BR112021008249A2

BR112021008249A2 - sais cristalinos de um inibidor de calicreína plasmática

Info

Publication number: BR112021008249A2
Application number: BR112021008249-2A
Authority: BR
Inventors: Yahya El-Kattan; Yarlagadda S. Babu
Original assignee: Biocryst Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 2018-11-02
Filing date: 2019-11-01
Publication date: 2021-08-03
Also published as: CO2021007172A2; CN112969458A; JP2024109860A; TW202031255A; US20240109844A1; PH12021550883A1; AR116951A1; EP3873463A1; SG11202103804TA; US20200140389A1; US11117867B2; PE20211280A1; JP2022505670A; US20200308118A1; KR20210087037A; UY38438A; US11618733B2; EA202191192A1; WO2020092898A1; MX2021004917A

Abstract

SAIS CRISTALINOS DE UM INIBIDOR DE CALICREÍNA PLASMÁTICA. São divulgados sais cristalinos do Composto I, métodos para prepará-los e preparações farmacêuticas dos mesmos relacionadas. Também são divulgados métodos de tratamento usando os sais cristalinos da invenção.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “SAIS CRISTALINOS DE UM INIBIDOR DE CALICREÍNA PLASMÁTICA”.

PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica o benefício e prioridade do Pedido de Patente Provisório U.S. número de série do 62/754.983, depositado em 2 de novembro de 2018, cujos conteúdos são incorporados a este documento por referência. Antecedentes

[002] Serina proteases constituem o maior e mais extensamente estudado grupo de enzimas proteolíticas. Seus papéis críticos nos processos fisiológicos se estendem por diversas áreas como coagulação do sangue, fibrinólise, ativação do complemento, reprodução, digestão e liberação de peptídeos fisiologicamente ativos. Muitos desses processos vitais começam com a clivagem de uma única ligação peptídica ou de algumas ligações peptídicas na proteína ou peptídeos precursores. As reações ou cascatas proteolíticas sequenciais limitadas estão envolvidas na coagulação do sangue, fibrinólise e ativação do complemento. Os sinais biológicos para iniciar essas cascatas também podem ser controlados e amplificados. Da mesma forma, a proteólise controlada pode desligar ou inativar proteínas ou peptídeos por meio de clivagens de ligação simples.

[003] As calicreínas são um subgrupo de serina proteases. Em humanos, a calicreína plasmática (KLKB1) não tem homólogo conhecido, enquanto as peptidases relacionadas à calicreína tecidual (KLKs) codificam uma família de quinze serina proteases intimamente relacionadas. A calicreína plasmática participa de várias vias relacionadas à via intrínseca da coagulação, inflamação e sistema de complemento.

[004] A coagulação é o processo pelo qual o sangue forma coágulos, por exemplo, para parar o sangramento. A fisiologia da coagulação é um tanto complexa, na medida em que inclui duas vias iniciais separadas, que convergem em uma via comum final que leva à formação do coágulo. Na via comum final, a protrombina é convertida em trombina, que por sua vez converte o fibrinogênio em fibrina, sendo esta última o principal bloco de construção dos polímeros de fibrina reticulados que formam um tampão hemostático. Das duas vias iniciais a montante da via final comum, uma é conhecida como ativação de contato ou via intrínseca e a outra é conhecida como fator tecidual ou via extrínseca.

[005] A via intrínseca começa com a formação de um complexo primário no colágeno pelo cininogênio de alto peso molecular (HMWK), pré-calicreína e FXII (Fator XII; fator de Hageman). A pré-calicreína é convertida em calicreína e o FXII é ativado para se tornar FXIIa. FXIIa então converte o Fator XI (FXI) em FXIa, e FXIa por sua vez ativa o Fator IX (FIX), que com seu cofator FVIIIa forma o complexo “tenase”, que ativa o Fator X (FX) em FXa. É o FXa que é responsável pela conversão da protrombina em trombina dentro da via comum final.

[006] A pré-calicreína, o precursor inativo da calicreína plasmática, é sintetizada no fígado e circula no plasma ligada a HMWK ou como um zimogênio livre. A pré-calicreína é clivada pelo fator XII (FXIIa) ativado para liberar a calicreína plasmática (PK) ativada. A calicreína plasmática ativada exibe atividade de endopeptidase em direção a ligações peptídicas após arginina (preferencial) e lisina. A PK então gera FXIIa adicional em uma alça de retorno que, por sua vez, ativa o fator XI (FXI) para que FXIa se conecte à via comum. Embora a ativação inicial da via intrínseca seja por meio de uma pequena quantidade de FXIIa ativando uma pequena quantidade de PK, é a ativação de feedback subsequente de FXII por PK que controla a extensão da ativação da via intrínseca e, portanto, a coagulação a jusante. Hathaway, W. E., et al. (1965) Blood 26:521-32.

[007] A calicreína plasmática ativada também cliva o HMWK para liberar o potente peptídeo vasodilatador bradicinina. Também é capaz de clivar várias proteínas precursoras inativas para gerar produtos ativos, como a plasmina (do plasminogênio) e a uroquinase (da prouroquinase). A plasmina, um regulador da coagulação, cliva proteoliticamente a fibrina em produtos de degradação da fibrina que inibem a formação excessiva de fibrina.

[008] Os pacientes que sofreram infarto agudo do miocárdio (MI) apresentam evidências clínicas de estarem em um estado hipercoagulável (promotor de coágulos). Esta hipercoagulabilidade é paradoxalmente adicionalmente agravada nos pacientes que recebem terapia fibrinolítica. O aumento da geração de trombina, medido pelos níveis de trombina-antitrombina III (TAT), é observado em pacientes submetidos a tal tratamento, em comparação com os níveis já elevados observados naqueles que receberam apenas heparina. Hoffmeister, H. M. et al. (1998) Circulation 98:2527-33. Foi proposto que o aumento da trombina resulta da ativação da via intrínseca mediada pela plasmina por ativação direta do FXII pela plasmina.

[009] A hipercoagulabilidade induzida por fibrinólise não apenas leva a taxas aumentadas de reoclusão, mas também é provavelmente responsável, pelo menos em parte, pela falha em atingir fibrinólise completa do coágulo (trombo), uma grande deficiência da terapia fibrinolítica (Keeley, E. C. et al. (2003) Lancet 361: 13-20). Outro problema na terapia fibrinolítica é o risco elevado de hemorragia intracraniana que a acompanha. Menon, V. et al. (2004) (Chest 126:549S-575S; Fibrinolytic Therapy Trialists' Collaborative Group (1994) Lancet 343:311-22. Portanto, uma terapia anticoagulante adjuvante que não aumente o risco de sangramento, e sim inibe a formação de nova trombina, seria muito benéfica.

[0010] Os inibidores da calicreína plasmática também têm potencial terapêutico para o tratamento do angioedema hereditário (HAE). O HAE é uma doença genética rara, grave e potencialmente fatal, causada por mutações no gene inibidor da esterase C1 (C1INH), localizado no cromossomo 11q. O HAE é herdado como uma condição autossômica dominante, embora um quarto dos casos diagnosticados resulte de uma nova mutação. O HAE foi classificado como uma doença órfã na Europa, com uma prevalência estimada de 1 em 50.000. Os indivíduos com HAE apresentam ataques agudos recorrentes de edema subcutâneo ou submucoso doloroso da face, laringe, trato gastrointestinal, membros ou genitais que, se não tratados, podem durar até 5 dias. Os ataques variam em frequência, gravidade e localização e podem ser fatais. Ataques laríngeos, com potencial de asfixia, representam o maior risco. Ataques abdominais são especialmente dolorosos e geralmente resultam em procedimentos exploratórios ou cirurgias desnecessárias. Ataques faciais e periféricos são desfigurantes e debilitantes.

[0011] O HAE tem vários subtipos. O HAE tipo I é definido por mutações no gene C1INH que produzem baixos níveis de inibidor de C1, enquanto o HAE tipo II é definido por mutações que produzem níveis normais de proteína C1 ineficaz. O HAE tipo III tem patogênese separada, sendo causado por mutações no gene F12 que codifica a serina protease conhecida como Fator XII. Os critérios de diagnóstico para distinguir os subtipos de HAE, e diferenciar o HAE de outros angioedemas, podem ser encontrados em Ann Allergy Asthma lmmunol 2008; 100(Suppl2): S30-S40 e J Allergy Clin lmmunol 2004; 114: 629- 37, incorporados a este documento por referência.

[0012] Os tratamentos atuais para o HAE se enquadram em dois tipos principais. Tratamentos não específicos mais antigos, incluindo andrógenos e antifibrinolíticos, estão associados a efeitos colaterais significativos, particularmente em mulheres. Os tratamentos mais recentes são baseados na compreensão da patologia molecular da doença, ou seja, que C1INH é o inibidor mais importante da calicreína no plasma humano e que a deficiência de C1INH leva à ativação sem oposição da cascata de calicreína-bradicinina, com a bradicinina sendo o mediador mais importante da permeabilidade vascular aumentada localmente que é a marca registrada de um ataque. Todas as terapias direcionadas disponíveis atualmente são administradas por injeção intravenosa ou subcutânea. Atualmente, não há terapia crônica oral direcionada específica para o HAE.

[0013] Portanto, existe uma necessidade de desenvolver inibidores de PK que podem inclinar o equilíbrio da fibrinólise/trombose no trombo de oclusão em direção à dissolução, promovendo assim a reperfusão e também atenuando o estado hipercoagulável, evitando assim que o trombo se forme e oclua o vaso novamente. Particularmente, a criação de inibidores de calicreína plasmática que são específicos e podem ser formulados para uso in vivo pode levar a uma nova classe de terapêuticas. Assim, o que é necessário são composições e métodos melhorados para preparar e formular inibidores de calicreína plasmática. Sumário da Invenção

[0014] Um aspecto da invenção refere-se a um sal cristalino do Composto I, I.

[0015] Outro aspecto da invenção refere-se a métodos para preparar os sais cristalinos do Composto I. Nestes aspectos, os métodos compreendem a) fornecer uma mistura de base livre do

Composto I em um primeiro solvente orgânico; b) combinar a mistura de base livre a uma solução reagente compreendendo um ácido e um segundo solvente orgânico sob condições suficientes para formar uma mistura compreendendo um sal do Composto I; e c) cristalizar o sal do Composto I a partir da mistura que compreende um sal do Composto I.

[0016] Em certas modalidades, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica, compreendendo um sal cristalino do Composto I e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, as preparações farmacêuticas podem ser para uso no tratamento ou prevenção de uma condição ou doença caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática. Breve Descrição dos Desenhos

[0017] A Figura 1 é um padrão de difração de raios X por pó (XRPD) do Composto I•2(HCl).

[0018] A Figura 2 é um espectro que mostra uma análise TG-IR do Composto I•2(HCl).

[0019] A Figura 3 mostra a concentração plasmática do Composto I•2(HCl) versus perfis de tempo no Dia 7 após a administração oral uma vez por dia (QD) do Composto I•2(HCl) a 125, 250 e 500 mg QD; e no Dia 14 após a administração oral QD do Composto I•2(HCl) a 350 mg QD. Descrição Detalhada da Invenção

[0020] Em certas modalidades, a invenção fornece um sal cristalino do Composto I, I.

[0021] O Composto I é um inibidor potente da calicreína plasmática,

descrito em WO 2015/134998 e na Publicação do Pedido de Patente U.S. Nº 2017/0073314 A1, sendo os conteúdos de ambos incorporados a este documento por referência.

