Os dados nas Figuras 4A e 4B mostram que as células cancerígenas MCF7 mudaram de um perfil altamente energético para um estado metabolicamente quiescente após o tratamento de combinação.
[0047] Em relação à toxicidade, as modalidades da presente abordagem não são tóxicas em relação às células normais e saudáveis. A Figura 5 resume os dados de toxicidade demonstrativos, na forma da porcentagem de células vivas que permanecem em condições de crescimento independentes de ancoragem, em amostras tratadas com 1 M de doxiciclina, 1 M de azitromicina e a combinação de 1 M de doxiciclina e 1 M de azitromicina. Após o tratamento em monocamada tanto com doxiciclina sozinha, azitromicina sozinha ou quanto com a combinação, por 48 horas, a população de CSC foi enriquecida por semeadura em placas de baixa fixação. Nessas condições, a população não-CSC sofre anoikis (uma forma de apoptose induzida pela falta de ligação do substrato celular) e acredita-se que as CSCs sobrevivam. A fração de CSC sobrevivente foi então determinada por análise FACS. Resumidamente, 1 x 104 células da monocamada MCF7 foram tratadas com antibióticos ou veículo sozinho por 48h em placas de 6 poços. Em seguida, as células foram tripsinizadas e semeadas em placas de baixa fixação em meios de mamoesfera. Após 12h, as células MCF7 foram centrifugadas. As células foram enxaguadas duas vezes e incubadas com corante LIVE/DEAD (corante reativo Violeta Morto Fixável; Invitrogênio) durante 10 minutos. As amostras foram então analisadas por FACS (Fortessa, BD Bioscience). A população viva foi então identificada empregando o ensaio de coloração com corante LIVE/DEAD como é conhecido na técnica. Os dados foram analisados usando o software FlowJo. A Figura 5 mostra a morte celular mínima para os agentes terapêuticos testados. Como pode ser visto, a combinação de 1 M de doxiciclina com 1 M de azitromicina não é tóxica em condições de crescimento independentes de ancoragem. Tomados em conjunto,
os resultados experimentais mostram que a combinação de doxiciclina e azitromicina, particularmente em doses baixas, são mais eficazes do que a doxiciclina sozinha, para a erradicação de CSC.
[0048] A introdução de um pró-oxidante na combinação fornece um efeito anticâncer ainda mais forte para a combinação de doxiciclina e azitromicina. Uma variedade de resultados experimentais confirma que a combinação tripla de um primeiro antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande e um segundo antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno, e pró-oxidante, tem propriedades anticancerígenas potentes. A combinação de três agentes terapêuticos é significativamente mais eficaz do que qualquer um deles individualmente ou em pares, no que diz respeito à atividade anticâncer. Em exemplos demonstrativos, uma modalidade com uma combinação de doxiciclina, azitromicina e Vitamina C foi confirmada para inibir efetivamente a propagação de CSC. A Figura 6A resume a formação de mamoesfera em células MCF7 após o tratamento simultâneo com uma composição que tem 1 M de doxiciclina, 1 M de azitromicina e 250 M de Vitamina C. A Figura 6B compara a formação de mamoesfera em células MDA-MB-468 (uma linhagem de células de câncer de mama humana triplo-negativa) após tratamento simultâneo com, em um conjunto de dados, uma primeira composição que tem 5 M de doxiciclina, 5 M de azitromicina e 250 M de vitamina C e, em outro conjunto de dados, uma segunda composição que tem 10 M de doxiciclina, 10 M de azitromicina, e 250 M de vitamina C. Os dados demonstram que as modalidades de combinação tripla da presente abordagem inibiram a propagação de CSC em até ~ 90%, em comparação com o controle. Assim, a ablação quase completa das habilidades de formação de esferas tumorais 3D foi alcançada em concentrações de agentes terapêuticos muito baixas, demonstrando que as CSCs são vulneráveis às modalidades da presente abordagem. Deve ser observado que as concentrações de agentes terapêuticos aqui descritas são demonstrativas e que outras concentrações de agentes terapêuticos podem ser farmaceuticamente eficazes. Vantajosamente, as modalidades da presente abordagem permanecem eficazes mesmo em concentrações submicrobiais de antibióticos.
[0049] Dados adicionais confirmam os efeitos inibitórios da combinação tripla de um primeiro antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande e um segundo antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno e pró-oxidante na função mitocondrial do CSC. As Figuras 7A-7B e 8A-8F mostram perfis metabólicos, incluindo taxa de consumo de oxigênio ao longo do tempo, respiração basal, respiração máxima, produção de ATP e capacidade respiratória sobressalente, respectivamente, para monocamadas de células MCF7 pré-tratadas com uma combinação de 1 M de doxiciclina, 1 Azitromicina M e Vitamina C 250 M por 3 dias. As Figuras 7A e 7B são perfis de Seahorse que mostram a inibição do metabolismo mitocondrial oxidativo (Figura 7A) e da função glicolítica (Figura 7B) por meio de uma modalidade da presente abordagem. Como pode ser visto, a combinação tripla inibiu o metabolismo mitocondrial oxidativo (medido por OCR) e induziu a função glicolítica (medida por ECAR). As Figuras 8A-8F resumem os dados metabólicos para células MCF7 pré-tratadas com doxiciclina, azitromicina e a combinação de doxiciclina e azitromicina, em concentrações de 1 M e 250 M de vitamina C. As taxas de metabolismo mitocondrial oxidativo e glicólise foram significativamente reduzidas por meio do pré-tratamento de combinação, conforme avaliado usando o analisador Seahorse XFe96. Notavelmente, a taxa de metabolismo mitocondrial oxidativo foi reduzida em mais de 50% e os níveis de ATP foram drasticamente reduzidos, conforme avaliado usando o analisador Seahorse XFe96. De maneira geral, isso resultou em reduções significativas na respiração basal e máxima. Em contraste, a glicólise foi aumentada, mas a reserva glicolítica foi diminuída nas monocamadas de células pré-tratadas com a modalidade de combinação tripla testada.
[0050] A inclusão de um pró-oxidante tem um efeito valioso nas modalidades da presente abordagem. As Figuras 9A e 9B resumem dados de OCR e ECAR para células MCF7 tratadas com 250 M de vitamina C, sozinha, em comparação com um controle. Como visto nos dados, o tratamento com 250 M de vitamina C (sozinha) aumentou significativamente tanto o metabolismo mitocondrial quanto a glicólise em células cancerígenas MCF7. As Figuras 10A-10F mostram dados de perfil metabólico para células MCF7 pré-tratadas com 250 M de vitamina C por três dias. O tratamento com 250 M de vitamina C aumentou significativamente a respiração basal, a produção de ATP e a respiração máxima. O tratamento com 250 M de vitamina C aumentou significativamente a glicólise e as reservas glicolíticas, enquanto diminuiu a capacidade de reserva glicolítica. Estas observações indicam que a vitamina C sozinha atua como um pró-oxidante suave e, por meio do estresse oxidativo mitocondrial, o agente terapêutico estimula a biogênese mitocondrial em células cancerígenas, conduzindo o aumento do metabolismo mitocondrial (por exemplo, aumento da síntese de proteína mitocondrial e produção de ATP). A produção da proteína nuclear mitocondrial e da proteína codificada mt- DNA é aumentada na célula. Esta interpretação é consistente com os dados experimentais que mostram diretamente que modalidades que têm um ou mais antibióticos que inibem o ribossomo mitocondrial grande e um ou mais antibióticos que inibem o ribossomo mitocondrial pequeno, e um pró-oxidante, erradicam efetivamente as células cancerígenas. Em particular, os inibidores da biogênese mitocondrial previnem o aumento do metabolismo mitocondrial induzido pela vitamina C. A combinação inibe a síntese de proteínas codificadas pelo DNA mitocondrial (mt- DNA), levando à depleção de componentes proteicos essenciais para OXPHOS nas CSCs. Sem essas proteínas, o CSC experimenta biogênese mitocondrial anormal e depleção severa de ATP.
[0051] As Figuras 11A e 11B mostram perfis de Seahorse (dados OCR e ECAR, respectivamente) para vitamina C em baixa dose e uma combinação tripla de acordo com uma modalidade da presente abordagem. Essas comparações metabólicas lado a lado mostram que a vitamina C em baixa dosagem (por exemplo, suficiente para atingir um pico de concentração de vitamina C em pelo menos um dentre sangue, soro e plasma, de cerca de 500 M ou menos) aumenta o metabolismo mitocondrial oxidativo, enquanto a combinação tripla resultou em depleção severa de ATP. A vitamina C em baixas doses e a combinação tripla aumentaram a glicólise. As Figuras 12A-12F mostram os dados metabólicos para a comparação nas Figuras 11A e 11B. A vitamina C em baixas doses aumentou a respiração basal, a produção de ATP e a respiração máxima, enquanto a combinação tripla diminuiu todos esses três parâmetros. Também, a vitamina C em baixas doses e a combinação tripla aumentam a glicólise, enquanto diminuem a capacidade de reserva glicolítica. Esses resultados mostram que a inclusão de dois inibidores da biogênese mitocondrial, um que inibe o ribossomo mitocondrial grande e o outro que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno, com vitamina C, bloqueia e reverte o aumento induzido pela vitamina C no metabolismo oxidativo mitocondrial. A combinação de todos os três agentes terapêuticos resulta em uma atividade anticâncer significativamente melhorada. Em algumas modalidades da presente abordagem, a vitamina C (que inclui derivados de ascorbato que se comportam como agentes redutores) pode ser substituída por outro agente que induz estresse oxidativo mitocondrial, como certos quimioterápicos e tratamento de radiação.
[0052] Os efeitos temporais do pré-tratamento sobre a eficácia da presente abordagem foram avaliados no ambiente pré-clínico, usando a propagação de CSC como medida. Essas avaliações consideraram, em parte, a eficácia da coadministração simultânea de três agentes terapêuticos (por exemplo, um antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande, um antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno e, nesta modalidade, vitamina C), por meio de um ensaio de pré-tratamento antes de iniciar o ensaio de células-tronco da mamoesfera 3D. As células MCF7 foram cultivadas como culturas em monocamada e primeiro pré- tratadas com vitamina C sozinha ("Vit C," 250 M) ou doxiciclina e azitromicina ("D + A," 1 M cada), por um período de 7 dias. Em seguida, as células MCF7 foram colhidas com tripsina e plaqueadas novamente em condições de crescimento independentes de ancoragem, na presença de várias combinações de vitamina C, doxiciclina e azitromicina. A Tabela 1, abaixo, mostra que 7 dias de pré-tratamento com vitamina C sozinha ou a combinação de doxiciclina e azitromicina (D + A), renderam a administração subsequente da combinação tripla significativamente menos eficaz. Mecanicamente, parece que os pré-tratamentos pré-condicionaram efetivamente as células MCF7 aos efeitos da combinação tripla de doxiciclina, azitromicina e vitamina C. Isso pode ser devido à capacidade das células MCF7 de induzir o estresse oxidativo, conduzindo a uma resposta antioxidante. Dados esses resultados clínicos, as modalidades da presente abordagem que coadministram simultaneamente todos os três agentes terapêuticos parecem ter o impacto mais significativo na população de CSC e são preferenciais. Por exemplo, em uma modalidade, a coadministração simultânea de doxiciclina (1 M), azitromicina (1 M) e Vitamina C (250 M), será mais eficaz do que administrar sequencialmente os componentes. Contudo, algumas modalidades podem exigir a administração de agentes terapêuticos dentro de uma janela estreita, como 1-3 horas, ao longo de vários dias (por exemplo, 3-7 dias em algumas modalidades, 4-14 dias em algumas modalidades). Os antibióticos podem ser administrados na forma oral (por exemplo, pílula ou comprimido), enquanto a vitamina C é administrada por via intravenosa em algumas modalidades. Em outros, todos os três agentes terapêuticos podem ser administrados por via oral, seja como pílulas ou comprimidos separados, ou como uma única mistura que contém cada agente terapêutico.