[0022] Uma forma cristalina do Composto I pode ser usada para modular/melhorar as propriedades físico-químicas do composto, incluindo, mas não se limitando a, propriedades de estado sólido (por exemplo, cristalinidade, higroscopicidade, ponto de fusão ou hidratação), propriedades farmacêuticas (por exemplo, taxa de solubilidade/dissolução, estabilidade ou compatibilidade), bem como características de cristalização (por exemplo, pureza, rendimento ou morfologia). Por exemplo, a cristalização do Composto I permite o acesso ao composto com níveis de pureza consistentes e previsíveis. Adicionalmente, os tamanhos de partícula uniformes resultantes da cristalização conduzem a uma processabilidade melhorada do composto cristalino sólido em relação à forma amorfa sólida. A forma cristalina do Composto I também exibe propriedades farmacocinéticas benéficas; a uniformidade da forma do cristal leva a um perfil farmacocinético consistente e previsível.

[0023] Em certas modalidades, o sal cristalino é um sal cloridrato, por exemplo, um sal bis(cloridrato).

[0024] Em certas modalidades, o polimorfo do sal cristalino é caracterizado por difração de raios X por pó (XRPD). θ representa o ângulo de difração, medido em graus. Em certas modalidades, o difratômetro usado na XRPD mede o ângulo de difração como duas vezes o ângulo de difração θ. Assim, em certas modalidades, os padrões de difração descritos neste documento referem-se à intensidade dos raios X medida com referência ao ângulo 2θ.

[0025] O valor de pico no ângulo de difração θ, ou em duas vezes o ângulo de difração θ (2θ), pode exibir um pequeno erro de medição devido aos instrumentos de XRPD ou às condições nas quais a medição é feita. Por conseguinte, em certas modalidades, os picos característicos no padrão de XRPD têm um valor de °2θ ± 0,2°. Em certas modalidades, os picos característicos no padrão de XRPD têm um valor de °2θ ± 0,1°. Em certas modalidades, os picos característicos no padrão de XRPD têm um valor de °2θ ± 0,06°.

[0026] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,3, 9,0 e 22,0. Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,3, 9,0 e 22,0.

[0027] Em outras modalidades, o sal cristalino tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,3, 9,0, 19,8, 21,2, 22,0 e 23,3. Em certas modalidades, o sal cristalino tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,3, 9,0, 19,8, 21,2, 22,0 e 23,3.

[0028] Em ainda outras modalidades, o sal cristalino tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,3, 9,0, 14,3, 16,2, 19,8, 21,2, 22,0, 23,3, 24,6 e 30,3. Em certas modalidades, o sal cristalino tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,3, 9,0, 14,3, 16,2, 19,8, 21,2, 22,0, 23,3, 24,6 e 30,3.

[0029] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,28, 8,96 e 22,01. Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,28, 8,96 e 22,01.

[0030] Em modalidades adicionais, o sal cristalino tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,28, 8,96, 19,79, 21,16, 22,01 e 23,31. Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,28, 8,96, 19,79, 21,16, 22,01 e 23,31.

[0031] Em modalidades adicionais, o sal cristalino tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,28, 8,96, 14,27, 16,18, 19,79, 21,16, 22,01, 23,31, 24,64 e 30,31. Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,28, 8,96, 14,27, 16,18, 19,79, 21,16, 22,01, 23,31, 24,64 e 30,31.

[0032] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem um padrão de XRPD substancialmente semelhante ao mostrado na Figura 1.

[0033] A intensidade relativa, bem como os dois valores teta, de cada pico nos padrões de XRPD descritos acima, bem como o mostrado na Figura 1, podem mudar ou se deslocar sob certas condições, embora a forma cristalina seja a mesma. Ao comparar conjuntos de dados de XRPD, um versado na técnica deve ser capaz de determinar prontamente se uma forma cristalina específica é a mesma forma cristalina descrita acima e mostrada na Figura 1.

[0034] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I é complexado com água em uma proporção molar de 1:1 de sal cristalino para água. Em certas modalidades, a rede cristalina não compreende moléculas de água.

[0035] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I é complexado com água em uma proporção molar de 1:2 de sal cristalino para água. Em certas modalidades, a rede cristalina não compreende moléculas de água.

[0036] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I é complexado com água em uma proporção molar de 1:2,5 de sal cristalino para água. Em certas modalidades, a rede cristalina não compreende moléculas de água.

[0037] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem um espectro termogravimétrico-infravermelho substancialmente semelhante ao mostrado na Figura 2.

[0038] O termo "substancialmente puro", conforme usado neste documento, refere-se a um polimorfo cristalino que é superior a 90% puro, o que significa que ele contém menos de 10% de qualquer outro composto, incluindo o composto amorfo correspondente, ou um polimorfo alternativo do sal cristalino. Preferencialmente, o polimorfo cristalino é superior a 95% puro ou mesmo superior a 98% puro.

[0039] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem picos característicos no padrão de XRPD em valores de dois teta (◦2θ) como descrito acima neste documento e é substancialmente puro. Por exemplo, a forma de sal cristalino pode ser pelo menos 90% pura, preferencialmente pelo menos 95% pura, ou mais preferencialmente pelo menos 98% pura.

[0040] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I tem um padrão de XRPD que é substancialmente o mesmo que o mostrado na Figura 1 e é substancialmente puro. Por exemplo, a forma de sal cristalino pode ser pelo menos 90% pura, preferencialmente pelo menos 95% pura, ou mais preferencialmente pelo menos 98% pura. Métodos de fabricação de sais cristalinos

[0041] Em certas modalidades, a invenção refere-se a um método para a preparação dos sais cristalinos do Composto I, compreendendo a) fornecer uma mistura de base livre do Composto I em um primeiro solvente orgânico; b) combinar a mistura de base livre a uma solução reagente compreendendo um ácido e um segundo solvente orgânico sob condições suficientes para formar uma mistura compreendendo um sal do Composto I; e c) cristalizar o sal do Composto I a partir da mistura que compreende um sal do Composto I.

[0042] Em certas modalidades, o sal cristalino é um sal cloridrato, por exemplo, um sal bis(cloridrato).

[0043] Em certas modalidades, o primeiro solvente orgânico compreende um solvente polar aprótico, como acetonitrila, N,N- dimetilacetamida (DMA), dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), éter dietílico, acetato de etila, acetato de isopropila, metiletilcetona, éter metil terc-butílico (MTBE), N-metil-2-pirrolidona (NMP), tetrahidrofurano. Preferencialmente, o solvente polar aprótico é éter metil terc-butílico.

[0044] Em certas modalidades, o primeiro solvente orgânico compreende ainda um solvente não polar. Os solventes não polares incluem, por exemplo, benzeno, heptaina, hexanos e tolueno. Em certas modalidades, o solvente não polar é tolueno.

[0045] Em certas modalidades, o ácido é ácido clorídrico.

[0046] Em certas modalidades, o segundo solvente orgânico é um solvente polar prótico, como etanol, metanol, 2-propanol, 1-butanol, água ou qualquer combinação dos mesmos. Preferencialmente, o solvente polar prótico é metanol.

[0047] Em certas modalidades, a mistura compreendendo um sal do Composto I formado na etapa b) é uma solução.

[0048] Em certas modalidades, a mistura que compreende o sal do Composto I é uma solução e a etapa de cristalização do sal da mistura compreende levar a solução à supersaturação para fazer com que o Composto I se precipite da solução.

[0049] Em certas modalidades, levar a mistura que compreende o sal do Composto I à supersaturação compreende a adição lenta de um antissolvente, como heptanos, hexanos, etanol ou outro líquido polar ou não polar miscível com um solvente orgânico, deixar que a solução esfrie (com ou sem a semeadura da solução), reduzir o volume da solução ou qualquer combinação dos mesmos. Em certas modalidades, levar a mistura que compreende o sal do Composto I à supersaturação compreende adicionar um antissolvente, resfriar a solução em temperatura ambiente ou menos e reduzir o volume da solução, por exemplo, evaporando o solvente da solução. Em certas modalidades, permitir que a solução esfrie pode ser passivo (por exemplo, deixar a solução em temperatura ambiente) ou ativo (por exemplo, resfriar a solução em um banho de gelo ou freezer).

[0050] Em certas modalidades, o método de preparação compreende ainda a indução de cristalização. O método também pode compreender a etapa de secagem dos cristais, por exemplo, sob pressão reduzida. Em certas modalidades, a indução de precipitação ou cristalização compreende nucleação secundária, em que a nucleação ocorre na presença de sementes de cristais ou interações com o ambiente (paredes do cristalizador, impulsores de agitação, sonicação, etc.). Em certas modalidades, a indução da cristalização compreende semear a solução com sementes de cristais do sal do Composto I.

[0051] Em certas modalidades, o método de preparação compreende ainda o isolamento dos cristais de sal, por exemplo, filtrando os cristais, decantando o fluido dos cristais ou por qualquer outra técnica de separação adequada. Em outras modalidades, o método de preparação compreende ainda a lavagem dos cristais.

[0052] Em certas modalidades, a lavagem dos cristais compreende a lavagem com um líquido selecionado a partir de antissolvente, acetonitrila, etanol, heptanos, hexanos, metanol, tetra-hidrofurano, tolueno, água ou uma combinação dos mesmos. Conforme usado neste documento, "antissolvente" significa um solvente no qual os cristais de sal são insolúveis, minimamente solúveis ou parcialmente solúveis. Na prática, a adição de um antissolvente a uma solução na qual os cristais de sal são dissolvidos reduz a solubilidade dos cristais de sal em solução, estimulando assim a precipitação do sal. Em certas modalidades, os cristais são lavados com uma combinação de antissolvente e solvente orgânico. Em certas modalidades, o antissolvente é água, enquanto em outras modalidades é um solvente alcano, como hexano ou pentano, ou um solvente hidrocarboneto aromático, como benzeno, tolueno ou xileno.

[0053] Em certas modalidades, a lavagem dos cristais compreende a lavagem do sal cristalino do Composto I com um solvente ou uma mistura de um ou mais solventes, que são descritos acima. Em certas modalidades, o solvente ou mistura de solventes é resfriado antes da lavagem.

[0054] Em certas modalidades, o método compreende ainda a secagem do sal cristalino.

[0055] Os sais cristalinos descritos neste documento podem ser fabricados de acordo com o método descrito acima. Composições Farmacêuticas

[0056] A invenção fornece composições farmacêuticas, cada uma compreendendo um ou mais sais cristalinos da invenção e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, a composição farmacêutica compreende um sal cristalino da invenção e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, a composição farmacêutica compreende uma pluralidade de sais cristalinos da invenção e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0057] Os termos "carreador" e "carreador farmaceuticamente aceitável", conforme usados neste documento, referem-se a um diluente, adjuvante, excipiente ou veículo com o qual um composto é administrado ou formulado para administração. Exemplos não limitantes destes carreadores farmaceuticamente aceitáveis incluem líquidos, tais como água, solução salina e óleos; e sólidos, tais como goma de acácia, gelatina, pasta de amido, talco, queratina, sílica coloidal, ureia e semelhantes. Adicionalmente, agentes auxiliares, estabilizantes, espessantes, lubrificantes e corantes podem ser usados. Outros exemplos de carreadores farmacêuticos adequados são descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences por E.W. Martin, incorporado a este documento por referência em sua totalidade.

[0058] Em certas modalidades, uma composição farmacêutica da invenção compreende ainda pelo menos um agente farmaceuticamente ativo adicional que não um composto da invenção. O pelo menos um agente farmaceuticamente ativo adicional pode ser um agente útil no tratamento de uma doença ou condição caracterizada por atividade aberrante da calicreína plasmática. Por exemplo, o pelo menos um agente farmaceuticamente ativo adicional pode ser um agente anticoagulante, um agente antiplaquetário ou um agente trombolítico.

[0059] Os agentes anticoagulantes evitam a coagulação dos componentes do sangue e, portanto, evitam a formação de coágulos, por exemplo, na fibrilação atrial. Os anticoagulantes incluem, mas não se limitam a, heparina, varfarina, coumadina, dicumarol, fenprocumom, acenocumarol, biscumacetato de etila, hirudina, bivalarutina, inibidores diretos da trombina e derivados da indandiona.

[0060] Os agentes antiplaquetários inibem a agregação plaquetária e são frequentemente usados para prevenir acidente vascular cerebral tromboembólico em pacientes que sofreram ataque isquêmico transitório, acidente vascular cerebral ou fibrilação atrial. Os agentes antiplaquetários incluem, mas não se limitam a aspirina, derivados de tienopiridina, como ticlopodina e clopidogrel, dipiridamol e sulfinpirazona, bem como miméticos de RGD.

[0061] Os agentes trombolíticos lisam coágulos que causam fenômenos tromboembólicos, como acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio e tromboembolismo pulmonar. Os agentes trombolíticos incluem, mas não se limitam a plasminogênio, a2-antiplasmina, estreptoquinase, antistreplase, TNK, ativador do plasminogênio tecidual (tPA) e uroquinase. O ativador do plasminogênio tecidual inclui tPA nativo e tPA recombinante, bem como formas modificadas de tPA que retêm as atividades enzimáticas ou fibrinolíticas do tPA nativo.

[0062] As composições farmacêuticas da invenção podem ser preparadas combinando um ou mais sais cristalinos da invenção com um carreador farmaceuticamente aceitável e, opcionalmente, um ou mais agentes farmaceuticamente ativos adicionais.

[0063] Em certas modalidades, a invenção fornece uma composição farmacêutica que é formulada para o tratamento profilático ou terapêutico de uma doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática. Métodos de Uso

[0064] A presente invenção fornece compostos que inibem a formação de trombina por meio da via intrínseca e, assim, reduzem o risco de formação de novos trombos patogênicos (oclusão ou reoclusão de vasos) e também melhoram a reperfusão induzida por fibrinolítico quando administrados como terapia adjuvante com um regime fibrinolítico. Doenças e condições que podem ser tratadas usando os compostos da presente invenção incluem, mas não se limitam a, acidente vascular cerebral, inflamação, lesão de reperfusão, infarto agudo do miocárdio, trombose venosa profunda, condição pós- tratamento fibrinolítico, angina, edema, angioedema, angioedema hereditário, sepse, artrite, hemorragia, perda de sangue durante o bypass cardiopulmonar, doença inflamatória intestinal, diabetes mellitus, retinopatia, retinopatia diabética, edema macular diabético, degeneração macular diabética, edema macular relacionado à idade,

degeneração macular relacionada à idade, retinopatia proliferativa, neuropatia, hipertensão, edema cerebral, excreção aumentada de albumina, macroalbuminúria e nefropatia.

[0065] Por exemplo, em pacientes com condições de angioedema, o inibidor de PK de polipeptídeos pequenos DX-88 (ecallantide) alivia o edema em pacientes com angioedema hereditário (HAE). Williams, A. et al. (2003) Transfus. Apher. Sci. 29:255-8; Schneider, L. et al. (2007) J Allergy Clin Immunol. 120:416-22; e Levy, J. H. et al. (2006) Expert Opin. Invest. Drugs 15:1077-90. Um antagonista do receptor de bradicinina B2, Icatibant, também é eficaz no tratamento de HAE. Bork, K. et al. (2007) J. Allergy Clin. Immunol. 119:1497-1503. Como a calicreína plasmática gera bradicinina, espera-se que a inibição da calicreína plasmática iniba a produção de bradicinina.

[0066] Por exemplo, na coagulação resultante do tratamento fibrinolítico (por exemplo, tratamento com ativador do plasminogênio tecidual ou estreptoquinase), níveis mais elevados de calicreína plasmática são encontrados em pacientes submetidos à fibrinólise. Hoffmeister, H. M. et al. (1998) J. Cardiovasc. Pharmacol. 31:764-72. Foi demonstrado que a ativação da via intrínseca mediada pela plasmina ocorre no plasma e no sangue e foi acentuadamente atenuada no plasma de indivíduos deficientes em qualquer um dos componentes da via intrínseca. Ewald, G. A. et al. (1995) Circulation 91:28-36.

[0067] Os indivíduos que tiveram um infarto agudo do miocárdio apresentaram níveis elevados de calicreína plasmática ativada e trombina. Hoffmeister, H. M., et al. (1998) Circulation 98:2527-33.

[0068] DX-88 reduziu o edema cerebral, o volume do infarto e os déficits neurológicos em um modelo animal de acidente vascular cerebral isquêmico. Storini, C. et al. (2006) J. Pharm. Exp. Ther. 318:849-854. O inibidor de C1 reduziu o tamanho do infarto em um modelo de camundongo com oclusão da artéria cerebral média (MCAO).

De Simoni, M. G. et al. (2004) Am. J. Pathol. 164:1857-1863; e Akita, N. et al. (2003) Neurosurgery 52:395-400). Descobriu-se que os antagonistas do receptor B2 reduzem o volume do infarto, o inchaço do cérebro e o acúmulo de neutrófilos e foram neuroprotetores em um modelo animal de MCAO. Zausinger, S. et al. (2003) Acta Neurochir. Suppl. 86:205-7; Lumenta, D. B. et al. (2006) Brain Res. 1069:227-34; Ding-Zhou, L. et al. (2003) Br. J Pharmacol. 139:1539-47.

[0069] Com relação à perda de sangue durante bypass cardiopulmonar (CPB), verificou-se que o sistema calicreína-cinina (ou seja, contato) é ativado durante CABG (enxerto de bypass de artéria coronária). Wachtfogel, Y. T. (1989) Blood 73:468. A ativação do sistema de contato durante a CPB resulta em um aumento de até 20 vezes da bradicinina plasmática. Cugno, M. et al. (2006) Chest 120:1776-82; e Campbell, D. J. et al. (2001) Am. J. Physiol. Reg. Integr. Comp. Physiol. 281:1059-70.

[0070] Descobriu-se que os inibidores da calicreína plasmática P8720 e PKSI-527 também reduziram o inchaço das articulações em modelos de ratos com artrite. De La Cadena, R. A. et al. (1995) FASEB J. 9:446-52; Fujimori, Y. (1993) Agents Action 39:42-8. Também se descobriu que a inflamação em modelos animais de artrite foi acompanhada pela ativação do sistema de contato. Blais, C. Jr. et al. (1997) Arthritis Rheum. 40:1327-33.

[0071] Adicionalmente, descobriu-se que o inibidor de calicreína plasmática P8720 reduz a inflamação em um modelo de rato de doença inflamatória intestinal (IBD) aguda e crônica. Stadnicki, A. et al. (1998) FASEB J. 12:325-33; Stadnicki, A. et al. (1996) Dig. Dis. Sci. 41:912-20; e De La Cadena, R. A., et al. (1995) FASEB J. 9:446-52. O sistema de contato é ativado durante a inflamação intestinal aguda e crônica. Sartor, R. B. et al. (1996) Gastroenterology 110:1467-81. Descobriu-se que o antagonista do receptor B2, um anticorpo para o cininogênio de alto peso molecular, ou a redução nos níveis de cininogênio, reduziu a clinicopatologia em modelos animais de IBD. Ibid.; Arai, Y. et al. (1999) Dig. Dis. Sci. 44:845-51; e Keith, J. C. et al. (2005) Arthritis Res. Therapy 7:R769-76.

[0072] Descobriu-se que H-D-Pro-Phe-Arg-clorometilcetona (CMK), um inibidor de PK e FXII e um inibidor fisiológico (inibidor de C1), reduz a permeabilidade vascular em múltiplos órgãos e reduz lesões em sepse induzida por lipopolissacarídeos (LPS) ou bactérias em animais. Liu, D. et al. (2005) Blood 105:2350-5; Persson, K. et al. (2000) J. Exp. Med. 192:1415-24. A melhora clínica foi observada em pacientes com sepse tratados com inibidor de C1. Zeerleder, S. et al. (2003) Clin. Diagnost. Lab. Immunol. 10:529-35; Caliezi, C., et al. (2002) Crit. Care Med. 30:1722-8; e Marx, G. et al. (1999) Intensive Care Med. 25:1017-20. Descobriu-se que casos fatais de septicemia apresentam maior grau de ativação por contato. Martinez-Brotons, F. et al. (1987) Thromb. Haemost. 58:709-713; e Kalter, E. S. et al. (1985) J. Infect. Dis. 151:1019-27.

[0073] Também foi descoberto que os níveis de pré-PK são mais elevados em diabéticos, especialmente naqueles com retinopatia proliferativa, e se correlacionam com os níveis de frutosamina. Gao, B.- B., et al. (2007) Nature Med. 13:181-8; e Kedzierska, K. et al. (2005) Archives Med. Res. 36:539-43. Descobriu-se que a pré-PK também é mais alta em pessoas com neuropatia sensitivo-motora. Christie, M. et al. (1984) Thromb. Haemostas. (Stuttgart) 52:221-3. Os níveis de pré- PK são elevados em diabéticos e estão associados ao aumento da pressão arterial. Os níveis de pré-PK se correlacionam independentemente com a taxa de excreção de albumina e são elevados em diabéticos com macroalbuminúria, sugerindo que a pré-PK pode ser um marcador de nefropatia progressiva. Jaffa, A. A. et al. (2003) Diabetes 52:1215-21. Descobriu-se que os antagonistas do receptor B1 diminuem o vazamento plasmático em ratos tratados com estreptozotocina. Lawson, S. R. et al. (2005) Eur. J. Pharmacol. 514:69-

78. Os antagonistas do receptor B1 também podem impedir que camundongos tratados com estreptozotocina desenvolvam hiperglicemia e disfunção renal. Zuccollo, A. et al. (1996) Can. J. Physiol. Pharmacol. 74:586-9.

[0074] Em certos aspectos, a invenção fornece um sal cristalino do Composto I, para uso como medicamento.

[0075] Em certos aspectos, a invenção fornece métodos de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática. O método inclui a etapa de administração a um indivíduo em necessidade de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal cristalino do Composto I, tratando ou prevenindo assim a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática. Ao reduzir a atividade da calicreína plasmática no indivíduo, a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é tratada.

[0076] Os termos "tratar", "tratando" e "tratamento", conforme usados neste documento, significam prevenir, interromper ou retardar a progressão de, ou eliminar uma doença ou condição em um indivíduo. Em algumas modalidades, "tratar", "tratando" e "tratamento" significa interromper ou retardar a progressão de, ou eliminar uma doença ou condição em um indivíduo. Em algumas modalidades, "tratar", "tratando" e "tratamento" significa reduzir pelo menos uma manifestação objetiva de uma doença ou condição em um indivíduo.

[0077] O termo "quantidade eficaz", conforme usado neste documento, refere-se a uma quantidade que é suficiente para produzir um efeito biológico desejado.

[0078] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz", conforme usado neste documento, refere-se a uma quantidade que é suficiente para produzir um efeito terapêutico desejado.

[0079] O termo "inibir", conforme usado neste documento, significa diminuição em uma quantidade ou extensão objetivamente mensurável. Em várias modalidades, "inibir" significa diminuir em pelo menos 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 95 por cento em comparação com o controle relevante. Em uma modalidade, "inibir" significa diminuir 100 por cento, ou seja, interromper ou eliminar.

[0080] O termo "indivíduo", conforme usado neste documento, refere-se a um mamífero. Em várias modalidades, um indivíduo é um camundongo, rato, coelho, gato, cachorro, porco, ovelha, cavalo, vaca ou primata não humano. Em uma modalidade, um indivíduo é um ser humano.

[0081] Alternativamente, em certos aspectos, a invenção fornece um sal cristalino do Composto I para o tratamento de uma doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática.

[0082] Alternativamente, em certos aspectos, a invenção fornece o uso de um sal cristalino do Composto I para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de uma doença ou condição caracterizada por atividade aberrante da calicreína plasmática.