Tratamento em monocamada Tratamento de MFE (% de inibição ± SD) (7 dias) suspensão (5 dias) Sem pré-tratamento D + A + Vitamina C 90,71% ± 4,30**** Vitamina C Vitamina C 49,25% ± 8,00** Vitamina C D+A 37,98% ± 5,68** Vitamina C D + A + Vitamina C 68,15% ± 7,72*** D+A D+A 40,64% ± 5,62** D+A Vitamina C 39,12% ± 4,73** D+A D + A + Vitamina C 64,25% ± 3,95*** TABELA 1 - EFEITOS TEMPORAIS DA ADMINISTRAÇÃO DE COMPONENTES DA PRESENTE ABORDAGEM. COMPONENTES ADMINISTRADOS INCLUEM DOXICICLINA (1 M), AZITROMICINA (1 M) E VITAMINA C (250 M). O SOBRESCRITO** INDICA P < 0,01, *** INDICA p < 0,001, e **** indica p < 0,0001.
[0053] Estes resultados demonstram que os efeitos inibitórios da doxiciclina na população de CSC podem ser potencializados pela combinação com outro antibiótico aprovado pelo FDA, a saber, azitromicina, e um suplemento dietético, Vitamina C (um pró-oxidante leve). Consequentemente, a presente abordagem fornece composições farmacêuticas que têm um ou mais antibióticos que inibem o ribossomo mitocondrial grande, um ou mais antibióticos que inibem o ribossomo mitocondrial pequeno e um ou mais pró-oxidantes. As modalidades podem incluir, por exemplo, azitromicina, doxiciclina e vitamina C. Testes clínicos futuros e avaliações adicionais estão planejados para gerar mais dados sobre a modalidade revelada e sugerida no presente documento.
[0054] Algumas modalidades podem assumir a forma de uma composição, como uma composição farmacêutica, que tem uma quantidade farmaceuticamente eficaz de cada agente terapêutico. A composição pode ser para o tratamento do câncer por meio da erradicação de células-tronco de câncer, incluindo, por exemplo, células-tronco de câncer energéticas, células tumorais circulantes e células cancerígenas resistentes à terapia. A composição pode ser para sensibilizar células-tronco de câncer para radioterapia, fototerapia e/ou quimioterapia. A composição pode ser para tratar e/ou prevenir a recorrência do tumor, metástase, resistência ao medicamento, resistência à radioterapia e caquexia. As modalidades da composição podem incluir como ingredientes ativos, um primeiro agente terapêutico que inibe a biogênese mitocondrial e alveja o ribossomo mitocondrial grande, um segundo agente terapêutico que inibe a biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno e um terceiro agente terapêutico que induz o estresse oxidativo mitocondrial. Por exemplo, em algumas modalidades, o primeiro agente terapêutico é azitromicina, o segundo agente terapêutico é doxiciclina e o terceiro agente terapêutico é Vitamina C (ou um derivado de ácido ascórbico). A concentração de pelo menos um dentre, e em algumas modalidades, o primeiro e o segundo agentes terapêuticos pode ser sub-antimicrobial. Por exemplo, em algumas modalidades, a concentração de azitromicina e doxiciclina é sub-antimicrobial. Em algumas modalidades, o terceiro agente terapêutico é a vitamina C em uma concentração suficiente para atingir um pico de concentração de vitamina C entre 100 µM e 250 µM em pelo menos um dentre sangue, soro e plasma.
[0055] Sob a presente abordagem, um ou mais antibióticos que inibem o ribossomo mitocondrial grande e um ou mais antibióticos que inibem o ribossomo mitocondrial pequeno podem ser usados. Os antibióticos da família da eritromicina (ou macrolídeo), incluindo eritromicina, azitromicina, roxitromicina, telitromicina e claritromicina, inibem o ribossomo mitocondrial grande. Outros agentes terapêuticos que inibem o ribossomo mitocondrial grande incluem outros membros da família macrolídeo, membros da família cetolídeo, membros da família anfenicol, membros da família lincosamida, membros da família pleuromutilina, bem como derivados desses compostos. Deve ser observado que um derivado pode incluir um ou mais sinais de alvejamento por membrana e/ou sinais de alvejamento mitocondrial, como discutido no presente documento. Os antibióticos da família das tetraciclinas, incluindo tetraciclina, doxiciclina, tigeciclina, eravaciclina e minociclina, inibem o ribossomo mitocondrial pequeno. Outros agentes terapêuticos que inibem o ribossomo mitocondrial pequeno incluem outros membros da família das tetraciclinas, membros da família das glicilciclinas, membros da família das fluorociclinas, membros da família dos aminoglicosídeos, membros da família das oxazolidinonas, bem como derivados destes compostos. Deve ser observado que um derivado pode incluir um ou mais sinais de alvejamento por membrana e/ou sinais de alvejamento mitocondrial. As modalidades preferenciais da presente abordagem incluem azitromicina e doxiciclina, embora deva ser observado que outros antibióticos possam ser usados. Adicionalmente, um ou mais dos antibióticos podem, em algumas modalidades, ser quimicamente modificados com pelo menos um sinal de alvejamento de membrana e/ou sinal de alvejamento de mitocôndria, conforme discutido abaixo.
[0056] Conforme discutido acima, as modalidades da presente abordagem podem incluir um ou mais pró-oxidantes. Um pró-oxidante é um composto que induz estresse oxidativo em um organismo, por meio da inibição de sistemas antioxidantes e/ou geração de espécies reativas de oxigênio. O estresse oxidativo mitocondrial pode danificar as células e, nas CSCs, causar uma mudança em direção à biogênese mitocondrial. Algumas vitaminas são pró-oxidantes quando operam como agentes redutores.
A vitamina C, por exemplo, é um antioxidante potente que evita o dano oxidativo aos lipídios e outras macromoléculas, mas se comporta como um pró-oxidante em várias condições.
Por exemplo, a vitamina C em uma concentração baixa (por exemplo, em uma composição farmacêutica para administração oral, a vitamina C pode ser administrada em uma quantidade ou concentração suficiente para atingir o pico de concentração de vitamina C em pelo menos um dentre sangue, soro e plasma, de cerca de 500 M até cerca de 100 M, e em algumas modalidades cerca de 400 M até cerca de 150 M; e em algumas modalidades cerca de 300 M até cerca de 200 M, e em algumas modalidades, cerca de 250 M) e na presença de íons metálicos, induz estresse oxidativo mitocondrial.
Entende-se que o pico da concentração de vitamina C no sangue/soro/plasma por meio da administração oral é de cerca de 250 µM, enquanto o pico da concentração pode ser significativamente maior por meio da administração intravenosa.
Assim, como outro exemplo da presente abordagem, algumas modalidades nas quais a vitamina C é administrada por via oral podem usar vitamina C suficiente para atingir uma concentração de vitamina C no sangue, soro e/ou plasma, de cerca de 100 M até cerca de 250 M.
Neste contexto, o termo "cerca de" deve ser entendido como uma aproximação de ± 10 µM, mas pode depender da exatidão e precisão do método usado para medir a concentração de sangue, soro e/ou plasma.
Algumas modalidades podem incluir vitamina C suficiente para atingir uma concentração de vitamina C no sangue, soro e/ou plasma de 100 M até 250 M.
Deve ser observado que a dose adequada de Vitamina C pode depender dos outros componentes usados na presente abordagem e, portanto, aquele versado na técnica pode avaliar a dose apropriada para uma determinada modalidade, usando métodos conhecidos na técnica.
Adicionalmente à vitamina C, vários derivados do ascorbato podem ter comportamentos pró-oxidantes em certas condições.
Por exemplo, o ascorbato pode reduzir os íons metálicos e gerar radicais livres por meio da reação de Fenton.
O radical ascorbato é normalmente muito estável, mas se torna mais reativo especialmente na presença de íons metálicos, incluindo ferro (Fe), permitindo que o radical ascorbato se torne um pró-oxidante muito mais poderoso.
Como as mitocôndrias são particularmente ricas em ferro, elas podem se tornar um alvo chave dos efeitos pró-oxidantes da vitamina C. A vitamina C está altamente concentrada dentro da mitocôndria. Por exemplo, quando as células U937 (uma linha de células de leucemia humana) foram incubadas por apenas 15 minutos em meio contendo 3 M de vitamina C, ela foi transportada de forma eficiente para a mitocôndria, atingindo um nível de 5 mM (representando um aumento de aproximadamente 1.700 vezes em relação à dose). O transporte mitocondrial de vitamina C é realizado pelo transportador de vitamina C acoplado ao sódio 2 (SCVCT2), também conhecido como SLC23A2, embora outros novos transportadores mitocondriais tenham sido sugeridos.
[0057] Outros terapêuticos pró-oxidantes podem ser usados, em conexão com ou como uma alternativa à vitamina C. Como muitos agentes quimioterápicos atuais, bem como a radiação direcionada, todos matam as células cancerígenas, por meio de suas ações pró-oxidantes e, em seguida, inibição combinada da biogênese mitocondrial pode ser usada como um complemento à terapia convencional e pode-se prever que melhore sua eficácia. Existem outros agentes terapêuticos que se comportam como pró-oxidantes nas células cancerígenas, gerando espécies reativas de oxigênio. Existem 9 classes de quimioterápicos associados ao estresse oxidativo: antraciclinas, complexos de platina/paládio, agentes alquilantes, epipodofilotoxinas, camptotecinas, análogos de purina/pirimindina, antimetabolitos, taxanos e alcaloides de vinca. Por exemplo, a terapêutica anticâncer adriamicina (e outras antraciclinas), bleomicina e cisplatina demonstraram toxicidade específica para células cancerígenas. Portanto, em algumas modalidades, um agente é usado para induzir o estresse oxidativo mitocondrial, em combinação com um antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande e um antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno. Investigações adicionais estão planejadas para identificar agentes terapêuticos adicionais com efeitos pró-oxidantes, bem como o momento de administração do agente alternativo que induz estresse oxidativo mitocondrial. Contudo, a vitamina C claramente tem menos efeitos colaterais e geralmente tem um perfil de segurança melhor do que os agentes quimioterápicos. Deve ser observado que os agentes pró-oxidantes podem ser usados sem se afastar da presente abordagem.
[0058] As CSCs têm uma massa mitocondrial significativamente aumentada, o que contribui para sua capacidade de sofrer crescimento independente de ancoragem. Desse modo, o uso de inibidores da biogênese mitocondrial, junto com a vitamina C, poderia, em última análise, prevenir que as mitocôndrias de CSC se recuperassem totalmente dos efeitos pró-oxidantes da vitamina C, pois essas células-alvo seriam incapazes de ressintetizar novas mitocôndrias. Em condições metabolicamente restritas, as células cancerígenas sofreriam biogênese mitocondrial "frustrada" ou "incompleta". Esta afirmação é diretamente suportada pelos dados de análise de fluxo Seahorse mostrados nas Figuras 11A, 11B e 12A-12F, revelando i) metabolismo mitocondrial reduzido, ii) função glicolítica compensatória aumentada e iii) depleção grave de ATP. Estudos anteriores demonstraram que a vitamina C sozinha aumenta a produção de ATP mitocondrial em até 1,5 vezes, no coração de rato, em condições de hipóxia. Adicionalmente, a vitamina C é um regulador positivo da biossíntese de L-carnitina endógena, um micronutriente essencial necessário para a beta-oxidação mitocondrial. Como tal, essas descobertas são consistentes com os resultados atuais que mostram que a vitamina C sozinha é de fato suficiente para aumentar a produção de ATP mitocondrial, em até 2 vezes, em células MCF7.
[0059] A Figura 13 ilustra o mecanismo terapêutico de acordo com uma modalidade da presente abordagem. Este processo pode ser usado para, como exemplos, erradicar CSCs em uma amostra ou organismo, terapia anticâncer, prevenir e/ou eliminar recorrência e metástase, tratar a senescência e erradicar células senescentes em uma amostra ou organismo. Sob esse mecanismo, a vitamina C está presente em condições que promovem o comportamento pró- oxidante S1301. A concentração de vitamina C administrada pode ser considerada uma dose relativamente baixa. Por exemplo, vitamina C oral suficiente para atingir um nível de sangue/plasma/soro entre 100 µM e 250 µM pode ser apropriada. As mitocôndrias são ricas em ferro e as CSCs têm uma alta concentração de mitocôndrias. Devido ao alto teor de ferro, a vitamina C como pró-oxidante induz estresse oxidativo mitocondrial nas CSCs 1303, gerando radicais ascorbato reativos.