[0083] Como usado neste documento, uma “doença ou condição caracterizada por atividade aberrante da calicreína plasmática” refere- se a qualquer doença ou condição na qual seja desejável reduzir a atividade da calicreína plasmática. Por exemplo, pode ser desejável reduzir a atividade da calicreína plasmática em caso de ativação ou hiperativação inadequada da calicreína. Como outro exemplo, pode ser desejável reduzir a atividade da calicreína plasmática em caso de um estado hipercoagulável. Como outro exemplo, pode ser desejável reduzir a atividade da calicreína plasmática em caso de isquemia tecidual que está associada à presença ou formação de trombo.

[0084] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é selecionada do grupo que consiste em: acidente vascular cerebral, inflamação, lesão de reperfusão, infarto agudo do miocárdio, trombose venosa profunda, condição pós-tratamento fibrinolítico, angina, edema, angioedema, angioedema hereditário, sepse, artrite, hemorragia, perda de sangue durante o bypass cardiopulmonar, doença inflamatória intestinal, diabetes mellitus, retinopatia, retinopatia diabética, edema macular diabético, degeneração macular diabética, edema macular relacionado à idade, degeneração macular relacionada à idade, retinopatia proliferativa, neuropatia, hipertensão, edema cerebral, excreção aumentada de albumina, macroalbuminúria e nefropatia.

[0085] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é o angioedema.

[0086] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada por atividade aberrante da calicreína plasmática é angioedema adquirido ou angioedema hereditário (HAE).

[0087] O angioedema adquirido (AAE) (Caldwell JR, et al. Clin Immunol Immunopathol. 1972; 1:39-52) é caracterizado de várias maneiras, incluindo por deficiência adquirida de inibidor de C1 (C1-INH), hiperativação da via clássica do complemento humano e sintomas de angioedema mediados por bradicinina liberada por ativação inadequada do sistema de contato-cinina. O AAE pode estar presente em duas formas, AAE tipo 1 (que normalmente está associado a outra doença) e AAE tipo II, que normalmente está associado a uma doença autoimune. O AAE pode ser causado por vários fatores, incluindo, mas não se limitando a, doenças autoimunes (por exemplo, a produção de anticorpos anti-C1INH) ou por uma mutação adquirida em C1 INH. Além disso, os sais cristalinos do Composto I podem ser usados para tratar os efeitos colaterais dos tratamentos com inibidores da enzima de conversão da angiotensina (ACE). Os inibidores da ACE bloqueiam a principal via de degradação da bradicinina. A inibição da formação de calicreína através do uso dos sais cristalinos da invenção reduz a formação de bradicinina.

[0088] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada por atividade aberrante da calicreína plasmática é o angioedema hereditário (HAE). Em certas modalidades, o angioedema hereditário é o angioedema hereditário Tipo I. Alternativamente, o angioedema hereditário pode ser angioedema hereditário Tipo II. Alternativamente, o angioedema hereditário pode ser angioedema hereditário Tipo III.

[0089] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I é usado para o tratamento profilático de HAE. Em outras modalidades, o sal cristalino do Composto I é usado para o tratamento agudo de HAE.

[0090] Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I é usado para a prevenção ou tratamento de ataques de angioedema em um indivíduo com HAE. Em certas modalidades, o sal cristalino do Composto I é usado como um tratamento preventivo para reduzir a frequência de ataques de angioedema em um indivíduo com HAE. Em outras modalidades, o sal cristalino do Composto I é usado para o tratamento de um ataque de angioedema agudo em um indivíduo com HAE.

[0091] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é o acidente vascular cerebral.

[0092] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é a lesão de reperfusão.

[0093] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é o infarto agudo do miocárdio.

[0094] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é a hemorragia.

[0095] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é a perda de sangue durante bypass cardiopulmonar.

[0096] Em certas modalidades, a doença ou condição caracterizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é selecionada do grupo que consiste em retinopatia, retinopatia diabética, edema macular diabético, degeneração macular diabética, edema macular relacionado à idade, degeneração macular relacionada à idade e retinopatia proliferativa. Formulações, Vias de Administração e Dosagem

[0097] Os sais cristalinos do Composto I descritos neste documento podem ser formulados como composições farmacêuticas e administrados a um hospedeiro mamífero, como um paciente humano, em uma variedade de formas adaptadas à via de administração escolhida, por exemplo, oralmente ou parenteralmente, por via intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, tópica ou subcutânea. Vias adicionais de administração também são contempladas pela invenção.

[0098] Assim, os sais cristalinos do Composto I (também referidos neste documento como um "composto ativo") podem ser administrados sistemicamente, por exemplo, por via oral, em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável, como um diluente inerte ou um carreador comestível assimilável. Podem ser envoltos em cápsulas de gelatina dura ou moles, podem ser comprimidos em comprimidos ou podem ser incorporados diretamente com o alimento da dieta do paciente. Para a administração terapêutica oral, o composto ativo pode ser combinado com um ou mais excipientes e usado na forma de comprimidos ingeríveis, comprimidos bucais, trociscos, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, bolachas e semelhantes. Tais composições e preparações devem conter pelo menos 0,1% de composto ativo. A porcentagem das composições e preparações pode, naturalmente, ser variada e pode ser convenientemente entre cerca de 2% a cerca de 60% do peso de uma forma de dosagem unitária. A quantidade de composto ativo nessas composições terapeuticamente úteis é tal que um nível de dosagem eficaz será obtido.

[0099] Os comprimidos, trociscos, pílulas, cápsulas e semelhantes também podem conter os seguintes diluentes e carreadores: aglutinantes, tais como goma de tragacanto, acácia, amido de milho ou gelatina; excipientes, tais como fosfato dicálcico; um agente desintegrante, tal como amido de milho, amido de batata, ácido algínico e semelhantes; um lubrificante, tal como estearato de magnésio; e um agente edulcorante, tal como sacarose, frutose, lactose ou aspartame, ou um agente aromatizante, tal como hortelã-pimenta, óleo de gualtéria ou aromatizante de cereja, pode ser adicionado. Quando a forma de dosagem unitária é uma cápsula, ela pode conter, além dos materiais do tipo acima, um carreador líquido, tal como um óleo vegetal ou um polietilenoglicol. Vários outros materiais podem estar presentes como revestimentos ou podem modificar de outro modo a forma física da forma de dosagem unitária sólida. Por exemplo, comprimidos, pílulas ou cápsulas podem ser revestidos com gelatina, cera, goma-laca ou açúcar e semelhantes. Um xarope ou elixir pode conter o composto ativo, sacarose ou frutose como um agente edulcorante, metila e propilparabenos como conservantes, um corante e aromatizante como cereja ou laranja. É óbvio que qualquer material usado na preparação de qualquer forma de dosagem unitária deve ser farmaceuticamente aceitável e substancialmente não tóxico nas quantidades utilizadas. Ademais, o composto ativo pode ser incorporado em preparações e dispositivos de liberação sustentada.

[00100] O composto ativo pode também ser administrado por via intravenosa ou intraperitoneal por infusão ou injeção. As soluções do composto ativo podem ser preparadas em água ou solução aquosa fisiologicamente aceitável, opcionalmente misturada a um surfactante não tóxico. As dispersões também podem ser preparadas em glicerol, polietilenoglicóis líquidos, triacetina e misturas destes e em óleos. Em condições normais de armazenamento e uso, essas preparações contêm um conservante para evitar o crescimento de microrganismos.

[00101] As formas de dosagem farmacêutica apropriadas para injeção ou infusão podem incluir soluções aquosas estéreis ou dispersões ou pós estéreis compreendendo o composto ativo, que são adaptados para a preparação extemporânea de soluções injetáveis ou infusíveis estéreis ou dispersões, opcionalmente encapsuladas em lipossomas. Em todos os casos, a forma de dosagem final deve ser estéril, fluida e estável nas condições de fabricação e armazenamento. O carreador ou veículo líquido pode ser um solvente ou meio de dispersão líquido compreendendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol e polietilenoglicol líquido e similares), óleos vegetais, ésteres de glicerina não tóxicos e misturas adequadas destes. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pela formação de lipossomas, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersões ou pelo uso de surfactantes. A prevenção da ação de micro-organismos pode ser alcançada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal e semelhantes. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, tampões ou cloreto de sódio. Absorção prolongada das composições injetáveis pode ser provocada pelo uso nas composições de agentes que atrasam a absorção, por exemplo, o monoestearato de alumínio e gelatina.

[00102] Soluções injetáveis estéreis são preparadas incorporando o composto ativo na quantidade necessária no solvente apropriado com vários dos outros ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido por esterilização por filtro. No caso dos pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação podem incluir técnicas de secagem a vácuo e de liofilização que produzem um pó do composto ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado presente nas soluções previamente esterilizadas e filtradas.

[00103] Para administração tópica, os sais cristalinos do Composto I podem ser aplicados na forma pura, ou seja, quando são preparados em líquidos. No entanto, será geralmente desejável administrá-los na pele como composições ou formulações, em combinação com um carreador dermatologicamente aceitável, que pode ser um sólido ou um líquido.

[00104] Os carreadores sólidos úteis incluem sólidos finamente divididos como talco, argila, celulose microcristalina, sílica, alumina e similares. Os carreadores líquidos úteis incluem água, álcoois ou glicóis ou misturas de água-álcool/glicol, em que os sais cristalinos da invenção podem ser dissolvidos ou dispersos em níveis eficazes, opcionalmente com o auxílio de surfactantes não tóxicos. Adjuvantes, tais como fragrâncias e agentes antimicrobianos adicionais podem ser adicionados para otimizar as propriedades para um determinado uso. As composições líquidas resultantes podem ser aplicadas a partir de almofadas absorventes, utilizadas para impregnar ligaduras e outros pensos, ou pulverizadas sobre a área afetada utilizando pulverizadores do tipo bomba ou aerossol.

[00105] Espessantes como polímeros sintéticos, ácidos graxos, sais de ácidos graxos e ésteres, álcoois graxos, celuloses modificadas ou materiais minerais modificados também podem ser usados com carreadores líquidos para formar pastas que podem ser espalhadas,

géis, pomadas, sabonetes e similares para aplicação diretamente sobre a pele do usuário.

[00106] Exemplos de composições dermatológicas úteis que podem ser utilizadas para administrar os sais cristalinos da invenção na pele são conhecidos na técnica; por exemplo, ver Jacquet et al. (Patente U.S. Nº. 4.608.392; incorporada a este documento por referência), Geria (Patente U.S. Nº. 4.992.478; incorporada a este documento por referência), Smith et al. (Patente U.S. Nº. 4.559.157; incorporada a este documento por referência) e Wortzman (Patente U.S. Nº. 4.820.508; incorporada a este documento por referência).

[00107] As dosagens úteis dos sais cristalinos do Composto I podem ser determinadas, pelo menos inicialmente, comparando sua atividade in vitro e in vivo em modelos animais. Os métodos para a extrapolação de dosagens eficazes em camundongos, e outros animais, para humanos são conhecidos na técnica; por exemplo, ver a Patente U.S. Nº 4.938.949 (incorporada a este documento por referência).

[00108] A quantidade do sal cristalino do Composto I necessária para uso no tratamento irá variar não apenas com o sal cristalino específico selecionado, mas também com a via de administração, a natureza da condição a ser tratada e a idade e condição do paciente e, em última análise, ficará a critério do médico ou clínico assistente.

[00109] Em geral, no entanto, uma dose adequada estará na faixa de cerca de 0,5 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal do receptor por dia, por exemplo, de cerca de 3 a cerca de 90 mg/kg de peso corporal por dia, de cerca de 6 a cerca de 75 mg por quilograma de peso corporal por dia, de cerca de 10 a cerca de 60 mg/kg de peso corporal por dia, ou de cerca de 15 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal por dia.