Em resposta ao estresse oxidativo mitocondrial, as CSCs mudam em direção à biogênese mitocondrial 1305. Contudo, a presença de um antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande e um antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno 1307, como a azitromicina e doxiciclina, previne que as CSCs tenham biogênese mitocondrial suficiente para se recuperar do estresse oxidativo mitocondrial. Isso resulta em uma catástrofe mitocondrial em CSCs 1309. As CSCs, então, experimentam depleção de ATP 1311 e, finalmente, morrem (por exemplo, por apoptose) 1313.
[0060] Os terapêuticos em uma modalidade da presente abordagem podem ser usados na forma de composições farmacêuticas usuais que podem ser preparadas usando um ou mais métodos conhecidos. Por exemplo, uma composição farmacêutica pode ser preparada usando diluentes ou excipientes, tais como, por exemplo, um ou mais preenchedores, agentes de massa, ligantes, agentes umectantes, agentes desintegrantes, agentes tensoativos, lubrificantes e semelhantes, como são conhecidos na técnica. Vários tipos de formas de unidade de administração podem ser selecionados dependendo do propósito terapêutico (ou propósitos terapêuticos). Exemplos de formas para composições farmacêuticas incluem, mas não se limitam a comprimidos, pílulas, pós, líquidos, suspensões, emulsões, grânulos, cápsulas, supositórios, preparações de injeção (soluções e suspensões), cremes tópicos, nanopartículas, formulações lipossomais, e outras formas como podem ser conhecidas na técnica. Em algumas modalidades, os agentes terapêuticos podem ser encapsulados juntos. Como exemplos adicionais, doses na forma de nanopartículas ou nano-carreadores podem ser usadas sob a presente abordagem, tais como lipossomas contendo ácidos graxos, colesterol, fosfolipídios (por exemplo, fosfatidilil-serina, fosfatidil-colina), sílica mesoporosa, e nanomontagens de heliceno-esqualeno. Com o propósito de moldar uma composição farmacêutica na forma de comprimidos, quaisquer excipientes que são conhecidos podem ser usados, por exemplo, carreadores como lactose, açúcar branco, cloreto de sódio, glicose, ureia, amido, carbonato de cálcio, caulino, ciclodextrinas, cristal celulose, ácido silícico e semelhantes; ligantes como água, etanol, propanol, xarope simples, soluções de glicose, soluções de amido, soluções de gelatina,
carboximetilcelulose, shelac, metilcelulose, fosfato de potássio, polivinilpirrolidona, etc. Adicionalmente, agentes desintegrantes, tais como amido seco, alginato de sódio, pó de ágar, pó de laminália, hidrogenocarbonato de sódio, carbonato de cálcio, ésteres de ácidos graxos de polioxietileno sorbitano, laurilsulfato de sódio, monoglicerídeo de ácido esteárico, amido, lactose, etc, podem ser usados. Inibidores de desintegração, tais como açúcar branco, estearina, manteiga de coco, óleos hidrogenados; aceleradores de absorção, tais como base de amônio quaternário, laurilsulfato de sódio, etc, podem ser usados. Podem ser usados agentes molhantes, tais como glicerina, amido e outros conhecidos na técnica. Podem ser usados agentes adsorventes, tais como, por exemplo, amido, lactose, caulino, bentonita, ácido silícico coloidal, etc. Podem ser usados lubrificantes, tais como talco purificado, estearatos, ácido bórico em pó, polietilenoglicol, etc. Se os comprimidos forem desejados, eles podem ser ainda revestidos com os materiais de revestimento usuais para fazer os comprimidos como comprimidos revestidos de açúcar, comprimidos revestidos de filme de gelatina, comprimidos revestidos com revestimentos entéricos, comprimidos revestidos com filmes, comprimidos de camada dupla e comprimidos de múltiplas camadas. As composições farmacêuticas adaptadas para administração tópica podem ser formuladas como pomadas, cremes, suspensões, loções, pós, soluções, pastas, géis, espumas, sprays, aerossóis ou óleos. Tais composições farmacêuticas podem incluir aditivos convencionais que incluem, mas não se limitam a conservantes, solventes para auxiliar a penetração do fármaco, cossolventes, emolientes, propelentes, agentes modificadores de viscosidade (agentes gelificantes), surfactantes e transportadores. Deve ser observado que a vitamina C, ou outro composto de ascorbato, pode ser administrada através de soluções administradas diretamente na circulação venosa por meio de uma seringa ou cateter intravenoso, como é conhecido na técnica.
[0061] A presente abordagem pode ser usada para tratar e/ou prevenir a recorrência do tumor, metástase, resistência ao medicamento, caquexia e/ou resistência à radioterapia. Os tratamentos anticâncer frequentemente falham porque o tumor reaparece ou entra em metástase, principalmente após a cirurgia. Além disso, a resistência aos medicamentos e a resistência à radioterapia são razões comuns para o insucesso do tratamento do câncer. Acredita-se que a atividade mitocondrial da CSC possa ser, pelo menos em parte, a responsável por essas causas de falha no tratamento. As modalidades da presente abordagem podem ser usadas em situações em que as terapias convencionais de câncer falham e/ou em conjunto com tratamentos anticâncer para prevenir a falha devido à recorrência do tumor, metástase, resistência à quimioterapia, resistência a fármacos e/ou resistência à radioterapia.
[0062] Conforme mencionado, modalidades da presente abordagem também podem ser usadas para prevenir, tratar e/ou reverter a resistência aos medicamentos em células cancerígenas. Acredita-se que a resistência aos medicamentos seja baseada, pelo menos em parte, no aumento da função mitocondrial nas células cancerígenas. Em particular, é esperado que as células cancerígenas que demonstram resistência às terapias endócrinas, como o tamoxifeno, tenham uma função mitocondrial aumentada. As modalidades da presente abordagem inibem a função mitocondrial e, portanto, são úteis na redução e, em alguns casos, na reversão da resistência a fármacos em células cancerígenas. Assim, nos casos em que a resistência ao medicamento é indicada, modalidades da presente abordagem podem ser administradas. Uma composição farmacêutica conforme discutida no presente documento pode ser administrada antes e/ou em conjunto com e/ou após um tratamento de quimioterapia convencional. Além disso, os inibidores da função mitocondrial que têm como alvo o ribossomo mitocondrial também podem ter como alvo bactérias e leveduras patogênicas, células senescentes alvo (e, assim, fornecer benefícios antienvelhecimento), funcionam como radiossensibilizadores e/ou fotossensibilizadores, sensibilizam células cancerígenas em massa e células-tronco de câncer para agentes quimioterápicos, produtos farmacêuticos e/ou outras substâncias naturais, como suplementos dietéticos e restrição calórica.
[0063] Em relação aos benefícios antienvelhecimento, as células senescentes são tóxicas para o ecossistema saudável normal do corpo. A presente abordagem pode, em algumas modalidades, exterminar seletivamente as células senescentes enquanto poupa as células do tecido normal. A exterminação seletiva das células senescentes pode: 1) prevenir a inflamação associada ao envelhecimento, por meio da prevenção da aquisição de um fenótipo secretor associado a senescência (SASP), que transforma fibroblastos senescentes em células pró-inflamatórias que têm a capacidade de promover a progressão do tumor; 2) facilitar a reparação e regeneração dos tecidos; e/ou 3) aumentar a longevidade do organismo e a longevidade da saúde. As modalidades também podem ser usadas para exterminar seletivamente células cancerígenas senescentes que sofrem senescência induzida por oncogene devido ao início do estresse oncogênico.
[0064] Algumas modalidades podem assumir a forma de um kit anticâncer. O kit anticâncer pode conter um ou mais componentes de acordo com a presente abordagem. Por exemplo, um kit anticâncer pode conter um primeiro antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande, um segundo antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno e um pró-oxidante ou um agente que induz o estresse oxidativo mitocondrial. O kit anticâncer pode conter doses suficientes de cada componente para um período de tratamento específico ou um tempo predeterminado, como uma semana ou um mês. A Figura 18 mostra um exemplo de kit anticâncer 1401 de acordo com uma modalidade. Nesta modalidade, o kit anticâncer 1801 inclui uma semana de doses; 2 comprimidos de azitromicina (“Azith”), 14 comprimidos de doxiciclina (“Doxy”) e 7 comprimidos de vitamina C (“Vit C”). A quantidade de cada componente pode ser conforme descrita no presente documento. O kit anticâncer 1401 pode incluir indicadores de hora, data ou dia para confirmar quando cada componente deve ser tomado, bem como outros lembretes que podem ser apropriados. Deve ser observado que um kit anticâncer pode incluir doses suficientes para períodos mais curtos ou mais longos, como um tratamento de duas semanas ou um tratamento de um mês.
[0065] A presente abordagem visa vantajosamente os fenótipos de CSC em relação às células saudáveis normais. A célula cancerígena alvo pode ser pelo menos uma dentre uma CSC, uma célula-tronco cancerígena energética (e-CSC), uma célula tumoral circulante (CTC, uma célula-semente que leva ao crescimento subsequente de tumores adicionais em órgãos distantes, um mecanismo responsável por uma grande fração das mortes relacionadas ao câncer) e uma célula cancerígena resistente à terapia (TRCC, uma célula que desenvolveu uma resistência a uma ou mais dentre quimioterapias, radioterapias e outros tratamentos comuns de câncer). Conforme descrito no Pedido de Patente Provisório dos EUA copendente Nº 62/686.881, depositado em 19 de junho de 2018 e 62/731.561, depositado em 14 de setembro de 2018, e incorporado a título de referência em sua totalidade, e-CSCs representam um fenótipo de CSC associado com a proliferação. Em adição às células cancerígenas em massa e CSCs, deve ser observado que a presente abordagem pode ser usada para direcionar uma subpopulação de células hiperproliferativas que os inventores se referem como e-CSCs, que mostram aumentos progressivos nos marcadores de potencial tronco (atividade ALDH e atividade formadora de mamoesfera), massa mitocondrial altamente elevada e atividade glicolítica e mitocondrial aumentada. As composições que têm um primeiro antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial grande e um segundo antibiótico que inibe o ribossomo mitocondrial pequeno podem ser administradas com um pró-oxidante, para direcionar tais fenótipos de células cancerosas e prevenir, tratar e/ou reduzir a recorrência do tumor de forma benéfica, metástase, resistência a fármacos, resistência à radioterapia e/ou caquexia. A modificação química de um ou mais dentre esses agentes terapêuticos com um sinal de alvejamento de membrana e/ou um sinal de alvejamento de mitocôndria aumenta a captação do agente terapêutico modificado nas mitocôndrias e, consequentemente, a potência desse agente.