[00110] Os sais cristalinos do Composto I podem ser convenientemente formulados na forma de dosagem unitária; por exemplo, contendo de 5 a 1000 mg, de 10 a 750 mg, de 50 a 500 mg,

de 75 mg a 350 mg, de 75 mg a 300 mg, de 75 mg a 250 mg, de 75 mg a 200 mg, de 75 mg a 175 mg, de 75 mg a 150 mg, de 75 mg a 125 mg, de 100 mg a 750 mg, de 100 mg a 500 mg, de 100 mg a 350 mg, de 100 mg a 300 mg, de 100 mg a 250 mg, de 100 mg a 200 mg, de 100 mg a 175 mg, de 100 mg a 150 mg, de 100 mg a 125 mg, de 125 mg a 350 mg, de 125 mg a 300 mg, de 125 mg a 250 mg, de 125 mg a 200 mg, de 125 mg a 175 mg, de 125 mg a 150 mg, incluindo, por exemplo, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 125 mg, 150 mg, 175 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg, 550 mg, 600 mg, 650 mg, 700 mg, 750 mg, 800 mg, 850 mg, 900 mg, 950 mg, 1000 mg e outras dosagens unitárias que se enquadrem nas faixas de dosagem unitária anteriores, do composto ativo por forma de dosagem unitária. Em uma modalidade, a invenção fornece uma composição compreendendo um sal cristalino do Composto I formulado nesta forma de dosagem unitária. A dose desejada pode ser convenientemente apresentada em uma dose única ou em doses divididas a serem administradas em intervalos apropriados, por exemplo, duas, três, quatro ou mais subdoses por dia. A subdose propriamente dita pode ser adicionalmente dividida, por exemplo, em várias administrações discretas espaçadas livremente.

[00111] Os sais cristalinos do Composto I também podem ser administrados em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, outros agentes que são úteis para o tratamento ou prevenção de isquemia, perda de sangue ou lesão de reperfusão.

[00112] Outros sistemas de distribuição podem incluir sistemas de distribuição de liberação ao longo do tempo, liberação retardada ou de liberação sustentada, como os bem conhecidos na técnica. Estes sistemas podem evitar administrações repetidas do composto ativo, aumentando a conveniência para o indivíduo e o médico. Muitos tipos de sistemas de distribuição por liberação estão disponíveis e são conhecidos pelos versados na técnica. O uso de um implante de liberação sustentada de longo prazo pode ser desejável. Liberação em longo prazo, como usado neste documento, significa que o sistema de distribuição ou implante é construído e estruturado para fornecer níveis terapêuticos do composto ativo por pelo menos 30 dias e preferencialmente 60 dias.

[00113] Em certas modalidades, um sal cristalino do Composto I é formulado para administração intraocular, por exemplo, injeção direta ou inserção dentro ou em associação com um dispositivo médico intraocular.

[00114] Os sais cristalinos do Composto I podem ser formulados para serem depositados em um dispositivo médico, que pode incluir qualquer um de uma variedade de enxertos convencionais, stents, incluindo enxertos de stent, cateteres, balões, cestas ou outro dispositivo que possa ser colocado ou permanentemente implantado dentro de um lúmen corporal. Como um exemplo específico, seria desejável ter dispositivos e métodos que possam distribuir sais cristalinos da invenção à região de um corpo que foi tratada por técnica de intervenção.

[00115] Em modalidades de exemplo, um sal cristalino do Composto I pode ser depositado dentro de um dispositivo médico, como um stent, e distribuído ao local de tratamento para o tratamento de uma porção do corpo.

[00116] Os stents têm sido usados como veículos de distribuição de agentes terapêuticos (ou seja, drogas). Os stents intravasculares geralmente são implantados de forma permanente em vasos coronários ou periféricos. Os designs de stents incluem os da Patente U.S. Nº.

4.733.655 (Palmaz), Patente U.S. Nº. 4.800.882 (Gianturco) ou Patente U.S. Nº. 4.886.062 (Wiktor). Esses designs incluem stents metálicos e poliméricos, bem como stents autoexpansíveis e balão expansíveis. Os stents também podem ser usados para distribuir uma droga ao local de contato com a vasculatura, conforme divulgado na Patente U.S. Nº.

5.102.417 (Palmaz), Patente U.S. Nº. 5.419.760 (Narciso, Jr.), Patente U.S. Nº. 5.429.634 (Narciso, Jr.) e nos Pedidos de Patente Internacional Nºs. WO 91/12779 (Medtronic, Inc.) e WO 90/13332 (Cedars-Sanai Medical Center), por exemplo.

[00117] O termo "depositado" significa que o composto ativo é revestido, adsorvido, colocado ou incorporado de outra forma ao dispositivo por métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, o composto pode ser incorporado e liberado da parte interna ("tipo de matriz") ou rodeado por e liberado através ("tipo de reservatório") de materiais poliméricos que revestem o ou se espalham pelo dispositivo médico. No último exemplo, o composto pode ser envolvido pelos materiais poliméricos ou acoplado aos materiais poliméricos usando uma ou mais das técnicas para gerar tais materiais conhecidos na técnica. Em outras formulações, o composto pode ser ligado à superfície do dispositivo médico sem a necessidade de um revestimento, por exemplo, por meio de ligações destacáveis, e liberado com o tempo ou pode ser removido por processos mecânicos ou químicos ativos. Em outras formulações, o composto pode estar em uma forma permanentemente imobilizada que apresenta o composto no local de implantação.

[00118] Em certas modalidades, o composto ativo pode ser incorporado a composições de polímero durante a formação de revestimentos biocompatíveis para dispositivos médicos, como stents. Os revestimentos produzidos a partir desses componentes são tipicamente homogêneos e são úteis para revestir vários dispositivos projetados para implantação.

[00119] O polímero pode ser um polímero bioestável ou bioabsorvível dependendo da taxa de liberação desejada ou do grau desejado de estabilidade do polímero, mas frequentemente um polímero bioabsorvível é preferencial para esta modalidade, uma vez que, ao contrário de um polímero bioestável, não estará presente por muito tempo depois implantação para causar qualquer resposta local adversa e crônica.

Polímeros bioabsorvíveis que podem ser usados incluem, mas não se limitam a, ácido poli(L-láctico), policaprolactona, poliglicolídeo (PGA), poli(lactídeo-co-glicolídeo) (PLLA/PGA), poli(hidroxibutirato), poli(hidroxibutirato-co-valerato), polidioxanona, poliortoéster, polianidrido, ácido poli(glicólico), ácido poli(D-láctico), ácido poli(L-láctico), ácido poli(D, L-láctico), poli(D, L-lactídeo) (PLA), poli (L-lactídeo) (PLLA), ácido poli(glicólico-co-trimetileno carbonato) (PGA/PTMC), óxido de polietileno (PEO), polidioxanona (PDS), polifosfoéster, polifosfoéster uretano, poli(aminoácidos), cianoacrilatos, poli(carbonato de trimetileno), poli(iminocarbonato), copoli(éter-ésteres) (por exemplo, PEO/PLA), oxalatos de polialquileno, polifosfazenos e biomoléculas, como fibrina, fibrinogênio, celulose, amido, colágeno e ácido hialurônico, poliepsilon caprolactona, ácido polihidroxi butírico, poliortoésteres, poliacetais, polidihidropiranos, policianoacrilatos, copolímeros reticulados ou em bloco anfipático de hidrogéis, e outros polímeros bioabsorvíveis adequados conhecidos na técnica.

Além disso, polímeros bioestáveis com uma resposta tecidual crônica relativamente baixa, como poliuretanos, silicones e poliésteres podem ser usados e outros polímeros também podem ser usados se puderem ser dissolvidos e curados ou polimerizados no dispositivo médico, como poliolefinas, poliisobutileno e copolímeros de etileno-alfaolefina; polímeros e copolímeros acrílicos, polímeros e copolímeros de haleto vinílico, tais como cloreto de polivinila; polivinilpirrolidona; éteres polivinílicos, tais como éter metílico polivinila; haletos de polivinilideno, tais como fluoreto de polivinilideno e cloreto de polivinilideno; poliacrilonitrila, polivinil cetonas; polivinis aromáticos, como poliestireno,

ésteres de polivinil, como acetato de polivinila; copolímeros de monômeros de vinila entre si e olefinas, tais como copolímeros de metacrilato de etileno-metila, copolímeros de acrilonitrila-estireno, resinas ABS e copolímeros de etileno-acetato de vinila; copolímero de pirano; polihidroxi-propil-metacrilamida-fenol; polihidroxietil- aspartamida-fenol; polietilenoxido-polilisina substituído por resíduos de palmitoila; poliamidas, como Nylon 66 e policaprolactama; resinas alquídicas, policarbonatos; polioximetilenos; poli-imidas; poliéteres; resinas epóxi, poliuretanos; rayon; triacetato de rayon; celulose, acetato de celulose, butirato de celulose; butirato de acetato de celulose; celofane; nitrato de celulose; propionato de celulose; éteres de celulose; e carboximetilcelulose.

[00120] Polímeros e matrizes poliméricas semipermeáveis podem ser formados em artigos moldados, tais como válvulas, stents, tubos, próteses e similares.

[00121] Em certas modalidades da invenção, o sal cristalino do Composto I é acoplado a um polímero ou matriz polimérica semipermeável que é formada como um stent ou dispositivo de enxerto de stent.

[00122] Normalmente, os polímeros são aplicados à superfície de um dispositivo implantável por revestimento por rotação, imersão ou pulverização. Métodos adicionais conhecidos na técnica também podem ser utilizados para esta finalidade. Os métodos de pulverização incluem métodos tradicionais, bem como técnicas de microdeposição com um tipo de dispensador de jato de tinta. Adicionalmente, um polímero pode ser depositado em um dispositivo implantável usando foto-padronização para colocar o polímero apenas em porções específicas do dispositivo. Este revestimento do dispositivo fornece uma camada uniforme em torno do dispositivo que permite uma difusão melhorada de vários analitos através do revestimento do dispositivo.

[00123] Em certas modalidades da invenção, o composto ativo é formulado para liberação do revestimento de polímero no ambiente no qual o dispositivo médico é colocado. Preferencialmente, o composto é liberado de forma controlada ao longo de um período de tempo prolongado (por exemplo, meses) usando pelo menos uma das várias técnicas bem conhecidas envolvendo carreadores ou camadas de polímero para controlar a eluição. Algumas dessas técnicas são descritas no Pedido de Patente U.S. 2004/0243225A1, cuja divulgação inteira é incorporada a este documento em sua totalidade.

[00124] Além disso, conforme descrito, por exemplo, na Patente U.S. Nº. 6.770.729, que é incorporada a este documento em sua totalidade, os reagentes e as condições de reação das composições de polímero podem ser manipulados de modo que a liberação do composto ativo do revestimento de polímero possa ser controlada. Por exemplo, o coeficiente de difusão de um ou mais revestimentos de polímero pode ser modulado para controlar a liberação do composto do revestimento de polímero. Em uma variação deste tema, o coeficiente de difusão de um ou mais revestimentos de polímero pode ser controlado para modular a capacidade de um analito que está presente no ambiente no qual o dispositivo médico é colocado (por exemplo, um analito que facilita a degradação ou hidrólise de alguma porção do polímero) para acessar um ou mais componentes dentro da composição de polímero (e por exemplo, modular assim a liberação do composto do revestimento do polímero). Ainda outra modalidade da invenção inclui um dispositivo com uma pluralidade de revestimentos de polímero, cada um com uma pluralidade de coeficientes de difusão. Nestas modalidades da invenção, a liberação do composto ativo do revestimento de polímero pode ser modulada pela pluralidade de revestimentos de polímero.