[0066] Portanto, algumas modalidades da presente abordagem podem incluir um ou mais agentes terapêuticos quimicamente modificados com um sinal de alvejamento de membrana e/ou um sinal de alvejamento de mitocôndria. O sinal de alvejamento da membrana pode ser um ácido graxo e, em modalidades preferenciais, um de ácido palmítico, ácido esteárico, ácido mirístico, ácido oleico. Exemplos de sinais de alvejamento de mitocôndrias incluem cátions lipofílicos, como TPP e derivados de TPP. O Pedido de Patente Internacional copendente do Requerente Nº PCT/US2018/062174, depositado em 21 de novembro de 2018, é incorporado a título de referência em sua totalidade. Tri-fenil-fosfônio e seus derivados são sinais de alvejamento de mitocôndrias eficazes para direcionar células cancerígenas "em massa", células-tronco de câncer e células senescentes "normais" (fibroblastos), sem exterminar células saudáveis normais. Exemplos de derivados de TPP incluem: (1) 2- buteno-1,4-bis-TPP; (2) 2-clorobenzil-TPP; (3) 3-metilbenzil-TPP; (4) 2,4- diclorobenzil-TPP; (5) 1-naftilmetil-TPP. Também deve ser notado que os derivados de TPP também podem ter derivados. Por exemplo, o composto de alvejamento de mitocôndrias pode ser um derivado de TPP sendo pelo menos um dentre 2-buteno- 1,4-bis-TPP; 2-clorobenzil-TPP; 3-metilbenzil-TPP; 2,4-diclorobenzil-TPP; 1- naftilmetil-TPP; p-bisxilileno-TPP; um derivado de 2-buteno-1,4-bis-TPP; um derivado de 2-clorobenzil-TPP; um derivado de 3-metilbenzil-TPP; um derivado de 2,4- diclorobenzil-TPP; um derivado de 1-naftilmetil-TPP; e um derivado de p-bisxilileno- TPP. O cátion lipofílico 10-N-nonil acridina laranja também pode ser usado como um sinal de alvejamento de mitocôndria em algumas modalidades. Deve ser observado que estes exemplos de sinais de alvejamento não são exaustivos.
[0067] Os parágrafos a seguir referem-se a agentes terapêuticos conjugados com um sinal de alvejamento de membrana. Exemplos de sinais de alvejamento de membrana incluem ácidos graxos, como palmitato, estearato, miristato e oleato. Ácidos graxos de cadeia curta, por exemplo, ácidos graxos com menos de 6 átomos de carbono, também podem ser usados como um sinal de alvejamento de membrana. Exemplos de ácidos graxos de cadeia curta incluem ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido butírico, ácido isobutírico, ácido valérico e ácido isovalérico. O sinal de alvejamento de membrana também pode ser um ou mais ácidos graxos de cadeia média, que tem 6-12 átomos de carbono. Modalidades preferenciais de agentes terapêuticos conjugados têm uma porção química de ácido graxo com pelo menos 11 carbonos e até 21 carbonos.
[0068] Em algumas modalidades, a porção química de ácido graxo em um composto conjugado pode compreender a fórmula geral , em que X representa o local de substituição em um agente terapêutico ao qual a fração de ácido graxo está ligada, e 'n' é um número inteiro de 1-20, e preferencialmente de 10-
20. Conforme descrito no presente documento e dado o uso deste pedido do termo "porção química de ácido graxo", algumas modalidades da presente abordagem podem compreender um composto conjugado incluindo uma porção química de ácido graxo que tem a fórmula geral , em que X representa o local de substituição em um agente terapêutico ao qual a porção química de ácido graxo está ligada e 'n' é um número inteiro de 1-20 e, preferencialmente, de 10-20.
[0069] Conjugados com uma porção de ácido graxo podem ser sintetizados usando técnicas disponíveis na técnica. Por exemplo, um conjugado de doxiciclina e ácido mirístico pode ser sintetizado por meio de miristoilação. Outras técnicas para sintetizar conjugados como são conhecidas na técnica podem ser usadas. Deve ser observado que esta não é uma lista abrangente de sinais de alvejamento de membrana e que um sinal de alvejamento de membrana não listado pode ser usado sem se afastar da presente abordagem. O sinal de direcionamento de ácido graxo fornece um benefício adicional em relação à distribuição de fármacos. O ácido graxo facilita a incorporação do composto conjugado em nanopartículas à base de lipídios ou uma vesícula composta por uma ou mais bicamadas fosfolipídicas concêntricas. Por exemplo, a Patente Nº U.S. 4.761.288, emitida em 2 de agosto de 1988, descreve sistemas de entrega de fármacos lipossomais que podem ser usados em algumas modalidades e é incorporada a título de referência em sua totalidade. Estas modalidades de entrega de fármaco em lipossoma fornecem uma entrega de fármaco mais eficaz, uma vez que menos do ingrediente ativo é consumido durante a entrega e o metabolismo inicial.
[0070] Um ou mais agentes terapêuticos conjugados com um sinal de alvejamento de membrana, tal como uma porção química de ácido graxo, podem ser usados em modalidades da presente abordagem. Embora os ácidos graxos de cadeia curta e de cadeia média possam ser usados como sinais de alvejamento, os ácidos graxos com pelo menos 11 carbonos e até 21 carbonos fornecem a maior melhoria na inibição de CSC do agente terapêutico. Conjugados com ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico e ácido esteárico mostram melhora significativa da inibição do agente terapêutico e propriedades de retenção preferenciais. Como um exemplo demonstrativo, modalidades de conjugados de doxiciclina-miristato mostraram mais potência do que a doxiciclina sozinha. A Figura 14 compara os resultados do ensaio de mamoesfera em células MCF7, para doxiciclina ("Dox") e o conjugado doxiciclina- miristato ("Dox-M") mostrado como composto [1] (observe que esta revelação também faz referência ao composto [1] como um conjugado de doxiciclina e ácido mirístico), abaixo. Os dados representam contagens de mamoesfera após a exposição a um composto, como uma porcentagem de um controle. Os compostos foram testados em concentrações de 1,5 M, 3 M, 6 M e 12 M. Pode ser observado que, em cada concentração, o conjugado doxiciclina-miristato foi mais potente do que a doxiciclina não conjugada. A potência foi significativamente mais pronunciada em concentrações acima de 3 M. Comportamento semelhante é visto com outros membros da família das tetraciclinas e membros da família da eritromicina, conjugados com ácidos graxos, particularmente porções químicas de ácidos graxos com 11-21 carbonos totais.
[0071] A Figura 15 é um gráfico de linha que mostra os resultados do ensaio da mamoesfera em uma faixa mais ampla de concentrações de compostos para doxiciclina e o conjugado doxiciclina-miristato mostrado como composto [1]. A curva superior representa a contagem de mamoesfera (como uma porcentagem em comparação com um controle) para células MCF7 expostas à doxiciclina. A curva inferior representa a contagem de mamoesfera para células MCF7 expostas ao conjugado de doxiciclina-miristato. A 2,5 M, a doxiciclina sozinha teve pouco ou nenhum efeito no ensaio da mamoesfera em células MCF7. Em contraste, o conjugado de doxiciclina-miristato a 2,5 M inibiu a formação da mamoesfera MCF7 em 40-60% em relação ao controle. Com base nesses dados, a metade da concentração inibitória máxima (IC50) para doxiciclina é de 18,1 M, e a IC50 para o conjugado doxiciclina-miristato é de 3,46 M. Isso demonstra que o conjugado doxiciclina-miristato é 5 vezes mais potente do que a doxiciclina para inibir a propagação de CSC.
Conjugado de Ácido Doxiciclina-Miristato
[0072] As Figuras 16A-16C são imagens que comparam a retenção celular do conjugado doxiciclina-miristato com a doxiciclina não conjugada. As células MCF7 foram cultivadas em meio de cultura de tecidos na presença de qualquer agente terapêutico (ou seja, o conjugado doxiciclina-miristato ou doxiciclina não conjugada), a uma concentração de 10 M, por 72 horas. Em seguida, as células foram lavadas com PBS e qualquer agente terapêutico retido dentro das células foi visualizado por autofluorescência verde, a partir da excitação da estrutura de anel de tetraciclina. As células de controle foram incubadas apenas com veículo. A Figura 16A é o controle não tratado, a Figura 16B mostra a retenção do composto conjugado de doxiciclina-miristato [1] e a Figura 16C mostra a retenção de doxiciclina. A cor original nas imagens foi invertida, para melhorar a reprodutibilidade, e as regiões mais escuras da Figura 16B indicam retenção celular aumentada do agente terapêutico conjugado. Como pode ser visto através da comparação das Figuras 16A-16C, a escuridão e a intensidade da Figura 16B indicam que o conjugado de doxiciclina- miristato melhorou significativamente a retenção celular em comparação com a doxiciclina sozinha. Devem ser esperados resultados comparáveis com outros agentes terapêuticos conjugados com outros sinais de alvejamento.
[0073] Modalidades de agentes terapêuticos conjugados com sinais de alvejamento mostraram menos toxicidade em células cancerígenas em massa e fibroblastos normais em comparação com agentes terapêuticos não conjugados. Por exemplo, as Figuras 17A e 17B mostram dados de viabilidade celular para doxiciclina e o conjugado de doxiciclina-miristato mostrado como composto [1], para células MCF7 em massa e células BJ em massa, respectivamente. Os dados representam a viabilidade celular expressa como uma porcentagem de um controle. Como pode ser visto em ambas as Figuras 17A e 17B, o conjugado doxiciclina-miristato é menos tóxico do que a doxiciclina ao longo da faixa de concentrações testadas, mesmo em concentrações de 20 M. Comportamento similar foi observado em outros agentes terapêuticos conjugados com sinais de alvejamento.
[0074] Deve ser observado que o conjugado doxiciclina-miristato do composto [1] é um exemplo de um agente terapêutico conjugado de acordo com a presente abordagem, e diversos outros agentes terapêuticos conjugados são contemplados. O composto [2], mostrado abaixo, representa uma estrutura genérica de doxiciclina conjugada com uma porção química de ácido graxo. O 'n' é um número inteiro de 1-20 e, preferencialmente, é de 10-20. Por exemplo, se 'n' for 12, isso resulta em um conjugado com uma fração de ácido mirístico. Embora a doxiciclina seja usada neste exemplo, deve ser observado que outros membros da família da tetraciclina (por exemplo, antibióticos com um núcleo de naftaceno que tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno) podem ser usados como o agente terapêutico, incluindo, por exemplo e sem limitação, tigeciclina, minociclina. O composto [3] é uma estrutura química genérica para derivados de tetraciclina, com rótulos nos anéis centrais de naftaceno para uso na descrição atual. Deve ser entendido que os derivados de tetraciclina têm diferentes grupos funcionais ligados ao núcleo de naftaceno, e que o composto [3] é usado principalmente para ilustrar locais de substituição e fornecer um sistema de marcação. Usando os rótulos mostrados no composto [3], a porção química de ácido graxo mostrada no composto [2] é substituída no que é referido como a posição R9 no anel D do núcleo de naftaceno. Deve ser observado que outros locais de substituição também podem ser usados. Conforme mostrado na estrutura genérica do composto [3], por exemplo, as posições R7 e R8 do anel D são opções adicionais de substituição, por exemplo. De maneira geral, contudo, os grupos dimetilamino e amida no anel A são importantes para a atividade antibiótica, que também pode depender da configuração estereoquímica ao longo do anel B e do anel C.
[0075] O composto [4], mostrado acima, é outro exemplo de um agente terapêutico conjugado com doxiciclina e uma porção química de ácido graxo, de acordo com a presente abordagem.
Nesta modalidade, a porção química de ácido graxo é substituída na posição R8 position do anel D.
O 'n' é um número inteiro de 1- 20 e, preferencialmente, é de 10-20. O composto [5A], mostrado abaixo, ilustra um exemplo de um conjugado de tetraciclina-ácido graxo de acordo com outra modalidade da presente abordagem.
Neste exemplo, a porção química de ácido graxo é substituída na posição R9 do anel D, mas deve ser entendido que a porção química de ácido graxo pode ser substituída em outros locais, como já descrito.
O composto [5B], abaixo, demonstra outra modalidade de um membro da família de tetraciclinas conjugado com um sinal de alvejamento de membrana.
No composto
[5B], a estrutura da minociclina tem uma porção química de ácido graxo substituída na posição R9 do anel D. É claro que a porção química de ácido graxo pode ser substituída em outro lugar, como discutido acima. Para ambos os compostos [5A] e [5B], o 'n' é um número inteiro de 1-20 e, preferencialmente, é de 10-20.
[0076] Os exemplos anteriores de conjugados de agentes terapêuticos envolveram membros da família das tetraciclinas. Deve ser observado que conjugados de membros da família da eritromicina com um sinal de alvejamento de membrana também são contemplados pela presente abordagem. Os compostos [6],
[7] e [8] abaixo mostram as estruturas para azitromicina, roxitromicina e telitromicina, exemplos de antibióticos aprovados pela FDA na família da eritromicina conhecidos na técnica.