[00125] Em ainda outra modalidade da invenção, a liberação do composto ativo do revestimento de polímero é controlada pela modulação de uma ou mais das propriedades da composição de polímero, tal como a presença de um ou mais compostos endógenos ou exógenos ou, alternativamente, o pH da composição de polímero. Por exemplo, certas composições de polímero podem ser projetadas para liberar um composto em resposta a uma diminuição no pH da composição de polímero. Kits

[00126] A invenção também fornece um kit, compreendendo um sal cristalino do Composto I, pelo menos um outro agente terapêutico, material de embalagem e instruções para administrar o sal cristalino do Composto I e o outro agente ou agentes terapêuticos a um mamífero para tratar ou prevenir uma doença ou condição caracterizada por atividade aberrante da calicreína no mamífero. Em uma modalidade, o mamífero é um humano. Exemplos Materiais e Métodos Difração de Raios X por Pó

[00127] O padrão XRPD foi coletado com um difratômetro PANalytical X'Pert PRO MPD usando um feixe incidente de radiação de Cu produzido usando uma fonte Optix longa de foco fino. Um espelho multicamada elipticamente graduado foi usada para focar os raios X de Cu Kαatravés da amostra e no detector. Antes da análise, um exemplar de silício (NIST SRM 640e) foi analisado para verificar se a posição observada do pico de Si 111 é consistente com a posição certificada pelo NIST. Um exemplar da amostra foi colocado entre películas de 3- μm de espessura e analisados por geometria de transmissão. Um limitador de feixe, extensão antidifusão curta, ponta de lâmina antidifusão, foram usadas para minimizar o fundo gerado por ar. Fendas Soller para os feixes incidentes e difratados foram usadas para minimizar a ampliação da divergência axial. Os padrões de difração foram coletados por meio de um detector sensível à posição de varredura (X'Celerator) localizado a 240 mm da amostra e o software Data Collector v. 2.2b. Análise Termogravimétrica

[00128] As análises TG foram realizadas usando um analisador termogravimétrico TA Instruments Discovery com um forno IR. A calibração da temperatura foi realizada usando níquel e Alumel™. Cada amostra foi colocada em uma bandeja de alumínio. A amostra foi hermeticamente vedada, a tampa foi perfurada e inserida no forno de TG. O forno foi aquecido sob nitrogênio. A taxa de varredura de aquisição é registrada no cabeçalho do termograma, enquanto a faixa de aquecimento pode ser determinada a partir do gráfico individual. Espectroscopia no Infravermelho (IR)

[00129] A análise termogravimétrica no infravermelho (TG-IR) foi realizada em um analisador termogravimétrico (TG) TA Instruments Q5000 IR conectado a um espectrofotômetro de infravermelho de transformada de Fourier Magna-IR 560® (FT-IR) (Thermo Nicolet) equipado com Ever-Glo mid / fonte de IR distante, um divisor de feixe de brometo de potássio (KBr) e um detector de telureto de mercúrio e cádmio (MCT-A). A verificação do comprimento de onda FT-IR foi realizada usando poliestireno e os padrões de calibração TG foram níquel e Alumel ™. A amostra foi colocada em um cadinho de platina para amostras e o cadinho foi inserido no forno TG. O instrumento TG foi iniciado primeiro, seguido imediatamente pelo instrumento FT-IR. O instrumento TG foi operado sob um fluxo de hélio a 90 e 10 cc/min para a purga e o equilíbrio, respectivamente. O forno foi aquecido por hélio a uma taxa de 20 °C/minuto até uma temperatura final de 350 °C. Os espectros de IR foram coletados aproximadamente a cada 16 segundos por aproximadamente 13 minutos. Cada espectro de IR representa 16 varreduras co-adicionadas coletadas a uma resolução espectral de 4 cm−1. Os voláteis foram identificados a partir de uma pesquisa na biblioteca espectral de Alta Resolução Nicolet Vapor Phase. Exemplo 1: Protocolo sintético para o composto racêmico 54e Reproduzido de WO 2015/134998 e Publicação de Pedido de Patente U.S. Nº 2017/0073314 A1 (ambos incorporados por referência) Preparação de 1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3-cianofenil)(ciclopropil- metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5- carboxamida (54e) Etapa 1: Preparação de 3-((3-amino-4- fluorofenil)(hidróxi)metil)benzonitrila (54b)

[00130] A uma solução de 3-formilbenzonitrila (54a) (29 g, 217 mmol) em tetra-hidrofurano (200 mL) resfriada a 0 °C foi adicionado reagente de Grignard preparado na hora (52c) (245 mL, 221 mmol, aproximadamente 0,9 M em THF) agitada a 0 °C durante 1 h e em temperatura ambiente durante 18 h. A mistura de reação foi suprimida com 1 N de HCl (aq. 440 mL), agitada por 3 h, neutralizada com NaOH (2 N, aq.) para pH = aproximadamente 8. A mistura de reação foi extraída com acetato de etila (600, 300 mL). Os extratos combinados foram lavados com salmoura (120 mL), secos com MgSO4, filtrados e concentrados em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash [sílica-gel, eluindo com hexanos/acetato de etila (1:0 a 1:1) para obter 3-((3-amino-4-fluorofenil)(hidróxi)metil)benzonitrila (54b) (36,28 g) como uma goma marrom que foi usada na próxima etapa; MS (ES+) 265,3 (M+23). Etapa 2: Preparação de 3-(5-(5-((3-cianofenil)(hidróxi)metil)-2- fluorofenilcarbamoil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-1-il)benzilcarbamato de terc-butil (54c)

[00131] A uma solução de 3-((3-amino-4- fluorofenil)(hidróxi)metil)benzonitrila (54b) (24,682 g, 102 mmol) em DMF (480 mL) foi adicionado ácido 1-(3-((terc- butoxicarbonilamino)metil)fenil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5- carboxílico (10d) (35,0 g, 91 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (132 mL, 758 mmol), hexafluorofosfato(V) de bromotripirrolidin-1- ilfosfônio (PyBrOP, 42,8 g, 91 mmol) e agitada em temperatura ambiente por 19 h. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (1000 mL), lavada com água (500, 400 mL), salmoura (400 mL), seca com MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash [sílica-gel, eluindo com hexanos/acetato de etila (1:0 a 1:1)] para gerar 3-(5-(5-((3- cianofenil)(hidróxi)metil)-2-fluorofenilcarbamoil)-3-(trifluorometil)-1H- pirazol-1-il)benzilcarbamato de terc-butil (54c) (4,583 g, 5% para duas etapas) como um sólido amarelo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,57 (s, 1H), 7,81 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7,73 – 7,66 (m, 2H), 7,64 – 7,19 (m, 10H), 6,25 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,78 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 4,19 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 1,37 (s, 9H); 19F NMR (282 MHz, DMSO-d6) δ -60,81, -123,09; MS (ES+) 632,3 (M+23). Etapa 3: Preparação de 3-(5-(5-((3- cianofenil)(ciclopropilmetilamino)metil)-2-fluorofenilcarbamoil)-3- (trifluorometil)-1H-pirazol-1-il)benzilcarbamato de terc-butil (54d)

[00132] A uma solução de 3-(5-(5-((3-cianofenil)(hidróxi)metil)-2- fluorofenilcarbamoil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-1-il)benzilcarbamato de terc-butil (54c) (1,333 g, 2,187 mmol) em diclorometano (40 mL) a 0 °C foi adicionado cloreto de tionila (0,340 mL, 4,59 mmol) e aquecido em temperatura ambiente durante 2 h. A mistura de reação foi suprimida com trietilamina (2,0 mL, 14,35 mmol) agitada em temperatura ambiente por 1 h. Em seguida foi tratada com ciclopropilmetanamina (4,30 mL, 48,0 mmol), concentrada para remover a maior parte do diclorometano seguido pela adição de acetonitrila (30 mL), agitação a 70 oC por 14 h e concentrada em vácuo até secar. O resíduo foi tratado com clorofórmio (200 mL), lavado com água (100 mL), seco com MgSO4 seguido por filtração e concentração. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash [sílica-gel eluindo com hexanos/acetato de etila (1:0 a 2:1)] para gerar 3-(5-(5-((3- cianofenil)(ciclopropilmetilamino)metil)-2-fluorofenilcarbamoil)-3- (trifluorometil)-1H-pirazol-1-il)benzilcarbamato de terc-butil (54d) (184 mg, 13%) como uma goma incolor; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,56 (s, 1H), 7,89 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7,77 – 7,71 (m, 1H), 7,70 – 7,30 (m, 10H), 7,22 (dd, J = 10,3, 8,5 Hz, 1H), 4,93 (s, 1H), 4,19 (d, J = 6,2 Hz, 2H), 2,26 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 1,37 (s, 9H), 1,00 – 0,80 (m, 1H), 0,45 – 0,28 (m, 2H), 0,12 – -0,01 (m, 2H); 19F NMR (282 MHz, DMSO-d6) δ - 60,80, -123,20; MS (ES+) 663,4 (M+1). Etapa 4: Preparação de 1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3- cianofenil)(ciclopropil-metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)- 1H-pirazol-5-carboxamida (54e)

[00133] A uma solução de 3-(5-(5-((3- cianofenil)(ciclopropilmetilamino)metil)-2-fluorofenilcarbamoil)-3- (trifluorometil)-1H-pirazol-1-il)benzilcarbamato de terc-butil (54d) (161 mg, 0,243 mmol) em 1,4-dioxano (18 mL) foi adicionado cloreto de hidrogênio (2,60 mL, 10,40 mmol, 4 M em 1,4-dioxano) e a mesma foi agitada em temperatura ambiente por 16 h. A mistura de reação foi tratada com hexanos, decantada, lavada com hexanos e decantada novamente. O produto bruto insolúvel foi purificado por cromatografia em coluna flash [sílica-gel, eluindo com clorofórmio/CMA80 (1:0 a 2:1)] para gerar 1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3-cianofenil)(ciclopropil- metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5- carboxamida (54e). O produto puro foi dissolvido em metanol (10 mL) e 4 N HCl (aq. 0,14 mL) foi adicionado seguido por concentração em vácuo até secar para obter sal HCl de 1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3- cianofenil)(ciclopropil-metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)- 1H-pirazol-5-carboxamida (54e) (74 mg, 48%) branco sólido; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, D2O ex NMR) δ 8,13 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7,98 – 7,84 (m, 3H), 7,73 – 7,64 (m, 3H), 7,63 – 7,48 (m, 4H), 7,44 (dd, J = 10,2, 8,6 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,12 (s, 2H), 2,76 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 19 1,17 – 0,94 (m, 1H), 0,68 – 0,47 (m, 2H), 0,34-0,24 (m, 2H); F NMR (282 MHz, DMSO-d6) δ -60,82, -120,02; MS (ES+): 563,3 (M+1); Análise calculada para C30H26F4N6O·2,0 HCl·3,0 H2O: C, 52,26; H, 4,97; N, 12,19; Obteve: C, 52,26; H, 5,00; N, 11,72. Exemplo 2: Separação de enantiômeros do composto racêmico 54e Reproduzido de WO 2015/134998 e Publicação de Pedido de Patente U.S. Nº 2017/0073314 A1 (ambos incorporados por referência) F3C F F3C F H Separação N Chiral H N quiral N N Separation N

O N O HN

HN NH2 CN NH2 CN 54e Composto Compound I (base I (free livre) base) Separação de (+)-1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3-cianofenil)(ciclopropil- metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5- carboxamida (Composto I), e (-)-1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3-

cianofenil)(ciclopropil-metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)- 1H-pirazol-5-carboxamida ((-)-enantiômero)

[00134] Isômeros de 1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3- cianofenil)(ciclopropil-metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)- 1H-pirazol-5-carboxamida racêmica (54e) (0,4 g) foram separados usando o método de SFC preparativa com as seguintes condições para fornecer: Método de SFC preparativa usado: Coluna 20 mm x 25,0 cm ChromegaChiral CCS da Regis Technologies (Morton Grove, IL) Co-solvente CO2 (Solvente B) Metanol: Isopropanol (1:1) com Isopropilamina a 1% Método Isocrático 20% de Co-solvente a 80 mL/min Pressão do Sistema 200 bar Temperatura da coluna 25 °C Diluente de Amostra Metanol: Isopropanol

[00135] A Pureza Quiral dos picos foi determinada pelo seguinte Método de SFC Analítica: Coluna 4,6 x 100 mm ChiralPak AS da Chiral Technologies (West Chester, PA) Co-solvente de CO2 (Solvente B) Metanol: Isopropanol (1:1) com Isopropilamina a 0,1% Método isocrático 5-65% de gradiente de co-solvente a 4 mL/min Pressão do Sistema 100 bar Temperatura da Coluna 25 °C Diluente da Amostra Metanol Pico-1 (Composto I) 2,1 min 144 mg >95% ee (UV 254) 98,6% de pureza (UV 254) Pico-2 ((-)-enantiômero) 2,4 min 172 mg 95,5% ee (UV

254) 96,5% de pureza (UV 254)

1. Pico-1 atribuído como (+)-1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3- cianofenil)(ciclopropil-metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)- 1H-pirazol-5-carboxamida (Composto I) (144 mg, >95%ee) de base livre como um sólido branco; Rotação óptica: [α]D = (+) 6,83 [CH3OH, 1,2]; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,53 (s, 1H, D2O intercambiável), 7,88 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7,77 – 7,71 (m, 1H), 7,67 (dt, J = 7,7, 1,4 Hz, 1H), 7,63 (dd, J = 7,5, 2,1 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,54 – 7,47 (m, 2H), 7,47 – 7,38 (m, 2H), 7,34 (ddt, J = 8,6, 5,9, 2,8 Hz, 2H), 7,22 (dd, J = 10,3, 8,5 Hz, 1H), 4,93 (s, 1H), 3,77 (s, 2H), 2,31 – 2,21 (m, 2H), 0,97 – 19 0,80 (m, 1H), 0,42 – 0,33 (m, 2H), 0,10 – -0,02 (m, 2H); F NMR (282 MHz, DMSO-d6) δ -60,73, -123,20; MS (ES+) 563,3 (M+1), 561,3 (M-1). A uma solução de mistura de base livre de (+)-1-(3-(aminometil)fenil)-N- (5-((3-cianofenil)(ciclopropil-metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3- (trifluorometil)-1H-pirazol-5-carboxamida (Composto I) (120 mg) em metanol (15 mL) foi adicionado cloreto de hidrogênio (0,969 mL, 1,938 mmol), a mesma foi agitada em temperatura ambiente por 10 min, evaporada até secar para gerar (+)-1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3- cianofenil)(ciclopropil-metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)- 1H-pirazol-5-carboxamida (Composto I) (100 mg) sal de cloridrato como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,84 (s, 1H, D2O intercambiável), 10,44 (s, 2H, D2O intercambiável), 8,44 (s, 3H, D2O intercambiável), 8,30 (s, 1H, D2O intercambiável), 8,09 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,91 – 7,83 (m, 1H), 7,80 – 7,50 (m, 7H), 7,42 (dd, J = 10,3, 8,6 Hz, 1H), 5,78 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 2,88 – 2,62 (m, 2H), 1,42 – 0,99 (m, 1H), 0,73 – 0,46 (m, 2H), 0,32 (d, J = 4,4 Hz, 2H); 19F NMR (282 MHz, DMSO-d6) δ -60,81, -119,99; MS (ES+): MS (ES+) 563,3 (M+1), MS (ES-) 561,3 (M-1), 597,3 (M+Cl); Análise calculada para C30H26F4N6O·2HCl·1,75H2O: C, 54,02; H, 4,76; Cl, 10,63; N, 12,60; Obteve: C, 54,12; H, 4,83; Cl, 10,10; N, 11,97.

2. Pico-2 atribuído como (-)-1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3- cianofenil)(ciclopropil-metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)- 1H-pirazol-5-carboxamida ((-)-enantiômero) (172 mg, 95,5% ee) como base livre foi repurificada por cromatografia em coluna flash (sílica-gel 12 g, eluindo com 0-30% de MeOH em clorofórmio por 15 min) para gerar (-)-1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3-cianofenil)(ciclopropil- metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5- carboxamida ((-)-enantiômero) em base livre como um sólido esbranquiçado; Rotação óptica: [α]D = (-) 5,44 [CH3OH, 1,25]; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,88 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,70 – 7,61 (m, 2H), 7,57 (s, 1H), 7,54 – 7,47 (m, 2H), 7,45 – 7,41 (m, 2H), 7,34 (ddq, J = 8,7, 6,1, 3,5, 2,8 Hz, 2H), 7,22 (dd, J = 10,3, 8,5 Hz, 1H), 4,93 (s, 1H), 3,78 (s, 2H), 2,25 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 0,90 (ddd, J = 9,8, 8,0, 5,2 Hz, 1H), 0,47 – 0,29 (m, 2H), 0,04 (dd, J = 5,0, 1,5 Hz, 2H); 19 F NMR (282 MHz, DMSO-d6) δ -60,73, -123,19; MS (ES+) 563,3 (M+1), MS (ES-), 561,3 (M-1). A uma solução de base livre de (-)-1-(3- (aminometil)fenil)-N-(5-((3-cianofenil)(ciclopropil-metilamino)metil)-2- fluorofenil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5-carboxamida ((-)- enantiômero) (0,124 g, 0,220 mmol) em metanol (15 mL) foi adicionado cloreto de hidrogênio (1,102 mL, 2,204 mmol), a mesma foi agitada em temperatura ambiente por 10 min, evaporada até secar para gerar sal cloridrato (-)-1-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((3-cianofenil)(ciclopropil- metilamino)metil)-2-fluorofenil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5- carboxamida ((-)-enantiômero) (0,121 g) como um sólido esbranquiçado; 1H NMR: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,82 (s, 1H, D2O intercambiável), 10,36 (s, 2H, D2O intercambiável), 8,38 (s, 3H, D2O intercambiável), 8,27 (s, 1H), 8,06 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,78 – 7,49 (m, 7H), 7,48 – 7,37 (m, 1H), 5,78 (s, 1H), 4,13 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 2,72 (s, 2H), 1,14 (s, 1H), 0,56 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 0,31 (d, J = 5,0 Hz, 2H); 19F NMR (282 MHz, DMSO-

d6) δ -60,82, -120,03; MS (ES+): MS (ES+) 563,3 (M+1), MS (ES-), 561,3 (M-1), 597,2 (M+Cl); Análise calculada para C30H26F4N6O.2HCl.1.75H2O: C, 54,02; H, 4,76; Cl, 10,63; N, 12,60; Obteve: C, 54,12; H, 4,83; Cl, 10,10; N, 11,97. Exemplo 3: Preparação de uma Semente de Cristal do Composto I•2(HCl)

[00136] Uma solução do Composto I (ver Exemplo 2) em éter metil terc-butil (MTBE) (1 equiv) é adicionada a uma solução de HCl (aq) (2 equiv) em metanol (frio), seguido por aquecimento a cerca de 30 °C, e mantendo-o a cerca de 30 °C durante não mais do que 5 horas com agitação a cerca de 115 rpm. O Composto I bis(HCl) é recolhido por filtração e seco. O material cristalino obtido pode ser usado como uma semente para o protocolo de cristalização descrito no Exemplo 4. Exemplo 4: Protocolo de Cristalização e Sintético em Grande Escala para o Composto I•2(HCl) F3C F3C

N O F N O F 2(HCl)

N N HN HCl, MeOH, MTBE HN NH2 HN NH2 HN

CN CN Composto Compound II (base livre) (free base) Composto I bis (HCl) Compound I bis(HCl)

[00137] Ácido clorídrico aquoso a 37% (38,1 kg, 32,3 L, 2,14 equiv.) foi carregado em um recipiente de cristalização limpo e vazio, metanol (228,9 kg, 39,5 equiv.) foi adicionado e o conteúdo foi resfriado a -7 ± 3 °C. Uma solução de base livre do Composto I (aprox. 101,8 kg; 180,9 mols) em MTBE (aprox. 1.300 L) foi filtrada através de um filtro de polimento para o recipiente de cristalização a uma temperatura de -5 ± 5 °C. Após enxágue com MTBE, sementes de cristais previamente pesadas do Composto I•2(HCl) (1,39 kg, 0,012 equiv.; Exemplo 3) foram carregadas no recipiente de cristalização através da abertura. O conteúdo do recipiente foi aquecido a 30-33 °C e a velocidade de agitação foi ajustada para 25-50 rpm. Após confirmação da cristalização, a pasta fluida foi agitada por mais três a quatro horas. A pasta fluida do produto foi transferida para uma centrífuga e isolada por centrifugação. O produto foi lavado com MTBE (585 L). Depois secar o produto úmido por rotação, o Composto I•2(HCl), foi descarregado da centrífuga e o produto foi seco a ≤ 40 °C sob vácuo em um secador cone. Rendimento do produto do Composto I•2(HCl): 100 kg; 157,4 mol; aproximadamente 85%.

[00138] Os dados de 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) são mostrados na tabela a seguir: Desvio Químico Número de Estrutura Classe (ppm) Hidrogênios 0,02 - 0,10 m 2 0,33 - 0,42 m 2 0,80 - 0,97 m 1 2,21 -2,31 m 2 3,77 s 2 4,93 s 1 7,22 dd 1 7,34 ddt 2 7,38 - 7,47 m 2 7,47 - 7,54 m 2 7,56 s 1 7,63 dd 1 7,67 dt 1 7,71 - 7,77 m 1 7,88 t 1 10,53 s 1 Os dados de 19F NMR (282 MHz, DMSO-d6) são mostrados na tabela a seguir:

Estrutura Deslocamentos Químicos do Flúor (ppm) -60,81, -119,99

[00139] O Composto I tem dois sítios básicos. O ácido conjugado da amina primária foi calculado para ter um valor de pKa de 8,89, e o ácido conjugado da amina secundária foi calculado para ter um valor de pKa de 7,86.

[00140] O padrão de XRPD do Composto I•2(HCl) é mostrado na Figura 1. O Composto I•2 (HCl) tem picos característicos em seu padrão de XRPD em valores de dois teta (◦2θ) de 5,28, 8,96, 14,27, 16,18, 19,79, 21,16, 22,01, 23,31, 24,64 e 30,31.

[00141] A análise de TG-IR indicou duas regiões distintas de perda de peso: a primeira foi concluída a 125 ˚°C enquanto a segunda começou a aproximadamente 208 ˚°C. A análise de IR dos gases de exaustão deste experimento detectou apenas traços de água na perda de peso inicial, enquanto o gás HCl foi detectado no evento de 208 °C. Nenhum outro solvente foi detectado na amostra. Assim, foi determinado que o Composto I•2 (HCl) inicialmente perde água quando aquecido e, quando aquecido acima de 200 °C o sal começa a se separar e o gás HCl é liberado. O sinal de IR para todos esses eventos é muito fraco, indicando que eles ocorrem em uma faixa e não em uma temperatura específica. Um espectro de TG-IR exemplar é mostrado na Figura 2. Exemplo 5: Ensaios de Composto

[00142] O Composto I foi testado em um ensaio bioquímico in vitro que mede a inibição da atividade da calicreína plasmática humana. Os protocolos experimentais e os resultados dos ensaios são encontrados em WO 2015/134998 e na Publicação do Pedido de Patente U.S. Nº. 2017/0073314 A1 (ambos incorporados por referência). Os resultados deste ensaio bioquímico demonstram que o Composto I é um inibidor potente da atividade da calicreína plasmática humana. Exemplo 6: Farmacocinética do Composto I•2(HCl) em Indivíduos Saudáveis

[00143] Como parte de um estudo de Fase I, duplo-cego, placebo- controlado, de variação de dose, a farmacocinética de múltiplas doses orais crescentes do Composto I•2(HCl) foram avaliados em indivíduos saudáveis. Quatro coortes de dose crescente foram registradas para a dosagem de forma sequencial. No início, doze indivíduos foram randomizados em cada coorte para administração de um curso de 7 ou 14 dias da droga do estudo (n = 10/coorte recebeu o Composto I•2(HCl) e n = 2/coorte recebeu placebo correspondente) de acordo com os seguintes regimes de dosagem: 125 mg de Composto I•2(HCl) ou placebo uma vez por dia (QD) por 7 dias na Coorte 1; 250 mg de Composto I•2(HCl) ou placebo QD por 7 dias na Coorte 2; 500 mg de Composto I•2(HCl) ou placebo QD por 7 dias na Coorte 3; ou 350 mg de Composto I•2(HCl) ou placebo QD por 14 dias na Coorte 4. No geral, 37 dos 40 indivíduos que receberam doses múltiplas do Composto I•2 (HCl) completaram seus respectivos regimes de dosagem e estavam disponíveis para avaliação dos parâmetros de PK no Dia 7 ou no Dia 14.