Azitromicina
Roxitromicina Telitromicina
[0077] A estrutura do macrolídeo fornece vários locais de substituição potencial. Esta descrição aborda duas séries de fórmulas para conjugados da família da eritromicina. Os compostos [9A], [9B], [10A], [10B], [11A] e [11B], abaixo, mostram estruturas gerais para conjugados de azitromicina, conjugados de roxitromicina e conjugados de telitromicina, respectivamente. Cada estrutura geral é mostrada com vários grupos R que denotam um local de substituição potencial. Em algumas modalidades da presente abordagem, um grupo R pode ser um sinal de alvejamento, tal como um sinal de alvejamento de membrana ou um sinal de alvejamento de mitocôndria, e os grupos R restantes seriam então a porção química normalmente presente na estrutura (por exemplo, como mostrado nos compostos [6] - [8]). Em alguns casos, o grupo NH-R pode ser N(CH3)2, como discutido abaixo.
Conjugados de Azitromicina I Conjugados Azitromicina II Conjugados de Roxitromicina I
Conjugados de Roxitromicina II Conjugados de Telitromicina I Conjugados de Telitromicina II
[0078] A primeira série de fórmula geral para os conjugados da família da eritromicina é representada pelos compostos [9A], [10A] e [11A]. Começando com o composto [9A], R2 no composto [9A], um conjugado de azitromicina, pode ser uma porção química de ácido graxo, e cada um dentre R1, R3, R4, e R5 pode então ser a porção química normalmente presente para a azitromicina, como mostrado no composto [6], nomeadamente, H, H, açúcar desoxi (desosamina) e um açúcar desoxi (cladinose), respectivamente. Deve ser observado que a porção química do sinal de alvejamento pode, em vez disso, ser substituída em outro local em vez de R2 como usado nesse exemplo. O composto [10A] mostra uma primeira fórmula geral para conjugados de roxitromicina. R1 no composto [10A] pode ser uma porção química de ácido graxo, e cada um dentre R2- R6 pode então ser a porção química normalmente presente para roxitromicina, como mostrado no composto [7]. Como um outro exemplo, o conjugado de telitromicina do composto [11A], R3 pode compreender um sinal de alvejamento, e R1 e R2 podem então ser a porção química normalmente presente para roxitromicina, como mostrado no composto [8] (por exemplo, R1 é porção química de alril-alquila anel carbamato, e -NHR2 se torna -N(CH3)2, ou seja, o anel de açúcar desosamina).
[0079] A segunda série de fórmulas gerais mostrada acima demonstra conjugados de acordo com modalidades adicionais da presente abordagem. O composto [9B] mostra uma segunda fórmula geral para conjugados de azitromicina de acordo com algumas modalidades, em que grupos funcionais R1 e R2 podem ser iguais ou diferentes e um ou ambos são um sinal de alvejamento. Por exemplo, R1 e/ou R2 pode ser um sinal de alvejamento, e se não for o mesmo, então o outro R permanece o mesmo que mostrado no composto [6]. Por exemplo, R1 pode ser metil e R2 pode ser a sinal de alvejamento, tal como uma porção química de ácido graxo. Como um outro exemplo, R1 pode ser um agente de alvejamento e NH-R2 pode ser - N(CH3)2.
[0080] O composto [10B] mostra uma segunda fórmula geral para conjugados de roxitromicina de acordo com algumas modalidades, em que grupos funcionais R1 e R2 podem ser iguais ou diferentes, e um ou ambos podem ser um sinal de alvejamento. Por exemplo, R1 e/ou R2 podem ser a porção química de ácido graxo, como discutido acima, e o outro pode ser o mesmo como mostrado no composto [7]. Como outro exemplo usando o composto [10B], R1 pode ser um metóxi, como um O-CH2-O-(CH2)2-OCH3 presente na roxitromicina, e R2 pode ser um sinal de alvejamento, como uma porção química de ácido graxo. Como um outro exemplo, R1 pode ser um agente de alvejamento e NH-R2 pode ser N(CH3)2.
[0081] O composto [11B] mostra uma segunda fórmula geral para conjugados de telitromicina, em que grupos funcionais R1 e R2 podem ser iguais ou diferentes, e um ou ambos podem ser um sinal de alvejamento. Por exemplo, R1 e/ou R2 podem ser um sinal de alvejamento de membrana ou um sinal de alvejamento de mitocôndria, conforme discutido acima. Por exemplo, R1 pode ser um grupo alquil- arila, tal como , que está presente no anel de carbamato de telitromicina, e R2 pode ser um sinal de alvejamento. Como um outro exemplo, R1 pode ser um agente de alvejamento e -NH-R2 pode ser -N(CH3)2.
[0082] Os compostos [12A], [13A] e [14A], abaixo, demonstram exemplos específicos de conjugados de membros da família da eritromicina de acordo com a abordagem, usando a primeira série de estruturas gerais para conjugados descritos acima. No composto [12], R5 foi substituído com a estrutura geral por uma porção química de ácido graxo e os outros locais de substituição têm os constituintes normais encontrados na estrutura da azitromicina. No composto [13], R5 foi substituído pela estrutura geral por uma porção química de ácido graxo, e os outros locais de substituição têm os constituintes normais encontrados na estrutura da roxitromicina. No composto [14], R3 foi substituído com a estrutura geral por uma porção química de ácido graxo, e os outros locais de substituição têm os constituintes normais encontrados na estrutura da telitromicina. Nestes exemplos, o 'n' é um número inteiro de 1-20 e, preferencialmente, é de 10-20. As modalidades dos compostos [12A], [13A] e [14A], em que a porção química de ácido graxo é miristato, por exemplo, demonstraram melhorias na atividade de inibição de CSC e retenção celular em relação aos antibióticos não conjugados. Deve ser observado que esta abordagem pode ser usada para formar diversos conjugados de membros da família da eritromicina e porções químicas de sinal de alvejamento.
Conjugado de ácido Graxo-Azitromicina Conjugado de ácido Graxo-Roxitromicina Conjugado de ácido Graxo-Telitromicina
[0083] Os compostos [12B], [13B], e [14B], abaixo, demonstram exemplos específicos de conjugados de membros da família de eritromicina de acordo com a abordagem e que usam a segunda série de estruturas gerais mostradas acima.
No composto[12B], R1 foi substituído pela estrutura geral para uma porção química de ácido graxo , em que 'n' é um número inteiro entre 1 e 20, de preferencialmente 10 até 20, e o outro local de substituição tem o constituinte normal encontrado na estrutura da azitromicina.
No composto[13B], R2 foi substituído com a mesma estrutura geral de porção química de ácido graxo como no composto [12B], e o outro local de substituição R1 tem o constituinte normal encontrado na estrutura da roxitromicina.
Como um exemplo com base na segunda fórmula geral de conjugado de telitromicina, o composto [14B] tem a mesma estrutura geral de ácido graxo em R1, e NH-R2 é, em vez disso, N(CH3)2 como encontrado na estrutura da telitromicina.
Nestes exemplos, o 'n' é um número inteiro de 1-20 e, preferencialmente, é de 10 até 20. Modalidades de eritromicina e conjugados de ácido graxo, como mostrado nos compostos [12A], [12B], [13A], [13B], [14A] e [14B], em que a porção química de ácido graxo é miristato, por exemplo, demonstraram melhorias na atividade de inibição de CSC e retenção celular em relação aos antibióticos não conjugados.
Deve ser observado que esta abordagem pode ser usada para formar diversos conjugados de membros da família da eritromicina e porções químicas de sinal de alvejamento.
[0084] Abaixo é uma modalidade de um exemplo específico de um conjugado de telitromicina e uma porção química de ácido graxo, usando a estrutura geral mostrada na fórmula [11B] acima. Neste exemplo, mostrado como fórmula [14C], R1 permanece o mesmo que na telitromicina não conjugada e a porção química de ácido graxo está em R2, em que n é um número inteiro de 1-20 e, preferencialmente, é de 10 até 20. Em uma modalidade preferencial de fórmula [14C], n é 12, e o conjugado resultante demonstrou melhorias significativas na atividade de inibição de CSC e retenção celular em relação aos antibióticos não conjugados.
[0085] O composto [15], mostrado abaixo, ilustra uma modalidade de um membro da família da eritromicina, azitromicina, conjugado com miristato. A porção química de ácido graxo é substituída no local R2 no composto [9B], e R1 permanece um grupo metil. O conjugado mostrado como composto [15] demonstrou potência e seletividade melhoradas para CSCs, em comparação com a azitromicina sozinha, e pode ser usado como um agente terapêutico em modalidades da presente abordagem.
[0086] Antes de passar para os conjugados com cátions lipofílicos, segue uma breve discussão sobre os conjugados do ácido ascórbico (vitamina C)
com os ácidos graxos. Algumas modalidades podem usar um agente terapêutico pró- oxidante conjugado com um sinal de alvejamento de membrana. Outros agentes terapêuticos também podem ser conjugados com um sinal de alvejamento de membrana. Em particular, os derivados da vitamina C (por exemplo, ascorbatos) podem ser conjugados com uma porção química de ácido graxo. Por exemplo, palmitato de ascorbila é um éster de ácido ascórbico e ácido palmítico comumente usado em grandes doses como uma fonte de vitamina C solúvel em gordura e um aditivo alimentar antioxidante. Modalidades da presente abordagem podem usar palmitato de ascorbila como pró-oxidante. Algumas modalidades da presente abordagem podem usar um derivado de Vitamina C conjugado com um sinal de alvejamento, com ou sem agentes terapêuticos que também têm uma porção química de sinal de alvejamento. Modalidades em que os compostos terapêuticos são conjugados com ácidos graxos para a distribuição de fármacos em lipossomas podem incluir palmitato de ascorbila, ou outros conjugados com um ácido graxo, para melhoria coletiva na embalagem e distribuição de cada agente terapêutico na modalidade. O composto [S], abaixo, é uma estrutura genérica para um derivado da vitamina C conjugado com um ácido graxo, em que n é um número inteiro de 1-20 e, preferencialmente, é de 10-20.
[0087] Conforme discutido acima, um ou mais compostos terapêuticos podem assumir a forma de um antibiótico conjugado com um sinal de alvejamento de mitocôndria. Os parágrafos a seguir descrevem modalidades nas quais um agente terapêutico é conjugado com um sinal de alvejamento de mitocôndria, muitas vezes através do uso de um braço espaçador e/ou um grupo de ligação. Exemplos de sinais de alvejamento de mitocôndria incluem cátions lipofílicos, tais como TPP, derivados de TPP, porções químicas à base de guanidínio, porções químicas à base de quinolínio e laranja 10-N-nonil acridina. Ésteres de colina, derivados de rodamina, piridínio, (E) -4- (1H-Indol-3-ilvinila) -N-metilpiridínio iodeto (F16) e derivados de sulfonil-ureia, como diazóxido, também podem ser usados como um sinal de alvejamento de mitocôndria em algumas modalidades. Exemplos de derivados de TPP incluem, por exemplo, 2-buteno-1,4-bis-TPP; 2-clorobenzil-TPP; 3-metilbenzil- TPP; 2,4-diclorobenzil-TPP; 1-naftilmetil-TPP; ou p-bisxilileno-TPP. O composto derivado de TPP 2-buteno-1,4-bis-TPP pode ser usado em algumas modalidades preferenciais. Deve ser observado que esta não é uma lista abrangente de sinais de alvejamento de mitocôndria e que um sinal de alvejamento de mitocôndria não listado pode ser usado sem se afastar da abordagem atual.