[00144] Amostras de sangue em série foram coletadas para análise farmacocinética antes da administração da dose no Dia 7 ou Dia 14, e durante as 24 horas seguintes. As amostras de plasma para determinação das concentrações do Composto I•2(HCl) foram analisadas com o uso de um ensaio bioanalítico validado LC-MS/MS (Cromatografia Líquida acoplada à espectrometria de massas).

[00145] A concentração do Composto I•2(HCl) no plasma versus perfis de tempo no Dia 7 após a administração oral QD do Composto

I•2(HCl) a 125, 250 e 500 mg QD e no Dia 14 após a administração oral QD do Composto I•2(HCl) a 350 mg QD, são mostrados na Figura 3.

[00146] A Tabela 1 fornece um sumário dos parâmetros farmacocinéticos plasmáticos [a concentração plasmática máxima (pico) da droga (Cmax), tempo (ponto no tempo observado) para atingir a concentração plasmática máxima (pico) da droga após a administração da droga (Tmax), a concentração plasmática mínima observada ao fim do intervalo de dosagem (Ctau) e a área sob a curva de concentração plasmática-tempo ao longo do intervalo de dosagem (AUCtau)] após 7 ou 14 dias de múltiplas doses orais do Composto I•2(HCl). Tabela 1. Sumário dos parâmetros farmacocinéticos do plasma após 7 ou 14 dias de múltiplas doses orais do Composto I•2(HCl) em indivíduos saudáveis (Dia 7 ou Dia 14). Composto I•2(HCl) 125 mg QD 250 mg QD 500 mg QD 350 mg QD Parâmetro Dia 7 Dia 7 Dia 7 Dia 14 Farmacocinético (N = 10) (N = 9) (N = 9) (N = 9) Cmax (ng/mL)a 97,8 (35) 217 (25) 517 (37) 363 (37) b Tmax (hr) 5,0 (2,0, 8,1) 6,0 (3,0, 12,0) 2,0 (1,0, 8,1) 4,0 (1,0, 8,0) Ctau (ng/mL)a 46,1 (46) 101 (25) 235 (32) 158 (40) AUCtau (ngh/mL)a 1600 (41) 3710 (23) 8230 (34) 5720 (34) a Dados relatados como média geométrica (CV% da média geométrica). b Tmax relatado como mediana (min, max).

[00147] Concentrações plasmáticas máximas do Composto I•2(HCl) foram alcançadas em aproximadamente 2 a 6 horas após a dose. Um aumento na dosagem de 125 mg para 250 mg QD e de 250 mg para 500 mg QD conferiu proporcionalidade de dose razoável. Ao longo de todo o intervalo de dose de 4 vezes, a exposição aumentou de forma ligeiramente superior à proporcional à dose, com um aumento de 5,1 e 5,3 vezes nos valores de mediana geométrica de AUCtau e Cmax, respectivamente.

Incorporação a Título de Referência

[00148] Todas as patentes U.S. e os Pedidos de Patente publicados U.S. e PCT mencionados neste documento são incorporados a este documento por referência em sua totalidade, como se cada patente individual ou pedido publicado fosse específica e individualmente indicado para incorporação por referência. Em caso de conflito, o presente pedido, incluindo quaisquer definições contidas neste documento, prevalecerá. Equivalentes

[00149] Embora modalidades específicas da invenção em questão tenham sido discutidas, o relatório descritivo acima é ilustrativo e não restritivo. Muitas variações da invenção tornar-se-ão aparentes àqueles versados na técnica mediante revisão deste relatório descritivo e das reivindicações abaixo. O escopo completo da invenção deve ser determinado por referência às reivindicações, juntamente com o escopo completo de equivalentes e o relatório descritivo, juntamente com essas variações.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Sal cristalino do Composto I, caracterizado pelo fato de que é I.

2. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o sal é um sal cloridrato.

3. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o sal é um sal bis(cloridrato).

4. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,3, 9,0 e 22,0.

5. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,3, 9,0 e 22,0.

6. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,3, 9,0, 19,8, 21,2, 22,0 e 23,3.

7. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,3, 9,0, 19,8, 21,2, 22,0 e 23,3.

8. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,3, 9,0, 14,3, 16,2, 19,8, 21,2, 22,0, 23,3, 24,6 e 30,3.

9. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,3, 9,0, 14,3, 16,2, 19,8, 21,2, 22,0, 23,3, 24,6 e 30,3.

10. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,28, 8,96 e 22,01.

11. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,28, 8,96 e 22,01.

12. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,28, 8,96, 19,79, 21,16, 22,01 e 23,31.

13. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,28, 8,96, 19,79, 21,16, 22,01 e 23,31.

14. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,28, 8,96, 14,27, 16,18, 19,79, 21,16, 22,01, 23,31, 24,64 e 30,31.

15. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,28, 8,96, 14,27, 16,18, 19,79, 21,16, 22,01, 23,31, 24,64 e 30,31.

16. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que tem um padrão de XRPD substancialmente semelhante ao mostrado na Figura 1.

17. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino é complexado com água em uma proporção molar de 1:1 de sal cristalino para água.

18. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino é complexado com água em uma proporção molar de 1:2 de sal cristalino para água.

19. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino é complexado com água em uma proporção molar de 1:2,5 de sal cristalino para água.

20. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino tem um espectro termogravimétrico-infravermelho substancialmente como mostrado na Figura 2.

21. Sal cristalino do Composto I, caracterizado pelo fato de que o sal é um sal bis(cloridrato).

I;

22. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,3, 9,0 e 22,0.

23. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,3, 9,0 e 22,0.

24. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,3, 9,0, 19,8, 21,2, 22,0 e 23,3.

25. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,3, 9,0, 19,8, 21,2, 22,0 e 23,3.

26. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 24 ou 25, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,3, 9,0, 14,3, 16,2, 19,8, 21,2, 22,0, 23,3, 24,6 e 30,3.

27. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,3, 9,0, 14,3, 16,2, 19,8, 21,2, 22,0, 23,3, 24,6 e 30,3.

28. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,28, 8,96 e 22,01.

29. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,28, 8,96 e 22,01.

30. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 28 ou 29, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,28, 8,96, 19,79, 21,16, 22,01 e 23,31.

31. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,28, 8,96, 19,79, 21,16, 22,01 e 23,31.

32. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 30 ou 31, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ ± 0,2°) de 5,28, 8,96, 14,27, 16,18, 19,79, 21,16, 22,01, 23,31, 24,64 e 30,31.

33. Sal cristalino, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que tem picos característicos no padrão de difração de raios X por pó (XRPD) em valores de dois teta (°2θ) de 5,28, 8,96, 14,27, 16,18, 19,79, 21,16, 22,01, 23,31, 24,64 e 30,31.

34. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 a 33, caracterizado pelo fato de que tem um padrão de XRPD substancialmente semelhante ao mostrado na Figura 1.

35. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 a 34, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino é complexado com água em uma proporção molar de 1:1 de sal cristalino para água.

36. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 a 34, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino é complexado com água em uma proporção molar de 1:2 de sal cristalino para água.

37. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 a 34, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino é complexado com água em uma proporção molar de 1:2,5 de sal cristalino para água.

38. Sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 a 34, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino tem um espectro termogravimétrico-infravermelho substancialmente como mostrado na Figura 2.

39. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o sal cristalino como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 38; e um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis.

40. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 39, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica é formulada para administração parenteral.

41. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 39, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica é formulada para administração tópica.

42. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 39, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica é formulada para o tratamento profilático ou terapêutico de uma doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática.

43. Método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição particularizada por atividade aberrante da calicreína plasmática, caracterizado pelo fato de que compreende a administração a um indivíduo em necessidade de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal cristalino, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 38.

44. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é selecionada do grupo que consiste em acidente vascular cerebral, inflamação, lesão de reperfusão, infarto agudo do miocárdio, trombose venosa profunda, condição pós-tratamento fibrinolítico, angina, edema, angioedema,

angioedema hereditário, sepse, artrite, hemorragia, perda de sangue durante o bypass cardiopulmonar, doença inflamatória intestinal, diabetes mellitus, retinopatia, retinopatia diabética, edema macular diabético, degeneração macular diabética, edema macular relacionado à idade, degeneração macular relacionada à idade, retinopatia proliferativa, neuropatia, hipertensão, edema cerebral, excreção aumentada de albumina, macroalbuminúria e nefropatia.

45. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é o angioedema.

46. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é o angioedema hereditário.

47. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é o acidente vascular cerebral.

48. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é a lesão de reperfusão.

49. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é o infarto agudo do miocárdio.

50. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é hemorragia.

51. Método, de acordo com a reivindicação 44,

caracterizado pelo fato de que a doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é a perda de sangue durante o bypass cardiopulmonar.

52. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição particularizada pela atividade aberrante da calicreína plasmática é selecionada do grupo que consiste em retinopatia, retinopatia diabética, edema macular diabético, degeneração macular diabética, edema macular relacionado à idade, degeneração macular relacionada à idade e retinopatia proliferativa.

53. Método para preparar um sal cristalino do Composto I, I; caracterizado pelo fato de que compreende: a) fornecer uma mistura de base livre do Composto I em um primeiro solvente orgânico; b) combinar a mistura de base livre com uma solução de reagente sob condições suficientes para formar uma mistura compreendendo um sal do Composto I, em que a solução de reagente compreende um ácido e um segundo solvente orgânico; e c) cristalizar o sal do Composto I a partir da mistura que compreende um sal do Composto I.

54. Método, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino é um sal cloridrato.

55. Método, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino é um sal bis(cloridrato).

56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55, caracterizado pelo fato de que o primeiro solvente orgânico compreende um solvente polar aprótico.

57. Método, de acordo com a reivindicação 56, caracterizado pelo fato de que o solvente polar aprótico é éter metil terc- butílico.

58. Método, de acordo com a reivindicação 56 ou 57, caracterizado pelo fato de que o primeiro solvente orgânico compreende ainda um solvente não polar.

59. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o solvente não polar é tolueno.

60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 59, caracterizado pelo fato de que o ácido é ácido clorídrico.

61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 60, caracterizado pelo fato de que o segundo solvente orgânico é um solvente polar prótico.

62. Método, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que o solvente polar prótico é metanol.

63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 62, caracterizado pelo fato de que a mistura que compreende um sal do Composto I é uma solução e a etapa de cristalização do sal do Composto I a partir da mistura compreende levar a solução à supersaturação para fazer com que o sal do Composto I se precipite da solução.

64. Método, de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que a etapa de levar a solução até a supersaturação compreende adicionar lentamente um antissolvente, permitir que a solução esfrie, reduzir o volume da solução ou qualquer combinação dos mesmos.

65. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 62, caracterizado pelo fato de que a mistura compreendendo um sal do Composto I é uma solução e a etapa de cristalização do sal do Composto I a partir da mistura compreende a indução da cristalização.

66. Método, de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que induzir a cristalização compreende semear a solução com sementes de cristais do sal do Composto I.

67. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 66, caracterizado pelo fato de que compreende ainda isolar o sal cristalino.

68. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que o isolamento do sal cristalino compreende filtrar o sal cristalizado da mistura.

69. Método, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a secagem do sal cristalino sob pressão reduzida.

70. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 69, caracterizado pelo fato de que o sal cristalino é o sal cristalino, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 38.