[0088] Os exemplos a seguir são usados para demonstrar conjugados de compostos de tetraciclina com um sinal de alvejamento de mitocôndria. A descrição anterior de potenciais locais de substituição (por exemplo, em relação aos compostos [3] e [9A] - [11B]), é aplicável a conjugados com sinais de alvejamento de mitocôndria. Em algumas modalidades, o agente terapêutico pode ser conjugado com TPP usando um grupo de ligação e/ou um braço espaçador químico, conforme descrito acima. Adicionalmente, deve ser observado que diversos grupos de ligação são conhecidos na técnica e podem ser usados para formar conjugados com sinais de alvejamento de mitocôndria, conforme descrito no presente documento. Por exemplo, a Publicação do Pedido de Patente Internacional Nº WO 99/26582, correspondente ao Pedido de Patente Internacional PCT/NV98/00172, depositado em 25 de novembro de 1998, aqui incorporado a título de referência em sua totalidade, descreve o uso da fórmula TPP-X-R Z--, em que Z é um ânion, X é um grupo de ligação e R é o agente terapêutico. Em algumas modalidades, X pode ser um C1-6 alquila. Como outro exemplo, a Publicação do Pedido de Patente Internacional Nº WO 2010/141177, correspondente ao Pedido de Patente Internacional PCT/US2010/031455, depositado em 16 de abril de 2010 e incorporado a título de referência em sua totalidade, descreve uma variedade de exemplos de "porções químicas de ligação" que podem ser usados na presente abordagem.
[0089] O composto [16A] ilustra uma fórmula geral para um derivado de tetraciclina (neste caso, tetraciclina) conjugado com um sinal de alvejamento de mitocôndria (neste caso, TPP), através de um grupo de ligação -NHC (O) - no que é referido como a posição R9 no anel D, e um braço espaçador (CH2)n, em que 'n' é um número inteiro de 1-20. O composto [16A] abaixo ilustra um exemplo de doxiciclina conjugada com o cátion TPP, amarrado através de um braço espaçador de 5 carbonos demonstrativo e um grupo de ligação de amida na posição R9.
Conjugado de Doxiciclina-TPP Conjugado de Tigeciclina-TPP
[0090] Conjugados de membros da família da eritromicina e sinais de alvejamento de mitocôndria também podem ser formados, usando os locais de substituição mostrados nos compostos [9A] - [11B]. Por questões de brevidade, essas estruturas não serão repetidas e apenas uma modalidade demonstrativa será fornecida. O composto [17], mostrado abaixo, ilustra um membro da família eritromicina, azitromicina, conjugado com TPP, através de um braço espaçador de 4 carbonos demonstrativo e um grupo de ligação amida. Deve ser observado que diversos outros conjugados de membros da família da eritromicina e sinais de alvejamento de mitocôndria podem ser formados, como descrito acima.
Conjugado Azitromicina-TPP
[0091] Os parágrafos a seguir descrevem exemplos de métodos para sintetizar conjugados de acordo com a presente abordagem. Primeiro, dois métodos estavam disponíveis para HPLC preparativa (cromatografia líquida de alto desempenho). O método A envolveu uma coluna LC de Phenomenex Kinetex 5 µm EVO C18 100 250x21,2 mm. Eluente de gradiente: 20-80% de acetonitrila/água contendo 0,1% de ácido fórmico. Tempo: 0-25min. Comprimento de onda: 246nm. O método B também envolveu uma coluna LC de Phenomenex Kinetex 5 µm EVO C18 100 250x21,2 mm. Eluente de gradiente: 20-80% de acetonitrila/água contendo 0,015M2PO4 e 0.015M ácido oxálico (pH7). Tempo: 0-25min. Comprimento de onda: 254nm. A cromatografia líquida analítica foi executada via coluna LC. Waters Sunfire C18 30x4,6mm. Eluente de gradiente: 3-97% de acetonitrila/água contendo 0,05% de ácido fórmico. Tempo: 0-6min.
[0092] As seguintes abreviações são usadas nos Exemplos; N,N,N ,N - Tetrameitl-O-(1H-benzotriazol-1-ila)hexafluorofosfato de urônio (HBTU), N-
metilmorfolina (NMM), diclorometano (DCM), dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), O-(6-Clorobenzotriazol-1-ila)-N,N,N ,N -hexafluorofosfato de tetrametilurônio (HCTU), metanol (MeOH), amônia (NH3).
[0093] Exemplo 1 - Um conjugado de doxiciclina e um ácido graxo. (4S, 5S, 6R, 12aS) -4- (dimetilamino) -3,5,10,12,12a-pentahidroxi-6-metil-1,11-dioxo-9- (tetradecanoilamino) -4a, 5,5a, 6-tetrahidro-4H-tetraceno-2-carboxamida (ou seja, doxiciclina conjugada com ácido mirístico em R9, como descrito acima e mostrado abaixo composto [18]). Uma solução de 9-aminodoxiciclina (preparada conforme descrito em Barden, Timothy C. et al. “Glicilciclinas”. 3. 9- Aminodoxiciclinocarboxamidas. J.Med.Chem. 1994, 37, 3205-3211) (0,70g, 1,5mmol), ácido tetradecanoico (0,36g, 1,5mmol), HBTU (0,85g, 2,25mmol) e NMM (0,33ml, 3,0mmol) em uma mistura de DCM (12ml) e DMF (4ml) foi agitado sob atmosfera de nitrogênio à temperatura ambiente por 72 horas. Os solventes foram evaporados sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi triturado com acetonitrila (40 ml), a precipitação foi recolhida por filtragem, foi lavada com acetonitrila (10 ml), éter dietílico (20 ml) e seca sob vácuo. O produto bruto foi dissolvido em DMSO e purificado por HPLC preparativa (Método A) para produzir (4S,5S,6R,12aS)-4- (dimetilamino)-3,5,10,12,12a-pentahidroxi-6-metil-1,11-dioxo-9-(tetradecanoilamino)- 4a,5,5a,6-tetra-hidro-4H-tetraceno-2-carboxamida (0,086 g). LC-MS 670,2 [M+H]+, RT 2,78min.
[0094] Exemplo 2 - Um conjugado de doxiciclina e um ácido graxo. (4S,5S,6R,12aS)-4-(dimetilamino)-9-(hexadecanoilamino)-3,5,10,12,12a- pentahidroxi-6-metil-1,11-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahidro-4H-tetraceno-2-carboxamida. O Composto [19], mostrado abaixo, foi preparado seguindo o método do Exemplo 1. LC-MS 698,2 [M+H]+, RT 3,02min.
[0095] Exemplo 3 - Um conjugado de doxiciclina e um ácido graxo. (4S,5S,6R,12aS)-4-(dimetilamino)-9-(dodecanoilamino)-3,5,10,12,12a-pentahidroxi- 6-metil-1,11-dioxo-4a, 5,5a,6-tetrahidro-4H-tetraceno-2-carboxamida. O Composto
[20], mostrado abaixo, foi preparado seguindo o método do Exemplo 1. LC-MS 642,1 [M+H]+, RT 2,42min.
[0096] Exemplo 4 - Um conjugado de doxiciclina e TPP (como um sal oxalato). [6-[[(5R,6S,7S,10aS)-9-carbamoil-7-(dimetilamino)-1,6,8,10a,11- pentahidroxi-5-metil-10,12-dioxo-5a,6,6a,oxalato de 7-tetra-hidro-5H-tetracen-2- ila]amino]-6-oxo-hexila]trifenil-fosfônio. O Composto [21], mostrado abaixo, foi preparado seguindo o método do Exemplo 1, exceto purificado por HPLC preparativa (Método B). LC-MS 409,7 [M ½]+, RT 1,53min.
[0097] Exemplo 5 - Um precursor para conjugados de azitromicina. 2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-2-etil-3,4,10-trihidroxi-13-[(2S,4R,5S,6S)- 5-hidroxi- 4-metoxi-4,6-dimetil-tetra-hidropiran-2-ila]oxi-11-[(2S,3R,4S,6R)-3-hidroxi- 6-metil-4-(metilamino)tetra-hidropiran-2-ila]oxi-3,5,6,8,10,12,14-heptametil-1-oxa-6- azaciclopentadecan-15-ona. O composto [22] foi preparado de acordo com Vujasinovic, Ines et al. Nova reação em tandem para a síntese de 2-Imino-1,3- oxazolidinas substituídas por N 'a partir de álcool vicinal (sec-outert-) Amino álcool de desosamina. Eur. J. Org.Chem. 2011, 2507-2518. LC-MS 735,3 [M+H]+, RT 0,97min.
[0098] Exemplo 6 - Um conjugado azitromicina-ácido graxo. N- [(2S,3R,4S,6R)-2-[[(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-2-etil-3,4,10-trihidroxi- 13-[(2S,4R,5S,6S)-5-hidroxi-4-metoxi-4,6-dimetil-tetra-hidropiran-2-ila]oxi- 3,5,6,8,10,12,14-heptametil-15-oxo-1-oxa-6-azaciclopentadec-11-ila]oxi]-3-hidroxi-6- metil-tetra-hidropiran-4-ila]-N-metil-tetradecanamida. O composto [23] foi preparado a partir de 2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-2-etil-3,4,10-trihidroxi-13 - [(2S,4R,5S,6S)-5-hidroxi-4-metoxi-4,6-dimetil-tetra-hidropiran-2-ila]oxi-11- [(2S,3R,4S,6R)-3-hidroxi-6-metil-4-(metilamino)tetrahidropiran-2-ila]oxi- 3,5,6,8,10,12,14-heptametil-1-oxa-6-azaciclopentadecan-15-ona seguindo o método no Exemplo 1, exceto ao usar HCTU no lugar de HBTU e realizar a purificação final em gel de sílica (2,5% NH3 em MeOH (7M)/DCM). LC-MS 946,4 [M+H]+, RT 2,48min.
[0099] Em algumas modalidades, um ou mais dentre os agentes terapêuticos podem ser parte de um complexo de inclusão com um composto de ciclodextrina, como uma alfa-ciclodextrina, beta-ciclodextrina, gama-ciclodextrina e seus derivados. Em algumas modalidades, o derivado de ciclodextrina pode incluir um ou mais dentre os sinais de alvejamento descritos no parágrafo anterior. Em algumas modalidades, um complexo de inclusão de ciclodextrina pode aumentar a entrega do agente terapêutico ao tecido alvo.
[0100] Deve ser observado que as modalidades da presente abordagem podem possuir benefícios vantajosos além da atividade anticâncer. Em algumas modalidades, por exemplo, a composição possui pelo menos uma dentre atividade de radiossensibilização e atividade de fotossensibilização. Em algumas modalidades, a composição sensibiliza as células cancerígenas a pelo menos um dentre agentes quimioterápicos, substâncias naturais e restrição calórica. Em algumas modalidades, a composição extermina seletivamente as células senescentes. As modalidades da presente abordagem também têm implicações para melhorar a longevidade e a longevidade da saúde, uma vez que o envelhecimento é um dos fatores de risco mais significativos para o desenvolvimento de muitos tipos de câncer humano. A azitromicina, por si só, é um fármaco aprovado pela FDA com notável atividade senolítica que tem como alvo e remove fibroblastos senescentes, como mio- fibrobastos. Essa atividade senolítica tem eficiência considerável, aproximando-se de quase 97%. Acredita-se que o acúmulo de células senescentes pró-inflamatórias seja a principal causa de muitas doenças associadas ao envelhecimento, como doenças cardíacas, diabetes, demência e câncer, por exemplo. Uma vez que os fibroblastos associados ao câncer (CAFs) são mio-fibroblastos senescentes, com atividade de promoção de tumor, modalidades de combinação tripla da presente abordagem com azitromicina também podem ter como alvo eficaz o estroma tumoral glicolítico de cânceres agressivos e metastáticos, especialmente aqueles portadores das marcas metabólicas do “Efeito Warburg reverso”. Em algumas modalidades, a composição evita a aquisição de um fenótipo secretor associado a senescência. Em algumas modalidades, a composição facilita a reparação e regeneração de tecidos. Em algumas modalidades, a composição aumenta pelo menos um dentre o tempo de vida do organismo e o tempo de saúde.
[0101] As modalidades da presente abordagem também podem assumir a forma de métodos para o tratamento de pelo menos um dentre recorrência tumoral, metástase, resistência a fármacos, caquexia e resistência à radioterapia. Deve ser observado que a presente abordagem pode ser usada para fornecer compostos para a preparação de medicamentos para o tratamento de pelo menos um dentre recorrência tumoral, metástase, resistência a fármacos, caquexia e resistência à radioterapia. Em algumas modalidades, os métodos de acordo com a presente abordagem podem ser administrados após um tratamento convencional do câncer. Em outras modalidades, a presente abordagem pode preceder um tratamento convencional do câncer, como, por exemplo, para prevenir ou reduzir a probabilidade de recorrência, metástase e/ou resistência. Em outras modalidades, a presente abordagem pode ser usada em conjunto com um tratamento convencional do câncer.
[0102] Os parágrafos a seguir descrevem os métodos e materiais usados em conexão com os resultados e análises laboratoriais fornecidos acima. Linhagens de células e reagentes: as células MCF7, uma linhagem de células de câncer de mama humano ER (+), foram originalmente adquiridas na American Type Culture Collection (ATCC), número de catálogo HTB-22. Doxiciclina, azitromicina e ácido ascórbico (vitamina C) foram obtidos comercialmente na Sigma-Aldrich, Inc.
[0103] Ensaio de formação de mamoesfera: Uma suspensão de célula única foi preparada usando desagregação manual e enzimática (1x Tripsina-EDTA, Sigma Aldrich, # T3924) (agulha de calibre 25). As células foram plaqueadas a uma densidade de 500 células/cm2 em meio de mamoesfera (DMEM-F12 + B27 + 20 ng / ml EGF + PenStrep) sob condições não aderentes, em placas de cultura pré- revestidas com (2-hidroxietilmetacrilato) (poli- HEMA, Sigma, # P3932), chamadas “placas de esfera tumoral”. As células de controle de veículo sozinho (DMSO) foram processadas em paralelo. As células foram cultivadas por 5 dias e mantidas em incubadora umidificada a 37 ºC. Após 5 dias de cultura, as mamoesferas 3D> 50 m foram contadas usando uma lente ocular ("gratícula"), e a porcentagem de células plaqueadas que formaram esferas foi calculada e é referida como a formação percentual de mamoesfera (MFE, e foi normalizada para um (1 = 100% MSF).
[0104] Análise do Fluxo Metabólico: As taxas de consumo de oxigênio em tempo real (OCR) e as taxas de acidificação extracelular (ECAR) em células MCF7 foram determinadas usando o analisador Seahorse Extracellular Flux (XFe96) (Seahorse Bioscience, EUA). Resumidamente, 1,5 x 104 células por poço foram semeadas em placas de cultura de células de poços XFe96 e incubadas de um dia para o outro para permitir a fixação das células. Então, as células foram tratadas com antibióticos por 72h. As células de controle de veículo sozinho foram processadas em paralelo. Após 72 horas de incubação, as células foram lavadas em meio de ensaio XF pré-aquecido (ou para medição de OCR, meio de ensaio XF suplementado com glicose 10 mM, piruvato 1 mM, L-glutamina 2 mM e ajustado para pH 7,4). As células foram então mantidas em 175 µL/poços de meio de ensaio XF a 37 ºC, em uma incubadora sem CO2 por 1 hora. Durante o tempo de incubação, carregamos 25 µL de glicose 80 mM, oligomicina 9 µM e 2-desoxiglicose 1M (para medição de ECAR) ou oligomicina 10 µM, FCCP 9 µM, rotenona 10 µM, antimicina A 10 µM (para medição de OCR), em meio de ensaio XF nas portas de injeção no cartucho de sensor XFe96. As medições foram normalizadas pelo conteúdo de proteína (ensaio de Bradford). Os conjuntos de dados foram analisados usando o software XFe96 e o software GraphPad Prism, usando ANOVA de uma via e cálculos de teste t de Estudante. Todos os experimentos foram executados em quintuplicata, três vezes de forma independente.
[0105] Ensaio Vivo/Morto para resistência à Anoikis: Após o tratamento em monocamada com doxiciclina sozinha, azitromicina sozinha ou a combinação por 48 horas, a população de CSC foi enriquecida por semeadura em placas de baixa fixação. Nessas condições, a população não-CSC sofre anoikis (uma forma de apoptose induzida pela falta de ligação do substrato celular) e acredita-se que as CSCs sobrevivam. A fração de CSC sobrevivente foi então determinada por análise FACS. Resumidamente, 1 x 104 células da monocamada MCF7 foram tratadas com antibióticos ou veículo sozinho por 48h em placas de 6 poços. Em seguida, as células foram tripsinizadas e semeadas em placas de baixa fixação em meios de mamoesfera. Após 12h, as células MCF7 foram centrifugadas. As células foram enxaguadas duas vezes e incubadas com corante LIVE/DEAD (corante reativo Violeta Morto Fixável; Invitrogênio) durante 10 minutos. As amostras foram então analisadas por FACS (Fortessa, BD Bioscience). A população viva foi então identificada empregando o ensaio de coloração com corante LIVE/DEAD. Os dados foram analisados usando o software FlowJo.
[0106] A terminologia usada na descrição de modalidades da presente abordagem tem a finalidade de descrever apenas modalidades particulares e não se destina a ser limitante. Conforme usado na descrição e nas reivindicações em anexo, as formas singulares "um", "uma" e "o" e "a" destinam-se a incluir as formas plurais também, a menos que o contexto indique claramente o contrário. A presente abordagem abrange várias alternativas, modificações e equivalentes, como se tornará aparente a partir da consideração da seguinte descrição detalhada.
[0107] Será entendido que embora os termos “primeiro”, “segundo”, “terceiro”, “a),” “b),” e “c),” etc, possam ser usados no presente documento para descrever vários elementos da presente abordagem, e as reivindicações não devem ser limitadas por estes termos. Esses termos são usados apenas para distinguir um elemento da abordagem atual de outro. Assim, um primeiro elemento discutido abaixo pode ser denominado um aspecto de elemento e, similarmente, um terceiro sem se afastar dos ensinamentos da presente abordagem. Assim, os termos "primeiro", "segundo", "terceiro", "a)," "b)" e "c)", etc. não têm a intenção de transmitir necessariamente uma sequência ou outra hierarquia para os elementos associados, mas são usados apenas com propósitos de identificação. A sequência de operações (ou etapas) não se limita à ordem apresentada nas reivindicações.
[0108] A menos que definido de outra forma, todos os termos (incluindo termos técnicos e científicos) usados no presente documento têm o mesmo significado como comumente entendido por aquele versado na técnica. Será ainda entendido que termos, tais como aqueles definidos em dicionários comumente usados, devem ser interpretados como tendo um significado que é consistente com seu significado no contexto do presente pedido e da técnica relevante e não devem ser interpretados de forma idealizada ou excessivamente no sentido formal, a menos que expressamente definido no presente documento. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências mencionadas no presente documento são incorporadas a título de referência em sua totalidade. Em caso de conflito de terminologia, o presente relatório descritivo é dominante.
[0109] Também, conforme usado no presente documento, "e/ou" refere- se a e abrange todas e quaisquer combinações possíveis de um ou mais dentre os itens listados associados, bem como a falta de combinações quando interpretado na alternativa ("ou").
[0110] A menos que o contexto indique o contrário, a intenção específica é de que as várias características da presente abordagem descritas no presente documento possam ser usadas em qualquer combinação. Ademais, a presente abordagem também contempla que, em algumas modalidades, qualquer recurso ou combinação de recursos descritos em relação às modalidades demonstrativas podem ser excluídos ou omitidos.
[0111] Conforme usado no presente documento, a frase de transição "consistindo essencialmente em" (e variantes gramaticais) deve ser interpretada como abrangendo os materiais ou etapas recitados "e aqueles que não afetam materialmente a característica básica e nova (ou características básicas e novas)" da reivindicação. Assim, o termo "consistindo essencialmente em", conforme usado no presente documento, não deve ser interpretado como equivalente a "que compreende".
[0112] O termo "cerca de", tal como aqui utilizado quando se refere a um valor mensurável, tal como, por exemplo, uma quantidade ou concentração e semelhantes, pretende abranger variações de ± 20%, ± 10%, ± 5%, ± 1 %, ± 0,5% ou mesmo ± 0,1% da quantidade especificada. Uma faixa fornecida no presente documento para um valor mensurável pode incluir qualquer outra faixa e/ou valor individual nela.
[0113] Tendo assim descrito certas modalidades da presente abordagem, deve ser entendido que o escopo das reivindicações anexas não deve ser limitado por detalhes particulares estabelecidos na descrição acima, pois muitas variações aparentes das mesmas são possíveis sem se afastar do espírito ou escopo como reivindicado doravante no presente documento.

Claims (57)

REIVINDICAÇÕES
1. Composição CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma combinação entre um primeiro agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial grande, um segundo agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno e um terceiro agente terapêutico que induz estresse oxidativo mitocondrial.
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende azitromicina, o segundo agente terapêutico compreende doxiciclina e o terceiro agente terapêutico compreende Vitamina C.
3. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende um membro da família eritromicina conjugado com um primeiro ácido graxo, o segundo agente terapêutico compreende um membro da família tetraciclina conjugado com um segundo ácido graxo e o terceiro agente terapêutico compreende pelo menos um dentre Vitamina C e palmitato de ascorbila.
4. Composição, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos um dentre o primeiro ácido graxo e o segundo ácido graxo compreende ácido mirístico.
5. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos um agente terapêutico compreende um conjugado com uma porção química de ácido graxo.
6. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo agente terapêutico compreende um dentre: ,
, , , em que n é um número inteiro de 1-20; , em que n é um número inteiro de 1-20; , em que n é um número inteiro de 1-20; e .
7. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos um dentre o primeiro agente terapêutico e o segundo agente terapêutico compreende um conjugado com uma porção química de TPP.
8. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo agente terapêutico compreende um de , em que n é um númro inteiro de 1-20..
9. Composição, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a concentração de pelo menos um dentre azitromicina e doxiciclina é sub- antimicrobial.
10. Composição, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a concentração tanto de azitromicina quanto de doxiciclina é sub- antimicrobial.
11. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o terceiro agente terapêutico compreende Vitamina C administrada oralmente em uma concentração suficiente para atingir uma concentração de pico de Vitamina C entre 100 µM e 250 µM em pelo menos um dentre sangue, soro e plasma.
12. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o primeiro agente terapêutico é um membro da família eritromicina ou um conjugado de um membro da família eritromicina e um ácido graxo.
13. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo agente terapêutico é um membro da família tetraciclina ou um conjugado de um membro da família doxiciclina e um ácido graxo.
14. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende um dentre:
,
, em que n é um número inteiro de 1-20;
, em que n é um número inteiro de 1-20;
, em que n é um número inteiro de 1-20;
, em que n é um número inteiro de 1-20;
, em que n é um número inteiro de 1-20;
, em que n é um número inteiro de 1-20;
e , em que n é um número inteiro de 1-20.
15. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o terceiro agente terapêutico é um composto que tem a fórmula , em que n é um número inteiro de 1-20.
16. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o primeiro agente terapêutico é um conjugado de azitromicina e ácido mirístico, o segundo agente terapêutico é um conjugado de doxiciclina e ácido mirístico e o terceiro agente terapêutico é um dentre Vitamina C, palmitato de ascorbila ou um derivado de ascorbato.
17. Composição, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADA pelo fato de que o o primeiro agente terapêutico, o segundo agente terapêutico e o terceiro agente terapêutico são encapsulados em um sistema de entrega de fármaco lipossomal.
18. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos um agente terapêutico é quimicamente modificado com pelo menos um dentre TPP; um derivado de TPP; 2-buteno-1,4-bis-TPP; 2-clorobenzil- TPP; 3-metilbenzil-TPP; 2,4-diclorobenzil-TPP; 1-naftilmetil-TPP; p-xililenobis-TPP; um derivado de 2-buteno-1,4-bis-TPP; um derivado de 2-clorobenzil-TPP; um derivado de 3-metilbenzil-TPP; um derivado de 2,4-diclorobenzil-TPP; um derivado de 1-naftilmetil-TPP; um derivado de p-xililenobis-TPP; guanidínio; um derivado de guanidínio; quinolínio; uma porção química à base de quinolínio; um éster de colina; rodamina; um derivado de rodamina; piridínio; iodeto de (E)-4-(1H-Indol-3-ilvinil)-N- metilpiridínio (F16); um derivado de sulfonil-ureia; diazóxido; e laranja de 10-N-nonil acridina.
19. Composição, de acordo com a reivindicação 1, sendo que a composição é CARACTERIZADA pelo fato de que possui atividade anticancerígena e pelo menos um dentre atividade de radiossensibilidade e atividade de fotossensibilidade.
20. Composição, de acordo com a reivindicação 1, sendo que a composição é CARACTERIZADA pelo fato de que sensibiliza células cancerígenas para pelo menos um dentre agentes quimioterápicos, substâncias naturais e restrição calórica.
21. Composição, de acordo com a reivindicação 1, sendo que a composição é CARACTERIZADA pelo fato de que extermina seletivamente células senescentes.
22. Composição, de acordo com a reivindicação 1, sendo que a composição é CARACTERIZADA pelo fato de que impede a aquisição de um fenótipo secretor associado à senescência.
23. Composição, de acordo com a reivindicação 1, sendo que a composição é CARACTERIZADA pelo fato de que facilita a regeneração e reparação de tecido.
24. Composição, de acordo com a reivindicação 1, sendo que a composição é CARACTERIZADA pelo fato de que aumenta pelo menos um dentre ciclo de vida e vida-útil do organismo.
25. Método para um dentre tratar e erradicar células cancerígenas, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar simultaneamente, em um paciente que necessita do mesmo, um primeiro agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial grande, administrar uma quantidade eficaz de um segundo agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno e um terceiro agente terapêutico que induz estresse oxidativo mitocondrial.
26. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende azitromicina, o segundo agente terapêutico compreende doxiciclina e o terceiro agente terapêutico é Vitamina C.
27. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o terceiro agente terapêutico menos é um dentre Vitamina C e palmitato de ascorbila, o primeiro agente terapêutico compreende um membro da família eritromicina conjugado com um primeiro ácido graxo e o segundo agente terapêutico compreende um membro da família tetraciclina conjugado com um segundo ácido graxo.
28. Método, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que pelo menos um dentre o primeiro ácido graxo e o segundo ácido graxo compreende ácido mirístico.
29. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que pelo menos um agente terapêutico compreende um conjugado com uma porção química de ácido graxo.
30. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende um dos compostos da reivindicação 14 e o segundo agente terapêutico compreende um conjugado de doxiciclina e ácido mirístico.
31. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que pelo menos um agente terapêutico compreende um conjugado com uma porção química de TPP.
32. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o terceiro agente terapêutico é radiação.
33. Método, de acordo com a reivindicação 26, CARACTERIZADO pelo fato de que a concentração de pelo menos um dentre azitromicina e doxiciclina é sub- antimicrobial, e a concentração de Vitamina C é suficiente para atingir uma concentração de pico de Vitamina C entre 100 µM e 250 µM em pelo menos um dentre sangue, soro e plasma.
34. Método, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADO pelo fato de que as células cancerígenas compreendem pelo menos uma dentre células-tronco de câncer, células-tronco de câncer energéticas, células tumorais circulantes e células cancerígenas resistentes à terapia.
35. Composição farmacêutica para tratar câncer, sendo que a composição farmacêutica é CARACTERIZADA pelo fato de que compreende a combinação de um primeiro agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial grande, um segundo agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno, e um terceiro agente terapêutico que induz um estresse oxidativo mitocondrial.
36. Composição, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADA pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende azitromicina, o segundo agente terapêutico compreende doxiciclina e o terceiro agente terapêutico compreende um dentre Vitamina C, palmitato de ascorbila e um derivado de ascorbato.
37. Composição, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADA pelo fato de que a concentração de pelo menos um dentre azitromicina e doxiciclina é sub- antimicrobial, e a concentração do pelo menos um dentre Vitamina C e um derivado de ascorbato é suficiente para atingir uma concentração de pico de Vitamina C de entre 100 µM e 250 µM em pelo menos um dentre sangue, plasma e soro.
38. Composição, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADA pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende um dos compostos da reivindicação 14, o segundo agente terapêutico compreende um conjugado de doxiciclina e um segundo ácido graxo, e o terceiro agente terapêutico compreende pelo menos um dentre Vitamina C, palmitato de ascorbila e um derivado de ascorbato.
39. Composição, de acordo com a reivindicação 38, CARACTERIZADA pelo fato de que pelo menos um dentre o primeiro ácido graxo e o segundo ácido graxo é ácido mirístico.
40. Método para um dentre tratar e prevenir pelo menos um dentre reincidência de tumor, metástase, resistência a fármaco, resistência à radioterapia e caquexia, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar simultaneamente um primeiro agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial grande, um segundo agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno e um terceiro agente terapêutico que induz estresse oxidativo mitocondrial.
41. Método, de acordo com a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende um dos compostos da reivindicação 14, o segundo agente terapêutico compreende doxiciclina ou um conjugado de doxiciclina e um segundo ácido graxo, e o terceiro agente terapêutico compreende pelo menos um dentre Vitamina C, um derivado de ascorbato, um quimioterápico e terapia por radiação.
42. Método, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADO pelo fato de que a concentração de pelo menos um dentre o primeiro agente terapêutico e o segundo agente terapêutico é sub-antimicrobial, e o terceiro agente terapêutico é Vitamina C em uma concentração suficiente para atingir uma concentração de pico de Vitamina C entre 100 µM e 250 µM em pelo menos um dentre sangue, plasma e soro.
43. Método, de acordo com a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que a administração é realizada em pelo menos um dentre antes de um tratamento contra câncer, com um tratamento contra câncer e após um tratamento contra câncer.
44. Composição farmacêutica para prevenir pelo menos um dentre reincidência de tumor, metástase, resistência a fármaco, caquexia e resistência à radioterapia, sendo que a composição farmacêutica é CARACTERIZADA pelo fato de que compreende a combinação de um primeiro agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial grande, um segundo agente terapêutico que inibe biogênese mitocondrial e tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno e um terceiro agente terapêutico que induz estresse oxidativo mitocondrial.
45. Composição, de acordo com a reivindicação 44, CARACTERIZADA pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende azitromicina ou um conjugado de azitromicina e um primeiro ácido graxo, o segundo agente terapêutico compreende doxiciclina ou um conjugado de doxiciclina e um segundo ácido graxo e o terceiro agente terapêutico compreende um dentre Vitamina C, aplmitato de ascorbila e um derivado de ascorbato.
46. Composição, de acordo com a reivindicação 45, CARACTERIZADA pelo fato de que a concentração de pelo menos um dentre o primeiro agente terapêutico e o segundo agente terapêutico é sub-antimicrobial, e a concentração do terceiro agente terapêutico é suficiente para atingir uma concentração de pico de Vitamina C entre 100 µM e 250 µM em pelo menos um dentre sangue, plasma e soro.
47. Composição, de acordo com a reivindicação 44, CARACTERIZADA pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende um dos compostos da reivindicação 14.
48. Método terapêutico anticancerígeno CARACTERIZADO pelo fato de que compreende simultaneamente: inibição biogênese mitocondrial com um primeiro agente terapêutico que tem como alvo o ribossomo mitocondrial grande, inibição biogênese mitocondrial com um segundo agente terapêutico e tem como alvo o ribossomo mitocondrial pequeno, e indução de estresse oxidativo mitocondrial em células cancerígenas com um terceiro agente terapêutico.
49. Método, de acordo com a reivindicação 48, CARACTERIZADO pelo fato de que o primeiro agente terapêutico, o segundo agente terapêutico e o terceiro agente terapêutico são administrados em pelo menos um dentre antes de um tratamento contra câncer, com um tratamento contra câncer e após um tratamento contra câncer.
50. Método, de acordo com a reivindicação 48, CARACTERIZADO pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende azitromicina ou um conjugado de azitromicina e um primeiro ácido graxo, o segundo agente terapêutico compreende doxiciclina ou um conjugado de doxiciclina e um segundo ácido graxo e o terceiro agente terapêutico compreende Vitamina C.
51. Método, de acordo com a reivindicação 50, CARACTERIZADO pelo fato de que a concentração de pelo menos um dentre o primeiro agente terapêutico e o segundo agente terapêutico é sub-antimicrobial, e a concentração de Vitamina C é suficiente para atingir uma concentração de pico de Vitamina C entre 100 µM e 250 µM em pelo menos um dentre sangue, plasma e soro.
52. Método, de acordo com a reivindicação 48, CARACTERIZADO pelo fato de que o terceiro agente terapêutico é pelo menos um dentre Vitamina C, palmitato de ascorbila, um derivado de ascorbato, um quimioterápico e terapia por radiação.
53. Método, de acordo com a reivindicação 48, CARACTERIZADO pelo fato de que pelo menos um agente terapêutico é quimicamente modificado com um dentre um sinal de alvejamento de membrana e um sinal de alvejamento de mitocôndria.
54. Método, de acordo com a reivindicação 48, CARACTERIZADO pelo fato de que o primeiro agente terapêutico compreende um dos compostos da reivindicação 14.
55. Método, de acordo com a reivindicação 48, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que extermina pelo menos uma dentre células-tronco de câncer, células-tronco de câncer energéticas, células tumorais circulantes e células cancerígenas resistentes à terapia.
56. Método, de acordo com a reivindicação 48, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que aumenta sensibilidade à célula cancerígena a pelo menos um dentre agentes de quimioterapia, radioterapia, quimioterápicos, substâncias naturais e restrição calórica.
57. Método, de acordo com a reivindicação 48, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que pelo menos um extermina células senescentes; impede aquisição de um fenótipo secretor associado à senescência e facilita a regeneração e a reparação de tecido.
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4153563A4 (en) * 2020-05-13 2024-06-19 Lunella Biotech, Inc. MYRISTOYL DERIVATIVES OF 9-AMINO-DOXYCYCLINE FOR TARGETING CANCER STEM CELLS AND PREVENTING METASTASIS
WO2023200824A1 (en) * 2022-04-13 2023-10-19 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Delivery system to target gram-negative bacteria

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK149776C (da) * 1984-01-06 1987-04-21 Orion Yhtymae Oy Antibiotisk virksom erytromycinforbindelse og praeparat indeholdende forbindelsen
JP4573925B2 (ja) * 1998-07-09 2010-11-04 アベンティス・ファーマ・ソシエテ・アノニム 新規のエリスロマイシン誘導体、その製造方法及びその薬剤としての使用
RU2223103C1 (ru) * 2002-07-17 2004-02-10 Открытое акционерное общество "Биосинтез" Фармацевтическая композиция, обладающая антибактериальным действием
CN1837229A (zh) * 2005-08-05 2006-09-27 济南思创生物技术有限公司 克拉霉素衍生物及其制备方法和药物应用
WO2009038656A1 (en) * 2007-09-17 2009-03-26 Kosta Steliou Mitochondria-targeting antioxidant therapeutics
US20100173024A1 (en) * 2008-12-01 2010-07-08 LifeSpan Extension, LLC Methods and compositions for altering health, wellbeing, and lifespan
WO2013024467A2 (en) * 2011-08-18 2013-02-21 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Mitochondrial ribosomal proteins as aging regulators
GB201217310D0 (en) * 2012-09-27 2012-11-14 C10 Pharma As Compounds
CN103536530A (zh) * 2013-10-30 2014-01-29 王玉万 盐酸多西环素长效注射剂及制备方法
IL305316B2 (en) * 2017-03-15 2024-09-01 Lunella Biotech Inc Mitoriboscines: Mitochondrial-Based Therapies Targeting Cancer Cells, Bacteria, and Pathogenic Yeasts
CA3060510A1 (en) * 2017-04-21 2018-10-25 Lunella Biotech, Inc. Vitamin c and doxycycline: a synthetic lethal combination therapy for eradicating cancer stem cells (cscs)
PE20200605A1 (es) * 2017-05-19 2020-03-10 Lunella Biotech Inc Antimitoscinas: inhibidores especificos de la biogenesis mitocondrial para erradicar celulas madre cancerosas

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